Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Эмбриокультура стеноспермокарпических сортов для улучшения сортимента винограда

ВАК РФ 06.01.07, Плодоводство, виноградарство

Автореферат диссертации по теме "Эмбриокультура стеноспермокарпических сортов для улучшения сортимента винограда"

На правах рукописи

Берникова Наталья Викторовна

ЭМБРИОКУЛЬТУРА СТЕНОСПЕРМОКАРПИЧЕСКИХ СОРТОВ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ СОРТИМЕНТА ВИНОГРАДА

Специальность 06.01.07 - Плодоводство, виноградарство

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Краснодар - 2004

Работа выполнена в Всероссийском научно-исследовательском институте виноградарства и виноделия им. Я.И. Потапенко

Научный руководитель - доктор сельскохозяйственных наук, старший научный сотрудник Дорошенко Наталья Петровна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Трошин Леонид Петрович доктор сельскохозяйственных на) к, профессор Серпуховитина Ксения Алексеевна

Ведущая организация - Донской государственный аграрный университет.

Защита состоится . 2004 г. в 10 часов на заседании диссер-

тационного совета Д 220.038.04 при Кубанском государственном аграрном университете по адресу: 350044 г.Краснодар, ул.Калинина, 13, КГАУ, факс 20-29-35.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Кобляков В.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Многовековая практика возделывания винограда и селекционная работа способствовали созданию большого разнообразия сортов. Благодаря высокой практической ценности, особое место среди них принадлежит бессемянным. Однако в Государственный реестр селекционных достижений России включен лишь Кишмиш черный.

Значительную часть мирового сортимента столового и изюмного винограда составляют стеноспермокарпические сорта. Они не являются истинно бессемянными, так как их ягоды содержат недоразвитые семена различных размеров. Опыление в них происходит, но зародыши затем останавливаются в развитии и семена абортируются.

Благодаря успехам биотехнологии и появлению возможности культивирования зародыша семени в условиях in vitro, открылась перспектива получения жизнеспособного потомства от скрещивания бессемянных сортов между собой с последующим развитием зародышей семени в контролируемых условиях. Использование методов in vitro расширяет возможности селекции на бессе-мянность, так как позволяет включить в селекционный процесс стеноспермо-карпические сорта и гибриды в качестве материнских форм.

Одним из наиболее перспективных направлений создания межвидовых и межродовых гибридов является эмбриогенез. Этот метод представляет интерес и при выведении бессемянных сортов, так как позволяет культивировать гибридные зародыши на ранних этапах развития, препятствуя их деградации, приводящей к формированию бессемянности. Однако определяющими и недостаточно изученными остаются вопросы выбора родительских сортов и их комбинационная способность, подбор и оптимизация питательной среды, уточнение сроков изолирования семяпочек. Очевидна необходимость в поисках путей оптимизации данной технологии, в частности, изучение эмбриогенеза различных сортов с целью предотвращения деградации зародышей стеноспермокарпических сортов и увеличения популяции сеянцев высокой категории бессемянности.

Цель исследований: изучить эмбриогенез стеноспермокарпических сортов винограда и разработать метод получения жизнеспособных проростков и сеянцев из изолированных семяпочек в культуре in vitro.

Задачи исследований:.

1. Исследовать уровень эмбриогенеза у стеноспермокарпических сортов винограда при инцухтировании и скрещивании по схеме: бессемянный х бессемянный.

2. Подобрать питательную среду, обеспечивающую оптимальные условия для ввода в культуру и дальнейшего культивирования семяпочек стеноспермо-карпических сортов.

3. Разработать режим стерилизации семяпочек на этапе ввода в культуру.

4. Подобрать родительские сорта и проверить их комбинационную способность. <ота

5. Исследовать динамику роста и развития ягод и семяпочек^фазличных

категорий бессемянности и обосновать выбор с иона hih.'ihuitbhtwji и.и «почек.

I РОС. НАЦИОНАЛЬЫАЯI

I БИБЛИОТЕКА I

6. Размножить in vitro и адаптировать к условиям in vivo гибридные формы, полученные из стеноспермокарпических семяпочек.

7.0пределить зависимость уровня эмбриогенеза в семяпочках стеноспермокарпических гибридов винограда от метеорологических условий в период вегетации.

8. Исследовать новые формы винограда по агробиологическим признакам.

Научная новизна. Впервые исследован эмбриогенез стеноспермокарпических сортов винограда при самоопылении и скрещивании. Подобраны родительские формы для ведения селекции между стеноспермокарпическими сортами в культуре in vitro. Разработан режим стерилизации семяпочек винограда с применением AgNO3. Впервые на основе изучения динамики роста и развития семяпочек сортов различной категории бессемянности определены сроки их изолирования и посева на питательную среду. Установлено, что основным критерием выбора срока введения семяпочек в культуру является отношение количества нормальных семян и рудиментов в ягоде. Впервые проведен корреляционный анализ и выявлена зависимость уровня эмбриогенеза от метеорологических условий в период вегетации. Установлено, что определяющим погодным фактором развития зародышей семени является сумма тепла в период бутонизации, оплодотворения и постоплодотворения. Получены гибридные формы винограда по схеме: бессемянный х бессемянный. Впервые проведено изучение новых форм винограда по агробиологическим признакам.

Положения, выносимые на защиту:

1. Анализ уровня эмбриогенеза при самоопылении и скрещивания стено-спермокарпических сортов.

2. Возможность использования в селекции бессемянных родителей с последующим культивированием изолированных семяпочек in vitro.

3. Режим стерилизации семяпочек при вводе в культуру in vitro.

4. Обоснование выбора срока изолирования стеноспермокарпических семяпочек и посева их на питательную среду.

5. Определение зависимости уровня эмбриогенеза от климатических факторов.

6. Агробиологическая оценка новых форм винограда.

7. Практические рекомендации по использованию в селекции стеноспер-мокарпических сортов винограда, обеспечивающих, при самоопылении и скрещивании по схеме бессемянныйхбессемянный, высокий уровень эмбриогенеза и получение гибридных сеянцев.

Практическая значимость работы.

Предложен способ получения исходного материала для селекции из изолированных семяпочек бессемянных сортов с использованием методов биотехнологии.

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований были доложены на заседаниях Ученого совета ВНИИВиВ им. Я.И. Потапенко (1995, 2000 гг.), зональной конференции Ростовского отделения РОГиС (Ростов-на-Дону, 1999 г.) на, XVI Мичуринских чтениях (Мичуринск, 1995 г.), ме-

ждународной научно-практической конференции "Садоводство и виноградарство 21 века" (Краснодар, 1999 г.), на 2 Всероссийской научно-практической конференции "Современные достижения биотехнологии" (Ставрополь, 2002 г.) и Всероссийской научно - практической конференции "Биотехнология 2003" (Сочи, 2003 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано двенадцать научных статей и подана заявка на предполагаемое изобретение AO1G 17/00,02 "Способ стерилизации семяпочек " (в соавторстве).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц, 22 рисунка и 3 приложения. Состоит из введения, обзора литературы, условий и методов исследований, экспериментальной части, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 184 источника, в том числе 60 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Место, время проведения и предмет исследований. Работа выполнена в лаборатории биотехнологии и на полевых участках селекционного центра Всероссийского НИИ виноградарства и виноделия им. Я.И. Потапенко в 19901999 гг. в соответствии с программой НИР.

Предметом исследований являлись семяпочки от самоопыления 14 сортов и 30 комбинаций скрещивания между стеноспермокарпическими сортами и гибридными формами винограда V. «ш1ёга и межвидового происхождения различной категории бессемянности.

Семяпочки извлекали из ягод через 35, 50, 65, 80 и 100 дней после опыления, культивировали на агаризованной питательной среде Уайта с добавлением 0,5 мг/л ГК, 0,1 мг/л ИУК, 0,4 мг/л кинетина и 400 мг/л гидролизата казеина. рН среды 5,7-5,9. В каждый срок высевали по 50-100 семяпочек, по одной в пробирку, содержащую 8-10 мл среды. Ввод в культуру осуществляли в асептических условиях ламинарного бокса после предварительной стерилизации объекта.

Семяпочки в течение трех месяцев культивировали при температуре воздуха +25+27°С, шестнадцатичасовом световом дне и интенсивности освещения 2-3 тыс. люкс, затем на 3-4 месяца помещали для прохождения стратификации в условия пониженной положительной температуры, после чего вновь возвращали в культуральные условия.

Сеянцы, развившиеся из семяпочек, продолжали культивировать в пробирках до состояния 2-3-х настоящих листьев, затем пересаживали для адаптации к нестерильным условиям в торфоперегнойные горшки, наполненные смесью почва : песок : торф в соотношении 3:1:1. Дальнейшее выращивание сеянцев проводили по схеме ускорения селекционного процесса.

Непроросшие семяпочки вскрывали в марте-апреле под микроскопом МБС-9 (увеличение 8x12) с целью определения наличия в них жизнеспособных зародышей. Выделенные с частью эндосперма зародыши высаживали на жидкую питательную среду Мурасиге-Скуга на мостики из фильтровальной бумаги по одному в пробирку и вновь помещали в контролируемые условия. Пророст-

ки, развившиеся из изолированных зародышей, культивировали как указано выше.

Для усиления дезинфицирующего эффекта применяли двойную стерилизацию (ягод и семяпочек, извлеченных из них) 0,8 %-ным раствором AgNO3.

Для выявления оптимального срока изолирования семяпочек изучали динамику их роста и развития. Определяли диаметр ягоды, длину семяпочек и количество нормальных семян и рудиментов в ягодах, полученных от самоопыления семенного сорта Восторг и сортов разных классов бессемянности: Русбол (мягкосемянный), Кишмиш уникальный (2-3 класс), Перлет (1 класс). Измерения и количественные учеты проводили каждую декаду в динамике от 10 до 100 суток с момента цветения.

Наблюдения за развитием полученных сеянцев в полевых условиях осуществляли по методике М.А. Лазаревского (1963). Проводили фенологические наблюдения, агробиологические учеты, определяли силу роста и степень вызревания побегов, анализировали количество и качество урожая.

Подготовку и стерилизацию питательных сред и исходного материала, приготовление растворов дезинфицирующих веществ, адаптацию растений к условиям открытого грунта проводили по методикам ЦГЛ им. И.В. Мичурина (1987), Государственного Никитского ботанического сада (1974) и ВНИИВиПП "Магарач" (1986) в нашей модификации. Статистическая обработка полученных данных проведена по методике Б. А. Доспехова (1985) на базе ПК с помощью программ Microsoft Excel, Statistica.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Стерилизация семяпочек

Наиболее трудной задачей при вводе в культуру является стерилизация материала. Этот этап подготовки к посеву во многом определяет результативность всего исследования. Для каждого объекта необходимо подбирать вид стерилизующего агента, его концентрацию и экспозицию, исходя из особенностей тканей исходного экспланта.

Основываясь на рекомендациях, имеющихся в литературе, первоначально дезинфекции подвергали ягоды, из которых, непосредственно перед посевом на питательную среду, в стерильных условиях извлекали семяпочки. Для усиления стерилизующего эффекта применили ступенчатую обработку: ягод и семяпочек, извлеченных из них. При посеве предварительно прсстерилизованных' семяпочек уменьшилось количество инфицированных среди них (на 8,8-50,0%), увеличился объем посадки, за счет времени сэкономленного на вычленении семяпочек, которое проводится в период подготовки к посеву и сокращения числа операций, выполняемых в ламинарном боксе.

С целью выявления наиболее эффективного дезинфектанта для ступенчатой стерилизации семяпочек сравнили применение растворов гипохлорита кальция или натрия, азотнокислого серебра и этилового спирта (табл. 1).

Таблица 1-Эффективность ступенчатой стерилизации семяпочек на этапе ввода в культуру, 1999 г.

Способ стерилизации Экспозиция Посеяно семяпочек, шт. Инфицировано семяпочек после ввода

шт. %

Ягоды - 10% Са(СЮ)2, семяпочки - 96% С2Н5ОН, обжиг в пламени горелки 30 мин. 30 сек. 56 39 69,6

Ягоды и семяпочки -10% Са(СЮ)2 30 мин 56 ' 56 100,0

Ягоды -10% Са(СЮ)2, семяпочки - 0,8% А£Ы03 30 мин. 3 мин. 56 23 41,1

Ягоды -10% Са(СЮ)2, семяпочки - 0,8% AgNOз 30 мин. 5 мин. 56 20 35,7

Ягоды - 0,8% АдКОз, семяпочки - 96% С2Н5ОН, обжиг в пламени горелки 10 мин. 1 сек 54 20 37,0

Ягоды-1,0% №СЮ, семяпочки - 96% С2Н5ОН, обжиг в пламени горелки • 10 мин. 1 сек. 56 37 66,1

Ягоды - 0,8% АдШз, семяпочки - 0,8% А^ИОз 10 мин. 5 мин. 257 10 3,9

Ягоды - 0,8% АиКОз, семяпочки - 0,8% А£>Юз 8 мин. 5 мин. 197 9 4,6

Лучшие результаты получены при стерилизации. ягод и семяпочек 0,8%-ным раствором AgNO3. Количество инфицированных семяпочек составило 3,9 % и 4,6 % (в зависимости от экспозиции) против 35,7-100 % в вариантах с применением других дезинфицирующих веществ.

Сроки изолирования и введения семяпочек в культуру

Мнения ученых о сроках изолирования семяпочек для посева их на питательную среду различны. Z. Singh, S.I.S. Вгаг (1992) считают, что число семяпочек у бессемянных сортов уменьшается через 20 суток после цветения. Н. Ding и Guimei Qi (2001), напротив, отмечают, что степень развития семяпочек значительно возрастает при вычленении их через 35-50 дней после опыления. В работах D.W. Cain (1983), A. Bonquet и Н.Р. Davis (1989) лучше прорастали семяпочки, изолированные из ягод перед их созреванием.

Изучали 5 сроков изолирования семяпочек (извлечения их из ягод) и посева на питательную среду с целью выявления оптимальных, обеспечивающих получение наибольшего количества жизнеспособных проростков. Отмечено отсутствие единообразной связи между сроком изолирования семяпочек и раз-виием зародышей и растений для всех комбинаций скрещивания в различные годы наблюдений (табл. 2).

Таблица 2-Влияние сроков изолирования семяпочек на развитие зародышей и растений, 1991-95 гг.

Срок изолирования, дни Развилось зародышей, % Получено растений, %

1991 1992 1993 1994 1995 1991 1992 1993 1994 1995

1 2 1 3 4 5 6 7 8 9 10 и

Кишмиш ЦГЛ х Коринка русская

35 - 35,7 - - - - 3,6 - - -

50 13,0 45,8 - - - 0 16,7 - - -

65 20,0 70,4 - - - 0 29,6 - - -

80 25,4 71,4 - - 37,7 0 29,6 - - 13,5

100 56,0 70,4 - - - 15,0 29,6 - - -

Кишмиш ЦГЛ хКишмиш уникальный

35 - 40,7 - - - . - 11,1 - - -

50 25,0 45,4 - - - 0 9,1 - - -

65 42,3 67,9 - - 23,2 0 32,1 - - 7,1

80 67,9 60,0 - - 35,6 8,7 36,7 - - 10,0

100 733 48,1 - - 61,4 0 25,9 - - 18,5

1-15-7-1 х Восторг

35 - 47,1 0 - - - 0 0 0 -

50 - 42,3 - 22,2 - - 0 - 0 -

65 28,5 48,1 - 0 - 25,0 3,7 - 0 -

80 - 56,0 - 28,6 - - 20,0 - 7,4 -

100 - 39,3 - 8,3 - - 3,6 - 0 -

1-15-7-1 х Кишмиш уникальный

35 - 0 0 - - - 0 0 - -

50 - 50,0 - - - - 3,6 - - -

65 - 50,0 - - - - 14,8 - - -

80 - 54,5 - - - - 18,1 - - -

100 - 54,0 - - - - 18,0 - - -

1-15-5-7 хРусбол

50 - - - 39,3 - - - - 0 -

65 - - 0 66,7 - - - 0 3,6 -

80 - - 8,9 9,1 1,7 - - 0 0 0

100 - - - 16,7 - - - - 0 -

1-15-5-7 х Кишмиш уникальный

35 - - 0 - 0 - - 0 - 0

50 - - 45,0 - 4,8 - - 5,0 - 0

65 - - 5,5 - 0 - - 0 - 0

80 - - 7,7 - 5,3 - - 0 - 0

100 - - 24,1 - 11,0 - - 6,9 - 2,1

В первый срок изолирования (35 дней) эмбриогенез либо полностью отсутствовал (1-15-7-1хКишмиш уникальный, 1-15-5-7хКишмиш уникальный), либо количество развившихся зародышей было довольно высоко, но нормальные растения получены лишь в 3,6-11,1 % случаев (при опылении сорта Кишмиш ЦГЛ).

В скрещиваниях с участием сорта Кишмиш ЦГЛ и формы 1-15-7-1 (оба $) увеличение числа дифференцированных зародышей и полученных из них растений отмечено при изолировании семяпочек в более поздние сроки (через 65100 дней после опыления).

Наиболее активное развитие зародышей в семяпочках от скрещивания 1-15-5-7хРусбол отмечено через 50 и 65 дней с момента опыления, а. в гибридной комбинации 1-15-5-7хКишмиш уникальный максимальное количество сеянцев получено из семяпочек последнего срока отбора.

Таким образом, при скрещивании сорта Кишмиш ЦГЛ (материнская форма) предпочтительна изоляция семяпочек через 80-100 дней после опыления, выделение семяпочек от опыления формы 1-15-7-1 оправдано уже после 65 дней с момента цветения. Выход гибридных сеянцев, полученных с участием формы 1-15-5-7, остается очень низким, независимо от срока введения семяпочек в культуру.

Анализ данных, полученных за годы наблюдений по всем изучаемым гибридным парам, свидетельствует о том, что в целом существует сильная нелинейная корреляционная зависимость между сроком изолирования семяпочек и выходом сеянцев (рис. 1).

40 35

п

8 зо

X

0)

о 25

х

ю 20

г

о

5- 50-О

« Количество зародыией ■ Коомество сеянцэв

Рисунок ^Зависимость уровня эмбриогенеза от срока изолирования семяпочек, 1991-95 гг.

Обоснование сроков изолирования семяпочек

Нами отмечено, что количество полученных сеянцев в большой степени зависит от срока изолирования и посева семяпочек на питательную среду. При этом для разных сортов предпочтительны различные сроки изолирования. В связи с этим встает проблема определения параметров ягод и семяпочек сте-носпермокарпических сортов винограда, в наибольшей степени характеризующих оптимальные сроки изолирования семяпочек для дальнейшего получения из них жизнеспособных сеянцев. На основании измерений ягод и семяпочек, а также учета количества нормальных семяпочек и рудиментов в ягодах, получены следующие результаты.

Увеличение размера ягод всех изученных сортов отмечено на протяжении 60-80 дней, но наиболее активный рост наблюдали в течение 50-60 дней после опыления.

Семяпочки сортов Восторг и Рубол растут на протяжении 80 дней, увеличиваясь за это время в 4-5 раз. Замедление темпов их роста отмечено через 4050 дней (у сорта Перлег - через 20 дней) после цветения.

У мягкосемянного сорта Русбол в течение всего периода наблюдений было больше нормальных семяпочек, чем рудиментов. Уменьшение количества нормальных семяпочек происходило у него постепенно в течение 80 дней (рис.2).

Начало деградации семяпочек бессемянных сортов отмечено через 30-40 дней после цветения. При этом в ягодах сорта Кишмиш уникальный нормальных семяпочек всегда было больше, чем рудиментов. У сорта Перлет через 50 дней после опыления число рудиментов в ягоде превышает число нормальных семяпочек.

Таким образом, торможение развития семяпочек у сортов III-IV класса бессемянности протекает медленно и проявляется через 70-80 дней после цветения. У сортов высокого класса бессемянности семяпочки раньше останавливаются в развитии и через 50 дней после опыления в ягоде становится больше рудиментов, чем выполненных семян.

Полученные результаты свидетельствуют о необходимости индивидуального подхода к выбору срока изолирования и посева семяпочек на питательную среду. Одним из критериев этого признака может служить соотношение количества нормальных семяпочек и рудиментов в ягоде. Исходя из этого, семяпочки сортов высокой категории бессемянности (Перлет) следует вводить в культуру в период до 50 дней с момента опыления, сортов III-IV класса бессемянно-сти (Кишмиш уникальный) - до 80 дней после цветения, а семяпочки сортов типа Русбол — в течение всего периода созревания и полной зрелости ягод.

Оптимизация состава питательной среды

Успех культивирования клеток тканей и органов в значительной мере зависит от правильного подбора питательной среды. В работе с семяпочками винограда исследователи применяли различные среды (В.Н. Новикова, 1979; D.I. Gray и др., 1987; ИА Павлова, 1999; Y. Elidemir A., Uzun H. J., 2000).

Рисунок 2 - Соотношение числа выполненных семян и рудиментов в ягодах винограда, 1994-96 гг.

Для посева семяпочек винограда нами испытаны среды Уайта и Нича, которые, по литературным данным, пригодны для культивирования семяпочек и зародышей плодовых и ягодных культур, а также винограда.

В наших исследованиях больше жизнеспособных зародышей по всем комбинациям скрещивания получено на среде Уайта. При этом отмечены различия между комбинациями скрещивания по отношению к питательной среде. Выход жизнеспособных зародышей Кишмиш ЦГЛхКишмиш уникальный на среде Уайта был в 2,5 раза выше, чем на среде Нича, а для гибридной пары Кишмиш ЦГЛхКоринка русская разница составила 5,3 раза. Более половины проанализированных семяпочек от скрещивания формы 1-15-7-1 с сортом Восторг на среде Нича содержали зародыши, но ни один из них в дальнейшем не развился, в то время как на среде Уайта все зародыши, обнаруженные в таких же семяпочках, были жизнеспособными (табл. 3).

Таблица 3 - Культивирование семяпочек на различных питательных средах

Питательная Комбинация Вскрьгго Наличие зародышей Жизнеспособные

среда скрещивания семяпочек в семяпочках зародыши

шт. шт. % шт. %

Кишмиш ЦГЛх Кишмиш уникальный 97 56 57,7 8 14,3

Нича Кишмиш ЦГЛх /Соринка русская 98 16 16,3 1 6,3

Г-15-7-1хВосторг 14 9 64,2 0 0

Всего 209 81 38,8 9 11,1

Кишмиш ЦГЛх Кишмиш уникальный' 97 48 49,5 17 35,4

Уайта Кишмиш ЦГЛх Коринка русская 100 24 24,0 8 33,3

Г-15-7-1хВосторг 7 2 28,6 2 100,0

Всего 204 74 36,3 27 36,5

Таким образом, наши исследования показали, что питательная среда Уайта более предпочтительна для выращивания семяпочек винограда, чем среда Нича.

Эмбриогенез при самоопылении стеноспермокарпических сортов винограда

Способ культивирования гибридных семяпочек in vitro позволяет получить потомство от скрещивания бессемянных сортов (D. Cain, R. Emershad, 1983; R. Spiegel - Roy and oth., 1985). R. Goldy, U. Amborn (1987) обращают внимание на выбор таких родительских сортов, между которыми возможны комбинации, дающие жизнеспособные эмбрионы и способные к культивированию в условиях in vitro.

В наших исследованиях критерием подбора родительских сортов для проведения дальнейших скрещиваний служил уровень эмбриогенеза в семяпочках, полученных от самоопыления этих сортов. Оценку эмбриогенеза проводили по прорастанию семян и наличию зародышей в непроросших рудиментах, выявленных в результате их рассечения. Семяпочки перед посевом на питательную среду измеряли и взвешивали для определения существования связи между величиной семяпочек и уровнем эмбриогенеза в них.

Установлено, что между параметрами рудиментов и уровнем эмбриогенеза существует прямая корреляционная зависимость, величина которой значительно варьирует по годам (табл. 4).

Таблица 4 - Корреляционная зависимость между параметрами семяпочек и уровнем эмбриогенеза, 1991-93 гг.

Параметры семяпочек Коэффициент корреляции

1991 1992 | 1993

Масса, мг 0,80 0,30 | 0,76

Длина, мм 0,73 0,38 0,67

Ширина, мм 0,78 0,30 0,83

Результаты исследований показали, что эмбриогенез полностью подавлен у сортов, масса рудиментов которых не превышает 10 мг. К ним относятся Белградский бессемянный, Таировский розовый, Перлет (V. vmifera L.) и сорт межвидового происхождения Коринка русская. В семяпочках сортов Вита, Розовый бисер и Кишмиш лучистый незначительное количество зародышей (2,4-3,8 %) отмечено лишь в 1991 году при массе семяпочек от 10,0 до 16,0 мг. В 1992 году, когда масса рудиментов сорта Вита составляла 6,0 мг, а сорта Кишмиш лучистый - 20 мг, зародыши в них не развились. Таким образом, в большинстве сортов V. vinifera L. нами отмечено угнетение эмбриогенеза.

У полученных в результате межвидовых скрещиваний Гибридов № 311, № 342 и сортов Кишмиш новочеркасский и Русбол во все годы наблюдений обнаруживали дифференцированные зародыши (табл. 5).

У этих сортов выше процент оплодотворенных зародышей и интенсивнее их прорастание и развитие. Это указывает на перспективность использования в селекции на бессемянность, с последующим культивированием семяпочек в условиях in vitro, сортов межвидового происхождения Кишмиш новочеркасский, Русбол и Гибридов № 311 и № 342.

Таблица 5 - Уровень эмбриогенеза в семяпочках стеноспермокарпических сортов при самоопылении, 1991-97 гг.

Сорт Количество проросших семяпочек, % / количество зародышей в непроросших семяпочках, %

1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997

Кишмиш лучистый 0/3,8 0/0 - - - - 0/0

Вита 0/2,7 0/0 - - - - -

Перлет - о/о 0/0 - - - 0,5/0

Белградский бессемянный 0/0 о/о

Мечта 0/16,7 - о/о 0/0 - - -

Таировский розовый (8-25-78) 0/0 о/о -

Розовый бисер 0/2,3 - - - - - -

Гибрид У-6 - - 0/10,5 - - - -

Гибрид VI-4 - - 0/57,9 - - - -

Коринка русская 0/0 о/о - - - - -

Русбол ¡26,2/59,5 0,9/2,8 3,5/9,1 0 / 23,8 3,6/21,7 - -

Кишмиш новочеркасский 0 / 50,0 0/19,3 0,3/9,4

Гибрид № 342 - /,1/31,1 0/13,6 1 - -

Гибрид № 311 - 0/37,5 0 / 47,4 - - t,9 / 52,0 -

Эмбриогенез в скрещиваниях между стеноспермокарпическими сортами винограда

Исследовано 30 вариантов скрещивания между стеноспермокарпическими сортами. Комбинационную способность выбранных пар оценивали по следующим показателям: прорастание семяпочек при культивировании in vitro, наличие зародышей в непроросших рудиментах, выход гибридных сеянцев (табл. 6).

Количество проросших семяпочек значительно варьирует в зависимости от родительских сортов. Наиболее дружное прорастание семяпочек характерно для комбинаций скрещивания с участием сорта функционально женского типа Кишмиш ЦГЛ (до 52,4 %).

Число семяпочек, содержащих неразвившиеся зародыши, характеризует потенциальные возможности эмбрионального развития той или иной гибридной комбинации. По этому признаку выделяются скрещивания Кишмиш ЦГЛ х Кишмиш уникальный и Кишмиш ЦГЛхКоринка русская, в которых выход сеянцев увеличился за счет развития на питательной среде зародышей, выделенных из не-проросших семяпочек. Их количество составило в среднем около 45 %. Значительно ниже показатели, полученные при опылении форм 1-15-7-1 и 1-15-5-7.

Таблица 6 - Развитие зародышей и выход сеянцев в скрещиваниях между стеноспермокарпическими сортами винограда, 1991-94 гг.

Прорастание Количество Выход

Комбинация скрещивания семяпочек, % семяпочек с зародышами, % сеянцев, %

среднее максимальное среднее максимальное средний максимальный .

1 2 3 4 5 6 7

Кишмиш ЦГЛ х 8а 16,4 45,2 48,2 15,5 22,8

Кишмиш уникальный

Кишмиш ЦГЛ х 5,3 10,7 45,1 52,5 18,8 20,0

Коринка русская

Кишмиш ЦГЛ х Русбол 26,2 52,4 37,8 45,0 4,0 5,7

1-15-7-1 хКишмиш 1,4 2,9 18,2 . 38,5 0 0

уникальный

1-15-5-7 х Кишмиш 1,4 2,8 11,2 17,2 9,3 12,5

уникальный

1-15-5-7 х Русбол 0,3 0,9 17,7 46,4 0,9 2,8

1-15-5-7 х Коринка 0 0 7,4 8,8 1,0 2,0

русская

Кишмиш лучистый X оа 0,4 4,8 8,7 1,9 2,0

Русбол

Белградский бессемян- 0 0 2,6 5,3 0 0

ный х Русбол

Мечта х Русбол 0 0 5,4 15,6 0,8 2,3

Использование в качестве материнских форм сортов V. лтпйёга, даже при скрещивании с сортом Русбол, отличающимся высокими показателями эмбриогенеза при самоопылении, не дает значительных результатов. Гибридные семяпочки практически не прорастали, число зародышей в них было низким (в среднем от 2,6 до 5,4 %). Максимальный выход сеянцев составил 2,0-2,3 %. О существенном влиянии на эмбриогенез материнской формы свидетельствуют результаты, полученные при изучении скрещиваний бессемянных гибридных форм межвидового происхождения с сортами Русбол (рис. 3) и Кишмиш новочеркасский (рис.4).

Рисунок 3 - Уровень эмбриогенеза стеноспермокарпических гибридных форм в скрещивании с сортом Русбол, 1995 г.

В 23-37-7-2 х Кишмиш новочеркасский Ш13-3-7-7 х Кишмиш новочеркасский ¡313-7-12-пк х Кишмиш новочеркасский Н Л/-9-4-4 х Кишмиш новочеркасский

Рисунок 4- Уровень эмбриогенеза стеноспермокарпических гибридных форм в скрещивании с сортом Кишмиш новочеркасский, 1996 г.

При использовании в качестве опылителя сорта Русбол, наибольшее количество проростков (до 70% в срок изолирования 65 дней) получено из семяпочек от скрещивания с формой 1У-9-4-4 (СВ 12-375хРусбол). Результативность скрещивания с сортом Кишмиш новочеркасский была значительно ниже. Наибольшее количество проростков также отмечено в случае использования в качестве материнской формы гибрида 1У-9-4-4, однако при скрещивании этой формы с сортом Русбол проросло от 10,5 % до 69,8 % семяпочек, в зависимости от срока изолирования, а с сортом Кишмиш новочеркасский - лишь 5,7 % семяпочек при посеве через 65 дней после опыления.

Использование в скрещивании в качестве материнской формы гибрида 13-7-12-пк, независимо от опылителя, малоэффективно.

Таким образом, результативность скрещиваний очень отличается в различных гибридных комбинациях и зависит от генотипа родительских сортов, погодных условий в период формирования генеративных органов, оплодотворения и постоплодотворения, срока изолирования семяпочек и степени их развития к моменту перенесения на питательную среду.

Влияние метеорологических условий на эмбриональное развитие семяпочек

Для определения степени влияния отдельных погодных факторов на эмбриогенез проведен корреляционный анализ зависимости уровня эмбриогенеза от суммы осадков и температурного режима в различные периоды вегетации. Проанализированы показатели эмбрионального развития семяпочек пяти гибридных комбинаций (Кишмиш ЦГЛхКишмиш уникальный, Кишмиш ЦГЛх Коринка русская, МечтахРусбол, 1-15-5-7хРусбол, 1-15-7-1хКишмиш уникальный). Данные, полученные за 3 года, обработаны методом корреляционного анализа (табл. 7).

Таблица 7-Коэффициент корреляции между эмбриогенезом и погодными факторами в различные периоды вегетации

Изучаемый фактор Коэффициент корреляции

Сумма активных температур в период от начала вегетации до цветения, ° С 0,49

Сумма осадков в период от начала вегетации до цветения, мм 0,51

Среднесуточная температура воздуха в мае, °С 0,55

Среднесуточная температура воздуха в июне, °С 0,66

Сумма активных температур за 2 недели до цветения, °С 0,69

Сумма активных температур в период цветения, °С 0,07

Сумма осадков в период цветения, мм 0,32

Установлена криволинейная зависимость различной степени связи между уровнем эмбриогенеза и изученными погодными факторами. Наиболее тесная зависимость выявлена между уровнем эмбриогенеза и суммой активных температур в период за 2 недели до начала цветения (г = 0,69) и среднемесячной температурой воздуха в июне (г = 0,66). В это время заканчивается формирование генеративных органов виноградного растения, происходит оплодотворение и начинается этап эмбриогенеза (развитие зародыша из зиготы).

Агробиологическая оценка гибридных сеянцев

Проводили полевые наблюдения за развитием сеянцев, полученных в гибридных комбинациях 1-15-7-1 (СВ 12-375хСверхранний бессемянный)хВосторг, Кишмиш ЦГЛхКоринка русская, Кишмиш ЦГЛхКишмиш уникальный, Кишмиш ЦГЛхРусбол, IV-9-4-4 [(СВ 12-375хВосторг)хРусбол]хРусбол.

Наиболее высокий уровень зимостойкости, по результатам перезимовки 1993-94 гг. (абсолютный минимум температуры воздуха - 26,7°С), отмечен у трех сеянцев из семьи Кишмиш ЦГЛхКишмиш уникальный и по одному сеянцу от скрещиваний Кишмиш ЦГЛхКоринка русская и 1-15-7-1хВосторг (распускание почек 75-91,2 %).

По срокам распускания почек и дате начала цветения сеянцы практически не различались. Более раннее созревание ягод отмечено у сеянцев из семьи Кишмиш ЦГЛхКоринка русская (начало созревания - последняя декада июля), у остальных сеянцев - на 1-2 недели позже.

Наибольший урожай получен у сеянца V-15-7-10 (Кишмиш ЦГЛ х Кишмиш уникальный). Этот же сеянец, вместе с сеянцем IV-2-1-5 (Кишмиш ЦГЛх Коринка русская), отличался более крупными гроздями, а сеянец 1V-2-1-5 еще и средним размером ягод (4 г). Ягоды остальных сеянцев были, в основном, мелкими, их средняя масса составляла около 1 г. Все сеянцы семенные, средняя масса семян от 39,7 до 68,2 мг.

В 1995 году выделен по первому плодоношению сеянец VI-15-1-2 из семьи Кишмиш ЦГЛхКоринка русская, отнесенный к Ш—IV классу бессемяннос-ти (средняя масса семени 17,0 мг, масса самого большого семени - 26,9 мг).

В 2003 году выделен сеянец из семьи Кишмиш ЦГЛхКишмиш уникальный, привитый на подвое Кобер 5ББ (посадка 2001 года), с ягодой массой 2,3 г и средней массой семени 30 мг (масса самого большого семени 49,7 мг). Масса семени родительских сортов: $ - 55 мг, с? - 11 мг. Урожай по первому плодоношению составил 0,7 кг, средняя масса грозди 140 г.

В результате скрещивания между стеноспермокарпическими сортами винограда и последующего культивирования семяпочек в условиях in vitro, выращены гибридные сеянцы, которые могут служить исходным материалом для дальнейшей селекции с целью получения гибридов высокого класса бессемян-ности, обладающих повышенной устойчивостью к неблагоприятным условиям окружающей среды.

На основании проведенных исследований разработан метод получения исходного материала для селекции бессемянных сортов из изолированных семяпочек в культуре in vitro, включающий в себя следующие этапы:

1. Подбор сортов для скрещивания. В качестве материнской формы рекомендован сорт Кишмиш ЦГЛ, отцовской - Кишмиш уникальный, Коринка русская, Русбол.

2. Гибридизация по схеме бессемянный х бессемянный.

' 3. Выделение гибридных семяпочек через 65-100 дней после опыления, дезинфекция ягод и семяпочек 0,8 %-ным раствором AgNC>3 с экспозицией 5-10 минут, посев на питательную среду Уайта.

4. Стратификация семяпочек при температуре воздуха +3+5°С в течение 3-4-х месяцев.

5. Культивирование в контролируемых условиях: температура воздуха +25+27°С, шестнадцатичасовой световой день при интенсивности освещения 23 тыс. люкс.

6. Получение проростков и пробирочных растений.

7. Вегетативное размножение сеянцев методом клонального микроразмножения.

8. Пересадка сеянцев на субстрат в торфоперегнойные горшочки.

9. Адаптация к нестерильным условиям.

10. Высадка растений в открытый грунт.

ВЫВОДЫ

1. Использование метода культуры изолированных семяпочек позволяет получить проростки и сеянцы от самоопыления стеноспермокарпических сортов винограда. Количество жизнеспособных семян от инцухтирования сортов V. vinifera L. Белградский бессемянный, Таировский розовый (8-25-78), Вита, Перлет, Розовый бисер и Кишмиш лучистый составило 0-3,8 %. Уровень эмбриогенеза сортов межвидового происхождения Русбол, Кишмиш новочеркасский, Гибрид № 311 достигал 50-60 %.

2. При использовании стеноспермокарпических генотипов в качестве родительских форм установлены значительные различия между комбинациями скрещивания по уровню эмбриогенеза. Слабый эмбриогенез отмечен в скрещиваниях, где в качестве материнской формы взяты сорта V. vinifera L. (Кишмиш лучистыйхРусбол, Белградский бессемянныйхРусбол, Мечтах Русбол). Количество семяпочек с жизнеспособными зародышами в скрещиваниях 1-15-5-7х Русбол, 1-15-5-7хКишмиш уникальный, 1-15-7-1хКишмиш уникальный, составило 11-18 %. Высокие показатели эмбриогенеза (37-45 %) отмечены при опылении сорта Кишмиш ЦГЛ пыльцой сортов Кишмиш уникальный, Коринка русская, Русбол.

3. Установлено, что уровень эмбриогенеза потомства от скрещиваний по схеме бессемянный х бессемянный в большей степени определяется генотипом материнской формы.

4. Повышение уровня эмбриогенеза обеспечивает проведение насыщающих скрещиваний. В 70 % семяпочек от опыления формы IV-9-4-4 [(СВ 12-375 хВосторг)хРусбол] пыльцой сорта Русбол развились зародыши.

5. Установлено, что эмбриогенез зависит от генотипа родительских сортов, срока изолирования семяпочек и степени их дифференциации к моменту посева на питательную среду.

6. При вводе в культуру in vitro семяпочек винограда установлена высокая эффективность применения азотнокислого серебра в качестве стерилизую-гцего агента. Двойная стерилизация (ягод и семяпочек, извлеченных из них) 0,8 %-ным раствором AgNC>3 в течение 5-10 минут позволяет сократить количество инфицированных семяпочек до 3,9-4,6 % в сравнении со 100%-ным заражением при обработке 10 %-ным раствором гипохлорита кальция с экспозицией 30 минут.

7. Выявлена сильная нелинейная корреляционная зависимость между сроком изолирования семяпочек и выходом сеянцев (R2= 0,89). Для увеличения выхода жизнеспособных растений зыделение гибридных семяпочек и ввод их в культуру следуег ос) ществлять через 65-100 дней после опыления (с учетом генотипа родительских сортов).

8. Сроки изолирования и посева семяпочек на питательную среду специфичны для каждой конкретной комбинации скрещивания или сорта и зависят от условий года. Критерием этого признака может служить соотношение нормальных семяпочек и рудиментов в ягоде. Учитывая это, "спасение" в культуре in vitro зародышей сортов высокой категории бессемянности (Перлет) следует осуществлять в период до 50 дней с момента опыления, сортов III-IV класса бессемянности (Кишмиш уникальный) - до 80 дней после опыления, сортов типа Русбол - в течение периода созревания и полной зрелости ягод. . ,

9. Испытание питательных сред выявило преимущество среды Уайга по сравнению со средой Нича для культивирования семяпочек стеноспермокарпи-ческих сортов винограда (количество развившихся зародышей увеличилось с 11,1% до 36,5%).

10. Установлено, что значительное влияние на эмбриогенез оказывают погодные условия в период формирования генеративных органов, оплодотворения и постоплодотворения. Корреляционный анализ зависимости эмбриогенеза от климатических факторов показал, что наиболее тесная связь существует между уровнем эмбриогенеза и суммой активных температур в период бутонизации (r = 0,69) и оплодотворения и постоплодотворения (r = 0,66).

11. Гибридный фонд пополнен новыми формами. Выделены бессемянные формы винограда: VI-15-1-2 (Кишмиш ЦГЛхКоринка русская) III-IV класса бессемянности с ягодой массой 1,7 г, средняя масса семени 17 мг и сеянец из семьи Кишмиш ЦГЛхКишмиш уникальный - масса ягоды 2,3 г, семени - 30 мг.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. С целью получения исходного материала для селекции на бессемян-ность рекомендуется использовать метод культуры изолированных семяпочек in vitro.

2. Для создания бессемянных межвидовых сортов винограда предлагается использовать в качестве материнской формы сорт Кишмиш ЦГЛ и гибридные формы 1-15-7-1 и 1-15-5-7 из семьи СВ 12-375хСверхранний бессемянный, отцовской - сорта Кишмиш уникальный, Русбол, Коринка русская.

3. Для усиления эмбриогенеза и увеличения популяции жизнеспособных сеянцев целесообразно проводить насыщающие скрещивания с сортом Русбол.

4. Выделение стеноспермокарпических семяпочек из ягод и ввод их в культуру рекомендуется проводить через 65-100 дней после опыления с учетом генотипа родительских сортов.

5. В качестве стерилизующего агента при вводе в культуру семяпочек винограда предлагается применять 0,8 %-ный раствор AgNoj.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Берникова Н.В., Дорошенко Н.П. Использование зародышей и семяпочек в селекции бессемянных сортов винограда // Совершенствование приемов возделывания винограда.-Новочеркасск, 1990.-С. 157-169.

2. Дорошенко Н.П., Берникова Н.В. Культура зародышей и семяпочек / Актуальные проблемы возделывания и переработки винограда. - Ялта, 1990. -С. 25-27.

3. Применение биотехнологических методов для создания и размножения селекционного материала винограда / Н.П.Дорошенко, Н.В.Берникова, Г.В. Соколова и др. // Методы комплексной оценки продуктивности и устойчивости сельскохозяйственных растений. - М, 1994. - С. 13.

4. Берникова Н.В., Дорошенко Н.П. Культура семяпочек "in vitro" в селекции бессемянных сортов винограда // Проблемы оценки исходного материала и подбор родительских пар в селекции плодовых растений. - Мичуринск, 1996.-С. 128-131.

5. Берникова Н.В., Дорошенко Н.П. Селекция бессемянных сортов винограда с использованием изолированных семяпочек "in vitro"//Progresul tehnico-stiintific in viticultura.-Chisinau, 1998. - C. 16-17.

6. Дорошенко Н.П., Берникова Н.В. Агробиологическая оценка сеянцев винограда бессемянного направления, полученных нетрадиционным способом // Материалы 7-ой международной научно-практической конференции. - Симферополь, 1998. - С. 282-283.

7. Дорошенко Н.П., Берникова Н.В., Соколова Г.В. Перспективы применения биотехнологии в виноградарстве // Материалы международной научно-практической конференции "Садоводство и виноградарство 21 века". - Краснодар, 1999.-Ч.4.-С. 81-83.

8. Дорошенко Н.П., Берникова Н.В., Соколова Г.В. Биотехнология в виноградарстве будущего // Виноград и вино России.-Спецвыпуск.-2000. - С. 32.

9. Берникова Н.В. Обоснование сроков изолирования семяпочек при селекции винограда на бессемянность в культуре т Л'йго//Виноград и вино России. - 2000. - № 3. - С. 43-45.

10. Берникова Н.В. Результаты селекции бессемянных сортов винограда в культуре т уйго//Перспективы внедрения современных биотехнологических разработок для повышения эффективности сельскохозяйственного производства. - Ставрополь, 2000. - С. 31.

11. Берникова Н.В. Эмбриогенез при самоопылении и скрещивании бессемянных сортов виноград // Материалы 2 Всероссийской научно-практической конференции "Современные достижения биотехнологии".- Ставрополь, 2002. -Т. 1.-С.166-167.

12. Берникова Н.В., Дорошенко Н.П. Применение регуляторов роста для активизации эмбриогенеза у стеноспермокарпических сортов винограда.// "Биотехнология 2003" - Сочи, 2003. - С. 9 -10.

Берникова Наталья Викторовна

ЭМБРИОКУЛЬТУРА СТЕНОСПЕРМОКАРПИЧЕСКИХ СОРТОВ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ СОРТИМЕНТА ВИНОГРАДА

Автореферат

Подписано в печать 24.02.2004. Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. л. 1. Уч.-изд. л. 1,33. Тираж 100 экз. Заказ 317.

Типография ЮРГТУ (НПИ) 346428, г. Новочеркасск, ул. Просвещения, 132 Тел., факс (863-52) 5-53-03 E-mail: typography@novoch.ru

i - 5470

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Берникова, Наталья Викторовна

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Бессемянность у виноградного растения

1.2 Биотехнологические основы селекции винограда на бессемянность

1.3 Резюме анализа литературных данных

2. Общая характеристика работы

2.1. Научная новизна и практическая значимость

2.2. Место, время проведения и предмет исследований

2.3. Почвенно - климатические условия

2.4. Метеорологические условия в годы наблюдений

2.5. Методика исследований

3. Результаты исследований

3.1 Стерилизация семяпочек

3.2 Сроки изолирования и введения семяпочек в культуру 58 3.2.1 Обоснование сроков изолирования семяпочек

3.3 Оптимизация состава питательной среды

3.4 Эмбриогенез при самоопылении стеноспермокарпических сортов винограда

3.5 Эмбриогенез в скрещиваниях между стеноспермокарпическими сортами винограда

3.6 Влияние метеорологических условий на эмбриональное развитие семяпочек винограда

3.7 Агробиологическая оценка гибридных сеянцев 94 Выводы 103 Список использованной литературы 106 Приложение

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Эмбриокультура стеноспермокарпических сортов для улучшения сортимента винограда"

Среди плодово-ягодных культур виноград занимает одно из первых мест по пищевой и диетической ценности. Многовековая практика его возделывания и селекционная работа способствовали созданию большого разнообразия сортов. Согласно последним данным мировые коллекции винограда насчитывают около 30 тысяч сортообразцов. Благодаря высокой практической ценности, среди этих сортов особое место принадлежит бессемянным. Наиболее широко они используются для производства сушеной продукции (кишмиша), потребления в свежем виде, приготовления вин, сока и других пищевых продуктов. Бессемянный виноград характеризуется высоким содержанием Сахаров и витаминов. Кроме того, благодаря отсутствию семян в ягодах, при технической переработке винограда увеличивается выход сока и виноматериалов, семена. Среди большого числа известных и описанных сортов группа бессемянных очень малочисленна (около 2 и в основном представлена мелкоягодными формами, относящимися к виду V. vinifera L. восточной группы Orientalis Negr., пригодными к возделыванию в регионах с теплым климатом, высокой суммой активных температур и длинным вегетационным периодом (районы Средней Азии, Иран, Турция, Афганистан и др.). В России лишь немногие районы Южного Дагестана пригодны для возделывания бессемянных сортов винограда. Селекция бессемянных сортов винограда наиболее широко развернута в США, Италии, странах бывшего Советского Союза (Узбекистан, Армения, Молдавия, Украина), а также в Испании, Австралии, Израиле, Болгарии, Венфии. В США получен целый ряд бессемянных сортов с использованием гибридов V. labruska: Ромулус, Эйнсет сидлис, Орландо сидлис, Сатурн, в которых отсутствует терпкий вкус, вызываемый фенольными соединениями, высокое содержание которых приходится на

Заключение Диссертация по теме "Плодоводство, виноградарство", Берникова, Наталья Викторовна

ВЫВОДЫ

1.Использование метода культуры изолированных семяпочек позволяет получить проростки и сеянцы от самоопыления стеноспермокарпических сортов винограда. Количество жизнеспособных семян от инцухтирования сортов Vitis vinifera L. Белградский бессемянный, Таировский розовый (8-2578), Вита, Перлет, Розовый бисер и Кишмиш лучистый составило 0 - 3,8 %. Уровень эмбриогенеза сортов межвидового происхождения Русбол, Кишмиш новочеркасский, Гибрид № 311 достигал 50 - 60 %.

2. При использовании стеноспермокарпических генотипов в качестве родительских форм установлены значительные различия между комбинациями скрещивания по уровню эмбриогенеза. Слабый эмбриогенез отмечен в скрещиваниях, где в качестве материнской формы взяты сорта V. vinifera (Кишмиш лучистый х Русбол, Белградский бессемянный х Русбол, Мечта х Русбол). Количество семяпочек с жизнеспособными зародышами в скрещиваниях 1-15-5-7 х Русбол, 1-15-5-7 х Кишмиш уникальный, 1-15-7-1 х Кишмиш уникальный, составило 11-18 %. Высокие показатели эмбриогенеза (37 - 45 %) отмечены при опылении сорта Кишмиш ЦГЛ пыльцой сортов Кишмиш уникальный, Коринка русская, Русбол.

3.Установлено, что уровень эмбриогенеза потомства от скрещиваний по схеме бессемянный х бессемянный в большей степени определяется генотипом материнской формы.

4. Повышение уровня эмбриогенеза обеспечивает проведение насыщающих скрещиваний. В 70 % семяпочек от опыления формы IV-9-4-4 [(СВ 12-375 х Восторг) х Русбол] пыльцой сорта Русбол развились зародыши.

5. Установлено, что эмбриогенез зависит от генотипа родительских сортов, срока изолирования семяпочек и степени их дифференциации к моменту посева на питательную среду.

6. При вводе в культуру in vitro семяпочек винограда установлена высокая эффективность применения азотнокислого серебра в качестве стерилизующего агента. Двойная стерилизация (ягод и семяпочек, извлеченных из них) 0,8 %-м раствором AgN03 в течение 5-10 минут позволяет сократить количество инфицированных семяпочек до 3,9 - 4,6 % в сравнении со 100%-ным заражением при обработке 10 % -ным раствором гипохлорита кальция (экспозиция 30 минут).

7. Выявлена сильная нелинейная корреляционная зависимость между сроком изолирования семяпочек и выходом сеянцев (R2 = 0,89). Для увеличения выхода жизнеспособных растений выделение гибридных семяпочек и ввод их в культуру следует осуществлять через 65 - 100 дней после цветения (с учетом генотипа родительских сортов).

8. Сроки изолирования и посева семяпочек на питательную среду специфичны для каждой конкретной комбинации скрещивания или сорта и зависят от условий года. Критерием этого признака может служить соотношение нормальных семяпочек и рудиментов в ягоде. Учитывая это, посев на питательную среду семяпочек сортов высокой категории бессемянности (Перлет) следует осуществлять в период до 50 дней с момента опыления, сортов III - IV класса бессемянности (Кишмиш уникальный) - до 80 дней после опыления, сортов типа Русбол - в течение периода созревания и полной зрелости ягод.

9. Испытание питательных сред выявило преимущество среды Уайта по сравнению со средой Нича для культивирования семяпочек стеноспермокарпических сортов винограда (количество развившихся зародышей увеличилось с 11,1 % до 36,5 %).

10. Установлено, что значительное влияние на эмбриогенез оказывают метеорологические условия в период формирования генеративных органов, оплодотворения и постоплодотворения. Корреляционный анализ зависимости эмбриогенеза от погодных факторов показал, что наиболее тесная связь существует между уровнем эмбриогенеза и суммой тепла в период бутонизации (г = 0,69) и оплодотворения и постоплодотворения (г = 0,66).

11. Гибридный фонд пополнен новыми формами. Выделены бессемянные формы винограда: VI-15-1-2 (Кишмиш ЦГЛ х Коринка русская) III-IV класса бесемянности с ягодой массой 1,7 г, средняя масса семени 17 мг и сеянец из семьи Кишмиш ЦГЛ х Кишмиш уникальный - масса ягоды 2,3 г, семени - 30 мг.

Практические рекомендации:

1. С целыо получения исходного материала для селекции на бессемянность рекомендуется использовать метод культуры изолированных семяпочек in vitro.

2. Для создания бессемянных межвидовых сортов винограда предлагается использовать в качестве материнской формы сорт Кишмиш ЦГЛ и гибридные формы 1-15-7-1 и 1-15-5-7 из семьи СВ 12-375 х Сверхранний бессемянный, отцовской - сорта Кишмиш уникальный, Русбол, Коринка русская.

3. Для активизации эмбриогенеза и увеличения популяции жизнеспособных сеянцев целесообразно проводить насыщающие скрещивания с сортом Русбол.

4. Выделение стеноспермокарпических семяпочек из ягод и ввод их в культуру рекомендуется проводить через 65 - 100 дней после опыления с учетом генотипа родительских сортов.

5. В качестве стерилизующего агента при вводе в культуру семяпочек винограда предлагается применять 0,8 % - ный раствор AgNo3.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Берникова, Наталья Викторовна, Новочеркасск

1. Апазова А.О. Индуцированная партенокарпия у винограда //Плодоводство и овощеводство. М., 1977. - Вып. 231. - С. 102-105.

2. Архангельский Н.С. Приемы управления ростом свеклы первого года жизни // Доклады ТСХА. 1967. - Вып. 163. - С. 57-66.

3. Баранов П.В. Стерильность у винограда и ее типы // Труды 1-го Узбекистанского Съезда по садоводству, виноградарству, огородничеству и пчеловодству. Самарканд, 1929.-С. 164-170.

4. Берникова Н.В. Эмбриогенез при самоопылении и скрещивании бессемянных сортов винограда // Материалы 2 Всероссийской научно — технической конференции "Современные достижения биотехнологии",-Ставрополь, 2002. Т. 1.- С. 166-167.

5. Бойко Г.Н. Рост изолированных зародышей плодовых растений в стерильной культуре // Сб. научн. тр. / ВНИИ садоводства им. И.В. Мичурина.- 1971.-№ 15.-С. 75-79.

6. Борзикова Г.М. Выведение сверхранних, ранних и бессемянных сортов винограда // Селекция устойчивых сортов винограда. Кишинев, 1982. - С. 1016.

7. Буркова Т. М. Влияние регуляторов роста на прогамную фазу оплодотворения у виноградного растения // Виноградарство и виноделие СССР.- 1990. Вып. 1 (4). - С. 27-30.

8. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964. - 270 с.

9. Волосовцев В.Д. Биология цветения и цитоэмбриология бессемянныхсортов винограда: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Ташкент. - 1967. - 19 с.

10. Волынкин В.А. Эффективность гибридизации у винограда // Виноград и вино России. 2000. - № 1. - С. 11-13.

11. Применение регуляторов роста растений в селекции винограда / Гадиев P.LLL, Шерер В.А., Мелешко Л.Ф. и др. // Виноградарство и виноделие СССР.- 1990.-Вып. 5 (8).-С. 14-18.

12. Изменчивость количественных признаков винограда, индуцированная химическими мутагенами / Гадиев Р.Ш., Шерер В.А., Мелешко Л.Ф. и др. // Виноград и вино России. 1995. - №2. - С. 18-20.

13. Гадиев Р.Ш. и др. Оптимальные сроки воздействия химическими мутагенами и фиторегуляторами роста на виноград / Р.Ш. Гадиев, В.А. Шерер, А.Ф. Воробьева // Виноград и вино России. 1998. - № 1. - С. 18-20.

14. Гадиев Р.Ш. и др. Способы повышения всхожести семян и жизнеспособности сеянцев винограда / Р.Ш. Гадиев, В.А. Шерер, А.Ф. Воробьева // Виноград и вино России. 1999. - № 3. - С. 24-25.

15. Голодрига П.Я. и др. Наследование признака бессемянности в гибридном потомстве винограда V. vinifera L. / П.Я. Голодрига, Л.П. Трошин, Л.И. Фролова // Цитология и генетика. 1985. - Т. 19. - № 5. - С. 372-376.

16. Голубинская Е.С. Культура изолированных зародышей пиона // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М., 1970. - С. 36-41.

17. Дорошенко Н.П. Биотехнологические методы ускоренного размножения и оздоровления, селекции бессемянных сортов и создания коллекций генофонда винограда: Автореф. дисс. . доктора с-х наук.-Новочеркасск. 1999. - 59 с.

18. Дорошенко Н.П., Кострикин И.А. Селекция бессемянных сортов винограда с использованием культуры семяпочек « ин витро » //Виноград и вино России. 1992. - № 1. - С. 14-18.

19. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта.-М.: Агропромиздат, 1985.351с.

20. Дудник Н.А., Моливер М.Г. Характер наследования бессемянности винограда в условиях юга УССР // Виноградарство. — Одесса, 1976. С. 105112.

21. Евсеева Р.П., Кравцов П.В. Влияние гиббереллиновой кислоты на прорастание изолированных зародышей яблони и груши в условиях стерильной культуры // Труды / ЦГЛ им. И.В. Мичурина. 1977. - Вып. 18. - С. 39-42.

22. Журавель М.С., Фролов А.И. О выведении бессемянных сортов винограда // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. 1960. - № 4.-С. 27-32.

23. Журавель М.С. Выведение сверхранних сортов винограда // Сорт в виноградарстве. М., 1962. - С. 73-84.

24. Журавель М.С. и др. Выведение бессемянных сортов винограда / М.С. Журавель, Г.М. Борзикова, И.П. Гаврилов // Сортоизучение и селекция винограда. Кишинев, 1976.-С. 15-29.

25. Занков 3. Состояние работы по созданию и расширению площадей под бессемянными сортами винограда в Болгарии // Вопросы развития столового виноградарства. Ташкент, 1964.-С. 180-187.

26. Здруйковская-Рихтер А.И. Получение сеянцев ранних сортов черешни путем воспитания зародышей на искусственной среде // Бюллетень Гл. ботан. сада АН СССР. 1955. - Вып. 22. - С. 56-67.

27. Здруйковская-Рихтер А.И. Воспитание зародышей плодовых растений на искусственной питательной среде // Морфогенез растений. М., 1961. - Т. 2. -С. 375-377.

28. Здруйковская-Рихтер А.И. Воспитание зародышей рано созревающих сортов персика in vitro // Труды / Гос. Никитский ботан. сад. 1962. - Т. 36. -С. 213-231.

29. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура зародышей в искусственных условиях как метод селекции рано созревающих сортов черешни, персика и груши // Сб. науч. тр. / Гос. Никитский ботан. сад,- 1964. Т. 37. - С. 256-270.

30. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура изолированных зародышей ипути её применения в биологических исследованиях // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений.- М., 1970. С. 20-29.

31. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура изолированных зародышей семяпочек и семян различных плодовых растений и аспекты её применения в прикладных целях// С.-х. биология. 1985. - № 3. - С. 57-61.

32. Зозикова Е. и др. Идентификация ауксинов и цитокининов в препарате из вытяжек семян винограда / Е. Зозикова, Т. Андонова, Д. Лилов // Физиология на растенията. 1989.-Т. XV.-№ 1 - С. 14-17.

33. Зотов В.В. Селекция винограда // Труды / Украинский НИИ им. К. А. Тимирязева. 1935. - № 6. - 87 с.

34. Иванов Й., Вълчев В. Някои резултати, получени от между сортовото кръетосване на семенни и безсеменни сортове лози // Градинарска и лозарска наука. 1968. - № 3. - С. 87-92.

35. Иванова Паройская М.И. Бессемянность среднеазиатских сортов винограда. - Ташкент, 1938. - 38 с.

36. Ивановская Е.В. Использование метода выращивания зародышей на искусственной питательной среде в работах по отдаленной гибридизации // Труды совещ. по отдаленной гибридизации растений и животных. 1960. - С. 164-174.

37. Изворска Н.Д. и др. Влияние регуляторов роста на формирование цветочных почек и развитие цветка в культуре изолированных генеративных тканей винограда /Н.Д. Изворска, Д.Ц. Лилов, Р.Н. Белчева// Физиология растений.- 1985.-Т. П. Кн. 4. - С. 39-45.

38. Казахмедов Р.Э. Получение бессемянных ягод у семенных сортов винограда V. vinifera L. путем применения регуляторов роста: Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук. Ялта, 1992,- 23 с.

39. Казахмедов Р.Э. Биологические основы формирования бессемянных ягод у семенных сортов винограда и способы их получения с использованием регуляторов роста. М.: Изд - во МСХА, 1996. - 148 с.

40. Казахмедов Р.Э. Физиологические основы формированиягенеративных органов и пути индуцирования бессемянности у семенных сортов винограда: Автореф. дисс. доктора биол. наук. М., 2000. - 46 с.

41. Казахмедов Р.Э. Зависимость реакции семенных сортов винограда при индукции бессемянности от гормонального баланса соцветий // Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях. Тезисы VI международн. конф. -М., 2001.-С. 95.

42. Калинин Ф.Л. и др. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений / Ф.А. Калинин, В.В. Сарнацкая, В.Е. Полищук Киев: Наукова думка, 1980. - 272 с.

43. Катаева Н.В., Бутенко Р.Г. Клональное микроразмножение растений. -М.: Наука, 1983.-96 с.

44. Кобель Ф. Научные основы плодоводства. М.: ОГИЗ, 1935. - 340с.

45. Ковалева Л.В. и др. Бессемянность: структура и метаболическая активность женского гаметофита винограда Кишмиш черный / Л.В. Ковалева, Н.К. Смирнова, Э.Л. Миляева // Физиология растений. 1997. — 44. - № 3. - С. 425-431.

46. Ковальчук И.Ю. Размножение почковых культур in vitro // Ускорение научно техн. прогресса в плодоводстве и виноградарстве и задачи молодых ученых. - Алма-Ата, 1987. - С. 23 - 25.

47. Кожин А.В. Кравцов П.В. Влияние пиридоксина на рост изолированных зародышей яблони и и груши в стерильной культуре // Физиология растений. 1973-Т. 20. - Вып. 4. - С. 696 - 699.

48. Клоконос Н.П. Возможность ускоренного размножения малины in vitro // Ускорение научно техн. прогресса в плодоводстве и виноградарстве и задачи молодых ученых. - Алма-Ата, 1987. - С. 34 - 36.

49. Коркодел А.В. Эмбриокультура в селекции винограда на раннеспелость и устойчивость: Автореф. дисс. . доктора с.-х. наук. — Кишинев, 1993.-35с.

50. Кострикин И.А. и др. Бессемянные сорта винограда в Нижнем Придонье / И.А. Кострикин, Л.А. Майстренко, В.А. Озерова // Виноград и вино

51. России. 1992. -№3.- С. 12-15.

52. Кострикин И.А. и др. Новый бессемянный сорт винограда Русбол / И.А. Кострикин, JI.A. Майстренко, И. Иванов, В. Вылчев // Садоводство и виноградарство. 1994. - № 1. - С. 14.

53. Кравцов П.В. Опыт применения культуры изолированных зародышей в селекции плодовых растений // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М., 1970. - С.41 - 44.

54. Кравцов П.В. Рост изолированных зародышей яблони на среде с различными концентрациями агара в стерильной культуре / П.В. Кравцов, JI.B. Кравцова, В.Д. Семенова // Бюлл. научн. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. -1971.-18-С. 43-48.

55. Кравцов П.В., Кравцова Л.В. Рост изолированных зародышей и семян плодовых растений в условиях стерильной культуры при добавлении в среду дрожжевого экстракта // Труды / ЦГЛ им. И.В. Мичурина. 1971 - Т. XII - С. 241-244.

56. Кравцов П.В. Действие регуляторов роста на дифференциацию и органогенез зародышей плодовых растений в стерильной культуре // Применение физиологически активных веществ в садоводстве. М.- 1974. -Вып. 2.-С. 87-94.

57. Культура изолированных зародышей и некоторые другие приемы выращивания растений "in vitro". Методич. рекомендации. - М., 1974. - 60 с.

58. Курсаков Г.А. Применение культуры изолированных зародышей при отдаленной гибридизации сливы // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений.- М., 1970. С. 47-50.

59. Курсаков Г.А., Дубовицкая Л.А. Культура in vitro зародышей косточковых плодовых растений на ранних стадиях эмбриогенеза // Бюлл. ЦГЛ. -1988.-№46.-С. 3-7.

60. Лазаревский М.А. Изучение сортов винограда Ростов н-Д: Изд-во ун-та, 1963.- 150 с.

61. Леопольд А. Рост и развитие растений. М.: Мир, 1968, - 494 с.62.

62. Литвак А.И. Кузьменко А.П. Культура клеток, тканей и органов винограда in vitro // Селекция устойчивых сортов винограда. Кишинев, 1982. - С. 116-138.

63. Майстренко Л.А. Селекция винограда на бессемянность // Актуальные проблемы возделывания и переработки винограда. Ялта, 1990. - С 8-10.

64. Майстренко Л.А. Наследование признаков при селекции бессемянных устойчивых сортов винограда // Виноград и вино России. 1997. -№ 5. - С. 1820.

65. Майстренко Л.А. Интродукция и селекция бессемянных сортов винограда в условиях северной зоны промышленного виноградарства Российской Федерации: Автореф. дисс. . канд. с. х. наук. - Новочеркасск, 1998.- 32 с.

66. Мержаниан А.С. Об обсыпании и мелкоягодности винограда // Изв. Одесск. винод. станции. 1919. -Т. 1.-№1.-С. 1-37.

67. Методические рекомендации по клональному микроразмножению винограда. Ялта, 1986. - 56 с.

68. Методические рекомендации по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико селекционных работах с плодовыми. -Мичуринск, 1987.-59 с.

69. Милюкевич М.П. и др. Использование эмбриокультуры для решения современных генетико селекционных задач / М.П. Милюкевич, П.В. Кухарчик, М.С. Чиковани // 6 Съезд Белорус, общества генетиков и селекционеров. - Горки, 1992. - С. 54.

70. Мирзахидов Б.Д. Наследование хозяйственно биологических признаков винограда при селекции на бессемянность // Труды / Узбекский НИИСВиВ им. P.P. Шредера.-2001.-Т. 50.-С. 104-110.

71. Негруль A.M. Генетические основы селекции винограда. Л., 1936.148 с.

72. Негруль A.M. Эволюция культурных форм винограда // Доклады Академии Наук СССР. 1938. - Т. XVIII. - № 8. -С. 585-588.

73. Негруль A.M. Происхождение культурного винограда СССР //

74. Ампелография СССР. 1946. - Т. 1. - С. 159-216.

75. Николаева З.В. К методике выращивания зародышей хлопчатника на искусственных питательных средах // Научные труды / Ташкентский ун-т. -1973.-Т. 479.-С. 271 -272.

76. Новикова В.М. Культивирование зародышей винограда в условиях in vitro в связи с селекцией: Автореф. дисс. . канд. с. х. наук. - Кишинев, 1979. -28 с.

77. Павлов А.Н., Смирнов A.M. Использование культуры изолированных зародышей для улучшения качества белка в зерне кукурузы // Биологические основы повышения качества семян с.-х. растений. М., 1964. - С. 73-78.

78. Павлова М.К., Банникова В.П. Преодоление перекрестной несовместимости при отдаленной гибридизации методом культуры незрелых гибридных семян // С-х биология. 1974. - Т. IX. - № 1. - С. 23-27.

79. Павлова И. А. Получение межвидовых гибридов в селекции на бессемянность с использованием культуры ткани in vitro // Виноград и вино России. 1999.-№2.-С. 11-12.

80. Павлова И.А. Особенности культивирования стеноспермокарпических семян винограда в селекции на бессемянность: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Ялта, 2003. - 16 с.

81. Павлюченко Н.Г. Исследование бессемянности винограда при межвидовой гибридизации // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдовы. 1991.-№ 10.-С. 27-28.

82. Павлюченко Н.Г. Характер наследования и изменчивости признака бессемянности гибридным потомством винограда при межвидовых скрещиваниях // Виноград и вино России. 1993. - № 5. — С. 24-26

83. Павлюченко Н.Г. Селекция устойчивых сортов винограда набессемянность методом межвидовой гибридизации: Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук.-Новочеркасск, 1996.- 26 с.

84. Погосян С.А., Хачатрян С.С. Селекция столовых и технических сортов винограда. Ереван: Айастан, 1983. - 198 с.

85. Понтович В.Э. Ткани репродуктивных органов в культуре in vitro // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений.- М., 1970. С. 720.

86. Раджабов А.К., Биляль И. Влияние регуляторов роста на качество и величину урожая винограда сорта Агадаи //Доклады ТСХА. 1996. - Вып. 267. -С. 184-191.

87. Ройчев В. Динамика развития семяпочек и ягод бессемянных и семенных сортов винограда (Vitis vinifera L.) // Растениевъд. науки. — 1994. -Вып. 31.-№5-6.-С. 135-139.

88. Сальникова Е.И. Гормональный баланс и его регуляция на ранних этапах эмбриогенеза винограда: Автореф. дисс. . канд. биол. наук.-М., 1988. -23 с.

89. Гормональный баланс и стимуляция развития бессемянных ягод винограда / Е.И. Сальникова, П.Б. Курапов, Р.Э. Казахмедов и др. // Регуляторы роста и развития растений. -М., 1997.-С. 121.

90. Сальникова Е.И. и др. Роль эпифитной микрофлоры в формировании гормонального баланса винограда / Е.И. Сальникова, П.Б. Курапов, Г.В. Годова // Доклады ТСХА. 1998. - № 269. - С. 12-18.

91. Динамика содержания гормонов в соцветиях винограда различных эколого-географических групп / Е.И. Сальникова, П.Б. Курапов, Р.Э. Казахмедов и др. // Виноград и вино России. 1998. - № 2. - С. 25-26.

92. Смирнов К.В. Методы селекции винограда на бессемянность // Селекция и семеноводство картофеля, овощных, плодовых и винограда. М., -1962.-С. 289-298.

93. Смирнов К.В. О методике выведения крупноягодных бессемянных сортов винограда // Сорт в виноградарстве. М., 1962. - С. 196-205.

94. Смирнов К.В. Краткие итоги и задачи селекции винограда по бессемянности // Труды / НИИСВиВ им. P.P. Шредера. 1964. - Т. 28. - С. 91102.

95. Смирнов К.В. Бессемянные сорта винограда и их селекция в зарубежных странах // Виноделие и виноградарство СССР.- 1965.- № 8. С. 29 -32.

96. Смирнов К.В. Биологические основы селекции бессемянных сортов винограда // Доклады на Юбилейной сессии Ученого Совета инстигута, посвященной 50-летию ВОС революции. Ташкент, 1970. - С. 64-73.

97. Смирнов К.В. Методика выведения крупноягодных бессемянных сортов винограда столово-кишмишного направления // Вопросы методики исследований в садоводстве и виноградарстве Ташкент, 1971. - Ч. 1. — С. 5961.

98. Смирнов К.В. Пути и методы селекции винограда на бессемянность // Селекция винограда. Ереван, 1974.-С. 154-168.

99. Смирнов К.В., Апазова А.О. Партенокарпия как одна из факультативных форм бессемянности винограда // Садоводство и виноградорство. Ташкент, 1975. - Т. XXXVI. - С. 31-44.

100. Смирнов К.В. Бессемянность винограда и селекция бессемянных сортов в Узбекистане: Автореф. дисс. . доктора с.-х. наук. -Ереван, 1977. 36 с.

101. Смирнов К.В. Селекция винограда на бессемянность // Научные труды / ТСХА. 1977. - № 231. - С. 90 - 97.

102. Смирнов К.В. Бессемянность у винограда и селекция бессемянных сортов // Итоги науки и техники. М., 1979. - Т. 4. - С. 3 - 49.

103. Смирнов К.В., Перепелицина Е.П. Селекция винограда на бессемянность // Труды / НИИСВиВ им. P.P. Шредера. 1985. - № 44. - С. 57 -64.

104. Смирнов К.В. Бессемянность винограда // Энциклопедия виноградарства. Кишинев, 1986.-С. 155.

105. Селекция винограда на бессемянность / Смирнов К.В., Кострикин И.А., Майстренко Л.А. и др. // Труды / ТСХА. 1996. - Вып. 267. - С. 160-168.

106. Бессемянные сорта и гибридные формы винограда / Смирнов К.В., Кострикин И.А., Майстренко Л.А. и др. Новочеркасск - Запорожье, 2002. - 49 с.

107. Смирнова Н.К. Биохимические особенности формирования ягод у семенного (Кара Джанджал) и бессемянного (Кишмиш черный) сортов винограда // Новые приемы возделывания плодовых растений. М., 1981. - С. 55-58.

108. Смирнова Н.К. Структурные и метаболические особенности формирования бессемянности у винограда: Автореф. дисс. канд. биол. наук.-М., 1984.-24 с.

109. Солдатов П.К. Бессемянные сорта винограда // Виноградарство и виноделие СССР. 1960. - № 7. - С. 34-37.

110. Стыцко С.А., Глотова Л.В., Теслюк Н.И. Применение кукурузного крахмала в культуре винограда in vitro // Виноград и вино России. 2000. -№3. -С. 48-49.

111. Уайт Ф.Р. Культура растительных тканей. М., 1949. - 155 с.

112. Угадышев М. Т. Клональное микроразмножение садовых культур на безагаровой основе. // Садоводство и виноградорство. 2000. - № 5-6. - С. 2021.

113. Урманцева В.В. Культивирование каллусных тканей на твердых питательных средах // Методы культивирования клеток. Л., 1988. — С. 222241.

114. Разработка научных основ и принципов селекции комплексно устойчивых столовых сортов винограда / В.Т. Усатов, Л.К. Киреева, В.П. Клименко и др. // Пути интенсификации столового виноградарства. — Ялта, 1989.-С. 55-75.

115. Хачатрян С.С. Раннеспелость у винограда: Автореф. дисс. . доктора с.-х. наук. Ереван, 1965. - 52 с.

116. Хачатрян С.С. и др. Разнообразие бессемянных гибридных сеянцев винограда по степени развитости рудиментов семян / С.С. Хачатрян, Э.Л. Мартиросян, В.И. Егизарян // Виноградарство и виноделие СССР. 1978. - № 7.-С. 32-34.

117. Цолова В. Микроспорогенез у бессемянных сортов винограда // Генетика и селекция. София. - 1990. - Т. 23. - №1. - С. 3-9.

118. Цолова В., Георгиева Й. Развитие пыльцевых трубок бессемянных сортов винограда // Генетика и селекция. София. - 1992. - Т. 25.- № 6. - С. 471 -475.

119. Първи резултати от проучването на Fi регенерати ин витро ембриокультури на безсеменни лози / Цолова В., Атанасов А., Иванов М. И др. // Лозарство и винарство. - 1996. - Т.45. - № 1. - С. 5-8.

120. Эмбриология растений: использование в генетике, селекции, биотехнологии. Т. 1. М.: Агропромиздат, 1990. — 509 с.

121. Якимов Л.М. Образование семяпочки в ceM.Vitacea // Морфо-функциональные аспекты развития женских генеративных структур семенных растений. Телави, 1984. - С. 72.

122. Атлас по эмбриологии винограда / Якимов Л.М., Литвак А.И., Балан Ю.Г. и др. // Кишинев: Штиинца, 1977.- 162с.

123. Abdul-Baki A.A. Hypochlorite and tissue sterilization. Planta, 1974. —V. 115.-№4.-P. 24-31.

124. Barlas M., Rammimg D.W., Davis H.P. In — ovule embryo culture: breeding technique to rescue seedless x seedlesstable grape // Australian Grapegrowen Winkmaker. Adelaide, 1988. - 292. - P. 123-125.

125. Barrit B.H. Ovule development in seeded and seedless grapes // Vitis. -1970.-V. 9.-P. 9-14.

126. Bertrand D., Weawer R. Effect of exogenous gibberellin on endogenous hormone content and development to "Black Corinth" grapes // Vitis. 1972. - V. 10.-P. 292-297.

127. Bhulhar J.S., Dhillon B.S. Gibberellin-like activity in berries of seeded and seedless grapes // Indian J. Hort. 1977. - Vol. 31. - P. 362-371.

128. Bordelor B.P., Moore I.N. Promoting stenospermic grape seed Frace development and germination with plantgrowth regulators // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1994. - V. 119. - № 4. - P. 719-726.

129. Bouguet A., Davis H. P. Culture in vitro de ovules et de embryos de vigne ( V. vinifera L.) appliguee a la selection de varietes de raisin de table sans pepins // Agronomie. 1989. - 9(6). - P. 565-574.

130. Brinduse S., Ionescu M. Cercetari preliminare privind folosirea cultwibor de embrioni in scopul optinerii de vita de vie // Cere. Genet, veget. anim. Bucuresti. -1992.-Vol.2.-P. 183-191.

131. Cain D.W., Emershad R.L., Tarailo R.E. In ovule embryo culture and seedling development of seed and seedless grapes ( V. vinifera L.) // Vitis. - 1983. -V. 1. - P 9-14.

132. Cancellier S. and oth. Coltura in vitro di vinaccioli e di embrioni nel miglioramento genetico delle uve da tavola / S. Cancellier, A. Costacurta, V. Catalano // Riv. Viticolt. e enol. 1990.-43.-№ 1.- P. 9-18.

133. Chebotarjeva M.S., Fardzinova I.M. In vitro embryo of Cerasus Mill. In breeding for resistance to Coccomyces hiemalls Higg // Embryology and seed reproduction: XI Int. symp., Leningrad, USSR, July 3-7, 1990. Leningrad, 1990. — C.30.

134. Dahmen W.I., Mock J.J. Effects of nutrientmedia composition on growth of seedlings from intact seeds and exised embryos of maize // Crop. Sci. 1972. -Vol. 12.-№4.-P. 549-550.

135. Darhan Romes lose and oth. Germinacao in vitro de sementes imaturas doporta-enxerto Citrus sunci Hort. ex Tan / Darhan Romes lose, Maacik Pasqual, Chalfun Nitlon N.I. Rev. Cers // Univ. fed. Vicosa. - 1997. - 44. - № 253. - P. 263-271.

136. Daulta B.S., Chauhan K.S. Metaxenia studies on some berry and seed characters in grapes (V. vinifera L.) // Indian J. Hort. 1984. -41.- P.23-39.

137. Davis A.R., Severson S. California Crop and Livestock Reporting Service / USDA Statistical Reporting Service. 1981. - P. 4.

138. Dunstan R.T. New grapes for old: California moves east / Am. Hort. Magazine.-1963.-42.-P. 169-172.

139. Dure L.S., Jensen W. A. The influence of gibberellic acid and indolelacetic acid on cotton embryos cultured in vitro // Bot. Gaz. 1957. - Vol. 118. -№4.-P. 254-261.

140. Einset J. Lekemont and Suffolk Red seedlees grapes named / N. J. Food and Life Science Bulletin. 1972. - 21 (4).

141. Emershad R.L. Ramming D.W. In ovule embryo culture of V. vinifera L. cv. " Tompson Seedless" // American Jornal of Botany . - 1984. - № 7(16). - P. 873-877.

142. Farmahan H.L., Pandey R.M. Hormonal regulation of las phase in seed and seedlees grapes (V. vinifera L.) // Vitis. V. 15. - № 2. - P. 227-235.

143. Gadiev R.Sh. and oth. Increasing the germination potential of grape seeds and vitality of seedlings / R.Sh. Gadiev, V.A. Sherer, A.F. VoroB eva // Vitis: Viticulat. and Enol. Abstr.- 2000.- V. 39.- № 1-2.- C.12.

144. Goldy R.G., Amborn U. In vitro culturability of ovules from 10 seedlees grape clnes // Hortscience. -1987. V. 22 - P. 92.

145. Embryo culture as means of introgressing seedleesness from V. vinifera to V. rotundifolia / R.G. Goldy, R.L. Emershad, D.W. Ramming and oth. // Hort.Science. -1988. -V. 27. P. 886-889.

146. Gray D.J. and oth. Camparison of Methodologies for in ovule Embryo Rescue of Seedlees Grapes / D.J.Gray, L.C. Fisher, J.A. Mortensen // Hort. Science. -1987. 22 (6). - P. 1334-1335.

147. Ovule culture to obtain progeny from hybrid seedlees bunch grapes / D.J • Gray, J.A. Mortensen, C.M. Benton and oth. // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1990. -1156.. P1019-1024.

148. Gustafson F.G. The cause of natural partenocarpy // Amer. J. Botany. -1939.-V. 26.-P. 135-138.

149. Hanfeng Ding, Guimei Qi Ovules culture and plant formation of hybrid progeny of seedless grape // Tropenlandwirt. 2001. - 102, Feb. - P. 147-152.

150. Kyungchul H., Stephens Jozen C. Carbohydrate and nitrogen sources affect respectively in vitro germination of immature ovules and early seedling growth of Impatiens platypetala // Plant Cell., Tissue and Organ Cult. 1992. - 31. - № 3. -P. 211-214.

151. Lammerts W.E. Use of embryo culture in rose breeding // Plants Gardens.- 1946.-Vol. 2.-P. 111.

152. Langilier P., Fournioux J.C. Endogenous abscisic aced in juvenile and adult grape ( Vitis vinifera L. cv. Pinot noir) // Vitis. 2000. -V. 39. - № 1. - P. 4748.

153. Ledbetter C.A., Ramming D.W. Seedlessness in Grapes / Horticultural. Reviews. 1989. -V. 11. - P. 159-184.

154. Relationship between embryo dormancy induction and abscisic acid lewel in Campbell Early grape seed during berry maturation / J.S. Liu., S. Horiuchi, T.

155. Ogata and oth. // Vitis: Viticulat and Enol. Abstr. 2000. - 39.- № 1-2. - P. 12.

156. Loomis N.H., Weinberger J.H. .Inheritance Sudies of Seedlessness in Grapes // J. Am. Soc. Hort. Sci. 1979. - 104 (2). - P. 181 -184.

157. Luckwill L.C. Hormonal aspects of fruit development in higher plants // Symp. Soc. Exptl. Biol. 1957. - 11. - P. 63-85.

158. Miflin B.I. A technique for the sterile culture of germinating barley embryos // J. Esp. Bot. 1969. - 20. - № 65.

159. Monnier M., Clippe A. Efeect of plant extracts on development of Capsella embryos in ovules cultured in vitro // Biol. Plant. 1992. - 34. - № 1-2.- P.31.38.

160. Moore J.N. "Mars" seedless grape // Hort. Science. 1985. - Vol. 20. - № « 2. - P. 313.

161. Moore J.N. and oth. "Saturn" seedless grape / J.N. Moore, J.P. Clare, J.R. Moorris // Hort. Science. 1989. - Vol. 24. - № 5. - P.861-862.

162. Mortensen J.A., Gray D.J. Orlando seedless grape// Hort. Science. 1987.- Vol. 22.-№2.-P. 327-328.

163. Mosheva G., Boshinova-Boneva I. Investigation on endogenous gibberellins during the vegetative cycle of grope vines // Fisiol. Rast. 1978. — Vol. 1.-P. 51-58.

164. Narayanaswamy S., Norstay K. Plant embryo culture // Jhe Bot. Rev. -1964.-№30.-P. 587-628.

165. Natural growth substances in Concord and Concord seedless grapes in 9 relation to berry development / J. Nitsch, C. Piatt, C. Nitsch and oth. // Amer. J.

166. Botany.- 1960. V. 47. - P. 556-568.

167. Nitsch J.P. Natural growth substances in Concord seedless grapes in relation to berry development // Amer. J. Botany.- 1980. Vol. 47. - P. 566-576.

168. Olmo H.P. Somatic mutation in the vinifera grape . III Scidlees Emperor. J. Hered. - 1940. - 31. - P. 211 -213.

169. Control of cereal embryogenesis and the regulation of gene expression by abscisic acid (ABA) / Quatrano R.S., Marcotle W.R., Litts C. and oth. // Biol. Bull.щ 1989.- 176.-№ 1.-P.65.

170. Reisch B.I., Remaily G.W. Einset seedless grape // Hort. Science. — 1986.- Vol. 21.-№ l.-P. 155-156.

171. Regine M. and oth. A new embryo rescue procedure for interspecific hybridization / M. Regine, E. Sansoles, G. Robbelen // Plant. Breed. 1990. — 104. -№ 3. - P. 258-261.

172. Reynolds A.G. and oth. " Simone" grape / A.G. Reynolds, L.C. Dendy, M.I. Bouthillier // Hort. Science. 1989. - Vol. 24. - № 5. - P. 866-867.

173. Hormonal profile in seeded and seedless table grape cultivars: Reflections ^ on development and maturation / A. Scienza, M Zamboni, C. Vasai and oth. //

174. Breeding of seedless grape cultivars / Smirnov K.V., Kostrikin I.A., Maistrenko L.A. and oth. // VI International Simposium on Grape Breeding. Ylta, Crimea. - 1994.-P. 100.

175. In vitro culture and plant formation from grape cultivars with abortive ovules and seeds / Spiegel- Roy P., Sahar N., Baron J. and oth. // J. Am. Soc. Hort. Sci.- 1985.- 110.-P. 109-112.

176. Stoltz L.P. Agar restriction of the growth of exiced mature iris embryos // J. Am. Soc. Hort. Sci. -1971.- Vol. 96. № 5. - P. 681 -684.

177. Stout A.B. Seedlessness in grapes New Jork State //Agric. Expt. Sta.

178. Tech. Bull. 1936. - 238. - P. 68.

179. Vilaplana M., Mullins M.G. Regeneration of grapevines in vitro. Formation of adventitions buds on hiypocotyls and cotyledons of somatie embryons // J. Plant Physiol. 1989. - 134/3. - P. 413-419.

180. Weinberger J.H., Loomis N.P. "Fiesta" grapes // Hort. Sci. 1974. - 9. -P. 603.

181. Wilson D.O. Evalution of chemical seed coat sterilants // Plant and Sail. -1976.-44.-№ 3.-P. 7.

182. Yalcin Elidemin A., Uzun H.I. Studies on the propagation of seedless and early grape cultivars by embryo culture // Vitis: Viticulat and Enol. Abstr. 2000. -39.-№ 1-2.-P. 15-16.