Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экологический аспект ферментативного гидролиза возобновляемого природного сырья (пивной дробины)

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кодитувакку Прасанна Анурада Диас Эдирисингхе

Введение.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1 Л. Экологические проблемы, возникающие при сжигании ископаемого топлива.

1ЛЛ. Исчерпание ископаемых топливных ресурсов.

1.1.2. Энергетика на ископаемом топливе - глобальное загрязнение.

1Л.З. Современное моторное топливо как источник загрязнения.

1Л.4. Влияние компонентов отработанных газов на организм человека

1Л.5. Основной вклад выбросов и вида хозяйственной деятельности в развитие парникового эффекта.

1Л.6. Отравление почв - следствие этилирования моторного топлива

1.2. Возможности использования растительной биомассы в качестве возобновляемого энергетического ресурса.

1.2.1. Виды и запасы целлюлозосодержащего растительного сырья.

1.2.2. Целлюлозосодержащие отходы как наиболее экономически выгодный энергоресурс.

1.3. Ферментативный гидролиз растительного сырья.

1.3.1. Ферменты, гидролизующие целлюлозу.

1.3.2. Основные компоненты целлюлозосодержащего сырья.

1.3.4. Структура, реакционная способность и физико-химические свойства целлюлозы.

1.3.5. Влияние предобработки на изменение реакционной способности целлюлозосодержащего сырья.

1.3.6. Изменение реакционной способности и физико-химических параметров при предобработке различными способами.

1.3.7. Ферментативный гидролиз и получение этанола из сахарных сиропов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследований.

2.2. Методы исследованиий.

2.2.1. Метод определения влажности сырья.

2.2.2. Методы определения химического состава пивной дробины.

2.2.2.1. Определение гемицеллюлозы:.

2.2.2.2. Определение смолы

2.2.2.3. Определение лигнина.

2.2.2.5. Определение целлюлозы.

2.2.3. Метод определения фракционного состава пивной дробины.

2.2.4. Метод проведения ферментативного гидролиза.

2.2.5. Определение глюкозы.

2.2.6. Определение активности грибных целлюлолитических ферментов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Биомасса отходов пивного производства как источник получения лигноцеллюлозных материалов.

3.2. Предобработка пивной дробины.

3.3. Ферментативный гидролиз пивной дробины.

3.3.1. Изучение динамики концентрации глюкозы, образующейся при ферментативном гидролизе пивной дробины в зависимости от способов ее предобработки.

3.3.1.1. Оценка концентрации глюкозы в сахарных сиропах, получаемых при ферментативном гидролизе нативной ячменной и рисовой дробины.

3.3.1.2. Оценка концентрации глюкозы в сахарных сиропах, получаемых при гидролизе измельченной ячменной и рисовой дробины.

3.3.1.3. Оценка концентрации глюкозы в сахарных сиропах, получаемых при ферментативном гидролизе дробленой ячменной и рисовой дробины.

3.3.1.4. Оценка концентрации глюкозы в сахарных сиропах, получаемых при ферментативном гидролизе ячменной и рисовой дробины, предобработанной экструзией.

3.3.2. Изучение влияния способов предобработки на скорость ферментативного гидролиза пивной дробины.

3.3.2.1. Оценка скорости протекания ферментативной реакции при гидролизе нативной ячменной и рисовой дробины.

3.3.2.2. Оценка скорости протекания ферментативной реакции при гидролизе измельченной ячменной и рисовой дробины.

3.3.2.3. Оценка скорости протекания ферментативной реакции при гидролизе дробленой ячменной и рисовой дробины.

3.3.2.4. Оценка скорости протекания ферментативной реакции при гидролизе ячменной и рисовой дробины, предобработанной экструзией.

3.3.3. Изучение влияния способов предобработки на глубину ферментативного гидролиза пивной дробины.

3.3.3.1. Оценка глубины гидролиза нативной ячменной и рисовой дробины.

3.3.3.2. Оценка глубины гидролиза измельченной ячменной и рисовой дробины.

3.3.3.3. Оценка глубины гидролиза дробленой ячменной и рисовой дробины.

3.3.3.4. Оценка глубины гидролиза ячменной и рисовой дробины, предобработанной экструзией.

3.3.4. Оценка характера ингибирования ферментных препаратов при гидролизе ячменной и рисовой дробины.

3.3.5. Определение общей целлюлазной активности ферментных пепаратов.

4. Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экологический аспект ферментативного гидролиза возобновляемого природного сырья (пивной дробины)"

Актуальность проблемы:

Одной из главных задач концепции устойчивого развития провозглашаемой конференций ООН "Окружающая Среда и Развитие" (Рио де Жанейро, 1992), является постепенная замена ископаемого топлива, которое при современном темпе добычи может исчерпаться в ближайшие 50-60 лет (Deleage J. P., Souehou С, 1987).

Сжигание ископаемого топлива приводит к рассеянию С02 в атмосфере, которое вызывает глобальные экологические проблемы такие как: парниковый эффект, глобальное изменение климата, потерю биологического разнообразия. Кроме того, загрязняющее вещества от сжигания ископаемого топлива вызывают региональные экологические проблемы: ухудшение здоровья людей, загрязнение водоемов и уменьшение плодородия почв

Современная тенденция отказа от экологически более рискованной атомной энергии стимулирует поиск альтернативных видов энергоресурсов. Поэтому необходимо обратить внимание на получение энергии на основе использования возобновляемых видов сырья.

Общие запасы на Земном шаре возобновляемого сырья, представляющего собой растительную биомассу, оцениваются в 800 млрд. тонн (для сравнения можно отметить, что запасы невозобновляемого ископаемого топлива составляют 900 млрд. тонн), причем ежегодно в

21 результате фиксации 10 кал солнечной энергии на земном шаре образуется примерно 50 млрд. тонн биомассы, а также накапливается 4-5 млрд. тонн отходов или вторичных продуктов промышленной и сельскохозяйственной переработки растений и древесины. Это показывает на потенциальную возможность использования возобновляемых видов энергоресурсов на растительной основе.

Глюкоза и другие моносахариды, получаемые в результате гидролиза природных полисахаридов (целлюлозы, гемицеллюлоз, крахмала) служат дешевым источником Сахаров для получения ценных продуктов. Особенно важной представляется возможность получения из глюкозы этанола с целью его использования в качестве моторного топлива (или добавки к традиционному жидкому топливу) для двигателей внутреннего сгорания.

Ферментативный способ получения моносахаридов во многом лишен недостатков, присущих способу, основанному на кислотном гидролизе, поскольку осуществляется в гораздо более мягких условиях по температуре, давлению и кислотности среды. Это требует значительно меньших расходов энергии, предотвращает деструкцию Сахаров и образование трудно утилизируемых отходов, снижающих биологическую ценность гидролизатов.

Целью данной работы является изучение возможности эффективной утилизации отходов пивного производства (ячменной и рисовой дробины).

В соответствии с целью данного исследования были поставлены и решены следующие задачи: определить химический состав нативной ячменной и рисовой дробины; осуществить предобработку сырья измельчением на вибромельнице (измельченная дробина), дроблением на дробильной установке (дробленая дробина) и экструзией и определить его фракционный состав по размерам частиц; изучить динамику концентрации глюкозы, образующейся при ферментативном гидролизе дробины в зависимости от способов предобработки; оценить влияние способов предобработки на скорость ферментативного гидролиза пивной дробины; оценить влияние способов предобработки на глубину ферментативного гидролиза пивной дробины; определить тип ингибирования и активность ферментов Asp mix В2000, целловиридина Г20х, В1 mix и АСЕ при гидролизе пивной дробины.

Научная новизна: В диссертации впервые разработана комплексная технология ферментативного гидролиза отходов пивного производства (ячменной и рисовой дробины), включающая следующие этапы:

- показано преимущество предобработки указанных отходов методом экструзии, позволяющим сократить время ферментативного гидролиза;

- впервые осуществлен ферментативный гидролиз ячменной дробины предобработанной методом экструзии в течение 14-16 часов при 90100% выходе глюкозы.

- впервые достигнута начальная скорость реакции для пивной дробины составляющая 12-14г/л.ч.

Практическая значимость работы:

Предложена безотходная технология ферментативного гидролиза пивной дробины. Предлагаемый биотехнологический процесс экологичен, так как включает использование концентрированных суспензий; характеризуется меньшей материалоемкостью, чем химические способы биоконверсии растительного сырья. Последние требуют жестких условий проведения и как следствие, дорогого корозионно-устойчивого оборудования, выдерживающего высокие давления и температуру.

Из 4-х изученных ферментных препаратов отобрали один, а именно Asp. mix В2000, позволяющий достичь за 14-16 часов 100% глубины ферментативного гидролиза ячменной дробины предобработанной методом экструзии. Таким образом, предлагаемый способ ферментативного гидролиза пивной дробины экономичен и позволяет утилизировать указанный субстрат наиболее эффективно, чем все предлагаемые способы (Синицын А. П., Клесов А. А., 1981, Tassinari et al, 1982).

Заключение Диссертация по теме "Экология", Кодитувакку Прасанна Анурада Диас Эдирисингхе

4. Выводы

1. Результаты анализа состава сырья указывает на принципиальную возможность использования биомассы пивной дробины для ферментативного получения глюкозы.

2. Изучение динамики накопления глюкозы показывает, что ячменная дробина и рисовая дробина лучше гидролизуется при применении ферментных препаратов Asp mix В2000 и В1 mix.

3. Показано, что максимальная глубина ферментативного гидролиза в течение 10ч инкубации (100%) препаратом Asp mix В2000 в соотношении ф/с 1:1 наблюдается при обработке экструзией ячменной дробины, а максимальная глубина гидролиза рисовой дробины достигает 69,1% путем ее измельчения и с ферментным препаратом целловиридина Г20х. Предобработка путем измельчения в дробильной установке показала максимальную глубину ферментативного гидролиза 66.6% для ячменной и 29.54% для рисовой дробины.

4. Впервые показана возможность 95-100% -ой конверсии целлюлозы ячменной дробины до глюкозы в течение 14-16ч.

5. Результаты анализа начальных скоростей реакции расщепления дробины показывают, что предобработка измельчением, дроблением и экструзией позволяет увеличить скорости ферментативной реакции и снять лаг-фазу.

6. Проведенное исследование показывает, что имеется существенная разница в реакционных способностях между ячменной и рисовой дробины.

7. Обоснована эффективность применения экологически безопасного метода экструзии, измельчения и дробления для предобработки ячменной и рисовой дробины.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кодитувакку Прасанна Анурада Диас Эдирисингхе, Москва

1. Артур Д. Реакции, инициированные излучением высокой энергии Целлюлоза и ее производные / Ред. Н. Байклз, JI. Сегал. М., 1974. Т. 2. С. 356-291.

2. Байклс Н, Сегал Л., М Целлюлоза и ее рпоизводные / Ред., 1974. Т. 1, 2.

3. Берлин А.Х., Тихомиров Д.Ф, Гутьеррес Б.Р., Гусаков А.В., Попова Н.Н., Синицын А.П. (1998) Оценка топоферментной активности целлюлаз и ксиланаз. Прикл. биохим. микробиол., т.34, N4, с.382-387.

4. Билай В. П., Билай Т. И, Мусич Е. Г.,Трансформация целлюлозы грибами. Киев, 1982. 295с.

5. Биотехнология. Принципы применения / под. Ред. И. Хиггинса, Д. Беста, Д. Джонса. М., 1988. 479с.

6. Блэквол Д. Влияние различных обработоек на микроструктуру целлюлозы // Целлюлоза и ее производные / Ред. Н. Байклз, JI. Сегал. М., 1974. Т. 1. С. 43-53.

7. Быков В. А., Манаков М.Н., Панфилов В.П., Свигцов А.А., Тарасова Н.В Биотехнология 5, Производства бельковых веществ. М., 1987, Высш. Школа, С- 140.

8. Варвикер Д.О. Набухание целлюлозы // Целлюлоза и ее производные / Ред. Н.Байклз, Л.Сегал. М., 1974. Т.1. С. 235-278.

9. Ю.Вудворд Д, Иммобилихованные клетки и ферменты. Методы под ред. Вудворда Д. М., 1988. 215с.

10. Г.П. Александрова, С. А. Медведева., Влияние ферментативного гидролиза на процесс органосольвентной делигнификации древесины осины "Химия в интересах устойчивого развития" т.7, № 6, 1999.

11. Глегг Р.Е., Ганг JL Дж., Бруэр Р. Дж. Функционирование целлюлозы //Целлюлоза и ее производные / Ред. Н. Байклз, JI. Сегал. М., 1974. Т. 1. С. 382-412.

12. Глобальное потепление, доклад Гринписа под Ред. Дж. Легетта, Изд. Московского Университета, М., 1993, С-271.

13. Грачева И. М. Гаврилова Н. Н., Иавнова Л. А. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и жиров. М., 1980. С. 83-90.

14. Гришутин С.Г., Гусаков А.В., Синицын А.П., Кричевский Г.Е., Тиматков А.Г., Барышева Н.В. (2000) Биоотварка хлопчатобумажных тканей. Текстильная химия, N2(18), с.65-70.

15. Гусаков А.В., Синицын А.П. (1998) О механизме действия ферментов-целлюлаз на текстильные материалы: взгляд энзимологов. Текстильная химия, N2(14), с.68-72.

16. Евилевич А. 3., Ахкмина А. И., Разкин М. Н. Безотходное производства в гидролизной промцышленности. М., 1982. С. 4-40.

17. Блинов И. П. Химия микробных полисахаридов. М., 1984. С.162.19.3оров И.Н., Дубасова М.Ю., Синицын А.П., Гусаков А.В., Митченко

18. А.А., Баразненок В.А., Гутьеррес Б., Попова Н.Н. (1997) Применение бицинхонинатного метода анализа восстанавливающих Сахаров для определения КМЦазной активности целлюлаз с использованием микроплашечного ридера. Биохимия, т.62, N7, с.826-832.

19. Калунянц К. А., Шаненко Е. Ф., Зайцева Л. В. Современные способы ферментативного гидролиза целлюлозосодержащих материалов // Итоги науки и техники . Сер. Хим. и технол. Пиш. Прод. М., 1988. Т. 7. 187 с.

20. Кастельянос О., Ермолова О.В., Синицын А.П., Попова Н.Н., Окунев

21. О.Н., Керне Г., Куде Е. (1995) Схема очистки ферментов целлюлазного комплекса Penicillium verruculosum, исследование их биохимических свойств и специфичности. Биохимия, т.60, N6, с.925-943.

22. Кастельянос О., Синицын А.П., Власенко Е.Ю., Кузнецов В.М. Реакционная способность древесины, предобработанной автогидролизом паровым взрывом, Прикл. биохимия и микробиол. -1994. - 30, N 4-5. - С. 721-727. - Рус.

23. Кастельянос О., Синицын А.П., Ермолова О.В., Попова Н.Н., Гутьеррес Б., Антонова В.А., Берлин А., Керне Г. (1995) Кинетические свойства индивидуальных компонентов целлюлазного комплекса Penicillium verruculosum. Биохимия, т.60, N10, с.1609-1617.

24. Каткевич Р.Г., Каткевич Ю.Ю.,Балоде Б.К. Ферментативный гидролиз полисахаридов древесины и соломы. 4. Повышение ферментативной гидролизуемости соломы путем обработки растворами NaOH и КОН при 120°С //Химия древесины. 1980. N 2. С. 85-88.

25. Клеесов А. А., Синицын А. П., Ковалев Г. В. и др. Влияние гамма облучения целлюлозы на эффективность ее ферментативного гидролиза . Роль степени полимеризации и кристалличности субстрата // ДАН. 1981. Т. 259, №6. С. 1495-1497.

26. Кленкова Н. И. Структура и реакционная способность целлюлозы. Д., 1970. 367 с.

27. Клесов А. А. Ферментативное превращение целлюлозы // Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. М.,1983. Т.1 .С. 63-150.

28. Клесов А. А., Митькевич О. В., Синицын А. П. и др. Роль активности иадсорбционной способности целлюлаз в эффективности ферментативного гидролиза аморфной и кристаллической целлюлозы // ДАН 1984. Т. 277, № 7. С. 999-1002.

29. Клесов А. А., Синицын А. П. Ферментативный гидролиз целлюллозы. IV. Влияние физико-химических и структурных факторов субстрата на эффективность ферментативного гидролиза //Биоорг. Химия. 1981. Т. 7, №12. С.1801-1812.

30. Клесов А.А. Ферментативное превращение целлюлозы в глюкозу // Введение в химическую энзимологию. М., 1983. С. 189-249.

31. Ковалев Г. В., Синицынн А. П., Вольф Е. Г. и др. Влияние гамма -облучения природных целлюлозосодержащих материалов на скорость ферментативного гидролиза // Биотехнология. 1987. Т. 3, № 3. С. 380385.

32. Колвин Дж. Р. Структура и образование целлюлозеых микрофибрилл // Целлюлоза и ее производные // Ред. Н. Байклз, JI. Сегал. М., 1974. Т. 2. С. 20-46.

33. Коллинз С. Освоение электростанций, работающих на биотопливе, сталкивается с временными трудностями SO Миров, электроэнерг. -1994, N 1. С. 41-44. - Рус.

34. Кононова М. М. Проблема почвенного гумуса и современные задачи его изучения. М., 1951. 250 с.

35. Максимов В. Ф., Вольф И.В., Яковлева О. И. Борьба с загрязнением окружающей среды в целлюлозно- бумажной промышленности М., 1970. 30 с.

36. Манн Д. Реакции дейтерироавния и тритирования цеелюлозы // Целлюлоза и ее производные / Ред. Н. Байклз, Л. Сегал. М., 1974. Т. 1. С. 91-166.

37. Непорожний П.С., Обрезков В.Н., Гидро-Электро- Энергетика. М., 1982. С-303.

38. Никитин В. М., Оболенская А. В., Щеголев В. П. Химия древесины и целлюлозы. М., 1978. 363 с.

39. Никитин Н.И. Химия древесины. М.,1962. 415 с.

40. Оболенская А Б, В. П. Щеголев, Г. JI. Аким, Э. Л. Аким, Н. JI. Коссович, И. Емельянова 3, Практические работы по хими древесины и целлюлозы. Изд. Лесная промышленность. Москва. 1965. А. Б. 412с.

41. Оболенская А.Б, 3. П. Ельницкая, А. А. Леонович. Лабораторные работы по химии древесины и целлюлозы. А. Б. Москва. Экология. 1991. 320. (after Berg et al ., Science, 184, 1974, p. 322).

42. Огарков В. П., Киселев О. И., Быков В. А. Биотехнологические направления использования растительного сырья // Биотехнология. 1985.№3. cl-15.

43. Ренненберг Р. Эликсиры жизни. Новейшие результаты в области исследований ферментов. М., 1987. 151с.

44. Роговин 3. А. Химия целлюлозы. М., 1972. 519 с.

45. Родионова Н. А. Ферментативное расщепление целлюлозы // Целлюлозы микроорганизмов / под ред. Кретовича В. Л. М.,1981. С. 440.

46. Рэуце К, С. Кырстя Борьба с загрязнением почвы, М., 1986.

47. Самуилов В.Д, Олескин А.В, Технологическая биоэнергетика. 1994. -189с.

48. Сассон А. Биотехнология : свершения и надежды. М., 1987. 411 с.

49. Сахаров И.Ю., Зоров И.Н., Синицын А.П. (1996) Выделение эндоглюканазы Penicillium verruculosum с помощью иммуноаффиннойхроматографии. Биохимия, т.61, N9, с. 1658-1663.

50. Синицин А. П., Е. И. Райнина, В. И. Лозинский, С. Д. Спасов Иммоболизованные клетки микроорганизмов, М., 1994. С 216-225

51. Синицын А. П., Клесов А. А. Влияние предобработки на эффективность ферментативного преврашения хлопкового линта /ЛТрикл. Биохим. Микробиол. 1981. Т. 17, вып. 5. С. 682-695.

52. Синицын А. П., Ковалев Г. В., Меса-Манреса С. П. и др. Сравнительное изучение влияния различных видов предобработки на скорость ферментативного гидролиза природных целлюлозосодержащих материаллов Химия древесины. 1984. №5. С. 60-71.

53. Синицын А. П., Леонова И. Л., Наджеми Б. и др. Срвнительный анализ реакционной способности целлюлозосодержащего сырья по отношению к ферментативному гидролизу // Прикл. Биохим. Микробиол. 1986. Т. 22, Вып. 4. С. 517-525.

54. Синицын А. П., Митькевич О. В. Различие в кинетических свойствах прочно и слабо адсорбирующихся на целлюлозе ферментов // Биотехнология. 1987. Т. 3, № 2. С. 227-233.

55. Синицын А. П., Митькевич О. В., Клесов А. А. Уменьшение реакционной способности и изменение физико- химических параметров целлюлозы в ходе ферментативного гидролиза // Биотехнология. 1987. Т. 3, № 5. С. 640-649.

56. Синицын А. П., Наджеми Б., Митькевич О. В. и др. Взаимное усиление гидролатического действия прочно ислабо адсорбирующихся целлюлазных препаратов // Прикл. Биохим. Микробиол. 1986. Т. 22. Вып.З. С. 333-336.

57. Синицын А.П, Райнина Е.И, Бачурин Г.П и др. Иммоболизованные клетки в биотехнологии. Пущино, 1987. 86-95.

58. Синицын А.П., Гусаков А.В., Черноглазое В.М. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов, 1995, Москва, Изд-во Моск. Ун-та.

59. Синицын А.П., Черноглазов В.М., Гусаков А.В. Методы изучения и свойства целлюлолитических ферментов. Итоги науки и техники, Сер. "Биотехнология", т.25, 1990 (1-е изд.), 1993 (2-е изд.), Москва, Изд-во ВИНИТИ.

60. Сихтола X., Макконен X. Целлюлоза // Химия древесины / Ред. В.Йенсен., М., 1982. С. 96-129.

61. Скомаровский А.А., Зоров И.Н., Гришутин С.Г., Марков А.В., Синицын

62. A.П., Гусаков А.В., Рябов А.Д., Гнеденко Б.Б. (2000) Электрохимическое определение эндодеполимеразной активности целлюлаз. Биохимия, т.65, N10, с. 1415-1420.

63. Тиунова Н. А. Применение целлюлоз // Целлюлозы микроорганизмов /Под ред. В. Л. Кретовича. М., 1891. С.40-73.

64. Трипп В. У. Определение кристалличности целлюлозы // Целлюлоза ее производные / Ред. Н. Байклс, Л. Сегал. М., 1974. Т. 1. С. 214-235.

65. Химия древесины / Под ред. Б.Л.Браунинга. М., 1967. 400с.

66. Шарков В. И., Куибина Н. И., Соловьева Ю. П. и др. Количественный и химический анализ растительного сырья. М., 1971. 203 с.

67. Шестрем Э., Малинен Р., Наленнус И. и др. Химические процессы, происходящие при варке целлюлозы // Химия древесины / Под ред.

68. B.Йенсена. М., 1982. С. 221-252.

69. Экспериментальные методы в адсорбции и газовой хроматогрфии / Ред.

70. А. В. Киселев, В.П. Древинг. М., 1973. С. 214-216. 70.Эллефсен И., Теннесен Б. Полиморфные модификации целлюлозы // Целлюлоза и ее производные / Ред. Н. Байклз, Л. Сегал. М., 1974. Т. 1.1. C. 154-182.

71. Woodward Jonathan, Stephan Lynette M., Koran Laurence J., Wong Ken K.Y., Saddler John N. Enzymatic separation of high-quality uninked pulp fibers from recycled newspaper Bio/Technology. 1994. - 12, N 9. - C. 905

72. Basshsem J. A. Cellulose as a chemical resources. General consideration //Biotechnol. Bioeng. Symp. 1975. Vol. 5. P. 9-20.;

73. Bungay H. R. Energy : The biomass options. New York, 1981. 347 p.;

74. Castellanos, O.F., Sinitsyn, A.P., Vlasenko, E.Yu. (1995) Comparative evaluation of hydrolytic efficiency toward microcrystalline cellulose of Penicillium and Trichoderma cellulases. Bioresource Technol., v.52, pp.119124.;

75. Castellanos, O.F., Sinitsyn, A.P., Vlasenko, E.Yu. (1995) Evaluation of hydrolysis conditions of cellulosic materials by Penicillium cellulase. Bioresource Technol., v. 52, pp.109-117.;

76. SO.Chakpuray M.M.,Lee Y.-H., Fan L.T. Structural modification of lignocellulosics by pretreatments to enhance enzymatic hydrolysis // Biotechnol. Bioeng. 1983. Vol. 25. P. 157-172.;

77. Chang M.,Chou Т., Tsao G.T. Structure, pretreatment and hydrolysis of cellulose//Bioenergy/ Ed.A.;

78. Chromy. V., Voznicek, J., Fischer, J.: Biochem. Clin. Bohemoslov. 10.123(1981).;

79. Compagno C., Tura A., Ranzi B.M., Martegani E. Saccharomyces cerevisiae. Production of fructose diphosphate by bioconversion of molasses with Saccharomyces cerevisiae cells, Biotechnol. Lett. 1992. - 14, N 6. - C. 495498. - ISSN 0141-5492.;

80. Cowling E. B. Physical and chemical constraints in hydrolysis of cellulose and lignocellulosic material // Biotechnol. Bioeng. Symp. 1975. No. 5. P. 163-181.;

81. Deleage J. P., Souehou С Enerhy an interdiciplinary theme for environmental education. UNESCO-UNEP International Environmental Education.;

82. Development of biomass applied technology // Technocrat. 1984. Vol. 17. P. 15-26.;

83. Environmental Protection Agency, США, 1994.;

84. Eriksson К. E. Advances in enzymatic degradation of lignocellulosicmaterials//Proc. Int. Symp. On Ethanol, Canada. 0ct.l982.p.345-370.;

85. Fan L. Т., Lee Y. R., Beardmore D. H. Mechanism of the enzymatic hydrolysis of cellulose : effect of major structural features of cellulose on enzymatic hydrolysis // Biotechnol. Bioeng.1980. Vol. 22. P. 179-188.;

86. Farid M.A., Sharer M.H., El-Diwany A.I. Effect of peracetic acid sodium hydroxide and phosphoric acid on cellulosic materials as a pretreatment for enzymatic hydrolysis // Enzyme Microb. Technol. 1983. Vol. 5. P. 441-444.;

87. Ferrari M.D., Neirotti E., Albornoz C., Saucedo E. Ethanol production from eucalyptus wood hemicellulose hydrolysate by Pichia stipitis, Biotechnol. and Bioeng. 1992. - 40, N 7. - C. 753-759. - ISSN 0006-3592.;

88. Fischer, J., Chromy, V., Voznicek, J.: Biochem. Clin. Bohemoslov. 10.48(1981).;

89. Fitchter. Berline, Heidelberg, New York. 1981.p.l5-32.;

90. Fontes C.M.G.A., Hall J., Hirst B.H., Hazlewood G.P., Gilbert H.J. The resistance of cellulases and xylanases to proteolytic inactivation SO Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1995. - 43, N 1. - C. 52-57. - ISSN 0175-7598.;

91. Fumi M.D., Ragg E., Battistotii G., Colagrande O. Alginate immobilized Saccharomyces cerevisiae cell alterations during alcoholic fermentation Ital. J. Food Sci. 1994. - 6, N 3. - C. 325-338. - ISSN 1120-1770.;

92. Gao Dawei, Chen Manxiang, Liang Hong, Min Yaguang, Li Guoji, Huanan ligong daxue xuebao. Ziran kexue ban = J. S. China Univ. Technol. Natur. Sci. 1994. - 22, N 1. - C. 70-74. - ISSN 1000-565X.;

93. Gharpuray M. M., Lee Y. H., Fan L. T. Structural modification of lignocellulosics by pretreatments to enhance enzymatic hydrolysis // Biotechnol. Bioeng. 1983. Vol. 25. P. 157-172.;

94. Ghose Т. K. Cellulase biosynthesis and hydrolysis of cellulose substances // Adv. Biochem. Eng. Berlin, Heidelberg, 1977. Vol. 6. P. 39-48.;

95. Ghose Т. К., Das К. Economic evaluation of enzymatic utilization of waste cellulosics //Adv. Biochem. Eng. 1971. Vol. l.P. 55-76.;

96. Godia F, Casas C, Sola C, Pros.Biochem., 1987, №4, 43-48.;

97. Goel Anuj, Nene Sanjay A novel cyclomaltodextrin glucanotransferase from Bacillus firmus that degrades raw starch SO Biotechnol. Lett. 1995. -17, N 4. - C. 411-416. - ISSN 0141-5492.;

98. Goel S.C., Ramachandran K.B. Studies on the adsorption of cellulase on lignocellulosics// J. Ferment. Technol. 1983. Vol. 61. P.281-286.;

99. Goodwin Douglas C., Aust Steven D., Grover Thomas A. Evidence for veratryl alcohol as a redox mediator in lignin peroxidase-catalyzed oxidation, Biochemistry. 1995. - 34, N 15. - C. 5060-5065. - ISSN 0006-2960.;

100. Grethlein H. Pretreatment for enhancement hydrolysis of cellulosic biomass // Biotechnol. Adv. 1984. Vol. 2. P. 43-62.;

101. Gusakov, A.V., Berlin, A.G., Popova, N.N., Okunev, O.N., Sinitsyna, O.A., Sinitsyn, A.P. (2000) A comparative study of different cellulase preparations in the enzymatic treatment of cotton fabrics. Appl. Biochem. Biotechnol., v.88, pp.119-126.;

102. Hattori Ikuo, Kumai Sumio, Fukumi Ryouhei, Bayorbor Thomas B. The effect of some additives on aerobic deterioration of corn silage, Nihon chikusan gakkaiho = Anim. Sci. and Technol. 1994. - 65, N 6. - C. 547-550.-ISSN 0021-5309.;

103. Horstmann B. J., Kennedy C. N., Chase H. A. Adsorption of proteins on Sephrose affinity adsorbents of varying particle site // J. Chromatogr. 1986. Vol. 361. P. 179-190.;

104. Hubbert, Resources and Men, 1969, Ac. Sci. U. S. , Freeman (ed.), p. 196.;

105. Inamdar Shashank Economics of molasses to ethanol in India: Pap.) 15th Symp. Biotechnol. Fuels and Chem., Colorado Springs, Colo, May 10-14, 1993, Appl. Biochem. and Biotechnol. A. 1994. - 45-46. - C. 723-725. -ISSN 0273-2289.;

106. Jana Swapan K., Ghosh Vinay K., Singh Ajay., Production and hydrolytic potential of cellulase enzymes from a mutant strain of Trichoderma reesei, Biotechnol. and Appl. Biochem. 1994. - 20, N 2. - C. 233-239. - ISSN 0885-4513.;

107. Jones Alison M., Ingledew W.M. Fuel alcohol production: Optimization of temperature for efficient very-high-gravity fermentation SO Appl. and Environ. Microbiol. 1994. - 60, N 3. - C. 1048-1051. - ISSN 0099-2240.;

108. Joutz Frederik L. Biomass fuel supply: A methodology for determining marginal costs, Bioresour. Technol. 1992. - 39, N 2. - C. 179-183 - ISSN 0960-8524.;

109. Kahlon S.S., Neeraj K., Kalra K.L., Grewal H.S. Bioconversion of rice straw into feed J. Res. / Punjab Agr. Univ. 1990. - 27, N 3. - C. 447-456. -ISSN 0048-6019.;

110. Kamakura M., Kaetsu I. Radiation degradation and the subsequent enzymatichydrolysis of waste papers // Biotechnol. Bioeng. 1982. Vol. 24. P. 991-997.;

111. Kelsey R. G., Shafizadeh F. Enhancement of cellulose assessibility and enzymatic hydrolysis by simultaneous wet milling // Biotechnol. Bioeng. 1980. Vol. 22. P. 1025-1036.;

112. Kitts W. D., Krishnamurpi J. A., Shaltord J. A. Et al. Use of wood andwoody by- products as a source of energy in beef cattle rations // Cellulases and their applications. Washington, 1969. P. 279-297.;

113. Klyosov A. A., Mitkevich O.V., Sinitsyn A. P. Role of the activity and adsorption of cellulases in the efficiency of the enzymatic hydrolysis // Biochemistry. 1986. Vol. 25. P. 540-542.;

114. Knappert D., Grethlein H., Converse A. Partial acid hydrolysis of cellulose materials as a pretreatment for enzymatic hydrolysis // US/USSR Enzyme Engineering Conf. New Orleans, 1978. P. 403-419.;

115. Kovalef G. V., Sinitsyn A. P., Volf E. G. Et al . Enzymatic conversion of irradiated cellulosic materials // Brit. Polym. J. 1987. Vol. 19. P. 63-66.;

116. Kumakura M., Kojima Т., Kaetsu I. Pretreatment of lignocellulosic wastes by combination of iarradiation and mechinical crashing // Biomass. 1982. Vol. 2. P. 299-308.;

117. Ladish S.R., Ladish C.E., Tsao G.T. Cellulose to sugar: new path gives quantitative yield // Sciens. 1978. Vol. 201. P. 743-745.;

118. Lawford Hugh G., Rousseau Joyce D. Escherichia coli. Fuel ethanol from com residue prehydrolysate by a patented ethanologenic Escherichia coli В Biotechnol. Lett. 1992. - 14, N 5. - C. 421-426. - ISSN 0141-5492.;

119. Lee Y. H., Fan L. T. Kinetic studies of enzymatic hydrolysis of insolublecellulose : analysis of the inintial rate // Biotechnol. Bioeng. 1982. Vol. 24. P. 2306-2383.;

120. Lin J. K., Ladisch M. R. Petterson J. A. et al. Determining pore size distribution in wet cellulose by measuring soluble exclusion using a differential refractometer // Biotechnol. Bioeng. 1987. Vol. 29. P. 976-981.;

121. Lin K. W., Ladish M. R. Effect of pretreatment and fermentation on pore size in cellulose materials // Biotechnol. Bioeng. 1985. Vol. 27. P. 14271433.;

122. Lin K.W., Ladish M.R. Effect of pretreatments and fermentation on pore size in cellulose materials// Biotechnol. Bioeng. 1985. Vol.27.P. 1427-1433.;

123. Linko M. Cellulose hydrolysis // Adv. Biochem. Eng. Berlin, Heidelberg. 1977. V. 5. P. 27-42.;

124. Lynd L.R., Grethlein H.E. Hydrolysis of dilute acid pretreated mixed hardwood and purified microcrystalline cellulose by cell-free broth from Clostridium thermocellum 11 Biotechnol. Bioeng. 1987. Vol. 29. P. 92-100.;

125. MacDonald D.G., Bacshi N.N., Matheys J.F. at al. Alkali treatment of corn stover to improve sugar production in enzymatic hydrolysis // Biotechnol. Bioeng. 1983. Vol. 25. P. 2067-2076.;

126. Madamwar Datta, Patel Anami, Patel Vikram, Shastri N.V. Effect of mixture of surfactants and adsorbents on anaerobic digestion of water hyacinth-cattle dung Appl. Biochem. and Biotechnol. 1992. - 36, N 3. - C. 163-169. - ISSN 0273-2289.;

127. Madan Patrabansh S. The microbial conversion of different agricultural residues and its biological efficiency, Acta biotechnol. 1995. - 15, N 1. - C. 131-135.-ISSN 0138-4988.;

128. Martinez M.J., Munos C., Guillen F., Martinez A.T. Pleurotus eryngii. Studies on homoveratric acid transformation by the ligninolytic fungus Pleurotus eryngii Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1994. - 41, N 5. - C. 500-504. - ISSN 0175-7598.;

129. Neilson N. G., Kelsey R. G., Shafizadeh F. Enhancement of enzymatic hydrolysis by simultaneous attrition of cellulosic substrates // Biotechnol. Bioeng. 1982. Vol. 24. P.293-304.;

130. Petterson N., Mederos J., Mandels M. Absorption of Trichoderma cellulase on cellulose// Bitechnol. Bioeng. 1977. Vol. 19. P. 1091-1094.;

131. Ranby B.G. Celluloses and their applications. Washington. 1969. P. 139210.;

132. Rolz C., Arriola J., Villadares J. At al. Effect of some physical and chemical pretreatments on the composition, enzymatic hydrolysis and digestibility of lignocellulosic sugar cane residue // Process Biochem. 1987. Vol. 2. P. 17-23.;

133. Ruang A.A. Kinetic studies on insoluble cellulose- cellulase systems // Biotechnol. Bioeng., 1975. Vol. 17. P. 1421-1433.;

134. Rye D. D. Y., Lee S. В., Tassinari T. et al. Effect of compression milling on cellulose structure and on enzymatic hydrolysis kinetics // Biotechnol. Bioeng. 1982. Vol. 24. P. 1047-1067.;

135. Ryu. D., Mandels M. Cellulases: biosynthesis and applications// Enzyme Microb. Technol. 1980. Vol.2. P.91-102.;

136. Saddler J. N., Hogan С. M., Mes-Hartree M. Substrate effects limiting the efficiency of enzymatic hydrolysis of cellulose // Biotechnology in the Pulp and Paper Industry. The Third Int. Conf. Stockholm. 1986. P. 96-98.;

137. Samejima H, Nagashima M, Azuma M et.al. Enzyme Engneering, 434, 1984,394-405.;

138. Sasaki Т., Tanaka Т., Nanbu N. Et al. Correlation between X- ray diffraction measurements of cellulose crystalline structure and the susceptibility to microbial cellulase // Biotechnol. Bioeng. 1979. Vol. 21 . P. 1031-1042.;

139. Sasaki Т., Tanaka Т., Nanbu N. Et al. Correlation between X- ray diffraction measurements of cellulose crystalline structure and the susceptibility to microbial cellulase // Biotechnol. Bioeng. 1979. Vol. 21. P. 1031-1042.;

140. Schefner D.W., Tolado R.T. Cellulase production in continuous culture by Trichoderma reesei on xylose-based media, Biotechnol. and Bioeng. -1992. 39, N 8. - C. 865-869. - ISSN 0006-3592.;

141. Selvam P.V.P., Ghose Т.К., Ghose P. Catalytic solvent delignification of agrocultural residues: inorganic catalysis // Process Biochem. 1983. May / June. P.13-15.;

142. Shewale J. G., Sadana J. C. Enzymatic hydrolysis of cellulosic materials by Sclerotium rolfsii culture filtrate for sugar production // Can. J. Microbiol. 1979. Vol. 25. P. 773-783.;

143. Sinitsyn, A.P., Gusakov, A.V., Grishutin, S.G., Sinitsyna, O.A., Ankudimova, N.V. (2001) Application of microassays for investigation of cellulase abrasive activity and backstaining. J. Biotechnol., v.89, Nos. 2-3, pp. 233-238.;

144. Stone J. E., Scallan A. M., Donefer E. Et al. Celluloses and their application. Washington. 1969. P. 219-233.;

145. Tanaka M., Taniguchi M., Morita T. et al. Effect of chemical treatment on solubilization of crystalline cellulose wastes with Pellicularia filamentose cellulase //J. Ferment. Technol. 1979. Vol. 57. P.l 17-123.;

146. Tanaka M., Taniguchi M., Morita T. et al. Effect of chemical treatment on solubilization of crystalline cellulose wastes with pellicularia filamentose // J. Ferment. Technol. 1979. Vol. 57. P. 117-123.;

147. Tanaka Norifumi, Akamatsu Yasumi, Hattori Takefumi, Shimada Mikio. Effect of oxalic acid on the oxidative breakdown of cellulose by the Fenton reaction, Wood Res. 1994, N 81. - C. 8-10. - ISSN 0049-7916.;

148. Tanaka Osamu, Kimura hidetoshi, Takahashi Eiji, Ogata Seiya, Ohmomo

149. Sadahiro Screening of lactic acid bacteria for silage inoculants by using a model system of silage fermentation, Biosci., Biotechnol. and Biochem. -1994. 58, N 8. - C. 1412-1415. - ISSN 0916-8451.;

150. Tassinari Т. H., Macy C. F., Spano L. A. Technology advances for continuous compression milling pretreatment of ligno- cellulosics for enzymatic hydrolysis // Biotechnol. Bioeng. 1982. Vol. 24. P. 1495-1505.;

151. Tassinari Т., Macy C., Spano L. Et al. Energy requirements and processing considerations in compression- milling pretreatment of cellulosic wastes for enzymatic hydrolysis // Biotechnol. Bioeng. 1980. Vol. 22. P. 1689-1705.;

152. Tassinari Т., Mascy C. Differential speed two roll mill pretreatment of cellulosic materials for enzymatic hydrolysis // Biotechnol. Bioeng. 1973. Vol. 19. P. 1321-1929.;

153. Thomas Daniel R., Carswell Kathleen S., Georgiou George., Phanerochaete chrysosporium. Mineralization of biphenyl and PCBs by the white rot fungus Phanerochaete chrysosporium, Biotechnol. and Bioeng. -1992. 40, N 11. - C. 1395-1402. - ISSN 0006-3592.;

154. Trinder. P.: Ann. Clin. Biochem.6.24(1969).;

155. Uma L., Kalaiselvi R., Subramanian G. Isolation of a lignolytic bacterium for the degradation and possible utilizatoin of coir waste, Biotechnol. Lett. -1994. 16, N 3. - C. 303-308. - ISSN 0141-5492.;

156. Wang Ping, Brenchley Jean E., Humphrey Arthur E. Screening