Биоморфологическая характеристика некоторых лекарственных растений нгеан провинции Вьетнама и оценка их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики

Нгуен Ань Зунг

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биоморфологическая характеристика некоторых лекарственных растений нгеан провинции Вьетнама и оценка их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики
ВАК РФ 03.02.01, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "Биоморфологическая характеристика некоторых лекарственных растений нгеан провинции Вьетнама и оценка их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики"

На правах рукописи

НГУЕН АНЬ ЗУНГ

БИОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ НГЕАН ПРОВИНЦИИ ВЬЕТНАМА И ОЦЕНКА ИХ ЭФФЕКТИВНОСТИ НА БИОЛОГИЧЕСКИХ МОДЕЛЯХ МАРКЕРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Специальность 03.02.01 Ботаника

03.03.04 Клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Астрахань 2010

094607062

004607062

Работа выполнена в Астраханском государственном университете

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

Пилипенко Владимир Николаевич

доктор медицинских наук, профессор Епинетов Михаил Александрович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор,

член - корр. РАМН Шимановский Николай Львович

Защита состоится «04» июня 2010 г. в 1500 часов на заседании диссертационного совета Д 212.009.10 при Астраханском государственном университете по адресу: 414000, г. Астрахань, пл.Шаумяна 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Естественного института Астраханского государственного университета по адресу: 414000, г. Астрахань, пл.Шаумяна 1. www.aspu.ru

Автореферат разослан «,/19 » _

ПУШАЯ 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного сов«

доктор биологических наук Курочкина Татьяна Федоровна

Ведущая организация:

Калмыцкий государственный университет

доктор биологических наук, доцент

А.В. Федотова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.

В современной мировой науке и промышленности все большее значение приобретают исследования и технологии, направленные на сохранение и восстановление здоровья населения (Health Protections), в частности, поиск лекарственных растений с цитопротективным и противоопухолевым механизмом действия. Одним из наиболее перспективных направлений в этой области, по данным WHO, является поиск новых растительных источников в субтропической и тропической зонах.

Вьетнам - тропическая страна с различными климатическими и географическими особенностями в ее различных регионах. Она имеет изобилие разнообразных природных ресурсов. Жители Вьетнама не имея доступ к современным лекарствам приобрели огромный многовековой опыт использования лекарственных растений (Yagama Reddy Y.. A Glimpse of Vietnam's Forest Wealth and Medicinal Plants-Based Traditional Medicine. J. Hum. Ecol-2005.-17(4): 293-299).

Нгеан - самая большая по площади провинция Вьетнама, которая расположена на северной части Центрального побережья. Около 83% площади Нгеана покрывается холмами, горами и лесами. В Нгеан произростает более 600 ценных диких лекарственных растений, многие из которых пока еще не изученных, хотя их целебные свойства давно используются в традиционной медицине Вьетнама (Зунг H.A. Исследование разнообразия высших растений в деревне Мон-шон - буферная зона национального парка Пу-мат. Магистерская диссертация. Вьетнам, 2002; Зунг H.A. Современное состояние использования лекарственных растений в коммуне Маудык, Конкуонг район, провинция Нгеан. Изд-во науки и техники, Ханой, Вьетнам- 2006. С.61-65).

Аналогичных работ по комплексной оценки эффективности лекарственных растений на биологических моделях маркерной диагностики не проводилось. Выбор места произрастания изучаемых лекарственных растений основан на эндемичной специфичности и высокой биологической активности сырья, связанной с особыми климатическими условиями Нгеан провинции Вьетнама.

Тема исследования поддержана Российским фондом фундаментальных исследований (РФФИ) и Вьетнамской академией наук и технологий (ВАНТ) в рамках Международного проекта Вьетнам-Россия № 09-03-90302.

Psychotria montana Blume, Ehretia asperula Zoll. & Moritzi, Erythropalum scandens Blume, Hedyotis diffusa Willd., Symplocos glomerata King ex C.B. Clarke, Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils., Symplocos cochinchinensis (Lour.) S. Moore, Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk собранных в Нгеан провинции Вьетнама и оценки их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики.

Для достижения были поставлены задачи:

1. Экспедиция в заповедники Нгеан провинции Вьетнама для сбора и сушки листьев, корней и плодов лекарственных растений Н. occulta, N. nucífera, S. dulcís, S. tuberosa, S. jambolana, P. montana, E asperula, E scandens, H. diffusa, S. glomerata, S. cunéala, S. cochinchinensis, P. palatiferum.

2. Дать биоморфологическую характеристику собранных лекарственных растений в Нгеан провинции Вьетнама.

3. Дать оценку эффективности экстрактов изучаемых растений на биологической модели клеточной маркерной диагностики пролиферации культур нормальных фибробластов, клеток рака молочной железы человека MCF-7 и рака шейки матки Hela.

4. Провести оценку эффективности экстрактов растений на биологической модели маркерной диагностики методом иммуногистохимического окрашивания экспрессии онкобелка Вс1-2.

5. Оценить эффективность экстрактов растений по способности конкурировать с меченными лигандами гормональных рецепторов за связывание со специфическими участками тканей-мишеней.

6. Определить антиоксидантную активность экстрактов методами хемилюминесценции, определения ТБК - активных продуктов по реакции взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), определения содержания восстановленного глутатиона.

Научная новизна.

1. Впервые на биологических моделях маркерной диагностики изучено влияние экстрактов лекарственных растений собранных в Нгеан провинции Вьетнама на пролиферацию клеток HeLa (рак шейки матки человека) и MCF-(paK молочной железы), экспрессию онкобелка Вс1-2.

2. Впервые на клеточных линиях рака шейки матки (HeLa) и рака молочной железы человека (MCF-7) показана цитотоксическая активность густых экстрактов растений Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa.

3. Впервые в условиях экспериментальной гипоксии, вызванной субтоксическими дозами NaCN и ДНФ, установлено что, изучаемые экстракты растений Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum и Hedyotis diffusa снижали уровень ТБК-активных продуктов в клетках, нормализовали протекающие с участием свободных радикалов окислительные процессы.

Научно-практическая значимость исследования состоит в том, что материалы диссертации могут быть использованы для последующих этапов разработки лекарственных препаратов, обладающих противоопухолевым, антиоксидантным, гормоноподобным действием.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анализ биоморфологических признаков лекарственных растений Н. occulta, N. nucífera, S. dulcís, S. tuberosa, S. jambolana, P. montana, E. asperula, E. scandens, H. diffusa, S. glomerata, S. cunéala, S. cochinchinensis, P. palatiferum собранных в экспедиции в Нгеан провинции Вьетнама.

2. Оценка эффективности экстрактов лекарственных растений собранных в Нгеан провинции Вьетнама на биологической модели клеточной маркерной диагностики пролиферации культур нормальных фибробластов, клеток рака молочной железы человека MCF-7 и рака шейки матки Hela.

4. Маркерная диагностика эффективности изучаемых экстрактов лекарственных растений на биологической модели методом иммуногистохимического окрашивания экспрессии онкобелка Вс1-2.

5. Оценка эффективности изучаемых экстрактов лекарственных растений на биологической модели маркерной диагностики по способности конкурировать с меченными лигандами гормональных рецепторов за связывание со специфическими участками тканей-мишеней.

6. Определение антиоксидантной активности изучаемых экстрактов лекарственных растений методами хемилюминесценции, определения ТБК - активных продуктов по реакции взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), содержания восстановленного глутатиона.

Апробация работы. Диссертация обсуждена на заседании кафедры биологии и экологии растении биологического факультета и кафедры фармакологии химического факультета Астраханского государственного университета (г.Астрахань, 2008 г., 2010 г.).

Основные положения работы были изложены на II Всероссийской конференции-школы «Высокореакционные интермедиаты химических реакций» (г.Астрахань, 2007 г.), III Всероссийской конференции-школе с международным участием «Высокореакционные интермедиаты химических реакций» (г.Астрахань, 2008 г.), Международной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря и водоемов внутреннего стока Евразии» (г.Астрахань, 2008 г.), Международной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов» (г.Астрахань, 2009 г.), Международной научно-практической конференции «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования» (г-Астрахань, 2009 г.), 7-й Международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2010).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 19 работ, включая 5 статьи в научных журналах, рекомендуемых ВАК.

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 131 страницах компьютерного текста, содержит 38 рисунков, 10 таблиц. Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов, библиографического списка, приложения.

ХАРАКТЕРИСТИКА НГЕАН ПРОВИНЦИИ ВЬЕТНАМА

Вьетнам обладает богатейшей флорой на Земле, насчитывающей свыше 12.000 видов растений. Сегодня, по оценкам, 75% процентов вьетнамцев используют традиционную медицину в качестве основного источника для лечения общих проблем здоровья (Зунг Т.Н., Ван Н.Д.Н., 2005).

По данным Министерства здравоохранения Вьетнама в настоящее время собраны более 40 тысяч рецептов при участии более 12 тысяч народных лекарей. Около 400 научных медицинских трудов древности дошли до наших времен и используются современными врачами. Например, современной традиционной медицине Вьетнама известны рукописи народного лекаря Туе Тинь, жившего в XIV н.э. Его труды содержат подробные описания, свойства и применение 499 лекарственных растений для лечения 184 видов заболеваний. Народный вьетнамский лекарь Ле Хыу Чак (XVIII в.) составил 66 книг объемом 5,5 тысяч страниц, в которых подробно описывает более 800 лекарственных растений. Примерно 1500 видов традиционных лекарственных средств в настоящее время имеют лицензию, выданная министерством здравоохранения будет продаваться на рынках Вьетнама (Анон., 2003а; Чань Ван Лау, 2003).

Академическими школами Винь университета были проведены различные ботанические исследования, в т.ч. исследования лекарственных растений Нгеана (Nha N.T, 1995,2001, 2006; Hanh N.T.,1995, 1999, 2001; Osborn Т. и др.,2000; Thin N.N.,2001, 2004; Chau D.Q.,2003; Dung N.A.,2002, 2006). Особенно, в 2001 году, по статистическим результатам Thin N.N., Hanh N.T., Nha N.T. в горном районе Нгеана растет 600 растений, обладающих лекарственными свойствами (Thin N.N. и др., 2001). Авторы также собирали ценные лечебные препараты на основе растительного лекарства, которые давно используются местными лекарями. Некоторые из этих рецептов подвергались проверкой на биологическую активность и формацевтические свойства. Проверка дала положительный результат. Например, препарат для лечения: гастрита, дерматита, воспаления почек (Hanh N.T., 1999,2001, Thin N.N., Nha N.T., 2001).

В 2002 - 2006 г. проведены исследования, оценка разнообразности растительности в горном районе провинции Нгеана и определено более 600 лекарственных растений, найдено большое количество ценных лечебных лекарственных препаратов, принимаемых народом (Lam D.N. и др., 1987; Зунг H.A., 2002, 2006). В том числе много ценных диких

лекарственных растений до сих пор еще не применяются, хотя их целебные ценности известны.

Природные условия провинции Нгеан, Вьетнам

Провинция Нгеан принадлежит центральной области Вьетнама, с географическими координатами с 18°33'10" к 19°24'43" северной широты и с 103°52'53" на 105°45'50" восточной долготы. Общая площадь суши составляет 1.648.729 га, из которых 207.100 га для сельского хозяйства, 1.195.477га для лесоводства (в т.ч. 745.557 га с лесом, 490.165 га без леса).

В северо-восточной части Нгеана находятся цепи гор Чыонгшона со сложными, разнообразными топографическими характеристиками. Местность изрезана горами и реками, проходящими по направлению с Северо-запада к Юго-востоку. Место с наибольшей высотой является пик Пулайленг в горном районе Кушон, низменность располагается в восточных районах Куиньлыу, Зиентьяу, Иентхань. Бывает место (например, село Куиньтхань района Куиньлыу) находящееся выше морской поверхности только 0,2м. Горы и холмы занимает 83% общей площади провинции.

Нгеан расположен в тропической муссонной зоне. Климат формируется под непосредственным воздействием летнего (южного и юго-западного) и зимнего (северо-восточного) муссонов. По данным 2008 года: средняя температура 24,2 выше температуры предыдущих годов 0,2°С; годовой осадок - 1610,9мм; количество дождевых дней-157; средняя влажность года-84; количество солнечных часов года -1460.

Проведен анализ литературных данных о лекарственных растениях, применяемых в традиционной народной медицине в Нгеане провинции. Выявили более 600 растений, которые используются народной медициной для лечения различных видов заболеваний (Nha N.T, 1995, 2001, 2006; Hanh N.T., 1995, 1999, 2001; Thin N.N., 2001, 2004; Chau D.Q., 2003; Dung N.A., 2002, 2006). При анализе популярного уровня лекарственных растений во всех средств, определили 82 вида растений наиболее часто используемых для получения препаратов. Нами был проведен сбор 13 видов для изучения биоморфологии: Н. occulta, N. nucífera, S. dulcís, S. tuberosa, S. jambolana, P. montana, E. asperula, E. scandens, H. diffusa, S. glomerata, S. cuneata, S. cochinchinensís, P. palatiferum.

Рис. 1. Провинция Нгеан Вьетнама

ЭКСПЕДИЦИЯ В НГЕАН ПРОВИНЦИЮ ВЬЕТНАМА

Изучаемые лекарственные растения были собраны в горах Нгеан провинции в период с июля до октября 2008 г. После сбора растений, было проведено определение их научного названия, предварительной обработки, очистки, сушки на кафедре ботаники Винь университета Вьетнама в соответствии с документом «Research Methods in Plant Science» R.M.Klein, Рис. 2. Экспедиция в провинцию Нгеан D.T.Klein (1979). Для Вьетнама 2008г.

классификации растений пользовались определительными ключами Но Р.Н. (1999), и ботаническими описаниями в трудах «Flora of Vietnam» , «Vietnam forest tree» (Forest inventory and planning Institute, Vietnam, 1996).

Для проведения

микроскопического анализа сбора часть аналитической пробы помещали на чистую гладкую поверхность и выделяли вручную лопаточкой или препаровальной иглой составные компоненты сбора. При разборе

руководствовались внешним видом сырья, рассматривая его невооруженным глазом или с помощью лупы (10х). Для каждого компонента сбора отбирали по 25- Рис. 3. Лекарственные растения

30 однородных по внешнему виду после этапа первичной обработки

частиц и из них готовили микропрепараты. Микроскопическое исследование отдельных компонентов сбора проводили в соответствии с ГФ XI изд. вып. «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного сырья» (Государственная фармакопея СССР, 1989).

Изучение анатомии растений осуществляли с использованием микроскопа «Unico Н604Т» (США) с окулярами К7х и объективами 4х, 10х, 20х, 40х и ЮОх. Для фотосъемки использовали фотокамеру «Canon Power Shot A 650IS - 12М» (Китай).

БИОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СОБРАННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

Pseuderanthemumpalatiferum Blume

(Псевдэрантемум палатиферум) Семейство: Acanthaceae (Акантовые)

Р. palatiferum является кустарниками и многолетними растениями. Их высота 1-3 м. Стебель мягкий и зеленый в малолетнем возрасте и становится коричневым в многолетнем с разветвлением. Листья симметричные, их края целые, на вершине

Рис. 4. Pseuderanthemum palatiferum

Рис. 5. Фрагмент листовой пластики Р.palatiferum (поперечный разрез - 40х)

заостренные, по краям

двоякоостропильчатые, около 15см длиной, 4см шириной. Длина основания листьев около 2см. Соцветие с длиной 1016см. Цветок гермафродитный, неравномерный с длиной около 3 см. Лепестки белые, низкая часть узко-тубчатая, верхняя часть имеет 5 долей. Пыльник фиолетовый. Столбик с длиной около 2,5см.

При рассмотрении поперечного среза листа Pseuderanthemum palatiferum видно, что кроме эпидермиса клетки мезофилла разделяются на два четкие слои. Полисадный мезофилл составляет из 2-3 слои многоугольных клеток с прямыми стенками, содержающих хлоропласт и запасных веществ с кристалличесим видом, располагаемые равномерно. Такой слой обладает многочисленными железками с шарообразным видом. Слой губчатого мезофилла составляет из клеток с разнообразными видами, в основном, многоугольных или шарообразных.

Hedyotis diffusa (L.) Lam. (Хедиотис раскидистый)

Семейство: Rubiaceae (мареновые)

Hedyotis diffusa является однолетними растениями. Стебель травянистый, гладкий, ползучий. Стебель слабо-коричневый с высотой 30-50 см, круглое основание. Листья серые с длиной 1-3 см в виде ленты, на вершине заостренные и остропильчатые, стойкие, без основания. Цветки одиночные или

двойные в аксилле. 4-ая чашечка Рис- Hedyotis diffusa

Рис. 7. Erythropalum scandens

заостренная. 4-ая гирлянда белая. 4-ая тычинка прицепляет к горловине трубы гирлянды. Плоды сухие, плоские на вершине и имееют много зерен. Цветение круглый год, но в основном в июле-сентебре. Erythropalum scandens Blume (Эритропалум лазающий) Семейство: Olacaceae (Олаксовые) Лиана высотой до 5-10 м, стебель гладкий. Черешок 3-10 см, листья яйцевидные, продолговато-яйцевидные или треугольно-яйцевидные, 8-20 * 4-15 см, тонкий, кожистые, тупые базы, усеченный, или сердцевидные, и обыкновенно щитовидный, заостренные вершины, основная жилка 3 или 5. Сложный зонтик 6-18 см, много цветков; цветоножка 4-10 см. Цветоножки нитевидные, 2-5 мм. Чашечка относящийся к куполу, 5-зубчатые (1 мм). Лепестки белые, 1,5-2 мм. Тычинки с пучками волос по бокам. Диск повышен. Костянка эллиптический или обратно-яйцевидный, 1,5-2,5 х 0,8-1,2 см, увенчанный стойких чашечки. Семена тёмно-синие, широко эллипсоида. Цветет в Марте-сентябре.

При рассмотрении поперечного среза листа Erythropalum scandens видно, что

корковая проба составляет из толстых одревесневших клеток. Корковая паренхима составляет из клеток с различными размерами, расположенных неравномерно. У таких клеток имеются игло-шарообразные кристаллы кальции оксалата. Энтодерма составляет из слоя прямоугольных клеток, распооженных равномерно. Перицкл составляет из прямоугольных клеток, расположенных вперемежку с клетками энтодермы. Флоэма составляет из маленьких клеток, образующих пучки, расположенные вперемежку с ксилемой. Сердцевинная паренхима составляет из клеток с тонкими стенками, имеющих различные размеры. В сердцевинной паренхиме рассеянно располаются большие древесинные сосуды.

Рис. 8. Фрагмекг листовой пластики Е. scandens (поперечный разрез - 40х)

ИЗГОТОВЛЕНИЕ ЭКСТРАКТОВ ИЗ СОБРАННЫХ РАСТЕНИИ

Получены жидкие концентрированные и сгущенные экстракты изучаемых растений путем водного извлечения биологически активных веществ растительного происхождения согласно указанию Государственной фармакопеи XI (ГФ) (Таблица 1).

Таблица 1.

Экстракты из растений провинции Нгеан Вьетнама_

Номер образца Название растения Часть растения

1 Syzygium jambolana листья

2 Syzygium jambolana цветы

3 Syzygium jambolana плоды

4 Homalonema occulta 0 корневища

5 Erythropalum scandens Blume корневища

6 Nelumbo nucífera Gaertn листья

7 Nelumbo nucífera Gaertn цветы

8 Nelumbo nucífera Gaertn плоды

9 Scoparia dulcís L. листья

10 Сахарный густой колер Контроль 1

11 Stemona tuberosa Lour корневой клубень

12 Pseuderanthemum palatiferum листья

13 Ehretia asperula листья

14 Hedyotis diffusa листья

15 Psychotria montana Blume листья

16 Psychotria montana Blume стебель

17 Symplocos glomerata листья

18 Symplocos cochinchinensis листья

19 Sargentodoxa cuneata стебель

20 Сахарный густой колер Контроль 2

В процессе получения экстрактов на основе данного растительного сырья, в том числе, лекарственно-технического, основным этапом являлось приготовление вытяжек целевых компонентов. С целью облегчения проникновения воды в экстрагируемый растительный материал, сырье измельчалось согласно указанию Государственной фармакопеи XI (ГФ), листья, травы и цветки измельчались до размера частиц не более 5 мм; стебли, кору, корня - не более 3 мм; плоды и семена-0,5 мм. С целью ускорения диффузионного обмена, а, следовательно, и экстракции процесс веди при повышенной температуре до +72-*-78°С. Продолжительность экстрагирования составляла не менее 3 часов. По показателям качества густой экстракт изучаемого растительного сырья соответствовал требованиям Государственной фармакопеи XI (ГФ): внешний вид - густая однородная масса без комков и посторонних включений; цвет - от коричневого до тёмно-коричневого; содержание сухих веществ - 68,0-70,0%.

ОЦЕНКА НА БИОЛОГИЧЕСКИХ МОДЕЛЯХ Методология оценки на биологических моделях маркерной диагностики с использованием клеточных технологий.

Использование клеточных культур HeLa, MCF-7. Культивирование клеток осуществлялось в стерильных условиях с использованием ламинарбокса ЛБ-В (Россия), (инкубирование: при 37 С, 5% С02,

относительная влажность воздуха 95%). При культивировании клеток использовали стандартную среду DMEM с добавлением 20% термоинактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, L-глутамина в концентрации 100 мкг/мл и антибиотика гентамицина сульфата концентрации 40 мкг/мл.

Оценка эффективности экстрактов лекарственных растений на жизнеспособность чувствительных и резистентных опухолевых клеток методом MIT (3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолий бромистый) - теста (Mealey et al., 2002).

Оценка эффективности экстрактов лекарственных растений на экспрессию онкобелка bcl-2 в клетках методом иммуногистохимического окрашивания (MediaCybernetics, США).

Оценка эффективности экстрактов лекарственных растений на основании активности специфических ферментов апоптоза методом колориметрического измерения активности каспазы-3. Измерение активности каспазы-3 основано на расщеплении субстрата, меченого хромофором, под действием активной каспазы-3 и высвобождении хромофора, который окрашивает среду в желтый цвет. Окрашивание регистрировали с помощью спектрофотометра при длине волны 1=405 им.

Для оценки апоптоза в культуре клеток использовали электрофорез экстракта геномной ДНК культуры клеток в агарозном геле и флуориметрическую оценку соотношения фрагментированной/ высокомолекулярной ДНК (Daniel et al, 1999).

Изучение противоопухолевых, антиоксидантных,

гормоноподобных свойств, динамики воздействия на модельные клеточные системы.

Определение антикосидантной активности изучаемых экстрактов проводили методами хемилюминесценции, определения ТБК - активных продуктов по реакции взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) и по определению содержания восстановленного глутатиона. 20 образцов (18 экстрактов и 2 контроля) изучаемых лекарственных растений провинции Нгеан Вьетнама приведены в таблице 1.

Изучение влияния экстрактов лекарственных растений провинции Нгеан Вьетнама на пролиферацию HeLa, MCF.

Результаты влияния образцов на жизнеспособность клеток HeLa (в % от контроля) представлены в таблице 2, а на жизнеспособность клеток MCF-7 в табл. 3.

Таблица 2.

Влияния образцов на жизнеспособность клеток HeLa (в % от контроля)

Концентрация Номера образцов

1 2 3 4 5 б 7 8 9 10 11

1% 100 90 35* 60* 55* 130* 65* 60* 100 140* 65*

±30 ±27 ±10 ±12 ±18 ±15 ±16 ±10 ±20 ±20 ±25

0,5% 100 80 40* 75 60* 90 70* 80 60* 150* 70*

±25 ±10 ±20 ±25 ±20 ±10 ±15 ±10 ±15 ±30 ±10

0,1% 100 100 100 90 70 80 100 110 70 100 100

±20 ±25 ±15 ±15 ±10 ±10 ±20 ±15 ±30 ±15 ±10

Номера образцов

Концентрация 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Физ раствор

1% 40* 150 35* 95 20* 50* 90 70* 75 90

±10 ±20 ±15 ±10 ±25 ±20 ±30 ±20 ±10 ±15

0,5% 44* 140 32* 100 28* 50* 80 75 85 85

±15 ±30 ±15 ±20 ±10 ±15 ±10 ±30 ±15 ±10

0,1% 60* 90 25* 80 90 100 90 100 70 100

±20 ±25 ±15 ±15 ±20 ±25 ±10 ±20 ±15 ±15

Примечание достоверные отличия от контроля Взято по 3 лунки на каждую концентрацию

Таблица 3.

Влияния образцов на жизнеспособность клеток НеЬа (в % от контроля)

Концентрация Номера образцов

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

1% 100 ±25 95 ±28 40* ±10 50* ±10 60* ±19 130* ±15 70 ±30 65* ±10 100 ±20 120 ±20 75 ±20

0,5% 100 ±25 85 ±15 45* ±15 70 ±20 60* ±20 90 ±10 75 ±20 80 ±15 60* ±15 120* ±30 75 ±20

0,1% 100 ±25 100 ±25 100 ±20 90 ±25 70 ±10 85 ±15 100 ±25 110 ±15 70 ±30 100 ±15 105 ±10

Концентрация Номера образцов

12 13 14 15 16 17 18 19 20 Физ раствор

1% 35* ±15 130 ±20 30* ±15 100 ±10 20* ±25 80 ±20 95 ±20 80 ±20 85 ±10 90 ±15

0,5% 48* ±12 130 ±30 39* ±15 100 ±20 28* ±10 60* ±15 90 ±10 75 ±30 95 ±15 85 ±10

0,1% 57* ±20 100 ±25 30* ±15 90 ±15 90 ±20 100 ±25 100 ±10 90 ±20 80 ±15 100 ±15

Примечание *-достоверные отличия от контроля Взято по 3 лунки на каждую концентрацию.

Изучение влияния образцов 5,12 и 14 на экспрессию онкобелка Ьс1-2.

Оценку экспрессии онкобелка Ьс1-2 в клетках осуществляли методом иммуногистохимического окрашивания. Метод иммуногистохимического окрашивания образцов основан на связывании первичных моноклональных антител с онкобелком Ьс1-2 и последующим присоединением вторичных антител, меченых флуоресцеином. Количество онкопротеина в образце оценивали на флуоресцентном микроскопе методом флуориметрии с использованием программного обеспечения 1та£еРгоР1ш 5.0 (МесИаСуЬеп^юэ, США).

Продолжая изучение роли алоптоза в механизме действия гестагенов, мы исследовали экспрессию антиапоптотического белка Ьс1-2, методом иммуногистохимического окрашивания. Клетки культуры МСР-7

и HeLa инкубировали в течение 72 часов в присутствии исследуемых веществ. Контролем служили клетки, инкубируемые в тех же условиях, но в отсутствие исследуемых соединений. С помощью флуоресцентного микроскопа "Axiostar" были получены изображения клеток в спектре видимого света, а также комбинированные изображения при возбуждении флюоресценции маркера вторичных антител УФ-излучением.

Как в опыте, так и в контроле оценивали соотношение количества флуоресцирующих клеток к общему количеству клеток в поле зрения, а также интегральную площадь, соответствующую значениям флуоресценции выше фоновых (программа Image Pro Plus 5.0). Результаты, полученные в результате проведения обработки первичных данных, представлены в таблице 4.

Полученные данные показывают, что отношение флуоресцирующих клеток к общему количеству клеток в поле зрения при уровне значимости р<0,05 достоверно не отличается от контроля ни в одном из образцов.

Таким образом, при анализе экспрессии антиапоптотического белка Вс1-2 в культуре клеток MCF-7 при инкубации с образцами 5, 12 и 14 с помощью иммуноокрашивания не было выявлено достоверных отличий от контроля при времени инкубации 72 часа. Это позволяет говорить об отсутствии значимого влияния исследуемых веществ на экспрессию фактора Вс1-2 в данных условиях.

Таблица 4.

Иммуногистохимическое окрашивание антителами к Вс1-2 в культуре клеток

Образец Концентрация, моль/л Соотношение* S окрашивания

1% 0,234±0,09 15,9

5 0,5% 0Д11±0,18 31,1

0,1% 0Д94±0,07 30,5

1% 0,301±0,12 17,1

12 0,5% 0Д72±0,16 26,8

0,1% 0,213±0,08 42,1

1% 0,182±0,10 3,9

14 0,5% 0,231±0,08 10,2

0,1% 0,215±0,22 29,0

Примечание: Соотношение* - отношение количества флуоресцирующих клеток к общему количеству клеток в поле зрения; 5 окрашивания — интегральная площадь, соответствующая значениям флуоресценции выше фоновых, вычисленная в процентах по отношению к фону, отражает плотность монослоя клеток. 1 Сравнительная оценка способности образцов 5, 12 и 14 взаимодействия с участками специфического связывания прогестерона клеточных культур.

Определение сродства новых прогестинов к рецепторам прогестерона проводили по методике Бассалык (1987) в модификации. Для определения общего связывания пробы содержали 0,2 нМ [2,4,6,7]3Н-прогестерона (Р4) в исследуемой культуре клеток. Для определения

(

✓

неспецифического связывания в пробы дополнительно добавляли 10 цМ спиртовой раствор диэтилстильбэстрола или 4 рМ спиртовой раствор прогестерона. Каждая проба повторялась три раза. Этанол после раскапывания выпаривали. Затем добавляли 100 мкл суспензии клеток и инкубировали в течение 0,5 ч. После инкубации суспензию клеток наносили на стекловолоконные фильтры СРЛ7 ("\Vatman"). радиометрировали на жидкостном сцинтилляционном радиометре БЬ-ЗО ЫеЛесЫ^ие (Франция). Связывание гормона в культуре клеток выражали в фМ гормона, связанного одним млн клеток. Эту величину расчитывали по формуле: N — (Т-^В)хК/(2.22хАхС), где N - связывание гормона в культуре (фМ/млн клеток); Т - средняя величина общего (в отсутствии конкурента) связывания меченого гормона в имиУмин., регистрируемых Р-радиометром; КБВ - средняя величина неспецифического (в присутствии конкурента) связывания в аналогичной аликвоте в имп./мин., регистрируемых Р-радиометром; К - коэффициент, учитывающий разведение пробы и эффективность счета Р-радиометра; 2.22 -коэффициент пересчета из импУмин, регистрируемых Р- радиометром, в Ки/мМ; А - удельная радиоактивность 3Н-17р-эстрадиола (3Н-

Бьш проведен анализ относительной способности связывания (RBA) гестагенов со специфическими участками связывания прогестерона в клетках MCF-7. Для определения общего связывания 3Н- Р4 суспензию клеток инкубировали с 3Н- Р4 (удельная радиоактивность 3,44 ТБк/ммоль), в конечной концентрации 5x10"8 М в течение 30 мин. при 37° С. Для определения неспецифического связывания среду инкубации дополняли избытком немеченого изучаемого гестагена по отношению к меченому. Каждая проба повторялась три раза. Связанный с клетками гормон осаждали на стеклянных фильтрах GFF (Sigma). Фильтры промывали

холодным фосфатным буфером рН=7,4 при t=4 °С. Радиоактивность каждого образца определялась жидкостным сцинтилляционным Р-радиометром "ЬКВ"(Швеция).

Были получены следующие результаты (рис.9).

Общее связывание составило 1195 +/-125 с.р.мУсек.

Связывание ЗН -прогестерона в присутствии избытка образца 5 составило в среднем 50% от общего, в присутствии аналогичного избытка образца 12 - 40%, а образца 14 - 40-45%.

Из полученных данных следует, согласно расчетам что RBA (образца 14) = 518%, RBA (образца 12) = 1515%, RBA (образца 5) = 1675%. Это означает, что образцы 5 и 12 обладают большей способностью связываться с рецепторами прогестерона, чем эндогенный гормон прогестерон и образец 14.

Полученные результаты влияния соединений на жизнеспособность опухолевых клеток, их сродства к участкам специфического связывания прогестерона позволили предположить наличие у образцов 5 и 12 гестагенной активности.

Изучение влияния образцов 5,12 и 14 на остеобласты и фибробласты

Проведено исследование протекторных свойств образцов 5,12 и 14 на жизнеспособность фибробластов и остеобластов и их пролиферативную активность как в норме, так и в условиях гипоксии вызванной цианидом Na (NaCN) и динитрофенолом (ДНФ).

В экспериментах использовались новорожденные белые крысы. Объектом исследования были культуры остеобластов теменной кости и фибробластов кожи. Остеобласты получали и культивировали по ранее описанному нами методу (Гацура В.В., 1993). Форма клеток соответствовала изображениям остеобластов, приводимым в литературе (Боленский С.В., 2001) и на рисунке 9 а.

Для получения первичной монослойной культуры фибробластов кожу измельчали на фрагменты и помещали в пластиковые флаконы для культивирования. Среда инкубации содержала 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 40 мкг/мл антибиотика гентамицина. Через 10-14 дней после формирования монослоя клеток их обрабатывали трипсином, переводили в суспензию и рассевали по 100 мкл в 96-луночные планшеты Costar для проведения эксперимента (рис. 9 б).

Для моделирования гипоксии добавляли раствор NaCN до конечной концентрации 0,2 мМ и динитрофенол (ДНФ) 0,5 мМ. Инкубировали планшеты в течение суток. Оценку цитотоксичности веществ проводили с помощью МТТ-теста (Чурилова И.В и др. 2002).

Среду отбирали через 4 часа инкубации, кристаллы формазана растворяли в лунках планшета диметилсульфоксидом и измеряли оптическую плотность на ИФА-ридере (анализаторе) планшетов «Пикон».

Полученные результаты представляли в виде средних значений 3-х измерений с помощью стандартного программного обеспечения Ехе1.

Жизнеспособность клеток контролировалась по окрашиванию трипановым синим и составляла 85 - 90%. Для получения изображений культуры окрашивали метиленовым синим и проводили цифровую съемку с использованием системы «МекоС» (Россия).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью / критерия Стьюдента.

Нами установлено, что изучаемые экстракты не токсичны для остеобластов и фибробластов (табл. 5,6).

Таблица 5.

Влияние образцов 5,12 и 14 на жизнеспособность остеобластов.

Вещества Разведение препарата Контроль

1:10 1:20 1:100

5 1324,33±154,9 1626,0±12 1536±258 1464±317 интакгный

12 1189± 115 119&ЫЗ 1338±346 1138±42»* сШСЫ

14 1092±74* 1142±24* 960±71* 818±37** с ДНФ

Примечание. **эффекты цианида Ыа и ДНФ достоверно отличаются от контроля при р < 0,05; * эффекты образцов 5, 12 и 14 достоверно отличаются от контроля в присутствии цианида Л/я или ДНФ при р< 0,05. Таблица 6. Влияние образцов 5,12 и 14 на жизнеспособность фибробластов

Вещества Разведения препарата Контроль

1:10 1:20 1:100

5 1844±172 1907±147 2009±83 2140±168 интакгный

12 1219± 110 1292±98 129Ш51 1139±72** с ЫаСЫ

14 669±46* 548 ±23 617±95 540±43** с ДНФ

Примечание. **эффекты цианида Ыа и ДНФ достоверно отличаются от контроля при р < 0,05; * эффекты образцов 5, 12 и 14 достоверно отличаются от контроля в присутствии цианида Ыа или ДНФ при р < 0,05.

Внесение в среду инкубации ЫаСЫ и ДНФ вызывало снижение степени адгезии к субстрату, оцениваемой по уменьшению их площади и увеличению межклеточного расстояния (рис. 10 в, г, д, е). При этом ИаСЫ и ДНФ угнетали рост остеобластов на 50 и 23% ,а фибробластов - на 75 и 47% соответственно (табл. 4 и 5).

При воздействии на клетки ШСИ и ДНФ, а также их сочетания вызывали достоверное увеличение жизнеспособности клеточных культур, способствовали нормализации адгезии и количества остео- и фибробластов

(рис. 11 а - е). Существенных отличий в действии образцов 5, 12 и 14 не выявлено.

Рис. 10. Культура остебластов и фибробластов в присутствии NaCN и ДНФ.

Примечание: а - первичная монослойная культура остеобластов; б - первичная монослойная культура фибробластов; в - остеобласты в присутствии ОД мМ КаСИ; г -остеобласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ; д - фибробласты в присутствии 0,2 мМ ЫаСК; е - фибробласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ. Окраска трипановым синим - х 100.

Рис. 11. Культура остебластов и фибробластов в присутствии NaCN, ДНФ и. Я. diffusa Примечание: а - остеобласты в присутствии 0,2 мМ NaCN и Я. diffusa 50 мг/мл; б -остеобласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ и Я diffusa 50 мг/мл; в - фибробласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ и Я. diffusa 50 мг/мл; г - фибробласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ и Я. diffusa 50 мг/мл; д - остеобласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ и Я. diffusa 50 мг/мл; е - остеобласты в присутствии ОД мМ NaCN и Я diffusa 50 мг/мл. Окраска трипановым синим - х 100.

Учитывая, что ДНФ вызывает увеличение окислительных процессов и уменьшение образования макроэргических соединений, можно предполагать участие свободнорадикальных механизмов повреждения в его цитотоксическом действии.

NaCN блокирует дыхательную цепь, вызывая накопление продуктов цикла трикарбоновых кислот. Вероятно, образцы 5, 12 и 14 способствует нормализации метаболических процессов в условиях NaCN гипоксии.

Таким образом, образцы 5, 12 и 14 защищают культивируемые остеобласты и фибробласты кожи крыс от действия метаболических гипоксантов: NaCN и ДНФ.

Влияние образцов 5,12 и 14 на перекисное окисление липидов (ПОЛ)

Целью данной части работы явилось изучение влияния образцов 5, 12 и 14 на процессы ПОЛ остеобластов и фибробластов крыс в условиях экспериментальной гипоксии.

В работе использовались новорожденные белые крысы. Объектом исследования служили культуры остеобластов теменной кости и фибробластов кожи новорожденных крысят. Остеобласты получали и культивировали по ранее описанному нами методу (Вышковский ГЛ. и др., 2004).

Для получения первичной монослойной культуры фибробластов кожу измельчали на фрагменты и помещали в пластиковые флаконы для культивирования. Среда инкубации содержала 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 40 мкг/мл антибиотика гентамицина. Через 10-14 дней после формирования монослоя клеток их трипсинизировали, переводили в суспензию и рассевали по 100 мкл в 96- луночные планшеты Costar. Исходные растворы Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa 50 мг/мл вносили в лунки до разведения 1:10, 1:20 и 1:100.

Для моделирования гипоксии в лунки планшета добавляли растворы цианида Na (NaCN) и динитрофенола (ДНФ) до конечных концентраций 0,2 мМ и 0,5 мМ соответственно, которые, согласно литературным данным (Чурилова И.В. и др., 2002), являются субтоксическими. Жизнеспособность клеток контролировалась по окрашиванию трипановым синим и составляла 85 - 90%.

Интенсивность ПОЛ определяли по уровню активных продуктов 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Из лунок планшетов, с исследуемыми веществами и клетками, инкубируемыми в течение суток, удаляли среду и последовательно добавляли по 100 мкл раствора Тритона Х-100 (0,1%.) и 100 мкл 17% водного раствора трихлоруксусной кислоты. Содержимое лунок количественно переносили в 1,5 мл пробирки Эппендорф. Образующийся осадок отделяли центрифугированием в течение 10 мин при 4 000 об/мин.

К надосадочной жидкости добавляли по 100 мкл 0,8% водного

раствора ТБК и помещали пробы на 10 мин в кипящую водяную баню. В качестве контроля использовали пробы, содержащие вместо надосадочной жидкости раствор Хенкса. После развития розовой окраски пробы охлаздали до комнатной температуры, переносили по 200 мкл в луночные планшеты и измеряли оптическую плотность при 530 нм на анализаторе «Пикон», сопоставляя её с контрольной пробой. Результаты выражали в % от контроля. Использовалось по 5 образцов на каждую точку.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью 1 критерия Стьюдента.

Установлено (табл. 7 и 8), что при моделировании гипоксии введением в среду инкубации субтоксических доз ИаСЫ и ДНФ увеличивается содержание ТБК-активных продуктов в остеобластах на 12 и 18% и фибробластах на 7 и 8% соответственно.

Таблица 7.

Влияние образцов 5,12 и 14 на ПОЛ остеобластов_

Вещества Разведение препаратов Контроль

1:10 1:20 1:100

5 150± 41 * 138± 27 169132 199±36

12 131131» 118134 141±51 187± 28 с ИаСЫ

14 161±27 145± 38 149±17 18б±24 с ДНФ

* Различия достоверны по сравнению с контролем при р < 0,05.

Примечание. Здесь и в табл. 7 представлены значения оптической плотности образцов в условных единицах, контролем служили пробы без и в присутствии ИаСИ и ДНФ.

Изучаемые образцы не влияли на процессы ПОЛ остеобластов и фибробластов при их суточной инкубации в обычных условиях.

Согласно полученным результатам следует полагать, что цитотоксическая активность в отношении изучаемых опухолевых клеток характерна для образцов 5,12 и 14.

Таблица 8.

Влияние образцов 5,12 и 14 на ПОЛ фибробластов._

Вещества и их сочетания Разведения препаратов Контроль

1:10 1:20 1:100

5 231±31* 242±23 269141 289132

12 226±19 199±54 211133 237120 с

14 197135 229121 179177 256139 с ДНФ

* Различия достоверны по сравнению с контролем при р < 0,05.

Введение в инкубационную среду образцов 5, 12 и 14 приводило к достоверному снижению уровня ТБК-активных продуктов в условиях гипоксии, индуцированной №СЫ и ДНФ.

Таким образом, образцы 5,12 и 14 не влияют на уровень ПОЛ при их суточной инкубации остеобластов и фибробластов. В условиях экспериментальной гипоксии, вызванной субтоксическими дозами ИаСЫ и ДНФ, изучаемые образцы 5, 12 и 14 снижают уровень ТБК-активных

продуктов в клетках, нормализуют протекающие с участием свободных радикалов окислительные процессы и предупреждают разрушение биомембран клеток, связанное с активацией ПОЛ.

ВЫВОДЫ

1. Дана биоморфологическая характеристика лекарственных растений провинции Нгеан Вьетнама Homalonema occulta (Lour.) Schott., Nelumbo nucífera Gaertn., Scoparia dulcís L., Stemona tuberosa Lour., Syzygium jambolana DC., Psychotria montana Blume, Ehretia asperula Zoll. & Moritzi, Erythropalum scandens Blume, Hedyotis diffusa Willd., Symplocos ghmerata King ex C.B. Clarke, Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils., Symplocos cochinchinensis (Lour.) S. Moore, Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk

2. На биологических моделях маркерной диагностики установлена цитотоксическая активность в отношение опухолевых клеток HeLa (рак шейки матки человека) и МСТ-(рак молочной железы) у экстрактов растений Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa.

3. В условиях экспериментальной гипоксии, вызванной субтоксическими дозами NaCN и ДНФ экстракты растений Е. scandens, Р. palatiferum, H. diffusa снижали уровень ТБК-активных продуктов в клетках, нормализовали протекающие с участием свободных радикалов окислительные процессы и предупреждали разрушение биомембран клеток, связанное с активацией ПОЛ.

4. Полученные результаты влияния экстрактов лекарственных растений Е. scandens, P. palatiferum, H. diffusa на жизнеспособность опухолевых клеток, их сродства к участкам специфического связывания прогестерона позволили предположить наличие у экстрактов Erythropalum scandens и Pseuderanthemum palatiferum гестагенной активности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Лекарственные растения Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa произрастающих в Нгеан провинции Вьетнама можно рекомендовать для оценки в фармакологии в качестве средств обладающих противоопухолевой и антиоксидантной активностью гормонозависимых опухолей рак шейки матки и молочной железы человека.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Зунг H.A. Исследование разнообразия высших растений в деревне Мон-шон - буферная зона национального парка Пу-мат, провинция Нгеан. Магистерская дисертатция, Винь университет.- Вьетнам, 2002.- 84 с.

2. Зунг H.A. Изучение ботанических характеристик и химического состава рода Литза (Litsea) во Вьетнаме / H.A. Зунг, Ч.Д. Тьанг, Н.С. Зунг // Материалы I Всевьетнамской конф.-школы "Экологии и биоресурсов".-

Вьетнам, 2005.- С.637-642.

3. Сьау Д.Т.М.. Недревесные лесные ресурсы в буферной зоне национального парка Пу-мат, провинция Нгеан и существования эксплуатации и управления / Д.Т.М. Сьау, H.A. Зунг // Фундаментальные вопросы исследования в биологических наук. Изд-во науки и техники, Ханой.- Вьетнам, 2005.- С.72-75.

4. Зунг H.A. Обновленные данные о видовом составе семейства бобовые (Fabaceae) в национальном парке Пу-мат, провинция Нгеан / H.A. Зунг, Б.Т.Т. Хьиен // Научный журнал университета Винг.- Вьетнам, 2006,-№ 2[А] - С.59-63.

5. Зунг H.A. Современное состояние использования лекарственных растений в коммуне Маудык, Конкуонг район, провинция Нгеан / H.A. Зунг, Н.Ч. Ньа, Л.К. Выонг // Некоторые исследования в биологических наук. Изд-во науки и техники Ханой.- Вьетнам, 2006.- С.61 -65.

6. Зунг H.A. Обновленные данные о видовом составе семейства молочайные (Euphorbiaceae) в буферной зоне национального парка Пу-Мат, провинция Нгеан / H.A. Зунг, Н.Т. Май // Некоторые исследования в биологических наук. Изд-во науки и техники, Ханой.- Вьетнам, 2006.-С.66-70.

7. Епинетов М.А. Фармакологическая кардиопротекция: итоги и перспективы / М.А. Епинетов, Н.Л. Шимановский, H.A. Зунг // Материалы II Всероссийской конф.-школы «Высокореакционные интермедиаты химических реакций».- Астрахань, 2007.- С.14.

8. Епинетов М.А. Сравнительная характеристика использования лекарственного растительного сырья России и Вьетнама / М.А. Епинетов, H.A. Зунг // Материалы III Всероссийской конф.-школы с международным участием «Высокореакционные интермедиаты химических реакций».-Астрахань, 2008.- С.28.

9. Епинетов М.А. Характеристика лекарственного растительного сырья России и Вьетнама / Епинетов М.А, H.A. Зунг // Материалы международной конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря и водоемов внутреннего стока Евразии».- Астрахань, 2008.- С.255-257.

10. Епинетов М.А. Перспективы применения биологически активных веществ лекарственных растений Syzygium jambolana DC. и Siemona turbelosa Lour, в Нгеан провинции Вьетнама / М.А. Епинетов, ТЛ. Верейная, В.Е. Турищев, Н.Ч. Ньа, H.A. Зунг // Материалы международной конф. «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов».- Астрахань, 2009.- С.30-32.

11. Епинетов М.А. Ботанический характеристики и использование лекарственного растения лотос орехоносный (Nelumbo nucifera Gaertn.) в Нгеан провинции Вьетнама / М.А. Епинетов. А.О. Толиба. Н.В. Медведева. T.JI. Вереина, В.Е. Турищев, H.A. Зунг II Материалы международной

научно-практической конф. «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования».- Астрахань, 2009,- С.167-169.

12. Епинетов М.А. Приготовление экстрактов лекарственных растений вербены (Verbena officinalis) и гарцинии Камбоджи (Garcinia cambogia) для пищевой промышленности / МА. Епинетов, Н.В. Медведева, ТЛ. Вереина, В.Е. Турицев, А.О. Толиба, H.A. Зунг // Материалы международной научно-практической конф. «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования».- Астрахань, 2009,-С.193-196.

13. Epinetov М.А. Prospects for the use of biologically active substances of medicinal plant Stemona taberosa Lour, from Vietnam / M.A. Epinetov, N.L. Shimanovsky, N.V. Medvedeva, N.A. Dung, O.A. Kiseleva, A.N. Ysenko, N.N. Firsov // Материалы 7-й международной научно-практической конф. «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины».- Астрахань, 2010,- С.11-14.

14. Епинетов М.А. Phytochemical characteristics and application of herb Syzygium jambolana DC. (Гвоздник джамболан) in national medicine in Vietnam / MA. Епинетов, H.A. Зунг II Материалы международной научной конф. Инновационные технологии в управлении, образовании, промышленности «АСТИНТЕХ-2010».- Астрахань, 2010.- (в печати).

Публикации в изданиях по списку ВАК:

15. Dung N.X. Chemical composition of the leaf oil of Michella balansae (A.DC) Dandy from Vietnam / N.X. Dung, T.D. Thang, N.A. Dung // Journal of Essential Oil Bearing Plants, 2005.- №7 [4].- P.34-36.

16. Dung N.X. Chemical Composition of the Leaf Oil of Evodia calophylla Guill. from Vietnam / N.X. Dung, T.D. Thang, N.A. Dung // Journal of Essential Oil Research, (USA), 2009.- Vol. 21.- P.l-2.

17. Dung N.A. Volatile Constituents of the Leaf Oil of Alchornea tiliifolia (Benth.) Muell. (Family Euphorbiaceae) from Vietnam / N.A. Dung, T. D. Thang, H.V. Luu, N.X. Dung // Journal of Essential Oil Research, (USA), 2009,-Vol.21.- P.3-4.

18. Епинетов M.A. Перспективы применения биологически активных веществ лекарственного растения Скопария сладкая {Scoparia ducils L.) произрастающей в провинции Нгеан Вьетнама / М.А. Епинетов, H.A. Зунг // Естественные науки, 2009.- №4 [29].- С.66-69.

19. Епинетов МА. Биологически активные вещества корневищ лекарственного растения Гомалонема душистая (Homalonema aromaüca Schott.) и перспективны их применения в фармацевтике / М.А. Епинетов, H.A. Зунг // Естественные науки, 2010.- (в печати).

Уч.-год. л. 1,5. Усл. пен. л. 1,4. Заказ № 2142. Тираж 100 экз.

Оттиражировано в Издательской доме «Астраханский университет» 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20 Тел. (8512) 48-53-47 (отдел маркетинга), 48-53-45 (магазин); тел. 48-53-44, телефакс (8512) 48-53-46 Е-шаШ asupress@yandex.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Нгуен Ань Зунг

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Литературный обзор

1.1. Характеристики лекарственных растений Нгеан провинции.

1.2. Оценка на биологических моделях маркерной диагностики.

Глава 2. Природные условия провинции Нгеан, Вьетнам

Глава 3. Материалы и методы исследования

Глава 4. Результаты исследования и их обсуждение

4.1. Обоснование выбора лекарственных растений Нгеан провинции Вьетнама с целью оптимального их применения.

4.2. Описание и систематика изучаемых лекарственных растений.

4.2.1. Syzygium jambolana DC.

4.2.2. Nelumbo nucífera Gaertn.

4.2.3. Homalonema occulta (Lour.) Schott.

4.2.4. Scoparia dulcís L.

4.2.5. Stemona tuberosa Lour.

4.2.6. Psychotria montana B1.

4.2.7. Ehretia asperula Zoll. & Moritzi.

4.2.8. Efythropalum scandens Blume.

4.2.9. Symplocos glomerata King ex C.B. Clarke.

4.2.10. Symplocos cochinchinensis (Lour.) S. Moore.

4.2.11. Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils.

4.2.12. Hedyotis diffusa Willd.

4.2.13. Pseuderanthemumpalatiferum (Nees) Radlk.

4.3. Оценки эффективности экстрактов изучаемых лекарственных на биологических моделях маркерной диагностики.

4.3.1. Изучение противоопухолевых, антиоксидантных, гормоноподобных свойств.

4.3.2. Сравнительная оценка способности образцов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биоморфологическая характеристика некоторых лекарственных растений нгеан провинции Вьетнама и оценка их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики"

Сегодня известно почти 500 тыс. видов растений, из них лишь около 290 растений описаны в атласе лекарственных растений, что вовсе не означает, что остальные растения лишены целительных свойств.

Исследователи установили, что народами древнего мира использовалось до 21 тыс. видов растений. Уже на самых ранних стадиях развития человечества растения были не только источником питания людей, они помогали человеку избавиться от болезней. Самый древний из дошедших до нас медицинских трактатов - это табличка, найденная при раскопках шумерского города (III тысячелетие до нашей эры). В 145 строках на шумерском языке даны прописи 15 рецептов. Из них следует, что врачи древнего Шумера использовали в основном такие растения, как горчица, пихта, сосна, чабрец, плоды сливы, груши, фиги, ива и др.( Ковалева Н.Г., 1971; Журавский С.Г., Каменев И.Ю., 1998).

Литературные источники свидетельствуют об употреблении лекарственных растении также в Древней Ассирии, Египте, Индии, Китае примерно за 3000 лет до н. э., а в начале н. э. в Иране, Греции и Риме; в средние века - в арабских странах, Средней Азии, Грузии, Армении, европейских странах.

Культуру и знания древних шумеров унаследовали вавилоняне, которые применяли в лечебных целях корень солодки, дурман, белену, льняное семя и др. Вавилоняне заметили, что солнечный свет отрицательно воздействует на целебные свойства некоторых растений, поэтому сушили их в тени, а некоторые травы даже собирали ночью. Широко применялись растения в Китае, Индии, Тибете. Еще в 3216 г. до н. э. китайский император Шен-нун написал работу по медицине "Бень - цао"("Травник"), где в основном описывались растительные средства (Курашвили В.А., Высочин И.В., 2002; Фруентов Н.К., 1987). Китайская медицина использовала более 1.500 растений. Наиболее часто применяли солодку, примулу, женьшень, лимонник китайский, шлемник, лук, чеснок, спаржу, астрагал, корицу, имбирь, кожуру мандарина, кизил [Ковалева Н.Г. ,1971; ВОЗ-Народная медицина, 1980).

Древнеиндийская медицина, изложенная в "Аюрведе" (I в. до н.э.), использовала около 800 растений, которые активно употребляются и в настоящее время (Карпеев A.A., Киселева Т.Д. ,1996). В трактате по тибетской медицине "Жуд-Ши" есть большой раздел, посвященный использованию лекарственных растений (Курашвили В.А., 1999). В книге Авиценны "Канон врачебной науки" описаны около 900 растений и способы их применения (Журавский С.Г., Каменев И.Ю., 1998; Захаров Ю. А.; 1999).

Траволечение было хорошо развито в Древней Греции. Гиппократ (460-370 г.г. до н. э.) в своей лечебной практике использовал около 200 лекарственных растений. Он применял такие растения, как белена, бузина, горчица, ирис, золототысячник, миндаль, мята, чилибуха и т. д. Кстати, именно он выдвинул лозунг: "Пусть пища будет тебе лекарством." (Блинков И.Л., Киселева Т.Д., Цветаева Е.В., 1999). В Древнем Риме фитотерапия развивалась под сильным влиянием греческой медицины. Труды выдающегося врача и фармацевта Клавдия Галена имели большое значение не только для древнеримской медицины, но и для последующего развития медицины и фармации. Наибольшее значение имеют два его травника, в которых описано более 300 лекарственных средств из растений (Дерикер В. В., 1866; Ефремов А.П., Шретер А.И., 1996; Южин В.И.; 1998; Курашвили В.А., Высочин И.В. 2002).

Вьетнам - тропическая страна с различными климатическими и географическими особенностями в ее различных регионах. Она шмеет изобилие разнообразных природных ресурсов. Восемьдесят процентов населения живут и работают в деревне; большое количество меньшинства этнические группы рассеяно живут в горной местности леса. Жители в этих местах имеют некоторые трудности в получении доступа к современным лекарствам (Yagama R. Y., 2005).

Однако, Вьетнам обладает вековой традиционной системой медицины -драгоценные наследуемые признаки, поданные с незапамятных времен. Лекарственные растения и травяные препараты сделали огромный вклад в национальное здоровье и развитие с самого начала. В течение очень длительного времени, вьетнамские люди, особенно в сельской местности и горах, использовали ежедневно локальные доступные лекарственные растения для лечения некоторых заболеваний (Дык Л.Ч., 1995).

В настоящее время исследование лекарственных растений сосредоточили большое внимание на статистике их количества, химических компонентов, фармацевтики и способности лечения. Существует мало исследовательских работ, касающихся их внутренних анатомических структур, особенно структур клеток и органоидов, где содержат важные природные соединения. С одной стороны исследование структур клеток и органоидов лекарственных растений поставляет материалы классификации разных родов лекарственных растений. С другой стороны это исследование является основанием определения состава веществ, существующих в клетках и ориентирует направление их сбора, поиском возможности использования в фармацевтической отрасли, ценных природных соединений из видов лекарственных растений.

Настоящая работа посвящена морфофункциональной характеристики и оценки эффективности биологически активных веществ (БАВ) растений Syzy-giinn jambolana DC., Nelumbo nucífera Gaertn., Homalonema occulta (Lour.) Schott., Scoparia dulcís L., Stemona tuberosa Lour., Psychotria montana Blume, Ehretia asperula Zoll. & Moritzi, Etythropalum scandens Blume, Hedyotis diffusa Willd., Symplocos glomerata King ex C.B. Clarke, Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils., Symplocos cochinchinensiás (Lour.) S. Moore., Pseiideranthemum palatiferum (Nees) Radlk., произрастающих в Нгеан провинции Вьетнама с рекомендациями возможности их использования в фармацевтической отрасли.

Аналогичных работ по изучению эффективности биологически активных г веществ (БАВ) из растений Syzygium jambolana DC., Nelumbo nucífera Gaertn., Homalonema occulta (Lour.) Schott., Scoparia dulcís L., Stemona tuberosa Lour., Psychotria montana Blume, Ehretia asperula Zoll. & Moritzi, Erythropalum scandens Blume, Hedyotis diffusa Willd., Symplocos glomerata King ex C.B. Clarke, Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils., Symplocos cochinchinensis (Lour.) S. Moore. Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk. в мире не проводилось, хотя многие из них применяются по соответствующему назначению в народной медицине. Выбор места произрастания изучаемых растений основан на эндемичной специфичности и высокой биологической активности сырья, связанной с особыми климатическими условиями произрастания.

Целю работы является изучение биоморфологии лекарственных растений Homalonema occulta (Lour.) Schott., Nelumbo nucífera Gaertn., Scoparia dulcís L., Stemona tuberosa Lour., Syzygium jambolana DC., Psychotria montana Blume, Ehretia asperula Zoll. & Moritzi, Erythropalum scandens Blume, Hedyotis diffusa Willd., Symplocos glomerata King ex C.B. Clarke, Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils., Symplocos cochinchinensis (Lour.) S. Moore, Pseuderanthemum pa-latiferum (Nees) Radlk собранных в Нгеан провинции Вьетнама и оценки их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики.

Задачи исследования:

1. Экспедиция в заповедники Нгеан провинции Вьетнама для сбора и сушки листьев, корней и плодов лекарственных растений H. occulta, N. nucífera, S. dulcís, S. tuberosa, S. jambolana, P. montana, E. asperula, E. scandens, H. diffusa, S. glomerata, S. cuneata, S. cochinchinensis, P. palatiferum.

2. Дать биоморфологическую характеристику собранных лекарственных растений в Нгеан провинции Вьетнама.

6. Определить антиоксидантную активность экстрактов методами хемилю-минесценции, определения ТБК - активных продуктов по реакции взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), определения содержания восстановленного глутатиона.

Работа выполнена в соответствии с научным направлением кафедры фармакологии, фармакогнозии и фармацевтических технологий Астраханского государственного университета «Создание и внедрение в практику новых лекарственных средств с использованием метода нанофармацевтической технологии» (зав. кафедрой д.м.н., проф. Епинетов М.А.) и при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ) и Вьетнамской академией наук и технологий (ВАНТ) в рамках Международного проекта Вьетнам-Россия «Биологически активные вещества в лекарственных растениях провинции Нге-ан Вьетнама и Астраханской области России (Syzygium jambolana, Nelumbo nucífera, Homalonema occulta, Scoparia dulcís, Stemona tuberosa, Psychotria montana, Ehretia asperula, Erythropaliim scandens, Hedyotis diffusa, Symplocos glome-rata, Sargentodoxa cuneata, Symplocos cochinchinensis, Pseuderanthemum palatife-rum). Выделение, структура, противоопухолевые, антиоксидантные и гормоно-подобные свойства, динамика воздействия на модельные клеточные системы, направленный поиск синтетических аналогов» проект № 09-03-90302.

Научная новизна.

1. Впервые на биологических моделях маркерной диагностики изучено влияние экстрактов лекарственных растений собранных в Нгеан провинции Вьетнама на пролиферацию клеток HeLa (рак шейки матки человека) и MCF-(рак молочной железы), экспрессию онкобелка Вс1-2.

Научно-практическая значимость иследования состоит в том, что материалы диссертации могут быть использованы для последующих этапов разработки лекарственных препаратов, обладающих противоопухолевым, антиокси-дантным, гормоноподобным действием.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анализ биоморфологических признаков лекарственных растений Н. occulta, N. nucífera, S. dulcís, S. tuberosa, S. jambolana, P. montana, E. asperula, E. scandens, H. diffusa, S. glomerata, S. cuneata, S. cochinchinensis, P. palatiferum собранных в экспедиции в Нгеан провинции Вьетнама.

Апробация работы. Диссертация обсуждена на заседании кафедры биологии и экологии растении биологического факультета Астраханского Государственного Университета (г.Астрахань, 2008 г., 2010 г.).

Основные положения работы были изложены на II Всероссийской конференции-школы «Высокореакционные интермедиаты химических реакций» (г.Астрахань, 2007 г.), III Всероссийской конференции-школе с международным участием «Высокореакционные интермедиаты химических реакций» (г.Астрахань, 2008 г.), Международной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря и водоемов внутреннего стока Евразии» (г.Астрахань, 2008 г.), Международной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов» (г.Астрахань, 2009 г.), Международной научно-практической конференции «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования» (г.Астрахань, 2009 г.), 7-й Международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2010).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 19 работ, включая 5 статьи в научных журналах, рекомендуемых ВАК.

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 130 страницах компьютерного текста, содержит 39 рисунков, 10 таблиц. Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов, библиографического списка, приложения.

Заключение Диссертация по теме "Ботаника", Нгуен Ань Зунг

ВЫВОДЫ

1. Дана биоморфологическая характеристика лекарственных растений провинции Нгеан Вьетнама Homalonema occulta (Lour.) Schott., Nelumbo nucífera Gaertn., Scoparia dulcís L., Stemona tuberosa Lour., Syzygium jambolana DC., Psychotria montana Blume, Ehretia asperula Zoll. & Moritzi, Erythropalum scandens Blume, Hedyotis diffusa Willd., Symplocos glomerata King ex C.B. Clarke, Sargen-todoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils., Symplocos cochinchinensis (Lour.) S. Moore, Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk

2. На биологических моделях маркерной диагностики установлена цитоток-сическая активность в отношение опухолевых клеток HeLa (рак шейки матки человека) и MCF-(paK молочной железы) у экстрактов растений Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Нгуен Ань Зунг, Астрахань

1. Абдуллин И.Ф. Экспрессная оценка антиоксидантной активности расти-телные сырья // Всероссийская конф. химия и технология растительных веществ, Казань.- 2002.- С.24-27.

2. Асеева Т.А. Пищевые растения в тибетской медицине / Т.А. Асеева, Ц.А. Найдакова // Новосибирск «Наука» Сибирское отделение, 1991. 49с.

3. Афанасьев В.В. Клиническая фармакология реамберина.- СПб.: Фолиант, 2005.- 43с.

4. Бекман Р. 10 лет терапевтического применения супероксиддисмутазы / Р. Бекман, Л.Флое, К. Вильсам,- Ахен, 1995.- 21с.

5. Бергельсон Л.Д. Препаративная биохимия липидов / Л.Д. Бергельсон, Э.В. Дятловицкая, Ю.Г. Молотковский и др.- М. наука-1981.- 259с.

6. Блинков И.Л. Справочник по лечебному применению растений / И.Л. Блинков, Т.Л. Киселева, Е.В. Цветаева. Вып. 4.- М.: Марс, 1998.- 197с.

7. Борисов В.Н. Химическое изучение биологически активных веществ некоторых видов ферул средней Азий: Дис. канд. Хим. наук: 02.00.107 Всесоюзный научно-исследовательский институт лекарственных растений (ВИЛР).- 1967- С.29-36.

8. Васьков К.С. Влияние некоторых производных гамма-оксимаслянной и янтарной кислот на выживаемость кожного лоскута на ножке: Автореф. дис. канд. мед. наук: 14.01.07 / Ростов-на-Дону.- 1989,- 20с.

9. Воскресенский О.Н. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе па-родонтита / О.Н. Воскресенский, Е.К. Ткаченко // Стоматол. 1991. № 4. С.5-10.

10. Всемирная Организация Здравоохранения. Народная медицина: пути содействия и развития / Сер. технич. докл. 622. Доклад Совещ. ВОЗ, Женева, 1977-М.: Медицина, 1980.- 46с.

11. Вышковский Г.Л. Регистр лекарственных средств России / Г.Л. Вышков-ский, Ю.Ф. Крылов, Е.Г. Лобанова. ООО «РЛС 2004»,- 1504с.

12. Галенко-Ярошевский П.А. Очерки фармакологии средств метаболической терапии / П.А. Галенко-Ярошевский, И.С. Чекман, H.A. Горчакова.- М.: Медицина, 2001.- 240с.

13. Гаммерман А. Ф. Обзор лекарственных растений восточной медицины: Дис. д-ра фарм. Наук / С.-Петерб., 1941.- 480с.

14. Гасанов A.M. Опыт эколого-анатомического исследования некоторых растении Азербайджана, произрастающих в различных климатических усло-виах: Дис. канд. биол. наук / Институт ботаники академии наук Азербайджанской ССР., 1958.- С.35-41,154-178.

15. Гацура В.В. Фармакологическая коррекция энергетического обмена ише-мизированного миокарда.- М.: Антекс, 1993.- 252с.

16. Георгиевский В.П. Биологически активные вещества лекарственных рвстений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. Новосибирск «Наука» Сибирское отделение. 1990.- 333с.

17. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1.-XI изд., доп.- М: Медицина, 1989.- С.266-267, 277-282.

18. Гринкевич Н.И. Лекарственные растения (справочное пособное) / Н.И. Гринкевич и др.- М: «высшая школа», 1991.- 396с.

19. Дмитриева Л.А. Клинико-лабораторная оценка эффективности применения «Мексидола» в комплексном лечении хронического генерализованного па-родонтита / Л.А. Дмитриева, Е.П. Просвирова // Пародонтол.- 2004.- Т.32.-№3.- С.28-34.

20. Дык Л. Ч. История Вьетнамских лекарственных растений и фармакология «Туе Тинь»,- Хошимин, 1995.- 403с.

21. Ефремов А.П. Травник для мужчин / А.П. Ефремов, А.И. Шретер. М.: "Асадаль", 1996,- 352с.

22. Журавский С.Г. К вопросу об истории применения многокомпонентных лекарственных композиций в традиционных медицинских системах / С.Г. Журавский, И.Ю. Каменев // Терра Медика Нова.- 1998.- №3. (Url: http://medi. ru/doc/8 780309. htm)

23. Захаров Ю. А. "Лечение травами". Часть 1 и 2.- М.: Школа пресс, 1999.

24. Зенков Н.К. Окислительный стресс: биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Панкин, Е.Б. Меньшикова,- М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001.- 343с.

25. Зунг H.A. Исследование разнообразия высших растений в Мон-шон -буферная зона национального парка Пу-мат. Дис. магист. биол. наук / Винг университет.- Вьетнам, 2002.- 84с.

26. Зунг H.A. Обновленные данные о видовом составе семейства Euphorbiaceae в национальном парке Пу-мат, Нгеан провинция / Зунг H.A., Май Н.Т. // Некоторые исследования в биологических наук. Издательство науки и техники, Ханой, Вьетнам. -2006.- С.66-70.

27. Зунг H.A. Обновленные данные о видовом составе семейства бобовые (Fabaceae) в национальном парке Пу-мат, Нгеан провинция // Зунг Н.А, Хьен Н.Т. // Научный журнал Винг университета. Вьетнам.-2006.- № 2(А).-С.59-63.

28. Калмыкова O.JI. Традиционная медицина Вьетнама // Советское здравоохранение.- 1990.- № 6.- С.74-76.

29. Карпеев A.A. Проблемы развития традиционной медицины в России / A.A. Карпеев, T.JI. Киселева// Мед.- фарм. вестник.- 1996.- №6.- С.15-18.

30. Ковалева Н.Г. Лечение растениями. Очерки по фитотерапии.- М. Медицина, 1971.- 350с.

31. Короткова Е.И. Вольтамперометрия и анализ антиоксидантов. Томский политехнический университет. (Url: http://euro-sib-analyse.eu/?sid=29).

32. Курашвили В.А. Биологически активные вещества как факторы сохранности иммунитета// Альтернативная медицина.- 1999. -№4.- С.24-27.

33. Курашвили В.А. Использование опыта традиционной китайской медицины для профилактики и реабилитации / В.А. Курашвили, И.В. Высочин // В сб.: Современные технологии восстановительной медицины.- Сочи, 2002.-С.24-27.

34. Кханг Н. Фармакогнозия и экспорт медикаменты Вьетнама за рубежом / Н. Кханг, В.В. Схыонг // Бизнес.- Ханой, 1996.- Т.5.- №3.- С.2.

35. Jle Хак В.В. Стиль здоровой жизни (Healthy Lifestyle) // К.: (б. и.), 2008.-288с.

36. Межрегиональный центр "Адаптоген" СПБ: Применение метода высокоэффективной тонкослойной хроматографии в фармакокинетическом исследовании тритерпеноидов экстракта босвеллии (Boswellia serrata Roxb.) /

37. С.А. Иванова, О.Н. Пожарицкая, М.В. Карлина и др. // Вопросы биологической и фармацевтической химии.-2008.- №6.- С.59-63.

38. Меладзе В.Н. Влияние энергостима на пролиферативную активность остеобластов крыс и уровень внутриклеточного кальция / В.Н. Меладзе, В.Л. Попков, П.А. Галенко-Ярошевский и др. Прил. 2,- 2002.- С. 109-111.

39. Муравьёва Д.А. Фармакогнозия (с основами биохимии лекарственных растений).- М. "Медицина", 1978.- С.494.

40. Оболенский С.В. Реамберин новое средство для инфузионной терапии в практике медицины критических состояний. СПб.: МАЛО, 2001.- 19 с.

41. Орлова И.В. Синтез экдистероидов в растениях и культурах клеток Rhaponticum carthamoides (Willd.) Iljin / И.В. Орлова, A.M. Носов, В.Г. Лукша // Физиол. Растений.- 1994,- Т.41.- № в.- С.907-912.

42. Потимэкс: История развития фитотерапии во Вьетнаме (Элек.рес.) (URL: http://potimex.ru/Public/public20090418.htmT). Дата обращения: 18.04.2009

43. Ратахина Л. В. Крапива двудомная (Urtica dioica) в терапии экспериментальных опухолей // Новые лекарственные препараты растений Сибири и Дальнего Востока.-Томск, 1986.- 124с.

44. Российская академия наук. Растительные ресурсы.- СПБ: «Мир и семья-95», 1996.- С.105-106.

45. Смирнова Ю.А. Лекарственные растения, применяемые в народной медицине для лечения онкологических заболеваний / Ю.А. Смирнова, Т.Л. Киселева // Традиционная медицина, научно-практический журнал.-2006.-№1(6).- С.57-63.

46. Состав лекарственных растений (Url: http://www.sunhome.ru/journal /110083).

47. Стефанов A.B. Клинико-экспериментальное обоснование применения су-пероксиддисмутазы в медицине Харьков / A.B. Стефанов, JI.B. Деримед-ведь, И.В. Чурилова и др. Из-во НФаУ, 2004.- 288с.

48. Тепкеева И.И. Пептидные экстракты лекарственных растений: изучение состава и противоопухолевой активности: Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.05; 03.00.04 / Астрахан. гос. ун-т.- Астр., 2009.- 22с.

49. Терёшина Н.С. Биологически активные вещества и гомеопатические препараты брионии белой и двудомной // Традиционная медицина, научно-практический журнал.-2006.- №1(6).- С.20-26.

50. Фармакологическая академия: Ресурсы лекарственных растений Вьетнама. Ханой, 1993.- 640с.

51. Фоде Б. Анатомическое строение листа некоторых видов Сем. Bromelia-сеае Juss. в связи с их экологией: Дис. канд. биол. наук: 03.00.05 / С,-Петерб. гос. ун-т.- СПБ., 1996.- С.45-80.

52. Фруентов Н.К. Лекарственные растения Дальнего Востока. 3-е изд. Хабаровск, 1987.- 350с.

53. Хасанов В.В. Методы исследования антиоксидантов / В.В. Хасанов, Г.А. Рыжова, Е.Р. Мальцева // Химия растительного сырья.- 2004,- № 3.- С.63-75.

54. Чурилова И.В. Препарат эритроцитарной супероксиддисмутазы «Эрик-сод»: влияние на уровень обожженных в состоянии ожогового шока / И.В. Чурилова, Е.В. Зиновьев, Б.А. Парамонов и др // Бюл. экспер. биол.- 2002.-Т.134.- №11.- С.528-531.

55. Швец П. Свободные радикалы, этиопатогенез заболеваний и пути терапевтического воздействия // Словакфарма ревю, 1996.- № 4.- С.75-77.

56. Шретер А. А. Лекарственная флора советского Дальнего Востока.- М.: Медицина, 1975.- 328с.

57. Южин В.И. Энциклопедия лекарственных растений. М.: Ространсфер, 1998,- 96с.

58. Яшин Я.И. Проблема определения содержания антиоксидантов / Я.И. Яшин, А.Я. Яшин // Метрология-Компетентность 2009 - (Url: http://www.asms.ru/kompet/2009/082009/08Yachin.pdf).

59. Aaron P. D. The typification and characterization of the genus Psychotria L. (Ruabiaceae) / P.D. Asron et al // Botanical Journal of the Linnean Society.-2001.- Vol.135.-35-42.

60. Alliot-Licht. Cellular activity of osteoblasts / Alliot-Licht et al // Biomaterials.-1991.- Vol.12.-P.752-756.

61. Andreyev A.Y. Mitochondrial metabolism of reactive oxygen species / A.Y. Andreyev, Y.E. Kushnareva, A.A. Starkov // Biochemistry (Mosc).- 2005,-Vol.70.- № 2.- P.200-214.

62. Anon. National five million hectare reforestation programme.- Hanoi: Department of Forestry Development, Ministry of Agriculture and Rural Development, Government of Viet Nam., 2001.- 120p.

63. Anon. Proceedings of the International Conference on Network research, conservation, use and sustainable development of biological resources for medical purposes in Viet Nam.- 2003.- 158p.

64. Anthony C. A review of Wild Asparagus {Stemona tuberosa) Lour, 2005. {Url: www. dweckdata. com/Publ ishedpapers/Stemonatuberosa.pdf)

65. Aruoma O.I. Oxygen free radicals and human diseases / O.I. Aruoma, H. Kauer, B. Halliwell //J. R. Soc. Health.- 1991.- Vol.111.- P. 172-177.

66. Chau D.Q. Some of the resulting data on Thai Ethnicity medicinal herbs, Nghia Dan District in Nghe An Province // Journal of Biology.- 2001.- №3(C).- P.21-39.

67. D'Attillio M. Gingival endothelial and inducible nitric oxide synthase levels during orthodontic treatment: a cross-sectional study / M. D'Attillio et al // Angle Orthod.- 2004.- Vol.74.- №6.- P.851-858.

68. Dieu H.K. The effects of Psederanthemum palatiferum,a. new medicinal plant, on growth performances and diarrhea of piglets / H.K. Dieu et al // Jarq.-2006.-Vol.- 40(1).- P.85-91.

69. Duan X.H. A New Benzylisoquinoline Alkaloid from Stems of Nelumbo nucifera (nelumstemine (I)) / X.H. Duan, J.Q. Jang // Chin. Chem. Lett.- 2008. №19.-Vol.3.-P.308-310.

70. Forest inventory and planning Institute: Viet Nam forest trees. Publishing House Agriculture, Hanoi.- 1996.- 788p.

71. Govindarajalu E. Fuerther contribution to the anatomy of the stemonaceae (Roxbughinaceae) Stemona tuberosa Lour. / E. Govindarajalu, K. Rajasekaran // Journal Plant Sciences.- 1972.- Vol.75.- №5.- C.215-220.

72. Govindarajalu E. Further contribution to the anatomy of the stemonaceae (Rox-burghiaceae) Stemona tuberose Lour. / E. Govindarajalu, K. Rajasekaran // Plant Sciences.- 1972.- Vol.75.- №5.- C.215-220.

73. Graeme E. The Health Benefits of Traditional Chinese Plant Medicines: Weighing the scientific evidence / E. Graeme, Thomson // A report for the Rural Industries Research and Development Corporation, Australia.- 2007.- 139p.

74. Hanh N. T. Researching on medicinal plants of the Thai Ethnicity in Con Cuong, Nghe An. PhD thesis in biology / Vinh university.- 1999.- 123p.

75. Ho P.H. Flora of Vietnam (3 volumes).- Youth Publisher, Hanoi, 1999.

76. Hyo K.L. Original article Antioxidant Effect of Korean Traditional Lotus Liquor / K. L.Hyo, M.C. Yang, O.N. Dong / International Journal of Food Science and Technology.- 2005.- Vol.40.- P.709-715.

77. Hyun R.G. Simultaneous Determination of Quercetin and its Glycosides from the Leaves of Nelumbo nucifera by Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography / R.G. Hyun, S.C. Jae, H.N. Dong // Arch Pharm Res.- 2009.-Vol.32.- №2.- P.201-206.

78. Institute of Chinese Medicine: Alkaloids and Chemical Diversity of Stemona tu-berosa/ J. Ren-Wang et al // J. Nat. Prod.-2006.- Vol.69(5).- P.749-754.

79. Khanh T.C. Using the resources of medicinal plants the equitable sharing of benefits and reasonable / T.C. Khanh // Journal of Pharmaceutical Sciences, Hanoi.-2004.- P.7-11; 30.

80. Klein R.M. Research Methods in Plant Science / R.M.Klein, D.T.Klein.- Natural History Press, Garden City, 1970.- 756p.

81. Korshunov S.S. Fatty Acids as Natural Uncouplers Preventing Generation of 02 and H2O2 by Mitochondria in the Resting State / S. S.Korshunov et al // FEBS Lett.- 1999.- Vol.435.- P.215-218.

82. Kumar M. Plants Trapa bispinosa Roxb. and Nelumbo nucifera Gaertn / M. Kumar, S. Chikara, M.K. Chand et al. Contam. Toxicol.- 2002.- Vol.69.- 649p.

83. Kuo Y.C. Heipes simplex virus type 1 propagation in HeLa cells interrupted by Nelumbo nucifera / Y.C. Kuo, Y.L. Lin, C.P. Liu // Journal of Biomedical Science.- 2005.- Vol.12.- P.1021-1034.

84. Lam D.N. Some medicines and medicinal herbs in Vietnam, Laos, Cambodia / D.N. Lam, V.V. Chuyen, N.T. Binh. Agricultural Publisher in Hanoi.- 1987.-Vol.l.- 175p.

85. Le T.L.O. Purification and characterization of a protease from Pseuderanthe-mum palatiferum (Ness.) Radlk leaves / T.L.O. Le, H.B. Vo, T.D. Nguyen // 6th International Congress of Plant Molecular Biology, Quebec, Cananda.- P.06-28.

86. Liu S. Optimization of Liensinine, Isoliensinine and Neferine Extraction from the Embryo of the Seed of Nelumbo nucifera Gaernt // Separation Science and Technology.- 2008.- Vol.43.- Issuel4.- P.3637-3651.

87. Loi D.T. The medicinal plants and herbs of Vietnam.- Publisher of Scientific -Technical, Hanoi, 1997.- 1172p.

88. Loi D.T. Vietnamese Materia Medica.- Publisher of Scientific-Technical, Hanoi, 1995,- 521p.

89. Manandhar N.P. Antidiuretic effect of Scoparia dulcis in rats / N.P. Manandhar, S.Manandhar // Journals of Tropical Medicinal Plants.- 2002.- Vol.3.- №1.-447p.

90. Ministry of foreign affairs. The socialist republic of Vietnam. Basic information & Directory, Hanoi, Vietnam, 2007.- 65p.

91. Ministry of Science, Technology and Environment. Red Data Book of Vietnam.-Science and Technics Publishing House, Hanoi, 1996.- Vol.2.(Plants).- 484p.

92. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxity assays / T. Mosmann. J. Immunol // Methods.- 1983.- Vol.65.- №1.- P.55-63.

93. Nayashi T. Involvement of 2-C-Methyl-D-erythritol-4-phosphate Pathway in Biosynthesis of Aphidicolin-Like Tetracyclic Diterpene of Scoparia dulcis / T. Nayashi et al // Chem. Pharm. Bull.- 2006.- Vol.54(5).- P.758-760.

94. Nayashi T. Selective Enhancement of Scopadulcic Acid B Production in the Cultured Tissues of Scoparia dulcis by Methyl Jasmonate / T. Nayashi, K.M. Nkembo, J.B. Lee // Chem. Pharm. Bull.- 2005. Vol.53(7).- P.780-782.

95. On T.V. Literatrure Review on the trade of medicinal plants in Vietnam and within Tam Dao National Park and Buffer zone (report). Hanoi University of Pharmacy, 2005.- 59p.

96. Otsuka H. Chemical and Biological Evaluation on Scopadulane-Type Diterpe-noids from Scoparia dulcis of Vietnamese Origin / H. Otsuka et al // Chem. Pharm. Bull.- 2006.- Vol.54(4).- P.546-549.

97. Pari L. Antidiabetic effect of Scoparia dulcis: effect on lipid peroxidation in streptozotocin diabetes / L. Pari, M. Latha // Gen Physiol Biophys.- 2005.-Vol.24(l).- P. 13-26.

98. Pari L. Antihyperlipidemic Effect of Scoparia dulcis (Sweet Broomweed) in Streptozotocin Diabetic Rats / L. Pari, M. Latha // J. Med. Food.- 2006.-Vol.9(l).- P.102-107.

99. Pari L. Effect of Scoparia dulcis extract on insulin receptors in streptozotocin induced diabetic rats: studies on insulin binding to erythrocytes / L. Pari, M. Latha, C.A. Rao // J. Basic Clin Physiol Pharmacol.- 2004.- Vol. 15(3-4).- P.223-240.

100. Pulok K. Diuretic Activity of Extract of the Rhizomes of Nelumbo nucifera Gaertn. (Fam. Nymphaeaceae) / K. Pulok, Mukherjee, M. Pal et al // J. Das. Phytotherapy research.- 1996.- Vol.10.- P.424-425.

101. Rahn C.A. Assessment of mitochondrial membrane potential as an indicator of cytotoxicity / C.A. Rahn et al // Appl Toxicol.- 1991.- Vol. 16(3).- P.435-48.

102. Roginsky V. Review of methods to determine chain-breaking antioxidant activity in food / V. Roginsky, E.A. Lissi // Food chemistry.-2005.- P.25-29.

103. Takhtajan A. Diversity and Classification of Flowering Plants / A. Takhtajan New York, Columbia University Press, 1997.- 663p.

104. Tap N. Results of investigation of medicinal plants in Vietnam / N. Tap et al // Workshop report "Biodiversity in Vietnam: research, teaching, training, Hanoi.-2005.- P.164-167.

105. Thin N.N. Biodiversity of Botany in Pu Mat National Park / N.N. Thin, N.T. Nhan.- Agricultural Publisher in Hanoi, 2004.- 435p.

106. Thin N.N. Thai ethnicity medicinal herbs in Con Cuong, Nghe An / N.N. Thin, N.T. Nha, N.T. Hanh.- Agricultural Publisher, Hanoi, 2001.- 178p.

107. Traditional Medicine and pharmacopeia. The medicinal plants in Vietnam. Agency for Cultural and Technical Cooperation, Paris, 1990,- 188p.

108. UNEP.- WCMC. Review of significant trade analysis of trade trends with notes on the conservation status of selected spicies // Convention on international trade in endangered species of wild fauna and flora.- Vol.1 (Plants).- PC14 Doc.- №9(3).- 49p.

109. Van N.D.N. An overview of the use of plants and animals in traditional medicine systems systems in Vietnam / N.D.N. Van, N. Tap // Traffic Southeast Asia report. Greater Mekong Programme, Ha Noi, 2008.- 96p.

110. Vogel S. Contributions to the functional anatomy and biology of Nelumbo nucifera (Nelumbonaceae) 11 Plant Syst.- 2004.- Evol.- 249.- P.9-25, 27-35, 173-189.

111. W. Barthlott. Purity of the sacred lotus, or escape from contamination in biological surfaces / W. Barthlott, C. Neinhuis // Planta.-1997.- Vol.202.- P. 1-8.

112. Wen-Han L. Molecular structure of tuberostemonone / L. Wen-Han et al // Journal of Crystallographic and Spectroscopic Research.- 1991.- Vol.21.- No2.

113. Wondu Holdings Pty Limited. New pharmaceutical, nutraceutical & industrial products the potential for Australian agriculture. Rural Industries Research and Development Corporation Publication, 2000,- №00/173.- 145p.

114. Xiao J.H. Effects of isoliensinine on angiotensin II-induced proliferation of porcine coronary arterial smooth muscle cells / J.H. Xiao et al // Journal of Asian Natural Products Research.- 2006.- Vol.8.- Issue3.- P.209-216.

115. Yagama R.Y. A Glimpse of Vietnam's Forest Wealth and Medicinal Plants-Based Traditional Medicine / R.Y. Yagama // J. Hum. Ecol.- 2005.- Vol. 17(4).-P.293-299.

116. YanFen D. Changes in extreme high-temperature tolerance and activities of antioxidant enzymes of sacred lotus seeds / D. YanFen, C. HongYan, S. Song-Quan. Sci China Ser C-Life Sci.- 2008,- Vol.51.- №9.- P.842-853.

Информация о работе

Нгуен Ань Зунг
кандидата биологических наук
Астрахань, 2010
ВАК 03.02.01

Диссертация

Биоморфологическая характеристика некоторых лекарственных растений нгеан провинции Вьетнама и оценка их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы