Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эколого-морфологические особенности патологии и адаптации органов и тканей рыб при воздействии токсикантов

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Эколого-морфологические особенности патологии и адаптации органов и тканей рыб при воздействии токсикантов"

На правахрукописи

КРЮЧКОВ Виктор Николаевич

Эколого-морфологические особенности патологии и адаптации органов и тканей рыб при воздействии токсикантов

Специальность 03.00.16 - экология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Махачкала, 2004

Работа выполнена в Астраханском государственном техническом университете

Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ,

доктор сельскохозяйственных наук, профессор В.Ф. Зайцев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Д. С Краюшкина

почетный работник рыбного хозяйства РФ, доктор биологических наук А.Ф. Сокольский

заслуженный деятель науки Республики Дагестан, доктор биологических наук, профессор М.М. Шихшабеков

Ведущая организация: Калмыцкий государственный университет

Защита состоится 30 июня 2004 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212.053.03 по присуждению ученой степени доктора наук при Дагестанском государственном университете по адресу: 367025, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 21.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института прикладной экологии

Автореферат разослан 28 мая 2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета к.б.н., доцент

АЛ. Теймуров

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Проблема изучения влияния на живые организмы вредных факторов окружающей среды приобрела в последние годы универсальное биологическое значение, при этом большое внимание уделяется токсикологическим исследованиям. В настоящее время приоритеты исследований по проблеме влияния загрязнения водоемов на гидробионтов меняются. В связи с проводимыми природоохранными мероприятиями и современным падением промышленного производства острые экзотоксикозы водных животных стали относительно редкими. Вместе с тем, в водоемах, в частности, в р. Волге и в Каспийском море, постоянно присутствуют загрязняющие вещества в концентрациях, зачастую превышающие предельно допустимые (Хорошко и др., 1989; Андреев и др., 1990; Кукса, 1994).

В экологической токсикологии патоморфологические изменения внутренних органов рыб являются одним из объективных критериев токсичности, чему посвящено большое количество исследований (Кондратенко, Щербин, 1991; Корниенко и др., 1996; Ткачева, Рыжков, 1997; Федорова и др., 1999 и др.). Авторы этих и других работ убедительно показали значение изменений в микроструктуре органов и тканей рыб для оценки степени токсичности среды для рыб. Вместе с тем, многие принципиальные вопросы, такие, как значение выявляемых изменений для функции органа или для устойчивости всего организма рыб зачастую еще остаются вне поля зрения исследователей. Мало изучены вопросы единства структуры и функции органов, единства процессов деструкции и восстановления (Саркисов, 1988). Требуют дальнейшего обобщения огромные по объему фактические данные по патологии органов и тканей рыб с целью возможности сравнения результатов, полученных разными исследователями.

Для нормального функционирования организма необходим высокий уровень резистентности к неблагоприятным условиям среды. В этой связи необходимо отметить, что устойчивость животных к действию многих био-

ГОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ

ЬЧг.;!г;тг.чл

логических, химических и физических факторов обусловлена деятельностью иммунной и других гомеостатических систем. Оценка иммунофизиологиче-ского статуса животных получила широкое распространение при диагностике заболеваний, установлении физиологической опасности техногенных воздействий, изучении общей адаптационной реакции организма в условиях интенсификации животноводства (Коромыслов, 1988; Федоров, 1990 и др.). Принципы данного подхода с успехом реализованы для системного анализа иммунофизиологической реактивности рыб в условиях аквакультуры (Вих-ман, 1996). Несомненно, что эти или подобные методы могут быть применены и в практике эколого-токсикологических исследований.

Как известно, зачастую суждение о негативном воздействии на организм экстремальных факторов среды, в том числе и токсикантов, основывается на самом факте выявления изменения исследуемого показателя. При этом, как правило, не всегда учитывается, какое значение для организма имеет наблюдаемое изменение биологической функции (Флеров, 1989). Кроме того, необходимо сопоставление изменений с биологической нормой, что по ряду причин тоже не всегда оказывается возможным (Трахтенберг и ДР-, 1991).

Целью исследований явилось выявление современных морфологических и функциональных признаков патологии и адаптации у рыб, а также оценка общей резистентности при патологических изменениях в организме рыб, вызванных действием токсикантов, находящихся в воде.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Установить уровень кумуляции некоторых тяжелых металлов и хло-рорганических пестицидов в органах и тканях рыб.

2. Оценить основные патологические изменения в печени и экскреторных отделах почек некоторых видов рыб дельты Волги и Каспийского моря, возникающих в современных условиях внешней среды, а

также изучить частоту распространения основных морфологических нарушений в печени рыб.

3. Изучить механизмы патологии и адаптации печени рыб к воздействиям токсических веществ на тканевом, клеточном и субклеточном уровнях, а также определить экспериментальными методами функциональное значение адаптивных и репаративных процессов в печени рыб после интоксикаций.

4. Исследовать механизм нефротоксичности некоторых ксенс биотиков, а также определить роль иммунных процессов в развитии патологии экскреторных отделов почек рыб. Изучить толерантность карповых рыб к кадмию как к одному из важных экотоксикантов.

5. Изучить направленность и характер морфофункциональных нарушений периферической крови рыб при хронических токсикозах.

6. Оценить влияние на иммунофизиологический статус рыб токсикологических стресс-факторов и выявить характер и направленность изменений общей резистентности рыб.

Научная новизна работы

Впервые проведено обобщение патоморфологических изменений в жизненно важных органах осетровых и карповых рыб в современных экологических условиях Нижней Волги и Каспийского моря, а также приводятся сведения о распространении основных видов патологии печени у осетровых видов рыб, возникающих под действием внешних факторов. Впервые на тканевом, клеточном и субклеточном уровнях описаны как патолэгические, так и репаративные процессы в печени и в экскреторных отделах почек при действии на них различных токсикантов. Показано, что патология печени при некоторых токсикозах характеризуется функциональным напряжением гепатоцитов, вследствие чего происходит разрушение их органелл. Адаптивные процессы в печени происходят в виде внутриклеточной гиперплазии

и регенерации ультраструктур, функционально связанных с синтезом белка. На основании морфофункционального анализа показано, что состояние печени о рыб оценивается как компенсированная патология.

Впервые исследован один из основных механизмов хронического токсического действия кадмия на рыб, в связи с чем изучена роль иммунных процессов при развития морфологических и функциональных нарушений в экскреторных отделах почек карповых рыб. Выявлен дозазависимый эффект развития гломерулярных изменений почек рыб при накоплении в них кадмия.

Описан процесс отторжения первичного чешуйного аллотрансплантата у рыб, показана возможность использования данного показателя для оценки иммунной реактивности рыб при токсикозах.

Выявлена связь патоморфологических нарушений в паренхиматозных органах рыб с некоторыми показателями неспецифической резистентности, изменения которых приводят к развитию состояния, характеризующимся иммунодефицитом. Доказана возможность неспецифического проявления экзотоксикозов в виде сопутствующей инфекции.

Практическое значение работы состоит в систематизации основных форм патологии печени и экскреторных отделов почек рыб, развивающихся под влиянием современных экологических условий. Предложен комплекс морфофизиологических методов, позволяющих оценить степень развития адаптивных и патологических реакций организма рыб, который применим при проведении мониторинговых токсикологических исследованиях популяций рыб в естественных ареалах. Материалы исследования используются в преподавании курсов «Прикладная экология», «Экологическая токсикология», «Цитология», «Гистология» в институте биологии и природопользования Астраханского государственного технического университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Накопление из окружающей среды некоторых тяжелых металлов и хлорорганических пестицидов в органах и тканях рыб зависит от функциональных свойств тканей. Уровень накопления указанных токсикантов в современных экологических условиях не оказывает непосредственного влияния на характер и степень развития изменений во внутренних органах рыб. Исключение составляет кадмий, для которого выявлен критический уровень накопления в экскреторных отделах почек рыб, что приводит к развитию почечной патологии.

2. Действие различных по своей природе поллютантов (нефть, кадмий) приводит к развитию схожих изменений в печени, т.е. их действие на тканевом и клеточном уровнях неспецифично. Основным механизмом развития патологии печени рыб при действии изученных токсических веществ является функциональное перенапряжение гепатоцитов, приводящее к появлению морфологически измененных структур клетки. Морфологическим субстратом функциональных резервных возможностей печени является гипертрофия и гиперплазия внутриклеточных органелл гепатоцита.

3. Кадмий играет важную роль при возникновении изменений в экскреторных отделах почек рыб даже при относительно небольших его концентрациях в воде. Иммунным процессам принадлежит ведущая роль в развитии гломерулярных форм почечной патологии у рыб.

4. На фоне патологических изменений в жизненно важных органах рыб при действии токсикантов развивается состояние, характеризующееся лейкопенией и функциональной недостаточностью иммунной системы. Торможение реакции отторжения первичного аллотрансплантата и снижение толерантности к условно-патогенной микрофлоре рассматривается как неспецифическое проявление хронического токсикоза.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на Первом российско-американский симпозиуме «Аквакультура и здоровье рыб» (Москва, 1998), Первом конгрессе ихтиологов России (Астрахань, 1977), на Международном Форуме по проблемам науки, техники и образования (Москва, 1998), Юбилейной научной конференции, посвященной 80-летию Астраханского заповедника (Астрахань, 1999), Девятой Международной конференции «Diseases of Fish and Shellfish» (Родос, 1999), V Всероссийской конференции' «Нейроэндокринология-2000» (С-Петербург, 2000), Международной конференции «Осетровые на рубеже 21 века» (Астрахань, 2000), Симпозиуме, посвященном 100-летию со дня рождения проф. НЛ. Гербильского (С-Петербург, 2000), X Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2001), ежегодных конференциях профессорско-преподавательского состава Астраханского государственного технического университета.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 48 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, изложенных в трех главах, заключения и выводов. Материал изложен на 266 страницах, имеет 62 рисунка и 41 таблицу. Список использованной литературы содержит 257 наименований.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена на кафедре гидробиологии и общей экологии Астраханского государственного технического университета.

Основу работы составляют многолетние данные, собранные с 1989 года на водоемах дельты Волги и Северного Каспия и на рыбоводных хозяйствах Астраханской области. Неотъемлемую часть составляют результаты экспериментальных работ в аквариальных условиях.

В качестве объекта исследования были использованы карп (беспородный чешуйчатый) Cyprinus carpio (L), карась Carassius auratus gibelio (Bloch.), русский осетр Acipenser guldenstadti Brand. Кроме того, для пато-гистологического анализа использовались органы и ткани севрюги Acipenser stellatus, белуги Huso huso (L.), белого амура Ctenopharingodon idella (Val.), бычка-кругляка Neogobius melanostomus (Pall.).

В работе использовался комплекс методов.

1. Химические: для определения уровня накопления токсикантов в органах и тканях рыб.

2. Иммунологические и биохимические: для изучения иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов, фагоцитарной активности, активности лизоцима, содержания естественных антител и др.

3. Гистологические: классические гистологические, морфометрические методы, электронно-микроскопические.

4. Экспериментальные методы с использованием различных токсикантов (тяжелые металлы, нефть).

Химический анализ

Изучение кумуляции металлов в органах и тканях карпа проводилось методом атомно-абсорбционной спектофотометрии (Прайс, 1976) на спектрофотометре «Hitachi» модели AA-S 180-50.

Анализ хлорорганических пестицидов (ХОП) выполнен на газовом хроматографе «Янако» с детектором по захвату электронов. Колонка стеклянная, длина 1,0 м, диаметр 3 мм. Неподвижная фаза - метил-силикон SE-30 (5%). Температурный режим: испарителя колонки -

Скорость газа-носителя (азот о.с.ч.) - 30 мл/мин.

Патоморфологический анализ

Гистологические препараты тканей рыб приготавливали по общепринятым методикам: фиксация в растворе Буэна, проводка через спирты возрастающей крепости, заливка в парафин-целлоидиновые блоки, окраска гема-

токсилин-эозином, кислым фуксином с докраской по Маллори (Ромейс, 1953). Анализ.и фотографирование микропрепаратов осуществлялись на микроскопе «Olympus BH-2».

Для ультрамикроскопического исследования использовались ткани печени и экскреторного отдела почек. Материал фиксировался и обрабатывался по общепринятым методикам: фиксация в глютаровом альдегиде на фосфатном или кокодилатовом буфере (pH 7,3), дофиксация в 1% растворе осмия тетрооксида на том же буфере, проводка через этанол возрастающей концентрации, заключение в аралдит. Срезы изготавливались на ультратоме типа ЛКБ и анализировались под электронным микроскопом JEM 100СХ.

Биохимический анализ и иммунологический анализ

Концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови определялась по реакции с раствором - сульфата цинка с измерением оптической плотности растворов - и пересчетом единиц. оптической плотности в г% (Воловен-ко,1975).

Содержание циркулирующих иммунных комплексов изучали осаждением 2,5% раствором полиэтиленгликоля (ПЭГ-600) (Методы..., 1985).

Лизосомально-катионный тест проводили по методике, предложенной Пигаревским (1981), которая основана на применении красителей прочного зеленого и азура А: Подсчет среднего цветного коэффициента осуществлялся . по схеме, разработанной для крупного рогатого скота (Макаревич, 1988).

Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли общепринятым способом (Козлюк и др., 1987; Лукьяненко, 1989). В качестве корпускулярного антигена брали раствор китайской туши в физиологическом растворе, а также золотистый стафилококк. Параллельно определяли фагоцитарный индекс.

Бактерицидную активность сыворотки крови находили по методике А. С. Козлюк с соавторами (1987), использовали стандартные разведения

лиофилизированной культуры кишечной палочки штамма М-17 (колибак-терин) (Мальцев, Насонова, 1989).

Для определения гетерогемагглютининов применяли микрэтитратор Такачи. Эритроциты группы В (III) человека и беспородных кроликов фиксировали общепринятыми методами (Никитин, 1977; Мусселиус и др., 1983). Результаты оценивали по системе четырех крестов (Никитин, 1977).

Лизоцим в экстрактах органов и тканей и сыворотке крови определяли диффузно-гелевым методом с помощью серийных разведений (Генералова, Ситнова, 1994).

Для оценки иммунной реактивности применялась реакция отторжения первичного чешуйного аллотрансплантата. Течение реакции отторжения оценивали по следующим параметрам: по количеству хроматофоров в эпидермисе чешуи (Hildeman, 1957), по длительности воспалительной реакции вокруг аллотрансплантата, по времени выживания аллотрансплантата.

Оценку антигенных свойств белков почек рыб оценивали следующим способом. Антитела к почечным белкам рыб как контрольных, так и подвергшихся отравлению кадмием, получали путем иммунизации мышей. Предварительно готовили экстракт тканей почек рыб по обычной схеме (Антитела..., 1991). Иммунизацию мышей проводили однократна, антиген вводили одновременно внутримышечно и подкожно с неполным адъюван-том Фрейнда. Кровь у мышей отбирали на 10 сутки после иммунизации.

Выявление антител к «нормальным» и к «измененным» почкам проводили с помощью реакции коагглютинации. Предварительно готовился диагностикам. Стабилизированные Staphylococcus aureus штамм Cowan 1 в количестве 1,0 мл 10%-ной взвеси смешивали с иммунной сывороткой. Взвесь с сорбированными антигенами отмывали фосфатным буфером (pH—7,2) от несвязавшихся иммуноглобулинов. Готовили два вида диагностикумов: 1 -содержащий антитела к нормальным, неповрежденным тканям почек рыб (А); 2 — содержащий антитела к неповрежденным тканям почек и к тканям

почек, поврежденных кадмием (В). Белковый антиген, содержащий нормальные и поврежденные кадмием белки, истощали диагноститумом «А» для получения раствора антигена, содержащего только белки, измененные кадмием.

Изучение гематологических показателей проводилось по методикам, рекомендованным Н.Т. Ивановой (1983).

Были проведены эксперименты по заражению карпов, подвергнутых воздействию иона меди, условно-патогенной Pseudomonas fluorescens. Суточную культуру, выращенную на мясо-пептонном агаре, смывали физиологическим раствором хлорида натрия и доводили до концентрации 750-850 млн. микробных тел по оптическому стандарту мутности. Приготовленную взвесь внутрибрюшинно вводили карпам по 0,5 мл.

Для изучения функции почек рыб (карпа) отбиралась в течение суток выделяемая моча при помощи приспособления оригинальной конструкции, минимально травмирующего рыбу. В моче определялись общий белок, осадок, наличие клеток крови. Осмоляльность мочи определяли криоскопиче-ским методом на осмометре «ОМКА-Щ». В качестве стандарта применяли раствор NaCl концентрацией 400 ммоль/кгНгО.

Регенерационную способность печени изучали как после токсического поражения, так и после частичной гепатэктомии. У карпов массой 40-45г удаляли в среднем 25% (максимально до 1/3) объема печени. После частичной гепатэктомии разрез зашивали, рану обрабатывали антисептиком, швы снимали через неделю. Периодически осуществлялся отбор проб и снятие показателей. Оценка изменений в структуре печени проводилась на уровне световой микроскопии с использованием общепринятых гистологических методик и электронной микроскопии. Изменение функции печени регистрировалась с помощью пробы на билирубин.

Экспериментальные работы проведены в аквариальных условиях на базе лаборатории кафедры гидробиологии и общей экологии АГТУ. Подопыт-

ных рыбу содержали в аквариумах емкостью от 50 до 100 литров. В качестве токсикантов использовали медь в концентрации 0,02-0,5 МгСиг+/л, кадмий в концентрациях 0,2-0,25 МгСс^/л, ртуть в концентрациях 0,02-0,2 мгН£2+/л, нефть в концентрациях 0,1-1,0 мг/л. В контроле использовали чистую воду.

Всего было проведено 540 определений содержания тяжелых металлов, 320 определений содержания ХОП, проанализировано более 450 гистологических препаратов, выполнено более 1000 различных определений иммуно-физиологических показателей

Результаты анализов обработаны с применением общепринятых методов статистики (Лакин, 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Накопление некоторых экзотоксикантов в органах и тканях рыб Кумуляция в органах и тканях рыб тяжелых металлов и хлорорганиче-ских пестицидов (ХОП) рассмотрена на примере карпа в возрасте 3-4 лет.

Тяжелые металлы, многие из которых в адекватных количествах являются необходимыми для нормальной жизнедеятельности организма рыб микроэлементами, широко распространены в окружающей среде. В наиболее высоких концентрациях в органах и тканях карпа содержатся железо и цинк. На первом месте по накоплению железа находится селезенка, при этом минимальное значение накопления железа в этом органе было 322,2 мг/кг, а максимальное - 974,7 мг/кг. Далее по содержанию железа следуют туловищная почка, жабры, кишечник, головная почка, мышцы, что согласуется с литературными данными (Воробьев, 1979). Цинк в организме рыб по количеству уступает лишь железу, а иногда и превосходя его по уровню накопления в отдельных органах и тканях. Этот металл в основном концентрируется в головной и туловищной почках и селезенке (соответственно 1168,4, 490,0, и 1412,9 мг/кг). Рядом исследователей (Алабастер, Ллойд, 1984) отмечается, что цинк в основном концентрируется в жабрах и слизи непосредственно из воды. Максимально выявленные

средственно из воды. Максимально выявленные концентрации цинка в жабрах были достаточно высоки - до 425,7 мг/кг.

Медь активно депонируется печенью (до 69,1 мг/кг), поскольку этот элемент является компонентом ряда ферментов, связанных с окислительно-восстановительными процессами. На единицу массы почки и селезенки меди приходится в 7-10 раз меньше.

Марганец и никель максимально накапливаются в жабрах, в среднем соответственно 9,7 и 5,5 мг/кг. Преобладание марганца и никеля в жабрах связано, по-видимому, с тем, что жабры играют основную роль в проникновении этих металлов в организм. Ранее была показана прямая зависимость содержания марганца и никеля в жабрах от величины их концентрации в водной среде (Крючков и др., 1989).

Отмечается преобладание кадмия в экскреторных отделах почек и в жабрах. Была обнаружена прямая связь между кумуляцией кадмия в почках и развитием в органе патологических изменений. При накоплении кадмия в туловишной почке от 0,8 до 1,0 мг/кг отмечались тубулярные и интерстици-альные изменения. При повышении содержания кадмия в почках свыше 1,0 мг/кг развивались симптомы как тубулярных, так и гломерулярных поражений.

Проведенное в настоящей работе сопоставление не дало прямых зависимостей между степенью патологии внутренних органов и уровнем накопления в них тяжелых металлов. Вместе с тем, у рыб, в тканях которых обнаружены отклонения от «нормального» соотношения концентраций металлов, внутренние органы характеризовались значительными, по сравнению с другими, патогистологическими изменениями.

Хлорорганические пестициды были обнаружены во всех исследованных тканях карпа, но наиболее высокий уровень их накопления отмечен в печени и в туловищной почке Вы-

сокие концентрации ХОП в печени обусловлены большим содержанием в

ней жиров, хорошо растворяющих хлорорганические соединения и активной детоксикационной функцией органа. Значительное содержание ХОП в туловищной почке связано с ее функцией выведения из организма продуктов метаболизма и ксенобиотиков. Наличие пестицидов в крови карпа указывает на активное вовлечение их в процессы метаболизма

2. Патолого-морфологический анализ состояния некоторых органов и тканей рыб

2.1. Морфологическая характеристика печени некоторых видов рыб дельты Волги и Северного Каспия

В данном разделе приводятся сведения об особенностях строения печени различных видов осетровых (осетр, белуга, севрюга) и карповых (карп, карась) видов рыб в современных экологических условиях. Эколого-гистологическое исследование показало, что реакции печени рыб во многом стереотипны и часто не зависят от особенностей воздействия. Частота распространения основных изменений печени осетровых видов рыб по данным 1998-2001 гг. представлена в таблице 1.

Таблица 1

Основные формы патологии печени осетровых видов рыб, %_

Вид изменений Осетр Белуга Севрюга

Нарушения микроциркуляции 39,6 50,5 67,8

Геморрагии, плазмор-рагии 33,5 28,7 17,6

Дистрофии 59,5 72,0 67,0

Некротические изменения 13,0 22,6 17,8

Разрастание соединительной ткани 26,0 50,0 40,1

Нарушения обмена пигментов 41,0 10,0 50,8

Наиболее типичными были различные формы дистрофии, так, например, у белуги 72% проанализированных особей имели в печени дистрофически измененные гепатоциты, несколько меньше этот показатель был у севрюги (67%). В основном встречались вакуольная и жировая дистрофии.

Частота распространения некротических изменений колебалась от 13% у осетра до 22,6% у белуги. Следует обратить внимание на нарушение пигментного обмена, что проявлялось в накоплении гранул пигментов в паренхиме органа. Подобного рода процессы имеют место при хронических интоксикациях (Уолке и др., 1985).

В целом спектр изменений печени рыб был таков: компенсаторно-приспособительные реакции тканей; воспалительные процессы; нарушения микроциркуляции крови; дистрофические и некробиотические изменения; деструкция паренхимы.

Ранние коменсаторно-приспособительные изменения гепатоцитов начинаются с их гиперфункции (Руководство..., 2001), внешним проявлением которой может быть гипертрофия клеток. Гипертрофия гепатоцитов рыб проявлялась, прежде всего, в увеличении их размеров, размера ядра, увеличением количества ядрышек.

Расстройства микроциркуляции зачастую бывают первыми признаками патологических процессов в печени. В печени рыб было обнаружено венозное полнокровие, стазы, кровоизлияния и плазморрагии.

В условиях патологии функции печени нарушаются, а морфологическим признаком этих нарушений часто служат дистрофии. В печени дистрофические изменения захватывают, как правило, только паренхиматозные структуры (Серов, Пауков, 1975), это подтверждается также исследованиями на рыбах. Наиболее часто в патологии печени рыб выявлялась зернистая, гидропическая и жировая дистрофия гепатоцитов. При зернистой дистрофии размеры гепатоцитов были увеличены, они выглядели набухшими. Ядро при этом было не изменено. При гидропической дистрофии гепатоциты были увеличены в объеме, у них отмечалась прозрачная цитоплазма, были четко выражены контуры мембраны. Остатки слабозернистой цитоплазмы располагаются вокруг ядер или вдоль клеточных мембран. При электронной микроскопии наблюдалась вакуолизация митохондрий и эндоплазматического

ретикулума, однако разрушения мембран клетки не происходило. Также при гидропической дистрофии отмечались фрагментация мембран и расширение канальцев эндоплазматической сети, большое количество вакуолей, образовывающихся, по-видимому, из расширенных цистерн ретикулума. Сам ре-тикулум сохранялся в основном возле ядра и вокруг митохондрий.

При жировой дистрофии в цитоплазме гепатоцитов были видны светлые неокрашенные вакуоли различной величины. Мелкие вакуоли могут сливаться, образуя более крупные, а затем и одну большую вакуоль, которая занимала всю цитоплазму и смещала ядро к периферии клетки. Цитоплазма таких клеток представляла собой узкий базофильный ободок около плазматической мембраны. Зачастую ядра исчезали, и образовывались обширные участки паренхимы с безъядерными клетками. Жировые вакуоли нескольких клеток или, возможно сами клетки при слиянии образовывали жировые кисты. При продолжительном действии негативных факторов дистрофические изменения заканчивались некрозом.

2.2. Морфология печени рыб при экспериментальных токсикозах

Результаты работ показали, что действие различных по своей природе токсикантов (кадмий, ртуть, нефть) приводило к развитию схожих изменений в печени рыб. В качестве примера может быть рассмотрена печень карпа после 30-суточного действия кадмия в концентрации 0,25 мг/л. Отмечались отеки, множественные очаговые и массивные кровоизлияния. Были выражены явления нарушения циркуляции крови: многие сосуды были расширены, наблюдались стаз, отечность тканей. Дистрофические и некротические изменения охватывали до 30% ткани печени. В среднем, число ге-патоцитов с пикнотическими ядрами было 6,47%, достигая у отдельных экземпляров 20-30% и более. У части рыб в печени наблюдалась масса безъядерных клеток, до 50% в поле зрения. В целом можно отметить, что в печени карпа под воздействием кадмия развивались как адаптивные реакции (расширение сосудов), так и патологические процессы (развивались токси-

ческая дистрофия или прогрессирующий некроз). Отмечалась воспалительная альтеративно-экссудативная реакция. Некротизированные участки располагались преимущественно на периферии органа и вдоль сосудов, в сохранившихся рядом клетках наблюдались дегенеративные изменения.

В цитоплазме выявлялись изменения митохондрий, эндоплазматическо-го ретикулума, образование вакуолей. Часть митохондрий подвергалась деструкции: отмечалось уменьшение количества и даже полное исчезновение крист, митохондрии ошаривались, матрикс становился более плотным. Наблюдалось появление в матриксе исчерченных фибрилл. Подобные изменения в ультраструктуре митохондрий приводят к уменьшению образования АТФ, снижению окислительного фосфорилирования (Серов, Пауков, 1975).

Эндоплазматический ретикулум подвергался более выраженным изменениям. Его полости становились расширенными, причем эти расширения были как относительно небольшими, так и образовывавшие крупные вакуоли, т.е. экдоплазматический ретикулум подвергался вакуолизации, а затем и практически полному исчезновению. Количество рибосом на мембранах ре-тикулума уменьшалось. Однако это уменьшение не приводило к переходу гранулярного ретикулума в агранулярный. Наоборот, агранулярный эндо-плазматический ретикулум практически также полностью исчезал.

Следует отметить, что своеобразной формой функциональной адаптации служит дедифференцировка клеток, часто наблюдаемая при действии различных повреждающих факторов (Клишов, 1984). Морфологически де-дифференцировка характеризуется структурной реорганизацией клеток, в гепатоцитах рыб наблюдалось увеличение относительного объема ядра, увеличение количества ядрышек, увеличением содержания гранулярного компонента ядрышка, что согласуется с литературными данными (Токин, 1974).

23. Репаративные процессы в печени рыб

В обычных условиях для печени характерен высокий уровень резистентности в поддержании своей адекватной функциональной активности и

нормальной морфологической структуры. Закономерно возникает вопрос, насколько изменяется функция органа, и какова степень морфологической и функциональной адаптации ткани печени при токсических поражениях.

Изучение процессов регенерации печени рыб проводилось как после ее токсического поражения, так и после оперативного удаления части органа, что позволяло моделировать ситуацию, когда значительная часть печеночных клеток не функционировала (например, как это может быть при далеко зашедших дистрофических изменениях гепатоцитов). Опыты проводились на карпах массой 40-45 г.

Результаты исследования показали, что морфологическим субстратом функциональных резервных возможностей органа является гипертрофия и гиперплазия внутриклеточных органелл гепатоцита. В течение первых суток после частичной гепатэктомии обнаруживалось расширение канальцев эн-доплазматического ретикулума вплоть до возникновения вакуолей, разнообразные изменения в митохондриях, исчезновение гранул гликогена. Была отмечена высокая степень функционального напряжения оставшихся печеночных клеток в связи с удалением части органа, т.к. сохранившаяся часть должна выполнять ту же работу, в которую был вовлечен весь орган.

Первыми на токсическое воздействие реагировали митохондрии и эн-доплазматический ретикулум, эти структуры функционально связаны с внутриклеточным синтезом белка и ферментативными системами, и поэтому являются особенно лабильными и чувствительными к изменениям среды. Характерно, что и регенераторные внутриклеточные процессы начинались с восстановления этих структур. Отмечалась гиперплазия эндоплазматическо-го ретикулума, увеличение количества прикрепленных на нем рибосом, количество митохондрий увеличивалось, причем отмечалось много делящихся митохондрий.

В дальнейшем происходило восстановление массы органа. После удаления печени достижение первоначальной массы происходило приблизи-

тельно через 30 суток. Параллельно восстановлению структуры и массы, нормализовывалась и функция органа, которая оценивалась по метаболизму билирубина. Билирубиновая проба очень показательна, так как основное повышение билирубина в крови связано в основном с уменьшением поглощения его печенью из крови, нарушением секреции в желчь и повышением обратного выведения билирубина из гепатоцитов. У контрольных рыб уровень билирубина составил в среднем 7,56 ммоль/л. У подопытных рыб через сутки после операции уровень билирубина был равен 14,0 ммоль/л, что превысило норму почти в два раза. Затем наблюдалось постепенное снижение уровня билирубина в крови рыб, и через трое суток он составил 13,07 ммоль/л. Эта тенденция была весьма устойчивой, и через 10 суток концентрация билирубина в крови составила уже 11,5 ммоль/л, таким образом, функции печени после повреждения начали постепенно восстанавливаться. Так как увеличиваться печень стала только на пятые сутки, а нормализация ее функций началась уже через сутки, то видно, что на первом этапе оставшаяся часть клеток приняла на себя функцию целого органа.

Следует отметить принципиальное сходство изменения ультраструкгу-ры гепатоцитов и восстановительных процессов при механическом и токсическом поражении печени.

2.4. Морфологическая характеристика экскреторных отделов почек некоторых видов рыб дельты Волги и Каспия

Анализ и систематизация наиболее типичных изменений в мезанефросе рыб проведены на осетровых видах рыб, а также анализировались почки карпа и белого амура.

Многообразие элементов, составляющих экскреторную часть почек, обуславливает многообразие изменений, выявляемых при морфологическом исследовании срезов почки.

Нарушения микроциркуляции крови зачастую бывают единственным признаком патологического процесса или же в сочетании с отеками и ин-

фильтратами интерстиция. Наиболее характерными сосудистыми нарушениями были застойные явления в сосудах различного калибра.

Гломерулярные изменения могут быть систематизированы по следующим группам:

1) минимальные изменения;

2) гломерулярные изменения, обусловленные процессами в капиллярах;

3) пролиферативные изменения.

При минимальных изменениях почечных телец патологические нарушения на светооптическом уровне практически не определяются. Иногда отмечались набухание гломерулярной базальной мембраны, слабая пролиферация мезангиальных клеток. Для этого состояния была характерна вариабельность размеров почечных телец — например у карповых рыб от 26 до 130 и более мкм. Коэффициент вариации диаметра капсулы достигал величины СУ=25,5%. В неизмененной почке СУ как правило не превышал 10%. При электронной микроскопии основные элементы почечного тельца также выглядили неизмененными. Это касается базальных мембран, мезангиальных клеток, эндотелия. Изменения наблюдались в висцеральных эпителиальных клетках, ножки которых сливались. Происходило упрощение архитектуры подоцитов, что, вероятно, приводило к изменению интенсивности фильтрации.

Гломерулярные изменения, обусловленные процессами в капиллярах -это наиболее часто встречаемая гломерулярная патология рыб. Первым и наиболее просто выявляемым показателем изменений в капиллярах является гиперклеточность клубочка. Например, если в норме количество клеток (ядер) в капиллярном клубочке карпа составляет 51,62±6,71 шт., то при ги-перклеточности этот показатель может увеличиваться на 50% и даже более. При склеротическом изменении клубочков (разрастании коллагеновых волокон) происходит спаяние петель между собой или с капсулой. У рыб это довольно редкая патология. Сморщивание клубочка происходит в нефункцио-

нирующем нефроне. Отмечалось и превращение почечных телец в участки деструктированной ткани.

Пролиферативные изменения у рыб встречаются значительно реже, чем у теплокровных животных. Была отмечена пролиферация эпителия капсулы, хотя в большинстве она была выражена незначительно. Были обнаружены единичные случаи пролиферации эпителия капсулы в виде полулуний, что бывает характерно, например, для поражения почек при быстропрогресси-рующем гломерулонефрите человека.

Тубулярные изменения наиболее распространены у рыб. Большинство форм патологии почек рыб затрагивает преимущественно извитые канальцы (при этом зачастую в процесс вовлекается и интерстиций). Эпителиальные клетки канальцев весьма чувствительны к действию различных факторов (токсическое воздействие, нарушение трофики вследствие ишемии при сосудистых нарушениях в почке); токсическое поражение извитых канальцев было воспроизведено в эксперименте. Просветы извитых канальцев почек рыб варьировали в широких пределах. При патологических процессах извитые канальцы были расширены или наоборот сужены. Сужение канальцев, в частности, может быть следствием их сдавливания при отеке интерстиция. Как правило, при этом в патологический процесс вовлекался эпителий извитого канальца. Эпителиоциты извитых канальцев подвергались дистрофическим и некротическим изменениям. Характерными изменениями были вакуольная дистрофия, мутное набухание цитоплазмы.

Некрозы канальцев характеризовались разрушением эпителиальных клеток Часто некроз сопровождался разрывами базальных мембран (тубуло-рексис) и окклюзией просвета канальцев цилиндрами. Клетки эпителия канальцев могут полностью некротизироваться и слущиваться в просвет канальца. Спущенные эпителиоциты были отмечены при анализе мочи рыб (карпов), подвергнутых экспериментальному отравлению кадмием. Жидкость из разрушенных канальцев может проникать в интерстиций, приводя к

повышению интерстициального давления и коллапсу канальцев. В конечном итоге может происходить полное разрушение участка извитого канальца.

Эпителий извитых канальцев может регенерировать. Первыми признаками восстановления было появление уплощенных эпителиальных клеток с гиперхромными ядрами.

Сравнительная характеристика почек карпа после токсического воздействия дана в таблице 2.

Таблица 2

Морфометрические параметры почек молоди карпа после токсического дей-_ствия нефти и кадмия_

Параметры Контроль Нефть (0,1 мг/л) Кадмий (0,1 мг/л)

Диаметр почечной капсулы, мкм 66,9±3,2 67,2±4,1 77,4±4Д

Диаметр капиллярного клубочка, мкм 53,1±5,0 55,2±4,9 67,3±5,3

Количество клеток в сосудистом клубочке 52,3*2,1 51,7±3,3 63,7±4,1

Высота эпителия париетального листка капсулы, мкм 4,4±0,6 4,4±0,5 4,41:0,2

Диаметр канальцев 1 типа, мкм 21,8±0,8 21,6±2,4 26,0±Х,0

Диаметр канальцев 2 типа, мкм 69,4±1,3 70,0±1,7 76,(>±2,7

Диаметр канальцев 3 типа, мкм 46Д±2,4 46,8±1,0 46,7±1,7

Площадь межканалъ-цевой ткани, % 60,1±0,3 59,6±1,7 59,<5±0,4

Действие токсикантов находило свое выражение в изменении количественных показателей почечных телец, причем более выраженное действие оказывал кадмий. Диаметр почечной капсулы при воздействии нефти практически не изменялся, тогда как интоксикация кадмием привела к увеличению среднего диаметра капсулы на 15,7%. Увеличился также диаметр капиллярного клубочка с мкм, а также возросло количество клеток в клубочке.

2.5. Некоторые механизмы нефротоксичности кадмия для рыб

Известно, что иммунным процессам принадлежит ведущая роль в развитии многих форм почечной патологии (Дранник, 1989). Концентрация иммуноглобулинов (Ig) в крови карпа до начала опыта составила Г%. При содержании рыб в воде с кадмием в концентрации 0,25 мг/л через 20 суток уровень содержания Ig возросло 1,66±0 Г%, а на 60-е сутки достиг значения 2,34 Г%, превысив, таким образом, контрольный уровень более чем в 5 раз.

Следует отметить общеизвестный факт, что все антитела являются Ig, но не все обладают активностью антител. связывают антигены и, следовательно, образуют иммунные комплексы (ИК). Образование комплексов «антиген-антитело» - перманентный физиологический процесс, постоянно протекающий в организме животного и направленный на поддержание постоянства внутренней среды организма (Петров, 1987).

Увеличение количества ИК отмечалось уже на 10 сутки влияния кадмия, а первый максимум был отмечен через 20 суток интоксикации. При этом уровень контроля был превышен в 5,9 раз. Следующий пик был отмечен через 50 суток интоксикации, хотя наблюдавшееся в период от 20 до 50 суток интоксикации снижение содержания циркулирующих ИК было незначительным.

Одновременное увеличение содержания в крови рыб как Ig так и ЦИК дает основание полагать, что хотя бы часть обнаруженных иммуноглобулинов, по всей видимости, могут быть отнесены к антителам.

Известно, что поступление кадмия в организм способно инициировать синтез неспецифических для организма белков (Andersen et al, 1989). Результаты исследования антигенных свойств «нормальных» и «измененных» почек представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты реакции коагглютинации с антигенами, содержащими «нор_мальные» и «измененные» белки почек рыб_

№ Антиген Сыворотка Результат р-ции коагглютинации

1 Содержит только нормальные белки почек Содержит АТ к нормальным белкам +

2 Содержит белки, измененные кадмием (после истощения) Содержит АТ к нормальным, белкам -

3 Содержит только нормальные белки почек Содержит АТ к измененным белкам и нормальным +

4 Содержит белки, измененные кадмием (после истощения) Содержит АТ к измененным белкам и нормальным +

Анализируя результаты этих реакций, можно сделать вывод о различных антигенных свойствах «нормальных» и «измененных» кадмием почек рыб. Сообщения о роли кадмия в развитии патологии почек достаточно часто встречаются в публикациях. Многочисленные исследования, проведенные на теплокровных животных, показывают значение кадмия при развитии патологии почек (Nicholson et al., 1989). При рассмотрении механизма токсического действия было показано, что дисфункция почечных канальцев и хронический интерстициальный фиброз наблюдаются в случаях, когда концентрации кадмия в коре почек превышают критический уровень 200 мкг/г (Goyer, 1989). При проведении эколого-токсикологических исследований в водоемах дельты Волги нами было обнаружено, что в наибольшей степени кадмий накапливается в экскреторном отделе почек рыб (Зайцев и др., 1993), а при его накоплении свыше 1 мг/кг в почках наблюдались патологические изменения (Крючков и др., 1992).

Исходя из литературных данных и результатов собственных исследований, представляется, что кадмий, вызывая изменения белков организма рыб,

стимулирует, таким образом, синтез антител. По-видимому, эти антитела образуют иммунные комплексы, которые могут отлагаться в нефронах, вызывая изменения, морфологически сходные с гломерулонефритом. Следует также отметить, что при исследовании почек после воздействия кадмия в гломерулярных базальных мембранах были обнаружены электронноплотные депозиты. Эти депозиты были небольших размеров, поэтому их роль в нарушении клубочковой фильтрации оценить довольно трудно, что требует специальных исследований. Вместе с тем, влияние токсикантов, в частности, кадмия, функционально выражалось, прежде всего, в виде уменьшения количества образовывающейся мочи. Так если в норме у карпа массой 20-25 г за сутки выделялось в среднем 4,22±0,21 мл мочи, то после отравления кадмием в концентрации 0,25 мг/л суточный объем мочи составил 2,62±0,18 мл. При этом Осмоляльность мочи увеличилась почти в три раза и составила 36,0±3,1 ммоль/кг вместо 12,5±0,б4 ммоль/кг у контрольных рыб. В осадке мочи обнаруживались цилиндры, спущенные эпителиальные клетки. Качественная реакция на белок давала положительный результат.

Таким образом, при интоксикации кадмием морфологические изменения почек сопровождались ярко выраженными функциональными расстройствами.

3. Факторы естественной резистентности рыб и их изменения при токсических воздействиях

3.1. Оценка влияния токсикантов на кровь рыб

Действие токсических веществ проявлось изменениями в картине как красной, так и белой крови.

В крови осетров, не подвергнутых токсическому действию нефти, отмечалось порядка 56% лимфоцитов, 3,18% моноцитов. Суммарное количество нейтрофилов отмечалось более 31% со сдвигом ядерной формулы вправо, т.е. преобладали сегментноядерные нейтрофилы палочкоя-

дерные формы встречались в количестве метамиелоцитов и

миелоцитов было соответственно 7,23 и 3,88%.

Воздействие нефти в концентрации 1,0 мг/л через 7 суток привело к увеличению относительного количества лимфоцитов (73,5%), а также количества моноцитов с 3,18 до 8,0%. Количество нейтрофилов значительно уменьшилось, при этом также изменилось соотношение клеточных форм на различных стадиях пролиферации. Через 30 суток относительное число лимфоцитов увеличилось до Уменьшилось количество нейтро-

филов, при этом произошел сдвиг ядерной формулы влево. Следует отметить уменьшение количества бластных клеток с 4,28+0,78 ДО 2,5±0,15%.

Цитопатологический анализ форменных элементов крови осетра показал, что наиболее распространенным явлением была полихромазия эритроцитов. Пойкилоцитоз был умеренным. Отмечались патологические амитозы, сопровождавшиеся образованием шистиоцитов. Агглютинация отмечалась в виде цепочек эритроцитов длиной от 2-3 до 8-10 клеток. При воздействии сырой нефти в течение 30 суток наблюдалось снижение резистентности эритроцитов. При этом эритроциты ошаривались, у них разрушалась оболочка, и образовывались клеточные «тени».

Таким образом, влияние сырой нефти на кровь осетра проявлялось в виде дегенеративных изменений в эритроцитах, а также относительного лимфоцитоза, сопровождавшимся изменением ядерной формулы нейтрофи-лов.

Наиболее существенные различия в реакции периферической крови карпа и осетра на воздействие нефти заключались в динамике количества лейкоцитов. При концентрации сырой нефти 0,1 мг/л количество лейкоцитов в крови карпа имело устойчивую динамику к повышению. После кратковременного лейкоцитоза (на седьмые сутки интоксикации) наблюдался устойчивый спад в содержании лейкоцитов в крови. Наибольшему влиянию был подвержен миелопоэз. Действие нефти даже в незначительной концентра-

ции (0,1 мг/л) приводило к значительному снижению относительного числа нейтрофилов, при этом произошел сдвиг ядерной формулы влево. Так через 30 суток интоксикации нефтью в кровяном русле оставалось всего 4% ней-трофилов, причем это были только нейтрофильные миелоциты, тогда как у контрольных рыб общее количество нейтрофилов составило 14,65%.

Интоксикация кадмием в концентрации 0,25 мг/л через 10 суток привела к уменьшилось количества лимфоцитов в крови карпа на 66%, моноцитов - на 72%, нейтрофилов — на 64%. Снижение общего количества лейкоцитов может быть связано с общим угнетением гемопоэза, т.к. наиболее значительным было уменьшение бластных форм и клеток на ранних стадиях развития. Например, количество монобластов уменьшилось на 77%, а количество нейтрофильных миелоцитов на 76%.

По истечении 30 суток интоксикации абсолютное количество лейкоцитов составило 18,82 тыс. шт/мкл, т.е. наблюдалась значительная лейкопения. Количество лейкоцитов по сравнению с контролем уменьшилось в 2,43 раза. Следует отметить, что наблюдалась депрессия практически по всем классам лейкоцитов.

Таким образом, под действием токсикантов в периферической крови рыб происходят изменения в картине как красной, так и белой крови. Отмечается угнетение гемопоэза, что находит свое выражение, в частности, в снижении уровня содержания практически всех форменных элементов крови, развивается выраженная лейкопения.

3.2. Система полинуклеарных фагоцитов

Защиту организма от патогенов определяют факторы специфического иммунитета и естественной резистентности. Среди последних доминирующая роль принадлежит фагоцитозу. Результаты выполненного исследования показали, что изменения фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов характеризуются прежде всего снижением фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса, показателя завершенности фагоцитоза. Показатели

фагоцитарной активности меняются в основном однонаправлено как при хронических поражениях паренхиматозных органов (в основном, печени, в меньшей степени при поражениях почек), так и при длительной интоксикации (табл. 4).

Таблица 4

Изменение фагоцитарной активности нейтрофилов рыб при интоксикации

Токсикант, конц Осетр Карп

ФАН, % ФИ ФАН, % ФИ

М±т СУ М±т СУ М±т СУ М±т СУ

Контроль 60,06*2,5 14,2 8,9±0,6 33,33 58,2±2,7 17,3 7,5±0,6 21,3

Кадмий, 0, 25 мг/л 45Д±2,2 20,3 5,5±0,7 47,04 28,3 ±2,2 14,5 8,1±0,5 30,65

Нефть, 1,0 мг/л 39,1 Ш,5 32,6 6Д±0,3 12,10 37,7±1,8 18,6 10,9±0,7 25,74

Длительная интоксикация находит свое проявление как в изменении числа фагоцитирующих клеток, так и в показателях функциональной активности фагоцитов. У молоди осетра (масса 20-40 г) наиболее стабильно снижался фагоцитарный индекс (количество микробных тел, поглощенных одним фагоцитом). Стабильность этого показателя проявлялась в том, что практически у всех проанализированных подопытных осетров было выявлено в той или иной степени снижение фагоцитарного индекса. В целом, интоксикация кадмием (концентрация 0,25 мг/л, экспозиция 30 суток) оказала более выраженное влияние на функциональную активность нейтрофилов крови по сравнению с аналогичным показателем при отравлении нефтью (концентрация 1,0 мг/л, экспозиция 30 суток). Так, под действием кадмия количество корпускулярных поглощенных антигенов уменьшилось в 1,6 раза, а при воздействии нефти - и 1,4 раза. Количество активных фагоцитов также уменьшалось. В среднем же количество фагоцитирующих нейтрофи-лов в периферической крови русского осетра после воздействия нефти и

кадмия составило соответственно в

контроле.

Что касается карпа, то наиболее существенным изменениям подвергался показатель фагоцитарной активности нейтрофилов при действии кадмия 0,25 мг/л в течение 30 суток, при этом количество активных фагоцитов снизилось более чем в два раза. Фагоцитарный индекс, напротив, возрос с шт. корпускулярных антигенов. Аналогичная тенденция была выявлена также и при интоксикации нефтью, отличие состояло в том, что уменьшение числа активных фагоцитов было менее значительным (их количество уменьшилось в 1,54 раза, тогда как при воздействии кадмия -более чем в 2 раза), а фагоцитарный индекс возрос до единиц.

Данный феномен, по всей вероятности, представляет собой компенсаторную реакцию со стороны системы фагоцитирующих клеток.

Было исследовано изменение фагоцитарной активности лейкоцитов при хронических поражениях печени неизвестной этиологии. Исследование показало, что достоверное снижение активности фагоцитоза происходит в тех случаях, когда, во-первых, имеют место лейкопения и спленмегалия. В этом случае, по всей видимости, с одной стороны, происходит удаление из циркуляции и разрушение форменных элементов в увеличенной селезенке, с другой, возможна продукция дефектных в функциональном отношении ней-трофилов с угнетенной способностью к фагоцитозу (табл. 5).

Таблица 5

Угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов карпа при хрониче-

ских поражениях печени

Состояние печени ФАН, % ФИ К-во нейтрофилов, тыс пгг/мл

Условная норма 56,Ш,9 16,2 7,7+0,5 18,5 7,5

Дистрофии 49,27±3,35 21,5 6,3610,66 33,01 7,2

Дистрофия, некрозы, фиброз в сочетании со спенмегалией 27,5 ±3,5 42,21 8,0±0,60 27,48 3,6

3.3. Система лизоцима, естественных антител рыб в норме и при

некоторых патологических состояниях

Лизоцим - низкомолекулярный фермент лизосом, является основным составным элементом гранулоцитов и макрофагов. Гетерогемагтлютинины, обнаруживаемые в сыворотке крови и в различных лимфоидных органах, относятся к нормальным, или естественным антителам. Наличие в организме нормальных антител свидетельствует о готовности организма к анти-телообразовательной функции, что во многом определяет его резистентность (Лукьяненко, 1989).

Если рассмотреть содержание факторов естественной резистентности на примере карпа, то наибольшее относительное содержание лизоцима было отмечено в туловищной и головной почке, соответственно 2,93 и 52,02 усл.ед/мл. Выявлено высокое содержание гемагтлютининов в органах и сыворотке крови. Вместе с тем, отмечено отсутствие активности агглютининов к эритроцитам человека (АЭЧ) в туловищной почке в 45% проб, в головной почке - в 30%, в жабрах и селезенке соответственно в 20 и 60%. Активность агглютининов к эритроцитам кролика (АЭК) не обнаружилась в 5% головных и туловищных почек изучаемых рыб. По суммарному уровню содержания исследованных гуморальных факторов иммунитета выделяются головная и туловищная почки, затем следуют жабры и селезенка, меньше всего лизоцима и гемагтлютининов отмечалось в сыворотке крови (табл. 6).

Таблица 6

Относительное содержание гемагтлютининов и лизоцима

_в органах и сыворотке крови карпа_

Виц гуморального фактора Содержание, усл.ед./мл

Туловищная почка Головная почка Селезенка Жабры Сыворотка

Лизоцим 2,93±11,5 2,02±7,62 38,02±12,0 7,07±б,23 4,5±1,55

АЭК 8,79±1,71 8,1±0,9 6,91±1,07 5,27*4,63 26,0±4,7

АЭЧ 4,36±0,56 5Д8±0,76 3,01±0,43 2,3±0,6 4,45±1,4

Проведена оценка иммунофизиологических показателей некоторых органов карпа при различных патологических состояниях с использованием количественного анализа активности иммунной системы и системы неспецифической инактивации патогенов. Результаты сопоставления содержания лизоцима и гемагтлютининов в органах карпа при различной степени патологии представлены в таблице 7.

Таблица 7

Изменение иммунофизиологических факторов в зависимости от степени патологических изменений в органах карпа

Вид гуморального фактора Содержание, усл. ед /мл

Селезенка Головная почка Туловищная почка

Лизоцим 26.08±3.12 45,57±5,05 4?. 1$±4,9$ 43,7113,59 35.41+4.02 134,10110,23

АЭК 7.25±0.43 8,9510,55 7.34±0.51 8,84±0,45 3.49±0.34 7,3110,78

АЭЧ 2.5+0.51 3,69±0,34 6,9±<Ш 5,610,26 2.2610.46 3,9±0,70

В числителе - активность при патологии степени III и более; в знаменателе - активность при условной норме

Заметные изменения активности гуморальных факторов отмечались в селезенке и туловищной почке. Особенно это относится к лизоциму. Так, у рыб с явно выраженной патологией селезенки активность лизоцима меньше в 1,7 раза, а в туловищной почке - в 3,8 раза, различия во втором случае достоверные. Менее ярко выражена аналогичная тенденция по содержанию АЭК, хотя и в данном случае активность гемагглютининов в туловищной почке с тяжелой патологией более чем в два раза, меньше. В селезенке эти изменения были не столь значительны.

Особо следует отметить головную почку, в которой при нарастании патологических изменений в тканях не было обнаружено снижения активности гуморальных факторов иммунитета. По всей видимости, головная почка по изменению активности гуморальных факторов иммунитета более

реактивна, чем туловищная почка и селезенка в силу того, что в ней происходит более активный синтез, в частности, лизоцима.

Активность лизоцима и гемагглютининов изменялась и при действии токсических веществ (таблица 8).

Таблица 8

Иммунофизиологических показатели внутренних органов сеголетков

Показатель Экспозиция, сутки Содержание, усл. ед./мл

Селезенка Головная почка Туловищная почка.

Лизо-цим 0 7,05±0,76 19,6710,98 20,0214,26

7 5,11±0,82 17,3211,23 14,6212,12

15 6,2411,05 12,6011,80 11,8512,23

20 10,4611,20 29,8811,96 20,4413,54-

40 2,12±0Л4 11,3211,56 18,2413,13

АЭК 0 3,71±0,24 1,59±0,66 8,8913,07

7 2,8210,26 0,18±0,02 3,19Ю,24

15 0,1210,03 0,17±0,02 4,36Ю,28

20 5,0610,48 2,0910,17 7,0410,78

40 6,06±0,48 7,7813,11 5,09Ю,57

Изменение активности лизоцима в селезенке карпа после 15 суток воздействия сульфата меди не претерпевало существенных изменений. На 20 сутки произошло некоторое возрастание уровня активности до 10,46±1,20 усл. ед/мл. После 40 суток экспозиции активность лизоцима в селезенке упала до 2,12±0,34 усл. ед./мл. Сходная динамика изменения активности ли-зоцима наблюдалась в головной почке, отличие заключалось в том, что отмечавшееся снижение активности на 40-е сутки было не столь значительным, как в селезенке, и составило порядка 70%. Наименее значительное колебание активности лизоцима было выявлено в туловищной почке. Таким образом, интоксикация проявлялась в виде угнетения активности лизоцима после продолжительного действия негативного фактора, причем это угнетение было наиболее выражено в селезенке.

33

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ

библиотека

СЛ'.стсрсург 03 200 акт

4. Иммунные реакции, обусловленные лимфоцитами

4.1. Иммуноглобулины

Важнейшими функциональными свойствами иммуноглобулинов является их способность идентифицировать антиген, представлять его фагоцитам, активировать систему комплемента (Петров, 1987).

Наиболее значительное повышение концентрации иммуноглобулинов наблюдалось, кроме описанного выше при воздействии кадмия, при интоксикации нефтью (карпа и осетра). Так, у сеголетков осетра при воздействии нефти содержание иммуноглобулинов в крови достигало значения Г% (при норме 0,48 1%). У карпа аналогичный показатель составил 1,84±0,6

Умеренное повышение концентрации иммуноглобулинов наблюдалось при патологиях почек, печени в ярко выраженной форме.

Снижение концентрации иммуноглобулинов наблюдалось лишь при воздействии меди, но оно имело непродолжительный характер.

4.2. Иммунные комплексы

Специфическое взаимодействие антигена с антителом сопровождается образованием иммунного комплекса. Этот физиологический процесс представляет собой универсальный механизм защиты организма, способствующий элиминации антигенов. Увеличение содержания иммунных комплексов при хроническом поражении печени коррелирует с высокой концентрацией сывороточных иммуноглобулинов. Однако в ряде случаев увеличенная концентрация ЦИК наблюдается при незначительном изменении содержания сывороточных иммуноглобулинов: Видимо, при этом на первый план выступает угнетение функции фагоцитирующих клеток. Концентрация иммунных комплексов в крови карпа при патологии печени представлена в таблице 9.

Таблица 9

Содержание циркулирующих иммунных комплексов в крови карпа при различных патологических изменениях в печени, усл.ед/мл

Характер изменений, токсикант Частота выявления повышенного уровня ЦИК, % Содержание ЦИК СУ, %

Нарушение микроциркуляции, полиморфизм ядер, мелкокапельная дистрофия (медь, кадмий) 0 0,13±0,01 21,16

Стаз в капиллярах, точечные геморрагии, мелко- и крупнокапельная дистрофия, моноцеллюлярные некрозы (кадмий, нефть) 13 4,6±0,7 41,7

Дистрофия гепатоцитов, охватывающая более 1/3 клеток, очаги некроза, окруженные инфильтратом лейкоцитов (кадмий, нефть) 75 2,1±0,4 42,2

Дистрофия гепатоцитов, охватывающая более 1/3 клеток, масса безъядерных клеток, разрастания соединительной ткани (нефть, ртуть) 60 2,14±0,6 63,6

5.1. Оценка влияния токсикантов на иммунную реактивность

Оценка иммунной реактивности может проводиться различными методами. Одним из доступных и информативных методов оценки иммунной реактивности у рыб может являться метод аллотрансплантации.

Были проведены эксперименты по изучению влияния токсикантов на реакцию отторжения первичного чешуйного аллотрансплантата карася и карпа. Рассмотрим эту реакцию на примере карпа.

После пересадки трансплантата сначала происходило его приживление приблизительно через 72 часа после операции. При этом количество хрома-тофоров в чешуе карпа увеличивалось с

У рыб, не подвергавшихся токсическому воздействию, первые признаки начинающегося отторжения в виде воспалительной реакции возле аллотранс-плантата возникали через суток. При этом отмечалась гибель хрома-

тофоров, пересаженная чешуйка становилась бесцветной (мутной). В таком

состоянии трансплантат мог находиться еще несколько дней, затем происходило отторжение. Среднее время выживания первичного чешуйного ал-лотрансплантата у карпа при температуре составило суток.

При пересадке аллотрансплантатов рыбам, которые в течение 40 суток содержались в воде с концентрацией кадмия 0,25 мг/л, воспалительные реакции возникали в среднем на 10-14 день от момента пересадки чешуйки. Гиперемия наблюдалась в течение нескольких дней (от 5 до 10), затем постепенно исчезала. Чешуйки оставались живыми в течение всего периода наблюдения после пересадки (до 30 дней) у 24% рыб. У остальных рыб отторжение произошло, но время выживания трансплантатов увеличилось в среднем до 25 суток. Следует отметить, что интоксикация кадмием не оказала действия на приживаемость трансплантата: как у контрольных, так и у подопытных рыб, приживалось 80% первичных чешуйных аллотранспланта-тов.

Некоторых показатели, характеризующие течение реакции отторжения, представлены в таблице 10.

Таблица 10

Сравнительная характеристика реакции отторжения первичного аллотранс-плантзта у рыб, подвергнутых и неподвергнутых токсическому влиянию

Показатели До трансплантации Начало воспаления Сильное воспаление Отторжение

Кол-во лейкоцитов, тыс. шт/мкл Контроль 39,3±3,78 35,26±3,50 48,7±3,28 36,3±3,45

Интоксикация Си2* 0,50 мг/л, 40 суток 25,4±0,78 34,5±4,92 27,3±80,б 26,8± 1,31

Интоксикация С^ 0,25 мг/л, 40 суток 19Д5±2,68 20,12±3,14 27,34±4,56 26,72±2,40

Иммуноглобулины, г% Контроль 0,26±0,07 0,1±0,039 0Д6±0,08 0,78±0,02

Интоксикация Си2* 0,50 мг/л, 40 суток 0,17±0,02 0Д5±0,04 0,10±0,01 0,22±0,08

Интоксикация С<1гЧ25 мг/л, 40 суток 0,48±0,13 0,20±0,08 0,25±0,0б 0,19±0,02

Токсическое действие кадмия привело к снижению иммунной реактивности карпа, что проявилось в увеличении времени выживания первичного аллотрансплантата в среднем в 2,02 раза,

Недостаточно говорить о токсичности, если под влиянием загрязняющих веществ происходит достоверное отклонение функции от контроля, наблюдаемые изменения следует соотнести со «здоровьем» и выживаемостью гидробионтов (Флеров, 1989). В связи с этим, карпы, подвергнутые воздействию сульфата меди, были заражены культурой условно-патогенной Pseudomonas fluorescens. В контроле использовались рыбы, также зараженные данной культурой, но содержавшиеся в чистой воде. После внутри-брюшинного введения культуры бактерий в течение 11 дней погибло 56,6% подопытных рыб и 10% контрольных (не подвергавшихся интоксикации медью). Кроме того, контрольные рыбы характеризовались более длительным течением инкубационного периода заболевания. Таким образом, экспериментальные исследования свидетельствуют о том, что под влиянием токсиканта (ион меди) снижается сопротивляемость организма к инфекции.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Содержащиеся в волжской воде токсиканты, концентрации многих из которых превышают ПДК (медь, цинк, ртуть, углеводороды), создают постоянный токсикологический фон для рыб.

Накопление в организме рыб хлорорганических пестицидов, вовлечение их в процессы метаболизма, нарушение динамического равновесия поступления металлов в органы и ткани и их выведения, - все это является одной из причин развития негативных процессов в организме рыб.

Эколого-гистологические исследования показывают, что у рыб в естественных условиях встречаются разнообразные изменения в печени. У осетровых видов рыб наиболее выражены дистрофические процессы в гепатоци-

тах, в то время как у карповых на первый план выступают нарушения микроциркуляции, а дистрофии имеют меньшее значение.

Обращает на себя внимание то обстоятельство, что действие различных по своей природе токсикантов (нефть, кадмий) приводит к развитию схожих изменений в печени, т.е. их действие на тканевом уровне неспецифично, или мало специфично. Проведенное электронно-микроскопическое исследование однозначно свидетельствует о том, что патология гепатоцитов развивается вследствие первоначального повышения функциональной активности клеток. Характерно, что эти морфологические нарушения в клетках печени сочетаются с нарушениями функции органа, что было показано на примере метаболизма билирубина.

Проведенные исследования показали, что печень рыб способна восстанавливать свои структуры и функции при значительных поражениях, и можно сделать вывод, что в природных условиях выявляемые патологические изменения печени рыб компенсируются репаративными процессами.

Болезни почек сложны, и рыбы не являются исключением. Полученные в данной работе результаты свидетельствуют, что почка также была подвержена негативному влиянию нефти и тяжелых металлов, хотя именно кадмий оказывает наиболее выраженное влияние на экскреторные отделы почек рыб. Выявлен дозозависимый эффект развития патологии почек карповых рыб в связи с уровнем накопления в них кадмия, причем эта закономерность была выявлена в природных условиях и подтверждена в эксперименте. Из этого следует, что, несмотря на относительно небольшое содержание в природной среде (в воде реки Волги порядка ПДК), кадмий вносит свой вклад в развитие патологии экскреторных отделов почек рыб. Действие других токсикантов на почки находит свое выражение прежде всего в виде тубулярных и интерстициальных изменений.

Изменения в периферической крови носят, скорее всего, неспецифический характер, и проявляются в виде лейкопении и развитии цитоморфоло-гических изменений в клетках красной крови.

Действие токсикантов проявляется не только на органы и ткани, но и непосредственно на клетки. Функциональные изменения в клетках происходят на разных уровнях:

- изменение рецепторных свойств клетки - это реакции клетка-антитело, клетка-клетка (реакция агглютинации к эритроцитам кролика, человека);

- изменение продукции биологически активных веществ (гуморальных факторов в системе неспецифической инактивации патогенов, например, ли-зоцима);

- изменение содержания биологически активных веществ (неферментных лизосомально-катионных белков);

- изменение поглотительной способности клеток (фагоцитоз без специфического усиления).

Ответные реакции организма определяются характером, силой и длительностью воздействия, при этом реагирование разных иммунофизиолги-ческих систем не совпадает по направленности изменений во времени.

Из клинической медицины известно, что все патологические процессы, сопровождающиеся лимфопенией и гипогаммаглобулиномией, приводят к развитию вторичных иммунодефицитов разной степени выраженности (Петров, 1987). Проведенные работы свидетельствует о непосредственном влиянии токсикантов на иммунофизиологическую реактивность рыб.

Таким образом, анализ литературных данных и собственные исследования показали, что выявляемые морфологические и физиолого-биохимические изменения в организме рыб скорее всего являются следствием сочетанного действия различных экологических факторов, в том числе и многочисленных токсикантов, содержащихся в воде нижнего течения Волги

и Северного Каспия. Состояние исследованных рыб как в естественных условиях, так и в условиях эксперимента можно оценить как компенсированная патология.

ВЫВОДЫ

1. Установлено наибольшее содержание тяжелых металлов в метаболически активных органах карпа (печень, туловищная почка, селезенка), причем в каждом из них отмечается определенное соотношение различных элементов. Выявлено накопление хлорорганических пестицидов (ДДТ и его метаболитов, ГХЦГ и гептахлора) в органах и тканях карпа в концентрациях, достигающих величин 280 мкг/кг в печени, 374 мкг/кг в жабрах, 190 мкг/кг в мышцах.

2. Наблюдения, проведенные в естественных условиях на осетровых, карповых рыбах и бычках показали, что в печени рыб преобладают изменения, обусловленные как дистрофическими и некробиотически-ми процессами в гепатоцитах, так и нарушениями микроциркуляции крови.

3. Патогенез морфологических изменений в печени обусловлен функциональным перенапряжением ультраструктур гепатоцитов, вследствие чего происходит деструкция гранулярного и агранулярного эндо-плазматического ретикулума, появляются патологически измененные митохондрии. Продолжительное действие стресс-факторов приводит к некробиотическим изменениям гепатоцитов.

4. Показано, что адаптация печени к токсическим воздействиям проявляется в форме внутриклеточной компенсаторной регенерации, а именно в виде гиперплазии каналов гранулярной эндоплазматической сети, увеличения на них количества рибосом, увеличении количества митохондрий, формирования комплексов «митохондрии — гранулярный эн-доплазматический ретикулум». Механизмы компенсаторной гипер-

трофии печени рыб имеют сходный характер вне зависимости от причин поражения органа.

5. В экскреторных отделах почек исследованных рыб были выявлены преимущественно тубулярные и гломерулярные изменения. Наиболее характерными были изменения в извитых канальцах. Гломерулярные изменения были обусловлены патологическими процессами в капиллярах, а также пролиферацией мезангиальных клеток и эндотелиоци-тов.

6. Выявлена роль кадмия в развитии гломерулярной патологии мезанеф-роса рыб. Нефротоксичность кадмия проявляется через образование циркулирующих иммунных комплексов, обнаруживаемых в дальнейшем в виде электронноплотных депозитов в базальных мембранах почечных телец. Явно выраженные морфологические нарушения почек развиваются при накоплении в них кадмия свыше 1,0 мг/кг. Таким образом, этот уровень накопления металла следует считать критическим для нормального функционирования выделительной системы. Функциональные изменения мезанефроса проявляются в виде сниженного диуреза, а также протеинурии, наличия лейкоцитов в моче.

7. Под действием рассмотренных токсикантов в периферической крови рыб происходят изменения в картине как красной, так и белой крови. Отмечается угнетение гемопоэза, что находит свое выражение, в частности, в снижении уровня содержания практически всех форменных элементов крови, развивается явно выраженная лейкопения.

8. Установлено, что хроническое воздействие токсикантов (кадмий, ртуть, нефть) приводит к возникновению симптомов вторичного иммунодефицита в крови рыб в виде снижения фагоцитарной активности нейтрофилов, лизоцима, снижении концентрации естественных антител и лейкопении. Показано увеличение концентрации сывороточных иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов. Одно-

временное увеличение концентрации циркулирующих иммунных комплексов и угнетение фагоцитоза свидетельствует о том, что ведущую роль в увеличении концентрации иммунных комплексов играет дефицит нормально функционирующих фагоцитов, что препятствует элиминации иммунных комплексов.

9. Выявлено, что хронические интоксикации приводят к снижению иммунной реактивности и, в частности, к угнетению реакции отторжения первичного аллотрансплантата. Реакция отторжения первичного ал-лотрансплантата (чешуи) может быть использована для количественной оценки степени угнетения иммунной реактивности при воздействии токсических веществ. Доказано, что изменение иммунологических реакций карпа под влиянием изучаемых токсикантов приводит к снижению сопротивляемости организма к условно-патогенной Pseudomonas fluorescens.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Земков Г.В., Крючков В.Н., Акберова Т.Р. Изменение клеточного фактора иммунитета в зависимости от морфофункциональных нарушений в печени и почках карпа под влиянием промышленных сточных вод// Вопросы экологии гид-робионтов: Сб. научн. трудов.- М: ВНИИПРХ, 1991.- Вып. 64.- С. 124-126.

2. Крючков В.Н., Нгуен Ван Хао, Мохамед Сайд Ахмед, Федорова Н.Н. Патологические изменения в почках карповых рыб при накоплении кадмия// Тез. докл. научно-практической конференции по экологическим проблемам сельского и водного хозйства Поволжья.- Саратов, 1992.- С. 55.

3. Крючков В.Н. Клеточный состав периферической крови карпа на фоне накопления хлорорганических пестицидов // Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов: Сб. научн. трудов.- М: ВНИИПРХ, 1992,- Вып. 66.- С. 110-115.

4. Крючков В.Н., Антонова Л.А. Патогистологические изменения внутренних органов карпа в зависимости от содержания тяжелых металлов// Вопросы генетического и экологического мониторинга объектов рыбоводства. - М.: ВНИ-ИПРХ, 1992.- Вып. 68.- С. 88-94.

5. Земков Г.В., Крючков В.Н., Акберова Т.Р. Изменение клеточного фактора иммунитета в зависимости от нарушений в печени и почках карпа под влиянием сточных вод// Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов: Сб. научн. тр.- М.: ВНИИПРХ, 1992.- Вып. 66.- С. 106-108.

6. Зайцев В.Ф., Григорьев ВА, Крючков В.Н. Особенности распределения тяжелых металлов в органах и тканях туводных видов ихтиофауны Волго-Ахтубинской поймы // Вестник Астраханского технического института рыбной промышленности и хозяйства М., 1993.- С. 69-71.

7. Крючков В.Н., Антонова Л.А. Патоморфология тканей карпа при хронических интоксикациях в условиях прудового хозяйства // Вестник Астраханского технического ин-та рыбной пром-сти и хоз-ва.- М, 1993.- С. 104-106.

8. Крючков В.Н., Андреев В.В., Григорьев В.А. Гистология и уровень накопления тяжелых металлов в органах и тканях карповых рыб из водоемов, прилегающих к промзоне АГКК// Проблемы охраны здоровья и социальные аспекты освоения газовых месторождений России: Тез. докл. научно-практич. конф.- Астрахань, 1993,- С. 27.

9. Антонова Л.А., Крючков В.Н. Морфофункциональные критерии оценки состояния туводных рыб Нижней Волги// Вестник Астраханского государственного технического университета: Сб. научн. трудов. Вып. 2.- Астрахань: Астр, гос. техн. ун-т, 1996.- С. 89-93.

Ю.Крючков В.Н. Иммунологические исследования в практике товарного осетроводства // Первый конгресс ихтиологов России: Тезисы докладов.- М.: Изд-во ВНИРО, 1997.-С.316.

П.Крючков В.Н., Федорова Н.Н., Валедская О.М., Дубовская А.В. Морфофунк-циональное тестирование молоди бестера в товарном хозяйстве//Проблемы развития рыбного хозяйства на внутренних водоемах в условиях перехода к рыночным отношениям. Материалы международной научно-практической конференции. - Минск: Белорусское издательское товарищество "Хата", 1998.-С. 181-183.

12. V.F. Zaitsev, V.N. Krutchkov, S.Z. Kazantseva. Adaptability of sturgeon organs and tissues//The Caspian Sea. Science. Education. Technologies: International Journal of Collected Academic Articles/ Associated of Universities of Caspian Region States.-Astrakhan: ASTU Press, 1998.- Book l.-P. 24-25.

13. Krutchkov V.N. Immunophysiological researches in practice of commercial fsh rearing //Первый российско-американский симпозиум "Аквакультура и здоровье рыб". Рабочая программа и тезисы сообщений. - М., 1998. - С. 111-113 (159-161).

14. Федорова Н.Н., Зайцев В.Ф., Крючков В.Н. Реактивность органов и тканей рыб при накоплении в них токсикантов // Проблемы загрязнения окружающей сре-ды-98. Тез. докл. Международной конференции. - М., 1998. - С.82,374.

15. Крючков В.Н., Зайцев В.Ф., Хади М.С Выбор методов при проведении эколо-го-токсикологического мониторинга природных популяций рыб // Труды Международного Форума по проблемам науки, техники и образования. - М.: Академия наук о Земле, 1998.- С. 148-150.

16. Krutchkov V.N., Hadi S. M. Morphofunctional fsh testing in aquaculture // Aquaculture and water: fish culture, shellfish culture and water usage / Abstracts of contributions presented at the International Conference. - European Aquaculture Society Special Publication No. 26, Oostende, 1998. - P . 147-148.

17. Крючков В.Н., Зайцев В.Ф., Хади М.С Выбор методов при проведении эколо-го-токсикологического мониторинга природных популяций рыб // Междуна-

родная научно-техническая конференция, посвященная 40-летию пребывания КГТУ на Калининградской земле и 85-летию высшего рыбохозяйственного образования в России (Сборник тезисов и докладов). Часть 1. - Калининград,

1999.-С. 20-21.

18. Крючков В.Н., Федорова Н.Н., Зайцев В.Ф., Хади М.С. Характер патоморфоло-гических изменений внутренних органов некоторых видов рыб дельты Волги // Состояние, изучение и сохранение природных комплексов Астраханского биосферного заповедника в условиях повышения уровня Каспийского моря и усиливающейся антропогенной нагрузки / Тез. докл. юбилейной научной конф., посвященной 80-летию Астраханского заповедника. - Астрахань, Изд-во ООО «ЦНТЭП»,1999.-С.43-45.

19.Krutchkov V.N., Zaitsev V.F., Hadi S.M. The toxicity oflow concentrations of copper to the immune resistance of common carp// 9th International Conference "Diseases of Fish and Shellfish". - Rhodes, 1999.- Р-039.

20. Zaitsev V.F., Fedorova N.N, Krutchkov V.N. Tissue and organ changes of sturgeon species in modern environmental condition // 9th International Conference "Diseases ofFish and Shellfish". - Rhodes, 1999. - P-043.

21.Пивоварова Е.В., Курина Л.В., Хади М.С. Федорова НН., Зайцев В.Ф., Крючков В.Н. Влияние качества кормов на состояние печени рыб при искусственном выращивании // Второй международный симпозиум «Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре» / Материалы докладов. - Краснодар, 1999. - С. 210-211.

22. Федорова Н.Н., Крючков В.Н., Зайцев В.Ф. Морфологическая характеристика печени рыб в современных экологических условиях // Российские морфологические ведомости, № 34 1999.-С. 174-180.

23. Крючков В.Н., Алиновская Ю.Б. Оценка иммунной реактивности рыб методом аллотрансплантации при интоксикации // Гигиена окружающей среды и экология человека / Сборник научных трудов. - Саратов: Изд-во Саратовского медицинского университета, 1999. - С. 58.

24. Алиновская Ю.Б., Крючков В.Н. Применение лизосомальных белков для оценки резистентности рыб // Белки - маркеры патологических состояний: Матер, межвуз. научн. конф. мол. ученых. -Астрахань, 1999. - С.6-7.

25. Крючков В.Н., Федорова Н.Н. Морфофункциональное тестирование качества рыбопосадочного материала // Современные средства воспроизводства и использования водных биоресурсов: Сб. тез. на научно-технич. симпозиуме. -СПб.: КСИ, 2000.-С. 6-8.

26.Ложниченко О.В., Федорова Н.Н., Крючков В.Н., Шипулин СВ., Зайцев В.Ф., Абдулаев М.Ш., Куренкова М.П. Состояние селезенки осетровых рыб на фоне накопления тяжелых металлов // Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности: Сб. трудов Международного экологического конгресса / Под. ред. Н.И. Иванова. - СПБ.: Балтийский государственный технический университет,

2000.-С. 294.

27.Kruchkov V., Fedorova К, Hadi M. The quality influence of forage in fish liver during the artificial cultivation // Responsible aquaculture in the new millennium / Abstracts of contributions presented at the International Conference Aqua 2000. -European Aquaculture Society Special Publication No. 28, Oostende, 2000. - P. 351.

28. Крючков В.Н., Федорова Н.Н., Алиновская Ю.Б. Морфология печени и почек карпа после интоксикации кадмием // Тез. докл. V Всероссийской конф. «Ней-роэндокринология-2000». - СПб., 2000. - С. 75.

29. Крючков В.Н., Федорова Н.Н., Дубовская А.В. Морфологические критерии адаптации осетра к загрязнению воды // Международная конференция «Осетровые на рубеже 21 века»: Тез. докл. - Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000. -С.157-158.

30. Крючков В.Н., Алиновская Ю.Б. Обратимость некоторых иммунологических показателей карпа после интоксикации кадмием // Вопросы рыболовства, Т. 1, № 2-3,2000 / Биологические ресурсы окраинных и внутренних морей России и их рациональное использование: Материалы международной конференции. -С.21-22.

31. Крючков В.Н., Хади М.С., Алиновская Ю.Б. Реакция отторжения аллотранс-плантата рыб при интоксикации // Материалы Международной конф., посвященной 70-летию АГТУ. -Астрахань, 2000. - С. 255-258.

32. Крючков В.Н. Патологические и адаптивные изменения в печени и почках карпа под воздействием кадмия //Экологические и функциональные основы адаптации гидробионтов: Тез. докл. симпозиума, посв. 100-летию со дня рождения проф. НЛ. Гербильского. - СПб., 2000. - С. 65-66.

33.Крючков В.Н., Валедская О.М., Алиновская Ю.Б. Применение иммунофизио-логических тестов для оценки резистентности бестера // Вестник АГТУ. Рыбное хозяйство. - Астрахань: Изд-во АГТУ, 2000. - С. 63-68.

34. Крючков В.Н. Морфогенез токсического поражения туловищной почки рыб под влиянием кадмия // Российские морфологические ведомости, № 3-4, 2000. - С. 83-87.

35.Valedskaya O.M., Kruchkov V.N., Nesterova LA. Immunological methods of assessment of viability of sturgeon juveniles // New species. New technologies / Abstracts of contributions presented at the International Conférence Aquaculture Europe 2001, Trondheim, Norway, August 4-7,2001. - European Aquaculture Society Special Publication No. 29, Oostende, 2001.

36. Крючков В.Н. Реактивно-приспособительные изменения печени рыб после интоксикации кадмием // Материалы X Международного симпозиума «эколого-физиологические проблемы адаптации». - М.: Изд-во РУДН, 2001. - С. 268269.

37.3айцев В.Ф., Федорова Н.Н., Крючков В.Н., Ложниченко О.В., Земков Г.В. Патология органов и тканей рыб Волго-Каспийского бассейна в условиях антропогенной деятельности // Наука - производству, № 6 (44), 2001. - С. 27.

38. Зайцев В.Ф., Федорова Н.Н., Крючков В.Н. Структурно-функциональное состояние органов и тканей осетровых рыб Волго-Каспийского региона // Вестник Дагестанского научного центра, 2001, №11.- С. 34-38.

39. Крючков В.Н. Нефротоксичность кадмия для рыб // Материалы международной научной конференции «Проблемы мониторинга экосистем Каспийского моря». -Махачкала, 2002. - С. 25.

40. Крючков В.Н. Оценка влияния кадмия на иммунную систему рыб // Материалы международной научной конференции «Проблемы мониторинга экосистем Каспийского моря». - Махачкала, 2002. - С. 26.

41.Крючков В.Н., Федорова Н.Н., Зайцев В.Ф. Морфофункциональные критерии адаптации рыб к нефтяному загрязнению // Экологическая токсикология: Подготовка специалистов-биотехнологов; Мониторинг и биологическая реабилитация загрязненных нефтью и нефтепродуктами территорий: Тез. докл. - М.: МАКС Пресс, 2002. - С. 50.

42. Федорова Н.Н., Зайцев В.Ф., Крючков В.Н., Хади СМ. Характер патологических изменений печени некоторых видов рыб // Вестник АГТУ. Экология. -Астрахань: Изд-во АГТУ, 2002. - С. 83-88.

43. Крючков В.Н., Бойко А.В. Изучение механизма нефротоксичности кадмия для рыб // Современные проблемы Каспия: Материалы Междунар. конф., поев. 105-летию КаспНИРХ. - Астрахань: Изд-во КаспНИРХ, 2002. - С. 152-155.

44. Овсянникова Е.В., Фомин И.В., Боброва О.В., Крючков В.Н. Адаптация гидро-бионтов к действию загрязнителей // Материалы XI Международного симп. «Эколого-физиологические проблемы адаптации». 27-28 янв. 2003 года. - М.: Изд-во РУДН, 2003. - С. 186-187.

45. Боброва О.В., Лепилина И.Н., Крючков В.Н. Морфофункциональные особенности мезонефроса севрюги (Acipenseг stellatus) в современных экологических условиях // Актуальные проблемы современной науки: Сб. статей 4-й Международной конф. мол. ученых. Ч. II. Экология. - Самара: Изд-во СамГТУ, 2003. - С. 20-23.

46. Фомин И.В., Крючков В.Н. Методы исследования функциональной активности почек рыб // Актуальные проблемы современной науки: Сб. статей 4-й Международной конф. мол. ученых. Ч. И. Экология. - Самара: Изд-во СамГТУ, 2003. -С. 136-139.

47. Крючков В.Н., Фомин И.В. Изучение процессов регенерации печени рыб при экспериментальных токсических и травматических поражениях //Современная наука и проблемы выбора жизненной стратегии человечества. Материалы Международной очно-заочной научной конф., посв, памяти С.Н. Самарцева. — Тула: Изд-во ТулГУ, 2003. - С. 375-378.

48. Крючков В.Н., Абдурахманов Г.М., Федорова Н.Н. Морфология органов и тканей водных животных. - М.: Наука, 2004. -144 с.

»12 0 83

Тип. АГТУ. Зак. 385. Тир. 100 27.05.2004

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Крючков, Виктор Николаевич

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Качество поверхностных вод в современных условиях

1.2. Применение гистологических методов в эколого- 15 токсикологических исследованиях

1.2.1. Эколого-гистологические исследования печени рыб

1.2.2. Характер морфологических изменений в печени рыб под воздействием внешних факторов

1.2.3. Эколого-гистологические исследования почек рыб

1.3. Применение гематологических методов в эколого-токсикологических исследованиях

1.4. Применение иммуннологических методов в эколого-токсикологических исследованиях

Глава 2. Материал и методы исследований

Глава 3. Накопление некоторых экзотоксикантов в органах и тканях рыб

3.1. Накопление тяжелых металлов во внутренних органах карпа

3.2. Содержание хлорорганических пестицидов в органах и тканях карпа

Глава 4. Патолого-морфологический анализ состояния некоторых органов и тканей рыб

4.1. Морфологическая характеристика печени некоторых видов рыб дельты Волги и Северного Каспия

4.2. Патологическая морфология печени рыб

4.3. Морфология печени рыб при экспериментальных токсикозах

4.4. Репаративные процессы в печени рыб

4.4.1. Регенерационная и компенсаторная гипертрофия печени после частичной гепатэктомии

4.4.2. Регенерационная и компенсаторная гипертрофия печени после экспериментальной интоксикации кадмием

4.5. Морфологическая характеристика почек некоторых видов рыб дельты Волги и Каспия

4.6. Патологическая морфология почек рыб

4.7. Морфология почек рыб при экспериментальных токсикозах

4.8. Некоторые механизмы нефротоксичности кадмия для рыб

Глава 5. Факторы естественной резистентности рыб и их изменения при токсических воздействиях

5.1. Оценка влияния токсикантов на кровь рыб

5.2. Система полинуклеарных фагоцитов

5.3. Система лизоцима, естественных антител рыб в норме и при некоторых патологических состояниях

5.4. Иммунные реакции, обусловленные лимфоцитами

5.4.1. Иммуноглобулины

5.4.2. Иммунные комплексы

5.5. Изменение защитных функций крови рыб под воздействием различных токсикантов

5.5.1. Изменение иммунологических показателей карпа под влиянием ртути и меди

5.5.2. Изменение иммунологических показателей осетра при интоксикации нефтью

5.5.3. Изменение иммунологических показателей карпа при интокси- 208 кации нефтью

5.6. Оценка влияния токсикантов на иммунную реактивность

5.6.1. Влияние интоксикации на трансплантационный иммунитет

5.6.2. Влияние хронических интоксикаций на устойчивость к условно-патогенной микрофлоре

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-морфологические особенности патологии и адаптации органов и тканей рыб при воздействии токсикантов"

Проблема изучения влияния на живые организмы вредных факторов окружающей среды приобрела в последние годы универсальное биологическое значение. При разработке этой проблемы большое значение отводится токсикологическим исследованиям. В последние годы приоритеты исследований в проблеме влияния загрязнения водоемов на гидробионтов меняются. В связи с проводимыми природоохранными мероприятиями и современным падением промышленного производства острые экзотокси-козы водных животных стали относительно редкими. Вместе с тем, в водоемах, в частности, в р. Волге и в Каспийском море, постоянно присутствуют загрязняющие вещества в концентрациях, зачастую превышающие предельно допустимые (Хорошко и др., 1989; Андреев и др., 1990; Кукса, 1994).

Важность изучения рыб в эколого-токсикологических исследованиях не вызывает сомнений. Рыбы, являясь высшим трофическим звеном в водных экосистемах, в наибольшей степени испытывают на себе влияние загрязнения водной среды. Вместе с тем, в настоящее время токсикозы проявляются чаще всего в опосредованной форме в виде снижения резистентности, инфекционных и инвазионных заболеваниях, опухолевого роста тканей и др. Все это вынуждает исследователей применять различные морфологические и физиологические методы для изучения отдаленных последствие интоксикаций рыб, важное значение приобретают методы биотестирования (Патин, 1991).

В экологической токсикологии патоморфологические изменения внутренних органов рыб являются одним из объективных критериев токсичности, чему посвящено большое количество исследований (Кондратенко, Щербин, 1991; Корниенко и др., 1996; Ткачева, Рыжков , 1997; Федорова и др., 1999 и др.). Авторы этих работ убедительно показали значение патологических изменений в микроструктуре органов и тканей рыб для оценки степени токсичности того или иного вещества. Вместе с тем, многие Принципиальные вопросы, такие как значение выявляемых патологических изменений для функции органа или для устойчивости всего организма рыб зачастую еще остаются вне поля зрения исследователей. Мало изучены вопросы морфофункциональных нарушений, отражающих принцип единства структуры и функции, единства процессов деструкции и восстановления (Саркисов, 1988). Требуют дальнейшего обобщения огромные по объему фактические данные по патологии органов и тканей рыб с целью возможности сравнения результатов, полученных разными исследователями.

Для нормального функционирования организма необходим высокий уровень резистентности к внешним факторам воздействия. В этой связи необходимо отметить, что устойчивость животных к действию многих биологических, химических и физических факторов обусловлена деятельностью иммунной и других физиологических систем. Иммунная система является одной из важнейших в организме рыб, функции которой, наряду с нервно-эндокринной регуляцией, направлены на сохранение гомеостаза. Иммунная система наиболее тесно связана с неспецифической инактивацией патогенов и циркуляцией патогенов и защитных образований. Оценка иммунофизиологического статуса животных получила широкое распространение при диагностике заболеваний, установлении физиологической опасности техногенных воздействий, изучении общей адаптационной реакции организма в условиях интенсификации животноводства (Коромы-слов, 1988; Федоров, 1990 и др.). Принципы данного подхода с успехом реализованы для системного анализа иммунофизиологической реактивности рыб в условиях аквакультуры (Вихман, 1996). Несомненно, что эти или подобные методы могут быть применены и в практике экотоксикологиче-ских исследований.

Как известно, зачастую суждение о негативном воздействии на организм экстремальных факторов среды, в том числе и токсикантов, основывается на самом факте выявления изменения исследуемого показателя. При этом, как правило, не всегда учитывается, какое значение для организма имеет наблюдаемое изменение биологической функции. Кроме того, необходимо сопоставление изменений с биологической нормой, что по ряду причин тоже не всегда оказывается возможным.

Целью исследований явилось выявление современных морфологических и функциональных признаков патологии и адаптации у рыб, а также оценка общей резистентности при патологических изменениях в организме рыб, вызванных действием токсикантов, находящихся в воде.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи

1. Установить уровень кумуляции некоторых тяжелых металлов и хлорорганических пестицидов в органах и тканях рыб.

2. Обобщить основные патологические изменения в печени и почках некоторых видов рыб дельты Волги и Каспийского моря, возникающих в современных условиях внешней среды, а также изучить частоту распространения основных морфологических нарушений в печени рыб.

3. Изучить механизмы патологии и адаптации печени рыб к воздействиям токсических веществ на тканевом, клеточном и субклеточном уровнях, а также определить экспериментальными методами функциональное значение адаптивных и репаративных процессов в печени рыб после интоксикаций.

4. Исследовать механизм нефротоксичности некоторых ксенобиотиков, а также определить роль иммунных процессов в развитии патологии почек рыб.

5. Изучить направленность и характер морфофункциональных нарушений периферической крови рыб при хронических токсикозах.

6. Оценить влияния на иммунофизиологический статус рыб токсикологических стресс-факторов и выявить характер и направленность изменений общей резистентности рыб.

Впервые проведено обобщение патоморфологических изменений в жизненно важных органах осетровых и карповых рыб в современных условиях загрязнения водной среды Нижней Волги и Каспийского моря, а также приводятся сведения о распространении основных видов патологии печени у осетровых видов рыб, возникающих под действием внешних факторов. Впервые на тканевом, клеточном и субклеточном уровнях описаны как патологические, так и репаративные процессы в печени и в почках при действии на них различных токсикантов. Показано, что патология печени при некоторых токсикозах характеризуется функциональным напряжением гепатоцитов, вследствие чего происходит разрушение их органелл. Адаптивные процессы в печени происходят в виде внутриклеточной гиперплазии и регенерации ультраструктур, функционально связанных с синтезом белка. На основании морфофункционального анализа показано, что состояние печени осетровых рыб оценивается как компенсированная патология.

Впервые исследован один из основных механизмов хронического токсического действия кадмия на рыб, в связи с чем изучена роль иммунных процессов при развития морфологических и функциональных нарушений в почках карповых рыб. Выявлен дозазависимый эффект развития гломеру-лярных изменениий почек рыб при накоплении в них кадмия.

Описан процесс отторжения первичного чешуйного аллотранспланта-та у рыб, показана возможность использования данного показателя для оценки иммунной реактивности рыб при токсикозах.

Выявлена связь патоморфологических нарушений в паренхиматозных органах рыб с некоторыми показателями неспецифической резистентности, изменения которых приводят к развитию состояния, характеризующимся иммунодефицитом. Доказана возможность неспецифического проявления экзотоксикозов в виде сопутствующей инфекции.

Практическое значение работы состоит в систематизации основных форм патологии печени и почек рыб, развивающихся под влиянием современных экологических условий. Предложен комплекс морфофизиологиче-ских методов, позволяющих оценить степень развития адаптивных и патологических реакций организма рыб, который применим при проведении мониторинговых и токсикологических исследованиях популяций рыб в естественных ареалах, что позволяет прогнозировать дальнейшее состояние популяции. Материалы исследования используются в преподавании курсов «Прикладная экология», «Экологическая токсикология», «Цитология», «Гистология» в институте биологии и природопользования Астраханского государственного технического университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Накопление из окружающей среды некоторых тяжелых металлов и хлорорганических пестицидов в органах и тканях рыб зависит от функциональных свойств тканей. Уровень накопления указанных токсикантов в современных экологических условиях не оказывает непосредственного влияния на характер и степень развития изменений во внутренних органах рыб. Исключение составляет кадмий, для которого выявлен критический уровень накопления в экскреторных отделах почек рыб, что приводит к развитию почечной патологии.

2. Действие различных по своей природе поллютантов (нефть, кадмий) приводит к развитию схожих изменений в печени, т.е. их действие на тканевом и клеточном уровнях неспецифично. Основным механизмом развития патологии печени рыб при действии изученных токсических веществ является функциональное перенапряжение гепатоцитов, приводящее к появлению морфологически измененных структур клетки. Морфологическим субстратом функциональных резервных возможностей печени является гипертрофия и гиперплазия внутриклеточных ор-ганелл гепатоцита.

3. Кадмий играет важную роль при возникновении изменений в почках рыб даже при относительно небольших его концентрациях в воде. Иммунным процессам принадлежит ведущая роль в развитии гломерулярных форм почечной патологии у рыб.

4. На фоне патологических изменений в жизненно важных органах рыб при действии токсикантов развивается состояние, характеризующееся лейкопенией и функциональной недостаточностью иммунной системы. Торможение реакции отторжения первичного аллотрансплантата и снижение толерантности к условно-патогенной микрофлоре рассматривается как неспецифическое проявление хронического токсикоза.

В работе использованы следующие сокращения: АГ - антиген AT - антитело

БАСК - бактериостатическая активность сыворотки крови

АЭК - агглютинины к эритроцитам кролика

АЭЧ - агглютинины к эритроцитам человека

ФАН - фагоцитарная активность нейтрофилов

ФИ - фагоцитарный индекс

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

Ig - иммуноглобулины

Заключение Диссертация по теме "Экология", Крючков, Виктор Николаевич

ВЫВОДЫ

1. Установлено наибольшее содержание тяжелых металлов в метаболически активных органах карпа (печень, туловищная почка, селезенка), причем в каждом из них отмечается определенное соотношение различных элементов. Выявлено накопление хлорорганических пестицидов (ДЦТ и его метаболитов, ГХЦГ и гептахлора) в органах и тканях карпа в концентрациях, достигающих величин 280 мкг/кг в печени, 374 мкг/кг в жабрах, 190 мкг/кг в мышцах.

2. Наблюдения, проведенные в естественных условиях на осетровых, карповых рыбах и бычках показали, что в печени рыб преобладают изменения, обусловленные как дистрофическими и некробиотиче-скими процессами в гепатоцитах, так и нарушениями микроциркуляции крови.

3. Патогенез морфологических изменений в печени обусловлен функциональным перенапряжением ультраструктур гепатоцитов, вследствие чего происходит деструкция гранулярного и агранулярного эндо-плазматического ретикулума, появляются патологически измененные митохондрии. Продолжительное действие стресс-факторов приводит к некробиотическим изменениям гепатоцитов.

4. Показано, что адаптация печени к токсическим воздействиям проявляется в форме внутриклеточной компенсаторной регенерации, а именно в виде гиперплазии каналов гранулярной эндоплазматической сети, увеличения на них количества рибосом, увеличении количества митохондрий, формирования комплексов «митохондрии -гранулярный эндоплазматический ретикулум». Механизмы компенсаторной гипертрофии печени рыб имеют сходный характер вне зависимости от причин поражения органа.

5. В почках исследованных рыб были выявлены преимущественно ту-булярные и гломерулярные изменения. Наиболее характерными были изменения в извитых канальцах. Гломерулярные изменения были обусловлены патологическими процессами в капиллярах, а также пролиферацией мезангиальных клеток и эндотелиоцитов.

6. Выявлена роль кадмия в развитии гломерулярной патологии меза-нефроса рыб. Нефротоксичность кадмия проявляется через образование циркулирующих иммунных комплексов, обнаруживаемых в дальнейшем в виде электронноплотных депозитов в базальных мембранах почечных телец. Явно выраженные морфологические нарушения почек развиваются при накоплении в них кадмия свыше 1,0 мг/кг. Таким образом, этот уровень накопления металла следует считать критическим для нормального функционирования выделительной системы. Функциональные изменения мезанефроса проявляются в виде сниженного диуреза, а также протеинурии, наличия лейкоцитов в моче.

7. Под действием рассмотренных токсикантов в периферической крови рыб происходят изменения в картине как красной, так и белой крови. Отмечается угнетение гемопоэза, что находит свое выражение, в частности, в снижении уровня содержания практически всех форменных элементов крови, развивается явно выраженная лейкопения.

8. Установлено, что хроническое воздействие токсикантов (кадмий, ртуть, нефть) приводит к возникновению симптомов вторичного иммунодефицита в крови рыб в виде снижения фагоцитарной активности нейтрофилов, лизоцима, снижении концентрации естественных антител и лейкопении. Показано увеличение концентрации сывороточных иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов. Одновременное увеличение концентрации циркулирующих иммунных комплексов и угнетение фагоцитоза свидетельствует о том, что ведущую роль в увеличении концентрации иммунных комплексов играет дефицит нормально функционирующих фагоцитов, что препятствует элиминации иммунных комплексов.

9. Выявлено, что хронические интоксикации приводят к снижению иммунной реактивности и, в частности, к угнетению реакции отторжения первичного аллотрансплантата. Реакция отторжения первичного аллотрансплантата (чешуи) может быть использована для количественной оценки степени угнетения иммунной реактивности при воздействии токсических веществ. Доказано, что изменение иммунологических реакций карпа под влиянием изучаемых токсикантов приводит к снижению сопротивляемости организма к условно-патогенной Pseudomonas fluorescens. Возможно неспецифическое проявление экзотоксикозов в виде развития инфекционных заболеваний.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Эколого-токсикологическое исследование показало, что содержащиеся в волжской воде токсиканты, концентрации многих из которых превышают ПДК (медь, цинк, ртуть, углеводороды), создают постоянный токсикологический фон для рыб. Накопление в организме рыб хлорорганических пестицидов, вовлечение их в процессы метаболизма, нарушение динамического равновесия поступления металлов в органы и ткани и их выведения, -все это является одной из причин развития негативных процессов в организме рыб.

Поступление токсикантов в организм происходит через органы или системы органов, напрямую или опосредованно (например, через пищу) контактирующих с внешней средой: покровные образования, жабры, пищеварительную систему. Попадая затем в кровь, токсиканты перераспределяются в организме, накапливаясь в органах и тканях в зависимости от свойств и функций последних, частично выводятся из организма через жабры, пищеварительную, выделительную системы в первоначальном или инактивированном виде.

Токсичность тяжелых металлов (кадмия, меди, ртути и др.) и нефтяных углеводородов для рыб не вызывает сомнения, что подтверждается ранее проведенными многочисленными исследованиями. Вместе с тем, еще недостаточно ясны отдаленные последствия хронической интоксикации, которая не вызывает непосредственной гибели рыб.

Воротные системы печени и почек играют важную роль в защите организма от ксенобиотиков. Печень принимает активное участие в обеззараживании или трансформации токсикантов, и она также подвергается их негативному воздействию.

Эколого-гистологические исследования показывают, что у рыб в естественных условиях встречаются разнообразные изменения в печени, возникающие под действием негативных факторов, в том числе и загрязняющих веществ. Эти изменения весьма распространены. Кроме того, они схожи у разных видов рыб, хотя и имеются определенные видовые отличия. Так, например, у осетровых видов рыб наиболее выражены дистрофические процессы в гепатоцитах, в то время, как у карповых на передний план выступают нарушения микроциркуляции, а дистрофии имеют меньшее значение. Возможной причиной поражения печени может быть хроническая интоксикация обычными для волжской воды поллютантами. По свидетельству JI.A. Лесникова и И.Д. Чинаревой (1987), своеобразием гистологических изменений при гибели рыб является наличие значительных повреждений внутренних органов при длительном действии относительно невысоких концентраций загрязняющих веществ, и почти полное отсутствие симптомов поражения внутренних органов в высоких летальных концентрациях, особенно при приближении к «пороговому времени реакции». Ряд из отмеченных симптомов поражения тканей печени весьма характерен для хронических интоксикаций. Ацидофильная дистрофия - потеря цитоплазмой нормальной базофилии - рассматривается как ранний признак поражения печеночных клеток. Весьма характерным признаком токсического поражения печени является отложение пигментов в паренхиме орган. Мелкие капельки жира обнаруживались в нормальных печеночных клетках, однако в патологических условиях количество видимого жира резко увеличивается (жировая дистрофия). Повышенное содержание жира в печени (гепатоз) может быть следствием целого ряда факторов, таких, как нарушение обменных процессов, как результат нарушения кровотока на ограниченном участке органа, так и при действии токсических веществ (фосфор- и хлорорганических пестицидов, четыреххлористого углерода, тяжелых металлов и др.). Характерно нарушение обмена пигментов печени, что бывает при хронических интоксикациях (Уолке и др., 1985).

Выявленные нарушения неизбежно ведут к дисфункции органа, к снижению его детоксикационной способности.

Обращает на себя внимание то обстоятельство, что действие различных по своей природе токсикантов (нефть, кадмий) приводит к развитию схожих изменений в печени, т.е. их действие на органном и тканевом уровнях неспецифично, или мало специфично. Более того, изменения печени, обнаруживаемые у рыб в естественных условиях, очень похожи на те, которые развиваются в условиях экспериментальной интоксикации. Это тем более удивительно, что в эксперименте действует только лишь токсикант, тогда как в природных условиях на рыб действуют не только многие загрязняющие вещества, обладающие различным механизмом совместного действия (антогонизм, синергизм), но и многие другие негативные факторы.

Проведенное электронно-микроскопическое исследование однозначно свидетельствует о том, внутриклеточные изменения развивается вследствие первоначального повышения функциональной активности гепатоцитов. При этом можно наблюдать резкое увеличение числа ультраструктур, отличающихся по строению от нормальных. Характерно, что эти отличия делают похожими такие функционально активные структуры на так называемые патологически измененные. В дальнейшем происходит истощение резервных возможностей клеток, на первый план выступают изменения в строении митохондрий, эндоплазматического ретикулума. Эти структуры функционально связаны с внутриклеточным синтезом белка и ферментативными системами, и поэтому являются особенно лабильными и чувствительными к изменениям среды. Характерно, что эти морфологические нарушения в клетках печени сочетаются с нарушениями функции печени, что было показано на примере метаболизма билирубина.

Не может не интересовать вопрос, каким образом выявляемые в печени рыб патологические изменения могут влиять на их здоровье, тем более что исследуемые рыбы в большинстве случаев не имели выраженных симптомов какого-либо заболевания. В связи с этим следует отметить, что печень обладает большими потенциями к регенерации. Проведенные исследования показали, что печень рыб способна восстанавливать свои структуры и функции даже при потере (оперативным путем или вследствие токсического поражения) порядка 1/3 количества гепатоцитов. Первоначально происходит активация сохранившихся гепатоцитов, что проявляется как в виде изменения морфометрических показателей клеток (увеличение размеров клетки, ядра, активация белоксинтезирующей системы), так и в виде гиперплазии внутриклеточных структур. Так, в первые часы после частичной гепатэктомии обнаруживается расширение канальцев эндоплазматиче-ского ретикулума вплоть до возникновения вакуолей, набухание митохондрий и исчезновение гранул гликогена. Т.е. была отмечена высокая степень функционального напряжения оставшихся печеночных клеток в связи с удалением части органа, т.к. сохранившаяся часть должна выполнять ту же работу, в которую был вовлечен весь орган. Параллельно с этим в оставшейся части органа развертывается интенсивная репаративная регенерация, приводящая в конечном итоге к восстановлению массы органа.

Проведенные исследования показали, что печень рыб способна восстанавливать свои структуры и функции при значительных поражениях, в связи с чем можно сделать вывод, что выявляемые в природных условиях патологические изменения печени рыб компенсируются репаративными процессами.

Болезни почек сложны, и рыбы не являются исключением. Полученные в данной работе результаты свидетельствуют, что ткани почек реагируют на токсическое влияние нефти и тяжелых металлов развитием разнообразных морфологических и функциональных нарушений. Из исследованных токсикантов наиболее выраженное влияние на экскреторные отделы почек рыб оказывает кадмий. Выявлен дозозависимый эффект развития патологии почек карповых рыб в связи с уровнем накопления в них кадмия, причем эта закономерность была выявлена в природных условиях и подтверждена в эксперименте. Из этого следует, что, несмотря на относительно небольшое содержание в природной среде (в воде реки Волги порядка ПДК), кадмий вносит свой вклад в развитие патологии почек рыб. Действие других токсикантов на почки проявляется прежде всего в виде тубу-лярных и интерстициальных изменений.

Следует отметить, что способность рыбы адаптироваться и, следовательно, выживать при существующем загрязнении, зависит от того, насколько нормально функционируют основные гомеостатические системы (нервная, эндокринная, иммунная). Согласно современным представлениям о физиологической адаптации можно полагать, что ее неспецифические компоненты базируются на механизмах резистентности. Исторически понятие резистентности нередко отождествляется с понятием естественного иммунитета, хотя в физиологическом плане оно шире, т.к. резистентность проявляется прежде всего в форме общей устойчивости организма, а не только как действие против живых агентов. Общая или неспецифическая резистентность относится к числу интегральных функциональных характеристик организма и является показателем его устойчивости к различным воздействиям. В живом организме иммунологические и неспецифические защитные реакции практически всегда протекают совместно, они взаимосвязаны (Корнева, Шекоян, 1982).

Изменения в периферической крови носят, скорее всего, неспецифический характер, проявляются в виде лейкопении и развитии цитоморфоло-гических изменений в клетках красной крови.

Действие токсикантов проявляется не только на органы и ткани, но и непосредственно на клетки. Функциональные изменения в клетках происходят на разных уровнях:

- изменение рецепторных свойств клетки - это реакции клетка-антитело, клетка-клетка (реакция агглютинации к эритроцитам кролика, человека);

- изменение продукции биологически активных веществ (гуморальных факторов в системе неспецифической инактивации патогенов, например, лизоцима);

- изменение содержания биологически активных веществ (неферментных лизосомально-катионных белков);

- изменение поглотительной способности клеток (фагоцитоз без специфического усиления).

Ответные реакции организма определяются характером, силой и длительностью воздействия, при этом реагирование разных иммунофизиолги-ческих систем не совпадает по направленности изменений во времени.

Из клинической медицины известно, что все патологические процессы, сопровождающиеся лимфопенией и гипогаммаглобулиномией, приводят к развитию вторичных иммунодефицитов разной степени выраженности (Петров, 1987). Проведенные работы свидетельствует о непосредственном влиянии токсикантов на иммунофизиологическую реактивность рыб. Результаты экспериментов показали, что возможно неспецифическое проявление экзотоксикозов в виде развития инфекционных заболеваний.

Таким образом, анализ литературных данных и собственные исследования показали, что выявляемые морфологические и физиолого-биохимические изменения в организме рыб, скорее всего, являются следствием сочетанного действия различных экологических факторов, в том числе и многочисленных токсикантов, содержащихся в воде нижнего течения Волги и Северного Каспия. Состояние исследованных рыб как в естественных условиях, так и в условиях эксперимента можно оценить как компенсированная патология.

Считаем, что это состояние органов можно принять за адаптивную норму, которая включает в себя различные реакции организма, в том числе и отдельных органов и систем органов. Вместе с тем при усилении токсикологического пресса адаптивная норма может переходить в болезнь адаптации.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Крючков, Виктор Николаевич, Махачкала

1. Абдуллаев Н.Х., Каримов Х.Я. Печень при интоксикациях гепа-тотропными ядами. Ташкент: Медицина, 1989. - 96 с.

2. Абрикосов А.И. Основы частной патологической анатомии. — М.: Медгиз, 1950.-472 с.

3. Авцын А.П., Шахламов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки.-М., 1979.

4. Алабастер Дж., Ллойд Р. Критерии качества воды для пресноводных рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984. - 344 с.

5. Алиев Н.К., Абдурахманов Г.М., Мунгиев А.А., Гаджиев А.А. Экологические проблемы Каспия. Махачкала, 1997. - 168 с.

6. Алтуфьев Ю. В. Морфофункциональное состояние мышечной ткани и печени молоди русского осетра и белуги в экспериментах по хронической интоксикации // Вопросы ихтиологии. 1994. - 34, № 1 .С. 135-38.

7. Андреев В.В. Загрязнение Нижней Волги и Северного Каспия тяжелыми металлами // Экологические проблемы Волги: Тез. докл. к региональной конференции. Саратов, 1989. - С. 142 - 143.

8. Андреев В.В., Якубов Ш.А., Кириллов В.Н. Эколого-генетический мониторинг загрязнений Нижней Волги и Северного Каспия // Докл. АН СССР. 1990. - Т. 314, №2. - С. 505-508.

9. Ю.Андрейченко С. В., Зражва Л. Е., Нурищенко Н. Е. Общая характеристика ультраструктурных изменений гепатоцитов печени рыб из водоема-охладителя Чернобыльской АЭС //Радиобиол. съезд, Киев, 2025 сент., 1993: Тез. докл. -Пущино,1993 -С. 18-19.

10. П.Анохин П.К. Принципиальные вопросы общей теории функциональных систем // Принципы системной организации функции. М.: Наука, 1973.-С. 5-61.

11. Антитела. Методы: Кн. 1 / Под ред. Д. Кэтти. М.: Мир, 1991. - 287 с.

12. П.Антонова JI.A., Крючков В.Н. Морфофункциональные критерии оценки состояния туводных рыб Нижней Волги// Вестник Астраханского государственного технического университета: Сб. научн. трудов. Вып. 2.- Астрахань: Астр. гос. техн. ун-т, 1996.- С. 89-93.

13. М.Арипов А.Н., Каримов Х.Я., Фесенко JI.M., Паевская JI.A. Клеточные механизмы нарушения основных функций печени при ее остром токсическом поражении / Патология и экспериментальная терапия. -М.,1990.-16 е.-Деп. в ВИНИТИ 07.06.90, № 3150-Б90.

14. Афанасьева Н.А., Карьянов С.В. Состояние загрязненности вод Каспийского моря на современном этапе // Материалы Всесоюзного сов. по пробл. Каспийского моря. Гурьев, 1991. - С. 31-36.

15. Балабанова J1. В. Ультраструктура иммуннокомпетентных клеток некоторых морских рыб. // III Всес. конф. по морск. биол. -Киев, -1988.-С.З.

16. Балабанова Л.В. Влияние кадмия на ультраструктуру иммунокомпе-тентных клеток Мозамбикской тиляпии Oreochromis mossambicus // Цитология. 1997. - 39, № 8. - С. 677-680.

17. Балабанова JI.B. Ультраструктура иммунокомпетентных клеток почек рыб сем. Cyprinidae II Биол. внутр. вод. 1997. - № 2. - С. 65-69.

18. Балахнин И.А., Куровская Л .Я. О взаимосвязи титра комплемента, протеолитической активности и количества белка сыворотки крови карпа // Гидробиол. ж. 1997. - 33, № 5. - С. 83-86.

19. Бауер О.Н., Мусселиус В.А., Стрелков Ю.А. Болезни прудовых рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981. - 320 с.

20. Берман Ш.А., Ильзинь А.Э. Распределение микроэлементов марганца, меди, и цинка в органах и тканях пресноводных промысловых рыб // Микроэлементы в организме рыб и птиц. Рига, Зинатне, 1968. -С. 5-8.

21. Брагинский Л.П., Комаровский Ф.Я., Мережко А.И. Персистентные пестициды в экологии пресных вод. Киев: Наукова думка, 1979. -140 с.

22. Будников Г.К. Тяжелые металлы в экологическом мониторинге водных систем // Соросовский образовательный журнал. 1998, № 5. -С. 23-29.

23. Васильев Н.В., Яковлева В.В. Изменения неспецифических факторов иммунитета при хроническом лечении злокачественной миопаии //Роль вилочковой железы в патогенезе, клинике и лечении больных миопатией и миоастенией. Томск, 1980. - С. 24 - 27.

24. Ведемейер Г.А., Мейер Ф.П., Смит Л. Стресс и болезни рыб. М., Легкая и пищевая промышленность. - 1981. - 127с.

25. Винниченко Л.Н. Сравнительная ультраструктура нефрона. — Л.: Наука, 1980.- 136 с.

26. Вихман А. А. Об основных направлениях развития иммунологического исследования рыб. // Сб. Болезни рыб. М., 1991. - С.16-22.

27. Вихман А.А. Экологическая иммунология рыб на современном этапе//Успехи совр. биол., 1983, Вып 1, -С. 130-137.31 .Вихман А.А. Иммунофизиологический статус рыб объектов аква-культуры // Автореф. дисс. докт. биол. наук. - М., 1994. - 48 с.

28. Вихман А.А., Поддубная А.В. О влиянии стресса на иммунологическую реактивность карпа // Сб. научных трудов ВНИИРПХ. Вопросы интенсификации прудового рыбоводства. М., 1981. - Вып. 31. - С. 233-248.

29. Владимиров B.JI. Флеров В.А. Восприимчивость к ихтиофтириозу у рыб прсле отравления фенолом и полихлорпиненом // Инф. бюллетень Института биологии внутренних вод АН СССР. 1974, № 25. -С. 35 -37.

30. Войнар А.И. Микроэлементы в живой природе. М.: Высшая школа, 1962.-93 с.

31. Воловенко М.А. Определение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови новорожденных телят // Ветеринария. 1975. - №4. - С. 100-104.

32. Врочинский К.К., Мухопад JI.H. Эколого-гигиенические аспекты миграции пестицидов в воде // Влияние биологически активных веществ на гидробионтов: Сборник научных трудов, вып. 287. Л., 1988.-С. 31 -38.

33. Врочинский К.К., Перевозников М.А. Ихтиотоксикологическая характеристика химических веществ (пестициды, углеводороды, металлы, радионуклиды) // Влияние антропогенного фактора на экосистему озер: Сборник научных трудов, вып. 313. Л., 1990. - С. 3 -15.

34. Генералова Л.П., Ситнова О.В. Методика определения лизоцима жидкостно-гелевым способом. М.: ВНИИПРХ, 1994. - 3 с.

35. Говорова М.Ф. Влияние меди на гематологические показатели и ок-сидазную активность церулоплазмина сыворотки карпа // Вопросы прудового рыбоводства: Тр. ВНИИПРХ, т. XVIII, 1971. С. 43 - 45.

36. Головина Н.А. Методы гематологических исследований в ихтиопа-тологической практике // Труды ЦНИИТЭИРХ. М., 1979. - вып. 4. -С. 8- 18.

37. Головина Н.А., Тромбицкий И.Д. Гематология прудовых рыб. -Кишинев: Штиница, 1989. -157 с.

38. Гончаров Т.Д., Микряков В.Р. Влияние малых концентраций фенола на антителообразование у карпов // Вопросы водной токсикологии. -М.: Наука, 1970.-С. 171-175.

39. Григорьев В.А., Крючков В.Н. Динамика содержания ртути в водоемах в районе Астраханского газового комплекса // Проблемы изучения, охраны и рационального использования природных ресурсов Волго-Ахтубинской поймы. Астрахань, 1989. - С. 30 -31.

40. Григорьев Н.И. Строение и регенерация печени после ее местного повреждения. Л.: Медицина, 1975. - 192 с.

41. Грищенко Л.И. Влияние некоторых пестицидов на восприимчивость рыб к псевдомонозу // V Всесоюзный симпозиум по инфекционным болезням рыб. М., 1986. - С. 26 - 27.

42. Грищенко Л.И. Влияние некоторых пестицидов на восприимчивость рыб к псевдомонозу // V Всесоюзный симпозиум по инфекционным болезням рыб. М., 1986. - С. 26 - 27.

43. Грищенко Л.И. Структурные изменения в жабрах рыб под воздействием токсических веществ // Вторая всесоюзная конференция по ры-бохозяйственной токсикологии.- СПб., 1991.- Т. 1, С. 138 -140.

44. Грищенко Л.И., Рудиков Н.И. Проблемы патологии и иммунитета при инфекционных болезнях рыб. // Итоги науки и техники. Ихтиология. М. - 1985. - Т. 1. - С. 190-211.

45. Дранник Г.Н. Иммунонефрология. К.: Здоровья, 1989. - 184 с.

46. Ежегодник качества морских вод по гидрохимическим показателям за 1990 г. Обнинск: ВНИИГМИ-МЦЦ, 1991. - 277 с.

47. Жабрева С.Б. Влияние солей тяжелых металлов на ультраструк-туру жаберного эпителия ленского осетра // Вторая всесоюзная конференция по рыбохозяйственной токсикологии. СПб., 1991. - Т. 1, С. 190 -191.

48. Иванова Н.Т. Атлас клеток крови рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 184 с.

49. Илюхин В.И. Псевдомонадные инфекции в патологии человека // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 1985, N 2. -С. 110-114.

50. Исаева Н.М., Козиненко М.И. Влияние химических соединений на иммунный статус рыб в аквакультуре // Вопр. ихтиологии. 1992, Т. 32, вып. 1.-С. 157- 167.

51. Каграмова Л.К., Ермольева З.В. Сравнительная характеристика методов определения активности лизоцима // Антибиотики, 1966, № 11.-С. 917-919.

52. Карташова О .Я., Терентьева Л.А., Залцмане В.К., Максимова Л.А. Патология гепатоцитов при вирусных и токсических поражениях печени // Вестник АМН СССР. № 1, 1983. - С. 74-81.

53. Клиническая морфология в урологии и нефрологии / Под. A.M. Ро-маненко. К.: Здоровья, 1990. - 192 с.

54. Клисенко М.А. Основные закономерности накопления и распределения пестицидов и клиника отравлений // Гигиена применения, токсикология пестицидов и клиника отравлений. Вып. 8, Киев: ВНИИ-ГИНТОКС, 1979. - С. 54 - 57.

55. Клишов А.А. Гистогенез и регенерация тканей. JL: Медицина, 1984. - 232 с.

56. Козлюк А.С., Анисимова JI.A., Шройт И.Г. Иммунологические методы в гигиенических исследованиях. Кишинев: Штиница, 1987. -211 с.

57. Кордаков И.А. Внимание: пестициды! Алма-Ата: Кайнар, 1988. -216 с.

58. Короленко Т. К. О нефротоксическом действии солей бензойной кислоты // Гигиена труда (Киев). 1989. - № 25. - С. 118-120.

59. Коромыслов Г.Ф. Ускорить обновление // Ветеринария, 1988. № 10. -С. 3-6.

60. Костров Б.П., Магомедов А.К., Самудов Ш.М. Состояние нефтяного загрязнения экосистемы Среднего и Южного Каспия // I Международная конф. по проблемам Каспийского моря: Тез. докл. Баку-Элм., 1991.-С. 48-49.

61. Котов A.M., Мазманиди Н.Д. Изменение некоторых морфобиохими-ческих показателей крови у черноморской мариды при отравлении малыми концентрациями диспергентов // Экологическая физиология и биохимия рыб. Астрахань, 1979. - Т. 1. - С. 95 - 96.

62. Крючков В.Н., Григорьев В.А. Содержание тяжелых металлов в воде водоемов Волго-Ахтубинской поймы // Проблемы изучения, охраны и рационального использования природных ресурсов Волго-Ахтубинской поймы. Астрахань, 1989. - С. 34 -35.

63. Крючков В.Н., Андреев В.В., Григорьев В.А. Мониторинг загрязнения дельты Волги тяжелыми металлами // Экологические проблемы Волги: Тез. докл. к региональной конференции. Саратов, 1989. - С. 208-210.

64. Кукса В.И. Геоэкологический мониторинг Каспийского моря и современные изменения его режима // Водные ресурсы. 1994. - Т. 21, №1.-С. 80-83.

65. Купер Э. Сравнительная иммунология. М.: Мир, 1980. - 422 с.

66. Лакин К.М., Крылов Ю.Ф. Биотрансформация лекарственных веществ. Общие вопросы. М.: Медицина, 1981. - 344 с.

67. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1973. - 343 с.

68. Ласкорин Б.Н., Лукьяненко В.И. Проблема качества воды волго-каспийского бассейна // Физиолого-биохимический статус Волго-Каспийских осетровых в норме и при расслоении мышечной ткани. -Рыбинск, 1990.- С. 6-24.

69. Лиознер Л.Д. Регенерация и развитие.- М.: Наука, 1985. 167 с.

70. Лесников Л.А., Чинарева И.Д. Патологи-гистологический анализ состояния рыб при полевых и экспериментальных токсикологических исследованиях // Методы ихтиотоксикологических исследований. -Л., 1987.-С. 80-81.

71. Логинов А.С., Аруин Л.И. Возможности и ограничения морфологической диагностики заболеваний печени. Тер. арх., 1980, №2. - С. 3-8.

72. Логинов А.С., Аруин Л.И. Клиническая морфология печени. М.: Медицина, 1985. - 240 с.

73. Лукьяненко В.И. Иммунобиология рыб. М.: Пищевая промышленность, 1971.-364 с.

74. Лукьяненко В.И. Иммунобиология рыб: Врожденный иммунитет. -М.: Агропромиздат, 1989. 271 с.

75. Лукьяненко В.И. О нарастающем пестицидном загрязнении Волго-Каспийского бассейна и угрозе осетровому хозяйству страны // Осетровое хозяйство водоемов СССР. Астрахань, 1989. - С. 202 -207.

76. Лукьяненко В.И. Общая ихтиотоксикология. М.: Легкая и пещевая промышленность, 1983. - 319 с.

77. Мазманиди Н.Д., Ковалева Г.И. Экспериментальные данные о действии нефти на некоторые химические свойства морской воды // Океанология, 1972, Т. XII, вып. 5, С. 817-822.

78. Макаревич Н.А. Лизосомально-катионный тест для оценки резистентности организма крупного рогатого скота // Ветеринария, 1988, №5. -С. 26-28.

79. Матей В.Е. Функциональная морфология жаберного эпителия пресноводных костистых рыб // Физиология, биохимия и токсикология пресноводных животных. Л.: Наука, 1990. - С. 104 - 136.

80. Матей В.Е., Чуйко Г.М., Павлов Д.Ф. Сравнительный анализ изменений структуры жабр тиляпии Oreochromis mossambicus при хроническом действии нафталина и дихлофоса // Цитология. 1994, N9-10. -С. 938 - 945.

81. Материалы к государственному докладу о состоянии окружающей природной Среды РФ за 1992 г. по Астраханской области / Под общей редакцией Ю.С. Чуйкова. Астрахань, 1993. - 122 с.

82. Микряков В.Р. Закономерности формирования приобретенного иммунитета у рыб. Рыбинск, 1991. - 152 с.

83. Микряков В.Р. Влияние аварийных сбросов промышленных предприятий города Череповца на иммунную систему рыб Шекснин-ского плеса // Второй симпозиум по экологической биохимии рыб: Тез. докл. Ярославль, 1990. - С. 181 -183.

84. Микряков В.Р. Иммунологические основы контроля эпизоото-логического состояния рыбохозяйственных водоемов // Тез. докл. V Всесоюзного симпозиума по инфекционным болезням рыб. М., 1986. -С. 62-63.

85. Микряков В.Р., Лапирова Т.Б. Влияние солей некоторых тяжелых металлов на состав белой крови молоди ленского осетра Acipenser baeri // Вопр. ихтиол. 1997. - 37, № 4. -С. 538-542.

86. Миронов О. Г. Биологические ресурсы моря и нефтяное загрязнение. -М.: Пищевая промышленность, 1972. 106 с.

87. Мишустин Е.Н., Емцев В.Т. Микробиология. М.: Агропром-издат, 1987. - 368 с.

88. Моисеенко Т.И. Гематологические показатели рыб в оценке их токсикозов (на примере сига Coregonus laveratus) // Вопр. ихтиологии. 1998. - 38, №3.-С. 371-380.

89. Мотлох Н.Н. Митохондрии и посттравматическая регенерация. Успехи современной биологии, 1981, № 3. - С. 422-439.

90. Мур Д., Рамамурти С. Тяжелые металлы в природных водах: Контроль и оценка. М.: Мир, 1987. - 110 с.

91. Мусселиус В.А., Ванятинский В.Ф., Вихман А.А., Головина Н,А., Головин П.П., Марченко JI.M., Шелкунова Т.И., Шелкунов И.С., Юхименко JI.H. Лабораторный практикум по болезням рыб. -М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. 295 с.

92. Назаренко Л.Д. Содержание меди и цинка и сезонная динамика их в органах и тканях промысловых рыб Куйбышевского водохранилища // Тр. Ульяновского с/х института, 1972. Т. 17 (8). - С. 167 -179.

93. Некрасов С.Н., Ковалев В.В., Хрусталев Л.Ю., Елисеева С.В. К вопросу о токсикологической ситуации в районе Нижней Волги // Экологические проблемы Волги: Тез. докл. к региональной конференции. Саратов, 1989. - С. 83 - 85.

94. Некрасов С.Н., Хрусталев Л.Ю., Мумжу В.А. Особенности миграции токсичных микроэлементов в условиях антропогенного преобразования экосистемы Нижней Волги // Первая всесоюзная конф. по рыбохозяйственной токсикологии: Тез. докл. Рига, 1989.- С. 54 -55.

95. Никитин В.М. Справочник серологических реакций. -Кишинев: Штиница, 1977. 206 с.

96. Остроумова И.Н. Динамика состава крови зимующих сеголетков карпа, выращенных на разных рационах // Известия ГосНИОРХ. -Л., 1972.-Т. 81.-С. 36-58.

97. Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия: Т. 2. 4.II. М.: Медицина, 2001. - 680 с.

98. Патин С.А. Эколого-токсикологические аспекты изучения и контроля качества водной среды // Гидробиологический журнал. -1991.-Т. 27. №3. - С. 75-77.

99. Перевозников М.А. Экологические аспекты рыбохозяйст-венной токсикологии пестицидов // Влияние биологически активных веществ на гидробионтов: Сб. научных трудов, вып. 287. Л., 1988.-С. 4-30.

100. Пестова И.М., Четверных В.А. Морфофункциональная организация системы гемопоэза в эволюции // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1990, - Т. 99, N 11. - С. 90 - 99.

101. Петров Р.В. Иммунология. М.: Медицина, 1987. - 415 с.

102. Пигаревский В.Е., Мазинг Ю.А. К методике применения лизо-сомально-катионного теста в лабораторной диагностической практике // Лабораторное дело, 1988. №10. - С. 579-582.

103. Попова Г.В. О приспособительных реакциях рыб при воздействии пестицидов // Реакции гидробионтов на загрязнение. М.: Наука, 1983.-С. 99-102.

104. Попова Н.А., Черепанов А.В., Попов П.А., Кириллов В.В. Характеристика гематологических показателей и иммунного статуса окуня и щуки Телецкого озера // Сиб. экол. ж. 1997. - 4, № 2. - С. 191-197.

105. Прайс В. Аналитическая атомно-абсорбционная спектроскопия. -М.: Мир, 1976.

106. Просяная В.В. Выделение Aeromonas punctata и флуоресцен-тов от прудовых рыб при различных болезнях // VII Всес. совещание по паразитам и болезням рыб. JI.: Наука, 1979. - С. 84 - 85.

107. Путинцев А.И. Физиологические и биохимические методы исследования взрослых рыб при токсикологических исследованиях // Методы биотестирования качества водной среды. М.: Изд-во МГУ, 1989. - С. 74 - 96.

108. Ромейс Б. Микроскопическая техника. М.: Иностранная литература, 1953. - 720 с.

109. Рылина О.Н. Гистологическое исследование рыб Шекснинско-го водохранилища // Сб. научн. трудов / ГосНИОРХ. 1995. - № 314. -С. 354-356.

110. Рябинина З.А., Бенюш В.А. Полиплоидия и гипертрофия клеток в процессах роста и восстановления. М.: Медицина, 1973.

111. Саркисов Д.С. Очерки истории общей патологии. М.: Медицина, 1988.-336 с.

112. Саркисов Д.С., Втюрин Б.В. Электронная микроскопия деструктивных и регенераторных внутриклеточных процессов. М.: Медицина, 1967. - 224 с.

113. Семенов А.Д., Страдомская А.Г. и др. Характер и уровни загрязнения водной среды Каспийского моря в связи с явлением расслоения мышечной ткани осетровых // I Междунар. Конф. по проблемам Каспийского моря: Тез. докл. Баку-Элм., 1991. - С. 71-72.

114. Семенов В.В., Васильева Н.В. Формирование митохондрий de novo и их возможное происхождение у eukaryota // Проблемы медицинской микологии. Т. 3, № 1, 2001. - С. 33-65.

115. Серов В.В., Пауков B.C. Ультраструктурная патология. М.: Медицина, 1975. 430 с.

116. Серпунин Г.Г. Показатели крови карпа, выращиваемого в опытной рециркуляторной установке // Биологические основы индустриальной аквакультуры. Калининград, 1984. - С. 110 -117.

117. Серпунин Г.Г. Использование гематологических анализов в их-тиотоксикологическом мониторинге водоемов // Вторая Всес. конф. по рыбохозяйственной токсикологии: Тез. докл. СПб., 1991. - Т. 2. -С. 169-170.

118. Скворцов А.П. О строении селезенки костистых рыб // ДАН СССР, 1974, Т. VII, № 6. С. 75 - 78.

119. Смирнов В.В., Кипранова Е.А. Бактерии рода Pseudomonas. -Киев: Наукова думка, 1990. 264 с.

120. Спыну Е.И., Сова Р.Е., Моложанова Е.Г. Эколого-гигиеническая классификация пестицидов // Гигиена и санитария, 1989.- №2.-С. 66-68.

121. Строганов Н.С. Водная токсикология и санитарная гидробиология // Гидробиологич. журн. 1969. - Т.5, - №5. -С.5-13.

122. Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия: Учебник. М.: Медицина, 1985. - 528 с.

123. Тарасов А.Г. Экологические последствия загрязнения вод Нижней Волги // Проблемы изучения, охраны и рац. использованияприродных ресурсов Волго-Ахтубинской поймы и дельты Волги: Тез. докл. Астрахань, 1989. - С. 101-103.

124. Ткачева В.Г., Рыжков Л.П. Реакция печени радужной форели (Salmo irideus G.) на антропогенное загрязнение // 1 Конгр. ихтиологов России. Астрахань, сент., 1997: Тез. докл. Астрахань, 1997. - С. 242.

125. Токин Б.П. Проблемы радиационной цитологии. Л.: Медицина, 1974.

126. Трахтенберг И.М., Сова Р.Е., Шефтель В.О., Оникенко Ф.А. Проблема нормы в токсикологии. М.: Медицина, 1991. - 208 с.

127. Уолке Р.Е., Георг К.Дж., Блезер В.З. Скопления пигментных макрофагов, возможных показателях состояния здоровья рыб // Вопросы ихтиологии, Том 25, вып. 1, 1985. С. 145-151.

128. Утургаури Л.Г., Мурадов Б.Б., Татараев Т.М. и др. Сезонная изменчивость параметров загрязнения на поверхности Каспийского моря //1 Международная конф. по проблемам Каспийского моря: Тез. докл. Баку-Элм., 1991. - С. 80-81.

129. Федоров Ю.Н. Ветеринарная биотехнология: состояние и перспективы // Ветеринария, 1990. № 2. - С. 3 - 6.

130. Федорова Н.Н., Егоров М.А. Патологические изменения крови карпа под влиянием солей ртути и меди // Вестник Астраханского гос. техн. университета. 1996. - № 2. - С. 87-89.

131. Федорова Н.Н., Крючков В.Н., Зайцев В.Ф. Морфологическая характеристика печени рыб в современных экологических условиях // Российские морфологические ведомости, № 3-4, 1999. С. 174-180.

132. Флеров Б.А. Эколого-физиологические аспекты токсикологии пресноводных животных. Л.: Наука, 1989. - 144 с.

133. Хорошко В.И., Попова О.В., Васильева Л.М. Эколого-токсикологическая обстановка в восточной части Северного Каспия // Осетровое хоз-во водоемов СССР: Тез. докл. Всесоюзного совещания. Астрахань, 1989. - 4.1. - С. 331-332.

134. Хэм А., Кормак Д. Гистология: Пер. с англ. М.: Мир, 1983. -Т. 4. - 245 с.

135. Ченцов Ю.С. Общая цитология. М.: Изд-во МГУ, 1978. - 344 с.

136. Чихачев А.С. Основы физиологи-биохимического и генетического мониторинга объектов аквакультуры // Рыбное хозяйство, 1991.-№12.-С. 57- 59.

137. Шулутко Б.И. Патология почек. Л.: Медицина, 1983. - 296 с.

138. Эйхенберг Э. Взаимосвязь между необходимостью и токсичностью металлов в водных экосистемах // Некоторые вопросы токсичности ионов металлов. М.: Мир, 1993. - С. 62-87.

139. Эльпинер Л.И. О влиянии водного фактора на состояние здоровья населения России // Водные ресурсы, 1995, Т.22, № 4. С. 75.

140. Ярыгин Н.Е., Серов В.В. Атлас патологической гистологии. -М.: Медицина, 1977. 200 с.

141. Augspurger T.P., Herman R.L. Liver lesions in winter flounder (Pseudopleuronectes americanus) from Jamaica Bay, New York: indications of environmental degradation //Estuaries-1994.-17, No. IB.- P. 172-180.

142. Balasubramanian P., Saravanan T.S., Palaniappan M.K. Biochemical and histopathological changes in certain tissues of Oreochromis mos-sambicus (Trewaves) under ambient urea stress // Bull. Environ. Contam. and Toxicol.-1999.-63, No. l.-P. 117-124.

143. Baruffaldi A., Basaglia F., Aleotti A., Casara E., Cucchi C. Hepato-cytes response to benzidine in ictalurus species //Cytobios . 1994. - 78, №315.-P. 209-212.

144. Bender M.E. The toxicity of the Hydrolisis and breakdown products of malation to the fathead minnow (Pimephales promelas, Rafinesque) // Water Res., 3,N 8,1969.

145. Bergan T. Human and animal pathogenic members of the genus Pseudomonas. The Procariotes, - Berlin ets., Springer verl., 1981. - P. 666 - 700.

146. Bernet D., Schmidt H., Meier W., Burkhardt-Holm P., Wahi T. Histopathology in fish: Proposal for a protocol to assess aquatic pollution // J. Fish Diseases. 1999. - 22, No 1. - P. 25-34.

147. Blaxhall P.C., Daisly K. W. Routine haematological methods for use with fish blood // Journal fish, biology, 1973. Vol. 5. - P. 593 - 604.

148. Caldwell C.A. Aromatic hydrocarbon pathology in fish following a large spill into the Nemadji river, Wisconsin, USA // Bull. Environ. Contain. and Toxicol. 1997. - 58, № 4. - P. 574-581.

149. Campbell P.G. et al. Acid deposition: effects on geochemical cycling and biological avialibility of trace elements // Subground on metals of the Tri-Academy Commiteon Acid Deposition. National Academy Press. Washington, D.C., 1985.

150. Cherrington A.D., Paim U., Page O. In vitro degradation of DDT by intestinal contents of Atlantic salmon (Salmo salar) // J. Fish Board Canada, 26, N1,1969.-P. 47-54.

151. Collazas M.E., Berrige C., Ortega E. Seasonal variotions in the immune systeme of the cyprinid Tinea tinea // Compar. Immunol., Microbiol. and Inftct. Deseases. 1995. - 18, n 2. - p. 105 - 113.

152. Crilli A., De Lutiis M. A., Soldato G., Artese L, Volpe A. R., Fe-laco M. Hystochemical modifications in the kidney of rats by chronic Hg exposure resulted in hypertension // Basie and Appl. Histochem. -198933, Suppl.-P. 58.

153. Da P.E., Coox S.J., Go na D. Sublethal responses to pesticides of several species of australian freshwater fish and crustaceans and rainbow trout // Environ. Toxicol, and Chem. 1994. - 13, N 8. - P. 1341 - 1354.

154. Drewa G., Chesy M., Brukwicka A., Grzanka A., Sujkowska R. Morphological changes of liver cells of Gasterosteus aculeatus L. exposed to pollutants // Pol. arch, hydrobiol. 1994. - 41, No.4. - P 507-515.

155. Ellis A.E. The leucocytes of fish: a review // J. Fish Biology. -1977.-No. 11.-P. 453 -491.

156. Espelt M.V., Amodeo G., Krumschnabel G., Schwaizbaum PJ. Volume regulation in hepatocytes from goldfish: Abstr. Sci. Meet. Physiol. Soc., Pucon, 13-16 Nov., 1999 // J. Physiol. Proc. 2000. - 523. - P. 86.

157. Esteban M. A., Meseguer J. Factors influencing phagocytic response of macrophages from the sea bass (.Dicentrarchus labrax L.): An ultrastructural and quantitative study /1 I Anat. Rec. 1997. - 248, № 4. -C. 533-541.

158. Freitag D., Clein W. Pesticide residus in fisch with emphasis on the application of nuclear techigues., Agrochem., Fate Tood and Environ. Proc. Jut. Symp., Rome. 7-11 June, 1982. Vienna, 1982, p. 143-166.

159. Gagne F., Blaise C. Toxicological effect of municipal wastewaters to rainbow trout hepatocytes // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. -1999.-63, No. 4.-P. 503-510.

160. Galina M. S. The difference in brown trout (Salmo trutta L.) blood composition from acidic and limed sites of two rivers in Western Norway // Water, Air, and Soil Pollut. 1997. - 96, № 1-4. - C. 203-210.

161. Gomez L., Soler F., Martmez S., Gazquez A., Duran E., Roncero V. 2,4-D treatment in tench (Tinea tinea L.): Pathological processes on the excretory kidney // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. 1999. - 62, № 5.-P. 600-607.

162. Goyer R. A.Mechanisms of lead and cadmium nephrotoxicity //Goxicol. Lett .-1989, 46, No. 1-3, - P. 153-162.

163. Guo Qiong-Lin, Lu Quan-zhang Структура печени и селезенки японского угря //Dongwu xuebao = Acta zool. sin. .- 1994- 40, № 2 .С. 125-130, 225-226

164. Habib R. Classification of glomerulonephritis based on morphology // Glomerulonephritis. New York: Wiley, 1973. - P. 17-41.

165. Hildeman W.H. Scale homotransplantations in goldfish (Carassius auratus), Ann. N.Y. Acad. Sci., 1957, 64, p. 775.

166. Hughes Т., Klein K., Gill B. Biomonitoring studies at a Superfund in North Carolina // Environ. And Mol. Mutagenes. 1993. - V. 21, No. 22.-P. 31-34.

167. Hull E., Manire C., Huetel R., Spieler R. Changes in blood parameters in stressed sharks due to capture and restraint // Amer. Zool. 1994. -34,No. 5.-P. 36.

168. Johansen K., Weber R.E. On the adaptability of Haemoglobin function to envivonmontal conditions // Perspectives in Experimental Biology, 1976 VI, P. 219-234.

169. Jones S. G., Holscher M. A., Basinger M. A., Jones M. M. Dependence on chelating agent properties of nephrotoxicity and testicular damage in male mice during cadmium decorpbration //Toxicology .- 1988, 52, No. 1-2,-P. 135-146.

170. Jorgensen T. Immunsistemet hos fish. //Norsk, veter. 1989. - V. 101.-N6.-P. 481-491.

171. Khan R. A., Barker D. E., Hooper R., Lee E. M., Ryan K., Nag K. Histopathology in winter flounder (Pleuronectes americanus) living adjacent to a pulp and paper mill //Arch. Environ. Contam, and Toxicol. -1994.-26, № l.-P. 95-102.

172. Khangarot В. S. Copper-induced hepatic infrastructure alterations in the snake-headed fish, Channa punctatus // Ecotoxicol. and Environ. Safety .- 1992. 23, № 3. - P. 282-293.

173. Kiran S., Hayatsu H., Ogata M. Delection of mutagenicity in mussels and their ambient water// Bull. Environ. Contam. and Toxicol. -1989, V.43,N4. P. 583-589.

174. Kozaric Z., Screcocan E., Novak R. Histopathological changes in the gills of some marine teleostes // Vet. arh. 1993, N 4. - P. 209 - 215.

175. Kruger R. Einige histopathologische Verande-rungen am Rumpfnierenparenchym von Silberkarpfen (Hypophtalmichthys molitrix Val.) //Zool. Anz. 1991. - 227, № 5-6. - P. 245-255.

176. Krutchkov V.N. Immunophysiological researches in practice of commercial fish rearing //Первый российско-американский симпозиум "Аквакультура и здоровье рыб". Рабочая программа и тезисы сообщений. -М, 1998.-Р. 111-113(159-161).

177. Leitienne Ph., Colon S., Zech P. Classification anatomoclinique des glomerulopathies primitives // Lyon. med. 1978. - V. 239. - P. 533-554.

178. Lemaire G., Lemaire P., Pulsford A. Effects of cadmium and benzo(a)pyrene on the immune system, gill ATPase and EROD activity of European sea bass Dicentrarchus labrax // Aquat. Toxicol. 1995. - 31, N 4.-P. 297-313.

179. Lemaire P., Berhaut J., Lemaire-Gony S., Lafaurie M. Ultrastruc-tural changes induced by benzoa.pyrene in sea bass (Dicentrarchus labrax) liver and intestine: importance of the intoxication route // Environ. Res .- 1992. 57, № l.-P. 59-72.

180. Lie О., Evensen О., Sorensen A. Study of the lysozyme activity in some fish species // Diseases aquatic Organisms. 1989, - vol. 6.- n.l,- p. 1-5.

181. Maule A.G., Tripp P.A., Kaattari S.L., Schreel C.B. Stress alters immune function and disease resistanca in chinook salmon (Onco-rhynchus tshawytsha). // J. Endocrinol. 1989. - V.120, N 1. - P.135-142.

182. Mester L., Tesio C., Popescu-Marinescu V. Cell and tissue changes induced in carp young fishes by the components from waters derived from breeding farms // Rev. roum. biol. Ser. Boil. anim. 1994. - 39, No. 2. -P. 139-143.

183. Miller P. Effects of pesticides fauna and flora // Pesticides: Food and Environ. Ampere Proc. Ant. Symp. Chang. Perspect Agrochem. Asot. Techr. Study Food and Environ Amplic., Neuherberg, 24-27 Nov., 1987. -Vienna, 1988.-p. 11-27.

184. Murrey C.K., Fletcher T.C. The immunohistachemical localization if lisosyme in plaice (Pleuronctes platessal) tissues // J. Fish Biology, -1976.-vol. 9 (4)-p. 329-334.

185. Nepomuceno J., Ferrari I., Spano M., Centeno A. Detection of mi-cronuclei in peripheral erythrocytes of Cyprinus carpio exposed to metallic mercury // Environ, and Mol. Mutagenes. 1997. - 30, № 3. - P. 293297.

186. Pant F.C., Kumar Anil P.C. Haematological responses of a teleost, Barilius bendelisis following chronic exposure to hous hold effluents // Himalayen F. Environ, and Zool. - 1988. - 2, No. 1. - P. 1-4.

187. Pippy J-H., Hare Y.M. Relatioship of river pollution to bacterial infection in salmon (Salmo salar) and suckers (Catostomus commersoni) -Frans. Am. Fish. 8 oc. 1969, 98, 685-690.

188. Poppe T.T. Hjertelidelser hos laksefisk. Nor. Veterinaertidsskr. -1989,- 101,-No. 6.-P. 531-536.

189. Prasada Rao P. V. V., Jordan S. A., Bhatnagar M. K. Combined nephrotoxicity of methylmercury, lead, and cadmium in Pekin ducks: metallothionein, metal interactions, and histopathology //J. Toxicol, and Environ. Health .-1989.- 26 , № 3 .- C. 327-348.

190. Radhaiah V., Rao Jayantha K. Fenvalerate toxicity of the liver in a freshwater teleost, Tilapia mossambica (Peters) //Compar. Physiol, and Ecol. 1992 .- 17 , No. 2 .- P. 48-53.

191. Randl A.S., Monserrat J.M., Rodriguez B.M., Romano L.A. Histo-pathological effects of cadmium on the gills of the freshwater fish, Macropsobrycon uruguayanae Eigenmann (Pisces, Atherinidae) // J. Fish Diseases. 1996. -19, № 4. - P. 311-322.

192. Rice C.D., Kergosien D. H., Adams S.M. Innate immune function as a bioindicator of pollution stress in fish // Ecotoxicol. and Environ. Safety. 1996. - 33, No. 2. - P. 186-192.

193. Richter R.F. Zur Immunobiologie des Karpfens (Ciprinus carpio L.). // Z. Binenfischerei. DDR. - 1985. - Bd.32. - N12. - S.356-367.

194. Riichi K., Takatumi Т. Изменение биологической активности фагоцитов угрей иммунизированных Edwardsiella tarda. // Гебе кен-юо = Fish Pathol., 1990, - V.25, -N2, -Р.53-58.

195. Ritz E., Nowack R. Problematik der Spurenelemente in der Nephrologie // Therapiewoche. 1989. - 39, No. 47. - P. 3486-3497.

196. Roberts M.L., Hoole D. The effect of temperature on humoral immune respons of carp to sangvinicola inermis (plehn 1905) // Diseases of fish and sellfish. Spain. - 1995. - P. 72.

197. Rocha E., Monteiro R. A. F., Pereira C. A. The liver of the brown trout: A light and electron microscope study //j. Anat .- 1994. -185, No.2.-P. 241-249.

198. Rocha E., Monteiro R. A., Preira C.A. Liver of the brown trout, Salmo trutta (Teleostei, Salmonidae): A stereological study at light and electron microscopic levels // Anat. Rec. 1997. -247, No. 3. - P. 317328.

199. Romano N., Baldassini M., Terribiili F., Abelli L., Mastrolia L., Mazzini M. Histological observations on lymphomyeloid organs of the Antarctic fish Trematomus bernacchii (Teleostei: Nototheniidae) II Polar Biol. 1997. - 18, № 5. - C. 358-362.

200. Romeo M., Bennani N., Gnassiabarelli M., Lafaurie M., Girard J.P. Cadmium and copper display different responses towards oxidative stress in the kidney of the sea bass Dicentrarchus labrax // Aquat. Toxicol. -2000.-48, №2-3.-P. 185-194.

201. Roncero V., Duran E., Soler F., Masot J., Gomez L. Morphometric, structural, and ultrastructural studies of tench (Tinea tinea L.) hepatocytes after copper sulfate administration //Environ. Res. 1992. - 57, No. 1. -P. 45-58.

202. Sakai D.K. Иммунология и иммунная система рыб. // Sci.Repbs Hokkaido Fish Hatchery. 1989. - N43. - P. 11-35.

203. Santroni A. M., Fedeli D., Gabbianelli R., Zolese G., Falcioni G. Effect of organotin compounds on trout hemoglobins // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1997. - 238, № 2. - P. 301-304.

204. Sarot D.A., Pelmutter A. The toxicity of zinc to the immune response of the 3ebrafish (Brachydanio rerio), injected with viral and bacterial antigens. Frans. Am. Fish Soc., 1976, 106, p. 456-459.

205. Shan S.L., Hafeez M.A., Shaikh S.A. Changes in haematological parameters and plasma glucose in the fish, Cyprinion watsoni, in response to zinc and copper treatment // Pakistan J. Zool. 1995. - 27, No. 3. - P. 249-253.

206. Singhal R.N., Jain M. Cadmium-induced changes in the histology of kidneys in common carp, Cyprinus carpio (Cyprinidae) // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. 1997. - 58, № 3. - C. 456-462.

207. Struhsaker J., Eldridge M., Echeverria T. Effects of benzene (a water -soluble component of crude oil) on eggs and larvae of pacific herring and northern anchovy // Pollution and physiology of marine organisms, 1974.-P. 253-284.

208. Sulimanovic D., Curie S., Zeba L., Berc A. The possible role of rod-let cells in the immune system of carp (Cyprinus carpio L.) // Vet. arh. -1996.-66,№3.-C. 103-109.

209. Sullivan J.B. marine pollution by carcinogenic hydrocarbons // Marine Poluution Monitoring (petroleum). Proc. of a Sympos. and Workshop held at the National Bureau of Standards, NJAA, Maryland, 1974, P. 261

210. Tachir A., Secomber C.J. The effects of oil-baised drilling mud extracts on immuune responses of rainbow trout // Arch. Environ. Comlam. and Toxicol. 1995. - 29, N 1. - P. 27 -32.

211. Von Garaevenitz A. Eology, clinical significanse and antimicrobical sissceptibility of infreguently encountered glucose-nonfermenting gram -negative rods Nonfermentative gram - negative rods, 1985, p. 181-223.

212. Waterstrat P.R., Ainsworth A.J., Capley P. In vitro responses ofPchannel catfish,Ictalurus punctatus, neutrophiles to Edwardsiella ictaluri. // Dev. and Compar.Immunol., 1991. - 15. - N 1-2. - P.53-63.

213. Wedemeyer G.A., Goodyear C.P. Diseases of Pisces. Diseases caused by enviromental stressore. // Diseases Mar.animal. 1984. - V.4. -Pt.l. - P.424-434.