Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Биотехнологические методы интенсификации воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве

ВАК РФ 06.02.06, Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

Автореферат диссертации по теме "Биотехнологические методы интенсификации воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве"

На правах рукописи

Б АН ТЛЕ СО В ЕРБУЛАТ УПИЕВИЧ

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ВОСПРОИЗВОДСТВА МАТОЧНОГО СТАДА В МЯСНОМ СКОТОВОДСТВЕ

06.02.06 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

2 ^ 033 гол

Саратов 2011

4856334

Работа выполнена на кафедре «Акушерство и хирургия животных» ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И.Вавилова»

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Авдееико Владимир Семенович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Нежданов Анатолий Григорьевич

доктор ветеринарных наук, профессор Петров Алексей Михайлович

доктор ветеринарных наук, профессор Турков Владимир Георгиевич

Ведущая организация: НГУ «Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт» Россельхозакадемии.

Защита состоится « 18 » февраля 2011 года в «Ю00» часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.01 при ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по адресу: 410005, РФ, г. Саратов, ул. Соколовая, 335.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Автореферат разослан « 17 » января 2011г.

Отзывы направлять по адресу: 410012, Саратов, Театральная пл., 1, ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», диссертационный совет Д 220.061.01.

Ученый секретарь диссертационного совета

И.Ю. Домницкий

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1.Актуальноеть темы Биотехнология воспроизводства является эффективным инструментом селекции. Реализация биотехнологической программы на основе имеющегося уровня знаний прогнозирует достижение оплодотворяемости 80% коров в первые 60 дней после отела, равномерное распределение отелов в течение года, получение не менее 90 телят на 100 коров, снижение в 3...5 раз выбраковки из-за бесплодия. Тем не менее, реализация достижений в области биотехнологии воспроизводства встречает затруднение не только в условиях практического мясного скотоводства, но и на предприятиях сферы научно-исследовательских институтов. Широко известные методы гормональной регуляции половой функции зачастую ориентированы на проведение обработок животных без учета функционального исходного состояния организма, определяемого конкретными факторами окружающей среды.

Мощным средством интенсификации воспроизводства служит метод трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, основным назначением которого является генетическое улучшение животных. Трансплантация эмбрионов используется для интенсивного получения потомства от ценных в генетическом отношении самок. Разработанный метод криоконсервации эмбрионов даёт возможность продлить «хранение генов» практически неограниченно, что обеспечивает реализацию долгосрочных генетических программ благодаря воспроизводству нужного генофонда в любое время. Получение двоен от каждой самки, с помощью метода трансплантации, открывает широкие возможности для увеличения продуктивности и генетических исследований.

Приемлемое решение проблем в животноводстве - применение низкоэнергетического магнитно-инфракрасно-лазерного, электромагнитного излучения и динамической электронейростимуляции. Аппараты для проведения квантовой профилактики и терапии, производимые Российскими фирмами («РИКТА-МВ»), («Орбита»), («ЗооДиаДЭНС») открывают новые перспективы для дальнейшего усовершенствования существующих и разработки новых теоретических и практических подходов к решению проблемы интенсификации воспроизводства животных в мясном скотоводстве.

1.2.Цель и задачи исследования Изучить эндокринные механизмы регуляции полового цикла и отработать схемы применения гормональных препаратов для стимуляции фолликулогенеза, трансплантации эмбрионов, а также разработать биотехнические методы повышения воспроизводства маточного стада крупного рогатого скота в мясном скотоводстве.

При этом были поставлены и решены следующие задачи:

- изучить эндокринные аспекты, лежащие в основе биотехнических методов воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве;

- оценить, с учётом этнологии и патогенеза, эффективность методов нормализации фолликулогенеза при нарушениях функции яичников у коров;

-определить биотехнологические параметры получения, криоконсервации, хранения, размораживания и трансплантации эмбрионов у мясных коров;

- изучить эффективность методов применения биофизических воздействий для нормализации процессов в эндометрии при проведении биотехнилогических мероприятий;

- определить влияние низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного и электромагнитного излучения, динамической элекгронейростимуляции на физиологический, иммунобиологический и гормональный статус организма коров;

- изучить возможности и целесообразность направленной стимуляции возобновления овариальной цикличности у коров в послеотёльный период с использованием низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного и электромагнитного излучения и динамической электронейростимуляции.

1.3. Научная новизна:

- дана характеристика воспроизводительного статуса поголовья мясных коров ряда сельхозпредприятий в условиях различных регионов РФ, а также Республики Казахстан;

- определены эндокринные профили у коров при различном функциональном состоянии яичников на протяжении спонтанного и индуцированного полового цикла, а так же эндокринный статус при гипофункции яичников;

- доказаны с применением ультрасонографии морфо-функциональные предпосылки, определяющие эффективность воздействий гормональными препаратами при использовании биотехнических методов воспроизводства проблемных коров на основе детальной дифференциации нарушений половой функции;

- определена методическая основа устранения различных форм нарушений фолликулогенеза и исследованы биотехнологические параметры получения, криоконсервации, хранения, размораживания и трансплантации эмбрионов мясных коров;

- обоснована необходимость комплексного подхода к методам управления репродуктивной функцией коров при её нарушениях путём одновременного воздействия гормональными регуляторами и методами квантовых излучений (аппараты «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС») для интенсификации воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве;

- выявлены параметры биохимических показателей крови после применения электромагнитного излучения крайне высоких частот мм-диапазона, магнитно-инфракрасно-лазерного излучения и динамической элекгронейростимуляции которые подтверждают безопасность и позитивные биологические свойства квантовых методов и, таким образом, физиологически обосновано его применение как элемента биотехнологии регуляции репродуктивной функции.

1.4.Теоретическая и практическая значимость работы:

- определены факторы, лежащие в основе эффективного применения биорегуляторов с целью интенсификации репродуктивной активности мясных коров;

- выявлены параметры получения, криоконсервации и трансплантации эмбрионов у мясных коров в усовиях резко-континетального климата Западного региона Республики Казахстан;

- обоснованна необходимость использования электромагнитного излучения крайне высоких частот мм-диапазона, низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного излучения, динамической электронейростимуляции для коррекции репродуктивной функции, как элемента биотехнологии воспроизводства, в т.ч. и при активизации овариальной функции в послеродовой период, что значительно повышает эффективность биотехнологии воспроизводства;

- внедрены методы и пути снижения эмбриональных потерь у мясного скота.

Внедрение в производство полученных материалов исследований снижают стоимость и значительно повышают экономическую эффективность биотехнических мероприятий при ведении мясного скотоводства Республики Казахстан. Достигаемое при этом снижение уровня выбраковки высокопродуктивных коров вследствие потери плодовитости и интенсификация репродуктивной активности, в свою очередь, значительно ускоряют накопление и реализацию ценного селекционно-генетического потенциала коров мясных пород.

Материалы диссертации нашли применение при чтении лекций и проведении практических занятий в ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова», РГП «Западно-Казахстанский аграрно-технический университет им. Жангир хана», ЗКИТУ «Западно-Казахстанский инженерно - гуманитарный университет».

1.5.Апробация и реализация результатов исследований Результаты исследований отраженные в диссертации внедрены в племенных хозяйствах Западно-Казахстанской области (ТОО Племзавод «Чапаевский», ТОО «Изденис», К/Х «Шунайбекова»), а также племзаводе «Сычевский», КФХ «Новоузенский» Российской Федерации.

Основные результаты диссертационной работы доложены н одобрены на: ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов РГП «Западно-Казахстанский аграрно-технический университет им. Жангир хана» (г. Уральск, 1995-2010 гг.) ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» (г. Саратов, 2004-2010 гг.); Российской научно-практической конференции: «Современные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Саратов, 2007; 2008 гг.); межрегиональной научной конференции молодых ученых и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа (Саратов, 2005); XIII Московском международном ветеринарном конгрессе (Москва, 2005-2009 гг.).

1.6.Публикацин По теме диссертации опубликовано 57 работ, из них 14 опубликованы в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Получено 6 патентов, в которых отражены основные научные положения. Общий объем публикаций 21,8 печатных листа, из которых 16,3 п.л. принадлежат лично соискателю.

1.7.Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений. Список использованной литературы содержит 330 источника, из них 117 иностранных авторов. Диссертация изложена на 294 страницах, содержит 94 таблиц, 1 фотография и 28 рисунков, приложения на 10 страницах.

1.8.Рсновные положения, выносимые на защиту:

- эндокринные аспекты, лежащие в основе биотехнических методов воспроизводства маточного стада мясных коров;- гормональный статус, определяющий нормализацию функциональной активности яичников при проведении биотехнических мероприятий;

- с учётом этиологии и патогенеза дана оценка эффективности методов нормализации фолликулогенеза при различных нарушениях генеративной функции яичников у мясных коров;

состояние яичников, фолликулогенеза и эмбрионов при проведении трансплантации;

- в сравнительном аспекте дана оценка эффективности методов применения биофизических воздействий для профилактики и нормализации процессов в эндометрии при проведении биотехнических мероприятий;- возможности и

целесообразность направленной стимуляции возобновления овариальной цикличности у коров в послеотёльный период.

2.Материал и методы исследования

Экспериментальные исследования проводили - в хозяйствах Западно -Казахстанского региона Республики Казахстан (ТОО племзаводе «Чапаевский», К/Х «Шунайбекова», ТОО «Изделие»), а также в регионе Нижнего Поволжья Российской Федерации (Племзавод «Сычевский» и КФХ «Новоузенский»),

При проведении опытов максимально учитывали производственные условия и традиционную технологию разведения и содержания мясного скота. Кормление осуществляли с учетом физиологического состояния и продуктивности животных согласно норм и рационов, установленных в хозяйствах. Для характеристики функциональных нарушений воспроизводительной функции у коров и выяснения эффективности биотехнических методов их устранения применяли комплексный подход согласно «Методических указаний по диагностике, лечению и профилактике акушерско-гинекологических болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров» МСХ РФ,-М.: 2005. Стимуляцию активности яичников у «проблемных» коров при нарушениях фолликулогенеза проводили на более чем 850 коровах с использованием различных биорегуляторов отечественного производства: ФСГ-супер, ГСЖК в комплексе с прогестагенами, аналогами гонадолиберина, хориогоническим гонадотропином человека, синтетическими простагландинами в различных сочетаниях и дозировках.

Исследования по влиянию биотехнологических факторов на репродуктивную функцию проводили на протяжении 1995-2010 гг.

Для сравнительного изучения характера изменений в организме животных в разные физиологические периоды проводили лабораторные исследования. Концентрацию стероидных гормонов определяли радиоиммунологическим методом. Иммунобиологическое состояние коров определяли путем проведения гематологических и биохимических исследований проб крови животных с использованием современных методов. Уровень общего белка в сыворотке крови (CK) определяли рефрактометрически (рефрактометр ИРФ-22). Уровень общих иммуноглобулинов - цинк-сульфатным методом по A.D. McEwan, E.W. Fisher, J.E. Selman, W.R. Penhaie [1970]; белковые фракции определяли по Оллу Маккорду в модификации Каршока [1962); общие липиды - по А.Ф. Криницкому в модификации В.И. Волгина [1969], холестерин - по Ильку [И.П. Кондрахин и др., 1985]; гемоглобин - при помощи ФЭК по Г.В. Дервизу и А.И. Воробьеву [1959]; бактерицидную активность сывороток крови - по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой [1966]; активность ß-лизинов - по О.В. Бухарину и Н.В. Васильеву [1977]; эритроциты - по А.И. Воробьеву [1959]; количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу - по A.A. Кудрявцеву и JI.A. Кудрявцевой [1973]. После проведения ректального исследования на наличие желтого тела у коров осуществляли гормональную обработку препаратами ФСГ-Фоллитропин (Литва) в дозе 1200 ИЕ, гроффолон в дозе 1000 ИЕ, ФСГ-п (США) в дозах 42 и 52 мг, ГСЖК (Чехия) в дозе 3000 ИЕ. Обработку проводили на 8-12 день полового цикла. В исследовании была применена 4-х дневная схема гормональной обработки препаратом ФСГ с двукратным введением простагландина (эстрофан) в дозе 500 мкг ГСКК вводили на 9-12 день полового цикла и на 12-16 день инъецировали простагландин. В качестве коров-доноров были

использованы 110 чистопородных коров казахской белоголовой породы класса элита и элита-рекорд в возрасте от 3 до 13 лет (схема исследований). В качестве реципиентов телок случного возраста (18-20 мес.) и молодых коров (1-3 отелов) казахской белоголовой и в отдельных случаях молочной породы, менее ценные в племенном отношении, клинически здоровые, без отклонений в репродуктивных органах и нормальной половой цикликой. Коров-доноров отбирали по племенной ценности, воспроизводительным качествам на основе данных зооветеринарного учета и физиологического состояния половых органов. Искусственное осеменение коров-доноров осуществляли через 18 часов после введения эстрофана двух- и трехкратно с интервалом 8-10 часов двойной дозой свежеполучениой разбавленной (1:3 и 1:6), хранившейся при 0°С спермой с активностью 5 баллов и концентрацией более 30 млн/мл сперматозоидов в дозе, а также замороженно-оттаяниой спер.мой быков-улучшателей, оцененных по качеству потомства. Эмбрионы извлекали у коров-доноров нехирургическим методом с использованием резиновых катетеров. Для определения жизнеспособности зародышей применяли визуальную морфологическую оценку по пятибалльной шкале, разработанной в ВИЖе. При возникновении сомнений жизнеспособности заморожено-оттаянных эмбрионов их подвергали кратковременному культивированию 1-2 часа. Для культивирования применяли среды (ФБС + 30% фетальной сыворотки теленка) в термостате при температуре +37°С. При подготовке эмбрионов к замораживанию клетки зародышей насыщали раствором глицерина в 1,4 М концентрации. Для криоконсервирования биоматериала были использованы в качестве контейнеров пластиковые соломинки. Замораживали эмбрионы на программном замораживателе ЗЭМ-4 и ЗЭМ-1 в газообразном азоте без блока программного управления.

Нами изучено применение электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм - диапазона в научно-хозяйственном опыте на 90 коровах аппаратом «Орбита» производства ОАО «ЦНИИИИА» (г. Саратов) с соблюдением инструкции, изложенной в руководстве по эксплуатации аппарата и в методике по его применению. Воздействие аппаратом «Орбита» проводили по одной процедуре в день (продолжительность 7... 10 мин). Охоту у коров выявляли по данным трехкратного визуального наблюдения и осмотра в течение дня и подтверждали ее появление быком-пробником.

Нами проведены исследования по изучению влияния низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного излучения на сроки инволюции матки у 40 мясных коров казахской белоголовой породы после нормального отела, из которых сформировали одну контрольную и три опытных группы по 10 голов в каждой. Воздействие осуществляли аппаратом «РИКТА - МВ» при установлении наиболее оптимального режима. Во втором опыте, также проведенном на 40 коровах, ставилась задача изучить влияние одинакового режима воздействия (3 мин) аппаратом «РИКТА -МВ», но в различные сроки после отела. Коров 1-й опытной группы обрабатывали низкоинтснсивным магнитно-инфакрасно-лазерным лучом через 5 дней после отела, 2-й - через 7дней, 3-й - через 10 дней после отела в течение 5 дней. В контрольной группе аппарат «РИКТА - МВ» не применялся.

Электропунк-гуру аппаратом «ЗооДиаДЭНС» проводили, воздействуя на зоны расположения БАТ 30, 31, 32, 33 и 60 по 1, 2, 3 мин на 5-й день после отела при частоте импульсов аппарата 20 Гц. Клинические и морфологические, биохимические и эндокринные показатели коров при изучении биофизических средств определяли по принятым в физиологии и клинической диагностике методикам.

Статистическую обработку экспериментального материала проводили на персональном компьютере с использованием программы Microsoft Excel.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Биотехнологические приемы управления воспроизводством маточного стада крупного рогатого скота

С целью детализации временных параметров продолжительности полового цикла, прихода коров в охоту, овуляции и динамики развития фолликулов были проведены исследования на животных без клинически выраженной патологии репродуктивной системы. У 23 коров инъекцией эстрофана (500 мкг), при наличии хорошо выраженного жёлтого тела в одном из яичников, индуцировали охоту. Типичные клинические признаки охоты, в среднем через 34,3 часа после инъекции, проявила 21 корова, у которых исследовали динамику роста фолликулов от 1-й до 2-й овуляции (таблица 1).

Таблица 1 - Сроки прихода коров в охоту, овуляция, динамика развития и размер фолликулов

Число коров, п 23

Число животных, проявивших охоту и овуляцию в индуцированную охоту, п 21

Интервал времени между инъекцией эстрофана и появлением признаков охоты, ч 34,3± 1,03*

Продолжительность цикла, дней 21,7±0,91*

Количество животных (п-%) с

двумя волнами роста популяции фолликулов 16 (76,1)

тремя волнами роста популяции фолликулов 5 (23,9)

Срок появления второй волны роста фолликулов, дней 11,3±0,69

Срок появления третьей волны роста фолликулов, дней 16,3±1,09**

Продолжительность доминирования фолликула, дней 6,1±1,79*

Диаметр доминантного фолликула перед овуляцией, мм 15,8±0,02***

Интервал времени от начала эструса до овуляции, часов 26,Ш,71*

Примечание: здесь и далее, *р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001

Продолжительность цикла, в среднем, составила 21,7±0,91 дней. Большинство животных на протяжении цикла имело 2 волны роста фолликулов (76,1% против 23,9%). При этом продолжительность существования доминантного фолликула, как при двух-, так и при трёхволновом росте популяций составляла 6,1±1,79 дней. При двух-, и трёхволновом росте популяций размеры доминантного фолликула составили, в среднем, 15,8±0,02 мм в диаметре. Интервал времени от первых признаков охоты до овуляции составил 26,1±1,71 часа. Наиболее высокую концентрацию прогестерона (6,4 нг/мл) наблюдали на 16-й день у коров с тремя волнами роста, у коров с двумя волнами - на 12-й день (5,9 нг/мл). Размер жёлтого

тела при пиковых значениях прогестерона был несколько большим у животных с тремя волнами роста фолликулов. Концентрация эстрадиола в период эструса была также исследована у групп коров, включающих животных с двумя и тремя волнами роста популяции фолликулов. Максимальная концентрация (16,1пкг/мл) наблюдалась, через 2...4 часа после начала эструса. Пик концентрации ФСГ наблюдался на 11... 12 дни у коров с двумя волнами роста фолликулов и на 4-5-й и 15-16 дни у коров с тремя волнами роста. В качестве объективного критерия исследовалась динамика гормонального фона в крови подопытных животных. Изменения уровня концентрации прогестерона в течение 72 часов после инъекции препаратов составили лишь 0,2...0,55 нг/мл при исходном значении показателя 1,7±0,24 нг/мл. Сравнительное испытание увеличения дозы анипросга и клатрапростина до 500 мкг действующего вещества (по клопростенолу) провели на трёх группах: первой группе (п=20) вводили эстуфалан, второй (п=27) и третьей (п=27) группам - анипрост и клатрапростин, соответственно. Исходный уровень стероидных гормонов в группах животных был одинаковым. Концентрация прогестерона по группам составляла 1,78±0,33, 1,92±0,76 и 1,90±5,7 нг/мл, а эстрадиола - 29,0±2,34, 25,0±3,7 и 27,0±3,70 пг/мл. Резкое снижение содержание концентрации прогестерона до 0,08±0,02 нг/мл после инъекции эстуфалана произошло практически у всех животных через 48 часов. Снижение концентрации прогестерона в крови животных второй и третьей групп происходило асинхронно.

Во всех случаях при аналогичных сроках происходило повышение до максимальных величин конце1гграции эстрадиола до 31,5±3,5-40,0±5.2 пг/мл, причём совпадало по времени с клинически выраженными признаками охоты. Следовательно, анализ полученных данных позволяет сделать заключение, что инъекция эстуфалана через 48 часов приводит к синхронному лизису жёлтых тел у большинства коров. Анипрост и клатрапростин также обладают высокой лютеолитической активностью, однако, при низкой синхронности её проявления. Лютеолитический эффект препаратов ПГФ2а при полноценном желтом теле повышается от применения их в сочетании с другими биорегуляторами, например, с эстрогенами по следующей схеме: однократно внутримышечно ПГФ2 а (энзапрост-Ф) в дозе 15 мг/гол. или эстрофан - 0,25 мг/гол. с последующей инъекцией эстрадиола дипропионата 0,1% масляного раствора в дозе 2 мг/гол. (20 тыс. ед.). Время восстановления половых циклов составляет 5 - 10 дней, что увеличивает оплодотворяемость на 8,9 - 19,1%. Применение всех синтетических простагландинов показало равную эффективность (таблица 2). Доля, как коров, так и тёлок, пришедших в охоту, была довольно высокой при незначительных колебаниях. Практически у всех животных охота началась через 48 часов. Коров пришло в охоту от 90,0 до 93,3%. Как по группам коров, так и по группам тёлок, были получены удовлетворительные показатели оплодотворяемости после осеменения в индуцированную охоту. По группам коров оплодотворяемость в индуцированную охоту колебалась от 46,4 до 53,6, по группам тёлок - от 51,9 до 53,6. Следует отметигь, низкую оплодотворяемость коров после применения суперфана - 46,4% относительно групп коров, где вводили клатрапростин и эстуфалан. Общее количество осеменённых коров и тёлок в индуцированную и спонтанную охоту имели довольно высокие показатели по группам при незначительных колебаниях. Причём, в трёх группах коров был равный показатель - 80. По группам тёлок общий процент стельности составлял 80,0... 86,7%. В продолжение экспериментов провели испытание тех же синтетических простагландинов двукратной, с интервалом 11 дней

инъекции. Первую инъекцию провели в период с 6 по 18 день полового цикла. Индуцированную охоту фиксировали, по группам коров, при применении суперфана и эстрофана у обработанных животных, при введении клатрапростина.у 53,3%, а при введении эстуфалана - у 46,7%. В то же время, по группам тёлок при введении эстуфалана процент пришедших в охоту был наивысшим-56,7%, а в других трёх группах равным-53,3%.

Таблица 2 - Эффективность применения синтетических простагландинов при введении на 10-12 день спонтанного цикла

Препараты Обработано животных Пришли в охоту Плодотворно

В индуцированную охоту % к числу осеменения в индуцированную охоту Всего за 2 охоты % к числу обработанных животных

Коровы

п п % п % п %

клатрапростин 30 27 90,0 14 51,9 24 80,0

эстуфалан 30 28 93,3 14 50,0 22 73,3

суперфан 30 28 93,9 13 46,4 24 80,0

эстрофан 30 28 93,3 15 53,6 24 80,0

Телки

клатрапростин 30 27 90,0 14 51,9 25 83,3

эстуфалан 30 28 93,3 15 53,6 26 86,7

суперфан 30 27 90,0 14 51,9 25 83,3

эстрофан 30 28 93,3 15 53,6 24 80,9

Оплодотворяемость в индуцированную охоту по группам коров была от 46,7 до 50,094, по группам тёлок от 50,0 до 52,9%. Несколько выше была оплодотворяемость при введении суперфана - 56,3%. В целом по группам был удовлетворительный показатель оплодотворяемости в индуцированную охоту, по группам коров от 50,0 до

55,6%, по группам тёлок- от 50,0 до 55,6%. Учитывая число плодотворных осеменений после второй обработки в индуцированную и спонтанную охоту вместе, вывели общие показатели оплодотворяемости. Общее число пришедших в индуцированную охоту животных по группам имело незначительные колебания от 80,0 до 93,3% по группам коров и от 86,7 до 90% по группам тёлок. В целом, оплодотворяемость в индуцированную охоту составила от 50,0 до 58,3%, а индуцированную и последующую спонтанную - 50,0-63,3%.

Нами испытана эффективность комбинированного введения ГСЖК в дозе 500 ИЕ, фоллитропина в дозе 300 ед. с простагландинами для синхронизации охоты у коров фронтально. Не было выявлено существенных различий между группами коров, в которых применяли клатрапростин, эстуфалан, суперфан и эстрофан. В то же время необходимо отметить, что при введении в схему обработок фоллитропина по сравнению с ГСЖК даёт несколько лучшие показатели относительно общего числа коров с индуцированной охотой - 91,7 против 85,8, число приходящих в охоту через 48 - часовой интервал после обработки - 76,7 против 67,5, меньше животных приходит в охоту через 72 часа - 3,3 против 5,8. Тем не менее, общие показатели оплодотворяемости после осеменения в индуцированную охоту оказались равными (70,9%).

Учитывая данные литературы о том, что доля стельностей в индуцированную охоту может увеличиваться до 90% при дополнительной аппликации Оп-Ш1 и, что данные по этому вопросу не однозначны, мы провели сравнительные исследования эффективности введения перед осеменением синтетических гонадолиберинов -диригестраиа в дозе 5,0 (производство фирма «Лечава». Чехия) и отечественных -сурфагона в дозе 5,0 мл или ХГЧ 1000 ИЕ. Препараты вводили коровам и тёлкам в охоту, индуцированную как только простагландинами, так и комбинированными методами - простагландинами в сочетании с ГСЖК или фоллитропином. Введение как диригестрана, так и сурфагона увеличивало процент плодотворных осеменений до 80...85% и у коров, и у тёлок. Введение хориогонина дало во всех случаях стабильно одинаковый результат - 80,0% стельностей от числа осеменений. Общая эффективность стабилизации овуляции гонадолиберинами и ХГЧ при всех трёх применяемых методах синхронизации охоты у коров и тёлок колебалась от 80 до 83,3%. Введение в обработки с целью синхронизации охоты синтетических гонадолиберинов даёт положительные результаты более стабильно. В синхронизированную охоту отчётливо улучшалась оплодотворяемость до 80...90% при стабилизации сроков наступления и продолжительности охоты.. Точности синхронного проявления охоты у коров, возможно достичь включением в обработку инъекции эстрадиола бензоата через 48 часов после инъекции простагландина.

Отрицательной стороной при этом считается вероятность образования у определённого числа коров овариальных кист, однако этот негативный фактор можно нивелировать за счёт введения ХГЧ. В этой связи нами были проведены испытания обработок простагландином с комплексом ХГЧ-эстрадиол бензоата через 12 часов после инъекции простагландина. Исследование состояло из 2-х последовательных частей. В 1 части испытывали эффективность различных дозировок. Во 2-ой части определяли репродуктивные показатели после обработок при пальпаторно зафиксированном жёлтом теле, но без предварительного выявления охоты. В опыте было использовано 24 коровы через 60 дней после отёла. На 11... 12 день после охоты при хорошо выраженном жёлтом теле животным первой группы ввели 500 мкг эстуфалана, а через 12 часов 1200 ИЕ ХГЧ и 5 мг эстрадиола бензоата, во 2г - 500 мкг

эстуфалана и 750 ИЕ ХГЧ и 3 мл эстрадиола бензоата. В период до и во время эетруса исследовали яичники, фиксируя наличие больших фолликулов. Через 10 дней после эструса ректальными исследованиями проанализировали развитие лютеальных структур.

В эксперименте использовали 71 здоровую корову. Животные находились в состоянии с 40 по 100 денытосле отёла. Коровы были распределены по 2 группам по 36 голов. Обработки проводили при наличии хорошо выраженного жёлтого тела. Обработку 1 группы провели только простагландином, во 2-ой группе - так же, как во второй группе первой части. Начиная через 27 часов после проведения обработок и до наступления овуляции, т.е. в течение 4 дней проводили ректальные исследования динамики морфологических изменений в яичниках обработанных коров. Фиксировали диаметр жёлтых тел, фолликулов, консистенцию матки и степень раскрытия цервикального канала. Критериями того, что коровы были в охоте, служили: наличие предовуляторного фолликула 15...20 мм в диаметре; раскрытие шейки матки; и постовуляторное жёлтое тело не менее 10 мм в диаметре.

Плодотворность осеменения определяли по стельности, зафиксированной ректально на 60 день после осеменения. В первой части исследований интервал от отёла до обработки составил 67,9±14,6 дней в первой группе и 74,1± 12,2 дня во второй группе. Интервал времени, в который все коровы приходили в охоту после обработки простагландином составлял 24-48 часов. В 1-ой группе эструс начинался через 34,0±6,3 и во 2-ой-35,5±2,4. У четырёх коров из 1-ой группе через 10 дней при отсутствии жёлтых тел обнаружили фолликулоподобные образования диаметром 2 см, которые впоследствии трансформировались в кисты. У остальных коров зафиксировали наличие жёлтых тел.

Для исследования были подобраны 18 проблемных мясных коров 3-5-летнего возраста с нормальными кондициями тела, которые имели, индекс осеменения не ниже 2,6. Наблюдение животных в эструсе проводили ежедневно, 3 раза в день. С момента осеменения (день 0) у каждой коровы каждый четвёртый день проводили ректальное и ультрасонографическое исследование. Для этих целей использовали ультразвуковой сканер Aloka SSD-210 DX с частотой 5 МГц и видеопринтер Sony UP-850. Наблюдение над овуляторкыми фолликулами осуществляли с первого дня исследований (день 0) (п=18) вплоть до их следующего формирования (п=8). При этом были исследованы: размер, локализация и количество фолликулов на яичнике; отмечали день начала роста, день достижения максимального размера, период и показатели роста фолликулов, продолжительность и показатели атрезии.

С помощью ультрасонографии были исследованы жёлтые тела и вычислен объём лютеальной ткани: 'Л высота х Vi ширина х я; если жёлтое тело имело вид полости, то его объём и характеристики не учитывались. Коровы через 19-28 дней после осеменения были поделены на две группы: 1- проблемные, не проявляющие признаков эструса; 2 - проблемные, проявляющие признаки эструса. Средний диаметр 26 овуляториых фолликулов составлял 17,8±3,61 мм. При средней продолжительности полового цикла 23,3±2,7 дней, половина коров проявляла признаки эструса в пределах 19-28 дней, а половина коров эструса не проявляла.

Размер овуляторных фолликулов в 1-й группе составил 18,8±2,91 мм (п=12), во 2-й группе-7,0±4,11 мм (п=14). Две волны роста фолликулов были зафиксированы у 72,2% коров (13/18), а три волны- 16,6% (3/18) коров. Была отмечена значительная разница в параметрах среднего диаметра предовуляторных фолликулов и количеством воли роста фолликулов на протяжении полового цикла коров: в цикле с

двумя волнами роста фолликулов, средний диаметр предовуляторных фолликулов составил 18,8±2,11 мм; при трёх волнах-4,5±2,12 мм; при одной волне-5,0±1,91 мм; при четырёх волнах-3,2±1,09 мм, т.е. эти и другие параметры, характеризующие фолликулярные изменения имели различия в зависимости от числа волн роста популяций.

Три группы коров, распределенных по этим признакам, обработали внутримышечно инъекциями фоллимага (1200 ИЕ) и магэстрофана (500 миг).

Результат подтвердил наше предположение: если в 1 и 2 группе мы получили положительные результаты, то в 3-ей - показатели, как по числу проявивших признаки охоты, так и числу плодотворно осемененных коров оказались негативными. Это позволяли прогнозировать исходные концентраций прогестерона. Необходимо подчеркнуть, что коровы 1 и 2-ой групп, не сгавшие стельными после первого осеменения, были плодотворно осеменены в последующую, спонтанную охоту, в то время как представители 3-ей группы остались бесплодными.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что при определении способа стимуляции яичников при гипофункции следует учитывать уровень концентрации прогестерона. Использование фоллимага и магэстрофана эффективно при значениях не ниже 0,5 нг/мл. При более низких концентрациях в схему обработки целесообразно включать сурфагон в дозе 10,0 мл. В следующем научно-производственном опыте из коров с наличием гипофункции яичников было сформировано две подопытные группы.

Животным первой группы проводили гестагенизацто прогестероном (2,5%...5,0%) и через 168 часов вводили фоллимаг и магэстрофан в дозах 2000 ИЕ и 500 мкг, соответственно.

Животных второй группы обрабатывали без предварительной гестагенизации. В опыте в течение 5 дней после окончания обработок охоту проявило на 32,2% больше коров, чем в контроле. Стельных за этот период оказалось на 21,1% больше. С целью сравнения показателей плодовитости у коров при временном застое цикла после спонтанного и стимулированного восстановления половой цикличности нами были отобраны контрольная и опытная группы животных. Опытной группе возобновление овариальной активности стимулировали введением фоллимага (1000 ИЕ) и магэстрофана (500 мкг).

Сервис-период составил свыше 121 дня при индексе осеменения 2,3. С целью синхронизации охоты у мясных коров в анэстральный период применили три схемы обработки: - животным первой группы под кожу основания уха на 9 дней вводили имплантанты («Ыегуй»), содержащие 6 мг норгестомета, а за 48 ч до их извлечения -магэстрофан в дозе 500 мкг; - второй группе - имплантанты с 3 мг норгестомета и одновременно 5 мг эстрадиол валерата. На 9-й день после их извлечения вводили внутримышечно 1500 ИЕ фоллимага и на 11-й день - магэстрофан в дозе 500 мкг; -третьей группе (контроль) - 1500 ИЕ фоллимага в сочетании с магэстрофаном в дозе 500 мкг. Исследования показали, что наиболее эффективным было введение имплантантов с 3 мг норгестомета в сочетании с 5 мг эстрадиол валерата, 1500 ИЕ фоллимага и 500 мкг магэстрофана. Во второй группе в охоту пришло 80,0% от числа обработанных, из них 75,0% имели признаки охоты уже через 48 ч после инъекции простагландина. При этом плодотворность первого осеменения составила 20,5%, индекс осеменения — 1,7.

Использование имплантантов с 6 мг норгестомета, 1500 ИЕ фоллимага и 500 мкг магэстрофана позволило вызвать охоту у 60,0% коров первой группы, что на 20%

меньше, чем во второй. Плодотворность осеменений составили 58,3% при индексе осеменения 2,1. Самые низкие показатели по синхронизации охоты и плодотворности осеменений получили в контрольной группе. Не проявили признаков охоты 33,3% животных и плодотворность осеменения не превысили 33,3% при неудовлетворительном индексе осеменения -2,7+0,01.

Таким образом, предлагаемые схемы индуцирования охоты с применением прогестагенов, ГСЖК, простаглаццинов и биологически активных веществ позволяют преодолеть сезонное анэстральное состояние коров и явления постфизиологической ациклии.

3.2. Применение метода трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве

3.2.1. Характеристика жизнеспособное™ эмбрионов в зависимости от физиологического статуса коров

Идентификацию на основании морфологических признаков уровня развития и степени жизнеспособности эмбрионов проводили по 5-бальной шкале оценки качества: отличные эмбрионы - 5, хорошие - 4, удовлетворительные - 3, условно годные - 2, непригодные для трансплантации - 1 балл, принимая во внимание госстандарт на эмбрионы крупного рогатого скота. Дополнительно испытывали эффективность применения в качестве криопротектора этиленгликоля 1,5 М концентрации. Обобщённый анализ исследований по морфологической оценке показал, что большая часть получаемых зародышей от здоровых коров соответствует своему возрасту и стадии развития на день извлечения. Из общего числа полученных от таких коров эмбрионов, нормальных выделено 68,9%, дегенерированных - 20,8%, неоплодотворённых яйцеклеток -10,3% (таблица 3). В исследованиях суперовуляцию вызывали гипофизарными и сывороточными гонадотропинами ФСГ-п-Р8Р2а по 4-х дневной схеме и ГСЖК-Р8Р2а по 2-х дневной схеме.

Отмечая сравнительно большое число эмбрионов на ранних стадиях, не продолживших своё развитие в культивируемых условиях потеря жизнеспособности эмбрионами обусловлена наличием морфо-функциональных дефектов эмбрионов, незафиксированных методом морфологической оценки качества.

Таким образом, современные методы оценки жизнеспособности эмбрионов по морфологическим признакам не вполне совершенны, так они не позволяют определить отклонения на ультраструктурном уровне, являющиеся производными метаболических сдвигов в организме коров-доноров, вызванных патологическими процессами и/или перегруженностью обмена веществ при высокой продуктивности. Следовательно, это диктует необходимость подтверждать жизнеспособность положительно оцененных по морфологическим признакам эмбрионов (как свежеполученных, так и оттаянных после криоконсервации) методом культивирования, что позволит на 1/3 сократить непроизводительные затраты, обусловленные возможностью трансплантации нежизнеспособных эмбрионов.

Таблица 3 - Эффективность различных технологических элементов криоконсервирования эмбрионов с учетом физиологического состояния коров-

доноров

Криопротекторы Замораживание в газообразном азоте (метод витрификации)

Показатели Глицерин Этилен гликоль

1,0 M 1,4 M

л о W S Заморожено эмбрионов, п 200 200 299 315

с о о О ц с ао : Пригодные к пересадке, п 190 187 288 257

1 s m о О CL С Процент от числа замороженных 95,0 93,5 96,7 81,6

о1 к U ■А a g Заморожено эмбрионов, п 78 91 38 30

С! О й о а а о к 2 н 3 « Пригодные к пересадке, п 42 72 20 15

H го в g с. Е Процент от числа замороженных 53,8 79,1 523 50,0

« s я О, S ч s ■s ^ R â " c Заморожено эмбрионов, п 400 390 290 400

S и с: ю Пригодные к пересадке, п 179 293 117 160

а. G a^ Ê о bS Процент от числа замороженных 44,9 75,0 40,3 40,0

Анализ результатов показал, что эффективность ГСЖК несколько ниже относительно количественных показателей суперовуляторной реакции, вызываемой ФСГ-п. Однако, в обоих случаях очевидно значительное влияние физиологического состояния коров-доноров на качество эмбриопродуктивности. На стадиях экспавдированной бластоцисты и ранней морулы было до 32,1% эмбрионов. Доля отставших в развитии эмбрионов от высокопродуктивных и проблемных коров составила до 13,7 и 14,2%, соответственно.

Таким образом, следует констатировать, что характерная особенность эмбриогенеза у проблемных и здоровых высокопродуктивных коров заключается в снижении скорости развития эмбрионов. Опыты по культивированию эмбрионов отличного и хорошего качества показали, что наименьший процент продолживших развитие эмбрионов во всех случаях был при культивировании ранних морул. По мере увеличения возраста эмбрионов, возрастала их жизнеспособность.

3.2.2. Оценка качества эмбрионов мясных коров

Особое внимание обращали на колебания объема яйцеклеток, их форму, целостность, состояние прозрачной оболочки и протоплазмы, критерий уровня дробления.

Биологически полноценными считали зародыши, имеющие шарообразную форму, гомогенную цитоплазму, неповрежденную оболочку, одинакового размера бластомеры с плотным межклеточным компактом. У некоторых морул отдельные клетки выпячиваются в перивителлиновое пространство, на их поверхности допустимы небольшие цигоплазматические пузырьки. У нормальной ранней бластоцисты число бластомеров составляет от 80-120, просматривается небольшая полость, поверхность клеточной массы гладкая, равномерная, перивителлиновое пространство маленькое. Морфологически нормальная поздняя бластоциста имеет утонченную прозрачную оболочку, форму правильной сферы, полость большая, перивителлиновое пространство отсутствует. Условно годными для трансплантации можно признать эмбрионы со значительными морфологическими отклонениями: сколы оболочек, наличие вакуолей, гранул в перивителлиновом пространстве, выделенном большой части бластомеров. Эмбрионы, отстающие в развитии на день вымывания с асинхронным дроблением бластомеров и наличием их грануляции относят к непригодным для трансплантации (таблица 4).

Исследования по морфологической оценке показали, что из общего числа 521 свежеполученных эмбрионов нормальных было 326 или 62,7%, дегенерированных 106 (20,3%), неоплодотворенных яйцеклеток 39 (17,0%). Результаты нехирургического извлечения эмбрионов на 7-й день цикла показали, что при гормональном вызывании суперовуляции эмбрионов отличного качества на разных стадиях развития получили незначительное количество - 20,6% от общего числа зародышей.

Таблица 4 - Качество и стадия развития эмбрионов коров на 7-й день извлечения

Показатель Всего Стадии развития

морулы бластоцисты

ранняя поздняя ранняя поздняя

Число эмбрионов 432 47 239 104 42

Процент от общего числа 10,9 55,4 24,0 9,7

в т.ч. нормальных 326 22 188 84 32

процент от общего числа нормальных 75,5 6,7 57,7 25,8 9,8

дегенерированных 106-24 25-53,2 51-21,3 20-19,2 10-23,8

из них: отличных 67-20 3-13,6 22-11,7 20-23,8 22-58,8

хороших 175-53 7-31,8 103-57,4 52-62,8 8-25,0

удовлетворительных 84-25,8 12-54,6 58-30,9 12-14,2 2-6,2

Меньше всего отличных эмбрионов на стадии ранней и поздней морулы (13,6% и 11,7%). Процент их увеличивался на стадии ранней (23,8%) и поздней бластоцисты. На стадии ранней морулы отмечен низкий процент (31,8%) эмбрионов хорошего качества и относительно высокий процент удовлетворительных эмбрионов (54,6%). Более поздние стадии характеризуются наличием высокого числа хороших эмбрионов, снижением количества удовлетворительных и условно годных.

Стадия ранней бластоцисты от поздней морулы отличалась небольшим процентом эмбрионов хорошего качества (62,0% против 57,4%) и меньшим числом удовлетворительных (14,2% и 30,9%). Для поздних бластоцист характерно наличие высокого процента эмбрионов отличного (68,8%), хорошего качества (25,0%) и небольшого числа удовлетворительных эмбрионов (6,2%). Эмбрионы коров мясных пород имели более рыхлую структуру с несколько ослабленной связью между бластомерами.

Наблюдаются некоторые различия у скорости развития одновозрастных эмбрионов у коров-доноров молочных и мясных пород. Если у молочных коров на 7-й день извлечения число поздних морул от общего числа извлеченных составляли 36%, тогда как у мясных пород 55,4%. Количество ранних бластоцист составило 24,0%. Кроме поздней морулы и ранней бластоцисты у мясных коров извлекали эмбрионы на стадии ранней морулы 10,9% и поздние бластоцисты (9,7%).

3.2.3. Влияние скорости охлаждения и согрева на жизнеспособность и приживляемость эмбрионов

В задачу наших исследований входило установить влияние ускоренного замораживания в газообразном азоте на жизнеспособность и приживляемость эмбрионов, а также сравнить эффективность различных режимов охлаждения и программные замораживатели. В первом варианте (контрольная) - охлаждение эмбрионов +20°С до -ТС проводили со скоростью 1°С/мин. При достижении -7°С осуществлялась автоматическая кристаллизация. После этого охлаждение продолжалось со скоростью 0,ЗоС/мин до -35°С, затем эмбрионы помещали в жццкий азот. В качестве замораживателя использовали сосуд Дыоара СДС-2, камеру с гнездами для соломинок из фторопласта и универсальный штатив с держателем. Скорость охлаждения регистрировали на самописце КСП-4.

Таблица 5 - Влияние способа замораживателя на жизнеспособность и приживляемость эмбрионов

Показатель Замораживатели

ЗЭМ-4 ЗЭМ-1 Газообразный азот

Заморожено и оттаяно эмбрионов 95 85 68

Жизнеспособных эмбрионов 79 69 55

Процент 83,2 81,2 80,3

Пересажено эмбрионов 79 69 55

Стельных реципиентов 31 24 20

Процент стельности 39,2 34,8 36,2

Проведенные испытания разных замораживателей показал, что жизнеспособность эмбрионов после отогрева в группах была почти одинаковой. Так,

при замораживании на замораживателе ЗЭМ-1 жизнеспособных эмбрионов было 81,2%; газообразном азоте - 80,8% и на замораживателе ЗЭМ-4 - 83,2% (таблица 5). Стельность после пересадки заморожено-оттаянных эмбрионов составила 34,8%; 36,2% и 39,2% соответственно.

Сравнительные результаты испытаний 3-х моделей замораживателей показали, что любые из испытанных устройств может быть использовано с равной долей успеха в практической криобилогии.

Замораживание эмбрионов на мобильном замораживателе ЗЭМ-1 и в газообразном азоте без программных замораживателей вселяет надежду, что этот технологический приём может быть эффективно применяться в экстремальных условиях ферм, где часты случаи отключения электроэнергии. Кроме того, эти устройства по габаритам небольшие и легко можно их перевозить на любом виде транспорта. Важным в консервации является оттаивание эмбрионов, которое зависит от температуры водяной бани. Нами проведены исследования по изучению влияния разных температур на жизнеспособность эмбрионов. Выживаемость эмбрионов, оттаянных при температуре водяной бани +30 °С составило 84, 6% или на 6, 8% больше, чем при отогреве при температуре +25 °С (77,8%). Однако процент стельности был ниже на 5,4% в первом случае.

Финальной ступенью криоконсервирования является разбавление криопротектора в эмбрионах после их оттаивания. Обычно криопротектор добавляют многоступенчато в возрастающей концентрации с целью обеспечения равновесия внутри клеток эмбрионов.

При многоступенчатом насыщении криопротектором сохранность эмбрионов после оттаивания и стельность после пересадки была практически одинаковой (таблица 6). В связи с тем, что многоступенчатое введение криопротектора очень длительное, была сделана попытка одноступенчатого насыщения эмбриона криопротектором.

Обобщая данные исследований, можно утверждать, что выведение криопротектора раствором 0,7 М концентрации сахарозы может с равной долей успеха использовано в практике замораживания эмбрионов.

Таблица 6 - Жизнеспособность и приживляемость эмбрионов при многоступенчатом насыщении криопротектором

Показатель Замораживатели

ЗЭМ-4 ЗЭМ-1 Газообразный азот

Заморожено и оттаяно эмбрионов 55 45 38

Жизнеспособных эмбрионов 44 35 29

Процент 80,0 77,8 76,3

Пересажено эмбрионов 44 35 29

Стельных реципиентов 13 13 11

Процент стельности 40,9 37,1 37,9

Стельность после пересадки эмбрионов с поврежденной прозрачной оболочкой составляет 31,6%, что на 5,6% больше, чем у эмбрионов с выделенными бластомерами (26,3%). При наличии таких повреждений у бластоцист их приживляемость была высокой по сравнению с морулами. При пересадке бластоцист

с поврежденной прозрачной оболочкой стельность была выше, чем у морул на 28,3% и при выделенных бластомерах на 19,8%. При однократном добавлении криопротектора и выведении его после оттаивания сахарозой наблюдали резкое сжатие эмбрионов. Однако, эмбрион расправлялись полностью в течение последующих 10-15 минут. Число жизнеспособных эмбрионов составляло 86,3% (95 из 110).

Количество эмбрионов с поврежденной прозрачной оболочкой или с выделенными бластомерами в группах было 28,4% и 21,0%, соответственно. Такие повреждения чаще встречались у морул (31,3 и 25,0%), чем у бластоцист (22,6 и 12,9%). Отмечены различия в морфологии заморожено-оттаянных эмбрионов в сравнении со свежеполученными. Цвет у заморожено-оттаянных эмбрионов обычно темнее, чем не замороженных, что обусловлено, очевидно, наличием погибших клеток. У таких эмбрионов часто наблюдается присутствие везикулярных включений.

Поэтому при оценке качества заморожено-оттаянных эмбрионов следует обращать внимание и на их окраску. В криоконсервировании эмбрионов выделяют несколько этапов, каждый из которых отличается друг от друга своей специфичностью. Одним их таких этапов является продолжительность хранения эмбрионов в среде от получения до их замораживания. Продолжительность хранения эмбрионов от извлечения до замораживания отрицательно сказывается на их жизнеспособности и приживляемое™ после их замораживания и оттаивания.

После оттаивания и пересадки наивысший процент стельности реципиентов был 48,3% при хранении эмбрионов до замораживания не более 2-х часов. С увеличение продолжительности хранения эмбрионов от извлечения до замораживания снизилась их жизнеспособность и приживляемость после пересадки. Из приведенного следует, что хранение эмбрионов более 2-х часов от извлечения до замораживания нецелесообразно.

3.2.4, Биологические факторы, влияющие на жизнеспособность эмбрионов при замораживании и оттаивании

Исследованиями установлено, что жизнеспособность до и после замораживания зависит от стадии развития. Так, ранние морулы теряли жизнеспособность при охлаждении со скоростью 10°С/мин. до 0°С, тогда как поздние морулы успешно выдерживали замораживание. В наших исследованиях из 248 замороженных эмбрионов 9 из них находились на стадии ранней, 154 - поздней морулы, 67 -ранней и 18 - поздней бластоцисты. Пригодных для пересадки оказалось 203 (81,9%), в том числе 2 (0,9%0) ранних и 121 (78,6%) поздних морул, 67 (95,5%) ранних и 16(88,9%) поздних бластоцист. Из табл. 8 видно, что хорошие и отличные эмбрионы на стадии ранней бластоцисты значительно лучше переносили процесс замораживания (65,7%).

Сравнительно одинаковые результаты были получены при замораживании эмбрионов отличного и хорошего качества на стадии поздней морулы и бластоцисты (58,6 и 55,6%, соответственно). Исследования показали, что жизнеспособность эмбрионов мясных коров после замораживания и оттаивания непосредственно зависят от их качества до замораживания. Так эмбрионы отличного качества после оттаивания сохраняли своё первоначальное качество в 27,3%, а большая их часть (50%) перешла в группу «хорошие».

Эмбрионы хорошего качества после оттаивания 88,5% сохраняла жизнеспособность, (таблица 7) Остальные эмбрионы (11,5%) имели ухудшение морфологического состояния и их выживаемость после отогрева была низкой. Эмбрионы удовлетворительного качества только 32,6% сохранили жизнеспособность после отогрева. Поэтому эмбрионы удовлетворительного качества нецелесообразно подвергать криоконсервированшо, так как после оттаивания около 70% их оказывается непригодным для пересадки. Такие эмбрионы необходимо трансплантировать сразу после извлечения или замораживать и пересаживать их после оттаивания с хорошими эмбрионами для усиления эмбрионального сигнала. После пересадки удовлетворительная приживляемость была при пересадке ранних бластоцист отличного и хорошего качества - 52,3%.

Таблица 7- Жизнеспособность эмбрионов после оттаивания на ранних стадиях развития и качества

Качество эмбрионов

До замораживания После оттаивания

отличные хорошие удовлетвор ительные дегенери рованные

Морулы ранние (П=9) В том числе: хорошие (П=4) удовлетворительные (П=5) - - 2-5,0 2-5,0 5-100,0

Морулы поздние (П=154) В том числе: отлично (П=27) хорошо (П=89) удовлетворительные (П=38) 7-25,9 15-55,6 46-51,7 5-18,5 34-38,2 14-36,8 9-10,1 24-63,2

Бластоцисты ранние (П=67) В том числе: отличные (П=26) хорошие (П=41) 9-34,6 12-46,2 23-56,0 5-19,2 15-36,7 3-7,3

Бластоцисты поздние (П=18) В том числе: отличные (П=13) хорошие (П=5) 2-15,4 6-46,1 2-40,0 5-36,5 1-20,0 2-40,0

Несколько ниже была приживляемость от пересадки поздних морул - 45,6% и поздних бластоцист - 40,0%. Приведенные данные показывают, что высокая жизнеспособность эмбрионов после замораживания и оттаивания, а также приживляемость после пересадки наблюдается на стадии ранней бластоцисты отличного и хорошего качества.

В наших исследованиях эмбрионы, полученные от коров-доноров после гормональной обработки ФСГ, подвергались криоконсервированшо. Использовали для вызывания суперовуляции препараты гроффолон в дозе 1000 И.Е., фоллитропин -1200 И.Е. и ФСГ-п (США) - 42-50 мг.

Высокие показатели жизнеспособности эмбрионов после замораживания и оттаивания были при обработке коров фоллитропином (88,1%) и ФСГ-п (80,9%),

несколько ниже при обработке гроффолоном (70,6%). Отличных и хороших было наибольшим при использовании фоллитронина и ФСГ-п (60,5% и 63,5%), соответственно (таблица 8).

Таблица 8 - Влияние ФСГ на жизнеспособность заморожено-оттаянных эмбрионов (п-%)

Показатель ФСГ

гроффолон фоллитропин ФСГ-п (США)

Заморожено и оттаяно эмбрионов 17 89 142

Жизнеспособных после оттаивания 12-70,6 76-88,1 115-80,9

В том числе: отличные - 6-6,8 11-7,7

хорошие 4-23,6 40-44,9 62-43,7

удовлетворительные 8-47,0 30-33,7 42-29,6

дегенерированные 5-29,4 13-14,6 27-19,0

При обработке гроффолоном эмбрионов отличного качества не было зарегистрировано, а процент эмбрионов хорошего качества был очень низкий (23,6%), число дегекерированных эмбрионов было наиболее высоким (29,4%). Приживляемость от пересадки эмбрионов отличного и хорошего качества, полученная от коров, обработанных ФСГ, была относительно высокая. Так, при обработке гроффолоном она составила 50,0%; фоллнтропином - 43,5% и ФСГ-п -49,3%. Эмбрионов удовлетворительного качества, количество стельных реципиентов было низким и составило 23,3 и 21,4% соотносительно.

Различия в качестве эмбрионов после замораживания и оттаивания и их приживаемости после пересадки объясняется, вероятно, их разнокачествснностью препаратов, что было характерно для гроффолона.

3.2.5. Результаты нсхирургическон пересадки эмбрионов с целью получения

двойных отелов

Одной из важных задач трансплантации эмбрионов мясном скотоводстве является получение двоен.

В наших исследованиях ставилась задача выяснить возможность получения двоен у коров мясной породы при нехирургической пересадке заморожено-оттаянных эмбрионов и определить влияние некоторых факторов на результативность пересадки двух эмбрионов и пересадки одного осемененным реципиентам. В качестве реципиентов использовали коров казахской белоголовой породы 1-3 отелов. Пересаженные эмбрионы были па стадии развития поздней морулы, ранней и поздней бластоцисты отличного, хорошего и удовлетворительного качества. Было сформировано три группы коров: первой группе коров (п=30) пересаживали по одному эмбриону отличного и хорошего качества в контрлатеральный к желтому телу рог матки на 7-й день после осеменения, второй - (и=14) было пересажено 28 эмбрионов хорошего и удовлетворительного качества по два эмбриона с двгенерированным зародышем в один рог матки на стороне желтого тела, третьей

(п=18) пересажено 33 эмбрионы отличного и хорошего качества в разные рога матки по одному в каждый.

Проведенные опыты показали, что при правильном выборе метода и учете необходимых условий нехирургической пересадки реально можно получать приемлемые результаты. Наилучшая приживляемость наблюдалась при трансплантации двух эмбрионов отличного и хорошего качества в разные рога матки (50,0%0. Отмечено, что при пересадке двух эмбрионов, один из которых дегенерированный, приживляемость также может' быть высокой (42,8%). Стельность от числа пересаженных эмбрионов составила 40,0; 21,4 и 25,0%. Отелы двойнями зарегистрированы в первой группе - 3(25,0%), во второй - 1 (16,7%) и в третьей - 3 (33,3%). Во второй группе одна стельная корова абортировала двойней через 90 дней после проведения ректального обследования.

Следовательно, хороших показателей двойневости у мясных коров можно добиться при трансплантации двух эмбрионов в разные рога матки, а также при контрлатеральной пересадке предварительно осемененным коровам-реципиентам. Приживляемость эмбрионов находится в прямой зависимости от качества желтого тела в яичнике на день пересадки. Так, при отличном качестве желтого тела получены высокие показатели стельности при пересадке двух эмбрионов в один рог и в два рога матки (66,7 и 75,0%0). Показатель отела в группах колебался от 40,0 до 66,7%. Высокие результаты стельности (50,0%) зарегистрированы при трансплантации двух заморожено-оттаянных эмбрионов в разные рога матки реципиента с хорошим желтым телом.

При подсадке эмбриона осемененным реципиентам с хорошим желтым телом получено 46,2% стельностей и 16,7% отелов двойнями. При пересадке двух эмбрионов в один рог матки животным с хорошим желтым телом стельность составила 42,9% при отсутствии отелов двойнями. Неудовлетворительные результаты были у реципиентов с удовлетворительными желтыми телами в яичниках, стельность составила 25,0%. При этом отмечено, что со снижением качества желтого тела процент приживляемости повышается при пересадке двух эмбрионов в один рог матки. Таким образом, с экспериментальных данных следует, что с улучшением качества желтого тела в яичнике реципиентов на день пересадки прямо пропорционально повышается процент стельности и число отелов у осемененных реципиентов.

33. Изучение влияния электромагнитного излучения крайне высокой

частоты мм - диапазона на воспроизводительную функцию животных

3.3.1. Влияние ЭМИ КВЧ воздействия аппаратом «Орбита» на организм

животных

Визуальная оценка габитуса, а также аппетита у коров опытной группы при проведении ЭМИ КВЧ воздействии аппаратом «Орбита» выраженной клинической реакции не выявила. У животных до ЭМИ КВЧ воздействия температура тела была нормальной и составляла в опытной группе 38,3 ± 0,6 °С, в контрольной - 38,1 ± 0,3 °С.У животных опытной группы отмечено повышение частоты пульса после ЭМИ КВЧ воздействия на 2,4 удара/мин, в первый день прихода в охоту - на 1,4 и через сутки после осеменения - на 2,5 удара/мин. У коров контрольной группы в эти же сроки также отмечено повышение числа ударов пульса на 1,5...2 удара/ мин. У

животных обеих групп частота дыхания во все сроки исследований составляла от 16,1 ± 0,4 до 17,0 ± 0,8 движений/ мин, т.е. была в пределах физиологической нормы для взрослых животных. Учащение дыхания у коров опытной группы после ЭМИ КВЧ воздействия на 0,2±0,7 движений/мин было статистически недостоверным. Эти данные указывают, что ЭМИ КВЧ воздействие не оказывает отрицательного влияния на частоту дыхания у коров.

3.3.2. Воздействие электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм-

днапазона на поведение эритрецитарных мембран и морфологический состав

крови

Проведенные исследования показали, что электромагнитные колебания КВЧ мм-диапазона на частотах молекулярных спектров поглощения и излучения атмосферного 02 изменяют в опытных образцах количество и размер эритроцитов in vitro. Полученные данные свидетельствуют о том, что количество эритроцитов после экспериметального воздействия ЭМИ КВЧ (129 ГГц) достоверно уменьшается с 6,88± 0,36 до 4,97±0,49 • 1012/ л. При этом количество эритрощггов изменяется экспоненциально времени воздействия ЭМИ КВЧ (129 ГГц) достигая минимума (3,57±0,27 -1012/ л) при 90 минут.

Цитофотометрические показатели эритроцитов полученные путем исследования на AM - 060 (автоматический анализатор микрочастиц) выявили увеличение среднего диаметра, периметра и объема эритроцитов в опытных образцах. Так, в контрольных образцах минимальный диаметр эритроцитов составил 3,51 мкм, а максимальный — 5,35 мкм, в то время как в опытных образцах, соответственно 4,56 (р < 0,05) и 7,97 (р <0,01) мкм, полученная разница статистически достоверна.

Полученная информация, свидетельствует о том, что корреляции между стандартными значениями СОЭ и экспозицией взаимодействия ЭМИ КВЧ в диапазоне 129 ГГц не обнаружены, не смотря на тенденцию снижения интенсивности скорости оседания эритроцитов. Кроме того проведенные исследования показали, что воздействие ЭМИ КВЧ на частотах молекулярного спектра поглощения и излучения атмосферного кислорода на эритроцитарную взвесь оказывает существенное влияние на осматичесую резистентность эритроцитов. Было установлено, что гемолиз как в контрольных образцах, так и в опытных наблюдается в растворе NaCl 0,50 % - ной концентрации. Однако дальнейшее разведение раствора выявило различную устойчивость опытных и контрольных образцов крови in vitro к гипотоническим растворам NaCl. Так, если в контрольных образцах гемолиз эритроцитов наблюдается при концентрации NaCl 0,35% - ного раствора, то в опытных - 0,30 - 0,25% - кого раствора, что свидетельствует об устойчивости мембран эритроцитов к гемолизируюшему действию гипотонических растворов, после облучения электромагнитными волнами в мм-диапозоне на частоте 129 ГГц. Результаты исследования электрокинетических свойств эритроцитов показали, что воздействие ЭМИ КВЧ вызывает достоверное увеличение элсктрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ). Причем увеличение составляет в среднем от 15 до 20% и приводит к направленному сдвигу ЭФПЭ, что, вероятно, связано с воздействием ЭМИ КВЧ (129 ГГц) на мембрану эритроцитов, сопровождающееся изменением величины электрокинетического потенциала. Воздействие ЭМИ КВЧ на частотах молекулярного спектра поглощения атмосферного кислорода вызывает изменения физико-химических свойств мембраны эритроцита и перераспределение

электрического потенциала (таблица 9). Увеличение заряда ЭФПЭ является свидетельством непосредственного взаимодействия ЭМИ КВЧ-излучения в диапазоне 129 ГГц с липопротеиновой структурой мембраны эритроцитов, как миогомодовых резонансных систем.

Таблица 9 - Изменение биофизических и биохимических показателей крови под воздействием ЭМИ КВЧ мм-диапазона

Группы Концен Содерж- СОЭ, ОРЦ ЭФПЭ, МДА

-трация ие (мм/г) (% (мкм см (нмоль/мл)

НЬ г/л гематокр гемолиза) В"1 с')

-а (мг,

%)

Контроль 111,5± 36,40+ 2,88 + 0,5 ± 1,16 ± 2,17±

3,44* 2,06* 0.65 0,04 0,07 0,29*

Опыт 93,5± 47,75+ 17/75* 0,35 ± 1,45 ± 1,36±

2,72 4,92 0,72 0,05 0,08 0,28

Стабилизация мембраны эритроцитов за счет снижения интенсивности перекисного окисления липидов происходит при воздействии ЭМИ КВЧ в диапазоне 129 ГГц, когда существенно уменьшается концентрация малонового диальдегида (МДА), что свидетельствует о снижении свободно радикальных процессов. При этом усиление гидрофобных связей в мембране сопровождается снижением интенсивности пол и упорядочиванию липидных слоев мембраны эритроцитов. При этом воздействие ЭМИ КВЧ на частотах молекулярного спектра поглощения атмосферного кислорода вызывает изменения физико-химических свойств мембраны эритроцита и перераспределение электрического потенциала. Увеличение ЭФПЭ явится свидетельством непосредственного информационного взаимодействия ЭМИ КВЧ-излучения в мм-диапазоие с липопротеиновой структурой мембраны эритроцитов, как миогомодовых резонансных систем (таблица 10).

Стабилизация в мембранах эритроцитов регулируются за счет интенсивности перекисного окисления липидов. При воздействии ЭМИ КВЧ в диапазоне 129 ГГц, в эритроцитах уменьшается концентрация малонового диальдегида (МДА), что свидетельствует о снижении активности свободнорадикальных процессов, происходящих в эритроцитарной мембране. При этом ослабление гидрофобных связей в мембране сопровождается активацией интенсивности ПОЛ и разрыхлением липидных слоев мембраны эритроцитов. Изучение состава крови in vitro в опытных образцах показывает, что концентрация гемоглобина достоверно снижается после ЭМИ - воздействия. Таким образом, для утилизации глюкозы эритроцитарной взвесью при воздействии ЭМИ КВЧ на частоте молекулярного поглощения атмосферного 02 характерен сдвиг точки температурного оптимума в "низкотемпературную" область; при этом увеличивается время насыщения и снижается количество утилизируемой глюкозы (50% температурного оптимума контрольных образцов).

Таблица 10 - Изменение ферментативных свойств эритроцитов лактирующих коров при воздействии ЭМИ КВЧ частоты МСПИ 02 (129 ГГц) в условиях in vitro (n = 15)

Группы Транскетолаза, мкмоль/'мл Глутатион-пероксидаза ммоль/л МДА (нмоль/мл) Каталаза, ед./мл

Контрольная 0,2б£0,04 78,16±1,08 2,17±0,29 12,5±0,5

Опытная, 15 мин 0,34±0,03 82,45±2,03* 1,36±0,28* 13,2±0,6

Опытная, 30 мин 0,32±0,02 80,49±1,22' 1,30±0,23' 10,4±0,5

Опытная, 90 мин 0,33±0,01 68,32±1,06" 1,27±0,25" 7,4±0,4

Температурный оптимумом активности Ыа+, К+, Са" АТФазы при критической температуре [Дп(Тс)] для окисления глюкозы хорошо коррелирует с положением точки фазового перехода в эритроцкгарных мембранах при экспозиции облучения ЭМИ КВЧ (129 ГГц) в течении 30, и особенно 90 минут. Электромагнитное поле КВЧ в диапазоне 129 ГГц, способствует существенному снижению активности К+, Са' - АТФаз и приводит к увеличению времени насыщения утилизируемой глюкозы эритроцитарными мембранами в 2 раза. Следовательно в результате воздействия ЭМИ КВЧ - волн на частоте молекулярного поглощения атмосферного 02 происходит увеличение реакционной способности кислорода вызывающее усиление окислительных процессов в эритроцитарных мембранах и повышение их проницаемости и в конечном итоге разрыхлению. Поэтому воздействующему полю инерциалышх сил необходимо затратить меньше энергии, для максимального сжатия мембран и выделению фрагментов клеток в окружающую плазму крови.

3.33. Влияние ЭМИ КВЧ воздействия аппаратом «Орбита» на метаболический профиль крови

В ходе проведенных наблюдений установлено, что ЭМИ КВЧ МСПИ 02 оказывает существенное влияние на морфобиохимический состав крови. Так, с увеличением экспозиции облучения происходит экспоненциальное снижение количества эритроцитов в исследуемых опытных образцах на 10,5 % при 15 мин до11,6 % при 90 мин. (таблица! 1).

Таблица 11 - Изменение кислотно - основного состояния __при воздействии ЭМИ КВЧ МСПИ 02_

Показатели Время воздействия КВЧ, мин

Контроль 15 30 90

РН 7,37 ± 0,27 7,42 ±0,40 7,44 ± 0,36 7,46 ± 0,26

РС02, mniHg 43,4 ± 1,39 39,7 х 1,36* 36,9 ± 1,07* 35,5 ± 1,35*

Р02, mmHg

НС03, mmol/1 25,8 ±0,14 27,2 ± 0,40* 29,3 ± 0,77* 25,5 ± 0,50*

BE, mmol/1 + 0,15 + 3,33 + 4,4 + 4,5

tco2 26,68 ±0,39 26,51 ±0,26 25,7±0,34* 24,7±0,63

НСОз 24,85 ± 0,37 25,35 ±0,39 28,8±0,23* 27.5±0,45*

Hb SAT 54,22 ± 1,18 52,25 ± 1,56 29,4±0,17* 28,5±0,32*

При воздействии ЭМИ КВЧ МСПИ 02 на кровь in vitro происходит изменение актуальной степени насыщения гемоглобина кислородом (Hb SAT), приводящее к снижению относительной суммарной емкости гемоглобина по связыванию кислорода. Причем возрастает общее содержание кислорода (Т02) при снижении совокупного количества растворенного кислорода и увеличение количества связанного кислорода в крови (таблица 12). Представленные материалы свидетельствуют о том,,, что утилизация глюкозы клетками крови при воздействии ЭМИ КВЧ МПСИ 02 возрастает в 1,17... 1,75 раза в зависимости от времени экспозиции.

Таблица 12 - Биохимические показатели крови (in vitro) при воздействии ЭМИ

КВЧ МСПИ 02

Показатели Время воздействия КВЧ, мин

Контроль 15 30 90

Глюкоза, mrnol/i 5,13 ±0,75 4,40 ± 0,39* 3,36 ±0,47** 2,93 ± 0,72**

Мочевина, mmol/l 6,25 ± 0,42 90,0 ±2,80 5,88 ±0,38* 92,8 ± 1,71 5,19 ±0,29* 87,2 ± 1,40* 2,99 ±0,15** 88,8 ± 1,88*

Общий белок g/1 0,32 ±0,02 0,30 ±0,04 0,29 ±0,03* 0.23 ±0.02**

Альбумины (!) а 0,17 ±0,02 0,16 ±0,01 0,19 ±0,01* 0,20 ±0,02*

(3 0,21 ±0,02 0,20 ±0,01 0,16 ±0,02* 0,15 ±0,01**

Y 0,30 ±0,03 0,34 ± 0,02* 0,35 ±0,01* 0,40 ±0,02**

Следовательно, можно считать преимущественным вкладом в процесс «информационного взаимодействия» внеклеточных газов метаболитов крови. Это позволяет предположить начальную заинтересованность высокомолекулярных соединений плазмы крови облученных образцов крови к взаимодействию с электромагнитными волнами КВЧ мм диапазона на частоте 129 ГГц ... 150 ГГц.

33.4. Уровень половых гормонов при ЭМИ КВЧ воздействии аппаратом

«Орбита»

Изменение уровня прогестерона, эстрадиола и тестостерона в крови коров изучили в динамике по схеме: до воздействия ЭМИ КВЧ мм - диапазона на 14-й день после отела, через сутки после окончания ЭМИ КВЧ воздействия; в первый день прихода коров в охоту: через сутки после осеменения.

Определение в плазме крови коров опытной и контрольной групп количества прогестерона свидетельствует о существенных снижениях содержания этого гормона в крови по сравнению с фоном. Об этом свидетельствует достоверно более низкий уровень данного гормона при исследованиях после курса ЭМИ КВЧ мм - диапазона в период охоты и через сутки после осеменения у опытных и контрольных животных. Однако, степень снижения в опытной группе была меньше, чем в контрольной. Через сутки после курса воздействия ЭМИ КВЧ мм - диапазона в опытной группе количество прогестерона (1,88 ± 0,13 нг/мл) было ниже уровня фона в 5,38 раза, а в

контрольной группе в 8 раз; в первый день прихода в охоту - в 4 и 5 раз, через сутки после осеменения - в 3,7 и 3,9 раза соответственно.

Количество прогестерона у коров опытной группы после курса воздействия ЭМИ КВЧ мм - диапазона было достоверно выше, чем у животных контрольной, на 0,65 нг/мл (р < 0,05), в первый день охоты на 0,71 нг/мл, р<0,05).

У коров контрольной группы на 21-й день после отела уровень эстрадиола в отличие от этого показателя у опытных животных был стабильным. Количество эстрадиола снижалось в опытной и контрольной группах до первого дня прихода в охоту в 1,2 и 1,3 раза, соответственно. Через сутки после осеменения этот показатель незначительно понизился - до 0,15 ± 0,03 нг/мл в опытной группе, а контрольной повысился до 0,41±0,02 нг/мл.

Через сутки после курса воздействия ЭМИ КВЧ мм - диапазона у опытных коров количество тестостерона составило 0,09 ± 0,02 нг/мл, что на 0,04 и 0,07 нг/мл больше, чем при фоновых исследованиях и у коров контрольной группы соответственно. В первый день прихода в охоту у животных опытной группы количество тестостерона было также выше фона (+ 0,056, р < 0,05) и на 0,05 нг/мл выше, чем в контрольной (р < 0,05). Через сутки после осеменения у коров обеих групп тестостерон в крови не обнаруживался. Таким образом, стимуляция охоты у новотельных коров путем воздействия ЭМИ КВЧ мм-диапазона пояснично-крестцовой рефлексогенной зоны в течение 7 дней вызывала выраженные изменения уровня прогестерона, эстрадиола и тестостерона, что является главным фактором, обусловившим ускорение прихода коров в охоту и повышение их оплодотворяемости.

3.3.5. Изучение влияния электромагнитного излучения на становление репродуктивной функции коров в послеродовый период

Результаты изучения влияния стимуляции аппаратом «Орбита» в разные сроки после отела свидетельствуют о стимулирующем влиянии ЭМИ КВЧ мм-диапазона на проявление стадии возбуждения полового цикла у животных в разные сроки после отела Время наступления половой цикличности после отела в контрольных группах составляло 49,5 ± 0,22, 46,9 ±0,52 и 49,0 ± 0,28 дня.

В процессе проведения опыта выявлена статистически достоверная разность времени восстановлении половой цикличности между животными контрольными и опытными группами, что подтверждает одинаковые стабильные условия внешней среды в период опыта во всех группах. При ЭМИ КВЧ (аппарат «Орбита») воздействии на коров с 1-го по 7-й день после отела в 1-й опытной группе половая цикличность восстанавливалась через 51,4 ± 0,30 дня, а в контрольной - через 39,5 ± 0,22. т.е. ЭМИ КВЧ с 1-го по 7-й день после отела оказал стимулирующего влияния на проявление стадии возбуждения полового цикла у животных.

Проведение ЭМИ КВЧ мм-диапазона на частоте 129 ГГц животным второй опытной группы с 7-го по 14-й день после отела также оказало выраженное стимулирующее влияние на восстановление половой цикличности у коров. (+4,9 дня, р>0.1). Применение аппарата «Орбита», животным третьей опытной группы с 14-го по 21-й день после отела, оказал существенное стимулирующее влияние на проявление полового цикла. Коровы этой группы восстановили половую цикличность через 36,5±0,27 дней после отела - на 9,5 дня раньше (р < 0,05), чем коровы контрольной группы (46,0±4,8 дня). О закономерном стимулирующем влиянии ЭМИ КВЧ мм-диапазона с 14-го по 21-й день после отела на проявление

полового цикла свидетельствуют также приведенные данные статистической обработки и сравнительного анализа этого показателя у коров всех опытных групп. Животные третьей опытной группы пришли в охоту на 6,9 дня (р < 0,05) раньше, чем животные 1-й опытной группы, и на 7,5 дня раньше, чем коровы 2-й опытной группы, которым ЭМИ КВЧ мм-дианазона проводили с 1-го по 7-й день после отела.

Обобщая результаты опыта, можно констатировать, что применение ЭМИ КВЧ мм-диапазона на частотах атмосферного кислорода (65,56 ГГц и 129 ГГц) коровам аппаратом «Орбита» с 14-го по 21-й день после отела в течение 7 дней оказывает выраженное стимулирующее влияние на воспроизводительную функцию.

При этом разность показателей оплодотворяемости коров между второй и первой контрольными фуппами составляла +6,7 % между третьей и второй -6,7%, коэффициент корреляции между ними +0,142, что свидетельствует о существенных различиях уровня оплодотворяемости между контрольными и опытными группами коров. Наиболее значительные изменения показателей оплодотворяемости коров в первый половой цикл зарегистрированы нами у коров третьей опытной группы, в которой оплодотворяемость составила 80%, что на 20% выше, чем в третьей контрольной.

Таким образом, ЭМИ КВЧ мм-диапазона обеспечивает не только ускоренное восстановление половой цикличности, но и более высокую, их оплодотворяемость. Период от отела до оплодотворения у коров первой опытной группы (ЭМИ КВЧ воздействие с 1-го по 7-й день после отела) составил 62,1 ± 4,9 дня и был на 2,8 дня (64,9 ± 5,8) короче, чем у коров первой контрольной (без ЭМИ КВЧ воздействия). Во второй опытной группе, этот период составил 57,4 ± 3,1 дня (ЭМИ КВЧ воздействия с 7-го по 14-й день после отела), в контрольной (без ЭМИ КВЧ воздействия) - 59,2 + 7,3 дня. Более существенные различия периода от отела до оплодотворения установлены у коров третьей опытной группы, стимулирующий ЭМИ КВЧ воздействием, которым проводили с 14-го по 21-й дни после отела. Он составил 45,2 ± 7,3 дня, что достоверно короче на 11,9 дня, чем у коров контрольной группы (р < 0,05).

Установлено сокращение периода от отела до оплодотворения у новотельных коров на 11,9 дня при ЭМИ КВЧ воздействии один раз в день с 14-го до 21-й день после отела по сравнению с аналогами без ЭМИ КВЧ воздействия. При одинаковой технологии содержания, кормления и осеменения, характерных для многих хозяйств Российской Федерации и Республики Казахстан, это позволяет дополнительно получить в расчете на 100 коров (11,9-100) : 285 = 4,14 дополнительных теленка.

3.3.6. Сравнительное изучение оплодотворяемости коров с использованием электромагнитного воздействия аппаратом «Орбита» на пояснично-крестцовую рефлексогенную зону при искусственном осеменении коров

Опыт проводился в хозяйствах различных форм собственности Западно-Казахстанской области Республики Казахстан на 90 коровах.

При маноцервикальном способе введения спермы оплодотворяемость коров в 1-ой опытной группе (воздействие аппаратом «Орбита» в течение 7 мин до введения спермы) составила 73,3 %, что на 33,3 % выше, чем у коров 1-ой контрольной группы при этом способе без проведения воздействия аппаратом «Орбита».

При визоцервикалыюм способе осеменения оплодотворяемость коров 2-ой опытной группы составила в первую охоту 60 %, в контрольной - 33.3 %. При ректоцервикальном способе введения спермы у коров 3-й опытной группы

оплодотворилось в первую охоту 10 коров, или 66,7 %, что превышает уровень оплодотворяемости в 3-й контрольной группе на 20 %

. Приведенные данные по уровню оплодотворяемости коров свидетельствуют о том, что воздействие на пояснично-крестцовую зону коров электромагнитным излучением крайне высоких частот мм-диапазона в течение 7 мин перед искусственным осеменением при всех способах введения спермы (мано-, визо-, ректоцервикальный) повышает оплодотворяемость коров. В 1-ой опытной группе при маноцервикальном способе осеменения коров с использованием аппарата «Орбита» индекс осеменения составил 1,6, что на 0,34 ниже, чем в контрольной, где животных осеменяли этим способом без применения аппарата «Орбита». При визоцервикальном способе введения спермы с применением аппарата «Орбита» во 2-ой опытной группе кратность осеменения составила 1,4, что на 0,27 ниже, чем у коров контрольной, осемененных этим способом без применения аппарата «Орбита». Выраженное снижение индекса осеменения отмечено в 3-ей опытной группе животных при ректоцервикальном способе искусственного осеменения с применением аппарата «Орбита» (1,53) по сравнению с 3-ей контрольной группой коров, где коров осеменяли без применения аппарата «Орбита» (1,33). Разность показателей индекса осеменения между опытными группами коров составляла от 0,07 до 0,14.

Наименьшая кратность осеменения до плодотворного среди опытных групп установлена при маноцервикальном способе введения спермы, а наиболее высокая -при визоцервикальном. У коров контрольных групп самый низкий индекс осеменения (1,53) зарегистрирован при ректоцервикальном способе введения спермы.

Таким образом, при воздействии на пояснично-крестцовую зону коров при визо-, мано- и ректоцервикальном способах введения спермы за счет повьппения оплодотворяемости в первую охоту происходит снижение кратности осеменения коров.

3.4, Изучение влияния магнитно-инфракрасно-лазерного излучения на воспроизводительную функцию животных

3.4.1. Влияние низкоинтеысивного магнитно-ннфракрасно-лазерного воздействия аппаратом «РИКТА - МВ» на организм животных

Данные, характеризующие физиологическое состояние, свидетельствуют, что у животных опытных и контрольной групп до магнитно-инфракрасно-лазерного низкоинтенсивного воздействия-температура тела соответствовала физиологической норме и составляла соответственно от 38,5 ± 0,62 до 38,8 ± 0,48 °С. Частота дыхания у коров опытных и контрольной групп находилась ближе к верхней границе физиологической нормы, что характерно для коров в послеродовой период.

Результаты оценки показателей температуры, частоты пульса и дыхания свидетельствуют, что до воздействия аппаратом «РИКТА - МВ» физиологическое состояние коров соответствовало послеродовому периоду. После применения аппарата «РИКТА - МВ» в течение 5 дней по 3 мин через 5-7-10 дней после отела патологических сдвигов со стороны организма коров по показателям температуры тела, частоты пульса и дыхания не отмечено.

Применение аппарата «РИКТА - МВ» проводили на коровах на 5-й день после отела вагинальным методом в режиме согласно инструкции по применению прибора с биорезонансным процессом облучения в течение 5 дней. Время воздействия: 1-я

опытная группа - 1 мин, 2-я - 2 мин., 3-я - 3 мин. В контрольной группе применение аппарата «РИКТА - МВ» не проводили. Анализ полученных данных показывает, что выделение лохий у коров 1-ой и 2-ой опытных групп прекращалось к 12,5 ± 1,64 дня, у коров 3-ей опытной группы (время воздействия 3 мин) - к 9,8 ± 0,8 дня.

Лохиальный период у коров 3-ей опытной группы был достоверно короче, чем в 1-ой и 2-ой группах, эта разница составила 2,67 дня. Срок инволюции тела и рогов матки у коров 1-й и 2-й опытных групп составил 23,16 ± 1,32 и 23,50 ± 1,38 дня соответственно, в 3-й опытной группе 19,88 ± 1,47 дня. У коров контрольной группы он длился до 28,16 ± 1,33 дня, т.е. был достоверно больше на 5 дней, чем в 1-й и 2-й опытных группах, и на 8,28 дня, чем в 3-й. Инволюция шейки матки в контрольной группе завершалась только через 24 ± 1,41 дня, что по сравнению с показателями 1-й и 2-й опытных групп коров достоверно больше на 8 и 6,5 дня. В 3-й опытной группе разница по сравнению с контрольными группами коров составила 14 дней.

По результатам двух проведенных опытов на коровах по определению оптимального времени магнитно-инфракрасно-лазерного воздействия на половую систему коров после нормального отела в наших условиях было установлено положительное влияние в течение 3 мин. При установлении сроков магнитно-инфракрасно-лазерного воздействия после отела на инволюционные процессы в половой системе и наступлении охоты наиболее оптимальным было применение аппарата «РИКТА - МВ» на 10 день после отела.

Отмечено, что наступление первой охоты в опытной группе коров, которым проводили воздействие низкоинтенсивным магнитно-инфракрасно-лазерным излучением в течение 3 мин через 10 дней после отела составило 25,2 ± 1,98 дня, что на 7,1 дней короче, чем у животных контрольной группы, на 4,1 дня, чем у коров 1-ой опытной, и на 3 дня, чем у коров 2-ой.

Воздействие магнитно-инфракрасно-лазерным излучением на мышечную ткань и слизистую оболочку матки привело к уменьшению отека, что связано с повышением кровотока в тканях, активации транспорта вещества через сосудистую стенку, а также с интенсивным формированием сосудов, особенно капилляров.

3.4.2. Воздействие низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного излучения на морфобнохимический состав крови

Биохимический статус крови коров оценивали в динамике по показателям, которые характеризуют состояние обмена веществ у животных. Уровень общего белка в сыворотке крови коров опытных групп на начало опыта составлял от 6,05 ±0,11 до 6,58 ± 1,33 г%, т.е. был в пределах физиологической нормы. Резервная щелочность крови коров опытных групп на начало опыта составила 35,1 ± 2,1 об/% Со2, в контрольной - 43,8 ± 1,7 об/% Со2. Достоверных различий резервной щелочности у коров под влиянием применения аппарата «РИКТА - МВ» не выявлено. Уровень каротина в сыворотке крови у коров в опытных группах на начало опыта составлял 0,32 ± 0,01 мг%, на конец - 0,41 ± 0,02 мг%, в контрольной группе 0,38 ± 00,7 мг% на начало опыта и 0,41 ± 0,02 мг% - на конец, т.е. содержание его у животных всех групп ниже физиологической нормы, что типично для конца зимнего стойлового периода. Количество кальция в крови коров опытных групп колебалось незначительно - от 14,05 ± 0,06 до 15,01 ± 0,12 мг%, в контрольной оно составило 14,1 ± 0,3 мг% и не имело достоверных различий. Уровень фосфора у коров опытных групп на начало

опыта составлял от 4,71 ± 1,5 до 5,33 ± 0,04 мг%, в контрольной - 4,78 ± 1,6 мг%. Содержание эритроцитов во всех группах находилось на нижних пределах физиологической кормы и колебалось от 4,28 ± 0,21 до 4,52 ± 0,21 10й/л. Из-за незначительной потери крови во время родов и при лохиальных выделениях количество гемоглобина в опытных группах колебалось от 9,1 ± 0,30 до 9,2 ± 1,1 г/л, в контрольной группе оно составляло 8,9 ± 0,21 г/л.

В результате проведения экспериментов установлено, что 10-ти минутное воздействие на кровь крыс МИЛ-излучением происходит уменьшение запасов внутриклеточного гликогена, при одновременном увеличении процента нейтрофилов, в которых гликоген выявляется цитохимически (снижение показателей среднего цитохимического коэффициента на 17,8%). Наблюдается заметное уменьшение содержания в нейгрофилах внутриклеточных липидов (11%), которые, являясь одним из энергетических субстрактов клетки, интенсивно расходуются в процессах биологического окисления. Резко повышается активность сукцинатдегидрогеназы (СДТ 24%), в то время как активность миелопероксидазы и АТФ-азы остается неизменной. Почти в 1,4 раза повышается содержание в нейтрофилах лизосомных катионных белков (ЛКБ).

На фоне активации кислороднезависимых механизмов бактерицидности нейтрофила отмечено повышение показателей НСТ-теста. Двукратное увеличение дозы (20-минутное воздействие МИЛ-излучением крови крыс in vitro способствует увеличению запасов гликогена и липидов в клетке. Содержание внутриклеточного гликогена увеличивается на 25%, в то время как процент реагирующих нейтрофилов остается неизменным. Содержание липидов так же повышается на 27,5%. Процесс дегидрирования янтарной кислоты с образованием макроэргических соединений заметно активизируется (СДГ возрастает на 35,7%. МИЛ-излучение резко повышает активность миелопероксидазы (МП) в 1,5 раза и активацию кислород-независимых систем бактерицидностн нейтрофилов о чем, свидетельствует увеличение количества клеток содержащих гранулы ЛКБ (на 23,7%).

В заключение следует отметить, что МИЛ-излучение повышает проницаемость, снижает упругость эритроцитроцитарных мембран. Увеличивает размеры эритроцитов и вызывает их разрушение пропорционально экспозиции воздействия. Эритроциты, подвергнутые воздействию in vitro МИЛ-излучению, освобождают факторы гемокагуляции, а в нейтрофилах активизируется ферментативный и бактерицидный метаболизм. Проведенные исследования показали, что облучение крови МИЛ-излучением в течение 20 мин. оказывает существенное влияние на осмотическую резистентность эритроцитов. Было установлено, что гемолиз, как в контроле, так и в опытных образцах начинался в растворе NaCl 0,5%-ный концентрации. Однако дальнейшее разведение раствора выявило разную устойчивость опытных и контрольных образцов эритроцитов к гемолизу. На основании полученных данных, мы изучили возможность стабилизации мембраны за счет снижения ПОЛ МИЛ-излучением. Было установлено, что МИЛ-излучение существенно уменьшает концентрацию малонового диальдегида, что свидетельствует о снижении интенсивности свободнорадикальных процессов.

3.4.3. Уровень половых гормонов при воздействии киэконитеисивным магнитно-инфракрасно-лазерном излучении

Изменение уровня прогестерона, эстрадиола и тестостерона в крови коров изучали в третьем опыте по схеме: до применение аппарата «РИКТА-МВ» (14-й день после отела); через сутки после применения аппарата «РИКТА-МВ», в первый день прихода в охоту; через сутки после лазеропунктуры; в первый день прихода в охоту; через сутки после искусственного осеменения; через 15 дней после осеменения; через 21 день после осеменения.

Анализ изменения уровня прогестерона показал, что в послеродовой период его количество в крови коров обеих групп снизилось, что связано со стадиями полового цикла. Низкий уровень этого гормона отмечен и при исследованиях крови после применения аппарата «РИКТА-МВ» в период охоты и через сутки после курса МИЛ воздействия у коров опытной и контрольной (без МИЛ излучения) групп животных. Однако степень снижения уровня прогестерона в опытной группе коров была меньше, чем в контрольной. Через сутки после курса применения аппарата «РИКТА-МВ» в опытной группе коров количество прогестерона (1,97 ± 0,09 нг/мл) было ниже этого показателя до МИЛ воздействия, в 5,04 раза, а в контрольной - в 9,8 раза, в первый день прихода в охоту - в 3,6 и 5,9 раза, а через сутки после осеменения - в 3,48 и 4 раза соответственно. Через 21 день после осеменения количество прогестерона в опытной группе коров снизилось до 1,7 ± 0,12, в контрольной - до 2,8 ±0,14 нг/мл.

Наиболее активными эстрогенами являются эстрадиол и эстрон, образующиеся в яичниках самки. Анализ данных показывает, что уровень эстрадиола крови коров при применении аппарата «РИКТА-МВ» в опытной группе через сутки после МИЛ воздействия снизился по сравнению с показателями до воздействия в 8 раз. В контрольной группе коров снижения уровня эстрадиола в крови не наблюдалось. Через 15 дней после осеменения количество эстрадиола в опытной группе коров при применении аппарата «РИКТА-МВ» и контрольной без МИЛ воздействия было минимальным и составило 0,14 ± 0,02 и 0,13 ± 0,01 нг/мл соответственно. Через 21 день этот показатель увеличился: в опытной группе - 0,25 ± 0,02, в контрольной - 0.19 ± 0,03 нг/мл.

Через сутки после применения аппарата «РИКТА МВ» у опытных коров количество тестостерона составило 0,21 ± 0,01 иг/мл, что на 0,04 нг/мл больше, чем до проведения МИЛ воздействия, а также на 0,08 нг/мл больше, чем у коров контрольной группы. В первый день прихода в охоту у коров опытной группы этот показатель был также достоверно выше на 0,041 нг/мл, чем у коров контрольной группы (р < 0,05). Через сутки после осеменения у коров опытной и контрольной групп тестостерон в крови не обнаруживался.

Таким образом, стимуляция охоты у новотельных коров путем применения аппарата «РИКТА МВ» в течение 7 дней вызывала процесс нормализации уровня прогестерона, эстрадиола и тестостерона и тем самым привела к ускорению прихода коров в охоту и повышения их оплодотворяемое™.

3.4.4. Сравнительное изучение оплодотворяемости коров с использованием низконнтенснвного магнитно-инфракрасного лазерного излучения при искусственном осеменении коров

Результаты исследований показали, что во 2-ой опытной группе при МИЛ воздействии за 15 мин до введения спермы и в контрольной группе плодотворно осеменено в первую охоту 50 % коров, что на 16,6 % ниже, чем в 1-ой опытной группе (МИЛ воздействие за 15 мин до введения спермы). В 3-ей опытной группе при применении аппарата «РИ1СТА МВ» непосредственно перед введением спермы плодотворно осеменено в первую охоту 83,3 % коров.

При визоцервикалыюм способе осеменения оплодотворяемость коров опытной группы при магнигно-инфракрасно-лазерном воздействии составила в первую охоту 66,6 % против 46,6 % в контрольной (на 20 % больше).

При ректоцервикальном способе в опытной группе коров оплодотворилось в первую охоту 11, или 73,3 %, что превышает оплодотворяемость коров в контрольной на 30,3%. При маноцервикальном способе в опытной группе коров оплодотворяемость в первую охоту составила 53,3 %, что на 33,3% выше, чем в контрольной. Условия внешней среды и искусственною осеменения во всех группах были одинаковые.

Сравнительный анализ показал, что продолжительность сервис-периода у коров 1-3-й опытных групп, которым применили МИЛ воздействие на точки акупунктуры непосредственно до введения спермы и сразу после него, составила при маноцервикальном способе 75,2 ± 1,22 дня, при визоцервикальном - 76,3 ± 2,1 и при ректоцервикальном - 73,1 ± 2,26 дня. У коров 3-й опытной [руппы сервис-период был короче на 2,1 дня, чем в 1-й опытной, и на 3,2 дня, чем во 2-й. Более существенные различия продолжительности сервис-периода установлены у коров 3-й опытной группы (применение аппарата «РИКТА МВ» при ректоцервикальном способе введения спермы) - 73,1 ± 2,26 дня, что на 9 дней достоверно короче, чем у аналогов контрольной группы.

3.5. Изучение влияния динамической злектронейростимуляции на воспроизводительную функцию животных

3.5.1. Влияние динамической злектронейростимуляции аппаратом «ЗооДиаДЭНС» на организм животных

В целях исключения нарушений функции организма проводили общее обследование животных, которое включает в себя измерение температуры тела, частоту дыхательных движении в минуту и частоту пульса. Температура тела животных, частота пульса и дыхания на начало и конец опыта колебались в пределах физиологической нормы и не имели достоверных различий.

3.5.2. Влияние динамической злектронейростимуляции на морфобиохимический состав крови

Уровень общего белка в сыворотке крови коров опытных групп на начало опыта составлял от 8,0 ± 0,25 до 8,4 ± 0,9 г%, т.е. был в пределах физиологической нормы. Резервная щелочность крови коров опытных групп на начало опыта

колебалась от 32,8 ± 2,7 до 38,9 ± 2,4 об/% Со2, а в контрольной группе она составляла 42,4 ± 1,2 об/%С02.

Оценивая результаты определения резервной щелочности до и после применения аппарата «ЗооДиаДЭНС», следует отметить, что ее уровень у коров контрольной и опытной групп на начало и конец опыта был низким, что свидетельствует о нарушениях в кормлении животных. Изменений резервной щелочности у коров под влиянием воздействия аппаратом не выявлено. Уровень каротина в сыворотке крови у коров свидетельствуют, что его количество в опытных группах на начало опыта составляло от 0,1 ± 0,8 до 0,4 ± 0,07 мг%, в контрольной группе (без применения аппарата «ЗооДиаДЭНС») 0,2 ±0,1 мг%, т.е показатели каротина у всех животных опытных и контрольной групп были ниже физиологической нормы, что типично для конца зимнего периода содержания животных. Состояние фосфорно-кальциевого обмена у коров опытных и контрольной групп оценивали на основе определения уровня кальция и фосфора в крови. Количество кальция в крови коров опытных групп колебалось незначительно - от 11,3 ± 037 до 12,5 ± 021 мг%, в контрольной оно составило 12,3 ± 0,39 мг% и не имело достоверных различий. Повышение содержания кальция в крови животных опытных и контрольной групп характерно для послеродового периода. В начале опыта уровень фосфора у коров опытных групп составлял от 4,8 ± 0,3 до 5,2±0,2 мг%, в контрольной группе он равнялся 5,1 ± 0,2 мг%. Содержание гемоглобина в опытных группах колебалось от 9,6 ± 0,33 до 9,9 ± 0,58 г/л, в контрольной составляло 9,4±0,30 г/л. Анализ показал, что во всех группах животных было повышено содержание лимфоцитов от 60,1 ±0,18 до 61,5 ± 0,18 %, что, по нашему мнению, связано с возрастом коров (4-5 лет). Разница между контрольной и опытными группами недостоверна. Отмечено также пониженное содержание моноцитов - от 5,3 ± 0,11 до 5,6 ± 0,12 %, что соответствует физиологическим показателям количества моноцитов у коров на 10-й день после отела.

3.5.3. Уровень половых гормонов при воздействии динамической электронейростимуляции

В четвертом опыте на 12 коровах после нормального отела изучали изменение уровня прогестерона, эстрадиола и тестостерона в крови коров по схеме: до электропунктуры 14-й день после отела; через сутки после окончания электропунктуры; в первый день прихода коров в охоту; через сутки после осеменения.

Электропунктуру проводили на 14-й день после отела в течение 7 дней. Воздействовали на БАТ 31, 32, 33 и 60 в течение 3 мин при частоте работы аппарата «ЗооДиаДЭНС» 10 Гц. Было сформировано две группы коров (опытная и контрольная) по 6 гол. в каждой. Через сутки после искусственного осеменения количество прогестерона в опытной группе (при ДЭНС) составило 2,64 ± 0,04 нг/мл, что ниже показателя в этой группе до проведения ДЭНС-терапии в 3,7 раза, в контрольной (без ДЭНС) - в 3,6 раза.

Уровень прогестерона в крови коров опытной группы (при ДЭНС) на 21-й день после искусственного осеменения составил 1,2 ± 0,03 нг/мл и был ниже, чем у животных котрольной группы (без ДЭНС) на 1,37 нг/мл.

Уровень эстрогенов в плазме крови коров в первые дни после отела довольно высокий, он снижается примерно в 2 раза за 2 нед до наступления первой охоты. Уровень эстрадиола в послеродовой период у коров (до ДЭНС) был высоким и

составил в контрольной группе коров 0,24 ± 0,01, в опытной - 0,23 ± 0,01 нг/мл. На 2-й день после искусственного осеменения количество эстрадиола в крови коров опытной (при ДЭНС) и контрольной (без ДЭНС) групп составило 0,21 ± 0,01 и 0,18 ± 0,01 нг/мл, соответственно, разность между показателями содержания прогестерона в крови коров обеих групп была несущественной.

Анализ показал, что через сутки после курса ДЭНС у опытных коров количество тестостерона составило 0,21 ± 0,01 нг/мл, что на 0,04 нг/мл больше, чем при исследованиях до проведения ДЭНС, а также на 0,08 нг/мл больше, чем у животных контрольной группы. В первый день прихода в охоту у коров опытной группы количество тестостерона было также достоверно выше на 0,041 нг/мл, чем у коров контрольной (р<0,05). Через сутки после осеменения у коров обеих групп тестостерон в крови после ДЭНС почти не обнаруживался (0,01 нг/мл).

Таким образом, стимуляция охоты у новотельных коров путем электронейропунктурного воздействия в течение 7 дней вызывала выраженные изменения уровня прогестерона, эстрадиола и тестостерона, что является главным фактором, обусловившим ускорение прихода коров в охоту и повышения их оплодотворяемости.

3.5.4. Изучение влияния динамической электронейростимуляции на

становление репродуктивной функции коров послеродовый период

Для опыта отобрали по принципу пар-аналогов 50 новотельных коров с учётом возраста, срока отёлов, упитанности и живой массы, из которых сформировали 4 группы. Обработку животных проводили аппаратом «ЗооДиаДЭНС» в режиме 64-512 Гц в течение 8 дней по 1-2 мин. Коров I опытной группы (п=12) обрабатывали через 5 дней, II группы (п=12)-через 10 дней и III группы (п=11)-через 15 дней после отёла. Контрольную группу составили 15 интакгных коров.

При применении аппарата «ЗооДиаДЭНС» выделение лохий у коров 1-й (время воздействия 1 мин, частота 20 Гц) и 2-й (время воздействия 2 мин, частота 20 Гц) опытных групп прекращалось к 11,8±0,41 и 12,5±0,37 дня соответственно, у коров 3-й опытной - к 9,51±0,67 дня.

Лохиальный период у коров опытных групп был достоверно короче, чем в контрольной на 2,21; 2,99; 5,0 дня, соответственно. Инволюция тела и рогов матки у коров опытных групп завершилась к 23,16 ± 0,61; 22,5 ± 0,78 и 18,96 ± 0,42 дня соответственно. У коров контрольной группы срок инволюции тела и рогов матки составил 28,74 ±0,58 дня, т.е. был достоверно больше на 6 дней, чем в 1-2-й опытных группах и на 9,78, чем в 3-й. Инволюция шейки матки в контрольной группе завершилась к 23,81 ± 0,81 дня, что по сравнению с показателями 1-й и 2-й опытных групп достоверно больше, на 7,81 и 6,31 дня. В 3-й опытной группе разница показателя инволюции шейки матки у коров по сравнению с контрольной, группой животных составила 9,81 дня.

Следовательно, третий режим времени воздействия (ДЭНС на точки БАТ 31, 32,33, 60 в течение 3 мин) является оптимальным. Во втором опыте на 18 коровах после нормального отела применили третий режим воздействия (3 мин). Задачей исследований явилось определение сроков инволюции матки у коров при электропунктурном воздействии аппаратом «ЗооДиаДЭНС» в течение 3 мин в разные сроки после отела. Наточки акупунктуры 30, 31, 32, 33 и парную точку 60 коров 1-й

опытной группы (п = 6) воздействовали аппаратом «ЗооДиаДЭНС» в течение 30 мин через 8 ч после отела.

Во 2-й опытной группе ДЭНС проводили на вышеуказанные точки при времени воздействия 3 мин через 3 дня после отела, а через 7 дней - в 3-й. Контрольную группу (без ДЭНС) составили шесть коров-аналогов. Выделение лохий у коров 1-й опытной группы (ДЭНС в течении 3 мин через 8 ч после отела, частота работы аппарата 20 Гц) прекращалось к 8,11 ± 0,64 дня. Во 2-й опытной группе (ДЭНС через.3 дня после отела в течение 3 мин, частота работы аппарата 20 Гц) прекращалось к 11,2 ±0,45 дня; у коров 3-й опытной группы (ДЭНС в течении 3 мин через 7 дней после отела, частота работы аппарата 20 Гц) к 12,5 ± 0,32 дня.

Данные показатели свидетельствуют, что первый вариант воздействия (3 минуты через 8 ч после отела) является оптимальным. В третьем опыте на 18 новотельных коровах применены различные режимы частоты аппарата «ЗооДиаДЭНС», при этом проводили ДЭНС по отработанным ранее схемам - через 8 ч после отела в течение 3 минут, но при различной частоте работы аппарата: 10 ± 2 (минимальная частота), 20 ± 2; 60 ± 2 Гц. Электропунктурное воздействие аппаратом «ЗооДиаДЭНС» проводили наточки 30, 31, 32, 33 и 60 (таблица. 13).

Анализ полученных данных свидетельствует, что самые короткие (24,6 дня) сроки инволюции матки оказались в I опытной группе животных, обработку которой начали проводить через 5 дней после отёла. Несколько ниже скорость инволюции матки зафиксировали у коров II групны-28,2 дня. В III группе завершение инволюции произошло через 34,2, а в контролыюй-через 38,1 дня. Сроки появления первой охоты после отёла были зафиксированы в аналогичной последовательности.

Таблица 13 - Эффективность профилактических мероприятий в послеродовом периоде

Показатель Группы

I II III Контроль

Число коров, п 79 57 26 29

Число выздоровевших коров, п - % 59 - 74,6 35-61,4 23 - 88,5 25 - 86,2

Индекс осеменения 2,1± 0,09 2,41 ± 0,08 1,5± 0,03*** 2,4 ±0,01

Индиференс-период 97,0 ±3,50** 110,1 ± 11,17 85,0 ±3,08* 111,3 ± 17,31

Показатель стельности коров после первого осеменения оказался одинаковым в I и II группах-41,7%. В III группе количество стельных животных было меньше на 5,3%, чем в I и II группах, а по сравнению с контролем эта разница составила 8,4%. Стельных через 60 дней в I группе оказалось 75%, что на 8,3% больше, чем в III группе. По сравнению с контролем эта разница составила 28,3%. Всего стельных за время проведения опыта в I группе выявлено 97,7% коров, во Н-91,0, в Ш-81,8, в контрольной группе-80%.

Следовательно, чем раньше проводить курс ДЭНС-терапии, тем эффективнее его действие: уменьшается срок инволюции матки, что профилактирует субинволюцию матки и заболевание коров эндометритом.

В результате повышаются экономические показатели в отрасли мясного скотоводства. Данные показатели свидетельствуют, что динамическая элекгронейростимуляция (ДЭНС-терапия) через 8 ч после отела в течение 3 мин при частоте 10 Гц, оказывают положительное влияние на инволюционные процессы матки коров в послеродовой период.

Оплодотворяемость коров в первую охоту в 1-й опытной группе составила 50,0 ±4,1 %, что на 16,7 % выше, чем в контрольной. Сервис-период в этой группе составил 62,5 ±1,1 дня, что на 10,8 дня меньше, чем во 2-й опытной, и на 14,6 дня меньше, чем в 3-й опытной. Разность показателей между контрольной группой коров (98,6 ± 1,02) и 1-й опытной (62,5 ±1,1) составила 36,1 ±1,5 дня. Полученные в опыте результаты свидетельствуют о том, что наиболее высокие показатели оплодотворяемости коров в первую охоту, а также наименьший сервис-период получены в 1-й опытной группе при воздействии аппаратом «ЗооДиаДэнс» на точки 30, 31, 32, 33 и 60 (парная точка) через 8 ч после отела в течение 3 мин при частоте работы аппарата 10 Гц.

3.5.5. Применение динамической нейроэлектростимуляции при различных способах осеменения коров

Полученные в опыте результаты свидетельствуют, что более высокие показатели оплодотворяемости коров в первую охоту получены в 4-й опытной группе коров при динамическом электрнейроопунктурном воздействии через 15 мин после введения спермы. Плодотворно осеменено в первую охоту в данной группе 75,0 ± 8,2 % животных, что на 38,4 % выше, чем в кошролыюй.

В 1-й и 2-й опытных группах оплодотворяемость коров в первую охоту была выше, чем в контрольной, на 1,1 и 36,6 %, во 2-й опытной на 35,5 % выше, чем в 1-й. Наиболее эффективным из числа испытанных с применением динамической электронейропунктуры до введения спермы вариантов являлся второй, при котором оплодотворяемость составила 62,5 ±11,8 %, что на 36,6 % выше, чем в контрольной группе. Во втором опыте по изучению эффективности применения динамической электронейропунктуры на оплодотворяемость коров после искусственного осеменения коров сформировали три контрольных и три опытных группы по 6 гол. в каждой.

Динамическую электронейропунктуру проводили через 15 мин после введения спермы, воздействуя на точки акупунктуры 30, 31, 32, 33, 60 в течение 3 мин при частоте работы аппарата 10 Гц. В целом полученные результаты оплодотворяемости коров в опыте удовлетворительны, поскольку 90 % коров всех опытных и контрольных групп эффективно осеменены за два половых цикла после отела. При маноцервикальном способе введения спермы опытным коровам 1-й группы оплодотворяемость в первую охоту составила 50,0 %, что на 33,3 % выше, чем у коров контрольной.

При ректоцервикальном способе осеменения - оплодотворяемость коров 3-й опытной группы равнялась 66,7 %, а в контрольной (без ДЭНС) - 50 %. При визоцервикальном способе осеменения - оплодотворяемость коров опытной группы, составила в первую охоту 50 % животных, в контрольной не оплодотворилась ни одна корова. В 1-й опытной группе при маноцервикальном осеменении с использованием

динамической электронейростимуляции индекс осеменения составил 1,60, что на 0,06 ниже, чем в контрольной.

При визоцервикальном способе введения спермы во 2-й опытной группе кратность осеменения коров до плодотворного составила 1,46, что на 0,07 ниже, чем у контрольных аналогов. Разность показателей индекса осеменения между опытными группами коров составляла от 0,07 до 0,14.

В опьгге выявлено, что показатели сервис-период всех контрольных групп между собой имели следующие незначительные различия: в 1-й контрольной группе при маноцервикальном способе введения спермы 75,2 ± 2,3 дня, во 2-й при визоцервикальном -74,1±2,3, 3-й при ректоцервикалыюм - 75,8 ± 2,7 дня (разность между группами недостоверна). Более существенные различия продолжительности сервис-периода установлены у коров 3-й опытной группы, стимулирующее электронейровоздейсгвие которым проводили при ректоцервикальном способе введения спермы. Он составил 64,8 ± 2,2 для, что достоверно короче на 11 дней, чем у аналогов контрольной (р < 0,05). Сервис-период у коров 1-й и 2-й опытных групп, которым применяли динамическое электронейровоздейсгвие, составил при маноцервикальном способе введения спермы 69,1 ± 1,8 дня, при визоцервикальном - 69,7 ± 1,95 дня. У коров 3-й опытной группы сервис-период был на 4,3 дня короче, чем в 1-й опытнойгруппе животных, на 4,9 дня, чем во 2-й опытной группе.

Таким образом, динамическое электронейропунктурное воздействие за 15 мин до введения спермы на точки 30, 31, 32, 33, 60 в течение 3 мин на каждую при частоте работа аппарата 10 Гц повысило оплодотворяемость в первую охоту при всех способах введения спермы. При этом сократился сервис-период и индекс осеменения во всех опытных группах.

4. ВЫВОДЫ

1. В условиях сельхозпредприятий Республики Казахстан, не зависимо от форм собственности и технологий содержания, кормления и эксплуатации, нарушения функции органов репродуктивной системы регистрируют, в среднем, у 20,2-22,7% мясных коров; в структуре репродуктивных нарушений преобладают гипофункциональное состояние яичников, которые периодически в отдельных хозяйствах регистрируют у 20,8-90,1% лактирующих коров.

2. Одним из основных сезонных факторов, снижающих репродуктивную активность мясных коров, является термальный стресс, приводящий в пастбищный период к нарушению гормонального статуса организма. Проведение биотехнических мероприятий, активизирующих репродуктивную функцию с включением в схемы обработок средств, потенцирующих функцию желтого тела, а также метафилактического воздействия на матку позволяет нивелировать сезонное снижение показателей оплодотворяемости коров, в т.ч. и за счёт снижения эмбриональных потерь. Многочисленные варианты предовуляторного гормонального дисбаланса, приводящего к нарушению процесса спонтанной и индуцированной овуляции, сводятся, в конечном счёте, к сдвигу пика ЛГ во временных и/или количественных параметрах. Введение в режимы обработок с целью регуляции репродуктивной функции синтетического аналога гонадолиберина приводит к оптимизации параметров пика ЛГ.

3. Рассеивание сроков начала индуцированной охоты является основным фактором, негативно влияющим на результаты синхронизации. Степень рассеивания зависит от морфо-функционального состояния яичников коров, которое определяется

реакционной способностью желтого тела и возрастом растущего межэстрального фолликула. Введение в схему обработок препаратов гонадотропина и гонадолиберина унифицирует овариальные процессы, стабилизирует сроки начала охоты, что повышает результативность осеменений при проведении биотехнических мероприятий.

4. Полученные данные обосновывают необходимость при определении способа регуляции функциональной активности яичников учитывать уровень концентрации прогестерона. Индуцирование охоты у здоровых коров эффективно при концентрациях от 3,7 до 4,7 нг/мл. Использование фоллимага и магэстрофана при гипофункционалыюм состоянии яичников эффективно при значениях не ниже 0,5 нг/мл. При более низких конце!лрациях в схему обработок целесообразно включать сурфагон в дозе 10,0 мл.

5. Около 70% высокопродуктивных коров имеют задержку возобновления овариальной активности после отёла. При этом, пролонгирование лютеальной фазы и задержку первой овуляции регистрировали наиболее часто, что и являлось основной причиной задержки возобновления нормальной овариальной цикличности. В свою очередь, причинами пролонгации лютеальной фазы и задержки первой овуляции является задержка инволюции матки в течение 35 дней. Восстановление нормофункциональной циклической активности яичников у коров после отёла завершается быстрее, чем восстановительные процессы в эндометрии и маточной среде; достигаемая за счёт овариостимуляции стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет завершение восстановительных процессов в матке.

6. Исследованиями по овариостимуляции в послеродовой период установлено, что для этой цели наиболее эффективен комплекс препаратов: прогестерона, простагландина, гонадотропина и гонадолиберина. С одинаковой эффективностью для этой цели можно применять как отечественные, так и импортные препараты. Регламентировать режимы обработок следует таким образом, чтобы первая овуляция произошла не ранее 21 дня после отёла. Выясненная возможность взаимонаправленности патогенетического процесса матка-яичники диктует необходимость комплексных методов лечения и профилактики.

7. Особенностью эмбриогенеза здоровых и проблемных высокопродуктивных коров является снижение скорости развития эмбрионов - как ранних, так и поздних морул и бластоцист. Замедленное развитие эмбрионов сопровождается нарушениями на ультраструктурном уровне, косвенно определяемыми методом культивирования. Морфологические изменения эмбрионов на ультраструктурном уровне и скрытые морфо-функциональные нарушения в эндометрии, способствующие нецелесообразному выбросу маточного простагландина, приводят к эмбриональной гибели. Введение прогестагенных препаратов мясным коровам на 6-8 день после осеменения повышает нормы стельности, благодаря снижению эмбриональных потерь. С равной долей успеха для снижения эмбриональной смертности коровам можно вводить сурфагон или ХГЧ на 10-11-й день после осеменения.

8. Проведение воздействий низкоинтенсивным электромагнитным излучением КВЧ мм-диапазоном (частота 129 ГГц), магнитно-инфракрасно-лазерным и динамической электронейростимуляцией на биологически активные точки для профилактики и нормализации оворальных нарушений в комплексе с биорегуляторами нового поколения, повышает эффективность биотехнических мероприятий по регуляции репродуктивной функции мясных коров. Низкоинтенсивное электромагнитное воздействие КВЧ мм-диапазона, магнитно-

ифракрасно-лазерным излучением, а также динамической электронейростимуляцией в рекомендуемых параметрах нормализует и повышает иммунобиологический статус организма, не оказывая негативного влияния на экологическую чистоту получаемой продукции.

9. Квантовое воздействие на зоны точек 30, 31, 32, 33 и 60 аппаратами «Орбита», «РИКТА - МВ» и «ЗооДиаДЭНС» в течение 5 дней по 1, 2, 3 мин на 5-й день после отела в базовом режиме оказало положгггельное влияние на послеродовые инволюционные процессы половой системы коров. Несмотря на различный временной режим воздействия, срок инволюции тела и рогов матки во всех опытных группах был достоверно короче и составил 23,16 ± 0,61; 22,5 ± 0,78; 18,96 ± 0,42 дня в опытных группах и 28,74 ± 0,58 дня - в контрольной.

10. При режиме воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА - МВ» и «ЗооДиаДЭНС» 3 мин через 8 ч после отела биохимические показатели крови на начало и конец опыта находились в пределах физиологической нормы. Уровень общего белка в сыворотке крови коров опытных групп на начало опыта составлял от 8,0 ± 0,25 до 8,4 ± 0,9 г%. Резервная щелочность крови коров опытных 1рупп на начало опыта колебалась от 32,8 ± 2,7до 38,9 ± 2,4 об/% С02. Показатели каротина в сыворотке крови в опытных группах на начало опыта составляли от 0,1 ± 0,8 до 0,4 ± 0,07 мг%, в контрольной группе - 0,2 ± 0,1, т.е у всех животных они были ниже физиологической нормы, что типично для конца зимнего стойлового периода в Западном Казахстане. Данные биохимического и морфологического состава крови свидетельствуют о безвредности воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА - МВ» и «ЗооДиаДЭНС» на организм животных.

11. При различных сроках воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА - МВ» и «ЗооДиаДЭНС» в течение 3 мин (через 8 ч после отела, через 3 и 7 дней после отела) восстановление репродуктивной функции коров во всех опытных группах было достоверно короче, чем в контрольной. Так, наступление охоты у мясных коров было достоверно короче на 8,37 и 5,87 дня, чем во 2-й и 3-й опытных группах, и составило 28 ± 1,02 дня (р>0,05). В контрольной группе охота наступила на 9,37 дня позже, чем в 1-й опытной. Применение различной частоты воздействия не оказало отрицательного влияния на восстановление половой функции коров. В опытных группах животных сроки наступления первой охоты колебались от 31,5 ± 1,29 до 33,5 ± 0,84 (при р< 0,05), в контрольной группе коров первая охота наступила на 39,8 ± 0,87 дня.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Биотехнические мероприятия по повышению показателей воспроизводительной активности высокопродуктивных мясных коров следует проводить в комплексе с электромагнитным излучением крайне высоких частот мм-диапазона, низкоинтенсивным магнитно-инфракрасно-лазерным и динамической электронейростимуляцией на матку и яичники, что обеспечит максимальную эффективность, не оказывая при этом негативного влияния на экологическую безопасность получаемой продукции.

2. С целью профилактики и улучшения общепринят!,IX показателей плодовитости коровам после отёла следует проводить стимулирование овариальной активности введением комплекса препаратов: сурфагон, прогестерон, простагландин, ГСЖК в общепринятых дозировках и дозированием применением аппаратов «Орбита», «РИКТА - МВ» и «ЗооДиаДЭНС».

3. Для устранения гипофункции яичников у коров при уровне концентрации прогестерона в крови более 0,5 нг/мл рекомендуется использовать фоллимаг (1200 ИЕ) в сочетании с магэстрофаном (500 мкг). При снижении содержания гормона ниже 0,5 нг/мл следует проводить комплексное лечение животных гестагенами, ГСЖК и ПГФ2а в общепринятых дозировках.

4. Для снижения эмбриональных потерь и выравнивания сезонных показателей плодовитости коров целесообразно в пастбищный период на 8-11 день после искусственного осеменения как в спонтанную, так и индуцированную охоту вводить гонадолиберины, ХГЧ на фоне предварительной гестагенизации при сочетанном применении электромагнитного излучения крайне высоких частот мм-диапазона, низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного воздействия и динамической электронейростимуляции органов репродуктивной системы.

5. В практике биотехнологии воспроизводства мясного скота рекомендуется использовать следующие аппараты: «Орбита», «РИКТА - МВ, «ЗооДиаДЭНС», для нормализации и стимуляции репродуктивной функции.

6. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ: В ЦЕНТРАЛЬНЫХ ИЗДАНИЯХ, РЕКОМЕНДОВАННЫХ ВАК:

1. Анзоров, В.А. Сравнительная характеристика и оценка Жизнеспособности эмбрионов, получаемых от здоровых и проблемных коров-доноров с разным уровнем молочной продуктивности / В. А. Анзоров, В. М. Шириев, Н. И.Сергеев, В. А. Титова, Ф. Н. Насибов, Е. У. Байтлесов // Сельскохозяйственная биология. -2005. - № 6. - С. 37-41. (пл.0,25/0,10).

2. Титова, В. А. Воздействие на инволюцию матки у коров квантовым методом / В. А. Титова, Ф. Н. Насибов, Е. У. Байтлесов, В. Катюков, Г. Власова // Молочное и мясное скотоводство. -2006. - № 1. - С. 24-25. (пл.0,15/0,10)

3. Насибов, Ф. Н, Влияние лазеропунктуры на иммунологический статус коров при эндометрите / В. А. Титова, Ф. Н. Насибов, Е. У. Байтлесов, И. И. Балковой, В. П. Иноземцев // Ветеринария. - 2006. - № 4. - С.33-37 (пл. 0,25/0,!5).

4. Титова, В. А. Эффективность технологических элементов криоконсервирования эмбрионов, полученных от коров-доноров с различным физиологическим статусом / В. А. Титова, Ф. Н. Насибов, Н. И. Сергеев, Е. У. Байтлесов, Е. А. Тяпугин. // Доклады РАСХН. - 2006. - № 2. - С. 33-35 (пл. 0,20/0,10).

5. . Тяпугин, С. Е. Зависимость продуктивного долголетия коров от интенсивности выращивания молодняка / С. Е. Тяпугии, Ф. Н. Насибов, Е. У. Байтлесов // Молочное и мясное скотоводство. - 2007. - № 3. - С. 16-18 (пл. 0,25/0,15).

6. Байтлесов, Е. У. Этиология и патогенез кист яичников у коров и возможности нормализации овариальной функции / Е. У. Байтлесов, Ф. Н. Насибов, В. А. Титова, Е. А. Тяпугин // Доклады РАСХН. - 2007. - № 4. - С. 41-44 (пл. 0,25/0,15).

7. Насибов, Ф. Н. Частота эмбриональных потерь у коров мясных пород и способы её снижения / Ф.Н. Насибов, Е.У. Байтлесов, С.Г. Канатбаев //Сельскохозяйственная биология. - 2007. - № 4. - С. 62-69 (пл. 0,35/0,20).

8. Насибов, Ф.Н. Нормализация репродуктивной функции коров при кистах яичников / Е.У. Байтлесов, В. А. Титова, Е.А. Тяпугин// Ветеринарная патология. -2007.-№2.-С.128-131 (пл. 0,20/0,10).

9. Байтлесов, Е. У. Аспекты эмбриональной смертности в скотоводстве / Е. У. Байтлесов, Ф. Н. Насибов, Е. А. Тяпугин, В. А. Титова // Ветеринарная патология.-2007.-№2.-С. 228-231 (пл. 0,15/0,10).

10. Байтлесов, Е. У. Испытание прогестерона как средства для снижения эмбриональной смертности / Е. У. Байтлесов, С. Г. Канатбаев, Ф. Н. Насибов, Е.А. Тяпугин, В.А. Титова // Ветеринарная патология. - 2007. - № 2. - С. 231-233 (пл. 0,15/0,10).

11. Байтлесов, Е. У. Качество эмбрионов, получаемых от здоровых, проблемных и высокопродуктивных коров-доноров / Е. У. Байтлесов, В. А.Титова, Е. А. Тяпугин, Ф. Н. Насибов // Аграрная наука. - 2007. - № 5. - С. 29-32 (пл. 0,15/0,10).

12. Насибов, Ф. Н. Жизнеспособность эмбрионов в зависимости от физиологического статуса коров-доноров / Ф. Н. Насибов, Е. У. Байтлесов, Е. А. Тяпугин, В. А. Титова // Вестник ветеринарии. - 2007. - № 3. - С.36-45 (пл. 0,35/0,10).

13. Насибов, Ф. Н. Воспроизводительная активность стада при различных условиях эксплуатации коров / Ф. Н. Насибов, Е. А. Тяпугин, Е. У. Байтлесов, В. А. Титова // Ветеринарная патология. - 2008. - № 3. - С. 67-70 (пл. 0,20/0,15).

14. Насибов, Ф. Н. Исследование некоторых факторов, влияющих на образование кист яичников / Ф. Н. Насибов, Е. У. Байтлесов, Е. А. Тяпугин, В. А. Титова // Ветеринарная патология. - 2008. - № 3. - С.70-72 (пл. 0,20/0,10).

В МЕТОДИЧЕСКИХ РЕКОМЕНДАЦИЯХ:

15. Насибов, Ф. Н. Регуляция полового цикла и профилактика нарушений репродуктивной функции. / Ф. Н. Насибов, Ю. В. Конопелько, Е. А. Тяпугин, Е. У. Байтлесов, В. В. Власов, А. Г. Хмылов, Н. В. Осокина // Методические рекомендации. - Вологда, 2006. - 32 с. (пл. 2,0/1,0).

16. Байтлесов, Е. У. Нормализация воспроизводительной функции у коров / Е. У Байтлесов, Е. А. Тяпугин, Ф. Н. Насибов, А. Г. Хмылов, Н. В. Осокина // Методические рекомендации. - Вологда, 2006. - С. 47 - 48 (пл. 0,15/0,10).

17. Байтлесов, Е. У. Биотехника интенсификации репродуктивной активности молочных коров / Е. У. Байтлесов, В. А. Титова, С. Н. Хилькевич, Е. А. Тяпугин // Учебное пособие. - Вологда, 2008. - 412с. (пл. 25,75/6,43).

В СБОРНИКАХ НАУЧНЫХ РАБОТ:

18. Абуов, А. Г. Результаты трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве / А..Г. Абуов, Е. У. Байтлесов, С. Г. Канатбаев // Бюллетень науч. работ ВИЖ «Биотехнические приемы в технологии трансплантации эмбрионов». - вып. 104. -1991. - С. 56-59 (пл. 0,20/0,15).

19. Байтлесов, Е. У. Замораживание эмбрионов мясного скота казахской белоголовой породы / Е. У. Байтлесов, А. Г. Абуов, С. Г. Канатбаев // Бюллетень научно-технической информации аспирантов и молодых ученых. - Дубровицы, 1992. -С. 119-120 (пл. 0,15/0,10).

20. Байтлесов, Е. У. Морфологическая оценка эмбрионов коров казахской белоголовой породы / Е. У. Байтлесов, А. Г. Абуов // Тезисы докладов XI

межреспубликанской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов. - Оренбург, 1992. - С. 119-120 (пл 0,15/0,10).

21. Байтлесов, Е. У. Приживляемость эмбрионов при пересадке на двойственность / Е. У. Байтлесов, А. Г. Абуов // Бюллетень научно-технической информации аспирантов и молодых ученых. - Дубровицы, 1992. - С.64-65 (пл. 0,15/0,10).

22. Байтлесов, Е. У. Криоконсервирование и морфологическая оценка эмбрионов коров мясного скота / Е. У. Байтлесов: автореф. дис... канд. биол. наук. -Дубровицы, 1992.-24 с. (пл. 0,1,5/1,0)

23. Байтлесов, Е. У. Влияние способа добавления криопротектора на морфологическое состояние эмбрионов / Е. У. Байтлесов, С. Г. Канатбаев // Тезисы докладов XI межреспубликанской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов. - Оренбург, 1993. -С. 34-39 (пл.0,45/0,25).

24. Байтлесов, Е. У. Соотношение морфологических отклонений у эмбрионов при различных обработках гормональными препаратами / Е.У. Байтлесов, К. К. Бозымов // Бюллетень научно-технической информации аспирантов и молодых ученых. - Дубровицы, 1993.-С. 45-49. (пл. 0,45/0,25).

25. Байтлесов, Е. У. Уровень суперовуляции и качества эмбрионов в зависимости от концентрации прогестерона в крови мясных пород перед гормональной обработкой / Е, У. Байтлесов, С. Г. Канатбаев // Тезисы докладов региональной конференции молодых ученых Урала и Поволжья, посвященной 250-летию Оренбургской области. Т. 2. - Ассоц. мол. ученых и специалистов. - Оренбург, 1994. - С.308-309 (пл. 0,15/0,10).

26. Бозымов, К. К. Взаимосвязь между экосостоянием окружающей среды и содержанием токсикантов в говядине / К. К. Бозымов, Е. У. Байтлесов, Н. К. Ахтанова, А. Зейнуллина // Краеведческие проблемы экологии Западного Казахстана. -Уральск, 1994.-С. 85-86 (пл. 0,15/0,10).

27. Байтлесов, Е. У. Криоконсервирование эмбрионов мясного скота без использования электричества / Е. У. Байтлесов, Б. А. Курманов, Р. У. Бозымова // Тезисы докладов международного координационного совещания на тему «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных» / Рос. академия с.-х. ВНИВИПФТ. - Воронеж, 1997. - С. 379-385 (пл. 0,3/0,1).

28. Байтлесов, Е. У., Наставление по применению магнитно-инфракрасно-лазерного аппарата «РИКТА-МВ» / Е. У. Байтлесов - М.:1999. - 5 с. (пл. 0,4).

29. Байтлесов Е. У. Трансплантация эмбрионов как один из методов совершенствования воспроизводства в мясном скотоводстве / Е. У. Байтлесов //Тезисы докладов международной научно-практической конференции, посвященной 10-летию Независимости Республики Казахстан «Интеграция науки и образования -гуманитарный приоритет XXI века». - Уральск, 2001. - С. 166 (пл. 0,01).

30. Байтлесов, Е. У. Изучение эффективности различных методов синхронизации охоты и осеменения коров-доноров мясных пород / Е. У. Байтлесов // Первый международный ветеринарный конгресс. - Алматы, 2002. - С. 32-37 (пл. 0,75/0,30).

31. Байтлесов, Е. У. Эндогенные и экзогенные факторы, влияющие на эффективность трансплантации эмбрионов у коров мясных пород / Е. У. Байтлесов // Научно-практическая конференция «Образование и наука в современных условиях развития Казахстана: опыт, проблемы и перспективы». - Уральск, 2002. - С. 23-26 (пл. 0,25/0,10).

32. Байтлесов, Е. У. Физиология беременности у коров и телок казахской белоголовой породы / Е. У. Байтлесов // Материалы научно-практической конференции «Народное хозяйство Западного Казахстана: состояние и перспективы развития». - Уральск, 2004. - С. 122-123 (пл 0,15/0,10).

33. Байтлесов, Е. У. Физиология полового цикла у коров / Е. У. Байтлссов // Материалы научно-практической конференции «Народное хозяйство Западного Казахстана: состояние и перспективы развития». - Уральск, 2004. - С. 123-124 (пл 0,15/0,10).

34. Байтлесов, Е. У. Влияние сезона отела на соотношение пола в мясном скотоводстве / Е. У. Байтлесов // Материалы научно-практической конференции «Народное хозяйство Западного Казахстана: состояние и перспективы развития». -Уральск, 2004. - С. 124-125 (пл 0,15/0,10).

35. Сабыргалиев, К. Г. Ветеринарно-санитарные требования в животноводстве / К. Г. Сабыргалиев, У. Б. Таубаев, В. Е.Беглецов, Г. Г. Есенгалиев, И. Н. Жубантаев, Б. А. Курманов, Е. У. Байтлесов, Е. С. Дурткаринов // Система ведения сельского хозяйства Западно-Казахстанской области. - Уральск, 2004. - С. 178-198 (пл 1,2/0,80).

36. Насибов, Ф. Н. Основные факторы, приводящие к эмбриональным потерям / Ф. Н. Насибов, Н. И. Сергеев, Е. У. Байтлесов, В. А. Титова // Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России: материалы 3-ей мевд. науч.-практ. конф. - Дубровицы, Т. 2. - 2005. - С. 269-271 (пл 0,20/0,10).

37. Анзоров, В. А. Повышение неспецифической резистентности животных под влиянием низкоинтенеивного лазерного излучения / В. А. Анзоров, Ф. Н. Насибов, Е. У. Байтлесов, В. А. Титова, И. И. Валковой, Ю. Д. Клинский, Г. С. Власова // Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России: материалы 3-ей междунар. научно-практ. конф. - Дубровицы, Т. 2. - 2005. -С. 271-273 (пл 0,20/0,10).

38. Анзоров, В. А. Репродуктивный статус коров в зависимости от паратипических факторов / В. А. Анзоров, С. Н. Хилькевич, Ф. Н. Насибов, Е. У. Байтлесов, В. А. Титова, В. Н. Шириев // Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России: материалы 3-й междунар. научно-практ. конф. - Дубровицы, Т.2. - 2005. - С. 266-269 (пл 0,25/0,15).

39. Титова, В. А. Зависимость формирования фолликулярных кист яичника от концентраций прогестерона в сыворотке крови лактирующих коров / В. А. Титова, А. И. Абилов, С. Н. Хилькевич, Ф. Н. Насибов, Г. С. Власова, Е. У. Байтлесов // Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России: материалы 3-ей междунар. науч.-практ. конф. Т. 2. - Дубровицы, 2005. - С. 274-276 (пл 0,15/0,10).

40. Насибов, Ф. Н. Стимулирование овариальной активности у коров /' Ф. Н. Насибов, Е, У. Байтлесов, Е. А. Тяпугин, В. А. Титова // Материалы международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных». - Воронеж, 2006. - С. 991-994 (пл 0,25/0,15).

41. Байтлесов, Е. У. Паратипические факторы и воспроизводительная способность коров / Е. У. Байтлесов, Ф. Н. Насибов // Материалы международной научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2006. - С. 123-125 (пл 0,15/0,10).

42. Байтлссов, Е. У. Об этиологии кист яичников / Е. У. Байтлесов, Ф. Н. Насибов // Материалы международной научно-практической конференции. -Екатеринбург, 2006. - С. 34-35 (пл 0,10/0,05).

43. Байтлесов, Е. У. Снижение эмбриональных потерь у коров мясных пород / Е. У. Байтлесов, Ф. Н. Насибов, С. Г. Канатбаев // Материалы международной научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2006. - С. 32-34 (пл. 0,25/0,15).

44. Байтлесов, Е.У. Кормление и воспроизводительная способность коров / Е.У. Байтлесов // Материалы международной научно-практической конференции. -Екатеринбург, 2006. - С. 34-36.(пл.0,10/0,05).

45. Титова, В. А. Некоторые аспекты интраовариальных процессов у коров /

B. А. Титова, Ф. Н. Насибов, С. Н. Хилькевич, Е. У. Байтлесов, Е. А. Тяпугин, Г. К. Шиловский // Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных: материалы междунар. науч.-практ. конф., Дубровицы - Быково, 25-26 октября 2007 г. - Дубровицы, 2007. - С. 161-165 .(пл 0,10/0,05).

46. Байтлесов, Е. У. Влияние сезонных факторов на образование персистентных желтых тел у коров / Е. У. Байтлесов, В. А.Титова, Ф. Н. Насибов, Е. А. Тяпугин, Г. К. Шиловский // Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных: материалы междунар. науч.-практ. конф., Дубровицы - Быково, 25-26 октября 2007 г. - Дубровицы, 2007. - С. 165-167 (пл. 0,15/0,10).

47. Титова, В. А. Маститы и репродуктивная функция коров / В. А. Титова, Ф. Н. Насибов, Е. А.Тяпугин, Е. У. Байтлесов, С. Н.Хилькевич, Г. К. Шиловский // Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных: материалы междунар. науч.-практ. конф., Дубровицы-Быково, 25-26 октября 2007 г. - Дубровицы, 2007. -

C. 326-331 (пл. 0,20/0,15).

48. Байтлесов, Е. У. Влияние электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм-диапазона на воспроизводительную функцию животных / Е. У. Байтлесов, В. С.Авдеенко, А. С. Рыхлов, М. Н. Насибов // Обновление и развитие -через интеграцию науки, образования и производства: материалы междунар. науч.-практич. конф., Уральск, 3-5 июня 2009 г. - Уральск, 2009. - С. 252-256 (пл. 0,40/0,20).

49. Байтлесов, Е. У. Изучение влияния магнитно-инфракрасно-лазерного излучения на воспроизводительную функцию животных / Е. У. Байтлесов, В. С. Авдеенко // Обновление и развитие - через интеграцию науки, образования и производства: материалы междунар. науч.-практич. конф., Уральск, 3-5 июня 2009 г. -Уральск, 2009.-С. 256-262 (пл. 0,50/0,25).

50. Байтлесов, Е. У. Применение динамической нейростимуляции (ДиаДЭНС) на инволюцию половых органов в послеродовой период. / Е. У. Байтлесов // Обновление и развитие - через интеграцию науки, образования и производства: материалы междунар. науч.-практич. конф., Уральск, 3-5 июня 2009 г. - Уральск, 2009. - С. 263-265 (пл. 0,25/0,15).

51. Байтлесов, Е.У. Ettí тукымды сиырлардын эмбриональдык шыгындарыныц жиимп жэне оны азайгу тэсшдср1/ Е.У. Байтлесов, B.C. Авдиенко//Гылым жэне бЬнм.-2010.-№4(21).-С.38-42.

ПАТЕНТЫ:

52. Патент на полезную модель UI «Аппарат для лечения электромагнитными волнами крайне высоких частот» / В. С. Авдеенко, Е. У. Байтлесов, А. С. Рыхлов, М.

Н. Насибов, А. П. Креницкий, О. А. Лукьянова, А. Н. Кулемекова. - № 50835; заявка № 2005106379. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 27.01.2006 г.

53. Патент на полезную модель III «Аппарат для воздействия электромагнитными волнами крайне высоких частот» / В. С. Авдеенко," Е. У. Байтлесов, А. С. Рыхлов, М. Н. Насибов, А. П. Креницкий, С. С. Бугрим. - № 66961; заявка № 2006135569. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 10.10.2007 г.

54. Патент на изобретение Ш «Способ стимуляции репродуктивной функции животных» /В. С. Авдеенко, Е. У. Байтлесов, А. С. Рыхлов, М. Н. Насибов, А. П. Креницкий, Р. М. Бисенгалиев. - № 2316958; заявка №2006125567. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 20.02.2008 г.

55. Патент на изобретение Ш «Способ лечения и профилактики неспецифических воспалительных заболеваний половых органов животных» / В. С. Авдеенко, Е. У. Байтлесов, А. С. Рыхлов, М. Н. Насибов, А. П. Креницкий. - № 2345802; заявка № 2007105180. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 10.02.2009 г.

56. Патент на изобретение Ш «Способ коррекции нарушений репродуктивной функции яичников животных» / В. С. Авдеенко, Е. У. Байтлесов, А. С. Рыхлов, М. Н. Насибов, А. П. Креницкий. - № 2345799; заявка № 2007107901. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 10.02.2009 г.

57. Патент на изобретение Ш «Способ повышения продуктивности у животных» / В. С. Авдеенко, Е. У. Байтлесов, А. С. Рыхлов, М. Н. Насибов, А. П. Креницкий. - № 2345801; заявка №2007107903. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 10.02.2009 г.

Подписано к печати 17.01.2011 г. Тираж 100 экз. Заказ № 263 Отпечатано в типографии «Техно-Декор» 410012, г. Саратов, ул. Московская, 160

Содержание диссертации, доктора ветеринарных наук, Байтлесов, Ербулат Упиевич

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 2. АНАЛИЗ ЛИТЕРАТУРЫ И ОБОСНОВАНИЕ

ВЫБРАННОГО НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Раздел 2.1. Регуляторные механизмы овариальной функции у животных.

Раздел 2.2. Биорегуляторы репродуктивной функции животных.

Раздел 2.3. Механизмы регуляции репродуктивной функции животных.

Раздел 2.4. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота и перспективы ее применения в скотоводстве.

Раздел 2.5. Биофизические приемы регуляции репродуктивной функции животных.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Материал и условия проведения опытов

3.2. Методика- исследований гормональной регуляции половой функции животных

3.3. Методика исследований по трансплантации эмбрионов.

3.4. Методика изучения влияния биофизических средств на воспроизводительную функцию животных.:.

ГЛАВА 4: РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Раздел 4.1. Биотехнологические приемы управления воспроизвдства маточного стада в мясном скотоводстве.

Раздел 4.2. Применение метода трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве.

4.2.1.Характеристика жизнеспособности эмбрионов в зависимости от физиологического статуса коров

4.2.2. Влияние скорости охлаждения и оттаивания на жизнеспособность и приживляемость эмбрионов

4.2.3. Биологические факторы, влияющие на жизнеспособность эмбрионов при замораживании и оттаивании

4.2.4 Результаты нехирургической пересадки эмбрионов с целью получения двойнёвых отелов

Раздел 4.3. Изучение влияния электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм-диапазона на воспроизводительную функцию животных.

4.3.1. Влияние ЭМИ КВЧ воздействия аппаратом «Орбита» на организм животных

4.3.2. Влияние электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм-диапазона на поведение эритроцитарных мембран и морфологический состав крови

4.3.3. Влияние ЭМИ КВЧ воздействия - аппаратом «Орбита» на метаболический профиль крови

4.3.4. Уровень половых гормонов при ЭМИ КВЧ воздействии аппаратом «Орбита.».;.

4.3.5. Изучение влияния электромагнитного излучения на становление репродуктивной функции коров в послеродовой период

413-6. Сравнительное изучение оплодотворяемости коров с использованием электромагнитного воздействия аппаратом; «Орбита» на пояснично-крестцовую рефлексогенную зону при искусственном осеменении коров . 174 Раздел 4.4. Изучение влияния магнитно-инфракрасно-лазерного излучения на; воспроизводительную функцию животных

4.4.1. Влияние низкоинтенсивного магнитно-инфрокрасно-лазерного воздейтсвия аппаратом «РИКТА MB» на организм животных.

4.4.2. Воздействие низкоинтенсивного магнитно-инфрокрасно-лазерного излучения на морфобиохимический состав крови

4.4.3. Уровень половых гормонов при воздействии низкоинтенсивным магнитно-инфрокрасно-лазерным излучением.

4.4.4. Сравнительное изучение оплодотворяемости коров с использованием низкоинтенсивного магнитно-инфрокрасно-лазерного излучения при искусственном осеменении коров

Раздел 4.5. Изучение влияния динамической электронейростимуляции на воспроизводительную функцию животных

4.5.1. Влияние динамической электронейростимуляции аппаратом «ЗооДиаДЭНС» на воспроизводительную функцию животных.

4.5.2. Влияние динамической электронейростимуляции на морфобиохимический состав крови

4.5.3. Уровень половых гормонов при воздействии динамической электронейростимуляции

4.5.4. Изучение влияния динамической электронейростимуляции на становление репродуктивной функции коров в послеродовой период

4.5.5. Применение динамической электронейростимуляции при различных способах осеменения коров

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Биотехнологические методы интенсификации воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве"

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ 1.1 Актуальность темы. В программах биотехнологической коррекции репродуктивной: функции у животных выделяют три' физиологических периода: дородовой, послеродовой, раздоя и осеменения;

В дородовый период биотехнический контроль направлен; на нормализацию иммунного статуса и метаболического профиля; в послеродовой период - на ускорение подготовки органов репродуктивной системы к очередному циклу воспроизведения путем инициации циклической активности яичников. В период раздоя и осеменения биотехнический контроль играет роль устранителя дисфункции яичников, коррекции сроков осеменения и повышениям оплодотворяемости. Эти мероприятия базируются на систематическом клинико-гинекологическом обследовании «проблемных» коров; для обнаружения патологии и идентификации дисфункционального состояния яичников, что обеспечивает, целесообразное применение биотехнических средств.

Биотехнология воспроизводства;, является? эффективным инструментом селекции. Она,охватывает все этапы воспроизводства животных: : от отёла, до отёла, включая в себя подготовку коров к осеменению; и отёлу, учёт приплода, стимуляцию половой функции^ процесс осеменения; пересадки эмбрионов^ охрану стельности, гинекологическое обследование, борьбу с бесплодием и другие [5, 164].

Реализация данной программы' на-; основе имеющегося уровня знаний прогнозирует достижение оплодотворяемости 80% коров в первые 60 дней после отела, равномерное распределение отелов в течение года, получение не менее 90 телят на 100 голов коров, снижение в 3.5 раз,выбраковки из-за бесплодия [8,46, 167]:, Тем не менее, реализация достижений в области биотехнологии воспроизводства встречает затруднение не только в условиях практического скотоводства, но и на предприятиях сферы научно-исследовательских институтов [47,, 165]. Широко известные методы гормональной регуляции половой функции зачастую ориентированы на проведение обработок животных без учета функционального исходного состояния организма, определяемого конкретными факторами окружающей среды. Ряд исследователей находят такой подход малоэффективным. Необходимо принимать во внимание, что многие схемы и режимы применения биотехнических регуляторов половой функции разработаны в странах с высокоразвитым скотоводством и адаптированы для применения на фермах предприятий европейского уровня. Доказывают,, что механический перенос их в условия хозяйств Российской Федерации не всегда может быть оправдан [48,49].

Мощным средством интенсификации воспроизводства служит метод трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, основным назначением которого является« генетическое улучшение животных. Трансплантация эмбрионов используется для интенсивного получения потомства от ценных в генетическом отношении самок. Большие преимущества метод даёт для импорта и экспорта сельскохозяйственных животных. Трансплантация эмбрионов, в; ряде случаев, оказывается более эффективной, чем перевозка спермы. Эмбрионы можно хранить при определённых условиях in vitro от 4 до 48 часов. Разработанный метод криоконсервации эмбрионов даёт возможность продлить «хранение генов» практически неограниченно, что обеспечивает реализацию долгосрочных генетических программ благодаря воспроизводству нужного генофонда в любое время. Получение двоен от каждой самки, с помощью метода трансплантации, открывает широкие возможности для увеличения продуктивности и генетических исследований.

Выявление нежелательных рецессивных генов при трансплантации становится более доступным, и не будет требовать большого времени. Всё это приведёт к возможности элиминации нежелательных генов из популяции сельскохозяйственных животных. На стадии внедрения в практику такие важные приёмы, как определение пола эмбрионов до их трансплантации, т.е. на стадии морулы на основе хромосомного анализа и. выявления H-Y антигена специфическими' антителами.

Разрабатываются методы культивирования ооцитов вне организма и их последующего оплодотворения in vitro в яйцеводе других самок того же самого или другого вида. Особые возможности открываются для получения клонов животных методами генной инженерии и Т-ядер.

Таким образом, эти и другие известные достижения в области трансплантации эмбрионов уже сейчас превзошли ожидаемые эффекты, как в теоретическом, так и в практическом смысле [50].

Направленная регуляция генеративной функции яичников, в т.ч. и как элемент метода трансплантации, на основе применения гормональных средств не дает на практике прогнозируемой эффективности из-за широкого распространения у коров в послеродовой период и период лактации эндометритов. До 70. 80% коров переболевают послеродовыми эндометритами [52]. В этой связи, применение средств локального воздействия на матку, рассматривают как неотъемлемый элемент биотехнических мероприятий.

Широко практикуемые в ветеринарии методики применения антимикробных препаратов, в т.ч. антибиотиков, для проведения биотехнических мероприятий не всегда приемлемы, например, утероинфузии растворов антибиотиков и других антимикробных препаратов в ранний послеродовой* период. Применение большинства антимикробных препаратов на лактирующих коровах влечет за собой экологическую нагрузку на животноводческую пищевую продукцию. Антибиотикотерапия и химиотерапия, используемые при традиционном лечении, экологически небезопасны. При этом ограничивается использование мяса и молока в период лечения и после него. Присутствие ингибиторов в молоке приводит к большим материальным потерям на предприятиях перерабатывающей промышленности вследствие ухудшения его качества, выбраковки сборного молока, потерь при производстве кисломолочной продукции (сыров, творога и т.д.), к снижению сортности молока и, продуктов его переработки. Если сложить перечисленные убытки и ущерб от временного недополучения продукции, расходов на медикаментозные препараты при традиционных методах лечения, то получается значительная сумма потерь [53]. Это диктует необходимость поиска новых экологически безопасных средств [54] .Приемлемое решение этих проблем в животноводстве — применение низкоэнергетического магнитно-инфракрасно-лазерного, электромагнитного излучения и динамической нейроэлектростимуляции. В 90-х годах лазерная техника стала применяться в животноводстве. Существует множество модификаций лазерной аппаратуры, как отечественного, так и зарубежного производства, начиная от терапевтических лазеров для облучения биологически активных точек на теле больных, до хирургических аппаратов, с помощью которых можно коагулировать ткани.

Лазерные терапевтические комплексы «Зорька» и электролазер «Ключ», разработанные в НПО «Петролазер», а также аппараты для проведения квантовой профилактики и терапии, производимые другими фирмами (РИКТА-МВ), (Орбита), (ЗооДиаДЭНС) открывают новые перспективы [55].

Исследования последних лет показали, что при' современных технологиях эксплуатации коров, при« значительно возросшей'их генетически запрограммированной молочной продуктивности, происходит увеличение случаев эмбриональных потерь. Установлено, что от 7,0 до 38,0% потерь стельностей происходит между 28.98-и днями эмбрионального развития [58,59,60,61,62,63].

Вместе с тем, наибольшее число эмбриональных потерь происходит спустя 6.7 дней после осеменения. В этой связи большой объём исследований посвящают изучению причин ранней эмбриональной смертности, происходящей, перед периодом материнского распознавания беременности и несколько меньше современных работ рассматривают, проблему поздней эмбриональной и ранней фетальной гибели. Во многих исследованиях акцентировали внимание на эмбриональной смертности у повторно осеменённых коров; исследованы и описаны потенциальные факторы и возможные причины ранней эмбриональной смертности у субфертильных мясных коров. Целый ряд учёных приходит к выводу, что для выполнения программ по воспроизводству маточного стада главное внимание должно быть сфокусировано на решении задач по проблемам ранней эмбриональной смертности [64,65]. В этом отношении ультрасонография, как новый метод исследований заслуживает самого пристального внимания [66].

Известно, что продуктивные качества животного, в т.ч. и признаки воспроизводительной способности являются результатом взаимодействия генотипа и условий среды. Поскольку наследуется не готовый признак, а уровень реагирования, то проявление хозяйственно-полезных признаков обусловливается в значительной мере окружающей средой, в которой выращивают и содержат животных [67]. Это обстоятельство определяет основополагающий методологический принцип физиологии - неразрывное единство организма и внешней среды.

Следовательно, для повышения! эффективности биотехнологических мероприятий по регуляции репродуктивной функции необходим постоянный учёт состояния воспроизводительной активности маточного стада*.

Установлено, что на каждый период развития отрасли мясного скотоводства, репродуктивный статус и характер причин его снижения не одинаковы. Исследования в этом направлении всегда актуальны и являются первоочередными, т.к. в противном случае разработка и планирование концептуально направленной и физиологически обоснованной работы по оптимизации репродуктивной активности маточного стада не представляется возможной [68]. Для мясного скотоводства являются актуальными исследования, которые направлены одновременно, как на совершенствование норм кормления, содержания и эксплуатации коров, так и на совершенствование воздействий биологически активными веществами, гормональными регуляторами и биофизическими методами воздействия с целью профилактики и нормализации нарушений обменных процессов и репродуктивной функции.

Причём, особую актуальность приобретают вопросы разработки и производства новых комплексных препаратов, биотехнических средств и методик их применения в послеродовой период при параллельном проведении исследований эндокринологии нормы и патологии воспроизводительного статуса, а также изучение влияния факторов внешней среды на получаемые в ходе исследований показатели.

Следует констатировать, что до настоящего времени, несмотря на многочисленные исследования, наука не дает всеобъемлющих ответов на вопросы о нарушениях репродуктивной функции. Лишь в комплексе с исследованиями этих факторов возможно основательное изучение механизмов такого сложного биологического явления как бесплодие, разработка методов, его устранения, их физиологическое обоснование и практическая реализация1 полученных знаний через повышение эффективности традиционного метода воспроизводства — искусственного осеменения и нового биотехнического метода — трансплантации эмбрионов.

Дальнейшее усовершенствование существующих и разработка новых теоретических и практических подходов к решению < проблемы интенсификации воспроизводства животных, применения высокоэффективных биологически активных препаратов и биотехнических методов позволит достичь необходимых результатов по восстановлению количества и качественного состава маточного стада мясных коров. 1.2 Цель и задачи исследования. Изучить эндокринные механизмы регуляции полового цикла и отработать схемы применения гормональных препаратов для стимуляции фолликулогенеза, трансплантации эмбрионов, а также разработать биотехнические методы повышения воспроизводства маточного стада крупного рогатого скота в мясном скотоводстве.

При этом были поставлены и решены следующие задачи:

- изучить эндокринные аспекты, лежащие в основе биотехнических методов воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве;

- оценить, с учётом этиологии1 и патогенеза, эффективность методов нормализации фолликулогенеза при нарушениях функции яичников у коров;

-определить биотехнологические параметры получения, криоконсервации, хранения, размораживания и трансплантации эмбрионов у мясных коров; изучить эффективность методов применения биофизических воздействий для нормализации процессов в эндометрии при проведении биотехнологических мероприятий;

- определить влияние низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно -лазерного и электромагнитного излучения, динамической электронейростимуляции на физиологический, иммунобиологический) и гормональный статус организма коров;

- изучить возможности и целесообразность направленной стимуляции возобновления овариальной цикличности у коров в послеотёльный период с использованием низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного и электромагнитного излучения и динамической электронейростимуляции. 1

1.3. Научная новизна:

- дана характеристика воспроизводительного1 статуса поголовья мясных коров ряда сельхозпредприятий в условиях различных регионов РФ, а также Республики Казахстан;

- определены эндокринные профили у коров при различном функциональном состоянии яичников на протяжении спонтанного и индуцированного полового цикла, а так же эндокринный статус при гипофункции яичников;

- доказаны с применением ультрасонографии морфо-функциональные предпосылки, определяющие эффективность воздействий гормональными препаратами при использовании биотехнических методов воспроизводства проблемных коров на основе детальной дифференциации нарушений половой функции;

- определена^ методическая основа устранения различных форм нарушений фолликулогенеза и; исследованы биотехнологические параметры; получения, криоконсервации, хранения;, размораживания и трансплантации эмбрионов мясных коров; - обоснована необходимость комплексного подхода к методам управления репродуктивной функцией коров при её нарушениях путём одновременного воздействия гормональными регуляторами' и методами квантовых излучений (аппараты «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС») для интенсификации воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве;

- выявлены параметры; биохимических показателей' крови после применения-, электромагнитного излучения;; крайне высоких частот мм-диапазона, магнитно-инфракрасно-лазерного излучения! и динамической электронейростимуляции которые подтверждают безопасность и; позитивные биологические: свойства квантовых методов и, таким образом, физиологически обосновано его; применение как элемента биотехнологии регуляции репродуктивной функции.

1.4. Теоретическая ^практическая значимость работы:

- определены факторы, лежащие в основе эффективного применения биорегуляторов с целью интенсификации репродуктивной активности мясных коров;

- выявлены параметры получения, криоконсервации и трансплантации эмбрионов у мясных коров в усовиях резко-континетального климата Западного региона Республики Казахстан;

- обоснована необходимость использования электромагнитного излучения крайне' высоких частот мм-диапазона, низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного излучения, динамической электронейростимуляции для коррекции репродуктивной функции;., как элемента биотехнологии воспроизводства, в т.ч. и при активизации овариальнойь функции* в послеродовой период, что значительно повышает эффективность биотехнологии воспроизводства;

- внедрены методы и пути снижения эмбриональных потерь у мясного* скота.

Внедрение в производство полученных материалов исследований снижают стоимость и значительно повышают экономическую эффективность биотехнических мероприятий при ведении мясного скотоводства Республики Казахстан. Достигаемое при этом снижение уровня выбраковки высокопродуктивных коров вследствие потери плодовитости и интенсификация репродуктивной активности, в свою очередь, значительно ускоряют накопление и реализацию ценного селекционно-генетического потенциала коров мясных пород.

Материалы диссертации нашли применение при чтении лекций и проведении практических занятий в ФГОУ ВПО «Саратовский ГА У им. Н.И. Вавилова», РГП «Западно-Казахстанский аграрно-технический университет им. Жангир хана», ЗКИТУ «Западно-Казахстанский инженерно?. -гуманитарный университет».

1.5. Апробация и реализация результатов исследований; Результаты исследований, отраженные в>;диссертации внедрены в племенных хозяйствах Западно-Казахстанской области (ТОО Племзавод «Чапаевский», ТОО «Изденис», К/Х «Шунайбекова»), а также племзаводе «Сычевский», КФХ «Новоузенский» Российской;Федерации.

Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на: ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов РГП «Западно-Казахстанский аграрно-технический университет им. Жангир хана» (г. Уральск, 1991-2009 гг.) ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» (г. Саратов, 2004-2009 гг.); Российской научно-практической конференции: «Современные проблемы ветеринарной медицины, мелких домашних животных» (Саратов, 2007; 2008 гг.); межрегиональной научной конференции молодых ученых и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа (Саратов, 2005); XIII Московском международном ветеринарном конгрессе (Москва, 2005-2009 гг.).

1.6. Публикации. По теме диссертации опубликовано 57 работ, а также 6 патентов, в которых отражены основные научные положения. Общий объем публикаций 21,8 печатных листа, из которых 16,3 п.л. принадлежат лично соискателю, в том числе 14 опубликованы в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

F ЛАВА 2. АНАЛИЗ ЛИТЕРАТУРЫ И ОБОСНОВАНИЕ ВЫБРАННОГО НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Раздел 2.1. Регуляторные механизмы овариальной функции у животных

Фолликуло-, овогенетические и эндокринные процессы в яичниках на протяжении половой зрелости самок претерпевают изменения, что находит проявление в половом цикле [4, 12, 38, 166, 211]. Начало полового цикла соответствует дню охоты, обозначаемому нулевым днем цикла. На протяжении цикла яичник имеет последовательный функциональный ритм комплекса явлений: волнообразное развитие и рост популяции антральных фолликулов — созревание доминирующего фолликула последней волны роста популяции — овуляция — образование и развитие желтого тела [73, 92, 164, 182, 119]. В процессе роста фолликулы популяции постоянно изменяют чувствительность к гонадотропным гормонам. Степень чувствительности i каждого фолликула определяется вариациями концентраций гонадотропных рецепторов в клетках их гранулезы [66, 101. 146, 185]. В свою' очередь, концентрация прогестерона, 17-Р-эстрадиола и тестостерона в фолликулярной жидкости, антральных фолликулов зависит от их размеров, приходящихся на каждый конкретный период полового•> цикла [32, 92, 108, 155].

Параллельно этим явлениям в эндометрии функционально и морфологически чередуются пролиферативная и секреторная фазы. При учете поведения самок, как реакции на комплекс внутриовариальных процессов, выделяют эструс, в середине которого происходит овуляция, эструсу предшествует окончание проэструса [77, 95, 146, 189]. После завершения овуляторного процесса и окончания эструса следует метэструс и начало диэструса, продолжительность которого соответствует периоду функциональной активности жёлтого тела [6, 7, 8, 71, 197].

Рост популяции антральных фолликулов на протяжении полового цикла происходит волнообразно. Возможны одна, две, три, либо четыре волны роста популяции фолликулов, каждая из которых сопровождается развитием доминантного фолликула. г 2 со о 0

-ео. и

1 О.

Статическая фаза

Овуляция

• •

Фаза роста • •

• •

• V

1А О о о о

Фаза регрессии о * о „о о о" о о о ° ° о о ° 00 о о о о о О

10

12

14

16

18 20 О

• Первая волна О Вторая волна

Половой ЦИКЛ, ДН.

Рис. 1. Развитие доминантного фолликула при двухволновом росте популяции фолликулов (по О. ОтЛег е1 а1., 12)

У коров с двухволновым ростом популяции продолжительность полового цикла равна в среднем 20 дням. Созревание фолликулов первой волны начинается в день 0 (день овуляции), второй - на 10-й день цикла (рис.1).

Первые клинически выраженные признаки регрессии желтого тела наблюдают на 8. 12 день цикла, в то время как регрессия продолжается до 16,5 дней [46, 69, 91, 153, 197]. У коров с трехволновым ростом популяции продолжительность полового цикла равна в среднем 23 дня, созревание фолликулов первой волны начинается на 0,5 день, второй и третьей — на 9-й и 16-й дни цикла, соответственно. У коров при трехволновом росте популяции первые признаки регрессии желтого тела можно наблюдать на 10.14 день, а в целом развитие и регрессия могут продолжаться до 19,2 дней. Считают, что возникновение третьей волны роста и созревания фолликулов связано с увеличенной продолжительностью лютеальной фазы, причем параллельно лютеолизису доминантный фолликул трансформируется в овуляторный фолликул [11, 197, 208, 209]. Морфо-функциональные закономерности при одно- и четырёхволновом росте малоизучены. Фолликулярный рост последней волны, завершающейся овуляцией фолликула, отмечается на поздней лютеальной фазе цикла. Доминантные фолликулы предшествующих волн на соответствующих стадиях роста подвергаются регрессии и атрезии [8, 139, 181,204].

Растущие под комбинированным воздействием ФСГ и ЛГ фолликулы начинают выделять эстрогены, уровень концентрации которых достигает максимума незадолго до овуляции, непосредственно стимулируемой пиковой концентрацией ЛГ. Временные и количественные параметры пика ЛГ являются главным явлением регуляции функциональной деятельности яичника, т.к. в случае их отклонения от нормы происходит нарушение овуляторного процесса в виде преждевременной или поздней овуляции либо ее отсутствием с последующим перерождением неовулировавшего фолликула. При преждевременной или поздней овуляции происходит выход либо незрелой, либо персистентной яйцеклетки, что исключает возможность оплодотворения и развития зиготы [25, 67, 86,166].

Данные о сроках наступления пубертаты и точно «отрегулированного» чередования половых циклов у телок противоречивы. При этом определенное значение имеет порода животных. У европейских пород скота в возрасте 18.20 и более мес. до 30-40% телок могут оставаться неполовозрелыми, хотя у части телок половые циклы с правильным чередованием устанавливаются с 9. 10 месячного возраста [45, 81, 176, 159]. Тем не менее, принято считать, что средний возраст наступления пубертаты у телок равен 300 дням при достижении живой массы 300 кг. В этих случаях фолликулярную активность регистрируют за 20.40 дней до начала первой овуляции, причем разницы между длительностью первого и второго цикла не наблюдают [75, 161, 195].

Кратко изложенные в общих чертах сведения о механизме развития и временных параметрах полового цикла и его отдельных стадий имеют исключительное значение для технологий его направленной регуляции. Это обусловлено тем, что целесообразная эффективность воздействий гормональными препаратами возможна только на определенных стадиях цикла. При этом данные о продолжительности полового цикла коров весьма противоречивы. Данные отечественной и зарубежной литературы, приведённые в монографии B.C. Шипилова [206] показывают, что половой цикл у коров и телок длится в пределах 14.28 дней. По данным ряда зарубежных специалистов [314, 321, 326]. диапазон колебаний длительности полового цикла - 16.28 дней длится у 5% коров 16 и менее дней, у 60% -17.28 и у 35% — 29 и более дней; [107] утверждает, что у 7,6% он продолжается 27 дней и менее, у 26% - 8-24 дня. У 30% коров половой цикл либо короче, либо продолжительнее диапазона 17.25 дней [58, 148, 183]. Кроме того, для конкретного животного продолжительность цикла -величина непостоянная и может широко- варьировать. Минимальная вариабельность характерна для возраста коровы между 3.5 лактациями в-период оптимума воспроизводительного статуса; когда воспроизводительная функция наиболее «точно отрегулирована». Увеличение степени вариабельности наиболее выражено у молодых и старых животных [156, 200].

Таким образом, фолликулогенез - это постоянно продолжающийся процесс на протяжении продуктивной жизни коровы, который происходит непрерывно до тех пор, пока не истощится запас примордиальных фолликулов. У крупного рогатого скота менее чем 1,0% из примерно 100000 фолликулов, представленных на момент половозрелости, развиваются до полного созревания и овуляции. На протяжении полового цикла в большинстве случаев отмечаются две или три волны роста фолликулов.

Фолликулярная волна начинается с выделения группы (2.6 шт.) антральных фолликулов диаметром 2.5 мм. В течение нескольких последующих дней один из фолликулов этой группы более всех других ускоряет свой рост и становится доминантным. Остальные фолликулы подвергаются атрезии. При наличии достаточного количества рецепторов в клетках теки доминантного фолликула последней волны роста популяции, для восприятия повышенных концентраций ЛГ происходит овуляция. Фолликул, ещё не достигший более 20 мм в диаметре и не имеющий достаточного количества рецепторов для восприятия ЛГ, подвергается атрезии на фоне повышенных концентраций ФСГ и появления новой фолликулярной волны.

Если доминантный фолликул, достигший более 20 мм в диаметре не овулирует, а продолжает расти, то происходит его трансформация в фолликулярную кисту. В среднем, это явление происходит в 10. 15% случаев. Иногда размер такого фолликула может не превышать 20 мм.

Данные относительно вариабельности продолжительности фолликулярной и лютеальной фаз как у коров, так и телок, указывают на более стабильный характер последней. Стабильность продолжительности лютеальной фазы связывают с ее важнейшей ролью в подготовке организма к предстоящей стельности [98,138,187].

Однако на механизм регуляции стабильной продолжительности лютеальной фазы, которым можно было бы полностью объяснить эволюцию желтого тела, единой точки зрения нет. Регуляция, внутриовариальных процессов в значительной степени! автономна, и, тем не менее, нормальная функциональная- деятельность г яичника невозможна без определенного влияния гонадотропных гормонов из-за необходимой степени гипофизарной поддержки функционирования желтого тела. Общепризнанно, что для реализации лютеотропной функции необходимо обязательное присутствие ЛГ, тогда как неясно, способен ли, так называемый, чистый ЛГ играть лютеотропную роль. Установлено, что в эксперименте для этой функции необходимо1 его постоянное введение в составе с пролонгатором (адъювант Фрейда) [191,202].

Цикличность функции яичника регулируется выделением гонад отропинов из гипофиза, деятельность которого осуществляется высшими нервными стимулами в рамках системы положительной обратной связи с гипоталамусом (рис.2).

Основную роль здесь играет реакция гипофиза на гонадолиберин через посредство соотношения концентраций циркулирующих в крови стероидов, что рассматривают как алгебраическую сумму положительных и отрицательных обратных связей, с одной стороны, прогестагенов, с другой -эстрогенов [207]. положительная обратная связь - отрицательная обратная связь

Рис. 2. Механизм «плюс-минус» взаимодействия регуляции полового цикла коров с

На протяжении цикла изменения?функционального состояния яичников отражаются определенными изменениями гормонального статуса. Определяя функциональное' состояние яичников по гормональному статусу, можно эффективно управлять процессами'воспроизведения [207, 221].

В соответствующие периоды цикла имеют место отчетливые различия в изменениях соотношений концентраций ФСГ, ЛГ, прогестерона и эстрадиола. Эта разница может служить оценкой таких важных процессов, как лютеолизис, развитие, созревание и овуляция фолликула, образование, развитие и регрессия желтого тела. Учитывая, что воздействие гормональными препаратами многократно количественно и качественно изменяет спонтанно протекающий процесс [299, 300], для гормональных обработок следует использовать животных, у которых половой процесс нормально функционирует [301].

Ключевым моментом, определяющим успех биотехнических мероприятий, является точная- характеристика функционального* состояния желтого тела. Морфологическим критерием желтого, тела, предполагающим возможность результативного начала«, обработки' с целью- вызвать охоту, является5его размер ( 1,0 х 1,0 см) в>середине полового цикла, определяемый. на1, практике методом ректальной* пальпации*. Однако! оценка воспроизводительного статуса коров- по морфологическому состоянию желтого тела недостаточно точна. Правильный' диагноз проэструса, эструса, метэструса и диэструса составляет 54,2; 60,0; 71,4 и 89,8%, соответственно; и в целом после одной ректальной пальпации не превышает 80% [302, 314].

В этом отношении достаточно точен метод анализа изменений концентрации прогестерона в крови на протяжении полового цикла, который в значительной степени позволяет корректировать ошибки, допускаемые при ректальной диагностике. Функциональное состояние яичников у коров после отела оценивают по профилю прогестерона, который определяют, начиная с Ю дня после отела до осеменения с 5-дневными интервалами [139; 158].

Находят прямую связь между концентрацией прогестерона в крови и способностью коров положительно реагировать на гормональные обработки. Установлена взаимосвязь между концентрацией прогестерона, приходящейся на день начала обработок, проявлением индуцированной охоты и оплодотворяемостью после осеменения [303].

Таким образом, овуляция не просто центральное явление в периодической функциональной деятельности, а играет центральную роль в рамках полового цикла в качестве механизма, дающего пригодную для оплодотворения яйцеклетку и обусловливающего гормональную ситуацию, соответствующую плодотворному осеменению и подготавливающую организм к беременности.

Рис. 3. Фазы морфо-функциональных изменений репродуктивной функции

Учитывая непременное выполнение условия правильного понимания механизмов естественной регуляции репродуктивной функции, для успеха при её направленной корректировке, а также при постановке экспериментов и анализе результатов, получаемых в ходе их проведения, следует учитывать данные литературы поэтому вопросу [292].

Данные относительно вариабельности продолжительности фолликулярной и лютеальной фаз, как у коров, так и телок, указывают на более стабильный характер последней.

Временные и количественные параметры ЛГ являются ключевым явлением регуляции функциональной деятельности яичника, следовательно, их изменение за пределы физиологической нормы исключает возможность нормальной оплодотворяемости яйцеклетки и развития зиготы [215, 316].

Приведенные обобщающие соображения по овогенетическому циклу приводят к выводу, что эффективность гормональной регуляции,, как элемента технологии, нормализации репродуктивной активности, в. первую очередь,, будет зависеть от генетической предрасположенности, конкретное выражение которой, проявляется в биологической-полноценности и размерах популяций антральных фолликулов на протяжении цикла.

Следует учитывать, что эти размеры колеблются как у разных животных, так, и на,протяжении жизни у одного и того же животного. Это и другие положения с учетом- того, что в комплекс обработок с целью регуляции цикла включают препараты гонадолиберина, блокирующего возможные негативные изменения параметров пика ЛГ, позволяют считать современные дозировки и режимы применения биорегуляторов вполне приемлемыми для направленного корректирования воспроизводительной функции.

Раздел 2.2. Биорегуляторы репродуктивной функции животных

Реализация теории М.М. Завадовского [106, 107, 108] в практике животноводства стала возможной благодаря трём наиболее важным обстоятельствам. Первое - американскими исследователями в начале 30-х гг. прошлого столетия было обнаружено наличие в сыворотке, полученной из крови жеребых кобыл, гонадотропинов, способных регулировать рост, созревание и овуляцию фолликулов [238]; второе - открытие в этот же период простагландинов [222] и третье - открытие [311] рилизинг-факторов. В. сравнительно короткий исторический период было освоено промышленное производство и выпуск гонадотропных препаратов, синтетических простагландинов и рилизинг-факторов. С тех пор научными коллективами проведены многочисленные исследования биорегуляторов воспроизводства и накоплен большой объем литературы по регуляции репродуктивной функции крупного рогатого скота на основе их применения. Хотя спектр мнений о степени эффективности биорегуляторов довольно широк и противоречив [47], многолетней практикой подтверждена их безвредность [141].

Известно несколько типов гонадотропных препаратов, из которых наиболее широкое применение в практике скотоводства нашли 3 типа гонадотропинов: сывороточные, гипофизарные и плацентарные. В перечне гонадотропинов (ГСЖК, ФСГ, ХГЧ), используемых для стимуляции фолликулярного развития с целью индуцирования охоты и овуляции, ГСЖК является наиболее популярным [246].

ГСЖК, или гонадотропин из сыворотки крови- жеребых кобыл со сроком жеребости 45-100 дней, выпускают в двух формах: нативная неочищенная сыворотка жеребых кобыл (СЖК) и- очищенный лиофилизированный' препарат. При сравнительной оценке эффективности двух рассматриваемых гонадотропных препаратов, особо отмечают высокую вариабельность реакции яичников на введение нативного препарата СЖК и определенную1 вероятность возникновения анафилактической реакции. Более стабильные результаты получают при- использовании стандартных препаратов СЖК высокой степени очистки [190, 210].

Большая изменчивость реакции яичников коров на сывороточные гонадотропины связана с различной степенью зрелости фолликулов в популяции, приходящейся на момент проведения обработки и необычным гормональным фоном из-за высокой продолжительности срока полураспада препарата в организме обрабатываемых животных. Поэтому регуляция половой функции сывороточными гонадотропинами может привести к нежелательным последствиям [99].

Применяемые в биотехнологии воспроизводства гипофизарные гонадотропины получают из гипофиза свиней. В отличие от сывороточных, они* обладают минимальным побочным действием и обеспечивают более высокую результативность в смысле эффективности [202]. Наиболее широко в отечественной практике используют следующие препараты, различающиеся по соотношению ФСГ к ЛГ: гроффолон, фоллитропин, ФСГ-п и ФСГ-супер [138].

Считают, что колеблющаяся норма соотношения ФСГ/ЛГ в различных гонадотропных препаратах является одной из причин определённой, вариабельности их эффективности. Колебания соотношения в импортных препаратах составляют от 4,4:1,0 до 0,2:1.

Для отечественных гипофизарных гонадотропинов - фоллитропин и гроффолон - характерно соотношение 2-1:1. Редко отмечается5 соотношение ФСГ/ЛГ—1000:1, например; у препарата ФСГ-супер, что связывают с очень высокой степенью очистки [195]. ?

Этот фактор лимитирует использование биотехнически^ методов не только в практическом, но и в экспериментально-теоретическом отношении, так как «расширяет пределы изменчивости высоко ■ вариабельной системы». В ряде публикаций сообщают, что высокое содержание ЛГ в гипофизарных гонадотропинах обусловливает неудовлетворительный овариальный ответ [76, 197]. Доказывают негативное влияние высокого содержания ЛГ в гонадотропных препаратах на процесс фолликулогенеза, что, в конечном счёте, приводит к преждевременным овуляциям [76, 209], нарушению цитоплазматического и ядерного созревания ооцитов [195,196] и преждевременную лютеинизацию клеток гранул ёзы [200]. Инициация перечисленных негативных процессов происходит в результате неадекватных изменений параметров пика ЛГ эндогенного происхождения [68, 69]. Все эти сведения дают основание предполагать, что высоко очищенные препараты с минимальным содержанием ЛГ будут наиболее эффективны [155]. Данное предположение подтверждают опыты, проводимые на лабораторных животных, в которых высокоочищенные гонадотропные препараты достаточно эффективно индуцировали либо moho-, либо суперовуляторный ответ, причём повышение дозы коррелировало с повышением нормы суперовуляции [146]. И в то же время другие опыты не подтвердили негативного влияния повышенных содержаний ЛГ в гонадотропине на овуляторный ответ, как у лабораторных животных, так и у коров [208, 211].

Вариабельность результатов, имеющую место в ряде случаев при работе с гипофизарными гонадотропинами, объясняют изменением эндогенного гормонального профиля, в результате которого возможен преждевременный или запоздалый пик лютеонизирующего гормона при общей секреторной недостаточности. Это приводит к задержке по времени овуляции. В силу этого при одновременно высокой концентрации эстрадиола создаются неблагоприятные условия для оплодотворения яйцеклеток [166]. Однако данную ситуацию компенсируют путем введения в режимы обработок гонадолиберинов, ЛГ либо ХГЧ' [197].

Хориогонический гонадотропин человека (ХГЧ) применяют в практике скотоводства в.виде следующих препаратов: гонадотропин хориогонический, овогест, хорулон, хориогонин.

В опытах по регуляции половой функции с введением хориогонического гонадотропина выраженного лютеолитического действия не обнаружили, в то время как твердо установили его ЛГ-подобное действие. Хорионический гонадотропин показан при кистах яичников, ановуляторных циклах, гипофункции яичников. В целом же разноречивые сообщения о результатах применения ХГЧ не позволяют до сегодняшнего дня дать четкой оценки эффективности всех предлагаемых схем обработок [202], что определяет необходимость проведения испытаний.

Простагландины были открыты в 1930 году [73] в результате обнаружения свойства семенной жидкости человека расслаблять или сокращать миометрий в зависимости, от стадии полового цикла и названы так в результате предположения, что местом их образования является простата. Затем было уточнено и доказано, что местом образования простагландина, содержащегося в сперме, является пузырьковидная железа. В 1937 году простагландины впервые выделили из семенной жидкости в чистом виде и установили их структуру [38, 39, 40]. После химического синтеза в 1966 году и выяснения физиологической роли - вызывать лютеолизис, началось углубленное и интенсивное изучение механизма их действия и возможностей применения в биологии. Оказалось, что простагландины синтезируются в клеточных мембранах почти всех органов и тканей в моменты физиологической потребности и имеют очень короткий период полураспада. По химической структуре это ненасыщенные жирные карбоновые кислоты с 20 атомами углерода, в основе которых лежит протопоидная кислота с циклопентановым ядром и двумя боковыми цепями.

В настоящее время из различных тканей организма человека и животных выделены 14 соединений, относящихся к простагландинам, объединённым в 6 классов и, согласно интернациональной номенклатуре, обозначаемых буквами латинского алфавита. Наиболее распространёнными» являются А, В; Е, Б, которые различают по строению циклопентанового ядра. Классы, в свою очередь, различают по числу связей в боковых цепях и обозначают цифрами - 1, 2, 3, а по конфигурации 9-й гидроксильной группы—а и (3.

Известно, что к 15. 17 дню полового цикла коров и тёлок в клеточных мембранах эндометральных желёз идёт интенсивное образование маточного простагландина преимущественно из арахидоновой и линолиевой кислот. После накопления до определённой степени в эндометрии, простагландин диффундирует в маточную вену, яичниковую артерию и, таким образом, благодаря локальной гуморальной связи, достигает яичника и жёлтого тела. Кроме того, доказана возможность противоточного переноса простагландина из венозных и лимфатических сосудов* в маточную артерию [74, 75, 77].

Считают, что простагландин воздействует на вазоконстрикторы артерий яичников, нарушает трофику лютеальной ткани. Кроме того, он оказывает непосредственное действие на лютеоциты - крупные (гранулёза) и мелкие (тека). Последние претерпевают старение и дегенерацию, происходит снижение числа митозов, увеличивается число клеток с пикнотическими ядрами, происходит накопление большого числа липидных капель в цитоплазме, усиливается рыхлость и васкуляризация соединительной ткани. Дегенеративные изменения отмечают и на ультраструктурном уровне.

Эстрадиол усиливает дегенеративные процессы. В итоге происходит окончательное расплавление лютеальной ткани протеолитическими ферментами лейкоцитов и её окончательное рассасывание. Определённая часть простагландина, не подвергнутая метаболическому разрушению, выводится благодаря лёгочному обмену [78], другая часть подвергается в организме метаболизму и в виде двух основным метаболитов -тригидропростановой и тригидротетрапростановой кислот выводятся с мочой [79].

Для регуляции воспроизводительной функции коров и телок - наибольший, интерес представляет Р^2а, применяемый* в скотоводстве в виде синтетических аналогов, который< намного активнее естественного Р§Б2 а, и в терапевтических дозах не обладает побочным действием*[43].

Препараты простагландина широко используют для« подготовки животных с целью проведения туровых осеменений. Доза введения препарата для взрослого животного эквивалентна 500 мкг клопростенола. Через 12 часов после введения простагландина происходит лизис желтого тела, концентрация прогестерона снижается (в среднем с 4,0 до 1,5 нг/мл). Одновременные признаки охоты наблюдаются в течение вторых - четвертых суток после обработки [49].

Общий пик реактивности генеративных структур яичников к биологически активным веществам, регулирующим фолликулогенез, приходится на середину лютеальной фазы полового цикла. Из этого следует, что данный временной отрезок полового цикла (9.12 дни) является оптимальным для стимуляции фолликулогенеза. У коров циторецепторная чувствительность яичников к препаратам простагландина а отмечается в промежутке между 6. 16 днями после овуляции, то есть при наличии функционально активного желтого тела. В другие фазы полового цикла структура лютеальной ткани к ним малочувствительна либо рефрактерна, поэтому, нет оснований рассчитывать на получение лютеолитического эффекта, а, следовательно, и эффекта, стимулирующего рост, созревание и овуляцию фолликула.

Известно, многообразие фирменных названий PgF2a: в России -С-ПГФ2а, С-ПГФ2-ТС, анипрост, суперфан, эстуфалан, клатрапростин и другие; в США - динопрост, динолитик, лютализ и др.; в Великобритании -клопростенол, эструмат; в Японии - панацелян; в Венгрии, - энзапрост; в Чехии - эстрофан, ремофан и др., и количество этих названий, растет с каждыми годом, приближаясь к 20 — ЗО синонимам - фирменным названиям каждого - препарата. Считают, что назрела необходимость принять, единые правила, наименования препаратов, например; ПГФ-2-альфа фирмы Апджон США (содержащий- динопрост и названный динолитик™ или лутализ1М, •являющийся торговой маркой, опустить; это повысило бы ответственность фирм за качество препаратов) или аналогично: ПГФ-2-альфа фирмы.Мосбио, Россия-(содержащий раствор Д-клопростенола и названный-суперфан) [80].

Использование различных препаратов простагландина в дозе 500 мкг (действующего вещества по клопростенолу), как правило, не влияет на эффективность лизиса желтого тела, синхронность проявления охоты и оплодотворяемость. Увеличение дозы или кратности обработок не дают повышения эффективности. Предпринимаются попытки улучшить лютеолитические свойства простагландинов, используя их аналоги с пролонгированным действием (прозольвин, фенпростален). И хотя период полураспада таких препаратов достигает 15 часов (у обычных препаратов — 3 часа), они не имеют выраженного преимущества [12].

В системе обратной отрицательной связи механизма регуляции половой функции гипоталамус является , определяющим органом. Нейропептид^ называемый гонадотропин - рилизинг фактором, или гонадолиберином, и целесообразно выделяемый гипотоламусом, в ответ на центростремительные импульсы, в минимальных концентрациях регулирует инкреторную активность гипофиза относительно гонадотропинов [82, 42, 83].

Экзогеннный гонадолиберин, получаемый путем синтеза, по химической природе представляет собой декапептид с молекулярной массой 1181. Он не обладает видовой специфичностью, т.к. при парэнтеральном введении способен активизировать секрецию гонадотропинов; у всех видов млекопитающих. Известные синтетические аналоги гонадолиберина обладают в несколько раз более сильным действием, чем нативный препарат.

Синтетический аналог гонадотропного рилизинг-гормона, отечественный препарат сурфагон, обладая высокой биологической, активностью, при парэнтеральном введении животным стимулирует секрецию ФСГ и ЛГ, что обеспечивает нормальное функционирование яичников и создание в организме самки необходимого .эстрогенного. фона, способствующее, в, свою очередь,, ускорению овуляции и формированию полноценного желтого тела. Данное положение, аргументируют исследования^ которыми; установлено, что уже через 20 минут после введения коровам препарата, начинается стойкое повышение концентрации ЛГ, достигающее пиковых значений ко второму часу [17, 84].

Наставление по применению сурфагона не регламентирует срок его применения по отношению к началу полового цикла. Между тем утверждают, что сурфагон, как и его зарубежные аналоги, вызывает овуляцию незрелых фолликулов с последующим формированием гипопластического желтого тела. Этим положением аргументируют целесообразность применения сурфагона для стимуляции фолликулогенеза и овуляторной функции яичников в конце предтечковой фазы, характеризующейся^ наличием предовуляторных фолликулов [85].

В связи с этим представляет актуальность изучение сравнительной эффективности влияния отечественных синтетических гонадолиберинов на оплодотворяемость коров в спонтанную и индуцированную охоту.

На восьмой день после овуляции желтое тело достигает зрелости, характеризующейся предельной толщиной зернистого слоя с вакуолизацией его клеток и одновременной инволюцией текальных клеток. Для этого периода предложено название прогестативное тело (а для желтого тела беременности — гестативное желтое тело). На этот период приходится начало его максимальной секреторной активности, что находит проявление в повышении концентрации прогестерона в крови половозрелых самок. Прогестерон образуется также плацентой и надпочечниками. Имея самостоятельное физиологическое значение, является важным промежуточным продуктом при синтезе других стероидных гормонов [87].

В основе естественных прогестагенов находится ядро прегнена с 21 атомом углерода. С количественной и функциональных точек зрения наиболее важным является.прогестерон: 4-прегнен-3,20-дион - обязательный продукт в процессе синтеза всех стероидных гормонов. Прогестерон, как и. !

4 I

17р-эстрадиол, синтезируется в яичнике из, холестерола: холестерол-прегненолон-прогестерон.' Синтез происходит под контролем двух систем: ЛГ-цАМФ и Са~ -полифосфоинозитолциклическая протеинкиназа, которые действуют различно на разные типы клеток желтого тела, причем механизм действия окончательно не выяснен. Прегненолон и прогестерон в результате гидроксилирования превращаются в андрогены, часть которых через яичниковую вену либо базальную мембрану проникают внутрь фолликула, где в гранулезных клетках под влиянием ФСГ превращаются в эстрогены.

Прогестерон действует на яичники как ингибитор овуляции: косвенно -путем блокады производства гипоталамусом Гн-Рф, и непосредственно -замедляя фолликулярный рост и разрыв зрелого фолликула. Кроме того, прогестерон определяет структурные изменения слизистой и тонус мускулатуры яйцепроводов и матки, создавая оптимальные условия для оплодотворения и начала беременности, а в комплексе с эстрогенами способствует завершению эволюции молочных желез.

В крови; прогестерон связан с сывороточными глобулинами. Имеет период полураспада 4.6 часов. Прогестерон метаболизируется в печени в препандиол, который в конъюгированном виде выделяется мочой [3, 80, 87, 89, 90]. Синтез и секреция прогестерона контролируется ЛГ гипофиза и хориогоническим гонадотропином. Его уровень в крови зависит от стадии полового цикла, а также от стадии беременности.

Синтетические прогестагены - это продукты, располагающие гормональной активностью и способные вызывать на уровне слизистой оболочки матки эффекты, похожие на эффекты естественного прогестерона. С 193 8 года, когда* получили первый прогестаген- - ангидрокси-прогестерон, создан -целый ряд соединений с прогестагенной. активностью. Производные, получаемые путем эстерификации СЩСООН радикала а-гидроксил от Сп являются основой почтт всех имеющихся?, в- наличиш прогестативных препаратов: медроксипрогестерон, . мегестрол, хлормадинон; ацетат мегестрола, метрогестон [87].

Биологическое значение препаратовшрогестагенового ряда-определяют их двумя1 противоположными свойствами:: блокировать активность фолликулогенеза и активизировать воспроизводительную функцию. Второе свойство • обусловлено тем, что после прекращения- действия; экзогенных, прогестагенов, проявляется, так. называемый; ребоундгэффект, то- есть инверсия* ответа при прекращении стимула; что характеризуется целесообразной^ оптимизацией^ выброса гипофизом гонадотропных гормонов. В рамках биотехнических . мероприятий, благодаря эффекту ребоунда, прогестагены потенцируют эффективность гонадотропных препаратов и гонадолиберинов [91, 92]. Имеющиеся препараты прогестагенового ряда (прогестерон; меленгестрол ацетат, ацетат мегестрола, амол, диамол, СЬгопо-Сеэ!, РЯШ, 81псЬо-Ма1е В) предназначены для орального или парэнтерального введения в виде инъекций, вагинальных пессариев и подкожных силиконовых имплантантов [42, 93, 94].

Основными недостатками применения! прогестагенов являются: трудоемкость, обусловленная необходимостью многократных инъекций или дачей дозированного вещества с кормом, проблематичность точных дозировок (при введении с кормом), низкая оплодотворяемость животных по причине старения яйцеклеток в персистирующих фолликулах, неудовлетворительные свойства среды во время синхронизированной течки и преждевременное поступление яйцеклеток из яйцепроводов в матку.

Раздел 2.3. Механизмы регуляции репродуктивной функции животных

Кроме прогестерона, в жёлтом теле синтезируются два полипептидных гормона: релаксин и окситоцин, а также простагландины и простациклин. Гранулёзные клетки преовуляторного фолликула вырабатывают большие количества простагландинов Е2, (ГШЕ2), Ф-2-альфа (ПГФ-2-a) [14, 27].

Hansel W., Dowd J.P. [266] выявили лютеотропическую роль простациклина (ПГ1-2)-эпопростенола или циклопростина, который в больших количествах синтезируется на ранних стадиях развития жёлтого тела при участии фермента простациклин-синтетазы. В их, опытах через 15 минут после инъекции эпопростенола в жёлтом теле значительно увеличивалась концентрация прогестерона в крови, а при инъекциях индометацина (ингибитора ПГ1-2)-укорачивался цикл жёлтого тела [42].

Релаксин является полипептидом, состоящим из 48 аминокислотных остатков, организованных в две цепи (А и В), связанных между собой дисульфидными мостиками через цистеин. Он вырабатывается в жёлтом теле, а на более поздних стадиях беременности-и в плаценте и вызывает размягчение, расслабление связочного аппарата таза, лизиз хряща лонного сращения, превращение обычного таза самки в «родовой», когда все связки таза становятся рыхлыми, их длина увеличивается на 1/3 или 1/4, т.е. он подготавливает материнский организм к родовому акту [6].

Окситоцин-октапептид, состоящий из девяти аминокислот с цистеиновыми остатками в положениях 1 и 6, связанными дисульфидным мостиком, что формирует структуру кольца и боковой цепи из остатков трёх аминокислот.

Окситоцин обнаружен в жёлтом теле овцы и человека, но физиологическое значение его в жёлтом теле до сих пор не ясно. У овец под влиянием ПГФ-2-альфа, выделяемого маткой, происходит выброс окситоцина из жёлтого тела. Аналогично при введении клопростенола (аналога ПГФ-2-альфа) секреция окситоцина в яичниках быстро повышалась, и он обнаруживался в крови, оттекающей от яичника, при этом в крови яремной вены концентрация окситоцина не повышалась, что свидетельствует об отсутствии заметной секреции его в гипофизе (рис.4).

Рис. 4. Динамика развития фолликулов на протяжении эстрального цикла

Поскольку окситоцин снижает секрецию стероидов в культуре изолированных лютеальных клеток, возможно, что он опосредует или усиливает лютеолитическое действие ПГФ-2-альфа [67].

Таким образом, жёлтое тело в яичнике является железой внутренней секреции, производящей большое количество гормонов и биологически активных веществ, преобразующих эндометрий в прегравидное состояние, создающее условия для развития зародыша и формирования плаценты.

Рассмотрим динамику развития фолликулов на протяжении нормального эстрального цикла.

В процессе фолликулогенеза и формирования яйцеклеток выделяют три периода: первый характеризуется ростом фолликулов от стадии примординальных до стадии предполостных, в которых происходит увеличение размеров ооцитов; второй — ростом фолликулов со стадии крупных преантральных до предовуляторных, когда ооцит достигает дефинитивных размеров; третий — овуляцией« фолликула и формированием 1 желтого^тела [ 100; 10 Г, 141, 224].

Растущий фолликул постоянно изменяет чувствительность к гонадотропным гормонам, которая определяется вариациями концентраций гонадотропных рецепторов в клетках гранулезы. В свою очередь, концентрация прогестерона, 17-Р-эстрадиола и тестостерона в фолликулярной жидкости антральных фолликулов зависит от их размеров и дня полового цикла [159].

Овогенетические и эндокринные процессы в яичниках на протяжении половой зрелости самок находят проявление в половом цикле, начало которого соответствует дню охоты, обозначаемому нулевым днем цикла. Яичник имеет строго последовательный циклический ритм: волнообразное развитие и рост популяции антральных фолликулов - созревание доминирующего фолликула последней волны роста популяции - овуляция -образование и развитие желтого тела [141, 208].

При этом центральным явлением периодичности половых процессов в яичниках является овуляция, которая разделяет фолликулярную и лютеальную фазы морфологических изменений. В' эндометрии этому соответствует пролиферативная и секреторная фазы. При преждевременной или поздней овуляции происходит выход либо незрелой, либо состарившейся яйцеклетки, что исключает возможность оплодотворяемости и развития зиготы [208, 225].

Сведения о механизме развития и временных параметрах полового цикла и его отдельных стадий имеют исключительное значение для технологий его направленной регуляции. Это обусловлено тем, что целесообразная эффективность воздействий гормональными препаратами возможна только на определенных стадиях цикла и в определенные сроки [117]. Данные о продолжительности полового цикла коров весьма противоречивы [148, 159, 225]. Кроме того, для конкретного животного продолжительность цикла - величина непостоянная и может варьировать в .широких пределах. Минимальная вариабельность, продолжительности цикла характерна для возраста коровы между 3.5 лактациями в период оптимума1 воспроизводительного статуса, когда воспроизводительная функция наиболее- «точно отрегулирована». Увеличение степени вариабельности- с преобладанием в сторону уменьшения наиболее выражено у старых животных [149, 159, 197].

При условии обеспечения привесов до 800 г в сутки возможно добиваться у телок швицкой породы нормальной половой цикличности в возрасте 12.14 мес. В случаях осеменения продуктивность отелившихся в раннем возрасте животных практически не отличалась от продуктивности первотелок более позднего возраста [119].

Период формирования половой функции у телок подразделяют на три стадии: 1) первичное появление половых рефлексов; 2) формирование полового цикла; 3) наступление половой зрелости.

Таким образом, появление первичных половых рефлексов опережает наступление таких, феноменов, как течка и овуляция. Половая зрелость, под . которой* понимают способность производить полноценные яйцеклетки, наступает у телок в возрасте 9:.15 мес. [13]. У алатауских телок горных районов Средней Азии средний возраст при первой овуляции - 12. 15 мсс. [25, 46].

Независимо от породы механизм полового созревания у телок сводится к следующему: в период, предшествующий половому созреванию, активизируется образование гонадотропинов гипофизом, что приводит к росту фолликулов и продукции ими эстрогенов, которые накапливаются^ в крови, тормозя продукцию гонадотропинов, что блокирует продолжение роста фолликулов: Поэтому для: этой стадии характерна систематическая персистенция фолликулов; У телок перед половым; созреванием; в течение 1.2-х месяцев обнаруживают в яичниках; тонкостенные фолликулы величиной с горошину. Однако* желтых тел: в таких, яичниках не обнаруживают. С возрастом обмен эстрогенов; нормализуется. Становится адекватной гипоталамо-гипофизарная реакция на1 эстрогены^, что приводит к оптимальной динамике секреции гонадотропинов- с преовуляторным пиком ЛГ7, предполагающим нормальную овуляцию [25].

Непременным условием« нормальной продолжительности цикла; а следовательно с и оплодотворения- и эмбриогенеза оплодотворенной яйцеклетки является активное функционирование маточных желез и других гистохимических. элементов эндометрия, равно как, и, морфологических и топографических параметров- матки. Коренным образом измененные в результате стельности и родов указанные параметры приходят к небеременному состоянию перманентно и в определенной последовательности. Структуры, обеспечивавшие прошлую1 беременность (маточные железы, покровный эпителий и эндометрий) отмирают, отторгаются и вместе с лохиями элиминируются из организма: Регенерация покровного эпителия и зарождение новых, маточных желез происходит через

3.4 недели после отела. Еще 2.3 недели требуется для того, чтобы началось их нормальное функционирование и выработка эмбриотрофа. Полное освобождение матки от микробов происходит лишь к концу 2 месяца после отела, ко времени 2-ой или 3-ей течки [30].

Фолликулярная функция яичников после отела возобновляется быстрее: первые фолликулы созревают через 3.4 недели (что инициирует течку и половое возбуждение), происходит первая овуляция. В случае осеменения плодотворные яйцеклетки погибают, т.к. не находят в матке необходимых условий для развития [139]. Это объясняет сообщения, согласно которым лишь 17,8% коров из числа осемененных в первые 30'дней после отела становятся стельными, в то время как результативность осеменений возрастает по мере отсрочки осеменения после отела- с оптимальным сроком первого осемененияна 45-60 день [166, 138].

Решение проблемы раннего плодотворного осеменения, связано с увеличением эффективности реализации генетически детерминированных репродуктивных возможностей, что* сопряжено, во-первых, с детализацией причин, вызывающих снижение оплодотворяемости, во-вторых, с выявлением возможностей" целенаправленных воздействий на эти механизмы с помощью биологически активных веществ и, таким образом, с разработкой высокоэффективной' биотехнологии интенсивного воспроизводства сельскохозяйственных животных.

Раздел 2.4. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота и перспективы ее применения в скотоводстве

В мясном скотоводстве исключительное значение имеет экономически обоснованная эффективность воспроизводства поголовья маточного стада. В настоящее время; несмотря на бесспорные достижения в области репродуктивной физиологии, эффективность воспроизводства имеет неуклонную тенденцию к снижению [4, 98, 188, 213]. В этом смысле эмбриональную смертность считают главным фактором низкой репродуктивной активности поголовья, приводящим к значительным экономическим издержкам [265]. Современные методы искусственного осеменения могут оказывать негативное влияние на показатели репродуктивного статуса поголовья. Однако считают, что если эти методы выполняют правильно, то это влияние не существенно. Следовательно, для выполнения программ по воспроизводству основное внимание необходимо уделять увеличению плодотворности осеменений путём минимизации эмбриональных потерь [149, 211, 266].

При существующих методах осеменения в скотоводстве оплодотворяемость яйцеклеток коров достигает, в среднем, 87%, с колебаниями от 60 до 100%. При этих показателях лишь 45% плодотворно осеменённых (после однократного осеменения) коров приносят телят. С учётом этого, уровень стельностей, зафиксированный через три месяца после однократного осеменения, достигающий 55%, считают очень хорошим показателем [153, 267, 268, 269].

В 20-24% случаев, прерывание стельности происходит в первые 15 дней после осеменения в результате ранней эмбриональной-смертности, до наступления наивысшей' циторецепторной чувствительности жёлтого тела беременности, меньше — в<3-8% случаев, происходит поздняя эмбриональная смертность, в промежутке от 15 до 42 дня беременности в период наивысшей циторецепторной активности жёлтого тела. В фетальный период развития, т.е. после 42 дня эмбриогенеза, длящийся до рождения, потери стельности минимальны - 3-4%, преждевременные роды составляют — 1-2% [4, 156, 258].

Эмбриональная смертность обусловлена большим количеством внутренних и внешних факторов, которые можно разделить на 2 группы. К первой следует отнести факторы, негативно влияющие на процесс роста и созревания ооцитов. Произошедшие в результате этого морфо-функциональные отклонения зрелых ооцитов после оплодотворения неизбежно приводят к утрате жизнеспособности зародыша на определённом периоде эмбриогенеза [269, 270]. Доля эмбриональных потерь вследствие влияния негативных^факторов этой группы может составлять 20,5 - 50% от общего уровня, эмбриональной смертности. В этих случаях предотвращение эмбриональной смертности является проблематичной задачей и в; настоящее время практических рекомендаций и методов профилактики эмбриональных потерь, обусловленных нарушенным оогенезом, не разработано.

Актуальность исследований, направленных на изучение факторов первой группы, лежащих в основе причин эмбриональной смертности определяет следующее обстоятельство. Являясь фундаментальным разделом современной биологии, исследования по экспериментальной физиологии и патофизиологии: эмбрионального развития млекопитающих обусловлены не; только, научным, но и практическим интересом [271].

Углубление поиска в этой; области знаний предполагает развитие и внедрение результатов таких перспективных направлений сельскохозяйственной биотехнологии! как клонирование, получение трансгенных животныху ; элиминация нежелательных генов, исследований проблем- эмбриональной смертности. Изучение физиологии эмбрионального развития сопряжены с исследованиями по разработке и совершенствованию методов V криоконсервации эмбрионов, являющихся важнейшим элементом технологии эмбриотрансплантации. Актуальность, этого раздела определяет возможность значительного- упрощения межгосударственного; обмена генетическим материалом, лимитируемого' жесткими условиями экспорта и импорта животных, что снижает интенсивность селекционно-генетического прогресса в скотоводстве: Использование метода криоконсервации даёт возможность сохранять эмбрионы от выдающихся животных, а также накапливать генофонд локальных, исчезающих пород. В» исторической перспективе это может быть использовано для восстановления некоторых качеств,.неизбежно теряющихся породами в процессе интенсивной селекции. Применение данного элемента; технологии! эмбриотрансплантации позволяет решать вопросы; акклиматизации пород и получения гибридов, путём создания адаптированных популяций в регионах с экстремальными климатическими условиями [186, 197,271, 272,273, 274, 268, 275]. В этом смысле работы, направленные на совершенствование новейших биотехнических методов управления1 репродуктивной функцией и технологических элементов метода трансплантации эмбрионов, представляют уникальную возможность не только познания закономерностей сложнейших биологических процессов на ультраструктурном уровне, но и реализацию научных достижений в условиях практики [203, 276].

Анализ данных литературы и результатов собственной ? работы в области трансплантации эмбрионов показывает широкую вариабельность показателей жизнеспособности эмбрионов. В: ряде случаев приживляемость эмбрионов, как свежеполученных, так и оттаянных после криоконсервации может достигать 80,0% к числу трансплантированных, но может не превышать 10,0-17,0% [187, 277].

В процессе проведения исследований было выявлено, что эмбрионы, получаемые от здоровых высокопродуктивных и от проблемных коров, независимо от продуктивности, к которым относят животных с функциональными .расстройствами; воспроизводительной системы вследствие хронических стрессовых: воздействий [203,278, 279, 280]1, имеют характерную особенность — низкий процент приживляемости, включая случаи, когда эмбрионы после извлечения были оценены по пятибальной шкале на основании морфологических признаков как хорошие и отличные. Становится очевидным, что физиологический статус коров определяет особенности строения эмбрионов на ультраструктурном; уровне, нефиксируемые оценкой качества по морфологическим признакам методом микроскопии.

Незначительные отклонения в состоянии здоровья! оказывают негативное влияние на оплодотворяемость яйцеклеток и качество эмбрионов [210, 281, 282]. Даже при 100%-ой положительной реакции суперовуляцией у проблемных коров, качество, большинства полученных эмбрионов может

-'■■у- ■ -'■■■•■••. ' ' ■■ 42 оказаться неудовлетворительным при полном отсутствии эмбрионов, пригодных для трансплантации [207, 283]. В целом, лишь 29,0% извлекаемых эмбрионов от перегуливающих коров- являются нормальными, 33% с большой степенью - морфологических отклонений, 38% дегенерированных. При этом как нормальные, так и эмбрионы с морфологическими» отклонениями значительно отстают в развитии. При оценке 7-дневных эмбрионов, получаемых от многократно осеменяемых коров и виргинных телок, выяснили, что от телок получали эмбрионы, как правило, на стадии бластоцисты, в то время как от перегуливающих коров — на стадии морулы.

Таким образом^ замедленная интенсивность развития, иногда с последующей дегенерациеш и-полной резорбцией, является характерной особенностью эмбрионов коров, - имеющих или имевших нарушения репродуктивной системы; [210- 284]. Для дегенерированных эмбрионов свойственношаличие диплоидных и полиплоидных клеток.

Эмбрионы, получаемые, от проблемных коров отстают в накоплении сырой, массы и имеют на-1/3 болыпеаномалы1ых-кариотипов,:чем эмбрионы, получаемые от здоровых телок., Данные факторы неизбежно приводят к ранней эмбриональной смертности-^ [285]-. Ситуация-является производной патологических процессов, воздействующих на обменную и гормональную; активность развивающихся фолликулов; что подтверждают исследованиями; проведенными in vivo;и in vitro.' Следовательно; влияние . репродуктивных нарушений, обусловливающее причину низкого качества яйцеклеток и, как. следствие, низкий процент их окончательного созревания, фертильности, а в случае оплодотворения, нормального эмбриогенеза находит своё проявление на самом раннем этапе генеративного' цикла — оогенезе [286]. При культивировании ооцитов, полученных от проблемных коров отмечают высокий выход яйцеклеток с дегенерацией хромосом при характерном признаке - блоке анафазы [271]. В опытах по культивированию эмбрионов1 in vitro в аналогичных случаях отношение дегенерировавших морул составляло в 3,0 раза больше и бластоцист в 2.5 раза больше, чем при культивировании эмбрионов в контрольных группах, что влияло на увеличение случаев эмбриональных потерь [287].

Большую проблему представляют невыясненные особенности развития эмбрионов, обусловленные высокой молочной продуктивностью коров-доноров [288]. Актуальность решения данной проблемы объясняется задачей получения наибольшего числа эмбрионов от высокопродуктивных коров для обеспечения селекционно-генетического прогресса. В связи с родами и возрастающей лактационной активностью имеет место отрицательный энергетический баланс, возрастает необходимость в поглощении коровами высокопитательных рационов, что, коррелирует, со снижением всех репродуктивных показателей. Свойственная высокопродуктивным1 коровам перегруженность процесса обмена веществ оказывает негативное влияние не только на- эмбриогенез, приводящее к замедлению скорости развития эмбрионов, но и на более раннюю стадию генеративного процесса — оогенез и-оплодотворение. С увеличением, продуктивности от 3000' до 10000 кг молока в год, оплодотворяемость яйцеклеток снижается, в среднем, от 65% до 35% [287,289,290, 314]. - - - .

• Ооциты от телок с высоким генетически прогнозируемым уровнем продуктивности при культивировании in. vitro после оплодотворения характеризуются низкой' интенсивностью ' дробления и формирования бластоцист. В то же время; ооциты от коров с невысоким генетическим потенциалом продуктивности, но оптимальными экстерьерными данными, обладают нормальными морфологическими признаками и после оплодотворения в развитии до • стадии бластоцисты. В результате этих и других исследований был сделан вывод о том, что в первую очередь к общему снижению показателей плодовитости приводят, связанные с метаболическими сдвигами, изменения фолликулярной среды и среды яйцепроводов, оказывающие негативное влияние на рост, созревание ооцитов и оплодотворяемость [289, 291].

Во вторую очередь, снижение показателей плодовитости происходит благодаря изменениям маточной среды [291, 34, 293], негативно влияющих на процесс эмбриогенеза. В исследованиях in vitro культур эндометральных тканей высокопродуктивных коров показано, что изменения в матке градиента рН происходит посредством поляризации клеток и увеличения секреции простагландина F2a, что препятствует развитию эмбриона и, в конечном счете, может обусловить потерю жизнеспособности. В итоге следует обратить внимание на определенную идентичность механизмов снижения жизнеспособности эмбрионов проблемных коров, независимо от продуктивности и здоровых высокопродуктивных коров, причем во всех случаях основной признаю снижения жизнеспособности находит проявление в замедлении скорости развития эмбрионов. Вероятно, данная специфика определяет снижение устойчивости эмбрионов, полученных от проблемных и высокопродуктивных коров к жёстким условиям, которым они могут быть подвержены при определённых технологиях криоконсервации.

В то же время правомочно предположить, что эмбрионы, от здоровых коров-доноров со средней, продуктивностью »должны проявлять одинаковую устойчивость при всех применяемых технологических режимах. Учитывая это обстоятельство, следует считать большим недостатком то, что разработки всех применяемых технологий криоконсервации эмбрионов были проведены без дифференцированного учёта источника эмбрионов, т.е. без учёта физиологического статуса коров-доноров. Это привело к отсутствию сведений и рекомендаций по криоконсервации эмбрионов, получаемых от высокопродуктивных и проблемных коров.

Следует особо обратить внимание на исключительно важный, с нашей точки зрения, аспект. Разработка и совершенствование технологий элементов эмбриотрансплантации даст возможность изучения и уточнения процессов эмбрионального развития.

Вторая^ группа внутренних и внешних факторов приводит к нарушениям эндокринных взаимоотношений «самка-зародыш», вызывающих функциональные и- структурные изменения жизнеспособного зародыша и/или репродуктивной системы самок [230, 293]. В условиях практики негативное влияние этой группы факторов в определённой степени, возможно нивелировать путём проведения соответствующих биотехнических мероприятий.

Расчёты при учёте двух групп факторов, приводящих, к эмбриональной гибели показывают, что на современном уровне развития биотехники воспроизводства реально добиваться снижения эмбриональных потерь на 20-50%. Для оплодотворения и последующего нормального эмбриогенеза необходима взаимосвязь эмбриона с эпителиальными клетками эндометрия, что возможно при соблюдении условий поддержания постоянной оптимальной гистотрофной среды. При этом своевременное начало и оптимальный рост постовуляторной концентрации прогестерона играет важнейшую роль, что доказывает положительная1 корреляция определённых значений концентраций, прогестерона на 4-й день после осеменения с позитивными концентрациями интерферона т на 16-й день.[153, 294] 1

Данное утверждение подтвердили исследования; которые продемонстрировали, что гестагенизация, проведённая, перед 6-м*днём после осеменения лактирующих мясных коров увеличивает нормы сохранения стельности [146]. В* рамках этих исследований проводили испытания ряда прогестагенных препаратов. В испытаниях эффективности их применения на 6-12 дни после осеменения нормы стельности достигали 79%, в то время как в контроле - 56% [143, 295, 286 , 213].

С теоретической точки зрения обработки препаратами, которые способны блокировать или сдерживать регрессию жёлтого тела, препятствуя инкреции Р§Р2а будут способствовать оптимизации гистотрофной среды, и продлевать срок её существования на весь период раннего эмбриогенеза.

Таким образом, введение препаратов НСО (хориогонический гонадотропин человека) или Оп-ЯЬ (гонадолиберин) является альтернативным введению прогестерона [296, 97,, 298].

Учитывая вышеизложенное, в задачу нашей работы входило изучение влияния различных факторов на частоту эмбриональных потерь у коров, оценка возможности • инъекций прогестерона нормализовать гормональный профиль в случае снижения функциональной активности жёлтого тела и сравнительное испытание инъекций прогестерона, гонадолиберина и хориогонина повышать результативность осеменений.

Раздел 2.5. Биофизические приемы регуляции репродуктивной функции животных

Технологические методы поддержания воспроизводительной функции у коров и телок на высоком уровне требуют значительных капитальных затрат, часто эти методы нарушаются, что снижает показатели воспроизводства стада [120, 2].

Стимуляция половой функции гормональными и другими биологически активными препаратами может приводить к нарушению гормонального статуса животных [166, 167], а также снизить качественные показатели молока и мяса. В связи с этим требуются принципиально новые методы стимуляции воспроизводительной функции коров и телок, которые обеспечивали бы высокую эффективность, безвредность, экологическую чистоту, дешевизну и доступность их выполнения [123]. Этим требованиям отвечают физические методы, в том числе традиционные (массаж, тепло, движение, озокеритотерапия и др.) и новые, с использованием различных аппаратов с помощью электрических токов, лазерного излучения, ультразвука, вибромассажа, электропунктуры биологически активных точек и др.

В последние годы в России сложилось новое направление исследований в области повышения воспроизводительной функции животных физическими методами с использованием различных аппаратов и приборов [121, 1]. При этом установлено, что физические воздействия оказывают благоприятное влияние на попс1еу1;о систему животных и организм в целом [32, 35, 194, 102, 160].

Ректальный ручной массаж, матки и яичников усиливает в них кровообращение, лимфооток, улучшает питание тканей, повышает нервномышечный тонус половых органов, активизирует сократительную функцию матки, повышает оплодотворяемость на 7-20 % [3, 171,94].

Для усиления антиперестальтических сокращений матки [206] считает необходимым массажировать матку до введения спермы, а мясным коровам клитор - после осеменения.

М.Н: Демидова [94] новотельным коровам с целью профилактики гинекологических болезней проводила ректальный массаж матки по 5 мин 1 раз, в 48 ч в течение 10 дней, что ускорило инволюционные процессы половой системы коров на 2 дня.

Инструкцией по искусственному осеменению1 коров методическими указаниями ректальный, ручной массаж матки рекомендуется применять при искусственном! осеменении^ терапии субинволюции матки и хронического гнойно-катарального. эндометрита.' Ректальный массаж яичников рекомендован в течение 2-3 мин при*гипофункции яичников и1 персистентном желтом теле.

Орошение влагалища* горячими (45°С) и теплыми (35-40°С) или холодными растворами/ (3-15°С) №С1 и других средств оказывает тоническое, механическое и химическое воздействие на слизистую оболочку влагалища и влагалищной части шейки матки и рефлекторно стимулирует оплодотворяемость и> половую функцию [205]'.

Для повышения оплодотворяемости коров рекомендуется [122], орошать шейку матки и влагалища теплыми растворами сахара (10%), хлористого натрия (1%) или соды (2%). Благоприятно влияют на отделы полового аппарата грязевые процедуры и озокеритотерапия. Использование грязей и озокерита технически более сложное и трудоемкое дело, чем- аппаратные способы и пока не нашло широкого применения' в ветеринарной практике [28; 26].

В последние годы* находят все более широкое применение в животноводстве; и ветеринарии физические процедуры различного характера-с помощью специальных аппаратов [50, 80, 169]. Высокоэффективны способы электростимуляции функции половой системы животных. Для лечения атонии и гипотонии матки, а также для повышения оплодотворяемости предложен способ с использованием фарадического тока с частотой импульсов 20-30 Гц и напряжением 4000 В.

Однако, при положительном эффекте такое воздействие является сильным раздражителем [43, 120]; что приводит иногда к стрессам. ■ Стимулирующий эффект воздействия импульсными токамш частотой 40-120 Гц один раз; в день с помощью приборов 717 и СНИМ-1 отмечал [117, 44, 60]. Разработан один? из видов», электростимуляции - электронейростимуляция [169, 173, 277]. Сущность, этого метода заключается;» в воздействии слабыми импульсными? токами на биологически активные: зоны (БАЗ) половых органов, проекции которых находятся, на поверхности?тела животного; Для электронейростимуляции авторы сконструировали аппарат ЭТНС- 100-1В -генератор с частотой от 5 до 100 Гц: ш амплитудой 10-100 В с двумя электродами на матерчатом поясе. По данным:автора, воздействие аппаратом на: биологически активные зоны повысило оплодотворяемость коров: по сравнению^ контрольными-аналогами на 20 %.

Все более широко изучаются и; применяются способы рефлексотерапии и рефлексостимуляции путем воздействия на биологически активные точки (БАТ) в коже животных, в том числе акупунктура (АП) - иглоукалывание, электроакупунктура (ЭАП) - воздействие на БАТ электрическими импульсами, криопунктура - воздействие на БАТ холодом и др. [127, 128, 132, 130] установили, что при ЭАП-стимуляции трех точек с помощью' аппарата "Рампа" за 15-20 мин до введения спермы оплодотворяемость, коров повышалась, на 5,2-11,7 %. Более высокий эффект получен при использовании этого метода в комплексе с медикаментозными средствами [131].

В опытах [39, 85, 125, 136, 142, 160] установлено высокое стимулирующее воздействие магнитно-инфрокрасно-лазерного воздействия на метаболический профиль крови и структуру мембран эритроцитов. Способы акупунктуры, в том числе ЭАП, применяются для стимуляции оплодотворяемости у коров с эффективностью 80-85 % [123, 44].

Г.В. Казеев с соавт. [131] определил, что в зоне биологически активных точек существуют высокопроницаемые для электротока мембраны и выявил на коже животных свыше 200 БАТ. Восстановление энергетического баланса [7, 54, 55, 115, 141] при воздействии на них является преобладающим фактором Вт механизме действия акупунктуры [20, 31, 129, 140]. Воздействие на БАТ с помощью различной аппаратуры открывает большие возможности использования их в животноводстве с целью стимуляции воспроизводительной функции коров:

- Старейшим методом* аппаратной физиотерапии и физиостимуляции в медицине является лазеротерапия [19, 40, 82, 118, 174, 62], который начал использоваться в конце XX века для лечения многих гинекологических болезней [Л 9, 94, 178', 60, 143', 167].

В настоящее время КВЧ-терапия в медицине применяется при заболеваниях нервной, мочеполовой системы, при сердечно-сосудистой патологии-.

Многие авторы [34, 137, 90, 68, 317], КВЧ-терапию рассматривают как важный метод лечения электромагнитными волнами крайне высокой частоты. В основе механизма лечебного действия физических приемов на организм, в том числе КВЧ-терапия, по мнению [33, 35, 99, 135, 145, 186 ], наряду с местным влиянием лежит рефлекторный ответ организма, реализуемый нейрогуморальным путем.

Электромагнитное излучение крайне высокой частоты мм-диапазона активизирует окислительно-восстановительные процессы в мышцах, что способствует быстрому снятию утомления и восстановлению их работоспособности [2, 56,35].

Электромагнитное воздействие на частотах мм-диапазона вызывает сосудисто-двигательную реакцию [2, 56, 34, 151, 189, 316], что уменьшает воспалительные явления в органах и тканях организма человека.

Человеческое тело можно расценить как гетерогенную систему, состоящую из различных по структуре и функции органов и тканей, которые подобно другим физическим системам передают частоты газов-метаболитов всему организму [90, 136, 150, 236, 255].

Некоторые авторы [136, 212, 314] установили избирательную чувствительность клеток и тканей организма к различным параметрам частот мм-диапазона электромагнитных волн.

Многочисленные исследования .[135, 236] сделали экспериментальное обоснование целесообразности применения КВЧ-терапии при лечении нестабильной стенокардии. В медицинской практике применяется лечение мужского бесплодия методом - КВН-терапии - • [184^ ---315]. Широкое распространение получила КВЧ-терапия при заболеваниях дыхательной системы [51]; заболеваниях печени и желчевыводящих путей-[9].

В животноводстве' и ветеринарии до 90-х гг. XX в. исследования в области применения КВЧ-терапии с целью стимуляции- воспроизводительной функции не развивались.

С 2001 начаты научно-исследовательские работы по изучению электромагнитного излучения мм-диапазона и разработке методик его применения в отраслях ветеринарии и животноводства [56].

Для медицинской практики разработано и широко используется большое число устройств, для КВЧ-терапии. Они различны по назначению, характеру действия на организм, конструктивному выполнению и другим характеристикам.

Многочисленные исследования по использованию ЭМИ КВЧ мм-диапазона, проведенные в ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», позволили авторам разработать, конструктивные зоотехнические; ветеринарные и технические требования к КВЧ аппаратам [116].

В результате клинических и экспериментальных исследований^ которые проводились в клиниках Москвы и Екатеринбурга, создан аппарат ДиаДЭНС-двухдиапазонный электронейроадаптиный стимулятор [58, 93]. Было установлено, что, воздействуя на биоэнергетические зоны, можно изменить энергетику организма животного и тем самым регулировать в нем жизненные процессы [93]. При правильном воздействии это дает возможность снизить или вовсе исключить применение медикаментов при лечении животных и в результате получать экологически безопасные продукты животноводства.

Отмечено положительное влияние аппарата, ДиаДЭНС для электропунктурного воздействия - как в медицинской практике [58, 277], так и в. ветеринарной гинекологии, при эндометритах, вагинитах коров [59].

Растущий интерес к безмедикаментозному методу лечения и стимуляции половой функции животных объясняется его • безвредностью, относительной простотой исполнения и таким немаловажным фактом, как дешевизна; [15, 17,

Научная разработка и освоение, различных способов и методов интенсификации воспроизводства стада, в том числе применения различных видов аппаратного воздействия: электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм—диапазона («Орбита»), магнитно-инфрокрасно-лазерного нискоинтенсивного излучения («РИКТА-МВ»), динамической электронейростимуляции («ДиаДЭНС») для управления процессами воспроизводства в мясном скотоводстве, имеет большое научное и практическое значение:.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Материал и условия проведения опытов

Экспериментальные исследования проводили в хозяйствах Западно-Казахстанской области Республики Казахстан, а также в регионе Нижнего Поволжья Российской Федерации (Схема исследований).

Исследования проводили в ТОО племзаводе «Чапаевский», учебно-опытном хозяйстве ТОО «Изденис», К/Х «Шунайбекова» Западно-Казахстанской области Республики Казахстан, а также племзаводе «Сычевский», КФХ «Новоузенский» Российской Федерации.

В качестве доноров эмбрионов были использованы 110 чистопородных коров.казахской белоголовой породы класса элита и элита-рекорд в возрасте от 3 до 13 лет.

В качестве реципиентов телок случного возраста (18-20 мес.) и молодых коров (1-3 отелов) казахской белоголовой и в отдельных случаях молочной породы, менее ценные в племенном отношении, клинически здоровые; без -отклонений в репродуктивных органах и нормальной* половой цикликой. Коров-доноров отбирали по племенной ценности, воспроизводительным качествам на основе данных зооветеринарного учета по физиологическому состоянию половых органов.

При проведении опыта максимально учитывали производственные условия и традиционную технологию разведения и содержания мясного скота.

Так, в летнее время животные содержались в летних лагерях на пастбище, а в зимнее время — на стационаре со свободным выходом на выгульный кормовой двор.

Кормление осуществляли с учетом физиологического состояния и продуктивности животных согласно нормам и рационам, установленным в хозяйстве.

Схема исследований

В целом показатели воспроизводительного статуса поголовья оценивали по общепринятым в зоотехнической практике методам. При индивидуальной оценке воспроизводительного статуса анализировали показатели, характеризующие предродовой, родовой и послеродовой периоды: общее состояние здоровья до родов, предрасположение плода в матке, начало и продолжительность проявления предвестников родов, продолжительность периода от раскрытия шейки матки до начала выведения плода, степень необходимости в родовспоможении и его интенсивность, время отделения последа, проявление материнского инстинкта у роженицы, состояние здоровья матери и новорожденного после отела, его живую массу. Учитывали сроки прихода коровы в первую охоту после отела, индекс осеменений, продолжительность сервис-периода.

3.2. Методика исследований гормональной регуляции'половой функции животных

Для* характеристики функциональных нарушений воспроизводительной функции у коров и выяснения эффективности биотехнических методов их устранения применяли комплексный подход согласно «Методических указаний по диагностике; лечению и профилактике акушерско-гинекологических болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров» МСХ РФ, - М.:, 2005.

Эффективность воздействия лазером при эндометрите и мастите изучали в сравнительном аспекте с медикаментозными, комбинированными методами по различным схемам.

Индуцирование половых циклов, определение результативности применения разных препаратов, осеменение коров и телок осуществляли по методикам и инструкциям МСХ РФ,- М.:, 1989.

Стимуляцию активности яичников у «проблемных» коров при нарушениях фолликулогенеза проводили на более чем 850 коровах с использованием различных биорегуляторов отечественного производства: ФСГ-супер, ГСЖК в комплексе с прогестагенами, аналогами гонадолиберина, хориогоническим гонадотропином человека, синтетическими простагландинами в различных сочетаниях и дозировках. Эффективность использования лютеостабила в качестве средства, снижающего эмбриональную смертность, испытали более чем на 180 коровах. Применяемые в этом разделы элементы эмбриотрансплантации — индуцирование суперовуляции, извлечение, пересадку и оценку качества эмбрионов осуществляли по инструкциям ВГНИИЖ и согласно ГОСТ [63, 62, 33].

Для целей профилактики и устранения нарушений воспалительного характера при проведении биотехнических мероприятий применяли лазерные аппараты со следующими параметрами работы: мощность от 4,0 до 15,0 Вт, длина волны от 870 до 970 нм, частота модуляции от 50,0 до 5000,0 Гц, экспозиция 1, 2, 5 минут по одному сеансу в. день, курс 8-10 дней. В: том числе применяли аппарат квантовой терапии1 РИКТА-МВ. Использовали накожный метод в режиме 1000 Гц, экспозиция 1-2 мин. ежедневно в течение 5-8 дней. При этой: методике лазерный луч достигает всех дермальных, субдермальных и сосудистых сплетений; а также: мышечных слоев и внутренних органов [94].

Излучатель апплицировали по Г. В. Казееву [66] по секторам расположения корпоральных биологически активных точек (БАТ), которые представляют органы и различные системы организма на: поверхности тела животных. Исследования по влиянию климатических факторов на репродуктивную функцию проводили на протяжении 1999-2004 гг.

Исследования состояли из двух частей. В;первой части оценку влияния сезонности на оплодотворяемость коров при осеменении в спонтанную охоту определяли методом ретроспективного анализа данных зоотехнического учета. Таким образом; проанализировали данные по 560 коровам, содержащимся в различных хозяйствах.

Во второй части опыты по изучению влияния сезона года на плодотворность искусственного осеменения в индуцированную охоту проводили на коровах, по прошествии 60 и больше дней после отела без клинически выраженных признаков нарушения половой функции. В трех сериях экспериментов анализировали степень положительного влияния биорегуляторов полового цикла и физиотерапевтического воздействия на результативность осеменений.

Эффективность воздействий и время реабилитации определяли по показателям восстановления воспроизводительной способности коров. Репродуктивную активность, продолжительность бесплодия; устанавливали по данным зоотехнического учета. Использовали статистические обзоры и отчеты отделов (управлений) животноводства при администрациях областей, краев, республик, районных станций по борьбе с болезнями животных (районных ветеринарных объединений), областных (краевых, республиканских) и районных ветеринарных лабораторий и облстатуправлений ЦСУ РФ, а также материалы' акушерско-: : гинекологических диспансеризаций, экспертных оценок, и верификации клинико-гинекологического состояния крупного рогатого скотам в хозяйствах с различными технологиями и формами собственности. .'

Для сравнительного изучения характера изменений в организме животных в разные физиологические периоды (предродовой, родовой; послеродовой, лактационный периоды, сухостой и т.д.) проводили лабораторные исследования. Концентрацию стероидных гормонов определяли радиоиммунологическим методом. Иммунобиологическое состояние здоровых и больных эндометритом и маститом коров определяли путем проведения гематологических и биохимических исследований проб крови, а- также молока животных с использованием современных методов. Уровень общего белка в сыворотке крови (CK) определяли рефрактометрически (рефрактометр ИРФ-22). Уровень общих иммуноглобулинов — цинк-сульфатным методом по A.D. McEwan,. E.W. Fisher, J.E. Selman, W.R. Penhaie (1970); белковые фракции определяли по

Оллу Маккорду в модификации Карпюка (1962); общие липиды - по А.Ф. Криницкому в' модификации В.И. Волгина (1969), холестерин — по Ильку [И.П. Кондрахин и др., 1985]; гемоглобин - при помощи ФЭК по Г.В. Дервизу и А.И. Воробьеву (1959); бактерицидную активность сывороток крови — по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966); активность ß-лизинов — по О.В. Бухарину и Н.В. Васильеву (1977); эритроциты - по А.И. Воробьеву (1959); количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу - по A.A. Кудрявцеву и JI.A. Кудрявцевой (1973).

Детально методики ряда опытов сочли целесообразным отразить по ходу изложения.

3.3. Методика исследований по трансплантации эмбрионов (Схема исследований).

После проведения ректального исследования на наличие желтого тела у доноров осуществляли гормональную обработку препаратами ФСГ-Фоллитропин (Литва) в дозе 1200 ИЕ, гроффолон, в дозе 1000 ИЕ, ФСГ-п (США) в дозах 42 и 52 мг, ГСЖК (Чехия) в дозе 3000 ИЕ. Обработку проводили на 8-12 день полового цикла. В исследовании была применена 4-х дневная схема гормональной обработки препаратом ФСГ с двукратным введением простагландина (эстрофан) в дозе 500 мкг ГСЖК вводили на, 9-12 день полового цикла и-на 12-16 день инъецировали простагландин.

Большинство коров-доноров были витаминизированы комплексным препаратом «Тетравит» в дозе 5 и 10 мл на 2-й день эстрального цикла и перед гормональной обработкой.

Искусственное осеменение коров-доноров осуществляли через 18 часов после введения эстрофана двух-и трехкратно с интервалом 8-10 часов двойной дозой свежеполученной разбавленной (1:3 и 1:6), хранившейся при 0°С спермой с активностью 5 баллов и концентрацией более 30 млн/мл сперматозоидов в дозе; а также заморожено-оттаянной спермой быков-улучшателей, оцененных по качеству потомства.

Многоступенчатое насыщение и выведение криопротектора из эмбрионов

Качество и стадия развития эмбрионов до замораживания

Замораживатели

ЗЭМ-4

ЗЭМ-1

Одноступенчатое насыщение и выведение криопротектора из эмбрионов

Газообразный азот

Жизнеспособность и приживляемость замороженно-оттаяных эмбрионов

Факторы, влияющие на жизнеспособность и приживляемость эмбрионов температура стадия качество оттаивания развития эмбрионов время хранения эмбрионов до замораживания транспортировка качество желтого тела сезон года

Схема исследования

Эмбрионы извлекали у коров-доноров нехирургическим методом с использованием резиновых катетеров. Предварительно животное фиксировали в станке, снимали напряжение с прямой кишки и шейки эпидуральной инъекцией 2%-ного раствора новокаина в дозе 5 мл. Строптивым животным дополнительно с целью достижения частичного обездвиживания внутримышечно инъецировали рампунь в дозе 0,5 мл.

После извлечения эмбрионов промывную жидкость переносили в стерильный бокс и оставляли на 20-30 минут при комнатной температуре 20°С для отстоя. Верхнюю часть жидкости удаляли с помощью длинной иглы, соединенной с резиновым шлангом. Оставшуюся (80-100 мл) жидкость переносили в чашки Петри и под бинокулярной лупой проводили поиск. Для определения жизнеспособности зародышей применяли визуальную морфологическую оценку.

Морфологическую оценку жизнеспособности свежеполученных и заморожено-оттаянных эмбрионов проводили по пятибалльной шкале, разработанной в ВИЖе. При возникновении сомнений жизнеспособности заморожено-оттаянных эмбрионов их подвергали кратковременному культивированию 1-2 часа. Для культивирования применяли среды (ФБС + 30% фетальной сыворотки теленка) в термостате при температуре +37°С.

При подготовке эмбрионов к замораживанию клетки зародышей насыщали раствором глицерина концентрацией 1,4 М. Насыщение раствором криопротектора проводили многоступенчато и одноступенчато.

При использовании многоступенчатого метода эмбрионы последовательно выдерживали по 5 минут для уравновешивания осмотического давления в каждой концентрации криопротектора. Растворы готовили в стерильных флаконах, пробирках и часовых стеклах. Все компоненты тщательно перемешивали стеклянной палочкой. Контроль за насыщением эмбрионов выполняли под бинокулярной лупой в стерильном боксе при комнатной температуре. После выдержки в последнем растворе эмбрионы помещали в камеру замораживателя или в гнезда канистры из фторпластового материала для замораживания в жидком азоте. Одноступенчатый метод более простой и удобный при ограниченном времени их хранения. При этом способе эмбрионы сразу помещали: в каплю 1,4 М раствора глицерина на часовом стекле и выдерживали 20 минут, после чего подвергали замораживанию. Для криоконсервирования биоматериала были использованы в качестве контейнеров пластиковые соломинки (паетты). Замораживали эмбрионы на программном замораживателе ЗЭМ-4 и ЗЭМ-1 в газообразном азоте без блока программного управления.

В соответствии с методикой эмбрионы были разделены на 3 группы. Первую группу эмбрионов охлаждали от +20°С до -7°С со скоростью 1°С/мин с автоматической; кристаллизацией, затем со скоростью 0,3°С/мин до -35°С с последующим помещением в жидкий азот. Вторую охлаждали от +20°С до -40°С со скоростью 1,7°С/мин. Третью - от +20°С до; -40°С со скоростью от 1,5°С/мин. Эмбрионы оттаивали в водяной бане при температуре 20-30°С в течение: 10 секунд. Затем переносили в часовое стекло; в растворе криопротектора проверяли ; наличие , эмбриона- под бинокулярной' лупой. Затем выводили криопротектор из клеток эмбриона в обратной последовательности, если насыщение осуществлялось многоступенчато. При одноступенчатом? насыщении отмывание осуществлялось сахарозой в две степени.

После отмывания эмбрионов от раствора» криопротектора'их подвергали морфологической; оценке. Затем с 20%-ной фетальной сывороткой на ФБС,. согласно методике эмбрионы помещали в пайетту и пересаживали реципиентам.

3.4. Методика изучения ¡влияния биофизических, средств на воспроизводительную функцию животных

Нами изучено применение электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм - диапазона в научно-хозяйственном, опыте на 90' коровах аппаратом «Орбита» производства ОАО «Ц11ИИИИА» (г. Саратов) (фото 1) с соблюдением инструкции, изложенной в руководстве по* эксплуатации аппарата и в методике по его применению. Для опыта подбирались коровы только после нормального отела, клинически здоровые, не имеющие на месте воздействия генератором аппарата нарушений целостности кожи и патологических очагов.

Фото 1 - аппарат «Орбита»

Воздействие аппаратом «Орбита» проводили по одной процедуре в день (продолжительность 7. 10 мин). Охоту у коров выявляли по данным трехкратного визуального наблюдения и осмотра в течение дня и подтверждали ее появление быком-пробником. В опыте изучали и оценивали три варианта стимуляции охоты: с 1-го по 7-й день после отела, с 7-го по 14-й и с 14-го по 21 -й.

Для характеристики стимулирующего воздействия электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм-диапазона, на частоте 129 ГГц, на воспроизводительную функцию коров оценивали появление стадии возбуждения первого полового цикла по появлению первой охоты. В данном опыте изучили и оценили срок наступления первой охоты после отела, оплодотворяемость в первом и последующем половых циклах, продолжительность сервис - периода и индекс осеменения, а также экономическую эффективность использования аппарата «Орбита». Нами проведены исследования о влиянии электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм - диапазона (ЭМИ КВЧ) на оплототворяемость животных в трех научно-хозяйственных опытах, проведенных на 228 животных.

В первом опыте изучали сравнительную эффективность стимуляции половых циклов у новотельных коров аппаратом «Орбита» пояснично-крестцовой рефлексогенной зоны в базовом режиме один раз вздень после отела: с 1-го по 7-й день, с 7-го по 14-й и с 14-го по 21-й. Регистрировали и оценивали время появления стадии возбуждения полового цикла после отела, характеристики первого и последующих половых циклов, результаты и эффективность искусственного осеменения.

Во -втором опыте изучали влияние ЭМИ КВЧ мм-диапазона во время феномена охоты стадии возбуждения полового цикла у коров на их ■ физиологическое состояние, основные гематологические1 и биохимические показатели и уровень гормонов» в крови. У опытных и контрольных коров изучали клиническое состояние, температуру тела, частоту пульса и дыхания. Новотельных коров опытной группы с 14-го дня после отела подвергли ЭМИ КВЧ воздействию для проявления полового цикла один раз в день аппаратом «Орбита» в течение 7 дней". Время прихода в охоту после отела определяли методом наблюдений, как минимум, 3 раза в день, стадии половых циклов - по общепринятым методикам.

В третьем научно-хозяйственном опыте изучали эффективность ЭМИ КВЧ воздействия»на оплодотворяемость коров при разных способах введения спермы (ректо-, визо- и маноцервикальном). Время ЭМИ КВЧ воздействия на коров всех трех опытных групп (по 15 коров в каждой) проводили в течение 7-10 мин непосредственно перед введением спермы, контрольных аналогов осеменяли без вибромассажа.

Оценку влияния ЭМИ» КВЧ. воздействия на эффективность искусственного осеменения коров проводили по показателям оплодотворяемости в первую и последующие охоты, индексу осеменения, продолжительности периода от отела до оплодотворения путем наблюдений и данных зоотехнического учета по общепринятым методикам. Искусственное осеменение коров проводили согласно действующей инструкции МСХ РФ, 2004 г.

Мы провели исследования по изучению влияния низкоинтенсивного магнитно-инфракрасного лазерного излучения на сроки инволюции матки у 40 мясных коров казахской белоголовой породы после нормального отела, из которых сформировали одну контрольную и три опытных группы по 10 голов в каждой. Воздействие осуществляли аппаратом «РИКТА - МВ» при устанавлении наиболее оптимального режима.

- Во -втором опыте, также, проведенном на 40-коровах, ставилась задача изучить влияние одинакового режима воздействия (3 мин) аппаратом «РИКТА - МВ», но1 в различные сроки, после отела. Коров 1-й опытной группы обрабатывали низкоинтенсивным магнитно-инфракрасным лазерным лучом через 5 дней после отела, 2-й - через 7дней, 3-й - через 10 дней после отела в течение 5 дней. В контрольной группе аппарат «РИКТА - МВ» не применялся.

Электропунктуру аппаратом «ЗооДиаДЭНС» проводили, воздействуя на зоны расположения 1 точек 30, 31, 32, 33 и 60 по 1, 2, 3 мин на 5-й день после отела при частоте импульсов аппарата 20 Гц. В контрольную группу входили шесть коров-аналогов.

Перед проведением электропунктуры очищали кожу в зоне воздействия и обрабатывали спиртом, так как известно, что влажность и загрязненность кожных покровов приводит к изменению электрического сопротивления и электропунктурное воздействие теряет свои терапевтические свойства.

Во втором опыте на 18 коровах после нормального отела применили третий режим воздействия (3 мин). Задачей исследований явилось определение сроков* инволюции матки у коров при электропунктурном воздействии аппаратом «ЗооДиаДЭНС» в течение 3 мин в разные сроки после отела. На точки акупунктуры 30, 31, 32, 33 и парную точку 60 коров 1-й опытной группы (п = 6) воздействовали аппаратом «ЗооДиаДЭНС» в течение 30 мин через 8 ч после отела. Во 2-й опытной группе электропунктуру на вышеуказанные точки при времени воздействия 3 мин проводили через 3 дня после отела, а через 7 дней - в 3-й опытной группе. Контрольную группу (безэлектропунктуры) составили шесть коров-аналогов.

В третьем опыте на 18 новотельных коровах применены различные режимы частоты аппарата «ЗооДиаДЭНС», при этом проводили электропунктуру по отработанным ранее схемам - т.е. через 8 ч после отела в течение 3 минут, но при различной частоте работы аппарата: 10 ± 2 (минимальная частота), 20 ± 2; 60 ± 2 Гц. Электропунктурное воздействие аппаратом-«ЗооДиаДЭНС» проводили на точки 30, 31, 32, 33 и 60i Мощность (Р) воздействия аппаратом подбирали для каждого животного индивидуально допроявлениябеспокойства.

Изучению влияния применениям электропунктуры на эффективность оплодотворения после искусственного осеменения коров сформировали три контрольных и три опытных группы по 6 голов в каждой: Электропунктуру проводили через 15 мин после введения спермы, воздействуя на точки акупунктуры 30, 31, 32, 33, 60 в течение З'мин при частоте работы аппарата 10 Гц.

Клинические и морфологические, биохимические и эндокринные показатели коров (температура, пульс, дыхание) при изучении биофизических средств определяли по принятым в физиологии и клинической диагностике методикам.

Статистическую обработку экспериментального материала проводили на персональном компьютере с использованием программы Microsoft Excel.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Раздел 4.1. Биотехнологические приемы управления воспроизводством маточного стада в мясном скотоводстве.

С целью детализации' временных параметров продолжительности полового цикла, прихода коров в охоту, овуляции и динамики развития фолликулов были проведены собственные исследования на животных без клинически выраженной патологии репродуктивной системы. У 23 коров инъекцией эстрофана (500 мкг), при наличии хорошо выраженного жёлтого тела в одном из яичников, индуцировали охоту. Типичные клинические признаки охоты, в среднем через 34,3 часа после инъекции, проявила 21 корова, у которых исследовали динамику роста фолликулов от 1-й до 2-й овуляции (таблица 1).

Таблица 1- Сроки прихода коров в охоту, овуляция, динамика развития и размер фолликулов

Число коров, п 23

Число животных, проявивших охоту и овуляцию в индуцированную охоту, п 21

Интервал времени между инъекцией эстрофана и появлением признаков охоты, час 34,3±1,03*

Продолжительность цикла, дней 21,7±0,91*

Количество животных (п-%) с двумя волнами роста популяции фолликулов тремя волнами роста популяции фолликулов 16(76,1) 5 (23,9)

Срок появления второй волны роста фолликулов, дней 11,3±0,69

Срок появления третьей волны роста фолликулов, дней 16,3±1,09**

Продолжительность доминирования фолликула, дней 6,1±1,79*

Диаметр доминантного фолликула перед овуляцией, мм 15,8±0,02***

Интервал времени от начала эструса до овуляции, час 26,1±1,71*

Примечание: здесь и далее: *Р<0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001 , г

66

Продолжительность цикла, в среднем, составила 21,7±0,91 дней. Большинство животных на протяжении цикла имело 2 волны роста фолликулов (76,1% против 23,9%). При этом продолжительность существования доминантного фолликула, как при двух-, так и при трёхволновом росте популяций составляла 6,1 ±1,79 дней. И при двух- , и при трёхволновом росте популяций размеры доминантного фолликула составили, в среднем, 15,8±0,02 мм в диаметре.

Интервал времени от первых признаков охоты до овуляции составил 26,1±1,71 часа. У животных с двухволновым типом роста фолликулов (16 гол.) доминантный фолликул (ДФ) первой волны роста достигал максимума на 8-й день, второй волны - на 21-й день (16,5.17,0 мм); на 22-ой день у большинства коров была зафиксирована овуляция. У животных с трёхволновым типом роста фолликулов (5 гол.) доминантный фолликул первой волны имел максимальный диаметр на 9. 10 день, второй волны - на 16 день и третьей волны - на 23 день (16,6. 16,7'мм), далее происходила овуляция. Продолжительность полового цикла незначительно различалась между группами животных с различным количеством < волн роста фолликулов, в пределах 2-х дней.

Таким образом, фолликулогенез - это постоянно продолжающийся процесс на протяжении продуктивной жизни коровы, который происходит непрерывно до тех пор, пока не истощится запас примордиальных фолликулов. На протяжении полового цикла в большинстве случаев отмечаются две или три волны роста фолликулов. Фолликулярная волна начинается с выделения группы (2.6 шт.) антральных фолликулов диаметром 2.5 мм. Наиболее высокую концентрацию прогестерона (6, 4 нг/мл) наблюдали на 16-й день у коров с тремя волнами роста, у коров с двумя волнами - на 12-й день (5,9 нг/мл). В то же время, у коров с двумя волнами повышение и снижение концентрации прогестерона носило плавный характер и имело более высокие значения на протяжении всего цикла, исключая 14 и 16-й дни, (рис.5). I

I 6

1 5

4 с.

3 « 2

С 1 О о о 8

10

12 14 16 18 20 22

Количество дней после овуляции У животных с двумя волнами роста фолликулов ■ У животных с тремя волнами роста фолликулов

Рис. 5- Средние значения концентрации прогестерона на протяжении эстрального цикла у коров с двумя и тремя волнами роста фолликулов

Размер жёлтого тела при пиковых значениях прогестерона был несколько большим у животных с тремя волнами роста фолликулов (рис.6). Не было замечено какой-либо корреляции размера жёлтого тела с концентрацией прогестерона в плазме крови между двумя группами животных.

8 6 V со с

V Э 4

0 1

К 2

1 1 п о

4,2

1,8

0 0 гп 5,Р'3

4,1

3,9 3,3,9

1-1-1 - I-1-1-г

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 Количество дней после овуляции

О У животных с двумя волнами роста фолликулов □ У животных с тремя волнами роста фолликулов

2,8 9

22

Рис. 6- Размер жёлтого тела на протяжении эстрального цикла у коров с двумя и тремя волнами роста фолликулов

Рис. 7- Средние значения концентрации эстрадиола на протяжении эструса

Концентрация эстрадиола в период эструса была также исследована у групп коров, включающих животных с двумя и тремя волнами роста популяции фолликулов, (рис.7). Максимальная концентрация эстрадиола (16,1пкг/мл) наблюдалась, примерно, через 2.4 часа после начала эструса.

Коровы с двумя волнами роста фолликулов Коровы с тремя волнами роста фолликулов

Количество дней после овуляции

Рис. 8- Средние значения концентрации ФСГ на протяжении эстрального цикла у коров с двумя и тремя волнами роста фолликулов.

Пик концентрации ФСГ наблюдался на 11. 12 дни у коров с двумя волнами роста фолликулов и на 4-5-й и 15-16 дни у коров с тремя волнами роста (рис.8).

Учитывая строгую последовательность циклического ритма овариальной функции, волнообразное развитие и рост популяции антральных фолликулов, созревание доминирующего фолликула последней волны роста популяции, овуляция - развитие жёлтого тела, является центральным явлением периодической функциональной деятельности яичника. В связи с периодичностью половых процессов следует детерминировать овуляцию, которая разделяет фолликулярную и прогестативную фазу морфологических изменений. В эндометрии этому соответствуют пролиферативная и секреторная фазы.

Таким образом, овуляция не просто центральное явление в периодической функциональной деятельности, а играет центральную роль в рамках полового цикла в« качестве механизма, дающего пригодную для оплодотворения яйцеклетку и. обусловливающего гормональную ситуацию, соответствующую * плодотворному - осеменению и подготавливающую ■ организм к беременности.

Обобщив большое число данных, полученных в результате собственных исследований, и данных- других авторов можно прийти к выводу, что в среднем продолжительностью полового цикла у коров следует считать 21 день, у тёлок (к периоду случки) - 20 дней. Собственный опыт показывает, что минимальная вариабельность продолжительности цикла встречается в возрасте коровы между 3.5 лактациями, когда воспроизводительная функция наиболее «точно отрегулирована», причем точность растет к пределам оптимума воспроизводительного периода. Увеличение степени вариабельности продолжительности цикла (с преобладанием в сторону уменьшения) наиболее выражено у старых животных.

Нами проведена сравнительная оценка эффективности применения для лизиса жёлтого тела цикла отечественных аналогов простагландина -эстуфалана, анипроста и клатрапростина. В качестве объективного критерия» исследовалась динамика гормонального фона в крови подопытных животных.

Препараты выпускают научно-производственные отделения института органической химии РАН (г.Уфа), с рекомендуемой дозой внутримышечного введения 2 мл, содержащей 500 мкг действующего вещества. В последних сериях лютеолитических агентов - анипроста и клатрапростина, масса активного действующего вещества в дозе препаратов была снижена в 2 и 4 раза, соответственно. По данным* производственных испытаний для получения* синхронизационного эффекта охоты- с использованием этих препаратов необходимо введение- дозы- в 1,5.4,0 раза, больше рекомендуемой. Проведённый анализ динамики гормонального фона показал, что как анипрост, так и клатрапростин в рекомендуемых дозах (2-мл).не обеспечивают полного лизиса ткани жёлтого тела. Изменения уровня- концентрации прогестерона- в. течение 72 часов, после инъекции препаратов составили' лишь 0,2.0*55 нг/мл при исходном значении показателя. 1,7±0,24 нг/мл. Известно, что в- таких случаях большинство животных, вследствие слабой реакции на простагландин в охоту, не приходит или проявляет «тихую охоту», т.е. без клинически выраженных признаков.

Нами была увеличена дозировка анипроста и клатрапростина до 500 мкг действующего вещества (по клопростенолу). Сравнительное испытание провели на трёх группах: первой группе (п=20) вводили эстуфалан, второй (п=27) и третьей (п=27) группам- - анипрост и клатрапростин, соответственно. Исходный уровень стероидных гормонов в группах животных был приблизительно одинаковым. Концентрация прогестерона по группам составляла 1,78±0,33, 1,92±0,76 и 1,90±5,7 нг/мл, а эстрадиола - 29,0±2,34, 25,0±3,7 и 27,0±3,70 нг/мл. Резкое снижение содержание концентрации прогестерона до 0,08±0,02 нг/мл (т.е. до требуемого оптимального уровня во время охоты) после инъекции эстуфалана произошло практически у всех животных через 48 часов. Снижение концентрации прогестерона в крови животных второй и третьей групп происходило асинхронно (таблица 2).

Таблица 2 - Сроки достижения оптимального гормонального профиля

Показатель груп па Интервал между инъекцией и взятием проб крови, (час)

24 48 60 72 84

Число коров со I 1 .10,0 18.90,0 1.10Д - снижением концентрации II 13,7 10.37,1 9.33,3 4.14,8 3.11Д прогестерона до базального

III 1.3,7 9.33,3 10.37,1 2.7,4 5.18,5 уровня

Во всех случаях при аналогичных сроках происходило повышение до максимальных величин концентрации эстрадиола до 31,5±3,5-40,0±5.2 пг/мл, причём совпадало по времени с клинически выраженными признаками охоты.

Таким образом, анализ полученных данных позволяет сделать заключение, что инъекция эстуфалана через 48 часов приводит к синхронному лизису жёлтых тел у большинства коров. Анипрост и клатрапростин также обладают высокой лютеолитической активностью, однако, при низкой синхронности её проявления.

Лютеолитический эффект препаратов ПГФ2 а при полноценном желтом теле повышается от применения их в сочетании с другими биорегуляторами, например, с эстрогенами по следующей схеме: однократно внутримышечно ПГФ2 а (энзапрост-Ф) в дозе 15 мг/гол. или эстрофан - 0,25 мг/гол. с последующей инъекцией эстрадиола дипропионата 0,1% масляного раствора в дозе 2 мг/гол. (20 тыс. ед.). Время восстановления половых циклов составляет 5-10 дней, что увеличивает оплодотворяемость на 8,9 - 19,1%.

Показания к применению синтетических простагландинов могут быть-как биотехнические, связанные с синхронизацией и регулированием процессов размножения; так и терапевтические, при патологиях послеродового периода, расстройствах функции яичников.

Применение всех синтетических простагландинов показало равную эффективность (таблица 3). Доля, как коров, так и тёлок, пришедших в охоту, была довольно высокой при совсем незначительных колебаниях.

Таблица 3- Эффективность применения синтетических простагландинов при введении на 10-12 день спонтанного цикла

Группа Препарат Обработано -животных Пришли в охоту Плодотворно осеменили в индуцированную охоту %, к числу осеменённых в индуцированную охоту всего за две охоты (индуц. и последующую спонтанную) %, к числу обработанных животных п % п % п, % п %

Коровы-

I клатрапростин 30 100,0 27" 90,0 14 51,9 2Ф 80,0

II. эстуфалан 30 100,0' 2& 93,3 14' 50,0 22 73,3

III суперфан 30 100,0 28' 93;9 13' 46,4 24' 80$

IV эстрофан* 30 100,0 28 93 ;3 15 53,6 24 80,0

Телки

I клатрапростин 30 100,0 ■ 27 90,0 14 51,9 25 83,3

II эстуфалан 30 100,0^ 28' 93,з; 15 53;6 26 86,7

III суперфан 30 100,0- 27 90,0 14 51,9 25- 83,3

IV эстрофан 30 100,0 28 93,3 15 53,6 24 80,0

Практически у всех животных охота началась через 48 часов. Коров пришло в охоту от 90,0 до 93,3%. Те же самые показатели и по группам тёлок. Как по группам коров, так и по группам тёлок, были получены удовлетворительные показатели оплодотворяемости после осеменения в индуцированную* охоту. Различия этих показателей по группам, были^ более значительными, чем. показатели прихода в охоту однако также недостоверны.

По группам коров оплодотворяемость в индуцированную охоту колебалась от 46,4 до 53,6, по группам тёлок - от 51,9 до 53,6 (таблица 4). Следует отметить низкую оплодотворяемость коров после применения суперфана -46,4% относительно групп коров, где вводили клатрапростин и эстуфалан. Общее количество осеменённых коров и тёлок в индуцированную и сполнтанную охоту имели довольно высокие показатели по группам при незначительных колебаниях. Причём, в трёх группах коров был равный показатель - 80. По группам тёлок общий процент стельностей составлял 80,0.86,7%. В продолжение экспериментов провели испытание тех же синтетических простагландинов двукратной, с интервалом 11 дней инъекцией. Первую инъекцию (независимо от функционального состояния яичников) провели в период с 6 по 18 день полового цикла.

Таблица 4 -Эффективность первой инъекции синтетических простагландинов 'в период с 6 до 18 день спонтанного полового цикла Группа Препарат Число животных Пришлив охоту Плодотворно осеменили всего,п %лК числу осеменений п % п %

Коровы

I клатрапростин 30 100;0 16 53,3 • 8 50,0 >

II эстуфалан 30' 100,0 14 46,7 7 50,0

III суперфан 30 100,0 15 50,0 7 46,7

IV эстрофан 30 100,0 15 50,0 7 46,7

Телки

I клатрапростин 30» 100,0 16 53,3 8 50,0

II эстуфалан 30« 100,0 17 56,7 9 52,9

III суперфан 30 100,0 16 53;3 9 56,3

IV эстрофан 30 100,0 16 53,3 8 50,0

Как и в первом эксперименте, после первого введения во всех группах коров и тёлок были получены, с недостоверной разницей, приблизительно одинаковые результаты. Индуцированную охоту зафиксировали по группам коров при применении суперфана и эстрофана у половины обработанных животных, при введении клатрапростина у 53,3%, а при введении эстуфалана

- у 46,7%. В то же время, по группам тёлок при введении эстуфалана процент пришедших в охоту был наивысшим - 56,7%, а в других трёх группах равным, 53,3% (таблица 5). Оплодотворяемость в индуцированную охоту по группам коров была от 46,7 до 50,0%, по группам тёлок от 50,0 до 52,9% при недостоверной разнице. Несколько выше была оплодотворяемость при введении суперфана - 56,3%.

Таблица 5 -Эффективность второй инъекции синтетических простагландинов животным, не пришедшим в охоту после первой инъекции

Плодотворно осеменили

Группа Препарат Число животных Пришли в охоту в индуцированную охоту %, к числу осеменённых в индуцированную охоту всего %, к числу обработанных животных п % п % п % п %

Коровы

I клатрапростин 14 100,0 11 78,6 6 54,5 10 76,9

II эстуфалан 16 100,0- 10 62,5 5 50,0 9 75,0

III суперфан 15 100,0 10 66,7 5 50,0 8 66,7

IV эстрофан 15 100,0 9 60,0 5 55,6 9 75,0

Телки

I клатрапростин 14 100,0 11 78,6 5 45,6 10 76,9

II эстуфалан 13 100,0 9 69,2 5 55,6 9 75,0

III суперфан 14 100,0 10 71,4 5 50,0 10 76,9

IV эстрофан 14 100,0 10 71,4 5 50,0 9 75,0

Через И дней после первой инъекции простагландинов коровам и тёлкам, не проявившим признаки индуцированной охоты, провели повторные инъекции. В процентном отношении животных, пришедших в охоту после второй инъекции, было больше, чем после первой инъекции (таблица 6). Разница показателей по группам была недостоверна. В целом по группам был удовлетворительный показатель оплодотворяемости в индуцированную охоту, по группам коров от 50,0 до 55,6%, по группам тёлок от 50,0 до 55,6%.

Таблица 6- Эффективность второй инъекции синтетических простагландинов животным, не пришедшим в охоту после первой инъекции

Группа Препарат Число животных Пришли в охоту Плодотворно осеменили в индуцированную охоту % к числу осеменённых в индуцированную охоту всего % к числу обработанных животных п % п % п % п %

Коровы

I клатрапростин 30 100,0 27 90,0 14 51,9 18 60,0

II эстуфалан 30 100,0 24 80,0 12 50,0 16 53,3

III суперфан 30 100,0 25 83,3 12 48,0 15 50,0

IV эстрофан 30 100,0 24 80,0 14 58,3 16 53,3

Телки

I клатрапростин 30 100,0 27 90,0 13 48,1 18 60,0

II эстуфалан 30 100,0 26 86,7 14 53,8 18 60,0

III суперфан 30 100,0 26 86,7 13 50,0 19 63,3

IV эстрофан 30 100,0 26 86,7 13 50,0 17 56,7

Приблизительно такие же показатели оплодотворяемости в индуцированную охоту были после первой инъекции. В дальнейшем животных, не осеменившихся в индуцированную охоту, осеменили ещё раз по мере прихода в спонтанную охоту. Учитывая число плодотворных осеменений после второй обработки в индуцированную и спонтанную охоту вместе, вывели общие показатели оплодотворяемости.

Они были достаточно высокими, хотя и ниже, чем в первом эксперименте. По результативности двух инъекций простагландинов проанализировали общую объективность обработок относительно общего числа животных, пришедших в охоту и оплодотворяемых в индуцированную

1 ! I

76 1 охоту и индуцированную и последующую спонтанную охоту вместе относительно общего числа обработанных животных, причём по каждой группе (препарату) отдельно (таблица 7).

Таблица 7- Влияние интервала от аппликации простагландина до начала охоты на результаты осеменения (при двукратном, с интервалом 11 дней введении)

Группа Препарат Осеменено животных после прихода в охоту через 24 часа через 48 часа через 72 часа всего стало стельны ми всего стало стельны ми всего стало стельны ми п % п % п % п % п % п %

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Первая инъекция коровы

I клатрапрос тин 3 100 1 33,3 10' 100 6 60,0 3 ЮОг 1 33,3

II эстуфалан 2 100 2 100 9 100 4 44,4 3 100 1 33,3

III суперфан 3 100 1 33,3 10 100 5 50,0- 2 100-' 1. 50,0

IV эстрофан 3 100 1 33,3 9 100' 4 55,6 2 100 -

Всего по четырём группам 11 100 5 45,5 38 100 20 52,6 10 100 3 37,5 телки

I клатрапрос тин 4 100 1 25,0^ 11 100 7 54,5 1 100 -

II эстуфалан! 4 100 1 25,0 11 100 7 63,2 2 100 1 50,0

III суперфан 2 100 1 50,0 9 100 7 66,6 5 100' 1 20,0

IV эстрофан 5 100 1 20,0 10 100 7 70,0 1 100 -

Всего по четырём группам 15 100 4 26,7 41 100 28 68,3 9 100 2 22,2

Вторая инъекция коровы

I клатрапрос тин 2 100 2 100 8 100 4 62,5 1 100 -

II эстуфалан, 1 100 - - 8 100 5 75,0 1 100 -

III суперфан 2 100 - - 8 100 5 62,5 - 100 -

IV эстрофан 1 100 - - 6 100 6 100 2 100 1 50,0

Всего по четырём группам 6 100 2 33,3 30 100 20 66,6 4 100' 1 25,0

Продолжение таблицы 7. телки

I клатрапрост ин 2 100 2 100 8 100 5 62,5 1 100 - и. эстуфалан 1 100 1 100 8 100 5 62,5 - 100 -

III суперфан 2 100 1 50,0 6 100 3 50,7 2 100 1 50,0

IV эстрофан 3 100 1 33,3 6 100 4 66,7 1 100 -

Всего по четырём группам 8 100 5 25,0 28 100 17 60,7 4 100 1 25,0

Общее число пришедших в индуцированную охоту животных по группам имело незначительные колебания от 80,0 до 93,3% по группам коров и от 86,7 до 90% по группам тёлок. В целом, оплодотворяемость в индуцированную охоту составила от 50,0 до 58,3%, а индуцированную и последующую спонтанную - 50,0-63,3%.

Проанализированы показатели оплодотворяемости в индуцированную охоту начавшуюся после' первой и второй инъекции через 24, 48 и 72 часа (таблица 8). В целом, приемлемые показатели 45,5% и 26,7% соответственно у коров и тёлок констатировали в охоту начавшуюся через, 24 часа после обработок.

Аналогичные показатели • в охоту через 48 часов были существенно выше - 52,6 и 37,5%. После второй обработки прослеживали аналогичную зависимость - наилучшая результативность осеменения, была в, индуцированную охоту через 48 часов после инъекции, при общем показателе оплодотворяемости у коров и тёлок, соответственно, 60,6 и 60,7%. В охоту, наступившую через 24 и 72 часа аналогичные показатели были меньше на 33,3.35,7% и на 41,6.35,7%, соответственно. Можно утверждать, что аналогичная тенденция прослеживается по каждой группе коров и тёлок.

Различная реакция животных при синхронизации половых циклов'на простагландин зависит от целого ряда факторов. Считают, что реакция зависит от дня обработки и сезона года.

Таблица 8 - Эффективность комбинированного с гонадотропинами применения простагландинов для синхронизации охоты у коров при фронтальной обработке

Показатель клатрапростин эстуфалан суперфан всего по трём группам п % п % п % п %

ГСЖК (500 И Е)

Число обработанных животных 40 100,0 40 100,0 40 100,0 120 100,0

Пришли в охоту в т.ч. через: 36 90,0 35 37,5 32 80,0 103 85,8

24 часа 6 15,0 4 10,0 5 12,5 15 12,5

48 часов 28 70,0 29 72,5 24 60,0 81 67,5

72 часа 2 5,0 2 4,9 3 7,5 7 5,8

Не проявили признаки охоты 4 10,0 5 12,5 8 20,0 17 14,2

Оплодотворяемость в индуцированную охоту 25 69,4 25 71,4 23 71,9 73 70,9 с эоллитропин (ЗОО ед)

Число обработанных животных 40 100,0 40 100,0 ,40 100,0 120 100,0

Пришли в охоту в т.ч. через: 36, 90,0 37 92,5 37 92,5 110 91,7

24 часа 5 12,5 4 10,0 5 12,5 14 11,7

48 часов 29 72,5 ' 32 80,0 31 77,5 92 76,7

72 часа 2 5,0 1 2,5 1 2,5 4 3,3

Не проявили признаки охоты 4 10,0 3 7,5 4 10,0 11 9,2

Оплодотворяемость в индуцированную охоту 26 72,2 26 70,3 27 72,9 78 70,9

Комбинированное введение простагландинов и ГСЖК по данным ряда исследователей эффективно при проведении обработок на 8.12 дни полового цикла, причём хорошие показатели могут быть получены при обработках животных на 11. .12 дни полового цикла при наличии в яичниках типичного жёлтого тела.

В своих исследованиях мы испытали эффективность комбинированного введения ГСЖК в дозе 500 ИЕ или фоллитропина в дозе 300 ед. с простагландинами для синхронизации охоты у коров фронтально. Не было выявлено существенных различий между группами коров, в которых применяли клатрапростин, эстуфалан, суперфан и эстрофан (таблица 8). В то же время необходимо отметить, что при введении в схему обработок фоллитропина по сравнению с ГСЖК (таблица 9) даёт несколько лучшие показатели относительно общего числа коров с индуцированной охотой - 91,7 против 85,8, число приходящих в охоту через 48 - часовой интервал после обработки - 76,7 против 67,5, меньше животных приходит в охоту через 72 часа - 3,3 против 5,8. Тем не менее, общие показатели оплодотворяемости после осеменения в индуцированную охоту оказались, равными (70,9%). ,

Учитывая данные литературы о том, что доля стельностей в индуцированную охоту может увеличиваться до 90% при дополнительной аппликации Оп-Ш1 и, что данные по этому вопросу не однозначны, мы провели сравнительные исследования эффективности введения перед осеменением синтетических гонадолиберинов - диригестрана в дозе 5,0 (производство фирма «Лечава». Чехия) и отечественных - сурфагона в дозе 5,0 мл или ХГЧ 1000 ИЕ. Препараты вводили коровам и тёлкам- в охоту, индуцированную как только простагландинами, так и комбинированными методами - простагландинами в сочетании с ГСЖК или фоллитропином. Различия по группам показателей были незначительными и недостоверными (таблица 9).

Введение как диригестрана, так и сурфагона увеличивало процент плодотворных осеменений до 80.85% и у коров, и у тёлок. Введение хориогонина дало во всех случаях стабильно одинаковый результат - 80,0% стельностей от числа осеменений.

Таблица 9 - Эффективность осеменения коров и тёлок в индуцированную охоту при аппликации перед осеменением препаратов гонадолиберина или ХГЧ

Синтетический гонадолиберин ХГЧ Общая эффективность

Показатель диригестран сурфагон (хориогонин) осеменения число получено число получено число получено число получено осемененных стельностеи осемененных стельностей осемененных стельностей осемененных стельностеи животных животных животных животных п % п % п % п % п % п % п % п %

Коровы простагландин 20 100,0 16 80,0 20 100,0 17 85,0 ■ 20 100,0 16 80,0 60 100,0 49 81,7 простагландин+ 20 100,0 17 85,0 20 100,0 17 85,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 50 83,3

ГСЖК простагландин+ 20 100,0 16 80,0 20 100,0 16 80,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 48 80,0 фоллитропин

Тёлки простагландин 20 100,0 17 85,0 20 100,0 16 80,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 49 81,7 простагландин+ 20 100,0 16 80,0 20 100,0 17 85,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 49 81,7

ГСЖК простагландин+ 20 100,0 17 85,0 20 100,0 17 85,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 50 83,3 фоллитропин

Общая эффективность стабилизации овуляции гонадолиберинами и ХГЧ при всех трёх применяемых методах синхронизации охоты у коров и тёлок колебалась от 80 до 83,3%.

Опыты других исследователей по синхронизации охоты простагландином с дополнительным введением хориогонического гонадотропина подтвердили его лютеотропное ЛГ-действие, которое, не способно предотвращать регрессию жёлтого тела, вызванную простагландином. Введение в обработки с целью синхронизации охоты синтетических гонадолиберинов (таблица 10) даёт положительные результаты более стабильно. В синхронизированную охоту отчётливо улучшалась оплодотворяемость до 80.90% при стабилизации сроков наступления и продолжительности охоты. Точности синхронного проявления охоты у коров, возможно при включении в обработку инъекции эстрадиола бензоата через 48 часов после инъекции простагландина.

Таблица 10 — Эффективность введения синхронизации охоты1 простагландинами при различных дозах ХГЧ и эстрадиола

Показатель Число коров Интервал до начала эструса, час. Лимиты, час. Число коров с ЖТ на 10 день Число коров с кистозными яичниками

I группа (ХГЧ-1250 ИЕ эстрадиол-5 мг) 12 34±6,3 24.38 8 4

II группа (ХГЧ-750 ИЕ эстрадиол-3 мг) 12 35,5±2,4 30.40 12

Отрицательной стороной при этом считается вероятность образования у определённого числа коров овариальных кист, однако этот негативный фактор можно нивелировать за счёт введения ХГЧ.

В этой связи нами были проведены испытания обработок простагландином с комплексом ХГЧ-эстрадиол бензоата через 12 часов после инъекции простагландина, т.е. тогда, когда регрессия жёлтого тела ещё не завершилась. Исследование состояло из 2-х последовательных частей. В 1 части испытывали эффективность различных дозировок. Во 2-ой; части; определяли репродуктивные показатели- после обработок при пальпаторно-зафиксированном жёлтом теле, но без предварительного выявления охоты. Исследования проводили на здоровых коровах, по З-ей-4-ой лактации, через 2-3 месяца после отёла.

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных", Байтлесов, Ербулат Упиевич

ГЛАВА 6. ВЫВОДЫ

1. В условиях сельхозпредприятий Республики Казахстан, не зависимо от форм собственности и технологий содержания, кормления и эксплуатации; нарушения функции органов репродуктивной системы регистрируют, в среднем, у 20,2-22,7% мясных коров; в структуре репродуктивных нарушений преобладают гипофункциональное состояние яичников, которые периодически в отдельных хозяйствах регистрируют у 20,8-90,1% лактирующих коров.

2. Одним из основных сезонных факторов, снижающих репродуктивную активность мясных коров, является термальный стресс, приводящий в пастбищный период к нарушению гормонального статуса организма. Проведение биотехнических мероприятий, активизирующих репродуктивную функцию с включением в схемы обработок, средств, потенцирующих функцию желтого тела, а также метафилактического воздействия' на. матку позволяет нивелировать сезонное снижение показателей оплодотворяемости коров; в т.ч. и за счёт снижения: эмбриональных потерь. Многочисленные варианты предовуляторного; гормонального дисбаланса, приводящего5 к: нарушениюшроцесса::Спонтанно№ и индуцированной] овуляции; сводятся; в конечном счёте, к сдвигу пика ЛГ во, временных и/или количественных параметрах. Введение в режимы, обработок с целью регуляции репродуктивной; функции-; синтетического аналога гонадолиберина приводит к оптимизации ; параметров . пика ЛГ.

3. Рассеивание сроков начала индуцированной охоты является основным фактором, негативно влияющим на результаты синхронизации. Степень! рассеивания зависит от морфо-функционального состояния яичников коров, которое определяется реакционной способностью жёлтого тела и возрастом растущего межэстрального фолликула. Введение в: схему обработок препаратов гонадотропина и гонадолиберина унифицирует овариальные процессы, стабилизирует сроки; начала охоты, что-повышает результативность осеменений при проведении биотехнических мероприятий:

4. Полученные данные обосновывают необходимость при определении способа регуляции функциональной активности яичников учитывать уровень концентрации прогестерона. Индуцирование охоты у здоровых коров эффективно при концентрациях от 3,7 до 4,7 нг/мл. Использование фоллимага и магэстрофана при гипофункциональном состоянии яичников эффективно при значениях не ниже 0,5 нг/мл. При более низких концентрациях в схему обработок целесообразно включать сурфагон в дозе 10,0 мл.

5. В хозяйствах 37,8% мясных коров имеют задержку возобновления овариальной активности после отёла. При этом, пролонгирование лютеальной фазы и задержку первой овуляции регистрировали наиболее часто, что и являлось основной причиной задержки возобновления нормальной овариальной цикличности. В свою очередь, причинами пролонгации лютеальной фазы и задержки первой1 овуляции является задержка инволюции матки в течение 35' дней. Восстановление нормофункциональной циклической активности- яичников1 у коров после 1 отёла завершается быстрее, чем восстановительные процессы в эндометрии и . маточной среде; достигаемая за счёт овариостимуляции' стабилизация; функциональной: деятельности яичников ускоряет завершение - восстановительных процессов в матке.

• 6. Исследованиями по овариостимуляции в послеродовой период установлено, что для этой цели наиболее эффективен комплекс препаратов: прогестерона, простагландина, гонадотропина и гонадолиберина. С одинаковой эффективностью для этой цели можно применять как отечественные, так и импортные препараты. Регламентировать режимы обработок следует таким образом, чтобы первая овуляция произошла не ранее 21 дня после отёла. Выясненная возможность взаимонаправленности патогенетического процесса матка-яичники диктует необходимость комплексных методов лечения и профилактики.

7. Особенностью эмбриогенеза здоровых и проблемных высокопродуктивных коров является снижение скорости развития эмбрионов' - как ранних, так и поздних морул и бластоцист. Замедленное развитие эмбрионов сопровождается нарушениями на ультраструктурном уровне, косвенно определяемыми методом культивирования. Морфологические изменения эмбрионов на ультраструктурном уровне и скрытые морфо-функциональные нарушения в эндометрии, способствующие нецелесообразному выбросу маточного простагландина, приводят к эмбриональной гибели. Введение прогестагенных препаратов мясным коровам на 6-8 день после осеменения повышает нормы стельности, благодаря снижению эмбриональных потерь. С равной- долей успеха для снижения эмбриональной смертности коровам можно вводить сурфагон или ХГЧ наЛО-11-й день после осеменения.

8. Проведение воздействий низкоинтенсивным электромагнитным излучением КВЧ мм-диапазоном (частота 129 ГГц), магнитно-инфракрасно-лазерным и динамической электронейростимуляцией на биологически активные точки для профилактики, и нормализации- оворальных нарушений в комплексе с биорегуляторами нового'поколения, повышает эффективность биотехнических мероприятий- по регуляции репродуктивной функции мясных коров. Низкоинтенсивное электромагнитное воздействие КВЧ ммт диапазона, магнитно-ифракрасно-лазерным излучением, а^ также динамической электронейростимуляцией в рекомендуемых параметрах нормализует и повышает иммунобиологический, статус животного, не оказывая негативного влияния на экологическую чистоту получаемой продукции.

9. Квантовое воздействие на зоны точек 30, 31, 32, 33 и 60 аппаратами «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС» в течение 5 дней по 1, 2, 3 мин на 5-й день после отела в базовом режиме оказало положительное влияние на послеродовые инволюционные процессы половой системы коров. Несмотря на различный временной режим воздействия, срок инволюции тела и рогов матки во всех опытных группах был достоверно короче и составил 23,16 ± 0,61; 22,5 ± 0,78; 18,96 ± 0,42 дня в опытных группах и 28,74 ± 0,58 дня - в контрольной.

10. При режиме воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС» 3 мин через 8 ч после отела биохимические показатели крови на начало и конец опыта находились в пределах физиологической нормы. Уровень общего белка в сыворотке крови коров опытных групп на начало опыта составлял от 8,0 ± 0,25 до 8,4 ± 0,9 г%. Резервная щелочность крови коров опытных групп на начало опыта колебалась от 32,8 ± 2,7до 38,9 ± 2,4 об/% С02. Показатели каротина в сыворотке крови в опытных группах на начало опыта составляли от 0,1 ± 0,8 до 0,4 ± 0,07 мг%, в контрольной группе - 0,2 ± 0,1, т.е у всех животных они были ниже физиологической нормы, что типично для конца зимнего стойлового периода в Западном Казахстане. Данные биохимического и морфологического состава крови свидетельствуют

I ' о безвредности воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА-МВ» и «ЗооДиаДЭНС» на организм животных.

11. При различных сроках воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС» в течение 3 мин (через 8 ч после отела, через 3 и 7 дней после отела) восстановление репродуктивной функции - коров во всех -опытных группах было достоверно короче, чем в контрольной. Так, наступление охоты у мясных коров было достоверно короче на 8,37 и 5,87 дня, чем во 2-й и 3-й опытных группах, и составило 28 ± 1,02 дня (р>0,05). В контрольной группе охота наступила на 9,37 дня позже, чем в 1-й опытной. Применение различной частоты воздействия не оказало отрицательного влияния на восстановление половой функции коров. Разница показателей в опытных группах не имела достоверных различий, сроки наступления первой охоты колебались от 31,5 ± 1,29 до 33,5 ± 0,84, в контрольной группе коров первая охота наступила на 39,8 ± 0,87 дня.

ГЛАВА 7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Биотехнические мероприятия по повышению показателей воспроизводительной активности высокопродуктивных мясных коров следует проводить в комплексе с электромагнитным излучением крайне высоких частот мм-диапазона, низкоинтенсивным магнитно-инфракрасно-лазерным и динамической электронейростимуляцией на матку и яичники, что обеспечит максимальную эффективность, не оказывая при этом негативного влияния на экологическую безопасность получаемой продукции.

2. С целью профилактики и улучшения», общепринятых показателей плодовитости коровам после отёла следует проводить стимулирование овариальной активности введением комплекса препаратов: сурфагон, прогестерон, простагландин, ГСЖК " в- ~ общепринятых дозировках и дозированием применением' аппаратов «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС».

3. Для устранения гипофункции яичников у коров при уровне концентрации прогестерона^ в крови более 0,5 нг/мл рекомендуется использовать фоллимаг (1'200-ИЕ) в сочетании-с магэстрофаном (500 мкг). При снижении содержания гормона ниже 0,5, нг/мл следует проводить комплексное лечение животных гестагенами, ГСЖК и ПГФ2а в общепринятых дозировках. —

4. Для снижения эмбриональных потерь и выравнивания сезонных показателей плодовитости коров целесообразно, в пастбищный период на 811 день после искусственного осеменения как в спонтанную, так и индуцированную охоту вводить гонадолиберины, ХГЧ на фоне предварительной'гестагенизации при сочетанном применении КВЧ, МИЛ и ДЭНС терапии органов репродуктивной системы.

5. В практике биотехнологии воспроизводства мясного скота рекомендуется использовать следующие аппараты: «Орбита», «РИКТА — МВ, «ЗооДиаДЭНС», для нормализации и стимуляции репродуктивной функции.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора ветеринарных наук, Байтлесов, Ербулат Упиевич, Саратов

1. Абдулкеримов X. Т. Патогенетическое обоснование применения Скэнар-терапии / X. Т. Абдулкеримов, Л. Л. Стародумова, Л. Н. Суворкина // Уральское медицинское обозрение. 2001. - № 2. — С. 3335.

2. Амарбаев Ш. М. Биотехническая стимуляция репродуктивности коров / Ш.' М. Амарбаев // Животноводство. 1987. - № 9. - С. 17-19.

3. Синхронизация стадий полового цикла у коров-доноров« и реципиентов при пересадке эмбрионов / Ш. М. Амарбаев, Б. X. Аббасов, Г. Г. Герасимов, И. Ю. Бабаев // Изв. АН Каз. ССР. Сер. биол. — 1988. -№ 3. — С. 78-82.

4. Анзоров В. Л. Влияние факторов внешней среды на репродуктивную функцию коров / В. Л. Анзоров, О. А. Зейналов, С. Н. Хилькевич // Квантовая терапия в ветеринарии: сб. тр. — М.: 2003. — С. 128-136.

5. Антонов В. Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран / В. Ф. Антонов. -М.: Наука, 1982. 150 с.

6. Антонюк В. С. Применение овогена и эстрофана для стимуляции исинхронизации охоты у мясных коров / В. С. Антошок, В. В. Жаркий, Ю. А. Горбунов // Вестн. АН БССР. 1983. - № 2. - С. 91-93.

7. Аппараты для КВЧ-терапии «Электроника СВЧ» / О. И. Писанко, Ю. Н. Муськин, О. Б. Хатнюк, В. А. Гайдук // 10 Российский симпозиум с международным участием. «Миллиметровые волны в биологии и медицине». Москва, 1995.-С. 181-183.

8. Артюх В. М. Сроки осеменения высокопродуктивных коров после отела / В. М. Артюх, А. М. Чомоев, М. В. Варенников // Зоотехния. -2004.-№6.-С. 24-27.

9. Ахмадеев А. Н. Гинекологическая диспансеризация коров при поточно-цеховой системе производства молока / А. Н. Ахмадеев, М. Г. Миролюбов, О. Н. Преображенский // Ветеринария. — 1986. — № 12. — С. 12-14.

10. Бавильский В. Ф. Скэнар-терапия в комплексном лечении эректильной дисфункции / В. Ф. Бавильский, А. В. Суворов, А. С. Матыгин //Андрология и генитальная хирургия: тез. науч. тр. — М., 2001.-С. 26-28.

11. Багманов М. А. Лечебно-профилактическое воздействие Хорио-фага / М. А. Багманов // Вестн. РАСХН. 1997. - № 3. - С.58-59.

12. Багманов М. А. Морфологические изменения в гениталиях коров в послеродовой период / М. А. Багманов // Материалы научно-производственной конференции по актуальным'вопросам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 2001. — С. 10-11.

13. Балковой И. И. Квантовая профилактика послеродового эндометрита / И. И. Балковой, В. В. Бауков, Д. В. Михайлов // Квантовая медицинаи новые медицинские технологии: материалы I Междунар. симпозиума (Словения). Блед, 2001. - С. 246-247.

14. Балковой И. И. Квантовая профилактика послеродового эндометрита у коров / И. И. Балковой, В. В. Бауков, Д. В. Михайлов // Квантовая терапия в ветеринарии. М., 2003. - С. 100-102.

15. Балковой И. И. Лазерная терапия в ветеринарной акушерской практике / И. И. Балковой, В. П. Иноземцев // Ветеринария. — 1999. — № 2. С. 33-34.

16. Балковой И. И. Лазерная терапия при лечении домашних животных / И. И. Балковой, В. П. Иноземцев // Ветеринария. 1997. - № 6. - С. 5355.

17. Балковой И. И. МИЛ-терапия мастита у коров / И. И. Балковой и др. // Ветеринария. 1997. - № 3. - С. 46-47.

18. Балковой И. И. Монолазерная профилактика задержания последа у коров / И. И. Балковой, В. В. Бауков, С. С. Макаримов // Ветеринария. -2001.-№ 9.-С. 34-35.

19. Барабаш В. И. Акупунктурная коррекция половой системы и вымени коров / В. И. Барабаш, Л. В: Тихонова // Ветеринария. 2001. - № 5. -С. 37-39.

20. Батраков А. Я. Разработка и совершенствование профилактических и лечебных мероприятий при воспроизводстве крупного рогатого скота с высокой молочной продуктивностью: автореф. дис. . д-ра. вет. Наук /А. Я. Батраков. — Воронеж, 1991. — 52 с.

21. Бахтина Л. Г. ДЭНАС-терапия в практике районного онколога / Л. Г. Бахтина // Динамическая электронейростимулирующая терапия. Новые рубежи и итоги эмпирического этапа развития: материалы междунар. юбил. симпоз. — Екатеринбург, 2003. — С. 106-111.

22. Безбородин В: В. Организация воспроизводства крупного рогатого скота и акушерско-гинекологических мероприятий; в новых условиях хозяйствования / В. В. Безбородин. Волгоград, 1997. - 220 с.

23. Белобороденко А. М. Влияние гиподинамии на половой аппарат коров и их репродуктивную активность / А. М. Белобороденко // Морфология. -1996.-№2.-С. 34-37.

24. Белобороденко А. М. Профилактика климатического и симптоматического бесплодия у коров в условиях Западной Сибири: автореф. дис. д-ра вет. наук /А. М. Белобороденко. Воронеж, 1990. -38 с.

25. Белов А. Д. Физиотерапия и физиопрофилактика болезней;животных /А. Д. Белов, И; М. Беляков, В: А. Лукьяновский. — М.: Колос, 1983. -154 с.

26. Белов А. Д. Определение тирсоидных гормонов радиоиммунологическим анализом у коров при дисфункции яичников / А.'Д. Белов; Е. В: Шарлей^ // Тезисы; докладов- 3-й; Всесоюзной! конференции? по сельскохозяйственной радиологии. Обнинск, 1990;.— С1 79-80:

27. Березов Т. Т. Биологическая химия / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровин;,— М.: Медицина,. 1998. -704 с. . .,

28. Бецкий О. В. Миллиметровые волны и перспективные области их применения; / О. В. Бецкий, Ю. Г. Яременко // Зарубежная радиоэлектроника. — 2002. — № 5. — С. 42-50. .

29. Бецкий, О.-.В:. Современные представления о механизмах воздействия низкоинтенсивных, миллиметровых волн на биологические объекты / О. В. Бецкий; Н. Н. Лебедева // Миллиметровые волны в биологии-и медицине.-2001.-№ 3 (23). С. 5-19.

30. Бецкий; О. В. Лечение электромагнитными полями / О. В. Бецкий, Н. Д. Девятков, Н. Н: Лебедева // Биомедицинская радиоэлектроника. -2000.-№7.-С. 3-7.

31. Бецкий. О. В. Миллиметровые волны и перспективные области их применения / О. В. Бецкий, Ю. Г. Яременко // Зарубежная радиоэлектроника 2000. - № 5. - С. 42-50.

32. Боголюбов В. М. Проблема оптимизации воздействий лечебными физическими факторами / В. М. Боголюбов // Вопр. курортологии, физиотерапии и лечеб. и физ. культуры. 1982. — № 3. - С. 1-6.

33. Богомолов Ю. В. Воспроизводительные функции коров / Ю. В.1

34. Богомолов, X. В. Загитов // Науч.-техн. бюл. / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние. СибНИПТИЖ. Новосибирск, 1978, вып. 24. - С. 45-47.

35. Богомолов Ю. В. Организационно-хозяйственные меры и применение биогенных стимуляторов для повышения плодовитости коров на промышленных фермах: автореф. дис. . канд. вет. наук / Ю. В. Богомолов. Новосибирск, 1989. - 19 с.

36. Болис Я. Мембраны и болезни / Я. Болис, Д. Ф. Хоффман, А. Леаф. — М., Медицина, 1980. 408 с.40: Буйлин В. А. Низкоинтенсивная лазерная терапия в гинекологии / В. А. Буйлин. М.: Аспект Пресс, 1995. - 60 с.

37. Буйлин В.А. Низкоинтенсивная лазерная терапия с применением матричных импульсных лазеров / В.А. Буйлин // Информ.-метод. сб.; под ред. О.' К. Скобелина. — М: Техника, 2000. — 124' с.

38. Буйлин В. А: Применение низкоинтенсивных лазеров в экстремальной медицине / В. А. Буйлин. — М.: Техника, 2000. -С. 16-17.

39. Буланкин А. Л. Разработка и применение новых лечебных препаратов при эндометритах, маститах коров и желудочно-кишечных заболеваниях телят: дис. . д-ра вет. наук в виде науч. докл. / А. Л. Буланкин. Краснодар, 1996. - 47 с.

40. Бурдов Г. Н. Низкоинтенсивный лазер для лечения и профилактики гинекологических заболеваний свиней / Г. Н. Бурдов // Ветеринария. — 2002. -№ 1.-С. 35-37.

41. Буянов А. А. О гормональном статусе у коров при фолликулярных кистах яичников / А. А. Буянов // Акушерство,, гинекология, искусственное осеменение и биология молочной железы сельскохозяйственных животных. Л;, 1976. - С. 190-193 :

42. Буянов А. А. О значении гонадотропных гормонов в развитии желтых тел беременности и полового цикла у коров / А. А. Буянов // Физиология, морфология и болезни животных: материалы 17-й науч. конф. Л, 1971. - С. 95-96.

43. Быховский В. М; О сущности и значении бальнеологических реакций / В. М. Быховский, Р. О; Хамзамулин // Вопр. курортологии, физиологии и лечеб. и физ. культуры. 1985. - № А. — С. 51-54. •

44. Варганов А. И. Дифференцированное, осеменение коров / А. И: Варганов // Ветеринария. 1993. - № 8. - С. 41-43.

45. Великанов В. И; Влияние селенопирана на восстановление . воспроизводительной системы коров после .отела / В. И. Великанов,

46. М. С. Лодяной // Новые фармакологические средства в ветеринарии: материалы 15-й междунар. науч.-практ. конф. — СПб., 2003. С. 10-11.

47. Визнер Э. Кормление и плодовитость сельскохозяйственных животных / Э. Визнер. М.: Колос, 1976. — 221 с.53: Винокуров А. В: Предупреждение бесплодия у коров / А. В: Винокуров // Ветеринария: 1972. 8. - С. 46-48.

48. Витвицкий В. М. Регуляция гликолиза в эритроцитах человека. Механизм стабилизации концентрации АТФ: дис. к. ф. м. н. — Пущино, 1981.-98 с.

49. Владимиров Ю. А. Перекисное окисление липидов в* биологических мембранах / Ю. А. Владимиров, А. И. Аргаков. М.: Наука, 1972. — 256 с.

50. Влияние ЭМИ КВЧ МСПИ О2 на функциональное состояние крови животных invitro / В. С. Авдеенко, И. И. Калюжный, Ю. О. Золотарь, А. П. Креницкий, А. В. Майбородин, В. Д. Тупикин // Миллиметровые волны в биологии и медицине. 2003. - № 3 (31). — С. 11-21.

51. Волков Е. С. Физиотерапия и санитарно-курортное лечение половых расстройств / Е. С. Волков. — Киев, 1985. 173 с.

52. Гавриш В. Г. Лазерная акупунктура при заболевании коров эндометритами / В. Г. Гавриш, А. В. Егунова, Д. В. Михайлов // Квантовая терапия в ветеринарии: сб. науч. тр. М., 2003. — С. 59.

53. Гавриш- В. Г. Лазерная аурокулопунктура при заболевании коров эндометритом / В'. Г. Гавриш, А. В. Егунова, Д. В. Михайлов // Шестая Международная научно-практическая конференция по квантовой медицине: тез. докл. М., 2000. — С. 237-238.

54. Гавриш В. Г. Профилактика послеродовых заболеваний репродуктивных органов коров / В. Г. Гавриш, А. В. Егунова, В. А.

55. Сидоркин // Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы и перспективы. Ч. 4/5. — Ульяновск, 2005. С. 361-363;

56. Гамарник Н. Г. Интенсификация, производства5 говядины / Н. Г. Гамарник, М. Ф. Кобцев, А. Н. Жуков. Новосибирск: Зап.-Сиб. кн. изд-во, 1979.-150 с.

57. Гамарник Н: Г. Способы содержания и воспроизводительная функция животных / Н. Г. Гамарник, В. Ф. Петров, В. А. Тараненко // Ветеринария. 1983. - № 12. - С. 50-51.

58. Гарабина И. А. ДЭНС-терапия в практике лор-врача / И. А. Гарабина // Мед. вестн. Екатеринбург - 2002. - Т. 1, вып. 2. - С. 53-56.

59. Гончаров В. П. Профилактика и лечение гинекологических заболеваний коров / В. П. Гончаров, В; А. Карпов. М1: Росагропромиздат, 1991. - 189 с.

60. Гончарова Е. Биотехнические средства при дисфункции яичников коров / Е.Гончарова // Главный зоотехник. — 2004. № 6. - С. 43-44.

61. Гордон А. Контроль воспроизводства сельскохозяйственных животных / А. Гордон. М.: Агропромиздат, 1988. — 414 с.

62. Горев Э. Л. Некоторые аспекты гормональной регуляции полового! цикла у коров / Э. Л. Горев // Ветеринария. 1968. - № 8. - С. 79-82.

63. Горлов И. Ф. Зависимость воспроизводительных качеств ремонтных телок от способа их содержания / И. Ф. Горлов // Животноводство. -1978; — № 12. С. 57-58.

64. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих: пер. с англ. Под ред. К. Остина и Р. Шорта. М.: Мир, 1987. - 305 с.

65. Гормональный профиль у коровшри суперовуляции;/С. Н:,Хилькевич, .Е. А. Тяпугии, А. Г. Самоделкин и др. // Доклады РАСХН.- 1995.3.-С. 38-39. '

66. Грига Э. Н. Биологически активные вещества и: моцион в • профилактике акушерско-гинекологической патологии / Э. Н. Грига,

67. О. Э. Грига, Э. Э. Грига // Вестн: ветеринарии. 2005.-№ 35. -С. 57-60.

68. Грига Э. Н. Диспансеризация коров после отела / Э. Н. Грига //Зоотехния. 2003.-№ 5.- С. 27-28.

69. Грига Э: Н. Предупреждение бесплодия коров / Э. Н. Грига // Молоч. и мясн. скотоводство. 2003. - № 2. - С. 26-27.

70. Григорьева Г. С. Применение ДЭНС-терапии в комплексном лечении опорно-двигательного аппарата / Г. С. Григорьева. Екатеринбург, 2002. - Т. 1, вып. 3. - С. 52-55.

71. Григорьева М. Ю. Гормональная характеристика полового цикла у телок / М. Ю. Григорьева // Бюл. науч. работ ВНИИ животноводства. -1981.-№64.-С. 25-28

72. Григорьева Т. Е. Профилактика алиментарного и симптоматического бесплодия у коров, обусловленного минеральной недостаточностью: автореф. дис. . д-ра вет. наук / Т. Е. Григорьева. Воронеж, 1994. — 46 с.

73. Даровских В. Е. Рекомендации по нормализации функции размножения у коров / В. Е. Даровски-. -Дубровицы, 1989. 17 с.

74. Дашукаева К. Г. Повышение оплодотворяемости и профилактика перинатальной патологии у коров / К. Г. Дашукаева // Ветеринария. — 1996.-№7.-С. 41-43.

75. Девятков Н. Д. Миллиметровые волны и их роль в процессах жизнедеятельности / Н. Д. Девятков, М. Б. Галант, О. В. Бецкий. — М.: Радио и связь, 1991. 169 с.

76. Девятков. Н. Д. Влияние электромагнитного излучения миллиметрового диапазона длин волн на биологические объекты // Успехи физических наук. 1973. — Т. 110, вып. 3. - С.453 -454.

77. Дедов Ю. М. Сравнительное действие простагландинов Е. и Ф2 альфа на синхронизацию охоты у коров / М. Ю. Дедов, А. Чомаев // Молочное и мясное скотоводство. 1988. - № 3. - С.27-28.

78. Демидова Л. Д. Применение лазерного ветеринарного аппарата "Вега-МВ" при мастите коров / Л. Д. Демидова // Ветеринария. — 1996. — № 5. -С.-9-12.

79. Димов В. Метаболизм простагландина Р2а у овец. Идентификация на основе метаболитов / В. Димов // Животноводческая наука. 1987. -№ 6. - С.79-84.

80. Дмитриев В. Б. Применение эндокринологических методов в < зоотехнии / В. Б. Дмитриев //Животноводство. 1985. - № 5. - С.22-24.

81. Дьяконов Е. Ф.Содержание гонадотропных гормонов в сыворотке крови коров в течение полового цикла после обработки СЖК и электростимуляции: автореф. дис. канд. биол. наук/Е. Ф. Дьяконов. -Пушкин, 1967.-21 с.

82. Дюльгер Г. Н. Ультразвуковая диагностика ранних сроков беременности и бесплодия у коров / Г. Н. Дюльгер, И. В. Огородникова, П. А. Елкин // Ветеринария. 2003. - № 3. - С. 14-17.

83. Жаркий А. Ф. Рефлексотерапия в акушерстве и гинекологии /А. Ф. Жаркий, Н. А. Жаркий. Л.: Медицина, 1988. - 160 с.

84. Желайтис В. Индуцирование коровам полноценного полового цикла / В. Желайтис, Е. Анюлис // Материалы Всероссийской научной и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. Воронеж, 1994. - С. 52-53.

85. Жирков О. Г. Диагностика эструса и повышение оплодотворяемости коров / О. Г. Жирков // Биотехнология размножения сельскохозяйственных животных. Дубровицы, 1989. — Вып. 95. -С. 26-27.

86. Жуков П. Влияние экологических факторов на воспроизводство крупного рогатого скота / П. Жуков, В. А. Кленов //Актуальные проблемы и достижения в области репродукции и биотехнологии размножения животных. — Ставрополь, 1998. С. 188190.

87. Завадовский Б. М. Зоотехническая эндокринология в СССР. Проблемы зоотехнической экспериментальной эндокринологии / Б. М. Завадовский. -М, 1934. -Т. 1. С. 7-24.

88. Завадовский М. М. Теория и практика гормонального метода стимуляции многоплодия с.-х. животных / М. М. Завадовский. — М.: Колос, 1963.-677 с.

89. Завадовский М. М. Регулирование женского полового цикла у коров. Труды по динамике развития / М. М., Завадовский, Н. А. Эскин, Г. Ф. Овсянников. М, 1936. - Т. 9. - С. 95-98.

90. Заверюха? А. X. Пути интенсификации мясного скотоводства / А. X. Заверюха // Зоотехния; 1999. — №*5. — С. 2-6.,

91. Земсков В. Mi Фагоцитоз: физиологические и молекулярные аспекты / В. М. Земсков // Успехи совр. биол. 1984. - Т. 98, вып: 2(5). -С. 219-234.

92. Ы1.3ухрабов М. Метод контроля за воспроизводством стада / М. Зухрабов, О. Преображенский, Д. Ошкин // Молочное и мясное скотоводство. 2004. - № 8. - С. 19-20.

93. Иваницкий Г. Р. Биофизика на пороге нового тысячелетия: перфторуглеродные среды и газотранспортные кровезаменители / Г. Р. Иваницкий // Биофизика 2001. — Т. 46, вып.1. -С. 5-33.

94. Иванников А. А. Электропунктурная рефлексотерапия у коров при задержании последа / А. А. Иванникова. Воронеж, 1998. - 14 с.

95. Иванов Г. И. Влияние внесения азотсодержащих удобрений на воспроизводительную функцию коров и сохранность приплода / Г. И. Иванов // Гигиена, ветеринария и экология животноводства.

96. Чебоксары, 1994.-С. 159-160.

97. Ивенс И. Механика и динамика биологических мембран / И. Ивенс, Р. Скейлак. М.: Мир, 1982. - 304 с.

98. Илюшин В. М. Лазерный свет и живой организм / В. М. Инюшин. — Алма-Ата, 1970. 46 с.

99. Индукция . охоты и овуляции эстрофаном-и сурфагоном у коров / Л. И. Арджаев, П. И. Христиановский, С. В. Селин, Т. М. Кожанова, И. А. Авдеева // Зоотехния. 1990. —№ 5. - G.71-73.

100. Иноземцев В. П. Квантовая терапия коров при воспалительных заболеваниях матки и молочной железы: автореф. дисс. на соис. уч. степени док. вет. Наук. — Санкт-Петербург, 1999. 47 с.

101. Иноземцев В. П. Лазерное излучение как диагностика скрытого эндометрита у коров / В. П. Иноземцев, И. И. Балковой, Я. С. Стравский // Шестая Международная научно-практическая конференция по квантовой медицине: сб. науч. тр. М., 2000. — С. 239242.

102. Иноземцев В. П. Организация ветеринарного контроля за воспроизводством стада / В. П. Иноземцев, Б. Г. Таллер // Ветеринария. — 1993. -№ 2. С. 12-15.

103. Интенсивная технология воспроизводства стада / А. А. Шубин, Н. М. Писакова, Л. А. Шубина и др. // Зоотехния. 1993. - № 3. - С. 21-24.

104. Инюшин В. М. Биостимуляция лучом лазера и биоплазма / В. М. Инюшин. Алма-Ата: Казахстан, 1975. - 120 с.

105. Искусственное регулирование половой функции у высокопродуктивных коров / Г. Ф. Медведев, Е. Д. Голубева, Н. В. Медведева, М. А. Тейнена // Повышение эффективности производства молока и говядины. Горки, 1989. - С. 12-16.

106. Казеев Г. В Гомеопунктура при терапии акушерско-гинекологических заболеваний коров / Г. В. Казеев, Д. Д. Смирнов; А. В. Казеева // Материалы XII Московской международной гомеопатической конференции. М., 2002. - С. 120-122.

107. Казеев Г. В. Ветеринарная акупунктура: науч.-практ. руководство / Г. В. Казеев. М., 2000. - 398 с.

108. Казеев Г. В. Геопатогенные зоны и здоровье животных / Г. В. Казеев, А. В. Казеева // Акупунктура, биоэнергетика и нетрадиционные методы лечения животных: материалы науч.-практ. конф. М., 2005. -С. 40-42.

109. Казеев Г. В. Применение МИЛ-пунктуры и МИЛ-терапии в ветеринарной практике / Г. В. Казеев, А. В. Казеева, М. В. Чалая // Квантовая электроника в медицине и биологии: материалы второй Всерос. науч.-практ. конф.* по МИЛ-терапии. М., 1996. - С. 116-122.

110. Казеев Г. В. Стимуляция охоты у коров методом электропунктуры / Г. В. Казеев, Е. В. Варламов, А. В. Старченкова // Искусственное осеменение и профилактика бесплодия сельскохозяйственных животных. Ставрополь, 1988. - С. 21-24.

111. Казеев Г. В. Стимуляция охоты у коров методом электропунктуры / Г. В. Казеев, Е. В. Варламов // Ветеринария. 1988. - № 4. - С. 12- 14.

112. Квазиоптический КВЧ-генератор молекулярных спектров излучения атмосферных газов / А. В. Майбородин, А. П. Креницкий, В. Д. Тупикин, О. Ф. Трошин // Электронная промышленность. 200. - № 1. -С. 3-5.

113. Киричук В. Ф. Влияния электромагнитного излучения крайне высокой частоты на реологические показатели крови у больных стабильной стенокардией: материалы Росс. нац. конгресса кардиологов. М.: 2001. - С. 241.

114. Киякин А. Б. Исследование регуляции мембранных процессов в эритроцитах и их связи с жизнедеятельностью: дис: к. ф.-м. н. — М., 1986.- 153 с.

115. Кобыленков Н. М. Стимуляция и синхронизация охоты у тёлок / Н. М. Кобыленков, Ю. Д. Клинский // Ветеринария. 1986. - № 8.1. С. 59-60.

116. Козинец Г. И. Исследование системы крови в клинической практике / Г. И. Козинец, В. А. Макаров. М.: Триада-Х, 1997. - 480 с.

117. Котик А. Мембранный транспорт / А. Котик, К. Яначек. — М.: Мир, 1980.-338 с.

118. Кузник Б. Н. О влиянии разрушенных эритроцитов человека на свертываемость крови / Б. Н. Кузник // Физиологический журнал СССР. 1982. - Т. 48. - С. 11.

119. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник / под. ред. В. В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. - 368 с.

120. Мадисон В. Синхронизация охоты крупного рогатого скота простагландинами ПГФ2а // Молочное и мясное скотоводство. — 2000. — № 7. С.9-14.

121. Мадисон В. В. Трансплантация эмбрионов в практике разведения молочного скота / В. В. Мадисон, ВI Л. Мадисон. М.: Агропромиздат, 1988.- 128 с.

122. Майбородин А. В. Электродинамическая модель взаимодействия КВЧ-волн и атмосферного воздуха в дыхательной системе / А. В. Майбородин, А. П. Крёницкий, О. В. Бецкий // Биомедицинские технологии и радиоэлектроника. 2002. - № 5-6. - С. 91-98.

123. Мандельштам А. Э;. Семиотика и диагностика женских болезней7 А. Э. Мандельштам. JI.: ЛО Медгиз, 1959. — 691 с.

124. Медведев F. Ф. Эффективность применения простагландинов тёлкам в зависимости от их. экстерьерных и интёрьерных признаков / F. Ф. Медведев, Н. В. Медведева // Биологически- активные вещества в животноводстве. -М., 1988. С. 73-77.

125. Медведев Г. Ф. Повышение эффективности применения простагландинов тёлкам с целью синхронизации полового цикла и оплодотворения / Г. Ф. Медведев, Д. Самба // Пути увеличение производства молока и говядины. — Горки, 1987! — С. 33-36.

126. Мингазов Т. А. Оплодотворяемость коров при использовании гормональных препаратов / Т. А. Мингазов, JI. В. Бабышева // Зоотехния. 1994. - № 5. - С. 29-30.

127. Миненков А. А. Низкоэнергетическое лазерное излучение красного инфракрасного диапазона и его использование в сочетанных методах физиотерапии: автореф. дис. . д-ра мед. наук / А. А. Миненков. -М, 1989.

128. Мифтахов М. С. Новые синтетические аналоги простогландинов / М. С. Мифтахов, И. X. Хабибулин // Зоотехния. 1990. - № 3. -С.59-61.

129. Михайлов Д. В. Лазерная терапия «в ветеринарной гинекологии / Д.В. Михайлов, В. П. Жирохов // Седьмая Международная научно-практическая конференция по квантовой медицине: сб. тр. конф. М., 2001.-С. 263-266.

130. Налбандов А. Сравнительные аспекты функции-желтого тела / А. Налбандов // Сельское хозяйство за рубежом. 1971. — № 10. — С. 2226. .

131. Нежданов А. Г. Влияние теплового стресса на функциональную активность яичников и фитоплацентарную систему у коров / А. Г. Нежданов, К. Г. Дашукаева // Ветеринария. 1995. - № 6. - С. 26-28.

132. Нежданов А. Г. Физиологические основы профилактики бесплодия коров: автореф. дис. д-ра вет. наук / А. Г. Нежданов. — Воронеж, 1987. -30 с.

133. Нежданов А. Г. Стероидопродуцирующая функция яичников коров при воздействии гормональных препаратов / А. Г. Нежданов, Н. А. Соловьев // Сельскохозяйственная биология. 1990. - № 4. - С. 75-84.

134. О регуляторных механизмах развития фолликулов и овуляции у крупного рогатого скота / Р. Б. Шириева, В. М. Шириев, С. Н. Хилькевич и др. // Сельскохозяйственная биология. — 2000. — № 2. — С. 56-59.

135. Околелов В. И. Электронейростимуляция коров в послеродовой период / В. И. Околелов // Ветеринария. 1992. - № 12. - С. 35-37.

136. Особая роль системы «миллиметровые волны водная среда» в природе / Н. И. Синицын, В. И. Петросян, В.' А. Ёлкин, Н. Д. Девятков, Ю. В. Гуляев, О. В. Бецкий // Биомедицинская радиоэлектроника. — 1999.-№ 1.-С. 3-21.

137. Панова Е. Г. Изменение гормонального статуса коров при его оценке радиоиммунологическим методом / Е. Г. Панова, Ю. С. Бенемецкий, П. Hi Никоноров // Сельскохозяйственная радиология: тез. докл. 3-й, Всесоюз. конф. Т. 3. Обнинск, 1990. - С. 89.

138. Победимский Н. М. Применение лазеров в акушерстве и гинекологии / Н. М. Побединский, В. М. Зуев, М. Ковалев // Лазеры в медицинской практике. М., 1992. - С. 196.

139. Полянцев Н. И. Применение биорегуляторов половой функции коров / Н. И. Полянцев // Зоотехния. 1999. - № 6. - С.29-30.

140. Преображенский О. Н. Стресс и патология размножения сельскохозяйственных животных /О.Н. Преображенский // Ветеринария. 1993.-№ 4.-С. 38-41.

141. Применение лазера в ветеринарии / И. С. Панько и др.. Киев: Урожай, 1987. - 88 с.

142. Прокофьев М. И. Лечение гипофункции яичников / М. И.,Прокофьев //Ветинформ. 1999. - № 1. - С. 3.180: Прокофьев М. И. Организация воспроизводства скота в' новых хозяйственных условиях / М. И. Прокофьев // Зоотехния. — 1991. — № 12. С.46-48.

143. Прокофьев М. И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных / М. И: Прокофьев. Л.: Наука, 1983. - 263 с.

144. Простагландин Р2а и воспроизводство стада / Б. Н. Ермолов, Г. Е. Пономарёв, Ю. Э: Лилм, А. О. Мянник, Н. Э. Самель // Ветеринария. — 1985. — № 2. С.51-60.

145. Рассадников С. А. Клиническое проявление эструса у коров и тёлок при введении эстрофана / С. А. Рассадников // Современные проблемы профилактики и терапии незаразных болезней сельскохозяйственных животных. Л 1984. - С. 66-68.

146. Резонанс молекулярной системы как термодинамическое фазовое состояние / В. И. Петросян, Ю. В. Гуляев, Э. А. Житенева, Н. И. Синицын // Радиотехника и электроника 1998. - Т. 43. — № 7. — С. 868-871.

147. Родштат И. В. Новые физиологические подходы к оценке КВЧ-воздействия на биологические объекты / И. В. Роштат // Биомедицинская радиоэлектроника. — 1998. — № 3. —G. 11-16.

148. Середин В. А. Биологическая система стимуляции воспроизводства в. скотоводстве / В:, А. Середин // Вестник ветеринарии. 1997. - № 2. — С. 10-20.

149. Середин В. А. О желтом теле, его персистентности и оплодотворяемости / В. А. Середин // Вестник ветеринарии. 1998. — № 9. - С.72-80.

150. Середин В. А. Цикл воспроизводства в скотоводстве и концепция уровней регуляции репродуктивной функции / В. А. Середин // Аграрная Россия. 2006. - № 4. - С. 7-17.

151. Синяев В. А. Лазерное излучение: понятие свойства, история изучения и использования / В. А. Синяев // Нижегородский ветеринарный вестник. 1996. - № 2. - С. 32-35.

152. Хилькевич С. Н. Синхронизация половых циклов в программе трансплантации эмбрионов / С. Н. Хилькевич, Е. А. Тяпугин, А. Г. Самоделкин // Зоотехния. 1993. - № 4. - С. 24-25.

153. Храмцов В. В. Влияние сезонных факторов на воспроизводительные функции и продуктивность коров / В. В. Храмцов, Р. А. Шундулаев, Н. А. Савченко // Ветеринария. 2004. -№ 11.-С. 13-15.

154. Черемисинов Г. А. Отечественные простогландиновые препараты в акушерской и гинекологической практике / Г. А.

155. Черемисинов, А. А. Карамышев, В. Н. Карышов // Сб. науч. тр. ВИИНБЖ.-Воронеж, 1990.-С. 111-115.

156. Черницкий Е. А. Структура и функции эритроцитарных мембран / Е. А. Черницкий, А. В. Воробей. Минск: Наука и техника, 1981. — 242 с.

157. Чернышова М. Применение гонадотропина СЖК и простагландина Р2 альфа для молочного скота / М. Чернышева // Молочное и мясное скотоводство. — 1997. № 2. - С. 34-36.

158. Ширисв В. М. Применение препаратов; отечественного производства для стимуляции охоты у коров. РНТИК; / В. М. Шириев, А. Г. Самоделкин. Информлисток № 06-081-99. — Уфа, 1999. - 4 с.

159. Шириев В. М. Роль фолликулогенеза при вызывании суперовуляции / В. М. Шириев, А. Г. Самоделкин, С. Н. Хилькевич // Зоотехния. -2001. № 10; - С. 26-27.

160. Щеглова Н. Н. Синхронизация половой охоты у коров / Н. Н.

161. Щеглова, Е. Ф. Дьяконов // Воспроизводство с.-х. животных и криоконсервация гамет и эмбрионов. Л., 1986. - С. 20-21.

162. Эрнст JI. К. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных / JL К. Эрнст, Н. JI. Сергеев. М.: Агропромиздат, 1989. — 300 с.

163. Эрнст Л. К. Результаты применения простагландина для синхронизации охоты у коров-доноров и тёлок-реципиентов / Л. К. Эрнст, Н. И. Сергеев // Молочное и мясное скотоводство. 1984. - № 3. - С. 29-32.

164. Abecia J. Jugular and-ovarian venous profiles of progesterone and. associated endometrial progesterone concentrations in pregnant' and nonpregnant ewes / J. Abecia, S. Rhind, P: Goddard // Anim. Sci. - 1996. - V. 63. -P: 229-234.

165. Archbold- Z. F. Fucidence and treatment of abnormal postpartum ovarian function in dairy cows. Terogenology / Z. F. Archbold, S. N. Norman

166. E.I. -Bliss, 1990. Vol. 34. - № 2. - P. 283-290.

167. Armstrong D. T. Superovulation of immature rats by continuous infusion of folliclestimulating hormone / D. T. Armstrong, M. A. Opavsky // Biol. Reprod. 1988. -V. 39. -P.511-518.

168. AsianS.Veteriner do gum vet jenekolojide akupunktur / S. Asian, C. Kilicogu // Ancara Univ. Veter. Fak. Derg. 1993. - Vol. 40. - P. 38.

169. Assesment of the postpartum reproductive performance of the Icelandic dairy cow duriug u 3 yeur period / J. Elsdon, T. Olafsson // Postpartum Reprod. Peraorm Isel. Dairy Cow Uppsala. - 1988. -P. 1-15.

170. Bachler J. Exemen des cas de sterite de la vaute de Z Urinersite de Berhe, Schweis. Arch. Tierhein. / J. Bachler. 1990. - Vol. 102. - № 7. - P. 407512.

171. Bentele W. Vergleich verschiedener Behandlunsmethoden mit einem Prostaglandinanalog bei amöstrischen Rindern / W. Bentele, R. Humke // Tierärstl. Umschr. 1982. - V. 37. - № 2. - S. 243.

172. Berger G. Zur Häfigheit und Therepie von Ovarialzysten'beim RindErgebnisse aus der zuchthygienischen Betreung einer grossen Milchirehherde / G. Berger // Mh.Vet.Med. 1985. - V. 40. - S. 433-436.

173. Bergstom S. The isolation of prostaglandin / S. Bergstom // Acta Chem. Scand. 1957. - V. 11. - P. 1086.

174. Borjunovie S. Sinhronizadiucija estrusakrava I junica (na1 individualuom sektoru) primenom prostaglaudina F2-Alpha-"Dinolytic" / S. Borjunovie, O. Danicic, D. Vukovic // Vet. Grasnik. 1986. - V. 40. - № 2-3.-P. 165-169.

175. Botella Llusia J. Endocrinoljgy. Saunders Co., Philadelphia -London. - Toronto, 1973. — 516 p.

176. Boyd H; Progesterone assays and rectal palpation in preservise management of a dairy herd / H: Boyd, C. Munro // Vet,. Ree. 1979; -№ 104.-P. 341-343.

177. Britt J. Influence of nutrition and weight loss on reproduction and early embrionic death in cattle / J. Britt // Proc. XVIIWorld Buiatrics Congr. 1992.-V. 2.-P. 143-149.

178. Britt J. Ovulation, estrus and endocrine response after GnRn in early p-p cattle / J. Britt, R. Kittok, D. Harisson // J. Anim. Sei. 1974. - V. 39. -P. 915.

179. Brunner M. A. Exogenous hormones and luteal function in hysterectomies and intact heifers / M. A. Brunner, L. E. Donaldson, W. Hansel // J. Dairy Sei.- 1969. №52. - P. 1849-1854.

180. Burell W. New technology in estrous synchronization sides producers. /.W. Burell //Utah Farmer-Stockman. 1998. - V. 108. -№ 5. -P. 9.

181. Burfenig R. Synchronization of estrus with Pg F2a in beef cattle / R.r Burfenig // Anim Sei. 1978. - V 47.-№ 10. - P. 999-1003:

182. Busch W. Untersuchungen zur Anwendung von Gn-Rh zur Ovulationsynchronization' bei Färsen / W. Busch, F. Siebeckr //. Mh.Vet.-Med. 1984. -№ 12. - S. 397-399.

183. Callesen H. Premature ovulation in superovulated cattle /H: Gallesen, T. Greve, P. I-Iyttel // Theriogenology. 1987. - № 28. - P. 155-166.

184. Chupin D, Cognie J., Combarnous Y. Effect of purified LH and FSH on ovulation in the cow and ewe. In.: Roche J.F. and O'Callaghan D:0.eds.) Follicular Grows and Ovulation in Farm Animals. Martinus Nijhoff Publisheres. The Hague, 1987. P. 63-72.

185. Control of the bovine estrous cycle with melengestrol acetate (MGA): A review / D. Patterson, G; Kiracofe, J. Stevenson, L. Corah // J. Anim.Sci. 1989.-V, 67.-№8.-P. 1895-1906.

186. Cooper M. Control of estrous cycles of heifers with a synthetic Prostaglandine analogue / M. Cooper // Vet. Ree. 1974. - № 95. - P.200-203.

187. Dailey R. Synchronization of estrus in dairy heifers with prostaglandin F2a with or without estradiol benzoate / R. Dailey, R. James, E. Inskeep et al. //J. Dairy Sei.- 1983.-№60.-P. 881-886.

188. Daily R. Use of prostaglandin F2 or gonadotropin releasing hormone in treating problem breeding cows / R. Daily, E. Inskeep, SR. Washburg et al. //Jj Dairy Sei. — 1983. — № 66. — P: 1721-1727.

189. Dial G.D. and Bevier G.W. Pharmacologic control of estrus and ovulation in? the pig. In: Morrow D.A. (ed). Current Therapy in Theriogenology 2. W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1986. P.912-914.

190. Die Anwendung von Prostaglandin F2 zur Brunstsynchronisation bei Färsen / W. Busch, K. Fulenberger, S. Bach, M. Müller, R. Slucka // Mh. Vet.-Meg. 1980. -№ 11. - S. 411-414.

191. Donaldson L. Embryo production in superovulation cows: transferable embryos correlated with total embryo / L. Donaldson // Theriogenology. -1984.- № 21. P. 517-524.

192. Donaldson L. Effect of LH on embryo production in superovulated cows / L. Donaldson, D. Ward // Vet. Ree. 1986. - № 119. - P. 625-626.

193. Ein Bertrag zur Estrumate-Behandlung stillbrünstiger Kühe / G. Duz, Grunert, W. Rietbrock, H. Dehoust // Zuchthygiene.- 1977. № 13. - P.49.

194. Eley R. Luteolytic effect of cestrone sulphate on cyclic beef heifers / R. Eley, W. Thatcher, F. Bazer // J.Reprod. Fertil. 1979. - № 55. -P. 191-193.

195. Elliasson K. Studies on prostaglandin: Oceurence, formation and biological actions / K. Elliasson // Acta Physiol. Scand. 1959. - V. 46. -Suppl.158. - P. 1-73.

196. Erprobung des Gonadotropin-Releasing hormones Gn-Rh vet "Berlin-Ghemie" zur Auwendung in der Tierproduktion/J.Klinskij, G.Shirkow, N.Konovalov et al. // Mn. Vet.-Med. 1984. - № 2. - P. 177-179.

197. Euler von U. Zur Kenntnis der pharmakologischen Wirkungen von natiosekreten und extrakten männlicher accessorischer Geschlechtedruren // Arch Exp. Path. Pharmach. 1935. - V. 17. - S. 5-78.

198. Fontaubert Y. Synchronisation des chaleurs chez la vahe laitiere: bilan de l'utilisation du Synchro-Mate B pendant cinq annees successives / Y. Fontaubert, J. Cochaud, M. Terqui // Prod. anim. 1989. - V. 2. - № 5. -S. 317-323.

199. Foutaubert Y. La maitrise des cycle sexuel chez les bovines. Le point en 1988 / Y. Foutaubert//Prod. anim. 1988. -№ 3. - P. 179-187.

200. Gesprach C. Role of the anitibody Fe in the immunoclearance / C. Gesprach, S. Abita // Mol. Farmacol. 1982. - Vol. 21. - P. 78.

201. Ginther O. Composition and characteristics of follicular waves during the bovine estrous cycle / O. Ginther, J. Kastelic, Z. Knopf // Anim.Reprod.Sci. 1989. - V. 20. - P. 187-200.

202. Gjaz A. Treatment and control of cystic ovarian disease in dairy cattle: a review / A. Gjaz, M. Fahning, R. Zemjanie // Br. Vet. J. 1987. - № 43. -P. 226-237.

203. Godfrey R. Evaluation of luteolysis and estrous synchronization by prostaglandin analog (luprostinol) in Brahman cows and heifers / R. Godfrey, M. Guthrie, D. Neuendorf// J.Anim. Sci. 1989. - V. 67. - № 8. -P. 2067-2074.

204. Godke R. Plasma progesterone levels for diagnosis of anestrous beef cattle prior to PgF2 treatment / R. Godke, R. Jugraham, L. Archibald // Theriogenology. — 1979. V. 11. -№ 1. -P. 98.

205. Greenstein J., Murray R., Foley R. Effect of exogenour hormones on the reproductive processes of the cycling dairy heifers//J.Dairy Sci.-1958.-N.41.-P.1834.

206. Greve T., Cellesen H:, Hyttel P. Charakterization of plazma LH profiles in superovulated dairy cows"// Theriogenology. — 1984. V. 21. - P. 237.

207. Griinert E. Female genital system / E. Griinert // Clinical Examination of Cattle. Verlag Paul Parey, Berlin and'Hamburg, 1979. P. 323-340.

208. Hamilton S. Characterization of ovarian follicular cysts and associated endocrine profiles in dairy cows / S. Hamilton S, H. Garverick, D. Keisler et all. // Biol. Reprod. 1995. - V. 53. - P. 890-898.

209. Hansel W. New concepts of the control of corpus luteum function / W. Hansel, J. P. Dowd // J. Reprod. Fertil. 1986. - V. 78.- P.755-768.

210. Harrison L. Cloprostenol induced luteal regression in the beef cow. 1. Ovarian response and endocrine changes / L. Harrison, R. Randel, D. Forrest et al. // Theriogenology. 1985. - № 23. - P. 511-521.

211. Herzog H. Vermehrte Kenntnisse über den Brunstzyklus / H. Herzog // Schweiz.Braunvick. 1989. -V. 1. - S. 14-17.

212. Hodges R. A randomized clinical trial of the effect of the time of administration of cloprostenol on detection of estrous in dairy cattle / R. Hodges, M. White, C. Guard // Can.Vet.J. 1988. - V. 29. - № 4. - P. 343345.

213. Hormonuntersuchungen bei Superovulation an Kühen / M. Kitzig, E. Kanitz, G. Blödow et al. // Mh. Vet.-Med. 1984. - V. 39. -N 6. - S. 585591.

214. Humphrey W. Effects of FSH/LH ratio on ovulatory response / W. Humphrey, B. Murphey, D. Rieger et al. // Theriogenology. 1979. - № 11.-P. 109.

215. Johnson C. Time the onset of estrus after the injection.of heifers with cloprostenol / C. Johnson // Vet. Ree. 1978. - № 103. - P. 204-206.

216. Kesler D. Ovarian cysts in -dairy cattle: a review / D. Kesler, H. Garverick // J. Anim. Sei. 1982. - V. 55. - P. 1147-1159.

217. King M. Effect of stage of the estrous cycle on interval to estrus after PG-F2 in beef cattle / M. King, G. Kiracof, J. Stevenson et al. // Theriogenology. 1982. - № 18. - P. 191-200.

218. Knutson R. Influence of nutrition on serum concentrations of progesterone, luteinizing hormone and estrous behavior in dairy heifers / R. Knutson, R. Allrich // J.Anim. Sei. 1988. - V. 66. - № 1. - S. 90-97.

219. Kothbaner O. Uber die Acupunctur and Neuraltherapie bie Fruchbarkeisstorungen des weiblichen Riudes, Diagnose and Therapie / O. Kothbaner // Tierarzie. Umsehe- 1990. Vol. 45. - № 4. - S. 225-237.

220. Kurzrok A. Biochemical studies on human semen / A. Kurzrok, C. Lieb//Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1930.-V. 123.-№4.-P. 355.

221. La transplantation des embryons dans le cadre de meda-test Perrin J. Reprod. bovines anoestrus post-partum, transplant. Embryonaire // C. r. journees inf. UNCEJA-ITER, mars, 1982. Paris, 1983. - P. 121-125.

222. Lerner S. Age, dose of FSH and other factors affecting superovulation in Holstein cows / S. Lerner, W. Thayne, R. Baker et al.,// J. Anim. Sei. -1986.-№63.-P. 176-183.

223. Lewis P. Indomethacin inhibits estrogen induced luteolysis in heifers / P. Lewis, J. Wassen // J. Anim. Sei. 1974. - № 39. - P. 992.

224. Lindseil C. Variability in FSH: LH rations among batches of commercially available gonadotropins / C. Lindsell, K. Rajkumar, A. Manning // Theriogenology. 1986. - № 25. - P. 167.

225. Litch S., Condon W. // Mol. and Cell. Endocrinol. 1988. - V. 57. -№. 1-2.-P. 81-85.

226. Louis T. Intrauterine administration of prostaglandin F2 in cows. 2. Progesterone, estrogen, LH, estrus and ovulation / T. Louis, ,H. Hefs, D. Morrow // J.Anim.Sci. 1974. - № 38. - P. 347-353.

227. Macmillan K. Prostaglandin responses in dairy herd breedingprogrammers / K. Macmillan//N.Z. Vet J. 1983.-№ 31.-P. 110-113.

228. Macmillan K. Effects of supplemental progesterone on pregnancy rates in cattle / K. Macmillan, V. Taufa, A. Day et al. // J. Reprod. Fertil. -1991. — № 43. — P. 304-306.

229. Markusfeld O. Body condition score, nealth, yirld and fertility in dairy cow / O. Markusfeld, N. Golon, E. Ezra // Voter. Res. 1997. - Vol. 141. - № 3. - P. 67-72.

230. Mishell D. — In vol: The year book of obstestrics and gynecology 1974. Year Book Medical Publ. - Chicago, 1974. - P. 250-265.

231. Monniaux D. Action of PMSG on follicular populations in the heifer / D. Monniaux, M. Danielle, W. Gibson // J. Reprod. Fertil. 1984. - № 10. -P. 243-253.

232. Moor R. Intraovarian control of folliculogenesis: limits to superovulation / R. Moor, Th. Kruip, D. Green // Theriogenology. — № 21. — P. 103-115.

233. Moor R. Gonadotrophin induced abnormalities in sheep oocytes after superovulation / R. Moor R., J. Osborn, J. Crosby // J. Reprod; Fertil. -1985.-№74.-P. 167-172.

234. Murphy B. Variability in gonadotropin preparation as a factor in superovulatory response / B. Murphy, R. Mapletoft, J. Manns et al. // Theriogenology. 1984. - № 21. - P. 117-125.

235. Nash J. Effects of reproductive performance on administration of GnRH to early postpartum dairy cows / J. Nash, L. Ball, J. Olson // J. Anim. Sei.-1980.-№50.-P. 1017-1021.

236. Nazar L. Ification of parturinion in cattle effect of Triamenolone pretreatment on the incindence of retained placenta / L. Nazar at al. // Canad. Veter. J. 1994. - Vol. 35. -№ 8. - P. 491-496.

237. Newcomb R. Conception rate after uterine transfer of cow eggs in relation to synchronization of oestrus and age of eggs / R. Newcomb, L. E. Rowson // J/Reprod.Fertil. 1975. - V. 43. - P. 539-541.

238. Ngujen Van Quan. Acupuncture chinoise, pratique / Ngujen Van Quan-P, 1930.

239. Odde K. A review of synchronization of estrous in postpartum cattle / K. Odde // J. Anim.Sci. 1990. - V. 68. - № 3. - P. 817-830:

240. Opavsky M. Effects of luteinizing hormone on superovulatory and steroidogenic response of rat ovaries to infusion of follicle stimulating hormone / M. Opavsky, D. Armstrong // Biol. Reprod. 1989. - № 40. -P. 15-25.

241. Paisley L. Mechanisms of therapy for retained fetal membrane and uterine infections of cows: A Review / L. Paisley // Theriogenology. — 1986. -V. 25.-P. 31.

242. Peters J. Synchronisation of estrus in beef cattle with PF2a and estradiole benzoate / J. Peters, J. Welch, J. Lauderdale et al. // J. Anim. Sei.-1977. -№'45. -P. 230-235.

243. Plasma oestrogen and progesterone in relation to superovulation and egg recovery in- the cow „ / W. D. Booth, R. Newcomb, H7 Strange, L.

244. Rowson // Vet. Ree. 1975. - № 97. - P. 366-369. '305. --- Pierson R. Ultrasonography of the bovine ovary / R. Pierson, O. Ginther // Theriogenology. 1984. - V. 21. - P. 495-504.

245. Plunkett S. Prostaglandin F2a for lactaning dairy cows with a palpable corpus luteum but unobserved estrus / S. Plunkett, J. Stevenson, E. Call // J. DairySci. 1984. - № 67. - P. 380-387.

246. Roberts S. Veterinary Obstetrics and Genital Diseases / S. Roberts // Theriogenology. Published by the author: Woodstock, Vermont, 1986. -483 p.

247. Robinson N. Effect of treatment with progesterone on pregnancy rate and plasma concentrations of progesterone in Holstein cows / N. Robinson, K. Leslie, J. Walton // J. Dairy Sei. 1989. - № 72. - P. 202-207.

248. Rowson L. The use of 297 Prostaglandine for synchronization of oestrus in cattle / L. Rowson, R. Terwit, A. Brand // J. Reprod. Fert.1972.- № l.-P. 145-150.

249. Schally A. The hypotalamus and reproduction / A. Schally, A. Arimura // Am. J. Obstet. Gyn. 1972. - V. 114. - P. 423-442.

250. Schally A. Usolation and progerties of the FSH and LH releasing hormone / A. Schally, A. Arimura, J. Babu // Biochem. Biophys. Res. Com. -1971.-№43.-P. 383-399.

251. Schneebeli J. Die Bedentung der Interostrrusfollikel bei der Zyklus Steuerung mittels Prostaglandin beim Rind / J. Schneebeli, R. Dobeli // Zuchtgiene. 1987. - V. 22. - № 3. - S. 123.

252. Segal A.W. Kinetics of oxugen consumption by phagocytosig human neutrophils / A. W. Segal, S. B. Coade // Bioclem. Biophys. Res. Commun. 1978. - Vol. 84, №3. - P. 611-617.

253. Stevenson J. Sage of estrous cycle, time of insemination, and seasonal effects on estrous and fertility of Holstein heifers after prostaglandin F2a / J. Stevenson, M. Schmidt, E. Call //J.Dairy Sei. 1984. - V. 67. - № 8. -P. 1798-1805.

254. Superanalog LOH-RH (D-Tle6-Pro-NH-Et9) LH-RH. 7. Lecbä syndromu ovari/älnich cyst /Sebläk Libor. Oicha Josef, Strakovä Jana, Picmausova Dagmar, Olsa Tomas, Minarik Pavel // Biol, a . chem. zivoc. Vyroby. Vet. 1990. - 26. -№ 1. - S. 67-77.

255. Szenci O. Evaluation offaice ultrasonographic diagnoses in cows by measuring plasma levels of bovine pregnancy-associated glycoprotein J / O.

256. Szenci, M.A.M. Taveme, J.F. Beckers et al. // Voter. Rec. 1998. - Vol. 142. -№ 12.-P. 304-306.

257. Tanabe T. Synchronized estrus and subsequent conception in1 dairy heifers treated with prostaglandin F2. 1. Influence of stage of cycle at treatment / T. Tanabe, R. Hann //J.Anim. Sci. 1984. - № 58. - P. 805-811.

258. Trounson A. Effect of delayed insemination of in vitro fertilization culture and transfer of human embryos / A. Trounson, L. Mohr, C. Wood et al. // J. Reprod. 1988. - № 64. - P. 285-294.

259. Villabez-Martinez J. Effect of actinomycin L on the pituitary respons to LH-RH / J. Villabez-Martinez, A. Arimura, A. Schally // Acta enuocrinol.- 1976. -V. 81. -P. 73-81.

260. Welch J. Control of estrus in lactating beef cows with prostaglandin F2a and estradiol benzoate / J. Welch, A. Hackett, C. Cunningham // J.

261. Anim. Sci. 1975. — № 91.-P. 1686-1692.

262. Wenkoff M. Estrus synchronization in cattle. In: Morrow D.A. (ed). Current Therapy in Theriogenology. 2. W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1986.-P. 158-162.

263. Wenkoff M. The management of drug-induced manipulation of the estrous-cycle in normal cows and heifers / M. Wenkoff // Cfn.Vet.J. — 1987.- V. 28. -№.6. S. 366-373.

264. Wiltbank J. Effects of various forms and level of estrogen alone or. incombinations with gonadotrophins on the estrous cycle of beef heifers / J. Wiltbank, J. Ingall, W. Rowden // J. Anim. Sei. 1960. - № 20. -P. 341-346.

265. Youngquist R. Cystic follicular degeneration in the cow. In: Morrow DA (ed.), Current Therapy in Theriogenology. WB Saunders / R. Youngquist. Philadelphia, 1986. - P. 349-354.

266. Zaoral J. Improvement of the fertility of cows inseminated in synchronized estrus / J. Zaoral, J. Kvapilik, B. Krnaver // Sei. agr. bohemoslov. 1988. - V. 20. - № 3. - P. 175-180.