Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
ЭКОЛОГО-ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И ПРОФИЛАКТИКА ЛЕГОЧНЫХ НЕМАТОДОЗОВ МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА В ЗАПАДНОМ РЕГИОНЕ РФ
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология
Автореферат диссертации по теме "ЭКОЛОГО-ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И ПРОФИЛАКТИКА ЛЕГОЧНЫХ НЕМАТОДОЗОВ МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА В ЗАПАДНОМ РЕГИОНЕ РФ"
Л-земв
На правах рукописи
На правах рукош
Кротенков Владимир Павлович
Эколого-эпизоотологические особенности и профилактика легочных нематодозов мелкого рогатого скота в Западном регионе РФ
Специальность 03.00.19 - паразитология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук
Москва - 2006
Работе выполнена в ФГОУ ВПО «Смоленский сельскохозяйственный институт»
Официальные оппоненты:
Доктор ветеринарных наук, профессор Никитин Василий Филиппович
Доктор ветеринарных наук, Абрамов Владислав Евгеньевич
Доктор биологических наук, профессор Беэр Сергей Алексеевич
Ведущая организация: Московский государственный университет прикладной биотехнологии (МГУПБ)
Зашита диссертации состоится «28» июня 2006 года в 14.00 на заседании диссертационного совета Д.006.011.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им. К.И, Скрябина (ВИГИС)
Адрес: 117218, Москва, Б. Черемушкинская ул., д, 28.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС. Автореферат разослан « ь-СКХ'-/' 2006 года.
Учбиый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы. Из легочных гельминтозов мелкого рогатого скота — овец, коз наиболее широко распространенных во всем мире, являются диктиокаулез и мюллериоз. В Смоленской области, Западном регионе РФ, реструктуризация технологий животноводства, привела к изменению паразитологнческого статуса у животных. Об этом свидетельствует динамика диктиокаулезной и мюллериозной инвазии у овец, претерпевшая значительные изменения. Так, с 1980 по 1990г. численность овец в государственном секторе превышала 130 тыс. голов, а н н Базирована ость их днктиокаулами составляла 80% и более. В настоящее время при поголовье около 60 тыс. (с 1996 г. животные сосредоточены только в частном секторе) зараженность животных на юге области составляет 4%, в северном и центральном агрорайоне не превышает 1,6 %. В тоже время, с 1990 года, инвазированность овец мюллернями в центральном и южном агрорайонах области возросла до 40%, в северном до 65%, а инвазированность коз, поголовье которых превышает 160 тыс.. достигает 100%.
Такое положение возникло потому, что резкое сокращение численности животных нарушает возможность нахождения и встречи с личинками диктнокаул потенциального хозяина — овцы. В то же время, налнчие 8 жизненном цикле мюллернн промежуточных хозяев - сухопутных моллюсков обеспечивает более полное сохранение личиночных стадии паразита, а попатание последних в пищевую цепь овец и коз способствует не только выживанию популяции паразита, по и росту популяции мюллерий среди мелкого рогатого скота.
Исходя ш этого, борьба с гельминтозами, наряду с лечебными мероприятиями должна быть направлена на разрыв имеющихся в природе связей; «паразит — сухопутные моллюски - промежуточные хозяева-мюллерни — дефинитивный хозяин-мелкий рогатый скот». Причем особое внимание следует уделять регуляции численности популяций промежуточных хозяев — сухопутпых моллюсков, а значит и регуляции численности популяции паразитов на личиночных стадиях. Сходная ситуация, складывается и при других протостронгилндозах, в цикле развития возбудителей которых так же участвуют сухопутные моллюски — промежуточные хозяева. Исходя из этого, научно - обоснованное решение вопроса регуляции численности популяции паразитов и их промежуточных хозяев, а также разработка других профилактических мероприятий невозможна без знания эпизоотического процесса при этих гельминтозах, поэтому особый интерес представляет эколого-популяцнонный анализ нематод М.сарШапз — единственного представителя легочных прогостронгилнд овец и коз в данном регионе. Это связано с тем, что изучение межпопуляционных и внутрипопуляционных процессов на данном этапе — важны для понимания ртгуЛ'°тпГ'"-гу механизмов и их взаимодействия в условиях совреме^рАЗ^ИЛ^^ЬЙуризации технологий
; имени К.А. Тимирязева
ЦНБ имени Н.И. Железное? ! Фонд научнн^итерату^' № _
1 1Д.1" ' —-----
животноводства, значительно влияющих на течение эпизоотического процесса при гельминтоэах. Знание последнего даст возможность выявить определенные факторы в системе механизма передачи паразита от дефинитивного хозяина к промежуточным, а от них к «новым» дефинитивным хозяевам и воздействовать на более уязвимые звенья доступными методами. Также необходимо отметить, что эпизоотический процесс при протостроншлид озах мелкого рогатого скота, несмотря на большое число опубликованных работ, посвященных этим заболеваниям, изучен недостаточно. Особенно много неясного в онтогенезе протостронгилид на фазе развития определяющей специфичность механизма «передачи» и контакта между промежуточным хозяином - сухопутными моллюсками и личинками мюллерий I стадии. Отсутствуют эффективные методы контроля за степенью зараженности промежуточного хозяина -моллюска, как прижизненные, так и лабораторные. Не разработаны способы изучения закономерностей изменения морфологических структур и функциональной деятельности личинок в процессе их формирования, отсутствует возможность быстрого и точного определения достижения личинками инвазионного возраста. Слабо изучен механизм попадания инвазионных личинок, от промежуточного хозяина — сухопутного моллюска, дефинитивным хозяевам.
Кроме того, для того чтобы понять механизм взаимодействия в системах «хозяин - паразит» к изменения, происходящие в популяции паразита -необходимо использовать математическое моделирование основных этапов их развития, для анализа которых недостаточно только биологических наблюдений. Предложенная нами модель может и учитывает влияние оказываемое на паразитов разными факторами и переменными их взаимодействия, тем самым определять «целостность» структуры системы «хозяин - паразит» и окружающей среды. Разработка последней позволяет более точно оценить ситуацию в изучаемой системе, и притом в таких аспектах, к исследованию которых, к настоящему времени, нельзя подойти иными способами.
Изложенное выше и обуславливает необходимость усовершенствования интегрированных мер профилактики и борьбы с таким гельминтозом, как мюллсриоз овец и коз.
Тема исследований настоящей работы является составной частью Российской координационной ПТП (2001-2005 гг.) и задания 02 «Разработать новые теоретические подходы и принципы профилактики паразитарных болезней животных и охраны окружающей среды от паразитов».
Цель и задачи исследований. Цель наших исследований - разработать научные концепции и теоретические положения методологии эколого-популяционного анализа эпизоотического процесса при легочных нематодозах мелкого рогатого скота — М.сарШаш и О.ГПапа в Западном регионе РФ, как самостоятельного научного и практического направления, на научно-методической основе которого можно обосновать и обеспечить разработку
теоретических основ и методических положений интегрированных приемов профилактики и борьбы с мюллериюом с использованием их при других протостронгилидозах овец и коз.
В задачи исследования входили;
1. Изучение и анализ функционирования части системы «паразит — личинки мюллерий I стадии - промежуточный хозяин - сухопутные моллюски».
1.1. Разработка методов определения специфичности и чувствительности сухопутных моллюсков к личинкам мюллерий I стадии;
1.2. Изучение путей инвазировзния сухопутных моллюсков личинками мюллерий I стадии;
1.3. Разработка методов наблюдения и контроля за морфологическими изменениями проникших в тело «подошву» моллюсков — личинок мюллерий;
1.4. Разработка методов диагностики зараженности сухопутных моллюсков личинками мюллерий до достижения ими инвазионного состояния.
2. Изучение и анализ функционирования системы «паразит — дефинитивный хозяин при днктиокаулезе и мюллериозе»;
2.1. Изучение и выявление особенностей течения эпизоотического процесса при легочных нематодоэах мелкого рогатого скота в условиях современных технологий животноводства в Западном регионе РФ;
2.2. Разработка и использование математической модели для изучения взаимовлияния параметров эпизоотического процесса при мюллериозе мелкого рогатого скота, характеризующих контаминацию пастбищ личинками мюллерий I стадии и закономерностей формирования узелков с мюллериями в последующем в легких животных.
3. Определение на основе системного подхода наиболее уязвимых звеньев в цепи передачи возбудителя мюллериоза с целью использования их для борьбы с ним;
3.1. Изучение возможности применения б% гранул метальдегида в практике регуляции численности сухопутных моллюсков — промежуточных хозяев мюллерий;
3.2. Изучение эффективности отечественных препаратов звермектинового ряда - иверсекта и аверсекта-2 при мюллериозе овец и коз.
4. Разработка рекомендаций по гельминтологической оценке пастбищ, мерам профилактики и борьбы с мюллериозом мелкого рогатого скота в Западном регионе РФ.
Научная новизна. Принципиально новым в диссертации является эколого-эпизоотологическое изучение и осмысление развития и разработка теоретических концепций эпизоотического процесса при диктиокаулезе и протостронгилндозах, на примере О.Шала и М.сарШат и хозяев паразита в Западном регионе РФ, с учетом факторов влияющих и регулирующих виутрипопуляционные и межпопуляционные процессы: как в популяциях паразитов — дактиокаул так и в популяциях паразитов — мюллерий; так и в
популяциях различных сухопутных моллюсков - промежуточных хозяев; и в популяциях дефинитивных хозяев - овец, коз с учетом количественных показателен участвующих популяций хозяев в динамике, с целью выявления и влияния на тс элементы эпизоотического процесса, в большинстве своем воспроизведенных экспериментально, которые наиболее доступны для возможных интегрированных мер пастбищной профилактики легочных гельмннтозов овец, коз с возможной экстраполяцией на другие регионы.
Впервые установлено, что инвазионные и достигающие инвазионного состояния личинки м юл л ер и й, перезимовавшие в сухопутных моллюсках ~ служат одним из факторов весеннего заражения овец и коз па пастбищах.
Впервые разработаны: способ определения специфичности промежуточного хозяина в цикле развития протостронгилид па примере личинок I стадии M.C3pillaris (Патент № 2236128); способ прижизненной диагностики на зараженность сухопутных моллюсков личинками мюллсрий (Патент Хэ 2195873); способ диагностики на зараженность и определения инвазионного состояния личинок мюллерий в сухопутных моллюсках ( Патент Ха 2236819); способ получения инвазионных личинок мюллерии (Патент № 2225167). Получено положительное решение заявки на патент «Способ микрометрии гельминтов различных конфигураций Ка 2005125191».
Теоретическая и практическая значимость полученных результатов. Результаты полученные в исследованиях существенно дополняют теоретические и практические данные о межпопуляционных и внутрипопуляцнонных взаимоотношениях в системе «паразит - хозяин D.filaria н M.capillaris — овца, коза». Экологический, эпизоотологический и математический анализ (моделирование) позволил рассчитать и регламентировать наиболее эффективные методы профилактики н борьбы с легочными нематодозами овец и коз.
Результаты исследований вошли в следующие нормативно-технические документы: рекомендации но изучению жизненного цикла протостронгилид па примере личиночных стадий Muellerius capillaris (Mueller, 1889, Cameron 1927), утверждены к печати секцией «Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных» РАСХН (протокол № 1, от 27. 02. 2004г); Рекомендации «Мюллсрноз овец и коз. Гельминтологическая оценка пастбищ. Профилактика и меры борьбы с гельминтозом». Утверждены департаментом сельского хозяйства и ветеринарии по Смоленской области 30.10.2005.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены н одобрены на: - 11-ой Всероссийской научно-практической конференции «Ресурсосбережение и экологическая безопасность» (Смоленск, 1999г.), Научной конференции Всероссийского общества гельминтологов «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва 1999, 2000, 2001, 2002, 2003, 2004, 2005 г.г.). Международной научно- практической конференции «Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных» (г. Минск, 2000 г.), Международной научно- практической
конференции «Актуальные вопросы зоотехнической пауки и практики, как основа улучшения продукта!вных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных» (г. Ставрополь, 2001 г.), Объединенной сессии Координационного совещания по ветеринарной паразитологии. Центрального совета Общества гельминтологов РАН и секции Инвазионные болезни животных РАСХН (Москва, 2001, 2002, 2003, 2004, 2005 г.г.), Международный научно-практической и учебно-методической конференции «Наука и образование -возрождению сельского хозяйства России в XXI веке» (Брянск, 2002 г.), Международной научно-практической конференции «Проблемы аграрной отрасли в начале XXI века» (г. Смоленск. 2002 г.), Международной научно-практической конференции «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества» (г. Брянск, 2004г.), Международной научной конференции ««Основные достижения н перспективы развития паразитологии» (г. Москва, 2004 г.), Международной научно-методической конференции «Актуальные проблемы и перспективы разыггия агропромышленного комплекса» (г. Иваново, 2005г.), Международной научпо-методнческой конференции посвященной 75-летию Вятской государственной сельскохозяйственной академии (г. Киров, 2005г.).
Основные положения диссертации выносимые на защиту:
1. Эколого-эпизоотологи ч ескн ií анализ течения эпизоотического процесса при диктиокаулезе и мюллериозе, и путей распространения мюллериоза на основе моделирования закономерностей контаминации пастбищ личинками 1 стадии и в последующем с учетом степени инвазии — формирования узелков с мюллериями в легких животных.
2. Комплекс методологических приёмов разработанный для изучения функционирования и механизма передачи в системе «паразит — личинки мюллерий I стадии — промежуточный хозяин — сухопутные моллюски».
3. Результаты изучения возможности обусловленных экологических адаптаций личинок мюллерий и их развития до инвазионного состояния при различных путях проникновения в тело моллюсков H.pomatia, Н.vulgaris и изучение других интнмных аспектов механизма передачи инвазии от промежуточных хозяев — моллюсков, дефинитивным — мелкому рогатому скоту.
4. Усовершенствование комплекса мероприятий по профилактике и борьбе с легочными нематодозами мелкого рогатого скот
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 33 научные статьи, в которых изложены основные положения и выводы диссертационной работы. По результатам исследований получено 4 патента, зарегистрированных в Государственном реестре изобретений Российской Федерации. Получено положительное решение заявки на предполагаемое изобретение № 2005125191/13.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 414 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы,
информации характеризующей агроклиматические районы области, трех разделов собственных исследований включающих 6 глав, обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы содержащего 422 источника в том числе 273 отечественных и 149 иностранных.
Каждая глава включает материалы и методы исследований, результаты собственных исследований. Работа иллюстрирована 2 схемами, 44 таблицами, 81 рисунком, 24 приложениями на 75 страницах.
Собственные исследования Материалы м методы
Исследования по данной проблеме проводились нами с 1997 по 2005 г. в условиях Смоленской области — Западном репюне РФ. По тепло- и влагообеспсченности область разделяется на 3 агроклиматических района-южный, центральный и северный, в пределах которых с целью изучения развития и расселения личинок мюллерий 1 стадии па пастбищных биотопах 9 стаций обследовано 14040 маршрутных точек, проведено 125 полевых опытов, В лабораторных условиях поставлено 36 опытов включающих 5078 гел ьм и ггголар вое конических исследований фекалий животных и луговой растительности. Проведенная классификация полученных информационных элементов экологических данных положена в основу опыта моделирования закономерностей контаминации пастбищ личинками мюллерий I стадии (Кротснков В.П., 2005 г.).
В лабораторных и полевых опытах, по разработанным нами методикам: по изучению специфичности (восприимчивости) сухопутных моллюсков к личинкам мюллерий 1 стадии, способам заражения и диагностики на зараженность личинками мюллерий на различных стадиях морфологического развития использовано 152 тыс. особей 16 видов моллюсков собранных на 13 типах пастбищ (Кротенков В.П., 2003, 2004). Сбор, обработка и определение сухопутных моллюсков проводились по И.М.Лихареву и Е.С.Раммельменер (1952), И.М.Лихареву (1960), А.А.ШилеЙко (1978).
При изучении гистологического и гистохимического строения тканей тела «ноги» сухопутных моллюсков - промежуточных хозяев: A.circumscriptus, B.fmticum, O-sarsi, T.hispida, S.oblonga, S.putris, H.pomatia, H.vulgaris и учета реакции тканей их тела иа проникших и развивающихся личинок мюллерий, готовил» сагнтальные и фронтальные срезы ноги-тела «подошвы», а у видов Н. pomatia, H.vulgaris — дыхательной стенкн мантии — «легкого». Теоретическая и практическая часть гистологической и гистохимической работы проводились согласно существующих методик изложенных в руководстве «Гистологическая и микроскопическая техника» А.Г.Саподников и др., Смоленск "САУ" (2000). Приготовлено и изучено 950 гистосрезов.
Для изучения возможностей экологических адаптации личинок мюллерий к разным способам проникновения и путей миграции до достижения
инвазионной стадии у моллюсков различных видов н на модели моллюсков вида Н. poma ti а, Н. vulgaris были разработаны оригинальные методики (Кротенков В.П., 2004).
В основу изучения распространения легочных нематод мелкого рогатого скота были положены гельминтологические методы исследования легких (трахеи бронхов, узелковых образований) с учетом интенсивности инвазии. С 1997 по 2004 г. гельминтологическим исследованиям было подвергнуто 3600 легких от разновозрастных групп овец и коз. В изменениях полученных фактических данных выявлены закономерности поддающиеся математическому описанию (моделированию). Это позволило определить характер и особенности формирования узелков с мюллериями в легких у разных возрастных групп мелкого рогатого скота с учетом условий агроклиматических районов области. (Кротенков В.П., 2005).
Материал — нематод, собирали и их видовой состав подтверждали в гельминтологическом музее ВИГИ С.
Изучение сезонной н возрастной динамики зараженности овей и коз диктиокаулами и мюллериями проводили на основании ежемесячных, а в декабре — феврале ежедекадных количественных ларвоскопических исследований фекалий от мелкого рогатого скота. С 1997 по 2004 г. в трех агроклиматических районах области под постоянным наблюдением находилось более 900 голов овец и коз разных возрастных групп.
Изучение приживаемости и сроков достижения половозрелой стадии и формирования внутри легочной популяции мюллернй, проводили на 15 ягнятах и 15 козлятах, которым скармливали экспериментально зараженных моллюсков вида — B.frutícum и S.putris. В узелках в легких животных, после убоя, учитывали количество нематод: самок определяли по наличию в вагине яиц серого цвета, несегмс!пированиых, удлнненно-овалыюй или элинсовидной формы с очень тонкой, но ярко выраженной оболочкой; самцов, по характерному строению хвостового конца - наличию спи кул. Морфологическому исследованию подвергли - 106 нематод от ягнят, 134 экз. от козлят. Способ микрометрии гельминтов различных конфигураций разработан на основе орнлшалыюй методики (Кротенков В.П., 2005).
Опыты по изучению анттельминтных свойств отечественных препаратов {иверсекта и аверсекта-2) и схем дегельминтизаций проводили в различных фермерских, крестьянских и индивидуальных хозяйствах па 3113 головах овец и коз, спонтанно иквазированпых М.сарillaris. Препараты инъецировали индивидуально, подкожно в область шеи, перед выгоном на пастбище. Аитгельминтную эффективность препаратов учитывали по типу «контрольный тест» на 15-18, 30-32 и 50-52 дни после инъекций, по результатам ларвоскопических исследований и выборочного убоя животных с последующим гельминтологическим исследованием легких на наличие диктиокаул и мюплерий.
Изучена эффективность моллюскоцида метальдегада 6% в борьбе с сухопутными моллюсками — промежуточным» хозяевам», в системе мер профилактики мюллсриоза овец и коз.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием компьютерных программ: Microsoft office (Excel), Graphical analysts 3.1, Statistica 3.0, Mathcad 12.
Результаты исследований
Раздел первый. Изучение функционирования системы «паразит -личинки мюллернй 1 стадии — сухопутные моллюски — промежуточные хозяева»
I. Изучение расселения личинок 1 стадии на пастбищных биотопах
Исходя из того, что личинки мюллернй в фекальных кучках животных являются своего рода резерватом в течении эпизоотического процесса этого гельминтоза, целью наших исследова!тй являлось изучение характера расселения личинок мюллериЙ I стадии на пастбищных биотопах, выявление существующих закономерностей и подбор математического аппарата для их описания и использования в дальнейших исследованиях
Первой фазой жизненного цикла мюллерий является личинка первой стадии развития, попадающая с фекалиями овец, коз во внешнюю среду, весьма устойчивая к неблагоприятным природным условиям, но не изменяющая своего морфологического состояния до внедрения в организм промежуточных хозяев - специфичных видов сухопутных моллюсков.
Анализ распределения фекальных кучек овец и коз на 14Q40 учетных маршрутных точках охватывающих 13 типов пастбищ 3 агроклиматических районов области показал, что несмотря на их значительную плотность от 0,4*0,1 до 3,25±0,2 куч/м1 при течешш эпизоотического процесса при мюллсриозе мелкого рогатого скота, отдельным членам популяции в паразитарной системе свойственна прерывистость и прежде всего, в сроках нахождения в фекалиях популяции личинок мюллерий I стадии.
Для изучения закономерностей изменения численности личинок мюллернй I стадии находящихся в фекалиях, рассчитывали коэффициенты линейного тренда: у = а + xt (I), где: у — количество личинок мюллернй I стадии в 1 г. фекалий; а - начальное количество личинок мюллернй I стадии в 1 г. фекалий; t - время (декада). Для более точного описания процесса использовали математическую модель у = а, + bjt + ct1 + dtJ (2) где, а( - начальное количество личинок мюллернй I стадии в } г. фекалий; Ь| — скорость изменения количества личинок мюллернй ] стадии в 1 г. фекалий; с - ежедекадные скорости изменения количества личинок мюллернй I стадии в 1 г. фекалий; d -коэффициент скорости изменений количества личинок в I г. фекалий. Уровни вариации фактических данных (W общ.), показателей линейного тренда (W тенд.), математической модели (W мод.) и остаточной вариации (W ост,),
характеризующей степень влияния факторов среды определяли по методу наименьших квадратов.
В последующем полином 3 степени (формулу 2) использовали для оценки изменчивости количества узелков - степени поражеиности и заражения мюллериями в легких у разновозрастных групп овец и коз.
Численность личинок I стадии, в фекальных кучках, учитывали ежедекадно, через 5 мин после дефекации и через 5 дней после нахождения их на пастбище в сравнении с численностью личинок в I г. фекалий до выгона животных на пастбище. Математический анализ фактических переменных изменения численности личинок в фекалиях от овец после 5 мин. нахождения на пастбище, позволил установить достаточно близкий характер их «распределениям во всех трех агроклиматических районах области (рис. 1, 2, 3). Так изменения показателя обусловленные линейным развитием численности личинок имели положительные скорости в пределах 2,14... 2,55 экземпляра в декаду. По теоретической кривой, коэффициенты, при практически одинаковых начальных значениях для южного и центрального агрорайонов (7,29 - 7,04 экз.) были низкими для северного (5,12 экз.), причем скорости изменений в последнем, из за постоянно высокой влажности, были почти в 2 раза выше (4,31 против 2,07 и 2,39 экз./дек,). При этом остаточная вариация в численности паразита обусловленная внешними факторами была небольшой и составляла для южного, центрального и северного агрорайонов 9,57,4,02 и 7,42%, соответственно.
При анализе изменений численности личинок в фекалиях от коз установлено, что в тот же временной промежуток характер изменений численности значительно отличался от таковых у овец (рис. 4, 5, 6), Скорость изменений количества личинок, рассчитанная по линейному тренду имела значения: для южного и центрального агрорайонов —0,30; —0,38 и для северного - 0,09 экз./дек., свидетельствующие о ежедекадном снижении количества личинок в 1 г. фекалий. Следует отметить, что низкие значения изменчивости обусловленные линейным развитием, в южном агрорайопе были равны 2,51, в центральном 5,39 и северном только 0,38% п в большей степени изменения численности личинок соответствовали теоретической кривой при уровне изменчивости отражавшем изменение количества личинок в пределах 37-38% и начальных значениях скорости: —1,33; -4,29 и -2,44 экз/дек.. Особенности формирования фекалий, отдельных шариков «катышков» у коз, представляющих более компактные образования, чем у овец, привели к значительному увеличению влияния ряда факторов внешней среды (влажности), на численность личинок. Остаточная вариация (влияние факторов внешней среды) составила в южном агрорайопе -60,46, центральном -55,77 и северном —62,53%.
Рис« 1, Изменения количеств личинок мюллсрмй 1 стадии sir. факадий овец после кх 5 мин* нахождения на пастбище после дефеиаиии. Южный агроклиматический район
«lift itMitri t*rri*i Ымл«1|
Рис, 2. Изменения количества личинок мюллерий 1 стаднн в ) г, фекалнП овец после их 5 мни. нахождения на пастбище после дофотвцнк« Центральный ад роклиматччесгсий район
фмпчККМ Jtm
Рис. Изменения количества личико* мюллерий Т стадии е 1 г. фекалий овец поело нх 5 мин. нахождения на ластбмше Jtooie дефекация. Северный aj рокиимати чески Я район
РнСн 4. Изменения количества личинок мюллсрмм ] стадии а I г, фекалий овец после нх 5 дневного прсбывэки* к« пастбище после дефекаини, Южный агрокл кматмчес кий район
Рис. Шменеин* количества личинок мюллернн 1 стадии в I г« фе*ишЯ овец после их 5 дневного пребывания ил к^стбнше после дефекации. Центральный шроклнматнчестй район
Рис. б, Изменение количества личинок мкиыерий 1 стада и в ] г. фехшшй овец кгосле их 5 дневного пребывания на иастбише после дефекации, Северный агроклиматический район
Л
1QM H,«
' jluuw Mitiuu
Рис, 7« Изменения количества личинок мюдлеркй 1 стадии в 1 г фекалий коа после их 5 мин, гтребываыня на пастбище после дефекации, Южный ироклимэтичеышй район
Ubi iietfb Mit» 4»лг tt 4М»«Н ««Ци M*C*llt*
PiiC. ti, Н'4меменн4 количества лнчнно* мьйдл^рмй t стадии a t г* фекалий коэ после к* 5 мин. пребывания на л&сгбищс после дефекации. Центральный ыроклиматический рамой
Рис, 9. Изменения количеств личинок мюллерий I стадии в 1 г фекалий коз после нх 5 мни. лребыдакя на пастбище после дефекации, Северный агроклиматический район
I»
«tunfft
1
lllllll
Рис. ] О. Изменения количества личинок мюлперий 1 стадии в 1 г* фехллиИ koi поел« н* 5 дневного пребывания на пастбище после дефекации. Южный агроклиматический район
|J,M
I ™
£ ><мв j
В *>оо
| м*
£ 1Л>
пик«« МшАин А Трен
Трсы
t
«•ипбр*
Рис. 11» Изменения количества дичинок мюллернй 1 стадии в ] г. феюший коз после их 5 дневного пребывания на пастбище после дефекашж* Центральный агроклиматический район
i4,«0
»Htm
Рис, 12* Избиения количеств личинок мюлдерм^ \ стадии mir« фскамнй коз после «к 5 дневного пребывания на пастбище косле дефекации, Северный агроклиматическим район
Вид графиков (рис. 7, 8, 9), отражающих фактическую численность личинок I стадии, в фекалиях от овец после пятидневного нахождения их на пастбище, значительно изменялся: кривые приобретали более изломанный характер — численность личинок значительно уменьшалась (вплоть до полного исчезновения), что обусловлено повышением влажности и количества «капельной» влаги на пастбищных растениях вызванных атмосферными осадками (19-21 мм), в конце мая, середине августа и начале сентября.
При этом изменения численности личинок в популяции, рассчитанные по линейному тренду, свидетельствовали о тенденции снижения показателя, при скорости изменения равной & южном агрорайоне - 0,12, центральном -0,11 и северном — 0,05 экземпляров личинок в декаду. Уровень изменчивости численности личинок, обусловленный линейным развитием в перечисленных агрорайонах был равен - 27,78, 29,76 и 15,79%. В то же время теоретическая кривая приобретала внешний вид приближающийся по форме к «синусоидальному» типу с максимумом в конце второй декады июля и минимумом во второй декаде сентября. При этом во всех агрорайонах были получены достаточно близкие значения коэффициентов по теоретической кривой. Так начальное количество личинок в южном и центральном агрорайонах было практически одинаковым (2,73; 2,71 экз.) и несколько ниже в северном (1,68 экз.). То же можно сказать и о начальной скорости изменений показателя численности, которая располагалась в пределах 1,01; 1,18 и 1,68 экз/дек.. Следует отметить значительное увеличение уровня изменчивости, обусловленного влиянием внешней среды (остаточная вариация) в сравнении с результатами, полученными при учете количества личинок I стадии после 5 мин, нахождения фекалий на пастбище. Уровень остаточной вариации увеличивался в южном агрорайоне до 40,36 %, в центральном до 43,14% н в северном до 64,22%, что объясняется достаточно высоким влиянием внешних факторов на численность личинок в фекалиях, которая сильно изменяется в зависимости от интенсивности их «вымывания» осадками. Указанные выше различия в «сохранности» и структуре фекалий овец и коз привели к значительным отличиям в изменениях численности личинок в фекалиях последних (рис. 10, 11, 12). Так, если значительное снижение фактической численности личинок I стадии в фекалиях коз, как и в фекалиях овец приходится на конец мая и середину августа, то в фекалиях коз, в середине сентября, вместо снижения наблюдали их резкое увеличение, ввиду уменьшения атмосферных осадков (17 мм). Уровень скорости изменения показателя, рассчитанный по линейному тренду был невысоким и имел отрицательные значения (-0,012 ...-0,114 экз/дек., при этом уровень изменчивости обусловленный линейным развитием также был незначительным (0,14*36,5%). Теоретическая кривая отражающая количество личинок в фекалиях коз, в отличие от овец, имела минимум в середине июня и максимум в середине сентября, что можно объяснить более высокой экстенсивностью и интенсивностью мюллсриозной инвазии у коз. Так начальное количество
личинок, рассчитанное по теоретической кривой в фекалиях коз было выше, чем у овец более чем в 5 — 5,5 раз. Естественно такая ситуация привела к отрицательным значениям в начальной скорости изменений численности личинок в фекалиях коз, которая была равна в южном агрорайоне —1,61; в центральном -4,90, в северном -2,37 экз/дек., Характер изменений показателя в южном агрорайоне значительно отличался от таковых в других агрора ионах. Так уровень остаточной вариации (влияние факторов внешней среды) на численность личинок в этом агрорайоне составлял 89,1%, почти в 2 раза выше, чем в центральном (45,44%) и северном (56,32%), что можно объяснить характером почвы(супесчаная) и частыми кратковременными обильными осадками. Подобная ситуация приводила к нерегулярному и быстрому вымыванию личинок из отдельных шариков «катышков» фекалий от коз.
Наблюдения в лабораторных условиях за личинками I стадии в фекалиях от зараженных овец и коз показали, что численность личинок в популяции паразита (весной, летом, зимой) стабильна, однако их физиологический потенциал — жизнеспособность, во многом зависел от физического состояния фекалий — особенно их влажности. При достижении фекалиями параметров 18,0*0,8 - 19,0±0,б% относительной влажности, наступает гибель личинок мюллерий I стадии, как в фекалиях овец, так и в фекалиях коз. В полевых опытах было установлено, что эпизоотического значения перезимовавшие личинки I стадии не имеют. В апреле, в период таяния снега, личинки вымываются из фекалий. Наиболее интенсивно этот процесс протекает в фекалиях у овец, но единичных «нежизнеспособных» личинок мюллерий обнаруживали в мае, внутри шариков «катышков» фекалий от коз.
При соприкосновении фекалий с влагой личинки I стадии мигрируют из фекалий, от зараженных животных, в течение 1-2 сек. Наличие такой высокой чувствительности к влажности внешней среды представляет большой теоретический и практический интерес в течении эпизоотического процесса, поскольку резко меняется численность популяции личинок паразита на каждом конкретном участке пастбищ, где выпасались животные. Данный факт и результаты предыдущих опытов, позволили сделать предположение, что при выпасе животных на пастбищах с влажными растениями (при дожде, выпадении росы) контаминация последних личинками I стадии происходит не за счет миграции, а вследствии их кратковременного пребывания на растениях, как прн соприкосновении с влажными частями растений, так и при случайной задержке шариков «катышков» — фекалий на них. Результаты опытов в лабораторных условиях в эксикаторах, сухих и влажных а также полевые наблюдения, подтвердили это предположение. Установлено, что при выпасс животных «по росе» в 5 минутном интервале в местах акта дефекации, в пробах растений из 3 и 4 ярусов — отмечено максимальное количество личинок от 12,0±2,0 до 1б,0±2,0 экз. при выпасе овец и от 18,0±1,5 до 25,0±2,0 экз. прн выпасе коз. В пробах пастбищных растений из 2 яруса количество личинок I стадии при выпасе овец не превышало 7,0±2,0 экз., а при выпасе коз — П,0±2,0
экз. В пробах растений из 1 яруса численность обнаруженных личинок была еще меньше - 2,0± 1,0 экз. при выпасе овец; и 4,0±2,0 экз. при выпасе коз. Через
6 часов после выпаса как овец, так и коз личинок I стадии мюллерий в исследуемых местах не обнаруживали. При выпасе животных во время моросящего дождя в пробах «крупнолистных» растений из 3 и 4 ярусов растительности высотой 7-14 см в пятиминутном интервале после акта дефекации обнаруживали до 36,0±2,0 экз. личинок I стадии при выпасе овец и до 50,0±3,0 экз. личинок при выпасе коз. В пробах растений из 1 яруса, даже при наличии па них фекалий («катышки» фекалий застревали между стеблем и черешком листьев), личинок не выявляли. В пробах растений из 2 яруса, в этот временной промежуток, количество личинок при выпасе овец, не превышало — 1б,0±3,0 экз., при выпасе коз- 28,0±2,0 экз. Через 2 часа после того, как капельная «жидкая» вода испарялась с поверхности растений, личинок мюллерий в пробах надземных частей растений не обнаруживали.
2. Изучение роли сухопутных моллюсков — промежуточных хозяев в циркуляции личиночных стадий нематоды Muellerius capillaris
Второй фазой жизненного цикла паразита является период обитания личинок мюллерий в тканях промежуточного хозяина — сухопутного моллюска. По нашим данным, в Западном регионе РФ, в паразитарной системе «М.capillaris - промежуточный хозяин — сухопутные моллюски» принимают участие 16 видов сухопутных моллюсков, относящихся к 10 семействам и разным эколо гичсским группам.
Популяции сухопутных моллюсков — промежуточных хозяев мюллерий приурочены к определенным биотопам, и имеют четкое конгрегациошюе пространственное распределение. В обследованных биотопах 13 типов пастбищ 3 агроклиматических районов области встречаются виды B.fniticum, в 12 - C.pumilia, в 10 — C.lubrica, A.circumscriptus в 9 - Е. strigella, P.rubigmosa, в
7 - О. sarsí, Р. bidentata, в 6 — S. oblonga, S. putris и Z. nitidus, в 4 - Н. pomatia и в 3 - T.hispida н внд I. ven tricosa встретился в одном биотопе. Одним нз важнейших элементов жизненного цикла является миграция большинства видов взрослых и ювенильных особей моллюсков на ветви, стебли и листья кустарников м растений. Для вида В. fruticum вертикальный подъем в южном агроклиматическом районе отмечен в конце первой декады мая, в центральном во - второй декаде, в северном к концу месяца. Процесс миграции разновозрастных групп моллюсков В. fruticum в утренние и вечерине часы, или в дождливые дни продолжается в северном агрорайонс до конца 2 декады сентября, в центральном и южном до конца пастбищного периода. Количество особей на одном листе у кустарников достигает 3 экз., на стеблях и листьях крапивы до 12 экз. Осенью и в период летней засухи моллюски образуют гроздевидные скопления до 25 экз. Часть моллюсков (до 8-10 экз.) на одном кусте с образованием осенней эпнфрагмы отпадает вместе с листьями уходя на
зимовку. Для видов O.sarsi, S.putris период миграции короче и отмечается с середины июля до конца августа. Остальные виды сухопутных моллюсков, кроме Н. pomatia и слизи ей не отличаются ярко выраженными вертикальными миграциями.
При изыскании методов позволяющих определить специфичность сухопутных моллюсков (промежуточного хозяина) к личинкам мюллсрий I стадии исходили из того, что протостронгилиды в процессе эволюции должны были приобрести способность усваивать новое количество энергии, в том числе и химической, запасенной в других организмах. Данная способность должна была закрепиться тончайшей специализацией, отвечающей за этот процесс. В лабораторных опытах было установлено, что при соприкосновении шариков — фекалий от зараженных овец и коз со слизью «муцином» следа от ползущих специфичных сухопутных моллюсков, так н с каплями слизи в соскобах с тела-«подошвы» моллюска, личинки I стадии, в ту же секунду покидали поверхность последних и приобретали в слизи «муцине» резкие вращательные движения до 45-48 об/мин на 360® по часовой стрелке, с упором на шип хвостового конца (Патент РФ Na 2236128). Таким образом, можно считать, что при попадании личинок мюллерий I стадии в сферу влияния выделяемых телом моллюска-«подошвой», специфических веществ - «муцина» слизи поведение личинок в своих «исканиях» подчинялось хемотаксису слизи «муцина» специфического сухопутного моллюска (промежуточного хозяина мюллерий).
Результаты опытов по заражению обнаруженных в биотопах на пастбище сухопутных моллюсков личинками мюллсрий ! стадии в лабораторных условиях, путем контакта фекальных шариков с телом — «подошвой» и полевых, при непосредственном контакте - «наползанин» моллюсков па фекалии от зараженных овец и коз показывали, что при 5 минутном контакте интенсивность инвазии при 100% экстенсивное™ у моллюсков определялась площадью контакта тела «подошвы» с фекальными массами. Так виды взрослых моллюсков Н. pomatia, Н. vulgaris, В. fruticum, A. circumscriptus при заражении в полевых условиях имели в своем теле «подошве» при исследовании через 24 часа - 49,0±0,1, 48,0±0,б, 48,0±0,1, 45,0±1,3 экз. проникших личинок, соответственно. Инвазированностъ тела мелких по размерам тела моллюсков - Р. rubiginosa, Т. hispida, Z. nitidus не превышала 29,0±0,1, 23,0±0,3, 2б,0±1,3 экз., соответственно. Результаты экспериментов заражения яйцекладок S. putris, на всех этапах эмбрионального развития показали, что личинки мюллсрий I стадии при соприкосновении со слизью «муцином» яйцекладок приобретали резкие направленные движения к яйцевым капсулам. В течение 1-1,5 часов они достигали их оболочек, но не проникали в развивающийся эмбрион. При контакте только что народившейся молоди с фекалиями от зараженных животных интенсивность инвазии составляла 3,0±1,6 экз. личинок на одну особь.
Таким образом, результаты исследований показали, что основной путь заражения сухопутных моллюсков личинками мюллерий происходит при контакте — «наползиши» последних на фекалии зараженных животных. Личинки мюллерий I стадии при соприкосновении со слизью тела-«подошвы» моллюска приобретали энергичные «вбура вливающие» способности и проникали в тело «подошву» специфического моллюска — промежуточного хозяина. При одномоментном контакте с инвазионным материалом один моллюск способен «воспринять» до 50 личинок, выполняя роль «аккумулятора», а при последующих контактах пополняет их очередное поколение. В моллюске личинки остаются до момента попадания в пищеварительный тракт дефинитивного хозяина или до конца его жизни.
При разработке лабораторных методов диагностики на зараженность личинками мюллерий сухопутных моллюсков, исходили из того, что кислотно-щелочная среда желудочного содержимого (рН) у овец и коз колеблется от 2,2 до 6,5. Принцип разработанного нами метода лабораторной диагностики на зараженность сухопутных моллюсков личинками мюллерий основан на активизации искусственной средой (рН 3,2-3,5) и самопроизвольного выхода личинок или выпадспия «капсул» с личинками независимо от стадии развития, из отсеченного от тела части «нот» моллюсков. Данный метод кроме диагностики на зараженность моллюсков личинками мюллерий, позволяет контролировать процесс морфологических изменений с первых часов после проникновения до достижения личинками инвазионной стадии в моллюсках (Патент РФ № 2236819). Было установлено, что самопроизвольный выход личинок из отсеченных от тела моллюсков — «ноги», помещенных в чашку Петри с активизирующей средой до 4 дня с MOMetrra проникновения происходил между 20-40 минутами. С пятых по девятые сутки отмечали в тот же временной промежуток выпадение капсул с личинками. С 17-18 дня после проникновения у выходящих личинок отмечали процесс липьки и наличие у них на хвостовом конце «сползающей» кутикулы. V легочных моллюсков (на примере Н. pomatia, Н. vulgaris) необходимо дополнительно исследовать участок мантии, выполняющей роль легкого, где наряду с личинками мюллерий обнаруживали личинок свободно живущих нематод и личинок Tominx acrophilus.
Принцип прижизненного метода диагностики на зараженность моллюсков личинками мюллерий основан на установленном биологическом факте — вытеснении проникших в тело-«ногу» моллюска личинок мюллерий в дистальной конец трубчатых желез - нижнюю подошвенную часть тела моллюсков (Патент РФ Ks 2195873) Исследование соскоба с последней, на 7 день после заражения, выявляет наличие личинок мюллерий на различных стадиях развития в теле моллюсков.
Прослеженная нами возрастная динамика и и Базирован ности 16 видов сухопутных моллюсков - промежуточных хозяев личинками мюллерий позволила сделать вывод, что популяция паразита на личиночных стадиях
наиболее многочисленна в популяциях доминирующих групп моллюсков при этом, основную роль в эпизоотическом процессе при мюллернозе в первой половине пастбищного сезона играла часть перезимовавшей генерации моллюсков предыдущего года, зараженная личинками мюллерий (15-35%).
Генерация моллюсков текущего года участвует в эпизоотическом процессе, начинал со второй половины лета. Состоянием популяции моллюсков, как сочлена паразитарной системы, н определяется характер течения эпизоотического процесса. Ин Базированные моллюски служат аккумулятором «резервантом» инвазионного начала. Примером этому служили паши многолетние наблюдения за изменением популяции личиночных стадий паразита в популяции моллюсков В. fruticum. При выходе из зимовки в конце апреля популяция моллюсков была представлена взрослыми и подрастающими особями прошлого года с экстенсивностью инвазии до 3,5±0,7%, при интенсивности до 14,0±0,2 экз. Установлено, что 80% личинок являлись инвазионными. Данная тенденция, с небольшими отклонениями, сохранялась до появления молоди (июль), за счет которой увеличивается плотность популяции моллюсков, а в «теле-ноге» начинали преобладать развивающиеся личиночные стадии (до 70%), при интенсивности инвазии до 24,0±0,8 экз. личинок мюллерий. В сентябре вновь, популяция паразита представлена личинками достигшими инвазионного развития (65%).
3. Изучение адаптации личинок мюллерий к промежуточным хозяевам — сухопутным моллюскам
Характерным признаком анатомического строения тела сухопутных моллюсков является особый орган движения - «тело-нога». Поверхностью для движения является плоская часть подошвы «тела-ноги». В подошве «тела-ноги» сосредоточены одноклеточные трубчатые железы, глубоко входящие в соединительную ткань. Указанная часть «тела-ноги» сухопутных моллюсков — самое типичное место локализации и развития личинок мюллерий. При гистологическом и гистохимическом исследовании строения желез «тела* головоноги» установили, что у молодых моллюсков видов — Т. hispida, В. fruticum слизистые железы более крупные и занимают широкий слой подэпителиальной ткани. С возрастом они истончались и переходили в тонкие выходы многочисленных боковых желез тел а-«под ошвы». Такая же возрастная зависимость формы выходящих боковых протоков желез отмечалась у моллюсков A. circumscriptus. У молодых особей железы представлены укороченными расширенными трубками, у подрастающих и взрослых особей они переходили в компактные соединения. У крупных легочных раковинных моллюсков H. pomatia, H. vulgaris — железы тела «подошвы»-ноги, несмотря на их значительную площадь имели выраженное строение в виде тонких трубочек. Такое же трубчатое строение желез бокового окаймления подошвы отмечали у моллюсков вида - О. saisi, S. oblonga, S. putris.
Гистохимическая картина трубчатых желез тела-«подошвы» у моллюсков характеризовалась наличием в них кислых мукополисахаридов и фосфолипидов - энергетически богатых веществ.
В средней и верхней части «тела-ноги» различали две группы желсз. Первая группа представлена базофильными «мантийными» железами каплевидной формы, без выраженного выхода. Их расширенное образование соприкасалось с плотными группами мышц, расположенными продольно к середине «тела-ноги». Оболочка этих желез давала характерную реакцию окрашивания на наличие белков. Преобладающим цветом являлся коричневый. Вторая группа желез представлена более тонкими и удлиненными образованиями. Гистохимически в железах обеих групп «тела-ноги-подошвы» отмечено наличие кератогеалнна и триптофана. Содержимое желез окрашивалось в голубой и красный цвета.
Гистологические исследования дыхательной полости и стенки легкого моллюсков вида - Н. pomatia, Н. vulgaris показали, что внутренняя поверхность свода «потолка» складки состояла из плоского реснитчатого эпителия в котором отмечали легочные кровеносные сосуды. Гисто химически в дыхательной стенке легкого выявлялись кислые мукополисахариды и фосфолипиды.
Через 6 часов после проникновения в трубчатые железы подошвы тела-«поги» дичинки I стадии кардинально изменялись. Тело увеличивалось почти в 2 раза, достигало длины 0,36 — 0,38 мм и заполнялось темными продолговатыми гранулами, плотно прилегающими к кутикуле (рис.13, 14). В этот период заметно укрепление хвостового конца без изменения его формы. К концу первых суток гранулы становились более светлыми и округлыми. Удаляясь от дорсальной части кутикулы гранулы распостранядотся по всему телу кроме небольшой части головного конца и формировали отчетливо выраженное цилиндрическое образование простирающееся до хвоста. Форма хвостового конца не менялась. В гистосрсзах ткани, через 17 часов после проникновения вокруг свернувшихся личинок формировалась мягкая капсула. На третьи сутки содержимое гранул внугри тела становилось еще более отчетливым, проникая и в головную часть личинок. Хвостовой конец уплотнялся, выпуклость вентральной стороны сглаживалась, а шипик принимал положение почти прямого угла по отношению к оси тела. К концу четвертых суток в большей части тела появлялось светлое пространство, отделяющее гранулированное содержимое от дорсальной стенки тела. Иа шестой день после нивазнроваиия, в гистологических срезах вокруг личинок, лежащих продольно «подошве» - продолжали концентрироваться тканевые элементы, формирующие светлое пространство между капсулой личинок и окружающими се тканями. С седьмого дня личинок обнаруживали в соскобах слизи с тела «подошвы» моллюсков. В нативпых препаратах личинки имели форму кольца, с одновременным формированием тонкой прозрачной кутикулы, под которой отчетливо заметны образования в форме сплошного слоя,
охватывающего среднюю часть тела. В гистологических срезах заметно смещение личинок я окружении тканевых элементов в дистальную часть подошвы. Более отчетливо просматривался процесс трансформации фибробластов, образующих синусы. Исходя из гистологической картины можно предположить, что начавшийся процесс распознования «чужого» -личинок мюллерий, постепенно переходил в более тонкое специфическое «узнавание». Доказательством этому служило то, что структура тканей моллюска вокруг личинки становилась все более похожей на структуры, где они отсутствовали.
Рис 13. Лнчиыкк М. седШапз 1 стадии аыделенные ит фек&янй спонтанно инааэироаанных гоч (\ 20, ориг ). Дчина ила 0,29-0,30 мм.
Рис, Н. Личмнкн ыюдоерий через 6 часов после проникновения в железы тела «подошвы» моллюска В. Гп)Исиг». Самопроизвольный рнход в аакгндоэмрукыцун»» среду (к 40, орн)4). Длина тела 0,56-0,38 мм.
Рис, 15. Линька анчинок мюллерий на 19 день ггосле проникновения в *1ело-«по21>шву» моллюска В.Егийсит. Самопроизвольный выход ю тнгй моллюсков ■ «активирующую среду» (к 4г), ориг,). Длина тела 0,53-0.52 мм.
Рис. 16. Личинки мюддерий на 46 день после проникновение в тело «подошву» моллюска иТги11сит Инвазионкал личинка. Вторая линька в искусственной среде имитирующей пнщенарстельный тракт овец, коз (х20, ориг). Диина теля 0,б6*0,6& мм.
С восьмого по 16 день наступал период временного покоя. В нативных препаратах личинки были скручены в спираль, имеющую 1,5 витка. Головной и хвостовой концы плотно прилегали к телу. Вокруг личинок и внутри спирали формировались клеточные элементы, содержащие, по гистохимическим исследованиям, энергоемкие вещества. Изложенное свидетельствовало, что между личинками проникших мюллерий и тканями моллюска возникали биологические «образования», выполняющие «трофическую» функцию. Происходило это благодаря фагоцитирующей способности клеток соединительной ткани, обезвреживающей метаболиты, выделяемые личинками в фазе активного роста и морфогенеза. То есть, между развивающейся личинкой н тканями моллюска возникали взаимоотношения носящие взаимоадаптивный характер. Клеточная реакция протекала однотипно и не зависела от возраста и вида «специфичных» сухопутных моллюсков. На 16
день в натнвных препаратах отмечали переход крупных гранул содержимого в мелкозернистую массу, компактно прилегающую к вентральной части тела личинки длиной 0,42—0,44 мм. На 18 день наступал кульминационный MOMettr морфологических изменений проникших личинок - линька. При слабом движении личинки кутикула постепенно сползала с хвостового конца тела (рис. 15). К 26 дню процесс линьки заканчивался. Личинки длиной 0,55-0,57 мм становились малоподвижными, сворачивались в 2,5 оборота, не меняя внутренней структуры и продолжали свой рост до 0,66- 0,68 мм и оставались в теле «подошве» моллюска до попадания в организм дефинитивного хозяина. .
При переносе инвазионных личинок в искусственную среду иммитирующую среду пищеварительного тракта овец, коз (рН 3,2- 6,5), через 4-6 часов наступала вторая линька с отслоением кутикулы по всей поверхности тела (рис. 16).
4. Экспериментальное изучение экологических адаптация личинок мюллерий до инвазионного состояния при разных путях проникновения па модели моллюсков видов — H. pomatia, 11, vulgaris, подкласса Pulmonale
При проведении опытов учитывали следующие обстоятельства: - высота раковины моллюсков должна быть не менее 1,5 — 2 см; объем вводимой жидкости с личинками мюллерий 1 стадии не должен превышать - 2 мл; диаметр катетера вводимого в ротовую полость моллюсков должен быть не более 2 мм; желательно использовать фекалии от спо!гганно пнвазированных животных не позже 4-6 часов после взятия; для исключения появления осадка, фекальные шарики помещают на 3-5 мин. в чашки Петри с температурой водопроводной воды не выше 18°С; для контроля за выходом инвазионных личинок мюллерий моллюсков в опытах содержат в емкостях удобных для их систематического ополаскивания водопроводной водой; просмотр смыва осуществляют в чашках Петри иа столике микроскопа МЕС (8x4).
Рис. 17. Il.pomatia. Схема распределения личинок мюллерий в дыхательной стенке легкого до достижения инвазионного состояния при инъекции их в полости педальных венозных синусов тела «подошвы» (ори г).
1 - круговая вена; 2 - приносящий легочный сосуд; 3 - л С точная вена; 4 -предсердие; 5 - почка; 6 — правая краевая века; 7 - ректальный синус; 8 -дыхательное отверстие; 9 - выносящий легочный сосуд.
В первом варианте опытов с моллюсками Н. pomatia, Н. vulgaris в ротовую полость впрыскивали с помощью катетера жидкость (2 мл) с содержанием 30, 60 и 70 экз. личинок мюллернй I стадии. Установлено, что процесс миграции личинок до постоянного места локализации - внутренней стенки мантии, формирующей дыхательную стенку легкого занимал 7 дней. Наибольшие потери личинок — до 20% от общего числа введенных, происходили при проникновении их из «колена» тонкой кишки во вторичный мочеточник. При этом в слизистой кишечника образовывались узелки, изолирующие личинок. На 10 день вокруг личннок локализованных в лакунах дыхательной стенки легкого начинала формироваться сосудистая соединительная ткань с различными клетками. Процесс объединения соседних лакун продолжался -26-28 дней. С 30-32 дня отмечали выход личинок in «легкого» моллюска, через дыхательное отверстие последнего. Выход личинок (1-2 экз.) с интервалом 3-5 дней, длился 28-31 день. При впрыскивании 60-70 экз. личинок мюллернй I стадии, выход инвазионных составлял 16-28 экз., соответственно.
Во втором варианте опытов личинок мюллерий в водной взвеси, без соблюдения стерильности, инъецировали — в полости педальных венозных синусов «тела-подошвы». По правой краевой вене — до 70% личинок обнаружеваемых в «легком» моллюска, распределялись по его правому краю. По круговой вене — до 20% личинок попадали в передний кран дыхательной стенки. Остальная часть, по левой краевой вене, заносилась в левый край «легкого» (рис. 17). Выход инвазионных личинок, от числа инъецированных, составлял 40-44% (Патент РФ №2236819).
В третьем варианте опытов личинок мюллернй 1 стадии инъецировали в легочную (мантийную) полость моллюсков, без соблюдения стерильности. Так же как и в вариантах первых двух опытов, на 7 день, личинки проникали в соединительную ткань лакун легких. Установлено, что в момент инъекции 1215% вводимых личинок выбрасывалось через дыхательное отверстие моллюска, около 60% личинок терялось во время миграции. С 30 дня после шгьекцни, инвазионных личинок обнаруживали в смыве воды из емкостей, где содержались опытные моллюски. При инъекции 70 экз. личинок, выход инвазионных личинок не превышал 6,4¿0,4 экз. на одну особь.
Раздел второй. Изучение функционирования системы «паразит — дефинитивный хозяин»
5, Изучение эпизоотического процесса при легочных иематодозах овец и коз в Западном регионе РФ
По результатам изучения эколого-эпшоотическнх особенностей распространения легочных иематодозов мелкого рогатого скота установлено, что фауну гельминтов в легких овец и коз представляли нематоды рода Dictyocaulus Railliet et Henry, 1907, рода Muellerius Cameron, 1927, относящихся
к семействам Dictyocaulidae Skrjabin, 1941 и Protostrongylidae Leiper, 1926, входящих в подотряд Strongylata Railliet et Henry, 1913,
По результатам учетов вскрытий легких овец определено, что вид D. filaría распространен во всех трех агроклиматических районах области, однако экстенсивность инвазии не превышала 2,2±1,2%. Из протостронгилнд у овец широко распространен только, один вид М. capillaris, Инвазированность животных мюллериями достигала 53,2±0(8%. У коз из гельминтов паразитирующих в легких поголовно (100%) встречался только вид - М. capillaris (табл. 1)
Таблица 1. Видовой состав легочных нематод овец и коз в Смоленской области с учетом агроклиматических районов, за период наблюдений с 1997 по 2004 г.г. (по данным вскрытий 3600 легких животных)
Виды гельминтов Количество зараженных животных ЭИ,% Интенсивность инвазии (экз)
Средняя Максимальная
Овцы: Южный агроклиматический район
D. filaría М.capillaris 24 243 4,0±0,1 40,5 ±0,1 8,0±2,0 55,0±2,0 12 72
Овцы: Центральный агроклиматический район
D.filaría М.capillaris 8 327 1,3±0,8 54,5±0,2 6,5±0,8 56,0±2,0 7 75
Овцы: Северный агроклиматический район
D. filaría М. capillaris 7 389 1,2±0,9 64,8±0,7 6,3±0,9 58,0±1,2 7 88
Козы: Южный агроклиматический район
D. filaría М. capillaris 0 600 100 78,0±0,8 220
Козы: Центральный агроклиматический район
D.filaría М. capillaris 0 600 100 71,0±0,7 250
Козы: Северный агроклиматический район
D. filaría М.capillaris 0 600 100 85,2±0,3 270
Условия агроклиматических районов области существенно влияли на возрастную динамику нематодозов легких у животных. Так, ягнята на первом году жизни в южном агроклиматическом районе в большей степени и и Базировались диктиокаулами (ЭИ - 4,0±0,9%), но в меньшей, в сравнении с
другими агроранонамн - мюллериями (ЭИ-23,0±0,2%). Инвазированность ягнят диктиокаулами центрального и северного агрорайопов совпадала (ЭИ-2,0±0,1%). Зараженность животных мюллериями, по мере увеличения влажности в условиях агрорайонов возрастала в центральном до 36,0±0,27 и северном до 42,0±02%. Инвазированность овец 1-2-летнего возраста диктиокаулами в южном агрорайоне достигала б,0±0,1% при ИИ - 10,3±1,1 экз. В центральном и северном не более 2,0±0,7 и 1,6±0,5% при ИИ - 7,9±1,3 и 6,5±0,1 экз., соответственно.
Зараженность овец мюллериями, данной возрастной группы, в южном агрорайоне составляла 36,0*0,2, в центральном 54,0±0,1°/о, и северном 58,4±0,б% при ИИ мюллсрий в узелках легких 69,1±0,7, 71,3±0,4 и 89Д±1,2 экз., соответственно.
С учетом агроклиматических условий области у ягнят текущего года рождения, по данным вскрытий легких, впервые мюллериоз регистрировался с 16 по 24 июля (южный агрорайон - ЭИ - 8,0±0,1% и ИИ - 17,0±0,1 экз; центральный - 11,1±0,1% н ИИ-26,0±0,2 экз; северный-ЭИ-26,9±0,1% и ИИ
— 39,2±0,2 экз.) Инвазия постепенно нарастала и в декабре достигала своего пика (южный агрорайон — ЭИ —40,0±0,21% и ИИ - 41,9±0,2 экз.; центральный-ЭИ - 34,3±0,1% и ИИ - 36,0±0,2 экз.; северный - ЭИ 72,7±0,1% и ИИ-66,1 ±0,3 экз.). Овцы 1-2-летнего возраста были инвазироваиы мюллериями в течение всего года. Самые низкие показатели отмечались весной, перед выгоном на пастбище ( южный агрорайон - ЭИ 3б,3±0,1% и ИИ 47,1 ±0,1 экз.; центральный
- ЭИ - 40,0±0,1 и ИИ 36,3±0,1 экз.; северный -ЭИ-40,8% и ИИ - 59,1 ±1,2 экз.). Самые высокие показатели регистрировались в декабре (южный агрорайон -ЭИ - 46,7±0,1% и ИИ - 68,5±0,2 экз.; центральный - ЭИ - 70,8±0,1% и ИИ -71,1±0,1 экз.; северный - ЭИ -69,0±0,2% и ИИ - 82,0±0,3 экз.). У взрослых овец мюллериоз регистрировался в течение всего года.
Козлята текущего года рождения инвазировались мюллериями раньше: с 10 по 20 июля (южный агрорайон - ЭИ -12,0±0,1% и ИИ - 25,0±0,2 экз.; центральный - ЭИ - 12,3±0,1% и ИИ-28,2±0,1 экз.; северный - ЭИ - 16,3±0,2 % и ИИ - 32,1±0,1 экз.). К концу августа зараженность козлят достигала — 100% (южный агрорайон - ИИ — 93,3±0,3 экз.; центральный — ИИ — 56,2±0Д экз.; северный - ИИ-126,0±0,4 экз.).
При постоянной двусторонней инвазии легких, как у овец, так и у коз чаще поражалась правая диафрагмальиая доля легкого (52,5%), чем левая диафрагмапьная (46,4%). Локализация нематод в узелках в других долях легких была следующая: (в %) верхушечная правая доля легкого - 0,2, сердечная правая доля - 0,3, диафрагмальиая правая доля — 0,3, верхушечная доля -0,1 н сердечная левая доля — 0,2%.
Математическое моделирование взаимосвязей в системе «паразит-дефинитивный хозяин» позволило установить, что по линейному развитию паразита в легком молодняка, впервые попавшему на пастбище показатель ежемесячных скоростей развития нематоды характеризовался нарастанием
образования узелков с мюллериями от южного к северному агрорайоиу области у ягнят от 5,28 до 6,98 экз. и у козлят от 7,38 - 25,80 эюУмес. У 1-2-летиих овец, выпасавшихся на прежних пастбищах, скорости изменения ежемесячных появлений узелков с паразитами снижались до 2,44...2,75, а у взрослых животных эти явления были еще ниже до 0,61 ...1,25 экзУмес. У коз 1-2 лет наиболее низкие показатели начальных ежемесячных скоростей образования узелков отмечали в южном атрорайоне — до 3,23 экзУмес.. В центральном и северном от 5,83 до 8,16 экз. соответственно. В легких взрослых коз, напротив, наиболее низкие показатели начальных ежемесячных скоростей образования узелков с мюллериями отмечали в северном атрорайоне - 4,65 экз. В центральном и южном они возрастали до 6,20... 7,10 экзУмес., соответствен но.
Величина значений коэффициента скорости изменения количества узелков с паразитами, по теоретической кривой, определяла длительность сдерживания их очередного образования в легких животных старше года. Так при колебаниях последнего от 0,05 до 0,13 происходило сдерживание проявлений роста новых узелков до октября текущего года. Уровень приведенного показателя зависел от количества имевшихся узелков с паразитами в легких коз перед их выгоном на пастбище. Так при фактическом количестве узелков в легких коз в возрасте 1-2 лет перед выгоном на пастбище (2 декада апреля, 1 декада мая) 54,30. .,68,20 экз., сдерживание проявлений роста (образования) новых узелков в южном агрорайоне продолжалось до середины сентября. В центральном, при числешюсти узелков с паразитами (3 декада апреля, 1 декада мая) 70,00...72,60 экз. сдерживание их образования длилось до октября. В северном (1 декада мая) при численности узелков до 90,10 экз. сдерживание проявлений роста (образования) новых узелков длилось только до середины августа — у коз старше 3 лет при численности узелков с паразитами в легких перед выгоном на пастбище в южном агрорайоне — 69,50...70,60 экз., сдерживание роста узелков продолжалось до октября. Такой же временной промежуток сдерживания роста узелков отмечался у коз в центральном агрорайоне при численности узелков в легких 87,00 ,96,40 экз. В северном агрорайоне при фактической численности узелков с паразитами в легких животных перед выгоном па пастбище до 119,3 экз., период сдерживания их очередного образования продолжался только до 3 декады сентября, У овец, в отличие от коз теоретическая кривая, характеризующая очередное образование узелков с мюллериями в легких приближалась к линейной тенденции со стабильным повышением их численности с возрастом животных.
Результаты пяти вариантов опытов по изучению приживаемости, сроков достижения половозрелой стадии н формирования внутрилегочной популяции мюллерий на 15 ягнятах и 15 козлятах 3,5 -4 мсс. возраста путем скармливания отсеченных частей от тел-«ног» моллюсков В. риШв с инвазионными личинками позволил уточнить механизм попадания инвазионного начала в организм дефинитивных хозяев. Установлено, что однократное попадание в
пищеварительный тракт овей и коз - моллюсков с инвазионными личинками, вызывало формирование узелков с особями популяции М. сарШалэ в легких животных. Приживаемость мюллерий и количество паразитов в узелках легких, в эксперименте, зависела от числа инвазионных личинок попавших в организм с моллюсками. В опытах близких к природным их приживаемость колебалось у ягнят от 13,5 до 15,9, у козлят от 16,7 до 17,4%. Период преимагинального развития мюллерий локализованных в узелках легких в организме овец составлял 51-52 дня, в организме коз 50-51 день.
Рис. 18. «Лльвеол»рим лнггедиювиил» участка легкого» месте развития пар актирного узелке мкщлершмн. Продольный гнстосреэ участка легкого поклейка <ч60, ориг)
Анализ структуры внутрилегочной популяции М. сарШаго выявил высокий уровень однородности в развитии репродуктивных признаков нематод локализованных в узелках легких овец н коз. Во всех случаях количество самок превышало количество самцов. У ягнят это соотношение составляет -1,0±0,8... 1,4±0,2. Количество самок в парах, в узелках легких козлят, всегда больше (от 3,7±0,3 до 12,5±0,9), чем в узелках ягнят (от 3,1 ±0,6 до 17,0±0,9 экз.) Локализация мюллерий в узелках сопровождалась развитием лобулярных очагов продуктивного воспаления с резко ограниченными очертаниями пролнферативного поражения легочной ткани (рис. 18).
Раздел третий. Усовершенствование профилактики и мер борьбы с мюллериозом мелкого рогатого скота
6. Изучение антгел ьм шиной эффективности препаратов авермектинового ряда, схем дегельминтизаций и мер пастбищной профилактики мюллериоза овец н коз
Опыты по изучению антгельминтной эффективности отечественных препаратов авермекти нового ряда — иверсекта и аверсекта-2 в форме 1% инъекционных растворов для подкожного введения проводили на
разновозрастных группах овец и коз в период наибольшей спонтанной зараженности животных в сентябре 2002 г.
Сформированным в опытные группы животным по 30, 50 и 100 толов иверсект и аверсект -2 вводился однократно, индивидуально, подкожно в область лопатки из расчета по действующему веществу (ДВ). Ягнятам в дозах -0,2; 0,4; 0,6 мг/кг, овцам 1-2 лет, и взрослым в дозах - 0,4; 0,6 мг/кг. Козлятам, козам 1-2 лет и взрослым в дозах — 0,6, 0,8 мг/кг. Эффективность иверсекта и аверсектз-2 в указанных дозах учитывали на основании гельминтоларвоскопнческих исследований проб фекалий от подопытных групп животных и гельминтологических исследований легких по трем ягнятам, трем козлятам и 5 головам животных старших возрастных групп на каждую дозу препарата, через 15-18, 30-32 и 50-52 дней после нньекции. Расчет эффективности иверсекта и аверсекта -2 проводили по типу «контрольный тесг»
В опытах определено, что иверсект и аверсект -2, примененные у разных возрастных группах овец в дозах 0,2-0,4 мг/кг, и в разных возрастных группах коз в дозах 0,6 мг/кг не проявляли выраженного терапевтического эффекта против мюллерий локализованных в узелках в легких.
Установлено, что при увеличении дозы иверсекта и аверсекта-2 до 0,6 мг/кг по ДВ на 15-18, 30-32 дни у ягнят, овец 1-2 лет и взрослых животных препараты оказывали 100% эффект. На 50-52 дни после инъекции, эффективность лечения ягнят, по числу обнаруженных в узелках легких половозрелых мюллерий, составляла 90,8 н 92,3%. У овец 1-2 лет - 96,5 и 96,4%, взрослых овец — 96,1 и 96,2%. Иверсект и аверсект-2, инъецированный козам в дозе 0,8 мг/кг по ДВ, по результатам копроларвоскопин и гельминтологических исследовании легких на 15*18 и 30-32 дни проявлял 100% эффективность. На 50-52 дни, по результатам гельминтологических исследований легких козлят, эффективность лечения иверсектом и авсрсектом -2 составляла 95,5 и 95,8 %, коз 1-2 лет - 96,8 и 98,3%, взрослых коз - 98,0%, соответственн о.
Препараты, в выше указанных дозах не вызывали побочных явлений у мелкого рогатого скота разного возраста.
С целью разработки оптимальных схем дегельминтизации у разных возрастных групп овец и коз исходили из выявленных особенностей течения эпизоотического процесса при мюллериозе, включающего физиологические особенности и размножение животных. Это позволило предложить схему обработок животных опережающую начало прихода овцематок в охоту (конец второй декады августа—15-18 августа). В сравнительном аспекте, использовали общепринятую схему тотальной дегельминтизации животных при постановке на стойловое содержание (октябрь).
Отработку схем дегельминтизаций проводили в крестьянских и фермерских хозяйствах области на 877 гол. овец и коз разных возрастных групп. Иверсектом в дозе 0,6 мг/кг по ДВ обработано 221 голова овец,
аверсектом -2 в той же дозе (0,6 мг/кг по ДВ) -222 головы. Козам иверсект в дозе 0,8 мг/кг по ДВ инъецировали 218 животным, аверсе кт-2 в той же дозе (0,8 мг/кг по ДВ) 216 головам. Наряду с иверсектом и аверсектом-2, в сравнительном аспекте, на 108 головах овец н 107 головах коз согласно «Инструкции о мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболеваний животных гельмиитозами», 1999 г., применили ивомек в дозе 0,2 кг по ДВ.
Установлено, что после дегельминтизации нверсектом и аверсектом —2 по схеме 1 (во второй декаде августа 15-18.08) на 15-18, 30-32 дни препараты показали 100% эффективность в отношении половозрелых мюллерий в узелках легких разных возрастных групп овец и коз. На 50-52 дни эффективность лечения ягнят нверсектом, по среднегеометрическому количеству выявленных половозрелых мюллерий в узелках легких составила — 74,2, аверсектом -2 — 76,4%, у овец 1-2 лет 72,6 и 73,9%, у взрослых овец - 84,4 и 85,9%, соответственно. Эффективность применения ивереекта козлятам достигала -72,3%, аверсекта - 2- 72,5%. Пределы колебаний эффективности примененных препаратов козам 1-2 лет была в пределах - 77,8 и 77,9%, соответственно. Иверсект и аверсект -2 примененные однократно взрослыми козами проявляли эффективность — 82,1 и 80,3%,
Дальнейшие наблюдения за овцами и козами различных возрастных групп, дегельминтизированных по схеме I до выгоиа на пастбище показали в подсчетах по среднегеометрическому числу отсутствие каких-либо изменений у половозрелых мюллерий в узелках легких,
Иверсект и аверсект-2 в дозе 0,6 мг/кг по ДВ для овец и 0,8мг/кг по ДВ для коз, примененные по схеме 2 (20-23.10), показали 100% эффективность.
Ивомек в дозе 0,2 мг/кг примененный однократно по схеме 2 на 15-18 дни исследования легких проявлял эффективность у ягнят на 65,2, у козлят на -54,9%. У овец 1-2 лет эффективность дегельминтизации, в этот период составляла - 71,5, у козлят — 64,8%. У взрослых овец показатели эффективности не превышали — 72,2%, у взрослых коз - 54,8%,
Эффективность мер пастбищной профилактики мюллериоза овец и коз изучали при одно- и двукратном внесении 6% гранул метальдегида (Зг/10 м2) в пастбищные биотопы моллюсков и проводили оценку влияния моллюскоцида на плотность популяций доминирующих видов сухопутных моллюсков — B.fruicum и S.putris, с учетом экстенс — и интенсинвазированаости личинками мюллерий промежуточных хозяев - моллюсков, а дефинитивных - по учету нематоде узелках легких.
Установлено, что в мае, после внесения моллюскоцида (третья декада апреля), плотность популяции моллюсков вида В. fraticum, по сравнению с контрольными биотопами, снижалась в 8-9 раз и не превышала - 1,2±0,1 экз/м1. Однако, зараженность личинками мюллерий вышедших из зимовки «подрастающих» и половозрелых моллюсков опытных и контрольных групп была близка (ЭИ от 1,9±0Д...2,0*0,3 до 2,б±0,2...2,9±0,2%, при ИИ от13,9±0,2... 14,3±0,1 до 17,1±0,Ь..17,8±0,3 экз., соответственно). Моллюсков
вида Э.ритв в подопытных биотопах не обнаруживали. ЭИ личинками мюллерий половозрелых моллюсков данного вида в контрольных биотопах не превышала 0,4...0,5±0,2%, при Ш1-2Д±0,3..,3,0±0,2 экз. В июле, за счет появления молодых особей, плотность популяции В.йпЦсиш и 3. риШБ резко возрастала. При этом на пастбищных биотопах где моллюскоцнд вносили однократно (апрель) плотность В. йгиИсиш была в 3,2 раза ниже, чем в контрольных и не превышала — 19,5±0,3 экз/м1. Плотность популяции Э. ри1ш на подопытных биотопах, где вносили моллюскоцнд, была ниже контрольных в 3,6 раза - 6,5 экз/м1. ЭИ моллюсков В. йпгёсшп н Б. риНЬ в подопытных биотопах возрастала соответственно, до б,8±0,3 и 2,0±0,1%, контрольных до 7,1 ±0,4 и 3,1±0Д%. ИИ у моллюсков В. Лийсит опытных и контрольных биотопов, была представлена развивающимися стадиями личинок мюллерий и не носила резких отличий — 16,9±0,1 экз., соответственно. ИИ у моллюсков Б. риЦи в подопытных биотопов, была в 2 раза ниже контрольных и не превышала — 2,3± 0,3 экз. на особь.
В конце июля, при двукратном внесении метальдегида (вторая декада) плотность популяции В.ГпШсит в подопытных биотопах была в 38 раз ниже контрольных - 1,7±0,1 экз., плотность популяции Б. риШ$ - в 80 раз - 0,3±0,2 экз/м1. ЭИ у моллюсков В. йШюшп и Э.рщпз развивающимися личинками мюллерий в подопытных биотопах была в 2 раза ниже контрольного, соответственно - 4,7±0,1 и 1,3 ±0,2%. Показатели ИИ у моллюсков В.ГгоИсшп подопытных биотопов в 1,8 раза ниже чем в контрольных - 10,3±0,2 экз., Б. риШэ в 2,8 раза - 1,8±0,3 экз. на особь.
В сентябре в подопытных биотопах, при однократном внесении моллюскоцида, плотность популяции В. Ргиисит была в 1,8 ниже чем в контрольном — 29,8±0,1 экз/м1, 5. рШпз в 2,8 раза - 20,3±0,3 экз/м1. Показатели ЭИ и ИИ моллюсков личинками мюллерий в подопытных и контрольных биотопах не имели резких различий. ЭИ у В.ГгиЦсит достигала 10,8±0,1...]6,7±0,1; З.риЬй - 4, 6*0,2 ...5,0±0,4%. ИИ у В.ГгиПсит -21,4±0,1...22,1 ±0,3; З.ритб - 7,4±0,2,..8,7±0,3 экз. на особь, соответственно. Влияние на плотность популяции моллюсков двукратного внесения метальдегида было значительным. Плотность популяции В. ОиНсит в подопытных биотопах снижалась в 8,8 раза - 6,2±0,1 экз/м1, Э. риШз в 16,8 раза - 3,4±0,2 экз/м1. Однако снижение показателей ЭИ моллюсков В. йийсит в подопытных биотопах не превысило 2,1 раза и составило — 8,0±0,1%, 5. рШлв в 1,8 раза — 2,8±0,2%. Уменьшение плотности популяции В. йгийсит, Б. ршш, несмотря на постоянное присутствие на пастбище инвазионного материала (личинок мюллерий I стадии), приводило к снижению не только ЭИ, но и ИИ их личинками. Так ИИ у В.йтШсит в подопытных биотопах, по сравнении с контрольными уменьшалась в 1,5 раза - 13,9±0,1 экз., 5.ри1ш в 3 раза — 2,9±0,2 экз. на особь.
Проведенный анализ эпизоотического процесса при мюллернозе мелкого рогатого скота позволил определить, что он имеет многофакторную
биологическую и экологическую надежность, обусловленную взаимодействием популяций паразита и хозяина, поэтому целесообразно воздействовать на него используя интегрированные методы борьбы. Специфичный сухопутный моллюск является объединяющим звеном существующей многочленной паразитарной системы «мюллерни - сухопутные моллюски — овцы, козы». Воздействуя на этот фактор можно ограничить течение эпизоотического процесса при мюллериозе во времени на определенной территории.
Для практического подтверждения выводов, полученных как в результате теоретического изучения вопроса, так и в ходе исследований и экспериментов, провели в естественных условиях работу по изучению эффективности применения усовершенствованных мер профилактики и борьбы с мюллериозом мелкого рогатого скота.
Под наблюдением были три однотипных пастбища с выпасающимися па них разными возрастными группами овец и коз — 303 головы. В марте с 2004 г все поголовье, кроме ягнят и козлят текущего года рождения дегельминтиз провал и ивсрсектом и аверсектом-2 в терапевтических дозах. В первой декаде апреля поголовье дегельминттировзпных животных обследовали, в целях выявления эффективности проведенной обработки. В третьей декаде апреля на выявленные биотопы с сухопутными моллюсками на 2 пастбищах вносили метальдегид 6% . Третье пастбище оставалось контрольным и моллюскоцид в течение пастбищного периода не вносили.
Эффективность интегрированных мер профилактики и борьбы с мюллериозом овец и коз определяли по результатам ежемесячных, гельм и птоларвос копическнх обследований от выпасавшихся животных разновозрастных групп. Одновременно, путем гельминтологических исследований легких от 3 голов в каждой возрастной группе в конце июля » при постановке на стойловое содержание (третья декада октября), определяли интенсивность мюллернозной инвазии по поражению легких (количеству паразитов в узелках легких).
Первые случаи заражения у всех взрослых коз на 3 пастбищах установлены через 52-54 дня от начала выпаса ( 2 декада июня). При этом ЭИ у коз 1...2 лет и взрослых, выпасавшихся на пастбище, где моллюскоцид не вносился, достигала 50-72,7%, соответственно. Внесение метальдегида (третья декада апреля) снизило иивазированиость у коз 1-2 лет до 10,5 - 16,6, у взрослых до 11,1 — 16,7%. Зараженных взрослых овец, в этот период, выявили только на пастбище, где моллюскоцид не вносили ( ЭП-13,3%). К концу июня отмечали рост ЭИ у коз 1-2 лет выпасавшихся на необработанных пастбищах до 75%, у взрослых до — 90,9%. На пастбищах, где моллюскоцид вносили показатели инвазированпости были в 2-2,5 раза ниже и составляли соответствен по, 22,2 и 33,3 %.
Зараженность ягнят, козлят на всех пастбищах выявлена в конце июля, при ЭИ у ягнят в контроле - 23,5, у козлят - 28,6%; ИИ у ягнят - 5,0±0,4; у козлят -19,3±0,2 экз. На пастбище, где моллюскоцид вносили в апреле, ЭИ у ягнят не
превышала — 8,3%, при ИИ - 3,0±0,1 экз. нематод в узелках в легких; у козлят -15,4%, при ИИ - 8,4±0,1 экз. Повторное, во второй декаде июля, внесение метальдегида снизило показатели ЭИ у ягнят до - 7,1%, у козлят еще значительнее до-9,1%, при ИИ у ягнят-2,0±0,1, у козлят — 3,3±0,2 экз.
Результаты опытов по учету ЭИ и ИИмюллсриямн у животных 1...2 лет и старше, на опытных пастбищах в июле, не имели резких отличий в зависимости от кратности внсссния моллюскоцнда, но значительно отличались от показателей зараженности овец и коз на контрольном пастбище.
ЭИ овец 1-2 лет выпасавшихся па контрольном пастбище достигала —33% (ИИ-11,6±0,3 экз.); ЭИ у коз - 100% (ИИ-36,8±0,4 экз.). ЭИ у взрослых овец 46,2% (ИИ - 28,0±О,2 экз.), у взрослых коз - 100% (ИИ - 96,7±0,3 экз.).
На пастбище, где моллюскоцид вносился однократно ЭИ у овец 1...2 лет не превышала 18,2% (ИИ- 5,2±0,3 экз.), у коз -22,2% (ИИ-10,2±0,3 экз.), ЭИ у взрослых животных была несколько выше у овец до — 26,7% (ИН-12,1±0,1 экз.), у взрослых коз до —41,2% (ИИ-29,6 экз.). При двукратном внесении метальдегида показатели ЭИ у овец 1-2 лет достигала -23,1%, однако ИИ снижалась до - 3,0±0,1 экз. мюллернй в узелках в легких, У коз данной возрастной группы также отмечено снижение ПН до — 9,7±0,2 экз, при ЭИ -36,8%. ЭИ у взрослых овец незначительно превышала показатели у молодняка (ЭИ-25,0%), при ИИ -10,0±0,1 экз. Двукратное внесение моллюскопида уменьшало зараженность взрослых коз (ЭИ - 41,7%, ИИ -26,3±0,2 экз.). Восстановление плотности популяций моллюсков — промежуточных хозяев мюллерий па пастбищах (июль), где метальдегид вносили однократно (третья декада апреля) определяло сближение показателей по ЭИ разных возрастных групп овец и коз в сравнении с контрольным пастбищем. Однако показатели ИИ животных мюллериями по их числу в узелках легких, при однократном внесении моллюскоцнда, ниже показателей инвазированиости овец и коз с контрольного пастбища.
В октябре, по результатам гельминтологических вскрытий легких от ягнят и козлят с контрольного пастбища (моллюскоцид не вносился) установлено, что ИИ у первых составляла-32,3±0,4 экз, у вторых - 58,7±0,3 экз. Показатели ЭИ были соответственно-42,9 и 100%
ЭИ у ягнят на пастбище, где 6% метальдегид вносили однократно (третья декада апреля) достигала — 44,4%, однако показатели ИИ не превышали -2б,0±0,1 экз. При ¡00% ЭИ у козлят, ИИ животных па данном пастбище была в пределах - 48,3±0,2 экз.
На пастбище, где моллюскоцид вносили двукратно (третья декада апреля, вторая декада июля) показатели ИИ ягнят были в 2,6 раза ниже, чем у животных, где моллюскоцид вносили однократно - 9,8±0,1 экз. (ЭИ-27,33%0, у козлят в 2,5 раза ниже -19,3±0,2 экз. (ЭИ-60%).
Зараженность овец 1-2 лет и взрослых — с контрольного пастбища, где моллюскоцид вносили однократно достигала 50%, при ИИ -б0,6±0,2 и 71,0±0,2 экз., соответственно. ЭИ у коз 1-2 лет и взрослых -100%, а НИ -95,7±0,1 и
97,6±0,3 экз., соответствен но. .Двукратное внесение 6% гранул метальдегнда снижало показатели ПИ мюллериямн в легких у овец и коз 1-2 лет, в сравнении с данными вскрытий легких животных выпасавшихся на контрольном пастбище в 2,6 раза, у взрослых овец в 2,8, а у взрослых коз в 2,6 раза.
Наряду с антгельмшпиками, рациональное использование моллюскоцндов в борьбе с гельминтозами передающимися через моллюсков, может оставаться одним из основных методов оказывающим быстрое влияние на экстенсивность и интенсивность инвазии в популяциях промежуточного и дефишггивного хозяина.
Выводы
1. Впервые изучен эпизоотический процесс при легочных нематодозая мелкого рогатого скота в Западном регионе РФ, изучены межпопуляцнонные и внутрипопуляционные взаимоотношения легочных нематод диктиокаул (О.Л)апа) и мюллерий (М.сарШапя) у различных видов хозяев с использованием системного подхода, что дало возможность на основе полученных данных и экспериментальных исследований, методических обобщений и концепций, проанализировать функционирование системы «паразит — хозяин» включающей паразита — нематод (М.сарШапз), сухопутных моллюсков — промежуточных хозяев и дефинитивных хозяев - овец, коз, изученных на основе современных методов математического моделирования, с учетом влияния факторов внешней среды, в трех агроклиматических районах Смоленской области.
2. Изменения численности личинок мюллерий I стадии на пастбищах, на первом этапе течения эпизоотического процесса при мюллериозе, доступны математическому описанию с достаточным уровнем вероятности, при этом количество личинок в 1 г. фекалий от овец, по прошествии 5 минут после дефекации, на пастбищах южного, центрального и северного агрорайонов увеличивается при начальных значениях скорости на 2,2,2,4 и 4,3 экз. в декаду, в фекалиях от коз напротив, уменьшается при начальных значениях скорости на 1,3, 4,3 и 2,4 экз. в декаду, соответственно. Уровень изменчивости количества личинок, обусловленный влиянием факторов внешней среды (особенно важна - капельная влага растений), в фекалиях от овец равен 14,8, 11,3 и 12,8%, в фекалиях от коз - 60,5, 55,8 и 62,5% соответственно. После пятидневного пребывания фекалии овец на пастбище, уровень измене! шй численности личинок снижался до 1,2, 1,0 и 1,7 экз. в декаду, в фекалиях от коз скорость уменьшения численности была еще значительнее — 1,7, 4,9 и 2,4 экз. личинок в декаду. Влияние факторов внешней среды на количество личинок в одном грамме фекалий от овец возрастало до 40,4 43Д и 64,2%, в фекалиях от коз на 89,0, 45,4 и 56,3 % в южном, центральном и северном агрорайонах, соответственно. Эпизоотическое значение личинок мюллерий I стадии в
фекальной кучке на пастбище как источника заражения промежуточного хозяина, сохранялась не более 5 дней.
3. Установлены 16 видов сухопутных моллюсков, обитающих на пастбищных биотопах области, относящихся к различным экологическим группам, участвующим в развитии личиночных стадий нематоды М.сарШапэ, обуславливающих эпизоотический процесс при мюллсриозс. Роль основных промежуточных хозяев — моллюсков, территориально связанных общими биотопами с пастбищами мелкого рогатого скота, выполняют психрофильныс (3.рЩп5) и мезофильные (В.Гги^сит, О.заш) виды моллюсков.
4. Заражение сухопутных моллюсков на пастбище происходит при наползапии их на фекальные массы от инвазированных животных, с момента вылупления моллюсков из яйцевых капсул н до окончания их жизни. Специфичность моллюсков — промежуточных хозяев мюллерий, определяется хемотаксисом к слизи «тела-подошвы», за счет которого у личинок мюллерий I стадии возникают вращательные движения до 45-48 об/мин на 360°С по часовой стрелке, с упором на шип хвостового конца чем и обуславливается проникающая способность личинок в железы «тела-подошвы» моллюсков.
5. Пространственная структура популяций паразита на личиночных стадиях обуславливается пространственной структурой популяции сухопутных моллюсков — промежуточных хозяев, что обеспечивает возникновение стойких локальных очагов паразита на пастбищах. В эксперименте (в лабораторных и полевых условиях), экстенсивность инвазии у выявленных промежуточных хозяев — сухопутных моллюсков составила - 100%, при интенсивности от б,0±0,3 до 48,0±0,6 экз. личинок в одной особи. В пастбищных биотопах в сентябре максимальная ЭИ отмечена у моллюска В.Лшкит - 17,0*1,8% при ИИ 26,0±1,8 экз. личинок на разных стадиях морфогенеза.
6. Впервые разработаны удобные и эффективные способы диагностики, как прижизненные, так и лабораторные, по обнаружению инвазнн на разных стадиях морфогенеза у сухопутных моллюсков - промежуточных хозяев мюллерий, позволяющие проводить гельминтологическую оценку пастбищ, прогнозировать и целенаправленно осуществлять методы профилактики гельминтоза — путем локального внесения моллюскоцидов.
7. На основании системного анализа взаимоотношений личинок мюллерий и сухопутных моллюсков - промежуточных хозяев, установлено, что моллюск эволюционно морфологически адаптирован к данной системе — «паразит-хозяин». В моллюске, в его теле — подошвенной части ноги, за счет аккумуляции (накопления) личинок на разных стадиях морфогенеза, увеличивается численность популяции паразита. На 26 день после однократной линьки, личинки достигают инвазионной стадии.
8. При гельминтологическом вскрытии легких ягнят первые случаи обнаружения узелков с мюллериями у животных в годы наблюдений в южном агроклиматическом районе отмечены 16-18 июля (ЭИ - 4%. ±0,1%; при ПИ -12,2*0,2 экз. нематод), в центральном 18-20 июля (ЭИ - 5,3±0,2%, при ИИ -
12,8±0,2 экз.нематод), в северном 22-24 июля (ЭИ-6,0±0,1%; при ИИ - 13,2±0,1 экз.нематод). У козлят в южном агроклиматическом районе 10-15 июля (ЭИ -11,9. 0,1%; ИИ-24,3 экз.нематод), в центральном - 12-16 июля (ЭИ-12,3±0,1%; ИИ - 28,2±0,1 экз.нематод), в северном 18-20 июля (ЭИ 1б,3±0,2%; ИИ-32,1±0,1 экз.нематод). В трех агроклиматических районах области личинки мюллерий 1 стадии в фекалиях козлят начинают обнаруживаться 27-29 июля, в фекалиях ягнят 28-30 июля.
9. Экстенсивность мюллериозной инвазии у ягнят в возрасте до одного года в южном агрорайоне достигала -23±0,2%, в центральном - 36,0±0,2% и северном — 42,0±0,2%. У животных от одного до двух лет - 36,0±0,12%, 54,0±0,1 л 58,4%, соответственио. У овец старше трех лет до 52,0±0,8% в южном и 68,8±0,2%; 80,4±0,4% в центральном и северном, соответственно. Зараженность коз в трех агроклиматических районах области за период наблюдений была 100%.
10. Установлено, что функционирование в системе «паразит — инвазионные личинки — дефинитивный хозяин - овцы, козы» поддается математическому анализу и позволяет изучить и прогнозировать процесс формирования узелков с мюллсриями в легких с учетом возрзста и внешних факторов среды. У ягнят, впервые попавших па пастбище, скорости образования узелков с нематодами были равны: 5,28; 6,84 и 6,89 экз., ежемесячно в южном, центральном и северном агрорайонах, соответственно. У козлят данные характеристики более значительны: 7,38; 14,68 и 25,80 экз., ежемесячно. При среднем количестве узелков в легких овец 1-2 пет не более 62,8 экз. отмечены самые низкие скорости их образования — 0,61 экз., ежемесячно. При максимальном, средне фактическом, количестве узелков в легких овец данной возрастной группы - 70,5 экз., скорости их образования не превышали — 1,25 экз., ежемесячно. У коз 1-2 лет, при среднем количестве узелков в легких от 72,82 до 92,01, скорости ежемесячного образования узелков в легких не превышали — 3,23-5,83 экз., ежемесячно. При достижении среднего количества узелков в легких коз 133,98., скорость их ежемесячного образования увеличивалась до 8,16 экз. У взрослых овец, старше 3 лет, при среднем количестве узелков в легких не более 100 экз., скорости их ежемесячного образования не превышали — 0,61 экз. При среднем количестве узелков с нематодами более 100 экз., скорости ежемесячного образования возрастали до 1,25 экз. У коз, данной возрастной группы, резкое снижение скорости образования узелков до 4,65 экз., ежемесячно, отмечалось если среднее их количество превышало — 150 экз.
11. Впервые в гельминтологии установлено эпизоотическое значение перезимовавших моллюсков с инвазионными личинками мюллерий, как источника весеннего заражения мюллериозом мелкого рогатого скота на пастбище. Получены результаты, на основе которых показана необходимость установления оптимального времени гельминтологического для обследования
пастбищ, внесения моллюскоцидов и определения наиболее рациональных сроков дегельминтизаций мелкого рогатого скота.
12. Установлено, что двукратное применение моллюскоцида (третья декада апреля, вторая декада июля) в форме 6% гранул метальдегида в дозе 30г/10 м1 биотопа на пастбищах с промежуточными хозяевами — сухопутными моллюсками снижало плотность популяции основных видов - B.fmticum и S.putris в 8 и 20 раз, интенсивность инвазии личинками мюллерий, на разных стадиях морфогенеза - в 4 и 2 раза, соответственно, а интенсивность мюллериозной инвазии в легких мелкого рогатого скота — в 2 раза (без применения антгельминтиков).
13. Ивсрсскт и аверсект-2 в форме 1% инъекционных растворов для овец в дозе 0,6 мг/кг по ДВ, для коз - 0,8 мг/кг по ДВ обладали высокими (100%) антгельмиптными свойствами при мюллериозе мелкого рогатого скота. Препараты хорошо переносились животными, удобны в применении. При дегельминтизации разновозрастных групп овец, коз в пастбищный период, личинок мюллерий 1 стадии в фекалиях не обнаруживали в течение 50-52 дней.
Практические предложения
Результаты данной работы послужили основой для разработки и внедрения в ветеринарную практику научно обоснованного комплекса мер по интегрированной пастбищной профилактике и борьбе с мюллсриозом и включены в методические рекомендации «Мюллер ноз овец и коз. Гельминтологическая оценка пастбищ. Профилактика н меры борьбы с гельминтозом», утвержденные Департаментом сельского хозяйства и ветеринарии по Смоленской области (30.09.2005 г.)
Материалы эколого-популяцио иного анализа нематоды М. capillar is, включающие 4 патента и одно положительное решение на изобретение, послужили научной основой при составлении «Методических рекомендаций по изучению жизненного цикла протостронгнлид на примере личиночных стадий Muellerius capillar is (Mueller, 1889) Cameron 1927», утвержденные PACXH, секцией «инвазионные болезни сельскохозяйственных животных» (27.02.2004
г.)
Теоретические положения диссертации и новые данные о характере взаимоотношении между хозяином и паразитом на популяционном уровне с учётом экологических факторов, которые определяют динамику развития популяций нематод D. iilaria, М. capillaris, поддержания их стабильности и регуляции их численности в промежуточном и дефинитивном хозяине, используются в учебном процессе ФГОУ В ПО «Смоленский сельскохозяйственный институт» по дисциплинам «Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных» и «Биология с основами экологии».
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Кротснков В.П. Среда и процессы самоорганизации отдельных популяций гельминтов // Ресурсосбережение н экологическая безопасность: матер. 11 междунар. науч.-пракг.конф. -Смоленск, 1999.-С.136-137.
2. Кротенков В.П. Эпизоотическая ситуация по легочным гельминтозам жвачных в Западной части Российской Федерации // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Матер, науч.-практ. конф./ Всеросс. о-ва гельминтологов. -М, 1999.-С. 135-136.
3. Кротенков В.П. Самоорганизация паразитарных систем отдельных легочных гельмннтозов жвачных; гипотеза// Проблемы сельскохозяйственного производства в изменяющихся экономических и экологических условиях: матер, междунар.иауч.-практ. конф. -Смоленск,) 999.-С.27-29.
4. Кротенков В.П, К экологии личинок мюллериусов на модели Helix pomatia//TaM же,- С.31-32.
5. Кротенков В.П. К биологии M.capillaris на модели Helix pomatia // Там же. -С.39-40.
6. Кротенков В.П. Распространение и экология легочных паразитов жвачных // Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных: матер, междунар. науч.-практ. конф. посвящ, 70-летию БелНИИЭВ. -Минск, 2000,-а 373-474.
7. Кротенков В.П. Морфология личинок Muellerius capillaris на разной стадии развития ti Наука и образование - возрождению сельского хозяйства России в XXI веке: матер, междунар. науч.-практ. конф. -Брянск, 2000. -С.331-332.
8. Кротенков В.П, Структура паразито-хозяиниых отношений при отдельных легочных гельмшггозах жвачных // Ученые записки Витебской академии вет. медицины. -Витебск, 2000,- Т.3б.-Вып.1.- С.43-45.
9. Кротенков В.П. Процессы самоорганизации на примере личиночных стадий нематоды Muellerius capillaris // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: матер, докл. науч.-конф. Вссрос. о-ва гсльмиитологов.-М.,2001С. 126-127.
10. Кротенков В.П. Мюллсриоз: эколого-эпизоотологические аспекты гельминтоза и прогноз развития личинок Muellerius capillaris // Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики, как основа улучшения продуктивного качества и здоровья сельскохозяйственных животных: Матер. I междунар. науч.-практ. конф. -Ставрополь, 2001. -С. 391-395.
11. Кротенков В.П. Аспекты эко лого-биологи ческой профилактики протостронгнлид на примере M.capillaris // Проблемы аграрной отрасли в начале XXI века: матер, междунар. науч.-практ. конф. -Смоленск, 2002.-Ч.1.С. 228-230.
12. Кротснков В.П. Мюллерноз овец и коз: вопросы эпизоотологии и профилактики // Сб. научн. трудов Смол. науч. исслед.вст.станции, посвящ. 70-летию деятельности. -Смоленск, 2002. ^С. 103-105.
13. Кротснков В.П. Функциональные и структурные связи при отдельных легочных гельминтозах жвачных И Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: матер, науч.-практ.-коиф. Всерос. о-ва гельминтологов.-М., 2002. -С. 175-177.
14. Кротенков В.П. Эпизоотический процесс и меры борьбы при мюллериозе в Центральной части России//Там же.- С. 178-180.
15. Кротенков В.П. К развитию личинок Мие11егш$ сарШапз в промежуточных хозяевах моллюсках // Тр. Всеросс. НИН гельмннтол. им. К.И.Скрхбина-2002.-Т.38.-С. 131-135.
16. Кротснков В.П. Легочные гельминтозы овец и коз Центральной части России // Ветеринария.- 2002 -№ 10.-С. 29-32.
17. Кротенков В.П. Эпизоотический процесс при мюллериозе животных в Центральной части России // Ветеринария.- 2003.-Л*г 3. -С. 33-37.
18. Кротенков В.П. Методы диагностики моллюсков на зараженность личинками мюллсрий // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: матер, науч.практ.-конф. Всерос. о-ва гсльмннтологов.-М., 2003.-С.207-209,
19. Пат. 2195873. Российская Федерация. Способ прижизненной диагностики на зараженность сухопутных моллюсков личинками мюллернй/. Кротенков В.П.; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Смоленский СХИ, -Лй 200128093; заявл. 09.11.2000; Опубл. 10.01.03.
20. Кротенков В.П. Состояние и прогноз развития легочных гельминтозов овец и коз: биология, эпизоотология, терапия и меры профилактики мюллсриоза // Овцы, козы и шерстяное дело.- 2004.-№1,- С.53-57.
21. Кротенков В.П. Личинки мюллсрий и промежуточный хозяин. Аспекты взаимодействия и развития до инвазионной стадии // Основные достижения, перспективы развития паразитологии: матер, между нар. науч.-практ. конф. ( ИП РАМ.-М, 2004. - С163-165.
22. Кротенков В.П. Протостронгилидозы мелкого рогатого скота в Смоленской области И Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения се качества: сб.науч. работ междунар. науч.-практ. конф. -Брянск. 2004,-С. 312-315.
23. Кротенков В.П. Эффективность авермсктинов при мюллериозе овец и коз // Там же.-С. 315-317.
24. Кротенков В.П. Метод выбора оптимального срока дегельминтизации при легочных протостронгилядозах овец и коз // Теория и практика борьбы с паразитарными болезням: матер, науч. -практ.-конф. Всерос. о-ва гельминтологов.-М., 2004.-С. 186-190.
25. Пат. 2236128. Российская Федерация. Способ определения специфичности промежуточного хозяина в цикле развития протостронгилид/.
Кротспков В.П., Горохов В.В.; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Смоленский СХИ, -Л5г 200120410; заявл. 20.07.2001; Опубл. 20.09.2004.
26. Пат. 2225167. Российская Федерация. Способ получения инвазионных личинок мюллернй/Кротенков В.П., Горохов В.В.; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Смоленский СХИ, -Ла 20011244103; заявл. 29.08.2001; Опубл. 10.03.2004.
27. Пат. 2236819. Российская Федерация. Способ диагностики на зараженность и определения инвазионного состояния личинок мюллерий в сухопутных моллюсках/Кротенков В.П.; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Смоленский СХИ, -№ 2002124188; заявл. 11.09.2002; Опубл. 27.09.2004.
28. Кротеиков В.П. Мюллериоз мелкого рогатого скота: математическая модель it Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями; матер, науч. -практ.-конф. Всерос. о-ва гельминтологов.-М., 2005. -С.185-187.
29. Кротенков В.П. Математическое моделирование фазы личинок мюллерий первой стадии во внешней среде К Актуальные проблемы и перспективы развития агропромышленного комплекса: матер, междунар. науч.-практ.конф. -Иваново, 2005. — C.I31-133.
30. Заявка на изобретение № 2005125191/13. Российская Федерация. Микрометрия гельминтов различных конфигураций / КротенковВ.П.; заявитель ФГОУ ВПО Смоленский СХИ; заявл. 09.08.2005;
31. Кротенков В.П. Хемотаксис личинок мюллерий I стадии, как метод определения специфичности промежуточного хозяина // матер, междунар. науч. -практ.-конф., посвящ. 75-летню Вятской гос. сельскохоз. академии.-Киров, 2005. -С.76-77.
32. Кротеиков В.П. Методы контроля моллюсков на зараженность личинками мюллерий // Доклады РАСХН.-2006 (в печати).
33. Кротенков В.П. Легочные моллюски - H.pomatia, Н.vulgaris, как модель экологических адаптации личинок мюллерий до инвазионного состояния // Тр, Всерос. НИИ гсльминтол. им. К.И. Скрябина.- 2006 (в печати).
Формат 60*84/16 Тир. 100 Зак. 2500. Печ. листов 2,5 Отпечатано в типографии ООО «Принт-Экспресс» Лиц. ПЛД № 71-38 от 07.09 99 г. г. Смоленск, проспект Гагарина, 21, т.: (4812) 32-80-70
-
Кротенков, Владимир Павлович
-
доктора ветеринарных наук
-
Санкт-Петербург, 2006
-
ВАК 03.00.19
- Биолого-экономические основы борьбы с нематодозами крупного рогатого скота в Тюменской области
- Паразитозы крупного рогатого скота и меры борьбы с ними
- Нематодозы крупного рогатого скота Среднего Предуралья и обоснование оптимальных схем дегельминтизаций
- Эпизоотологическая характеристика гельминтозов овец и меры борьбы с ними в Алтайском крае
- Эпизоотология стронгилятозов пищеварительного тракта овец и крупного рогатого скота в равнинной зоне Чеченской Республики и совершенствование мер борьбы с ними
