Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эпидемиологические и экологические закономерности циркуляции вируса Иссык-Куль в Таджикистане

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Эпидемиологические и экологические закономерности циркуляции вируса Иссык-Куль в Таджикистане"

На правах рукописи

ЗИЁ РАХМОН

ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ И ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ЦИРКУЛЯЦИИ ВИРУСА ИССЫК-КУЛЬ В ТАДЖИКИСТАНЕ.

03.00.06 - вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1998 г.

Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском институте профилактической медицины. Директор заслуженный деятель науки и техники, д.м.н.. профессор Ф.И. Одинаев.

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки и техники Республики Таджикистан, доктор медицинских наук, профессор Ф.И. Одинаев. Доктор медицинских наук С.Д. Львов.

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор М.С. Воробьева Доктор биологических наук С.С. Ямникова

Ведущее учреждение - Государственный институт стандартизации и контроля биологических и медицинских препаратов им.Л. И.Тарасевича МЗ РФ.

Защита диссертации состоится " " июня 1998 г. в часов на заседании специализированного совета Д.001.20.02 в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (г.Москва, 123098, ул.Гамалеи, д. 16

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН.

Автореферат разослан

1998г.

Ученый секретарь

специализированного ученого совета доктор медицинских наук

Н.П. Косяксва.

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

В последнее десятилетие большое внимание уделяется исследованиям экологических и эпидемиологических особенностей арбовиру-сов и борьбе с наиболее распространенными и патогенными из них . разработке новых методов диагностики, профилактики и лечения инфекций. которые вызывают арбовирусы. Важное место в этих исследованиях занимает изучение их их роли в инфекционной патологии. Проблема арбовирусов продолжает оставаться весьма актуальной в связи с тем. что постоянно растет число вновь изолированных вирусов, которые способны вызывать заболевания у людей. В настоящее время известно более 500 арбовирусов, из которых около 100 патогенны для человека.

Интенсивные исследования направленные на поиски арбовирусов. циркулирующих на территории бывшего СССР, позволили выделить 43 вида арбовирусов. 15 из которых имеют эпидемиологическое значение. Наряду с этим продолжается изучение экологии ранее известных вирусов и выяснение новых для науки закономерностей их циркуляции. Среди арбовирусов практическое значение для южных районов Таджикистана имеет вирус Иссык-Куль. Иссык-Кульская лихорадка заслуживает внимания из-за широкого распространения в этом регионе и проявлением не только в виде спорадических случаев, но и вспышек.

Наличие сложного комплекса ландшафтов на юге республики, и связанная с этим пестрота климатических условий, обуславливает

богатство животного мира. Кроме того, Таджикистан расположен на стыке разных зоогеографических областей и регионов (европейс-ко-сибирской, восточно-азиатской, индо-малайской. эфиопской и западно и восточно-средиземноморской) и издавна служит ареной интенсивного формообразования и убежищем для сохранения реликтовых видов, родов и фаунистических комплексов, что влияет на условия циркуляции арбовирусов.

Со времени открытия вируса Иссык-Куль прошло более 20 лет. Изучение экологии арбовируса и вызываемой им о'дноименной лихорадки в Таджикистане проводилось М.А. Костюковым в 1975-1989гг.. Полученные результаты требовали продолжения этих исследований.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ.

Целью настоящей работы являлось изучение экологии вируса Иссык-Куль, определение цикла и эпидемиологических закономерностей циркуляции возбудителя, апробация метода твердофазного иммунофер-ментного анализа для обнаружения антигена и антител вируса Иссык-Куль, изучение формирования и структуры очагов.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

-проведения вирусологического обследования больных неясными лихорадочными заболеваниями.

-изучение связей вируса Иссык-Куль с позвоночными животными и кровососущими членистоногими для выявления новых фактов в экологии этого арбовируса.

-проведения серологического обследования людей, диких и домашних животных для уточнения иммуноструктуры населения и уста-

новления районов наиболее интенсивной циркуляции вируса.

-адаптировать и применить различные варианты иммунофермент-ного анализа для ранней диагностики Иссык-Кульской лихорадки.

-сравнение диагностических возможностей различных методов специфической диагностики.

-выявление и изучение активности очагов вируса Иссык-Куль на территории республики Таджикистан.

Научная новизна.

Проведена детальная ревизия вируса Иссык-Куль в различных зонах юга республики. Получены новые сведения по экологии вируса, выявлены основные эпидемиологические закономерности циркуляции. Выявлена особая роль рукокрылых в циркуляции вируса Иссык-Куль. как длительных резервуаров и источников инфекции.

Изучены лабораторные аспекты Иссык-Кульской лихорадки. Впервые применен метод ИФА и его варианты для идентификации вируса Иссык-Куль и диагностики Иссык-Кульской лихорадки.

Впервые выявлены и изучены очаги возбудителя на юге Таджикистана.

Практическая ценность исследований.

Практическое значение определяется возможностью использования полученных данных при разработке систем выявления специфической диагностики и профилактики эпидемических арбовирусных инфекций. На основании результатов полученных в ходе комплексных исследований разработаны и изданы методические рекомендации "Вирус Иссык-Куль и Иссык-Кульская лихорадка", 1998 г.Лабораторные методы исследования внедрены в работу областной вирусологической ла-

боратории, а методы обследования очагов в практику паразитологи-ческих отделов санитарно-эпидемиологических станций.

Основные положения выносимые на защиту.

1.Основными хозяевами вируса Иссык-Куль на территории Южного Таджикистана являются летучие мыши, птицы и мышевидные грызуны, переносчиками - комары АсЗ. саэрШв, С.р1р1епз, Ап.Ьугсапиэ и клещи Аг. уезрегШ1оп1з.

2.На основании серологических исследований показана высокая степень активности природных очагов вируса на юге республики.

3.Методом ИФА показано, что антиген вируса Иссык-Куль в крови больных можно определить в первые дни болезни, а специфические ранние антитела класса М на 4-5 день от начала болезни, что определяет ведущее значение специфической диагностики при обследовании таких больных.

4.Выявлены очаги активной циркуляции вируса Иссык-Куль в природных очагах в Восейском. Кумсангирском, Колхозобадском, Пар-харском. Московском,Пянджском районах и в г.Душанбе.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на:

-Конференции общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, сентябрь, 1997., г.Душанбе.

-Ученом Совете Таджикского научно-исследовательского института профилактической медицины, март, 1998 год.

-Конференции отдела экологии вирусов НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского, апрель. 1998 год.

ПУБЛИКАЦИИ. Основные положения диссертации отражены в 4 опубликованных научных работах.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, состоящего из работ отечественных и зарубежных авторов. Работа иллюстрированна 14 таблицами и 6 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Материалы и методы.

Представленная работа содержит итоги комплексных вирусологических, серологических и эпидемиологических исследований, осуществленных за период 1994-1997гг.

За это время проведено 14 экспедиционных выездов в различные районы республики. Сбор материала для исследований проводился и в городе Душанбе.

Общий объем собранного материала представлен в таблице 1.

Выделение вируса проводили на новорожденных белых мышах по методу, описанному Д.К.Львовым с соавт. 1970 г. Работу по идентификации новых вирусных агентов проводили на уровне 4-5 пассажа на 1-3 дневных белых мышах. Антиген готовили методом сахарозо-ацето-новой экстракции (Casals 1958). л использовали его в реакции связывания комплемента (РСК) с референс-сыворотками к вирусам, имеющихся в банке лаборатории арбовирусных инфекций Таджикского КИИ профилактической медицины и НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН.

Таблица 1.

ОБЩИЙ ОБЪЕМ СОБРАННОГО МАТЕРИАЛА.

№ п/п Вид материала Количество

Для вирусологических исследований

1 Кровь больных с неясными лихорадочными заболеваниями. 480

2 Летучие мыши 210

3 Птицы 600

4 Грызуны 100

5 Комары 45000

6 Клещи 3000

Для серологических исследований

1 Сыворотки крови здоровых людей 1945

2 Парные сыворотки крови реконвалесцентов 72

3 Сыворотки крови крупного рогатого скота 650

4 Сыворотки крови мелкого рогатого скота 539

5 Сыворотки крови диких птиц 180

6 Сыворотки крови грызунов 425

Иммунные асцитные жидкости (ИАЖ) получали по общепринятой методике (С.Я. Гайдамович с соавт.,1974).

Прямой вариант ИФА в "сэндвич" модификации использовали для экспресс-индикации антигенов вирусов в пулах кровососущих членистоногих переносчиков, в сыворотках крови больных и животных. Полистироловые планшеты сенсибилизировали вирусспецифическими мышиными igG в течение ночи при +4 С. Исследуемые образцы вносили в лунки сенсибилизированных планшетов по 0,05 мл и инкубировали при 37 С в течение 1 часа. Планшеты отмывали трижды ФСБ-Т, вносили коньюгат по 0,05 мл в каждую лунку в рабочем разведении и оставляли на 1 час при 37 С. Непрореагировавший коньюгат удаляли вытряхиванием, после чего планшеты промывали 5 раз ФСБ-Т и в каждую лунку вносили по 0,1 мл субстрат-индикаторного раствора. Инкубация проходила 15-20 мин. в темном месте при комнатной температуре, реакцию останавливали 2 H серной кислотой. В качестве энзим-субстрата использовали ОФД (Sigma,USA) - 4 мг на 20 мл 0,1 M ЦФБ pH 5.О в присутствии 0,006% перекиси водорода. Результат учитывали фотометрически на приборе "Мультискан" при длине волны 492 нм или визуально.

Для специфической диагностики Иссык-Кульской лихорадки и се-роэпидемиологических исследований использовали РСК и ИФА. Поиск специфических иммуноглобулинов класса M проводили методом "захвата" IgM антител (MAC-ELISA).

Постановку MAC-ELISA осуществляли по схеме, описанной С.H.Callser с соавт.1986г. с небольшими изменениями. Лунки 96-лу-ночных планшет сенсибилизировали козьими антителами против м-це-пей IgM человека (Sigma,USA). Затем последовательно вносили сыворотки в разведении 1:200, специфические антигены вируса Ис-

сык-Куль в рабочем разведении, нормальный антиген в качестве контроля и коньюгат специфических Ig мыши с пероксидазой хрена в рабочем разведении. Положительные считали пробы, оптическая плотность которых в 2.1 превышала оптическую плотность отрицательных контролей. Положительные пробы затем титровали в двукратных разведениях.

Все тест-системы ИФА были приготовлены научными сотрудниками лаборатории биологии и индикации арбовирусов НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН Лавровой H.A. и Хуторецкой Н.В.

РСК ставили по общепринятой методике с двумя дозами комплемента.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Экология вируса Иссык-Куль.

1.1.Общие сведения.

Вирус Иссык-Куль впервые был выделен в Киргизии в 1971 году от летучих мышей ( рыжая вечерница) и аргасовых клещей, снятых с них. В Таджикистане вирус Иссык-Куль впервые был изолирован от летучих мышей нетопырь-карлик, позднее от двухцветного кожана и большого подковоноса, клещей Argas vespertllionls и птиц - вертишейки и горной трясогузки. Вирус также был изолирован из крови лихорадящего больного, а затем были зарегистрированы вспышки этой инфекции.

1.2. Вирусологическое обследование больных неясными лихорадочными заболеваниями.

В данном разделе представлены результаты вирусологического обследования больных неясными лихорадочными заболеваниями. Собрано и исследовано методом биопроб на новорожденных белых мышах 480 проб крови из 10 районов республики южного Таджикистана. Выделено 12 штаммов вируса Иссык-Куль. Три штамма изолировано от больных из Воссейского района, по два из Пархарского, Московского. Кум-сангирского и по одному из Колхозобадского. Пянджского районов и г.Душанбе.

Кровь брали на пике температуры в первые дни заболевания у больных с различными диагнозами. Заболевание, обусловленное вирусом Иссык-Куль, чаще всего проходит под диагнозом: грипп, ОРВИ. бронхит. ОКИ (4,155, 3,4%, 2,6% и 2,3% соответственно), в среднем 2,5% + 0.7 от всех лихорадок неясной этиологии. Индикацию вируса проводили в ИФА, идентификацию выделенных штаммов в РСК и в РДПА (таблица 2).Методом ИФА в исходном материале от больных (кровь), взятом в острый период болезни, антиген вируса обнаружен в 7 случаях, что составляет 58% от выделенных штаммов. После "обогащения" на новорожденных белых мышах антиген вируса был выявлен на 1-2 пассаже еще в 5 случаях. Результаты, полученные в ИФА. полностью подтверждены изоляцией штаммов вируса Иссык-Куль из этих проб и последующей идентификацией их в РСК и РДПА.

Таким образом, метод ИФА впервые примененный для индикации и идентификации вируса Иссык-Куль в крови больных неясными лихорадочными заболеваниями является специфичным, высоко чувствительным, экономичным, а на проведение анализа требуется 6-8 часов от момента исследования.

1.3. Вирусологическое обследование комаров и клещей.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ШТАММОВ ВИРУСА ИССЫК-КУЛЬ, ИЗОЛИРОВАННЫХ ИЗ КРОВИ ЛЮДЕЙ. Разведение ИАЖ Иссык-Куль 1:20

№ п/п № штамма Методы идентификации

РСК РДПА ИФА исходный материал ИФА после обогащения на биопробах

1 9882 1/80 1/4 0 1 пассаж +

2 9883 1/160 1/4 + .......".......

3 9941 1/320 1/8 +

4 9980 1/40 Ц 0 2 пассаж +

5 9995 1/320 1/8 + ••

6 10176 1/80 1/2 0 1 пассаж +

7 10178 1/160 1/4 0 2 пассаж +

8 10384 1/320 1/8 + .......".......

9 10586 1/160 1/4 + _______".......

10 10480 1/320 1/8 + ••

11 9778 1/320 1/8 +

12 10487 1/80 1/2 0 2 пассаж +

X - величина обратная разведению сахарозо-ацетонового антигена

Ц- цельная

Отрицательные результаты в РСК, РДПА и ИФА получены с антителами к вирусам К-КГЛ, Тягиня, Синдбис, Западный Нил, Гиссар, Вад-Медани, москитных лихорадок, ЛХМ, эктромиелии.

С целью выявления очагов вируса Иссык-Куль в Южном Таджикистане и определения эпидемиологической значимости кровососущих членистоногих переносчиков арбовирусов нами изучена их естественная зараженность.

Всего вирусологически исследовано 45000 комаров 6 видов и 3000 клещей 4 видов (таблица 3).

Представленные в таблице виды комаров являются наиболее массовыми. Они охотно нападают на как на человека, так на летучих мышей и птиц.

Результаты изучения зараженности комаров указывают, что комары Aedes caspius, Culex plplens. Anopheles hyrcanus являются переносчиками вируса Иссык-Куль в природе, о чем свидетельствует и сравнительно высокая их зараженность (3.3%. 2.8%. 2.1% соответственно) .

Клещей Argas vespertlllonis собирали непосредственно с летучих мышей, Argas perslcus в курятниках, Н.an. anatoИcum с дува-лов.Как показали наши исследования вирусом Иссык-Куль были заражены только клещи Ar.vespertlllonis (13,04%). »

1.4. Вирусологическое обследование летучих мышей, птиц и грызунов и их роль в циркуляции вируса Иссьпс-Куль.

В Таджикистане обитает 18 видов летучих мышеи.Многолетние наши наблюдения свидетельствуют, что наиболее богатыми в численном и видовом отношении являются долинно-равнинные и предгорные зоны. Именно в этом регионе была сосредоточена работа по изучению связей летучих мышей с вирусом Иссык-Куль. Вирусологически было исследовано 210 экземпляров летучих мышей 5 видов - нетопырь-карлик, малый подковонос, большой подковонос, остроухая ночница.

РЕЗУЛЬТАТЫ ВИРУСОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ КРОВОСОСУЩИХ ЧЛЕНИСТОНОГИХ.

№ п/п Виды членистоногих Кол-во экз-ров Кол-во проб Изолировано штаммов вируса Иссык-Куль Удельный вес поло-жительн ых проб В Го ± м

Комары

1. Aedes caspius caspius 20000 60 2 3,3±2,3

2. Aedes vexanus 1300 5 0

3. Aedes detritum 1200 4 0

4. Culex pipens pipiens 10500 35 1 2,8±2,8

5. Anopheles hyrcanus 10400 36 1 2,7±2,7

6. Anopheles pulcherimus 1600 5 0

Bcero 45000 145 4 2,7±1,3

Клещи

1. Argas vespertilionis 450 23 3 13,0±7

2. Argas persicus 1000 50 0

3. Argas reflexus 110 52 0

4. Healoma an.anatolicum 1440 30 0

Bcero 3000 155 3 1,9±1,1

двухцветный кожан. Инфицированными вирусом Иссык-Куль оказались три вида: нетопырь карлик.остроухая ночница, двухцветный кожан.

Таким образом, проведенные нами исследования показали зараженность некоторых видов летучих мышей вирусом Иссык-Куль. Изоляция этого арбовируса от летучих мышей, собранных в различные сезоны года, свидетельствует, что эти млекопитающие являются превосходным резервуаром, способными сохранять вирус.

С целью изучения роли птиц в экологии арбовирусов, нами проведено комплексное вирусологическое и серологическое исследование птиц, добытых в равнинно-долинных и предгорных ландшафтах. Вирусологически исследованно 600 экземпляров 9 отрядов 110 видов диких птиц. Вирус Иссык-Куль выделен от птиц из отряда воробьиных, добытых в Пархарском районе на рисовых полях (полевой воробей) и голубеобразных (сизый голубь), добыт в г.Душанбе.

Для вирусологических исследований нами ловушками отловлено 100 экземпляров массовых видов грызунов Таджикистана - краснох-востая песчанка, индийская крыса, домовая мышь. Вирус Иссык-Куль был изолирован из внутренних органов домовых мышей, отловленных на скотном дворе индивидуального хозяйства в Воссейском районе.

Проведенные исследования позволили уточнить ареал вируса Иссык-Куль в Южном Таджикистане и определить участие различных видов животных в экологии возбудителя.

Результаты вирусологического исследования фоновых видов комаров и клещей указывают на их контакт с вирусом Иссык-Куль.

Наряду с членистоногими переносчиками в циркуляции вируса принимают участие летучие мыши, птицы и грызуны, которые являются резервуарами-хозяевами.

Впервые нами от полевого воробья и сизого голубя выделен ви-

рус Иссык-Куль, а также впервые он изолирован и от домовой мыши, что является новым фактом в экологии этого арбовируса.

1.5. Иммунологическая структура населения, диких и домашних животных к вирусу Иссык-Куль.

Популяционный иммунитет к вирусу Иссык-Куль у людей, диких и домашних животных в Таджикистане был изучен М.А.Костюковым с со-авт.(1076г), 3.Е.Гордеевой (1982), но в связи с известными событиями в республике произошли большие изменения: массовая миграция населения, отсутствие противокомариных и противоклещевых обработок, что послужило причиной проведения серологических исследований для уточнения иммунного статуса людей, диких и сельскохозяйственных животных и для правильной оценки интенсивности циркуляции возбудителя.

Сыворотки крови людей исследовали в РСК . Результаты исследования 1945 сывороток крови людей из 19 районов юга республики представлены в таблице 4. Как видно из таблицы процент лиц, содержащих комплементсвязывающие антитела, колебался в различных районах от 1,8 до 7,8, а титры антител от 1:8 до 1:128. причем общее количество положительных результатов составило 83 случая.

В РСК исследованы сыворотки крови 180 птиц 5 отрядов 11 видов. Результаты исследования показали, что потенциально опасными источниками арбовирусов могут быть представители отрядов воробьиных (7,15?) ржанкообразных (5.8%), голубеобразных (12,0%), пластинчатоклювых (9,0%).

При исследовании сывороток крови грызунов в РСК на антитела к вирусу Иссык-Куль процент серопозитивных составил 1.8.

Для изучения циркуляции вируса Иссык-Куль среди сельскохо-

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СЫВОРОТОК КРОВИ ЛЮДЕЙ В РСК НА АНТИТЕЛА К ВИРУСУ ИССЫК-КУЛЬ.

Районы Кол-во исследованных сывороток Кол-во серопо-зитивных Процент лиц с антителами (± м) Титры антител

1:8 1:16 1:32 1:64 1:128

г.Душанбе 110 5 5 ±2,1 0 3 1 0 1

г.Нурек ПО 2 1,8 ± 1.2 0 0 2 0 0

Гиссарский 100 5 5 ±2,1 3 2 0 0 0

Куйбышевский 100 4 4 ± 1,9 0 4 0 0 0

Пархарскин 100 6 6 ±2,3 2 2 1 1 0

Вахшский 126 0

Московский 115 6 5,2 ± 2,0 3 2 0 1 0

Кумсангир-ский 105 7 6,0 ± 2,3 1 3 0 2 1

Колхозабад-ский 111 8 7,2 ± 2,4 2 3 2 0 1

Пянджский 102 6 5,8 ± 2,3 2 3 0 0 1

Джиликуль-ский 101 4 3,8 ± 1,9 0 3 1 0 0

Советский 100 5 5 ±2,1 1 3 1 0 0

Восейский 102 8 7,8 ± 2,6 3 2 1 0 2

Дангарин-ский 90 4 4,4 ± 2.2 3 0 1 0 0

г.Куляб 100 3 3± 1,7 0 3 0 0 0

Кафирнигон ский 61 2 3,2 ±2,2 0 2 0 0 0

Шаартузс-кий 85 2 2,3 ± 1,6 2 0 0 0 0

Турсунзадев ский 148 6 4,1 ± 1,6 4 1 1 0 0

Всего 1945 83 4.4 ±0.4 28 36 12 5 6

зяйственных животных были исследованы сыворотки крупного и мелкого рогатого скота в РСК. В сыворотках крови коров из Шартузского района выявлены антитела в 10.0%. В сыворотках крови овец, собранных в Джиликульском.Кафирниганском, Шартузском, Советском и Дангаринском районах найдены антитела у 11,5%, 7,0%, 2,8%, 1,9% обследованных животных соответственно.

Таким образом, в южных районах республики крупный и мелкий рогатый скот активно вовлекается в циркуляцию вируса Иссык-Куль.

2. Эпидемиологические закономерности циркуляции Иссык-Куль ской лихорадки.

Иссык-Кульская лихорадка - природно-очаговое заболевание, проявляющееся как в виде спорадических случаев, так и небольших вспышек.Очаги инфекции приурочены преимущественно к припойменным ландшафтам юга республики.

Доказательством циркуляции возбудителя на данной территории является выделение вируса от переносчиков (комары.клещи). изоляция вируса из крови человека в острый период болезни, определение нарастания титров специфических антител в парных сыворотках крови, регистрация специфических 18 класса М, выделение вируса из органов диких животных.

Основными хозяевами вируса Иссык-Куль являются летучие мыши. Большая роль в длительности сохранения и образования новых очагов инфекции принадлежит птицам и грызунам, а основными переносчиками являются доминирующие на летучих мышах - аргасовые клещи. В циркуляции вируса активное участие принимают комары, о чем свидетельствует изоляция вируса от этих членистоногих и экспериментальные данные В.П. Булычева и др.о трансмиссивной передаче вируса

комарами через укус.

Лихорадке Иссык-Куль свойственна определенная сезонность. Первые случаи регистрируются в марте-апреле, максимальное число заболеваний наблюдается в июле-августе, спад зарегистрирован в конце сентября-октября. Иссык-Кульская лихорадка имеет несколько путей передачи: трансмиссивный, воздушно-капельный и алиментарный. При этом климатические условия Таджикистана, разнообразие ландшафтов, экология резервуаров и переносчиков вируса обуславливают неодинаковую активность этих путей,чем и объясняется сезонность заболевания.

Клинические проявления заболеваний, вызываемых вирусом Иссык-Куль разнообразны. Инкубационный период в среднем составил 5 дней. Болезнь начиналась остро без продромальных явлений. Температура быстро поднималась до 39-39,5 С и сопровождалась ознобом (8 больных). Появляются жалобы на головную боль (И больных), слабость, разбитость (12 больных). Аппетит снижен в первые дни у всех больных. Отмечалась гиперемия лица, зева (5 больных). Четырех больных беспокоили мышечные боли, особенно в мышцах ног и спины. У некоторых больных (3) отмечался сухой кашель, при аус-культации выявлялись сухие хрипы.Со стороны сердечно-сосудистой системы наблюдалась умеренно выраженная гипертония, брадикардия, приглушение сердечных тонов. Размеры печени и селезенки не изменены. Продолжительность лихорадочного течения в среднем составила 8 дней. СОЭ ускорено. Смертельных исходов не зарегистрировано.

Таким образом, клиническая картина Иссык-Кульской лихорадки достаточно полиморфна, отсутствие патогномоничных симптомов, спорадический характер заболеваемости затрудняет постановку диагноза. Этиологический диагноз может быть основан на результатах ла-

бораторных исследований и клинико-эпидемиологических данных. Решающее диагностическое значение имеют методы специфической диагностики. С этой целью проведена работа по использованию вариантов ИФА для диагностики заболевания, вызванного вирусом Иссык-Куль.

При вирусологическом обследовании 480 больных неясными лихорадочными заболеваниями было изолировано 12 штаммов вируса Ис-сык-Куль.Затем были исследованы парные сыворотки крови этих больных в ИФА и РСК. Вторые сыворотки крови были собраны через месяц от начала заболевания.Кроме того, было исследовано 50 парных сывороток крови больных из Воссейского района. Здесь в 11 случаях выявлено нарастание специфических антител против вируса Иссык-Куль (таблица 5). В таблице представлены только положительные находки . В первых сыворотках крови взятых на 1-5 день болезни в РСК антител не было найдено, а через месяц комплементсвязывающие антитела определялись у всех больных в титре 1:32 - 1:128. С помощью ИФА специфические антитела класса М определялись в первых пробах сывороток крови уже на 4-5 день болезни в титре 1:200 -1:800, а через месяц во всех случаях имело место четырехкратное и более нарастание титров 1вМ (1:200 - 1:1600 до 1:200 - 1:3200). Данные по выявлению антител в РСК и ИФА совпадали, однако, титры антител, выявляемые в ИФА, были значительно выше.

Таким образом применение метода ИФА позволило выявить антиген к вирусу Иссык-Куль, а следовательно, установить диагноз. Изучение динамики титров ^М и комплементсвязывающих антител подтвердило данное заболевание. В сыворотках больных взятых на 4-6 день болезни, уже определялись высокие титры 1§М. что позволило поставить диагноз по одной пробе сыворотки на ранних сроках заболевания.

20 А.

Таблица 5

ДИАГНОСТИКА ЛИХОРАДКИ ИССЫК-КУЛЬ РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ.

№ п/п Ф.И. больного День взятия крови от начала заболевания РСК ИФА 1§М ИФА антиген Метод биопроб

I св. И св. I св. II св.

1 А.М. 1 Д. 0 1/16 0 1/1600 + +

2 Ш.Ф. 1 Д. 0 1/32 0 1/800 + +

3 С.Х. 1 Д. 0 1/32 0 1/3200 + +

4 И.Ф. 1 Д. 0 1/32 0 1/1600 +

5 А.М. 2 д. 0 1/32 0 1/1600 + +

6 Р.С. 2 д. 0 1/128 0 1/3200 +

7 ш.к. 2 д. 0 1/64 0 1/1200 + +

8 Ш.Ф. 2 д. 0 1/64 0 1/1200 +

9 Ш.Р. 1 д. 0 1/64 0 1/1600 + +

10 М.А. Зд. 0 1/64 0 1/1200 +

11 Ф.И. 4 д. 0 1/64 1/200 1/3200 +

12 Р.Ф. 2 д. 0 1/64 0 1/1200 + +

13 Р.Ш. 2 д. 0 1/64 0 1/1200 ни

14 Б.Ш. 2 д. 0 1/64 0 1/1600 ни

15 Б.М. 2 д. 0 1/64 0 1/800 ни

16 Б.Ф. 4 д. 0 1/128 1/200 1/1600 НИ 1

17 С.А. Зд. 0 1/128 0 1/3200 ни

18 Р.А. Зд. 0 1/64 0 1/400 ни

19 Ф.Ш. 5 д. 0 1/64 1/400 1/1600 ни

20 Х.М. 1 Д. 0 1/128 0 1/6400 ни

21 Я.Р. 4 д. 0 1/128 1/800 1/3200 ни

22 С.Я. 2 д. 0 1/64 0 1/1200 ни

23 Ш.Ю. Зд. 0 1/64 0 1/800 ни

Примечание: ни - не исследовано; х - обратные титры

Полученные данные позволяют сделать общее заключение о высоких диагностических возможностях ИФА и его вариантов перед классическими серологическими тестами.

На основании анализа всего выше сказанного о лихорадке Иссык-Куль. и учитывая неспецифичность клинической картины, окончательный диагноз основывают на данных лабораторного исследования с учетом совокупности клинико-эпидемиологических данных, сезонности, контакта с кровососущими членистоногими, эндемичности территории.

3. Эколого-эпидемиологическая характеристика природных очагов вируса Иссык-Куль в Южном Таджикистане.

На территории Таджикистана природные очаги вируса Иссык-Куль отмечены на юге страны в долинно-пойменных и равнинно-предгоных районах. Заражение людей вирусом Иссык-Куль отмечены в Пархарском Восейском, Московском. Кумсангирском. Колхозобадском, Пянджском районах и в г.Душанбе.

С 1982 года по 1997 год на территории Южного Таджикистана зарегистрировано 107 случаев Иссык-Кульской лихорадки. Ежегодно наблюдается от 5 до 12 случаев. Вероятно, их гораздо больше, так как не во всех районах этого региона проводились исследования.

Для наиболее южных районов характерны пойменные ландшафты. Климат этой зоны характеризуется очень теплым летом и мягкой зимой. В этой ландшафтно-климатической зоне много постоянных и временных водоемов, где имеются благоприятные условия для выплода кровососущих комаров и других насекомых. Здесь наиболее многочисленны A.caspius, An.hyrcanus, C.plplens от которых нами был выделен вирус Иссык-Куль.Кроме того, сами комары являются пищей для

летучих мышей - основных хозяев этого арбовируса.

Об активности эпизоотического процесса в очагах можно судить по результатам вирусологического исследования синантропных птиц (воробей, голубь), летучих мышей и их эктопаразитов (А.уеэреги-11оп1з). грызунов от которых нами изолированы штаммы вируса Иссык-Куль.

Результаты серологического исследования показали наличие иммунитета к вирусу Иссык-Куль у 4,4% +0,4 здорового населения, проживающего в районах Южного Таджикистана.

Таким образом, данные наших исследований указывают на наличие очагов вируса Иссык-Куль на территории юга республики, которые отличаются по активности своего проявления. Наиболее активные очаги отмечены в Кумсангирском. Пархарском, Восейском, Колхозо-бадском и Пянджском районах и в г.Душанбе. Но это, по видимому, связано не только с наличием благоприятных абиотических и биотических условий для циркуляции здесь арбовирусов, но и проведением основных исследований в указанных районах.

- 23 -ВЫВОДЫ

1. Основными хозяевами вируса Иссык-Куль в природе являются летучие мши "дополнительные" хозяева: птицы и грызуны, переносчиками возбудителя являются комары.

2. Впервые проведена изоляция вируса Иссык-Куль от синант-ропных птиц (сизого голубя и полевого воробья) и мышевидных грызунов.

3. Впервые для индикации вируса Иссык-Куль в крови больных применен метод ИФА. Этот метод позволяет выявить вирус в острый период заболевания в первые 1-4 дня в течении 6-8 часов от начала исследования. Метод является специфичным, высоко чувствительным, экономичным.

4. Впервые применен метод ИФА для диагностики Иссык-Кульской лихорадки и его вариант (МАС-ЕЫБА) для "улавливания" ^М. что позволило выявлять антиген вируса в крови больных в первые дни болезни и определить ранние специфические антитела класса м на 4-5 день от начала заболевания, что позволяет провести правильное лечение и необходимые противоэпидемические и профилактические мероприятия.

5. Выяснена и уточнена иммуноструктура населения Южного Таджикистана к вирусу Иссык-Куль, процент иммунных составляет 4,4 ( в 1976 г.- 2.7%). Наиболее высокие показатели зарегистрированы б Воссейском. Колхозобадском. Кумсангирском, Пархарском. Пянджском районах (7.8%, 7,2%. 6.0%, 5.8% соответственно).

6. Впервые установлено с помощью комплексных вирусологичес-

ких и серологических исследований, что очаги вируса Иссык-Куль находятся на территории Кумсангирского, Воссейского, Пархарского, Московского. Пянджского. Колхозобадского, Дангаринского районов и г.Душанбе.

7. Анализ предполагаемых изменений природных биоценозов под воздействием деятельности человека, абиотических факторов, данных исследований показывает возможность активизации существующих и возникновения новых очагов вируса Иссык-Куль, что диктует необходимость постоянного мониторинга на эндемических территориях.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Рахмон 3. Надзор за арбовирусными инфекциями (мониторинг). В кн. Актуальные вопросы диагностики, лечения, реабилитации. //4.2. Душанбе. 1995г с.128-129.

2. Рахмон 3./ Ранняя диагностика арбовирусных инфекций имму-ноферментным методом.// В кн. Актуальные вопросы диагностики. лечения, реабилитации. ч.2. г.Душанбе. 1995г. с. 152.

3. Рахмон 3., Одинаев Ф.И./ Вирусы, экологически связанные с птицами и рукокрылыми в Южном Таджикистане.//Сборник научных трудов Таджикского НИИ профилактической медицины 1996г. с. 149 150.

4. Рахмон 3., Тишкова Ф.X., Волкова Т. В . /Вирус Иссык-Куль Иссык-Кульская лихорадка в Таджикистане. // Методические рекомендации. Душанбе. 1998г.

Автор выражает благодарность доктору медицинских наук, профессору заслуженному деятелю науки и техники Ф.И. Одинаеву и доктору медицинских наук С.Д. Львову за предложенную тему и научное руководство при проведении исследований.

Приношу особую благодарность за оказанную консультативную помощь и плодотворное сотрудничество старшим научным сотрудникам Таджикского НИИ профилактической медицины Ф.X. Тишковой, В.Т. Волковой, O.A. Даниярову, З.Е.Гордеевой, В.П. Булычеву.

Выражаю благодарность сотрудникам отдела экологии вирусов НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского В.Л. Громашевскому, 0.И.Вышемирскому, Е. И.Самохвалову за совместную работу и квалифицированную помощь.

Автор особо искренне благодарен и признателен директору Института вирусологии академику РАМН Д.К. Львову и министру здравоохранения Республики Таджикистан профессору A.A. Ахмедову за поддержку оказанную при защите диссертации.

Участок м м о ж и г е л ьн о и т е х пики ОНЦ РАМН

Поли, к печапцЗ. 5 96 Заказ у 1 Тираж 1 00 jk i