Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментально-биохимическое исследование индукции нервной ткани и хрусталика

ВАК РФ 03.00.11, Эмбриология, гистология и цитология

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Михайлов, Александр Трофимович

ВВЩЕНИЕ.

Глава I. МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ТКАНЕВЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ.

1.1. Терминологическое определение морфогенети-ческих тканевых взаимодействий.

1.2. Основные критерии морфогенетических тканевых взаимодействий.

1.3. Морфогенетические тканевые взаимодействия в развитии ЦНС.

1.4. Морфогенетические тканевые взаимодействия в развитии хрусталика.

Глава 2. "МОРФОГЕНЫ" - МЕДИАТОРЫ МОР^ОГЕНЕТМЕСКИХ

ТКАНЕВЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ.

2.1. Отношение к понятию морфоген.

2.2. Естественные морфогены.

2.3. Гетерогенные ("чужеродные") морфогены.

Глава 3. НЕЙРАЖЗУЩйЙ И ЛШЗОИНДУЦИРУЩИЙ АГЕНТЫ:

НАПРАВЛЕНИЕ И МЕТОДОЛОГИЯ ПОИСКА.

3.1. Подходы к идентификации нейрализующего и линзоиндуцирующего агентов.

3.2. Композиционное построение работы.

3.3. Объекты, материал и методы исследования.

3.3.1. Животные, получение зародышей, выделение тканей и органов.

3.3.2. Органная культура in vitro

3.3.3. Биохимические методы.

3.3.4. Иммунохимические методы.

Глава 4. ЭКТОДЕРМА РАННЕЙ ГАСТРУЛЫ RATTA TEMPORARIA

КАК ТЕСТ-ТКАНЬ ДЛЯ ВДЕНТИФИКАЦИИ НЕЙРАЛИЗУЮ-ЩЕГО И ЛШЗОШДУЩРУЩЕГО АГЕНТОВ.

4.1. Культивирование эктодермы гаструлы R. temporaria in vitro без воздействий.

4.2. Культивирование эктодермы ранней гаструлы R. temporaria in vitro В присутствии циклических нуклеотидов или "чужеродных" белков.

4.3. Сравнительный анализ белков эктодермы ранней гаструлы и нейрального зачатка.

4.3.1. Изо электрофокусирование (ИЭФ).

4.3.2. sds -электрофорез ( sds -ЭФ).

4.3.3. Иммунохимический анализ.

Глава 5. ИДЕНТИФИКАЦИЯ МОР$ОГЕНЕТИЧЕ(Ж-АКТИВНЫХ ЭКСТРАКТОВ ИЗ СЕТЧАТКИ И ГОЛОВНОГО МОЗГА КУРИНЫХ ЗАРОДЫШЕЙ.

5.1. Критерии идентификации индуцированных структур и условия биотестирования экстрактов.

5.2. Идентификация экстрактов с высокой морфоге-нетической активностью.

Глава 6. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-БИОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ М0РФ0-ГЕНЕТИЧЕСКИ-АКТИВНЫХ ЭКСТРАКТОВ ИЗ СЕТЧАТКИ И МОЗГА КУРИНЫХ ЗАРОДЫШЕЙ.

6.1. Природа агентов, определяющих морфогенети-ческую активность экстрактов из сетчатки и мозга куриных зародышей.

6.1.1. Определение доз ферментов и условий гидролиза.

6.1.2. Влияние ферментативной обработки на индуцирующую активность экстрактов.

6.2. Влияние ультрацентрифугирования на морфо-генетическую активность экстрактов из сетчатки и мозга куриных зародышей.

6.3. Сравнительный биохимический анализ экстрактов из сетчатки и мозга куриных зародышей.

6.4. Фракционирование экстрактов из сетчатки и мозга куриных зародышей и оценка морфогене-тической активности фракций.

Глава 7. ЭКОТЕРИМтМЬНО-БИОЖШЕСЖИЕ ПОДХОДЫ К ИДЕНТИФИКАЦИИ МОРФОГЕНЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГЛАЗНЫХ ПУЗЫРЕЙ КУРИНЫХ ЗАРОДЫШЕЙ.

7.1. Культивирование глазных пузырей куриных зародышей с эктодермой ранней гаструлы Rana temporaria in vitro

7.2. Электрофоретическое исследование белков глазных зачатков и сетчатки у ранних зародышей кур.

7.3. Определение морфогенетической активности электрофоретических фракций из глазных пузырей зародышей кур.

Глава 8. ИШМОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РЕАЛИЗАЦИИ ИНДУКЦИИ

ХРУСТАЛИКА И ЗАЧАТКА ЦНС В РАЗВИТИИ АМФИБИЙ.

8.1. Анализ появления кристаллинов после индукции хрусталика in vivo и in vitro

8.1.I. Электрофоретическая и иммунохимическая характеристика кристаллинов взрослых амфибий.

8.1.2. Иммунохимическая идентификация кристаллинов в хрусталике зародышей и в эксплантатах.

8.2. Иммунохимический анализ антигенов эктодермы гаструлы и нервной пластинки в развитии амфибий.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментально-биохимическое исследование индукции нервной ткани и хрусталика"

Эмбриональная индукция, - пожалуй трудно назвать еще какой-либо феномен, который привлекал к себе столь пристальное внимание исследователей-эмбриологов. Это не удивительно, поскольку явления эмбриональной индукции отражают, по-видимому, причинные механизмы дифференцировки многих тканей и органов. Расшифровка этих механизмов будет означать не только понимание, каким образом из яйца формируется организм . со множеством различно дифференцированных клеток, но и откроет реальные перспективы в "произвольном" управлении развитием. Посредством эмбриональной индукции обеспечивается нормальный ход дифференцировки и, следовательно, индуцирующие агенты можно будет использовать для коррекции отклонений от нормального развития, включая изменения, подобные опухолевому росту. Наконец, зная как "запускается" и поддерживается в развитии то или иное направление дифференцировки, мы сможем получать нужные клетки в достаточно больших количествах. Последнее существенно не только с экспериментальной точки зрения, но и может быть использовано для компенсации части утраченных клеток (см. Лопашов, 1974). Таким образом, анализ явлений, относимых в разряд эмбриональных индукций, имеет в перспективе реальные выходы в практику биологических и медицинских исследований. Быть может поэтому изучение механизмов эмбриональной индукции сохраняет свою актуальность уже на протяжении более чем полстолетия (см. Nakamura, Toivonen, 1978; Wiedemann, 1981, 1982).

Пародоксально, но несмотря на столь длительный период изучения, проблема эмбриональной индукции еще остается открытой в наиболее важных ее аспектах и пока трудно сделать какие-либо решающие обобщения (см. например Saxen, 1977 а,б,

1980 а,б). Вместе с тем, аргументированно экспериментально, что: I. эмбриональная индукция - это реально существующие процессы в развивающемся организме; 2. индукционные процессы опо-средованны специфическими медиаторами (веществами-индукторами). Своеобразный "прорыв" в этом направлении был достигнут западно-германскими эмбриологами и биохимиками под руководством профессора X. Тидемана ( Tiedemann, 1978, 1981, 1982), которым удалось выделить химически-чистый белок-индуктор, вызывающий образование в компетентной эктодерме производных энтодермы (т.н. вегетализирующий фактор). По-существу впервые было однозначно продемонстрировано, что в эмбриональных тканях позвоночных имеются белки, детерминирующие возникновение качественно новых направлений дифференцировки. Ценность этих исследований состоит также и в том, что они указывают, какие "звенья" проблемы доступны в настоящее время для экспериментального анализа, вне зависимости от сложности индукционных процессов в целом. Однако, вплоть до настоящего времени работы Тидемана и сотрудников с вегетализирующим фактором являются единственным примером успешного выделения морфогенетически-активных веществ у зародышей позвоночных. Следовательно, необходимы аналогичные исследования на других индукционных системах. Конечно, сущность индукционных процессов не может быть сведена только к веществам-индукторам. Вместе с тем, именно это направление исследований является, по-видимому, решающим для понимания природы и механизмов эмбриональной индукции. Проблема поиска и выделения эмбриональных индукторов не так проста, как кажется на первый взгляд. И это связано не только со сложностью биохимического фракционирования и выделения индуцирующих агентов из соответствующих эмбриональных тканей. Необходимо также иметь адекватную систему для биотестирования подобных агентов и уметь достоверно определять эффекты действия индукторов на клетки-мишени. Иначе говоря, идентификация и выделение эмбриональных индукторов может быть реализовано только в рамках комплексной экспериментальной программы, предусматривающей проведение исследований в нескольких взаимосвязанных направлениях.

Цель настоящей монографии - подвести итог нашим многолетним усилиям (1974-1984 г.г.) по идентификации и характеристике морфогенетических агентов в эмбриональных тканях. Естественно, что успех подобных исследований изначально определяется степенью феноменологической изученности тех индукционных процессов, медиаторы которых предстоит идентифицировать. Мы остановили свой выбор на двух примерах индукционных процессов, а именно, на индукции нервной ткани и хрусталика. Процессы индукции зачатка ЦНС и хрусталика наиболее полно изучены и охарактеризованы методами описательной и экспериментальной эмбриологии, что во многом облегчило планирование работы и позволило приблизить условия опытов к ситуациям, наблюдаемым в нормальном развитии. Вместе с тем, к моменту начала наших исследований (1974-1975 г.г.) работ по биохимической идентификации и выделению нейрализующих (и) и линзоиндуцирующих (I») агентов не проводилось. На основании предшествующих экспериментов Хаяши ( Hayashi, 1958, 1959) и Тидемана с соавт. ( Ti-edemann et al., 1961, 1963) можно было предполагать, что N -агенты, содержащиеся в эмбриональных и дефинитивных тканях, имеют белковую природу. Что же касается ь-агентов, то достоверных сведений об их свойствах и природе вообще не было см. Лопашов, Строева, 1963; Михайлов, 1978 а). Прямой экспериментально-биохимический анализ естественных тканей-индукторов ЦНС или хрусталика представлялся мало реальным, в силу ничтожно малых количеств исходного материала для фракционирования и биотестирования. Поэтому сам собой напрашивался традиционный прием с применением не естественных, а "чужеродных" тканей-индукторов. Однако, не было известно, какие эмбриональные ткани, доступные для биохимического фракционирования, можно использовать в качестве источников чужеродных ("гетерогенных") N - и L -агентов. В такой ситуации представлялось целесообразным провести скрининг биологической активности экстрактов из ряда эмбриональных тканей в надежде идентифицировать те из них, которые характеризовались бы выраженным ней-рализущжм или лшзоиндуцирущим действием. Подобному биотестированию подвергали экстракты из нервной ткани (сетчатки, головной мозг) куриных зародышей разных стадий развития (Михаилов, Горголюк, 1979 а, 1980 а). При этом изначально мы руководствовались рядом косвенных данных о том, что головной мозг и сетчатка зародышей может обладать нейрализующей или линзо-индуцирующей активностью ( Kawakami, I960; Саксен, Тойво-нен, 1963; Лопашов, Строева, 1963; Лопашов, Хоперская, 1970). Эти предположения в определенной степени оправдались и мы смогли идентифицировать и проанализировать экстракты и фракции с нейрализующей и линзоиндуцирующей активностью. Для биотестирования мы использовали эксплантаты эктодермы ранней гаструлы (ЭРГ) травяной лягушки ( Rana temporaria L. ). Вместе с тем, потенции и свойства ЭРГ Rana temporaria, как впрочем и других видов амфибий, были изучены к началу нашей работы достаточно поверхностно, с привлечением только традиционных экспериментально-эмбриологических приемов. В связи с этим возникла необходимость в проведении соответствующих исследований и в этом направлении. Наконец, вплоть до настоящего времени индукционные эффекты оцениваются, как правило, на гистологическом уровне. Однако морфогенез индуцированных структур, особенно в органных культурах, нарушен и для достоверной идентификации того или иного типа дифференцировки (в частности, хрусталиковой) необходимы дополнительные биохимические или им-мунохимические тесты.

Таким образом, перед нами встала задача разработать и реализовать экспериментальную программу, предусматривающую анализ индукции нервной ткани и хрусталика в следующих основных направлениях: I. изучение свойств и потенций реагирующей ткани; 2. идентификация, характеристика и выделение веществ-индукторов с нейрализующей или линзоиндуцирующей активностью; 3. анализ реализации индукции ЦНС и хрусталика в развитии и получение иммунохимических маркеров для идентификации соответствующих структур в эксплантатах. Изложению результатов наших исследований в этих направлениях и посвящена настоящая работа. Подавляющее большинство экспериментально-биохимических исследований выполнено нами на зародышах амфибий и птиц. Следовательно, полученные нами данные, а также соответствующие выводы, заключения и цредположения несут на себе определенные ограничения и не могут быть прямо экстраполированы на другие объекты.

Конечно, выполнение столь обширной программы не могло быть успешным без помощи, советов и критики со стороны моих коллег. Я чрезвычайно обязан своим соавторам - тем, с которыми работал ранее и работаю сейчас. Это касается, в первую очередь, Н.А. Горголюка, с которым были выполнены многие эксперименты. Другие помогли мне в разработке ряда методических приемов, облегчивших выполнение биохимических и иммунохими-ческих исследований. Из них мне хочется особо упомянуть А.А. Зотина, В.З. Закарейшвили, А.А. Караванова и Т.Э. Неума-на. Разработка такой проблемы,как эмбриональная индукция, невозможна без плодотворных дискуссий, которые послужили стимулом для более углубленного и корректного анализа затронутых в работе вопросов. В связи с этим мне хочется выразить благодарность Н.Г. Хрущову, Г.В. Лопашову, В.И. Старостину и Г.Г. Гаузе за постоянный интерес к работе и критические замечания, которые без сомнения способствовали ее улучшению. Я выражаю искреннюю благодарность профессору Л. Саксену, докторам Маркетте Каркинен-Яскелайнен, И. Виртанену и другим сотрудникам Отдела патологии Хельсинкского Университета, без содействия которых не могли быть выполнены опыты по биотестированию фракций из глазных пузырей куриных зародышей, а также эксперименты с использованием иммуноэлектроблоттинга.

Наконец, я приношу благодарность моей жене, Ирине Рей-Карро, без помощи и моральной поддержки которой я не смог бы уделять достаточно времени и сил научной работе.

Мы начали нашу работу, в полной мере сознавая все трудности, создаваемые разрозненностью наших знаний и своеобразием этой области биологии. Мы отдаем себе отчет, что материал, который мы привели в своей работе, мог быть освещен с различных точек зрения и что мы, по-видимому, не смогли избежать схематичности, пытаясь разделить имеющийся материал на определенные разделы". (Л. Саксен, 0. Тойвонен. Первичная эмбриональная индукция. М., 1963, стр. 16)

Заключение Диссертация по теме "Эмбриология, гистология и цитология", Михайлов, Александр Трофимович

ВЫВОДЫ

1. Для анализа молекулярных основ индукции нервной ткани и хрусталика предложена и реализована комплексная программа исследований, включающая: а) экспериментально-биохимическую характеристику тканей-мишеней (в основном, эктодермы ранней гаструлы Rana temporaria ); б) идентификацию, анализ и фракционирование экстрактов из эмбриональных тканей с нейрализую« щей и линзоиндуцирующей активностью; в) иммунохимический анализ реализации индукции зачатка ЦНС и хрусталика в раннем развитии амфибий и получение иммунохимиче ских маркеров для идентификации индуцированных структур.

2. Впервые проведен экспериментально-биохимический анализ свойств эктодермы ранней гаструлы Rana temporaria как тест-ткани для обнаружения нейрализующих и линзоинду цирующих агентов. Эта эктодерма, культивируемая в среде без добавок или в присутствии -циклических нуклеотидов, фетальной бычьей сыворотки, ^ -глобулина кролика, рибонуклеазы, не обнаруживает признаков образования нервной ткани или лентоидов. Однако, нейра-лизация эксплантатов под действием сыворотки крови морских свинок (33$) и т.н. фактора роста нервов (14$), а также сходство белковых (антигенных) спектров эктодермы гаструлы с нервной пластинкой, свидетельствуют о предсуществующей нейральной детерминации части ее клеток.

3. Впервые показано, что водные экстракты из эмбриональной нервной ткани (сетчатка, головной мозг) может быть использованы как источники нейрализующих и линзоиндуцирующих агентов. При биотестировании in vitro (на эктодерме ранней гаструлы R. temporaria ) большого числа экстрактов из тканей куриных зародышей разных стадий развития установлено, что высокой нейрализу-ющей активностью (80-100$) и способностью к индукции "свободных" лентоидов (5-40$) обладают экстракты из сетчатки и мозга зародышей 7-8 суток инкубации.

4. Экстракты из сетчатки и мозга зародышей кур 7-8 суток инкубации проявляют нейрализующую активность не только по отношению к эктодерме гаструлы r. temporaria , но и к бластодерме зародышей кур 18 часов инкубации. Эта бластодерма способна к "самонейрализации" in vitro (до 10$), а при добавлении экстрактов из сетчатки и мозга частота дифференцировки нервной ткани в эксплантатах достигает 60-100$.

5. Установлено, что нейрализующая и линзоиндуцирующая активность экстрактов из сетчатки и мозга зародышей кур 7-8 суток инкубации обусловлена недиализуемыми компонентами, устойчива к лиофилизации и обработке рибонуклеазой, но чувствительна к действию протеиназы К. Эффективный диапазон концентраций экстрактов из сетчатки и мозга составляет от 0,02 до 5,0 мг суммарного белка в 1,0 мл культуральной среды.

6. Нейрализующая активность водных экстрактов из сетчатки и мозга зародышей кур 7-8 суток инкубации связана исключительно с их растворимыми фракциями. Микросомные фракции этих экстрактов не оказывали нейрализующего действия на эктодерму ранней гаструлы амфибий. Напротив, линзоиндуцирующая активность характерна как для супернатантов, так и для осадков (после ПО 000 g ) экстрактов из сетчатки и мозга. Линзоиндуцирующей активностью, по отношению к эктодерме ранней гаструлы R. temporaria , обладали также белки фракции 80 s рибосом из зародышей кур 10 суток инкубации.

7. Нейрализующая и линзоиндуцирующая активность экстрактов из сетчатки и мозга зародышей кур 7-8 суток инкубации сохраняется после их электрофоретического фракционирования (электрофорез в агаровом геле). Нейрализующая активность характерна для всех электрофоретических фракций сетчатки и мозга. Напротив, линзоиндуцирующую активность проявляли, в основном, катодные фракции этих экстрактов.

8. С помощью изоэлектрофокусирования, разнообразных электрофоретических и иммуноэлектрофоретических методов показано, что экстракты и фракции из сетчатки и мозга зародышей кур 7-8 суток инкубации очень близки по спектру растворимых белков (пептидов). Возможно, что их сходные морфогенетические эффекты на эктодерму ранней гаструлы r. temporaria обусловлены присутствием в них одинаковых белков.

9. Предложен метод определения биологической активности электрофоретических фракций из эмбриональных тканей без их предварительной элюции из полиакриламидного геля. С помощью этого метода идентифицированы фракции глазных пузырей куриных зародышей, обладающие нейрализующей активностью по отношению к туловищной эктодерме 2-суточных зародышей кур in vitro . Линзоиндуцирующую активность фракций глазных пузырей зародышей кур выявить не удалось.

10. У зародышей R.temporaria И X.laevis выявлен латентный период между образованием зачатка хрусталика и началам синтеза специфических белков (криоталлинов), составляющий, в зависимости от температуры содержания зародышей, несколько суток. Эта закономерность прослежена также при индукции и дифференцировке хрусталика амфибий in vitro . Для идентификации дифференцировки хрусталика in vitro ' предложен метод, названный ретроспективной иммунофлуоресценцией, который позволяет выявлять кристаллины на предварительно окрашенных и заключенных в бальзам гистологических срезах.

11. Впервые исследован спектр водорастворимых белков и антигенов эктодермы гаструлы R. temporaria в процессе ее нейрализации. Антигены, обнаруженные в эктодерме ранней гаструлы и в нервной пластинке, характеризуются определенной ста-диоспецифичностью. Концентрация этих антигенов снижается по мере развития и часть из них иммунохимически не обнаруживается у зародышей поздних стадий и у взрослых амфибий.

12. Результаты предпринятого комплексного анализа свидетельствуют о том, что процессы индукции нервной ткани и хрусталика могут быть опосредованы растворимыми, высокомолекулярными соединениями, имеющими, по-видимому, белковую природу. Фракции с соответствующей морфогенетической активностью различаются по ряду свойств, что является аргументом в пользу существования качественно-различных индуцирующих агентов, определяющих дифференцировку разных тканей и органов в эмбриональном развитии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ: ИТОГИ И ПЕРСПЕКТИВЫ

В каждой из предшествующих глав мы обсуждали ряд вопросов, имеющих непосредственное отношение к полученным данным, а также проводили сравнение их с результатами аналогичных исследований других авторов. В этой главе мы не просто подведем краткий итог проделанной работе, но и попытаемся оценить значение и место наших результатов среди накопленной информации по биохимии индукционных процессов, приводящих к образованию зачатка ЦНС или хрусталика в эмбриональном развитии.

Прямое сопоставление данных, полученных разными авторами, не всегда возможно, поскольку подобные исследования выполняются на различных экспериментальных моделях с привлечением разных методических приемов. Кроме того, биохимия индукционных процессов еще не достигла такой стадии изученности, которая позволяла бы корректно сопоставлять различные результаты. В связи с этим, мы при изложении отдельных аспектов индукции ЦНС и хрусталика уделяли внимание не только результатам, но и тем приемам, с помощью которых эти результаты были получены.

В первом приближении идентификация морфогенетических веществ похожа на аналогичные исследования других биолошчес-ки-активных соединений (гормонов, ферментов и т.п.). Может быть поэтому общий методический план наших исследований подвергался незначительной коррекции по мере углубления анализа. Напротив, наши представления об явлениях, относимых в разряд эмбриональных индукций, претерпели, по мере накопления личного опыта, значительные изменения. Первоначально мы предполагали, что индукция ЦНС и хрусталика носит характер директивных морфогенетических взаимодействий и в этих процессах принимают участие агенты, качественно изменяющие судьбу клеток-мишеней (см. например, Михайлов, 1978 а). Мы и сейчас не отвергаем возможности таких директивных индукций, приводящих к качественно новым типам детерминации эмбриональных клеток. Однако, следует признать, что строго документированных примеров подобного рода воздействий пока немного. Может быть, это действительно редкие явления в развитии позвоночных, или же они имеют место на самых ранних этапах эмбриогенеза или "сдвинуты" в оогенез (см. Hieuwkoop, 1973; Tiedemann, 1977, 1978, 1982; Jacobson, 1982, 1983; Sawai, 1983; Gim-lich, Gerhart, 1984). Во всяком случае, основная масса экспериментов по изучению процессов индукции ЦНС и хрусталика выполнена на зародышах стадий поздней гаструлы - ранней нейрулы, т.е. в тот период, когда многие эмбриональные ткани уже детерминированы. На самом деле процессы детерминации энтодермы, мезодермы и т.д. начинаются гораздо раньше (см. главу I, 2, а также: Malacinski, Wooyoun, 1981; Cooke, Webber, 1983; Kageura, Yamana, 1983; Кап&Эа, Suzuki,1983; Smith, Malacinski, 1983; Prema Michael, 1984; Neff et al., 1984; Mikawa, Koseki, 1984; Imoh, 1984 a). Таким образом, вполне вероятно, что процессы индукции нервной пластинки или хрусталика представляют собой примеры "выбора", селективного предпочтения для дифференцировки уже детерминированных клеток (подробно это вопрос рассматривался в главе I). Такие представления вовсе не "отменяют" специфичности индукционных взаимодействий, т.к. именно в результате подобных взаимодействий и происходит выбор одного из нескольких возможных направлений дифференцировки. Правда, степень готовности клеток к фенотипической реализации может быть различной и, если процесс детерминации зашел достаточно далеко, то для "выхода" в гистотипическуюю дифференцировку может быть достаточно просто стимулирующих воздействий. Очевидно, что поиск медиаторов морфогенетических взаимодействий должен сопровождаться анализом свойств и потенций тканей-мишеней и характеристикой начальных этапов дифференцировки индуцированных клеток. В соответствии с этим, основная цель предпринятых нами усилий состояла в реализации экспериментальной программы, охватывающей основные звенья, присущие многим морфогенетическим тканевым взаимодействиям (см. рис. 67). Центральная задача нашей программы заключалась в идентификации экстрактов с нейрализующей и линзоиндуцирующей активностью, в анализе природы этой активности, в попытках выделения соответствующих морфогенетических агентов. Параллельно отрабатывались и другие, не менее важные "элементы" модели. Ясно, что идентификация и выделения индукторов во многом зависят от правильного выбора соответствующей тест-ткани. Вот почему основным опытам с экстрактами из эмбриональных тканей предшествовал экспериментально-биохимический анализ тканей, используемых для биотестирования.

9.1. Ткани для тестирования нейрализующей и линзоиндуцирующей активности

В своих экспериментах при биотестировании экстрактов (фракций) мы использовали эктодерму ранних зародышей амфибий и птиц (см. главу 3-7). Остановимся подробнее на эктодерме ранней гаструлы (ЭРГ) R. temporaria , т.к. именно эта

ДЕТЕН.0ШАЦ1Ш ВЫХОД

ТРАНС ДЕТЕВШНАШ1Я) В ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ

Идентификация гетерогенных и естественных N- и ^-агентов

Анализ потенция и свойств вк-тодесмы ранней гаструлы травяной лягушки Анализ дифференцировки зачат-I ка ЦНС и хрусталика в развитии

Рис. 67. Основные звенья морфогенетических тканевых взаимодействий и соответствующие им направления в анализе агентов с нейрализующей ( N ) и линзоиндуцирующей ( L ) активностью. ткань применялась для идентификации морфогенетически-активных экстрактов из тканей куриных зародышей. На основании результатов традиционного экспериментально-эмбриологического анализа (эксплантация фрагментов ЭРГ r. temporaria in vitro ) казалось, что она не содержит клеток, детерминированных к развитию в нейральном или хрусталиковом направлениях. Опыты по культивированию ЭРГ с циклическими нуклеотидами или с их дериватами также свидетельствовали в пользу этого предположения. Од-, нако, в ходе дальнейшей работы был получен -ряд данных о том, что ЭРГ R. temporaria все же не является идеальной тест-тканью для идентификации нейрализующих агентов (во всяком случае нейрализующих агентов с директивным характером действия). Изначально предполагали, что нейрализующий ( и ) и линзоинду-цирующий ( ъ ) агенты имеют белковую природу. В связи с этим была выполнена специальная серия опытов для выяснения, как реагирует ЭРГ R. temporaria на "неспецифическую" белковую нагрузку. Часть белковых препаратов (фетальная бычья сыворотка, $-глобулин кролика, рибонуклеаза, гонадотропный гормон осетровый) не оказывали нейрализующего или линзоиндуцирущего действия на эксплантаты ЭРГ. Вместе с тем, добавление к куль-туральной среде NGF или сыворотки крови морских свинок приводило к нейрализации части эктодермальных эксплантатов (10 и ЗС$ соответственно). Тот факт, что не все белковые препараты вызывали нейрализацию ЭРГ свидетельствует об определенной специфичности подобных эффектов. Однако, для оценки наших резульх Данные получены к.б.н. Н.А. Горголюком (Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова АН СССР). татов с гетерогенными N -агентами важно другое - опыты с белковой нагрузкой свидетельствуют о детерминации части клеток эктодермы гаструлы в нейральном направлении. Это предположение косвенно подтверждается и данными биохимического анализа белков (антигенов) эктодермы по мере ее нейрализации. В частности, было показано, что в нервной пластинке (трубке) присутствуют те же антигены, что и в ЭРГ R. temporaria Конечно, использованные для сравнительного анализа биохимические и иммунохимические методы обладают ограниченной разрешающей способностью и чувствительностью, о чем уже отмечалось в главе 4. Тем не менее, приходится констатировать, что на уровне мажорных белков, обнаруживаемых нашими методами, не выявлено качественных различий между эктодермой гаструлы и нервной пластинкой зародышей R. temporaroa . Следовательно, если подобные качественные различия и существуют, то их следует искать среди пула минорных белков. Действительно, концентрация некоторых "минорных" антигенов в эктодерме гаструлы резко возрастает по мере ее нейрализации. Аналогичные данные получены на зародышах X. laevis ( Stanisstreet, Deuchar, 1972) И, совсем недавно, на зародышах аксолотля ( Slack, 1984 а,б). Исследования Слека ( Slack, 1984 а,б) зачастую "перекрывают" результаты наших аналогичных экспериментов, хотя бы потому, что он использовал двумерный электрофорез по О'Фареллу и исследовал не только растворимые белки, но и гликопротеиды и гликолипиды. Ему удалось, в частности, выявить ряд белков, характерных для ЭРГ аксолотлей (эпимуцин, несколько типов кератинов), но отсутствующих в нервной пластинке. Кроме того, идентифицировано несколько белковых фракций^ которые более характерны для тканей нейрулы, чем для гаструлы зародышей аксолотля. Вместе с тем, даже при использовании двумерного электрофореза не было выявлено пептидов, специфичных только для нервной пластинки ( Slack, 1984 а).

Конечно, полученные нами данные можно трактовать под разным углом зрения, однако мы отдаем предпочтение следующему допущению. Отсутствие существенных качественных различий в спектрах белков между ЭРГ и нервной пластинкой может быть отражением "готовности" части эктодермальных клеток к нейрализации. В таком случае процесс нейрализации должен сопровождаться резким усилением синтеза соответствующих белков, что и наблюдалось в наших иммунохимических опытах (см. главу 4). Таким образом, мы полагаем, что в ЭРГ r* temporaria имеются клетки, детерминированные в нейральном направлении, но для начала фенотипической реализации дифференцировки нужны дополнительные воздействия на эту ткань. Соответственно, образование в эктодермальных эксплантатах нервной ткани лучше рассматривать как результат активации процессов гистотипической дифференцировки. Именно так мы оценили нейрализующие эффекты на ЭРГ R. temporaria экстрактов (фракций) из сетчатки и мозга куриных зародышей. Естественно возникает вопрос: насколько соответствуют такие представления положению вещей в нормальном развитии. При анализе литературных данных (см. главу I, 2) можно выделить несколько групп фактов, свидетельствующих о том, что в нормальном развитии функция зачатка хордомезодермы (дорзаль-ная губа бластопора) может быть сведена к "активации" уже детерминированных (в нейральном направлении) клеток эктодермы. Во-первых, задолго до начала нейруляции, в зародышах амфибий совершаются (на бластуле) процессы, приводящие к детерминации и дифференцировке мезодермы ( Nieuwkoop, 1969, 1973; Воterenbrood, Nieuwkoop, 1973). В свою очередь, индуцированный зачаток мезодермы контактирует непосредственно с клетками анимального полюса зародышей и может, на стадиях, предшествующих гаструляции, оказывать на них нейрализующее воздействие ( Asashima, 1980; Kan£da, Suzuki, 1983). Во-вторых, если ЭРГ тритонов или R. temporaria устойчива к "самонейрали-зации", то эктодерма зародышей других видов амфибий (аксолотлей) нейрализуется (в определенном проценте случаев) при эксплантации со стадии поздней бластулы - ранней гаструлы (т.е. она, или точнее, часть ее клеток детерминирована в нейральном направлении еще до гаструляции, см. Lrfvtrup, Perris, 1983; Slack, 1984 б). В-третьих, в клетках ЭРГ зародышей амфибий (в том числе и у тритонов) обнаружены N-агенты в неактивной (маскированной) форме ( Tiedemann, 1982; John et al., 1984). Имеется достаточно экспериментальных данных, позволяющих полагать, что естественные и -агенты связаны с внутриклеточными мембранами, белками цитоскелета, а процессы нейральной индукции и активации N -агентов являются мембра-НО-зависимыми (см. Tiedemann, 1982; Gualandris et al., 1983; Janeczek et al#, 1984; John et al., 1984; Yamamoto et al., 1981). В свете этих данных становится объяснимым (в определенной степени) феномен "самонейрализации" эксплантатов эктодермы гаструлы тритонов под действием конка-навалина А, солей лития, мочевины и т.д. Не исключено, что эти вещества, действуя посредством различных механизмов, приводят к высвобождению (активации) N -агентов, уже присутствующих в эктодермальных клетках (см. Suzuki, 1983; Lrfv-trup, Perris, 1983; Takata et al., 1983, 1984). Наконец, имеются достаточно убедительные данные Джекобсона ( Jacobson, 1982, 1983) и ДРУГИХ авторов ( Takasaki, Ose, 1984; Imoh, 1984 (3), свидетельствующие о ранней "компарт-ментализации" и детерминации презумптивных нервных клеток в развитии амфибий. Не исключено, что процесс директивной ней-ральной индукции "сдвинут" на более ранние сроки развития, чем стадия гаструлы (см. Imoh, 1984 а,б). Во всяком случае наш вывод о возможной нейральной детерминации части клеток ЭРГ у R. temporaria соответствует многим экспериментальным данным, полученным на зародышах амфибий. Дело, правда, осложняется тем, что ЭРГ амфибий представляет собой гетерогенную популяцию* клеток (см. главу 2, а также: Ave et al,,I968;

Slack, 1984 б). Поэтому вероятно, что под действием дорзалъ-ной губы бластопора в процесс нейрализации вовлекаются также клетки, не имевшие нейральной детерминации. Таким образом, процессы, приводящие к образованию зачатка ЦНС, могут состоять в активации нейральной дифференцировки уже детерминированных клеток, а также в вовлечении в нейрогенез клеток с иной судьбой. Следует особо подчеркнуть, что, если ткань и проявляет в эксперименте какие-либо директивные индуцирующие свойства, то это еще не является однозначным доказательством реализации подобных ее свойств в нормальном развитии. В частности, дор-зальная губа бластопора может индуцировать ЦНС в вентральной эктодерме гаструлы амфибий, которая в нормальном развитии не принимает участия в нейрогенезе и не содержит, по-видимому, клеток, коммитированных в нейральном направлении ( Smith, Slack, 1983; Jacobson, 1984). В этих опытах налицо директивное нейрализующее действие зачатка хордомезодермы на клетки вентральной эктодермы. Однако, в нормальном развитии, он влияет на дорзальную эктодерму гаструлы, часть клеток которой, возможно, детерминирована в нейральной направлении (во всяком случае, у зародышей аксолотлей). Аналогичным образом, зачаток глаза (глазной пузырь), проявляющий в эксперименте свойства хрусталикового индуктора по отношению к туловищной эктодерме, в нормальном развитии действует на головную эктодерму, часть клеток которой детерминирована к дщфференцировке в хрусталик ( Karkinen - Jaaskelainen, 1978 а,б; Барабанов, Федцова, 1982). Следовательно, адекватная трактовка действия того или иного индуктора (будь это ткань, фракция, экстракт или индивидуальное вещество) во многом определяется свойствами и потенциями реагирующих клеток. При этом не следует забывать, что в эксперименте иногда используют иную реагирующую ткань, чем те клетки-мишени, которые взаимодействуют с индуктором в нормальном развитии.

Конечно, основным критерием детерминированности является "самостоятельная" (строго определенная) дифференцировка ткани, эксплантированной in vitro или пересаженной в иное тканевое окружение. Другими словами, детерминированная ткань способна развиваться только в одном направлении, компетенция к иным . дифференцировкам у нее утрачена. С этой точки зрения ЭРГ R. temporaria не содержит клеток, детерминированных в нейраль-ном направлении, т.к. при культивировании in vitro без воздействий или в присутствии циклических нуклеотидов и некоторых белковых растворов она не образует нервную ткань. Следует, однако, подчеркнуть один момент, имеющий существенное значение для оценки свойств ЭРГ R* temporaria . Мы склонны рассматривать детерминацию как процесс, а не как одномоментное, "скачкообразное" изменение свойств клеток. Это означает, что состояние жесткой детерминированности не "задается" сразу, а д о ст и г а е тс я постепенно в ходе развития (см. Уоддингтон, 1947). Следовательно, на ранних этапах процесса детерминации ткань еще не способна к самостоятельной дифференцировке и для соответствующего гистотипического проявления она нуждается в дополнительных пермиссивных воздействиях. Так, например, эпибласт куриных зародышей не образует лентоиды при эксплантации in vitro , но проявляет линзообразующие свойства, если его скомбинировать с мезенхимой различного происхождения ( Mi-zuno, 1972 а,б). Нефрогенная мезенхима зародышей мышей морфологически не отличима от мезенхимы других паренхиматозных органов, но она способна к образованию почечных канальцев, если ее подвергнуть воздействиям ряда эмбриональных тканей, которые не являются индукторами почки в нормальном развитии ( Saxen et al,,I98I). В соответствии с этим мы подразделяем процесс детерминации на период лабильной ("гистотипически-скрытой") и жесткой, необратимой детерминации. Другие авторы обозначают состояние лабильной детерминации как "предетерми-нацию" (см. например, Saxen et al», 1981). Теперь вернемся еще раз к нашим опытам с ЭРГ r. temporaria . Эта эктодерма не способна к самодифференцировке в нервную ткань, но она ней-рализуется (в определенном проценте случаев) цри действии ttgf или сыворотки крови морских свинок. Отметим, что этот процесс охватывает только часть клеток эктодермы, поскольку в нейрали-зованных эксплантатах мы всегда наблюдали образование также эпидермиса и присосочной ткани. Мы предполагаем, что часть клеток ЭРГ R, temporaria детерминированна в нейральном направлении, но для соответствующей гистотипической дифференцировки нужны дополнительные пермиссивные воздействия. Наконец, следует помнить и о т.н. "эффекте массы". По-видимому, способность уже детерминированных тканей к гистотипической диф-ференцировке зависит от определенного минимального числа детерминированных клеток (см. Саксен, Тойвонен, 1963). Возможно, что в ЭРГ R. temporaria мало клеток, детерминированных в нейральном направлении и поэтому она не способна к самоней-рализации in vitro . Вместе с тем, не исключено, что добавление к культуральной среде некоторых белков способствует увеличению числа таких клеток, что и приводит, в конце концов, к развитию нервной ткани в эксплантатах.

Теперь остановимся на линзообразующих свойствах ЭРГ R. temporaria . В подавляющем большинстве контрольных опытов образования свободных (изолированных) лентоидов в этой эктодерме не наблюдалось (случаи образования лентоидов в составе тканевых комплексов не учитывались, т.к. они могли быть следствием вторичных индукций в пределах эксплантатов, см. главу 4). Присутствия кристаллинов в эктодерме гаструлы R. temporaria выявлено не было. Все это позволяет думать, что эта ткань не содержит клеток, коммитированных к развитию в хрусталик. Лишь один 'факт "не вписывается" в рамки этого заклюй чения. В частности, при действии на ЭРГ R. temporaria дибу-тирил-цАМФ мы наблюдали развитие в одном эксплантате 2-3 свободных лентоидов и эпидермиса без признаков каких-либо других дифференцировок. У нас не имеется сколько-нибудь серьезных объяснений этих результатов, поскольку это был единичный случай из многих контрольных экспериментов (см. главу 4). Но даже если допустить, что в ЭРГ R» temporaria имеются клетки, детерминированные в хрусталиковом направлении, то их число, по-видимому, весьма незначительно по сравнению, например, с клетками, способными к нейрализации при белковой нагрузке. В работах других авторов (Хоперская, 1973, 1976; Детлаф, 1983) также не содержится упоминаний об образовании свободных лентоидов в эксплантатах ЭРГ R. temporaria . Поэтому мы склонны рассматривать формирование свободных лентоидов в этой ткани как пример директивных индуцирующих влияний. Из всех исследованных нами индукторов лишь несколько вызывали образование в эксплантатах ЭРГ свободных лентоидов: экстракты (элек-трофоретические фракции) из сетчатки и мозга 7-8-суточных зародышей кур, а также белки фракции 80 s рибосом из зародышей кур 10 суток инкубации. Кончено, не следует думать, что последние являются хрусталиковыми индукторами в нормальном развитии. Линзоиндуцирующая активность белков фракции 80 s рибосом проявлялась только при их тестировании в "гетерологич-ной" системе (т.е. на ЭРГ амфибий). При тестировании в гомологичной системе (т.е. на бластодерме 18-часовых зародышей кур) эти рибосомные белки проявляли только нейростимулирующее действие. Таким образом, белки фракции 80 s рибосом выступают только как аналоги (по конечному действию) естественных

L -агентов, присутствующих в тканях зародышей амфибий. При этом сходство может быть ограничено не всей молекулой, а только "морфогенетическими детерминантами", идентичными детерминантам естественных L -агентов (см. Михайлов, 1978 а).

Таким образом, эктодерма ранней гаструлы R. temporaria может быть использована для идентификации N - и L -агентов, но ее реакции на соответствующие воздействия являются отражением по-видимому, различных процессов. С другой стороны, очевидно, что требуются дополнительные усилия для изучения свойств и клеточного состава эктодермы гаструлы амфибий. Одно из направлений подобных исследований должно, на наш взгляд, заключаться в попытке получения однородных агрегатов (клонов) из этой ткани. Для этих целей вполне реально использовать обычные методы диссоциации и реагрегации клеток эктодермы (см. например, Грунц, 1978-а,б) или же можно применять эдектрофорети-ческие методы разделения клеток (см. Ave et al., 1968). Во всяком случае, без "унификации" клеток-мишеней (по свойствам, потенциям и т.п.) невозможен корректный анализ ни сущности детерминации реагирующей ткани, ни морфогенетических агентов, обеспечивающих подобные процессы. До тех пор пока мы будем оперировать реагирующей тканью с позиций "черного ящика", мы будем вынуждены получать лишь приблизительную, зачастую неточную, информацию о морфогенетически-активных веществах и механизмах их действия.

9.2. Идентификация и свойства нейрализующего и линзоиндуцирующего агентов

Основное внимание в работе было уделено идентификации и анализу свойств т.н. гетерогенных индукторов, проявляющих нейрализующую или линзоиндуцирующую активность по отношению к ЭРГ R. temporaria in vitro . Это потребовало выполнения разнообразных, но связанных между собой серий экспериментов (см. рис. 68). Подведем краткий итог нашим усилиям в этом направлении. На основании предварительного биотестирования большого числа тканевых экстрактов, были идентифицировании два экстракта, характеризующиеся очень высокой нейрализующей активностью, а также способностью к индукции в эктодерме гастру

ЗАРОДЫЫ. КУР

5-18 суток инкубации т выделение сетчатки, мозга и печени обработка протеиназой К и рибонуклеазой гомогенизашя.а центрифугирование, 20 ООО gj-^супернатанты лиофилизация идентификация наиболее актив--|ншс экстрактов в плане индук-[ции нервной ткани или лентоидов центрифугирование Т супернатанты * осадки

ЭРГ]

ЭКСТРАКТЫ ИЗ ^ СЕТЧАТКИ И МОЗГА ЗАРОДЫШЕЙ СУТОК ИНКУБАЦИИ электрофорез в геле агвра * ФРАКЦИИ | элкция ♦ диализ I концентрирование осадки © строфокусирова-DS -электрофоизоэлект] ние, SDs pes, иммуноэлектрофо-рез, иммуноэлектро-блоттинг диализ бластодерма зародышей кур 18 часов инкубации изоэлектрофокусирование SDS -электрофорез

Рис. 68. Схема основных серий экспериментов по идентификации и характеристике экстрактов с нейрализующей и лин-зоиндуцирующей активностью.

ЭРГ - тестирование биологической активности экстрактов (фракций) на эктодерме ранней гаструлы Rana temporaria in vitro. лы свободных лентоидов (экстракты из сетчатки и мозга зародышей КУР 7-8 суток инкубации, см. рис. 68). Идентифицированные нами я - и ъ -агенты не связаны прочно с клеточными мембранами и могут быть экстрагированы из сетчатки и мозга куриных зародышей дистиллированной водой. Оказалось, что морфогенети-ческая активность этих экстрактов сохраняется после лиофили-зации и обусловлена их недиализируемыми компонентами. В дальнейшем показано, что нейрализующая и линзоиндуцирущая активность этих <экстрактов чувствительна к протеолитическому гидролизу, но не изменяется после обработки экстрактов рибонукле-азой. Нейрализующая активность экстрактов связана исключительно с растворимыми белками. Кстати, белки рибосом куриных зародышей, плохо растворяющиеся в водно-солевых растворах, не оказывали какого-либо нейрализующего действия на ЭРГ R. temporaria in vitro . Шесте с тем, линзоиндуцирующая активность характерна как для супернатантов, так и для осадков этих экстрактов (после центрифугирования при ПО ООО g ). Обнаружено значительное сходство белков (пептидов) сетчатки и мозга 7-8-суточных зародышей. Не исключено, что сходство мор-фогенетического влияния этих экстрактов на ЭРГ R. temporaria обусловлено наличием в них одинаковых пептидов. Исследованные экстракты из сетчатки и мозга куриных зародышей содержат не только ъ - и N -агенты, но также вещества, вызывающие образование хрящей в эктодерме гаструлы. На основании опытов с обработкой экстрактов ферментами (см. главу 6) можно предположить, что подобная активность экстрактов также связана с белками. Кроме того, в этих же экстрактах имеются недиализи-руемые компоненты, которые вызывают значительное усиление нейрализации уже детерминированной бластодермы 18-часовых куриных зародышей (см. главу 5). Таким образом, водные экстракты из сетчатки и мозга куриных зародышей 7-8 суток инкубации характеризовались множественным морфогенетическим действием на ткани-мишени. Мы предположили, что это является следствием присутствия в экстрактах ряда агентов (возможно белковой природы) , каждый из которых характеризуется определенной специфичностью действия и вызывает возникновение в эктодермальных эксплантатах качественно различных типов клеток. Для проверки этого предположения мы предприняли попытку выделить эти агенты с помощью методов электрофоретического фракционирования. Оказалось, что нейрализующая и линзоиндуцирующая активность экстрактов из сетчатки и мозга куриных зародышей не утрачивается после их электрофоретического фракционирования. Более того, удалось идентифицировать фракции с преимущественным ней-рализующим или линзоиндуцирующим действием. Нейрализующая активность характерна практически для всех электрофоретических фракций сетчатки и мозга. Однако, максимальная нейрализующая активность приходится на анодные фракции экстрактов, совпадающие по подвижности с пре-альбуминами и альбуминами сыворотки крови. Напротив, линзоиндуцирующий эффект характерен для катодных фракций сетчатки и мозга, соответствующих по электрофоретической подвижности J -глобулинам, т.е. белкам с нейтральными или основными изоточками. Не исключено, что такие белки могут адсорбироваться на рибосомах (или входить в их состав). В этой связи напомним, что белки фракции 80 s рибосом из куриных зародышей 10 суток инкубации вызывали образование в ЭРГ R. temporaria свободных лентоидов (Михайлов и др., 1983 б). С этих позиций можно объяснить также и тот факт, что линзоиндуцирующая активность была характерна как для супернатантов, так и для осадков после центрифугирования исходных тканевых экстрактов при НО ООО g . При таких условиях центрифугирования часть моносом (фракция 80 s ) увлекается в осадок, а часть остается в супернатанте. Конечно, подобные рассуждения достаточно спекулятивны и у нас нет ни одного прямого экспериментального доказательства, подтверждающего подобные предположения.

Для фракционирования экстрактов мы применили электрофорез в агаровом геле, который характеризуется не высокой разрешающей способностью. Тем не менее, даже с помощью такого электрофореза были получены фракции, различающиеся по спектру составляющих их пептидов. Анодные фракции сетчатки и мозга куриных зародышей содержат значительное число пептидов, причем наиболее выражены фракции с мол. массой около 30 кД. Напротив, катодные фракции этих тканей представлены 2-3 пептидами, в основном, пептидами с мол. массой около 18 кД.

Приведенными выше фактами исчерпывается основная информация, полученная нами в процессе идентификации и анализа свойств гетерогенных N - и ъ -агентов, содержащихся в эмбриональной нервной ткани кур. Теперь попробуем оценить место этих результатов среди аналогичных исследований веществ с ней-рализующей или линзоиндуцирующей активностью.

Попытки идентифицировать и выделить N -агенты, -по-видимому, самые многочисленные. Однако, агенты с подобной активностью не получены в химически чистом виде. В первых главах монографии мы подробно осветили причины такой ситуации, а также проанализировали известные факты о возможных свойствах и природе тг -агентов. Несмотря на большое число работ, посвященных изучению N -агентов, лишь несколько исследований имели принципиальный характер. Это, в основном, работы, выполненные Хаяши ( Hayashi, 1955, 1958, 1959) и Тидеманом ( Tiedemann et al., 1963). Полученные ими данные свидетельствовали о том, что в тканях зародышей кур и взрослых млекопитающих присутствуют "гетерогенные" агенты, оказывающие нейрализующее действие на эктодерму гаструлы амфибий in vivo или in vitro . При этом Хаяши ( Hayashi, 1959, 1959) удалось продемонстрировать, что IT-агенты, присутствующие во фракции рибонуклеопротеидов печени морских свинок, не устойчивы к действию протеолитических ферментов, т.е. имеют, скорее всего, белковую природу. С этого периода времени и вплоть до 1983 г. исследований, направленных^на идентификацию и выделение н -агентов, не проводилось. Было опубликовано лишь несколько сообщений о том, что гетерогенные N-агенты из тканей куриных зародышей действуют (первично) на плазматическую мембрану клеток-мишеней (эктодерма гаструлы тритонов, см. Tiedemann, 1976, 1978; Tiedemann, Bom, 1978). Таким образом, наши исследования, результаты которых публикуются, начиная с 1979 г. (см. Михайлов, Горголюк, 1979 а), представляли собой еще одну, независимую попытку найти новые источники и-агентов, определить их природу и свойства. При этом мы стремились максимально приблизить экспериментальную ситуацию к процессам нейральной индукции у зародышей. Подавляющее большинство предшествующих исследований выполнялись в методической аранжировке, предусматривающей предварительную инсолю-бшшзацию тестируемых N-агентов, хотя экспериментально-эмбриологически продемонстрировано,что естественные и-агенты зародышей амфибий способны к диффузии (см. главу I, 2, 3; а также Duprat, Gualandria, 1984х). В отличие от многих исследователей, нам удалось идентифицировать растворимые N -агенты, причем их источником оказалась эмбриональная нервная ткань. Выделение веществ-индукторов в химически чистом виде представляет собой многоэтапную и трудоемкую работу (см. например, Tiedemann, 1968, 1973, 1975, 1978, 1981, 1982). Наша работа в этом направлении пока не достигла такой фазы, когда идентифицированные нами и -агенты были бы получены в виде электрофоретически гомогенных фракций. Однако, уже сейчас мы можем с достаточной степенью вероятности говорить о природе и свойствах агентов, вызывающих in vitro нейрализа-цию эктодермы гаструлы амфибий. Эти агенты являются, по-видимому, растворимыми белками, причем наибольшая нейрализующая активность присуща слабо кислым белкам, располагающихся при электрофорезе в агаровом геле в зоне альбуминов. Что касается мол. массы идентифицированных нами агентов, то этот вопрос остается пока открытым. Во всяком случае показано, что фракции сетчатки и мозга куриных зародышей с наибольшей нейрализующей активностью содержат пептиды, мол. масса которых варьирует от 14 до 90 кД. Интересно, что естественные тг-агенты, идентифицированные нами в экстрактах из глазных пузырей куриных зародышей, также имеют электрофоретическую подвижность, совпадающую с подвижностью фракций сывороточного альбумина (см. ж Duprat А#-М#, Gualandris L# Extracellular matrix and neural determination.during amphibian gastrulation, - Cell Diff,, 1984* v,14, p.105-112. главу 7, рис. 49, 52, фракции зоны Ш, а также: Михаилов, 1981; Михайлов и др., 1983 а). В одном из последних обзоров Тидемана ( Tiedemann, 1982) приведены аналогичные результаты по начальным этапам характеристики и -агентов, присутствующих в экстрактах из гаструл X.laevis . Наибольшей нейрализующей активностью характеризуются кислые белки (pi 5-6) с мол. массой 100 кД, хотя нейрализующая активность обнаружена и в других фракциях этих экстрактов с более низкими значениями мол. масс. Приведенные выше данные свидетельствуют о том, что и гетерогенные (идентифицированные нами) и естественные (идентифицированные Тидеманом и сотр.) JT-агенты могут быть представлены растворимыми, слабо-кислыми белками. Шесте с тем, как уже отмечалось в главе 2, нейрализующая активность может быть связана и с микросомными фракциями тканевых экстрактов. Нам не удалось обнаружить нейрализующую активность микросомных фракций экстрактов из сетчатки и мозга 7-8-суточных куриных зародышей (см. главу 6). Уже после написания нашей монографии была опубликована статья, где представлены данные о нейрализующей активности микросомных фракций из гомогенатов яиц и зародышей х. laevis на стадии гаструлы35. Эта активность обусловлена, в основном, РНП-частицами, седи-ментирующими в градиенте сахарозы в области 18-27s . Нейрализующая активность РНП-частиц (биотестирование на ЭРГ Т. alк Janeczek J#, Bom J., John M#, Scharschmidt M., Tiedemann H., Tiedemann H, Ribonucleoprotein particles from Xenopus eggs and embryos» Neural-archencephalic-in<3ucing, activity of . the protein moiety, - Eur, J, Biochem., 1984, v.140, №2, p.257-264. pestris ) чувствительна к протеолитическому гидролизу. В то же время РНК, выделенная из этих частиц, не обладала нейрали-зующей активностью. Показано также, что максимальной способностью к индукции нейральных структур обладают гидрофобные белки РНП-частиц с мол. массой 10-16 кД; белки с более высокой мол. массой (40-88 кД) характеризовались меньшей нейрализующей активностью. Согласно данным Тидемана ( Tiedemann , 1982, 198^х) в клетках ранних зародышей амфибий существует, по-видимому, своеобразная "компартментализация" N-агентов, которые могут быть связаны с РНП-частицами, белками цитоскелета, фракцией т.н. маленьких пузырьков, а также могут находиться в растворенном состоянии в цитоплазме. В наших опытах источниками w-агентов служили "чужеродные", по отношению к ЭРГ амфибий, ткани куриных зародышей (мозг, сетчатка). Поэтому не удивительно, что обнаруженные в них аналоги естественных и—агентов представлены только водорастворимыми соединениями.

Таким образом, суммируя известные к настоящему времени данные, можно заключить, что нейрализующая активность связана с "семейством" растворимых или гидрофобных белков (из разных эмбриональных тканей), мол. масса которых варьирует от 10 до 100 кД. Для реализации своего действия и-агентам не нужно поступать внутрь клеток, а достаточно связаться с соответствующими "рецепторами" на плазматической мембране9? Не следует забывать также, что функция и-агентов, "внешних" по отношению к эктодерме гаструлы амфибий, может заключаться в инициации X

Tiedemann Н, Neural embryonic induction. In: The role of cell interactions in early neurogenesis, N,Y,-London:Plenum Press, 198±|f p.89-105.

ЗГЗГ

Suzuki A,S, ,ITakatake H,,Hidaka T. Cell-to-cell contact in primary embryonic induction:effects of lectin on electrical coupling and neural induction,- Different,,1984,v,28,p,73-77. процессов, приводящих к активации маскированного it-фактора, уже присутствующего в клетках-мишенях. Возможно, что процесс подобной активации заключается в высвобождении it-агентов из внутриклеточных структур, поскольку обработка клеток демекольцином и цитохалазином, а также аутолиз приводят к появлению нейрализующей активности в клетках эктодермы гаструлы Т. alpestris ( Tiedemann, 1982; John et al., 1984). Естественно, что окончательный ответ на вопрос о механизмах действия н -агентов может быть получен только в опытах с достаточно очищенными фракциями. В связи с этим остановимся на возможных перспективах выделения N -агентов, идентифицированных нами в сетчатке и мозге куриных зародышей 7-8 суток инкубации. Исходя из того, что нейрализация является мембра-нозависимым процессом, мы предлагаем использовать метод элек-троблоттинга, как средство для идентификации пептидов с нейрализующей активностью. Фракции тканевых экстрактов после sds -электрофореза можно перенести на нитроцеллюлозный фильтр (с помощью электроблоттинга). sds и другие нежелательные для культуральных опытов примеси удаляются в результате предварительной отмывки фильтров в соответствующих растворах. Затем фракции, иммобилизированные на фильтре, вырезаются и комбинируются in vitro с фрагментами эктодермы гаструлы амфибий. Реальность применения такого подхода в настоящее время проверяется нами.

Несколько слов о возможных перспективах по идентификации агентов, обладающих линзоиндуцирующими свойствами. Экспериментально-биохимические попытки идентифицировать естественные ъ-агенты, содержащиеся в глазных зачатках куриных зародышей, не принесли успеха (см. главу I, 2, 7, а также: Михайлов, 1981, 19846; Михайлов и др., 1983а). Показано,только, что такие агенты способны диффундировать через мембранные фильтры, а их размер не превышает, по-видимому, 12 кД ( Karki-nen - Jaaskelainen, 19786). Нами получены данные, позволяющие предположить, что L-агенты имеют белковую природу и относятся к растворимым в воде белкам. Не исключено также, что эти агенты ассоциированы с рибосомами (см. выше). Они относятся, по-видимому, к основным белкам и, соответственно, их выход должен повышаться при кислотной экстракции (по аналогии с гистонами). Более того, ряд фракций с линзоиндуцирующим действием представлен в основном 18 кД-пептидами. Эти данные вселяют надежду на выделение•пептидов с линзоиндуцирующей активностью. Таковы основные предпосылки для дальнейшей работы с морфогенетическими агентами, обнаруженными нами в сетчатке и мозге куриных зародышей.

Остановимся кратко еще на одном аспекте проблемы. При изложении экспериментального материала и обсуждении полученных данных мы специально ни разу не затрагивали вопрос о том, какое имеют значение морфогенетические агенты, присутствующие в сетчатке и мозге зародышей, для этих тканей. Нам представляется, что такая постановка вопроса вообще неправомочна и, что исследования, ведущиеся в этой области (см. например, Хоперская, 1983), неоправданы. В модельных экспериментах с гетерогенными индукторами ведущая роль принадлежит свойствам и потенциям реагирующей ткани; вещества-индукторы выступают только как аналоги естественных морфогенов. Правда, не исключено, что определенные ткани (органы) способны синтезировать вещества, регулирующие или поддерживающие достигнутый уровень дифференцировки. Мы уже упоминали, что в экстрактах из головного мозга зародышей кур 8 суток инкубации присутствуют белки, стимулирующие нейрогенез ( Cam et al., 1980; Baka -rat et al., 1982). Кроме того, экстракты из эмбрионального или дефинитивного головного мозга стимулируют рост нейритов ( Lindsay, Tarbit, 1979; Pettmann et al., 1980; Miki et al., 1981; Carry, Ebendel, 1983), однако подобные эффекты наблюдаются не всегда ( Clarke, McCallion, 1959; Braverman, 1961). Известно также о трофическом действии экстрактов из головного мозга зародышей (12 суток инкубации) и взрослых животных на культивируемые in vitro мышечные клетки. Эти эффекты обусловлены относительно высокомолекулярными агентами, активность которых чувствительна к обработке протеолитическими ферментами ( Jessel et al., 1979; oh, Markelonis, 1979, 1980; Collins, 1980; Popiela, Ellis, 1981; Bonner, Adams, 1982). Вполне вероятно, что в эмбриональной нервной ткани присутствуют вещества-стимуляторы ней-ральной и мышечной дифференцировки. Это было продемонстрировано и нами: экстракты из сетчатки и мозга 7-8-суточных зародышей значительно усиливали нейрализацию бластодермы ранних куриных зародышей. Однако, это вовсе не означает, что эти же агенты ответственны за нейрализующее действие экстрактов из сетчатки и мозга на эктодерму гаструлы амфибий.

Нам не известны работы, в которых упоминалось бы о нейро-стимулирующей активности экстрактов из сетчатки. Имеются лишь данные о том, что экстракты из сетчатки взрослых кур оказывают выраженный митогенный эффект на клетки глазных и внеглаз-ных тканей и органов ( Barritault et al., 1980, 1981; Gue-don et al., 1981).

Заключая этот раздел, хочется подчеркнуть, что в последнее время наметился определенный прогресс в индентификации и выделении агентов с морфогенетической активностью. Эта работа сдерживается рядом причин как теоретического, так и методического порядка. Однако, внедрение в экспериментальную эмбриологию ' новых технологий (генная инженерия, гибридомная техника получения антител и т.д.) обещает преодоление в ближайшем будущем чисто методических затруднений в исследовании веществ-индукторов. Естественно, что по мере накопления свежих, корректных сведений, можно надеяться на своего рода идеологический "прорыв", но все же пока перспективы здесь не очень обнадеживающие .

9.3. Соотношение процессов индукции и дифференцировки хрусталика и ЦНС в эмбриональном развитии

Работа с агентами, проявляющими морфогенетическую активность, неизбежно достигает такой стадии, когда необходимо оценить, с какими же процессами мы имеем дело. Иначе говоря, нужно постараться понять, отражением каких процессов служит наблюдаемое в эксперименте образование новых тканей и органов. Известно, что индукционные эффекты, которые наблюдаются в экспериментах и которые оцениваются, как правило, на гистологическом уровне, могут быть следствием первичного воздействия соответствующих агентов или результатом вторичных индукций в пределах реагирующей ткани (см. главу 3, 4). Стремясь разграничить такие процессы, мы при идентификации экстрактов (фракций) с нейрализующей и линзоиндуцирующей активностью придерживались довольно жестких критериев учета и отбора индуцированных эксплантатов. К нейрализующим эффектам относили только случал образования в эктодерме гаструлы ткани мозга или передне-головных комплексов. О линзоиндуцирующей активности экстрактов говорили тогда, когда наблюдали образование в эксплантатах только свободных лентоидов и эпидермиса или изолированных лентоидов и ткани мозга. Таким образом, можно полагать, что мы учитывали только те случаи формирования нервной ткани или лентоидов, которые были вызваны первичным действием экстрактов (фракций) на ЭРГ R. temporaria . Поскольку эксперименты проводились в условиях in vitro, какие-либо дополнительные воздействия исключались. Следовательно, действие использованных нами экстрактов или фракций непосредственно приводило к дифференцировке нервных клеток или клеток хрусталика. Подобные данные свидетельствуют о том, что индуцирующие влияния могут быть прямо связаны с выходом клеток в гистоти-пическую дифференцировку. Вместе с тем, не следует излишне категорично и прямолинейно подчеркивать эту связь (см. например, Лопашов, Звиададзе, 1984). Мы уже отмечали (см. главу 2, а также: Михайлов, 19846), что морфогены обеспечивают одно или несколько звеньев в цепи событий, приводящих к возникновению нового типа дифференцировки (нового типа клеток). При переводе на язык молекулярной биологии это может означать, что какой-либо морфоген может участвовать в активации одного или нескольких генов. Вместе с тем, детерминация и дифференциров-ка обеспечиваются множеством генов, которые "включаются" в работу в определенной последовательности, создающей у наблюдателя ощущение генетической программы развития. Хотя наши представления о программировании развития еще далеки от совершенства, можно заключить, что появление дифференцированных тканей и органов не задается изначально под влиянием какого-либо одного специфического сигнала, а достигается в результате достаточно длительного процесса, в котором принимают участие различные семейства морфогенов и других факторов. Следовательно, если под влиянием какого-либо агента мы наблюдаем образование в реагирующей ткани новых типов клеток, то это означает, скорее всего, что эти агенты стимулировали начало гистотипической дифференцировки уже детерминированных тканей.

При оценке соотношения процессов детерминации, индукции и дифференцировки не столь важно, имеем ли мы дело с директивными взаимодействиями или же с активацией фенотипической дифференцировки детерминированных клеток. Важно другое - индуцирующие влияния мо1ут приводить к возникновению новых типов клеток, но не терминально дифференцированных органов. Последнее представление подтверждается рядом полученных нами данных. При иммуногистохимическом исследовании дифференцировки хрусталика (у зародышей амфибий и в органной культуре) образование терминально дифференцированного хрусталика и синтез специфических белков-кристаллинов наблюдаются спустя много этапов от первоначальных индуцирующих воздействий эктомезодермы и глазных пузырей на эктодерму. Во всяком случае, первые признаки гистотипической дифференцировки хрусталика в нормальном развитии амфибий не сопровождаются синтезом белков, характерных для дефинитивного органа. Аналогичные данные получены другими авторами при исследовании ранних реакций эктодермы гаструлы амфибий на индуцирующие воздействия, в частности, на обработку ее вегетализирующим ( V ) фактором. Самые ранние проявления были отмечены через 24 часа после обработки эксплантатов гаструлы тритонов V -фактором, и проявлялись они, в частности, в изменении аффинитета клеток и в появлении определенных различий в профилях вновь синтезированных негистоновых белков хроматина,.по сравнению с интактной эктодермой ( Koch-er-Becker et al., .1965; Грунц, 19786; Grunz, Staubach, 1979; Minuth et al., 1979). Несколько позднее отмечено усиление активного транспорта аминокислот, который увеличивается в 50 раз по сравнению с необработанной эктодермой через 96 часов после воздействия. Однако, синтеза белков, специфичных для производных мезодермы или энтодермы выявлено не было ( Minuth et al., 1979; Tiedemann, 1981). Исследования на еще одной экспериментальной модели - индукции почки - показали, что первые изменения в ответ на индукцию затрагивают пептиды экстрацеллюлярного матрикса, а специфические почечные антигены появляются много позднее ( Ekblom et al., 1982). Если мы обратимся к процессам индукции зачатка ЦНС у зародышей амфибий, то и здесь маркеры нервных клеток обнаруживаются впервые только на клетках, уже имеющих морфологию типичных нейробластов ( Vulliamy, Messenger, 1981). В нашей работе показано, что процесс образования нервной пластинки и трубки у зародышей R. temporaria сопровождается усилением синтеза ряда белков (антигенов). Однако, на продвинутых стадиях развития концентрация таких белков снижается и они не выявляются в дефинитивных тканях и органах с помощью традиционных методов иммуноэлектрофоретического анализа. Следует также учитывать, что в нормальном развитии процессы нейральной или хрусталико-вой детерминации еще более "разобщены" с началом гисто-органо-генеза. Так, эктодерма поздней бластулы - ранней гаструлы некоторых видов амфибий детерминирована в нейральном направлении и способна к "самодифференцировке" в нервную ткань in vitro . Однако, в нормальном развитии образование нервной пластинки и нервной трубки наблюдается позднее и для гистоти-пической реализации этих процессов необходимы дополнительные индуцирующие влияния (см. главу I). Свободные лентоиды мо1ут быть индуцированы энтомезодермой в эктодерме ранней гаструлы^ тем не менее гистотипическая реализация этой программы осуществляется только с началом органогенеза под влиянием глазных пузырей зародышей (см. Михайлов, 1978а). Таким образом, между процессами детерминации (включая и директивный тип взаимодействий) и началом реализации терминальной дифференцировки имеется достаточно продолжительный период, "обеспечивающийся" собственными механизмами, отличными от механизмов предшествующей детерминации и терминального гистогенеза. Именно в этом плане и можно говорить об определенной разобщенности (независимости) процессов детерминации и терминальной дифференцировки. К сожалению, основные аспекты, связанные с детерминацией и дифференцировкой в развитии позвоночных, во многом еще являются "белыми пятнами". Идентификация и выделение веществ, обладающих морфогенетической активностью, по-видимому, один из реальных путей поиска в этом направлении. Однако, подобные исследования проводятся в рамках традиционного подхода, который дал в целом не очень много положительных результатов. Все исследования, посвящение выделению агентов с морфогенетической активностью, основывались на последовательном фракционировании исходных тканевых экстрактов или культуральных сред, кондиционированных тканями-индукторами (см. главу I и 2). Однако возможен, по-видимому, принципиально иной подход к этой проблеме (см. Михайлов, 1983). Формально логически молекулы индуктора должны взаимодействовать с "рецепторами" (связывающими участками) клеточных или ядерных мембран тканей-мишеней (по аналогии взаимодействия гормонов с рецепторами). Следовательно, препараты клеточных или ядерных мембран (а может быть и рецепторные участки) можно использовать как сорбенты, с помощью которых можно извлекать индукторы из исходных экстрактов (см. Михайлов, 1983). С другой стороны, интенсивное развитие гибридомной техники получения антител позволяет надеяться на их использование для идентификации и выделения индуцирующих агентов. Конечно, трудно предсказывать конкретные пути развития той или иной биологической проблемы. Однако, нам кажется, что исследования механизмов индукционных взаимодействий постепенно переходят на более корректный методический уровень и это обещает прогресс в изучении загадочного пока феномена, названного в начале XX века эмбриональной индукцией.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Михайлов, Александр Трофимович, Москва

1. Абелев Г.И., Бакиров Р.Д. Иммуноавторадиография. - В кн.: Йммунохимический анализ. Л.А.Зильбер (ред.), М.: Медицина, 1968, стр. 271-300.

2. Барабанов В.М. Становление антигенной структуры тканей глаза в ходе эмбриогенеза. В кн.: Основы иммуноэмбриологии. О.Е.Вязов, В.М.Барабанов (ред.), М.: Медицина, 1973,стр. 38-73.

3. Барабанов В.М. Обнаружение ^-кристаллинов в аденогипофизе куриных эмбрионов. Докл. АН СССР, 1977, т.234, стр.195--198.

4. Барабанов В.М., Федцова Н.Г. Проявление линзовой детерминации эктодермы ротовой области куриных эмбрионов при культивировании in vitro . Докл. АН СССР, 1978, т.242, Ж, стр. 225-228.

5. Барабанов В.М., Федцова Н.Г. ( Barabanov V.M., Fedtsova E.G.) The distribution of lens differentiation capacity in the head ectoderm of chick embryos* Differentiation, 1982,v. 21, p.183-190.

6. Белинцев Б.Н. Диссипативные структуры и проблема биологического формообразования. Усп. физ. наук, 1983, т.141, вып.1, стр.55-101.

7. Белоусов Л.В., Петров К.В. Роль межклеточных взаимодействий в дифференцировке индуцированных тканей зародышей амфибий. -Онтогенез, 1983, т.14, И, стр. 21-29.

8. Браше I. Биохимическая эмбриология. М.: из-во ИЛ, 1961, 327 стр.

9. Вязов О.Е., Титова И.И. Морфогенетическая роль тканевых антигенов. В кн.: Основы иммуноэмбриологии. О.Е.Вязов, В.М.Барабанов (ред.), М.: Медицина, 1973, стр.168-183.

10. Вязов О.Е., Аверкина Р.Ф., Петросян Ж.Л. Распределение хрусталиковых антигенов в тканях ранних куриных эмбрионов и проблема индукции. В кн.: Клеточная дифференцировка и индукционные механизмы. М.: Наука, 1965, стр.134-146.

11. Гаузе Г.Г., Михайлов А.Т., Горюнова Л.Е. Выделение кристал-линовых мРНК из хрусталика лягушки Rana temporaria и их характеристика с помощью трансляции в бесклеточной системе. Докл. АН СССР, 1980, т.250, № 4, стр.995-998.

12. Гекели Дж., де Бер Г. Экспериментальная эмбриология. М.-Л.: ОГИЗ Биомедгиз, 1936, 466 стр.

13. Горголюк Н.А. Влияние гетерогенных индукторов на энтодерму ранней гаструлы Rana temporaria in vitro, II. Региональная и избирательная индукция органов. Онтогенез, 1981, т. 12, стр.5-12.

14. Горголюк Н.А., Михайлов А.Т. Влияние гетерогенных индукторов на эктодерму ранней гаструлы Rana temporaria in vitro. III. Индукционный эффект электрофоретических фракций сетчатки, мозга и печени куриных зародышей. Онтогенез, 1981, т.12, I, стр.13-19.

15. Горголюк Н.А., Михайлов А.Т. Дифференцировка клеток эктодермы ранней гаструлы лягушек in vitro под влиянием экстрактов из эмбриональных тканей. В кн.: Цитологические механизмы гистогенезов. Д.Х.Хамидов (ред.), Ташкент: "ФАН" Узб. ССР, 1983, стр.41-44.

16. Грунц X. Изоляция и способы действия морфогенетических факторов в раннем эмбриогенезе. Онтогенез, 1978а, т.9, №. 4, стр.323-332.

17. Грунц X. Механизмы компетенции ранних эмбриональных тканей. Онтогенез, 19786, т.9, №5, стр.427-438.

18. Гусев А.И. Микрометод преципитации в агаре. В кн.: Им-мунохимический анализ. Л.А.Зильбер (ред.), М.: Медицина, 1968, стр.99-119.

19. Дабагян Н.В., Слепцова Л.А. Травяная лягушка Rana temporaria L.- В кн.: Объекты биологии развития. Т.А.Детлаф (ред.), М.: Наука, 1975, стр.442-462.

20. Детлаф Т.А., Руднева Т.Е. Шпорцевая лягушка Xenopus laevis ( Daudin )• В кн.: Объекты биологии развития. Т.А.Детлаф (ред.), М.: Наука, 1975, стр. 392-441.

21. Дюпра A.M., Матье К., Зальта Ж.П. Действие гистонов и не-гистоновых белков хроматина на дифференцировку зародышевых систем, Онтогенез, 1978, т.9, № I, стр.54-69.

22. Ермолаев С.В., Нейфах А.А. Исследование белкового состава зародышей вьюна в эмбриогенезе методом двумерного электрофореза. Онтогенез, 1984, т. 15, 3, стр.320-327.

23. Ермолаев С.В., Корж В.П., Нейфах А.А. Исследование белков, синтезируемых в эмбриональном развитии вьюна, методом двумерного электрофореза. Онтогенез, 1984, т. 15, Ж5, стр.493 -504.

24. Закарейшвшш В.З., Михайлов А.Т. Водорастворимые белки ранних зародышей амфибий. I. Электрофоретический анализгбелков эктодермы и нейрального зачатка. Онтогенез, 1983а, т.14, JB 3, стр. 266-274.

25. Закарейшвили В.З., Михайлов А.Т. Водорастворимые белки ранних зародышей амфибий. III. Иммуноэлектрофоретический анализ изменений антигенов эктодермы ранней гаструлы и нервной пластинки в развитии. Онтогенез, 19836, т.14, ® 4, стр.367-373.

26. Зотин А.А., Михайлов А.Т., Хрущов Н.Г. Подбор фиксаторов для иммуногистохимического исследования антигенов с помощью иммуноадсорбции. Онтогенез, 1983, т.14, № 4, стр. 442-446.

27. Игнатьева Г.М. Современное состояние проблемы первичной эмбриональной индукции. Экспериментально-эмбриологические исследования процессов первичной дифференцировки у хордовых животных. Серия "Итоги науки", М.: ВИНИТИ АН СССР, 1967, стр.5-62.

28. Игнатьева Г.М. Современное состояние проблемы первичной эмбриональной индукции. Исследование процессов, определяющих образование осевых структур у хордовых животных. -Серия "Итоги науки", М.: ВИНИТИ АН СССР, 1971, стр.5-81.

29. Караванов А.А., Михайлов А.Т., Закарейшвили В.З. Изоэлек-трофокусирование с импрегнацией белков серебром. Онтогенез, 1982, т. 13, Лз 5, стр.548-551.

30. Кафиани К.А., Костомарова А.А. Информационные макромолекулы в раннем развитии животных. М.: Наука, 1978, 336 стр.

31. Кирзон С.С., Аверкина Р.Ф., Вязов О.Е. Выявление хруста-ликовых антигенов на ранних стадиях развития лягушки Rana temporaria . Бюлл. экспер. биол. мед., 1969,5, стр.48-51.

32. Конюхов Б.В. Генетика развития позвоночных. М.: Наука, 1980, 294 стр.

33. Конюхов Б.В., Малинина Н.А., Платонов Е.С., Яковлев М.И. Иммуногистохимическое изучение синтеза кристаллинов в морфогенезе хрусталика мыши. Изв. АН СССР, 1978, сер.биол., т.4, стр.507-517.

34. Корочкин Л.И., Максимовский Л.Ф., Керкис Т.И. Микрометоды анализа и фракционирования рибонуклеиновой кислоты и белков. В кн.: Методы биологии развития. М.: Наука, 1974, стр.394-415.

35. Кэбот Е., Мейер М., Экспериментальная иммунохимия. М.: Медицина, 1968, 79 стр.

36. Лопашов Г.В., Формообразовательные поля мезодермы у зародышей амфибий. Докл. АН СССР, 1941, т.30, стр.761-764.

37. Лопашов Г.В. Эмбриональная индукция и закономерности причинных связей в развивающихся зачатках. Журн. общ. биол., 1961, т.22, стр.241-254.

38. Лопашов Г.В. Клеточная наследственность, ее преодоление и восстановление органов. Онтогенез, 1974, т.5, 6,стр.582-593.

39. Лопашов Г.В. XII международная эмбриологическая конференция и эмбриологические лаборатории Утрехта. Усп.совр. биол., 1977а, т.83, стр.473-478.

40. Лопашов Г.В. (Lopashov G.V.) Levels in stabilization of cell differentiation and. its experimental transformation.-Differentiation, 1977b, v.9» p. 131-137.

41. Лопашов Г.В., Звиададзе К.Г. Механизмы трансдифференциров-ки и их отношение к индукции и компетенции. Онтогенез, 1984, т.15, 4, стр.339-347.

42. Лопашов Г.В., Строева О.Г. Развитие глаза в свете экспериментальных исследований. М.: из-во АН СССР, 1963,206 стр.

43. Лопашов Г.В., Хоперская О.А. Происхождение и способы распределения индуцирующих веществ в развитии. В кн.: Межклеточные взаимодействия в дифференцировке и росте.

44. Г.В.Лопашов, Н.Н.Ротт, Г.Д.Туманишвили (ред.), М.: Наука, 1970, стр.52-64.

45. Лопашов Г.В., Хоперская О.А. Механизмы индукции и программирование дифференцировки. Онтогенез, 1977, т.8, № 6,стр.563-581.

46. Мануйлова Н.А., Кислов М.Н. Исследование посредством гомо-и гетеро-трансплантации действия глазной чаши на нейтральный и детерминированный эпителий у амфибий. Труды Ин-та эксп. морфогенеза, 1934, т.2, стр.29-53.

47. Мгвделадзе Н.Д., Михайлов А.Т., Барабанов В.М. Иммуноэлек-трофоретический анализ водорастворимых антигенов хрусталика рыб. Изв. АН Груз ССР, 1975, серия биол., т.1, .№5,стр.457-466.

48. Мгвделадзе Н.Д., Михайлов А.Т., Барабанов В.М. Иммунохи-мический анализ видовой специфичности белков хрусталика рыб. Изв. АН Груз ССР, 1977, серия биол., т.З, 6, стр. 630-636.

49. Михайлов А.Т. Иммунохимический анализ антигенной дифференцировки сетчатки кур в эмбриогенезе. Дисс. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук, М.: НИИ морфологии человека, 1973а.

50. Михайлов А.Т. Тканевые антигены сетчатки и их формирование в эмбриогенезе. В кн.: Основы иммуноэмбриологии. О.Е.Вязов, В.М.Барабанов (ред.), М.: Медицина, 19736, стр. 74-84.

51. Михайлов А.Т. (Mikhailov А*Т*) Immunochemical analysis of amphibian lens induction and. differentiation in vitro* -Abstracts to Finnish-Soviet Sympos. "Morphogenetic cell interactions." Helsinki, Meilahti med. centre, 1977,p. 12-13*

52. Михайлов А.Т. Экспериментальные и биохимические аспекты индукции хрусталика в эмбриогенезе. Онтогенез, 1978 а, т.9, J& 3, стр.211-227.

53. Михайлов А.Т. Иммунохимические маркеры дифференцировки хрусталика Rana temporaria в эмбриональном развитии.

54. Состав и свойства водорастворимых антигенов хрусталика.-Онтогенез, 19786, т.9, №5, стр.439-448.

55. Михайлов А.Т. йммунохимические маркеры дифференцировки хрусталика Rana temporaria в эмбриональном развитии. III. Индукция и дифференцировка хрусталика в процессе культивирования in vitro, Онтогенез, 1979, т.10, 1Й, стр. 130-136.

56. Михайлов А.Т. Биохимические аспекты индукции и дифференцировки хрусталика в эмбриональном развитии. Тез. докл.

57. У1 Всесоюзн. сов. эмбриол., М.: Наука, 1981, стр.123-124.

58. Михайлов А.Т. Специфические белки эпителия хрусталика амфибий. Докл. АН СССР, 1982а, т.265, М, стр.199-201.

59. Михайлов А.Т. Методологические аспекты исследований дифференцировки, 11 транс дифференцировки" и регенерации тканей. -В кн.: Современные проблемы регенерации. Г.Л.Билич, В.Э. Колла (ред.), Йошкар-Ола: Марийский гос. университет, 19826, стр.83-88.

60. Михайлов А.Т. Экспериментально-биохимические подходы к идентификации и выделению морфогенетически-активных веществ. В кн.: Цитологические механизмы гистогенезов,

61. Д.Х.Хамидов (ред.), Ташкент: "ФАН" Узб. ССР, 1983, стр. 124-129.

62. Михайлов А.Т. Совместимость глазных зачатков куриных зародышей с эктодермой ранней гаструлы амфибий in vitro, -Онтогенез, 1984а, т. 15, 15, с тр.542-547.

63. Михайлов А.Т. "Морфогены": экспериментальная иллюзия или реальность? Онтогенез, 19846, т.15, № 6, стр.563-584.

64. Михайлов А.Т., Барабанов Б.М. (Mikhailov А,т,, Barabanov V.M.) Immunochemical analysis of water-soluble antigens of chick retina in the course of embryogenesis, J• Em-bryol.exp.Morphol., 1975a, v.34, p.531-557.

65. Михайлов А.Т., Барабанов Б.М. Анализ формирования тканевых антигенов сетчатки кур в эмбриогенезе. Онтогенез, 19756, т.6, № 6, стр.546-553.

66. Михайлов А.Т., Горголюк Н.А. Применение микроэлектрофореза в полиакриламидном геле для исследования белков эмбриональных тканей. Лаб. дело, 1975, № II, стр.655-657.

67. Михайлов А.Т., Горголюк Н.А. Электрофоретическое исследование водорастворимых белков сетчатки кур на ранних этапах эмбриогенеза. Онтогенез, 1976, т.7, стр.333-340.

68. Михайлов А.Т., Горголюк Н.А. Экстракт сетчатки куриных зародышей возможный гетерогенный индуктор хрусталика в эктодерме гаструлы лягушек in vitro, - Докл. АН СССР, 1979а, т.245, №2, стр.462-464.

69. Михайлов А.Т., Горголюк Н.А. Иммуногистохимическое выявление специфических антигенов на окрашенных и заключенных в бальзам срезах хрусталика глаза. Бюлл. экспер. биол. мед., 19796, т.88, №9, стр.367-369.

70. Михайлов А.Т., Горголюк Н.А. Влияние гетерогенных индукторов на эктодерму ранней гаструлы Rana temporaria invitro, I. Индукционный эффект экстрактов сетчатки, мозга и печени куриных зародышей. Онтогенез, 1980а, т.II, I, стр.39-48.

71. Михайлов А.Т., Горголюк Н.А. (A.T.Mikhailov, N.A.Gorgolyuk) Retrospective immunofluorescence of specific antigens in stained and balsam embedded sections of the developing amphibian lens. Experientia, 1980b, v.36, p.113-115.

72. Михайлов А.Т., Горголюк Н.А. Свойства эктодермы гаструлы травяной лягушки как тест-ткани для нейральных индукторов. Докл. АН СССР, 1984, т.274, № 2, стр.416-418.

73. Михайлов А.Т., Закарейшвили В.З. Водорастворимые белки ранних зародышей амфибий. 2. Сравнительный иммуноэлектрофоретический анализ антигенов эктодермы ранней гаструлы и нервной пластинки. Онтогенез, 1983, т.14, ЖЗ, стр.275--282.

74. Михайлов А.Т., Корнеев А.Я. Иммунохимическое изучение водорастворимых белков хрусталика Xenopus laevis с мутацией периодического альбинизма. Онтогенез, 1979, т.10, стр.220-230.

75. Михайлов А.Т., Корнеев А.Я. (Mikhailov А.Т., Korneev A.Ya.) The lens proteins in adult and embryos of the periodic albino mutant of Xenopus laevis. Wilhelm Roux' Archiv.,1980, v.189, p. 155-163»

76. Михайлов А.Т., Мгвделадзе Н.Д. Иммунофлуоресцентное изучение формирования эволюционно-устойчивых белков хрусталика у зародышей кур. Онтогенез, 1977, т.8, J& 3, стр.297-301.

77. Михайлов А.Т., Такенов Ж.А. Изменение клеточной локализации ^-кристаллинов в процессе дифференцировки хрусталика амфибий. Онтогенез, 1983, т.14, № 4, стр.374-381.

78. Михайлов А.Т., Каркинен-Яскелайнен М., Саксен Л. Определение in vitro биологической активности электрофорети-ческих фракций экстрактов из эмбриональных тканей. Онтогенез, 1983а, т. 14, А& I, стр.52-56.

79. Михайлов А.Т., Закарейшвили В.З., Хрущов Н.Г., Караванов А.А. Биохимическая характеристика белков эктодермы и нейрального зачатка в раннем развитии амфибий. Докл. АН СССР, 1982, т.266, стр.1480-1482.

80. Михайлов А.Т., Неуман Т.Э., Горголюк Н.А., Сыбер Ю.П. "Нейрализующие" агенты: тестирование in vitro на эктодерме зародышей амфибий и птиц. Докл. АН СССР, 19836, т.270, № 3, стр.712-714.

81. Михайлов А.Т., Проказова Н.В., Звездина Н.Д., Кочаров С. Л., Мальченко Л.А., Бузников Г.А., Бергельсон Л.Д.

82. Mikhailov A.T. , Prokazova N.V., Zyezdina 1T.D., Kocharov S.L., Malchenko L.A., Buznikov G.A., Bergelson L.D.) Immunochemical study of gangliosides at the cell surface of sea urchin embryos. Differentiation, 1981, v. 18, p. 43-50.

83. Мэдди Э. (ред.) Биохимическое исследование мембран. -М.: Мир, 1979, 460 стр.

84. Нейфах А.А., Лозовская Е.Р. Гены и развитие организма. М.: Наука, 1984, 192 стр.

85. Нейфах А.А., Тимофеева М.Я. Проблемы регуляции в молекулярной биологии развития. М.: Наука, 1978, 336 стр.

86. Неуман Т.Э. Роль циклических нуклеотидов в реализации морфогенетических процессов у ранних зародышей кур. -Диссерт. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук, Ин-т хим. и биол. физики АН Эст. ССР, 1983.

87. Платонов Е.С., Яковлев М.И., Конюхов Б.В. Изучение действия мутантных генов на синтез кристаллинов в формирующемся хрусталике мыши. Сообщение I. Ген dominant cataract Pr. Онтогенез, 1976, т.7, №5, стр.484-489.

88. Платонов Е.С., Конюхов Б.В., Миронова О.В., Яковлев М.И. Дифференцировка клеток головной эктодермы зародышей мышей in vitro. Онтогенез, 1984, т.15, № I, стр.27-33.

89. Платонов Е.С., Яковлев М.И., Малинина Н.А., Миронова О.В., Конюхов Б.В. Анализ детерминации и дифференцировки клеток зачатка хрусталика мыши. Тез. докл. У1 Всесоюз. сов. эмбр., М.: Наука, 1981, стр. 144-145.

90. Попов В.В., Кислов М.Н., Никитенко М.Ф., Чантуришвили П.С.

91. Popov V,V., Kislow М.И., Nikitenko M.P., Chanturishvili P.S.) Uber die linsenbildende Fahigkeit des Epithels bei Embryonen von Pelobates fuscus, Bufo viridis, Bombina bombina und Triton cristatus. Ibid., 1977, v.16, p. 245-248.

92. Попов B.B., Кислов M.H., Никитенко М.Ф., Чантуришвили П.С. О линзообразувдей способности головного и туловищного эпителия Pelobates fuscus, Bufo viridis, Bombina bombina и Triton cristatus. Труды Ин-та эксп. морфогенеза, 1938, т. 6, стр. 149-176.

93. Рокицкий П.Ф. Основы вариационной статистики для биологов. Минск: Изд-во Белорусок, гос. ун-та им. В.И. Ленина, 1961.

94. Саксен Л., Каркинен-Яскелайнен М. Морфогенетические клеточные взаимодействия. Онтогенез, 1980, т. II, А®, стр. 451-466.

95. Саксен Л., Тойвонен С. Первичная эмбриональная индукция. М.: из-во ИЛ, 1963, 343 стр.

96. Симирский В.Н. Исследование возможности трансформации переднего эпителия роговицы травяной лягушки. Онтогенез, 1979, т. 10, й 3, стр. 253-260.

97. Спирин А.С. Спектрофотометрический метод определения суммарного количества нуклеиновых кислот. Биохимия, 1958, т. 23, вып.5, стр.656-659.

98. Томарев С.И., Зиновьева Р.Д., Краев А.С., Скрябин К.Г., Гаузе Г.Г. Первичная структура клонированной кДНК, кодирующей dAg-Kpncталлин хрусталика глаза лягушки Rana temporaria. Докл. АН СССР, 1983, т. 271, М, стр. 996-999.

99. Ю1.Уоддингтон К.Х. Организаторы и гены. М.: из-во ИЛ, 1947, 240 стр.

100. Федцова Н.Г. Экспериментальный анализ детерминации эпибласта куриных зародышей. В кн.: Матер, актуальн. вопр. гистопатол., М., 1979, стр. 100-102.

101. Федцова Н.Г., Барабанов В.М. Хрусталиковые и аденоги-пофизарные дифференцировки в эктодерме ротовой областикуриных эмбрионов в условиях культуры тканей. Онтогенез, 1978, т.9, стр. 609-615.

102. Филатов Д.П. О морфогенетическом действии закладки глазной чаши на туловищный эпителий у травяной лягушки. Биол. журнал, 1934, т.З, J62, стр.261-268.

103. Хоперская О.А. (Hoperskaya О.А. ) Differentiation of lens- and iris-like tissue in explants of the anterior part of the frog neural plate. Wilhelm Roux's Ar-chiv., 1972, v.171, р#1-1б.

104. Хоперская О.А. Специфическая индукция линз в эктодерме гаструлы под действием линзового эпителия взрослых лягушек. Докл. АН СССР, 1973, т. 212, № 6, стр.1475--1478.

105. Хоперская О.А. Техника экспериментов с зародышами. Амфибии. В кн.: Методы биологии развития. М.: Наука, 1974, стр.161-184.

106. Хоперская О.А. (Hoperskaya О.А.) Induction of lens tissue Ъу lens epithelium in frog embryonic ectoderm. Wilhelm Roux»s Archives, 1976, v.180, p.213-227.

107. Хоперская О.А. Молекулярные и клеточные аспекты дифференцировки и программирующая роль экстрацеллюлярных матриксов. Докл. АН СССР, 1983, т. 272, № 2, стр. 481-485.

108. НО. Хоперская О.А., Зайцев И., Голубева 0. ( Hoperskaya. О.А., Zaitzev I., Golubeva О. ) Isolation of a factor mediating melanogenic induction in pigment cells of Xenopus Laevis, Devi,, Growth and Differ,, 1982, v, 24, p,259-263*

109. Хоперская O.A., Зайцева Л.Н., Голубева O.H., Богданов M.E., Столбовская O.B. Программирующая активность внеклеточных матриксов кости. Докл. АН СССР, 1982, т.271, №5, стр.1238-1241.

110. Цветков B.C. Иммуноэлектрофорез и препаративный электрофорез в агаре. В кн.: Иммунохимический анализ, Л.А.Зильбер (ред.), М.: Медицина, 1968, стр.138-140.

111. Чертков ИЛ., Фриденштейн А.Я. Клеточные основы кроветворения (кроветворные клетки-предшественники). М.: Медицина, 1977, 272 стр.

112. Энгельгардт Н.В. Метод флуоресцирующих антител и его применение для обнаружения тканевых антигенов на срезах. В кн.: Иммунохимический анализ, Л.А.Зильбер (ред.), М.: Медицина, 1968, стр. 165-188.

113. Энгельгардт Н.В., Гусев А.И., Шипова Л.Я., Абелев Г.И. ( Engelhardt N.V., Gousev A.I,, Shipova L.Ya,, Abelev

114. Asahi K.-I., Asashima M., Geithe H.-P., Born J., Tiedemann H., Tiedemann H. Kadioiodination with and reductive methylation with tritium of a vegetalizing inducer protein.- Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1982, v.363, p.563-571.

115. Asashima M. Inducing effects of the presumptive entoderm of successive stages in Triturus alpestris. Wilhelm Roux's Arch. Devi. Biol., 1975, v.177, p.301-308.

116. Auerbach R. Angiogenesis-inducing factors: a review. Ini I^rmphokinas, E.Pick (ed.), N.I.s Acad.Press, 1981, v.4,p.69-88.

117. Ave K., Kawakami I., Sameshima M. Studies on the heterogeneity of cell populations in amphibian presumptive epidermis, with references to primary induction. Developm. Biol., 1968, v.I7, p.617-626.

118. Avrameas S., Ternynk T. The cross-linking of proteins with glutaraldehyde and its use for the preparation of immuno-adsorbents. Immunochemistry, 1969, v.6, p.53-66.

119. Axelsen H.H., Krjfll J., Weeke B. (eds). A manual of quantitative Immunoelectrophoresis. Methods and application. Oslo* Bergen, Tromsj*; Universitetsforlaget, 1973.

120. Ballantine J.E.M., Woodland H.R., Sturgess E.A. Changes in protein synthesis during the development of Xenopus laevis. J. Embryo1, езр. Morphol., 1979, v.51, p.137-153

121. Barakat I., Sensenbrenner M., Labourdette G. Stimulation of chick neuroblast proliferation in culture by brain extracts. J. Heurosci. Res., 1982, v.8, H 2-3» p.303-314.

122. Barritault D., Arruti C., Courtois X. Is there a ubiquitous growth factor in the eye? Proliferation induced in differentcell types by eye-derived growth factors. Differentiation, 1981, v.I8, p.29-42.

123. Barritault D., Arruti C., Olivie M., Plonet J., Courtois Y. EDGF or eye derived growth factor are new potent growth factors. Biological and biochemical properties» Bur. Cell Biol., 1980, v.22, p.386-391.

124. Barth L.G. Neural differentiation without organizer» -J. exp. Zool., 1941, v.87, p.371-383.

125. Barth L.G., Barth L.J. Ionic regulation of embryonic induction and cell differentiation in Rana pipiens. Developm. Biol., 1974, v.39, p.I-22.

126. Barth L.G., Graff S. Effect of protein extracts of neural plate plus chordamesoderm on presumptive epidermis. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 194-3, v.54, p.II8-I2I.

127. Bautzman H., Holtfreter J., Spemann H., Mangold 0. Versuche zur Analyse der Indubtionsmittel in der Embryonalentwick-lung. Naturwiss., 1932, Bd, 20, S.971-974.

128. Becker U. Die Bedewtung des reagierenden Gewebes fur die Ausbildung von freien Linsengebilden bei Triturus vulgaris. Arch. Entw. Mech., 1959, Bd. 151, S.I88-2I7.

129. Becker U. Untersuchungen uber die Abhangigkeit der Linsen-bildung von der wirtsregion bei Triturus vulgaris. Wilhelm. Roux's Archiv. Entw. Mech., I960, v.152, p.339-372.

130. Beebe D.C., Peagans D.E., Jebens H.A.H. Lentropin: a factor in vitreous humor which promotes lens fiber cell differentiation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v.77, p.490-496.

131. Bernfield M.R. Mechanisms of embryonic organ formation. -Life Sci. Rept., 1978, N 10, p.I0I-I20.

132. Bignami A., Raju Т., Dahl D. Localization of vimentin, the nonspecific intermediate filament protein, in embryonic gliaand early\differentiating neurons. Developm. Biol., 1982,v.9I, p.286-292.

133. Bjerre B. A neuralizing influence of dibutyryl cyclic AMP on competent chick ectoderm. Experientia, 1974, v.30, H 5* p.534-535•

134. Bjorklund B. Specific inhibition of precipitation as an aid in antigen analysis with gel diffusion method. Proc. Soc. exp. Biol. Med. (U.Y.), 1952, v.79, H 2, p.319^324.

135. Bloemendal H. The vertebrate eye lens. A useful system for the study of fundamental biological process on a molecular level. Science, 1977, v.197, p.I27-I38.

136. Bloemendal H. The lens proteins. In; Molecular and cellular biology of the eye lens. H.Bloemendal (ed.), U.Y. -Chichester-Brisbane-Toronto; A Wiley-intersci. publ., J.Wiley and Sons, 1981, p.1-48.

137. Bonner P.H., Adams T.R. Ueural induction of chick myoblast differentiation in culture. Devfelopm. Biol., 1982, v.90, p.175-184.

138. Bora J., Tiedemann H., Tiedemann H. The mechanism of embryonic induction: isolation of ал inhibitor for the vegetalizing factor. Biochim. Biophys. Acta, 1972a, v.279, p.175-183.

139. Bower D.J., Errington L.H., Pollock B.J., Morris S., Clayton R.M. The pattern of expression of chick 8-crystallin genes in lens differentiation and in trans-differentiating cultures tissues. The EMBO J., 1985, v.2, M 3, p.555-338.

140. Brahma S.K* Ontogeny and localization of pre-oC crystallin antigen in Rana temporaria lens development. Exptl. Eye

141. Res., 1977, v.25, р.ЗИ-315.

142. Brahma S.K. Isofocusing and iimmmoelectroplioretic studies of soluble eye lens proteins from regenerated and normally developed xenopus laevis. Exptl. Eye Res., 1980, v.JO, p.269-275.

143. J. Brahma S.K., Doorenmaalen WfJ. Preparation of specific antiserum against Rana esculenta pre-Gt-lens crystallin. Expe-rientia, 1976, v.32, p.930-931.

144. Brahma S.K., McDevitt D.S. Ontogeny and localization of gamma-crystalline in Rana temporaria, Ambystoma mexicanum and Pleurodeles waltlii normal lens development. Exptl. Eye Res., 1974, v.9I, p.379-387.

145. Brahma S.K., Saag P.T. Studies on biosynthesis of soluble proteins in early amphibian development by isoelectric focusing in thin layer ро1уа<я?х!аш-с1е gel. Exptl. Cell Res., 1972, v.75, p.527-530.

146. Brahma S.K., Starre H. v.d. Studies on biosynthesis of soluble lens crystallin antigens in the chick by isoelectric focusing in thin-layer polyacrylamide gel. Exptl. Cell Res., 1967, v.97, p.175-183.

147. Bravermann M.H. Regional specificity of inhibition within the chick brain. J. Morphol., 1961, v.108, p.263-285.

148. Bravermann M., Katoh A. Initial crystallin synthesis and lens fiber formation are independent of lens morphogenesis. Nature, 1971, v.230, p.392-393.

149. Bravo R., Knowland J. Classes of proteins synthesized in oocytes, eggs, embryos and differentiated tissues of Xenopus laevis. Differentiation, 1979, v.13, p.101-108.

150. Brock H.W., Reeves R. An investigation of de novo protein synthesis in the South African clawed frog, Xenopus laevis.- Developm. Biol., 1978, v.66, p.I28-I4I.

151. Cam Y., Ledig M., Ebel A., Sensenbrenner M., Mandel P. Study.of some enzyme activities in cultured chick embryo brain nerve cells treated by chick embryo brain extracts.- Neurochem. Res., 1980, v.5, N 8, p.831-845.

152. Carri N., Ebendal T. Organotypic cultures of neural retina: Neufcite outgrowth stimulated by brain extracts. Dev. Brain Res., 1983, v.6, p.219-229.

153. Chuang H.H. Spezifische Induktionleistungen von Leber und Mere in Explanations versuch. Biol. Zbl., 1938, v.58, p.472-480.

154. Clarke W.M., Fowler I. The inhibition of lens-inducing capacity of the optic vesicle with adult lens antiserum. -Developm. Biol., I960, v.2, p.155-172.

155. Clarke R.B., McCallion D.I. Specific inhibition of differentiation in the frog embryo by cell-free homogenates of adult tissues. Canad. J. Zool., 1959, v.37, p.I29-I3I

156. Clayton R.M. Distribution of antigens in the developing newt embryo. J. Embryol. exp. Morphol., 1953, v.I, p.25-42.

157. Clayton R.M. Antigens in the developing newt embryo. Nature, 1957, v.168, p.120-121.

158. Clayton R.M. Problems of differentiation in the vertebrate lens. Curr. Top. Developm. Biol., 1970, v.5, p.II5-I80.

159. Clayton R.M. Comparative aspects of lens proteins. In: The eye. H.Davson, L.T.Graham (eds.), N.Y. - London: Acad. Press, 1974, v.5, p.399-494.

160. Clayton R.M. Divergence and convergence in lens cell differentiation: regulation of the formation and specific content of lens fibre cells. In: Stem cells and tissue homeostasis (British Society for Cell Biology, symp.2). Cambridge, London,

161. N.Y., Melbourne: Cambridge Univ. Press, 1978, p.II5-I29«

162. Clayton R.M. Genetic regulation in the vertebrate lens cell. In: Mechanisms of cell change. J.D.Ebert, T.S.Okada (eds.). N.Y., Chichester, Brisbane, Toronto: A Wiley med. Publ., J.Wiley and Sons, 1979, p.129-167.

163. Clayton R.M. The molecular basis for competence, determination and transdifferentiation: a hypothesis. In: Stability and switching in cellular differentiation R.M.Clayton,

164. D.E.S.Truman (eds.). N.Y. London: Plenum Press, 1982a, p.23-38.

165. Clayton R.M. Cellular and molecular aspects of differentiation and transdifferentiation of ocular tissues in vitro. -In: Differentiation in vitro. Yeoman M.M., Truman D.E.S. (eds.). Cambridge: Cambridge Univ. Press, 1982b, p.83-100.

166. Clayton R.M., Romanovsky A. Passage of antigenic material between inductor and ectoderm. Exptl. Cell Res., 1959, v.18, p.410-412.

167. Clayton R.M., Thomson I., de Pomerai D.I. Relationship between crystallin mRNA expression in retina cells and their capacity to redifferentiate into lens cells. Nature, 1979, v.282, p.628-629.

168. Cooke J. Compartments, "switches"", "programs" and vertebrate development. Nature, 1980, v.284, N 5753, p.216-217.

169. Cooke J. Evidence for specific feedback signals underlying pattern control during vertebrate embryo^genesis. J . Embry— ol. exp. Morphol., 1983, v.76, p.95-114.

170. Cooke J., Webber J.A. Vertebrate embryos: diversity in developmental strategies. Nature, 1983, v.306, N 5942,p.423-424.

171. Coulombre J.L., Coulombre A.J. Lens development. V. Histological analysis of the mechanism of lens reconstitution from implants of lens epithelium. J. Exptl. Zool., 1971, v.176, p.15-24,

172. Craine B.L., Cornberg I. Activation of the mayor Drosophila heat-shock genes in vitro. Cell, 1981, v.25, p.671-681.

173. Desvaux F.X., Chalumeau-Le Foulgoc M.-T. Analyse par electro-phorese in gel de polyacrylamide des proWines embryonaires de Pleurodeles waltlii Michahelles. (amphibien urodele).

174. C. r. Acad. sci. (Paris), 1973, D 277, Ы I, p.I09-II2.

175. Deuchar E.M. Inducing activity in extracts from Xenopus embryos and from isolated dorsal lips. J. Embryol. exp. Morphol., 1967, v.I7, p.341-348.

176. Doorenmaalen van W.J. The developmental mechanics of the lens« In: Molecular and cellular biology of the eye lens. H.Bloe-mendal (ed.). New-York, Chichester, Brisbane, Toronto:

177. A Wiley-intersci. publ. John Wiley and Sons, 1981, p.415-432.

178. Doorenmaalen van W.J., Starre H. van der, Janssen P.Т., Starre-van Bekkum M. van der. Molecular biology of lens induction. In: Cellular communication during ocular development. N.Y., Heidelberg, Berlin: Springer, 1982, p.97-109,

179. Dreyer С., Hausen P. Two-dimensional gel analysis of the fate of oocyte nuclear proteins in the development of Xenopus laevis. Developm. Biol., 1983, v.100, p.412-425

180. Dreyer C., Scholz E., Hausen P. The fate of oocyte nuclear proteins during early development in Xenopus laevis. Wilhelm. Roux's Archiv., 1982, V.I9I, p.228-233.

181. Dreyer 0., Singer H., Hausen P. Tissue specific antigens in the germinal vesicle of Xenopus laevis.oocytes. Wilhelm. Roux's Archiv., 1981, v.190, p.197-207.

182. Duprat A.M., Mathieu 0., Buisan J.J. Effects of non-histone chromosomal proteins on primary embryonic induction and cyto-differentiation in salamanders. Differentiation, 1977, v.9, N 3, p.161-167.

183. Eisenberg S. Effect of lens and liver RNA on chick cephalic ectoderm. Abstracts to conf. of lens differentiation. Oak Ridge Natl. Lab. USA, 1964, p.20-21.

184. Ekblom P., Saxen L., Timpl R. The extracellular matrix and kidney differentiation. In: Membranes in growth and development; A.R.Liss (ed.), N.Y.: Acad.Press, 1982, p.429-442.

185. Faulhaber I. Anreicherung des vegetalisierenden Induktions-faktors aus der Gastrula des Krallenfrosches (Xenopus laevis) und Abgrenzung des Molekulargewichtbereiches durch Gradienten-zentrifugation. Z. Physiol. Chem., 1970, v.351, p.588-594.

186. Faulhaber I-. Die Induktionsleistung subzellularer Fraktionen aux des Gastrula von Xenopus laevis. W. Roux's Arch, Entw Mech. Org., 1972, v.171, N 2, p.87-108.

187. Flickinger R.A., Nace G.W. An investigation of proteins during the development of the amphibian embryo. Exptl, Cell Res., 1952, v.J, p.393-405»

188. Forman D., Slack M.W. Determination and cellular commitment in the embryonic amphibian mesoderm. Nature, 1980, v.286, N 5772, p.492-494.

189. Friedman H.P., Wenger B.S. Accumulation of an organ-specific protein during development of the embryonic chick brain, -J. Embryol• exp. Morphol., 1970, v.23, part 2, p.289-297.

190. Geithe H.P., Asashima M., Born J., Tiedemann H., Tiedemann H. Isolation of a homogeneous morphogenetic factor, inducing mesoderm and endoderm derived tissues in Triturus ectoderm.- Exptl. Cell Res., 1975, v.94, p.447-449.

191. Geithe H.P., Asashima M., Asahi K.I., Born J., Tiedemann H., Tiedemann H. A vegetalizing inducing factor. Isolation and chemical properties, Biochim. Biophys. Acta, 1981, v.676, p.350-356.

192. Gimlich R,, Cooke J. Cell lineage and the induction of second nervous system in amphibian development. Nature, 1983, v. 306, N 5942, p.471-473.

193. Gimlich R.L,, Gerhart J.C. Early cellular interactions promote embryonic axis formation in Xenopus laevis. Developm. Biol., 1984, v.I04, p,H7-I30.

194. Goettert L. Differenzierungsleistungen von explantierten Urodelenektoderm (Ambystoma mexicanum Cope und Triturus al-pestris Laur) nach verschieden lauger Unterlagerungszeit, -Arch, EntwMech., 1966, Bd.I57, S.75-100.

195. Goldin G.V, Towards a mechanism for morphogenesis in epithe-liomesenchymal organs. Quart, Rev. Biol., 1980, v.55, N 3,p.251-265.

196. Gospodarowicz D. Epidermal and nerve growth factors in mammalian development. Ann. Rev. Physiol., 1981, v.43, p.251-263.

197. Greene L.A., Shooter E.M. The nerve growth factor::biochemistry, synthesis and mechanisms of action. Ann. Rev. Neurosci., 1980, v.3, p.353-402.

198. Grobstein 0. Tissue interaction in the morphogenesis of mouse embryonic rudiments in vitro. In: Aspects of synthesis and order in growth. D.Rudnick (ed.), New Jersey: .Princeton Univ. Press, 1955, p.233-256.

199. Grobstein 0. Inductive tissue interactions in development.- Adv. Cancer Res., 1956, v.4, p.187-236.

200. Grobstein C. Interactive processes in cytodifferentiation.- J. Cell. сотр. Physiol., 1962, v.60, suppl. I, p.35-48.

201. Grobstein C. Mechanisms of organogenetic tissue interactions.- Natl. Cancer Inst. Monogr., 1967, N 26, p.279-299.

202. Grossbach U. Acrylami.de gel electrophoresis in capillary columns. Biochim. Biophys, Acta, 1965, v.107, N- 2, p.180-182.

203. Grunz H. Hemnrung der Reaggregation dissoziierter Amphibien-zellen durch Inhibitoren der RNS- und Proteinsynthese. -Wilhelm Roux's Arch., 1969, v.163, p.184-196.

204. Grunz H. Differentiation of the four animal and the four vegetal blastomeres of the eight-cell-stage of Triturus al-pestris. Wilhelm Roux's Arch., 1977, v.181, p.267-277.

205. Grunz H. Change of the differentiation pattern of amphibian ectoderm after the increase of the initial cell mass. -Wilhelm Roux's Arch., 1979, v.189, p.49-^57.

206. Grunz H. Change in the differentiation pattern of Xenopus• laevis ectoderm by variation of the incubation time and concentration of vegetalizing factor, Wilhelm Roux's Arch, Devi. Biol., 1983, v.192, N 3-4, p.I30-I37.

207. Grunz H., Staubach J. Cell contacts between chorda-mesoderm and the overlaying neuroectoderm (presumptive Central Nervous System) during the period of primary embryonic induction in Amphibians. Differentiation, 1979, v.14, p.59-65.

208. Grunz H., Staubach J. Changes of the cell surface charge of amphibian ectoderm after induction. Wilhelm Roux's Arch., 1979, v.I86, p.77-80.

209. Grunz H., Tiedemann H. Influence of cyclic nucleotides on amphibian ectoderm. WilheLn Roux1 s Arch., 1977, v.181, p.261-265,

210. Gualanclxis L., Rouge P., Duprat A.M. Membrane changes in neural target cells studied with fluorescent lectin probe. J. Embryol. exp. Morphol., 1983, v.77, p.183-200.

211. Guedon I., Barritault D., Courtois Y., Prunieras M. Culture and cytogenetic studies of adult human keratinocytes using a new growth factor. Differentiation, 1981, v.I8, N 2, p.109-114.

212. Hall Brian K. Cell-tissue interactions: a rationale and resum. J. Craniofacial. Gen. and Devi. Biol., 1983, v.3, N I, p.75-82.

213. Hall K., Sara V. The significance of growth factors for fetal growth, Life Sci. Res. Rept., 1978, N 10, p.I2I-I36,

214. Hamburger V,, Hamilton H.L, A series of normal stages in the development of the chick embryo, J, Morphol., 1951, v.88, p.49-92.

215. Нага K. "Spemann's organizer" in birds. In: Organizer -A milestone of a half-century from Spemann. O.Nakamura^

216. S.Toivonen (eds), Amsterdam, Oxford, N.I.: Elsevier / North-Holland Biomed. Press, 1978, p.221-266.

217. Hayashi T. Inductive effect of some fractions of tissue extracts after removal of pentose nucleic acid, tested on the isolated ectoderm of Triturus gastrula. Embryologia, 1955» v.2, N 15, p.145-162.

218. Hayashi Y. Morphogenetic effects of pentose nucleoprotein from the liver upon the isolated ectoderm. Embryologia, 1956, v.3, N I, p.57-67.

219. Hayashi Y. The effects of pepsin and trypsin on the inductive ability of pentose nucleoprotein from guinea pig liver. -Embryologia, 1958, v.4, N I, p.33-53*

220. Hayashi Y. The effect of ribonuclease on the inductive ability of liver pentose nucleoprotein. Developm. Biol., 1959, v.I, N 3, p.247-268-.

221. Hayashi Y., Takata K. Morphogenetic effects of subfractions of pentose nucleoprotein from the liver separated by means of ultracentrifugation. Embryologia, 1958, v.4, N 2,p.I49-160.

222. Heide K., Schwick H.G. Salt fractionation of immunoglobulins. In: Immunochemistry, D.M.Weir (ed). Oxford, London, Edinburgh, Melbourne: Blackwell scientific publications, 1979,p.7.1-7.II.

223. Hendrix H.W., Zwaan J. Changes in the glycoprotein concentration of the extracellular matrix between lens and optic vesicle associated with early lens differentiation. Differentiation, 1974, v.2, p.357-362.

224. Hendrix R.W., Zwaan J. The matrix of the optic vesicle-presumptive lens interface during induction of the lens in the chicken embryo. J, Embryol. exp. Morphol., 1975, v.33,р,Ю23-Ю49.

225. Hilfer S.R., Yang J.W. Accumulation of CFC-precipitable material at apical cell surface during formation of the optic cup. Anat, Rec., 1980, v.197, p.423-433.

226. Holoubek V., Tiedemann H. Slectrophoretic spectra of nuclear proteins from embryos of Xenopus laevis. Wilhelm Roux's Arch., 1978, v.I84, p.171-180.

227. Holtfreter J. Nachweis der Induktionsfahigkeit abgetoteter Keimteile. Isolations- und Transplantationsversuche. Archiv. EntwMech. Org., 1933, v.128, p.584-633.

228. Holtfreter J. Differenzierungspotenzen isolierter Teile der Anurengastrula. Arch. EntwMech. Org., 1938, v.138, p.657-738.

229. Holtfreter J. Neural differentiation of ectoderm through exposure to saline solution. J. exp. Zool., 1944, v.95, p.307-340.251• Holtfreter J. Neuralization and epidermalization of gastru-la ectoderm, J. exp. Zool., 1945, v.98, p,161-209.

230. Holtfreter J. Neural induction in explants which have passed through a sublethal cytolysis. J. exp. Zool., 1947, v.106, p.197-222.

231. Ikeda A., Zwaan J. Immunofluorescence studies on induction and differentiation of the chicken eye lens, Invest, Ophthalmol,, 1966, v.5, p.'402-412.

232. Imoh H. Appearance and distribution of RNA-rich cytoplasms in the enibxyo of Xenopus laevis during early development. -Devi., Growth and Diff., 1984a, v.26, N 2, p.167-176,

233. Imoh. H, Neurogenesis in normally developing embryos of Xenopus laevis, Devi., Growth and Dif£., 1984b, v.26, N 4,p.375 (abstract).

234. Inoua K. Precipitin reactions and developmental arrest by antisera in amphibian embryos. Developm. Biol., 1961, v.5, ' p.657-670.

235. Jaaskelainen M., Saxen L. Transfilter lens induction in chick. Ophthal, Res., 1972, v.5, p.19-20,

236. Jackie H., Eagleson G.W. Spatial distribution of abundant proteins in oocytes and fertilized eggs of the Mexican axo-lotl (Ambystoma mexicanum). Developm, Biol., 1980, v.75, p.492-499.

237. Jackson J.F., Clayton R.M., Williamson R., Thomson I., Truman, D.E.S., de Pomerai D.I. Sequence complexity and tissue distribution of chick lens crystallin mRNAs. Developm. Biol., 1978, v.65, p.383-^00.

238. Jacobson A.G. The determination and positioning of the nose, lens and ear. I. Interactions within the ectoderm and between the ectoderm and underlying tissues. J. Exptl. Zool., 1965a, v.154, N 5, P.275-284.

239. Jacobson A.G. The determination and positioning of the nose, lens and ear. II. The role of the endoderm. J. Exptl. Zool., 1965b, V.I54, N 3, p«285-292.

240. Jacobson A.G. The determination and positioning of the nose, lens and ear. Ill, Effects of reversing the anteroposterior axis of epidermis, neural plate and neural fold. J. Exptl. Zool., 1965c, v.154, N 5, p.295-505.

241. Jacobson A.G. Inductive process in embryonic development. -Science, 1966, v,152, p.25-54.

242. Jacobson A.G. Morphogenesis of the neural plate and tube, -In: Morphogenesis and pattern formation. T.G.Connelly, L.L.Brinkley, B.M.Carlson (eds), N.I.:.Haven Press, 1981, p.255-265.

243. Jacobson M. Developmental neurobiology. New York London: Plenum Press, 1978, ch.I, p.I0-I6.

244. Jacobson M. Origins of the nervous System in amphibians. -In:;Neuronal development. N.C.Spitzer (ed). New York London: Plenum Press (Curr. Top. Neurobiology), 1982, p.45-99.

245. Jacobson M. Clonal organization of the central nervous system of the frog. III. Clones stremming from individual blastomeres of the I28-, 256-, and 512-cell stages.

246. J. Neurosci., 1985, v.5, N 5, p.I0I9-I058.

247. Jacobson M. Cell lineage analysis of neural induction: Origins of cells forming the induced nervous system. Developm. Biol,, 1984, v.102, p.122-129.

248. Janeczek J,, John M., Born J., Tiedemann H., Tiedemann H, Inducing activity of subcellular fractions from amphibian embryos. Wilhelm Roux's Archiv. Devi. Biol., 1984, v.193, N I, p.I-12.

249. Jesse1 T.M., Siege1 R.E., Pischbach G.D. Induction of acetylcholine receptors on cultured skeletal muscle by a factor extracted from brain and spinal cord. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v.76, p.5397-5401.

250. John M., Born J., Tiedemann H., Tiedemann H. Activation ofa neuralizing factor in amphibian ectoderm. Wilhelm Roux's Archiv,, 1984, v.193, N I, p.I3-I8.

251. John M., Janeczek J., Born J., Hoppe P., Tiedemann H., Tiedemann H. Neural induction in amphibians. Transmission ofa neuralizing factor. Wilhelm Roux's Arch, Devi. Biol., 1983, v.192, p.45-47,

252. Jong de W. Evolution of lens and crystalline. = In: Molecular and cellular biology,, of the eye lens. H.Bloemendal (ed.), K, Y. Chichester - Brisbane - Toronto: A Wiley intersci. publ., 1981, p.221-278.

253. Kageura H., Yamana K. Pattern regulation in isolated halves and blastomeres of ear ly:, Xenopus laevis. J. Embryol. exp. Morphol,, 1983, v.74, p.221-234.

254. Kageura H., Yamana K. Pattern regulation in defect embryos of Xenopus laevis, Uevelopm. Biol., 1984, v.IOI, p.410-415.

255. Kamp M.v.d., Zwaan J. Intracellular localization of lens antigens in the developing eye of the mouse embryo. J. Exptl. Zool., 1973, v.186, p.23-32.

256. Karkinen-Jaaskelainen M. Permissive and directive influences in avian lens induction. Abstracts to Finnish-Soviet Symp.: Morphogenetic cell interactions. Helsinki, Meilahti med. center, 1977, p.16.

257. Karkinen-Jaaskelainen M. Permissive and directive interactions in lens induction. J. Embryol. exp. Morphol., 1978a, v.44, p.167-179.

258. Karkinen-Jaaskelainen M. Transfilter lens induction in avian embryo. Differentiation, 1978b, v.I2, p.31-37.

259. Kawakami I. Inducing effects of the killed archenteron roof on late gastrula ectoderm. Mem. Coll. Sci. Univ. Kyoto, ser. B, v.19, p.I-5.

260. Kawakami. I. Relation of inductive effect to embryonic field, with special reference to the developmental mechanism of the cephalic sensory organs in amphibians. Annot. Zool. Japon., 1952, v.25, p.9^-104.

261. Kawakami I.K. Successive alteration in inductive capacity of retinal tissue in chick embryo. J. exptl. Zool., I960, v.143, N I, p.47-60.

262. Kawakami I. Fish swimbladder:.an excellent mesodermal inductor in primary embryonic induction. J. Embryol. exp. Morphol., 1976, v.36, p.315-320.

263. Kawakami I., Iyeiri S. Isolation of mesoderm-inducing protein from chick embryos. Exptl. Cell Res., 1964, v.33, p.516-522.

264. Kawakami I., Watanabe H., Ave K., Iyeiri S. Competence and electrophoretic spectrum of the cells dissociated from

265. Kuusi T, tfber die chemische Natur der Induktionsstoffe mit besonderer Berucksichtigung der Rolle der Proteins und der

266. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during theassembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970,iv.227, p.680-685.

267. Langman J. The effect of lens antiserum on chick embryos.- Anat. Rec., I960, v.137, p.155-140.

268. Langman J. The effect of antibodies on embryonic cells.

269. Canad. Cancer Conf., 1965, v.5, p.549-56g« 505. Langman J., Maisel H., Squires J. The influence of lens antibodies on the development of lens antigen-containing tissues in the chick embryo. J. Embryol. exp. Morphol.,1962, v.10, p.178-190.

270. Lehto V.-P., Hove Т., Vartio Т., Badley R.A., Virtanen I. Reorganization of cytoskeletal and contractile elements during transition of human monocytes into adherent macrophages. Lab. Investigation, 1982, v.74, N 4, p.591-399.

271. Lehtonen E. Transmission of signals in embryonic induction.- Med. Biol., 1976, v.5^, p.I08-I58.

272. Leussink J.A. The spatial distribution of inductive capacities in the neural plate and archenteron roof of Urodeles.- Netherlands J. Zool., 1970, v.20, N I, p.1-79.

273. Liedke K.B. Autoradiographic studies in lens induction. The use of tritiated thymidine and cytidine for marking reactingembryonic tissue. In: Lens differentiation, Abstr. Conf. Oak Ridge Natl. Lab. USA, 1964, p.II-I2.

274. Lindsay R.M., Tarbit J. Developmentally regulated induction. of neurite outgrowth, from immature chick sensory, neurone (DRG) by homogenates of avian or mammalian heart, liver and brain. Neurosci. Lett., 1979, v.I2, p.195-200.

275. L^vtrup S., Perris R. Instructive induction or permissive activation? Differentiation of ectodermal cells isolated from the axolotl blastula. Cell Diff., 1983, v.12, p.171-176.

276. Lowry O.H., Rosebrough H.J., Farr A.J., Rendall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Ohem., 1951, v.193, p.256-276.

277. Malacinski L.M., Wooyoun B. The dynamics of early pattern formation in amphibian embryogenesis. Use of ultraviolet irradiation as a probe. Neth. J. Zool., 1981, v.31, N I, p.38-4-9.

278. Malacinski G.M., Youn B.W. Neural tube (canal) morphogenesis in notochordless amphibian (Xenopus laevis) embryos. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1983, V.I74-, N 3, p.316-321.

279. Masuko S., Shimada Y. Neuronal cell-surface specific anti-gen(s) is expressed during the terminal mitosis of cells destined to become neuroblasts. Developm. Biol., 1983, v.96, p.396-404,

280. Matthiew С., Duprat A.M., Zalta J.P., Beetschen J.S. Action du facteur de croissance nerveuse (nerve growth factor) sur la differentiation de cellules embryonnaire s d1amphibian. -Exp. Cell Res., 1971, v.68, p.25-32.

281. McAvoy J.W. Cell division, cell elongation and distribution of a'-, Ji-, and V-crystallins in the rat lens. J. Embryo ol. exp. Morphol., 1978a, v.p.149-158.

282. McAvoy, J.W. Cell division, cell elongation and the coordination of crystallin gene expression during lens morphogenesis in the rat. J. Embryol. ездр. Morphol., 1978b, v.45, p.271-281.

283. McAvoy; J.W. Induction of the eye lens. Differentiation, 1980a, v.I7, p.137

284. McAvoy J.W. Cytoplasmiceprocesses interconnect lens placode and optic vesicle during eye morphogenesis. Exptl. Eye Res., 1980b, v.3I, N 5, p.527-534.

285. McAvoy J.W. Developmental biology of the lens. In: Mechanisms of cataract formation in the human lens. London -N.Y. - Toronto - Sydney, - San Francisco: Acad. Press, 1981, p.7-18.

286. McDevitt D.S. The crystallins of normal and regenerated newt eye lenses. In: Stability, and switching in cellular differentiation. R.M.Clayton, D.E.S.Truman (eds.)» N.Y. -London: Plenum Press, 1982, p.177-186.

287. McDevitt D.S., Brahma S.K. Ontogeny and localization of the crystallins during embryonic lens development in Xenopus laevis. J. Exptl. Zool., 1973, v.186, p.I27-I38.

288. McDevitt D.S., Mesa I., Yamada T. Immunofluorescence localization of the crystallins in amphibian lens development with special reference to the У-crystallins. Developm. Biol., 1969, v.I9, p.581-607.

289. McKeehan M.S. Cytological aspects of embryonic lens induction in the chick. J. exptl. Zool., 1951, v.117, p.31-64.

290. McMahon D. Chemical messenger in development: a hypothesis.- Science, 1974, v.I85, p.1012-1021.

291. McMahon D., West C. Transduction of positional information during development. In: Cell surface in animal embryoge-nesis and development. Amsterdam: North-Holland Publ.Co., 1976, p.449-493.

292. Minuth W.W. Mesodermalization of amphibian gastrula ectoderm in transfilter experiments. Med. Biol., 1978, v.56, p.349-354.

293. Minuth M., Grunz H. The formation of mesodermal derivatives after induction with vegetalizing factor depends on secondary^ cell interactions. Cell. Differ., 1980, v.9, N 4,p.229-238.

294. Minuth W., Minuth M., Tiedemann H. Amino acid transport and protein synthesis in induced ectoderm of amphibian embryos.- Wilhelm Roux's Archiv., 1979, v.187, p.211-2X7.

295. Muthukkaruppan V. Inductive tissue interaction in the development of the mouse lens in vitro. J. Exptl. Zool., 1965, v.159, p.269-287.

296. Nace G.W., Clarke W.M. Immuno-histological localization of th® one or more transitory, antigens in the optic cup and lens of Rana pipiens. In::A symposium of the chemical basis of development. N.Y.: Johns Hopkins Press, 1958, p.546-561.

297. Nace G.W., Inoue K. Cytolysis versus differentiation in antineurula serum. Science, 1957, v.126, p.259-261.

298. Nakamura 0. Foreword io: Organizer A milestone of a half -century,/from Spemann. O.Nakamura, S.Toivonen (eds.), Amsterdam, Oxford, N.Y.: Elsevier / North-Holland Biomed. Press, 1978, p.X.

299. Nakamura 0., Toivonen S. (eds). Organizer A milestone of a half-century from Spemann. Amsterdam, Oxford, New York: Elsevier / North-Holland Biomed, Press, 1978, 378 pp.

300. Nakamura 0., Takasaki H.Y., Obayshi N.f Kono S.f Okamoto H., Okumoto T. Inductive activity,, of the organizer in morula and blastula of Triturus pyrrhogaster. Proc. Japan Acad., 1970, v.46, p.700-705.

301. Neff A.W., Wakahara M., Jurand A., Malacinski G.M, Experimental analysis of cytoplasmic rearrangements which follow fertilization and accompany,, symmetrization of inverted Xenopus. J. Embryol, ездэ. Morphol., 1984, v.80, p.I97-224.

302. Nieuwkoop P.D. The formation of mesoderm in urodelean amphibians. I. Induction by the endoderm. Wilhelm Roux's Archiv., 1969, v.162, p.341-373.

303. Nieuwkoop P.D. The "organization center" of amphibian embryo: its origin, spatial organization and morphogenetic action. Adv. Morphogenesis, 1973, v.10, p.1-39.

304. Nieuwkoop P.D. Origin and establishment of embryonic polar axes in amphibian development. Ourr. Top. Devi. Biol., 1977, v.II, p.115-132.356» Nieuwkoop P.D., Paber J. Normal table of Xenopus laevis (Daudin). Amsterdam: North-Holland Publ. Co., 1956.

305. Nieuwkoop P.D., Ubbels G.A. The formation of the mesoderm in urodelean amphibians. IV. Qualitative evidence for the purely "ectodermal" origin of the entire mesoderm and of the pharyngeal endoderm. Wilhelm Roux's Arch., 1972, v.169,p.I85-199»

306. Nieuwkoop P.D., Weijer O.J. Neural induction, a two-way process. Med. Biol., 1978, v.56, p.366-371.

307. Niu M.O. New approaches to the problem of embryonic induction. In:Cellular mechanisms in differentiation and growth. D.Rudnick (ed), Princeton: Univ. Press, 1956, p.I55-I7I.

308. Niu M.O., Twitty V. The differentiation of gastrula ectoderm in medium conditioned by axial mesoderm. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1953, v.39, p.985-989.

309. Nomura K. Differentiation of lens and pigment cells in cultures of brain cells of chick embryo. Differentiation, 1982, v.22, p.I79-184.

310. Oakely/B.R., Kirsch D.R., Morris N.R. Simplyfied ultrasensitive silver stain for detecting proteins in polyacrylamide gels. Analyt. Biochem., 1980, v.105, p.361-363.

311. O'Farrell P.J. High-resolution, two dimensional electrophoresis of proteins. J. Biol. Chem., 1975, v.250, p.4007-4021.

312. Ogawa T. Appearance of lens antigens during the embryonic development of the newt. Embryologia, 1965, v.8, p.345-36I.

313. Oh Т.Н., Markelonis G.J. Dependence of in vitro myogenesis on a trophic protein present in chick embryo extract . -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v.77, p.6922-6925.

314. Okada T.S. Cellular metaplasia or transdifferentiation as a model for retinal differentiation. Curr. Top. Devi. Biol., 1980, V.-I6, p.349-380.

315. Okada T.S., Eguchi G., Takeuchi H. The retention of differentiated properties by lens epithelial cells in clonal cell culture. Developm. Biol,, 1973, v.34-, p.321-333*

316. Okada T.S., Nomura K., Yasuda K. Commitment to transdifferentiation into lens occurs in neural retina cells after brief spreading culture of the dissociated cells. Cell Diff., 1983, v.I2, p.85-92.

317. Okada T.S., ItohY., Watanabe K., Eguchi G. Differentiation of lens in cultures of neural retinal cells of chick embryos. Developm. Biol., 1975, v.45, p.318-336.

318. Oppenheimer J.M. Dependent and independent differentiation of the lens in Fundulus embryos. Arch. Zool. Ital., 1966, ▼.51, Part 2, p.667-682.

319. Oppenheimer J.M. Fifty years of fundulus. Quart. Rev. Biol., 1979, v.54-, N 4, p.385-395.

320. O'Rahilly R., Meyer D.B. The early development of the eyein the chick Gallus domesticus (stages 8 to 25). Acta

321. Anat., 1959, v.36, p.20-58.• - w

322. Ossermann E.F, A modified technique of Immunoelectrophoresis facilitating the identification of specific precipitation ares. J. Immunol., I960, v.84, p.93-98.

323. Perris R,, Ljavtrup S. Induction or activation? Observations on the mechanism of primary induction in the amphibian embryo. In: Abstr. of IX Congress of the Internatl. Soc. of Devi. Biologists, Basle - Switzerland, 1981, p.267.

324. Pettmann В., Delaney J.-P., Courageot J., Devilliers G., Sensenbrenner M. Rat brain glial cells in culture: effect of brain extracts on the development of olygodendroglia-like cells. Developm. Biol., 1980, v.75, p.278-287.

325. Philpott G.W., Coulombre A.J. Cytodifferentiation of precul-tured embryonic chick lens epithelial cells in vitro and in vivo. Exptl. Cell Res., 1968, v.52, p.I40-I46.

326. Piatigorsky J. Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features. Differentiation, 1981, v.I9, p.134-153*

327. Popiela H., Ellis S. Neurotrophic factor: characterization and partial purification. Developm. Biol., 1981, v.83, p.266-277.

328. Prema-Michael, Are the primordial germ cells (PGCs) in Uro-dela formed by the inductive action of the vegetative yolk mass? Developm. Biol., 1984, v.103, p.I09-II6.

329. Rahmani Ш.М.-Z. Correlation between immunodifferentiation and histodifferentiation in presumptive lens ectoderm of the chick in vitro, Acta Anat,, 1984, v.119, p.203-209,

330. Ranzi S., Citterio P., Samuelli C. Proteine e antigeni durante lTacrescimento embrionale e larvale di due specie di ros-pi (Bufo bufo e Bufo viridis) e dei loro incroci. Acta Embriol. exp. Morphol., I960, v.3, p.65-73*

331. Rasilo M.-A., Leikola A. Neural induction by previously induced epiblast in avian embryo in vitro. Differentiation, 1976, v.5, N I, p.I-7.

332. Reddan J.R., Weinsieder A., Wilson D, Aqueous humor from traumatized eyes triggers cell division^in the epithelialof cultured lenses. Exptl. Eye Res., 1979, v.28, p.267-278.

333. Reyer R.W. Studies on lens induction in Amblystoma punctatum and Triturus viridescens viridescens. I. Transplants of prospective belly ectoderm. J. Exptl. Zool., 1958, v.138,1. P.505-555.

334. Reyer E.W. Morphological evidence for lens differentiation from intra-ocular implants of lens epithelium in Ambystoma maculatum. Exptl. Eye Res., 1977, v.24, p.511-522.

335. Righetti P.G. Isoelectric focusing: theory, methodology and application. Amsterdam, N.Y., Oxford: Elsevier Biomed. Press, 1983, 386 pp.

336. Righetti P.G., Drysdale J.W. Isoelectric focusing. Amsterdam, N.Y., Oxford: North-Holland Publ. Co., 1979, 590 pp.

337. Rollhauser-ter H.J. Artificial neural induction in amphibian. III. Retina formation and autoorganization in single and double layer Triturus explants. Anat. Embryol., 1981,v.162, N I, p.69-80.

338. Romanovsky A. Studies on antigenic differentiation in the embryonic development of Rana temporaria L. I. Agar precipitation tests. Folia Biol. (Praha), 1964a, v.10, p.I-II.

339. Romanovsky A. Studies on antigenic differentiation in the embryonic development of Rana temporaria L. II. Ring test.- Folia Biol. (Eraha), 1967b, v.10, p.12-21.

340. Sanchez S.S., Barbieri F.D. Developmental and biochemical alterations caused by tunicamycin in Bufo arenarum embryos.- Wilhelm Roux's Archiv. Developm. Biol., 1983, v.192, p.37-41.

341. Sasaki N. Inductive effects of the chick embryo extract on the presumptive epidermis of Amphibian embryo. Kumamoto J. Sci., I960, ser. B, v.5, p.89-99.

342. Sasaki N., Iyeiri S., Kurihara K. Interaction of induced and uninduced cells during primary induction. Wilhelm Roux's Archiv., 1976, v.179, p.237-241.

343. Sasaki N., Kawakami I., Okano H. Embryonic inductions by chick embryo extract and its nucleoprotein. Jap. Zool. Mag. (Tokyo), 1957, v.66, p.58.

344. Sasaki N., Kawakami I., Mifune S., Tamanoi I. The lens induction by a crude protein extracted from rabbit bone-marrow.- Mem. Fac. Sci. Kyushu Univ., Ser. E (Biology), 1957, v.2, N 3, p.159-162.

345. Sauer H.W. Developmental biology to-day, an overview. In: Fortschritte der Zoologie, Bd.26t Stuttgart - New York:. Gustav Fischer Yerlag, 1981, p.7-13.

346. Sawai T. Cytoplasmic and cortical factora participating in cleavage furrow formation in eggs of three amphibian genera: Ambystoma, Xenopus and Cynops. J. Embryol. exp. Morphol.,1983, v.77, P.24J-254.

347. Sawano J., Ikeda A. Studies on the effects of lens antiserum in the chick embryo. Kawasaki Med. J., 1976, v.2, N 4,p.165-174.

348. Saxen L. The transmission of information during primary embryonic induction. In: Biological organization at cellular and supercellular level. R.J.C.Harris (ed.), N.Y., London: Acad. Press, 1963, p.211-227.

349. Saxe'n L. Directive versus permissive induction: a working hypothesis, In: Cell and tissue interactions. J.W.Lash, M.M.Burger (eds), New-York: Raven Press, 1977a, p.I-9.

350. Saxen L. Morphogenetic tissue interactions: an introduction, In: Cell interactions in differentiation, M,Karkinen-Jaaskelainen, L.Saxen, L.Weiss (eds). London, New York, San Francisco; Acad. Press, 1977b, p.I45-I5I«

351. Saxen L, Two-gradient hypothesis of primary embryonic induction. Med. Biol., 1978, v.56, p.293-298.

352. Saxe'n L. Neural induction: past, present, and future. -Curr. Top. Developm. Biol., 1980a, v.15, ch.I2, p.409-418.

353. Saxen L, Mechanism of morphogenetic tissue interactions: the message of transfilter experiments, Differ, and Neoplasia, 1980b, p.147-154.

354. Saxen L,, Toivonen S. The two-gradient hypothesis in primary induction. The combined effect of two types of inductors mixed in different ratios. J. Embryol. exp. Morphol., 1961, v.9, p.514-533.

355. Saxen L., Lehtonen E., Karkinen-Jaaskelainen M., Nordling S., Wartiovaara J. Are morphogenetic tissue interactions mediated by transmissible signal substance or through cell contacts? Nature, 1976, v.259, p.662-663.

356. Scharf S.R., Gerhart J.O. Determination of the dorsal-ventral axis in eggs of Xenopus laevis: complete rescue of TJV-im-paired eggs by oblique orientation before first cleavage.- Developm. Biol., 1980, v.79, p.181-198.

357. Scharf S.R., Gerhart J.O. Axis determination in eggs of Xenopus laevis: A critical period before first cleavage, identified by the common effects of cold, pressure, and ultraviolet irradiation. Developm. Biol., 1983, v.99, p.75-87.

358. Scippa. S., de Tincentiis M. Soluble lens antigens determinants in early chick embryo. In: Abstracts of 15-th EDBO Internatl. Embryol. Conf., Strasbourg, 1982, p.71, N 146.

359. Silver P.H., Wakely J. Fine-structure, origin and fate of extracellular materials in interspace between presumptive lens and presumptive retina of chick embryo. J. Anat., 1974, v.II8, p.19-30.

360. Sirlin J.L., Brahma S.K. Studies on embryonic induction using radioactive tracers. II. The mobilization of protein components during induction of the lens. Developm. Biol., 1959, v.I, p.234-246.

361. Sirlin J.L., Brahma S.K., Waddington O.H. Studies on embryonic induction using radioactive tracers. J. Embryol. exp. Morphol., 1956, v.4, p.248-253.

362. Slack J.M.W. Regional biosynthetic markers in the earlyamphibian embryo. J. Embryol. exp. Morphol., 1984a, v.80, p.289-319.

363. Slack J.M.W. In vitro development of isolated ectoderm from axolotl gastrulae. J. Embryol. exp. Morphol., 1984b, v.80, p. 321-330»

364. Smith J.С. Disorganized embryos? Nature, 1983, v.302, N 59Ю, p.658-659.

365. Smith J.C., Enowland J. Protein synthesis in dorsal and ventral regions of Xenopus laevis embryos in relation to dorsal and ventral differentiation. Developm. Biol., 1984, v.I05, p.555-568.

366. Smith J.C., Malacinski Gr.M. The origin of the mesoderm in an Anuran, Xenopus laevis, and a Urodele, Ambystoma mexica-num. Developm. Biol., 1983, v.91, N I, p.250-254.

367. Smith J.C., Slack J.M.W. Dorsalization and neural induction: properties of the organizer in Xenopus laevis. J. Embryol. exp. Morphol., 1985, v.78, p.299-517.

368. Spar I.L. Antigenic differences among early developmentalstages of Rana pipiens. J. exp. Zool., 1955, v.125, p.467-W.

369. Spemann H. Embryonic development and induction. N.X.: Yale University, 1958.

370. Spemann H., Mangold H. Uber Induktion von Embryonalanlage durch Implantation artfremder Organisatoren. Roux's Arch. EntwMech. Org., 1924, v.100, p.599-658.

371. Stanisstreet M., Deuchar E.M. Appearance of antigenic material in gastrula ectoderm after neural induction. Cell, 1972, v.I, p.15-18.

372. Starre H. van der. Lens induction studies in vitro. Ophthalmol. Res., 1972, v.5, p.20.

373. Starre H. van der. Biochemical investigation of lens induction in vitro. I, Induction properties of the eye cup and ectodermal response. Acta Morphol. Neerl.-Scand., 1977, v.15, p.275-286.

374. Starre H. van der. Biochemical investigation of lens induction in vitro. II. Demonstration of the induction substance.- Acta Morphol. Neerl.-Scand., 1978, v.16, p.109-120.2

375. Suzuki M. Neural induction by treatment with Oa -free saline solution in the gastrula ectoderm of Cynops pyrrhogas-ter and inhibition Of neural induction with fetal calf serum. Devi., Growth and Diff., 1983, v.25, N 5, p.453-462.

376. Tahara Y. Differentiation of the independent lens rudimentin Phacophorus schlegelii arboreus Okada et Kawano» Embryo-logia (Nagoya), 1962, v.7, p.150-168.

377. Takasaki H., Ose Y. The blastomeres committed to head formation in Xenopus laevis embryos. Devi., Growth and Diff., 1984, v.26, N 4, p.373 (abstract).

378. Takata C., Albright J.F., Yamada T. Study of lens antigens in developing newt lens with immunofluorescence. Exptl. Cell Res., 1964, v.34, p.208-210.

379. Takata K., Yamamoto K.J., Orawa R. Use of lectins as probes for analysing embryonic induction. Wilhelm Roux's Arch. Devi. Biol., 1981, v.190, N 2, p.92-96.

380. Takata K., Yamamoto K.Y., Takahashi N. Cell surface glycoproteins as neural inducing receptors in Cynops presumptiveectoderm, Devi., Growth and Diff., 1983, v.25, N 4, p.418 (abstract),

381. Takaya H. On the types of neural tissue developed in connection with mesodermal tissue. Proc. Japan Acad., 1956b, v.32, p.288-292.

382. Takeuchi S. Change in modes of lens formation in the newt during development. Embryologia, 1963, v.8, p.21-44.

383. Tapscott S.J., Bennett G.S., Holtzer H. Neuronal.precursor cells in the chick neural tube express neurofilament proteins. Nature, 1981, v^292, p.836-838.

384. Tarin D. Histological features of neural induction in Xenopus laevis. J. Embryol. exp. Morphol., 1971, v.26, p.543-570.

385. Tarin D. Ultrastructural features of neural induction in Xenopus laevis. J. Anat., 1972, v.Ill, p.1-28.

386. Tarin D. Histochemical and enzyme digestion studies on neural induction in Xenopus laevis. Differentiation, 1973» v.I, p.109-126.

387. Tarin D. Studies on primary embryonic induction. In: Cell interactions in differentiation. L.Saxen, H.Karkinen-Jaaske-lainen, L.Weiss (eds), London, N.Y., San Francisco: Acad. Press, 1977, p.227-248.

388. Tarin D. Embryonic induction. A review of current information of the mode of signal transmission and target response.- Med. Biol., 1978, v.56, p.380-385.

389. Ten Cate G., Dandriev M., Gortza E. The effect of chick anti-sera to a protein fraction from the crystallin lens on the development of chick embryos. In: Symp. on germ cells and development. Pallanza, I960, p.623-624.

390. Thesleff I. Tissue interactions in tooth development in vitro. In: Cell, interactions in differentiation. H.Kar-kinen-Jaaskelainen, L.Saxen, L.Weiss (eds). London, N.Y., San Francisco; Acad. Press, 1977, p.191-208.

391. Tiedemann H. The molecular basis of differentiation in early development of amphibian embryos. Ourr. Top. Devi. Biol., 1966, v.I, p.85-112.

392. Tiedemann H. Biochemical aspects of primary induction and determination. In: Biochemistry of animal development. R.Weber:.-(ed), New York: Acad. Press, 1967, v.2, p.3-55*

393. Tiedemann H. Inducers and inhibitors of embryonic differentiation: their chemical nature and mechanism of action. -Exp. Biol. Med., 1967, v.I, p.8-21.

394. Tiedemann H. Factors determining embryonic differentiation.- J. Cell Physiol., 1968, v.72, Suppl.I, p.129-144.

395. Tiedemann H. Extrinsic and intrinsic information transferin early differentiation of amphibian embryos. In: Control mechanisms of growth and differentiation. Cambridge: Univ. Press, 1971, p.223-234.

396. Tiedemann H. Pretranslational control in embryonic differentiation. In: Regulation of transcription and translation in eukaryotes (Mosbacher Colloquium). Berlin-Heidelberg-New York: Springer Verlag, 1973, p.59-80.

397. Tiedemann Н», Born J. Biological activity of vegetalizing and neuralizing inducing factors after binding to BAC-cellu-lose and CNBr-sepharose. Wilhelm Roux1 s Arch. Devi. Biol., 1978, v.I84, p.285-299.

398. Tiedemann H., Born J., Tiedemann H. Mechanisms of cell differentiation: affinity of a morhogenetic factor to DNA. -Wilhelm Roux1s Arch., 1972, v.171, p.160-169,

399. Tiedemann H., Kocher-Becker U., Tiedemann H. Chromatographic separation of a hindbrain inducing substance into mesodermal and neural-inducing subfractions. Biochim, Biophys. Acta, 1963, v.74, p.557-560.

400. Tiedemann H., Tiedemann H., Kesselring K. Versuche zur Kennzeichnung von Induktionstoffen aus Huhneremryonen. I.

401. Abbau durch trypsin und Carboxypeptidase. Z. Naturf., I960, v.15, p.312-319.

402. Tiedemann H., Kesselring K., Becker U., Tiedemann H. The chemical nature of organ-determining substances in the early development of embryos. Biochim. Biophys. Acta, 1961,v.49, p.603-605.

403. Togashi S., Asashima Ы. Changes in the electrophoretic mobility of presumptive ectoderm cells treated with mesodermal inducing substances. Devi. Growth and Diff., 1980, v.22, N 5, p.797-803.

404. Toivonen S. Spezifische Induktionsleistungen von abnormen Induktoren im Implantatversuch. Ann. Zool. Soc. Fenn. Vanamo, 1938, v.5, p.I-12.

405. Toivonen S. tfber die Leistungspecifitat der abnormen Induktoren im Implantationsversuch bei Triton. Ann. Acad. Sci. Fenn., 1940, A 55, p.I-150.

406. Toivonen S. Zur Frage der Induktion selbstandiger Linsen durch abnorme Induktion im Implantatversuch bei Triton. -Ann. Zool. Soc., 1945, Bd.II, S.I-26.

407. Toivonen S. Zur Frage der Leistungsspeaifitat abnormer Induktoren. Experientia, 1949a, v.5* p.323-325.

408. Toivonen S. Die Induktionswirkung von Leistungsspezifischen Heterogenen Induktoren nach Behandlung mit verschiedenen Eingriffen (Temperatur, Losung smitteln) im Implantationsversuch bei Triton. Arch. Soc. Zool. Bot. Fenn. Vanamo, 1949b, v.4, p.28-34.

409. Toivonen S. The inducing action of the bonemaxrow of the guinea-pig after alcohol and heat treatment in implantation and explantation experiments with embryos of Triturus. J.

410. Embryol. езф. Morphol., 1954, v.2, p.233-244.

411. Toivonen S., Wartiovaara J. Mechanisms of cell interaction during primary embryonic induction studied in transfilter experiments. Differentiation, 1976, v.5, p.61-66.

412. Toivonen S., Tarin D., Saxen L., Tarin P.J., Wartiovaara J. Transfilter studies on neural induction in the newt. Differentiation, 1975, v.4, p.1-7.

413. Towbin H., Staehelin Т., Gordon J. Electrophoretic transferof proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. R£oc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1979, v.76, If 9, p.4350-4354.

414. Vainio T. The antigenic properties of the blastoporal lip of the Tritrurus gastrula. Ann. Med. exp. Fenn., 1956, v.34, p.71-77.

415. Vainio Т., Saxen L.,• Toivonen S. Transfer of the antigenicity of guinea-pig bone marrow implants to the graft tissue in explantation experiments. Experientia, I960, v.16, p.27-28.

416. Vainio Т., Saxen L., Toivonen S., Rapola J. The transmission problem in primary embryonic induction. Exptl. Cell Res., 1962, v.27, p.527-538.

417. Virtanen I., Vartio Т., Lehto V.-P. Low-ionic strength induces degradation of vimentin in cultured human fibroblasts* Biochem, Biophys. Res. Commun., 1982. v.I05, Ы 2, p.730-736.

418. Vulliamy Т., Messenger A. Tetanus toxin: a marker of amphibian neuronal differentiation in vitro. UeuEOsci. Letters, 1981, v.22, N 2, p.89-90.

419. Waddington C.H., Sirlin J.L. Studies on amphibian embryoge-nesis using labelled grafts. Broc. Roy. Phys. Soc., 1955» v.24, p.28-31.

420. Waddington O.H., Needham J., Brachet J. Studies on the nature of amphibian organization centre. III. The activation of the evocator. Proc. Roy. Soc. (London), I936, ser.B, v.120,p.I73-198.

421. Waggoner P.R., Lieska N.J., Maisel H. Electrophoretic study of the soluble proteins of the developing chick neural retina and brain. Experientia, 1974, v.30/12, p.I376-I377.

422. Wahn H.L., Lightbody L.E., Tchen T.T. Induction of neural differentiation in cultures of amphibian undetermined presumptive epidermis by cyclic AMP derivatives. Science, 1975, v.188, p.366-369.

423. Wahn H.L., Taylor J.D., Tchen T.T. Acceleration of amphibian embryonic melanophore development by melanophore-stimula6 pting hormone, N , 0 -dibutyryl adenosine 3' ,5'-monophosphate and theophylline. Devi. Biol., 1976, v.49, p.470-478.

424. Witte D., Sottlieb D.I. Time of appearance and tissue distribution of a cell surface antigen in early chick development.- Dev. Brain Res., 1983, v.9, N 3, p.63-67.

425. Woellwarth C.V. Die Rolle des Neuralleistenmaterials und der Temperatur bei der Determination der Augenlinse. Em-bryologia, 1961, v.6, p.219-242.

426. Yamada T. A chemical approach to the problem of the organizer. In: Advances in morhogenesis. M.Abercrombie, J.Bra-chet (eds), N.Y.: Acad. Press, 1961, v.I, p.I-53.

427. Yamada T. Factors of embryonic induction. In: Comprehensive biochemistry. M.Florkin, E.H.Stotz (eds). Vol.28. Morphogenesis, differentiation and development. Amsterdam -London - New York, 1967, p.115-14-3.

428. Yamada T. The inductive phenomenon as a tool for understanding the basic mechanism of differentiation. J. Cell. Сотр. Physiol., 1962, v.60, suppl.I, N 2, p.49-64.

429. Yamada T. The concept of embryonic induction in the passage of time. Netherlands J. Zool., 1981, v.31, N I, p.78-98.

430. Yamada T. Developmental control of cell differentiation. -Zool. Sci., 1984, v.I, p.333-3^8.

431. Yamada Т., Takata K. A technique for testing macromolecularvsamples in solution for morphogenetic effects on the isolated ectoderm of the amphibian gastrula. Devi. Biol., 1961, v.3, N 4, p.411-423.

432. Yamamoto Y. Growth of lens and ocular environment: role of neural retina in the growth of mouse lens as revealed by an implantation experiments. Devi., Growth and Diff.,1976, v.18, p.273-278.

433. Xamamoto K.T., Ozawa R., Takata K., Kitoh J. Cell surface changes of the presumptive ectoderm following neural-inducing treatment "by Concanavalin A. Wilhelm Roux's Arch., 1981, v.I90, H 6, p.313-319.

434. Yang J.W., Hilfer S.R. The effect of inhibitors of glyco-conjugate synthesis on optic cup formation in the chick embryo, Developm. Biol., 1982, v.92, p.41-53.

435. Zigler J.S., Sidbury J.B. A comparative study of the^ -crys-tallins of four sub-mammalian species. Corop. Biochem. Physiol., 1976, v. 55 B, p.19-24.

436. Zwaan J. Immunochemical analysis of the eye lens during development. Amsterdam. 1963. Thesis.

437. Zwaan J. Mitotic activity in the lens rudiment of the chicken embryo before and after the onset of crystallin synthesis. Roux's Archiv. Entw. Mech., 1974, v.175, p.13-25.

438. Zwaan J. The appearance of ©(-crystallin in relation to cell cycle phase in the embryonic mouse lens. Developm. Biol., 1983, v.96, p.173-181.