Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ ОПТИМИЗАЦИИ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ И АДАПТАЦИИ ГЕНОТИПОВ СИРЕНИ (SYRINGA VULGARIS L.).

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ ОПТИМИЗАЦИИ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ И АДАПТАЦИИ ГЕНОТИПОВ СИРЕНИ (SYRINGA VULGARIS L.)."

J~j~ " пРавахрукописи

КРЮЧКОВА Виктория Александровна

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ ОПТИМИЗАЦИИ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ И АДАПТАЦИИ ГЕНОТИПОВ СИРЕНИ (Syringa vulgaris £.)•

Специальность: 06.01.05 - селекция и семеноводство 03.00.23 — биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва, 2005

Работа выполнена на кафедре селекции и семеноводства овощных, плодовых и декоративных культур МСХА им К А Тимирязева

Научные руководители:

доктор сетьскохозяйственных наук, профессор Е В Мамонов,

кандидат сельскохозяйственных наук, доцент В И Деменко

Официальные оппоненты:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Е А Калашникова,

кандидат биологических наук В Г Лебедев

Ведущее учреждение: Главный ботанический сад Российской академии наук

Защита диссертации состоится «. О »2005 года в /3 часов на заседании диссертационного совета Д 220 043 10 при МСХА им. К А Тимирязева по адресу 127550, Москва, И-550, ул Тимирязевская, 49, Ученый совет МСХА

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МСХА им К А Тимирязева Автореферат разослан «. /3 _» 2005 г

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сирень обыкновенная (Syringa vulgaris L.) — один из наиболее привлекательных декоративных кустарников. Наибольшей декоративностью обладают сорта сирени, существенно превосходящие дикорастущие растения и поэтому пользующиеся огромным спросом при оформлении городских и сельских ландшафтов.

Многочисленные сорта и формы сирени в настоящее время сосредоточены главным образом в коллекциях ботанических садов, дендрариев, а также на селекционных участках. В ассортименте питомников набор сортов, несмотря на высокий спрос, крайне ограничен. Маточные насаждения представлены, как правило, сортами, отличающимися легкостью размножения, но не всегда обладающими высокой декоративностью. Прежде всего, это связано с отсутствием экономически рентабельной, универсальной для всех сортов технологии быстрого размножения сирени.

В связи с трудностями вегетативного размножения некоторых ценных сортов сирени, они практически отсутствуют в питомниководческих хозяйствах, чем не только ограничивается распространение их в культуре, но и возникает реальная опасность утери ценных сортов, что может привести к обеднению генофонда. Следовательно, возникает необходимость в разработке способов размножения сирени, которые были бы универсальными для всех сортов и позволили бы создать рентабельную технологию быстрого воспроизводства посадочного материала.

С помощью технологии in vitro можно быстро получить необходимое количество растений нового сорта или сохранить коллекцию. В настоящее время в технологии микроразмножения сирени освещены отдельные этапы, однако они не отвечают требованиям, предъявляемым селекционерами и питомниководами к получению качественного посадочного материала. Практически на всех этапах размножения возникают сложности, связанные в первую очередь с биологическими особенностями сирени.

Высокий процент контаминации, достаточно короткий период активного роста побега, раннее отмирание верхушечной почки уменьшают процент успешного введения нового сорта в культуру in vitro. В процессе культивирования часто встречающееся явление витрификации, каллусообразование вследствие использования несбалансированных питательных сред, что также снижает эффективность технологии. Недостаточно высокий коэффициент размножения одних сортов, низкая укореняемость других замедляют селекционный процесс, внедрение новых сортов, использование их в декоративном садоводстве и зеленом строительстве. Наиболее сложным является этап адаптации растении К—ттсстррпттьтттлм

. ЦНБМСХА . "-ературы

I №.

условиям. Медленный рост растений после пересадки в грунт, а часто и полное торможение ростовых процессов надземной части растения значительно увеличивают период доращиваяия растений для получения стандартных саженцев

Цель работы — разработка научно обоснованной технологии микроклонального размножения и адаптации сирени, обеспечивающей получение качественного посадочного материала в короткие сроки

Задачи исследований:

1. Выявить условия, позволяющие эффективно вводить в культуру новые сорта

2. Разработать методические основы культивирования растений сирени in vitro

3. Установить факторы, влияющие на корнеобразование сирени m vitro.

4. Определить оптимальные условия адаптации растений сирени, полученных in vitro, к нестерильным условиям

5. Изучить влияние состава питательных сред на этапе укоренения на последующую адаптацию растений к нестерильным условиям

Методологической базой исследования послужили работы отечественных и зарубежных ученых, занимающихся проблемами биотехнологии растений - Бутенко Р Г, Высоцкого В А, Катаевой H В , Калашниковой Е А, Jones О P., Hussey G, Pienk R L M., проблемами роста и морфогенеза растений — Кефели В И , Гамбурга К.З, Кулаевой О.Н, Муромцева ГС., Hartmann HT, а также исследователей, занимающихся размножением растений, в том числе и сирени - Кръстева M Т, Окуневой И Б , Попович Е А, Прохоровой 3 А, Graham С, и др

Научная новизна работы:

1. Впервые выполнены комплексные исследования по изучению условий введения в культуру новых генотипов сирени обыкновенной.

2. Оптимизирована технология и методические подходы размножения in vitro трудноукореняемых сортов сирени обыкновенной

3. Определены причины, влияющие на корнеобразование сирени обыкновенной in vitro

4. Установлена связь между условиями корнеобразования сирени in vitro и способностью к адаптации в нестерильных условиях.

5. Установлены оптимальные условия адаптации растений сирени обыкновенной, полученной m vitro, к нестерильным условиям

На основании результатов проведенных исследований разработана технология микроклонального размножения сирени обыкновенной, которая

позволяет успешно решать многие проблемные вопросы и может служить практическим руководством для питомниководов.

Практическая значимость работы. Разработана технология микроклонального размножения сирени обыкновенной, которая позволяет успешно решать на этапе введения в культуру такие проблемы, как высокий процент контаминации, каллусообразование, витрификация. Результаты работы могут быть использованы для создания методики промышленного размножения сирени обыкновенной in vitro и адаптации к условиям открытого грунта.

Апробация работы. Результаты работы обсуждены на совместном заседании кафедр селекции и семеноводства овощных, плодовых и декоративных культур и биотехнологии в 2005 году, научных конференциях Московской сельскохозяйственной академии имени К А.Тимирязева (2000-2004 гг.), VI международной конференции «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях» (2001 г.). По теме диссертации опубликовано 7 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 204 страницах машинописного текста, состоит из введения, 3 глав, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы и приложений. В тексте содержится 49 таблиц, 22 рисунка, приложений. Список литературы включает 284 наименования источников, в том числе 141 работу иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА г Эксперименты выполнены в лаборатории микроклонального размножения на Плодовой опытной станции Московской сельскохозяйственной академии им. К.А.Тимирязева в течение 2000 — 2004 гт.

Объектами исследований выбраны различные по показателям декоративности сорта сирени обыкновенной: Красавица Москвы (КМ), Флора (Ф), Богдан Хмельницкий (БХ), Утро России (УР), Сенсация (С), Примроз (П). Маточники сортов находятся на Плодовой опытной станции МСХА и в Главном ботаническим саду РАН.

Черенки с маточных растений сирени нарезали в сухую погоду. Для посадки на питательную среду использовали верхушечные почки в фазу активного роста побегов, либо боковые почки трех верхних узлов в фазу пробуждения почек или в период покоя. Почки промывали проточной водопроводной водой в течение 1,5 часов, затем стерилизовали в растворе гипохлорита натрия (20 мин.), сульфата меди (10-15 мин.) или сулемы (5 мин.) с последующей промывкой дистиллированной автоклавированной водой.

Экспланты высаживали на различные питательные среды с добавлением регуляторов роста, витаминов (тиамин, пиридоксин, никотиновая кислота, мезоинозит), сахарозы (30 г/л) и агар-агара (6-7 г/л); культивировали в условиях

световой комнаты с температурой 23°С и световым периодом 16 часов Питательные среды готовились по стандартной методике Мурасиге и С куга (1962)

В качестве регуляторов роста использовали 6-бензиламинопурин (6-БАП), кинетин, индолилуксусную (ИУК), индолилмасляную (ИМК) и нафтилуксусную (НУК) кислоты, паклобутразол (культар), эпин (эпибрассинолид), иммуноцитофит

Опыты проводили в трехкратной повторности, в повторности 10 сосудов, в сосуд высаживали 1 эксплант на этапе введения в культуру и 5 микрочеренков на этапах размножения и укоренения. Учитываемые показатели: на этапе введения эксплантов в культуру — процент контаминации, витрификации и приживаемости эксплантов, образование каллуса, развитие листьев, прирост, на этапе размножения - прирост побегов, количество и длину междоузлий, ветвление, наличие одревеснения нижней части побега, каллусообразование, процент витрификации, на этапе укоренения - количество и длину корней, процент укоренения, каллусообразование, прирост побега, ветвление побега, наличие одревеснения нижней части побега, наличие ветвления корней; на этапе адаптации к нестерильным условиям -приживаемость растений после пересадки, поражение грибной инфекцией, прирост надземной части, одревеснение надземной части, количество и размер листьев, наличие ветвления надземной части, развитие корневой системы (длина корней, ветвление корней) Также отмечали процент перезимовки и прирост на следующий после посадки сезон

Математическую обработку данных проводили методом дисперсионного анализа по Б.А Доспехову (1985) и с помощью программы Microsoft Office Excel 2003

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 1. Введение эксплантов в культуру.

На этапе введения эксплантов сирени в культуру основное внимание было направлено на сроки взятия эксплантов, особенности действия стерилизующих веществ на различных стадиях развития почек, влияние минерального и гормонального состава питательной среды на приживаемость и развитие экспланта

Время введения экспланта. Сирень обладает достаточно коротким периодом органического покоя, и уже в январе - феврале при наступлении оттепелей наблюдается активное набухание почек, период распускания почек короткий Оптимальным с точки зрения приживаемости и степени контаминации является этап активного роста побега Возможность отбора

эксплантов в другие фазы развития сирени позволит увеличить период их введения.

Таблица 1.

Влияние фенофаз развития маточных растений на приживаемость экспланта

Сорт Срок взятия экспланта

Распускание Активный рост Период покоя

почек (май) побега (июнь) (февраль-апрель)

Приживаемость эксплантов

Флора 24,4 61,1 42,2

Красавица Москвы 37,8 71,1 47,8

Сенсация 35,6 60,0 44,4

Примроз 34,4 66,7 48,9

Богдан Хмельницкий 25,6 62,2 45,6

НСРи 2,61

Контаминация

Флора 47,8 24,4 38,9

Красавица Москвы 47,8 20,0 28,9

Сенсация 43,3 21,1 26,7

Примроз 38,9 24,4 18,9

Богдан Хмельницкий 41,1 22,2 24,4

НСР„5 3,45

При введении эксплантов во время покоя маточного растения выпадов за счет зараженности и неприжившихся эксплантов в среднем по сортам значительно меньше, чем при введении в другие фазы развития растений. Самый низкий процент прижившихся эксплантов наблюдается на этапе распускания почек, одновременно на этом этапе отмечен высокий уровень контаминации, что связано, очевидно, с климатическими условиями (табл.1).

Наибольшей приживаемостью вне зависимости от фазы развития маточного растения отличатся сорт Красавица Москвы, наименьшей — Флора и Богдан Хмельницкий, сорта Сенсация и Примроз относятся к промежуточной группе. Возможно, это связано с различиями в строении почек — плотности прилегания чешуй, количеством почечных чешуй и т.д. Другой причиной могут быть различия в физиологическом статусе почек.

Стерилизация эксплантов. На разных этапах развития почек сирени имеются существенные различия в количестве и плотности прилегания почечных чешуй, что оказывает влияние как на проникновение внутрь почки патогенных микроорганизмов, так и на качество стерилизации. Кроме того, на различных этапах развития маточного растения (активный рост, распускание почек, созревание почек, состояние глубокого покоя) ткани экспланта в различной степени повреждаются стерилизующими веществами (табл.2). Период покоя, вне зависимости от типа стерилизующего вещества,

характеризуется более низкой степенью контаминации эксплантов при использовании смеси стерилизующих веществ

Таблица 2.

Влияние стерилизующих веществ на степень контаминации и выход

жизнеспособных эксплантов, % (2001 г )

Время взятия экспланта Стерилизующее вещество Сорт

Ф КМ С П БХ УР

Активный рост Гипохлорит натрия 28.9 62,2 23.3 66,7 23.3 62,2 22.2 63,3 25.6 63,3 23.3 60,0

Гипохлорит натрия + сулема 15.6 51,1 12.2 57.8 12.2 54,4 14.4 55,6 14.4 54,4 12.2 46,7

Гипохлорит натрия + сульфат меди 20,0 61,1 16.7 66,7 17.8 58.9 18.9 61 1 20.0 61,1 15.6 56.7

Период покоя Гипохлорит натрия 28,9 61,1 25.6 67,8 24.4 63,3 24.4 64,4 26.7 62 2 25.6 61,1

Гипохлорит натрия + 11.1 сулема | 55 6 11.1 58.9 8j9 58,9 12.2 56,7 12.2 57 8 10.0 52,2

Гипохлорит натрия + i 14.4 сульфат меди 62,2 17.8 60,0 17.8 60,0 18.9 58,9 18.9 58,9 18.9 54,4

Контамшшшя НСР0! частных различий 4 54 НСРЮ для фактора А на этапе активного роста 1 08 НСРоз для фактора В на этапе активного роста 0 54 НСРоз ДЛЯ фактора А в период покоя 1 66 НСРм Для фактора В в период покоя 0 83 Приживаемость НСРоз частных различий 4 68 НСРоз для фактора А на этапе активного роста 1 36 НСРоз для фактора В на этапе активного роста 0 68 НСРоз Для фактора А в период похоя I 68 НСРоз Для фактора В в период покоя 0 84

Числитель - контаминация, знаменатель - выход жизнеспособных эксплантов Использование сочетания гипохлорита натрия и сулемы уменьшало приживаемость эксплантов, однако незначительно с отдельно примененным гипохлоритом натрия Лучшей приживаемостью отличается сорт Красавица Москвы, самая низкая приживаемость отмечена у сорта Утро России Наши опыты показали, что на разных этапах развития растений необходимо использовать различные стерилизаторы - более мягкие при введении активно растущих, более жесткие при введении покоящихся почек Некоторые сорта способны переносить более жесткую стерилизацию по сравнению с остальными

Состав питательной среды. Одной из наиболее часто встречающихся проблем при микроклональном размножении многих древесно-кустарниковых растений, в том числе и сирени, является нитрификация, которая может возникать уже на этапе введения эксплантов в культуру.

Минеральный состав питательной среды. В большинстве работ по микроклональному размножению сирени для введения в культуру используется среда Мурасиге и Скуга и ее модификации

Приживаемость эксплантов сирени и показатели развития растений in vitro в значительной степени зависят от минерального состава питательной среды (табл 3) Высокая приживаемость отмечена на средах Мурасиге и Скуга и

Гамборга, отличающихся самым высоким содержанием макро- и микроэлементов из исследованных питательных сред. Несколько ниже приживаемость была получена на средах \VPIvi и Уайта. Среда Готре, характеризующаяся самым низким содержанием макроэлементов меньше всего подходит для этапа введения эксплантов сирени в культуру. Изученные сорта по приживаемости и дальнейшему развитию можно разделить на две группы — сорта с высокой приживаемостью на различных средах и сорта, приживаемость которых в значительной степени зависят от состава питательной среды. К первой группе относятся сорта Красавица Москвы, Сенсация, Флора, ко второй — Богдан Хмельницкий и Примроз.

Таблица 3.

Рост и развитие эксплантов сирени в зависимости от минерального состава

питательной среды (в среднем по сортам) (2001-2002 гг.)

Показатель Мурасиге и Скуга Уайта Готре Хеллера Гамборга (В5) WPM АСМ

Прижившиеся почки, % 72,6 52,6 13,3 42,6 71,3 63,3 45,3

Образование каллуса, % 13,3 51,3 75,3 54,6 16,0 28,0 40,0

Витрификация, % 2,6 39,3 1,3 1,3 6,6 29,3 30,0

Период развития листьев, дней 10-12 - 10-12 8-10 10-14

Период развития побега, дней 14-20 - - 20-25 12-14 - -

Выход растений, % 67,0 15,0 12,0 35,0 65,0 38,0 14,0

Наличие каплусообразования и нитрифицированных побегов при размножении сирени нежелательно. Наибольшее образование каллуса отмечено на средах Готре, Хеллера и Уайта (до 75,3%), экспланты на средах Мурасиге и С куга и Гамборта отличались достаточно слабым образованием каллуса. Высокий процент витрифицированных растений отмечен на средах Уайта, ACM, WPM. Наибольшей склонность к витрификации отличаются сорта Флора и Красавица Москвы. Сорт Сенсация образует витрифицированные побеги на всех средах, кроме Готре и Хеллера. Сорта Богдан Хмельницкий и Примроз практически не склонны к витрификации.

Гормональный состав питательной среды. Изучали влияние различных концентраций НУК, ИМК, ИУК в сочетании с 6-БАП и кинетином.

Максимальное количество побегов, пригодных для дальнейшего культивирования, отмечено при использовании 0,01 мг/л 6-БАП и 0,5 мг/л ИМК. Образование каллуса и витрификация в большей степени зависят от типа используемого ауксина, чем цитокинина. Применение НУК вызывает развитие большего количества витрифицированных растений (табл.4).

Сорта Красавица Москвы, Сенсация и Богдан Хмельницкий показали более высокую приживаемость по сравнению с сортами Флора и Примроз. Склонность к витрификации отмечена у сортов Красавица Москвы, Сенсация и Флора, витрификация растений сортов Богдан Хмельницкий и Примроз наблюдается при использовании НУК.

Таблица 4

Влияние физиологически активных веществ на рост и развитие эксплантов __сирени, % (2001-2002 гг.)_

Сорт 6-БАП, 0,01 ч/л Кинетин, 0,01 иг/т

НУК 0,5 мг/л ИМК 0,5 мг/л ИУК 0,5 мг/л НУК 0,5 мг/л ИМК 0,5 мг/л ИУК 0 5 мг/л

Приживаемость экстантов

КМ 83,3 93 3 83,3 73,3 80,0 76,7

Ф 60 0 76,7 76,7 70,0 73,3 73 3

С 76 7 83.3 80,0 70,0 73,3 73 3

БХ 76,7 83,3 76,7 1 66,7 70,0 70,0

П 50.0 70 0 60,0 ] 56,7 60,0 56,7

НСР05 12,005

Образование каллуса

КМ 16,7 3,3 6,7 16,7 0,0 6,7

Ф 13,3 0.0 0,0 167 6,7 3,3

С 3,3 00 3,3 3 3 00 0,0

БХ 16,7 1 0,0 0,0 100 00 00

П 13,3 . 0,0 0,0 10,0 0,0 0,0

НСР05 14,84

Витрификация

КМ 40,0 | 133 67 23,3 100 10 0

Ф 33,3 1 16 7 3,3 16,7 6,7 3,3

С 36 7 ■ 10 0 0,0 20,0 3 3 0,0

БХ 16,7 1 0 0 00 67 00 0,0

П 20,0 | 0 0 0,0 6,7 ,00 0,0

НСР05 28,64

Высокая склонность к развитию каллуса отмечена у сортов Красавица Москвы и Флора Образование каллуса других сортов отмечено при использовании НУК

Влияние эпина на приживаемость и развитие эксплантов. Брассиностероиды существенно увеличивают устойчивость растений к неблагоприятным факторам внешней среды, таким как повышенная или пониженная температура, увеличивают сопротивляемость растений воздействию патогенных микроорганизмов Изучали влияние эпибрассинолида (эпина) в концентрациях 10 9-10 5 мг/л на этапе введения эксплантов в культуру Применение эпина в концентрации 109-107 мг/л практически не влияло на образование каллуса Более высокие концентрации (105) у некоторых сортов стимулировали данный процесс (Красавица Москвы, Богдан Хмельницкий)

Использование эпина уменьшало количество образующихся нитрифицированных растений, в основном у сортов, слабо склонных к витрификации.

Значительно увеличивалась приживаемость эксплантов при добавлении эпина в концентрации 10"8-10"7 мг/л. При этом сорта Красавица Москвы, Флора и Примроз реагировали на добавление эпина в большей степени, чем остальные сорта.

2. Этап собственно микроклональное размножения сирени.

При микроразмножении сирени может быть использовано два пути -индукция развития существующей меристемы с последующим черенкованием побега и индукция образования новых адвентивных почек тканями экспланта. Вопрос об использовании того или иного способа размножения важен при размножении сортовых растений, когда необходимо сохранение генотипа. Меристематические очаги, возникшие в каллусной ткани предрасположены к мутированию. В связи с этим, как основной способ размножения сирени рассматривается индукция развития существующей меристемы, и задачей исследований на этапе собственно размножения было получение достаточно развитого побега с междоузлиями 7-11 мм.

Изучали влияние цитокининов (6-БАП и кинетин) в различных концентрациях и их сочетания с ауксинами (ИМК, НУК, ПУК).

Оптимальная концентрация 6-БАП, обеспечивающая наибольший коэффициент размножения 2,5-7,5 мг/л. При таких концентрациях образуется побег, имеющий достаточную длину и количество междоузлий (табл.5). В некоторых случаях применение 6-БАП приводило к появлению витрифицированных побегов.

Наибольшая длина побега, более раннее начало роста и более длинные междоузлия отмечены для сортов Красавица Москвы и Флора, более низкие показатели получены у сортов Сенсация и Богдан Хмельницкий. Сорта Красавица Москвы и Флора лучше реагировали на применение кинетина.

При размножении сирени микрочеренкованием коэффициент размножения равен количеству междоузлий, если их длина не менее 7 мм. В случае, когда междоузлия короткие (менее 7 мм), необходимо использовать микрочеренки, включающие 2 и более междоузлий, что уменьшает коэффициент размножения. Коэффициент размножения может быть увеличен, если высаженный микрочеренок образует не один, а несколько побегов.

Сочетания различных регуляторов роста обладали высоким синергическим действием. При совместном использовании цитокининов с ауксинами в зависимости от их концентрации можно добиться получения большего количества побегов или побегов большей длины. При добавлении в

питательные среды наряду с цитокининами ауксинов в некоторых случаях наблюдалось развитие большего числа побегов, чем при использовании только цитокининов

Таблица 5

Влияние концентрации 6-БАП на рост и развитие сирени in vitro _ (2002-2003 гг )_

Сорт Концентрация 6-БАП, мг/т

0 | 1 0 1 2,S | 5,0 | 7,5 1 10,0 | 12,5

Количество междоузлий, шт.

Флора 3 3 6 6 6 15 3

Красавица Москвы 3 3 6 5 5 i 5 1 4

Сенсация 2 3 4 4 4 3 1 2

Богдан Хмельницкий 2 2 5 5 5 4 1 3

Среднее 25 2,75 5,25 5,0 5,0 4.25 i 3,0

НСР05 1,33

Длина побега, мм

Флора 32 40 46 45 37 23 8

Красавица Москвы 39 43 48 47 41 31 17

Сенсация 22 35 43 42 34 17 3

Богдан Хмельницкий И 18 24 26 19 13 6

Среднее 26,0 34 0 40,25 40 0 32,75 21,0 8,5

HCPos 11,27

Длина меяедо узлий, мм

Флора 10,6 13,3 7,7 75 6,1 4,6 2,7

Красавица Москвы 13 14,3 8 9,4 8.2 6,2 4,25

Сенсация 11 11.7 10,75 10,5 85 5,7 1,5

Богдан Хмельницкий 5,5 9 48 5,2 3,8 3,25 2

Среднее 10,0 12,1 7,8 8,15 6,7 4,9 26

HCPos 3,6

Длина побега сирени в значительной степени зависит от сортовых особенностей и регуляторов роста Для всех сортов лучшие показатели в варианте совместного применения 6-БАП (2,0-3,0 мг/л) с 0,05 мг/л ИМК Длина междоузлий увеличивалась при увеличении концентрации 6-БАП Побеги с наибольшей длиной междоузлий характерны для сортов Красавица Москвы и Флора.

Количество междоузлий на побегах сирени в значительной степени зависит от используемых регуляторов роста и колеблется от 2 до 64 на один посаженный микрочеренок за 1,5 месяца Самые высокие показатели наблюдаются при применении 6-БАП в концентрациях более 5,0 мг/л в сочетании с НУК 0,1 мг/л. На средах с использованием НУК отмечено увеличение нитрифицированных растений Склонностью к образованию большого количества коротких междоузлий отличается сорт Сенсация Для сорта Богдан Хмельницкий характерно образование незначительного количества коротких междоузлий

Расчеты коэффициента размножения производили по схеме: при длине междоузлий более 7 мм коэффициент размножения приравнивался к количеству междоузлий на всех образованных из одного экспланта побегов, при длине междоузлий менее 7 мм суммарную длину образованных одним эксплантом побегов делили на 7 Получали теоретический коэффициент размножения, из которого отбраковывая витрифицированные побеги, получали итоговый коэффициент размножения (табл 7)

Таблица 6

Влияние концентрации кинетина на рост и развитие растений сирени т

уШго (2002-2003 гг.)

Сорт Концентрация кинетина, мг/л

0 | 05 | 2,5 | 5 | 10 1 15 | 20

Количество междоузлий, шт.

Флора 3,4 ЗД 1 4,4 4,2 4,2 4 32

Красавица Москвы 4,2 4Д I 4,6 4,6 5 4,4 4,4

Сенсация 3.2 3,2 3,6 3,8 38 ЗД 3

Богдан Хмельницкий 2Д 2Д 2.4 3 3,6 ЗД 3

Среднее 3,25 ЗД 3,75 1 3,9 4,15 3,7 3,4

НСРоз0,81

Длина побега, мм

Флора ■ 30 33 33 37 , 40 39 18

Красавица Москвы | 41 42 41 48 47 42 33

Сенсация 1 21 24 25 26 28 24 19

Богдан Хмельницкий 12 12 13 18 21 17 14

Среднее 26.0 1 27,75 28,0 32,25 34,0 30 5 21,0

НСР05 8,39

Длина междоузлия, мм

Флора 8,8 10,3 7,5 88 9,8 5,6

Красавица Москвы 9,8 100 8,9 10,4 9,4 9,5 7,5

Сенсация 66 7,5 6,9 6,8 7,4 7,5 6,3

Богдан Хмельницкий 5,5 5.5 , 5,4 6,0 5,8 5,3 4,7

Среднее 7,7 8,3 . 7,2 8,0 8,0 80 6,0

НСРоз 1,92

Максимальный коэффициент размножения получен в опытах с сортом Сенсация, несколько меньше с сортом Красавица Москвы, самый низкий • коэффициент размножения отмечен для сортов Богдан Хмельницкий и Флора

При сочетании кинетина с ауксином увеличение количества побегов происходит в меньшей степени, значительное увеличение количества побегов отмечено только при совместном использовании с ПУК в концентрации более 0,05 мг/л Наибольшая длина побегов (52 мм) в среднем по сортам наблюдается при концентрации кинетина 5,0 мг/л в сочетании с ИМК 0,1 мг/л.

Длина междоузлий при использовании кинетина была меньше, чем при использовании 6-БАП. При сочетании с ИУК длина междоузлий колебалась от 7,7 до 8,6 мм, а с ИМК - от 7,18 до 9,33; с НУК - от 6,2 до 7,2 мм. Длина междоузлий возрастала с увеличением концентрации кинетина. Отмечена сортовая реакция на кинетин. Для сорта Красавица Москвы характерно образование побегов с более длинными междоузлиями, короткими — у сорта Богдан Хмельницкий.

Таблица 7.

Коэффициент размножения сирени in vitro в зависимости от

концентрации 6-бензиламинопурина и ауксинов (2002 г.)

Концентрация 6-БАП, мг/л Сорт Концентрация ауксина, мг/л

ИМК ИУК НУК

0,01 0,05 0,1 0,01 0,05 0,1 0,01 0,05 0,1

2,0 КМ 9,3 10,0 11,1 4,5 4,7 4,8 6,4 7,9 13,2

С 11,2 14,8 13,5 7,8 8,6 7,7 11,4 13,6 17,1

БХ 7,3 8,7 7,3 2,7 3,3 2,7 4,7 7,4 6,2

Ф 6,7 8,0 6,7 3,6 4,1 3,5 7,0 8,2 7,0

3,0 КМ 15,6 15,6 15,4 5,3 5,7 5,2 9,4 12,7 14,3

с 19,2 21,7 21,9 6,4 7,0 7,7 13,7 15,9 17,4

БХ 6,6 7,8 7,7 3,3 3,9 3,9 8,1 9,5 8,0

Ф 9,9 10,9 9,4 4,3 4,9 4,2 8,8 11,1 9,5

4,0 КМ 12,2 12,1 13,5 5,5 5,5 5,3 10,1 11,4 13,9

с 18,5 23,3 21,2 6,7 7,2 6,5 8,8 9,2 10,4

БХ 7,0 8,4 8,0 2,6 3,1 3,1 5,4 6,9 5,8

Ф 8,1 8,4 8,2 3,5 4,0 4,6 7,2 9,6 8,2

5,0 КМ 9,5 10,6 9,5 4,4 4,5 5,3 11,7 13,5 14,1

с 16,0 18,1 16,5 6,5 7,0 7,2 13,6 14,4 13,3

БХ 5,1 5,9 5,0 2,2 2,6 3,1 7,8 9,2 7,7

Ф 6,2 8,0 6,7 2,8 3,3 3,2 8,6 9,3 7,9

Количество междоузлий в значительной степени зависело от типа используемого ауксина и его концентрации — минимальное количество • междоузлий наблюдается при использовании ИУК, максимальное — при НУК. При изменении концентрации ИМК и ИУК количество междоузлий меняется незначительно, в то время как в вариантах с НУК количество междоузлий для некоторых сортов (Богдан Хмельницкий) возрастает в 2 раза. В целом наибольшее количество междоузлий наблюдается у сортов Красавица Москвы и Сенсация, наименьшее — у сорта Богдан Хмельницкий.

Одним из положительных моментов использования кинетина является отсутствие витрифицированных побегов, поэтому уменьшения коэффициента размножения не происходит.

Несмотря на высокий коэффициент размножения, полученный при использовании и ИМК и НУК, в дальнейшем культивирование микрочеренков

сирени производили на средах с ИМК. Использование НУК увеличивало процент витрифицированных побегов и развитие каллуса.

Таблица 8

Коэффициент размножения сирени in vitro в зависимости от

концентрации кинетина и ауксинов (2002 г )

Концентрация кинетина, мг/л Сорт Концентрация ауксина, мг/л

ИМК ИУК НУК

0,01 0 05 0,1 0,01 0,05 0,1 0,01 0 05 0 1

5,0 КМ 8,1 84 11,6 4,5 4,4 4,6 6,7 9,0 17,6

С 6,1 7,7 8,2 4,6 50 S,0 4,0 62 11,1

БХ 2,7 3,6 5,5 2,6 2,7 2 6 1 2,6 V 64

П 53 I 5,4 5,5 2,9 3,2 3.3 4,4 5,5 6,5

10,0 КМ 5,7 7.1 6,7 5,0 4,9 48 6,8 8,4 1 9,7

С 6,0 ! 86 80 3,9 3,8 4,6 7.S 8,7 1 10,7

БХ 2.9 3,3 148 30 29 30 36 42 1 46

П 4,2 5,2 I 6,4 3,5 3,8 3 8 5,7 1 5,5 ' 8.0

t 15,0 КМ 4,5 4,8 6,7 4,2 ' 4,3 4,0 7,4 8,3 10,5

С 4,0 6 3 1 7,3 3,2 4,0 3,8 5.3 7,8 8,5

БХ 3,1 42 5,6 2,3 2,4 2.9 28 5,5 7,4

П 36 35 4,2 1 3,2 3,5 4,1 4,4 8,0 10 6

3. Корнеобразование и адаптация. Гормональный состав питательной среды. Для индукции корнеобразования в питательную среду добавляли ауксины (ИУК, ИМК) в концентрациях от 0,5 до 2,5 мг/л Результаты исследований показывают положительное действие ИМК по сравнению с ИУК Отмечено, что наилучшие результаты наблюдаются при концентрации ИМК 0,5 мг/л, а для некоторых сортов (Примроз) — в концентрации 1,0 мг/л

ИУК стимулировал корнеобразование при концентрации 2,5 мг/л, однако эффективность ИУК была значительно меньше по сравнению с ИМК.

Укореняемость некоторых сортов при использовании ИМК достигало 100%, в тоже время при использовании ИУК укореняемость достаточно низкая при всех концентрациях (табл 9)

У растений сирени на средах, содержащих только ауксины, наблюдается ингибирование роста побега и его ветвление. При переносе в нестерильные условия также наблюдается торможение роста. С целью преодоления ингибирования роста растений в процессе корнеобразования и успешной адаптации растений к нестерильным условиям на этапе укоренения в питательную среду добавляли 6-БАП (0,05 мг/л)

Максимальное количество корней при добавлении 6-БАП отмечено в варианте с 0,5 мг/л ИМК С увеличением концентрации ИМК количество корней уменьшается. Сорт Красавица Москвы в большей мере склонен к

ризогенезу. Сорта Примроз и Богдан Хмельницкий плохо укореняются in vitro. Добавление цитокинина в питательную среду практически не оказывает влияния на количество и длину корней, в то же время значительно увеличивает прирост побегов.

Таблица 9.

Укореняемость сирени обыкновенной в зависимости от применяемых

Сорт Контроль Концентрация ауксинов, мг/л

ИМК ИУК

0,5 1,0 2,5 0,5 1,0 2,5

Флора 31 83 85 85 39 38 62

Красавица Москвы 62 100 100 100 64 68 82

Сенсация 46 76 70 68 40 47 52

Примроз 12 69 69 51 14 38 39

Богдан Хмельницкий 20 100 52,6 75,4 14,3 32,0 33,3

НСРоз для ИМК 32,4 НСРсиДляИУК 17,4

Таблица 10.

Приживаемость (%) и прирост (см) растений сирени обыкновенной в нестерильных условиях в зависимости от использования регуляторов роста на

Сорта Концентрации регуляторов роста, мг/л

6-БАП 0,01 Без 6-БАП

ИМК 0,5 ИМК 1,0 ИМК 2,5 ИМК 0,5 ИМК 1,0 ИМК 2,5

Приживаемость

Флора 90,0 90,0 86,7 70,0 70,0 66,7

Красавица Москвы 93,3 90,0 83,3 70,0 60,0 60,0

Сенсация 93,3 96,7 83,3 66,7 60,0 60,0

Примроз 80,0 83,3 76,7 60,0 56,7 56,7

Богдан Хмельницкий 86,7 83,3 76,7 60,0 60,0 53,3

НСРо5 для вариантов с 6-БАП 7,14 НСР05 для вариантов без 6-БАП 6,91 НСР частных различий 8,16

Прирост

Флора 18 17 15 7 7 8

Красавица Москвы 27 27 26 5 6 7

Сенсация 25 26 22 6 5 4

Примроз 17 18 16 5 4 5

Богдан Хмельницкий 14 13 14 2 2 2

НСРоз для вариантов с 6-БАП 2,85 НСР05 для вариантов без 6-БАП 2,22 НСР05 частных различий 8,1

Наличие растущих побегов сирени может увеличить устойчивость растений к стрессам при пересадке в нестерильные условия, с другой стороны, это может быть причиной их повреждения.

Однако высокие результаты приживаемости растений сирени при пересадке в нестерильные условия получены в варианте совместного использования 6-БАП и ИМК в концентрации 0,5-1,0 мг/л (табл 10) Приживаемость растений, укорененных на средах с использованием только ИМК значительно ниже и не превышает 70% Приживаемость растений сирени зависела от использованных регуляторов роста Для сортов Сенсация и Примроз адаптация растений лучше проходила при концентрации ИМК 1,0 мг/л, в то время как остальные сорта лучше приживаются при укоренении на 0,5 мг/л ИМК. Сорта Флора, Красавица Москвы и Сенсация лучше приживаются при пересадке в нестерильные условия, чем Примроз и Богдан Хмечьницкий.

Таблица 11

Влияние культара на ризогенез сирени обыкновенной (2002 г )_

Сорт Концентрация культара, мг/т

Контроль 0,01 0,1 0.5

Количество корней, шт

Флора 0 3 1 2

Красавица Москвы 1 4 2 3

Сенсация 1 4 2 3

Примроз 0 2 1 2

Богдан Хмельницкий 2 3 2 2

Среднее 0,8 3,2 1.6 2,4

НСР05 1,29

Средняя длина корня, мм

Флора 0 32 18 42

Красавица Москвы 3 52 30 56

Сенсация 2 48 26 44

Примроз 0 16 14 28

Богдан Хмельницкий 2 18 10 22

Среднее 1,4 33.2 19,6 38 4

НСР05 20 4

Укореняемость, %

Флора 0 16 10 86

Красавица Москвы 40 50 30 98

Сенсация 28 28 20 88

Примроз 0 10 8 70

Богдан Хмельницкий 26 26 12 90

Среднее 18,8 26 16 86,4

НСР05 17,4

При длительном культивировании на питательной среде, содержащей ауксины, часто наблюдается снижение адаптации растений к нестерильным условиям Способность растений к адаптации повышается с увеличением разветвленности корневой системы. Добавление в питательную среду культара увеличивало ветвление корней и приживаемость растений в нестерильных условиях (табл 11)

Для всех сортов отмечено значительное увеличение укореняемости, длины, количества корней по сравнению с контролем. Действие культара усиливается при совместном использовании с ауксинами. При добавлении ИМК в концентрации 0,01-0,5 мг/л наблюдается увеличение укореняемости сирени, однако укореняемость ниже, чем при использовании только культара.

Минеральный состав питательной среды. Уменьшение концентрации макросолей в питательной среде часто приводит к увеличению укореняемости. Изучали влияние концентрации в питательной среде макросолей и хелата железа. Использование половинного состава макросолей среды Мурасиге и Скуга способствовало повышению укореняемости на 14% и увеличению количества корней (от 2,9 в контроле до 3,8) в среднем по сортам. Дальнейшее уменьшение концентрации приводит к уменьшению укореняемости (до 7173%).

В варианте с меньшей концентрацией хелата железа также отмечено увеличение укореняемости на 16% и незначительное увеличение длины и количества корней вне зависимости от сорта.

Влияние числа пассажей на укореняемость. С увеличением числа пассажей укореняемость сирени в наших опытах увеличивалась. После 12 пассажа укореняемость всех сортов превышала 70%

При размножении сирени микрочеренкованием коэффициент размножения равен количеству междоузлий, если их длина не менее 7 мм. В случае, когда междоузлия короткие (менее 7 мм), необходимо использовать микрочеренки, включающие 2 и более междоузлий, что уменьшает коэффициент размножения. Коэффициент размножения может бьггь увеличен, если высаженный микрочеренок образует не один, а несколько побегов.

Таблица 12.

Укореняемость сирени в зависимости от числа пассажей на этапе _ размножения, % (2002-2003 гг.)_

Сорт Число пассажей

3 5 6 8 10 12 14 20

Флора 48 50 58 68 72 70 74

Красавица Москвы - 76 82 88 90 96 96 98

Сенсация - - 52 58 68 76 76 78

Богдан Хмельницкий 46 48 60 64 76 86 88 92

Сочетания различных регуляторов роста обладали высоким синергическим действием. При совместном использовании цитокининов с ауксинами в зависимости от их концентрации можно добиться получения большего количества побегов или побегов большей длины. При добавлении в питательные среды наряду с цитокининами ауксинов в некоторых случаях

наблюдалось развитие большего числа побегов, чем при использовании только цитокининов

На начальных пассажах большинство сортов практически не укореняется - при пересадке растений после третьего пассажа укоренялся только сорт Богдан Хмельницкий, после пятого - Богдан Хмельницкий, Флора и Красавица Москвы.

Влияние продолжительности этапа укоренения на укореняемость и последующую адаптацию к нестерильным условиям. С увеличением продолжительности периода укоренения количество корней и укореняемость увеличивается Однако с увеличением продолжительности культивирования растений на этап укоренения процент приживаемости растений в нестерильных условиях уменьшается, особенно для сортов Флора и Богдан Хмельницкий В то время как для других сортов такой закономерности не наблюдается

Таблица 13

Показатели укоренения и адаптации в зависимости от продолжительности этапа укоренения, % (2002-2003 гг )_

Сорт Продолжительность этапа укоренения, недель

6 | 8 \ 10 1 12

Укореняемость, %

Флора 70 81 100 100

Красавица Москвы 86 100 100 100

Сенсация 62 76 93 100

Богдан Хмельницкий 91 г 100 100 1 100

НСР05 19,8

Адаптация, %

Флора 94 96 80 78

Красавица Москвы 86 84 84 86

Сенсация 92 94 90 92

Богдан Хмельницкий 82 80 80 76

НСР05 12 6

Прирост за месяц, мм

Флора 46 40 12 0

Красавица Москвы 81 86 70 31

Сенсация 43 39 40 23

Богдан Хмельницкий 18 | 16 15 21

НСР05 3 7 2

Длительное нахождение на среде укоренения ингибировало рост растяжением растений в нестерильных условиях

Влияние состава субстрата и типа культивационного сооружения на адаптацию растений. Высокий уровень приживаемости растений отмечен на субстратах, содержащих торф и песок в соотношении 1:1 (50-78%) и торф,

песок и перлит в соотношении 2:2:1 (45-80%). В контрольном варианте (торф) приживаемость составляла 28-45%.

Использование пластиковых контейнеров под полиэтиленовой пленкой обеспечивает максимальный процент адаптации растений (в основном за счет уменьшения повреждения грибными заболеваниями). Растения, полученные при таком способе адаптации, обладают наилучшими биометрическими показателями.

Таблица 14.

Влияние типа субстрата на адаптацию сирени обыкновенной, % (2003 г.)

Сорт Состав субстрата

Торф Торф: Песок (1:1) Перлит Торф: Песок: Перлит (2:2:1)

Флора 34 76 45 78

Красавица Москвы 45 78 56 80

Примроз 28 50 34 45

Сенсация 38 64 46 67

Богдан Хмельницкий 43 67 50 62

Влияние эпина на приживаемость растений сирени. Однократная обработка эпином слабо влияла на приживаемость растений сирени на этапе адаптации. Тем не менее, прослеживается определенная тенденция влияния эпина на приживаемость растений после пересадки в нестерильные условия. Увеличение выхода растений на этапе адаптации получены при обработке эпином в концентрации 10"5 - Ю-*. Более низкие или более высокие концентрации скорее ингибирували рост и снижали успешную адаптацию.

Таблица 15.

Влияние эпибрассинолида на приживаемость растений сирени _обыкновенной (2003-2004 гг.)_

Сорт Концентрация эпина, мг/л

Контроль 10" 10"' 10"* 1<Г» 10

Флора 86 12 34 43 39 0

Красавица Москвы 90 15 42 47 45 12

Сенсация 80 14 46 53 48 12

Богдан Хмельницкий 78 0 10 14 12 0

НСРо519,9

Наибольший прирост побега наблюдали при обработке растений эпином в концентрации 10"5 - 10"6. Применение эпина в более высоких концентрациях незначительно влияло на рост, а в концентрации 10"8 заметна тенденция к ингибированию роста. Отмечена существенная сортовая реакция на применение эпина. Контрольные растения сорта Богдан Хмельницкий начинают рост только в следующий вегетационный период, в то время как быстрорастущие сорта Сенсация и Красавица Москвы имеют прирост до 5,5 см за первые месяцы после пересадки в нестерильные условия.

Наибольший прирост у растений сирени отмечен при 10-кратной обработке и обработке в течение всего вегетационного сезона с 10-дневным интервалом Однако разница в приросте между этими способами обработки несущественна Кроме того, при длительной обработке древесина верхней части побега не одревесневает, особенно у сортов Сенсация и Красавица Москвы, отличающихся наибольшим приростом. Неодревесневшие побеги в зимний период повреждались отрицательными температурами, что уменьшало выход стандартных саженцев и увеличивало время доращивания растений Альтернативой высадки растений в открытый грунт может служить хранение растений в подвальных помещениях с температурой +4 - +6°С Так же могут храниться и контейнерные растения Однако при 4-хкратной обработке эпином растения сирени, оставленные на зиму в открытом грунте, не повреждались, а в следующем вегетационном периоде дали прирост от 26 до 37 см в зависимости от сорта

Таким образом, обработки эпином существенно увеличивают приживаемость растений после пересадки их в нестерильных условиях, ускоряют одревеснение побега, что повышает их сохранность в зимний период

Выводы:

1. Высокая приживаемость сирени наблюдается при введении эксплантов в фазу активного роста и в период покоя маточных растений В фазу активного роста в качестве стерилизующих веществ лучше использовать гипохлорит натрия и сульфат меди, в период покоя гипохлорит натрия и сулему Для эксплантов сортов Сенсация и Флора характерна высокая степень повреждения при стерилизации

2 Оптимальным составом питательной среды следует признать среды Мурасиге и Скуга и Гам борга с добавлением 0,5 мг/л 6-БАП и 0,01 мг/л ИМК На приживаемость эксплантов положительное влияние оказывает эпин в концентрации 10 8-10"7 мг/л.

3 Экспланты сортов Красавица Москвы, Сенсация и Флора хорошо вводятся в культуру, но склонны к витрификации, экспланты сортов Богдан Хмельницкий и Примроз отличаются низкой приживаемостью, но не склонны к образованию витрифицированных побегов и каллуса

4. Использование на этапе размножения ауксинов совместно с цитокининами увеличивает коэффициент размножения сирени. Оптимальным сочетанием является 5,0 мг/л 6-БАП и 0,05 мг/л ИМК Максимальный коэффициент размножения отмечен для сортов Красавица Москвы и Сенсация, меньший Богдан Хмельницкий и Флора.

5 Использование на этапе укоренения цитохининов положительно влияет на развитие растений, оптимальным сочетанием является 0,5-1,0 мг/л ИМК и 0,01

мг/л 6-БАП. Применение паклобутразола (культара) улучшает развитие корневой системы, совместное применение его с ауксинами снижает укореняемость микрочеренков. Уменьшение концентрации макроэлементов в питательной среде в 2 раза положительно влияет на укоренение.

6. Увеличение числа пассажей на этапе размножения способствует увеличению укореняемости сирени. Сорта Богдан Хмельницкий и Флора могут укореняться после 5 пассажа, для остальных сортов необходимо культивирование не менее 12 пассажей.

7. Увеличение продолжительности этапа укоренения приводит к увеличению укореняемости сирени, но снижает способность к адаптации, ингибирует рост растяжением в нестерильных условиях. Высокой приживаемостью при увеличении продолжительности укоренения отличаются только сорта Богдан Хмельницкий и Флора.

8. Оптимальным субстратом для адаптации сирени является торф:песок: перлит в соотношении 2:2:1. Лучшим способом адаптации является посадка в микропарник в пластиковые контейнеры.

9. Использование эпина в концентрации 10'7-10"5 мг/л при адаптации сирени положительно действует на увеличение прироста у сортов Красавица Москвы, Флора, Сенсация, в меньшей степени у сорта Богдан Хмельницкий. Многократные обработки эпином значительно увеличивают прирост растений во время адаптации и при доращивании.

Рекомендации производству.

Для введения эксплантов сирени в культуру рекомендуется использовать питательную среду Мурасиге и С куга или Гамборга с добавлением 0,5 мг/л 6-БАП, 0,01 мг/л ИМК и 10"7-10"8 мг/л эпина. При введении на этапе активного роста побегов маточного растения стерилизацию проводить гипохлоритом натрия и сульфатом меди, в период покоя маточных растений - гипохлоритом натрия и сулемой.

На этапе микроразмножения сирени необходимо использовать питательную среду Мурасиге и С куга с добавлением 2,0-3,0 мг/л 6-БАП и 0,01 мг/л ИМК. Укоренения микрочереков следует производить после 8-10 пассажа на модифицированной среде Мурасиге и Скуга, содержащей половинную концентрацию макросолей и хелата железа, с добавлением 0,5 мг/л ИМК. Пересадку укорененных растений в нестерильные условия необходимо проводить чрез 8 недель.

В качестве субстрата для адаптации использовать смесь торфшесок: перлит в соотношении 2:2:1. посадку растений производить в пластиковые контейнеры в микропарники. После посадки проводить внекорневые подкормки раствором макро- и микроэлементов половинной концентрации

среды Мурасиге и С куга, а также 8-10 кратные обработки энином 105-10-6 мг/л в течение сезона с периодичность 10 дней

Публикации по теме диссертационной работы:

1. Деменко В И, Крючкова В.А Влияние солевого и гормонального состава среды на рост и развитие in vitro сирени обыкновенной (Syrmga vulgaris L) II В сборнике «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях» Тез докл VI межд конф М , Изд-во МСХА, 2001, с. 180

2. Деменко В И, Крючкова В А Влияние гормонального состава питательной среды на введение в культуру лещины обыкновенной (Corylus avellana L) II В сборнике «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Тез докл. VI межд. конф. М, Изд-во МСХА, 2001, с.180.

3 Крючкова В.А., Деменко В И. Влияние регуляторов роста на микроклональное размножение сирени (Syringa vulgaris L.) И Материалы научной конференции молодых ученых и специалистов. М, Изд-во МСХА, 2001, с 63-65

4 Крючкова В А, Деменко В И Сравнительная оценка способов микроклонального размножения сирени (Syrmga vulgaris L.) I/ Сборник научных трудов по мат конф к 12-летию П Шитта и 100-летию АМНегруля, М, Изд-во МСХА, 2001,99-108.

5 Деменко В И, Крючкова В А. Адаптация растений, полученных in vitro, к нестерильным условиям. // Доклады ТСХА, вып 274 М , Изд-во МСХА, 2002, с 99-104

6 Крючкова В А, Деменко В И, Мамонов Е В Укореняемость сирени обыкновенной in vitro в зависимости от регуляторов роста // Доклады ТСХА, вып 274 М , Изд-во МСХА, 2002, с 109-112

7. Крючкова В А, Деменко В И, Мамонов Е В Влияние типа культвационного сооружения для адаптации на приживаемость при переносе растений сирени в нестерильные условия II Доклады ТСХА, вып. 276, М, Изд-во МСХА, 2004, с.449-451.

Объем 1,25 п л

Зак 262

Издательство МСХА 127550, Москва, ут Тимирязевская, 44

Тираж 100 эю