Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Динамика формирования паразитоценозов в кишечнике шмелей Bombus terrestris при нозематозе и коррекция их биологически активными препаратами

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Динамика формирования паразитоценозов в кишечнике шмелей Bombus terrestris при нозематозе и коррекция их биологически активными препаратами"

На правах рукописи

ЕМАРОВА

Екатерина Евгеньевна

ДИНАМИКА ФОРМИРОВАНИЯ ПАРАЗИТОЦЕНОЗОВ В КИШЕЧНИКЕ ШМЕЛЕЙ BOMBUS TERRESTRIS ПРИ НОЗЕМАТОЗЕ И КОРРЕКЦИЯ ИХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ

Специальности: 03.00.19. - паразитология;

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Иваново - 2004

Работа выполнена на кафедрах микробиологии и эпизоотологии, паразитологии ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия», в лаборатории шмелеводства ФГУП «Совхоз Тепличный» Ивановской области.

Научные руководители:

- доктор ветеринарных наук, профессор Гудкова Алла Юрьевна

- доктор биологических наук Ащеулов Василий Иванович

Официальные оппоненты:

- доктор ветеринарных наук Кузьмичев Василий Витальевич

- доктор медицинских наук, профессор Сотннкова Наталья Юрьевна

Ведущее учреждение: Научно-исследовательский ветеринарный институт зоны РФ

Защита диссертации состоится ЛЯсиЛ&ЯШг. в 10е3 часов на заседании диссертационного совета Д 220.029.01 в ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия». С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ивановская ГСХА» (адрес: 153012, г.Иваново, ул.Советская, 45).

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного доцент

С.В.Егоров

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность темы. В технологии получения высоких урожаев сельскохозяйственных культур открытого грунта шмели рода Bombus играют весьма важную роль, осуществляя активное опыление многих растений. В последние годы шмелей рода Bombus начали круглогодично выращивать в лабораторных условиях для опыления ими сельскохозяйственных растений (томатов, перцев, баклажанов и др.) закрытого грунта, что дает надбавку урожая до 15-20% (В.И.Ащеулов, 2002).

В настоящее время в РФ и других странах мира более 25 фирм занимаются лабораторным разведением шмелей Bombus terrestris, которые ежегодно производят около 1 млн. семей. Однако при круглогодичном лабораторном разведении шмелей Bombus terrestris у них часто возникают инфекционные и инвазионные болезни, которые нередко приводят к гибели насекомых и снижают экономические показатели тепличных хозяйств (В.И.Ащеулов, 2002). В связи с этим остро стоит вопрос выяснения этиологических факторов заразных болезней шмелей, разработки методов диагностики и мер борьбы с ними в лабораториях по круглогодичному разведению этих полезных насекомых.

Цели н задачи исследований. Целью нашей работы являлась разработка методов профилактики ассоциативного заболевания, вызываемого паразитирова-нием Nosema bombi и бактерий, у шмелей Bombus terrestris в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта. Для чего необходимо было:

- определить динамику микрофлоры кишечника у клинически здоровых шмелей Bombus terrestris в естественной популяции в различных регионах Европы и при круглогодичном лабораторном разведении их;

- определить зараженность шмелей Bombus terrestris в естественной популяции в различных регионах Европы и в условиях круглогодичного лабораторного разведения их паразитами Nosema bombi;

- изучить динамику формирования микропаразитоценозов в кишечнике шмелей Bombus terrestris при нозематозе;

- разработать комплексный метод терапии шмелей B.terrestris при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием Nosema bombi и бактерий.

Научная новизна. Впервые определено, что микрофлора кишечника у шмелей Bombus terrestris в естественной популяции в различных регионах РФ и завезенных из Голландии представлена 42 видами, в том числе микробами из родов Lactobacterium, Bifidobacterium, Bacteroides (до вида не определяли), анаэробами из рода аэробами Proteus (до вида не определяли), грибами из родов Mucor, (до вида не определяли), в том числе непатогенными — 19 и патогенными — 23 видами. Наибольшее число видов (31), в т.ч. патогенных видов (19) микробов встречается в кишечнике шмелей Bombus terrestris в естественной популяции Краснодарского края, умеренное число — в Ярославской области (24 и 11 видов), Костромской области (26 и 12 видов), наименьшее число -у завезенных их Голландии (20 и

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

Установлено, что в естественной популяции шмели Bombus terrestris инва-зированы Nosema bombi на 16,77%, наивысшая ЭИ регистрируется у шмелей в центральном районе Нечерноземной зоны Российской Федерации (Владимирская, Ивановская, Костромская, Ярославская области, ЭИ=20,2б-21,60%). Выявлено, что при инвазии Nosema bombi в кишечнике шмелей формируется микропарази-тоценоз, где преобладающими являются патогенные Staph. aureus, Staph. albus, Staph. muscae, Staph. epidermidis, E.coli, Strept. apis, в результате чего возникает ассоциативное заболевание протозойно-бактерийной этиологии. Разработан комплексный метод терапии шмелей при данной болезни, включающий применение химических препаратов и антибиотиков.

Практическая значимость работы. Научные разработки автора вошли в «Рекомендации по профилактике паразитарных и ассоциированных заболеваний шмелей Bombus terrestris (L.) в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта» (одобрены РАСХН 25 мая 2001г.), «Рекомендации по профилактике инфекционных болезней B.terrestris в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта» (одобрены РАСХН, 2002 г.).

Апробация работы. Основные положения диссертации изложены и одобрены на: научных конференциях ВОГ РАН (Москва, 2002, 2004), научных конференциях Ивановской ГСХА (2004), Костромской ГСХА (2004).

Основные положения выносимые на защиту:

- микрофлора кишечника клинически здоровых шмелей Bombus terrestris в естественных популяциях 6 регионов РФ, а также завезенных из Голландии;

- микрофлора кишечника клинически здоровых шмелей Bombus terrestris при круглогодичном лабораторном разведении их;

- зараженность шмелей Bombus terrestris Nosema bombi в естественных популяциях регионов РФ и завезенных из Голландии;

- микрофлора кишечника шмелей Bombus terrestris при нозематозе;

- комплексное лечение шмелей Bombus terrestris при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием в кишечнике Nosema bombi и бактерий, при лабораторном разведении насекомых.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 4 статьи, которые отражают основное содержание работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 110 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических Работа иллюстрирована 10 таблицами, 10 рисунками. Список литературы включает 142 источника, из них 60 отечественных, 82 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работу выполнили в 1999-2003 гг. на кафедрах микробиологии и эпизоотологии; паразитологии ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия», в лаборатории шмелеводства ФГУП «Совхоз Тепличный» Ивановской области. Для изучения состава микрофлоры материалом для исследо-

ваний служило содержимое кишечника клинически здоровых маток, рабочих особей и трутней шмелей Bombus terrestris, выловленных из естественных популяций Владимирской (47 экз.), Ивановской (108 экз.), Костромской (38 экз.), Смоленской (32 экз.), Ярославской (32 экз.) областей, Краснодарского края (38 экз.), а также завезенных из Голландии (23 экз.). Кроме того, бактериологическому исследованию подвергли (106 экз.) шмелей Bombus terrestris из лаборатории шмеле-водства ФГУП «Совхоз Тепличный», у которых в поведении отклонений от нормы не наблюдали.

Бактериологическому исследованию подвергали гемолимфу, содержимое кишечника. Из кишечника в стерильных условиях получали 10 мг содержимого, после чего делали ряд последовательных разведений до 10-4, из каждого разведения делали посевы на МПА для определения общего количества аэробных микробов, солевой МПА - стафилококков, среду Гарро - стрептококков, среду Вильсон-Блера — клостридий, среду Эндо — Е. rali, на лизоцимную среду — аэробных бацилл, среду ВНИИЖ — лактобацилл, среду Блаурокка - бифидобактерий, на кровяной агар с колистином и налидиксовой кислотой - бактероидов, среду Чапека -грибов. Посевы инкубировали в термостате при температуре +37,5°С в течение 16-24 часов в аэробных и анаэробных условиях для определения бактерий, при температуре +20...+22°С в течение 4 суток — для грибов.

Для определения видовой принадлежности у выделенных культур изучали биохимические и морфологические свойства общепринятыми методами. генность культур бактерий определяли путем внутрибрюшинного введения белым мышам по 500 млн. и 1 млрд. микробных тел суточной бульонной культуры Е. coli, изолированную от шмелей Bombus terrestris, типизировали моновалентными агглютинирущими О-коли сыворотками. Кроме того, у бактерий изучали гемолитические свойства, способность выделять токсины.

Для изучения распространения нозематоза паразитологическому исследованию подвергли 2049 особей шмелей Bombus terrestris, выловленных из вышеперечисленных регионов и полученных из лаборатории шмелеводства «Совхоза Тепличный». Кроме того, паразитологическому исследованию подвергли помет от 2286 особей шмелей из лаборатории шмелеводства. При этом определяли экстенсивность инвазии (ЭИ, в%) и интенсивность инвазии (ИИ, в экз. спор Nosema bombi в 10 мг содержимого кишечника или помета насекомых). Бактериологические исследования кишечника и помета больных нозематозом шмелей проводили по вышеописанной методике.

Для разработки комплексной терапии при ассоциативной болезни семьям шмелей, больных нозематозом, скармливали лечебный сироп, состоящий их углеводов с добавлением нозедина или ноземата в концентрации 0,025% (по 0,5 мл на 2л сиропа) и высокоактивного антибиотика из расчета от 500тыс. до 1000 млн. ЕД на 2л сиропа. Эффективность лечения контролировали по содержанию в помете насекомых спор Nosema bombi, количественного и качественного состава патогенных и условнопатогенных бактерий, а также по поведению шмелей.

Весь полученный цифровой материал подвергнут математической обработке по Н.Л.Ойвину (i960).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ МИКРОФЛОРА КИШЕЧНИКА ШМЕЛЕЙ ВошЬиБ геггезШв В ЕСТЕСТВЕННОЙ ПОПУЛЯЦИИ В РАЗЛИЧНЫХ РЕГИОНАХ ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РФ И ЗАВЕЗЕННЫХ ИЗ ГОЛЛАНДИИ

Микрофлора кишечника насекомых - опылителей растений определяется состоянием окружающей среды и способом питания их. Так, по данным А.О.Впап (1951), О.Ф.Гробова (1965, 1971, 1973), П.Агаке, М.Марин (1965) и других, микрофлора кишечника медоносной пчелы в различные периоды летнего сезона зависит от объектов фуражирования насекомых (сбор пыльцы и нектара), состояния загрязненности внешней среды. В то же время в период зимовки (в условиях Нечерноземной зоны РФ — в октябре-марте) микрофлора кишечника пчел остается стабильной. Что же касается шмелей Bombus terrestris, микрофлора кишечника этих насекомых - хороших опылителей растений практически не изучена.

Наши исследования, проведенные с 1999-2003 гг., свидетельствуют, что в лётный период (с мая по сентябрь) микрофлора кишечника шмелей Bombus ter-restris в различных регионах европейской части РФ и завезенных из Голландии является относительно стабильной, она меняется от объекта (растения) фуражирования насекомых. Так, у шмелей Bombus terrestris, выловленных из естественной популяции в Краснодарском крае, мы изолировали 31 вид микробов, в том числе патогенных - 19 видов, во Владимирской области - соответственно - 28 и видов, Ивановской области - 29 и видов, Костромской области - 26 и 12 видов, Смоленской области - 22 и И видов, Ярославской области - 24 и 11 видов, завезенных из Голландии и 13 видов, полученных из лаборатории шмелевод-ства «Совхоза Тепличный» - 27 и 14 видов.

Следовательно, наибольшее число видов микроорганизмов, в том числе патогенных регистрируется у шмелей в Краснодарском крае (соответственно и 19 видов), умеренное число - в Ярославской области (24 и видов), Костромской области (26 и 12 видов), наименьшее число — у завезенных из Голландии (20 и 13 видов). Данные явления мы объясняем тем, что в южных регионах РФ объектами фуражирования шмелей является большой круг растений, на котором, кроме шмелей, фуражируются и другие виды насекомых, что способствует обмену микробами между ними.

Во всех исследованных регионах постоянными обитателями кишечника шмелей Bombus terrestris являются лактобациллы, бифидобактерии, бактероиды (до вида мы их не определяли). В кишечнике шмелей, кроме перечисленных групп микробов постоянно присутствуют непатогенные Strept.cinereus, 81гер1.с1Ггоуош5, З^ер^аесаНБ, Strept.jodophilus, Bact. agropypi, Вас^апйггЫш, Bactxitrimaculans, Bact.dahilae, Вас^асЛоН, Bact.lycopersici, Вас^тапИороеит, Bact.medicaginis, Вас^теЬрЫогит, Bact.pollacii, Вас. pruni, Bact.stewarti, Bact.trifoliorum, Bact.vesicatorium, Вас^оодзп, Вас. та!^, ВасЛгшсНозшт. Полученные данные позволяют считать, что лактобациллы, бифидобактерии, бактероиды и перечисленные выше виды являются облигатной микрофлорой кишечника шмелей Bombus terrestris.

В исследованных регионах факультативная микрофлора кишечника у шмелей Bombus terrestris представлена условнопатогенными и патогенными видами Staph.aureus, Staph.albus, Staph.muscae, Staph.saprophyticus, Staph.epidermidis, Staph.cereus flavus, Strept.apis, Strept.bombycis, Strept.disparis, Strept.epidermicus, Strept.pyogenes, Bact.tumefaciens, Bac.alvei, Bac.subtilis, Bac.loxosus, Bac.mesenthericum, Bac.megathericus. Патогенность перечисленных видов микробов для белых мышей при внутрибрюшном введении колеблется в пределах 6,25100,0%. Наибольшее число (19) видов патогенных микробов регистрируется в кишечнике шмелей Bombus terrestris в естественной популяции в Краснодарском крае, умеренное — (13) у завезенных из Голландии, наименьшее — (11) во Владимирской, Ярославской и Смоленской областях.

Во всех регионах в кишечнике шмелей Bombus terrestris наиболее патогенными являются Staph. aureus, Staph.albus, Staph. muscae, Strept.apis, Strept.disparis, Strept.epidermicus, Strept.pyogenes, Bac.alvei, умереннопатогенными — Staph.epidermidis, Staph.saprophyticus, Strept.bombycis, Bac.subtilis, слабопатогенными - Staph.cereus flavus, Bact.tumefaciens.

Из кишечника шмелей Bombus terrestris мы изолировали и изучили 156 культур E.coli, которых по О-антигену отнесли к серовариантам О8, 015, 086, 0117. Наиболее патогенными для белых мышей являются серогруппы О8, 015 (33,3 - 100% гибель белых мышей), E.coli 086 (38,46-100% гибель), слабопатогенной — E.coli — 0117 (25,0-62,5% гибель белых мышей). Наиболее патогенные серогруппы E.coli регистрируется в естественных популяциях во Владимирской области и Краснодарском крае, умереннопатогенные - в Ивановской области и завезенные из Голландии, слабопатогенные — в Костромской и Смоленской областях.

МИКРОФЛОРА КИШЕЧНИКА У ШМЕЛЕЙ Bombus terrestris ПРИ КРУГЛОГОДИЧНОМ ЛАБОРАТОРНОМ РАЗВЕДЕНИИ ИХ ДЛЯ ОПЫЛЕНИЯ

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР ЗАКРЫТОГО ГРУНТА

В 1993-1999 гг. под руководством доктора биологических наук В.И.Ащеулова в ФГУП «Совхоз Тепличный» Ивановской области разработана технология круглогодичного лабораторного разведения шмелей Bombus terrestris для опыления сельскохозяйственных растений закрытого грунта, которая защищена 15 патентами РФ (В.И.Ащеулов, 2000, 2001, 2002). Приводим краткое описание метода круглогодичного лабораторного разведения шмелей (по В.И.Ащеулову, 2000-2002).

Для лабораторного разведения в весенний период маток отлавливают при посещении шмелями первоцветов (ивы, медуницы, ветреницы и т.д.): в Краснодарском крае - в начале апреля, Владимирской области - конец декада мая, Ивановской области — первая декада мая. Наиболее ценными являются насекомые из южных регионов страны. Другим источником получения шмелей в хозяйстве являются матки из семей шмелей Bombus terrestris при эксплуатации их в условиях теплиц.

При транспортировке отловленных самок шмелей в лабораторию наиболее эффективным является индивидуальное размещение маток в металлических коробках (диаметром около 4,5 см при такой же высоте) с перфорированными пластмассовыми или металлическими крышками, на дно которых помещают канди (5-6г.). Сохранение маток возможно в течение 5-7 дней, погибают лишь единичные особи.

Отловленных в природе маток, перед размещением в садки для закладки гнезд индивидуально осматривают на соответствие нормальной окраски матки виду ВотЬш 1егге51г1з; отсутствие внешних повреждений (сохранность ног, крыльев, волосяного покрова и уродств). Особей, имеющих те или иные несоответствия, выбраковывают. Просмотр и обработку проводят в отдельном помещении на хорошо освещенном столе, покрытом бумагой, которую сжигают после проведения работ. Отобранных для дальнейшего разведения самок шмелей помещают в индивидуальные садки и содержат в течение 7-10 дней в специальном помещении при температуре +24...+25°С и влажности 50-55% в темноте. Самок в садках ежедневно осматривают с целью выявления больных и ослабленных особей. В этот период самки проходят также этап адаптации к условиям лабораторного содержания.

На стартовом этапе работа с матками шмелей ВотЬш 1егге81п8 по созданию ими гнезда и последующего развития семей в лабораторных условиях требует наличия двух термокамер или изолированных комнат, в которых поддерживают определенную температуру (+27,5...+28,5°С или +24...+250С) и влажность (55-65% или 50-55%), а также ряд изолированных помещений для проведения необходимых работ, имеющих стеллажи, столы и другую оснастку.

Освещение включают при осмотре семей, свет красный; одновременно устанавливают лампы дневного света, работу которых предусматривают при ремонте или дезинфекции помещения.

В садок помещают матку и две молодые маленькие рабочие особи шмеля или 1-2-дневных рабочих медоносных пчел. Для закладки гнезда ставят полиэтиленовую коробочку с шариком пыльцы (5г) и укрепляют поилку с сахарным сиропом по прописи №1 (патент №2140149, за 1999 г.). Каждый садок с помещенным под ним листом бумаги располагают на стеллаже, где группируют по партиям, собранным в течение дня. Каждой группе маток, помещенных в определенный день в садки, присваивают номер.

По мере потребления маткой пыльцевого корма, количество шариков с пыльцой увеличивают. На первом этапе развития семья потребляет один шарик пыльцы, к его концу - два шарика пыльцы (Юг) в неделю. В семью пыльцевую пасту дают каждые 7-10 дней. Сироп заменяют 1-2 раза в неделю по мере его употребления, удаляют старые шприцы с остатками корма и дают новые заполненные. Наиболее четкие результаты по сокращению первого периода развития гнезд, большего их выхода достигаются путем жесткой выбраковки маток и гнезд шмелей, а также применением корма по прописи

Отловленные в природе матки начинают закладку гнезд обычно через 30 дней их содержания в лаборатории; полученные в лаборатории матки после их хранения при низкой температуре (8 недель) - на 2-ой неделе, а после преодоле-

пия диапаузы методом погружения шмелиных маток в дистиллированную воду на 15 минут некоторые матки начинают закладку с 4 дня.

Второй этап развития шмелей проводят при температуре 24-25°С,, влажности 50-55% в темном помещении в специальных двустенных картонных или пластмассовых ульях (в зависимости от их последующего предназначения для эксплуатации в теплицах или для лабораторного разведения, соответственно) объемом 8000см3. Осмотр семей проводят аналогично предыдущему этапу. На втором этапе развития семьи сироп (пропись №2) дают в перевернутых банках объемом 100 мл, расположенных на сетке. За счет улучшения работы на первом этапе развития возможно сократить выбраковку семей шмелей за счет гибели маток на втором этапе в 2,14 раза.

При нормальном развитии (коконы чистые, незагрязненное гнездо, наличие свежей кладки, активных рабочих особей и матки) через 4-5 недель семьи должны насчитывать 60-80 особей и в таком состоянии они поступают или в теплицы для опыления сельскохозяйственных растений, или остаются в лаборатории для последующего воспроизводства.

Полученные на этом этапе шмелиные семьи (10-15%) оставляют в лаборатории для воспроизводства. Для дальнейшего воспроизводства оставляют наиболее многочисленные семьи, содержащие крупных особей и не имеющих инфекционных болезней.

Для воспроизводственных целей проводится контроль материнских семей. Отбирают трутней среднего и большого размера и маток весом 600-1000мг, Эти особи поступают на спаривание, мелкие экземпляры уничтожают.

Прошедших копуляцию трутней уничтожают. Учитывая необходимость иметь объективные показатели произошедшей копуляции, разработана специальная методика по выявлению меток на теле спарившихся самок которая позволяет выявлять маток, спарившихся в материнском гнезде до их отлова. Точность определения составляет не менее 97 %.

Наиболее стабильный и высокий процент основания гнезд дают матки из Краснодарского края по сравнению с естественно перезимовавшими матками Ивановской и Владимирской областей. С целью сохранения показателя высокого выхода семей применяют отбор и гетерозис. Матки-гибриды закладывают гнезда в 87,21% случаев и обеспечивают выход 50-60 % полноценных семей шмелей ВошЬш 1егге81п8.

Преодоление диапаузы самок шмелей ВошЬш 1егге81п8 осуществляется при помощи углекислого газа. Прошедших обработку маток помещают по отдельности в садки для закладки гнезд.

Для длительного хранения отбирают маток шмелей массой 600 - 1000 мг, без признаков болезней и внешних повреждений и помещают в пластмассовые коробки с прозрачной крышкой и отверстиями для вентиляции по 20-50 маток.

Через каждые 2-3 недели проводят осмотр содержимого коробок на переувлажнение или подсушивание материала, поражение грибами хранящихся маток. Минимальный срок хранения 8 недель (56 дней), максимальный 6 месяцев при температуре + 2°С. Для выведения маток из диапаузы после хранения им, в течение необходимого времени, вновь задают требуемые значения температуры,

влажности и освещенности в обратной последовательности. При длительном хранении маток шмелей чаще всего происходит поражение их различными инфекционными заболеваниями.

В качестве углеводного корма используют 70% раствор инвертированного свекловичного сахара, расфасованного в полиэтиленовые пакеты по 2,5 кг. Инвертирование сахара проводят с помощью фермента, выделенного из дрожжей, что позволяет придать товарный вид (прозрачность) продукту, увеличить срок хранения и использовать его в течение всего времени нахождения семей шмелей в условиях теплицы.

На разных этапах развития и содержания семей необходимы различные корма. Источником белкового корма шмелей при их лабораторном разведении служит пыльца растений, собранная пчелами совхозной пасеки, а также закупленная из различных регионов. Наиболее охотно шмелями потребляется свежая пыльца от различных растений, собранная в первой половине весенне-летнего сезона.

Наши исследования, проведенные в 1999-2003 гг., показывают, что при круглогодичном лабораторном разведении в кишечнике шмелей terrestris

обитают микробы из родов Escherichia, Lactobacterium (до вида не определяли), (до вида не определяли), (до вида не определяли), а

также Staph. aureus, Staph. saprophyticus, Staph. muscae, Staph. epidermidis, Strept. apis, Strept. cinereus, Strept. citrovorus, Strept. disparis, Strept. Strept.

faecalis, Strept. jodophilus, Bact. lycopersici, Bact. Bact.

Bact. spondiosum, Bact. trifoliorum, Bact. vesicatorium, E. coli серогруппы 08, 015, 086, 0117, Вас. insidiosum, Вас. subtilis, Вас. loxosus, Вас. mescnthericum, Вас. megathericus, Вас. alvei, а также Proteus (до вида не определяли), анаэробы -(до вида не определяли), грибы из родов Aspergillus, Penicillium (до вида не определяли).

Все изолированные виды стафилококков были патогенны для белых мышей. Из изолированных видов стрептококков наиболее патогенными для белых мышей были Strept. epidermicus, Strept. apis, Strept. disparis. Из исследуемых Е. coli наиболее патогенными были серогруппы 08 и 015, из изолированных аэробных бацилл виды Вас. mesenthericum, Вас. megathericus, Вас. alvei, вызывали гибель белых мышей.

Следовательно, при круглогодичном лабораторном разведении шмелей Bombus terrestris микрофлора кишечника их беднее по сравнению с показателями насекомых из естественной популяции. Данный факт объясняется тем, что в условиях лаборатории белковый и углеводный корм шмелей подвергается специальной антибактерийной обработке, что исключает попадание возбудителей болезней из окружающей среды.

НОЗЕМАТОЗ ШМЕЛЕЙ BOMBUS TERRESTRIS

. Особенности эпизоотологии, патогенеза и клиники нозематоза шмелей Bombus terrestris, вызванного N. bomb i.

Нозематоз насекомых (медоносной пчелы, шмелей) является широко рас-

пространенным заболеванием на территории Европы, Азии, Африки, Северной и Южной Америки. Причем, у каждого вида насекомых имеется свой специфический возбудитель, но многие исследователи не исключают возможности перекрестного заражения различными возбудителями (H.J.Lin, 1973; D.V. Alford, 1975; П.С. Горбунов, 1987; О.Ф. Гробов и др., 1982; J. Van Den Eijnde, Vette N., 1993; О.Ф. Гробов, A.H. Сотников, 1998;.B. И. Ащеулов, 2000,2001,2002; А.Ю. Гудкова, Ю.Ф. Петров, В.И. Ащеулов, 2003 и др.).

Наши исследования, выполненные в 1999-2003 гг., показали, что в естественной популяции шмели terrestris заражены N. в среднем на 16,77% при интенсивности инвазии по 1-19 экз. спор паразитов в помете в поле зрения микроскопа. Наивысшая ЭИ и ИИ шмелей нозематозом регистрируется в центральном районе Нечерноземной зоны Российской Федерации (Владимирская, Ивановская, Костромская, Ярославская области, ЭИ = 20,26 - 21,60%), умеренное - в южном районе Нечерноземья РФ (Смоленская область, ЭИ = 17,63%), наименьшая - в Краснодарском крае (ЭИ = 4,39%) и у шмелей, завезенных из Голландии (5,39%).

Качественный состав микрофлоры кишечника шмелей Bombus terrestris, ин-вазированных N. существенно отличается от таковых у насекомых, сво-

бодных от возбудителя нозематоза. Так, в кишечнике инвазированных N. bombi шмелей преобладают патогенные для белых мышей Staph. aureus, Staph. albus, Staph. cereus flavus, Staph. saprophyticus, Staph. muscae, Staph. epidermidis, Strept. apis, Strept. bombycis, Strept. disparis, Strept. Strept. pyogenes, E.

ceporpyim 08, 015, 086, О 117, Вас. alvei. Следует отметить, что культуры патогенных микробов, изолированные из кишечника свободных от N. bombi шмелей Bombus terrestris в естественной популяции, при внутрибрюшинном заражении вызывали гибель белых мышей в основном (80% и более процентов лабораторных животных) при дозе микробных тел, а остальные культуры (менее 20%)

вызывали гибель мышей при дозе 500 млн. микробных тел. Тогда как у инвазиро-ванных N. bombi шмелей до 70% патогенных культур микробов вызывали гибель мышей при дозе 500 млн. микробных тел, а остальные 30% культур - при инъекции дозы 1 млрд. микробных тел.

Следовательно, при инвазии N. bombi в кишечнике шмелей, во-первых, увеличивается число патогенных микробов и они здесь становятся доминирующими; во-вторых, у патогенных микробов значительно возрастает вирулентность. На основании полученных данных можно заключить, что при заражении N. bombi в кишечнике шмелей Bombus terrestris формируется микропаразитоценоз с преобладанием здесь высокопатогенных бактерий, в результате чего развивается ассоциативное заболевание протозойно-бактерийной этиологии.

У больных ассоциативной болезнью маток, рабочих особей и трутней шмелей Bombus terrestris брюшко увеличено, мягкое, растянутое. При вскрытии кишечник увеличен, беловато-серого цвета. Шмели вялые, слабо реагируют на внешние раздражения. Больные матки шмелей не закладывают гнездо. Трутни теряют способность к осеменению, они не активны во время спаривания. Рабочие особи малоактивны, они не способны летать. При круглогодичном лабораторном разведении больные семьи шмелей погибают. Так, в условиях лаборатории шме-

леводства в начальный период работы (в 1993-1996 гг.) смертность маток шмелей от этой болезни составила 15-20%, в 1997-2001 гг. - 2-5%, начиная с 2001 года по настоящее время (2003г.) -менее одного процента (В.И. Ащеулов, 2002 и др.).

Диагноз на нозематоз ставится на основании анализа эпизоотологических, клинических данных, обнаружении спор ноземы в помете насекомых. При вскрытии погибших или больных шмелей мы регистрировали потемнение стенок кишечника, при микроскопировании помета или содержимого кишечника находили много спор ноземы, а также мелкие зерна не переваренной цветочной пыльцы.

Лечение и профилактика ассоциативного заболевания, вызванного па-разитированием N. bombi и бактерий, при круглогодичном лабораторном разведении шмелей Bom bus terrestris.

В условиях круглогодичного лабораторного разведения шмелей Bombus ter-restris основными методами профилактики нозематоза является недопущение в лабораторию инвазионного начала. Для чего весь собранный из естественной популяции в различных регионах РФ у маток шмелей помет исследуют на наличие в них спор ноземы. При обнаружении в помете единичных экземпляров спор N. bombi маток шмелей к дальнейшему разведению в лабораторию не допускают, их уничтожают. Остальных маток шмелей, выловленных из неблагополучных регионов, подвергают профилактической обработке в период 10-дневного карантина (В. И. Ащеулов, 2002).

При возникновении нозематоза при лабораторном разведении у шмелей Bombus terrestris мы использовали разработанный В.И. Ащеуловым с соавт.(1999) углеводный корм (рецепты 1 и 2, патент № 2140149 от 1999г.), куда добавляли но-земат или нозедин в концентрации 0,025% (по 0,5 мл на 2 л сиропа) и высокоэффективный антибиотик из расчета от 500 тыс. до 1 млн. ЕД на 1 л лечебного сиропа. Предварительно из помета больных шмелей выделяли чистые культуры бактерий, определяли их патогенность и чувствительность к антибиотикам.

Наши исследования свидетельствуют, что в кишечнике больных нозематозом шмелей резко возрастает количественный и видовой состав патогенных и ус-ловнопатогенных микробов. Кроме того, у зараженных N. bombi шмелей в кишечнике в несколько раз увеличивается вирулентность микробов.

Наши опыты, проведенные совместно с доктором биологических наук В.И. Ащеуловым и кандидатом биологических наук В.А. Пономарёвым, свидетельствуют, что после скармливания лечебного сиропа с добавлением нозедина или ноземата в концентрации 0,025% (по 0,5 мл на 2 л сиропа) в течение 10 дней в помете больных насекомых постепенно снижается содержание спор N. bombi, патогенных Staph. aureus, Staph. albus, Staph. muscae, Staph. epidermidis, E. coli, Strept. apis. Ha 11-12 сутки лечения в помете насекомых, получавших нозедин или ноземат, споры N. bombi отсутствовали, но численный состав патогенных микробов был на достаточно высоком уровне. При скармливании в течение 10 дней лечебного сиропа с добавлением нозедина и высокоактивного антибиотика (неоми-цина) в помете больных нозематозом шмелей на 7-8 сутки исчезли споры N. bombi, а численный состав факультативной микрофлоры снизился до уровня по-

казателей естественного фона на 11-12 сутки лечения.

Таким образом, при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием N. bombi и бактерий, для лечения шмелей в условиях лаборатории следует скармливать насекомым в течение 10 дней лечебный сироп с добавлением нозедина или ноземата и высокоактивного антибиотика из расчета от 500 тыс. до 1 млн. ЕД на 2 л сиропа.

Для профилактики нозематоза выловленных из естественной популяции шмелей Bombus terrestris, мы в течение 10 дней содержали в карантине и скармливали им лечебный сироп с фумагиллином (2 г фумагиллина Б на 1 л), что исключало возможность вспышки нозематоза при искусственном разведении (эта работа выполнена нами совместно с В.И. Ащеуловым и В.А. Пономарёвым).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одним из важнейших условий повышения рентабельности сельскохозяйственного производства, особенно при выращивании сельскохозяйственных культур в теплицах, является использование насекомых - естественных опылителей растений. Использование популяций шмелей Bombus terrestris из фауны различных регионов страны для разведения их в условиях лаборатории по методике В.И. Аще-улова (2000-2003) для опыления томатов, перца, баклажанов и других культур в теплицах позволяет повысить урожайность растений на 20-30%. Кроме того, часть шмелей из лаборатории и теплиц попадают в природу, поддерживая естественную популяцию насекомых в условиях сильного антропогенного воздействия.

Наши исследования свидетельствуют, что в естественной популяции в кишечнике шмелей Bombus terrestris постоянно обитают лактобациллы, бифидобак-терии, бактероиды, а также непатогенные Strept. faecalis, Strept. jodophilus, Bact. agropyri, Bact. antirrhini, Bact. citrimaculans, Bact. dahliae, Bact. gladioli, Bact. ly-copersici, Bact. manitopoeum, Bact. medicaginis, Bact. melophtorum, Bact. pollacii, Bact. pruni, Bact. stewarti, Bact. trifoliorum, Bact. vesicatorium, Bact. woodsii, Bac. maidis, Bac. insidiosum. Учитывая, что перечисленные непатогенные роды и виды микробов нами зарегистрированы во всех обследованных регионах, а также при круглогодичном лабораторном разведении, их следует отнести к индигенной микрофлоре кишечника шмелей Bombus terrestris.

Кроме перечисленных видов апатогенных микробов в кишечнике шмелей Bombus terrestris в исследованных регионах часто обитают патогенные и условно-патогенные Staph. aureus, Staph. al bus, Staph. muscae, Staph. saprophyticus, Staph. epidermidis, Staph. cereus flavus, Strept. apis, Strept. bombycis, Strept. disparis, Strept. epidermicus, Strept. pyogenes, Strept. cinereus, Strept. citrovorus, E. coli, Bact. tumefa-ciens, Bac. alvei, Bac. subtilis, Bac. loxosus, Bac. mesenthericum, Bac. megathericus, анаэробы Clostridium, аэробы Proteus, грибы из родов Aspergillus, Mucor, Penicil-

Учитывая количественный состав и уровень перечисленных

микробов следует отнести к факультативной микрофлоре кишечника шмелей Bombus terrestris.

Нозематоз является широко распространенным заболеванием медоносной пчелы и шмелей (О.Ф. Гробов и др. 1975, В.И. Ащеулов, 2002). Наши исследования свидетельствуют, что в естественной популяции шмели Bombus terrestris за-

ражены нозематозом в центральном районе Нечерноземной зоны РФ (Владимирская, Ивановская, Костромская, Ярославская области) на 20,89%, южном районе Нечерноземья РФ (Смоленская область) - на 17,63%, в Краснодарском крае - на 4,39%, у шмелей, завезенных из Голландии - на 5,39%. Следовательно, нозематоз чаще встречается у шмелей в центральном и северном районе европейской части РФ.

Наши исследования свидетельствуют, что при инвазии N. bombi в кишечнике шмелей в несколько раз увеличивается количественный состав патогенных и условнопатогенных микробов. Кроме того, у факультативной микрофлоры значительно возрастает вирулентность. Это дает основания считать, что нозематоз у шмелей Bombus terrestris протекает как ассоциативное заболевание протозойно-бактерийной этиологии.

Нами совместно с доктором биологических наук В.И. Ащеуловым, кандидатом биологических наук Пономаревым В.А. разработан комплексный метод лечения (лечебный сироп с добавлением нозедина, ноземата и антибиотика) шмелей Bombus terrestris при ассоциативной болезни протозойно-бактерийной этиологии, что позволяет полностью исключить вспышки заболевания при круглогодичном лабораторном разведении насекомых. Наши разработки одобрены РАСХН и в настоящее время широко применяются в производстве.

ВЫВОДЫ:

1. В 6 регионах РФ (Владимирская, Ивановская, Костромская, Смоленская, Ярославская области, Краснодарский край) и Голландии в естественной популяции в кишечнике шмелей Bombus terrestris обитают микробы из родов Lactobacte-rium, Bifidobacterium, Bacteroides, Escherichia, 6 видов стафилококков, 9 видов стрептококков, аэробные бактерии Bact. tumefaciens, Bact. agropyri, Bact. antirrhini, Bact. citrimaculans, Bact. dahliae, Bact. gladioli, Bact. lycopersici, Bact. manitopoeum, Bact. medicaginis, Bact. melophtorum, Bact. pollacii, Bact. pruni, Bact. steward, Bact. trifoliorum, Bact. vesicatorium, Bact. woodsii, аэробные бациллы Вас. alvei, Вас. sub-tilis, Вас. loxosus, Вас. maidis, Вас. insidiosum, Вас. mesenthericum, Вас. megatheri-cus, анаэробы из родов Clostridium, аэробы Proteus, грибы из родов Aspergillus, Mucor, Penicillium.

2. В естественной постоянными обитателями кишечника шмелей Bombus terrestris являются лактобациллы, бифидобактерии, бактероиды, а также непатогенные Strept. faecalis, Strept. jodophilus, Bact. agropyri, Bact. anttrrhini, Bact. citrimaculans, Bact. dahliae, Bact. gladioli, Bact. lycopersici, Bact. manitopoeum, Bact. medicaginis, Bact. melophtorum, Bact. pollacii, Bact. pruni, Bact. stewarti, Bact. trifoliorum, Bact. vesicatorium, Bact. woodsii, Вас. maidis, Вас. insidiosum. Их следует отнести к индигенной микрофлоре кишечника шмелей Bombus terrestris.

3. Факультативная микрофлора в кишечнике шмелей Bombus terrestris в естественной популяции представлена условнопатогенными и патогенными Staph. aureus, Staph. Staph. saprophyticus, Staph. Staph. cereus flavus, Strept. apis, Strept. bombycis, Strept. disparis, Strept epidermicus, Strept. pyogenes, Strept. cinereus, Strept. citrovorus, Bact. tumefaciens, Вас. subtilis, Вас. loxosus, mesenthericum, alvei.

4. Факультативная микрофлора кишечника у шмелей Bombus terrestris в количественном и качественном отношении в естественной популяции в южных регионах РФ богаче, чем в Нечерноземной зоне РФ.

5. При круглогодичном лабораторном разведении в кишечнике шмелей Bombus terrestris как в количественном, так и в качественном отношении микрофлора уступает таковой по сравнению с насекомыми из естественной популяции.

6. В естественной популяции в европейской части РФ и Голландии ЭИ шмелей Bombus terrestris Nosema bombi колеблется в пределах 4,39 -21,6%.

7. При инвазии Nosema bombi в кишечнике шмелей Bombus terrestris интенсивно развивается условнопатогенная микрофлора, формируется микропаразито-ценоз и возникает ассоциативное заболевание протозойно-бактерийной этиологии.

8. При ассоциативной болезни нозематозно-бактерийной этиологии для лечения шмелей Bombus terrestris при круглогодичном лабораторном разведении их предложен комплексный метод, включающий скармливание насекомым углеводного корма (сироп) с добавлением в него высокоактивного антибиотика и нозеди-на или ноземата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ:

Научные разработки автора вошли в следующие нормативные документы:

1. «Рекомендации по профилактике паразитарных и ассоциативных заболеваний шмелей Bombus terrestris (L.) в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта» (одобрены РАСХН, 2001 год);

2. «Рекомендации по профилактике инфекционных болезней шмелей Bombus terrestris в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта» (одобрены РАСХН, 2002 год).

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Ащеулов В.И., Гудкова А.Ю., Малиновская Е.Е. Микрофлора кишечника шмелей ВошЬш terrestris в естественных популяциях и при круглогодичном лабораторном разведении// Матер, науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы)». - М., 2002, вып.З, с.45-46.

2. Малиновская Е.Е., Гудкова А.Ю., Ащеулов В.И., Петров Ю.Ф. Культу-

свойства микроорганизмов, выделенных из кишечника здоровых и больных нозематозом шмелей ВошЬш terrestris// Матер, науч. конф. Костромской ГСХА, Кострома, 2004, том 2, с. 128.

3. Гудкова А.Ю., Малиновская Е.Е., Ащеулов В.И. Динамика микрофлоры кишечника шмелей ВошЬш terrestris при нозематозе// Матер, науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М., 2004, вып.4, с._.

4. Пономарёв В.А., Гудкова А.Ю., Малиновская Е.Е. Микрофлора кишечника шмелей ВошЬш terrestris в естественной популяции в различных регионах Европы// Матер.научно-практ.конф. Ивановской ГСХА. -Иваново, 2004, т.2, с.28-29.

6 4 4 0

Подписано в печать 18 03 2004 г Формат бумаги 60x84 1/16

Печ л 1,0 Уел печл 0,93 Тираж 70 экз Заказ № 195

Отпечатано на ризографе

Полиграфический отдел Ивановской государственной сельскохозяйственной академии

153012 г. Иваново, ул Советская,45

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Емарова, Екатерина Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Систематическое положение, морфология и биология шмеля B.terrestris.

Биология шмелиной семьи Bombus terrcstris.

Микрофлора кишечника шмелей в норме.

Технология круглогодичного лабораторного разведения шмелей Bombus terrestris.

Паразитофауна шмелей Bombus terrestris в естественной популяции и в условиях круглогодичного лабораторного разведения их.

Нозематоз насекомых.

Формирование микропаразитоценозов в кишечнике шмелей при нозематозе

Введение Диссертация по биологии, на тему "Динамика формирования паразитоценозов в кишечнике шмелей Bombus terrestris при нозематозе и коррекция их биологически активными препаратами"

Аютальность темы. В технологии получения высоких урожаев сельскохозяйственных культур открытого грунта шмели рода Bombus играют весьма важную роль, осуществляя активное опыление многих растений. В последние годы шмелей рода Bombus начали круглогодично выращивать в лабораторных условиях для опыления ими сельскохозяйственных растений (томатов, перцев, баклажанов и др.) закрытого грунта, что дает надбавку урожая до 15-20% (В.И. Ащеулов, 2002).

В настоящее время в РФ и других странах мира более 25 фирм У; занимаются лабораторным разведением шмелей Bombus terrestris, которые ежегодно производят около 1 млн семей. Однако при круглогодичном лабораторном разведении шмелей Bombus terrestris у них часто возникают инфекционные и инвазионные болезни, которые нередко приводят к гибели насекомых и снижают экономические показатели тепличных хозяйств (В.И. Ащеулов, 2002). В связи с этим остро стоит вопрос выяснения этиологических факторов заразных болезней шмелей, разработки методов диагностики их и мер борьбы с ними в лабораториях по 1фуглогодичному разведению этих полезных насекомых. V,- Цели и задачи исследований. Целью нашей работы являлась разработка методов профилактики ассоциативного заболевания, вызываемого па-разитированием Nosema bombi и бактерий, у шмелей Bombus terrestris в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта. Для чего необходимо было:

- определить динамику микрофлоры кишечника у клинически здоровых шмелей Bombus terrestris в естественной популяции в различных регионах Европы и при круглогодичном лабораторном разведении их;

- определить зараженность шмелей Bombus terrestris в естественной популяции в различных регионах Европы и в условиях круглогодичного лабораторного разведения их паразитами Nosema bombi;

- изучить динамику формирования микропаразитоценозов в кишечнике шмелей Bombus terrestris при нозематозе;

- разработать комплексный метод терапии шмелей Bombus terrestris при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием Nosema bombi и бактерий.

Научная новизна. Впервые определено, что микрофлора кишечника у шмелей Bombus terrestris в естественной популяции в различных регионах РФ и завезенных из Голландии представлена 42 видами, в том числе микробами из родов Lactobacterium, Bifidobacterium, Bacteroides (до вида не определяли), анаэробами из рода Clostridium, аэробами Proteus (до вида не определяли), фибами из родов Aspergillus, Mucor, Penicillium (до вида не определяли), в том числе непатогенными — 19 и патогенными — 23 видами. Наибольшее число видов (31), в т.ч. числе патогенных видов (19) микробов встречается в кишечнике шмелей Bombus terrestris в естественной популяции Краснодарского края, умеренное число - в Ярославской области (24 и 11 видов), Костромской области (26 и 12 видов), наименьшее число - у завезенных из Голландии (20 и 13 видов).

Установлено, что в естественной популяции шмели Bombus terrestris инвазированы Nosema bombi на 16,77 %, наивысшая ЭИ регистрируется у шмелей в центральном районе Нечерноземной зоны Российской Федерации (Владимирская, Ивановская, Костромская, Ярославская области, ЭИ = 20,26 -21,60%). Выявлено, что при инвазии Nosema bombi в кишечнике шмелей формируется микропаразитоценоз, где преобладающими являются патогенные Staph, aureus, Staph, albus, Staph, muscae, Staph, epidermidis, E. coli, Strept. apis, в результате чего возникает ассоциативное заболевание протозойно-бактерийной этиологии.

Разработан комплексный метод терапии шмелей при данной болезни, включающий применение химических препаратов и антибиотиков.

Практическая значимость работы. Научные разработки автора вошли в «Рекомендации по профилактике паразитарных и ассоциированных заболеваний шмелей Bombus terrestris (L.) в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта» (одобрены РАСХН 25 мая 2001 г.), «Рекомендации по профилактике инфекционных болезней Bombus terrestris в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого фунта» (одобрены РАСХН 2002г.).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и одобрены на: научных конференцях ВОГ РАН (Москва, 2002, 2004), научных конференциях Ивановской ГСХА (2004), Костромской ГСХА (2004).

Основные положения, выносимые на защиту:

- микрофлора кишечника клинически здоровых шмелей Bombus terrestris в естественных популяциях 6 регионов РФ, а также завезенных из Голландии;

- микрофлора кишечника клинически здоровых шмелей Bombus terrestris при круглогодичном лабораторном разведении их;

- зараженность шмелей Bombus terrestris Nosema bombi в естественных популяциях 6 регионов РФ и завезенных из Голландии;

- микрофлора кишечника шмелей Bombus terrestris при нозематозе;

- комплексное лечение шмелей Bombus terrestris при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием в кишечнике Nosema bombi и бактерий, при лабораторном разведении насекомых.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 3 статьи, которые отражают основное содержание работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 110 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений. Работа иллюстрирована 10 таблицами, 10 рисунками. Список литературы включает 142 источника, из них 60 отечественных, 82 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Емарова, Екатерина Евгеньевна

ВЫВОДЫ

1. В 6 регионах РФ (Владимирская, Ивановская, Костромская, Смоленская, Ярославская области, Краснодарский край) и Голландии в естественной популяции в кишечнике шмелей Bombus terrestris обитают микробы из родов

Lactobacterium, Bifidobacterium, Bacteroides, Escherichia, 6 видов стафилококков, 9 видов стрептококков, аэробные бактерии Bact. tumefaciens, Bact. ag-ropyri, Bact. antirrhini, Bact. citrimaculans, Bact. dahliae, Bact. gladioli, Bact. lycopersici, Bact. manitopoeum, Bact. medicaginis, Bact. melophtorum, Bact. pol-lacii, Bact. pruni, Bact. stewarti, Bact. trifoliorum, Bact. vesicatorium, Bact. wood-sii, аэробные бациллы Вас. alvei, Вас. subtilis, Вас. loxosus, Вас. maidis, Вас. insidiosum, Вас. mesenthericum, Вас. megathericus, анаэробы из родов Clostridium, аэробы Proteus, грибы из родов Aspergillus, Mucor, Penicillium.

2. В естественной популяции постоянными обитателями кишечника шмелей Bombus terrestris являются лактобациллы, бифидобактерии, бактероиды, а также непатогенные Strept. faecalis, Strept. jodophilus, Bact. agropyri, Bact. antirrhini, Bact. citrimaculans, Bact. dahliae, Bact. gladioli, Bact. lycopersici, Bact. manitopoeum, Bact. medicaginis, Bact. melophtorum, Bact. pol-lacii, Bact. pruni, Bact. stewarti, Bact. trifoliorum, Bact. vesicatorium, Bact. wood-sii, Вас. maidis, Вас. insidiosum. Их следует отнести к индигенной микрофлоре кишечника шмелей Bombus terrestris.

3. Факультативная микрофлора в кишечнике шмелей Bombus terrestris в естественной популяции представлена условнопатогенными и патогенными Staph, aureus, Staph, albus, Staph, muscae, Staph, saprophyticus, Staph, epider-midis, Staph, cereus flavus, Strept. apis, Strept. bombycis, Strept. disparis, Strept epidermicus, Strept. pyogenes, Strept. cinereus, Strept. citrovorus, Bact. tumefaciens, Вас. subtilis, Вас. loxosus, Вас. mesenthericum, Вас. megathericus, Вас. alvei.

4. Факультативная микрофлора кишечника у шмелей Bombus terrestris в количественном и качественном отношении в естественной популяции в южных регионах РФ богаче, чем в Нечерноземной зоне РФ.

5. При круглогодичном лабораторном разведении в кишечнике шмелей Bombus terrestris как в количественном, так и в качественном отношении микрофлора уступает таковой по сравнению с насекомыми из естественной популяции.

6. В естественной популяции в европейской части РФ и Голландии ЭИ шмелей Bombus terrestris Nosema bombi колеблется в пределах 4,39 -21,6%.

7. При инвазии Nosema bombi в кишечнике шмелей Bombus terrestris интенсивно развивается условнопатогенная микрофлора, формируется мик-ропаразитоценоз и возникает ассоциативное заболевание протозойно-бактерийной этиологии.

8. При ассоциативной болезни нозематозно-бактерийной этиологии для лечения шмелей Bombus terrestris при круглогодичном лабораторном разведении их предложен комплексный метод, включающий скармливание насекомым углеводного корма (сироп) с добавлением в него высокоэффективного антибиотика и нозедина или ноземата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки автора вошли в следующие нормативные документы:

1. «Рекомендации по профилактике паразитарных и ассоциативных заболеваний шмелей Bombus terrestris (L.) в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта» (одобрены РАСХН, 2001 год);

2. «Рекомендации по профилактике инфекционных болезней шмелей Bombus terrestris в условиях их круглогодичного лабораторного разведения для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта» (одобрены РАСХН, 2002 год).

99

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одним из важнейших условий повышения рентабельности сельскохозяйственного производства, особенно при выращивании сельскохозяйственных культур в теплицах, является использование насекомых — естественных опылителей растений. Использование популяций шмелей Bombus terrestris из фауны различных регионов страны для разведения их в условиях лаборатории по методике В.И. Ащеулова (2000-2003) для опыления томатов, перца, баклажанов и других культур в теплицах позволяет повысить урожайность растений на 20-30%. Кроме того, часть шмелей из лаборатории и теплиц попадают в природу, поддерживая естественную популяцию насекомых в усло-^ виях сильного антропогенного воздействия.

Наши исследования свидетельствуют, что в естественной популяции в кишечнике шмелей Bombus terrestris постоянно обитают лактобациллы, би-фидобактерии, бактероиды, а также непатогенные Strept. faecalis, Strept. jodo-philus, Bact. agropyri, Bact. antirrhini, Bact. citrimaculans, Bact. dahliae, Bact. gladioli, Bact. lycopersici, Bact. manitopoeum, Bact. medicaginis, Bact. melophto-rum, Bact pollacii, Bact. pruni, Bact. stewarti, Bact. trifoliorum, Bact. vesicato-rium, Bact. woodsii, Вас. maidis, Вас. insidiosum. Учитывая, что перечисленные непатогенные роды и виды микробов нами зарегестрированы во всех об-х следованных регионах, а также при круглогодичном лабораторном разведении, их следует отнести к индигенной микрофлоре кишечника шмелей Bombus terrestris.

Кроме перечисленных видов апатогенных микробов в кишечнике шмелей Bombus terrestris в исследованных регионах часто обитают патогенные и условнопатогенные Staph, aureus, Staph, albus, Staph, muscae, Staph, sapro-phyticus, Staph, epidermidis, Staph, cereus flavus, Strept. apis, Strept. bombycis, Strept. disparis, Strept. epidermicus, Strept. pyogenes, Strept. cinereus, Strept. citrovorus, E. coli, Bact. tumefaciens, Вас. alvei, Вас. subtilis, Вас. loxosus, Вас. mesenthericum, Вас. megathericus, анаэробы Clostridium, аэробы Proteus, грибы из родов Aspergillus, Mucor, Penicillium. Учитывая количественный состав и уровень патогенности, перечисленных микробов следует отнести к факультативной микрофлоре кишечника шмелей Bombus terrestris.

Нозематоз является широко распространенным заболеванием медоносной пчелы и шмелей (О.Ф. Гробов и др. 1975, В.И. Ащеулов, 2002). Наши исследования свидетельствуют, что в естественной популяции шмели Bombus terrestris заражены нозематозом в центральном районе Нечерноземной зоны РФ (Владимирская, Ивановская, Костромская, Ярославская области) на 20,89%, южном районе Нечерноземья РФ (Смоленская область) - на 17,63%, в Краснодарском крае — на 4,39%, у шмелей, завезенных из Голландии, - на на 5,39%. Следовательно, нозематоз чаще встречается у шмелей в центральном и северном районе европейской части РФ.

Наши исследования свидетельствуют, что при инвазии N. bombi в кишечнике шмелей в несколько раз увеличивается количественный состав патогенных и условнопатогенных микробов. Кроме того, у факультативной микрофлоры значительно возрастает вирулентность. Это дает основания считать, что нозематоз у шмелей Bombus terrestris протекает как ассоциативное заболевание протозойно-бактерийной этиологии.

Нами срвместио с доктором биологических наук В.И. Ащеуловым, кандидатом биологических наук Пономаревым В.А. разработан комплексный метод лечения (лечебный сироп с добавлением нозедина, ноземата и антибиотика) шмелей Bombus terrestris при ассоциативной болезни протозойно-бактерийной этиологии, что позволяет полностью исключить вспышки заболевания при круглогодичном лабораторном разведении насекомых. Наши разработки одобрены РАСХН и в настоящее время широко применяются в производстве.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Емарова, Екатерина Евгеньевна, Иваново

1. Агаке П., Марин М. Изучение бактериальной флоры и микофи-тов, содержащихся в средней кишке здоровых и больных нозематозом пчел// Биология (24), 1965, с.119.

2. Алексеенко P.M., 1952 (цит. по О.Ф. Гробову и др.) Методические рекомендации по изучению миазов полезных перепончатокрылых. -М. -1988. -36с.

3. Ащеулов В.И. Шмели опылители сельскохозяйственных растений в теплицах. -Иваново, 2001, с.233.

4. Ащеулов В.И. Профилактика инвазионных и инфекционных болезней шмелей Bombus terrestris (L.) при круглогодичном лабораторном разведении их для опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта// Автореф. дисс.докт.биол.наук-Иваново, -2002.-c.35.

5. Ащеулов В.И. Профилактика паразитарных болезней шмелей Bombus terrestris в условиях круглогодичного лабораторного разведения ихдля опыления сельскохозяйственных культур закрытого грунта// Автореф.дисс.канд. биол. наук. Иваново. - 2000.-е. 19.

6. Ащеулов В.И., Петров Ю.Ф., Гудкова А.Ю. Профилактика паразитарных заболеваний шмелей// Ж-л «Ветеринарный врач Поволжья и Урала», Казань, 2001, №1, с.77-79.

7. Ащеулов В.И., Пономарев В.А. XXXV международный конгресс в Антверпене (Бельгия)// Информационный сборник «Теплицы России», Москва, 1997, №3, с. 16-17.

8. Ащеулов В.И., Пономарев В.А., Качкин М.В. О биометодах защиты и опыления овощных культур в совхозе «Тепличный» Ивановской области// Вопросы экологии Волжско-Окского междуречья. Межвузовский сборник научных трудов, Ковров; КГТА, 1999, с. 107-109.

9. Березин М.В., Бейко В.Б. Шмелеводство в России новые проблемы и перспективы// Тез. док.междунар. науч.-практ. конф. «Экология и охрана пчелиных», г.Рыбинск, 1996.

10. Бойко А.К. Сенотаиниоз пчел. -Киев.-1967. -131 с.

11. И. Бодиарчук Л.И. Привлечение одиночных пчел и шмелей// Насекомые опылители сельскохоз. культур. Сб.науч.трудов.- Новосибирск, 1982.

12. Вервес Ю.Г., 1984 (цит. по О.Ф. Гробову и др.) Методические рекомендации по изучению миазов полезных перепончатокрылых. -М. -1988. -36с.

13. Вовейков Г.С. Разведение шмелей в целях опыления красного клевера. -М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1954. -75с.

14. Горбунов П.С. Лептомоноз шмелей// Материалы X конф. Украинского общества паразитологов. -Киев: Наук.думка. -1986. -с. 151.

15. Горбунов П.С. Микроспоридии Nosema bombi паразиты мальпи-гиевых сосудов шмелей// Региональные эколого-фаунистического мониторинга, охраны и рационального использования животных: Тез.совещ.зоологов пед. ин-тов. -Курск, 1990. -с. 15-17.

16. Горбунов П.С. Морфология и жизненный цикл Crithidia bombi Gorbunov, 1987 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae)// Автореф. соиск. уч.ст.канд.биол.наук. -С.-П., 1992. -18с.

17. Горбунов П.С. Эндопаразитические жгутиконосцы рода Crithidia (Trypanosomatidae, Zoomastigophorea) из пищеварительного тракта шмелей// Зоол.ж-л. -1987. —т.66, Вып. 12, с.1775-1780.

18. Григорьев М.В., Долгих В.В.// Сб. науч. трудов «Паразиты в природных комплексах и рисковые ситуации». -Новосибирск, 1998, с.235.

19. Гробов О.Ф. 1971-1975 (цит. по О.Ф.Гробову) Лихотину А.К. Болезни и вредители пчел. -М.: Агропромиздат, 1989,239с.

20. Гробов О.Ф. Клещ, паразитирующий в трахеях шмелей// Пчеловодство. -1974. -№9. -с.32.

21. Гробов О.Ф. Локустакароз шмелей// Ж-л «Ветеринария», 1996, №1. -с.28-31.

22. Гробов О.Ф., 1965 (цит. по О.Ф. Гробову) Роль микрофлоры в патогенезе нозематоза пчел//Ж-л «Ветеринария», 1971, №8, с.57-58.

23. Гробов О.Ф., Гузева Л.И., Чернов К.С. Болезни и вредители пчел-листорезов и шмелей. Рукопись. -1982. -181с.

24. Гробов О.Ф., Гузева Л.Н., Сотников А.И. Наиболее распространенные микозы маток шмелей// Ж-л «Ветеринария», 2000, №7, с.26-29.

25. Гробов О.Ф., Коновалова Т.В., Зимина Л.В., Столбов Н.М., Пале-вич С.М., Смирнов A.M., Луганский С.Н. Методические рекомендации по изучению миазов полезных перепончатокрылых. -М. -1988. -36с.

26. Гробов О.Ф., Сотников А.И. Сферуляриоз шмелей// Ж-л «Ветеринария», 1998, №9, с.39-42.

27. Гробов О.Ф., Сотников А.Н. Причины неудач при разведении шмелей//Ветеринарная газета, 1998, №15, с.5.

28. Гудкова А.Ю., Ащеулов В.И. Профилактика инфекционных болезней шмелей Bombus terrestris в условиях их лабораторного разведения// Шмели-опылители с/х растений в теплицах. -Иваново, 2001, с. 197-201.

29. Гудкова А.Ю., Петров Ю.Ф., Ащеулов В.И. Болезни шмелей// Монография. -Иваново, 2003, 106с.

30. Гузева Л.Н., 1965 (цит. по О.Ф. Гробову) Роль микрофлоры в патогенезе нозематоза пчел//Ж-л «Ветеринария», 1974, №8, с.57-58.

31. Давиденко А.В. К отчету Отдела полезных насекомых Детско-сельской энтомологической станции Л.С.Х.И. за 1922-1924 годы// Защита раст. от вредителей, 1926, №2-3, с. 1-6.

32. Долгов Л.А. Особенности биологии шмелей, заселяющих искусственные гнезда// Насекомые-опылители с/х культур. -Сб.науч.трудов, Новосибирск, 1982, с.83-86.

33. Еськов Е.К. Терморежим шмелиного гнезда и механизм его регулирования// Насекомые-опылители с/х культур. -Сб.науч. трудов, Новосибирск, 1982, с.43-45.

34. Жданов С.В. Профилактика нозематоза пчел// Ж-л «Ветеринария», №8, с.61-62.

35. Исси И.В., Онацкий Н.М. Особенности взаимоотношений микроспоридий и насекомых на ранних этапах заболеваний// Сер. Протозоология/ Под ред. Ю.И.Полянского. -JI.: Наука, 1984, с. 102-113.

36. Исси и др. Микроспоридии простейших// Сер. Протозоология, 1986, вып. 10, с.6-135.

37. Кипятков В.Е. Шмели, особенности жизни// М., 1991, с.59-67.

38. Кобзев А.И. Разведение шмелей// Пчеловодство, 1991,1: 40-41.

39. Кобзев А.Н. Некоторые проблемы шмелеводства// Насекомые-опылители с/х культур (ред. В.С.Гребенников). -Сб. ВАСНИЛ. -Новосибирск, 1982, с. 113-116.

40. Мадатов Р.И., Мерщиев В.И. Нозематоз пчел и меры борьбы с ним//Метод рекомендации.-Алма-Ата, 1975, 8с.

41. Малышев С.И. Дикие опылители на службе у человека. -М.-Л.: Наука, 1963, 68с.

42. Месяцев И.И., 1916 (цит. по О.Ф. Гробову и др.) Болезни и вредители пчел-листорезов и шмелей. Рукопись, 1982, 181с.

43. Нигматуллин Т.Г. Изучение некоторых биохимических показателей в организме здоровых и больных пчел// Автореф.дисс. на соиск.уч. степени канд.вет.наук-М., 1964, 12с.

44. Панфилов Д.В. К экологической характеристике шмелей в условиях Московской области// Уч.зап.Моск.Гос.пед.инст., 1956, т.61, с.467-484.

45. Панфилов Д.В., Зимина Л.В. Некоторые данные о гнездовании и поведении шмелей (Hymenoptera, Bombus)// Бюлл. Моск. общ. испыт. природы, отд.биологии, 1962, т.67, вып.З, с.38-44.

46. Полтев В.И., Нематаева Е.В. Болезни и вредители пчел. Изд. 2-е, испр. и доп. -М.: Колос, 1977.

47. Радченко В.Г. Биология шмелиной семьи. -Киев, 1989, 55с.

48. Радченко В.Г., Песенко Ю.А. Биология пчел (Hymenoptera, Apoidea). ЗИН РАН, С.-П., 1994,350с.

49. Речкин Д.В., Долгов JI.A. Оценка факторов, влияющих на гнездование шмелей//Научно-техн.бюлл. СО ВАСХНИЛ, 1984, 22: 46-50.

50. Родионова З.И. Серологическая диагностика микроспоридиозов полезных насекомых (медоносной пчелы и тутового шелкопряда)// Автореф. на соиск. уч. степени канд.биол.наук-М., 1986,24с.

51. Селезнев К.В., Антонова О.А., Ием И.В.// Паразитология, 1997, т.31(2), с. 181-185.

52. Сидоров Н.Г., Черкасов А.И. Восприимчивость различных пород пчел к нозематозу// Ж-л «Ветеринария», 1971, №8, с.58-60.

53. Скулачев В.П. Трансформация энергии в биомембранах. -М.: Наука, 1972,203с.

54. Соколова Ю.Л., Исси И.В.// Паразитология, 1997, т.31(4), с.307313.

55. Халифман И.А. Шмели и термиты. -М.: Детская литература, 1972,319с.

56. Шалимов И.И., Боднарчук Л.И., Олифир В.Н. Регуляция кормодобывание и зачатки мобилизации особей для поиска корма у шмелей (Hymenoptera, Apidae)// Вест. зоол. -1980, №3, с.63-67.

57. Шалимов И.И., Петриченко Т.Д. Шмели и углекислый газ// Ж-л «Пчеловодство», 1989, №5, с.40-41.

58. Штейнхауз Э. Патология насекомых. -М.: Изд-во Иностранной литературы, 1950.

59. Alford D.V. A study of the hibernation of bumblebees (Hym., Bom-bidae) in southern England//J.Animal. Ecel.- 1969. -v.38, №1, p.149-170.

60. Alford D.V. Bumblebees. -London: Davis Poynter, 1975, 352p.

61. Alford D.V. Egg laying by bumble bee queens at the beginning of colony development// Bee world. -1971. -v.52, №1, p.l 1-18.

62. Alford D.V. The biology and immature stages of syntretus splendidus (Marshall) (Hymenoptera: Bracenidae, Euphorinae), a parasite of adult bumblebees//Trans.rey.entomol.sec.London. -1968. -v.120, pt.17, p.392-393.

63. Bailey C., Brooks W.// J.Invert. Pathol., 1963, v.20, p.31-36.

64. Borchert A., 1930, 1960 (цит. по О.Ф. Гробову) Роль микрофлоры в патогенезе нозематоза пчел//Ж-л «Ветеринария», 1971, №8, с.57-58.

65. Bravo A.// J.Bacteriol., 1997, v.179, р.2793-2803.

66. Brian A.D. Brood development in Bombus agrorum (Hym., Bom-bidae)// Entemol. Mon. Mag. -1951. -v.87,4 sen, №139 (1046). -p.207-212.

67. Brooks W.M., BeKnel J.J.// J.Protozool. -1988, v.35, p.481-488.

68. Bucher G.E.//J. Inseet Pathol, 1960, v.93, p.611-625.

69. Calam D.H. Species and sex-specific compounds from the heads of male Bumblebees (Bombus sp.)// Nature (Engl.). -1969. -v.221, №5183. -p.856-857.

70. Cameron S.A. Brood care by male bumble bees// Prec. Natl. Acad. Sci. USA, Appl. Biol. -1983, v.82, p.6371-6373.

71. Cederberg B. Evidence for trail marking in Bombus terrestris workers (Hymenoptere, Apidae)// Zoon. -1977, v.5, №2, p.143-146.

72. Chmielewski W. The mites (Acarina) found on bumblebees (Bombus Latr.) and theirnests// Ecologia Dolska. -1971,19(4), s.57-71.

73. Cumber R.A. Some aspects of the biology and ecology of bumblebees bearing upon the yields of red-clover seed in new Zealand// New Zealand J. Sci. Tech. (Wellington). -1953, v.3413, №4, p.227-240.

74. Cumber R.A. The biology of Bumble-bees, with special reference to the production of the worker caste// Trans. Rey. Entomol. Soc.London. -1949, v. 100, pt.l, p.1-45.

75. De Jonghe R. Copulations interspecifiques en captivite d'especes du genre Bombus Latreille (sensu stricto) (Hymenoptera, Apidae, Bombinae)// Bull. Ann. Soc. Rey. Beige entmol. -1982, v.118, №4/6, p. 171-175.

76. Edwards-Anderka C.J. Ecology of the genus Bombus Latr. (Hymen-optera, Apidae) in southern Ontario with emphasis on pollen analysis// MSC Theses, Guelph University, Canada, 1967, 87 pp.

77. Eijnde J. Van Den, Vette N.Nosema infection in honeybees (Apis mel-lifera) and bumblebees (Bombus terrestris)// Proceedings of the Section Experimental and Applied Entomology of the Netherlands Entomological Society, 1993, p.205-208.

78. Eijnde J.van Den, Method for continuous rearing of Bombus terrestris and the production of bumble bee colonies for pollina tion purposes// Apidologic, 1990,21(4): 330-332.

79. Fantham H.B., Porter A. The morphology, biology and economie importance of Nosema bombi n. sp., parasitic in various bumblebees// Annales Tropical Medecine et Parasitologic 1914, 8, -p.623-628.

80. Fantham H.B., Porter A. The pathogenicity of Nosema apis to insects otherthan hive bees// Annales Tropical Medecineet Parasitologie, 1913, 7, -p.569-579.

81. Fisher R.M., Pomeroy N. Ineipient colony manipulation, Nosema incidence and colony productivity of the bumblebee Bombus terrestris (Hymenoptera: Apidae)//Journal of the Kansas Entomological Society. -1989. -62(4). -p.581-589.

82. Free J.B. The behaviour of egg laying workers of bumblebees colonies// Brit. J. anim. Behav. -1955, v.3, №4, p. 147-153.

83. Free J.B., Butler C.G. Bublebees. -London: Collins, 1959,208p.

84. Frison Т.Н. A contribution to the Knowladge of the life history of Bremus bimaculatus (Cresson) (Hym.)// Entomol. Amer. -1928, v.8, №4, p. 159223.

85. Garefalo C.A. Bionomies of Bombus (Fervidobombus) morio.2. Bodysize and length of life ofworkers//J.apicult.res. -1978, v. 17, №3, p.130-136.

86. Goldblatt J.W., Fell R.D. Parasites and parasitization rates in bumble bee queens, Bombus spp. (Hymenoptera; Apidae), in southwestern Virginia// Environmental Entomology. -1984. -13(6). -p.1661-1665.

87. Haas A. Gasetzma Bigkeiten und Ratsel des Hummelfluges// Ento-mon. -1949. -Bd 1, u.2. -s.37-40.

88. Haas A. Vergleichende verhaltensstudien zum Paarungsschwarm der Hummeln (Bombus) und Schmarotzerhummeln (Psithyrus). I. Teil// Zeitsehr. Tierpsychol. -1967. -Bd.24. -s.257-277.

89. Haeseler V. enarkierungsergebnisse und Beobachtungen an vol kern (insbesondere jungen Koniginnen) von Bombus terrestris L. (Hym., Apidae) in Schleswigholstein (BRD)//Zool. Jahrb. Syst. -1974. -Bd.101. -s.397-416.

90. Hartwig M. Bumblebee phatogenes and internal enemies, Bee Wor, 1970, Id, 76(3): 130-148.

91. Hassanein M.N.// Acta Protozoologica. -1956, v.7, p.229-241.

92. Hasselret T.B. Studies on Sweadish bumblebees (genus Bombus Lart.). Their domestication and biology// Opusc. Entomol.suppl.17, Lund. -1960. -192p.

93. HofTer E. Die Hummeln steiermarkd. Lebensgeschichte und Beschreibung derselben. Halfle 1. (31.Jaheesher. steierm. Landes-oberrealschulezu Graz). -Leaschner u. Lubinsky, braz, 1882. -92s.

94. Hogeweg P.// J.Protozool. 1981, v.32, p.311-317.

95. Huber P.Observations on several species of the genus Apis, Know by the name of bumblebees, and called Bombinatrices by Linnaeus// Trans. Linn.Soc. London. -1802, v.6, p.214-298.

96. Husband R.W. Bombacarus buchneri (Acarina; Podapolipodidae) in North America// Proceeding of the 2nd International Congress of Acarology. -1969.

97. Jakagami J.F. Specifflie difference in the bionomie characters of bumblebees. A comparative review//J.Fac. Sci. Hokkaido Univ., Ser. VI. -1976. -v.20, №3. -p.390-447.

98. Kittlausz, 1928 (цит. По О.Ф.Гробову) Роль микрофлоры в патогенезе нозематоза пчел//Ж-л «Ветеринария», 1971, №8, с.57-58.

99. Levine N.D., Сох F.E.G. et al.// J.Protozod. -1980. v.27, d.37-58.

100. Lindhard E. Humblebien som Husdyr. Spredte Tack, of nogle danske Humlebiarters Biologi// Tidskr. Landbrugests plantcavl., Cepenhagen. -1912. -Bd 19. -s.335-352.

101. Lipa J.J., Triggiani O. Gritidia bombi sp. n.a. flagellated parasite ofa bumblebee Bombus terrestris L. (Hymenoptera, Apidae)// Protozoologica. -1988. -27 (3/4).

102. Liu U.J., Macfarlane R.P., Pengelly D.U. Mattesia bombi n.sp. (Neogregarinida: Ophryocystidae), a parasite of Bombus (Hymenoptera: Apidae)// Journal of Invertabrate Pathology, 1974, 23(2).

103. LotmarR.//ActaProtozool. 1936, v.l, p.81-92.

104. Lundberg H., Svenson B.g. Studies on the behaviour of Bombus Latr. Species (Hym., Apidae) parasitized by Sphaerularia bombi Dufour (Nematoda) in an alpine area// Norwegian J. of Entomol. -1975. -22.

105. Macfarlane R.P. et all// Bee World, 1995, 76(3).

106. Macfarlane R.P., Griffin R.P. New Zealand distribution and seasonal incidence of the nematode, Sphaerularia bombi Dufour, a parasite of bumblebees// New Zealand J. oh zool. -1990. -17(2). -p. 191-199.

107. Meiver C. A.Nosema diseases of the bumble bee Bombus terrestris L.// Msc theses. -Massey University, New Zealand 1990. -84pp.

108. Newman H.W. On the habits of the Bombinatrius. Genus Bombus// Trans. Entomol. Soc. London. -1851. -Ser.2., v.l. -p.86-92.

109. Plath O.E. Breeding experiments with confined Bremus (Bombus) queens//Biol.Bull.mar.biol.lab., woods hole. -1923. -v.45, p.325-341.

110. Plath O.E. Bumlebees and their ways. -New York The Maemillan Company, 1934. -XVI, 201p.

111. Poinar G.O.Jr., Laan P.A. Van Der Morphology and life history of Sphaerularia bombi// Nematologica. -1972. -18. p.239-252.

112. Pouvreau A. Les ennemis des Bourdons. 1. -Etude d'une zoocenose: le nid de Bourbons// Apidologie. -1973. -v.4, №2, p.103-148.

113. Przelecka O., Hartwig M., Bumblebee phategens and internal enemies. Bee World. 76(3): 130-148.

114. Reaumur R.A.de Memoires pour server a l'histoire des insects, t.6. -Paris, imprim. Royale, 1742. -LXXXII, 608p.

115. Riehards O.W. Observations on Bombus ayrerum (Fabricius) (Hymen., Bombidae)//Proc. Roy. entomol. Soc. London, 8er.A. -1946. -v.21, pt.7/9. -p.66-71.

116. R6seler P.-F. Caste differentiation in bees. The influence of behaviour, pheromones and food on the endocrine activity// Bull. Intern. Seet. Frans. Union intern. Etude insects soc. 1981. -p.3-17.

117. R6seler P.-F. Die Anzahl der Spermien in Receptaculum seminis von Hummel KOniginnen (Hym., Apoidea, Bombinae)// Apidologie. -1973. -Bd4, h.3. -s.267-274.

118. Rdseler P.-F. Juvenile hormone control of oogenesis in bumble workers, Bombus terrestris//J. Insect Physiol. -1977. -v.23, №8. -p.985-992.

119. ROseler P.-F., ROseler I. Der EinfluB von CO2 und der Pars intercere-bralis auf die aktivitat der Corporaalata und die Eibildung bei Hummeln (Bombus hyphorum und Bombus terrestris)// zool. Jb. Physiol. -1984. -Bd.88, h.2. -s.237-246.

120. Schmid-Hempel P., Durrer S. Parasites, rloral resources and reproduc-tionin natural populaton of bumblebees// Oikos, 1991, 62(3).

121. Shykoff J.A., Schmid-Hempel P. Incidence and effects of four parasites in natural populations of bumblebees in Switzerland// Apidologie. -1991. -22(2).

122. Sken J.P.// Asskr. Kgl. Veterin. -og Landbohoiskola Kobenhavn,1967.

123. Sladen F.W.L., Lindhard E. The bumblebee, its life-history and how te domesticate it, with a description of all the british spreies of Bombus and Psithy-rus. -London, 1912. -XIII, 283p.

124. Sprague V. Biology of Microsporidia// In: Comparative Pathobiology. -New York, 1976, v.l,p.Xl.

125. Sprague V.// In: Comparative Pathobiology. -New York, 1976, v.2, p.1-150.

126. Stammer H.J. A new tracneal mite, Bombacarus buchneri n.g.n.sp.// Zoologischer Anzeiger. -1951. -146s.

127. Sundwik E.E. Uber das Wachs der Hummeln// Heppe -Seyleris Zeitschr. Physiol. Chemie. -1899. Bd.26. -s.56-59.

128. Sveboda F.// J.Invertebr. Pathol. 1965, v.9(2), p.188-195.

129. Triggiani O. Microorganisms and macroorganisms endozoies in adults of Bombus Latr. And Psithyrus Lep. (Hymenoptera: Apidae)// Atti XVI Congresso Nazionale Italiano di Entomologia Bari-Martina Franca (Та). -1991.-23/28. — p.587-597.

130. Valle O. Untersuchungen zur Sicherung der Bestaubung von Rotklee// Suom.maatal. seur Julk. -1955. Bd.83. -s.205-220.

131. Van Honk C., Hogeweg P. The ontogeny of the social structure ina captive Bombus terrestris colony// Behav. Ecol. a. Sociobiol. -1981. -v.9, №2. —p. 111-119.

132. Wagner W. Psichobiologische Untersuchungen an Hummeln/ Teil// Zoologica. -1907. Bd 19, h.46, s.79-239.

133. Weidner E. Subcellular Biochemistry, v. 18: Intracellular Parasites/ Eds. J.R. Harris. New York, 1992, p.385-399.

134. Weiser J.// Monogr. Angew. Entomol./ Berlin, 1961, №17, s. 1-149.

135. Weyrauch W. Uber einige Bauplane der wabenmasse in Hummelnest-ern// Ztschr. Morphol. Okel. -1934, Bd.28, s.497-552.

136. Wojtowski F. Observations on the construction and arrangement of ^ bumblebee nests (Bombinae)// Zool. Pol. -1963, v. 13, fasc.3/4, p. 137-152.

137. Wyatt B.K.W. Ecology of bumblebees (Bombus Latr.) in southern Ontario with reference to nest development and pollen sources// Mcs Thess,T