Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биотехнологические аспекты получения штаммов Bacillus cereus, перспективных для разработки препарата с пробиотическими свойствами

ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Биотехнологические аспекты получения штаммов Bacillus cereus, перспективных для разработки препарата с пробиотическими свойствами"

На правах рукописи

Позднякова Ирина Геннадьевна

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПОЛУЧЕНИЯ ШТАММОВ BACILLUS CEREUS, ПЕРСПЕКТИВНЫХ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ ПРЕПАРАТА С ПРОБИОТИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии) 03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

г я ноя 2013

005540462

Саратов 2013

005540462

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научные руководители: доктор медицинских наук,

старший научный сотрудник Назарова Лариса Степановна

доктор биологических наук, доцент Каблучеева Татьяна Ивановна

Официальные оппоненты: Васильев Дмитрий Аркадьевич

доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П.А. Столыпина», заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и вегеринарно -санитарной экспертизы

Миксров Анатолий Николаевич

кандидат биологических наук, ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет им. Н.И. Разумовского», доцент кафедры общей гигиены и экологии

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Санкт - Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Защита диссертации состоится 013 г. в $ ' часов на заседании

диссертационного совета Д 220.061.04 на базе ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по адресу: 410005, Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ» по адресу: 410005, Саратов, ул. Соколовая, 335.

Автореферат диссертации разослан » /¿¿^¿ <^¿/2013 г.

Отзывы на автореферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, Театральная пл. 1, ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ», учёному секретарю диссертационного совета.

Учёный секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор ^"карпушша Лидия Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Стремительно развивающаяся устойчивость патогенных и условно-патогенных микроорганизмов к антибиотикам настоятельно диктует необходимость поиска иных подходов к воздействию на них. С конца 20-го столетия вновь стали использовать методы борьбы с инфекцией, постулированные Л. Пастером, И. И. Мечниковым и их современниками, которые базируются на антагонизме одних видов микроорганизмов по отношению к другим. Этот постулат явился основой для создания пробиотиков. Такими микробами - антагонистами, используемыми в качестве пробиотиков, являются: лактобактерии, бифидобактерии, энтерококки, кишечная палочка, бациллы. Пробиотики на основе бацилл, по мнению ряда исследователей, предпочтительнее, поскольку они относятся к аллохтонной микрофлоре и в кишечнике приживаться не будут (Бовдаренко, 2006; Денисов, 2009 и др.).

Спорообразующие бактерии, как известно, способны оказывать антагонистическое действие на другие микроорганизмы, выделяя в среду первичные и вторичные метаболиты, а также конкурируя с ними за питательные вещества (Стайниер, Эльберг, 1979; Урдачи и др., 2008). Кроме того, при разрушении спор в среду также поступают вещества с антимикробной активностью (Никитенко и др., 2000). Антимикробное действие бацилл может быть направлено только на грамположительные или грамотрицательные бактерии и грибы, или продуцируемые ими субстанции могут подавлять рост многих видов микроорганизмов (Сорокулова, 1979). Использование смеси различных штаммов бацилл в ветеринарии для обработки помещений, где содержатся сельскохозяйственные животные (торговая марка «Экофренд»), или поверхностей . тела здоровых животных (разработка Бельгийской компании СШШАЬ) основано на конкуренции между бациллами и условно-патогенными микроорганизмами за питательные вещества (РгоЫойса ¡п Ргх^ге53-Р1В). При этом размножение последних подавляется (Смирнов, 1993).

Имеются фармакопейные препараты, созданные на основе бацилл различных видов, эффективные против кокковой микрофлоры, грамотрицательных бактерий, микобактерий, актиномицетов, кандид, грибов, поражающих растения, а также насекомых, клещей, нематод (Кукси, 1976; Забокрицкий, 2006; Лукьянцев, 2010).

Степень разработанности проблемы. В медицинской и ветеринарной практике применяют целый ряд препаратов, приготовленных на основе бацилл разного вида: «Биосептин», «Биоспорин», «Гинеспорин», «Бактисубтил», «Ветом 1.1.» и другие.

В обзоре В. Д. Похиленко и В. В. Перелыгина (2007) приводятся сведения о российских и зарубежных препаратах на основе спорообразующих бактерий, из которого следует, что их достаточно много, но только в единичных зарубежных биопрепаратах, предназначенных в качестве пробиотиков для людей, действующим началом служит В. сегеиз - «Бактисубтил». В доступной литературе нет сведений о возможности использовать одни и те же

пробиотические штаммы В. cereus и как средство для санации ран, и как пробиотики, и для обработки клеток с мелкими непродуктивными животными. Поэтому постоянно ведётся поиск новых штаммов бацилл, в том числе В. сега/я-продуцентов биологически активных веществ для использования в качестве главных составляющих лечебных препаратов, используемых как пробиотики при инфекционных заболеваниях различной этиологии, а также дня профилактики нагноительных процессов (Михайлова, Гринько, 2010).

Цель работы: разработка экспериментального биопрепарата с пробиотическими свойствами на основе апатогенных штаммов Bacillus cereus, их апробации на животных в сравнении с официнальными препаратами.

Задачи исследования:

1. Обосновать поиск во внешней среде (из микробиоценоза ветеринарного госпиталя) апатогенных штаммов В. cereus с антагонистической активностью по отношению к условно-патогенным микроорганизмам и выделить их в чистую культуру.

2. Изучить спектр антимикробного действия выделенных штаммов В. cereus и отобрать среди них штаммы с выраженной антагонистической активностью.

3. Исследовать основные биологические свойства 3-х отобранных штаммов В. cereus: морфологические, культуральные, биохимические, температурную устойчивость, чувствительность к антибиотикам.

4. Разработать критерии отбора штаммов В. сегегю-антагонистов условно-патогенных микроорганизмов.

5. Сконструировать экспериментальный препарат с пробиотическими свойствами на основе штаммов Bacillus cereus и апробировать его в сравнительных экспериментах in vitro и in vivo с официнальными пробиотиками.

Научная новизна работы. Выделены из объектов внешней среды и отобраны 3 апатогенных штамма Bacillus cereus 42, 45, 46, обладающие выраженной прямой и опосредованной антимикробной активностью по отношению к условно-патогенным микроорганизмам in vitro и in vivo, исследованы их биологические свойства. Изучен спектр их антимикробного действия. Экспериментальный препарат созданный из смеси этих штаммов, названный «Бакцер», при наружном использовании санировал раны у экспериментальных и сельскохозяйственных животных более эффективно, чем культура, выделенная из официнального препарата «Бактисубтил». «Бакцер» проявил себя и в качестве пробиотика, стимулируя развитие полезной микрофлоры желудочно-кишечного тракта у цыплят из неблагополучного по колибактериозу хозяйства. Эффективность «Бакцер» была сопоставима с пробиотиком «Ветом 1.1.».

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработаны критерии отбора штаммов В. cereus в качестве кандидатов для создания препаратов с пробиотическими свойствами.

Получение экспериментального препарата «Бакцер» открывает перспективы для его использования в качестве ранозаживляющего средства, пробиотика и средства для обработки клеток с мелкими непродуктивными животными, пребывающими в стационаре по поводу оперативных вмешательств.

По материалам диссертационной работы написаны «Методические рекомендации по выделению клинических изолятов бацилл и методам определения их безвредности и пробиотических свойств» (в соавторстве с JI.C. Назаровой, 2011), которые размещены на сайте научной библиотеки ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ», предназначенные для специалистов в области биотехнологии и микробиологии. Акт о практическом использовании. Получен патент № 2435864 «Способ пробиотической обработки клеток с содержащимися в них мелкими непродуктивными животными в условиях ветеринарного госпиталя».

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами факультета ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова».

Методология и методы исследования. Методологической базой послужили труды отечественных и зарубежных исследователей по вопросам антимикробного действия бацилл и их использования для создания лекарственных препаратов. Основу данного исследования составляют комплексный анализ и системный подход в изучении рассматриваемой темы.

При проведении исследования и изложения материала автором были применены общенаучные методы: теоретико-методологический анализ литературных источников, эмпирические методы исследования в форме наблюдения, эксперимента, описания, измерения и сравнительно-сопоставительного анализа. Применение указанных методов, а также анализ фактического материала позволил обеспечить объективность полученных выводов и результатов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Выделены из внешней среды - госпитального микробиоценоза и отобраны 3 штамма В. cereus 42, 45, 46 с выраженной антимикробной активностью по отношению к грамположительным и особенно грамотрицательным условно патогенным микроорганизмам.

2. Чистые культуры выделенных штаммов В. cereus 42, 45, 46 имели фенотипические признаки, присущие данному виду, но не обладали факторами патогенности при тестировании in vitro и in vivo.

3. Сформулированы критерии отбора штаммов В. cereus, перспективных для создания препаратов с пробиотическими свойствами.

4. Экспериментальный биопрепарат, приготовленный из смеси 3-х отобранных штаммов В. cereus 42, 45, 46, обладал санирующим и ранозаживляющим эффектом при наружном применении и свойствами

пробиотика при пероральном, сравнимыми с официнальными препаратами на основе бацилл.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на: научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных» (Саратов, 2010); V Всероссийской конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой» (Саратов, 2010); Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения» (Саратов, 2010); Научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани» (Краснодар, 2011); Международной научно-практической конференции, посвященной Всемирному году ветеринарии в ознаменование 250-летия профессии ветеринарного врача, «Ветеринарная медицина 21 века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения» (Ульяновск, 2011); конференции, посвящённой 80-летию доктора ветеринарных наук, профессора, заслуженного деятеля науки РФ Демкина Г. П. «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии и селекции животных» (Саратов, 2011).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 12 работ из них 4 статьи - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, и 1 патент.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения; обзора литературы; собственных исследований, объекты, материалы и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение; а также заключения; выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 112 страницах, содержит 9 таблиц, 1 рисунок. Список литературы включает 203 источника, в том числе 93 зарубежных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Объекты, материалы и методы исследований

Объекты исследования: 242 штамма микроорганизмов, из них 133 штамма, выделенные из ветеринарного госпиталя, в том числе 29 штаммов бацилл, 6 штаммов из ран экспериментальных животных (Staphylococcus aureus. Staphylococcus epidermidis, Serratiasp, 2 штамма Klebsiella oxytoca, Bacillussp.)', 40 штаммов из ран сельскохозяйственных животных (родов Staphylococcus, Streptococcus, семейства Enterobacteriaceae), 12 штаммов из музея кафедры микробиологии, вирусологии и биотехнологии: Staphylococcus aureus 209-Р, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella oxytoca 317, Proteus vulgaris 3503, пигментобразующие и необразующие штаммы Pseudomonas aeruginosa 1677, 128, 381, 35, 11, Escherichia coli 3495, Candida albicans 5152, Bacillus cereus 8035; 1 штамм, выращенный из пробиотика «Бактисубгил»; 50 штаммов бактерий, выделенных из желудочного-кишечного тракта цыплят-бройлеров: молочнокислые, бифидобактерии, лактатферменгирующие, бактерии группы Е. coli, стрептококки, целлюлозолитические.

Животные: беспородные белые мыши обоего пола массой 18-20 г - 110 особей. Все эксперименты, в том числе умерщвление животных, проводили в соответствии с требованиями Федерального Закона от 0.1. 0.1. 1997г «О защите животных от жестокого обращения в процессе проведения опытов» и «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных (2003); 3 козлёнка массой 5 кг, 11 поросят по 17 кг, коза 4-х лет, цыплята-бройлеры кросса «Росс-308» - 300 голов.

Материалы. Питательные среды: мясопептонный агар и бульон, среда АГВ, среда Эндо, полужидкие среды Гисса с маннитом, лактозой, сахарозой, глюкозой и мальтозой, полужидкий мясопептонный агар, 5% кровяной агар, солевой агар с полимиксином, среда Сабуро, среда Кларка, цитратный агар Симмонса, мясопептонная желатина (МПЖ), среда Квасникова, Кистнера, Эугонара, Хамлина. Пластины биохимические, дифференцирующие энтеробактерии и стафилококки, кроличья сыворотка для определения коагулазы, системы индикаторные бумажные (СИБ) для определения оксидазы, ферментации глюкозы, наличия индола и сероводорода, диски с антибиотиками. Полипропиленовые фильтры с диаметром пор 0,45мм, стерильные фильтры (25мм С>0/х), шприцевой фильтр, предназначенный для фильтрования труднофильтруемых образцов с размерами пор 0,2 мкм.

Реактивы и препараты: набор красок для окраски по Граму, Цилю, стандарт мутности - 0,5 по Мак-Фарланду (раствор ВаС12 0,048 моль/л и раствор Н2 804 0,18 моль/л), 3% раствор перекиси водорода, 0,85 % раствор №С1, раствор метилового красного, 20% раствор КОН, 5% раствор а-нафтола в абсолютном спирте, 40% КОН, 10% раствор формалина, 50% раствор глицерина для хранения культуры, спирты возрастающей концентрации, ксилол, парафин, растворы гематоксилина и эозина, фармакопейные препараты «Бактису&гил», «Циклоспорин Гексал», «Ветом 1.1.».

Методы. Исследование микрофлоры воздуха и различных поверхностей в помещениях госпиталя для животных проводили согласно методикам (Лабинская, Волина, 2008). Культуральные, морфологические, тинкториальные и биохимические свойства микроорганизмов, чувствительность к антибиотикам определяли по общепринятым методами (Лабинская, Волина; 2008 г; Приказ № 535 от 22 апреля 1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений», МУ 2002; МУК 4.2.1890-04). Биохимические свойства изолятов стафилококков и бактерий семейства Еп1егоЬас1епасеае исследовали также с помощью пластин биохимических и СИБ. Наличие в цитоплазме клеток бацилл жировых включений и белка изучали (Нетрусов, 2005). Определение принадлежности выделенных бацилл к виду В. сегеиБ осуществляли согласно Межгосударственному стандарту («Метод определения В. сегеиз» ГОСТ 10444.8-88.). Факторы вирулентности (лецитиназная, протеолитическая, гемолитическая активности) определяли (Лабинская, Волина, 2008). Антагонизм штаммов В. сегеиэ по отношению к микроорганизмам других

s

видов проводили методом агаровых блоков (Теппер и др., 2007). Определение отсроченного антагонизма бацилл по отношению к другим видам бактерий осуществляли по методу A.M. Пушкарёва (2007). Изучение выделения антимикробных веществ в питательную среду проводили по методу (Лазовская и др., 2008). Выделенные штаммы В.сггеш сохраняли (Миллер, 1976). Доя проверки действия температурного фактора на В.сегет 42, 45,46, их содержали на скошенном агаре при 39-40 °С в течение 1 месяца без пересевов.

Безопасность штаммов В. cereus in vivo проверяли согласно указанию о методах введения препаратов, предназначенных для местного применения (на кожу и внутрибрюшинно), дополнив пероральным введением, как это рекомендуется для пробиотических штаммов. Аналогичный эксперимент проводили с обработкой животных иммуносупрессором «Циклоспорин Гексал» в терапевтических дозах (Добрица и др., 2001), т.к. рекомендуется иметь сведения о последствиях применения спорообразующих штаммов бактерий у особей с иммунодефицитами (Похиленко, Перелыгин 2007).

Для создания биопрепарата на основе отобранных штаммов B.cereus 42, 45, 46, их выращивали в течение 5-ти суток на мясо-пептонном агаре, делали смыв стерильным физиологическим раствором и смешивали равные объемы.

Моделирование кожных ран проводили иссечением в межлопаточной области кожного лоскута. После их инфицирования осуществляли обработку биопрепаратом в дозах 3-103 м.к./мл, 3-105м.к./мл или физиологическим раствором. Отделяемое из ран исследовали бактериоскопически и бактериологически, определяли чувствительность выделенных микроорганизмов к антибиотикам, измеряли размеры ран. Животных с инфицированными ранами кожи живота помещали на опилки, обработанные экспериментальным препаратом или стерильным физиологическим раствором.

Гистологически исследовали внутренние органы и биоптаты из ран лабораторных животных (Волкова, Елецкий, 1971).

Для опыта на цыплятах-бройлерах было сформировано по принципу аналогов 3 группы цыплят по 100 голов в каждой. У животных всех групп исследовали общее количество микроорганизмов в зобе и толстом кишечнике, а также уровень среди них молочнокислых, лакгатферментирующих, целлюлозолитических микроорганизмов, бифидобактерий, стрептококков, бактерий группы К coli. Подсчет общего количества микроорганизмов проводили по Бриду. Титр целлюлозолитических микроорганизмов определяли методом последовательных разведений от 10"4 до Ю^(Каблучеева, 2000).

Статистическую обработку результатов экспериментальных исследований на мышах осуществляли по И.П. Ашмарину и A.A. Воробьёву [1962], в отдельных опытах-с помощью непараметрических методов исследования - Критерия U Вилкоксона - Манна -Уитни [Гублер, Генкин, 1973]. Статистическую обработку данных, полученных на цыплятах, проводили по B.C. Асатиани, а также методом вариационной статистики (Ойвин И.А.,

1960) с применением компьютера по программе Ехсе1-7.0 из пакета Microsoft office - 2000.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Поиск и отбор штаммов В. cereus с антимикробной активностью

При бактериологическом исследовании микробиоценоза ветеринарного госпиталя в динамике на протяжении 1 месяца: микрофлоры воздуха в различных помещениях и поверхностей (операционные столы, столы для манипуляций, стены, клетки, где пребывали животные после оперативных вмешательств), было выделено 133 культуры микроорганизмов. Установлено, что среди них доминировали грамположительные кокки и бациллы: 84 штамма стафилококков различных видов, микрококков и 29 штаммов бацилл. Среди стафилококков встречались метициллннустойчивые штаммы, которые обнаружены только в воздушной среде, в частности S. aureus 8. В значительно меньшем количестве (36 штаммов) выделены грамотрицательные палочковидные бактерии (Е. coli), и микроорганизмы родов Branhamella и Acinetobacter. Кроме этого, обнаружены плесневые и дрожжеподобные грибы (всего 10 штаммов). Последние были представлены Candida albicans. Из 29 штаммов бацилл, 21 не вызывал гемолиз эритроцитов при культивировании на кровяном агаре. Штаммы бацилл, выделенные с поверхностей клеток, гемолизинами не обладали, а у животных, после операции помещенных в эти клетки, нагноение в ранах отсутствовало. Вследствие этого были отобраны штаммы бацилл из клеток, изучена их принадлежность к виду В. cereus. Из 21 штамма бацилл 11 принадлежали к В. cereus, у 7 из которых определена способность к выработке антимикробных веществ. Из этих штаммов отобрали 3 с более высокой антимикробной активностью - В. cereus 42, 45, 46, у которых изучено дополнительно наличие таких факторов, как протеаза и лецитиназа, а также повреждающее действие на макроорганизм при различных путях их введения. Все 3 штамма не обладали факторами вирулентности и не вызывали гибели белых мышей.

Фенотипические признаки исходных и модифицированных Bacillus cereus 42,45,46

Чистые культуры исходных штаммов В. cereus 42, 45, 46, которые культивировали общепринятым методом на мясо-пептонном агаре, образовывали колонии в R-форме. На мясо-пептонном бульоне все они росли в виде пленки. На дне пробирки образовывался хлопьевидный осадок. На желточно-солевом агаре с полимиксином отмечены восковидные колонии с изрезанными краями, но без радужного венчика. При окраске по Граму выявлены грамположительные палочки, расположенные хаотично или в виде цепочки (в зависимости от штамма). В мазках из суточной культуры, выращенной на среде с глюкозой и окрашенных фуксином, обнаружены внутри клеток зёрна волютина. При окраске конго красным в клетках бацилл белков, которые типичны для В. thuringensis, не обнаружено, но имелись капли жира при окраске Суданом III, что характерно для В. cereus. Споры располагались в

центре и не превышали размеры клеток. Отмечена активная подвижность всех штаммов бацилл. Бациллы были каталазоположительные, ферментировали глюкозу, мальтозу, сахарозу до кислоты, маннит не ферментировали. Росли на цитратной среде Симмонса. Реакция с метиловым красным была отрицательной. Все штаммы образовывали ацетилметилкарбинол при постановке реакции Фогеса-Проскауера в модификации Баритга. Штаммы В. сегет 42,45,46 были чувствительны к гентамицину и офлоксацину.

При изучении морфологических, культуральных, биохимических признаков и чувствительности к антибиотикам у штаммов В. сегет 42, 45, 46, которые хранились при повышенной температуре установлено, что морфологические признаки бацилл всех штаммов изменились в сторону полиморфизма и расположения в мазке. Имела место диссоциация Я-форм колоний в М-формы. Биохимическая активность штаммов не изменилась. Следовательно, имела место модификационная изменчивость штаммов. Интересным был факт появления чувствительности к большему набору антибиотиков, которые не действовали на исходные штаммы: левомицетину, цефалотину, цефазолину (Таблица 1). Впоследствии при хранении в условиях холодильника (+4 °С) фенотипические признаки бацилл восстанавились, а повышенная чувствительность к антибиотикам сохранялась.

Культура В. сегет, выращенная из препарата «Бактисубтил» (штамм 1Р 5832), по ряду признаков отличалась от выделенных штаммов: на среде с полимиксином рост был очень скудный в виде округлых восковидных колоний с изрезанными краями белого цвета без венчика; на цитратной среде Симмонса культура рост не давала; чувствительность к антибиотикам была значительно выше, чем у госпитальных изолятов (Таблица 1).

Таблица 1 - Чувствительность к антибиотикам исходных и модифицированных штаммов В. сегеиз 42, 45, 46 и культуры из «Бактисубтил»

Антибиотики Зоны отсутствия роста, мм (М ±ш)

Штамм 42 Штамм 45 Штамм 46 Культура из препарата «Бактисубтил»

Исходный Моди-фицирова ннын Исходный Моди-фициров аннын Исходный Модифицирован ный

Левомицетин - 25 + 1 - 18+1 23 ±3 28+2 26 ±3

Цефалотин - 23 ±0 - 22±1 - 27+3 29 ±3

Цефазолин - 15±1 - 24 ±2 - 21 + 1 23 ±2

Гентамицин 32± 1 35±2 30±1 30±3 20 ±2 30 ±3 36+2

Офлоксацин 30±2 38+1 35 ±2 27±2 30±2 40 ±3 40±1

Примечание — «—» отсутствие чувствительности.

Антимикробная активность штаммов Bacillus cereus 42,45,46 по отношению к условно-патогенным микроорганизмам. Внутривидовой

антагонизм бацилл

Установлено, что штаммы В. cereus 42, 45, 46 обладали способностью выделять в питательную среду бактерицидные вещества, действующие на все взятые в опыт бактерии. У выделенных и музейных культур стафилококков (S. aureus 209Р, S. aureus 23, 36, 38, 41), в том числе метициллинустойчивого S. aureus 8 зоны отсутствия роста составили в среднем 20±3мм.

По отношению к К coli антимикробная активность была больше выражена у штамма В. cereus 42, который более значительно подавлял рост всех взятых в опыт штаммов: Е. coli 3495, Е. coli 44, 47, 88. Зоны отсутствия роста составили в среднем 30 ± 5мм. Самая значительная бактерицидная активность всех штаммов В. cereus, особенно В. cereus 45, отмечена по отношению к синегнойной палочке (Р. aeruginosa 381), которая, будучи посеяна газоном, выросла в виде небольших островков.

Кроме того, эти микроорганизмы утрачивали способность выделять пигмент в питательную среду, а у музейного штамма Р. vulgaris 3503 бациллы подавляли роение. При этом он рос в виде отдельных колоний. То есть у последних двух видов бактерий были подавлены факторы вирулентности. Таким образом, можно констатировать, что спектр антимикробной активности штаммов В. cereus 42, 45, 46 широкий, хотя преобладал эффект, направленный против грамотрицательных бактерий.

Культура, выращенная из препарата «Бактисубтил», не выделяла при своем росте бактерицидные субстанции.

Модифицированные повышенной температурой штаммы В. cereus 42, 45, 46 практически утрачивали способность выделять в среду бактерицидные вещества, сохраняя ее в значительно редуцированном виде только к штамму £ coli 3495. Вокруг дисков, смоченных безмикробным фильтратом питательной среды, где выращивали бациллы, диаметр зон отсутствия роста составил в среднем 10 ± 1мм.

Вместе с тем автоклавированный бульон, в котором выращивали эти штаммы бацилл при добавлении к питательной среде условно патогенных бактерий, стимулировал повышение их чувствительности к антибиотикам, а у синегнойной палочки дополнительно подавлялось выделение пигмента. Для примера приводим данные об антибиотикочувствительности бактерий, выращенных с автоклавированным бульоном, где предварительно выращивали культуру из штамма В. cereus 45 (Таблица 2).

Как видно из таблицы 2, у штамма S. aureus 209 Р выросла чувствительность к цефотаксиму и незначительно повысилась к другим препаратам, у штамма Е. coli 3495 чувствительность изменилась мало, зато синегнойная палочка приобрела чувствительность ко всем препаратам, за исключением цефазолина.

Таблица 2 - Чувствительность условно-патогенных бактерий к антибиотикам после инкубации с автоклавированным бульоном, где _выращивали В. сегеиь 45_

Культуры Зоны отсутствия роста в мм

Левоми-цетин Гентами-цин Офлок- caiuiH Цефазо-лин Цефо-таксим

S. aureus 209 Р (контроль) 28±1 28±2 35±3 28±2 20±4

S. aureus 209 Р (опыт) 30±3 30±4 38±3 28±2 35±4

Е. coli 3495 (контроль) 25±3 28±2 30±5 27±5 30±2

Е. coli 3495 (опыт) 25±2 30±5 35±2 30±3 15±2

Р. aeruginosa 381(конгроль) - - 25±2 - -

Р. aeruginosa 381 (опыт) 10±2 25±3 25±2 - 17±3

Примечание — «-» отсутствие чувствительности.

Штаммы В. cereus,42, 45, 46, подвергнутые действию температурного фактора, взамен выделения бактерицидных веществ в питательную среду приобрели выраженную способность за счет роения подавлять рост тех же тестируемых условно-патогенных бактерий. На грамотрицательные бактерии (£ coli 3495 и особенно Р. aeruginosa 381, 128, и 11) в большей мере действовал штамм В. cereus 46. Штаммы бацилл, особенно В. cereus 45, активно вытесняли Candida albicans 5152. Культура, выращенная из препарата «Бактисубгил», не превосходила по своей способности подавлять рост этих же штаммов бактерий и дрожжеподобных грибов, за исключением несколько более выраженного действия на К coli 3495 и К. oxytoca 317 (Таблица 3).

После выращивания в течение 5 суток штаммов В. cereus 42, 45, 46 на полипропиленовых дисках, наложенных на питательную среду (исследование отсроченного антагонизма), установлено, что на такой среде культуры условно-патогенных бактерий роста не давали, очевидно, из-за потребления питательных веществ бациллами.

Результаты этого опыта позволили заключить, что выраженность и прямого, и опосредованного антагонизма у изученных штаммов бацилл различна по отношению к условно-патогенным микроорганизмам, поэтому было решено создать экспериментальный препарат из смеси 3-х штаммов В. cereus для практического использования («Бакцер»). Вместе с тем было важным определить, как они поведут себя при совместном культивировании in vitro, т.е. определить у них наличие внутривидового антагонизма. Для этих целей суточную культуру каждого штамма В. cereus 42, 45 или 46 засевали

газоном, после чего накладывали блоки агара с 5-ти суточной культурой этих же штаммов.

Таблица 3 - Прямой антагонизм штаммов В. сегеш 42,45,46 и культуры из препарата «Бактисубтил» по отношению к музейным штаммам условно-патогенных микроорганизмов

Штаммы условно- патогенных микроорганизмов Диаметр зон расселения культур из В. cereus за пределы агарового блока, мм (М±т)

Штамм 42 Штамм 45 Штамм 46 Штамм из препарата «Еашисубтил»

Staphylococcus aureus 209-Р 40±1 35±2 23±2 не выселялся

Escherichia coli 3495 20±1 15±2 25±2 35±1

Klebsiella oxytoca 317 17±1 25±1 25±2 30±1

Proteus vulgaris 3503 15±2 18±2 18±2 15±1

Pseudomonas aeruginosa 11 35±1 35±2 не выселялся не выселялся

Pseudomonas aeruginosa 381 30±1 30±2 40±2 30±)

Pseudomonas aeruginosa 128 30±2 30±2 40±4 35±1

Candida albicans 5152 35±4 45±4 40±2 35±2

Установлено, что штаммы В. сегею 42, 45, 46 прямо действовали на рост друг друга, особенно активным был В. сегеия 46, который подавлял подвижность не только у двух других культур {В. сегеиз 42 и 45), но и у клеток суточной культуры собственного штамма. Следовательно, можно было ожидать, что в ранах или при пероральном введении они, будучи внесены в смеси друг с другом, проявят внутривидовой антагонизм. В ходе дальнейшей работы данное предположение подтвердилось.

Микробиологическое и гистологическое изучение безопасности композиции экспериментального препарата «Бакцер» при различных путях поступления в организм белых мышей

У контрольных групп мышей, обработанных водой перорально или физиологическим раствором внутрибрюшинно, гистологические изменения во внутренних органах отсутствовали. Иммунодепрессанг «Циклоспорин Гексал» оказывал в терапевтических дозах токсическое действие на организм

экспериментальных животных, повреждая печень и почки. Вместе с тем и в контрольных, и в опытных группах падежа животных не было. Они оставались активными и хорошо потребляли корм.

При естественном поступлении через рот «Бакцер» в дозе 1-107 м.к. мл изменения в желудочно-кишечном тракте в опыте и в контроле можно расценить как активацию обновления эпителиального пласта желудка и толстого кишечника и увеличение выделения секрета из бокаловидных клеток. «Бакцер» не приводил к дополнительным гистологическим изменениям во внутренних органах, ответственных за детоксикацию и выделение (печень и почки), развившихся от действия иммунодепрессанта.

При посеве фекалий этих животных на мясо-пептонный агар, среду Эндо и ЖСА роста не было, бациллы также не высевались. В контрольной группе на среде Эндо был рост, характерный для лактозопозитивной кишечной палочки, а на ЖСА росли бактерии, идентифицированные как стафилококки.

При внутрибрюшинном введении 5-107м.к. бацилл, один из трёх штаммов (В. cereus 42 - факультативный анаэроб) был высеян из брюшной полости. При этом на фоне иммунодепрессанта отмечали гистологические признаки, характерные для амилоидоза печени и селезёнки, обусловленные длительной (в течение 14 суток) персистенцией в организме этого штамма. Однако и после пребывания в организме животного у штамма В. cereus 42 не появилась гемолитическая и протеазная активность, не изменилась чувствительность к антибиотикам.

Санирующий эффект экспериментального препарата «Бакцер»на кожные раны

В ранах, инфицированных смесью условно-патогенных микроорганизмов, после двукратной их обработки «Бакцер» из исходных или модифицированных температурой В. cereus 42,45,46 в дозе З103 или 3-Ю5 м.к./мл уже на 2-е сутки условно-патогенная микрофлора была представлена только стафилококками (5. aureus, S. epidermidis), колониеобразующих единиц которых было в среднем 100-110 из одной раны. Выделенные из ран микроорганизмы приобретали большую чувствительность к антибиотикам, тогда как в контроле отмечен сплошной рост стафилококков, и присоединялась грамотрицательная микрофлора, (.Serratia sp или Klebsiella oxytoca). В ранах бациллы не приживались даже на фоне обработки мышей «Циклоспорин Гексал». Раны заживали у опытных животных быстрее, вне зависимости от фона (животные с или без предварительной обработкой иммунодепрессантом). Одинаково эффективны были препараты из исходных и модифицированных штаммов В. cereus 42, 45, 46. Гистологические исследования биоптатов ран показали наличие активированных макрофагов и менее выраженные признаки воспалительного процесса у мышей опытных групп (Рисунок 1).

, ;'ИГУ:'' V' ': -.-Г* .t

'bW*** ' , ' -г . : . -V •»„,

'.«•■ . - - .:г < -"-* J

• $ •' "'ч - * .--Q у - v.-'- / '•-%

»• - -ч' » ; у• " г,'.--: : - С.

л- -^^А;:.

~ • . • - , 'V Г'Д. * <

$...... ^ лч .4,5 ; • •^'■•т.-''. •••.. •• -

¿-у- - - . \ ^

к. „ .... - Б

Рисунок 1- Гистологические изменения в ранах у мышей через 8 суток после аппликации на инфицированные раны «Бакцер». Условные обозначения: А-активированные макрофаги в молодой грануляционной ткани при обработке в дозе З103 м.к./мл. Гематоксилин-эозин, X 400; Б-замещение раневого дефекта молодыми коллагеновыми волокнами, большое количество фибробластов при обработке в дозе 3-105 м.к./мл. Гематоксилин-эозин, X 200

Размеры ран на 3-й сутки у экспериментальных животных становились меньше чем у контрольных мышей и достигали минимальных величин на 7-е сутки. Уменьшение размеров ран было достоверным (Ри=0,05).

При сравнительных исследованиях эффективности «Бакцер» и культуры, выращенной из препарата «Бактисубтил», которыми обрабатывали раны, инфицированные P. aeruginosa 128, оказалось, что этот штамм в ранах не приживался, а вместо него из раневого отделяемого на питательных средах выделена Klebsiella oxytoca. Из ран, обработанных культурой из препарата «Бактисубтил», высевалось в пять раз больше этих бактерий, чем из ран обработанных «Бакцер», и дополнительно - бациллы. Спустя 3 суток размеры ран у животных, обрабатываемых «Бакцер» были меньше на 0,5 см по сравнению с ранами, на которые наносили культуру из «Бактисубтил».

Опилки, обработанные экспериментальным препаратом, препятствовали нагноению ран у лабораторных животных.

Раны у сельскохозяйственных животных также хорошо санировались и быстрее заживали от «Бакцер» по сравнению с общепринятыми в ветеринарии антисептиками и химиотерапевтическими препаратами (йод, стрептоцид, мазь левомицетиновая).

Пробнотнческая активность «Бакцер»

Результаты влияния экспериментального биопрепарата на микрофлору желудочно-кишечного тракта цыплят представлены в таблице 4.

Как хорошо видно из таблицы 4, общее количество микроорганизмов повышалось от обоих препаратов «Бакцер» и «Ветом 1.1.» и в зобе, и в слепых отростках практически одинаково у цыплят в возрасте 24 суток по сравнению с контролем. Аналогично изменялись и молочнокислые бактерии, но от «Ветом 1.1.» их уровень был выше, чем от «Бакцер», в 1,6 и 1,7 раза, соответственно в зобе и слепых отростках. Бифидобактерии в большей мере увеличивались в

зобе от «Ветом 1.1.», несколько ниже их уровень был от «Бакцер», а в слепых отростках количество этих микроорганизмов было больше при введении экспериментального препарата. Лактатферментирующие бактерии в зобе увеличивались от «Ветом 1.1.», но уменьшались от «Бакцер». В слепых отростках их уровень от обоих препаратов практически одинаково увеличивался по сравнению с контролем у цыплят 24-суточного возраста. В обоих исследованных органах возрастал уровень целлюлозолитических бактерий, особенно от «Ветом 1.1.». В отношении стрептококков и бактерий группы кишечной палочки отмечена иная динамика. У цыплят 24-суточного возраста их количество было снижено от «Бакцер» и от «Ветом 1.1.», особенно значительно снижались бактерии группы Е. coli (Таблица 4). С возрастом цыплят (40-суточные) влияние пробиотиков было не столь значительным, как у 24-дневных. Общее количество бактерий у иитактных цыплят возрастало, а от обоих препаратов по сравнению их уровнем у 24-суточных не изменялось в зобе и слепых отростках. У опытных групп уровень молочнокислых и бифидобактерий несколько снижался, содержание лактатферментирующих бактерий незначительно увеличивалось, мало изменялся уровень целлюлозолитических бактерий. Уровень бактерий группы Е. coli несколько снижался по сравнению с первым сроком исследования, а количество стрептококков умеренно возрастало (Таблица 4).

Таблица 4 - Микрофлора желудочно-кишечного тракта цыплят-бройлеров при даче пробиотиков на основе бактерий рода Bacillus (M±m)

Представители различных бактерий желудочно-кишечного тракта Возраст 24 дня 40 дней

Группа Интакгные «Бакцер» «Ветом 1.1.» Интактные «Бакцер» «Ветом 1.1.»

1 2 3 4 5 б 7 8

Общее количество микроорганизмов, млрд/г Зоб 8,43*0,07' 26,26*3,54 26,20*0,9 12,42i0,48' 26,58±1,20 26,48*1,05

Слепые отростки 27,39*2,76' 57,07*9,67 57,58±4,45' 22,33*2,98 57,98±3,11 57,70*13,07

Молочнокислые млн/г Зоб 1,95*0,48 23,03*0,98 38,0*11,49 0,15*0,0005' 0,5*0,02 0,45*0,017

Слепые отростки 19,5*0,96' 41,0*10,79 69,5*1,66* 3750,0±1123,0 13875,0*1031,0 12900,0*1910,0

Лактатферментирующи е, млн/г Зоб 0,0002±0,008 0,00009*0,004 0,0008*0,003 0,0006±0,0005 0,15*0,0012' 0,13*0,003'

Слепые отростки 0,0014*0,003 0,014*0,007' 0,01*0,001' 0,014±0,0003 1,22*0,001 0,4*0,007

Бифидобактерии, млн/г Зоб 2,05*0,096' 17,18*0,24" 20,25*5,97' 3,0*11,31 20,75*3,77' 20,5*18,19

Слепые отростки 17,75*10,06 30,25*3,45 27,5*13,58 12,5±2,87 28,5*4,79 23,25*4,05

1 2 3 4 5 6 7 8

Слепые отростки 352,5*60,0* 37,75* 10,32 50,0±15,01 28,0*62,0 39,0*10,79 5,75*2,97

Стрептококки, млн/г Зоб 21,5*2,87' 15,75*3,09 13,5*0,96 67,75*12,23 24,0*3,14* 52,5*2,87

Слепые отростки 45,45*0,16 29,75*2,43 38,0*0,41 252,3*0,15 49,1*1,31' 84,8*3,82'

Целлюлозолитические, титр Зоб 1:10' 1:10"' 1:104 ШО"1 1.10"1 1:104

Слепые отростки 1:10-* 1:10" 1:104 1:103 1:10' ыо5

Примечание - «*» - различия между опытной и контрольной группами достоверны при р<0,05 здесь и далее.

Выводы

1. Экспериментально обоснован поиск во внешней среде — микробиоценозе ветеринарного госпиталя апатгогенных штаммов Bacillus cereus с опосредованной антагонистической активностью по отношению к условно патогенным грамположительным и грамотрицательным микроорганизмам.

2. Установлено, что чистая культура отобранных штаммов В. cereus 42, 45, 46 обладала типичными морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами, присущими виду, но не имела факторов патогенности и не приобрела их даже на фоне токсического действия на организм лабораторных животных иммуносупрессора «Циклоспорин».

3. Отмечено, что хранение в течение месяца при температуре 3940 °С культур В. cereus 42, 45, 46 приводило к их модификационной изменчивости с утратой опосредованного действия на тестируемые микроорганизмы, но с приобретением прямого, антагонизма за счет роения, присущего культуре из официнального пробиотика «Бактисубтил».

4. Сформулированы критерии отбора штаммов В. сегешг-антагонисгов условно патогенных микроорганизмов, согласно которым они должны быть изначально апатогенными, обладать опосредованным и (или) прямым антагонизмом широкого спектра действия по отношению к бактериям и кандидам, ранозаживляющим и пробиотическим эффектами, иметь типичные морфологические, культуральные и биохимические признаки; не приживаться в макроорганизме и не приобретать факторы патогенности, в том числе на фоне иммунодепрессанта, не повышать устойчивость к антибиотикам.

5. Показано, что экспериментальный биопрепарат, полученный из смеси штаммов В. cereus 42, 45, 46, обладал санирующим и ранозаживляющим действием при наружном применении у лабораторных и сельскохозяйственных животных, в 5 раз превышающим эффективность культуры, выращенной го официнального препарата «Бактисубтил».

6. Установлено, что данный экспериментальный препарат обладал пробиотическими свойствами, аналогичными ветеринарному пробиотику «Ветом 1.1.».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Позднякова И.Г. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха в госпитале для животных / И.Г. Позднякова, A.C. Рыхлов, JI.C. Назарова // Научно-практическая конференция профессорско-преподавтельского состава и аспирантов по итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы за 2010 г. - Саратов, 2010.-С. 64-67.

2. Позднякова И.Г. Межпопуляционные отношения в микробиоценозах ветеринарного госпиталя / И.Г. Позднякова, JI.C. Назарова // Стратегия

взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой: Тез. пятой Всероссийской конференции молодых учёных. - Саратов, 2010. - С. 103.

3. Позднякова И.Г. Пробиотические свойства алатогенных госпитальных штаммов Bacillus cereus / И.Г. Позднякова, JI.C. Назарова // Вавиловские чтения - 2010: материалы Междунар. научно-практической конференции. - Саратов, 2010. —С. 167—168.

4. Позднякова И.Г, Механизмы антагонистического действия Bacillus cereus на Pseudomonas aeruginosa / И.Г. Позднякова, Л.С. Назарова II Актуальные проблемы современной ветеринарии, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани: материалы Международной науч.- практ. конф. -Краснодар, 2011.-С. 119-122.

5. Назарова Л.С. Микробиологический и гистологический контроль безопасности пробиотических штаммов Bacillus cereus / Л.С. Назарова, И.Г. Позднякова // Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии и селекции животных: материалы конференции посвящены 80-летию доктора ветеринарных наук, профессора, заслуженного деятеля науки РФ Демкина Григория Прокофьевича. -Саратов, 2011. -С. 54-55.

6. Позднякова И.Г. Факторы, обуславливающие антагонистический эффект Bacillus cereus / И.Г. Позднякова, Л.С. Назарова // Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии и селекции животных: материалы конференции посвящены 80-летию доктора ветеринарных наук, профессора, заслуженного деятеля науки РФ Демкина Григория Прокофьевича. - Саратов, 2011. - С. 57 - 59.

7. Позднякова И.Г. Клинические изоляты пробиотических штаммов Bacillus cereus как санирующие агенты кожных ран животных / И.Г. Позднякова, Л.С. Назарова // Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения: материалы Междунар. науч.-практ. конф. посвященной Всемирному году ветеринарии в ознаменование 250-летия профессии ветеринарного врача. - Ульяновск, 2011. - С. 23 - 25.

8. Ларина Е.К. Характеристика изменчивости у пробиотических штаммов Bacillus cereus / Ларина Е.К, Л.С. Назарова, И.Г. Позднякова // Материалы IV-й Всероссийской студенческой научной конференции. -Ульяновск, 2011.-С. 97-99.

9. Позднякова И.Г. К вопросу о влиянии штаммов Bacillus cereus со свойствами пробиотиков на организм экспериментальных животных при пероральном введении иммунодепрессанта / И.Г. Позднякова, Л.С. Назарова // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2011. - №9.-С. 6-9.

10. Позднякова И.Г. Сравнительные характеристики официнального пробиотического препарата Бакгисубтил и апатогенных клинических изолятов Bacillus cereus со свойствами пробиотиков / И.Г. Позднякова, Л. С. Назарова // Естественные и технические науки. - 2011. - № 4. - С. 173 -174.

11. Позднякова И.Г. Характеристика микробной контаминации стационара госпиталя для животных / И.Г. Позднякова, Л.С. Назарова // Ветеринарный врач. - 2011. - № 3. - С. 23 - 25.

12. Назарова Л.С. Новые подходы в лечении инфицированных ран кожного покрова / Л.С. Назарова, Г.А. Кутузова, И.Г. Позднякова П Вестник ветеринарии. - 2012. - № 1. - С. 37-38.

13. Пат. 2435864 Способ пробиотической обработки клеток с содержащимися в них мелкими непродуктивными животными в условиях ветеринарного госпиталя / И.Г. Позднякова, Л.С. Назарова; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ». - № 2010134456; заявл. 17. 08.2010; опубл. 10.12.2011.

Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Подписано в печать 14.11.2013.

Гарнитура Times. Печать Riso. _Усл. печ. л. 1,00. Тираж 100 экз. Заказ 0446_

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии

ИП «Экспресс тиражирование» 410005, Саратов, Пугачевская, 161, офис 320 S 27-26-93

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Позднякова, Ирина Геннадьевна, Саратов

 Н.А. КРИЧЕВСКИЙ, С.Ф. ГОНЧАРОВ

КОРПОРАТИВНАЯ СОЦИАЛЬНАЯ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ

1

Издательско-торговая корпорация «Дашков и К°»

Н. А. Кричевский С. Ф. Гончаров

КОРПОРАТИВНАЯ

СОЦИАЛЬНАЯ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ

2-е издание

Москва, 2008

УДК 36 ББК 65.27 К82

К82 Кричевский Н. А., Гончаров С. Ф. Корпоративная

социальная ответственность. — 2-е изд. — М.: Издатель-ско-торговая корпорация «Дашков и К°», 2008. — 216 с.

ISBN 978-5-91131-849-9

Книга посвящена новому для России, но массовому для развитых стран явлению в социальной защите населения — корпоративной социальной ответственности.

Авторы рассматривают социальную ответственность бизнеса как инструмент повышения уровня жизни работников предприятий, не забывая об окружающем сообществе и экологии. Большое внимание уделено зарубежному опыту корпоративной социальной ответственности, современным коллективным договорам, анализу нефинансовой или социальной отчетности ведущих российских компаний.

Читатели узнают много нового о путях развития корпоративного социального страхования, проанализируют направления совершенствования корпоративных жилищных программ, смогут составить рейтинг социальной ответственности любой российской компании. Концепция корпоративной социальной ответственности станет понятней и ближе.

УДК 36 ББК 65.27

ISBN 978-5-91131-849-9

© Н. А. Кричевский, С. Ф. Гончаров, 2006

ОГЛАВЛЕНИЕ

Для чего написана эта книга..................................................................................................5

ГЛАВА 1. КОРПОРАТИВНАЯ СОЦИАЛЬНАЯ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ В ТЕОРИИ..................................................................................7

§1. Что такое корпоративная социальная ответственность...............7

§2. КСО и социально-трудовые отношения....................................................14

Понятие трудовых отношений...............................................................................14

Сущность социально-трудовых отношений..............................................15

Социальное партнерство.............................................................................................17

Международное регулирование социально-трудовых

отношений.......................................................................................................................23

Глобализация........................................................................................................................25

§3. КСО и социальная защита занятого населения.................................28

Социальная защита населения.............................................................................29

Определение социальной защиты занятого населения...................33

Функции, принципы и формы социальной защиты

занятого населения.................................................................................................36

ГЛАВА 2. КОРПОРАТИВНАЯ СОЦИАЛЬНАЯ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ НА ПРАКТИКЕ...................................................................43

§1. Зарубежные концепции КСО..............................................................................43

Европа..........................................................................................................................................45

США..............................................................................................................................................47

Канада..........................................................................................................................................49

Основное в зарубежных моделях КСО..........................................................51

Стандартизация КСО.....................................................................................................53

§2. Необходимость развития КСО в России...................................................57

Общественные ожидания..........................................................................................59

Макроэкономические факторы внедрения КСО...................................62

Социальная сфера.............................................................................................................62

Занятость.................................................................................................................................65

Безработица..........................................................................................................................67

Охрана окружающей среды.....................................................................................70

§3. Коллективный договор как инструмент реализации КСО............71

Примеры коллективных договоров...................................................................73

Что не относится к коллективному договору

и является частью КСО.......................................................................................78

Что должно входить в коллективный договор.........................................85

§4. Социальные отчеты российских компаний............................................86

Социальный отчет ОАО "ГМК "Норильский никель"......................91

Социальный отчет ОАО "ЛУКОЙЛ"................................................................96

Социальный отчет РАО "ЕЭС России"...........................................................99

Общее в социальной отчетности российских компаний................104

ГЛАВА 3. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ КОРПОРАТИВНОЙ СОЦИАЛЬНОЙ ПОЛИТИКИ.........................................................................................107

Краткая характеристика ОАО "Мосэнерго"...........................................107

§1. Развитие корпоративного социального страхования.................110

Российские и мировые стандарты социального

обеспечения.................................................................................................................110

Обязательное социальное страхование

в ОАО "Мосэнерго"...............................................................................................113

Корпоративное социальное страхование

в ОАО "Мосэнерго"...............................................................................................116

Страхование дней ожидания.................................................................................117

Накопительное страхование семьи.................................................................118

§2. Оптимизация Программы ипотечного жилищного

кредитования.....................................................................................................................120

Жилищная политика ОАО "Мосэнерго".....................................................122

Программа ипотечного жилищного кредитования

ОАО "Мосэнерго"...................................................................................................124

§3. Рейтинг социальной ответственности.......................................................130

Показатели социальной ответственности

перед работниками................................................................................................136

Показатели социальной ответственности

перед окружающим сообществом............................................................140

Показатели экологической ответственности..........................................142

Показатели социальной ответственности..................................................144

Выводы...........................................................................................................................................148

Литература по теме.............................................................................................................152

Приложения:

1. Международный стандарт БА8000:

2001 Социальная ответственность 8000..............................................156

2. Коллективный договор

ОАО "Мосэнерго" на 2005-2006 гг...........................................................168

3. Социальный кодекс ОАО "ЛУКОЙЛ".....................................................189

Для чего написана эта книга

Российская система социальной защиты населения переживает нелегкие времена. По ряду причин государство сегодня не в состоянии обеспечить приемлемый уровень социальной защищенности людей. Установленные на заре новейшей истории России социальные гарантии минимальны, насущные социальные проблемы не решаются, механизмы социальной помощи показывают свою неэффективность.

В этих условиях все большее значение приобретают социальные программы российского бизнеса, едва ли не единственного института, пытающегося смягчить социальную напряженность в обществе. Ограниченный финансовый и правовой арсенал способов решения социальных проблем своих работников и окружающего сообщества дополняется отсутствием методологической базы социальной политики. Не хватает концепции действий, в которой нашли бы отражение планируемые и реализуемые социально ориентированные мероприятия.

За рубежом такая концепция разработана и уже второе десятилетие является основой деятельности множества компаний. Эта концепция получила название корпоративной социальной ответственности, или КСО. В развитых странах в КСО включатся вопросы регулирования социально-трудовых отношений, социальные программы для местного сообщества, мероприятия по обеспечению экологической безопасности производства, а в отдельных случаях — меры по стимулированию экономического и социального развития всего общества. Внедрение принципов КСО в повседневную деятельность предприятий обусловлено нарастающими процессами глобализации, важностью создания положительного имиджа корпораций в регионах присутствия, получения дополнительных инвестиций с помощью проведения социально ответственной политики.

Стремясь заполнить теоретический вакуум, мы предприняли исследование, основными задачами которого стали:

— обобщение теоретического багажа КСО, уточнение основ социальной защиты работников, принципов государственного регулирования развития социальной ответственности российских предприятий;

— исследование зарубежного опыта КСО, особенно в части социальной защиты занятого населения и поддержания социальной стабильности в окружающем сообществе;

— представление российских достижений внедрения КСО в финансово-хозяйственную деятельность предприятий;

— разработка механизмов реализации принципов КСО в современных российских условиях;

— определение направлений совершенствования корпоративной социальной политики, адаптированных к финансово-хозяйственной деятельности конкретной организации.

Предметом нашего исследования стали не только теоретические основы современных социально-экономических отношений. Мы проанализировали современные коллективные договоры российских предприятий, рассмотрели корпоративные страховые и пенсионные программы, уделили внимание развитию ипотеки. Нам удалось сформулировать методические основы, необходимые для составления рейтинга социальной ответственности компаний, показать эффективность социальной отчетности для развития бизнеса.

Однако главная задача, стоявшая перед нами при написании этой книги, заключалась в ознакомлении широкого круга читателей с теми возможностями, которые дает КСО в деле улучшения социального положения людей, в убеждении руководителей предприятий в полезности и актуальности КСО для их бизнеса, в представлении молодым гражданам нашей страны путей достижения согласия между людьми в процессе их жизнедеятельности.

Никита Кричевский, Сергей Гончаров.

ГЛАВА 1. КОРПОРАТИВНАЯ СОЦИАЛЬНАЯ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ В ТЕОРИИ

§1. Что такое корпоративная социальная ответственность

В современной экономической науке распространено мнение, что корпоративная социальная ответственность (КСО) появилась в 90-х гг. прошлого века вместе с признанием глобализации как доминирующей тенденции общемирового развития. Однако это не совсем верно. Еще в начале 70-х гг. XX в. на Западе возникла теория, объяснявшая суть взаимоотношений бизнеса и общества, основным постулатом которой стал тезис о том, что если компания не уходит от налогообложения, устанавливает приемлемый уровень заработной платы, выполняет условия по безопасности труда и защите экологии, то такая компания ведет добросовестную деловую практику, а значит, является социально ответственной.

Впервые основные положения этой теории, получившей название теории корпоративного эгоизма, представил нобелевский лауреат М. Фридман, писавший в 1971 г. в New York Times: "Существует одна и только одна социальная ответственность бизнеса: использовать свои ресурсы и энергию в действиях, ведущих к увеличению прибыли, пока это осуществляется в пределах правил игры".

Другая точка зрения получила название теории просвещенного эгоизма. В ней КСО отождествлялась со спонсорством и благотворительностью как разновидностями социального инвестирования. Квинтэссенцией теории стал тезис о том, что

текущее сокращение прибылей компаний за счет социально ориентированных трат создает благоприятное социальное окружение, способствующее устойчивому развитию бизнеса.

За последние 10 лет международное понимание необходимости КСО и теоретическое обоснование направлений ее развития значительно продвинулись по сравнению с представленными выше взглядами. В современных условиях общественного развития трактовка концепции КСО, когда в социальную ответственность попадает все, включая способность вовремя выплачивать своим сотрудникам зарплату и вовремя платить налоги, характерна для "молодых, развивающихся рынков, недавно открывшихся (всего 10 лет назад), типа российского и китайского"1. Более узкая трактовка, принятая в западных компаниях, гласит, что "социальная ответственность — это способность и желание бизнеса по собственной воле заниматься вопросом, не только прямо не связанным с производством, продажей товаров и услуг, но и с благополучием общества той страны, в которой компания работает"2, а общество — это в том числе потребители продукции компании и сотрудники компании, а также их семьи.

Современная концепция КСО, распространенная на Западе, показывает стремление компаний добровольно и самостоятельно решать наиболее насущные проблемы общества. Например, Европейская комиссия дает такое определение КСО: "Корпоративная социальная ответственность по своей сути является концепцией, которая отражает добровольное решение компаний участвовать в улучшении общества и защите окружающей среды"3. Рамочное определение КСО подчеркивает добровольный характер проводимых компаниями общественно ориентированных мероприятий.

1 Корпоративная социальная ответственность: общественные ожидания / Под ред. С. Е. Литовченко, М. И. Корсакова. — М., 2003. С. 61.

2 Там же.

3 The Challenges of Corporate Social Responsibility. Towards Constructive Partnership // The Phillip Morris Institute for Public Policy Research ASBL, Brussels, Belgium, 2000.

Профессор М. ван Марревиик из Эразмус Университета (г. Роттердам, Нидерланды), одного из ведущих учебных и научных центров по изучению КСО, представляет такое определение: "КСО — это включение социальных и экологических вопросов в процесс бизнеса и его взаимодействие с заинтересованными сторонами"1. Добавим, что названный университет ведет международный исследовательский проект по разработке основ и новых измерений, способных поддержать компании в демонстрации социально ответственного способа ведения бизнеса. О заинтересованности общества в результатах исследования говорит тот факт, что проект финансируется ЕС.

Из представленных определений следует, что в КСО включены два направления — развитие социально-экономических отношений, частью которых являются социально-трудовые отношения, и экологическая безопасность. Включение вопросов защиты экологии произошло под влиянием различных общественных объединений и в результате многочисленных экологических катастроф, самыми известными и оказавшими наибольшее влияние на изменение политики корпораций по отношению к обществу стали:

• утечка токсичных газов на заводе по производству пестицидов компании Union Carbide в Бхопале (Индия) в 1994 г., в результате которой погибли более 22 000 человек;

• катастрофа танкера Valdez компании Exxon у берегов Аляски в 1989 г., приведшая к самому большому разливу нефти в истории Америки — пораженными оказались более 1770 км прибрежной территории, сумма штрафов компании составила 1 млрд долларов;

• обвинения нефтяной компании Shell в нарушении прав коренного населения в долине р. Нигер на территории Нигерии, где компания Shell Nigeria добывала

1 G. Zwetsloot, M. van Marrewijk. Corporate Sustainability & Social Responsibility // Pre-Conference: EFQM Learning Edge: Social Dimensions of Organizational Excellence, 2003, June, The Hague.

80% своей нефти, кроме того, компании были предъявлены обвинения в финансировании диктаторского режима в стране.

В последнее время в понятие КСО часто включаются вопросы взаимоотношений корпораций с инвесторами и акционерами, эта тенденция особенно проявилась после скандалов с крупнейшими американскими компаниями Enron и WorldCom. Инвесторы, акционеры и общество оказались союзниками в процессе формирования и внедрения КСО.

Толкование КСО как функции взаимодействия бизнеса и общества, не ограничивающейся лишь социально-трудовыми и экологическими вопросами, стремлением повышать уровень жизни лишь собственных сотрудников, становится все более популярным среди исследователей и практиков. Например, Всемирный совет по устойчивому развитию считает, что "корпоративная социальная ответственность — это приверженность бизнеса концепции устойчивого экономического развития в работе со своими сотрудниками, их семьями, местным населением, обществом в целом с целью улучшения качества их жизни"1. В данном определении прослеживается зависимость между развитием компании и улучшением качества жизни общества в целом.

Председатель Societe Generale de Belgique и председатель "Европейского движения предпринимателей за социальную консолидацию" Э. Давиньон дает такое определение КСО: "Что бы ни понималось под корпоративной социальной ответственностью, это не благотворительность и не развитие связей с общественностью. Смысл социальной ответственности — в осознанной заинтересованности бизнеса, приносящей пользу для общества в целом"2. В этой трактовке обращает внимание четкое противопоставление КСО и благо-

1 Цит. по: Чернов Е. Корпоративная социальная ответственность // Информационный бюллетень Det Norske Veritas. № 4 (8). С. 6-7.

2 Цит. по: Открытая корпоративная отчетность как триединый итог экономической, социальной, экологической ответственности компании/ АФК "Система". Библиотека менеджера. — М., 2004. С. 19.

творит�