Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические свойства возбудителя и прижизненная диагностика аденоматоза у овец

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства возбудителя и прижизненная диагностика аденоматоза у овец"

ГЛАВАГРОБИОПРОМ СССР ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ

На правах рукописи УДК 619:576.858:616-006,55

АГИБАЛОВА Александра Игнатьевна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВОЗБУДИТЕЛЯ И ПРИЖИЗНЕННАЯ ДИАГНОСТИКА АДЕНОМАТОЗА У ОВЕЦ

03.00.06 — вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

г. Покров — 1991 г.

I. ОБЩАЯ ХАРА1С1ЕРИС1Ш РАБОТа.

Актуальность теми.

Интенсивное развитие животноводства на промышленной основе поставило перед ветеринарными специалистами ряд.важных проблем по к»фзкционной патологии, среди которых наиболее актуальной является проблема медленных инфекций овец и коз таких, как аденоматоа, висна-маеди и скрепи. Эти инфекции широко распространены во многих странах ыира, регистрируется и в нааеЯ стране, особенно в хозяйствах Нечерноземной зоны РСФСР, причиняя большой экономический ущерб отрасли.

Медленные инфекции были известны еяе в конце прошлого века ( ¡{.гизш), но более углубленное их исследование стало возкотгм после сообщения в 1954 году Сигурдссонем о наблюдаемых га массовых болезнях у овец в-Исландии.- В 1963-1967 годах появились сообщения об аденоиатозэ и у нае в стране (Митрофанов В.Ы., Алиев Д.И.).

Данные литературы отечественных я иностранных авторов свидетельствуя?, что к настоящему времени достигнуты ¡значительные успехи в изучении ряда аспектов этой болезни. В то де время.иногие вопроси этиологии, особенно культивирования возбудителя, методов ранней диагностики аденоматоза не разработаны. Йиепзаяся литература по этой болезни по-сппзена, главна образоы, изучению шишига, патоыорфолопга и эпизоотологии болезни (Д.Н.Алиев, 1964г., В.Ы.Митрофанов, 1964г., Ь.Г.Костенхо, 1964г., Н.И.Архипов, Г.Н.Братин, 1981, 19Ь5гг., Н.И.Архипов, В.А.Шубнк н др. 1966г., А.СиЪа--Сараго И Др. 1945г., !ЫГоЪе1 е* аЛл, 1968-79ГГ., 1Г.ЗипЕа1, 1938, 1946г., А. ЕЪег, 1899г., З.ЕпсЬеу, 1958г., .х.и.Огеа-а, 1960 и др.). В последнее вреия появился ряд работ по изучение этиологического фактора згойболезна: 1).Уегт*оега ег а1. (1977-1У80гг.), if.Se 11аг1:1п1 et о1. (1935г.), Я.КагИп (1980г.), А.Негг1г« е1: а1. (1983Р.), К.Ьахгиогв (1906г.), А.'»71Шапзоп е-Ь (1980), -ТГ.Яьп-" авга е! а1. (1968г.). Их нсследовагмя подтаерднга предав-лоасше Б.шгсКеИ , которгЛ «во а 1915 году еискозоз

мнение о вирусной природе болезни. Однако, до сдас пор нет единого инедая об этиологии этой инфекцаи. Одш авторы: V. Cvj е tanovi с et al. (1972г. ), De У il liera et al. (197У--1984ГГ.), iV.Hartin et al. U979r.), A.Kswjestic et ta. (I97Q-I9âlrr,), - склонны считать, что возбудителе» адено-натоза является герпссввруе, а по последним данным: D.'/er-woerd et аХ. (IS80-J990rr.), G.Querat et al. (IS87ï\), ¿.De' T.artini et а1,Ц9й8г.)» A.Herring et al. СГЭеЗг.), J.Sharp et al. (I981r.), ù.Irving et al. (1У84Г.), A.Paiœe e al. (1983-19Ь6гг.), - рзтровкрус. Несмотря на многочисленные попытка авторов культивировать выделенный оетро-вярус.устаютадтьрепродукцнп его в культуре клеток на не удалось.

В нажзй стране до настоящего времени работ по изучена» этиологического фактора аденоматоза у овен не проводилось. ^агноз ставился на основании результатов патоыорфологических исследований с учетом клинико-эпизоо-тологических данных. Разработка ранней прижизненной диагностик«, профилактики и борьбы с этой болезнь» сдерживается из^за отсутствия способов культивирования возбудителя аденоматоза .

Настоящая научно-исследовательская работа является составной: часть» плановых НИР по темам 05.06-05.08; 7.1-6-66 и №.0№ .программы 0.СХ62 и проводилась с I9U2 го-:• Д»*- V

Цель и задачи исследования; Целью работы явилось изучение некоторых биологических свойств возбудителя аденоматоза, изолированного из пораженных тканей легкого больных овею, разработка способа получения специфического антигена н ветода его использования в диагностике болезни.

■ . Ддй достижения поставленной шли необходимо было редать следунаие задачи:

I. Подобрать клеточку» систему для выделзния возбудителя аденоматоза овец и получкть из организма спонтанно больных яивотных вируссодержаеие изолкты.

2. Изучить некоторые биологические свойства возбуди- ■ теля аденоматоза овец (характер ЦПД йа чувствительной культуре клеток, изменение ыетаболнз«а ивфаварованных клеток, идентификации специфического антигена, воспроизведение болезни у овец и лабораторных яивотюх).

3. Разработать способ получения специфического акта-гена аденоматоза я метод его использования в серологической диагностике болезни.

4. Отработать оптимальные параметры серологической реакции для лряяизнегаюП диагностика адекбиатйза у овец.

Научная новизна.

Впервые з казей стране из органязг^спокТашю больных аденоиатоэом овец получены с^спенатсл/* культуралышо изолягы возбудителя еденоматоза овец. Разработай способ получения культурального преципитирукзего антигена п ке-тод его прямекешя для прижизненного выявления вирусоноси* теяей аденоаатоза»

Разработанц катоды очистки и концентрирования впруся, исследована его ыор^яогическпэ и накоторцз физико-хика-ческие свойства. Показано, что но шрфологяи, размзраи, плавучей плотности и физико-хаыкчесазш свойствам полученный в изолятах вирус коздо отнести к семейству Яе1;гоу1П-йае . Экспериментально воспроизведен аденоматоз у овец, ягнят и кроликов при интратрахеадьноы я внутривенно» заражении вируесодержадей суспензией из опухолей» а также оча-ценкши культурадькк^'изолятал! возбудителя аденоыатоза. Изучена.и обосновала возможность ршо-датологаческого метода для выявления больных аденояатозом йнвотнш: на стадии чглин-пеского проявления болззии.

Практическая ценность.

Ввделекы е помоаыэ культуры клеток ТЯ пзоляты возбудителя аденоматоза от естественпв больнак аденоматозок овец. Разработан способ получения специфических.антигенов возбудителя болезни, котарне используются для кзготовлеиая дйагностякумов.

Разработан и апробирован "Набор" для диагностики аденоиагоэа овец. Предложена схема прягязнэнной диагностика болезни.

Практическое использование результатов проведенных исследований определено следуязими норыативно-техническики документами, утвержденными ГУВ МСХ СССР:

- Технические условия № 4620-1127-84 на "Набор препаратов для диагностики аденоыатоза легких овец методом РИД";

- Временная инструкция по изготовлений и контроле "Набора";

- Наставление по■применении "Набора" от 28.11.84;

~ Временные методические указания по лабораторной диагностике адсноматоза овец и коз от 02.07.85;

- Временная инструкция "О мероприятиях по борьбе с аденоиатоэоы овец н коз" от 18.II.85.

Результата -исследований используется во ВШИВВиМ и ветерииарио-бактерислогических лабораториях при -проведении, .диагностики аденоыатоза методом РИД.

Апробация работы. Результаты осиоаних научит 'исследований апробированы я подтверждены комиссионными испыта-шга в институте (акт от 04.11,88 В 17), межведомственной комиссией (акт от марта 1933г.), Росконтролером института (паспорт на "Набор препаратов для диагностики аденокатоза негодои РИД* ot 27.II.89) атакке результатами экспертиз-' ньвс исследований полевых материалов из 21 хозяйства и 15 областей нашей етраны.

Материалы диссертации были доложены на научно-теоретических конференциях е института в 1933, 1985 и 1986 годах, на ученом совете института в 1986 году, на ВДНХ в 1989 и 1990 годах, на облаетноы совеаанин ветеринарных врачей г.Владимира в 1939 году.

Публикация результатов. Материала диссертации опубликована в отчетах по яаушю-исследоватальскии темам в период 1932-1990 гг. в 9 научных статьях, в 7 удостоверениях на рационализаторские предложения, нормативно-технических документах, утвержденных ГУВ МСХ СССР.

..Основные паяог-сния, вздвигеягше на зьяяту; .

- иорфояогическме и некоторые физико-химические свойства возбудителя зденэматоза овец;

- биологические свойства: способность к воспроизведете болезни у ягнят» овец я пролвкоа при «штратрахеальнад и внутривенном заражении;

- чувствительность культур клеток к возбудителю аденокатс» за st цк голшшческие из«енения.в них;

- методы выделения специфическое антигенов возбудителя -. аденоматоза;

- длагиоспгеесгаЯ "й&бер** а схема для пркхяэкенной диагностики адемоматоза. ;.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 168 страница* каппноапеного текста, шшзч&е?. введение, ,: обзор литературу, собстзешше исследования,-обсуждение,1", выводы, практические лредАоаетая.

1 абота иллюстрирована 26 рисунками, 12 таблица&и, . 4 графиками и схемой. Список литературы включает 263 источников, из кж? 195 шшетраш-ж, В приложении предегав-лены 12 документов, подтвертдагягдх достоварность подучен-кых результатов и их практичёскуз цепкость.

Й. СОБСТВЕННЫЕ ИСХЖЩОВАКИЯ. -

Материалы и катода

Работа ашолнялгеь so ВНШШнУ, а такае в ИарнйскоЯ республиканской ветеринаркой лаборатории, на мясоко^лиа-тах г. Йошкар-Олы и г. Коврова.

В работ® были использованы; ягнята романовской породы 2-4-йесячного возраста, ярки, старзе года» овцеаатки й ; барааа старае 3 лет, аролика порода "ISutssuua", ияееой 2,5-3 кг.

Цатераалом для неследовстя елуяила пробы кроая в ко-личесгве 2156 овец и коз, кусочки ткани легкого ot ISO спонтанно больных и 33 экспериментально эаргзекнях адвно-иатозом овец и о? 60 кроликов, дгепзряпсктальио шфшзра-ваннкх возбудителем болеэня.

■ - ? -

Для выделения возбудителя чденоматоза использовали слсдуязке культуры клеток: • порйгеко-грипсинязированшв куриные- фйбробластз Ш®), почки ягнят СПЯ)9 тесгикулы ягнят СД1), тестихулы козля? (ЗД), перевиваемые клеточные линии эибриональной почки свиньи клональной сублишк (ПйК-ббб), почки озца ШО-Й), почки эмбриона ефрикинской козы (ПЗАК), почки сибирского горного козерога (ПСГК;, почки ноЕэрож-' денного. китайского хомячка (ВНК мексиканская), щитовидной

эмбриона КРС ( 3$ Щу). Названные культуры клеток пег лучены ка лаборатории культур клеток с музеем клеточных отамыэв ВЙИИЗВиК» Из згой *е лаборатории были получены необходимые для работы питательные среды, солезые растворы и бакереды.

Исходным^ктериалом для изучения биологических свойств ■йзолятоа служили кусочки пораженной ткани легкого болымх аденоматоэоы овец к кроликов. Из исследуемых материалов готовили Кй&~ные суспензия, осветляли их при 6000 об/ыин в течение 20 иииут, обрабатывали антибиотика®! и заражали в .' объеме по 0,2 ыл на пробирку различные клеточные систеыы. . Перед использованием вируссодержащув суспензии контролиро-•..'в«яи на наличие аэробной, анаэробной и грибковой коктеки-нация. Титры шфекдаоиней'активности определяли с помощь» культуры клепке к расчитывали по Керберу в ТЦД^о/ыл.

Участим пораженных адоноиатоэом органов овец я культуры клеток исследовали на наличие аирускшс частиц в злекг-рошом кйкроскопе» Дея этой цели готовили ультратонкие срази из органов больных овец к ин^ашрованньк культур клеток ь. срой: наиболее ььгракённого вдгопаткчеекзго эффекта, (более 70& деструктивных изменений в монослое клеток), йс-.следуемые материалы фиксирован в 5%-ном растворе глутар-альдегида с постфиксацией в ХЙ-ном растворе осмиевой кислоты, обезвоживали 8 спиртах восходшей концентрации, заливали в эпоп-аралдкт и пэлиыеризоваял при 60°С в течение 4В часов» Срезы готовили на ультр&тоые КЗ~Ь801А, контрастировали ураннлацетатси, нитратом свинца к исследовали под электронным микроскопов ТЕ^-100. Ультратонхие срезы готовили и изучали совместно с научным сотрудников Сиыонэвай Э.Г.

Концентрированные культураяьк?5® ггатераалу «зояятов. ис-.следовали яетодоя негативного - конзрастяровадая. Концзнтря-ровекие проводили с псмозьа полиэтиленгликоля с молекулярной кассоЗ 6000 с послодугота 'вцсокосаорсстши сснтрифугироза-наеи. Материалу готовили я изучала совместно с зедугвс* научны» сотрудником Иерзапксевглем B.C.

Вируссодержедив. материалы - использовали для получения прецяпнтяруздего .культурального.антигена, а такие для заражения овец и кроликов. Полученную от животшх саворотху испольговали для идентификации антягеиа аденоматоза ША. Изучение фкэико-хийнчееких свойств выдёлеяного возбудятоля . проводили совкестио с каучшм еотруднийом Баляааойгм A.B. {определение плавучей плотности методом седюлентапяонного анализа. Изучает устойчивость вируса.к действии ферментов и некоторых физико-химаческях факторов. КулиуральныЯ антиген применяли в реакции радиальной илмунодкффузю! (РИД), для- выявления преюогатяруазих антител в сыворотке кропи инфицированных гденоматозом овец. Рсакцнэ ставал» на стеклах ■ размером 9x12 см, на которнэ наносил« расплазленккЯ 2,6%-~инй агар на '7,2%-нси растворе i.'aCl » ахеаанныЯ с антигеном, в соотношении соответственно (2:1) при температура cvecH 50°С. После заставания агара нарезали лунки, ,з кото-риз вносили контрольные. и испытуемые сыворотки. При наличии колыза преципитаций в исследуемой пробе вокруг лунки реакция считали положительной, независимо от диаггетра. В случае отсутствия преципитата -.реакций считается отрицательной, Методика' постановки реакция подробно описана во "Временных методических указаниях", утвержденных РУВ МСХ СССР (02.07.85, 15-ба).

Кудьтуральные изоляты возбудителя аденоаатоза, концентраты изолятов, а также 10%-кые суспензии из пораженкой аденоиатозоц ткани. легкого больных овец использовали для экспериментального воспроизведения болезш на овцах к ягнятах. Овец и ягнят зара-калн интратрахеадьно соответственно в объемах по 10 я 5 мл дважды с интервалом через три ■зддели, Кроликов заразали коцентрярованиг.;и культуральнугч кзолятаык, полученнкск на основе культуры клеток ТЯ, по

схеке; подкожно по 0,2 мл с полным едкззантом арейица & по-дузечку каждой даыяи, «ереа 5 днзй внутривенно в объеме I ал концентрата, содержащего 200 нкг белка, через 14-дней-- вцу^рижаечно с полный -ацыозантом Фрейнда в объеме 1 ил, через .9 месяцев вводил« подкожно в объеме 1 мл. Через 14 месяцев кроликов гаракаял.дополнительно подкожно в том кг объеме с полный едыввантом 4рейзда. Контрольным жизохкыи в те се срока вводили мнгактну» кульзуру клеток Тл.

Опыты по 'воспроизведен«» болезна проводили совместно со стараш научный сотрудником Г.И.Брагишы и научша сот-рудшкои •.Д.В.Балцасоваи. Гистологические исследования органов от спонтанно больных и экспериментально зараженных кк-зогных проведена Г.И.Братиным.

РШЛЬТАТЫ ИССйЕ/РБАЖ.

I. Выделение возбудителя аденоматоэа из пораженкой ткани легкого больных овей с помощь» культур клеток а изучение некоторые биологических свойств.

Ксзсодньа катер;:алом в качестве источника возбудителя аденоиатоза служили пораженные ткани легких больных адеио-ы&тозои овец романовской порода из овцехозяйств Маркйской АССР. Культуральиаз свойства вируса аденоматоза изучали на гомологичных и гетародогичных культурах клеток, кото-риз заражала 10%-вой суспензией из ткани легкого болъкнх аденоаатозом овец.

За критерий анфавдионности принимали наличке характерных цитолатических нзкгнзний в ионослое клзток, которые проявлялись норусенпеи связи между клатхами, их округлеш-си, зерклстостьэ и вакуолизацией цитоплазмы, отслоением клеток от стекла с образованием просветов в ыонослое в течений 24-48 чесов после ннокулядаи ,исходной суспензия. В чувствительных е возбудители аденокатоза культурах клеток шфекшошая активность составляла 4,Ь+0,5 и; ЗЩ^л/ил. Вяруссодердадай материал первого пассана р.азруиалк трехкратным- завораживанием при -20°С и оттаиванием при комнатной температуре и проводили лдедушкй пассаж. Для резистентных культур клеток проводили три "слепых" пассажа и, в случае отсутствия деструктивны* изменений, работу с

шагл арекрсзали, а в чувствительных кулмурах клеток иеслз-

дозакхя продолжала до исчезновения вдтошмготшого о-^окта, Реагируйгке культуры клеток изучали под электронным микроскопа», Содеряазие вирус кзолягп лиофализярозавя,

X.I. Чувствительность некоторых яультуп кяетек к гозбуцитолв аденоиатоза овец.

fr ' - - Г J "Г

3 ~ < '1 ' С ~ 3 ^ „ ) Г

» йр, тж-бё*, ао-гЛ пзжs псгх » мог

Г~ <*) Q Г Г- п

1 *'T3VU7;iSIC:-:3 HOi-'O""ГМП'Я' ЯП DC'Ki

, t4

.пл.

ГОК к-

)'

с

Ч С

. 11 i 'Т

а

Т!1.1^д/нл, которая убивала :с *рзтш.?у лксагу, з четвертом пгссЕ~та ре&та«! owtyrcsnonars.

В культурах клеток 12JK-6S5 •: кгксш:< ВНК наблюдали слпбкй ЩЭ после (закуляпш еуспекзпк, ко?ср:гЗ арщтхя^п '■¡аъ з.пстеи п второй пссезяв з пределах ил. Kpcvs различий 5 ш$8:й$й>кйаЯ «вгизносяг' ЮЙ—нЬГ% суспензия з поречкслонкш: культурах xxstcs отгтечали' разный сроки пролзлг.г'.я десгрух'пшншс изменений. Та:с, полное разрушение «онослоя в культуре клеток ТЯ и ТА наступало спустя 24-43 часоэ посла инокудяцаи а а перззивае-шя яультургх алэтох ППК-665, П0-2,С-$В!?у? UCFK а -кексах ЕНК спусгп 96 -чогоз поела янсвдзяда». В кулыурэ кле?ок -ПЭЛй дсетрухтазшз' usxemtzm разаизалйеь. на сроткэсегаи 96-128 ч&соз. ■ •

Электронной еакросгсопией ульгратонтлх -сргзоз гпфа-цароештак клгтоа 0бнаруя.1зэлн глруснке -чаатада по -раз-; . .кереа а корфойопш сходннз с ретрозчруссгя. ■ В г.ошгро:г-ькцх;

г-, -л

. культурах- teseTOic подобных вирусных но обнаруживали.

Тада? образом, по результата.! инфэглшошоЯ активности кзолятоз к срокам проявления ЩЭ для выделения возбудителя аденокатоаа'наиболее чувсязительиши являются первично--трипсшмзкрованные культуры-клеток ТЯ и ТК, особенно подученные от ягнят и козлят 1/2-2-мееячного возраста, а тааее. перевиваемая культура клеток D.3AK.

1.2. Отологические и штохикичвекие изменения инфицированных культур клеток Iii и ПЭАК.

Обнаруженное различие в чувствительности исследуемых культур клеток к-возбудителю аденокатоза овец, а также резистентность некоторые'из них, по-вкдиагому, обусловлено морфологическим составом монослоя культур клеток. Установлено, что независимо от происхождения эпителиальные клетки рейгировали с проявлением ЦПЭ. .

Отологическими, 'методами обнаружила, что в Ш-УШ суб-паееааах первичных культур клеток ТЯ, а также в первичной ТЯ, полученной от баранчиков старше 2' кесяцез, .в монослое преобладай? или присутствует фибробластяие клетки. fyatam-'кь. деструкции-конослоя подробно изучена в первичной куль-.iyps' клеток üffi, Спустя tí-IO часов поело инокуляции суспензии отмечали зершстость и вакуолкзаш» штоплазмы, округление' единичных клеток, смеоение их ядер к периферии клетки» к ,16 часам .гиперхром&тоа и пикноз ядра, базефилию •■штоплазкы, отслоение.округлившихся клеток,■наруаение . целостности ыокослся с образованием просветов. К 24-4Й часаа шкослой был полностью разрушен, на "стекле оставались единичные островки с клетками, отдельные бааофкльно-. OKpisevnrae структура и клеточной детрит. Подобные измене-няя конослоя культура клеток Iii наблюдала и при пасеиро-.'; ваши вируса.

Аналогичные изменения в кошелое, но в более поздгме срою?, развивались в культурах клеток ПЭАК, IÍO-2, [1СГК, ШИС-65би ыекеик.ЬЬК.

Изучение. интантных и инуицированимх культур меток с.поиошью' щтохиыических реакций показало значительное отклонение в инфицированных клетках гликогена, бс.:<1.

- là -

нуклеиновых кислст, липидоз а некоторых ферментов.

. Содержание гликогена .в интаятной культуре клеток ТН на про?яненюг72 часов оставалась постоянный, а в-инфицированной его количество снижалось спустя 12 часов после инокуляция суспензии, к 24-43 часа;! он пракигческя отаутстзо-вол.

Бзлоксодержааив структуры окрггавадксь а серо-чернаЯ пвет в интактной культуре клеток ТЯ, а а тфшгфо&анноЯ в черно-коричневый,' послэ -разруаения'клеток йа стекле оставались следы белка черно-коричневого изота.

При, окрааивани» по Браое. в инфицированных клетках ТЯ • отвечали гиперхроиатоз,'усиление интенсивности сккв-зеяе-ного окрашивания ядра, а цитоплазме скоалатв круцггсг ярко-красных гранул РНК. В округливаихйя клогяах Ьитопя&з-иа имела однородный интенсивно кросннй пзет. ' .

В шфидарованшх культурах .клеток . ТЯ, ПЭАК» .ППК-666, ;Г6Ы'у наблюдали накопление больного количества л*.! пи доз s форме различной'величины капель'черного usera, которые часто заполняли всв иятоплааму, а после ягзяса' клеточной мембрана обнаруживались в виде агрегатов' виз кхехкя.' В контрольных препарата кировно вкяэчошя били набольсини и равномерно распределены в клетке.

В инзипнровадаоЯ культуре клеток ТЯ отмечала увеличение активности кисло,1 и щелочной йосфатаги, сукпянаг-и фоефатдегядрогеназа, а такяэ 'х<?лкнзсгерага.

. Таким образом, штохдая!ческие рзаяциа позволяла выявить значительные отклонена,*; в кетабалигио пкфишро-. ..ванных культур клеток. Подобные йгазкенал- при репродукции различных вирусов в йнфигаревашЬсс культурах клеток с разними. 'сроками даяанияи процесса нЕбдгдаги Й.Ц. Жданов и С.Я.ГаЧдачосцч (19?4-1975гг. ), О.Г.Аадаапаридзе 11972,1975 гг.), й.Я.Кзриыаева (1980г.), Л«Н.Носач и И.С. Дяченко Ц9Ь2г.), А.Г.Букринекая (1974,1^3 гг.>, а такко G.Qcurat (1Ш4г.) С 37 -40, лейкекня Франца, вируса висна--маеди).

ÍWL

1.3. o?i:cat;H»s:vj.o исследования

'Ш h ПЭАК. ' ' -

.» с „ » !L

-J r 1 H "**

^ w vi1 ^ t- ^ i

EJicra:, йдрл крудкыз, овальгаз с xoposo проси&т/ ■ Ядслззсй fipo^iTiiH в ;:np;:oriii.iiMS расиред^лс оно» кдриж.: хгжеу^стзаз&Лл с ко;з:«ес?вз ог 2 п.с

о. j

V/ V л

xü^pa^s p^pyuüi-r.í.í sr.í крлст к прос^етлйния иглрикаа4

iiOni-üím^! itíülüEb ЛЙПВДОЬ sí Cij.SpOCOIíaiK Jí ИХ ЭКйОЦИгОЗп ЧйрЯВ

V V 1,, - » O i i . 1 1

- — , í ~ * i _ структур.

ЙО isojkí своего рмшиткн в ш:$зкшшкйдй процесс вовле-коелсь eso koess ¡загочккь элемента ц к 24-ФЗ чаеел отвечали почти noJHios р&зруше»гае коте доя, в поле зрения обна-руаквалл ашь отдельные клеточшз коипошяии

Свусгя 18-24 чгга после гпюцуляцяи исходного патологического ыаа-ераш» к его пер^ш пяти п&есазеЗ можно было би-доуь ерздц pcspyséiaax структур клеток вирусоподобные час-екца. Оал tsssa сфзрлзескуэ Форму, овольчуэ, pese 2-ипа ра-кекш. Размер юс кэлгЗсдая от ВО до 135 uj¡. Встречались де£оряфоггшаз часгаш до 150 н,у . Бириони имели трехелой-пуа сборочку, состояли ко наружного ц внутреннего капсида. р&экэй сскаофзлыюста. Разпар цуклеоида составлял 40-60 ни, раешша»ахза он цзитркчпо, эксцентрично л jatea округлую клл овальыуа форлу. йз.позерхиаста оболочки иногда простат-

ряваагеь сшшкк. Встречали частаца, надошшаад'е §орзгу ••".'' бублика - из двух двуслоШак мекбран.

Варускке чаеэтяза обнаруживала .з гааяоялаамо -клокот одиночно или по 2-3, варьировали как по форме, так.и по размерам. В материалах, первых.пята nacfcaselt кожно было наблюдать вхфуснке частици ка различной стадии своего развитая: зрзлгэ с осетофилькнн нуняеоидом, без -нуклеййда и форм-фуй~иеся белковые структуры, сходнее с оболочкой. гаруса. После•пятого'пассажа вирусных частиц обнаружить не удалось, не наблзгдаш • и образования виропяастса. Вирусные .одежда' тяааяятл только в период наиболее ярко зыражы'псгс, до 70!? и более, деструктивных изменений з монослос- кдзгох. Ь отдельна: изолятая, наряду е тетзотгсачзтя .часящсг^*, . вцделяли вкриош по разкерет я кор&ологкя ,'сходш» с гез- • несБйрусон. •

3 ю^гширозакнкх: -культурах айатоя ЗК и ПЭАК били об-каруяе"ч чяриокн до 150 h,:í , акалогнчщз там, что вкязяа-' яись -в .культура ккегок 'ТЯ.

1.4. Эксперикзнтадьноо восктроизсодшз адено-катоза у овец, ягнят а кроликов,

Для воспроиззедегая болезни з оксязрк^аетаяькых ус-xasasx вкгаряя BHiSiBSn'l било поставлено трн освта на'оз-цззс а ягнятах и три опнта на лрсимязх» *

Работа- прозодклась'совместно со старзка научай! сотрудником Брзгинкм Г.И. и научная -ебгрдозшол Бапассзкм Á/B. . - ...

В гачестэе sarjsinstoiajoro пяруйсодерхсзвго матэралА испэльзсзахя lGí5-jsb суспензии из пораженной • гщежягатоэса ткани легкого больной оясй,'. а тахко. аи^ссодерввдиэ кулъ-а^аяькыв-йзоЬян'пврзвх-.'трзх ir&ióezeñ' на кулыурз клэтоа ТЯ. Опухоли отбирали от овец рз^пиоисксЯ породы з созхозз "Шойбулаяекяй" Карийской АССР з возраетё 2-3 ■ с &лияа-necíocsi лряенгшаш 'едено?;атоэа, лодтзерздекного. .гястолв-' гичесЕ1ш исследованием ткани легкого. .

Инфекционная .активность материалов была у.о iztte . 3,5+0,5 /t B4%q/ms. Культуральнкй изолит возбудителя аденоаатоза овец получали на культуре клеток "И cjsrrarKS

ПЗиЗЫс- ТрЛ ...с,... л-,,.-;: с. .Л;..».;!..; ч--'. - .: .

осветленного кульгурального шо.ж:. е пойлог^гг^й обработкой его г - г" г -ч^-х

ролашя I гр " ^ .1 П10 1 ч ^ " ~>г

е-тьв 1,Г< »' I о. о ч. (.

гГ-^-Г'О'"'1"" --------- - .......— р" I....... 'Т- •-

, * 3 I ^ ' > г ,

I 3 > „Г I „ Г" ^ 1 1

í 0 с. >

^ » 1С 1 Ч * С

¡-С Сч- ЧГИ ) "с ^

- V: . >Ч<: Г . 1 . I.; . • . . ... ' . - „"...>! /.'*'.

сус^ала;:« нэрг;ша>Ц'лч> лигкиго оу ЗдО^мош; у^аы.

Зараженные тавотняе находил::», г г и

года до 2,5 лег, у гах екедношо 1 [ ~ - ^ 1 . .тела, одкн раз в ¡,:ееяп брали пробы крови для снализа образования антител б разработанной иаыц рзакшк РИД. В результате эквперкуеитов удалось воспроизвести едеиокатоэ у овец к ягнят при зереявшш кх Юй-яок суспензией к культу-ралыш.к вирусеодерж£з;ши материалами. Откачали характерна поракзш:г. с легких у 20-30й-ой йи^иияровйщшх животных.

Использование для 'заражения кокцектрирввашшзс вирус-содерказих материалов позволило увеличить количество больных шгвотшх до 60/о. Установлено, что ягнята более воепри-1У"чП-:ви к аденоматозу, чем взрослые особи.

Кроме того, в результате ишунизавди с использованием концентрированного вируса^еноматоза удалось воспроизвести болезнь у кроликов с клиническими-признаками и специфячес-'ккиа пораяенит». клеток ткани легкого.

Серологические исследования сывороток крови ин$иииро-йшкшх еивотньк методом РВД показало, что в них появляются препиттруааие антитела, которые выявляются постоянно, происходит выпадение реакции.

Из патматбриалов проводил;! выделении возбудителя адеиокатоза в культуре меток ТЯ, активность суспензий бала .ш шее 3,5+0 ,Ь и; 'Щ^ц/ил, а з электронном микроскопе обнаруживала вирусные час^иы ас размерам и мосф-э-Логкк сходные с ретровирусами.

I.b. d^eîtTponHO-tsumocKommecîGie кседадозанля яорзхекн&х адваох'ауопой гякквЗ легкого спонтйкко большее л окепзои:"вн?адьш зералелшх овен,- яг>иг -л кроллкоз»

Ир:: rizQKVTiúvmñ гжхеоскошж п опухолях osen, ягнят, крзжгссз, заразегааас зозбуяягелзн зд<шокатоза, кшс сувпек-

я 8у.*ьгураяыаггк иэолктеггд кйблздаж вдек-тач$гхе поратеюл а клегкзх опухолей. Ï0k;:c порягошш бвия характера я для сяонтваяо боляпгс аденеадатогом овей; большое колйчевтао jbîsocok, взггуо;2ей» рагпягзлгняа newdpft-' ш ялэтгги, otsk шгошйзгш, к"о™есгзо 'лгкротрубопгк э из тог: лазке, разркэ дсспооом к утрата ^ЗаКл^'гощггя езяэзЗ, Б гшшяезкз клеток и срзцк рверугвккцх струлуур повлэ лизпеа клеток вида: влруешй часги?т разной ков|«гурагйи, по 4op"s сходкыо е частаисгтд тала А,В,С *л Д ро-тровкруссз, о? 120 до 150 нй. В огдеяьких едучвях нйЗлгдшд яочкутпо~ ся ôopî.si, Чезз всего встречались ^гстииьехрааа с psrpo-ппрусаглк sma tí. Kojspîcô?so ггфкокоз бшго ггежогеткслек-нна 1-3, рзЕэ 5 fin клэтку, Вироаластн не яаблздатд» В сгя-экс же вкделйгяя?: кэ косових полостей болыгж osen з r.:5.rt~ рсфагах ебкарргдзали гакае кз внрлош.

В оедвлыш пробах наряду с рзтрэз'лрусг«з' обнарут.гл-saat sstpyojsîa частэдз по корфодогки п разшрад (210-300 Híí) огкоеязаеся к ггрлеевируегл.

1.6. ilfteii?Kfeiaacaa спецяфг-гееекого ангагека адекоиагоза в шфиЕПЗовсякоЯ 'кульгурз ¡глэток

Дяя зденглфияаша спапдф"ческого аагагвка о&епо'лз.-тоза в шфодроеашой кульгурз клзгек ÏH шзехонялп npmcîï к непрямой метода фг^респзруэдх ентагоя.

В аряиом USA иешш>зов&га ШЦ-аокаипата ккмуиоигобу-лияов, шдутешыо из сывороток болькж' кролааоз, шг^угеюя-ровашшх возбудителей адононатоза. Шя^укоржзбуззаш пояуча-лн с помощь» въкалкзаккя серкокяелзга '«згаияем, считали о? соли диализом, пропускав через ДЗАЕ-йзлдэдазу, собирала бэлокеодертазке фракции и метили да ФШЦ~е:1 из расчета на X0D0 мг белка 2а-30 красизоля. Еояызгшеш проводили

сри 4 С а течение 16-18 часов, э качестве наполнителя использовали тальк (9 ч талька к 1 ч ЖЕЦ-а). Избыток талька удаляли центрифугированием, 'избыток -красителя гельфилмра-даей в колонке с сефадекеом Г-50. Перегруженные Щ-ai бедки отделяли хрохатографией- на ДЕАЕ целлюлозе. Выход §ШЦ-коньвгата контролировали на спектрофотометре с .длиной водны 280 н,;; . Выход ШЦ-конъагатов проходил дВукя 'никаш. Фракции обоих пиков объединял^, фасовал:-! по I мл в ампулу к лиофилизировалн. Консервировали азидоы натрия.

Активность' ®йи-коньвгатов определи с помощь» нифн-дарованной культуры клеток Ш. Коньвгаты титровали в раз-веденгшя -1:2-1:126. Ставили пряыу» реакцию имцунофлуорос-цзнкаи с соотзетствуиаиии контроля!®: кеин£нтарованкая 'культура клеток, обработанная коньвгатоа; инфишрованная культура клеток, обработанная.гетерологичнами кокьюгатаыи: КЛО, ДЦР, болезнь Найроби. В контролях - флюоресценция отсутствовала, а в опыта .титры-составляли 1:32-1:64. Рабочий титров ШЩ-конъагатоа считали. 1:6-1:16 и проводили реакцию опытных культур клеток для идентификации-антигенов.

Для непрямого -Ш?А использовали немаркированную.сызо-.ротку от больных еденокатозом овец в разведении 1:20, а в качестве онтисидовой - га;.о,:а глобулиновув фракцию сыворотки кролика к одтибвраиьиы 'глобулинам, каченную 3$ТЦ-еа, по^ученцуо из института им.Н.Ф.Геиалея.в.рабочей разведении. Для подтаерздеиия спэшфлчнося! использовали необходимые контроле. В результате исследований в перзыз 6-8 часов поело юфаировеная в цитоплазме клеток обнаруживали специфически светящиеся грздулн, которые со временен укрупнялись, заполняли весь объем' Елтоплазш, а в округлившихся . клекак свечение наблюдалось и в цитоплазме и в ядре.

Сравнительна» .акэдз инфекционной активности и локаш-' ведш специфического антигена с электронно-кикроскопнческн-izi цсследозакцки инфидарозанной культура клеток по часам показала, что ош обусловлены вирусшдщ частицам.

Tai-да; образом, обнаруженный в .инфицированной культура Елотоз вирус является'-воз'будителси оденоматоза (он содержался в tküzs легиого спонтанно больная: аденокатозои овец,

* * - ^ а 1 . •Jг I

1 - -V ч г г г ~ ^ г п

<1 . > 'г"^., } ^ - ^ I * 1, ) ' ; " " Э

, \ г-, ~ ^ - ь "'-'Г '/"О.и)

• ч" " л.-ог ''' ^ о?" ! я;-" ^-з «», Рм-<>з<

О ПС' ^ Г 3 -ч~< «р-^, - ¡"Т'

Д.Л 1»Ч"> 1д~>о т -5 Г Л "•'-су "У" ОЗУ 5 вируса аденсмагоза.

йожучвюш препараты ггуклешюзой кислота из разруза-дксь ДНК-азой, но деструшровшги под действием РНК-азн. Седгагеитациоикий слзлиз фракций с зкстшшдей Ез^/^г"о з пределах 2,25+0,35 -- 2,63+0,4 по сивктрофотокетрии располагался в диапазоне яяазучей плотное?» Х,59-1,ь2 г/см3-по хлористому цезиа, что соотзетстоус? плотности РНК, Уода» куляриая-игсса цухяепнозой кисло«! ссетазлязл 5,25£0,05МД.

•' Бадацбошй.А,В«; .бнда -определена- в ссетаэз г-ггруса . офзвяная' «ракзкрйптазак.-

;.' ''результаты вляяния разяпчнш: фкзико-хиапчес-

ках- факторов '.на возбудитель адекоыатоза овед .отмечали,.что. вирус чувствителен к РНК-аае, протеиназ'е-Е,.саркозилу, фенолу, Полностьв шактивнруется при арогрвва>жи до

80 С в течение I часа,

Таэтш образом, выделанный в культуре клеток ТЯ вирус даляезся. 1Ш-содераеа1Ш, икосеэдряческой формы размером Ш-120 Вирусесдерясадае препарат обладает активноетья обратной траискриптазы, которая, по-видимому, входит в состав вирконсв, С.«х поиоаыэ воспроизведена болезнь у овец, ягнят, кроликов. Перечисленная признаки- дают основание отнес та адделениый агент к семейству ретровирусов,'

2* Разработка методов прижизненной диагностика . аденоматоза у овец.

2,1. Пожучеше. спешфкческого антигена аденэ-.катоза-.в культуре клеток Ш м использование его в: реакции ЩД;.

Идснпгфнкация специфического антигена в .инфицированной, культуре клеток Ш показала, что он нахваливается в Ссдыю;.: *Ьлачестве, особенно внз клетки. Это послужило ос- . щваШея-'длд разработки способа применения культурального антигена в диагностике адэно&атоза овен. Иаиболез простым I: доступкш кетодои является реакция радиальной идаунодаф-фугйи по Ышишти Принцип метода сснозан на реакции препи-цитСдий незду диспергированные в гела агара стандартным 'антигеном и внесенными в лушш стандартными и испытуемыми ензоротшл!, содержащий антитела к данному антигену. От количества коипокентов зависит характер/преципитации, раз-пар диаметра кольца пряко пропорционален количеству антител. .

Для приготовления прешпитирутаего антигена использовал;.', кудьтурадыуй Екруссодсрязауи жидкость первых трех пассохей на ТЯ. Материалы трехкратно перехоранивали з присутствии 7,2%-ного содержания Пасх , осветляли при 6 тыс. об/кан в течение 20 минут, проводили инактивадиа '■:.<% лод

яакпоЯ БУФ з течение 20 минут в кварцевых кюветах на расстояния 16 см'О? ла?яш,' материала проверяли на стерильность, разливали по 2 ш в ампулы, и лиофнлизирЬвали. Для контроля специфичности использовали гетаролог..чнис- сыворотка; от больных овец Ю10, Найроби, ДДР и др,, а также прикипали за стандаитну» сыворотки трех заведено положительных на адеко-кетоз больных овзи,-. образукшос четкие кольца прощпнтагои с культуральнш антигеном адеиоматоэа. Титры культуралького прешпитируазего антигена составляли 1:64-1:128. Для реак-пии радиальной нммуно.дйффуэии ш рекомендован; 'использовать антигены в разведении 1:32, поскольку это наиболее оптимальное разведение. при котором, в случае большого количества антител в сыворотке, фетокен прозонн уже переходят границу, а а случае малого количества .аняител кольпо преципитации четко выявляется.

Сравнение культуральнызс и суспенпиокзпгс изолятов показало, что культуральные наиболее пригодны для приготовления антигенов, поскольку она свобод»! от гетерологичшес антигенов, приеутетвувкявс б суспензии. Побучены несколько ссрнй антигенов, активность их сохраняется при 0т4°С а.течение пятя лет (срок наблюдения). Разработан диагностический набор препаратов для выявления изфнироваякых адечоматозсгм тавотных. Метод диагностики аденоматоза просел пе~.ведом~ ственкке нсяетания (акт от'карта 1983г.). Наработана, опытно-промышленная серии "Набора" согласно утверждеикьк ГУБ в'19Ь5р. ЗУ 1М620-1Х27-Й6, которая проала проверку госконтроля (паспорт от 27.11.86} и использовалась в-ряде хозяйств Нечерноземной зоны для диагностик! сдендаатоза у овец методом РИД.

2.2. Отологические исследования слизистых

вкделенкй из носовой полости шфпздров&шшх аденом&тозом овец.

При аденокатозе овец характерном клиническим признаком является серозно-слизистые выделения из носовых отверстой. Однако такие выделения йогу? быть и при заболеваниях верхних дыхательных путей к пневмониях различной этиологии.

й связи с этим для прижизненной диалтостики аденоыато-за и дифференциации его от .других болезней, зопровоядегаихся

поражениями органов дыханяя, представляло интерес изучить возшш&ть использования ркноцатологаческих иссагедований -слизистых выделений на носовых путей.

Для исследования отбирали латматзриал (славястш выделения) от 30 озец с признаками поражений в .легких к от здоровых животных. Пробы отшвалн трижды в физраствора, готовили иазки, фиксировали их в спирт-зфире и окрсгзшалк по Ршановскому-Гииза,

В глазках от - здоровых юшотких при прасготре под им-«ерсией в поле зрения отмечая,! бледно-розовые эритрошт^, темно-окраяеннке пергракденныг и окертвевда-з клетки покровного эпителия, тикфоштк,.сегиентоядерные лейкоциту и ыакрефаги.

У больше адекоиатозок животных в ¡лазках крс:.:э перечисленных алешнтоз обнаруживал»! шлодк^ерекхщюааикиа атипичные строения клетки эпителия альвеол и бронхиол. Такие клетки имели округлую,' призказическу» пли шлиндр::-чоскуо форму с эксцентрично расположенным, гшэрхрогягш ядром и шрокой.светлой цитоплазмой. Хрокатики ядер колко-глыбчатой структура. Встречались двуядернне клетки с фигурами «итоза. Отторгнутые от опухоли клетки выазке располагаюсь одиночно, группами и цельши когщлзкееш з виде аалисадообразках структур. Обнаружение таких клеток свидетельствует о наличии нзопластического процесса в легких.

Контрольная убой савотных, в казках из слизистых выделений г.оторцхобнлрудЕаз5атиш!Чше клетки, показал, что у них присутствую? характерные для адеиоматоза опухолевые пора-.:ск:я в ткани легкого, а гис то логически!-: исследованием установлены селеэистоподобше структуры.,

В рзакцгш РОД а сыворотках крови от этих животных выявлялись 'превдпи^арушке антитела к антигену еденокатоза.

Такта образом, дгя диагностики оденохгатоза могшо использовать ршовдтологмческий катод исследования в период клшютеской стедш проявления болезни. .

2.3. Разработка схе;® диагностики .болезни у овец и предложения по оздооозлени» хозяйств о? аденснатоза*.

Борьба с аденойатозом до настоящего времени бала затруднена, поскольку отсутствовали метода прижизненной диагностики болезни.

Посла разработки серологического метода приязненной диагностики ■ адекоиатоза у об-эц нети бнла предложена схема, в которой предусматривалось двукратное серологическое обследование взрослого поголовья 038И на аденонатоз с после-дуплей выбраковкой серопсзитивккк животных. Апрс-бакни метода и схекы диагностики с шлкэ оздоровления от адеиоиа-тоза начали проводить в совхозе "Шо'йбуяакехий"- Марийской АССР с 19Ь2 года, где 'после первого серологического обследования з ХУЫ г. было выявлено 18,9% серопозктлвшх ' зевотных.

'.I настоящему врекэгаг а совхозе 'выявляемся до Ъ% серопознтизных к адекоматозу овец, а хозяйство из убыточных перешго з разряд доходных. Это свидетельствует сб эффективности использования предлагаете методов для оздоровления хозяйств от адснояатозз.

Кроя® того, тш проведена исследования на-адено-катэз сизоротхк «роЕк от 2155 овец, полученных на хозяйств Горьковской, Владимирской, Ярославской, Вологодской областей,- Алтайского краэ и других регионов страны. Иееле-дова-ия' показали, что аденоиатоз кшет кесто ао всех указанных областях, но процент поражений стад значительно варьирует,'что по-зпдкмому зависит от технологии ведения овцеводства, породы кизоттяс и других факторов. Все это свидетельствует о необходимости проведения оздоровительных мероприятий от аденоматоза з стране. •

Таким образе«, применение разработанного назгл нетода серологической диагностики с использозгишеы преодпятаруэ-аего культурального антигена позволяет выявлять -кивот»шх вирусоносителей яденснатода. йетод может быть использован для оздоровления хозяйств от лденсмагсза и для формирования свободных от. аденсаатоза стад овец.

12. В Н В О Д Н.

1. Подобрана чувствительная культура клеток для выявления к идентификация' возбудителя -аденоматоза овец. Вирус вы»

' деляется из суспензия порайонной адекоматозои т.*аин легких овец в.пэрвично-трипсшглзированкой культуре клеток тестикук ягнят 0,0-2-кесячяого возраста на'протяжении пяти пассажей.

2. Изучены некоторые биологические свойства возбудителя аденоматоза овец:

- установлено, что вирус размножается в. культуре кле- • ток Т;". накоплением до 3,6+0,5 (е ТЦ^ф/ыл, прк пассировании титры инфекционной активности сдажаятся к 6-8 пассажу;

- при.репродукции в клетке вирус вызывает нарушение кетаболазка:' .увеличение содержания РНК, липидов, белка, снижение количества гликогена, повшеше активности кислой к щелочкой фосфатазы, сук^нат- и фоефатдегидрогеназц, ходнвзс теразы;

- еируесодержаяше материалы (культуральный, концентри-ровашшЯ- и очищенный, суспензия легких больных овец) при кнтратрздеальном Введении овцам по 10 мл и ягнятам по 5 мл .вызывают у животных в течение Г-2,5 лет специфические для аденоматога поражения легких в 20~60%~ах случаев;

-'в влруссодерхедей культуральной жидкости обнаружены прс^питируюзие. антигены в татре 1:32-1:126, обеспочивавпие эффективное' выявление инфицированных адекокатозом животных по реакции РИД;

■ - идентификацией специфического антигена аденоматоза ШК/установлено, что его.накопление происходит в цитоплазме шфщяроаанных клеток; . .

- вирус, выделенный из суспензии пораженной оденомато-зом ткани легкого, вызывает образование железистой опухоли у оксперииентально зараженных овец, содержит в своем составе РНК и обратную транскриптазу, по устойчивости к физико--хдаическим-факторам, размере« и морфологии характеризуется как ретровирус.

3. Подучены ®Щ-к6кьягаты иммуноглобулинов из сыао- ■ ротки больных аденоматозом кроликов с титрами 1:32-1:128 и показана зозкогхность их использования для идентификация специфического антигена возбудителя аденоматоза а инфицированной культуре клеток ЗЯ МФА.

4. Определена пршгтическая ценность риноцятологическс-го метода прижизненного выявления яивоткпх с клинически вы-ра-кенными формаик болезни. Обнаружение в кееовых слизистых выделениях больных овец опухолевых клеток с учетом клинико--эпизоотологкческих данных позволяв? ставить диагноз на аденоматоз.

5. Разработан метод РИД. изготовлен "Набор" препаратов для прижизненной диагностики аденоматоза у озец и предложена схема его использования для оздоровления хозяйств от этой болезни.

ГУ. ОРШШЕШЕ ПРЕДЮШЯЯ .

Разработаны и утверждена ГУВ:

- Технические условия $ 4620-1127-84 на "Набор препаратов для лабораторной диагностики аденоматоза легких овец методом радиальной кммунодиффузпи (РИД)" от 28.11.84;

- Временная инструкция по изготовлении я контроля . набора препаратов для лабораторной диагностики аденоматоза легких овец от 28.11.84;

- Наставление по применению набора препаратов для лабораторной диагностики аденсиатоза легких овец методом

.радиальной иммунодкффузии (РИД) от 02.07.85;

- Временная инструкция о мероприятиях по борьбе с аценоматозом овец и коз от 18.11.85;

- Временные методические указания по лабораторной диагностике аденоматоза овец и коз от 02.07.85;

Предложена "Схема лабораторной диагностики аденоматоза овец с использованием диагностического "Набора прз-паратой".

Материалы диссертационной работа иогут быть использованы при написании монографий в учебном процессе зооветеринарных вузов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ даССЕРТАЦЙИ

1. Транспортировка культуры клеток тестикуя ягннт

/ Агибалова А.И., Коптева A.A., Брагин Г.И. и др. // Вопр. вет.вирусол.,ыикробиол. и эпиэоотол. Тез .докл. ВНШБВиМ, г.Покров.-I9ö3.-C.175-176.

2. Подбор животных доноров для культуры клеток тзсти-кул ягнят / Агибалова А.И., Коптева A.A. , Брагин Г.И. и др. // Вопр.вет.вирусол..ыикробиол. и эпиэоотол. Тез.докл. ЩШЬШ, г.Покров. -I9B3.-С.177-178.

3. Дктолатогенное действие тканевой взвеси из адено-матозных очагов легких овец на различные клеточные системы / Агибалова А.И., Хкжинекий П.Г., Коптева A.A. и др. // Вопр.вет.вирусол., ыикробиол. и эпиэоотол. Тез.докл. ВНШВВии, г.Покров, 19ЬЗ, сб.ДСП £000040.-С.15.

4. Экспериментальное воспроизведение еденоматоза овец / Брагин Г.й., Балмасов A.B., Агибалова А.И. и др. // Вопр. вет.вирусол., микробиол. и эпиэоотол. Тез.докл.ВНИИВБиМ, г.Покров.-1965.-Йнв.» 522.-С.47-49.

5. Цитологические изменения в культурах клеток, инфишрованкых суспензией из пораженных еденоматозом легких овец / Могильный J0.M,, Архипов Н.И., Агибалова А.И.

и др. // Вопр.вет.вирусол., никробиол. и эпиэоотол. Тез. докл. ВНШВВиМ, г.Покров.-Х985.-Инв.# 522.-C.50-5I.

6. Архипов Н.И., Колосов Ь.М., Хижинский П.Г. и др. Изучение роли вирусных агентов в этиологии болезни овцематок романовской породы в комплексе "Марий-Эл". Научный отчет по теке Ю5.06-С6.08 программы 0.СХ.95, инв.» 49/95» г.Покров, 1985г., 65 стр.

7. Электронно-микроскопическое изучение культуры клеток ЗН, йотированной суспензией из пораженных аденоматозом легких овец / Агибалова А.И., Симонова Э.Г. // Вопр.вет.яирусол,, микробиол. и зпизоотол. Тез.докл. научн.ко|4.ВЙЙИШиМ, г,По|фов, 1986, инв.^629.-C.8-I0.

tí. Цитоморфологичеекие я цитохимические изменения в культуре клеток ТЯ к ППК-66К, щ-фиЕированшх суспензией из пораженных аденоматозом легких овец / Агибалова А.И. ' // Вопр.вет.вирусол., микробиол. и эпизоотол. Тез.докл. научи.конф. БНйШВиМ, г.Покров, I9ö6.-Kh3.S529,-G.14-15.

9, Эконошческая эффективность от внедрения "Набора препаратов для диагностики аденоттоза легких у овец методой РИД" /Братин Г.И., Балмасов A.b., Цииароза.Е.Г., Агибалова A.M. и др. // Бопр.вет.вирусах., ми'хробноЛ. к эпкзсотол. Tea.докл. tíHKHBBstlí, Покров.-190б.-йнз-.^Ъ29.--С.64-67.

10. Цитологическое и т-олунсфлуоресцентиоб одявлёиие возбудителя аденоттоза овец з культурах клотон / Агибалова А.И., Симонова Э.Г // Tea.докл. на патолорзанатч, koi$. г.Caparos, Í9c¡?.

II Лрхипоэ Н.й., Колоеоэ .13.Ii,, Братин Г.И. « яр. Усовершенствование лабораторной диагностик!! аденоаат-дза овец. Научигй отчет по .теме 1? ?.1-6-06.-Инв.$ 75, г.Покроэ.-19Вй.-С.Ю1.

12. Архипов Н.Й., Братан Г.И., Агибалова А.Я. и др. Разработать и внедрить инструкции о мероприятиях по профилактике и борьбе с кедленнаки инфекциями овец. Научный отчет по теме Р 00.04 ДЧ„ 'программа 0.СХ.62, инз.# Б?, г.Покров, 1990.-97с.

Jl.utS**- 'у ,