Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биохимические свойства фенольных соединений некоторых дикорастущих растений Таджикистана
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические свойства фенольных соединений некоторых дикорастущих растений Таджикистана"

На правах рукописи

РАХИМОВА ФАЙЗИГУЛ АМОНКУЛОВНА

БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НЕКОТОРЫХ ДИКОРАСТУЩИХ РАСТЕНИЙ ТАДЖИКИСТАНА

03.01.04 -биохимия

2 6 ДПР 2012

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

і

005018035

Душанбе-2012..

005018035

Работа выполнена на кафедре химии Технологического университета Таджикистана

Научный руководитель: - кандидат химических наук, доцент

Мирзорахимов Курбонали Каримович.

Официальные оппоненты: - доктор химических наук, профессор

Ведущая организация: - Институт химии им.В.И.Никитина Академии наук Республики Таджикистан

Защита состоится « 15 » мая 2012 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д.737.004.05 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Таджикском национальном университете 734025, г. Душанбе, пр. Рудаки,17.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Таджикском национальном университете.

Автореферат разослан «12» апреля 2012 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Халиков Ширинбек Халикович

- доктор биологических наук, доцент Джумаев Бахшулло Бокиевич

кандидат биологических к,

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность работы. Фенольные соединения - широко распространенная в растительном мире группа соединений, которая в своей основе содержит бензольное кольцо, несущее одну или несколько гидроксидных групп. Фенольные вещества играют важную роль в обмене веществ растений. Они участвуют в дыхании, фотосинтезе; отвечают за стимуляцию или ингибирование роста и развития (растительные гормоны), защиту клеток и метаболитов растения от окисления, повреждения бактериями и грибками и т.п. Предполагают, что они играют роль в образовании иммунитета.

Чрезвычайно широк спектр их биологического воздействия. Они обладают антисептическим, антиоксидантным, кардиотокическим, кардиотропным, спазмолитическим, гипотензивным, седативным, гепатопротекторным, кровоостанавливающим, желчегонным действием. Эти свойства, а. также растворимость в воде, возможность получения водорастворимых форм в виде отваров, настоев обуславливает широкое применение фенольных соединений в медицине и биологии. Этим не исчерпывается значение фенольных соединений растений. Они имеют важное практическое применение в некоторых отраслях промышленности, ■ в том числе пищевой. Современная пищевая промышленность широко применяет растительные экстракты в качестве пищевых и технологических добавок - тпцевых красителей, антиоксидантов, консервантов. Красящими веществами в этих экстрактах являются в основном фенольные соединения, которые издавна использовались в качестве красителей.

При технологической обработке сырья или при хранении цвет готовых изделий может меняться или ослабевать.. Поэтому с целью повышения качества большинство продукции кондитерской, мясомолочной,

масложировой, консервной, ликероводочной промышленности подкрашивается. В качестве пищевых красителей используются как синтетические, так и натуральные, то есть выделенные из природных объектов, вещества.

В настоящее время в различных странах используются свыше 160 синтетических красителей. Не все они безопасны для человека. Поэтому многие распространенные в прошлом синтетические пищевые красители ныне запрещены к использованию.

В современной пищевой промышлешюсти наметилась стойкая тенденция к использованию пищевых натуральных красителей.

В связи с этим научные исследования, направленные на выявление новых источников сырья, разработку способов выделения, условий хранения и применения экстрактов фенольных соединений в пищевой промышленности, важны и актуальны. Эта проблема особенно важна для Таджикистана, имеющего богатейшую и уникальную флору. Известно более 120 красильных растений, произрастающих па территории Таджикистана. Анализ литературных данных показывает, что красящие вещества, выделяемые из них, применяются в основном для крашения текстильных волокон и тканей. О применении их для окрашивания продуктов питания нет сведений.

Целью работы является изучение биохимических свойств природных фенольных соединений, выделенных из некоторых дикорастущих растений, из корней и корневищ ревеня (Rheum iurkestanicum Janisch, семейство гречишные), щавеля конского (Rumex oonfertus Willd, семейство гречишные), солодки (Glycyrrhiza glabra, семейство бобовые) и кизильника (Cotoneaster tnelanocarpus Fisch. Семейство розоцветных) произрастающих в Таджикистане, определение оптимальных условий их выделения, хранения и применения их в качестве биологических пищевых добавок.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- изучить процесс экстракции красящих фенольных веществ из растительного сырья и влияние на нее различных факторов;

- определить и научно обосновать оптимальные условия извлечения фенольных веществ из растительного сырья;

- изучить биохимические свойства выделенных фенольных соединений;

- изучить превращения фенольных соединений при их выделении и хранении;

- и зучить токсичность выделенных фенольных соединений;

- изучить возможность применения экстрактов фенольных соединений для окрашивания различных групп пищевых продуктов;

Научная новизна. В результате проведенных исследований выделены и применены для окрашивания пищевых продуктов красящие фенольные вещества из растений, произрастающих на территории Таджикистана - корней и корневищ ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника.

Исследован процесс экстракции красящих веществ из указанного растительного сырья. Изучена зависимость извлечения фенольных соединений от различных факторов: экстрагента, соотношения с сырья и растворителя, температуры, времени нагревания, способа экстракции. На основании полученных результатов разработан способ получения красящих экстрактов фенольных соединений из растительного сырья.

Изучены биохимические свойства экстрактов фенольных веществ, выделенных из корней и корневищ ревеня (Rheum turkestanicum Janisch, семейство гречишные), щавеля конского (Rumex confertus Willd, семейство гречишные), солодки (Glycyrrhiza glabra, семейство бобовые) и кизильника (Cotoneaster melanocarpus Fisch. Семейство розоцветных), имеющие технологическое значение - растворимость в воде и органических растворителях, содержание сухих веществ, содержание красящих веществ, плотность, кислотно-основные свойства.

Изучены превращения фенольных соединений при выделении и хранении и определена их устойчивость к воздействию спета, температуры и времени нагревания, pH среды. Вьмвлена нетоксичность выделенных красящих экстрактов.

Практическое значение.

Разработан способ экстракции фенольных соединений из растительного сырья, содержащего комплекс красящих веществ, определены оптимальные

условия для их выделения. Показана возможность их применения в качестве пищевых добавок в пищевой промышленности. Апробация работы.

Результаты диссертационной работы доложены на Международной конференции «Наука, образование», Санкт-Петербург, 27-28 октября 2009г.; Ш Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 29 января 2011г.; IV Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 23 апреля 2011г.; V Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 23 июля 2011г.; Международной заочной научно-практической конференции «Актуальные проблемы естественных наук». Новосибирск, 26 октября 2011г.; УШ Международной научной конференции «Наука и современность», Новосибирск, 15 ноября 2011г. Публикации.

По материалам диссертации опубликованы 2 статьи в журнале, рекомендованном ВАК РФ, 15 статей в сборниках Международных научных конференций.

Структура п объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 135 страницах компьютерного набора, состоит из введения, литературного обзора, экспериментальной части, обсуждения результатов и выводов. Содержит 41 рисунков, 35 таблиц, список литературы, включающий 167 наименования.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы, цели и задачи исследования, раскрыто основное содержание диссертации.

В обзоре литературы приведены данные о фенольных соединениях ■ растительного происхождения, их классификация, биохимические свойства, биосинтез и физиологическая роль, а также способы получения их экстрактов.

2. Экспериментальная часть

Экспериментальная часть содержит характеристику растений, выбранных в качестве источника фенольных соединений, методики их выделения из сырья, исследования биохимических сеойств, рецептуру пищевых продуктов, выбранных для испытания полученных экстрактов фенольных соединений и методики применения исследованных экстрактов для окрашивания пищевого продукта.

В качестве объектов исследования при получении экстрактов фенольных соединений выбраны корпи и корневища ревеня (Rheum turkestanicum Janisch, семейство гречишные), щавеля конского (Rumex confertus Willd, семейство гречишные), солодки (Glycyrrhiza glabra, семейство бобовые) и кизильника (Cotoneastcr melanocarpifs Fisch. Семейство розоцветных) Все выбранные растения могут быть источником красящих пигментов, а также других биологически активных веществ. Известно, что полифенолы растений

обладают антисептическими свойствами, следовательно, они могут проявлять помимо красящего и некоторое консервирующее действие.

Выделение фенольных красящих веществ из растительного сырья проводилось методом экстракции. Красящие вещества были получены в виде концентрированных растворов и сухих порошков.

Биохимические и физико-химические свойства выделенных фенольных красящих веществ изучались по известным методикам, приведенным в литературе

Выделенные экстракты фенольных соединений были испытаны для окрашивания некоторых видов пищевых продуктов - выпечных кондитерских изделий, конфетных помад, мясных и молочных продуктов.

3. Обсуждение результатов

В главе «Обсуждение результатов» рассматриваются процесс выделения фенольных соединений, их биохимические и физико-химические свойства, превращения при экстракции и хранении и влияние на них различных факторов, а также применение экстрактов фенольных соединений в производстве пищевых продуктов.

3.1. Экстракция фенольных соединений из растительного сырья

Экстракция фенольных веществ из объектов исследования была произведена дистиллированной водой. 1% и 10%-ным растворами соляной, лимонной кислот и гидрокарбоната натрия, водно-спиртовыми растворами и 96%-еым этиловым спиртом.

Из корней и корневищ ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника экстракция проводилась при кипячении водой, спиртом, водно-спиртовыми растворами, а также слабыми растворами кислот и гидрокарбоната натрия. Водные вытяжки из корней кизильника, ревеня и щавеля конского имеют темно-красный цвет. Установлено, что при использовании в качестве экстрагента 1-2% раствора гидрокарбоната натрия, создающего щелочную среду, получаются более интенсивно окрашенные растворы и сокращается время экстракции. Водные, спиртовые и водно спиртовые экстракты из корней и корневищ солодки окрашены в желтый цвет. При экстракции растворами кислог получены экстракты светлого коричневато-желтого цвета. Это вполне согласуется с литературными данными, согласно которым в корнях и корневищах и древесине лиственных деревьев красящие вещества представлены флавоноидами и дубильными веществами - производными галловой кислота и катехинов, причем содержание растворимых экстрактивных веществ достаточно велико - 18-20%, а у некоторых видов растений до 40%. Гидролизующиеся дубильные вещества хорошо растворимы в воде и плохо - в спирте. При нагревании производные катехинов переходят в производные галловой кислоты, которые в кислой "среде гидролизуются с образованием бесцветной галловой кислоты, возможно также образование эллаговой кислоты, имеющей желтоватый цвет. В присутствии щелочей кагехины и производные галловой кислоты окисляются кислородом воздуха

подобно пирогаллолу, переходя в хиноидную форму, окрашенную в красный цвет.

При экстракции красящих веществ из корней ревеня и щавеля конского водными растворами получаются экстракты красного цвета. Экстракция же 96%-ным этанолом дает экстракты ярко-желтого цвета. Известно, что красящими веществами корней ревеня являются в основном хризофановая кислота и эмодин, которые относятся к производным антрахинона. Очевидно, их растворимость в спирте и воде различна, чем и объясняется различный цвет экстрактов.

В кислой среде могут экстрагироваться антоцианы, имеющие красный цвет в данной среде. Однако полученные экстракты в присутствии кислот практически не окрашены. По-видимому, антоцианы в исследуемом растительном сЕ.грье отсутствуют или же в кислой среде переходят в бесцветные лейкоантоцианы. На возможность этого указывается в литературе.

Было изучено влияние на степень извлечения фенольных соединений таких факторов, как соотношение сырья и экстрагепта, температуры и времени ее воздействия.

На рисунках 3.1. 1-2. представлены результаты изучения зависимости экстракции от соотношения сырья и экстрагепта при извлечении фенольных соединений из корней ревеня водой, спиртом н водно-спиртовым раствором, и из корней кизильника водой и раствором соды.

Рис. 3.1.1. Зависимость экстракции фенольных соединений от соотношения сырья и экстрагента (при температуре 20°С, 40°С, 60°С 80°С, 100 С)

1. Водный экстракт корней кизильника

2. Экстракт из корней кизильника раствором соды

3. Спиртовой экстракт из корней ревеня

4. Водный экстракт из корней ревеня

5. Водно-сипртовой экстракт из корней ревеня

' • • иIо изо

Рис. 3.1. 2. Зависимость экстракции фенольных соединений от соотношения сырья и экстрагента( при температуре 20°С, 40°С, 60°С 80ЧС,100°С)

1. Водный экстракт из корней солодки

2. Водный экстракт ю корней щавеля

3. Экстракт из корней щавеля раствором соды

Как видно из рисунков, увеличение соотношения сырья и растворителя ведет к увеличению экстракции, но начиная с определенного соотношения, она остается практически постоянной

С целью исследования влияния температуры на экстракцию была выполнена серия опытов по извлечению окрашенных фенольных веществ в интервале температур 20-100°С. Сырьё и экстрагент, взятые в соотношении, при котором экстракция максимальна (1:3), выдерживались в течение 1 часа при температуре 20°С, 40°С, 60°С 80°С и при кипячении. Затем определялась оптическая плотность, как показатель степени экстракции. Полученные результаты приведены на рис. 3.1. 3,4,5,6.

Рис. 3.1.3. Зависимость экстракции фенольных соединений от температуры

1. Водно-спиртовой экстракт из корней ревеня

2. Спиртовой экстракт из корней ревеня

3. Водный экстракт из корней ревеня

4. Водный экстракт из корней солодки

Рис. 3.1.4. Зависимость экстракции фенольных соединений от температуры

1. Спиртовой раствор из корней кизильника

2. Водный раствор из корней кизильника

3. Водный раствор из корней щавеля

4. Спиртовой раствор из корней щавеля

Рис. 3.1. 5. Зависимость экстракции фенольных соединений от времени действия температуры

1. Водно-спиртовой экстракт из корней ревеня

2. Спиртовой экстракт из корней ревеня

3. Водный экстракт из корней ревеня

4. Водный экстракт из корней солодки

Рис. 3.1. 6. Зависимость экстракции фенольных соединений от времени действия температуры

1. Водный экстракт из корней щавеля

2. Спиртовой экстракт из корней кизильника

3. Водный экстракт из корней кизильника

4. Экстракт из корней кизильника раствором соды

Как показывают полученные результаты, с увеличением температуры увеличивается степень извлечения окрашенных фенольных веществ. Эти Еещества извлекаются больше всего при кипячении. Для определения оптимального времени кипячения была изучена зависимость степени экстракции от времени кипячения. Для этого сырье и экстрагент в соотношении 1:3 кипятили в колбе с обратным холодильников в течение определенного времени и измеряли оптическую плотность экстракта. Полученные результаты показали, что оптимальное время кипячения составляет от 40 до 60 минут.

3.2. Определение кинетических параметров процесса экстракции красящих веществ

Проведенные эксперименты позволили рассчитать некоторые кинетические параметры процесса экстракции фенольных соединений из выбранных растений.

Были рассчитаны средние скорости экстракции полифенольных соединений водой из корней и корневищ солодки, ревеня, щавеля конского и кизильника при кипячении сырья и экстрагентов, взятых в оптимальных соотношениях. Средние скорости были рассчитаны при различных промежутках времени кипячения в интервале от 10 минут до достижения

постоянства концентрации экстрагированных веществ. Полученные результаты приведены в таблице 3.2.1.

Таблица 3.2.1

_Скорость экстракции красящих веществ при кипячении

Экстракт из корней

Время, мин

Средняя скорость экстракции, г/л-мин

Солодки

10

5,091

20

0,535

30

0,446

40

0,357

50

0.357

Ревеня

10

4,532

20

0,895

30

0,268

40

0,215

50

0,161

60

0,161

Щавеля конского

10

5,093

20

0,597

30

0,161

40

0,107

50

0,075

Кизильника

10

6,410

20

0,537

30

40

0,536

0,536

Как видно из данных таблицы, скорость экстракции полифенольных соединений из исследуемых растений водой, которая имеет определенное значение после 10 минут кипячения, с увеличением времени кипячения уменьшается.

Графические зависимости степени экстракции от времени и от температуры показывают, что процесс экстракции красящих веществ можно описать кинетическим уравнением для реакций первого порядка:

1пс=-1й + В (1)

Согласно уравнению (1) логарифм концентрации находится в линейной зависимости от времени. Если опытные данные укладываются на прямую линию в координатах ^С - 1;, то это является доказательством того, что рассматриваемый процесс описывается кинетическим уравнением для реакций первого порядка. Подобные графические зависимости построены нами для экстракции окрашенных фенольных веществ из всех исследованных растении различными экстрагентамп. На рис. 3.2.1. представлены графики для процесса экстракции красящих веществ водой из. корней ревеня, корней щавеля конского, корней солодки н кизильника.

Как видно из представленного ниже графика, зависимость ^С от времени при экстракции красящих веществ имеет линейных характер и

10

процесс экстракции действительно описывается кинетическим уравнением для реакций первого порядка.

■' ' ' т. тли

Рис. 3.2.1. Зависимость ^С от времени для процесса экстракции фенольных соединений из корней исследуемых растений

1. Экстракт из корней кизильника 2. Экстракт из корней солодки

3. Экстракт из корней ревеня 4. Экстракт из корней щавеля

По формуле: 2,303^—^- = Л/

а-х

где х - концентрация образовавшегося к моменту I вещества, а - первоначальная концентрация вещества, нами были рассчитаны константы скорости экстракции красящих веществ в интервале температур от 20°С до 100°С. Значения констант скорости экстракции, рассчитанные при 100°С приведены в таблице 3.2.2.

Таблица 3.2.2.

Констант скорости экстракции при 100°С

Экстракция Кьмин К2.мин К3,мин Кср.мин

Из корней солодки 0,0231 0,0232 0,0231 0,0231

Из корней ревеня 0,1005 0,0899 0,0887 0,0930

Из корней щавеля конского 0,3486 0,3915 0,3506 0,3478

Из корней кизильника 0,2449 0,2553 0,2478 0,2497

Таким образом, полученные результаты показали, что процесс экстракции полифенольных соединений описывается кинетическим уравнением для реакций первого порядка. Полифенольные вещества из корней сошдки, ревеня, щавеля конского и кизильника хорошо растворяются в воде, и их основная часть экстрагируется в течение первых 10-20 минут кипячении. Зависимость константы скорости реакции от температуры описывается уравнением Аррениуса. .

2,3031ок = ~ + в, где А и В — постоянные для данной реакции.

В случае, когда известны значения констант скорости реакции к! и к2 при двух температурах Т] и Т2, получаем:

2,3031§^=

*2 1:

Величина А связана с энергией активации соотношением Е = -АЛ. Данные уравнения были использованы нами для определения энергии активации процесса экстракции красящих веществ из исследуемых растений. Результаты расчета энергии активации представлены в таблице 3.2. 3.

Таблица 3.2.3

Значения энергии активации процесса экстракции красящих веществ

Экстракция Энергия активации, Дж/моль

Из корней и корневищ ревеня водой 2021,503

Из корней и корневищ ревеня водно-спиртовым раствором 1651,324

Из корней и корневищ ревеня спиртом 35382,601

Из корней и корневищ щавеля конского спиртом 2324,495

Из корней солодки водой 5560,306

Из корней солодки спиртом 1634,891

Из корней кизильника водой 2463,542

Из корней кизильника раствором спиртом 967,513

Как показывают полученные расчетные данные, процесс экстракции имеет небольшую энергию активации, то есть экстракция красящих веществ незначительно зависит от температуры.

Этот вывод подтверждается и вычислением температурного коэффициента.

Таким образом, результаты опытов показали, что для выделения фенольных соединений из корней ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника оптиматьным является экстракция водно-спиртовыми растворами и этанолом при кипячении в аппарате Сокслета в течение 40-60 минут при соотношении сырья и растворителя 1:3.

3.3. Состав выделенных экстрактов

Содержание фенольных соединений в составе выделенных экстрактов определено качественными реакциями и подтверждено данными ИК и УФ-спектров.

Для качественного определения всех групп фенольных соединений были использованы реакция образования осадка при действии ацетата свинца и реакция с ванилином в сильно-кислой среде, при которой образуется ярко-красное окрашивание. Указанными реакциями установлено содержание флавоноидов в исследуемых экстрактах. Индивидуальные группы флавонойдов качественными реакциями не определялись. Однако, изменения цвета экстрактов в кислой, нейтральной и щелочной среде, а также данные ИК-и УФ-спектров позволяют предположить, что в выделенных экстрактах преобладают флавоноиды (флаванолы, флаваноны, катехины, халконы), изофлавоноиды, в экстрактах из корней ревеня и щавеля содержатся также

антрагликозиды. Антоцианы содержатся в незначительных количествах или отсутствуют.

ИК-спектры исследованных экстрактов, таблетированных с бромидом калия, снятые на спектрометре SPECORD в диапазоне длин волн от 500 до 4000 см", подтверждают наличие фенольных соединений в исследуемых экстрактах.

В спектрах всех исследованных экстрактов присутствует широкая интенсивная полоса в области 2900-3600 см", характерная для валентных колебаний О-Н связи спиртовых групп. О наличии в экстрактах ароматических связей свидетельствуют интенсивные полосы при 1600, 1400 см" и полоса средней интенсивности при 1490 см", относящиеся к колебаниям С-С связей бензольного кольца. Интенсивная полоса поглощения при 1000 см" относится к неплоским деформационным колебаниям С-Н связен ароматических соединений, полосы поглощения при 1290 см ~ средней интенсивности и слабые полосы при 1390 и 1440 см" и полосу средней интенсивности при 780 см" - к колебаниям С-С связей гетероциклического кольца. Полоса поглощения карбонильной группы, сопряженной с бензольным кольцом, смещается в область 1750-1720 см". Эта полоса в виде выступа присутствует только в спектрах экстрактов из корней ревеня и щавеля конского. Это позволяет нам утверждать, что в экстрактах из корней солодки и кизильника преобладают флавоноиды - производные флавана и изофлавана, а в экстрактах из корней ревеня и щавеля содержатся в основном производные антрахинона.

Состав полученных экстрактов из корней ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника был исследован также метом УФ-спектроскопии.

В спектрах присутствуют интенсивная полоса поглощения при 280 нм, полосы поглощения средней интенсивности при 210, 240, 320 нм, а также слабые полосы поглощения при 420 и 540 нм. В соответствии с литературными данными наличие этих полос свидетельствует о присутствии фенольных веществ различных групп. Интенсивная полоса поглощения с максимумом при 280 нм и минимумом при 260 нм свидетельствует о наличии производных антрахинона, коими являются антрагликозиды. Полосы поглощения при 320 нм и 240 нм можно также отнести к флавонам. Возможно присутствие в экстракте халконов, которым соответствует резкая полоса поглощения при 390 нм и антоцианов, имеющие полосу поглощения в области 450 нм.

В УФ-спектре экстракта из корней щавеля обнаруживаются полосы поглощения при 220, 300, 400, 440 и 600 нм. Наиболее интенсивная полоса поглощения наблюдается при 440 нм, также имеется резкий максимум при 400 нм и меньший максимум при 300 нм. Согласно литературным данным такое расположение и интенсивность полос поглощения обусловлено присутствием антрахипоновых производных и халконов.

УФ-спектр экстракха корней солодки характерен для изофланонов. Именно к этим соединениям относятся очень интенсивные полосы поглощения • с максимумом при 380 нм и полосу поглощения с несколько меньшей интесивностыо при 220 нм.

В УФ-спектре экстракта из корней кизильника, присутствуют интенсивные полосы поглощения при 300 нм, 360 нм, 460 нм, полосы средней интенсивности при 220 нм, полосы при 420 и 560-580 в виде выступа (или «плеча»). На основании этого мы предполагаем, что в составе водного экстракта из корней кизильника содержатся в основном флаванолы, ауроны. В небольшим количестве гликозиды антоцианинов.

Сопоставляя данные УФ- и ИК спектров, можно говорить также о том, что в исследованных экстрактах наряду с указанными фенольными соединениями присутствуют также их сложнее эфиры с фенолкарбоновымн кислотами и гликозиды.

Количественное содержание фенольных соединений определялось как сумма красящих веществ фотоколориметрическим методом со стандартным раствором сульфата кобальта.

3.4. Ф1П11КО-Х11МИЧеСКИе свойства выделенных фенольных веществ

Все полученные порошкообразные сухие экстракты фенольных веществ растворимы в воде,, спирте и спиртовых растворах и не растворимы в органических растворителях. Содержание красящих веществ в выделенных веществах составляет от 27 до 79 г/л.

Определение общей и титруемой кислотности показало, что экстракты фенольных красящих веществ обладают низкими значениями общей (титруемой) кислотности, а активная кислотность, выражаемая значением рН растворов красителей равна 5-7.

Результаты определения общей и титруемой кислотности полученных экстрактов являются косвенным доказательством наличия в них фенольных соединений, так как фенольные соединения в растворах проявляют свойства слабых кислот. Эти результаты также показывают, что спектр их применения в качестве пищевых красителей может быть достаточно широк, так как они не будут способствовать появлению в пищевом продукте сильно-кислой или щелочной среды.

3.5. Биохимические превращения фенольных соединений при экстракции и хранении

Фенольные соединения подвержены многим превращениям, которые могут проходить с участием ферментов и без них. Па скорость прохождения этих реакций оказывают влияние температура, время. рН растворов, присутствие минеральных веществ. Для определения технологических параметров применения фенольных соединений в производстве пищевых продуктов представляет интерес изучение прекращении фенольных соединений в процессе экстракции и при хранении сухого экстракта и их растворов.

О превращениях фенольных соединений судили по устойчивости их цвета на основе изменения оптической плотностн растворов. Так как оптическая плотность растворов прямо пропорциональна концентрации растворенного вещества, то по изменению оптической плотности можно судить об изменении концентрации, и, следовательно, о разрушении окрашенных фенольных

соединений. На основании полученных нами результатов можно судить о тех превращениях, которые претерпевают фенольные соединения в процессе экстракции и в растворе при дальнейшем хранении под воздействием света, температуры и времени ее воздействия.

Образование окрашенных в красный цвет экстрактов при экстракции водой происходит в результате превращения полнфенольных соединений в окрашенные в красный цвет хиноны, которые затем полимеризуются. По литературным данным, это превращение может происходить под влиянием ферментов фенолоксидаз и пероксидаз. Мы предполагаем, что в данной реакции имеют большее значение пероксидазы, так как они по сравнению с фенолоксидазами более стабильны и в растениях они локализуются в местах, где происходит образование лигнина, а именно такие части растений выбраны нами в качестве сырья. При повышении температуры вследствие инактивации ферментов процесс полимеризации фенстьных соединений, конечным результатом которого является образование темноокрашенных, нерастворимых веществ, не идет до конца, а останавливается на стадии образования димеров и олигомеров, которые окрашены в красный цвет и хорошо растворимы в воде. Кроме того, образовавшиеся димерные и олигомерные формы фенольных соединений сами являются ингибиторами фенолоксидаз и других ферментов, вызывающих полимеризацию. Результаты наших опытов показывают, что подобные формы полимеров фенольных соединений устойчивы и могут существовать достаточно долго. Они также устойчивы к воздействию температуры в интервале от 20 до 100°С.

В технологии пищевых продуктов не менее важным технологическим фактором является воздействие рН среды. Цвет исследуемых красителей меняется в зависимости от среды. При значения рН 2 и 1 цвет растворов исследуемых красителей становится желтым. Устойчивый красный цвет появляется при рН 4 и сохраняется до значений рН 12. Как показывают полученные результаты, при увеличении значения рН от 1 до 3-4, оптическая плотность; измеренная при длине волны 480 нм, несколько уменьшается, затем выравнивается и остается постоянной до достижения значения рН от7-11. На основании этих результатов можно предположить, что в сильнокислых средах проходит гидролиз производных катехинов с фенолкарбоновыми кислотами с образованием бесцветной галловой кислоты или эллаговой кислоты, имеющей светло-желтый цвет, а также происходит образование светлоокрашенных полимерных форм фенольных соединений. Характер изменения цвета при изменении рН среды косвенно подтверждает, что в составе выделенных экстрактов имеется незначительное количество антоцианов, для которых характерно изменение цвета при значениях 4.8-5,3 (исчезает оранжево-красная окраска, при 5,3 и выше нарастает фиолетово-синяя окраска, что связано с их структурными изменениями).

Согласно литературным данным, в сильно щелочной среде фенольные соединения подвергаются окислительным реакциям, при которых происходит присоединение кислорода к фенольным соединениям. При этом происходит разрыв бензольного кольца с образованием малорастворимых соединений типа

меланинов или гуминовых кислот с темно-коричневой, почти черной окраской. Однако полученные нами результаты показывают, что данные реакции не идут до конца, возможно вследствие инактивации ферментов.

3.6. Исследование токсического действия выделенных фенольных соединений

В связи с тем, что исследуемые фенольные соединения из корней ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника предполагается использовать в производстве пищевых продуктов, представляет интерес изучение их токсического воздействия. Многочисленные литературные источники сообщают о нетоксичности флавоноидов. Фенольные соединения с конденсированными бензольными кольцами, производные нафтохинона и антрахинона, широко используются в медицине и пищевой промышленности в качестве перспективных консервантов. Однако некоторые источники сообщают о том, что продолжительное применение антрагликозидов может быть причиной ряда заболеваний.

Была изучена токсичность экстрактов пз корней ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника.

При скармливании белым лабораторным мышам выделенных экстрактов фенольных соединений в течение всего периода наблюдения животные были спокойны, заторможенности не наблюдалось, все животные живы. Результаты биохимического и морфологического исследования крови приведены в таблицах 3.6.1- 8.

Таблица 3.6.1

Биохимические показатели крови мышей принимавших экстракт из корней

кизильника

Показатели Результат Норма

(экстракты фенольных соединений -день исследования)

7 14 21 Контрольный

Общий белок, г/л 97,1 102 102 82,30 98-108

Общий билирубин, мкмоль/л 1,2 1,3 1,3 1,54 0,00-1,67

Щел. Фосфатаза, Е/л 1029,0 1230,0 1779,2 1280,1 1066,0-1220,0

Мочевина, ммоль/л 7,08 7,2 7,8 9,10 8,0-14,0

Аланина АТ (АлАТ), Е/л 11.5,20 123,0 125,0 130,0 110,0-140,0

Аспарагин (АсА'Г), Е/л 80,50 82,0 80,10 79,00 72,0-196,0

Глюкоза, моль/л 9,2 9,5 9,8 8,9 8,8-16,3

Таблица 3.6.2

Показатели периферической крови подопытных мышей_

Эозинофилы, 2.0 (0-4.0%) Нсґігрофильї Лимфоциты, 68.0(60.0-77.0%) Моноциты, 3.0 (2.0-4.0%)

Палочкоядерпые, 3.0 (1.0-4.0%) Сегменты, 23.0(18.0-30.0%)

Промежуток времени исследования (дни)

7 14 21 К. 7 14 21 К. 7 14 21 К. 7 14 21 К. 7 14 21 К.

),0 3,0 10,0 3,0 1,0 1,0 2,0 2,0 69,0 £6,0 37,0 35,0 27,0 40,0 52,0 60,0 !,0 3,0 ),0 2,0

Таблица 3.6.3

Биохимические показатели крови мышей принимавших экстракт __из корней щавеля____

Показатели Результат Норма

(экстракты фенольных соединений -день исследования)

7 14 21 Контрольный

Эбщий белок, г/л 74,10 110,10 114,0 82,30 98-108

Эбщий билирубин, мкмоль/л 1,58 1,62 1,70 1,54 0,00-1,67

Щел. Фосфатаза, Е/л. 1087,0 1098,0 1112,0 1280.1 1066,0-1220,0

Мочевина, ммоль/л 6,24 6,12 6,10 9,10 8,0-14,0

Аланина АТ (АлАТ), Е/л 122,74 124,2 125,76 130,0 110,0-140,0

Аспарагин (АсАТ), Е/л 68,2 68,54 68,25 79,00 72,0-196,0

Глюкоза, ммоль/л 9,01 9,5 10,04 8,9 8,8-16,3

Таблица 3.6.4

Показатели периферической крови подопытных мышей____

Эозинофилы, 2.0 (0-4.0%) Нейтрофилы Лимфоциты, 68.0(60.0-77.0%) Моноциты,. 3.0(2.0-4.0%)

Палочкоядерные. 3.0(1.0-4.0%) Сегменты, 23.0(18.0-30.0%)

Промежуток времени исследования (дни)

7 14 ¡21 К. \1 14 21 К. 7 ! 14 21 К. 7 14 21 К. 7 14 21 ¡К.

),0 0,0 р,о 3,0 р,о 2,0 р,0 2,0 38,0 ¡47,0 58,0 35,0 55,0 48,0 37,0 60.0 7,0 ?,о ко

Таблица 3.6.5

Биохимические показатели крови мышей принимавших экстракт из корней __ревеня_____

Показатели Результат Норма

(экстракты фенольных соединений -день исследования)

7 14 і 21 Контрольный

Эбщий белок, г/л 86,4 90,80 | 92,5 82,30 98-108

Эбщий билирубин, мкмоль/л 0,95 0,94 8,50 і 1,54 0,00-1,67

Щел. Фосфатаза, Е/л. 1075,20 1160,0 1287,0 1280,1 1066,0-1220,0

Мочевина, ммоль/л 9,8 10,06 10,82 9,10 8,0-14,0

Аланина АТ (АлАТ), Е/л 130,40 160,80 170,40 130,0 110,0-140.0

Аспарагин (АсАТ), Е/л 73,40 79,00 82,30 79,00 72,0-196,0

Глюкоза, ммоль/л 9,8 10,2 10,20 8,9 8,8-16,3

/

Таблица 3.6.6

Показатели периферической крови подопытных мышей_

Эозинофилы, 2.0 (0-4.0%) Нейтрофилы Лимфоциты, 68.0(60.0-77.0%) Моноциты. 3.0 (2.0-4.0%)

Палочкоядерные, 3.0(1.0-4.0%) Сегменты, 23.0 (18.0-30.0%)

Промежуток времени исследования (дни)

П? 14 21 |К. 7 14 |21 К. 7 I 14 21 К. (7 14 21 К. 7 14 21 К.

0,0 0,0 0,0 |о,о Р,0 ¡1,0 4,0 2,0 56,0 ¡59,0 52,0 35,0 40,0 36,0 33,0 60,0 4,0 4,0 11,0 2,0

Таблица 3.6.7

Биохимические показатели крови мышей принимавших экстракт из корней _солодки____

Показатели Результат Норма

(экстракты фіенольньїх соединений -день исследования)

7 14 21 Контрольный

Эбший белок, г/л 59,70 82,3 72,00 82,30 98-108

Эбщий билирубин, мкмоль/л 0,85 0,90 0,95 1,54 0,00-1,67

Щел. Фосфатаза, Е/л. 1095,0 1110.0 1112,0 1280,1 1066,0-1220,0

Мочевина^ ммолъ/л 9,99 6,66 8,33 9,10 8,0-14,0

Аланина АТ (АлАТ), Е/л 144 120,8 124,2 130,0 110,0-140,0

Аспарагин (АсАТ), Е/л 82,2 84,20 85,0 79,00 72,0-196,0

Глюкоза, моль/л 8,7 9,0 9,2 8,9 8,8-16,3

Таблица 3.6.8

Показатели периферической крови подопытных мышей_

Эолшофилы, 2.0 (0-4.0%) Нейтрофилы Лимфоциты. 68.0(60.0-77.0%) Моноциты, 3.0 (2.0-4.0%)

Палочкоядерные, Сегменты, 3.0 (1.0-4.0%) 23.0 (18.0-30.0%)

Промежуток в рсмени исследования (дни)

7 14 21 к. 7 14 21 К. ! 7 14 21 К. 7 і 14 21 К. 1 7 14 21 К.

Ь,0 0,0 0,0 0,0 2,0 5,0 4,0 2,0 157,0 46,0 45,0 [35,0 38,0 ¡53,0 47,0 60,0 0,0 1,0 [2,0 12,0

Как показывают результаты определения биохимических показателей крови, при скармливании мышам экстракта из корней кизильника в течение 7 дней содержание общего белка и мочевины остается в пределах нормы, возрастает содержащие щелочной фосфатазы. После 21 дня скармливания экстракта из корней кизильника возрастает содержание общего белка, а щелочная фосфатаза значительно возрастает. Показатель (АлАТ) несколько увеличивается, хотя и в пределах нормы, а (АсАТ) остается практически неизменным.

Картина вскрытия мышей. Все животные были забиты с соблюдением принципов эвтаназии. По истечении каждых 7 дней проводилось вскрытие подопытных животных. После забоя оценивался внешний вид органов, кровенаполнение.

За весь период исследования у подопытных животных не было отмечено макроскопических изменений со стороны внутренних органов. Патологии со стороны легких и сердца рет. Легкие бледно-розозые, без изменений. Печень без видимых изменений. Желчный пузырь не растянут, содержимое желчного пузыря желтого цвета. Слизистая оболочка желудка без изъязвлений и гиперемии.

В результате проведенной работы по изучению токсического действия экстрактов из корней ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника было установлено, что исследованные экстракты не обладают острой токсичностью для мышей.

Животные контрольных групп в течение всего периода наблюдений оставались живы, здоровы.

Рассматривая воздействие исследуемых экстрактов на живые организмы и сравнивая эти результаты с результатами биохимического и морфологического анализа крови мышей контрольной группы, можно отметить отклонения от нормы в значении некоторых показателей крови мышей как опытных, так и контрольной групп. Так, у всех животных повышаются показатели общего белка, щелочной фосфатазы, тогда как содержание мочевины, глюкозы, общего билирубина соответствует норме. Отклонения от нормы в показателях общего белка, щелочной фосфатазы кровн как опытной, так и контрольной группы от нормы показывает, что они не связаны с приемом экстракта и, наш взгляд, объясняются характером питания. Повышенное потребляемое количество углеводистой пищи может вызывать дегидратацию организма, результатом которой является повышение уровня белка в сыворотке крови. Причиной повышения уровня фосфатазы также является пища, обедненная белком. Показатели морфологического анализа крови животных опытных и контрольных групп в целом соответствуют норме, но некоторые показатели изменяются - значительно. Так, у мышей, которых кормили экстрактом кизильника и щавеля конского, наблюдается увеличение количества моноцитов в два раза по сравнению с нормой, увеличивается содержание сегментовндных нейтрофилов в крови животных, принимавших экстракт из корней щавеля. Уменьшается показатель лимфоцитов под воздействием экстракта из корней солодки, щавеля и корней ревеня. Наибольшие отклонения от нормы наблюдаются в крови животных, принимавших экстракт из корней ревеня.

Сопоставляя результаты исследования биохимических и морфологических показателей крови с картиной вскрытия животных и с наблюдениями их поведения во время опыта, можно сделать вывод о том, что исследуемые экстракты из корней кизильника, солодки, щавеля конского до в дозировке до 5 г/кг ж.в. нетоксичны. Наблюдаемые изменения в крови и органах связаны не с токсичностью вводимых образцов, а с большой дозой их введения и однообразным рационом кормления, что подтверждается и литературными источниками.

Экстракт из корней ревеня вызывает не только достаточно большие изменения биохимических и морфологических показателей крови, но и

аннзоцитоз и пойкилоцитоз. Состояние внутренних органов после вскрытия также свидетельствует о токсичности данного экстракта в дозе 5 г/кг ж.в. При вскрытии животных, которых кормили экстрактом из корней щавеля, наблюдались небольшие изменения печени и желчного пузыря. Подобное воздействие экстрактов из корней ревеня можно объяснить содержанием антрагликозидов, производных антрахинона, которые согласно литературным источникам, обладают токсическим действием и при длительном применении в больших дозах вызывают поражения печени и т.д.

3.7. Окрашивание пищевых продуктов экстрактами фенольных соединений

Полученные красящие экстракты фенольных веществ были испытаны в качестве пищевых красителей.

Лабораторными опытами показано, что полученные красители могут применяться при окрашивании некоторых видов кондитерских изделий и молочных продуктов. Изученные свойства указанных красителей позволяют предположить, что их можно использовать также в производстве безалкогольных напитков, варенья, компотов. Их можно вводить в порошки для сухих концентратов, например для киселей и желе.

ВЫВОДЫ

1. Изучен процесс экстракции фенольных соединений из корней 'ревеня туркестанского (Rheum turkestanicum Janisch. семейство гречишные), щавеля конского (Rumex confertus Wild, семейство гречишные), солодки голой (Glycyrrhiza glabra, семейство бобовые) и кизильника (Cotoneaster melanocarpus Fisch. Семейство розоцветных), и влияние не нее различных факторов - вида растворителя, соотношения сырья и растворителя, времени и температуры экстракции. На основе проведенных исследований разработан метод получения красящих фенольных веществ из растительного сырья, определены оптимальные режимы экстракции и экстрагенты.

2. Рассчитаны некоторые кинетические параметры процесса экстракции красящих веществ - средние скорости экстракции, константы скорости и энергия активации.

3. Изучены физико-химические свойства выделенных фенольных соединений, имеющие значение в технологии пищевых продуктов - плотность, содержание сухих веществ, содержание красящих веществ, общая и титруемая кислотность. Установлено. что совокупность указанных физико-химических и органолептических свойств полученных экстрактов фенольных соединений соответствует значениям, известным из литературы, а содержание красящих веществ в полученных "красителях составляет до 72г/кг, что выше, чем в известных натуральных пищевых красителях.

4. Изучены биохимические превращения фенольных соединений при экстракции и хранении. Установлено, что процесс окислительной полимеризации, которая приводит к образованию нерастворимых полимерных соединений, не идет в условиях экстракции до конца, а заканчивается на стадии

образования окрашенных олигомерных хинонных форм, устойчивых к воздействию света в течение достаточного времени. Установлено также, что в сильнокислых средах происходит образование светлоокрашенных полимерных форм фенольных соединений, а также гидролиз производных катехинов с фенолкарбоновыми' кислотами с образованием бесцветной галловой кислоты или эллаговой кислоты, а окислительные реакции, идущие в щелочной среде с разрывом бензольного кольца, не идут до конца.

5. Исследована микробиологическая чистота и токсичность выделенных красящих веществ. Показано, что они не обладают токсичностью.

6. Лабораторными опытами показана возможность окрашивания полученными красителями некоторых видов кондитерских изделий, колбасных изделий, кисломолочных продуктов.

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1. Мирзорахимов К.К., Икрами МБ., Шарипова М.Б., Рахимова Ф.А. Получение пищевого красителя из корней ревеня. // Труды ТУТ. Вып.XIV. 2008. - С. 74-^7.

2. Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б.. Шарипова М.Б., Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н. Применение пищевого красителя в выпечных кондитерских изделиях. // Материалы Международной конференции «Высокие технологии, фундаментальные исследования, образование, промышленность» Россия, Санкт-Петербург, 27-28 10.2009,- С. 220-221.

3. Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н. Исследование токсичности растительных экстрактов. // Материалы Международной конференции «Новое в технологии и технике пищевых производств». Воронеж 30 июня-2 июля 2010. - С. 66-68.

4. Икрами М.Б., Мирзорахимов КМС., Рахимова Ф.А., Шарипова М.Б., Тураева Г.Н. Исследование экстракции полифенольных соединений из некоторых растений. // Материалы Ш Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 29 января 2011.-С. 127-129.

5. Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н. Полифенольные соединения, выделенные из корня ревеня и их применение. // Материалы Ш Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 29 января 2011. - С. 131132.

6. Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н., Гулбекова Н.Б. Некоторые кинетические параметры процесса экстракции полифенольных соединений из растений. // Материалы VIII Международной научной конференции «Наука и современность» (Новосибирск),! февраля 2011.4.1.-С. 34-38.

7. Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Рахимова. Ф.А., Тураева Г.Н. ИЬС-спектросконическое исследование растительных экстрактов. // Материалы IV Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 23 апреля 2011. - С. 128-129.

8. Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н. Биологические свойства растительных экстрактов. // Материалы IV Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 23 апреля 2011. - С. 140-141.

9. Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н. Гулбекова Н.Б. Влияние растворителя на экстракцию полифенольных соединений из некоторых растений. // Материалы V Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 23 июля 2011.-С. 117-119.

10.Икрами М.Б., Мирзорахимов К.К., Рахимова Ф.А.. Тураева Г.Н., Гулбекова Н.Б. УФ - спектры растительных экстрактов. //' Материалы Международной заочной научно-практической конференции «Актуальные проблемы естественных паук». Новосибирск, 26 октября 2011. - С. 20-24.

11.Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н., Гулбекова Н.Б. Биологические свойства экстрактов солодки и кизильника. // Материалы Международной заочной научно-практической конференции «Актуальные проблемы естественных наук». Новосибирск, 26 октября 2011. - С. 24-28.

12.Икрами М.Б., Мирзорахимов К.К., Рахимова Ф.А., Гулбекова Н.Б. К вопросу о токсичности природных производных антрахинона. // Материалы V Международной научной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ.г. Липецк 29 октября 2011. - С. 171173.

13.Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н. Влияние растворителя на экстракцию полифенольных соединений из некоторых растений. // Материалы V Международной научной конференции ((Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, г. Липецк 29 октября 2011. - С. 174-176.

14.Икрами М.Б., Мирзорахимов К.К., Рахимова Ф.А., Тураева Г., Гулбекова Н.Б. Кислотно-основные свойства фенольпых соединений в растительных экстрактах. // Сборник материалов XIII международной научной пракпгческой конференции «Наука и современность» - 2011. Новосибирск, 15 ноября 20И.4.1.-С. 32-34.

15.Мирзорахимов К.К.. Икрами М.Б.. Рахимова Ф.А., Тураева Г.Н., Гулбекова Н.Б. Влияние времени температуры на устойчивость цвета растительных экстрактов. // Сборник материалов XIII Международной научной практической конференции «Наука и современность» - 2011. Новосибирск, 15 ноября 2011.4.1.-С. 34-38.

16. Рахимова ФА., Икрами М.Б., Мирзорахимов К.К., Тураева Г.Н., Гулбекова Н.Б. Превращения фенольпых соединений в процессе экстракции некоторых растений Таджикистана // Известия АН РТ Серия. -2012 №1(178),-С.

17. Рахимова Ф.А., Мирзорахимов К.К., Икрами М.Б., Тураева Г.Н., Гулбекова Н.Б. Воздействие фенольных соединений на живые организмы. // Известия АН РТ Серия. -2012 №4( 177),-С.

Подписано в печать 12.04.2012. Формат 60x84'/i6 Бумага офсетная Печать офсетная. Гарнитура Times New Roman Tj. Усл. печ. л. 1,5 Тираж 100 экз.

ООО "ЭР-граф". 734036, Душанбе, ул. Р. Набиева, 218. Тел.: +992(37) 881-15-16. E-mail: r-t>raph@mail.ru.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рахимова, Файзигул Амонкуловна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Природные растительные фенольные соединения.

1.2. Физиологическая роль фенольных соединения.

1.3. Биосинтез фенольных соединений.

1.4. Методы идентификации фенольных соединений.

1.5. Методы получения растительных красящих экстрактов фенольных соединений.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические свойства фенольных соединений некоторых дикорастущих растений Таджикистана"

Актуальность работы. Фенольные соединения - широко распространенная в растительном мире группа соединений, которая в своей основе содержит бензольное кольцо, несущее одну или несколько гидроксидных групп. Фенольные вещества играют важную роль в обмене веществ растений. Они участвуют в дыхании, фотосинтезе; отвечают за стимуляцию или ингибирование роста и развития (растительные гормоны), защиту клеток и метаболитов растения от окисления, повреждения бактериями и грибками и т.п. Предполагают, что они играют роль в образовании иммунитета [1,2,3].

Чрезвычайно широк спектр их биологического воздействия. Они обладают антисептическим, антиоксидантным, кардиотоническим, кардиотропным, спазмолитическим, гипотензивным, седативным, гепатопротекторным, кровоостанавливающим, желчегонным действием. Эти свойства, а также растворимость в воде, возможность получения водорастворимых форм в виде отваров, настоев обуславливает широкое применение фенольных соединений в медицине и биологии [4,5,6].

Этим не исчерпывается значение фенольных соединений растений. Они имеют важное практическое применение в некоторых отраслях промышленности, в том числе пищевой. Современная пищевая промышленность широко применяет растительные экстракты в качестве пищевых и технологических добавок -пищевых красителей, антиоксидантов, консервантов [7,8,9,10,11,12,13,14]. Красящими веществами в этих экстрактах являются в основном фенольные соединения, которые издавна использовались в качестве красителей [15].

При технологической обработке сырья или при хранении цвет готовых изделий может меняться или ослабевать. Поэтому с целью повышения качества большинство продукции кондитерской, мясомолочной, масложировой, консервной, ликероводочной промышленности подкрашивается. В качестве пищевых красителей используются как синтетические, так и натуральные, то есть выделенные из природных объектов, вещества.

В настоящее время в различных странах используются свыше 160 синтетических красителей [16].

Не все они безопасны для человека. Поэтому многие распространенные в прошлом синтетические пищевые красители ныне запрещены к использованию

В современной пищевой промышленности наметилась стойкая тенденция к использованию пищевых натуральных красителей [17,18,19,20,21,22,23,24,25,26].

В связи с этим научные исследования, направленные на выявление новых источников сырья, разработку способов выделения, условий хранения и применения экстрактов фенольных соединений в пищевой промышленности, важны и актуальны. Эта проблема особенно важна для Таджикистана, имеющего богатейшую и уникальную флору. Известно более 120 красильных растений, произрастающих на территории Таджикистана. Анализ литературных данных показывает, что красители, выделяемые из них, применяются в основном для крашения текстильных волокон и тканей. О применении их для окрашивания продуктов питания нет сведений [27].

Целью работы является изучение биохимических свойств природных фенольных соединений, выделенных из некоторых дикорастущих растений, из корней и корневищ ревеня (Rheum turkestanicum Janisch, семейство гречишные), щавеля конского (Rumex confertus Willd, семейство гречишные), солодки (Glycyrrhiza glabra, семейство бобовые) и кизильника (Cotoneaster melanocarpus Fisch. Семейство розоцветных) произрастающих в Таджикистане, определение оптимальных условий их выделения, хранения и применения их в качестве биологических пищевых добавок.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- изучить процесс экстракции красящих фенольных веществ из растительного сырья и влияние на нее различных факторов;

- определить и научно обосновать оптимальные условия извлечения фенольных веществ из растительного сырья;

- изучить биохимические свойства выделенных фенольных соединений;

- изучить превращения фенольных соединений при их выделении и хранении;

- изучить токсичность выделенных фенольных соединений;

- изучить возможность применения экстрактов фенольных соединений для окрашивания различных групп пищевых продуктов;

Научная новизна. В результате проведенных исследований выделены и применены для окрашивания пищевых продуктов красящие фенольные вещества из растений, произрастающих на территории Таджикистана - корней и корневищ ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника.

Исследован процесс экстракции красящих веществ из указанного растительного сырья. Изучена зависимость извлечения фенольных соединений от различных факторов: экстрагента, соотношения с сырья и растворителя, температуры, времени нагревания, способа экстракции. На основании полученных результатов разработан способ получения красящих экстрактов фенольных соединений из растительного сырья.

Изучены биохимические свойства экстрактов фенольных веществ, выделенных из корней и корневищ ревеня (Rheum turkestanicum Janisch, семейство гречишные), щавеля конского (Rumex confertus Willd, семейство гречишные), солодки (Glycyrrhiza glabra, семейство бобовые) и кизильника (Cotoneaster melanocarpus Fisch. Семейство розоцветных), имеющие технологическое значение - растворимость в воде и органических растворителях, содержание сухих веществ, содержание красящих веществ, плотность, кислотно-основные свойства.

Изучены превращения фенольных соединений при выделении и хранении и определена их устойчивость к воздействию света, температуры и времени нагревания, pH среды. Выявлена нетоксичность выделенных красящих экстрактов.

Практическое значение.

Разработан способ экстракции фенольных соединений из растительного сырья, содержащего комплекс красящих веществ, определены оптимальные условия для их выделения. Показана возможность их применения в качестве пищевых добавок в пищевой промышленности. Апробация работы.

Результаты диссертационной работы доложены на Международной конференции «Наука, образование», Санкт-Петербург, 27-28 октября 2009г.; Ш Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 29 января 2011г.; IV Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 23 апреля 2011г.; V Международной конференции «Актуальные вопросы современной техники и технологии». РФ, Липецк, 23 июля 2011г.; Международной заочной научно-практической конференции «Актуальные проблемы естественных наук». Новосибирск, 26 октября 2011г.; УШ Международной научной конференции «Наука и современность», Новосибирск, 15 ноября 2011г. Публикации.

По материалам диссертации опубликованы 2 статьи в журнале, рекомендованном ВАК РФ, 15 статей в сборниках Международных научных конференций.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 135 страницах компьютерного набора, состоит из введения, литературного обзора, экспериментальной части, обсуждения результатов и выводов. Содержит 41 рисунков, 35 таблиц, список литературы, включающий 167 наименования.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Рахимова, Файзигул Амонкуловна

выводы

1. Изучен процесс экстракции фенольных соединений из корней ревеня туркестанского (Rheum turkestanicum Janisch, семейство гречишные), щавеля конского (Rumex confertus Willd, семейство гречишные), солодки голой (Glycyrrhiza glabra, семейство бобовые) и кизильника (Cotoneaster melanocarpus Fisch. Семейство розоцветных), и влияние не нее различных факторов - вида растворителя, соотношения сырья и растворителя, времени и температуры экстракции. На основе проведенных исследований разработан метод получения красящих фенольных веществ из растительного сырья, определены оптимальные режимы экстракции и экстрагенты.

2. Рассчитаны некоторые кинетические параметры процесса экстракции красящих веществ - средние скорости экстракции, константы скорости и энергия активации.

3. Изучены физико-химические свойства выделенных фенольных соединений, имеющие значение в технологии пищевых продуктов - плотность, содержание сухих веществ, содержание красящих веществ, общая и титруемая кислотность. Установлено, что совокупность указанных физико-химических и органолептических свойств полученных экстрактов фенольных соединений соответствует значениям, известным из литературы, а содержание красящих веществ в полученных красителях составляет до 72г/кг, что выше, чем в известных натуральных пищевых красителях.

4. Изучены биохимические превращения фенольных соединений при экстракции и хранении. Установлено, что процесс окислительной полимеризации, которая приводит к образованию нерастворимых полимерных соединений, не идет в условиях экстракции до конца, а заканчивается на стадии образования окрашенных олигомерных хинонных форм, устойчивых к воздействию света в течение достаточного времени. Установлено также, что в сильнокислых средах происходит образование светлоокрашенных полимерных форм фенольных соединений, а также гидролиз производных катехинов с фенолкарбоновыми кислотами с образованием бесцветной галловой кислоты или эллаговой кислоты, а окислительные реакции, идущие в щелочной среде с разрывом бензольного кольца, не идут до конца.

5. Исследована микробиологическая чистота и токсичность выделенных красящих веществ. Показано, что они не обладают токсичностью.

6. Лабораторными опытами показана возможность окрашивания полученными красителями некоторых видов кондитерских изделий, колбасных изделий, кисломолочных продуктов.

Заключение

Изучение литературных данных по исследуемой проблеме показало, что фенольным соединениям растительного происхождения, их физико-химическим и биохимическим свойствам, а также получению красящих экстрактов фенольных соединений и методам их применения в различных отраслях, в том числе в производстве пищевых продуктов, уделяется много внимания. Тема эта важна и актуальна. Важность и актуальность исследования фенольных соединений обусловлены многообразием фенольных соединений, комплексом их физико-химических и биохимических свойств, физиологической ролью как в самих растениях, так и их воздействием на биологические объекты.

Многообразные фенольные соединения ответственны за вкус и аромат пищевого сырья и продуктов. Их биохимические превращения, зависимость биохимических свойств от различных факторов важны для достижения потребительского качества и безопасности пищевых продуктов.

Одним из перспективных направлений применения фенольных соединений является их использование в качестве технологических пищевых добавок -красителей, консервантов и т.д.

В качестве источников фенольных красящих веществ используются различные части растений - корни и корневища, цветки, листья древесина и кора. Способы выделения красителей основаны на экстракции их различными растворителями.

Экстракция красящих веществ из растительного сырья водой и различными растворителями - наиболее распространенный метод получения фенольных соединений, применяемых в качестве пищевых красителей. Но он не единственный. В литературе описаны также биотехнологические методы получения красящих веществ, а именно их синтез с помощью микроорганизмов. Но, хотя микробиологические методы являются более экономичными, получаемые этими методами красящие вещества имеют хорошие технологические характеристики, имеются возражения против их широкого применения в производстве пищевых продуктов. К примеру, широко применяемый в мясной промышленности пищевой краситель - ферментированный рис, который официально разрешен и является наиболее используемым в мясных изделиях среди пищевых добавок этого класса, в основном благодаря своей низкой стоимости. Этот краситель применяется более двух тысяч лет в Китае и других странах Юго-Восточной Азии как в качестве приправы к пище, так и при лечении различных заболеваний, включая нарушения пищеварения и различные инфекции.

Ферментированный рис имеет следующие технологические свойства: устойчивость к воздействию света, высоким температурам, окислению, ионам металлов, изменению рН среды, не меняет окраску, как в процессе производства, так и в процессе, хранения пищевых продуктов. При комбинировании с органическими кислотами он проявляет консервирующие свойства. К недостаткам этого красителя относится неполная растворимость в воде, что может привести к появлению неоднородного окрашивания мясных продуктов.

Целенаправленное применение ферментированного риса в мясной отрасли без какого-либо вреда для здоровья потребителей продукции с его использованием возможно только при наличии научно обоснованной допустимой нормы по содержанию цитринина в химическом составе препаратов или же при полном его отсутствии. Поэтому необходимо уделить повышенное внимание контролю за содержанием этого агента в коммерческих препаратах ферментированного риса, поступающих на рынок пищевых добавок, с целью введения данного показателя в действующие санитарные нормы и правила по использованию пищевых добавок [116]. Кроме того, поскольку невозможно полностью прогнозировать состав продукта микробиологического производства, необходимо осуществлять контроль общей токсичности получаемых препаратов с помощью биологических объектов.

Вызывает споры и применение другого красителя микробиологического происхождения - каротина [117].

В связи с этим, можно считать, что наиболее перспективным является получение фенольных красящих веществ из растений физико-химическими методами.

Несмотря на большое число разработанных методов получения природных красящих веществ из большого числа растительного сырья, необходимость и актуальность научных исследований по изысканию новых источников сырья, разработку способов выделения, биохимических свойств, условий хранения и областей и методов применения природных фенольных соединений не подлежит сомнению.

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 2.1. Получение красящих экстрактов феиольиых соединений из растительного сырья. 2.1.1. Сырье для получения красителей.

В качестве объектов исследования для получения красящих веществ, пригодных для окрашивания пищевых продуктов, нами были выбраны корни и корневища ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника. Наш выбор обусловлен следующими причинами:

1. Экстракты из корней ревеня, щавеля конского, солодки кизильника имеют интенсивную окраску и могут быть применены для окрашивания пищевых продуктов;

2. Выбранные растения являются широко известными лекарственными растениями, используются в лечебных целях в народной и современной медицине [118,119,120], содержат многие полезные, биологически активные вещества.

В корнях и корневищах ревеня содержатся дубильные вещества, пектин, крахмал, танногликозиды и антрагликозиды, обладающие антисептическими свойствами. Красящими свойствами обладают в основном антраценпроизводные.

Ревень содержит витамины, макро- и микроэлементы: витамины: витамин РР: 0,1 (мг), бэта-каротин: 0,06 (мг), витамин А (РЭ): 10 (мкг), витамин В1 (тиамин): 0,01 (мг), витамин В2 (рибофлавин): 0,06 (мг), витамин С: 10 (мг), витамин Е (ТЭ): 0,2 (мг), витамин РР (Ниациновый эквивалент): 0,2 (мг).

Макроэлементы: кальций: 44 (мг), магний: 17 (мг), натрий: 2 (мг), калий: 325 мг), Фосфор: 25 (мг).

Микроэлементы: железо 0,6 (мг).

Корни щавеля конского содержат 4—11% дубильных веществ, 2,5% смолы и 25,7% экстрактивных веществ. В надземных частях около 0,1% эмодина, хризофановая кислота, около 4% производных антрахинона, сахар, смола и органические кислоты, до 175 мг% (в листьях - 112 - 272 мг-%.) аскорбиновой кислоты, витамины Р, В, каротин, 8 - 10% дубильных веществ. В незрелых плодах обнаружено 4 - 5% дубильных веществ, 119,3 мг% витамина С, каротин, 0,3% свободного и 0,47% связанного оксиметилантрахинона и др. Кроме того, в растении в фазе цветения обнаружены Са, Р, К, М^;, 31, Р и Мп.

Подземная часть солодки богата биологически активными соединениями, главным из которых ученые считают тритерпеновый сапонин глицерризин (в 40 раз слаще сахара), содержание его колеблется в зависимости от места произрастания и фазы развития растений в пределах от 3 до 23%. Минимальное количество глицирризина и экстрактивных веществ обнаруживается в молодых корневищах 1,8—4,8% и 17,1—32,1%. В корнях найдены 3—4% флавоноидов (не менее 27 компонентов): ликвиритозид, изоликвиритин, ликурозид, ликвиритигенин, 2,4-4-тригидроксихалкон и его гликозид, а также ликвиритин; кроме того, глабровая (глициретовая) кислота, диоксистигмастерин (0,02%), цирризиновая горечь (до 8,1%), эфирное масло (0,02%), желтый пигмент, аспарагин (0,7 - 3,5%), 10-35 мг% витамина С. Кроме того, корни солодки содержат в %:. глюкозу (0,6 - 15,2), сахарозу (0,3 - 11,0), крахмал (до 34), стероиды (1,5 - 2), жироподобные (0,2 - 4.7) и смолистые (1,75 - 4,12) вещества, камеди (1,5 -6,5), нерастворимую горечь (3 - 3,6) и растворимую - (4,9 - 9,7). В траве солодки глицирризин не обнаружен, но содержится 0,77% азотистых оснований, 5,5% дубильных веществ, 8% стероидных и тритерпеновых сапонинов, 2% флавонов, 0,02—0,035% эфирного масла, 2,13% общих Сахаров, 6,2% жирного масла, 2,5% органических кислот, до 704,5 мг% витамина С, 15 мг% каротина, 1% пигмента хлорофилла и следы сердечных гликозидов, около 10 флавоноидных соединений (кемпферол, астрагаллин, гликозид кверцетин, сапонаретин, витексин, глабранин и др.) [121].

Химический состав различных частей кизильника плохо изучен. Тем больший интерес представляет изучение химического состава экстракта из его корней.

Таким образом, все выбранные растения могут быть источником не только красящих пигментов, но также других биологически активных веществ. Известно, что полифенолы растений обладают антисептическими свойствами, следовательно, они могут проявлять помимо красящего и некоторое консервирующее действие.

В соответствии с известными литературными данными, ревень, щавель конский используются не только как лекарственные и пищевые, но и как красильные растения. Из корней щавеля конского получают желтую, красно-оранжевую, бежевую краску для различных текстильных волокон [118,122]. Однако использование красящих веществ из щавеля конского и других выбранных нами растений, кроме корней ревеня [123] для окраски пищевых продуктов неизвестно.

Для выделения красящих веществ нами использованы корни ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника. Растения были собраны в весенне-летнее время в Варзобском, Вахдадском и Ванчском районе РТ, высушены на воздухе.

2.1.2. Методы выделения красящих веществ из растений.

Нами выделены фенольные красящие вещества из корней ревеня, щавеля конского, солодки и кизильника. Выделение фенольных красящих веществ из растительного сырья проводилось методом экстракции. Высушенное измельченное растительное сырье смешивали с растворителем и экстрагировали в течение определенного времени при различных температурах. В качестве экстрагирующего вещества использовались дистиллированная вода, водные растворы (1 и 10%-ные) соляной и лимонной кислот и гидрокарбоната натрия, водно-спиртовые растворы, а также 96%-ный этиловый спирт. Красящие вещества были получены в виде концентрированных растворов и сухих порошков.

Для получения сухих порошкообразных фенольных красящих веществ полученные экстракты упаривались под вакуумом и затем выдерживались в эксикаторе над гидроксидом натрия до полного высушивания. Выход сухих красящих веществ составляет от 27 до 61% для экстрактов, выделенных из различных частей растений.

Изучалось влияние соотношения сырья и растворителя. Выделение красящих веществ проводили при соотношении сырья и растворителя 1:2, 1:3,

1:5, 1:8, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50. Количество фенольных красящих веществ в экстракте определялась фотоэлектроколориметрическим методом по величине оптической плотности раствора, которая, как известно, пропорциональна концентрации.

С целью определения влияния температуры на выделение фенольных красящих веществ экстракцию проводили в интервале температур 20-80°С и при кипячении в колбе с обратным холодильником на водяной бане, а также противоточной экстракцией в аппарате Сокслета.

Также нами была изучена зависимость степени экстракции от времени кипячения. Для этого сырье и растворитель, взятые в соотношении 1:3, кипятили в течение 5 часов, каждый час проверяя степень экстракции. Количественно степень экстракции устанавливалась по значению оптической плотности раствора.

2.2. Исследование физико-химических свойств выделенных красителей

Нами были исследованы физико-химические свойства выделенных фенольных красящих веществ, имеющих технологическое значение -растворимость в воде и спирте, плотность растворов, общая кислотность, титруемая кислотность, содержание сухих веществ, содержание красящих веществ. Определения проводились по методикам, приведенным в литературе [124].

Плотность растворов определялась с помощью ареометров, кислотность -электрометрическим методом, титруемая кислотность - потенциометрическим титрованием, содержание сухих веществ - высушиванием навески красителя в течение 2 ч при температуре 130°С и последующим взвешиванием, содержание красящих веществ определялось фотоэлектроколориметрическим методом по стандартному раствору сульфата кобальта (для красных красителей) и по раствору бихромата калия (для желтый красителей).

2.2.1,Определение растворимости полученных сухих экстрактов

Для определения растворимости сухих экстрактов фенольных соединений в химический стакан емкостью 300 мл наливают 200 мл дистиллированной воды, вносят 2 мл концентрированного натурального красителя или 0,2 г порошкообразного красителя, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и рассматривают раствор в проходящем свете. Полученный раствор должен быть прозрачным, без осадка и мути. Растворимость следует определять при 20° С.

2.2.2. Определение относительной плотности полученных красителей

Для полученных жидких экстрактов фенольных соединений была измерена плотность растворов. Плотность полученных вытяжек определялась ареометром. При определении плотности необходимо термостатировать раствор красителя и определения проводить при температуре 20° С. Необходимо также обращать внимание на то, чтобы в растворе не было пузырьков воздуха. Испытуемый краситель наливали в стеклянный цилиндр емкостью 250-300 мл и осторожно погружали в раствор ареометр. Значение плотности отсчитывали по шкале ареометра.

2.2.3. Определение содержания сухих веществ в полученных красителях

Содержание сухих веществ в полученных нами экстрактах определялось гравиметрическим методом. Навеска экстракта в количестве 1-2 г. помещалась в предварительно высушенный и прокаленный тигель и выдерживалась в течение 60 минут в сушильном шкафу при температуре 130° С. до постоянной массы. При определении сухих веществ в жидких концентрированных экстракта 2-3 мл его наливали в высушенный и взвешенный тигель, содержащий 6-8-кратное количество подготовленного особым образом кварцевого песка. Все тщательно перемешивали, подсушивали на водяной бане и сушили в сушильной шкафу в течение 60 минут при температуре 130° С. Песок необходим для увеличения поверхности испарения влаги. Песок предварительно промывается водой, затем соляной кислотои, после чего опять промывается водой до полного удаления кислоты. Хорошо промытый песок необходимо высушить и прокалить в муфельной печи.

Содержание сухих веществ определяется по формуле: х = т-<-а-ь'>,т т

Где х - содержание сухих веществ, %; а - масса тигля с экстрактом до выслушивания, г;

Ь - масса тигля с красителем после выслушивания, г; т - масса навески экстракта, г.

2.2.4,Определение количества красящих веществ в полученных экстрактах.

Содержания фенольных красящих веществ в выделенных нами экстрактах определялось фотоэлектроколориметрическим методом.

Фотоэлектроколориметрический метод определения количества красного пигмента в растворах предложен Леоновым Б. И [124]. В НИИ кондитерской промышленности этот метод детально изучен, уточнен и опробован при определении количества красящих веществ в ряде натуральных красных пищевых красителей.

Содержание красящих веществ в красителе определяют путем сравнения интенсивности окраски стандартного и испытуемого раствора. Определение количества красящих веществ в натуральных красных пищевых красителях проводится по стандартному раствору сульфата кобальта.

Стандартный раствор готовят следующим образом: взвешивают точно 20 г кристаллического сульфата кобальта (Со804*7Н20), растворяют в химическом стакане в дистиллированной воде и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой при температуре 20°С и все хорошо перемешивают. Приготовленный стандартный раствор сульфата кобальта по интенсивности окраски соответствует содержанию 22 мг красящего вещества (энина) в 1 л.

Затем готовят испытуемый раствор красящего экстракта. С этой целью навеску хорошо перемешанной средней пробы образца красителя в количестве 1 -4 г (в зависимости от содержания пигмента) взвешивают с точностью до 0,0002 г, разбавляют в химическом стакане дистиллированной водой, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл. В случае, когда цвет фенольных красящих веществ изучаемого экстракта обусловлен антоцианами, к раствору мерным цилиндром приливают 40 мл концентрированной соляной кислоты (плотностью 1190 кг/м , х. ч.) и содержимое колбы доводят дистиллированной водой с температурой 20°С до метки.

Приготовленный раствор должен быть совершенно прозрачным. Если раствор мутный или содержит нерастворимые частицы, его фильтруют через стеклянный фильтр или центрифугируют.

Интенсивность окраски исследуемого раствора и стандартного сравнивают на колориметре любого типа. Испытуемым раствором красителя наполняют кювету с толщиной измеряемого слоя 10 мм и определяют ее оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при зеленом светофильтре (А,=540 нм). Оптическую плотность стандартного раствора сернокислого кобальта определяют заранее.

При расчете количества красящих веществ исходят из того, что оптическая плотность раствора красителя пропорциональна концентрации пигмента в нем, т. е.

Б,: В2 = С,: С2. где В] - оптическая плотность стандартного раствора сернокислого кобальта;

- оптическая плотность испытуемого раствора красителя;

С1 - концентрация энина;

- концентрация пигмента в 1 л раствора красителя.

Содержание красящих веществ х в граммах в 1 л красителя рассчитывают по следующей формуле, выведенной из приведенного выше соотношения: с, А о,

0,022Д -1000 , или х =---г/л;

22 Д , „ или х =-- г/л; Где га - масса навески красителя, г.

Метод определения содержания красящих веществ в желтых красителях, например в куркуме и ее спиртовых экстрактах, основан на колориметрировании испытуемого раствора и определении количества желтого пигмента по предварительно построенной калибровочной кривой. Кривую строят по стандартному водному раствору бихромата калия (К2Сг207), содержащему 360 мг этой соли в 1000 мл. 1 мл стандартного раствора К2Сг207 соответствует 2,08 мкг каротина.

Для приготовления стандартного раствора используют трижды перекристаллизованный бихромат калия, навеску которого в количестве 0,360 г, отвешенную с точностью 0,0002 г, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 мл.

Для построения калибровочной кривой приготовленный стандартный раствор К2Сг207 из бюретки точно дозируют в мерные колбы вместимостью 50 мл в количестве соответственно 45, 40, 35 мл и т. д.

Затем содержимое каждой колбы разбавляют дистиллированной водой при температуре 20°С до метки.

В полученных растворах бихромата калия определяют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 10 мм при синем светофильтре (^=480 нм). В табл.2.2.4.1 представлены средние данные определения оптической плотности разведенных водой стандартных растворов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рахимова, Файзигул Амонкуловна, Душанбе

1. Кретович B.J1. Биохимия растений. М., 1980.-445с.

2. Биохимия фенольных соединений// под ред Дж.Харборна. М., 1968.- 451с.

3. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений. М., 1,Т.2- С. 167-203.

4. Базарнова Ю.Г. Исследование содержания некоторых биологически активных веществ, обладающих антиоксидантной активностью, в дикорастущих плодах и травах.\\Вопросы питания. 2007.-Т.76.- №1.-С.22-25.

5. Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. -М., 1984.-С160.

6. Липкан Г.Н. Применение плодово-ягодных растений в медицине. Киев- 1988.-С.120-122.

7. Спиричев В.Б., Шатнюк JI.H. Обогащение пищевых продуктов микро-нутриентами: современные медико-биологические аспекты. \\Пищевая промышленность.- 2002.- №7.-С. 98-101.

8. Касьянов Г.И., Кизим.И.Е., Холодцов М.А. Применение пряно-ароматических и лекарственных растений в пищевой промышленности.\\Пищевая промышленность.-2000.- №5. -С.33-35.

9. Толкунова H.H., Чуева E.H., Бидюк А .Я. Влияние экстрактов растений на развитие микроорганизмов // Пищевая промышленность.-2002.-№ 8.- С.70-71.

10. Демидов И.Н., Данилова Л.А., Чернова Л.А., Гладкая В.Ф. и др. Влияние добавок растительных экстрактов на окисление жиров // Пищевая промышленность.-1992.- № 9.- С.35.

11. Толкунова H.H. Влияние эфирных масел на микробиологические показатели мясопродуктов. //Пищевая промышленность,2002. -№12.- С.56-58.

12. Вагин В.В. Повысить качество колбасных изделий.//Пищевая промышленность.-1992.- № 9.- С.36-37.

13. Карнаушенко Л.И., Золотарева Л.А. Калугина И.М. Фитодобавки и их влияние на реологические свойства мармеладной массы. \\Пищевая промышленность.- 1999. -№ 3.- С.27.

14. Климантова Е.В. Использование каротиноидов в качестве красителей.// Пищевая промышленность.-1996. -№6,- С.28-29.

15. Петров А.А.,Бальян X.B.,Трощенко А.Т. Органическая химия.-М., 1969.-671с.

16. БакулинаО.Н. Натуральные пищевые красители.//Пищевая промышленность.-1999.- №8. С.46-48.

17. Архипова А.Н. Пищевые красители, их свойства и применение. \\Пищевая промышленностью.- 2000.- № 4.- С.66-69.

18. Харламова O.A., Кафка Б.В. Натуральные пищевые красители.\\Пищевая промышленность.- 1979. -№ 6.-С.21-23.

19. Гулин А.Н. Перспективы использования каротиноидов в качестве красителей. \\Пищевая промышленность.- 2003.- №10.- С.72-73.

20. Колмакова Н.С. Последние исследования в области безопасности синтетических красителей и тенденции развития рынка. //Пищевая промышленность.- 2008.- №11.- С.56-57.

21. Поваляева H.A. Каротиноидные красители.// Пищевая промышленность. -2003.- №5. С.52-53.

22. Колмакова Н.С. Последние исследования в области безопасности синтетических красителей и тенденции развития рынка// Пищевая промышленность.-2008.- №11.- С.56-571.

23. Прянишников В.В.,Микляшевски П., Гиро Т.М. АКТИВ-РЕД натуральный пигмент для мясных продуктов. // Мясная индустрия .-2010.- №3.- С.28-30.

24. Гусейнов В.М., Алиев С.А., Асланова В.А., Садыхова P.A. О возможности применения красителей растительного происхождения для производства колбасных изделий // Мясная индустрия .-1986.- №3.- С.25-28.

25. Семенова A.A., Беретов JI.A. Если мясной продукт красный, значит он небезопасный? // Мясная индустрия.-2009.-№ 10.С.20-24.

26. Исупов В.П. Пищевые добавки и пряности. История, состав, применение. СПб.ГИОРД. 2007,230 с.

27. Ходжиматов М. Дикорастущие лекарственные растения Таджикистана. Душанбе,1989.-С.137-144.

28. Блажей А., Шутый J1. Фенольные соединения растительного происхождения, М., Мир, 1968, 120с.

29. Филлипцова Г.Г., Смолич И.И. Основы биохимии растений. Минск БГУ, 2003.- 136с.

30. Неницеску К. Органическая химия. -М., 1963- 330с.

31. Скорикова Ю.Г. Полифенолы плодов и овощей и формирование цвета продуктовЛШшцевая промышленность. 1973.- №3. -С.9-32.

32. Яковлева Г.А. Лекарственное сырье растительного происхождения. \\Фармакогнозия. -2006.- 845 с.

33. Головкин Н., Руденская Р.Н., Трофимова И.А., Шретер А.И. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.-М., Наука.- 2002.-205с.

34. Горелик М. В. Химия антрахинонов и их производных.- М., 1983-301с.

35. Ullmann's Encyclopedic, 4 Aufl., Bd 7, Weinheim.- 1974 S. 579.

36. Johanson JF. Sonnenberg A, Koch TR: Clinical epidemiology of chronic constipation. J Clin Gastroenterol, 1989; II: 525-36

37. Запрометов, M.H. Фенольные соединения. Распространение, метаболизм и функции в растениях / М.Н. Запрометов М.: Наука, 1993, 272с.

38. Валиева А.И., Абдурахимова И.Р. Вторичные метаболиты растений: физиологические и биохимические аспекты (часть 3. Фенольные соединения) Казань, КФУ.- 2010,- 40 с.

39. Evans J.R. Carbon fixation profiles do reflect light absorption profiles in leaves // Aust. J. Plant Physiol.-1995. V.22, P. 865-873.

40. Feild T.C., Lee D.W., Holbrook N.M. Why leaves turn red in autumn. The role of anthocyanins in senscing leaves of red-osier dogwood. Plant Physiol. 2001, V.127. P.566-574.

41. Phenolic Compounds in Food and Their Ef fects on Health. I: Analysis, Occurrence, and Chemistry (Ho CT, Lee CY, Huang MT, eds.), American Chemical Society, Washington, DC.- 1992.- P. 102-117.

42. Velioglu YS, Mazza G, Gao L, Oomah BD: Antioxidant activity and total phenolics in selected fruits, vegetables and grain prod ucts. J Agric Food Chem.- 1998. V. 46.- P. 4113-4117.

43. Олениченко Н.А. Фенольные соединения и устойчивость мягкой пшеницы (Triticum aestivum L.) к низкотемпературному воздействию. Диссертации кандидата биологических наук. М.: ИФР РАН.-2006.-131с.

44. Brett С.Т., Waldron Е.К. Physiology and biochemistry of plant cell wall.- Eds. Black M., Cahapman E.J.- London: Unwin Hyman.- 1990.- 194p.

45. Чернов Ю.Н., Бузлама A.B., Дронова Ю.М. Полифенольные соединения: структура, свойства и прикладные аспекты применения // Фарматека. 2004. -№8. С. 43-48.

46. Бриттон Г. Биохимия природных пигментов.- М.,Мир.- 1986- 422с.

47. Георгиевский В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск, Наука.- 1990.-144с.

48. Танчев С.С. Антоцианы в плодах и овощах.- М. Пищевая промышленность.-1980-304с.

49. Биохимия фенольных соединений. Под ред. Н.М.Эммануэля М.: Мир.- 1968.-451с.

50. Редико Е.Э. Анализ и стандартизация полифенольного комплекса листьев и жома плодов черной смородины. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук, 2010, 133 с.

51. Пасешниченко В.А. Растения продуценты биологически активных веществ. \\Соросовский образовательный журнал.-2001.-Т.7.- №8.-С.13-19.

52. Левицкий А.П., Вертикова Е.К., Селиванова Н.А. Хлорогеновая кислота: биохимия и физиология. Микробиология и биотехнология.-2010.- №2.-С.6-20.

53. Winkel-Shirley В. Flavonoid biosynthesis. A colorful model for genetics, biochemistry, cell biology, and biotechnology. Plant Physiol. 2001 V.126.- P.485-493.

54. Лукнер M. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных.М., Мир,1979-548с.

55. Высочина Г.И. Эволюция и филогенетические отношения родов в семействе POLEGONACEAE гречишные в связи с биогенезом фенольных соединений. Растительный мир Азиатской России.- 2008 С. 1-8.

56. A.C. 1693002 СССР. Способ получения пищевого красителя. Р.А.Атакузиева, Х.Т.Саломов, К. Давронов, Т.Т.Саилова, А.А.Алимбаева. № 4745199/13 заявлено 03.10.89, опубликовано 23.11.91.Бюл. № 43.

57. A.C. 126570 СССР. MKU С 09Ь6/00 Способ получения пищевого красителя. Б.И.Леонов, Н.М.Руднев, Г.Б.Леонов. № 633761/28, заявлено 13.06.1959. Опубликовано Бюллетень изобретений № 5 за 1960.

58. A.C. 189974 СССР. МПК С 09Ь 61/00 А231 1/27. Способ производства пищевого красителя. Ф.Г.Ахметзянова, В.Г.Сперанский № 1006179/28-13, заявлено 07.05.1965, опубликовано 16.12.1966, бюллетень №1 «Открытия и изобретения».

59. A.C. 571492 СССР МКл2 С 09 В 61/00 А 23 L 1/27. Способ получения красного пищевого красителя. Б.В.Кафка, С.А.Салихов, А.С.Султанходжаев, М.А.Аскаров. № 2063427/13, заявлено 24.09.74 , опубликовано 05.09.77, бюллетень № 33.

60. A.C. 277155, МПК С 09Ь 61/00. Способ получения красного пищевого красителя. М.П.Каджая. № 1344877/28-13. заявлено 02.07.1969, опубликовано 22.07.1970, бюллетень № 24.

61. Балиян А.Р., Эгамбердиев Н.Б., Наралиева Б.Ф. Новый пищевой краситель для кондитерской и безалкогольной отраслей. \\ Пищевая промышленность.- 1994,-№6.- С.13.

62. Касумов М.А. Новые красильные растения. //Пищевая промышленность.-1991.- №12.-С.75-77.

63. A.C. РФ 1693002 AI 09 В 61/00 Способ получения пищевого красителя Р.А.Атакузиева, Х.Т.Саломов, К.Давронов, К.Т.Саилова, А.А.Алимбаев № 554275. Заявлено 03.10.1989, опубликовано 23.11.91, бюллетень № 43.

64. A.C. 1055749 СССР С 09 В 61/00 Способ получения красителя из плодов тутового дерева. Р.З.Алиев, Р.А.Зумеров, Л.Г.Сентюрова. № 3402773/28-13. Заявлено 25.02.1982, опубликовано 23.11.83, бюллетень № 43.

65. A.C. 2158743 РФ. 7 С 09 В 61/00. Способ получения антоцианового красителя из растительного сырья. В.А. Смирнов, В.В.Сидоров, В.В.Смирнова. № 000110391/13. Заявлено26.04.2000, опубликовано 10.11.2000, бюллетень № 31

66. A.C. 277987 AI С 09 В 61/00 Способ получения красного пищевого красителя. З.К.Чхеидзе № 1319201/13. Заявлено 10.04.1969, опубликовано 05.08.1970, бюллетень № 25.

67. A.C. 1501054 AI С 09 В 61/00 Способ получения красного пищевого красителя. В.А.Бурыгин, С.А.Салихов, A.C. Султанходжаев, С.Ф.Фахрутдинов, А.Н.Зайцев и В.Ж.Муратова. № 2020654/13. Заявлено 29. 04.74, опубликовано 07.01.76, бюллетень № 4.

68. A.C. 1669950 AI С 09 В 61/00 Способ получения пищевого красителя. Д.К.Шапиро, В.В.Вересковский, С.Ю. Буслович, Н.А.Каган, Л.Г.Бирюкова, М.А.Кудинов. № 3976460/13. Заявлено 18. 12.85, опубликовано 15.08.91, бюллетень № 30.

69. Хайрутдинова А.Д. Разработка технологии антоциановых красителей из растимтетльного сырья: диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук, Воронеж, 2004, 224 с.

70. A.C. 15982318 AI С 09 В 61/00; А 23 L 1/27 Способ получения красного пищевого красителя. В.Б.Кулиев, Ф.А.Мамедов, Г.Л.Филонова, Р.А.Ермакова., Н.А.Комракова, В.В.Трейс. № 4482497/30-13. Заявлено 15.09.89, опубликовано 15.09.90, бюллетень № 34.

71. A.C. 340673 СССР. M. Кл. С. 09b 61/00 Способ получения красного пищевого красителя из свеклы. Ю.Т.Жук, И.Э. Цапалова № 1440878/13, Заявлено 18.05.70, опубликовано 05.06.72, бюллетень № 18.

72. АС. 1742295 СССР. МПК С 09Ь 61/00 А231 1/27. Способ получения пищевого красителя. Р.Г.Бинеев, Л.П.Зарипова, А.Г.Лиакумович, С.И.Агаджанян и Н.В.Шильникова. № 2068809, заявлено 26.06.1989, опубликовано 23.06.1992, бюллетень №23.

73. A.C. 405923 СССР. М. Кл. С. 09Ь 61/00 Способ производства пищевого красителя из растительного сырья. Н.И.Манциводо, М.С.Горбачевкая, Б.Г.Залецкая, В.В .Малаш, В.Н.Залецкий. № 1427475/28-13, Заявлено 04.05.70, опубликовано 05.11.73, бюллетень № 45.

74. A.C. 267783 СССР. М.Кл. С. 09Ь 61/00. Способ получения пищевого красителя из пленки зерен сорго. Л.Е.Олифсон, А.П.Нечаев, Н.Д.Осадчая, Л.И.Михайлова « 1292119/28-13 Заявлено 25.12.68, опубликовано 02.04.70, бюллетень №13.

75. Патент РФ, 2280660 С1 С. 09В 61/00. Способ получения пищевого красителя на основе скорлупы орехов. О.М. № 98100503/13. Заявлено 14.01.98, опубликовано 20.05.99, бюллетень № 14.

76. A.C. 460286 СССР. М. Кл С 09Ь 61/00 Способ получения красного пищевого красителя из растительного сырья. З.К.Чхеидзе, О.Р.Кобаладзе, И.И.Бурачевский. № 1927733/28-13. Заявлено 05.06.73, опубликовано 15.02.75, бюллетень № 6.

77. A.C. 869305 СССР, С 09 В 61/00 Способ получения пищевого красителя из свеклы для клеймения мясных туш. О.А.Кремнев, Боровский В.Р., Лопатин В.В., Демченко В.В. №2991603/13.Заявлено 23.10.80, опубликовано 15.10.93, бюллетень №37-38

78. Патент РФ 2001070 С1 с 09 В 61/00 Способ получения красного красителя. Астанов С., Вафоев Б.У., Сохибов Э.Р. № 5019699/13. Заявлено 28.12.91, опубликовано 15.10.92, бюллетень № 37.

79. A.C. 440393 СССР, МПК С. 09Ь 61/00. Способ получения пищевого красителя из сырья растительного происхождения. М.Г.Абуталыбов, Р.М.Аббасов, С.М.Асланов № 1819928/28-13. Заявлено 10.08.72, опубликовано 25.08.74, бюллетень №31.

80. A.C. 231051 СССР, МПК С. 09Ь 61/00. Способ получения пищевого красителя из выжимок плодов и ягод. В.В.Андреев, Э.М.Шприцман № 845824/28-13. Заявлено 08.07.63, опубликовано 15.11.68, бюллетень № 35.

81. Патент RU 2133621, МПК 6 А 61 К 35/78. Способ получения растительного полифенольного экстракта. О.Б.Максимов, Н.И.Кулеш, J1.C. Степаненко, П.Г.Горовой. опубликовано 27.07.1999, бюллетень № 21.

82. A.C. 2158743 РФ. 7 С 09 В 61/00. Способ получения антоцианового красителя из растительного сырья. В.А. Смирнов, В.В.Сидоров, В.В.Смирнова. № 000110391/13 Заявлено26.04.2000, опубликовано 10.11.2000, бюллетень № 31.

83. Патент РФ, 264423 С1 С. 09В 61/00. Способ производства пищевого красителя. № 98100503/13. Заявлено 14.01.98, опубликовано 20.05.99, бюллетень № 14.

84. A.C. 460287 СССР, МПК С. 09Ь 61/00. Способ получения красного пищевого красителя из растительного сырья. З.К.Чхеидзе. № 192773228-13, заявлено0506.73, опубликовано 15.02.75, бюллетень № 6.

85. A.C.501054 СССР, М. Кл.2 С. 09Ь 61/00. Способ получения пищевого красителя. В.А.Бурыгин, С.А.Салихов, А.С.Султанходжаев, С.А.Фахрутдинова, А.Н.Зайцев, В.Ж. Муратова. № 2020654/28-13, заявлено2904.74, опубликовано 30.01.76, бюллетень № 4.

86. A.C. 1081188 А СССР, С. 09Ь 61/00. Способ получения красного красителя из кошенили. 3. Инерсисян, A.B. Мушигян, К.Э. Хачатурян. № 3481422/23-05, заявлено 04.08.82, опубликовано 23.03.84, бюллетень № 11.

87. A.C. 343987 СССР, M. Кл. С. 09Ь 61/00. Способ получения пищевого красителя из семян орлеана. П.Ф.Разинков, Б.М.Гаврилов, Н.В.Клочкова. № 1448693/28-13. Заявлено 15.06.70, опубликовано 07.07.72, бюллетень № 21.

88. A.C. 1758049 А 1 СССР, С. 09Ь 61/00. Способ получения концентрата желтого красителя из цветков сафлора. А.А.Кулиев, И.В.Копмане, Г.М.Насирова. № 4822772/05. Заявлено 23.03.90, опубликовано 30.08.92, бюллетень № 32.

89. Патент РФ ,2001072 С1 С. 09В 61/00. Способ получения красителя из шелухи лука. JI.M. Ильина, О.М. Квасенков. № 5038855/13. Заявлено 21.04.92, опубликовано 15.10.93, бюллетень № 37-38.

90. Патент РФ ,2130472 С1 С. 09В 61/00. Способ производства красителя из шелухи лука. О.М. Квасенков, В.А. Ломачинский, Э.С. Гореньков. № 98100503/13. Заявлено 14.01.98, опубликовано 20.05.99, бюллетень № 14.

91. A.C.18819275 СССР, М. Кл. С. 09Ь 61/00. Способ получения пищевого красителя для пищевых продуктов. И.И. Сафронова, А.Г. Губанова, Л.Я. Полищук, Г.С. Христоферзен. №987960 . Заявлено 11.09.90, опубликовано 30.05.93, бюллетень № 20.

92. A.C. 510492 СССР, МПК С. 09Ь 61/00. Способ получения пищевого красителя из растительного сырья. М.Г.Абуталыбов, С.М. Асланов, Н.М.Исмаилов, Э.Н. Новрузов № 2043247/-13. Заявлено 09.07.74, опубликовано 15.04.76, бюллетень №31.

93. Патент РФ, 2154075 С1 09 В 61/00. Способ получения пигментной добавки из растительного сырья. Кацерикова Н.В., Ильина Н.Г., Казанкова O.A., Мусин Ю.В. №98121967/13. Заявлено 03.12.1998, опубликовано 10.08.2000, бюллетень №22.

94. A.C. 878770 СССР, М.Кл2 С. 09В 61/00. Способ получения концентрата каротиноидов. С.М.Асланов, Э.Н.Новрузов, О.В.Ибадов, Л.А.Шамси-заде. № 2780187/28-13. Заявлено 26.10.79, опубликовано 07.11.81, бюллетень № 41.

95. A.C. 1567589 AI СССР, С. 09В 61/00. Способ производства каротинсодержащего красителя из моркови. Л.А.Брикмане, А.Н.Морорзов,

96. Д.Л.Лиепа, У.Я.Кулиныд № 4312214/31-13. Заявлено 02.10.87, опубликовано 30.05.90, бюллетень № 20.

97. Патент RU 2174011, МПК 7 А 61 К 35/78, С 07 С 37/80. Способ получения полифенолов / Рубчевская Л.П., Лебедева О.И., Ушанова В.М., Лис Е.В., Репях С.М. Опубл. 27.09.2001, бюллетень №27.

98. Патент RU 2175236, МПК 7 А 61 К 35/78, 31/05, С 07 С 39/04. Способ получения суммы полифенолов / Безпалько Л.В. и соавт. Опубл. 7.10.2001, бюллетень №30.

99. Патент RU 2171111, МРК. А 61 К 35/78. Экстракт листьев аронии, обладающий биологической активностью, и способ его получения. / Платова О.М. и соавт. опубликовано 27.07.2001, бюллетень № 21.

100. Касумов М.А., Гасымов A.A. Полифенольные желтые пищевые красители. \\ Пищевая промышленность. -1996. -№ 6.- С. 12.

101. A.C. 266117 СССР, МПК С. 09В 61/00. Способ получения пищевого зеленого красителя из растительного сырья. Касперская Т.В., Семенова Н.П. № 1307201/28-13. Заявлено 17.11.1969, опубликовано 17.03.1970, бюллетень № 11.

102. Мустафина A.C., Помозова В.А., Сорокопуд А.Ф. Исследование процесса экстрагирования черной смородины// переработка сельскохозяйственного сырья: тезисы научных работ.- Кемерово, 1999.- С 42 43.

103. A.C. 275271 СССР, МПК С. 09В 61/00.Пищевой краситель М.А.Бокучавы и Г.Н.Пруидзе, содержащий естественные красящие вещества и витамины. 902552/28-13. Заявлено 26.05.64, опубликовано 03.07.70, бюллетень № 22.

104. Патент РФ, 2126025 С1 6 С 09 В 61/00. Способ получения таннидов из растительного сырья. Шекуров В.Н., Ефремов Б.А., Ибрагимов Ш.Н.,

105. Чеченев Л.А., Лазько A.C. заявлено 09.06.1994, опубликовано 10.02.1999, бюллетень № 4.

106. Патент РФ, 2159257 С1 7 С. 09В 61/00. Способ получения черного красителя из природного происхождения. А.П. Хачатрян, Р.Г.Хачатрян № 99118612/13. Заявлено 02.02.98, опубликовано 20.11.2000, бюллетень № 32.

107. Патент РФ ,2159258 С1 7 С. 09В 61/00. Способ получения черного красителя из природного происхождения. А.П. Хачатрян, Р.Г.Хачатрян № 99125162/13. Заявлено 06.12.99, опубликовано 20.11.2000, бюллетень № 32.

108. Патент СССР , 584799 М. Кл2 С1 7 С. 09В 61/00. Способ получения красного пищевого красителя. Х.Р.Молл, Д.Р.Фарр. № 2187199/05. Заявлено 06.11.75, опубликовано 15.12.77, бюллетень № 46.

109. A.C. 1786048 СССР, С. 09В 61/00. Способ получения пищевого красителя . Ляшенко Е.С./, Мелетьтев А.Е.,Проценко А.Т., СеменоваТ.С., Калашнюк Л.В. Гайворон Е.Ф. № 4837657/13. Заявлено 08.06.90, опубликовано 07.01.93, бюллетень № 1.

110. A.C. 1689389 А 1 СССР, С. 09В 61/00. Способ получения красного пищевого красителя. Атакузиева P.A., Саломов Х.Т. № 4730900/13. Заявлено 22.08.89, опубликовано 07.11.91, бюллетень № 41.

111. Патент СССР, 1819275 A3 С 09 В 61/00. Способ получения красителя для пищевых продуктов Сафронова И.И., Губанова А.Г., Полищук Л.Я. № 4865074/13. Заявлено 11.09.90, опубликовано 30.05.93, бюллетень №20.

112. Семенова A.A., Беретов Л.А., Черемных Е.Г. Новый пищевой краситель для мясных продуктов // Мясная индустрия.-2007.- № 10.-С. 34-36.

113. Семенова А.П., Беретов Л.А. О безопасности ферментированного риса // Мясная индустрия. -2007.- № 8.-С.8.

114. Кричман Е.С. Тартразин и другие. //Пищевая промышленность.-2002.- №7.-С.62.

115. Нуралиев Ю. Лекарственные растения Таджикистана Душанбе, Маориф.-1989.-С.183.

116. Шукуров А.Ш., Станюкович М.Б. Основные красильные растения Таджикистана // Изв. АН Тадж.ССР. Отд-ние биол. наук, 1974. №2 (47). С. 1924.

117. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия) М: Медицина.-1985- 463с.

118. Гаммерман А.Ф.Дадаев Г.Н. и др. Лекарственные растения. М., Высшая школа. 1975, 400 с.

119. Жизнь растений. Под ред. А.А.Тахтаджяна. М.: Просвещение.-1980.-С.330.

120. Кацерикова. Н.В. Пищевая промышленность.- 2000.- № 1.-С.33-34.

121. Харламова O.A., Кафка Б.В. Натуральные пищевые красители. \\Пищевая промышленность.-1979.- № 5.-С.22-23.

122. Западнюк И.П., Западнюк В.И. , Захария Е.Г., Западнюк Б.В. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев, «Вища школа».-983-383с.

123. Кишкун A.A. Руководство по методам диагностики М., «ГЭОТАР-Медиа».-2007-779 с.

124. Гуськова Т.А. Оценка безопасности лекарственных средств различных фармакологических групп.// Новые препараты в фармакологии.-Москва.-2003.- №9.-С.20-30.

125. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / Л. Из-во мед. лит.-1986-184 с.

126. Использование лабораторных животных в токсикологическом эксперименте. Под ред. П.И.Сидорова. Архангельск.-2002- 20 с.

127. Долгов В.В., Морозова В.А. Клинико-диагностическое значение лабораторных показателей. -М.: Медицина.- 1997.-160с.

128. Мокеев А.Н. Применение карамельных красителей в хлебобулочных кондитерских изделиях и выпечке.// Пищевая промышленность. -2002.- №11.-С. 52-53.

129. Истомина М.М. Технология и техника механизированного производства тортов и пирожных. М: Пищевая промышленность.-1975-252с.

130. Журавлева Е.И. Технологи я кондитерского производства. М: Пищпромиздат.-1962-442С.

131. Кузнецова Л.С., Седанова М.Ю. Технология приготовления мучных кондитерских изделий. М: «Мастерство».-2002-319с.

132. Лурье И.С. Технология и технохимический контроль кондитерского производства. М: Легкая и пищевая промышленность.-1981-325с.

133. Газаева М.С., Хамицаева A.C., Мамукаев З.М. Вареная колбаса «Осетинская» для лечебно-профилактического питания // Пищевая промышленность.-2007.-№6.-С.60-61.

134. Шумиляк К., Скрабка Т. Применение красителей в производстве мясопродуктов. //Пищевая промышленность.- 1991.- №8.- С.93-97

135. Кученев П. В., Барабанщиков И.В. Практикум по «молочному делу» М: «Колос».- 1968-190с.

136. Химия древесины. Под ред. Иванова М.А., М., Лесная промышленность.-1982.-С.173-184.

137. Герасимов Я.И. Курс физической химии.- М., Химия.-1973.С.24.

138. Киреев В.А. Курс физической химии. М., Химия.- 1975.-С.627.

139. Жуховицкий A.A., Шварцман Л.А. Физическая химия. М., Государственное научно-техническое издательство цветной металлургии.-1963.- 646с.

140. Райд К. Курс физической органической химии. М. Мир.-1972.- 552с.

141. Миронов В.А., Янковский С.А. Спектроскопия в органической химии. М., Химия,- 1985.- 232 с.

142. Кунаева Р. М. Гидролитические и окислительные ферменты обмена фенольных соединений растений. Диссертации доктора биологических наук, Алма-Ата.-1984. -320с.

143. Дренин A.A. Флавоноиды и изофлавоноиды трех видов растений родов TRIFOLIUM L. и VICIA L. Автореферат диссертации на соискание учепной степени кандидат химических наук. -2008.- 24с.

144. Браславский В.Б., Куркин В.А., Исследование электронных спектров флавоноидов тополя и прополиса. \\ Медицинский альманах, №2,(156). -2011.-С.140-144.

145. Росивал Л., Энгст Р., Соколай А. Посторонние вещества и пищевые добавки в продуктах. \\ Легкая и пищевая промышленность.-1982.- С.117

146. Буланкин Д.Г. Исследование по стандартизации и разработке лекарственных средств на основе листьев гинкго двулопастного. Диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. -2011.Д 10 е.

147. Давитян Н.А. Разработка технологи и нормирование качества жидкого и сухого экстрактов травы стальника полевого. Диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. 2007 г., 173 с.

148. Вичуткина Е.А. Создание фитосбора «Нефролен» с использованием рационального химико-фармакологического подхода. Диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. 2007 г., 173 с.

149. Мирович В.М. Фармакогностическое исследование представителей родов ORIGANUM L. И RHODODENDRON L. Флоры Восточной Сибири. Диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук. 2010 г., 308 с.

150. Johanson JF. Sonnenberg A, Koch TR.Clinical epuiemiology of chronic constipation. \\ J Clin Gastroenterol. 1989.-P. 525-36.

151. Read NW, Celik AF, Katsinelos P. Constipation and incontinence in the elderlyA\ J Clin Gastroenterol. 1995.- V.20. P.61-70.

152. Whitehead WE., Chaussade S, Corazzian E. Kumar D: Report of an international workshop on management of constipation. Gastroenterology International. 1991.-V.-20. P.61-113.

153. Heaton KW, Radvan 3, Cripps H et al: Defecation frequency and timing, and stool form in the general population: a prospective study. Gut. 1992/ V.33/- P.818-24.

154. Haran D, Gunvitz JH, Avorn J et al: Bowel habit in relation to age and gender. Findings from the national health survey and clinical implications. Arch Intern Med. 1996.-V.56. P.315-20.

155. Андрушкевич В. В. Биохимические показатели крови, их референсные значения, причины изменения уровня в сыворотке крови г. Новосибирск. 2006-172с.

156. Жаринов А.И., Воякин М.П. Технологизмы» мясного производства // Мясная индустрия. 2008.-№1.- С. 30-33.

157. Месхи А.И. Биохимия мяса, мясопродуктов и птицепродуктов.\\ Легкая и пищевая промышленность.- 1984- 280с.

158. Соколов А. А. Физико-химические и биологические основы технологии мясопродуктов. \\Пищевая промышленность.- 1965- 490с.

159. Гусейнов В.М., Алиев С.А., Асланова В.А., и др. Возможности применения красителей растительного происхождения для производства колбасных изделий // Мясная индустрия.-1986.- № 3.- С.79.

160. А. С. 1261611 СССР, кл. А22С 5/00. Способ цветообразования мясных изделий/В.М. Горбатов, В.М. Чесников (СССР).-№3742305/28-13; Заявлено 23.05.84; опубл. 07.10.86. Бюл. № 37 // Открытия. Изобретения.- 1983-37.-С.77.

161. Ефимова И.Е., Белодедова A.C. Использование кармина при производстве мясных изделий // Пищевая промышленность.-2003.-№8.- С.96.

162. Семенова A.A., Беретов Л.А., Черемных Е.Г. Новый пищевой краситель для мясных продуктов // Мясная индустрия.-2007.- № 10.- С.34-36.

163. Касьянов Г.И., Алешкевич Ю.С. Пути формирования цвета мясных продуктов// Пищевая промышленность.-1999.- №4.-С.41.

164. A.C. 1011092 СССР, кл. А22С 11/00. Способ цветообразования мясных изделий /И.П. Кривопишин и А.Д. Игнатьев .- №3363965/28-13; Заявлено 08.12.81; опуб. 15.04.83, бюл. № 14 // Открытия. Изобретения.- 970.- № 14.-С. 63.

165. Куликов Ю.И., Дадян Н.К. Новый натуральный краситель для производства вареных колбас.\\ Мясная индустрия.- 2009.- №10.- С.26-29.