Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологический способ обнаружения нефтяного загрязнения в водных средах

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Биологический способ обнаружения нефтяного загрязнения в водных средах"

На правах рукописи

ЛОЗОВОЙ ДМИТРИЙ ВИКТОРОВИЧ

БИОЛОГИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ НЕФТЯНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ В ВОДНЫХ СРЕДАХ

03.00.16 - экология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Иркутск-2003

Работа выполнена в Иркутском государственном университете Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Стом Д.И. кандидат биологических наук, с.н.с. Саксонов М.Н.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, чл.-корр. РАМН, профессор Савченков М.Ф. кандидат биологических наук, доцент, Осипова Е.В.

Ведущее учреждение:

Красноярский государственный университет

Защита состоится «19» июня 2003 г. в 17 часов на заседании диссертационного совета Д 212.074.07 при Иркутском государственном университете по адресу: 664003 г. Иркутск, ул. Сухэ-Батора, 5, Байкальский музей им. профессора М.М. Кожова (ауд. 219).

Почтовый адрес: 664003, г. Иркутск, ул. Ленина, 3, а/я 24, НИИ биологии при ИГУ.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Иркутского государственного университета.

Автореферат разослан «19» мая 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б.н.

Купчинская Е.С.

Актуальность проблемы. На сегодняшний день зафязнение окружающей среды токсикантами становится таким же экологическим фактором как свет, температура и т.д. Нефть и получаемые из нее продукты относятся к числу

оценка загрязнения окружающей среды нефтепродуктами, как, впрочем, и другими токсическими веществами, производится, преимущественно, на основе

результатов экоаналитических анализов (Жмур, 1997). Однако, учитывая, что загрязняющие вещества многокомпонентны, и сочетанное действие всех компонентов на живые системы не представляет собой простой суммы, аналитический контроль не позволяет судить о качестве воды в целом, и ориентация только на ПДК весьма опасна и ненадежна (Брагинский, 1998). Переход к более надежному экологическому контролю состояния окружающей среды возможен только при обязательном использовании методов биотестирования (Mancha, Diaz, Arese, 1997; Barron et al., 1999). Оперативная интегральная оценка качества воды, почвы и атмосферы методами биотестирования не заменяет химический анализ, но дополняет и предваряет его, благодаря экспрессности, простоте и невысокой стоимости методов биотестирования.

Метод биотестирования, основанный на выживаемости рачков рода Daphnia, является одним из наиболее широко применяемых в водной токсикологии и рекомендован в качестве первоочередного для контроля сточных вод и выявления потенциально опасных источников загрязнения водных объектов (РД 118-02-90; ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.5-2000). Вместе с тем, в острых опытах чувствительность дафний к нефтегенным загрязнителям при использовании гибели как тест-реакции явно недостаточна для оперативного контроля. В связи с этим, поиски перспективных биологических методов обнаружения нефтеген-ного загрязнения являются весьма актуальными.

Цель и задачи исследований. Основная цель настоящей работы - разработать на основе дафний новый экспрессный и высокочувствительный метод обнару-

наиболее распространенных и опасных загрязнителей (Beswick, 1996). Сегодня

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ

БИБЛИОТЕКА С. Петербург yj,^ 09 ИМ

жения нефтяного загрязнения в водных средах. Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

1. Предложить экспрессный, надежный и информативный метод обнаружения нефтепродуктов и их ингредиентов с использованием дафний.

2. Сопоставить чувствительность предложенного биотеста на различных видах ракообразных и разновозрастных С1ас1осега к нефтепродуктам.

3. Провести сравнительную оценку чувствительности к нефтепродуктам известных методов и предлагаемого биотеста.

4. Выявить вероятную взаимосвязь между строением нефтепродуктов и их свойствами и чувствительностью биотеста. Выяснить степень специфичности найденного теста для нефтепродуктов.

5. Изучить возможность использования предлагаемой тест-реакции для биологического контроля сред, содержащих нефтепродукты в присутствии загрязнителей других классов.

6. Исследовать возможные механизмы предлагаемой тест-реакции.

7. Оценить перспективы, ограничения и выдать рекомендации по использованию разработанного метода для биотестирования нефтезагрязненных субстратов.

Положения, выносимые на защиту:

1. В присутствии нефти, нефтепродуктов, ароматических и алифатических углеводородов происходит всплытие ракообразных отр. С1ас1осега на границу раздела водная среда-воздух. На основе этой реакции разработан новый биологический способ обнаружения нефтяного загрязнения по тест-реакции перехода ракообразных отр. С1аёосега в поверхностную пленку. Предлагаемый способ на несколько порядков чувствительнее к нефтепродуктам, чем известные биотесты, основанные на выживаемости и регистрации сердечного и дыхательного ритма рачков.

2. Реакция перехода в поверхностный слой специфична для нефтепродуктов. Она характерна для ракообразных отр. Cladocera и не свойственна для представителей отр. Copepoda, отр. Anostraca, отр. Podocopida.

3. Чувствительность реакции перехода рачков на поверхность, также как и теста по выживаемости, возрастала с увеличением температуры кипения фракций нефти и нефтепродуктов, а для ароматических и алифатических углеводородов - и по мере увеличения их молекулярных масс.

4. Всплытие Cladocera на поверхность обусловлено хемотаксическим эффектом углеводородов нефтей, а невозможность их последующего ухода в толщу сред связана с гидрофобизацией покровных тканей рачков углеводородами нефтяной пленки.

Научная новизна и теоретическое значение. Обнаружена и изучена новая поведенческая реакция Cladocera - всплытие рачков на поверхность раздела водная среда-воздух в присутствии нефти и нефтепродуктов. Установлено, что данная реакция характерна для ракообразных отр. Cladocera (Daphnia magna, Daphnia pulex, Ceriodaphnia pulchella, Bosmina longirostris, Simocephalus vetulus, Chydorus sphaericus). Для рачков отр. Copepoda (Cyclops kolensis, Epischura baicalensis, Harpacticella inopinata), отр. Anostraca (Artemia salina) и отр. Podocopida (Heterocypris reptans) всплытия в поверхностный слой не зафиксировано. Найденная реакция специфична для нефтепродуктов, всплытие в поверхностный слой не инициировали фенолы, соли тяжелых металлов, спирты, эфиры, поверхностно-активные вещества и биологические депрессанты. В процессе работы сопоставлена токсичность более 30 нефтепродуктов различного строения в отсутствие и присутствие других соединений различных классов на 8 видах ракообразных. Выявлено, что токсический эффект нефтепродуктов повышался по мере увеличения их температур кипения, а у ароматических и алифатических углеводородов также и по мере нарастания молекулярных масс. Изучены возможные механизмы, обуславливающие всплытие дафний под влиянием нефтепродуктов. Установлено, что всплытие тест-объектов в поверх-

ностный слой не связано с дефицитом кислорода, наркотическим действием нефтепродуктов, реакцией фототаксиса, изменением поверхностного натяжения и аккумуляцией в организме капелек нефтепродуктов. Показана определяющая роль хемотаксиса и поверхностных явлений в возникновении исследуемой реакции.

Практическое значение работы. Предложена новая экспрессная и высокочувствительная тест-реакция, позволяющая выявлять низкие концентрации нефтепродуктов в водных, газообразных и твердых средах, в том числе и в присутствии других химических соединений различных классов, за исключением высоких концентраций поверхностно-активных веществ. Сравнение чувствительности предложенной тест-реакции и известных биотестов позволило предложить ее в качестве высокочувствительного биологического метода для экспрессного обнаружения нефтяного загрязнения жидких и газообразных сред. Внедрение нового биотеста в систему мониторинга дает возможность оперативного контроля нефтяного загрязнения.

Результаты работы включены в отчеты лаборатории водной токсикологии НИИ биологии при ИГУ по госбюджетной теме 1999 г.; по хоздоговору 2000 г., выполненному по заданию компании "РУСИА-Петролеум"; по грантам РФФИ (№ 99-04-49612) и Интеграция (№ 54-275-15). Разработанный метод защищен патентом № 2152612 от 10.07.2000.

Апробация работы. Материалы диссертации представлялись на региональном научно-техническом совещании «Решение проблем охраны окружающей среды и рационального использования ресурсов в Иркутской энергосистеме» (Иркутск, 1996); Международной научно-практической конференции «Человек -среда - вселенная» (Иркутск, 1997); Юбилейной конференции «Современные проблемы экологии, природопользования и ресурсосбережения Прибайкалья» (Иркутск, 1998); Научно-практической конференции «Водные ресурсы Байкальского региона» (Иркутск, 1998); 1 съезде токсикологов (Москва, 1998); Международной научно-практической конференции «Экология речных бас-

сейнов» (Владимир, 1999); Международной научно-практической конференции «Экология. Образование. Здоровье» (Иркутск, 2000); 4 Всероссийском научном молодежном симпозиуме «Безопасность биосферы» (Екатеринбург, 2000); Международном симпозиуме по защите окружающей среды (Корея, 2000); Международной конференции «Природные условия, история и культура Западной Монголии и сопредельных регионов» (Ховд, MP, 2001). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 работ. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 172 страницах и состоит из введения, 6 глав, выводов и списка литературы. Список литературы включает 254 источников, в том числе 106 иностранных. Работа иллюстрирована 44 таблицами.

Содержание работы Глава 1. Литературный обзор. Проанализирована литература по влиянию нефтепродуктов на гидробионтов и по современному состоянию методов биотестирования.

Глава 2. Объекты и методы исследований. Материалами для написания работы послужили данные экспериментов проведенных в лаборатории водной токсикологии и на Байкальской биостанции НИИ биологии при ИГУ в пос. Большие Коты.

Объектами исследований являлись ракообразные (кл. Crustacea) отр. С1а-docera (Daphnia magna, Daphnia pulex, Simocephalus vetulus, Bosmina longi-rostris, Ceriodaphnia pulchella, Chydorus sphaericus), отр. Copepoda (Cyclops kolensis, Harpacticella inopinata, Epischura baicalensis), отр. Podocopida (Heterocypris reptans), отр. Anostraca (Artemia salina).

Содержание, культивирование и эксперименты проводили в лабораторных условиях согласно общепринятым методикам (Колупаев, 1988; РД 118-0290, 1991; ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.5, 2000). Н. inopinata и Е. baicalensis отлавливали в оз. Байкал в районе пос. Большие Коты. Опыты с этими рачками ставили в соответствии с (Стом, Гиль, 2000; Саксонов, Балаян, Стом, 2001).

В качестве токсикантов использовали нефть Марковского месторождения Иркутской области и ее фракции со следующими температурами кипения: до 110 °С, 110-150 °С, 150-180 °С, 180-210 °С, 210-240 °С, 240-270 °С, более 270 °С. Исходную эмульсию анализируемых нефтепродуктов готовили согласно (Миронов и др., 1985). Затем последовательным разбавлением готовили нужные концентрации. Диапазон исследуемых концентраций от 10 мл/л до Ю'10 мл/л. Водные суспензии и эмульсии, исследуемых токсикантов готовили на воде используемой для культивирования рачков. Эта же вода служила контролем.

Все эксперименты проводили в трех параллельных сериях. В качестве контроля использовали три параллельные серии с культивационной водой. Биотестирование проводили в химических стаканах объемом 100 мл, в них помещали по 10 рачков.

В опытах определяли концентрацию, вызывающую 50 % изменение тест-показателя (выживаемость, всплытие в поверхностный слой, изменение сердечного и дыхательного ритмов) за 24 часа.

Содержание растворенного в опытных средах кислорода определяли по методу Винклера (Аналитическая химия..., 1984). Измерение поверхностного натяжения опытных сред проводили согласно (Практикум по коллоидной химии..., 1974) .Аккумуляцию нефтепродуктов тест-объектами наблюдали с помощью люминесцентного микроскопа "Люмам И-1" (Саксонов и др., 2001). Химические анализы проб выполнены в Межвузовской региональной лаборатории экологических исследований под руководством профессора Г.М. Шпей-зера.

Для статистической обработки данных пользовались общепринятыми методами (Беленький, 1963; ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.5, 2000).

Глава 3. Новая высокочувствительная тест-реакция ракообразных отр. Cladocera на нефтепродукты

При постановке экспериментов по токсикометрической оценке водных проб загрязненных нефтепродуктами нами было обнаружено всплытие D.

Таблица 3.1 - Концентрации (мл/л) нефтепродуктов вызывающие всплытие в поверхностный слой 50% рачков отряда СЫосега при 24-х часовой экспозиции

Нефтепродукты Температура кипения, °С Тест - объекты

Оар1ша шавпа ОарЬша ри1ех 8]тосерЬа1из уепНиБ Возтта Ьпетоэйв Ceriodaphnia ри1сЬеПа Chydorus зрЬаепсив

авиабензин Б-95/130 35-195 (3,45±0,55)х10"2 (3,67±0,79)х102 (6,44±1,23)х10-: (4,17±0,84)х10"2 (5,62+1,27)х10"2 (2,16+0,37)хЮ'2

авиабензин Б-91/115 (2,19±0,38)х10"3 (5,27±0,93)х10'2 (2,14±0,3 2)х I О"2 (6,69±1,24)х10"2 (4,41±0,9б)х10"3 (4,19±0,82)х10'2

автобензин 80 (5,76+1,23)х10"3 (8,13±1,«1)х10-3 (4,15±0,83)х10"3 (2,12±0,38)х10'3 (2,22±0,44)х10° (5,5 6± 1,27)х 10"3

автобензин 92 (4,22±0,84)х10"* (5,33±1,15)х10"3 (1,83±0,31)х10"3 (6,71±1,28)х10'3 (5,Н+0,97)х10"3 (1,92±0,35)х10'3

автобензин 95 (3,64±0,87)х10'4 (6,27±1,24)х10"3 (7,19±1,48)х10"4 (3,25±0,55)х10"4 (4,18±0,83)х10"4 (7,14±1,41)х10"3

лигроин 120-240 (7,12±1,36)х10'5 (2,13±0,33)х10° (7,11±1>42)х10"4 (5,71±1,24)х10"4 (2,38±0,36)х10"4 (8,22+1,84)х10"4

реактивное топливо Т-1 180-300 (2,18±0,36)х10"4 (5,37±1,18)х10"4 (6,17±1,14)х10"4 (3,44±0,77)х10"4 (2,19±0,38)х10"5 (1,74±0,35)х10"4

реактивное топливо Т-2 (7,17±1,32)х10-< (5,26± 1,12)х 10"4 (4,43±0,92)х10"5 (7,21 ± 1,47)х 10"5 (4,22+0,84)х10"5 (4,25±0,76)х10"5

реактивное топливо Т-б (7,21±1,41)х10"4 (1,55±0,32)х10"5 (3,41±0,52)х10"6 (5,15±0,92)х 10"6 (2,14±0,32)х10"5 (5,23±1,16)х10'5

диз. топливо (зимнее) 220-370 (4,12±0,84)х10"7 (8ДЗ±1,86)х10"6 (2,17±0,35)х10"6 (5,5б±1,22)х10"6 (1,55±0,32)х10"7 (6,11±1,22)х10"5

диз. топливо (летнее) (2,18±0,31 )х О"8 (5,34±0,91)х10'7 (5,1б±0,92)х10'8 (7,24±1,47)х10"6 (7,17±1,32)х10"7 (1,55+0,38)х10"6

мазут М-40 более 350 (6,68±1,22)х10"8 (4,23±0,86)х10'8 (8,42±1,87)х10"8 (2,24±0,48)х10'8 (6,68±1,22)х108 (3,38±0,72)х10"7

мазут М-100 (3,22±0,59)х10"9 (б,67±1,23)х10"8 (1,96±0,32)х10"8 (3,56±0,79)х10"8 (4,23±0,86)х10"8 (7,25±1,43)х10'7

magna на границу раздела эмульсия-воздух. Такое поведение рачков навело на мысль о возможности использования данной реакции в качестве показателя на присутствие нефтегенного загрязнения. В ходе проверки подобного предложения были проведены опыты с нефтью, различными нефтепродуктами, ароматическими и алифатическими углеводородами. Эксперименты показали (таблица 3.1), что реакция всплытия в поверхностный слой характерна для всех рачков отр. Cladocera вне зависимости от их видовой принадлежности. Значительных видовых различий в чувствительности к нефтепродуктам у представителей вет-вистоусых не наблюдалось.

В тоже время, во всем диапазоне исследуемых концентраций токсикантов (10 мл/л-Ю'10 мл/л), не наблюдали перехода в поверхностный слой для представителей отр. Copepoda (С. kolensis, Е. baicalensis, Н. inopinata), отр. Ап-ostraca (A. salina) и отр. Podocopida (Н. reptans).

Глава 4. Сопоставление чувствительности перехода рачков в поверхностный слой с другими критериями интоксикации Cladocera

В практике биотестирования широко используются такие показатели, как выживаемость и изменение сердечного и дыхательного ритмов у планктонных организмов. Поэтому сопоставляли чувствительность реакции всплытия ветви-стоусых рачков на поверхность слой с вышеназванными показателями токсичности.

Как показали эксперименты по такому критерию токсичности как выживаемость, нами не выявлено существенных видовых различий в чувствительности у представителей отр. Cladocera: D. magna, D. pulex, С. pulchella, В. longirostris, S. vetulus и С. sphaericus обнаруживали высокую и достаточно близкую степень чувствительности к исследуемым нефтепродуктам. Представители отр. Copepoda (С. kolensis) и отр. Podocopida (Н. reptans) оказались немного более устойчивыми к токсикантам, по сравнению с ветвистоусыми рачками. Более высокую устойчивость веслоногих рачков к пестицидам, тяжелым металлам и поверхностно-активным веществам отмечали многие авторы

(Кривцова, Островский, 1980; Ме1тозЬ, Кеуегп, 1974) и связывали более высокую токсикорезистентиость Сорероёа с типом их питания (хищничество) и наличием сравнительно плотного хитинового покрова. Принимая за критерий токсичности всплытие в поверхностный слой 50 % тест-объектов, чувствительность рачков увеличивалась по мере роста температур кипения и молекулярных масс нефтепродуктов (таблица 4.1). Значительно менее выражен этот эффект, если принимать за критерий токсичности выживаемость 50 % С1а<1осега (рисунок 4.1).

Имеются сведения, что молодь ракообразных более чувствительна к некоторым токсикантам, чем взрослые особи. Наши исследования показали, что молодые рачки в возрасте 1 суток характеризовались более низкой устойчивостью к нефтепродуктам, чем взрослые особи в возрасте 12-14 суток, принимая за критерий токсичности выживаемость.

Рисунок 4.1 - Чувствительность тестов по выживаемости (50%) и всплытию (50%) D. magna при действии фракций нефти с различными температурами кипения

Как считают некоторые авторы, такая низкая токсикорезистентиость может быть обусловлено тем, что молодь характеризуется более высокой степенью протекания биосинтетических процессов, создающих благоприятные условия для внедрения токсикантов и нарушения обмена веществ (Патин, 1979;

Таблица 4.1 - Концентрации (мл/л) ароматических и алифатических углеводородов вызывающие всплытие в поверхностный слой 50% Daphnia magna при 24-х часовой экспозиции

Ароматические углеводороды Температура кипения, °С Молекулярная масса Концентрации, мл/л Алифатические углеводороды Температура кипения, °С Молекулярная масса Концентрации, мл/л

бензол 80 78 (3,16±0,63)xl0'J пентан 36 72 (3,34±0,67)х10"2

толуол 110 92 (6,62±1,26)х10"2 гексан 69 86 (7,33±1,45)х10"2

этилбензол 136 106 (2,12±0,34)х10"2 гептан 98 100 (2,27±0,49)х10"2

пара-ксилол 138 106 (5,32±1,14)х10*4 изооктан 99 114 (1,48±0,32)х10"э

мета-ксилол 139 106 О^Ш^хЮ-4 октан 125 114 (4,27±0,73)х10'4

орто-ксилол 144 106 (8,24±1,88)х10"5 нонан 150 128 (2,32±0,44)х10"4

стирол 145 104 (5,32±0,96)х10'5 декан 174 143 (3,34±0,67)х10"6

кумол 152 120 (4,17±0,81)х10"5 ундекан 195 156 {8,37±1,92)х10"6

мезителен 164 120 (7,21±l,43)xl0"s додекан 213 170 (4,25±0,83)х10'7

псевдокумол 169 120 (5,59±l,18)xl0"s гексадекан 247 226 (7,2б±1,42)х10*

тетралин 207 132 (8,41±1,83)х10"6 октадекан 318 254 (3,23±0,64)х10'8

нафталин* 218 128 (4,25±0,78)х10"* нонадекан 330 268 (2,34±0,41)х10"8

антрацен* 342 178 (7,28±1,42)х10'8

Примечание: * - концентрации даны в мг/л

Щеглов, Григорай, 1987). Вместе с тем, принимая за показатель токсичности реакцию всплытия, взрослые особи обнаруживали более высокую чувствительность по сравнению с молодью.

Таблица 4.2 - Сравнение чувствительности некоторых тест-функций D. magna при действии нефтепродуктов при 24-х часовой экспозиции

Нефтепродукты Температура кипения, °С Концентрации (мл/л), вызывающие изменение тест - функций в 2 раза

гибель 50 % рачков всплытие в поверхностный слой 50 % рачков 50% изменение частоты

сердцебиения дыхания

авиабензин Б-95/130 35-195 5,52±0,96 (3,45±0,55)х10'2 2,85±0,54 1,13±0,22

автобензин 95 3,24+0,55 (3,64+0,87)х10"4 1,17±0,21 (7,62±1,52)х10"'

реактивное топливо Т-6 180-300 1,23+0,23 (7Д1±1,41)х10"6 (6,48±1,29)х10'2 (З,46±0,58)х10"3

дизельное топливо (летнее) 220-370 1,13±0,21 (2,18±0,31)х10"8 (4,85±0,92)х10'3 (8,19±1,47)х10"4

топочный мазут М-100 более-350 (2,46±0,43)х10"' (3,22±0,59)х10-9 (8,53±1,62)х10"4 (6,37±1,14)х10'5

Материалы таблицы 4.2 показывают, что 50 % изменение дыхательного ритма в эмульсиях исследуемых токсикантов фиксировали в несколько более низких концентрациях, чем 50 % изменение сердцебиения. Вместе с тем, биотесты основанные на регистрации изменения сердцебиения и дыхания оказались более чувствительны к исследуемым токсикантам, чем метод биотестирования основанный на выживаемости рачков. Исследуемая реакция, основанная на регистрации всплытия рачков в поверхностный слой, оказалась более чувствительной к исследуемым токсикантам, чем названные биотесты, при этом техника постановки опытов проста и доступна для широкого применения. Глава 5. Специфичность реакции всплытия С1а<1осега в поверхностный слой на нефтепродукты

Компонентный состав сточных вод предприятий нефтехимической промышленности чрезвычайно разнообразен и зависит от профиля вырабатываемой продукции. В этой связи представлялось важным оценить влияние нефте-

продуктов в смесях с различными химическими соединениями на реакцию всплытия С1а<1осега в поверхностный слой.

Эксперименты показали, что различные фенолы, кислоты, щелочи, соли металлов, спирты, эфиры и биологические депрессанты (хлороформ, ацетон, четыреххлористый углерод и др.) всплытия рачков С1а<1осега в поверхностный слой не инициировали во всем диапазоне исследуемых концентраций.

Поверхностно-активные вещества, также как и другие исследованные токсиканты, не вызывали перехода ветвистоусых рачков в поверхностный слой. Вместе с тем, в смесях с нефтепродуктами они оказывали существенное влияние на реакцию всплытия дафний. Представленные в таблице 5.1 материалы показывают, что при наличии в опытных средах додецилсульфата натрия (ДСН) в концентрации 10'2 мл/л все дафнии были живы, всплытия рачков в поверхностный слой при этом не происходило. Присутствие ПАВ в концентрациях 10"3 мл/л заметно сказывалось на поведении тест-объектов: часть рачков переходило в поверхностный слой, другие активно плавали в толще инкубационных сред. Концентрация 10"4 мл/л ДСН не оказывала видимого воздействия на реакцию всплытия.

Таблица 5.1 - Влияние додецилсульфат натрия в смесях с нефтепродуктами на реакцию всплытия D. magna (в %) при 24-х часовой экспозиции

Нефтепродукты Концентрации (мл/л) вызывающие всплытие 50% рачков Додецилсульфат натрия, мл/л

10 10 10"4

дизельное топливо (летнее) (2,18±0,31)х10"8 -(+) 63,67±12,09 (+Т)

нефть (7,19±I,42)x10j6 38,51+7,31 (+Т) 54,16±9,73 (+Т)

мазут М-100 (3,22±0,59)х10"9 52,18±9,91 (+t) 68,92+13,78 (+f)

лигроин (7,12±1,36)х10"5 42,53±8,12 (+t) 61,84±11,13 (+Т)

Примечание: (-(+)) - рачки живы, плавают в толще опытных сред; (+Т) - рачки живы, находятся в поверхностном слое

Сходное действие на поведение Cladocera оказывали и другие использованные в опытах поверхностно-активные вещества (Tween-21, Tween-40, Triton Х-100): низкие концентрации ПАВ в смесях с нефтепродуктами не влияли на

проявление реакции всплытия ветвистоусых рачков в поверхностный слой, а высокие концентрации предотвращали исследуемую реакцию. Отметим, что в экспериментах использовали нетоксичные для тест-объектов концентрации ПАВ (при 24-х часах), и концентрации нефтепродуктов, в которых при суточной экспозиции фиксировали всплытие в поверхностный слой 50 % рачков.

Предложенный метод был использован при оценке качества природных сред на Ковыктинском газоконденсатном месторождении. При химическом определении нефтепродуктов в снеговой воде и почве во всех взятых пробах в районе буровой скважины 1071 КГКМ было зафиксировано наличие нефтепродуктов. Данные пробы не оказывали ингибирующего действия на гашение люминесценции светящихся бактерий и не вызывали гибели дафний (D. magna) при суточной экспозиции, но во всех пробах наблюдали всплытие рачков в поверхностный слой. Полученные данные подтверждают результаты химического анализа, т.е. наличие в пробах нефтепродуктов. С другой стороны водные вытяжки бурового шлама взятого с различных глубин скважины 1071, отличались высокой токсичностью для гидробионтов. При этом, в пробах не наблюдали всплытия дафний в поверхностный слой. Как показали данные химических анализов, в пробах нефтепродукты отсутствовали. Результаты анализа засоления бурового шлама показали, что концентрация солей в шламе очень высокая (от 290 до 440 г/кг сухого шлама). Очевидно, что токсичность опытных проб обусловлена именно высокими концентрациями NaCl. Анализ проб продемонстрировал возможности использования на практике предложенного способа обнаружения нефтяного загрязнения. Такой подход должен лишь предварять, а не исключать последующее использование признанных аналитических методов, особенно в тех случаях, когда результаты биотестирования оправдывают необходимость подключения сложных аналитических процедур. Глава 6. Возможные причины всплытия Cladocera в поверхностную пленку в присутствии нефтепродуктов

Для выявления возможных механизмов, лежащих в основе исследуемой реакции всплытия ветвистоусых рачков в поверхностный слой опытных сред содержащих нефть и нефтепродукты, была проведена серия экспериментов.

Нами было проверено, не связано ли всплытие С1ас1осега в поверхностный слой с возможным дефицитом кислорода, наступающим при образовании поверхностной пленки нефтепродуктов.

На обогащенной и обедненной кислородом воде готовили эмульсии дизельного топлива с концентрацией 10'7 мл/л. После приготовления эмульсий содержание кислорода составляло 10,8±1,4 мг/л и 2,9±0,5 мг/л соответственно. В результате, при суточной экспозиции наблюдали всплытие 50 % дафний в поверхностный слой и в насыщенной и в обедненной кислородом эмульсиях. Это убедительно свидетельствовало против того, что всплытие рачков в поверхностный слой может быть связано с недостатком кислорода.

Известно, что под толстым нефтяным сликом приток света может быть сокращен более, чем на 90 %, что резко снижает скорость фотосинтеза фитопланктона и может препятствовать ежедневной вертикальной миграции зоопланктона, регулируемой интенсивностью света (Миронов, 1985). Установлено, что изменение знака фототаксиса или прекращение реагирования на све! являются показателями функциональных нарушений у планктонных организмов под действием токсических веществ (Флеров, 1989). Поэтому возникал вопрос, не могло ли каким-то образом изменение характера освещенности и реакции фототаксиса, под действием нефтепродуктов, быть причиной всплытия С1ас1осега в поверхностный слой. Однако, при всех манипуляциях со светом (направление светового потока сверху, снизу, сбоку) и даже в полной темноте, в эмульсиях дизельного топлива с концентрацией 10"7 мл/л фиксировали всплытие 50 % тест-объектов в поверхностный слой. Таким образом, исследуемая реакция не зависела от интенсивности и характера освещения, и, следовательно, не может быть обусловлена влиянием нефтепродуктов на фототакси-ческую реакцию дафний.

Имеются сообщения, что в состав нефтепродуктов входят соединения, обладающие наркотическими свойствами (Currier, Peoples, 1954; Goldacre, 1968). Как показали наши эксперименты, в диапазоне концентраций 10 мл/л-10"10 мл/л вещества, обладающие наркотическими свойствами (хлороформ и четыреххлористый углерод), не инициировали всплытия D.magna в поверхностный слой при 24-х часовой экспозиции. Таким образом, исследуемую реакцию Cladocera нельзя объяснить наркотическим действием нефтепродуктов.

Известно, что представители зоопланктона способны захватывать мелкодисперсные частицы нефтепродуктов и накапливать их в концентрациях, многократно превышающих их содержание в окружающей среде (Авдеева, Миронова, 1981; Mackie et al., 1978; Spooner, Corkett, 1979).

Было высказано предположение, что обнаруженная нами реакция всплытия рачков в поверхностный слой, может быть связана с фактом накопления мелкодисперсных частиц нефтепродуктов и придания им, тем самым, дополнительной плавучести. Но как показали наши исследования, накопление люми-несцирующих капелек нефти происходило в жировых включениях рачков отряда Copepoda - Е. baicalensis, С. kolensis и Н. inopinata. Для Cladocera подобного эффекта мы не обнаружили. Принимая во внимание, что для веслоногих рачков реакции всплытия в поверхностный слой не наблюдали при действии как нефтепродуктов, так и нефтяных углеводородов, исследуемую нами реакцию нельзя объяснить фактом накопления тест-объектами частиц нефтепродуктов.

В ходе экспериментов возникло предположение, что исследуемая реакция может быть связана с хемотаксисом. В эксикаторы объемом 3 литра помещали сосуды объемом 100 мл с водой и 10 дафниями и сосуд с эмульсией дизельного топлива (концентрация 10 мл/л). При 24-х часовой экспозиции, во всех сосудах с водой, в которых отсутствовало дизельное топливо, наблюдали 100 % всплытие D.magna в поверхностный слой.

Следующий эксперимент ставили с эмульсией дизельного топлива (концентрация 10'7 мл/л) в двух сериях. В первой серии опыта, в пробирку наливали эмульсию и помещали 10 дафний, сосуд закрывали герметично крышкой, при этом воздушной фазы не было. В другом варианте в пробирке оставляли воздушную фазу. В результате, в первом случае рачки более суток жили в инкубационных средах и реакции всплытия не отмечали. Во втором варианте наблюдали всплытие тест-объектов в поверхностный слой.

В опытах применяли проточные установки парного выбора, которые представляли собой боксы размером 20x40 см с поперечной перегородкой, разделяющей каждый на два параллельных отсека. Установки были герметично закрыты крышками с наличием воздушной фазы над жидкостью. В отсеки раздельно подавали 2 потока жидкости: один поток с водой, другой поток с токсикантом (Флеров, 1989). При поступлении в один отсек воды, а в другой отсек эмульгированных нефтепродуктов (нефть, дизельное топливо, бензол и гексан в диапазоне концентраций 10"'-10"3 мл/л) тест-объекты переплывали из отсека с водой в отсек, содержащий эмульсию.

Анализируя полученные данные, можно отметить, что для возникновения исследуемой реакции всплытия Оаёосега в поверхностный слой необходимо наличие в опыте двух фаз - жидкой и воздушной. При этом необязателен непосредственный контакт нефтепродукта с тест-объектами, достаточно лишь наличие токсикантов в воздушной фазе. По всей вероятности всплытие ветви-стоусых рачков в поверхностный слой связано с наличием в воздушной среде летучих фракций нефтепродуктов, что позволяет использовать данный метод для обнаружения нефтяных углеводородов не только в водной среде, но и в воздухе. Перемещение дафний из отсеков с водой в отсеки с эмульсией нефтепродуктов в проточных камерах свидетельствует о хемотаксическом характере тест-реакции. Результаты всех выполненных нами экспериментов, с большой долей вероятности позволяют говорить о том, что рачков привлекают именно нефтепродукты, накапливающиеся на поверхности раздела вода-воздух.

Наблюдение в люминесцентном микроскопе показало, что тело дафний, перешедших в поверхностный слой, покрыто тонкой пленкой нефтепродуктов, а у рачков, извлеченных из толщи водной эмульсии, такая пленка отсутствует. Таким образом, невозможность ухода рачков из поверхностного слоя в толщу инкубационных сред обусловлена гидрофобизацией их покровных тканей углеводородами нефтяной пленки, которая в дальнейшем препятствует обратимости поведенческой реакции, т.е. переходу Cladocera с границы раздела фаз в толщу инкубационных сред.

Выводы:

1. Обнаружена и изучена реакция всплытия рачков отр. Cladocera в присутствии эмульсий нефтепродуктов, ароматических и алифатических углеводородов на границу раздела фаз жидкость-воздух и на основе этой реакции разработан новый высокочувствительный экспрессный и технически простой биологический метод обнаружения нефтяного загрязнения в природных средах.

2. Поведенческая реакция всплытия специфична только для нефтепродуктов. Тяжелые металлы, фенолы, спирты, эфиры, поверхностно-активные вещества и вещества обладающие наркотическими свойствами переход рачков в поверхностный слой не инициировали.

3. Показана специфичность реакции всплытия в зависимости от тест-объектов и их возраста. Изучаемый эффект наблюдался только для рачков отр. Cladocera (Daphnia magna, Daphnia pulex, Simocephalus vetulus, Bosmina longirostris, Ceri-odaphnia pulchella, Chydorus sphaericus). Для представителей отр. Copepoda (Cyclops kolensis, Epischura baicalensis, Harpacticella inopinata), отр. Podocopida (Heterocypris reptans), отр. Anostraca (Artemia salina) всплытия в поверхностный слой эмульсий нефтепродуктов не зафиксировано.

4. Чувствительность поведенческой реакции всплытия Cladocera для некоторых нефтепродуктов на 3-7 порядков выше, чем биотестов основанных на выживаемости рачков, а также изменении сердцебиения и дыхания.

5. Установлено, что чувствительность реакции всплытия, также как и теста по выживаемости, возрастала с увеличением температуры кипения фракций нефти и нефтепродуктов, а для ароматических и алифатических углеводородов и по мере увеличения их молекулярных масс.

6. Показано, что всплытие рачков в поверхностный слой не связано с дефицитом кислорода, наркотическим действием нефтепродуктов, реакцией фототаксиса, изменением поверхностного натяжения и аккумуляцией в организме нефтепродуктов.

7. Переход рачков в поверхностный слой под действием летучих фракций нефтепродуктов без непосредственного контакта организма с эмульсией, необходимость для его осуществления воздушной фазы и факт привлечения ветви-стоусых рачков эмльгированными нефтепродуктами в проточных камерах парного выбора свидетельствуют в пользу природы хемотаксического эффекта. Невозможность последующего ухода рачков из поверхностного слоя в толщу эмульсий связана с гидрофобизацией их покровных тканей углеводородами нефтяной пленки.

Основные публикации по теме диссертации

1. Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Стом Д.И., Лозовой Д.В. Реакция всплытия дафний при действии нефтепродуктов // Международная научно-практическая конференция «Человек-среда-вселенная»: Тез. докл., Иркутск, 16-20 июня 1997.-т. 1,- С. 37-38.

2. Лозовой Д.В., Баранская В.К., Саксонов М.Н. Влияние парафиновых углеводородов нефти на Daphnia magna // Научно-практическая конференция «Водные ресурсы Байкальского региона: проблемы формирования и использования на рубеже тысячелетий» Тез. докл., 6-9 октября 1998 г., Иркутск. - т. 2. - С.27.

3. Стом Д.И., Саксонов М.Н., Балаян А.Э., Потапов Д.С., Лозовой Д.В., Барха-това O.A., Горбунов В.В., Агапова A.B. Разработка новых методов биотестиро-

вания нефтепродуктов //1 съезд токсикологов России: Тез. докл., 17-20 ноября 1998 г. - Москва. - С. 320.

4. Лозовой Д.В., Стом Д.И., Балаян А.Э. Саксонов М.Н., Баранская В.К. Перспективный метод биотестирования нефтяного загрязнения // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 1998.-№2(8).-С. 137-139.

5. Лозовой Д.В., Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Стом Д.И. Влияние детергентов на реакцию биотестирования нефтепродуктов с помощью Cladocera // Между-нар. науч.-практ. конф.: Экология речных бассейнов. - Тез. докл. - Владимир: Владимиринформэкоцентр, 1999. - С. 92.

6. Лозовой Д.В., Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Стом Д.И. Daphnia magna как тест-объект при оценке токсичности нефтяного загрязнения // Проблемы систематики, экологии и токсикологии беспозвоночных: сборник статей. - Иркутск, 2000. - С. 104-107.

7. Balayan А.Е., Saxonov M.N., Stom D. I., Polovitkin V.P., Lozovoy D.V. Method of biotesting of oil pollution based on behavior of Daphnia magna // Program and Proceedings of the International Symposium on Ecotechnology in Environmental Protection and Fresh Water Lake Management, october 17-20, 2000. - Natural Science Auditorium, PaiChai University, 2000. - P. 254.

8. Лозовой Д.В. Биотестирование нефтепродуктов с помощью ракообразных // Безопасность биосферы: Сборник тезисов докладов. - Екатеринбург: УГТУ-УПИ, 2000-С. 108.

9. Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Стом Д.И., Лозовой Д.В., Стом А.Д. Выбор тест-объекта при биотестировании нефтепродуктов // Биоразнообразие Байкальского региона; Труды биол.-почв. факультета ИГУ. - Иркутск: ИГУ, 2001. - Вып.4. — С. 9-12.

10. Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Стом Д.И., Лозовой Д.В., Стом А.Д. Действие нефтепродуктов и поверхностно-активных веществ на Daphnia magna // Биоразнообразие Байкальского региона; Труды биолого - почв, факультета ИГУ. -Иркутск: ИГУ, 2001. - Вып.4. - С. 19-23.

11. Лозовой Д.В. Оценка токсичности эмульсий нефтепродуктов на разновозрастных Daphnia magna // 5 Международная конференция "Природные условия, история и культура Западной Монголии и сопредельных регионов": 20-24 сентября 2001 г. г. Ховд, МНР. - С. 46-47.

Подписано к печати 19.05.2003 г. Объем 1 п.л. Тираж 120 экз. Заказ № 227 Издательство Института географии СО РАН, 664033, Иркутск, ул. Улан-Баторская, 1 Институт географии СО РАН, 2003 г.

í

I í,

i

I

I

I

I ■

* i

I

J

í ¡

t

•^365

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лозовой, Дмитрий Викторович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Нефть и нефтепродукты как приоритетные загрязнители гидросферы

1.2. Опасность дгя гидробионтов нефтяного загрязнения

1.3. Биотестирование как метод оценки состояния окружающей среды

1.4. Использование поведенческих реакций в водной токсикологии

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследований

2.2. Используемые вещества

2.3. Методы исследований

2.3.1. Метод биотестирования основанный на регистрации выживаемости тест-объектов

2.3.2. Метод биотестирования основанный на регистрации изменения сердечного и дыхательного ритмов

2.3.3. Оценка токсичности анализируемых проб основанная на регистрации реакции всплытия

2.3.4. Оценка влияния химических соединений различных классов на D. magna

2.3.5. Оценка отношения D. magna к содержанию кислорода

2.3.6. Прочие методы использованные в работе

2.3.7. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. Новая высокочувствительная тест-реакция ракообразных отряда Cladocera на нефтепродукты

ГЛАВА 4. Сопоставление чувствительности перехода рачков в поверхностный слой с другими критериями интоксикации Cladocera

ГЛАВА 5. Специфичность реакции всплытия Cladocera в поверхностный слой на нефтепродукты

ГЛАВА 6. Возможные причины всплытия Cladocera в поверхностную пленку в присутствии нефтепродуктов

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологический способ обнаружения нефтяного загрязнения в водных средах"

Актуальность проблемы. Глобальное загрязнение окружающей среды и неблагополучная экологическая ситуация в промышленных регионах обуславливают необходимость постоянного контроля (мониторинга) за загрязнением воздуха, качеством питьевой воды и накоплением токсичных химических веществ в почве и растительности (Другов, Родин, 2002). На сегодняшний день загрязнение окружающей среды токсикантами становится таким же экологическим фактором как свет, температура и Т.д.

К числу наиболее распространенных и опасных загрязнителей природной среды относятся нефть и получаемые из нее продукты (The ecological impacts., 1997; Паренаго, Давыдова, 1999). Этот тип загрязняющих веществ, как никакой другой, имеет поистине глобальное распространение (Beswick, 1996). Ни один другой загрязнитель не может сравниться с нефтью по широте распространения, количеству источников загрязнения, уровням химических нагрузок на все компоненты ландшафтов при авариях скважин, нефтепроводов и других технических, объектов, связанных с добычей, транспортировкой, переработкой и хранением нефти (Гурвич, 1997). Загрязнение природной среды нефтяными углеводородами - одна из сложных и многоплановых проблем экологии.

Контроль за загрязнением воздуха, воды и почвы вредными химическими веществами, в том числе и нефтепродуктами, основан на сравнении результатов измерения их содержаний в объектах окружающей среды с предельно допустимыми концентрациями (ПДК) этих веществ (Другов, Родин, 2000). Для нормирования содержаний вредных веществ (установления, разработки ПДК) используются результаты токсикологического эксперимента с животными, расчетные методы и прогнозирование величин ПДК по аналогии с ПДК для родственных по химическим и токсикологическим свойствам соединений с учетом величин ПДК для конкретных химических соединений, принятых в других странах. В России величины ПДК постоянно изменяются - в основном в сторону снижения (ужесточения нормативов).

В России нормировано для воздуха, воды и почвы несколько тысяч токсичных соединений (Контроль химических и биологических., 1998). При этом ежегодно внедряется в промышленность, сельское хозяйство и сферу быта несколько тысяч новых химических веществ. Данные Международного регистра потенциально токсичных химических веществ (МРПТХВ) за 90-е годы XX столетия свидетельствуют о существовании более 4 млн. химических соединений. Поэтому традиционный подход к выполнению санитарно-химических измерений (определение индивидуальных соединений с помощью официальных методик) является далеко не оптимальным: во-первых, такие анализы дороги и длительны (процесс разработки ПДК занимает более 1 года); во-вторых, большинство стандартных (официальных) методик не позволяет получить достоверные результаты при анализе реальных смесей загрязнителей; в-третьих, нет смысла определять по существующим методикам отдельные индивидуальные компоненты, когда в анализируемой смеси загрязнителей присутствует еще по крайней мере несколько десятков подобных веществ, которые нужно также определять в искомом объекте (Мазаев, Подлепа, Сот-сков и др., 1999).

Сегодня оценка загрязнения окружающей среды нефтепродуктами, впрочем, как и другими токсическими веществами, производится, преимущественно, на основе результатов экоаналитических анализов (Жмур, 1997). Экологическая аналитическая химия использует методики, основанные на хроматографии (ГХ, ВЭЖХ, ИХ, ТСХ), спектроскопии (эмиссионный спектральный анализ, атомная абсорбция, атомная флуоресценция, спектрофотометрия в УФ- и ИК-области спектра, люминесценция, масс-спектрометрия, ядерный магнитный резонанс и др.) и электрохимических методов анализа (полярография и вольтамперометрия, потенциометрия, кулонометрия и кондуктометрия). Также находят широкое применение гибридные методы и их комбинации (ГХ/МС, ГХ/ИК-Фурье, ВЭЖХ/МС, ВЭЖХ/ГХ, ГХ/ТСХ, ГХ/МС/ИК-Фурье, ВЭЖХ/МС/ИК-Фурье, ГХ/МС/ИК/АЭД и др.). Вместе с тем, аналитическая процедура определения загрязняющих веществ длительна и дорогостояща, требующая наличия высококвалифицированного персонала и современной аналитической аппаратуры. Во-первых, все этапы процедуры, от пробоотбора и концентрирования микропримесей до детектирования и идентификации целевых компонентов и метрологической оценки результатов измерений осуществляются в специальных хорошо оснащенных химических лабораториях (Карасек, Клемент, 1993; Спектральный анализ., 1994; Столяров и др., 1998; Гейсс, 1999; Сониясси, Сандра, Шлетт, 2000). Во-вторых, надежная идентификация целевых компонентов в сложных смесях загрязнителей различной природы и токсичности, возможна лишь при одновременном использовании трех-четырех независимых методов (Кунце, Шведт, 1997; Ермаченко, 1997; Другов, Родин, 1999; Золотов, Дорохова, Фадеева, 1999). Тщательный и корректный (доказательный) анализ нужен во всех тех случаях, когда сложившаяся ситуация может угрожать здоровью людей или нанести вред животным и окружающей среде (Майстренко, Хамитов, Буд-ников, 1996). И, наконец, в последние годы все чаще возникают ситуации, связанные с необходимостью выполнения быстрого анализа сложных смесей токсичных химических соединений неизвестного или частично известного состава.

В настоящее время все больше исследователей приходят к выводу, что переход к более надежному экологическому контролю состояния окружающей среды возможен только при обязательном использовании методов биотестирования (Сидоров, Немова, 1997; Зарубин, Цветков, 1997; Брагинский, 1998; Тягненко, Володина, Полякова и др., 1998; Дятлов, 2000; Mancha, Diaz, Arese, 1997; Rosso-Darment, Rebillard, Lafont, 1998; Rudneva-Titova, 1998). Биологические методы, характеризующие качество природной среды как среды обитания, уже зарекомендовали себя как достаточно информативные, позволяющие дать интегральную оценку влияния комплекса ингредиентов и факторов на организмы (Брагинский, 1993; Жмур, 1997; Чесалина, Руднева, 1998; Егоров, Зарипова, Арсентьева и др., 1998; Domal-Kwiatkowska et al., 1994; Neff Jerry, Burns William, 1996; Tisler Tatjana, Zagorc-Koncan Jana, 1999; Barron et al., 1999). Оперативная интегральная оценка качества воды, почвы и атмосферы методами биотестирования не заменяет химический анализ, но дополняет и предваряет его, благодаря экспрессности, простоте и невысокой стоимости методов биотестирования.

Метод биотестирования основанный на выживаемости ветвистоусых рачков рода Daphnia является одним из наиболее применяемых в водной токсикологии (Филенко, Дмитриева, Исакова и др., 1991; Сазонова, Пань-кина, 1998; Туманов, Постнов, 1998; Исакова, Юклеевских, 1998; Степанов, Зобов, Петрова и др., 1999; Baird et al., 1991; Gaete Hernan, Paredes Karina, 1996; Penttinen, Kostamo, Kukkonen, 1998; Rojiikov, Marsalek, Hol-oubek, 1998). Это обусловлено тем, что дафнии широко распространены в природе, легко культивируются и обладают высокой чувствительностью к токсикантам различной природы. Биотест входит в большинство национальны х и международных стандартов исследования качества вод и имеет ряд директивных документов по применению в практике биологического тестирования (Методическое руководство., 1991; ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.52000).

Вместе с тем, как показали наши исследования, в острых опытах чувствительность дафний к нефтегенным загрязнителям, при использовании гибели как тест-реакции, явно недостаточна для оперативного контроля нефтяного загрязнения (Лозовой, Стом, Балаян и др., 1998; Balayan, Saxonov, Stom et al., 2000; Лозовой, 2000; Лозовой, Балаян, Саксонов и др., 2001). Другие существующие на сегодняшний день методы биологической оценки, также позволяют выявлять лишь относительно высокие концентрации нефтепродуктов в природных средах (Котов, 1995; Седых, Игнатьев, Семенюк, 1998; Егорова, Зарипова, Арсентьева и др., 1998; Лозовой, Балаян, Саксонов и др., 2000; Руднева, Чесалина, Кузьминова, 2000; Саксонов, Балаян, Стом, 2001; Балаян, Стом, 2001; Wirth, 1998). В связи с этим поиски перспективных биологических методов, позволяющих в достаточно короткий промежуток времени обнаружить наличие нефтегенного загрязнения являются весьма актуальными.

Цель и задачи исследований. Основная цель настоящей работы -разработать на основе дафний новый экспрессный и высокочувствительный метод обнаружения нефтяного загрязнения в природных средах. Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

1. Предложить экспрессный, надежный и информативный метод обнаружения нефтепродуктов и их ингредиентов с использованием дафний.

2. Сопоставить чувствительность тест-реакции на различных видах ракообразных и разновозрастных Cladocera к нефтепродуктам.

3. Провести сравнительную оценку чувствительности к нефтепродуктам известных методов и предлагаемого биотеста.

4. Выяснить степень специфичности найденного теста для нефтепродуктов. Изучить вероятную взаимосвязь между строением и свойствами нефтепродуктов и чувствительностью предлагаемого биотеста.

5. Изучить возможность использования предлагаемой тест-реакции для биологического контроля сред содержащих нефтепродукты в присутствии загрязнителей других классов.

6. Исследовать возможные механизмы предлагаемой тест-реакции.

7. Оценить перспективы, ограничения и выдать рекомендации по использованию разработанного биотеста для биотестирования нефтезагрязнен-ных субстратов.

Научная новизна. В результате выполнения поставленных задач была обнаружена и изучена новая высокочувствительная и экспрессная тест-реакция Cladocera - всплытие рачков на поверхность раздела водная среда - воздух в присутствии нефти и нефтепродуктов. Показано, что данная реакция не инициируется фенолами, солями тяжелых металлов, спиртами, зфирами, поверхносг ю-активными веществами и биологическими депрессантами. Установлено, что поведенческая реакция характерна для ракообразных отряда Cladocera (Daphnia magna, Daphnia pulex, Ceriodaph-nia pulchella, Bosmina longirostris, Simocephalus vetulus, Chydorus sphaeri-cus). Для рачков отряда Copepoda (Epischura baicalensis, Cyclops kolensis, Harpacticella inopinata), отряда Anostraca (Artemia salina) и отряда Podo-copida (Heterocypris reptans) всплытия в поверхностный слой не зафиксировано. В процессе работы сопоставлена токсичность нефти, нефтепродуктов, алифатических и ароматических углеводородов в отсутствие и присутствии других соединений различных классов на 8 видах ракообразных. Изучена взаимосвязь между различными физико-химическими характеристиками данных нефтепродуктов и токсичностью. Выявлено, что токсический эффект нефтепродуктов повышался по мере увеличения их температур кипения, а у нефтяных углеводородов также и по мере нарастания молекулярных масс. Изучены возможные механизмы, обуславливающие всплытие и последующую иммобилизацию дафний под влиянием нефтепродуктов. Показано, что всплытие тест-объектов в поверхностный слой не связано с дефицитом кислорода, наркотическим действием нефтепродуктов, реакцией фототаксиса и аккумуляцией в организме мелкодисперсных частиц нефтепродуктов. Отмечена высокая роль хемотаксиса в возникновении исследуемой реакции.

Практическое значение работы. Предложенная новая экспрессная и высокочувствительная тест-реакция позволяет выявлять низкие концентрации нефтепродуктов, в том числе в присутствии в опытных пробах и других химических соединений различных классов, за исключением высоких концентраций поверхностно-активных веществ. Сравнение чувствительности предложенной тест-реакции и известных биотестов позволило предложить ее в качестве высокочувствительного биологического метода для экспрессного обнаружения нефтяного загрязнения природных объектов. Результаты работы включены в отчеты лаборатории водной токсикологии НИИ биологии при ИГУ по госбюджетной теме 1999 г., по хоздоговору 2000 г. выполненному по заданию компании "РУСИА-Петролеум", по грантам РФФИ (№ 99-04-49612) и Интеграция (№ 54-275-15). Они используются в учебном процессе для чтения курсов лекций на биологическом факультете ИГУ («Санитарная гидробиология», «Водная токсикология» и др.). Разработанный метод защищен патентом № 2152612 от 10.07.2000.

Апробация работы. Материалы диссертации представлялись на региональном научно-техническом совещании «Решение проблем охраны окружающей среды и рационального использования ресурсов в Иркутской энергосистеме» (Иркутск, 1996); Международной научно-практической конференции «Человек - среда - вселенная» (Иркутск, 1997); Юбилейной конференции «Современные проблемы экологии, природопользования и ресурсосбережения Прибайкалья» (Иркутск, 1998); 1 съезде токсикологов (Москва, 1998); Международной научно-практической конференции «Экология речных бассейнов» (Владимир, 1999); Международной научно-практической конференции "Экология. Образование. Здоровье" (Иркутск,

2000); 4 Всероссийском научном молодежном симпозиуме "Безопасность биосферы" (Екатеринбург, 2000); Международном симпозиуме по защите окружающей среды (Корея, 2000); 5 Международной конференции "Природные условия, история и культура Западной Монголии и сопредельных регионов" (Ховд, MP, 2001); Научной конференции "Природные ресурсы Забайкалья и проблемы природопользования" (Чита, 2001); Молодежной научной школе "Нефть и газ в современном мире: геолого-экономические и социально-культурные аспекты" (Иркутск, 2001); Международной научно-практической конференции "Почва как связующее звено функционирования природных и антропогенно-преобразованных экосистем" (Иркутск,

2001).

Заключение Диссертация по теме "Экология", Лозовой, Дмитрий Викторович

Выводы:

1. Обнаружена и изучена реакция всплытия рачков отр. Cladocera в присутствии эмульсий нефтепродуктов, ароматических и алифатических углеводородов на границу раздела фаз жидкость-воздух и на основе этой реакции разработан новый высокочувствительный экспрессный и технически простой биологический метод обнаружения нефтяного загрязнения в природных средах.

2. Поведенческая реакция всплытия специфична только для нефтепродуктов. Тяжелые металлы, фенолы, спирты, эфиры, поверхностно-активные вещества и вещества обладающие наркотическими свойствами переход рачков в поверхностный слой не инициировали.

3. Показана специфичность реакции всплытия в зависимости от тест-объектов и их возраста. Изучаемый эффект наблюдался только для рачков отр. Cladocera (Daphnia magna, Daphnia pulex, Simocephalus vetulus, Bosmina longirostris, Ceriodaphnia pulchella, Chydorus sphaericus). Для представителей отр. Copepoda (Cyclops kolensis, Epischura baicalensis, Harpacticella inopinata), отр. Podocopida (Heterocypris reptans), отр. Anostraca (Artemia salina) всплытия в поверхностный слой эмульсий нефтепродуктов не зафиксировано.

4. Чувствительность поведенческой реакции всплытия Cladocera для некоторых нефтепродуктов на 3-7 порядков выше, чем биотестов основанных на выживаемости рачков, а также изменении сердцебиения и дыхания.

5. Установлено, что чувствительность реакции всплытия, также как и теста по выживаемости, возрастала с увеличением температуры кипения фракций нефти и нефтепродуктов, а для ароматических и алифатических углеводородов и по мере увеличения их молекулярных масс.

6. Показано, что всплытие рачков в поверхностный слой не связано с дефицитом кислорода, наркотическим действием нефтепродуктов, реакцией фототаксиса, изменением поверхностного натяжения и аккумуляцией в организме нефтепродуктов.

7. Переход рачков в поверхностный слой под действием летучих фракций нефтепродуктов без непосредственного контакта организма с эмульсией, необходимость для его осуществления воздушной фазы и факт привлечения ветвистоусых рачков эмльгированными нефтепродуктами в проточных камерах парного выбора свидетельствуют в пользу природы хемотак-сического эффекта. Невозможность последующего ухода рачков из поверхностного слоя в толщу эмульсий связана с гидрофобизацией их покровных тканей углеводородами нефтяной пленки.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лозовой, Дмитрий Викторович, Иркутск

1. Авдеева С.У., Миронова Т.О. О накоплении нефти Acartia clausi // Биологические науки, 1981, № 1. С. 49 - 51.

2. Алексеев В.Р. Роль качественных и количественных фотопериодических реакций в жизнедеятельности ракообразных. В кн.: Гидробиологические исследования морских и пресных вод. - JT., 1988. - С. 99 - 107.

3. Алексеев В.А., Флеров Б.А. Реакция избегания токсических растворов фенола у некоторых водных насекомых и паукообразных // Биология внутренних вод: Информ. бюл. J1., 1972. № 14. - С. 32 - 35.

4. Алексюк В.А., Крохалевская Н.Г., Семенова Л.А. Экологическая характеристика зоопланктона в сорах Нижней Оби // Результаты рыбохо-зяйственных исследований на водоемах Западной Сибири, JL: ГосНИ-ОРХ НПО "Промрыбвод", 1984. Вып. 214. - С. 63 - 76.

5. Алякринская И.О. Биохимические предпосылки высокой выживаемости мидий. В кн.: Промысловые двустворчатые моллюски - мидии и их роль. - Л.: Наука, 1979. - С. 12 - 13.

6. Алякринская И.О. О поведении и фильтрационной способности черноморских мидий в воде, загрязненной нефтью // Зоол. журн., 1966. Т. 45,-№7.-С. 998.

7. Балаян А.Э., Стом Д.И. Губки как токсикологический объект /У Гидробиологический журнал, 2001. № 6. - С. 58 - 63.

8. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Л.: Медгиз, 1963. - 152 с.

9. Белоиваненко В.И., Миронов О.Г. Скорость диффузии кислорода через поверхность в присутствии нефтяных пленок // Водные ресурсы, 1979. -Ко 6. -С. 127- 131.

10. Богатова И.Б., Шмакова З.И. Активация диапаузирующих яиц Arte-mia salina L. // Гидробиол. журн., 1980. 6, № 3. - С. 108 - 110.

11. Богданов В.Д. Выклев и скат личинок сиговых рыб уральских притоков Нижней Оби. В кн.: Биология и экология гидробионтов экосистемы Нижней Оби. - Свердловск: УНЦ АН СССР, 1983. - С. 55 - 79.

12. Богданова Е.Н. Зоопланктон Северной Сосьвы. В кн.: Биология и экология гидробионтов экосистемы Нижней Оби. - Свердловск: УНЦ АН СССР, 1983.-С. 18-30.

13. Бочаров Ю.С. Некоторые вопросы токсикологии ранних этапов онтогенеза животных // Журн. общей биологии, 1975. Т. 36, № 6. - С. 847 - 858.

14. Брагинский Л.П. Интегральная токсичность водной среды и ее оценка с помощь методов биотестирования // Гидробиол. журн., 1993. 29. -№ 6.-С. 66 - 73.

15. Брагинский Л.П. Пестициды и жизнь водоемов. Киев: Наук, думка, 1972.-226 с.

16. Брагинский Л.П. Принципы классификации и некоторые механизмы структурно-функциональных перестроек пресноводных экосистем в условиях антропогенного стресса // Гидробиол. журнал, 1998. 34, № 6. -С. 72 -95.

17. Брагинский Л.П., Величко И.М., Щербань Э.П. Пресноводный планктон в токсической среде. Киев: Наук, думка, 1987. - 180 с.

18. Брагинский Л.П., Комаровский Ф.Я., Щербань Э.П., Линник П.Н., Осипов Л.Ф. Эколого-токсикологическая ситуация в водной среде // Гидробиол. журн., 1989. 25, № 6,- С. 91 - 101.

19. Вернадский В.И. Химическая природа биосферы Земли и ее окружения. М.: Наука, 1965. - 374 с.

20. Волков И.В., Заличева А.Н., Каймина Н.В. и др. Региональные особенности токсикорезистентности гидробионтов // Гидробиол. журн., 1992.-28, №3,-С. 69-71.

21. Ворошилова А.А., Дианова Е.В. Бактериальное окисление нефти и ее миграция в природных водах. Рукопись деп. в ВИНИТИ, № 5217-63. -1998.-31 с.

22. Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии. пер. с англ. / Под ред. Березкина В.Г. - М., 1999.-Т. 1,405 С. - Т. 2. - С. 348.

23. Гольдберг В.М., Зверев В.П., Арбузов А.И. Техногенное загрязнение природных вод углеводородами и его экологическое последствие. М.: Наука, 2001.-125 с.

24. Грушко Я.М., Кожова О.М., Мамонтова Л.М. Токсические вещества в сточных водах нефтехимических предприятий и их влияние на гидробионтов (Обзор) // Гидробиол. журн., 1978. 14, № 2. - С. 55 - 60.

25. Гурвич JI.M. Методы предотвращения загрязнения гидросферы неф-тесодержащими сточными водами // Химия и технология воды, 1990. -12, № 10.-С. 21 -34.

26. Гурвич JT.M. Нефтяное загрязнение гидросферы: источники поступления, формы нахождения, методы и технические средства предотвращения: автореф. дис. . докт. техн. наук. Москва, 1997. -38 с.

27. Гурвич JI.M. Формы миграции нефтяных углеводородов в Балтийском море. В кн.: Геологическая история и геохимия Балтийского моря. - М.: Наука, 1984. - С. 157 - 165.

28. Гусейнов Т.И., Алекперов Р.Э. Охрана природы при освоении морских нефтегазовых месторождений. М.: Недра, 1989. - 230 с.

29. Дианова Е.В. О бактериальном окислении нефти и ее миграции в природных водоемах // Микробиология, 1994. 18, вып. 3. - С. 203 -210.

30. Дивавин И.А. О различной чувствительности к нефтяному загрязнению фракций ДНК Polysiphonia ораса. В кн.: Биологическая продуктивность южных морей. - Киев: Наукова думка, 1974. - С. 291 - 297.

31. Другов Ю.С., Родин А.А. Газохроматографическая идентификация загрязнений воздуха, воды и почвы. Санкт-Петербург: «ТЕЗА», 1999. -623 с.

32. Другов Ю.С., Родин А.А. Пробоподготовка в экологическом анализе. Практ-е руководство. Санкт-Петербург:«Анатолия», 2002. - 750 с.

33. Другов Ю.С., Родин А.А. Экологическая аналитическая химия. С.Петербург, 2002. - 464 с.

34. Другов Ю.С., Родин А.А. Экологические анализы при разливах нефти и нефтепродуктов. Практическое руководство. Санкт-Петербург: «Анатолия», 2000. - 250 с.

35. Дудоров П. Токсикологические тесты при регулировании сброса сточных вод. В кн.: Влияние загрязняющих веществ на гидробионтов и экосистемы водоемов. - JL: Наука, 1979. С. 213 - 221.

36. Дятлов С.Е. Роль и место биотестирования в комплексном мониторинге загрязнения морской среды. В кн.: Экология моря, 2000. - Вып. 51.-С. 83 - 87.

37. Егорова К.В., Зарипова С.К., Арсентьева А.П. и др. Оценка токсичности нефтепромысловых сточных вод. Казань: Гос. ун-т, 1998. - 12 с.

38. Ермаченко JI.A. Атомно-абсорбционный анализ в санитарно-гигиенических исследованиях. М.: 1997. - 207 с.

39. Жмур Н.С. Государственный и производственный контроль токсичности вод методами биотестирования в России. М.: Международный Дом Сотрудничества, 1997. - 117 с.

40. Зарубин С.Л., Цветков И.Л. Принципы выбора тест-объекта и тест-показателя при биоиндикации и биотестировании сточных и природных вод. В кн.: Биол. исслед. в Ярослав, гос. ун-те: Юбил. сб. тез. конф., 29 нояб., 1996. - Ярославль, 1997. - С. 62 - 65.

41. Земенков Ю.Д., Кутузова Т.Т., Коваленко Н.П. Повышение экологической безопасности при эксплуатации нефтепроводов Западной Сибири // Изв. вузов. Нефть и газ, 1997. № 5. - С. 85 - 88.

42. Зенин А.А., Белоусов Н.В. Гидрохимический словарь. JL, 1988. -240 с.

43. Золотов Ю.А., Дорохова Е.Н., Фадеева В.И. и др. Основы аналитической химии (в 2-х книгах). - Издание 2-е, пер. и допол. - Ред. Золотов Ю.А. - М.: Высшая школа, 1999. - 845 с.

44. Иванов Н.В. Новые экологические проблемы и их решения на нефтепромыслах // Нефт. х-во, 1998. № 2. - С. 66 - 68.

45. Исакова Е.Ф., Колосова JI.B. Метод биотестирования с использованием дафний. В кн.: Обобщенные показатели качества вод. - Черноголовка, 1988.-С. 50 - 57.

46. Исакова Е.Ф., Юклеевских М.Ю. Сезонные изменения резистентности лабораторной культуры Daphnia magna (Straus) к бихромату калия // Биол. внутр. вод, 1998. № 3. - С. 76 - 82.

47. Карасек Ф., Клемент Р. Введение в хромато-масс-спектрометрию.-Пер. с англ. М.: Мир, 1993. - 240 с.

48. Кожова О.М. Введение в гидробиологию: Учеб. пособие. Красноярск: Изд-во Краснояр. ун-та, 1987. - 244 с.

49. Колупаев Б.И. Метод биотестирования по изменению дыхания и сердечной деятельности у дафний. В кн.: Методы биотестирования вод. - Черноголовка, 1988. - С. 103 - 104.

50. Колупаев Б.И., Андреев А.А., Самойленко Ю.К. Оптический метод регистрации сердечного ритма у дафний // Гидробиол. журн., 1977. 13, №3. - С. 93-94.

51. Колупаев Б.И., Покацкая B.C. Влияние 2,4-динитрофенола и хлорофоса на дыхание и сердцебиение дафний. В кн.: Экспериментальная водная токсикология. - Рига: Зинатне, 1981. - Вып. 7. - С. 112-115.

52. Контроль химических и биологических параметров окружающей среды / Ред. Исаев Л.К. Санкт-Петербург: «Крисмас+», 1998. - 851 с.

53. Кормак Д. Борьба с загрязнением моря нефтью и химическими веществами / Пер. с англ. М.: Транспорт, 1989. С. 365.

54. Королева A.M. Изменение численности зоопланктона под влиянием нефтяного загрязнения и диспергентов. В кн.: Вестник МГУ. Сер. биол. - М.:МГУ, 1977.-№ 1,-С. 30-33.

55. Котов A.M. Изменение некоторых морфологических показателей крови у черноморской смариды, ласкиря и морского языка в сезонном аспекте при отравлении растворенными нефтепродуктами // Гидробиол. журн., 1995. 12, № 4. - С. 63 - 68.

56. Кравченко М.С., Собина Н.А. Аналитический контроль природных и сточных вод. В кн.: Проблемы и перспективы: Тезисы докл. 1 республиканской конференции по аналитической химии, Киев, 16-18 октября 1979 г. - Киев, 1979. - С. 86 - 87.

57. Крайнюкова А.Н. Биотестирование в охране вод от загрязнения. В кн.: Методы биотестирования вод. - Черноголовка, 1988. - С. 4 - 15.

58. Крайнюкова А.Н. Биотестирование в системе оценки и контроля источников токсического загрязнения водной среды: Автореф. дис. . докт. биол. наук. Купавна, 1991. - 39 с.

59. Крайнюкова А.Н., Вальтер Г.А., Антонов С.В., Катриченко Г.Н. Метод биотестирования сточных вод по реакции ухода рыб из токсичной среды. В кн.: Методы биотестирования вод. - Черноголовка, 1988. - С. 66 - 68.

60. Кривцова О.Т., Островский С.В. Влияние севина, метатиона и ДНОК на некоторых ракообразных. В кн.: Фауна, экология и физиология животных. - Кишинев: Штиинца, 1980. - С. 67 - 80.

61. Кузьменко М.И. К совершенствованию понятий и терминов, отражающих загрязнение природных вод // Гидробиол. журн., 1991. 27, № З.-С. 99-102.

62. Кунце У., Шведт Г. Основы качественного и количественного анализа. / Пер. с нем. М.: Мир, 1997. - 424 с.

63. Ланская JI.A. Культивирование водорослей. В кн.: Экологическая физиология морских планктонных водорослей. - Киев: Наукова думка, 1971.-С.5-21.

64. Лапкина Л.Н., Флеров Б.А., Чалова И.В., Яковлева И.И. Использование поведенческих реакций молоди пиявки Hirudo medicinalis для биотестирования. В кн.: Вопросы сравнительной физиологии и водной токсикологии. - Ярославль, 1987. - С. 11 - 17.

65. Лелеко Т.И. Особенности зоопланктонных сообществ Обской губы. В кн.: Географические проблемы изучения и освоения Арктических морей. - Л.: Изд-во АН СССР, 1985. - С. 100-101.

66. Лесников Л. А., Исакова Е. Ф., Колосова Л. В. Методические рекомендации, по установлению предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов. М.: ВНИИРО, 1986,- С. 34 -48.

67. Литвиненко В.И., Варфоломеев В.Г. Интенсификация очистки сточных вод нефтяных промыслов // Нефт. х-во, 1998. № 1. - С. 49 - 51.

68. Лозовой Д.В. Биотестирование нефтяного загрязнения. В кн.: Материалы международной конференции "Экология. Образование. Здоровье". - Иркутск: ИГУ, 2000. - С. 175 - 176.

69. Лозовой Д.В., Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Стом Д.И. Daphnia magna как тест-объект при оценке токсичности нефтяного загрязнения.

70. В кн.: Проблемы систематики, экологии и токсикологии беспозвоночных. Иркутск: ИГУ, 2000. - С. 104 - 107.

71. Лозовой Д.В., Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Стом Д.И. Роль ракообразных в биотестировании нефтяного загрязнения. В кн.: Природные ресурсы Забайкалья и проблемы природопользования: Тезисы н. конф., Чита, 10-15 сентября 2001. Чита, 2001. - 464 с.

72. Лозовой Д.В., Стом Д.И., Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Баранская В.К. Перспективный метод биотестирования нефтяного загрязнения // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН, 1998. N 2(8). - С. 137 - 139.

73. Лукьяненко В.И. Общая ихтиотоксикология. М., 1983. - 319 с.

74. Лукьяненко В.И. Физиолого-биохимические аспекты водной токсикологии. В кн.: Влияние загрязняющих веществ на гидробионтов и экосистемы водоемов. - Л., 1979. - С. 49 - 56.

75. Мазаев В.Т., Подлепа С.А., Сотсков Ю.П., Хромченко Я.Л. О создании единой структуры и формы перечня нормируемых химических веществ в водных средах // Стандарты и качество, 1999. № 5. - С. 43-46.

76. Мазманиди М.Д. Экология рыб Чёрного моря и нефть. Батуми, 1997.-147 с.

77. Майстренко В.Н., Хамитов Р.З., Будников Г.К. Эколого-аналитический мониторинг супертоксикантов. М.: Химия, 1996. - 319 с.

78. Мак Интайр А.Д. Успехи в изучении эффектов загрязнения морской среды. - В кн.: Комплексный глобальный мониторинг загрязнения окружающей природной среды. - Л., 1990. - С. 120 - 130.

79. Макаренко П.П. Комплексное решение проблем развития газодобывающего региона. М.: Недра, 1996. - 321 с.

80. Максимов В.Н. Проблемы комплексной оценки качества природных вод (экологические аспекты) // Гидробиол. журнал, 1991. Т. 27. - № 3. - С. 8- 13.

81. Матимов Г.Г., Шпарковский И.А. Муравейко В.М. Анализ токсичности буровых растворов, применяемых при поисково-оценочных работах на шельфе арктических морей // Докл. РАН, 1998. 361, № 6. - С. 849 - 852.

82. Методика определения токсичности воды по смертности и изменению плодовитости дафний // ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.5-2000. М., 2000. - 35 с.

83. Методические рекомендации по установлению предельно допустимых концентраций загрязняющих веществ для воды рыбохозяйственных водоемов. М.: ВНИРО, 1986. - 88 с.

84. Методические указания по установлению предельно допустимых концентраций вредных веществ для рыбохозяйственных водоемов и дополнительных характеристик, нужных для расчета ПДС. Л.: ГосНИ-ОРХ, 1989.-51 с.

85. Методическое руководство по биотестированию воды. РД 118-0290. - М., 1991.-48 с.

86. Миловидова Н.Ю. Перспективы использования моллюска-фильтратора мидии для очистки балластных вод танкеров. В кн.: Биологическое самоочищение и формирование качества воды. - М.: Наука, 1975.-С. 141-143.

87. Миронов О.Г. Биологические ресурсы моря и нефтяное загрязнение.- М., Пищевая пром-сть, 1972. 105 с.

88. Миронов О.Г. Взаимодействие морских организмов с нефтяными углеводородами. Л.: Гидрометеоиздат, 1985. 128 с.

89. Миронов О.Г. Нефтеокисляющие микроорганизмы в море. Киев: Наукова думка, 1971. - 233 с.

90. Миронов О.Г. Нефтяное загрязнение и жизнь моря. Киев: Наукова думка, 1973. - 86 с.

91. Миронов О.Г., Лебедь А.А., Семанов Г.Н., Мурашев И.А. Результаты изучения токсичности ч биоразлагаемости некоторых диспергентов в морской воде. В кн.: Экспериментальная водная токсикология. - Рига: Зинатне, 1985.-Вып. 10.-С. 122 - 129.

92. Миронов О.Г., Миловидова Н.Ю., Щекатурина Т.Л. Некоторые особенности устойчивости черноморских мидий к углеводородному загрязнению. В кн.: Экспериментальная водная токсикология. - Рига: Зинатне, 1985. - Вып. 10. - С. 84 - 87.

93. Миронов О.Г., Дымбал И.М. Развитие микроводорослей в воде, загрязненной нефтью // Биологические науки, 1975. № 5. - С. 53-56.

94. Миронов О.Г., Щекатурина Т.Л. Углеводородная характеристика органов и тканей некоторых средиземноморских рыб // Вопросы ихтиологии, 1978.-№ 6.-С. 1147 1150.

95. Михайлова Л.В. Действие водорастворимой фракции нефти на ранний онтогенез стерляди Acipenser ruthenus // Гидробиол. журн., 1991.- 27, № 3. С. 77 - 87.

96. Михайлова Л.В. Современный гидрохимический режим и влияние загрязнений на водную экосистему, и рыбное хозяйство (Обзор) // Гидробиол. журн, 1991. 27, № 5. - С. 80 - 91.

97. Можаев Е.А. Загрязнение водоемов поверхностно-активными веществами. М.: Медицина, 1976. - 123 с.

98. Мясников И.Н., Потанина В.А., Кудрявцев С.А., Чмелев Ю.А. Очистка нефтесодержащих вод на установках заводского изготовления // Водоснабжение и санитарная техника, 1998. № 6. - С. 20 - 21.

99. Нейман Е.Я. Организация экоаналитического контроля в Российской Федерации // Экологическая химия. 1993. - № 1. - С. 59 - 67.

100. Нельсон-Смит А. Нефть и экология моря. М.: «Прогресс», 1977. -302 с.

101. Новиков Ю.В. Экология, окружающая среда и человек: Учеб. пособие для вузов, средних школ и колледжей. М.: ФАИР-ПРЕСС, 2000. -320 с.

102. Обобщенный перечень предельно допустимых концентраций (ПДК) и ориентировочно безопасных уровней воздействия (ОБУВ) вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов. М.: Мин-рыбхоз СССР, 1990. - 46 С.

103. Паренаго О.П., Давыдова C.JT. Экологические проблемы химии нефти (обзор) // Нефтехимия, 1999. 39. - с. 3-13.

104. Патин С.А. Влияние загрязнения на биологические ресурсы и продуктивность Мирового океана. М., Пищевая пром-сть, 1979. - 304 С.

105. Платпира В.П. Изучение влияния некоторых углеводородов нефтяного происхождения на бактериальную продукцию в прибрежных водах Рижского залива. В кн.: Экспериментальная водная токсикология. -Рига: Зинатне, 1981. - Вып. 7. - С. 129-141.

106. Н.Платпира В.П. Микрофлора и трансформация нефтяных углеводородов в морской среде. Рига: Зинатне, 1985. - 162 с.

107. Правдин Н.С. Руководство по промышленной токсикологии. М.; Л., 1934.-Т. 1.-259 с.

108. Практикум по коллоидной химии и электронной микроскопии. -Под ред. С.С.Вюцкого и P.M. Панин. М.: Химия, 1974. - 243 с.

109. Руднева И.И., Чесалина T.JL, Кузьминова Н.С. Ответные реакции молоди черноморской кефали на загрязнение мазутом // Экология, 2000. № 4. - С. 304 - 306.

110. Руссо Р.С. Информационная система по токсичности стоков сложного состава. В кн.: Проблемы водной токсикологии, биотестирования и управления качеством воды. - Л., 1986. - С. 151 - 163.

111. Сазонова В.Е., Панькина Е.В. Сравнительный анализ чувствительности двух биотестов для определения степени токсичности воды // Вод. ресурсы, 1998.-25, № 1.-С. 80 84.

112. Саксонов М.Н., Балаян А.Э., Стом Д.И. Метод люминесцентной микроскопии в определении накопления нефтепродуктов эпишурой и биоиндикация загрязнения // Водные ресурсы, 2001. т. 28. - № 6. - С. 752- 755.

113. Саноцкий И.В., Уланова И.П. Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. М., 1975. -328 с.

114. Седых В.Н., Игнатьев Л.А., Семенюк М.В. Реакция растений на отходы бурения нефтяных скважин. Всхожесть семян и выживаемость сеянцев. Сообщ. 1 // Сиб. экол. журн., 1998. 5, № 1. - С. 105 - 110.

115. Солуха Б.В. Методы измерения чувствительности ориентированных перемещений и специализированных актов рыб в полях химических раздражителей. Хемочувствительность и хемокоммуникации рыб. - М.: Наука, 1989. - С. 5 - 97.

116. Сониясси Р., Сандра П., Шлетт К. Анализ воды: органические микропримеси: практ. руководство. / Пер. с англ. - Санкт-Петербург: «ТЕЗА», 2000. - 250 с.

117. Сорокин А.Ф., Ан В.Б., Полтолярный Е.П. Оперативный гидрооптический мониторинг в индустриальном рыбоводстве // Гидробиол. журн., 1991. 27, № 5. - С. 37 - 42.

118. Спектральный анализ чистых веществ. Издание 2-е, пер. и допол. / Ред. Зильберштейн Х.И. - Санкт-Петербург: Химия, 1994. - 345 С.

119. Степанова Г.С., Зобов В.В., Петрова JI.M., Латыпова В.З., Березинский Л.А., Романов А.Г., Степанова Н.Ю. Исследование токсичности химических загрязнителей на Daphnia magna (Straus) // Токсикол. вестн., 1999. № 3. - С. 22-27.

120. Столяров Б.В. и др. Практическая газовая и жидкостная хроматография: учебное пособие. Санкт- Петербург: СПбУ, 1998. - 610 с.

121. Стом Д.И., Гиль Т.А. Токсичность органических соединений и тяжелых металлов при наличии кормовых организмов для Epischura baicalensis и Daphnia magna // Гидробиол. журн., 2000. Т. 36., № 2,. - С. 54- 59.

122. Строганов Н.С. Введение. В кн.: Оловоорганические соединения и жизненные процессы гидробионтов. - М., 1975.- С. 5 - 15.

123. Строганов Н.С. Методика определения токсичности водной среды. В кн.: Методика биологических исследований по водной токсикологии. -М.: Наука, 1971С. 98 - 108.

124. Тагунов В.Б., Флеров Б.А. Реакция избегания токсических веществ у водяного ослика // Биология внутренних вод: информ. бюл., 1978. № 39. - С. 80 - 84.

125. Туманов А.А., Постнов И.Е. Водные беспозвоночные как аналитические индикаторы (обзор) // Гидробиол. журн., 1998. 21, № 5. - С. 12 -26.

126. Тягненко В.А., Володина Е.П., Полякова B.C., Поляков С.П. Биомониторинг как инструмент контроля и прогноза экологического воздействия на организмы // Газ. пром-сть, 1998. № 3. - С. 65 - 67.

127. Федорова JI.C., Короленко П.И., Гвоздаров А.Ю., Якунина О.В. Проблемы создания един эй системы биологического анализа природных и сточных вод // Гидрохим. Материалы, 1994. 82. - С. 51-63.

128. Филенко О.Ф. Водная токсикология. М., 1988. - 154 с.

129. Филенко О.Ф. Практические ориентиры водной токсикологии) // Гидробиол. журн., 1991. 27, № 3. - С. 72 - 75.

130. Филенко О.Ф., Дмитриева А.Г., Исакова Е.Ф., Путинцев А.И., Ларин В.Е. В кн.: Тр. 4 Поволж. конф. «Пробл. охраны вод и рыб. ресурсов», Казань, 9-15 апр., 1990. - Т. 2., секц. 2,3. - Резолюция и решение. -Казань, 1991.-С. 126 - 130.

131. Флеров Б.А. Об использовании в водной токсикологии исследований поведения животных // Гидробиол. журн., 1974. Т. 10, № 5. - С. 114 - 120.

132. Флеров Б.А. Эколого-физиологические аспекты токсикологии пресноводных животных. Л.: Наука, 1989. - 144 с.

133. Флеров Б.А., Тагунов В.Б. Анализ реакции избегания токсических веществ у жабронога Streptocephalus torvicornis (Waga) // Биология внутренних вод: Информ. бюл., 1978. № 40. - С. 68 - 71.

134. Фомченков В.М., Холоденко В.П., Ирхина И.А., Петрунина Т.А. Влияние загрязнения водной среды нефтью и нефтепродуктами на барьерные свойства цитоплазматических мембран бактериальных клеток // Микробиология, 1998. Т. 67. - № 3. - С. 333 - 337.

135. Чесалина Т.Л., Руднева И.И. Воздействие тяжелых нефтяных фракций на икру и личинок бычка-кругляка Neogobius melanostomus // Вопр. ихтиол., 1998. Т. 38, - № 3. - С. 426 - 429.

136. Щеглов В.В., Григорай Г.В. Ингибирование биосинтеза белка и РНК в эмбрионах морского ежа при воздействии тяжелых металлов. В кн.: Экспериментальная водная токсикология. - Рига: Зинатне, 1987. -Вып. 12.-С. 73-81.

137. Baird Donald J., Barber Ian, Soares Amadeu M., Calow Peter. An early life-stage test with Daphnia magna (Straus) an alternative to the 21-day chronic test? // Ecotoxicol. and Environ. Safety, 1991. 22, № 1. - P. 1 - 7.

138. Barron M. G., Podrabsky T, Ogle R. S, Dugan J. E, Ricker R. W. Sensitivity of the mysid Mysidopsis bahia to a weathered oil // Bull. Environ. Contam. and Toxicol, 1999. 62, № 3. - 3. 266-271.

139. Batterton J.C, Winters K, Van Baalen C. Sensitivity of three microal-gae to crude oil and fuel oils. Mar. Environ. Res, 1978. - vol. 1, № 1. - p. 31-43.

140. Baumard Pascale, Budiinski Helene, Garrigues Philippe. Polycyclic aromatic hydrocarbons in sediments and mussels of the western Mediterranean sea// Environ. Toxicol, and Chem, 1998. 17, № 5. - P. 765-776.

141. Berne S, Marchand M, Ozouville L. Pollution of sea water and marine sediments in coastal areas. AMBIO, 1980. - vol. 9, N 6. - P. 287-294.

142. Beswick J. Environmental aspects of onshore drilling in Europe // Oil and Gas. J, 1996. - 94, № 3, - 3. 18-19.

143. Bjornberg T.K.S, Wilbur K.M. Copepod phototaxis and vertical migration induced by Xanthin dyes // Biol. Bull, 1968. Vol. 134, № 3. - p. 398-410.

144. Boswell J.L. Experiments to determine the effect of surface film of crude oil on the absorption of atmospheric oxygen by water, Texas A and M Research Foundation, College Station, 1950.

145. Bovee E.C, Bergquist B.L, Wyttenbach E, Sternhein D.J, Tippitt A. Effects of heavy metals on Tetrahymena pyriformis: a summary // 5th Intern. Congress Protozool. Abst. New York, 1977. p.

146. Bovee E.C, O'Brien T.L. Some effects of selenium, vanadium and zirconium on the swimming rate of Tetrahymena pyriformis: a bioassay study // Univ. Kans. Sci. Bull. 1982. Vol. 52, № 4. - P. 39-44.

147. Bridie A.L. et al. Formation prevention and breaking of sea water in crude oil emulsions chocolate mousse. Mar. Pollut. Bull., 1980. - vol. 11, N 12. -РП. 343-348.

148. Brines M.L., Gould J.L. Skylight polarization patterns and orientation // J. Exp. Biol., 1982. № 96. - P. 69-91.

149. Brown S.B., Evans R.E., Thompson B.E., Haka T.J. Chemoreception and aquatic pollutants. // Chemoreception in fishes. Amsterdam, 1982. - p. 363 - 393.

150. Brown S.O., Reid B.L. Experiments to test the diffusion of oxygen through a surface layer of oil, Texas A and M Research Foundation, College Station, 1951.

151. Cherry D.S., Cairns J. Jr. Biological monitoring. Part 5: Preference and avoidance studies // Water Res., 1982. Vol. 16, № 3. - P. 263-301.

152. Conell D.W. Kerosene-like tainting in Australian mullet. // Marine Pollution Bull., 1971. vol. 2, № 12. - P. 188-189.

153. Conover R.J. Some relations between zooplankton and Bunker С oil in Chedabucto Bay following the wreck of the tanker ARROW. // J. Fish. Res. Bd. Canada, 1971. vol. 28, № 9. p. 1327-1330.

154. Currier H.B., Peoples S.A. Phytotoxicity of hydrocarbons, "Hilgardia", 1954, 23. P. 155-173.

155. Davy F.B., Kleerekoper H., Gensler P. Effect of exposure to sublethal DDT on the locomotor behavior of the goldfish (Carassius auratus) // J. Fish. Res. Board Canada, 1972. Vol. 29, № 9. - P. 1333-1336.

156. Davy F.B., Kleerekoper H., Matis J.N. Effects of exposure to sublethal DDT on the exploratory behavior of goldfish (Carassius auratus) // Water Resour. Res., 1973. Vol. 9, № 4. - P. 900-905.

157. Doane T.R., Cairns J., Buikema A.L. Comparison of biomonitoring techniques for evaluating effects of jet fuel on bluegill sunfish (Lepomis macrochirus). Freshwater Biological Monitoring. Oxford; New York, 1984. - P. 103-112.

158. Domal-Kwiatkowska Dorota, Sosak-Swiderska Bozena, Mazurek Ur-szula, Tyrawska Danuta. The effect of cadmium on the survival and filtering rate of Daphnia magna (Straus) // Pol. Arch. Hydrobiol., 1994. 41, № 4. -P. 465-473.

159. Donahue W.N. et al. Effects of water-soluble components of petroleum oils and aromatic hydrocarbons on barnacle larvae // Environ. Pollut., 1977. -№ 13.-p. 187-203.

160. Escher Beate I., Behra Renata, Eggen Rilk I. L., Fent Karl. Molecular mechanisms in ecotoxicology: An interplay between environmental chemistry and biology//Chimia., 1997,-51, № 12. P. 915-921.

161. Faust S. D., Hunter J. V. Organic compounds in aquatic environments. -New York, 1971. p. 79-87.

162. Floch J.Y., Diourus M. Initial effect of Amoco Cadiz on intertidal algae. AMBIO, 1980. - vol. 9, № 6. - P. 284-288.

163. Folt C.L., Chen C.Y., Moore M.V., Burnaford J. Synergism and antagonism among multiple stressors // Limnol. and Oceanogr., 1999. 44, № 3, Pt 2. - P. 864-877.

164. Frear D.E., Boyd J.E. Use of D. magna for the Microbioassay of Pesticides. 1. Development of standardized techniques for rearing Daphnia and preparation of Dosage-Mortality Curves for Pesticides //J. Econ. Entomol. -1967.-60, №4.-P. 1236-1247.

165. Gaete Hernan, Paredes Karina. Toxicidad de mezclas de contaminantes quimicos sobre el Daphnia magna // Rev. Int. Contam. Ambient. 1996. 12, № 1. - P. 23-28.

166. Galtsoff P.S. et al. Effects of crude oil pollution on oysters in Louisiana waters. Bull. Bur. Fish. 1936. - 18 p.

167. Giattina J.D., Garton R.R. A review of the preference-avoidance responses of fishes to aquatic contaminants // Residue Revs, 1983. Vol. 87. -P. 43-90.

168. Goldacre R.J. The effects of detergents and oils on the cell membrane, "Fid. Studies", 1968, 2. P. 131-138.

169. Gray R.H., Page Th.L., Saroglia M.G. Behavioral response of carp Cyprinus carpio, and black bullhead, Ictalurus melas, from Italy to gas supersaturated water // Environ. Biol. Fish. 1982. Vol. 7, № 3. - P. 287-294.

170. Guigues F. Problem of the water quality of refinery effluents. Rev. Ass. Fran, tech petrol., 1972. - N. 215. - P. 33-48.

171. Heaton M.G., Wilke R.J., Bowman M.J. Formation of tar balls in a simulated oceanic front. Texas J. Sci., 1980. - vol. 22, N 3. - P. 265-268.

172. Issa Ahmed A., Ismail Mady A. Effects of detergents on River Nile water microflora // Acta hydrobiol., 1995. 37, № 2. - pP 93-102.

173. Johannes P.E. Pollution and degradation of coral reef communities. -In: Tropical Marine Pollution. Amsterdam: Elsevier, 1975. P. 13-51.

174. Johnson D.W., Webster D.A. Avoidance of low pH in selection of spawning sites by brook trout (Salvelinus fontinalis) // J. Fish. Res. Board Canada. 1977.-Vol. 34, № 11.-P. 2215-2218.

175. Jones F.R. The response of the planaria Dendrocoelum lacteum to an increase in light intensity // Anim. Behav., 1971. Vol. 19, № 2. - P. 269276.

176. Jones K.R., Нага Т.J., Scherer E. Behavioral modifications in arctic char (Salvelinus alpinus) chronically exposed to sublethal pH // Physiol. Zool., 1985. Vol. 58, № 4. - p. 400-412.

177. Kauss P.R., Nuchinson T.G., Griffiths M. Field and laboratory studies on the effects of crude oil spills on phytoplankton. Proc. 18th Ann. Tech. Conf. Environmental Progress in Science and Education. New York, 1972. -P. 22-26.

178. Kleerekoper H. Effects of sublethal concentrations of pollutants on the behavior of fish // J. Fish. Res. Board Canada, 1976. Vol. 33, № 9. - P. 2036-2039.

179. Kleerekoper H., Waxman J.B., Matis J. Interaction of temperature and copper ions as mediating stimuli in the locomotor behavior of the goldfish, Carassius auratus // J. Fish. Res. Board Canada, 1973. Vol. 30, № 6. - P. 725-728.

180. Krahn M.M., Myers M.S., Burrows D.J., Malins D.C. Determination of metabolites of xenobiotics in the bile of fish from polluted waterways. Xe-nobiotica, 1984. - vol. 14, № 8. - P. 633-646.

181. Krasinska Anna, Steiiga Teresa, Wielowieyska Barbara. Ekologiczna ocena materialow stosowanych eksploatacji gazu ziemnego i ropy naftowej // Nafta-Gaz., 1997. 53, № 7-8. - P. 320-326.

182. Kusk K.O. Effects of hydrocarbons on respiration photosynthesis and growth of diatom Phaedactylum tricornutum. // Botanica Marina, 1981. vol. 24, №8. -P. 413-419.

183. Linder G., Bergman H., Meyer J. Constituent bioconcentration in rainbow trout exposed to a complex chemical mixture. // Bull. Environmental Contam. Toxicol., 1984. vol. 33, № 3. - P. 330-338.

184. Little E. E., Flerov B. A., Ruzhinskaya N. N. Behavioral approaches in aquatic toxicity investigations: a review.- Toxic substances in the aquatic en-viroment: an international aspect. Bethesda, 1985. - P. 72-98.

185. Loya Y., Rinkevich B. Effects of oil pollution on coral reef communities. Mar. Ecol. Progr. Ser., 1980. - vol. 3, № 3. - P. 167-180.

186. Macinnes I., Catabrese A. Combined effects of salinity, temperature and copper on embryos and early larvae of the American oyster, Crassostroa oirginica. // Arch. Environmental Contam. Toxicol., 1979. vol. 8, № 5. - P. 553-562.

187. Mackie P.R. et al. Early samples of oil in water and some analyses of zooplankton. // Mar. Pollut. Bull., 1978. vol. 9, № 11. - P. 296-298.

188. Mancha R., Diaz G., Arese A. Prediction of bioaccumulation potential of some aromatic hydrocarbons in indicator species of ecotoxicity // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. 1997. 59, № 3. - P. 422-429.

189. Marsland D. The site of narcosis in a cell; the action of a series of paraffin oils on Amoeba dubia, "J. cell. сотр. Physiol.", 1933, 4. P. 9-33.

190. Mason P.R. Chemo-klino-kinesis in planarian food location // Anim. Behav., 1975. Vol. 23, № 2. - P. 460-469.

191. Matulova D. Influence of detergents on water algae, //"Technol. Vody", 8, Prague, 1964. P. 251-301.

192. Melntosh A.W., Kevern N.R. Toxicity of Copper to Zooplankton // J. Environ. Qual., 1974. 3, № 2. - p. 166-170.

193. Microorganisms consume oil in test spill. Chem. engin. news, 1970. -48, N. 38. -p. 48-49.

194. Mironov O. G. The effect of oil pollution on the flora and fauna of the Black Sea, FAO tech. Conf. mar. Pollut., pap. E-92. Rome, 1970.

195. Motohiro Т., Inove N. n-Paraffin's in polluted fish by crude oil from "Juliana" wreck. // Bull. Fac. Fishery Hokkaido Univ., 1973. vol. 23, № 4. -P. 204-208.

196. Muirhead-Thomson R.C. Lethal and behavioral impact of chlorpyrifos methyl and temephos on select stream macroinvertebrates: experimentalstudies on downstream drift // Arch. Environ. Contam., Toxicol., 1978. Vol. 7, №2. - P. 139-147.

197. Nelson-Smith A. Oil pollution and marine Ecology. Oxford: Elec. Sci. Books, 1972. - 260 p.

198. North W.J., Neushul M., Clendenning K.A. Successive biological changes observed in a marine cove exposed to a large spillage of mineral oil. Proc. Symp. Pollut. Mar. Microorg. Prod. Petrol., Monaco, 1964. - Monaco, 1965. -P 333-354.

199. Ottway S.M. The comparative toxicity of crude oils. The ecological effects of oil pollution on littoral communities. - Institute of Petroleum, London, 1971.-P. 172-180.

200. Parker C.A. The ultimate fate of crude oil at sea-uptake of oil by zoo-plankton. Rep. Admir. Mater. Lab. U. К., В 198 (M), 1970. - 15 p.

201. Peltier W.H. Impact of industrial effluent on aquatic organismus: EPA region IV case history. Environ. Hazard. Asses. Effluents. Proc. Pellston. Environ. Workshop, Cody Wyo., 22-27 Aug., 1982, N.Y., 1986. - P. 216-227.

202. Penttinen Sari, Kostamo Auli, Kukkonen Jussi V. K. Combined effects of dissolved organic material and water hardness on toxicity of cadmium to Daphnia magna // Environ. Toxicol, and Chem., 1998. 17, № 12. - P. 24982503.

203. Pesch G., Stewart N., Pesch C. Copper toxicity to the bay scallop, Ar-gopecten irradians. // Bull. Environmental Contam. Toxicol., 1979. vol. 23, № 6. - P. 759-765.

204. Poremba К. New toxicity testing method using marine bacterivorous nanoflagellates // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. 1991. - 46, № 2. - P. 193-196.

205. Rand G.M. The effect of exposure to a subacute concentration of parathion on the general locomotion behavior of the goldfish // Bull. Environ. Contam, Toxicol. 1977. Vol. 18, № 2. - P. 259-260.

206. Roberts C.H. The effect of oil pollution upon certain forms of aquatic life, "J. Cons. perm, intern. Explor. Mer.", 1926, 1. P. 245-275.

207. Rogers M. A. Bacterial degradation of crude oil comparison of field and experimental data // Chem. Geolog, 1973. 11, N. 3. - P. 203-221.

208. Rogoff M.N. Oxidation of aromatic compounds by bacteria // Adv. appl. Microbiol. 1961. -№ 3. - P. 193-221.

209. Rojiikov Padrtova Renata, Marsalek Blahoslav, Holoubek Ivan. Evaluation of alternative and standard toxicity assays for screening of environmental samples: selection of an optimal test battery // Chemosphere, 1998.- 37, № 3. P. 495-507.

210. Rosso-Darment Agnes, Rebillard Jean-Pierre, Lafont Michel. Ces vers qui nous surveillent // Adour Garonne: Rev. Agense eau, 1998. № 74. - P. 23-27.

211. Rudneva-Titova I. I. The biological effects of toxicants in developing eggs and larvae of Black Sea fish species // Mar. Environ. Res, 1998. V. 46.- № 1-5. P. 499-500.

212. Rushton W, Jee E.C. Fuel oil and aquatic life, "Salmon Trout Mag.", 1923, 31.-P. 89-95.

213. Scripps Institution of Oceanography, Center for Short-lived Phenomena Event Report 9:69/26a, Smithsonian Institution, Cambridge, 1969.

214. Simon Thomas P., Tubin Arthur, Curieux Frank Le. Predictive abilities of environmental protection agency subchronic toxicity test endpoinst for complex effluents // Proc. Indiana Acad. Sci., 1990. 99, № 1. - P. 29-37.

215. Smith J.E. TORREY CANYON pollution and marine life. London: Cambridge Univ. Press, 1968. - 196 p.

216. Solbe J., Mark U., Buyle В., Guhl W., Hutchinson Т., Kloepper-Sams P., Lange R., Munk R., Scholz N., Bontinck W., Niessen H. Analysis of the ecetoc aquatic toxicity (EAT) database. I. General introduction // Chemos-phere, 1998.-36, № 1.-P. 99-113.

217. Spangenberg R., Streloke M., Rothert H. Prufung der Auswirkungen von Pflanzenschutmitteln auf Wasserorganismen im Zulassungsverfahren // Mitt. Biol. Bundesanst. Land- und Forstwirt. Berlin Dahlem., 1998. № 346. -P. 27-33.

218. Spooner M F Corkett CJ Effects of Kuwait oils on feedinqrates of co-pepods. //Mar. Pollut. Bull., 1979. vol. 10,№ 7. - P. 197-202.

219. Stott В., Buckley B.R. Avoidance experiments with homing shoals of minnous, Phoxinus phoxinus, in a laboratory stream channel // J. Fish Biol., 1979.-Vol. 14, №2. P. 136- 146.

220. Strand J.A. et al. Development of toxicity test procedures for marine phytoplankton. Proc. Joint. Conf. Prevention and Control Oil Spills. Washington: Amer. Petrol. Inst., 1971. - P. 279-286.

221. Sutterlin A.M. Pollutants and chemical senses of aquatic animals -perspective and review// Chem. Senses, Flavor., 1974. Vol. 1. - P. 167-178.

222. Swedmark M, Braaten В., Emanuelsson E., Granmo A. Biological effects of surface active agents on marine animals // Mar. Biol. 1971. Vol. 9, №3.-P. 183 - 201.

223. Swedmark M., Granmo A., Kollberg S. Effects of oil dispersants and oil emulsions on marine animals. // Water Res., 1973. vol. 7, № 11. - P. 1649-1672.

224. Symposium on microbial degradation of residual oil. Wach. 16 sept. 1971, Biotechn. and bioenerget. - 1972. - 14, N 3. - P. 295-513.

225. Tebo L.B. Effluent monitoring: historical perspective. Environ. Hazard. Asses. Effluent. Proc. Pellston Environ. Workshop. Cody Wyo., 22-27 Aug. 1982, N.Y., 1986. - P. 13-31.

226. The ecological impacts of the oil industry // Ecologist., 1997. 27, № 3.-P. 101.

227. Tisler Tatjana, Zagorc-Koncan Jana. A simple flow-through system for toxicity testing with Daphnids // Water, Air, and Soil Pollut., 1999. 111, № 1-4.-P. 327-336.

228. Trecanni V. Microbial degradation of aliphatic and aromatic hydrocarbons//Zeitsch. allg. microbiol. 1965. № 5. - P. 332-341.

229. Twagilimana L., Bohatier J., Groliere C., Bonnmoy F., Sargos D. // Ecotoxicol. and Environ. Safety, 1998. 41, № 3. - P. 231-244.

230. Van Sickle Virginia, Groat C. G. Oil field brines: another problem for Louisiana's coastal wetlands// Proc. 1st Int. Symp. Oil and Gas Explor. and Prod. Waste Manag. Pract., New Orleans, La, Sept. 10-13, 1990. P. 659675.

231. Vernberg W.B., DeCoursey P.J., Padgett W.J. Synergistic effects of environmental variables on larvae of Uca pugulator // Mar. Biol., 1973. Vol. 22, № 4. - P. 307.

232. Vulliermet B. Improvement of the mass and Energy Balances in the tannius Industry. Jalca, 1980. - 75. - P. 233-275.

233. Wirth E. F., Fulton M. H., Chandler G. Т., Key P. В., Scott G. I. Toxicity of sediment associated PAHs to the estuarine crustaceans Palaemonetes pugio and Amphiascus tenuiremis // Bull. Environ. Contam. and Toxicol., 1998. -61, №5. -P. 637-644.

234. Woodward D.F., Mehrle P,M., Mauck W.L. Accumulation and sublethal effect of a Wyoming crude oil in cutthroat trout. Trans. Amer. Fisheries Soc., 1981. - vol. 110. - P. 437-445.

235. Yu Rui-lian, Xu Jian-ling, ZhaoYuan-hui, Wang Chun-mei // Dongbei shida xuebao. // J. Northeast Norm. Univ., 1999. № 3. - p. 73-78.

236. ZoBell С. E. The occurence effects and fate of oil pollution in the sea. -London: Pergamon Press, 1064. p. 87.