Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические механизмы повреждения головного мозга плода и новорожденного, развивавшегося в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения, и их коррекция (экспериментальное исследование).

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические механизмы повреждения головного мозга плода и новорожденного, развивавшегося в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения, и их коррекция (экспериментальное исследование)."

На правах рукописи

ТОМИЛОВА Ирина Константиновна

(г, 4

БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПОВРЕЖДЕНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА ПЛОДА И НОВОРОЖДЕННОГО, РАЗВИВАВШЕГОСЯ В УСЛОВИЯХ НАРУШЕНИЯ МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ, И ИХ КОРРЕКЦИЯ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.01.04 - Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

1 7 ш 2012

Москва - 2012

005044300

005044300

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ивановская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный консультант:

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Терентьев Александр Александрович

Официальные оппоненты:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Панченко Леонид Федорович (заведующий лабораторией биохимии ФГБУ «Национальный научный центр наркологии» Минздравсоцразвития России)

доктор медицинских наук Турина Ольга Ивановна (руководитель лаборатории нейрохимии отдела фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГБУ «Государственный научный центр социальной и судебной психиатрии им. В. П. Сербского» Минздравсоцразвития России)

доктор медицинских наук Голубев Михаил Аркадьевич (главный специалист по лабораторной диагностике, заместитель руководителя медицинского отдела ООО «Столица-Медикал»)

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Минздравсоцразвития России.

Защита состоится « » — 2012 года в ич часов

на заседании диссертационного совета Д 208.072.01 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова» Минздравсоцразвития России по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н. И. Пирогова Минздравсоцразвития России по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1

Автореферат разослан «

» 2012 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор II. Г. Потешкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность научного исследования

Нарушения внутриутробного развития плода влекут за собой риск формирования психомоторных и соматических расстройств, нередко не компенсируемых в течение всей последующей жизни (Барашнев Ю. И., 2002; Попова Ю. Ю., 2007; НабиеваТ. Н., 2009; Володин Н. Н., 2010; Николаева Т. Н., 2011). Общеизвестным является тот факт, что патологическое течение перинатального периода часто приводит к невынашиванию беременности, задержке внутриутробного развития плода, повреждению различных органов и систем, что в свою очередь обусловливает высокие показатели перинатальной смертности и отрицательно влияет на здоровье будущего поколения.

Среди факторов, неблагоприятно отражающихся на течении антенатального периода, большое значение имеет нарушение маточ-но-плацентарного кровообращения (МПК), причиной которого могут быть экстрагенитальная патология у матери, наличие острых и хронических инфекций, гестоз и т. п. (Васильева О. А., 2007; Driul L., 2008; Байбарин Е. Н., 2009). Нарушение МПК приводит к развитию гипоксии, являющейся центральным звеном патогенеза внутриутробного повреждения плода, и в первую очередь центральной нервной системы (Баранов A.A., 2001; Silveria R. С., 2003; NeerhofM. G., 2008; Фадеева Н. И., 2010). В структуре детской инвалидности патология нервной системы составляет около 40%, причем в 70-80% случаев она ассоциирована с перинатальными поражениями мозга (Пальчик А. Б., 2000; Барашнев Ю. И., 2002).

Неблагоприятный исход перинатальных поражений центральной нервной системы, приводящих к нарушению жизнедеятельности растущего организма, в значительной степени обусловлен несовершенством диагностики, прогноза и профилактики (Баранов A.A., 2001; Голосная Г. С., 2004; Володин Н. Н., 2010). Внедрение новых автоматизированных технологий и принципов интенсивной терапии позволило резко снизить перинатальную и неонатальную смертность, однако улучшения неврологического здоровья новорожденных, перенесших гипоксию, не произошло. В связи с этим в последние годы возрос интерес к изучению патогенеза изменений мозговых структур, подвергшихся гипоксическому воздействию, с целью проведения патогенетически обоснованной терапии в восстановительном периоде.

В клинической практике изучение недостаточности МПК и ее влияния на развивающийся плод представляет собой трудную задачу вследствие невозможности проведения биохимических исследований на уровне органов и тканей. Поэтому наиболее адекватными для решения этих вопросов являются экспериментальные исследования.

Работами ряда авторов в этой области установлен целый комплекс физиологических приспособительных реакций плода к неблагоприятным условиям развития, в частности, к гипоксии (Сизяко-ваГ. Л., 1991; Томилова И. К., 1995; Васильева Е. М., 2005; Richardson В. S., 1998; Jones С. Т., 1998; Silveria R. С., 2003). Однако информация о биохимическом статусе фетального мозга при данной форме патологии практически отсутствует. Вместе с тем, для понимания патогенетических механизмов антенатального повреждения головного мозга при нарушении МПК целесообразность проведения такого рода исследований вполне очевидна. Они необходимы также в плане обоснования эффективной медикаментозной коррекции перинатальных поражений ЦНС, учитывая, что назначение некоторых препаратов является до настоящего времени спорным и приводит к по-липрагмазии.

Цель исследования - установить биохимические механизмы повреждения головного мозга у плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровообращения, и обосновать подходы к коррекции выявленных сдвигов на основании показателей, характеризующих особенности процессов энергетического и углеводного обмена, метаболизма глу-таминовой кислоты и оксида азота, уровня свободнорадикальных процессов, элементного статуса и структурных изменений.

Задачи научного исследования

1. Исследовать особенности энергетического и углеводного обмена в головном мозге плодов крыс, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровообращения.

2. Выявить особенности обмена глутаминовой кислоты в мозге плодов и новорожденных крысят при нарушении маточно-плацентарного кровотока.

3. Оценить уровень свободнорадикальных процессов (перекисного окисления липидов и обмена оксида азота) и антиоксидантной защиты в мозге плодов и новорожденных крысят при патологической беременности и применении экзогенного донатора оксида азота.

4. Охарактеризовать микроэлементный статус в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения и применения препарата МагнеВб, а также его влияние на метаболические процессы.

5. Проанализировать структурные изменения в головном мозге плодов и новорожденных животных, развивавшихся в условиях антенатальной гипоксии и применения препарата МагнеВ6.

6. На основе выявленных адаптационных и дезадаптационных метаболических изменений и установленных коррелятивных связей между характеризующими их показателями определить метаболические маркеры повреждения головного мозга плода и новорожденного при нарушении маточно-плацентарного кровообращения.

7. Выделить приоритетные патогенетические составляющие для обоснования возможной биохимической коррекции метаболических нарушений в головном мозге плода и новорожденного, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровообращения.

Научная новизна исследования

Полученные в ходе исследования результаты существенно расширяют фундаментальные представления о возрастных аспектах метаболизма нервной ткани, а также о патогенетических механизмах повреждения головного мозга плода и новорожденного при нарушении маточно-плацентарного кровообращения.

Показана взаимосвязь и взаимообусловленность изменений энергетического, углеводного, нейромедиаторного обменов, интенсивности свободнорадикальных процессов и структурных изменений в головном мозге животных при нарушении маточно-плацентарного кровообращения.

Доказана однонаправленность структурно-метаболических процессов в головном мозге плодов и новорожденных крысят разной степени выраженности, что свидетельствует о стадийности патологических изменений при переходе от внутриутробного периода жизни к внеутробному.

Показано, что метаболические изменения в головном мозге плодов, обусловленные цереброваскулярными механизмами, носят компенсаторно-приспособительный характер к гипоксическому фактору, однако их последствия приводят к проявлениям эксайтотоксичности глутамата и окислительного стресса, являющимся патогенетическими звеньями повреждения нервной ткани.

Впервые предложены биохимические маркеры для оценки структурно-метаболических изменений в мозге плодов и новорожденных экспериментальных животных при патологической беременности.

Впервые показано, что при действии гипоксического фактора метаболическим маркером повреждающего действия N0 является концентрация цитруллина, повышение содержания которого отражает активность ЬЮ-синтазы как локальной компенсаторно-приспособительной реакции, лимитирующей интенсивность нитритредук-тазной компоненты цикла и гиперпродукции оксида азота. Уменьшение концентрации цитруллина при повышении уровня нитритов указывает на дезадаптивный характер изменений и является неблагоприятным признаком развития патогенетических механизмов гиперпродукции N0, обусловливающих нитрозильный стресс.

Впервые показано, что при недостаточности маточно-плацентар-ного кровообращения имеет место нутриентная недостаточность, в частности нарушение гомеостаза микроэлементов и их перераспределение, усу^бляющие развитие и проявления биохимических изменений.

Работа поддержана грантом Российского фонда фундаментальных исследований № 09-04-97552.

Практическая значимость исследования

Представленные новые данные о стадийности и различной степени выраженности структурных и метаболических изменений дают возможность применять дифференцированный подход к диагностике и фармакологической коррекции последствий антенатальной гипоксии у плода и новорожденного.

Предложенные метаболические маркеры, отражающие состояние энергетического, нейромедиаторного обмена, свободнорадикаль-ных процессов и элементного статуса, являются дополнительными объективизирующими критериями диагностики гипоксических поражений центральной нервной системы у ребенка и определения эффективности их лечения.

Доказана высокая эффективность применения и целесообразность включения в комплекс лечебных и профилактических мероприятий при нарушении маточно-плацентарного кровообращения препаратов магния в сочетании с пиридоксином.

Показано, что биохимическая коррекция элементного гомеостаза плода и новорожденного должна проводиться на ранних сроках беременности матери с профилактической целью.

Основные положения, выносимые на защиту

1. При действии гипоксического фактора в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения в головном мозге плодов и новорожденных крысят происходят однонаправленные компенсаторно-приспособительные и дезадаптивные изменения углеводного, энергетического и нейромедиаторного метаболизма.

2. Выявленные биохимические сдвиги сопряжены с выраженностью окислительного стресса и свободнорадикальных процессов и отражают фазовость структурных изменений ткани мозга.

3. Биохимические маркеры установленных изменений могут быть использованы для оценки структурно-метаболических нарушений и эффективности терапевтических мероприятий при диагностике, лечении и профилактике антенатальных поражений головного мозга плода и новорожденного.

4. Включение в комплекс фармакологической коррекции при недостаточности маточно-плацентарного кровотока у беременных крыс экзогенных донаторов оксида азота и препаратов магния в сочетании с пиридоксином оказывает нейропротективный эффект на головной мозг плода и новорожденного.

Апробация работы

Результаты исследования доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы пери-натологии» (Екатеринбург, 1996); VI Научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Молодежь и медицинская наука на пороге XXI века» (Киров, 2000); Международной конференции «Проблемы медицинской энзимологии» (Москва, 2002); межрегиональной конференции «Анестезиология и реаниматология Тюменской области: вчера, сегодня, завтра» (Тюмень, 2004); II Российской научной конференции «Молодые женщины в науке» (Москва, 2004); II Российской конференции по иммунотерапии и иммунореабилита-ции (Москва, 2005); XIII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (2008); IX Международном конгрессе «Здоровье в XXI веке» (Москва, 2008); XIV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2009); X Международном конгрессе «Здоровье в XXI веке», «Инновационные технологии в биологии и медицине» (Москва, 2009); научно-практической конференции студентов и молодых ученых Ивановской государственной медицинской академии «Неделя науки - 2009» (Иваново, 2009), III Всероссийской студенческой науч-

ной конференции Самарского государственного медицинского университета (Самара, 2009), XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2010); XI Международном конгрессе «Здоровье в XXI веке» (Москва, 2010), II Международной научной интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологий» (Pax Grid, 2011).

Публикации и сведения о внедрении в практику

По материалам диссертации опубликовано 34 работы, из них 17 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Результаты исследования используются в работе научно-исследовательской лаборатории ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В. Н. Городкова», научно-исследовательской лаборатории ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, а также в лекционном курсе на кафедрах биологической химии, фармакологии с клинической фармакологией, акушерства, гинекологии и неонатологии педиатрического факультета ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России и на кафедре органической и биологической химии ФГБОУ ВПО «Ивановский государственный университет».

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 221 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, и списка литературы, включающего 395 источников, в том числе 209 отечественных и 186 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 20 таблицами и 26 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

Модель нарушения МПК была воспроизведена по методике М.М.Вартановой (1984) на 629 белых беременных беспородных крысах путем перевязки части преплацентарных сосудов на 16-17-й день беременности, когда плацентация уже завершена и плод полностью переходит на плацентарное кровообращение. Первая группа животных забивалась на 21-22-й день беременности, т. е. в сроки, соответствующие концу периода гестации. После релапаротомии плоды извлекались из брюшной полости крыс, проводилось их взвешивание

и измерялась длина. Критериями степени повреждающего действия, которое оказывает уменьшение интенсивности МПК, были процент гибели и резорбции плодов после оперативного вмешательства, а также масса тела выживших плодов. Гибель плодов составила 10,5 ± 0,6%, масса выживших плодов экспериментального рога - 75% массы плодов контрольного рога (3,7 ± 0,2 и 5,3 ±0,1 г, р < 0,001), что соответствует данным литературы (Вартанова М. М., 1984). Длина туловища плодов экспериментального рога крысы была равна 5,43 ±0,07 см, в то время как у плодов . контрольного рога -5,93 ±0,06 см (р < 0,01), массо-ростовой коэффициент составил 0,73 ± 0,05 и 0,86 ± 0,04 соответственно (р < 0,01).

У 2-й прооперированной группы самок после родов на 2-е сутки крысята забирались от матери, проводилось их визуальное обследование, взвешивание и измерение длины туловища. Гибель крысят опытной группы в нашем эксперименте составила 8,6 ± 0,5% (против 2% в контрольной группе), масса выживших новорожденных крысят экспериментального рога - 87% массы крысят контрольного рога (6,39 ±0,1 и 7,31 ± 0,1 г, р < 0,001). Длина туловища опытных крысят была равна 5,83 ± 0,07 см, в то время как у контрольных крысят -6,42 ± 0,06 см (р < 0,001). Массо-ростовой коэффициент у опытных и интактных животных составил соответственно 1,1 ± 0,05 и 1,14 ± 0,04 (р > 0,05). Полученные результаты соответствуют данным литературы, что свидетельствует об адекватности постановки эксперимента (Журавин И. А., 2003).

Для постановки эксперимента с экзогенным донором оксида азота была использована 3-я группа прооперированных животных, которым сразу после операции на внутреннюю поверхность ушной раковины наклеивался пластырь, содержащий нитроглицерин «Депо-нит-10» («Schwarz Pharma», Германия), который обеспечивал выделение нитроглицерина со скоростью 0,001 мг/кг/ч.

Для изучения влияния препарата Магне-В6 на метаболизм и элементный статус головного мозга новорожденных крысят беременным крысам 4-й группы с 6-го дня беременности до конца периода гестации вводился Магне-В6; крысам 5-й группы введение препарата начиналось после операции и продолжалось также до конца периода гестации. Магне-Вб вводился животным обеих групп внутрижелудоч-но в дозе 10-15 мг/кг/сут (рекомендуемой беременным и кормящим женщинам). Выбор срока введения определялся тем, что критически низкий уровень пиридоксина (витамина В6) отмечается у женщин к концу первого триместра (Спасов А. А., 2000; Кудрин А. В., 2006).

Эксперимент проведен на 633 плодах и 926 новорожденных крысятах. Они обезглавливались, после чего у них извлекался головной мозг. В связи с тем, что его масса у плодов и новорожденных крысят в опыте не имела достоверных отличий от контроля, для подтверждения повреждающего действия, которое оказывает уменьшение интенсивности МПК, было проведено морфологическое исследование гиппокампа головного мозга плодов и новорожденных крысят, развивавшихся при нарушении МПК, а также в условиях применения Магне-В6. Контролем служили плоды и новорожденные крысята, развитие которых происходило в условиях сохраненного МПК. Гистологические срезы окрашивались гематоксилином и эозином по методу Ниссля; использовалась PAS-реакция, а также импрегнация нервной ткани серебром с помощью тестового набора «Bio Optica» (Италия). При микроскопическом исследовании проводилась оценка выраженности расстройства кровообращения в нервной ткани, характера ишемического повреждения нейронов, реактивных изменений нейро-глии.

Морфометрический анализ головного мозга в зоне гиппокампа основывался на определении плотности нейронов, подсчета количества поврежденных (с явлением тигролиза) и погибших (клетки-тени) нервных клеток, набухших аксонов с помощью анализатора изображений «Biovision» (Австрия) с использованием микроскопа «MC 200 Micros» (Австрия) и цифровой камеры «DCM 900» на базе лаборатории патоморфологии научно-исследовательского центра ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздрав-соцразвития России.

Проведенные нами эксперименты подтвердили повреждающее действие пренатальной гипоксии на головной мозг и, следовательно, адекватность используемой модели нарушения МПК. При патогисто-логическом исследовании сериальных срезов гиппокампа опытных плодов и новорожденных крысят были выявлены существенные расстройства кровообращения на фоне выраженного отека нервной ткани, а также гипоксическое/ишемическое повреждение пирамидальных нейронов дегенеративного характера. Морфометрический анализ показателей клеточной плотности выявил достоверное снижение концентрации нейронов у плодов опытной группы в 1,4 раза по сравнению с контролем (р < 0,05). У двухдневных крысят опытной группы наблюдались подобные, но более выраженные изменения головного

мозга. Концентрация нейронов у крысят опытной группы также уменьшалась в 1,7 раза по сравнению с контролем (р < 0,05).

Оценка функционального состояния синтетического аппарата нервных клеток у плодов и новорожденных крысят была проведена по методу Rigler в модификации В. Н. Карнаухова (1994) с использованием акридинового оранжевого. Результаты выявили достоверное снижение параметра а - отношения содержания одно- и двухспи-ральных нуклеиновых кислот - в опытных группах по сравнению с контролем (у плодов - 0,943 и 0,966 соответственно, у новорожденных - 0,961 и 0,832 соответственно, Ри < 0,05).

Для оценки интенсивности окислительных процессов в головном мозге плодов, развивавшихся в условиях недостаточности МПК, были использованы радиоизотопные методы исследования по определению скорости включения радиоактивного углерода из 6-иС-глюкозы, 1-'4С-а-кетоглутарата и 1-314С-лактата в двуокись углерода (Прохорова "М. И., 1959). Удельная радиоактивность выражалась количеством импульсов в минуту на 1 мг выделившегося углекислого газа.

Интенсивность использования альтернативных субстратов головным мозгом плода определялась путем измерения удельной радиоактивности после введения 1-314С-лактата внутрибрюшинно беременным крысам в дозе 0,3 мкКи/г массы животного и выражалась количеством импульсов за 1 минуту на 1 г ткани.

Анализ изменений интенсивности окислительной стадии гексозо-монофосфатного пути в мозге плодов был проведен на основании исследования скорости включения радиоактивного углерода из 1-14С-глюкозы в углекислоту.

Для выявления особенностей углеводного обмена в фетальном мозге исследовалась активность гексокиназы (Walker D., 1963), аль-долазы (Товарницкий В. И., 1965), лактатдегидрогеназы (Berq-meyerH. U., 1974), ее изоферментов (Hirano Т., 1987), а также общая интенсивность гликолиза и содержание глюкозо-6-фосфата (Lam-pretch W., 1965), лактата (Hohorst Н. J., 1970), АТФ (Lampretch W., 1965), АДФ и АМФ (Jaworek D., 1974).

Состояние обмена гликогена изучалось измерением интенсивности гликогенолиза по приросту лактата при инкубации постмитохонд-риальной фракции гомогенатов ткани мозга с гликогеном в атмосфере азота, а также по определению его содержания.

Для оценки обмена глутаминовой кислоты устанавливалось ее количество в ткани головного мозга плодов и новорожденных крысят (Ещенко Н. Д., 1999), а также активность глутаматдегидрогеназы (Клюева H.H., 1989), аспарагиновой и аланиновой трансаминаз (наборами реактивов) и глутаминазы (Лебедева 3. И., 1981). Исследование количества кальция и магния для выявления их роли в реализации эксайтотоксического эффекта глутамата проводилось спектрофо-тометрически наборами реактивов (PLIVA-Lachema).

Уровень перекисного окисления липидов (ПОЛ) исследовался по содержанию ТБК-реактивных продуктов (малонового диальдеги-да) (Стальная И. Д., 1977) и методом индуцированной хемилюминес-ценции. Антиоксидантная защита оценивалась по показателям активности супероксиддисмутазы (Чевари С., 1985), глутатионредуктазы (Horn F., 1965), глутатионпероксидазы (Власова С. Н., 1990), содержанию восстановленного глутатиона (Путилина Ф. Е., 1982), а также по определению общей антиоксидантной активности по методу D. L.Timiti (1990) и методом индуцированной хемилюминесценции.

Состояние обмена оксида азота изучалось по содержанию нитрит-ионов (Фланаган Р. Дж., 1997), аргинина методом тонкослойной ионообменной хроматографии (Яровая Г. А., 1982) и цитру длина колориметрическим методом (Sugawara К., 1998).

Элементный статус в гомогенатах мозга новорожденных крысят исследовался методом эмиссионной спектрометрии с индукционно связанной аргоновой плазмой сотрудниками «Независимого эксперт-но-аналитического совета по разработке и внедрению современных методов исследований и анализа» на базе кафедры неорганической и аналитической химии ФГОУ ВПО РГАУ-МСХА им. К. А. Тимирязева и кафедры клинической и лабораторной диагностики ГОУ ВПО РГМУ Росздрава.

Статистическая обработка результатов проводилась по общепринятым методикам параметрической и вариационной статистики с использованием электронных таблиц Excel. Рассчитывались среднее арифметическое, среднее квадратическое отклонение, ошибка среднего; достоверность различий между выборками оценивалась при помощи t-критерия Стыодента. В ряде случаев для выявления достоверной разницы между средними величинами использовался непараметрический критерий Вилкоксона - Манна - Уитни. Проводился анализ парных коэффициентов корреляции.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенных исследований выявлено значительное снижение интенсивности окислительных превращений глюкозы в мозге плода при нарушении МПК, установленное на основании уменьшения скорости включения радиоактивного углерода из 6-'4С-глюкозы в С02, выделяемую срезами мозга при их инкубации с указанным изотопом (587 имп/мин/мг ИС02 в контрольной группе и 402 имп/мин/мг ИС02 в опытной группе; 68% по сравнению с контролем, Ри < 0,05). При этом результаты исследования активности гексо-киназы (16,4 ±2,12 и 24,1 ±2,01 нмоль NADPH/мин/мг белка в контроле и в опыте соответственно, р < 0,05) и содержания узлового метаболита - глюкозо-6-фосфата (0,086 ±0,012 и 0,185 ±0,064 мкмоль субстрата/г ткани в контроле и в опыте соответственно, р < 0,05) показали, что мозг плода адекватно обеспечивается глюкозой при недостаточности МПК.

Поскольку окисление глюкозы до углекислого газа и воды не является центральным путем ее метаболизма в мозге плода, очевидно, что выявленные нами изменения окислительных превращений обусловлены усилением утилизации субстрата по другим метаболическим путям. Принимая во внимание, что основным процессом деградации глюкозы в фетальном мозге является гликолиз, нами была изучена общая интенсивность гликолитического потока (ОИГ), которая оказалась на уровне таковой у интактных плодов. Активность альдо-лазы и общая активность ЛДГ в мозговой ткани также не изменились по сравнению с контролем, однако в изоферментном спектре ЛДГ наблюдался сдвиг в сторону анодных фракций (активность ЛДГ] 2 -14,2 ±0,02 и 17,5 ±0,75 мкмоль NAD/мин/мг белка в контроле и в опыте соответственно, р < 0,01; активность ЛДГ4 5 - 37,6 ±2,57 и 39,0 ± 1,92 мкмоль NAD/мин/мг белка в контроле и в опыте соответственно, р > 0,05) и достоверное снижение коэффициента ЛДГ4,5/ЛД1\2 (81% по сравнению с контролем, р<0,05,). Вместе с тем содержание лактата в мозге плодов крыс в условиях эксперимента оказалось не только не уменьшенным, что следовало бы ожидать, а наоборот, достоверно увеличивалось и составило 143% от контрольных показателей (0,300 ± 0,009 и 0,430 ± 0,026 мкмоль/г ткани в контроле и в опыте соответственно, р< 0,001). Принимая во внимание данные исследования ОИГ и направленность изменений в изоферментном спектре ЛДГ, вполне обоснованно можно было предположить, что повышенное содержание лактата в фетальном мозге обу-

словлено не столько его гиперпродукцией, сколько активным потреблением из пуповинной крови. Подтверждением этого явились результаты изучения включения радиоактивного углерода из равномерно меченого лактата в мозг плодов крыс in vivo (9000 ± 1000 и 18000 ± 2000 имп/мин/г ткани в контроле и в опыте соответственно; 200% по сравнению с контролем, р< 0,001). Учитывая, что скорость транспорта молочной кислоты через гематоэнцефалический барьер и расщепления в ткани полностью определяется соотношением ее концентрации в крови и мозговой ткани (Jones С. Т., 1995), можно полагать, что мозг лишь утилизирует лактат, продуцируемый плацентой, для выработки энергии.

Однако удельная радиоактивность 14С02, выделяемого срезами мозга плодов крыс при их инкубации с 1-314С-лактатом, отражающая уровень окислительных превращений этого субстрата при нарушении МПК, достоверно не изменялась. Можно полагать, что активное его поглощение мозгом плода при патологической беременности смещает равновесие реакции лактат «-» пируват в сторону образования последнего, т. е. система «лактат - пируват» играет роль своего рода буфера, регулирующего концентрацию пирувата. Подобное мнение высказывают некоторые авторы относительно метаболизма головного мозга у взрослых (Jones С. Т., 1995).

Кроме того, снижение pH при недостаточности МПК возможно является попыткой фетального мозга компенсировать действие в условиях гипоксии возбуждающих нейромедиаторов, так как нейро-нальный ацидоз приводит к блокированию глутаматных NMDA-рецепторов и усилению ответа тормозных ГАМК-рецепторов (Фокин В. Ф., 2003; Rho J., 1999).

В то же время избыточное накопление лактата может привести к декомпенсации физиологического метаболического ацидоза, присущего нормальному состоянию плода, и развитию патологического ацидоза с активацией протеолитических процессов и снижением активности ферментов, катализирующих окислительную утилизацию глюкозы и метаболизм глутамата.

По результатам эксперимента был сделан вывод, что лактат использовался клетками фетального мозга при патологической беременности не на энергетические, а на пластические цели, в частности на синтез глюкозы или гликогена. Однако некоторые авторы считают, что головной мозг практически не способен к глюконеогенезу (Фокин В. Ф., 2003; Ашмарин И. П., 2007).

Косвенным доказательством усиления синтеза гликогена может служить увеличение содержания гликогена в фетальном мозге при нарушении МПК - 172% по сравнению с контрольным уровнем (742,0 ±92,5 и 1273,0 ±207,0 мг% в контроле и в опыте соответственно, р < 0,05). Дальнейшее наше исследование выявило, что гликоген, усиленно синтезируемый в мозге плода в условиях гипоксии, не используется активно, как можно было ожидать, непосредственно в антенатальном периоде, так как интенсивность гликогенолиза в мозге опытных плодов практически не изменялась по сравнению с контрольной группой. С одной стороны, это могло быть следствием отсутствия гликогенфосфорилазы в нейронах и олигодендроцитах (НатргесЫ В. е1 а1., 1990) и низкой антенатальной активности нейронов; с другой - результатом интенсификации анаплеротических энер-гообеспечивающих путей в клетках головного мозга, в частности превращений глутамата и аспартата, что сберегает глюкозу и обусловливает увеличение концентрации цитрата и АТФ, которые лимитируют скорость гликолиза.

Внутриклеточный пул глюкозо-6-фосфата поддерживает на физиологическом уровне течение окислительной стадии гексозомоно-фосфатного пути (ГМФ), обеспечивающего растущие клетки пластическими ресурсами, поскольку его значимость в развивающемся мозге выше, чем у взрослого организма. Об этом свидетельствуют результаты исследования удельной радиоактивности 14СОг, выделяемой срезами мозга плодов опытной группы при их инкубации с 1-14С-глюкозой, не отличающиеся от контрольных значений. Восстановительные эквиваленты, генерируемые в ходе окислительной стадии ГМФ, используются для биосинтеза жирных кислот, холестерина и его производных, фосфолипидов и аминокислот, восстановленного глутатиона, обеспечивающего антиоксидантную защиту, а пентозофосфаты - для синтеза нуклеиновых кислот и белка.

Однако результаты исследования энергетического заряда клеток головного мозга плода при недостаточности МПК показали, что отношение количества АТФ к уровню других адениловых нуклеотидов достоверно снижается (4,91 ±0,12 и 4,39 ±0,1 в контроле и в опыте соответственно; 86% по сравнению с контролем, р < 0,05). Следовательно, фетальный мозг при осложненной беременности находится в состоянии субкомпенсации, что в условиях интранатально возникающей асфиксии может привести к срыву выявленных адаптационных механизмов и явиться причиной возникновения неврологического дистресса новорожденного.

Обобщая полученные в ходе исследования данные, было сделано заключение, что глюкоза, усиленно поступающая в клетки головного мозга плода при нарушении МПК, используется главным образом не как энергетический, а как пластический субстрат, в частности для гликогенеза и апотомического окисления. Однако энергетический потенциал фетального мозга сохраняется на достаточно высоком уровне, о чем свидетельствует не измененное по сравнению с контрольными плодами содержание АТФ. В условиях снижения окислительной депривации глюкозы и низкой активности фетального пи-руватдегидрогеназного комплекса становится очевидным, что энергетическое состояние клеток мозга поддерживается за счет интенсификации анаплеротического пути утилизации глутамата и аспартата, активно синтезируемых плацентой (Курбат М. Н., 2009; Канун-никова Н. П., 2009), в цикле трикарбоновых кислот через последовательное превращение в а-кетоглутарат и оксалоацетат. Подтверждением высказанного предположения служит достоверное увеличение удельной радиоактивности 14С02, выделяемой срезами мозга плодов крыс при их инкубации с 1-14С-а-кетоглутаратом (614 ±318 и 1654 ±227 имп/мин/мг 14СОг в контроле и в опыте сответственно; 269% по сравнении с контролем, р < 0,01).

Комплекс выявленных в ходе эксперимента биохимических изменений в головном мозге плода при недостаточности МПК укладывается в картину адаптивной стадии стресса (Меерсон Ф. 3., 1994; Крыжановский Г. Н., 2002; Еделев Д. А., 2007) и подтверждает точку зрения, что адаптогенный эффект стресса прежде всего связан с повышением, при общем адаптационном синдроме, устойчивости к гипоксии (рис. 1). Подобные изменения были выявлены у детей с различными неврологическими синдромами (Осипова Е. В., 2005).

Однако результат стресса зависит от продолжительности и фазы выхода из него. Вполне понятно, что длительная стимуляция гипота-ламо-гипофизарной и надпочечниковой систем при недостаточности МПК приведет к их истощению. Во время родового стресса и стресса при переходе к внеутробной жизни в раннем постнатальном периоде это может явиться причиной срыва адаптогенных механизмов и переходу физиологического стресса в патологический.

сохранение обшей интенсивности гликолиза ОИГ

НАРУШЕНИЕ МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ

+

ГИПОКСИЯ АДАПТИВНЫЙ СТРЕ:

| окислительной утилизации глутамата

| окислительной утилизации глюкозы

сохранение

Т ГАМК-шунта

энергетических ресурсов

нарушение неироналгаых функций дисбаланс между тормозной и возбуждающей синаптнческой передачей адреналин

энергетического заряда клеток

| потребления

глюкозы | гексокиназы

I глюкозо-6-фосфата

| потребления лактата

тлд^

ТЛДГ4УДЦГи |Рн 1

смещение *— равновесия «лактат - пируват»

t гликогеиез | гликогенолиз Т АПО

блокирование >«'\ШЛ-рецепторов

ацидоз -

I п|>о

Т пол

окендативныи _стресс ^_

1 глутамата

активация протеолнза, накопление А1

I

апоптоз и/или некроз

„ эксаитотоксвчносх

Рис. 1. Изменения углеводного обмена в мозге плодов крыс, развивавшихся в условиях нарушенного МПК

Кроме того, при анализе полученных результатов нужно иметь в виду, что в развитии стресса в головном мозге, как типового процесса, участвуют два главных компенсаторных механизма, действие которых не может не отразиться на деятельности и состоянии нервной ткани.

Во-первых, активация анаплеротических путей, в частности утилизация глутамата сохраняет энергетические ресурсы и поддерживает уровень анаболических процессов. Учитывая, что эта аминокислота является важнейшим нейромедиатором, ее окислительная депривация может привести к нарушению основных нейрональных функций.

Во-вторых, избыток адреналина при стрессе способствует усилению ПОЛ, в частности в результате образования семихинона адреналина, сбрасывающего электроны на кислород с образованием супероксидного радикала. Кроме того, несмотря на попытку стрессовой адаптации фетального мозга к гипоксии при недостаточности МПК, гипоксический фактор может инициировать патогенетические механизмы эксайтотоксичности глутамата и активации ПОЛ.

И действительно, результаты исследования метаболизма глутамата выявили статистически достоверное увеличение содержания глу-таминовой кислоты в головном мозге опытных плодов и новорожденных крысят по сравнению с контролем в 2 и 1,4 раза (у плодов -6,48 ± 0,95 и 13,01 ± 1,01 мкмоль/г ткани в контроле и в опыте соответственно, р< 0,001; у новорожденных - 6,56 ±0,71 и 9,26 ± 1,03 мкмоль/г ткани в контроле и в опыте соответственно, р < 0,05), что может привести к активации глутаматных рецепторов в условиях гипоксии наряду с их перекисной модификацией.

В головном мозге плодов и новорожденных крысят опытной группы было установлено увеличение активности глутаматдегидро-геназы, которая составила соответственно 156 и 120% по сравнению с контролем (у плодов - 6,03 ±0,7 и 9,4 ±1,2 мкмоль НАДФ/мин/мг белка в контроле и в опыте соответственно, р < 0,01; у новорожденных - 12,89 ±0,61 и 15,42 ±0,89 мкмоль НАДФ/мин/мг белка в контроле и в опыте соответственно, р < 0,05). Активность АЛТ и ACT в головном мозге плодов, развивавшихся в условиях нарушенного МПК, составила соответственно 167% (р < 0,05) и 168% (р < 0,05) от контрольных значений; у новорожденных крысят опытных групп -соответственно 147% (р < 0,01) и 137% (р < 0,05) по сравнению с кон-

тролем. Нам представлялось правомерным рассматривать выявленные изменения как адаптивные, учитывая, что таким образом цикл трикарбоновых кислот обеспечивается а-кетоглутаратом, тем самым поддерживается энергообеспечение функций нейронов. Однако последствием увеличения активности АЛТ и АСТ может явиться истощение пула пирувата и оксалоацетата, что отрицательно скажется на митохондриальных окислительных процессах. Также негативным будет повышение содержания аспартата, обладающего, наряду с глута-матом, эксайтотоксичностью (ОИегееп О. Р., 1991; Курбат М. Н., 2009).

Однако проведенное нами исследование активности глутамина-зы в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях недостаточности МПК, выявило ее увеличение до 170 и 138% по сравнению с интактными животными, соответственно (у плодов - 15,38 ± 2,0 и 26,18 ± 1,3 нмоль/мин/мг белка в контроле и в опыте соответственно, р<0,05; у новорожденных - 25,16 ±2,65 и 34,39 ± 2,33 нмоль/мин/мг белка в контроле и в опыте соответственно, р <0,05).

При этом в мозге новорожденных крысят опытной группы пул глутамата уменьшился в 1,4 раза по сравнению с плодами той же группы (р < 0,05). Выявленное изменение может иметь, с одной стороны, компенсаторно-приспособительный характер и явиться следствием усиления аэробных окислительных процессов его утилизации при переходе животного к внеутробному образу жизни, что подтверждается увеличением активности ГДГ у новорожденных крысят в 1,6 раза по сравнению с плодами (р < 0,01). С другой стороны, это можно рассматривать как дезадаптивную реакцию в связи с постна-тальным усилением нейрональной активности, которая, в частности, способна вызвать недостаточность ГАМК-ергических механизмов и развитие постгипоксической повышенной возбудимости нейронов (Гусев Е. П., 2001; Пальчик А. Б., 2000).

Сопоставляя полученные результаты, можно сделать заключение, что в головном мозге плода и новорожденного при гипоксии увеличивается нейротрансмиттерный пул глутамата, что приводит к избыточной активации глутаматных рецепторов. Как известно, в роли вторичного посредника при этом выступают ионы кальция. И действительно, содержание кальция в головном мозге плодов, развивавшихся в условиях осложненной беременности, составило 144% по сравнению с контролем (3,91 ±0,03 и 2,72 ±0,05 ммоль/л соответственно, р < 0,05).

Именно накопление Са2+, опосредованное КМОА-рецепторами, является ключевым моментом в нейрональной гибели, индуцируемой глутаматом. Такое увеличение вызывает активацию протеинкиназ, фосфолипаз, протеаз, нитроксидсинтетазы, а также нарушение мито-хондриальных функций и образование свободных радикалов. Увеличение Са2+ может задействовать один или более этих потенциально летальных процессов, так как нарушается способность нейронов поддерживать низкий уровень кальция путем захвата и удержания его митохондриями. Как следствие, развивается состояние отсроченной кальциевой дисрегуляции (Большаков А. П., 2008; Веа1 М. Р., 1996; Нет'^оп I е1 а!., 1996).

Известно, что естественным антагонистом кальция является магний, одной из наиболее важных функций которого является защита нервной системы от всевозможных стрессов, и поэтому полная активация ЫМОА-рецепторов глутаматом возможна лишь после удаления ионов из соответствующих центров (Квривишвили Г. И., 1999; Кудрин А.В., 2006). При исследовании содержания магния в головном мозге плодов крыс, развивавшихся при недостаточности МПК, его содержание оказалось достоверно ниже в опытной группе и составило 76% по сравнению с контролем (0,645 ± 0,03 и 0,847 ± 0,04 ммоль/л соответственно, р < 0,05).

У новорожденных крысят изменения уровня кальция и магния в головном мозге носили аналогичный характер. Так, содержание кальция у новорожденных крысят, развивавшихся в условиях осложненной беременности, составило 136% по сравнению с контролем (3,08 ± 0,34 и 2,24 ± 0,09 ммоль/л соответственно, р < 0,05). При определении уровня магния была отмечена обратная направленность изменений - 0,652 ± 0,04 ммоль/л в опыте и 0,78 ± 0,04 ммоль/л в контроле (83%, р< 0,05).

Как известно из литературы, эксайтоксические механизмы возбуждения глутаматных рецепторов приводят к избыточному образованию интермедиаторов кислорода и развитию оксидантного стресса при различной патологии ЦНС (например, при нейродегенеративных заболеваниях) (Квривишвили Г. И., 1999; Федорова Т. Н. с соавт., 1999; Болдырев А. А., 2003; Ма1езе К. а1., 1996; Бтуйнев I., 1999). В свою очередь, метаболиты кислорода и вторичные продукты ПОЛ усиливают эксайтотоксический эффект, нарушая систему обратного захвата или блокируя ряд ферментативных систем утилизации нейро-

трансмиттера, что формирует замкнутую цепь патологических реакций повреждения ЦНС.

Как показали полученные нами результаты, при нарушении МПК усиливаются процессы липидной пероксидации, о чем свидетельствует повышение содержания МДА - конечного метаболита неферментативной деградации продуктов ПОЛ - в 1,8 раза у плодов (67,45 ±0,4 и 123,0 ±2,08 нмоль/г ткани в контроле и в опыте соответственно, р< 0,001) и в 1,5 раза у новорожденных крысят по сравнению с контролем (59,76 ± 2,93 и 90,25 ± 6,39 нмоль/г ткани в контроле и в опыте соответственно, р< 0,001). Между тем, общеизвестно, что его накопление приводит к деструктивным изменениям в клетках и необратимым нарушениям их функций.

Можно полагать, что одной из причин усиления ПОЛ в головном мозге плодов опытной группы является снижение компонентов антиоксидантной системы. Так, активность супероксиддисмутазы у плодов в условиях антенатальной гипоксии уменьшается на 39% (70,58 ± 0,36 и 43,03 ± 0,27% блокирования восст. НСТ в контроле и в опыте соответственно, р< 0,001), что свидетельствует о нарушении антиокислительной активности уже на стадии генерации активных форм кислорода.

Снижается активность и другого компонента АОС - глутатион-редуктазы - на 50% в цитоплазме (р < 0,01) и на 49% в митохондриях (р < 0,01). Уменьшение активности глутатионредуктазы, по-видимому, вызвано переключением утилизации НАДФН с пути гидроксили-рования на путь пероксидации липидов, что влечет за собой снижение его фонда в клетке.

Понижение активности глутатионредуктазы приводит к уменьшению количества восстановленного глутатиона, что в свою очередь обусловливает снижение активности глутатионпероксидазы. Действительно, как показали проведенные нами исследования, активность глутатионпероксидазы в головном мозге плодов в условиях нарушенного МПК оказалась меньше, чем у контрольных, на 34% (р < 0,01).

Вышеизложенное объясняет и результаты, полученные при исследовании общей антиоксидантной активности (ОАА), которые выявили ее снижение на 63% (р < 0,01) у опытных плодов по сравнению с контролем.

Аналогичные изменения были выявлены в головном мозге новорожденных крысят при патологической беременности (рис. 2).

0% -г—-!-,--,--р

-10% р.'^ Г Ц ЦТ 1Л I П м X

С0Д»тх С -в,

-20%

-30% -

-40% -

-50% -

-60% -

-58%

-55% -56%

-70% -

-62%

-80% -

-71%

-90% ->—-

--82%__

Рис. 2. Изменение показателей антиоксидантной системы в головном мозге новорожденных крысят опытной группы по сравнению с контролем.

Примечание:* - р < 0,05, ** - р < 0,01, *** - р < 0,001

Таким образом, показатели ПОЛ и АОС свидетельствуют, что усиление процессов пероксидации и накопление их продуктов в мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся при недостаточности МПК, обусловлено как активацией этого процесса глутаматной эксайтотоксичностыо и гипоксическим влиянием, так и срывом антиоксидантной защиты. Развитие «окислительного стресса», т. е. нарушенного динамического равновесия системы «ПОЛ - антиоксидан-ты», можно рассматривать как патогенетический механизм антенатального повреждения мозга плода и новорожденного.

Сопоставляя полученные результаты исследования показателей ПОЛ в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях МПК, нужно отметить, что количество МДА у последних оказалось в 1,4 раза меньше, чем у плодов (р < 0,01), хотя в условиях повышения оксигенации после родов при переходе к внеутробному образу жизни следовало бы ожидать оксидантного «взрыва» и, наоборот, усиления ПОЛ. Кроме того, основываясь на данных эксперимента, можно предположить, что увеличенная интенсивность процессов пероксидации у плодов по сравнению с новорожденными крысятами является в большей степени следствием проявлений эксайтотоксичности глутамата, реализуемой через Са-зави-симые механизмы (рис. 3). Такое предположение основывается также

на выявленном уменьшении содержания кальция и глутамата, сочетающимся с активацией его метаболических превращений, у крысят по сравнению с плодами. Из этого можно сделать вывод о ведущей роли эксайтотоксичности глутамата в повреждении фетального головного мозга. Такому выводу соответствуют и положительные коррелятивные связи между уровнем МДА и глутамата в головном мозге плодов и новорожденных животных (г = 0,55 и г = 0,89 соответственно), а также содержанием МДА и Са (г = 0,93 и г = 0,86, соответственно).

Состояние NMDA-каналов при развитии эксайтотоксичности глутамата непосредственно связано с активностью NO-синтазы и степенью продукции N0. Поэтому синтез NO в участках скопления NOS-содержащих синапсов тесно коррелирует с активностью глута-матергических терминалей. Кроме того, NO способен образовывать комплексы с тиолами, которые в присутствии ионов железа подавляют Na+, К+-АТФазу и, снижая обратный захват медиатора, усугубляют токсическую составляющую действия глутамата (Болдырев А. А., 2003). Глутамат - типичный возбуждающий синаптический трансмиттер, однако посредством NO его эффекты передаются на другие нервные клетки, не получающие прямой глутаматергический вход. Таким образом, N0 может адаптировать импульсную активность соседних нейронов без вовлечения в этот процесс механизма синапти-ческой глутаматергической передачи (Охотин В. Е., 2002), тем самым активно участвуя и потенцируя эксайтотоксичность глутамата.

В связи с этим нами было проведено исследование основных показателей обмена оксида азота в головном мозге подопытных животных. Концентрация субстрата NO-синтазной реакции - L-аргини-на — у плодов и новорожденных крысят опытных групп достоверно увеличивалась и составила 158 и 170% соответственно по сравнению с контролем (у плодов - 0,155 ±0,02 и 0,098 ±0,02 нмоль/г ткани соответственно, р < 0,01; у новорожденных - 0,171 ±0,02 и 0,101 ± 0,01 нмоль/г ткани соответственно, р < 0,01).

При исследовании содержания нитритов - конечных метаболитов оксида азота - отмечалось их достоверное увеличение в головном мозге плодов и новорожденных, развивавшихся в условиях недостаточности МПК, в 1,5 и 2,3 раза соответственно по сравнению с контролем (у плодов - 0,027 ± 0,005 и 0,036 ± 0,002 ммоль/г ткани в контроле и в опыте соответственно, р< 0,001, у новорожденных -

0,038 ±0,01 и 0,088 ±0,02 ммоль/г ткани в контроле и в опыте соответственно, р < 0,05), причем у крысят достоверно выше, чем у плодов (р < 0,001).

Содержание другого продукта МО-синтазной реакции - цитрул-лина - в головном мозге плодов опытных групп достоверно не отличалось от такового у интактных животных, а в головном мозге новорожденных крысят при недостаточности МПК уменьшилось и составило 87% по сравнению с контрольной группой (0,74 и 0,85 ммоль/л соответственно, Ри < 0,05). Совершенно очевидно, это указывает на тот факт, что в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся при недостаточности МПК, увеличения >Ю-синтазной активности не происходит. При интерпретации полученных результатов следует учитывать, что метаболизм оксида азота является универсальным циклическим механизмом, однако нитритредуктазная его компонента часто остается вне поля зрения исследователей. В нормальных физиологических условиях N0 синтезируется только тогда и в таком количестве, которое необходимо в каждый данный момент. Поэтому при дефиците кислорода роль ЫО-синтазного механизма может снижаться, и активируется более мощная нитритредуктазная компонента, которая почти на три порядка выше, чем ЫО-синтазная (Реутов В. П., 1997). Вполне очевидно, что в головном мозге плодов и новорожденных крысят в условиях гипоксии активируется нитритредуктазная составляющая цикла окиси азота, так как при выявленном повышении уровня нитрит-ионов ожидаемого уменьшения субстрата >Ю-синтазной реакции - аргинина и увеличения содержания другого ее продукта - цитруллина в нашем эксперименте не произошло.

Согласно общепринятой точке зрения, гиперпродукцию N0 можно рассматривать как компенсаторно-приспособительную реакцию в условиях гипоксии. Однако цитопротективный эффект N0 с нарастанием его концентрации в тканях сменяется эффектом цито-токсическим.

И действительно, выявленная в эксперименте гиперпродукция оксида азота в головном мозге плодов и новорожденных крысят при нарушении МПК является, по-видимому, патогенетическим фактором, способствующим генерации АФК и усилению ПОЛ, что подтверждается высоким уровнем положительной корреляции между содержанием МДА и концентрацией нитрит-ионов (г = 0,91 и г = 0,93 у плодов и новорожденных соответственно).

НАРУШЕНИЕ МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ

+

ГИПОКСИЯ +

АДАПТИВНЫЙ СТРЕСС

|энергетический заряд

Нервное окончание

Глюкоза

' уменьшение утилизации

. | гликоген Т АПО

| ГДГ, АСТ, ДЛТ I глутамнназа

а-кетоглутарат увеличение *- глутамнн .

ГЛУТАМАТА

ГАМК-шунт I тормозящее влияние

деполяризация мембраны

повышение высвобо; здения глутамата

Т ГЛУТАМАТ

нарушение обратного захвата

Межсинаптическое пространство

активация _>'.\ШЛ -рецепторов-

ТСа,1 М|

ЭКСАЙТОТОКСНЧНОСТЬ-

Астротия

|А1

глутамин

| глутамнненнтаза

Г*2

ОКСПДАТНВНЫН СТРЕСС

ГЛУТАМАТ

.X активности N8, К-АТФазы

Хэнерп тическнй

заряд

Рис. 3. Взаимосвязь изменений углеводного обмена, метаболизма глутамата и развития оксидатив-ного стресса в головном мозге плодов и новорожденных крысят при нарушении МПК

Обобщая полученные результаты, мы пришли к выводу, что увеличенная интенсивность процессов пероксидации у новорожденных крысят по сравнению с плодами в большей степени обусловлена проявлениями нитрозильного стресса, чем глутаматной эксайтоток-сичности.

Кроме того, основываясь на данных нашего исследования, можно полагать, что метаболическим маркером адаптивного или дезадап-тивного действия N0 является показатель концентрации цитруллина. Повышение его содержания означает, что более сильная составляющая цикла окиси азота — ЫО-синтазная реакция активна, лимитирует интенсивность нитритредуктазной компоненты цикла и гиперпродукция оксида азота является локальной стресс-лимитирующей компенсаторно-приспособительной реакцией. В то же время уменьшение содержания цитруллина при повышении концентрации нитритов указывает на дезадаптивный характер изменений и является неблагоприятным признаком развития патогенетических механизмов метаболических последствий гиперпродукции N0, обусловливающих нитрозиль-ный стресс.

В связи с полученными в ходе эксперимента результатами было высказано предположение, что для устранения цитотоксическо-го эффекта гиперпродукции оксида азота целесообразно использовать не ингибиторы 140-синтаз, а экзогенные доноры N0.

Для подтверждения сделанного заключения мы провели серию экспериментов с экспозицией трансдермальной терапевтической системы «Депонит-10» при нарушении МПК.

Результаты показали, что продукция N0 в головном мозге новорожденных крысят, матери которых получали нитроглицерин, по сравнению с контролем остается достоверно выше, хотя по сравнению с опытной группой количество нитрит-ионов уменьшается (в контроле - 0,038 ±0,01 ммоль/г ткани, в опыте - 0,088 ±0,02 ммоль/л, в опыте + «Депонит» - 0,069 ± 0,01 ммоль/г ткани, р < 0,05).

Исследование интенсивности ПОЛ у новорожденных крысят, родившихся от крыс с экспозицией «Депонит-10», выявило увеличение концентрации МДА в опытной группе в 1,3 раза по сравнению с контролем (59,13 ±5,34 против 44,92 ±3,79 нмоль/г ткани, р < 0,05). При этом уровень МДА оказался достоверно ниже как у крысят экспериментального, так и контрольного рога по отношению к животным опытной (р < 0,01) и контрольной групп (р < 0,01), у матерей

которых не применялся «Депонит-10», что свидетельствует о его положительном влиянии на уменьшение последствий процессов перок-сидации. Выявлена корреляция высокой степени между уровнем МДА и концентрацией нитрит-ионов (г = 0,83).

Анализ состояния АОС показал, что ОАА в головном мозге крысят, матери которых получали экзогенный донатор оксида азота, оставалась ниже в опытной группе по сравнению с контролем (43,81 ±3,38 и 57,94 ±3,3% соответственно, р < 0,05), что, по-видимому, связано у них с более низкой по сравнению с контролем активностью основных ферментов АОС.

Однако при этом в головном мозге новорожденных опытных крысят, матери которых получали «Депонит-10», по сравнению с теми животными, матери которых его не получали, выявлено повышение активности компонентов АОС. Так, ОАА увеличилась в 1,24 раза (р < 0,05), чему способствовало повышение активности СОД в митохондриях в 1,27 раза (р < 0,05), ГП в цитоплазме в 1,14 раза (р < 0,05) и ГП в митохондриях в 1,4 раза (р < 0,01) (рис. 4).

а опытная груши И контрольная группа

Рис. 4. Изменения показателей ПОЛ и АОС в головном мозге новорожденных крысят опытной и контрольной групп, матери которых получали «Депонит-10», по сравнению с контрольными и опытными животными, не испытывавшими воздействие донатора оксида азота: 1 - МДА, 2 - ОАА, 3 - СОДц, 4 - СОДм, 5 - ГПц, 6 - ГПм

Таким образом, применение экзогенного донатора оксида азота снижает содержание нитрит-ионов и МДА, а также увеличивает ан-тиоксидантную защиту в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения МПК. Полученные результаты подтверждают целесообразность применения донаторов оксида азота для устранения гиперпродукции N0 более сильной нитритредук-тазной составляющей цикла окиси азота с развитием нейроцитоток-сичности.

Анализируя NO-зависимые механизмы локальной защиты, целесообразно еще раз перечислить основные звенья стрессорного повреждения головного мозга: активация свободнорадикального повреждения, перегрузка клетки кальцием, денатурация белков, повреждение клеточных мембран. Как показали данные эксперимента, оксид азота действует на все эти звенья: снижает процессы пероксидации, увеличивает активность антиоксидантных ферментов, предупреждает повышение внутриклеточной концентрации кальция, уменьшая эк-сайтотоксичность глутамата, ограничивает повреждение мембран. Все это указывает на его нейропротекторное действие как звена локальной стресс-лимитирующей системы в условиях гипоксии при нарушении МПК.

Как известно, для регуляции гомеостаза в норме и при патологии ферментативная активность метаболических процессов в организме в целом и в клетке в частности обусловлена прежде всего доступностью субстратов и кофакторов, причем установлено, что степень тяжести поражения ЦНС определяется низкой нутриентной обеспеченностью новорожденных в неонатальный период (Фавье М., 2002; Серов В. Н., 2010; Bourre J. M., 2006).

И действительно, результаты нашего эксперимента показали, что в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях недостаточности МПК, происходит нарушение макро- и микроэлементного гомеостаза - уменьшение содержания эссенциальных и накопление тяжелых и токсичных элементов (табл. 1), что может явиться одним из патогенетических механизмов повреждения нервной ткани при недостаточности МПК.

Учитывая полученные данные, выявившие увеличение содержания кальция и уменьшение уровня магния в мозге экспериментальных животных, а также то, что препаратами выбора для нормализа-

ции элементного статуса и устранения дефицита магния следует считать его препараты в сочетании с пиридоксином, нами было проведено исследование изменений содержания макро- и микроэлементов и интенсивности свободнорадикальных процессов в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения МПК и применения Магне-Вб.

Введение беременным крысам препарата Магне-Вб как с 6-го, так и с 16-го дня беременности оказало положительное влияние на изменение элементного гомеостаза в головном мозге новорожденных крысят (табл. 1).

Более эффективным путем нормализации элементного статуса оказалось применение препарата Магне-В6 с 6-го дня беременности, т. е. с целью профилактики возможных последствий при угрозе возникновения нарушения МПК.

Применение Магне-В6 не вызвало изменений метаболизма оксида азота у опытных крысят 4-й и 5-й групп по сравнению с контролем тех же групп, однако по сравнению с опытными крысятами 2-й группы содержание нитрит-ионов достоверно уменьшилось, а цитрулли-на, напротив, возросло (табл. 2). Полученные результаты свидетельствуют об активации МО-синтазной реакции и ингибировании нитри-тредуктазной составляющей цикла окиси азота, что имеет нейпропро-тективный характер при действии гипоксического фактора.

На основании полученных результатов было сделано предположение, что увеличение содержания элементов, необходимых для ан-тиоксидантной защиты в головном мозге крысят в условиях применения препарата Магне-В6, должно оказать на нее активирующее влияние. Показатели биохемилюминесцентного исследования активности свободнорадикальных процессов и антиоксидантного потенциала подтвердили это предположение (табл. 3).

Данные эксперимента убедительно доказывают, что изменения в головном мозге новорожденного при недостаточности МПК имеют не только гипоксический генез, но также являются следствием нутри-ентной недостаточности, в частности, нарушения элементного гомеостаза. Применение препарата Магне-В6 оказывает положительное действие и устраняет последствия проявлений основных патогенетических механизмов глутаматной эксайтотоксичности и гиперпродукции оксида азота, реализуемых через оксидативный стресс.

Таблица 1

Содержание макро- и микрокроэлементов в головном мозге новорожденных крысят

Содержание, мкг/г ткани

Элемент 2-я группа (без Магне-Вб) 4-я группа (Магне-В6с 6-го дня беременности) 5-я группа (Магне-В6 с 16-го дня беременности)

Контроль (п = 25) Опыт (п = 25) Контроль (п = 22) Опыт (п = 23) Контроль (п = 25) Опыт (п = 22)

Са 21643 ±407 29423 ±467** 23996±1460 29815±1820** 25227 ±670 22057 ±89**

Mg 2601±106 1457 ±370* 1921 ±143 2275 ±97* 2254 ±37 1715 ±69**

Na 16440±1135 10820 ±72** 16920 ±1982 22183 ±970* 14990 ±551 16590 ±669**

К 8401,3 ±460 7473 ± 59** 9050 ±710 11150 ±680** 4992± 180 8117±9**

Р 3953,4 ±150 4225 ± 98* 2703 ± 245 4100 ±285* 2740 ±41,8 3546 ±269**

А1 1620±105 3730 ±750** 1439±171 1718 ±103* 1225 ±26 1258 ±51,6

Си 23,98 ± 4,8 5,52 ±0,16** 28,66 ± 1,9 12,37 ± 0,74** 22,65 ±0,12 9,64 ±0,72**

Zn 610,6± 11,63 195,1 ± 12,5* 492,6 ± 115,2 298,7 ± 17,9* 160,7 ±38,6 220,7 ± 8,9*

Se 0,254 ±0,01 0,137 ±0,008** 0,277 ±0,006 0,373 ±0,02** 1,77 ±0,03 0,28 ±0,01**

Mn 1,77 ±0,06 0,131 ±0,002** 1,841 ±0,09 0,366 ±0,02** 0,138 ±0,001 0,278 ±0,01*

Fe 323,1 ± 19,1 526,5 ± 15,9** 353,2 ±11,5 461,9 ±27,2** 362,4 ± 11,8 355 ± 14,3

Co 0,85 ±0,05 0,68 ±0,01** 0,20 ± 0,003 0,67 ± 0,09 0,21 ±0,004 0,08 ±0,003**

Li 0,257 ±0,04 0,361 ±0,05* 0,154 ±0,003 0,403 ±0,02** 0,102 ±0,07 0,263 ±0,2**

Si 209 ± 19,0 21,7 ±4,0** 212 ± 19,0 192 ±23,0 219 1,0 302 ±23,0**

V 0,134 ±0,003 0,427 ±0,013** 0,887 ±0,006 0,402 ±0,016** 0,921 ±0,006 0,194 ±0,03**

Cr 0,761 ±0,007 0,176 ±0,005** 0,078 ±0,018 0,169 ±0,015** 0,081 ±0,001 0,157 ±0,011**

Pb 14,84 ± 1,8 18,85 ±0,24** 13,57 ±0,31 19,22 ± 1,52** 13,53 ±1,73 14,59 ±0,58

В 10,41 ±0,075 11,49 ±0,12** 15,67 ±3,16 64,86 ±3,59** 18,36 ± 10,09 48,49 ±0,06**

Ba 10,95 ±0,76 8,86 ±0,08 11,25 ±0,31 4,92 ±0,26 8,25 ±2,51 3,89 ±0,31

Примечание: достоверность различий между контролем и опытом: * - р < 0,01, ** - р < 0,001

Таблица 2

Показатели метаболизма оксида азота в головном мозге новорожденных крысят в условиях применения Магне-В6

Показатель 2-я группа (без Магне-В6) 4-я группа (Магне-Вб с 6-го дня беременности) 5-я группа (Магне-Вб с 16-го дня беременности

Контроль (п = 25) Опыт (п = 25) Контроль (п = 23) Опыт (п = 20) Контроль (п = 19) Опыт (п = 22)

Нитрит-ионы, ммоль/г ткани 0,038 ±0,01 0,088 ± 0,02* 0,132 ±0,01 0,172 ±0,03** 0,114 ±0,03 0,146 ±0,2***

Цитруллин, ммоль/л 0,85 0,74# 1,38 1,4** 0,83 0,88ш

Примечание: достоверность различий: * - между показателями опыта и контроля 2-й группы р <0,05; ** - между показателями опыта 4-й и 2-й групп р < 0,001; *** - между показателями опыта 5-й и 2-й групп р < 0,01;* - между показателями опыта и контроля 2-й группы непараметрический критерий Вилкоксона- Манна - Уитни Ри < 0,05; т - между показателями опыта 4-й и 2-й групп Ри <0,01; ** - между показателями опыта 5-й и 2-й групп Ра < 0,05.

Таблица 3

Показатели свободнорадикальных процессов и антиоксидантного потенциала в гомогенатах головного мозга новорожденных крысят в условиях применения Магне-В6

Показатель 2-я группа (без Магне-Вб) 4-я группа (Магне-Вб с 6-го дня беременности) 5-я группа (Магне-В6 с 16-го дня беременности

Контроль (п = 26) Опыт (п = 25) Контроль (п = 22) Опыт (п = 20) Контроль (п = 26) Опыт (п = 23)

1шах, имп/ с мВ 164,7 ± 11,5 234,6 ± 12,8* 200,4 ± 15,9 193,7± 14,1** 182,3 ± 10,7 146,1 ±7,6*'***

8 556,5 ± 26,5 689 ±45,2* 648,5 ± 33,2 565 ± 16,8*'# 556 ±48,9 470 ± 24*,т

149 ± 10,7 92,4 ± 8,8* 110,5 ±9,1 106,2 ±3,8### 95,4 ±9,9 84,5 ± 7,2

Примечание: достоверность различий: * - между показателями опыта и контроля р <0,001; ** -между показателями опыта 4-й и 2-й групп р < 0,05; *** - между показателями опыта 5-й и 2-й групп р < 0,001;# - между показателями опыта 4-й и 2-й групп р < 0,01;## - между показателями опыта 5-й и 2-й групп р < 0,001; ти - между показателями опыта 4-й и 2-й групп р < 0,01.

В результате морфологического исследования подтвержден нейропротекторный эффект Магне-В6, так как выявлена меньшая степень выраженности структурных изменений нервной ткани, а показатель клеточной плотности нейронов увеличился на 56% по сравнению с его величиной у новорожденных крысят опытных групп, которые развивались без применения Магне-В6 у беременных крыс (р < 0,01) (4-я группа) и на 41% (р <0,01) (5-я группа).

Как биохимические, так и морфологические исследования установили, что применение Магне-В6 в конце I триместра беременности у крыс (до перевязки преплацентарных сосудов) оказалось более эффективным, чем в III триместре (после перевязки преплацентарных сосудов).

Результаты наших экспериментов подтверждают данные А. В. Кудрина с соавт. (2000), показавших, что чем раньше начата восстановительная коррекция гипоксических нарушений мозга, включая нарушения минерального обмена, тем более легкими будут последствия антенатальных поражений центральной нервной системы и лучше прогноз заболевания.

Интерпретируя полученные нами данные, следует учитывать концепцию П. М. Балабана (2006) об общности молекулярных механизмов нейропластичности и нейропатологии и использовать инте-гративный подход к пониманию того, что при гибели клетки задей-ствуются те же процессы, что и при нормальном ее функционировании. Особенно важен этот факт при исследовании мозга, деятельность которого управляется многочисленными сложнейшими системами меж- и внутриклеточной сигнализации. Представление о дуализме базовых молекулярных механизмов, необходимых для нормального функционирования нейрона или принимающих участие в его повреждении и гибели, является принципиальным методологическим подходом при изучении метаболизма ЦНС. Кроме того, вместе с количественными изменениями в головном мозге плода и новорожденного при нарушении МПК имеет место качественная дисрегуля-ционная патология, когда компенсаторные механизмы превращаются в патологические (рис. 5). Так, увеличение пула глутамата для его окислительной утилизации и поддержания энергообеспечения нейронов приводит к проявлению его эксайтотоксичности. Накопление лактата без окислительных превращений может вызвать декомпенсацию физиологического метаболического ацидоза в мозговой ткани

плода, что сопровождается ингибированием основных метаболических путей и усугублением последствий гипоксии. Увеличение синтеза N0 как вазодилятирующего фактора с целью улучшения оксиге-нации влечет за собой в условиях антенатальной гипоксии его гиперпродукцию с последующей генерацией АФК и развитием окислительного стресса.

Корреляционный анализ показателей, характеризующих структурно-метаболические изменения, проведенный нами с учетом выявленного дефицита эссенциальных и накопления токсичных элементов, позволил предложить метаболические маркеры повреждения головного мозга плодов и новорожденных крысят, развивавшихся при нарушении МПК. К таким метаболическим маркерам антенатального повреждения у плодов относятся увеличение уровня глутамата, МДА и кальция, снижение содержания магния, а у новорожденных - повышение концентрации нитритов в сочетании с уменьшением уровня цитруллина, снижение активности СОД, уменьшение содержания Си, 2п, 8е, Мп, Со, 81, накопление V, А1 и Ре.

Полученные нами результаты имеют однонаправленный характер с клиническими данными (Еремина О. В., 2005; Макаров И. О., 2005; Осипова Е. В., 2005; Зайцева О. Е., 2006; Журавлева Е. А., 2007; Попова Ю. Ю., 2007; Чайка В. К., 2007; Баранова Т. И., 2007; Харламова Н. В., 2010) и объективно отражают характер метаболических изменений в головном мозге плода и новорожденного при недостаточности МПК.

Таким образом, комплексный анализ результатов исследований, проведенных в соответствии с поставленными задачами, выявил, что метаболические изменения в головном мозге плода при недостаточности МПК развиваются не по сценарию цереброваскулярных нарушений. Напротив, гипоксия при данной форме патологии обусловливает активацию механизмов адаптации в фетальном мозге, и он находится в состоянии стресс-реакции (срочной адаптации).

Интерпретируя полученные данные, мы пришли к выводу, что инициируемая гипоксическим фактором метаболическая «катастрофа» в головном мозге плода и новорожденного при недостаточности МПК обусловлена глутаматной эксайтотоксичностью и гиперпродукцией оксида азота, которые развиваются параллельно и взаимодополняют друг друга (рис. 5), но имеют разную степень выраженности, что свидетельствует о фазовости процессов повреждения головного мозга анте- и постнатально.

НАРУШЕНИЕ МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ

ИПО&СШ

АДАПТИВНЫ» СТРЕСС ' 1

| глутамат -*-

^№,К-АТФазы «-

| глутаминсинтазы

ОКСИДАТИВНЫЙ СТРЕСС

ГАфЬ

активация нитритредуктазной составляющей цикла окиси азота

активация МГОА-рецеиторов

Эксайтотоксинность глутамата

активация

протеолитическпх

ферментов

активация фосфолипазы А фосфолипазы С ксантиоксидазы моноаминооксцдазы НАДФН-оксидазы

| энерг. заряд ннгибироваиие дых. цепи и

негемовых Ге-зав. ферментов ЦТК

Рис. 5. Взаимосвязь компенсаторно-приспособительных и дезадаптивных изменений в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушенного МПК

В последнее время все больше сторонников находит точка зрения, что витаминно-минеральные комплексы необходимо применять в гтрегравидарный период и в течение всей беременности постоянно, без перерывов. Однако во избежание полипрагмазии следует использовать препараты, способные осуществлять эндотелиопротекторное действие сразу по нескольким направлениям. К таким лекарственным средствам относятся препараты магния, которые не только используются при угрозе прерывания беременности, преждевременных родах, для профилактики гестозов, эклампсии, маточно-плацентарной недостаточности у беременной, но и обусловливают адаптационные изменения мозга плода на ультраструктурном уровне и подавляют апоптоз нейронов, способствуют нормализации элементного статуса. Нами показана эффективность применения в ранние сроки беременности препарата МагнеВ6 для нормализации в головном мозге новорожденных крысят элементного статуса, устранения последствий глутамат-ной эксайтотоксичности и гиперпродукции оксида азота.

ВЫВОДЫ

1. Нарушение маточно-плацентарного кровообращения в головном мозге плодов крыс сопровождается выраженными и разнонаправленными изменениями метаболизма, важнейшими из которых являются снижение окислительной утилизации глюкозы на фоне повышения ее потребления, накопление лактата, увеличение синтеза гликогена и активация апотомического окисления, деформация элементного статуса в виде дефицита эссенциаль-ных и накопления токсичных элементов.

2. Выраженные изменения претерпевает обмен глутамата в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровотока, приводящие к истощению его метаболического и увеличению нейротрансмиттерного пула, о чем свидетельствует повышение активности глутаматдегидрогеназы, аспарагиновой трансамина-зы, аланиновой трансаминазы и глутаминазы.

3. При патологической беременности в головном мозге плодов и новорожденных экспериментальных животных наряду с отчетливыми изменениями метаболизма развивается окислительный стресс, о чем свидетельствует повышение уровня малонового диальдегида и нитритов и понижение активности основных ферментов антиоксидантной защиты.

4. В головном мозге плодов и новорожденных животных, развивавшихся в условиях антенатальной гипоксии, наряду с изменением метаболизма, перекисного окисления липидов и содержания нитритов развиваются структурные нарушения в виде уменьшения плотности нейронов, появления клеток-теней, тигролиза и аксо-нальных шаров, а также снижения функционального состояния синтетического аппарата нервных клеток по соотношению концентрации одно- и двухспиральных нуклеиновых кислот.

5. В головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся при недостаточности маточно-плацентарного кровотока, имеют место однонаправленные структурно-метаболические изменения разной степени выраженности, отражающие фазо-вость патологических сдвигов. При этом метаболическими маркерами антенатального повреждения нервной ткани у плодов являются увеличение уровня глутамата, малонового диальдеги-да, кальция и снижение содержания магния; у новорожденных -повышение концентрации нитритов в сочетании с уменьшением уровня цитруллина, снижение активности супероксиддисмутазы, дефицит Си, Мп, Бе, Со, накопление V, Бе и А1.

6. Среди изучаемых параметров наибольшую информационную ценность в диагностике фаз структурно-метаболических изменений имеет концентрация цитруллина, которая может служить маркером повреждающего действия гиперпродукции оксида азота, обусловленной гипоксическим фактором, и эффективности проводимой терапии.

7. Метаболические изменения в головном мозге плодов и новорожденных крысят при патологической беременности в условиях гипоксии носят как компенсаторно-приспособительный, так и дезадаптивный характер. Компенсаторно-приспособительные реакции обусловлены изменениями углеводного и энергетического обмена, в то время как ведущее значение в дезадаптивных сдвигах принадлежат изменениям метаболизма глутамата и оксида азота.

8. Приоритетными патогенетическими составляющими и, соответственно, «мишенями» фармакологического воздействия в головном мозге плода и новорожденного при недостаточности маточно-плацентарного кровотока являются эксайтотоксичность глутамата, нитрозильный стресс и нарушения элементного гомео-стаза, которые развиваются параллельно, взаимодополняют, взаимообусловливают друг друга и реализуются через кальциевую дисрегуляцию и окислительный стресс.

9. Использование во время беременности экзогенного донора оксида азота приводит к снижению содержания нитрит-ионов и малонового диальдегида, а также увеличению антиоксидантной защиты в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения.

10. В условиях применения Магне-В6 в головном мозге новорожденных животных при патологической беременности увеличивается показатель клеточной плотности нейронов, повышается содержание нитрит-ионов, цитруллина, антиоксидантного потенциала и уменьшается интенсивность свободнорадикальных процессов. Нейропротекторное действие препарата проявляется в большей степени при введении с профилактической целью на ранних сроках беременности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При диагностике, оценке терапевтических мероприятий и профилактике перинатальных поражений центральной нервной системы у детей следует учитывать состояние элементного статуса и антиоксидантной системы, интенсивность перекисного окисления липидов, продукции оксида азота и проявлений эксайто-токсичности глутамата.

2. В качестве дополнительного критерия оценки цитотоксического действия гиперпродукции оксида азота рекомендуется определение содержания цитруллина как маркера активности N0-синтазы в условиях гипоксии.

3. Для коррекции метаболических нарушений в головном мозге плода и новорожденного при нарушении маточно-плацентарного кровообращения рекомендуется применение у беременных препарата Магне-Вб для нормализации элементного статуса и уменьшения проявлений окислительного и нитрозильного стрессов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Томилова И. К. Нарушения обмена углеводов в головном мозге плода как фактор риска развития энцефалопатии / И. К. Томилова, В. Б. Слободин, Г. Л. Сизякова и др. // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы перинатологии». - Екатеринбург, 1996. - С. 26-29.

2. Томилова И. К. Роль нарушений обмена глюкозы в патогенезе антенатальных повреждений систем и органов плода / И. К. Томилова, В. Б. Слободин, Г. JI. Сизякова и др. // Вести. Ивановской медицинской академии. - 1996. -Т. 1, № 1. - С. 36—41.

3. Томилова И. К. Метаболические нарушения в головном мозге плодов, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацен-тарного кровообращения / И. К. Томилова, В. Б. Слободин, Г. Л. Сизякова и др. - 1996. - Деп. в ВИНИТИ № 3382-В96.

4. Томилова И. К. Патогенетическая роль нарушения обмена глюкозы в повреждении фетального мозга / И. К. Томилова, В. Б. Слободин, Г. Л. Сизякова и др. // Вестн. Ивановской медицинской академии. - 1997. - Т. 2, № 3. - С. 23-27.

5. Томилова И. К. Энергетическое обеспечение клеток головного мозга плода в условиях осложненной беременности / И. К. Томилова, В. Б. Слободин // Вестн. Ивановской медицинской академии. - 1998.-Т. 3,№4.-С. 18-22.

6. Томилова И. К. Роль метаболических нарушений в патогенезе антенатального пореждения почек плода / И. К. Томилова // Материалы VI Итоговой открытой научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Молодежь и медицинская наука на пороге XXI века». - Киров, 2000. - С. 19-20.

7. Томилова И. К. Роль свободнорадикальных процессов и антиок-сидантной защиты в патогенезе повреждений внутренних органов плода и новорожденного, развивавшегося в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения / И. К. Томилова, А. В. Маслюкова, В. Б. Слободин и др. // International Journal on Immunorehabilitation. - 2002. - Vol. 4, № 2. - P. 327-328.

8. Томилова И. К. Состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в печени и головном мозге плодов, развивавшихся в условиях нарушенного маточно-плацентарного кровообращения / А. В. Маслюкова, И. К. Томилова, В. Б. Слободин // Деп. в ВИНИТИ. - № 526 В 2002.

9. Томилова И. К. Особенности обмена глутаминовой кислоты в головном мозге плодов, развивавшихся в условиях нарушенного маточно-плацентарного кровотока / А. В. Маслюкова, И. К. Томилова, Е. В. Гарусова. - 2003. - Деп. в ВИНИТИ. - № 2248.

10. Томилова И. К. Перекисное окисление липидов и оксид азота как факторы антенатального поражения головного мозга при ма-точно-плацентарной недостаточности / Д. Н. Богатов, В. Б. Слободин, И. К. Томилова и др. / Материалы межрегиональной кон-

ференции «Анестезиология и реаниматология Тюменской области: вчера, сегодня, завтра» // Тюменский медицинский журн. -2004. -№3-4.- С. 33-34.

11. Томилова И. К. Особенности перекисного окисления липидов и антиоксидантная система в головном мозге и печени новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения / Д. Н. Богатов, В. Б. Слободин, И. К. Томилова // Медицинские науки. - 2004. - № 6(6). - С. 52-54.

12. Томилова И. К. Свободные радикалы в патогенезе гипоксиче-ских энцефалопатий новорожденных в эксперименте / И. К. Томилова, Д. Н. Богатов, В. Б. Слободин и др. / Материалы X Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммунореабилитации. Всемирный форум педиатров // Аллергология и иммунология. - 2005. - Т. 6, № 2. - С. 217.

13. Томилова И. К. Свободно-радикальные процессы и особенности метаболизма глутамата в головном мозге новорожденных крыс, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацен-тарного кровообращения / Д. Н. Богатов, В. Б. Слободин, И. К. Томилова и др. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2007. - № 2. - С. 17-19.

14. Томилова И. К. Влияние экзогенного донатора оксида азота на перекисное окисление липидов в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушенного маточно-плацентарного кровообращения / И. К. Томилова, Д. Н. Богатов, В. Е. Махайкова и др. / Материалы XIII Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммунореабилитации. Всемирный форум педиатров // Аллергология и иммунология. -2008.-Т. 9, № 1.-С. 149.

15. Томилова И. К. Сравнительный анализ структурных изменений лимбической системы мозга в раннем постнатальном онтогенезе крыс в условиях пренатальной гипоксии и применения Магне-Вб / И. К. Томилова, В. И. Демидов, М. С. Абросимова // Науч. труды IX Международного конгресса «Здоровье в XXI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине». 27-30 ноября 2008.-С. 498.

16. Томилова И. К. Структурные изменения лимбической системы в головном мозге в раннем постнатальном онтогенезе крыс в условиях пренатальной гипоксии и биохимической коррекции / И. К. Томилова, В. И. Демидов, М. С. Абросимова // Вести. РУДН. Серия «Медицина». - 2008. - № 8. - С. 206-212.

17. Томилова И. К. Метаболические нарушения в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровообращения и применения препарата Магне-В6 / И. К. Томилова, О. А. Громова, В. Е. Ма-хайкова // Материалы XIV Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммунореабилитации. Всемирный форум педиатров // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10, № 1.-С. 147.

18. Томилова И. К. Структурные изменения гиппокампа в головном мозге новорожденных крысят в условиях пренатальной гипоксии и применения препарата Магне-В6 / И. К. Томилова, М. С. Абросимова, В. А. Горбунов // Морфологические ведомости. - 2009. - № 1-2. - С. 3-5.

19. Томилова И. К. Перекисное окисление липидов в головном мозге новорожденных крысят в условиях антенатальной гипоксии и применения препарата Магне-В6 / И. К. Томилова, Т. Н. Завго-родняя, В. А. Горбунов // Вести. Ивановской медицинской академии. - 2009. - Т. 14. - С. 23-24.

20. Томилова И. К. Особенности метаболизма оксида азота в головном мозге новорожденных крысят в условиях антенатальной гипоксии и применении препарата Магне-В6 / И. К. Томилова, О. А. Громова, Е. JI. Алексахина // Научные труды X Международного конгресса «Здоровье в XXI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине». - М., 2009. - С. 349-350.

21. Томилова И. К. Активность ферментов антиоксидантной системы и содержание микроэлементов в головном мозге новорожденных при нарушении маточно-плацентарного кровообращения в эксперименте / И. К. Томилова, В. Б. Слободин, Е. Л. Алексахина и др. / Материалы XV Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммуноребилитации // International Journal on Immunorchabilitation. - 2010. - Vol.12, №2. -P. 226-227.

22. Томилова И. К. Особенности применения магния в период беременности и в педиатрической практике / И. К. Томилова, И. С. Юргель, О. А. Громова и др. // Фарматека. - 2009. -№ 14 (188).-С. 70-74.

23. Томилова И. К. Состояние метаболизма в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения и применения Магне-В6 /

И. К. Томилова, Т. Н. Завгородняя // Материалы научно-практической конференции студентов и молодых ученых Ивановской государственной медицинской академии «Неделя науки -2009». 20-25 апреля 2009 г. - Иваново, 2009. - С. 18.

24. Томилова И. К. Коррекция дефицита магния и пиридоксина: кли-нико-фармакологические перспективы / И. Ю. Торшин, О. А. Громова, И. К. Томилова // Доктор. Ру. - 2010. - № 7(58). - С. 37-42.

25. Томилова И. К. Содержание тяжелых металлов в головном мозге крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения / И. К. Томилова, О. А. Громова // Науч. труды XI международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке», «Инновационные технологии в биологии и медицине». - М., 2010.- С. 551

26. Томилова И. К. Макро- и микроэлементный статус головного мозга новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения / И. К. Томилова, О. А. Громова // Вести. Ивановской медицинской академии. - 2010. - Т. 15, №4.-С.11-14

27. Томилова И.К. Развитие концепции микронутриентного (элементного) гомеостаза / Т. Р. Гришина, О. А. Громова, И. К. Томилова и др. // Вести. Ивановской медицинской академии. -2010.-Т. 15.-С. 8-12.

28. Томилова И. К. Эритрофагоцитоз у потомства белых крыс, подвергаемых хронической нитритной интоксикации в период беременности и лактации / Материалы XVI Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммунологии / Е. К. Голубева, И. К. Томилова, Е. Л. Алексахина // Аллергология и иммунология. - 2011. - Т. 12, № 1. - С. 49.

29. Томилова И. К. Морфофункциональные и биохимические свойства эритроцитов в раннем постнатальном онтогенезе у крыс в норме и после пренаталыюго стресса / Е. К. Голубева, И. К. Томилова, С. Б. Назаров // Рос. физиологический журн. им. И. М. Сеченова. - 2011. - Т. 97, № 7. - С. 725-732.

30. Томилова И. К. Показатели продукции оксида азота в онтогенезе крыс в условиях антенатальной гипоксии / И. К. Томилова, В. Б. Слободин // Вестн. Ивановской медицинской академии. - 2011.-Т. 16,№2.-С. 25-29.

31. Томилова И.К. Особенности метаболизма глутамата и оксида азота в головном мозге новорожденных, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения и

применения Магне-Вб (экспериментальное исследование) / И. К. Томилова, О. А. Громова, В. Б. Слободин // Вести. Ивановской медицинской академии. - 2011. -Т. 16, № 3. - С. 23-26.

32. Томилова И. К. Содержание нуклеиновых кислот в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся при нарушении маточно-плацентарного кровообращения / И. К. Томилова, Н. В. Рубцов // Сборник трудов II Международной Интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехно-логии». - Казань, 2011. - Т. 2. - С. 325-328.

33. Томилова И. К. Использование органических солей магния в акушерстве с позиций доказательной медицины / И. К. Томилова, Е. Ю. Лисицына, О. А. Лиманова и др. // Вести. Ивановской медицинской академии. -2011. - Т. 16, № 4. - С. 58-62.

34. Томилова И. К. Макро- и микроэлементы в головном мозге плода и новорожденного в норме и патологии (обзор) / И. К. Томилова, О. А. Громова, О. В. Гришина // Неирохимия. -2012.-Т. 29, № 1.-С. 5-10.

ТОМИЛОВА Ирина Константиновна

БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПОВРЕЖДЕНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА ПЛОДА И НОВОРОЖДЕННОГО, РАЗВИВАВШЕГОСЯ В УСЛОВИЯХ НАРУШЕНИЯ МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ, И ИХ КОРРЕКЦИЯ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Подписано в печать 22.04.2012. Формат 60х841/16.

Печ. л. 2,75. Усл. печ. л. 2,56. Тираж 100 экз. ГБОУ ВПО ИвГМА Минздравсоцразвития России 153012, г. Иваново, просп. Ф. Энгельса, 8

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Томилова, Ирина Константиновна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ МЕТАБОЛИЗМА НЕРВНОЙ ТКАНИ ПЛОДА И НОВОРОЖДЕННОГО В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Особенности созревания нервной системы и углеводного обмена в норме и при нарушении маточно-плацентарного кровообращения.

1.2. Метаболизм глутамата в центральной нервной системе в норме и при гипоксии.

1.3. Свободнорадикальные процессы в головном мозге плода и новорожденного.

1.3.1. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная система защиты в ЦНС в норме и при нарушении маточно-плацентарного кровообращения.

1.3.2. Участие оксида азота (II) в репродуктивной функции и метаболизме головного мозга в норме и при гипоксии

1.4. Макро- и микроэлементный статус головного мозга плода и новорожденного в норме и при гипоксии.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Методика воспроизведения экспериментальной модели нарушения маточно-плацентарного кровообращения.

2.2. Морфологические методы исследования структурных изменений гиппокампа в головном мозге плодов и новорожденных крысят в условиях пренатальной гипоксии.

2.3. Биохимические методы исследования.

2.3.1. Методы выделения митохондриальной и цитоплазматической фракции ткани головного мозга для анализа активности ферментов.

2.3.2. Методы радиоактивной индикации.

2.3.3. Методы определения показателей углеводного обмена

2.3.4. Методы определения показателей обмена глутамата.

2.3.5. Методы оценки интенсивности перекисного окисления липидов.

2.3.6. Методы изучения обмена оксида азота.

2.3.7. Методы исследования элементного статуса в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся при недостаточности маточно-плацентарного кровообращения и применении Магне-В6.

Глава 3. ОСОБЕННОСТИ УГЛЕВОДНОГО И ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО ОБМЕНА В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ ПЛОДА, РАЗВИВАВШЕГОСЯ В УСЛОВИЯХ НАРУШЕННОГО МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО

КРОВООБРАЩЕНИЯ.

Глава 4.ОСОБЕННОСТИ МЕТАБОЛИЗМА ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ ПЛОДОВ И НОВОРОЖДЕННЫХ КРЫСЯТ, РАЗВИВАВШИХСЯ ПРИ НАРУШЕНИИ МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ.

Глава 5. СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ ПЛОДА И НОВОРОЖДЕННОГО ПРИ НЕДОСТАТОЧНОСТИ

МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ.

5.1. Состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы в головном мозге плода и новорожденного, развивавшегося в условиях нарушенного маточно-плацентарного кровообращения.

5.2. Показатели обмена оксида азота (II) в головном мозге плода и новорожденного, развивавшегося в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровообращения.

5.3. Влияние экзогенного оксида азота на процессы перекисного окисления липидов и показатели антиоксидантной системы в головном мозге крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения.

Глава 6. ИЗМЕНЕНИЯ ЭЛЕМЕНТНОГО И БИОХИМИЧЕСКОГО СТАТУСА ГОЛОВНОГО МОЗГА НОВОРОЖДЕННЫХ КРЫСЯТ, РАЗВИВАВШИХСЯ В УСЛОВИЯХ НАРУШЕНИЯ МАТОЧНО-ПЛАЦЕНТАРНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА МАГНЕ-В6.

6.1. Изменения элементного статуса в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся при недостаточности маточно-плацентарного кровообращения и применении Магне-В6.

6.2. Морфологические и биохимические изменения в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях пренатальной гипоксии и применения препарата

Магне-В6.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические механизмы повреждения головного мозга плода и новорожденного, развивавшегося в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения, и их коррекция (экспериментальное исследование)."

Актуальность проблемы

В настоящее время обширные медицинские и социальные исследования, проведенные в ряде стран при непосредственном участии Всемирной организации здравоохранения, показали достоверную связь между нарушением внутриутробного развития плода и возникновением в последующем риска формирования психомоторных и соматических расстройств, нередко не компенсируемых в течение всей последующей жизни [11, 19, 26, 39, 41, 57, 104, 129, 139, 148, 155, 193]. Общеизвестным является тот факт, что патологическое течение антенатального периода часто приводит к невынашиванию беременности, задержке внутриутробного развития плода, повреждению различных органов и систем, что в свою очередь обусловливает высокие показатели перинатальной смертности и отрицательно влияет на здоровье будущего поколения [40, 98, 220].

Среди факторов, неблагоприятно влияющих на антенатальный период, большое значение имеет нарушение маточно-плацентарного кровообращения, причиной которого могут быть экстрагенитальная патология матери, наличие острых и хронических инфекций, гестоз и т. п. [173, 193, 304]. Нарушение МПК в свою очередь приводит к развитию гипоксии, являющейся центральным звеном патогенеза антенатального повреждения плода и, в первую очередь, центральной нервной системы [9, 12, 50, 192, 338]. В структуре детской инвалидности поражения нервной системы составляют около 40%, причем в 70-80% случаев они ассоциированы с перинатальными гипо-ксически-ишемическими поражениями мозга [41, 139]. Некоторые заболевания, хотя и не приводят к инвалидизации ребенка, но, в значительной степени, определяют его биологическую и социальную дезадаптацию [30, 52, 98].

Неблагоприятный исход перинатальных поражений центральной нервной системы, ведущих к нарушению жизнедеятельности растущего организма, связывают с трудностью и несовершенством диагностики, прогноза и профилактики синдромов поражения нервной системы [9, 49, 365]. Между тем, в клинической практике изучение недостаточности МПК и ее влияния на развивающийся плод представляет собой трудную задачу вследствие невозможности проведения биохимических исследований на уровне органов и тканей. Поэтому наиболее адекватными для решения этих вопросов являются экспериментальные исследования.

Работами многих авторов в этой области установлен целый комплекс физиологических приспособительных реакций плода к неблагоприятным условиям развития, в частности, к гипоксии [30, 32, 353, 359, 365]. Однако информация о биохимическом статусе нервной ткани плода и новорожденного при данной форме патологии практически отсутствует. Вместе с тем, для понимания патогенетических механизмов антенатального повреждения головного мозга при нарушении МПК необходимость проведения такого рода исследований вполне очевидна.

Несомненный интерес в этом плане представляет изучение метаболизма глюкозы, за счет превращений которой поддерживается оптимальный уровень энергетических и пластических субстратов, необходимых для обеспечения нормального внутриутробного развития и постнатального созревания головного мозга; особенностей свободнорадикальных процессов и обмена глутамата - основного медиатора в составе центральной нервной системы, обладающего эксайтотоксичностью, а также элементного статуса мозга, так как макро- и микроэлементы - неотъемлемые и биологически активные ингредиенты нервной ткани, играющие ключевую роль в сложных биохимических процессах, являющихся химической основой деятельности ЦНС.

Особый интерес в плане возможной медикаментозной коррекции в связи с этим представляют препараты, влияющие на регуляцию кровотока и, соответственно, степени гипоксии, а также элементного статуса головного мозга. В последнее десятилетие активно изучаются подходы к применению донаторов оксида азота в связи с открытием его вазодилятирующих свойств. Также крайне актуальным и до сих пор спорным является назначение препаратов магния. Из всех микроэлементов беременная женщина в значительной степени подвержена возникновению дефицита именно этого элемента, так как потребность в нем в этот период возрастает в 2-3 раза [175]. Причинами гипомагниемии являются гестоз, угроза прерывания беременности, плацентарная недостаточность [104]. Дефицит магния приводит к спастическому сокращению матки, что в свою очередь еще больше уменьшает маточно-плацентарный кровоток. Гипомагниемия очень часто сопряжена с маргинальным уровнем или дефицитом пиридоксина [185], влияющего на уровень и метаболизм нейромедиаторов и биогенных аминов нервной ткани [37]. При этом симптоматика дефицита пиридоксина во многом перекликается с клинической картиной магниевого дефицита, что обусловливает обоснованность их применения в сочетанном виде. В то же время по многим аспектам применения магния в акушерстве не достигнут консенсус, и далеко не все существующие практические рекомендации подтверждены с позиций доказательной медицины.

Цель научного исследования

Установить биохимические механизмы повреждения головного мозга у плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровообращения, и обосновать подходы к коррекции выявленных сдвигов на основании показателей, характеризующих особенности процессов энергетического и углеводного обмена, метаболизма глутаминовой кислоты и оксида азота, уровня свободнорадикальных процессов, элементного статуса и структурных изменений.

Задачи научного исследования

1. Исследовать особенности энергетического и углеводного обмена в головном мозге плодов крыс, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровообращения.

2. Выявить особенности обмена глутаминовой кислоты в мозге плодов и новорожденных крысят при нарушении маточно-плацентарного кровотока.

3. Оценить уровень свободнорадикальных процессов (перекисного окисления липидов и обмена оксида азота) и антиоксидантной защиты в мозге плодов и новорожденных крысят при патологической беременности и применении экзогенного донатора оксида азота.

4. Охарактеризовать микроэлементный статус в головном мозге новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения, и применения препарата Магне-В6, а также его влияние на метаболические процессы.

5. Проанализировать структурные изменения в головном мозге плодов и новорожденных животных, развивавшихся в условиях антенатальной гипоксии и применения препарата Магне-В6.

6. На основе выявленных адаптационных и дезадаптационных метаболических изменений и установленных коррелятивных связей между характеризующими их показателями определить метаболические маркеры повреждения головного мозга плода и новорожденного при нарушении маточно-плацентарного кровотока.

7. Выделить приоритетные патогенетические составляющие для обоснования возможной биохимической коррекции метаболических нарушений в головном мозге плода и новорожденного, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровотока.

Научная новизна исследования

Полученные в ходе исследования результаты существенно расширяют фундаментальные представления о возрастных аспектах метаболизма нервной ткани, а также о патогенетических механизмах повреждения головного мозга плода и новорожденного при нарушении маточно-плацентарного кровообращения.

Показана взаимосвязь и взаимообусловленность изменений энергетического, углеводного, нейромедиаторного обменов, интенсивности свобод-норадикальных процессов и структурных изменений в головном мозге животных при нарушении маточно-плацентарного кровообращения.

Доказана однонаправленность структурно-метаболических процессов в головном мозге плодов и новорожденных крысят разной степени выраженности, что свидетельствует о стадийности патологических изменений при переходе от внутриутробного периода жизни к внеутробному.

Показано, что метаболические изменения в головном мозге, обусловленные цереброваскулярными механизмами, носят компенсаторно-приспособительный характер к гипоксическому фактору, однако их последствия приводят к проявлениям эксайтотоксичности глутамата и окислительного стресса, являющимися патогенетическими звеньями повреждения головного мозга крыс.

Впервые предложены биохимические маркеры для оценки структурно-метаболических изменений в мозге плодов и новорожденных экспериментальных животных при патологической беременности.

Впервые показано, что при действии гипоксического фактора метаболическим маркером повреждающего действия N0 является концентрация цитруллина, повышение содержания которого отражает активность N0-синтазы как локальной компенсаторно-приспособительной реакции, лимитарующей интенсивность нитритредуктазной компоненты цикла и гиперпродукции оксида азота. Уменьшение концентрации цитруллина при повышении нитритов указывает на дезадаптивный характер изменений и является неблагоприятным прогностическим признаком развития патогенетических механизмов гиперпродукции N0, обусловливающих нитрозильный стресс.

Впервые показано, что при недостаточности МПК имеет место нутри-ентная недостаточность, нарушение гомеостаза МЭ, перераспределение элементов, усугубляющее развитие и проявления биохимических изменений.

Работа поддержана грантом Российского фонда фундаментальных исследований № 09-04-97552.

Практическая значимость исследования

Представленные новые данные о стадийности и различной степени выраженности структурных и метаболических изменений дают возможность проводить дифференцированный подход к диагностике и фармакологической коррекции последствий антенатальной гипоксии у плода и новорожденного.

Предложенные метаболические маркеры, отражающие состояние энергетического, нейромедиаторного, свободнорадикального и элементного обменов, являются дополнительными объективизирующими критериями диагностики и прогнозирования здоровья ребенка.

Доказана высокая эффективность применения и целесообразность включения в комплекс лечебных и профилактических мероприятий при нарушении маточно-плацентарного кровообращения экзогенных доноров оксида азота и препаратов магния в сочетании с пиридоксином.

Показано, что биохимическая коррекция элементного гомеостаза плода и новорожденного должна проводиться на ранних сроках беременности матери с профилактической целью.

Положения, выносимые на защиту

1. При действии гипоксического фактора в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения в головном мозге плодов и новорожденных крысят происходят однонаправленные компенсаторно-приспособительные и дезадаптивные изменения углеводного, энергетического и нейромедиаторного метаболизма.

2. Выявленные биохимические сдвиги сопряжены с выраженностью окислительного стресса и свободнорадикальных процессов и отражают фазо-вость структурных изменений ткани мозга.

3. Биохимические маркеры установленных изменений могут быть использованы для оценки структурно-метаболических нарушений и эффективности терапевтических мероприятий при диагностике, лечении и профилактике антенатальных поражений головного мозга плода и новорожденного.

4. Включение в комплекс фармакологической коррекции при недостаточности маточно-плацентарного кровотока у беременных крыс экзогенных донаторов оксида азота и препаратов магния в сочетании с пиридоксином оказывает нейропротективный эффект на головной мозг плода и новорожденного.

Апробация работы

Результаты исследования доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы перинатологии» (Екатеринбург, 15-17 апреля 1996 г.); VI Научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Молодежь и медицинская наука на пороге

XXI века» (Киров, 18-20 апреля 2000 г.); международной конференции «Проблемы медицинской энзимологии» (Москва, 2002); межрегиональной конференции «Анестезиология и реаниматология Тюменской области: вчера, сегодня, завтра» (Тюмень, 2004); II Российской научной конференции «Молодые женщины в науке» (Москва, 2004); II Российской конференции по иммунотерапии и иммунореабилитации (Москва, 2005); XIII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (2008); IX Международном конгрессе «Здоровье в XXI веке» (Москва, 2008); XIV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2009); X Международном конгрессе «Здоровье в XXI веке», «Инновационные технологии в биологии и медицине» (Москва, 2009); Научно-практической конференции студентов и молодых ученых Ивановской государственной медицинской академии (Иваново, 2009), III Всероссийской студенческой научной конференции Самарского государственного медицинского университета (Самара, 2009), XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2010); XI Международном конгрессе «Здоровье в XXI веке» (Москва, 2010), II Международной научной интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологий» 15-18 ноября 2011г. (Pax Grid, 2011).

Реализация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 34 работ, из них 17 - в журналах, рекомендованных ВАК.

Результаты исследования используются в работе научно-исследовательской лаборатории ФГБУ «Ивановский НИИ материнства и детства имени В. Н. Гродкова», научно-исследовательской лаборатории ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, а также в лекционном курсе на кафедрах биологической химии, фармакологии с клинической фармакологией, акушерства, гинекологии и неонато-логии педиатрического факультета ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России и на кафедре органической и биологической химии ФГБОУ ВПО «Ивановский государственный университет».

Структура и объем диссертации

Работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы.

Текстовая часть изложена на 221 страницах, иллюстрирована 20 таблицами, 26 рисунками.

Библиографический список включает 395 источников, из них 209 отечественных и 186 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Томилова, Ирина Константиновна

ВЫВОДЫ

1. Нарушение маточно-плацентарного кровообращения в головном мозге плодов крыс сопровождается выраженными и разнонаправленными изменениями метаболизма, важнейшими из которых являются снижение окислительной утилизации глюкозы на фоне повышения ее потребления, накопление лактата, увеличение синтеза гликогена и активация апотомического окисления, деформация элементного статуса в виде дефицита эссенциальных и накопления токсичных элементов.

2. Выраженные изменения претерпевает обмен глутамата в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях недостаточности маточно-плацентарного кровотока, приводящие к истощению его метаболического и увеличению нейротрансмиттерного пула, о чем свидетельствует повышение активности глутаматдегидрогеназы, аспарагиновой трансаминазы, аланиновой трансаминазы и глутаминазы.

3. При патологической беременности в головном мозге плодов и новорожденных экспериментальных животных наряду с отчетливыми изменениями метаболизма развивается окислительный стресс, о чем свидетельствует повышение уровня малонового диальдегида и нитритов и понижение активности основных ферментов антиоксидантной защиты.

4. В головном мозге плодов и новорожденных животных, развивавшихся в условиях антенатальной гипоксии, наряду с изменением метаболизма, пе-рекисного окисления липидов и содержания нитритов развиваются структурные нарушения в виде уменьшения плотности нейронов, появления клеток-теней, тигролиза и аксональных шаров, а также снижения функционального состояния синтетического аппарата нервных клеток по соотношению концентрации одно- и двухспиральных нуклеиновых кислот.

5. В головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся при недостаточности маточно-плацентарного кровотока, имеют место однонаправленные структурно-метаболические изменения разной степени выраженности, отражающие фазовость патологических сдвигов. При этом метаболическими маркерами антенатального повреждения нервной ткани у плодов являются увеличение уровня глутамата, малонового диальдегида, Са и снижение М§; у новорожденных - повышение содержания нитритов в сочетании с уменьшением цитруллина, снижение активности супероксиддисму-тазы, дефицит Си, Ък\, Мп, Бе, Со, накопление V, Бе и А1.

6. Среди изучаемых параметров наибольшую информационную ценность в диагностике фаз структурно-метаболических изменений имеет концентрация цитруллина, которая может служить маркером повреждающего действия гиперпродукции оксида азота, обусловленной гипоксическим фактором, и эффективности проводимой терапии.

7. Метаболические изменения в головном мозге плодов и новорожденных крысят при патологической беременности в условиях гипоксии носят как компенсаторно-приспособительный, так и дезадаптивный характер. Компенсаторно-приспособительные реакции обусловлены изменениями углеводного и энергетического обмена, в то время как ведущее значение в дезадап-тивных сдвигах принадлежат изменениям метаболизма глутамата и оксида азота.

8. Приоритетными патогенетическими составляющими и, соответственно, «мишенями» фармакологического воздействия в головном мозге плода и новорожденного при недостаточности маточно-плацентарного кровотока являются эксайтотоксичность глутамата, нитрозильный стресс и нарушения элементного гомеостаза, которые развиваются параллельно, взаимодополняют, взаимообусловливают друг друга и реализуются через кальциевую дисрегуляцию и окислительный стресс.

9. Использование во время беременности экзогенного донора оксида азота приводит к снижению содержания нитрит-ионов и малонового диаль-дегида, а также увеличению антиоксидантной защиты в головном мозге плодов и новорожденных крысят, развивавшихся в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения.

10. В условиях применения Магне-В6 в головном мозге новорожденных животных при патологической беременности увеличивается показатель клеточной плотности нейронов, повышается содержание нитрит-ионов, цитрул-лина, антиоксидантного потенциала и уменьшается интенсивность свободно-радикальных процессов. Нейропротекторное действие препарата проявляется в большей степени при введении с профилактической целью на ранних сроках беременности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При диагностике, оценке терапевтических мероприятий и профилактике перинатальных поражений центральной нервной системы у детей следует учитывать состояние элементного статуса и антиоксидантной системы, интенсивность перекисного окисления липидов, продукции оксида азота и проявлений эксайтотоксичности глутамата.

2. В качестве дополнительного критерия оценки цитотоксического действия гиперпродукции оксида азота рекомендуется определение содержания цитруллина как маркера активности 1чЮ-синтазы в условиях гипоксии.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Томилова, Ирина Константиновна, Москва

1. Активность супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы и уровень малонового диальдегида у недоношенных новорожденных с гипокси-ческим поражением центральной нервной системы / В. А. Желев и др. // Клин. лаб. диагностика. — 2004. — № 12. — С. 13—16.

2. Александрова Ю. Н. Роль системы цитокинов в патологии перинатального периода//Педиатрия. — 2007. — Т. 86, № 1. —С. 116—118.

3. Амилоид и ионы алюминия усиливают повреждение нейронов, опосредованное глутаматными рецепторами NMDA-класса / Е. О. Тунева и др. // Биологические мембраны: журнал мембранной и клеточной биологии. — 2009. — Т. 26, № 6. — С. 479—485.

4. Ароян Г. Ц. Метаболические аспекты задержки внутриутробного развития плода : автореф. дис. . канд. биол. наук. — Тверь, 2002. — 24 с.

5. Аушева Ф. X., Летифов Г. М. Развитие и процессы свободнорадикаль-ного окисления у новорожденных и детей раннего возраста, рожденных у матерей с неблагоприятным течением беременности // Педиатрия. — 2007. — Т. 86, № 6. — С. 15—19.

6. Ашмарин И. П., Ещенко Н. Д., Каразеева Е. П. Нейрохимия в таблицах и схемах. — М. : Экзамен, 2007. — 144 с.

7. Балабан П. М., Гуляева Н. В. Общность молекулярных механизмов нейропластичности и нейропатологии: интегративный подход // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. — 2006. — Т. 92, № 2. — С. 145— 151.

8. Банержи А. Медицинская статистика понятным языком / пер. с англ. / под ред. В. П. Леонова. — М. : Практ. медицина, 2007. — 286 с.

9. Баранов А. А., Альбицкий В. Ю., Волгина С. Я. Недоношенные дети в детстве и отрочестве. — М., 2001. — 188 с.

10. Баранова Т. И., Никитина И. Л. Антенатальная йодная профилактика как медико-социальный фактор в развитии когнитивных функций у детей дошкольного возраста // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. — 2007. — Т. 57, №5. —С. 79.

11. Барашнев Ю. И. Гипоксическая энцефалопатия: гипотезы патогенеза церебральных расстройств и поиск методов лекарственной терапии // Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. — 2002. — № 1. — С. 6—13.

12. Барашнев Ю. И. Перинатальная неврология. — М., 2001. — 638с.

13. Бахтина Г. Г., Ленько О. А., Суханова С. Е. Микроэлементозы человека и пути коррекции их дефицита // Патология кровообращения и кардиохирургия. — 2007. — № 4. — С. 82—89.

14. Башкатова В. Г. Оксид азота в механизмах повреждения мозга, обусловленных нейротоксическим действием глутамата // Биохимия. — 1998. —Т. 63, №7. —С. 1020—1028.

15. Беляков Н. А., Семесько С. Г. Антиоксидантная активность биологических жидкостей человека: методология и клиническое значение // Эфферентная терапия.— 2005. — Т. 11,№ 1. — С. 5—17.

16. Бензодифуроксан как NO-зависимый активатор растворимой гуанилат-циклазы и новый высокоэффективный ингибитор агрегации тромбоцитов / О. Г. Бусыгина и др. // Биохимия. — 2000. — Т. 65. — С. 540.

17. Бентон Д. Микроэлементный статус, познания и поведенческие проблемы в детстве // Eur. J. Nutr. — 2008.— Vol. 47, Supp. 13. — P. 38—50.

18. Биоамины мозга и поведение потомства после антенатальной гипоксии: эффекты пептидных нейромодуляторов / М. В. Маслова и др. // Нейрохимия. — 2001. — Т. 18, № 3. — С. 212—215.

19. Биохимические корреляты острой пренатальной гипоксии у беременных самок крыс и их потомства / А. В. Граф и др. // Нейрохимия. — 2004. — Т. 21, № 4. — С. 307—310.

20. Бокша И. С. Взаимосвязь нейронов и глиальных клеток через метаболизм глутамата в мозге здоровых людей и больных психическими заболеваниями // Биохимия. — 2004. — Т. 69, вып. 7. — С. 869—886.

21. Болдырев А. А. Взаимодействия между глутаматными рецепторами // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2000. — Т. 130, № 9. — С. 244—251.

22. Болдырев А. А. Роль активных форм кислорода в жизнедеятельности нейрона // Успехи физиол. наук. — 2003. — Т. 34, № 3. — С. 21—34.

23. Болдырев А. А., Куклей М. Л. Свободные радикалы в нормальном и ишемическом мозге // Нейрохимия. — 1996. — Т. 13. — С. 271—278.

24. Большаков А. П. Глутаматная нейротоксичность: нарушения ионного гомеостаза, дисфункция митохондрий, изменение активности клеточных систем // Нейрохимия. — 2008. — Т. 25, № 3. — С. 157—169.

25. Брюне Б., Сандау К., фон Кнетен А. Апоптотическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации и антагонистические сигнальные пути // Биохимия. — 1998. — Т. 63, вып. 7. — С. 966—975.

26. Брязгунов И. П., Касатикова Е. В., Гончаров О. В. Синдром дефицита внимания с гиперактивностью у детей: протокол лечения // Рос. педиатрический журн. — 2001. — № 5. — С. 34—36.

27. Булыгина Е. Р., Ляпина Л. Ю., Болдырев А. А. Активация глутаматных рецептров ингибирует Иа/К-АТФазу гранулярных клеток мозжечка // Биохимия. — 2002. — Т. 67, вып. 9. — С. 1209—1214.

28. Ванин А. Ф. Оксид азота в биомедицинских исследованиях // Вестн. РАМН. — 2000. — № 4. — С. 3—5.

29. Вартанова М. М. Патогенез и профилактика синдрома отставания в развитии плода при плацентарной недостаточности и его отдаленные последствия : дис. . д-ра мед. наук. — Л., 1984. — 462 с.

30. Васильева Е. М., Баканов М. И. Биохимические изменения при неврологической патологии // Биомедицинская химия. — 2005. — Т. 51, № 6. — С. 581—602.

31. Ватаева Л. А., Косткин В. Б., Макухина Г. В. Поведение в «открытом поле» у самцов и самок крыс, подвергшихся действию гипоксии в различные сроки пренатального развития // Доклады РАН. — 2001. — Т. 380 (1). —С 125—127.

32. Вахитова Л. Ф. Влияние перинатальной гипоксии на показатели мем-бранолиза у новорожденных // Казанский мед. журн. — 2004. — Т. 85, № 1, —С. 33—35.

33. Вельтищев Ю. Е. Проблемы охраны здоровья детей // Рос. вестн. пери-натологии и педиатрии. — 2000. — № 1. — С. 5—9.

34. Верещагин Н. В., Моргунов В. А., Гулевская Г. С. Патология головного мозга при атеросклерозе и артериальной гипертонии. — М. : Медицина, 1997. —288 с.

35. Власова С. Н., Шабурина Е. И., Переслегина И. А. Активность глутати-онзависимых ферментов эритроцитов при хронических заболеваниях печени//Лаб. дело. — 1990. — № 8. — С. 19—21.

36. Влияние пиридоксальфосфата на метаболизм глутамина в субклеточных фракциях мозга / Р. Г. Камалян и др. // Нейрохимия. — 1999. — Т. 16, №3. — С. 227—229.

37. Володин Н. Н, Медведев М. И., Рогаткин С. О. Перинатальная энцефалопатия и ее последствия — дискуссионные вопросы семиотики и терапии // Рос. педиатрический журн. — 2001. — № 1. — С. 4—8.

38. Володин Н. Н. Перинатальная медицина: проблемы, пути и условия их решения // Педиатрия. — 2004. — № 5. — С. 18—13.

39. Володин Н. Н. Перинатальная неврология — проблемы и пути решения // Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. — 2009. — № 10. —С. 4—8

40. Володин Н. Н. Показатели смертности и рождаемости в Российской Федерации // Педиатрия. — 2006. — № 1. — С. 5—8.

41. Воронцов И. М. Педиатрические аспекты пищевого обеспечения женщин при подготовке к беременности и при ее врачебном мониторинге // Педиатрия. — 1999. — № 5. — С. 87—92.

42. Вятчанина Е. С. Влияние алкогольной интоксикации самок крыс до зачатия на содержание макро- и микроэлементов в различных органах потомства : автореф. дис. . канд. биол. наук. — М., 2010. — 12 с.

43. Вятчанина Е. С., Скальный А. В. Изучение влияния употребления алкоголя матерью до беременности на элементный состав коры головного мозга потомства // Материалы I Российского национального конгресса по наркологии. — М., 2009. — С. 7—8.

44. Гармашева Н. Л., Константинова Н. Н. Патофизиологичекие основы охраны внутриутробного развития человека. — Л. : Медицина, 1985. — 160 с.

45. Гарусова Е. В. Клинико-прогностическое значение показателей окисления глюкозы и функции желез внутренней секреции у новорожденных, развивавшихся в условиях прерывания беременности : автореф. дис. .канд. мед. наук. — Иваново, 1989. — 24 с.

46. Гипоксия и оксид азота / И. Ю. Малышев и др. // Вестн. РАМН. — 2000. — № 9. — С. 44—47.

47. Гнусаев С. Ф., Шибаев А. Н., Федерякина О. Б. Сердечно-сосудистые нарушения у новорожденных, перенесших перинатальную гипоксию // Педиатрия. — 2006. — № 1. — С. 9—14.

48. Голосная Г. С. Роль ингибиторов апоптоза в диагностике и прогнозировании исходов перинатальных гипоксических повреждений головного мозга у новорожденных // Педиатрия. — 2005. — № 3. — С. 30—36.

49. Гомазков О. А. Системы нейрохимической регуляции при патологии мозга // Биомедицинская химия. — 2004. — Т. 50, вып. 4. — С. 321—343.

50. Гончарова О. В. Применение препарата элькар у детей с перинатальными гипоксическими поражениями центральной нервной системы // Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. — 2005. — № 3. — С. 36—41.

51. Городецкий В. В., Талибов О. Б. Препараты магния в медицинской практике // Малая энциклопедия магния. — М. : Медпрактика, 2003. — 44 с.

52. Громова О. А. Дефицит магния в организме ребенка с позиции практикующего врача // Рос. педиатрический журн. — 2002. — № 5. — С. 48—51.

53. Громова О. А. Магний и пиридоксин. Основы знаний. — М. : ПротоТип, 2006. —234 с.

54. Громова О. А. Нейрохимия макро- и микроэлементов. Новые подходы к фармакотерапии. — М. : Алев-В, 2001. — 272 с.

55. Громова О. А. Элементный статус и способы его коррекции у детей с последствиями перинатального поражениями ЦНС : дис. . д-ра мед. наук. — Иваново, 2001. — 323 с.

56. Громова О. А., Серов В. Н., Торшин И. Ю. Магний в акушерстве и гинекологии: история применения и современные взгляды // Трудный пациент. — 2008. — № 8. — С. 5—12.

57. Гулевская Т. С., Моргунов В. А. Патологическая анатомия нарушений мозгового кровообращения при атеросклерозе и артериальной гипертонии. — М. : Медицина, 2009. — 296 с.

58. Гунбина Т. Е., Суханова Г. А., Кондратьева Е. И. Критерии оценки ге-модинамических нарушений и повреждения нейронов при гипоксиче-ски-ишемической энцефалопатии новорожденных // Клин. лаб. диагностика. — 2007. — № 9. — С. 84—85.

59. Гуревич К. Г., Шимановский Н. Л. Оксид азота: биосинтез, механизмы действия, функции // Вопр. биол. медицины и фармакологической химии. — 2000. — №4. — С. 16—21.

60. Гусев Е. И., Скворцова В. И. Ишемия головного мозга. — М. : Медицина, 2001, —328 с.

61. Делягин В. М. Дефицит витаминов и минералов у детей // Рос. педиатрический журн. — 2006. — № 1. — С. 48—52.

62. Друккер Н. А., Погорельцева Т. Н., Крукиер В. О. Роль пероксинитрита в патогенезе гестоза // Материалы 4-го съезда акушеров-гинекологов России. — М., 2008. — С. 79.

63. Дубинина Е. Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса // Вопр. мед. химии. — 2001. — Т. 47, № 6. — С. 561—575.

64. Еделев Д. А., Бобровницкий И. П. Влияние гипоксии на углеводный обмен и неспецифическую резистентность организма // Вестн. восстановительной медицины. — 2007. — № 1. — С. 24—26.

65. Еремина О. В. Нарушения адаптации и содержание некоторых микроэлементов в сыворотке крови у маловесных новорожденных : дис. . канд. мед. наук. — Саратов, 2005. — 156 с.

66. Ещенко Н. Д. Определение количества глутаминовой кислоты в тканях // Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен) : учеб. пособие / под ред. М. И. Прохоровой. — Л. : Изд-во Jle-нингр. ун-та, 1982. — С. 244—246.

67. Ещенко Н. Д. Энергетический обмен в головном мозге // Биохимия мозга / под ред. И. П. Ашмарина и др.. — СПб. : Изд-во СПбГУ, 1999. — С. 124—169.

68. Жукова Т. П., Сюткина Е. В. Особенности кровоснабжения мозга плода и новорожденного // Гипоксия плода и новорожденного / под ред. М. Я. СтуДеникина, Н. Холлмана. — М. : Медицина, 1984. — С. 11—36.

69. Журавин И. А. Влияние условий пренатального развития на формирование центральных механизмов регуляции двигательных функций // Проблемы экологии человека. — Архангельск, 2000. — С. 83—87.

70. Журавин И. А., Дубровская H. М., Туманова Н. Л. Постнатальное физиологическое развитие крыс после острой пренатальной гипоксии // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. — 2003. — Т. 89, № 5. — С. 522—532.

71. Журавин И. А., Туманова Н. Л., Потапов Д. О. Структурные изменения в сенсомоторной коре мозга в раннем постнатальном онтогенезе крыс, перенесших пренатальную гипоксию // Журн. эволюции биохимии и физиологии.— 2001. —Т. 37, №6.— С. 518—520.

72. Зайцева О. Е. Особенности накопления микроэлементов в плаценте и пуповине при нормальной и осложненной гестозом беременности : дис. . канд. мед. наук. — М., 2006. — 126 с.

73. Зайчик А. III., Чурилов Л. П. Основы общей патологии. — СПб. : ЭЛ-БИ-СПб, 1999, —624 с.

74. Зарубина И. В., Шабанов П. Д. Молекулярная фармакология антигипо-ксантов. — СПб.: Изд-во Н-Л, 2004. — 368 с.

75. Защита Си,2п-СОД карнозином при нарушении окислительного метаболизма в мозге in vivo / С. Л. Стволинский и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2003. —№2. — С. 151—154.

76. Зенков Н. К., Меньшикова Е. Б., Реутов В. П. NO-синтаза в норме и при патологии различного генеза // Вестн. РАМН. — 2000. — № 4. — С. 30—34.

77. Зенков Н. К., Панкин В. 3., Меньшикова Е. Б. Окислительный стресс. — Минск : Наука и периодика, 2001. — 344 с.

78. Ивантер Э. В., Коросов А. В. Основы биометрии. — Петрозаводск, 1992. —164 с.

79. Изменения перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы головного мозга крыс в ходе раннего постнатального развития / О. В. Галкина и др. // Нейрохимия. — 2009. — Т. 26, № 2. — С. 111— 116.

80. Интенсивность перекисного окисления липидов головного мозг крыс разного возраста / О. В. Галкина и др. // Нейрохимия. — 2002. — Т. 19, №4. —С. 278—283.

81. Ишпахин Г. Ю., Логутова Л. С. Активность оксида азота в продолговатом мозге плода с учетом его предлежания // Рос. вестн. акушера-гинеколога. — 2007. — Т. 7, № 4. — С. 14—16.

82. Йодный дефицит как гетерогенное полиэтиологическое состояние человека / К. Б. Баканов и др. // Экология человека. — 2006. — № 6. — С. 18—24.

83. Карабутов Н. Н. Создание интегрированных документов в Microsoft Office. Введение в анализ данных и подготовку документов. — М. : СОЛОН-Пресс, 2005. — 296 с.

84. Каркищенко Н. Н. Основы биомоделирования. — М. : Изд-во ВПК, 2004. — 608 с.

85. Карнаухов Н. А., Сергиевич Л. А., Аксенова Г. Е. Изменение флуоресцентных характеристик окрашенных акридиновым оранжевым лимфоцитов крови крыс после быстрого у-облучения // Биофизика. — 1994. — Т. 39, вып. 1. — С. 123—128.

86. Касаткина Э. П., Шилин Д. Е., Петрова Л. М. Роль йодного обеспечения в неонатальной адаптации тиреоидной системы // Пробл. эндокринологии. — 2001. —№ 3. — С. 10—15.

87. Катехоламинергическая система мозга при ишемии / Т. Г. Гукасян и др.//Нейрохимия. — 2000. — Т. 17,№ 1. —С. 13—22.

88. Квривишвили Г. И., Митагвария Н. П. Современные представления о роли глутамата в ишемических повреждениях головного мозга // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. — 1999. — Т. 85, № 12. — С. 1489— 1495.

89. Клинические проявления и патоморфологическая картина внутрижелу-дочковых кровоизлияний гипоксического генеза у новорожденных / Л.

90. B. Ледяйкина и др. // Вопр. современной педиатрии. — 2009. — Т. 8, №2. —С. 124—125.

91. Клюева Н. Н. Определение активности глутаматдегидрогеназы в митохондриях тканей животных // Вопр. мед. химии. — 1989. — № 1. —1. C. 49—51.

92. Ключников С. О., Дещекина М. Ф., Демин В. Ф. Минеральный состав сыворотки крови новорожденных в раннем неонатальном периоде // Педиатрия. — 1995. — № 3. — С. 28—32.

93. Кожура В. Л., Носова Н. В. Апоптоз как механизм отсроченной постги-поксической энцефалопатии // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2000. — Прил. 2. — С. 30—32.

94. Конторщикова К. Н. Перекисное окисление липидов в норме и патологии : учеб. пособие. — Н. Новгород, 2000. — 24 с.

95. Коренева Е. М., Карпенко Н. А., Рычкова С. С. Металлы как факторы гипофертильности // Медицинские аспекты здоровья женщины. — 2010. —№3 (1). —С. 5—10.

96. Кореновский Ю. В., Горбенко Е. В., Фадеева Н. И. Антиоксидантные энзимы в амниотической жидкости при перинатальной гипоксии у новорожденных // Материалы 7-го Всероссийского научного форума «Мать и дитя». — М., 2005. — С. 106.

97. Коровин Н. А. Роль железа в организме и коррекция его дефицита у детей // Вопр. современной педиатрии. — 2004. — № 5. — С. 86—91.

98. Критические периоды развития головного мозга / В. Г. Кассиль и др. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. — 2000. — Т. 86, № 11. — С. 1418—1425.

99. Крыжановский Г. Н. Дисрегуляционная патология. — М. : Медицина, 2002. —632 с.

100. Кудрин А. В., Громова О. А. Микроэлементы в неврологии. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 2006. — 304 с.

101. Курбат М. Н. L-глутамат: современный взгляд на известную аминокислоту // Нейрохимия. — 2009. — Т. 26, № 3. — С. 202—207.

102. Курбат М. Н., Лелевич В. В. Обмен аминокислот в головном мозге // Нейрохимия. — 2009. — Т. 26, № 1. — С. 29—34.

103. Лебедева 3. И., Березов Т. Т., Орехович В. Н. Глутамин(аспарагин)аза из Pseudomonas Aurantiaca ВКМВ-548 // Биохимия. — 1981. — Т. 46, вып. 1. —С. 85—88.

104. Легонькова Т. И. Состояние здоровья детей раннего возраста в зависимости от обеспеченности цинком : автореф. дис. . д-ра мед. наук. — Саратов, 2003. —44 с.

105. Лопина О. Д. Биологические мембраны // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1999. — Т. 16. — С. 584—603.

106. Магний при патологии беременности и родов / О. П. Алексеева и др. //РМЖ. —2010. —Т. 18, № 19. —С. 30—36.

107. Макаров И. О., Сидорова И. С. Современный взгляд на патогенез фето-плацентарной недостаточности // Материалы 7-го Всеросссийского научного форума «Мать и дитя». — М., 2005. — С. 134.

108. Максимова И. А., Клименко Л. Л., Протасова О. В. Макро- и микроэлементный баланс в тканях различных органов экспериментальных животных при физиологическом и ускоренном (радиационном) старении // Успехи геронтологии. — 2008. — Т. 21, № 2. — С. 218—225.

109. Малышев И. Ю., Манухина Е. Б. Стресс, адаптация и оксид азота // Биохимия. — 1998. — Т. 63, вып. 7. — С. 992—1006.

110. Марченко И. А., Бурулев А. Л., Иова А. С. Особенности спинальной ультрасонографии у детей грудного возраста // Неврологический журн. — 2006. — № 4. — С. 28—30.

111. Машковский М. Д. Лекарственные средства. — 15-е изд., перераб., испр. и доп. — М. : Новая Волна, 2006. — С. 396.

112. Меерсон Ф. 3. Физиология адаптационных процессов. Серия : Руководство по физиологии. — М. : Наука, 1986. — 640 с.

113. Менщикова Е. Б., Зенков Н. К., Реутов В. П. Оксид азота и NO-синтазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях // Биохимия. — 2000. — Т. 65. — С. 484.

114. Метаболизм ГАМК и глутамата в мозге крыс при экспериментальной ишемии и реперфузии / Н. П. Канунникова и др. // Нейрохимия. -— 2003. — Т. 20, № 3. — С. 196—200.

115. Метаболическая адаптация плода и новорожденного к условиям внеутробной жизни / Г. В. Яцык и др. // Рос. педиатрический журн. — 2009. —№4. —С. 39—42.

116. Метельская В. А., Туманова Н. Г. Скрининг-метод определения уровня метаболитов оксида азота в сыворотке крови // Клин. лаб. диагностика. — 2005. —№6. —С. 15—18.

117. Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен) / под ред. М. И. Прохоровой. — JI. : Изд-во Ленингр. ун-та, 1982. —272 с.

118. Микроэлементозы человека: этиология, классификация, органопатоло-гия / А. П. Авцын и др.. — М. : Медицина, 1991. — 496 с.

119. Мозговая Е. В., Кошелева Н. Г. Эффективность использования препаратов магния с целью профилактики гестоза // Медицинские аспекты здоровья женщины. — 2009. — Т. 19, № 1—2. — С. 27—33.

120. Набиева Т. Н. Неврологические последствия перинатальной асфиксии у детей дошкольного возраста // Успехи физиол. наук. — 2009. — Т. 40, № 2. — С. 72—77.

121. Нарушения минерального обмена у детей / А. В. Скальный и др.. — М., 2000, —44 с.

122. Нейман Е. Г. Основные причины перинатальных поражений ЦНС у новорожденных детей // Сибирское мед. обозрение. — 2005. — № 4. — С. 30—32.

123. Нетребенко О. К. Роль меди и селена в питании недоношенных детей // Педиатрия. — 2005. — № 2. — С. 59—63.

124. Нетребенко О. К., Щеплягина Л. А. Иммунонутриенты в питании детей // Педиатрия. — 2006. — № 2. — С. 61—66.

125. Николаева Т. Н., Дашичев К. В. Исходное состояние и динамика показателей сердечного ритма у недоношенных новорожденных в периоде ранней постнатальной адаптации // Вестн. Ивановской медицинской академии. — 2011. — Т. 16, № 3. — С. 27—31.

126. Новиков А. А. Роль оксида азота при нормальной беременности и нарушении маточно-плацентарного кровообращения у белых крыс : ав-тореф. дис. . канд. биол. наук. —Ярославль, 2005. — 28 с.

127. Одинаева Н. Д., Яцык Г. В., Скальный А. В. Макро- и микроэлементы: анализ волос недоношенных новорожденных // Микроэлементы в медицине. — 2002. — Т. 3. — С. 12—17.

128. Определение ароматических и основных аминокислот в пробах крови методом тонкослойной ионообменной хроматографии / Г. А. Яровая и др. // Методы разделения и анализа в биохимии. — М., 1982. — С. 24—25.

129. Осипова Е. В. Закономерности метаболических реакций у детей с различной функциональной активностью полушарий головного мозга при неврологических синдромах : дис. . д-ра биол. наук. — Иркутск, 2005. —250 с.

130. Осипова Е. В. Роль химических элементов в деятельности нервной системы // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. — 2005. — № 1. — С. 79—84.

131. Особенности применения магния в период беременности и в педиатрической практике / И. К. Томилова и др. // Фарматека. — 2009. — № 14 (188). —С. 70—74.

132. От здоровой клетки к здоровому организму. Современные подходы к оценке и коррекции состояния ряда энергообеспечивающих систем организма в норме и при наличии патологии / Т. Д. Измайлова и др. // Лечащий врач. — 2005. — № 4. — С. 66—69.

133. Охотин В. Е., Калиниченко С. Г., Дудина Ю. В. NO-ергическая трансмиссия и NO как объемный нейропередатчик. Влияние NO на механизмы синаптической пластичности и эпилептогенез // Успехи физиол. наук. — 2002. — Т. 33, № 2. — С. 41—55.

134. Павлова Л. А. Морфофункциональные изменения головного мозга при патологии щитовидной железы в условиях макро- и микроэлементозов (клинико-нейропсихологическое и экспериментальное исследование) : дис. . канд. мед. наук. — М., 2005. — 136 с.

135. Пальчик А. Б., Шабалов Н. П. Гипоксически-ишемическая энцефалопатия новорожденных. — СПб. : Питер, 2000. — 224 с.

136. Перинатальные гипоксические поражения ЦНС у новорожденных / Г. М. Савельева и др. //Вестн. РАМН. — 1994. — № 1. — С. 20—23.

137. Перспективы применения магния в педиатрии и детской неврологии / О. А. Громова и др. // Педиатрия. — 2010. — Т. 89, № 5. — С. 142— 149.

138. Пестрикова Т. Ю., Юрасова Е. А. Пренатальная диагностика и профилактическое лечение препаратом Магне-Вб беременных группы рискапо развитию гестоза // Акушерство и гинекология. — 2006. — № 4. — С. 55—58.

139. Петренко С. В., Недвецкий П. И., Конев С. В. Влияние доноров окиси азота на Са2+-зависимое освобождение ГАМК из синаптосом головного мозга // Биохимия. — 2000. — Т. 65, № 9. — С. 1215—1224.

140. Петрушина А. Д., Левитина Е. В., Халитов М. Ш. Нарушения метаболизма кальция у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы // Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. — 2002. — № 1. —С. 14—18.

141. Повышенное содержание в среде обитания и дисбаланс в организме людей ряда макро- и микроэлементов как причина алопеции и системного поражения организма детей / С. В. Нагорный и др. // Микроэлементы в медицине. — 2000. — Т. 1. — С. 35—50.

142. Полунин И. И., Митрохина Н. М., Зенченко Н. Ю. Изменение параметров основных функциональных систем новорожденных, перенесших острую или хроническую гипоксию // Успехи современного естествознания. — 2007. — № 12. — С. 24—26.

143. Попова Ю. Ю. Нейротрофические факторы и ионный гомеостаз у недоношенных новорожденных с гипоксическим поражением центральной нервной системы : дис. . канд. мед. наук. — Томск, 2007. — 165 с.

144. Пренатальное воздействие ацетата свинца на антиоксидантную глута-тионовую систему головного мозга новорожденных крыс in vivo и на нейритный рост in vitro / А. А. Кравцов и др. // Нейрохимия. — 2009. — Т. 26, № 3. — С. 225—321.

145. Промыслов М. Ш., Дамчук М. Л. Модификация метода определения антиоксидантной активности сыворотки крови // Вопр. мед. химии. — 1990. — Т. 40, № 4. — С. 90—92.

146. Прохорова М. И., Туликова 3. Н. Методы определения радиоактивного углерода. — Л., 1959. — 176 с.

147. Раевский К. С. Роль оксида азота в глутаматэргической патологии мозга // Вестн. РАМН. — 2000. — № 4. — С. 11—15.

148. Разыграев А. В. Активность глутатионпероксидазы в ткани шишковидной железы крыс и ее изменения при старении // Успехи геронтологии. — 2010. — Т. 23, № 3. — С. 392—395.

149. Райвио К. О., Антонов А. Г., Сафонова Т. Я. Биохимические параметры гипоксии плода и новорожденного // Гипоксия плода и новорожденного / под ред. М. Я. Студеникина, Н. Холлмана. — М. : Медицина, 1984. —С. 91—115.

150. Ранняя диагностика неблагоприятных последствий перинатальных ги-поксически-ишемических поражений головного мозга у недоношенных детей и оптимизации их лечения / H. Н. Володин и др. // Педиатрия. — 2010. — Т. 89, №2. —С. 101—106.

151. Ратнер А. Ю. Неврология новорожденных. — М. : Бином, 2006. — 368 с.

152. Реутов В. П. Цикл окиси азота в организме млекопитающих и принцип цикличности // Биохимия. — 2002. — Т. 67, вып. 3. — С. 353—376.

153. Решетник JI. А., Парфенова Е. О. Биогеохимическое и клиническое значение селена для здоровья человека // Микроэлементы в медицине. — 2001. — Т. 2, № 2. — С. 2—8.

154. Роль арахидоновой кислоты и ее метаболитов в поражении синаптиче-ских мембран при действии глутамата на нервные окончания из разных областей мозга крыс / С. М. Молчанова и др. // Нейрохимия. —2004.—Т. 21, №2. —С. 100—109.

155. Роль оксида азота в механизмах формирования рефлекторных вазомоторных реакций / А. А. Мойбенко и др. // Успехи физиол. наук. —2005. — Т. 36, № 4. — С. 3—12.

156. Роль цинка и меди в микронутриентном статусе новорожденного / Е. А. Журавлева и др. // Экология человека. — 2007. — № 11. — С. 23—28.

157. Рюкерт Е. Н., Соболева О. И. Темперамент детей, перенесших гипокси-чески-ишемическое поражение центральной нервной системы, взаимосвязь с уровнем серотонина // Вестн. РГМУ. — 2006. — № 2. — С. 306.

158. Савельев С. А., Репкина Н. С., Саульская Н. Б. Чувствительный метод определения цитруллина для прижизненного мониторинга продукции оксида азота в ЦНС // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова. — 2005. —Т. 91, №5. —С. 587—591.

159. Самойлов М. О., Мокрушин А. А., Семенов Д. Г. Вовлечение глутамат-ных рецепторов (NMDA-типа) в реакции нейронов мозга на аноксию различной длительности // Вестн. РАМН. — 2000. — № 9. — С. 34—39.

160. Северин Е. С. Биохимия. — М. : ГЭОТАР-Мед, 2009. — 780 с.

161. Серая И. П., Нарциссов Я. Р. Современные представления о биологической роли оксида азота // Успехи современной биологии. — 2002. — Т. 122, № 3. — С.249—258.

162. Сергутина А. В. Влияние L-ДОФА на активность глутаматдегидрогена-зы в нейронах мозга крыс с различной двигательной активностью // Нейрохимия. — 2010. — Т. 27, № 1. — С. 31—35.

163. Серов В. Н., Твердикова М. А., Тютюнник В. Л. Профилактика витами-нодефицита в перинатальном периоде // РМЖ. — 2010. — Т. 18, № 19, —С. 1191—1196.

164. Сидорова И. С., Макаров И. О. Фетоплацентарная недостаточность: клинико-диагностические аспекты. —М. : Медицина, 2000. — 128 с.

165. Сизякова Г. Л. Метаболизм глюкозы в печени плода, развивавшегося в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения : авто-реф. . канд. биол. наук. — Иваново, 1990. — 24 с.

166. Система энергетического обеспечения и антиоксидантной защиты у новорожденных при острой и хронической гипоксии / К. И. Пагава и др. // Педиатрия. — 2003. — № 1. — С. 34—38.

167. Смирнов В. В., Горбунов Г. Е. Роль оксида азота в физиологии и патологии органов и систем // Педиатрия. — 2010. — Т. 89, № 6., прил. 1. — С. 182—188.

168. Состояние здоровья новорожденных, родившихся у женщин с плацентарной недостаточностью и инфекцией / Е. Н. Байбарин и др. // Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. — 2009. — Т. 54, № 5. — С. 14—19.

169. Сосунов А. А. Оксид азота как межклеточный посредник // Соросов-ский образовательный журн. — 2000. — № 6. — С. 27—34.

170. Спасов А. А. Магний в медицинской практике. — Волгоград, 2000. — 272 с.

171. Способ определения содержания нитрит-ионов как конечного метаболита оксида азота II / Р. Дж. Фланаган и др. // Основы аналитической токсикологии. — Женева : ВОЗ, 1997. — 7 с.

172. Сравнительное изучение нейротоксического действия солей лития / П. П. Балашов и др. // Сибирский вестн. психиатрии и наркологии. — 2008.—№4. —С. 83—84.

173. Сравнительный анализ отдаленных последствий пренатальной гипоксии, проведенной в периоды прогестации и раннего органогенеза / А. С. Маклакова и др. // Рос. физиол. журн. — 2006. — Т. 92, № 9. — С. 1085—1091.

174. Стальная И. Д., Гаришвили Т. Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты. Современные методы в биохимии / под ред. акад. АМН СССР В. Н. Ореховича. — М., 1977.

175. Ткачева Н. В. Клинико-морфологическая характеристика патологии сосудистых сплетений желудочков головного мозга у новорожденных и детей грудного возраста, перенесших гипоксию : дис. . канд. мед. наук. — Саратов, 2004. — 107 с.

176. Товарницкий В. И. Метод определения альдолазы в сыворотке крови // Современные методы в биохимии. — М., 1964. — Т. 1. — С. 303—310.

177. Томилова И. К. Особенности углеводного обмена в мозге, сердце и почках плода, развивавшегося в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения : автореф. . канд. мед. наук. — Иваново, 1995. —20 с.

178. Томилова И. К., Громова О. А., Гришина О. В. Макро- и микроэлементы в головном мозге плода и новорожденного в норме и патологии // Нейрохимия, — 2012. — Т. 29, № 1. —С. 5—10.

179. Торчинов А. М., Цахилова С. Г., Сарахова Д. X. Показатели ПОЛ у беременных с гестозом // Материалы 2-го регионального форума «Мать и дитя». — Сочи, 2008. — С. 90—91.

180. Торшин И. Ю., Громова О. А., Гусев Е. И. Механизмы антистрессового и антидепрессивного действия магния и пиридоксина // Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. — 2009. — Т. 109, № 11. — С. 107—111.

181. Торшин И. Ю., Громова О. А., Томилова И. К. Коррекция дефицита магния и пиридоксина: клинико-фармакологические перспективы // Доктор. Ру. — 2010. — № 7 (58). — С. 37—42.

182. Тул Д. Ф. Сосудистые заболевания головного мозга. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 2007. — 590 с.

183. Тутельян В. А., Княжев В. А., Хотимченко С. А. Селен в организме человека. — М. : Изд-во РАМН, 2002. — 224 с.

184. Увеличение генерации оксида азота в тканях животных при адаптации к кратковременным стрессорным воздействиям (ЭПР исследование) / Ф. 3. Меерсон и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1994. — № 3. — С. 242—244.

185. Уллубиев М. А., Маликова А. Г., Никонов А. А. Изменения микроэлементов при ишемическом инсульте // Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. — 2007. — Т. 107, № 20. — С. 37—42.

186. Фавье М., Хининджер-Фавье И. Микроэлементы и беременность // Микроэлементы в медицине. — 2002. — № 3 (4). — С. 2—6.

187. Фадеева Н. И., Ховалыг Н. М., Ремнева О. В. Оксидантно-антиоксидантный статус недоношенных новорожденных с перинатальным поражением центральной нервной системы // Рос. вестн. перина-тологии и педиатрии. — 2010. — Т. 55, № 3. — С. 26—30.

188. Фармаколазерная профилактика перинатальных осложнений фетопла-центарной недостаточности / О. В. Васильева и др. // Педиатрия. —2007. —Т. 86, № 1. —С. 119—126.

189. Фокин В. Ф., Пономарева Н. В. Энергетическая физиология мозга. — М. : Антидор, 2003. — 288 с.

190. Формализованные подходы к оценке нервно-психического развития детей раннего возраста с перинатальной патологией / Н. Н. Володин и др. // Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. — 2003. — Т. 48 (6). — С. 38—41.

191. Формирование депрессивноподобного поведения и тревожности у животных в условиях алиментарного дефицита магния / А. А. Спасов и др. // Журн. высшей нервной деятельности им. И.П. Павлова. —2008. — Т. 58, № 4. — С. 476-485.

192. Харламова Н. В., Чаша Т. В., Шилова Н. А. Антенатальной прогнозирование и профилактика постгипоксической кардиопатии у новорожденных детей // Вестн. новых медицинских технологий. — 2004. — Т. 11, №4, —С. 37—38.

193. Хемилюминесценция как метод оценки общей антиокислительной активности крови, слюны, слезной жидкости и мочи / Р. Ф. Камилов и др. // Клин. лаб. диагностика. — 2009. — № 2. — С. 21—36.

194. Цитохимическая морфометрия лимфоцитов в оценке адаптации детей с перинатальными поражениями ЦНС / Т. Д. Измайлова и др. // Рос. педиатрический журн. — 2004. — № 4. — С. 4—7.

195. Чайка В. К., Батман Ю. А., Пиклун В. Л. Роль микроэлементов в становлении иммунокомпетентности новорожденных // Неонатология. — 2007. — № 1 (4). — С. 21—26.

196. Чевари С., Секей И. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах // Лаб. дело. — 1985. —№ 11. —С. 678—681.

197. Чекман И. С., Горчаков Н. А., Николай С. Л. Магний в медицине. — Кишинев, 1992. — 104 с.

198. Шевченко Ю. Л. Гипоксия. Адаптация, патогенез, клиника. — СПб. : Элби, 2000. —384 с.

199. Щеплягина Л. А., Легонькова Т. И. Клиническое значение обеспеченности цинком матери и ребенка // Актуальные вопросы педиатрии : сб. науч. тр. — Екатеринбург, 2002. — С. 34—36.

200. Щеплягина Л. А., Маслова О. И. Микронутриенты и познавательные способности детей — возможности коррекции // Рос. педиатрический журн. — 2004. — № 1. —С. 52—55.

201. Экологобиогеохимические факторы и здоровье человека / Н. А. Агад-жанян и др. // Экология человека. — 2000. — № 3. — С. 35—37.

202. Якимовский А. Ф., Варшавская В. М. Ионы магния предотвращают развитие гиперкинеза, вызываемого введением пикротоксина в не-остриатум крыс // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова. — 2006. — Т. 92, №6, —С. 723—731.

203. Янковский О. Ю. Токсичность кислорода и биологические системы. — СПб.: Игра, 2000. — 328 с.

204. Яснецов С. А., Евсеев А. В., Парфенов Э. А. Изучение антигипоксиче-ских эффектов медьсодержащих биологически активных веществ //

205. Психофармакология и биологическая наркология. — 2006. — Т. 6, вып. 4. —С. 1335—1340.

206. A peptide preparation protects cells in organotypic brain slices against cell death after glutamate intoxication / C. Riley et al. // J. Neural. Transm. — 2006. — Vol. 113, № 1. — P. 103—110.

207. Aggregation and neurotoxicity / T. Chen et al. // Inorganic Chemistry. — 2009.—Vol. 48, № 13. —P. 5801—5809.

208. Ahen G. P., Klyachko V. A., Jackson M. B. cGMP and S-nitrosylation: two routs for modulation of neuronal excitability by NO // Trends Neurosci. — 2002. —Vol. 25, № 10. — P. 510—517.

209. Alison B. Nitric oxide regulation of free radical and enzymemediated lipid and lipoprotein oxidation // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vase. Biol. — 2000. — Vol. 20, № 7. — P. 1707—1715.

210. An inborn error of metabolism imitating hypoxic-ischaemic encephalopathy / P. G. Benardis et al. // BLOG. — 2000. — Vol. 107 (7). — P. 941—942.

211. Analysis of citrulline in brain tussue after perfusion with haloperidol by liquid chromatography-mass spectrometry / K. Igarashi et al. // J. Chromatography B. — 2000. — Vol. 746. — P. 33—40.

212. Antioxidant and electrochemical properties of calcium and lithium ascor-bates / O. A. Avramchik et al. // J. of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. — 2005. — № 37. — P. 1149—1154.

213. Antony M. Nervous system // J. Metal. Toxicology. — 1995. — P. 199— 235.

214. Astroglial cells and energy metabolism of the brain / B. Hamprecht et al. // Biochem. Soc. — 1990. — Vol. 6. — P. 45—62.

215. Balduini W., De Angelis V., Mazzoni E. Long-lasting behavioral alterations following a hypoxic/ischemic brain injury in neonatal rats // Brain Research. — 2000. — Vol. 859. — P. 318—325.

216. Baschat A., Hecher K. Fetal growth restriction due to placental disease // Semin. Perinatol. — 2004. — Vol. 28. — P. 67—80.

217. Beal M. F. Mitochondria, free radicals and neurodegeneration // Clin. Opin. Neurobiol. — 1996. — Vol. 6. — P. 661—666.

218. Beaufrere B., Bresson J. L., Briend A. Iodine nutrition in the infant // Arch. Pediatr. — 2000. — Vol. 7 (1). — P. 66—74.

219. Behcet brain tissue identified with increased levels of Si and A1 / M. Aranyosiova et al. // Applied Surface Science. — 2008. — Vol. 255, №4.—P. 1123—1125.

220. Berger R., Gamier Y. Perinatal brain injury // J. Perinat. Med. — 2001. — Vol. 29, № 1. —P. 85—86.

221. Bergmeyer H. U., Bernt E., Jaworek D. Methoden der enzymatischen analyse. — Berlin, 1970.—Bd. II, III. —P. 1536—1539.

222. Black R. E. Micronutrimements in pregnancy // Br. J. Nutr. Suppl. — 2001. —Vol.2. —P. 193—197.

223. Block A. Acetylcholine synthesis and quintalrelease reconstituted by trans-feet ion ofmediatophore and choline acethyltransferase cDNAs // Eur. J. Neurosci. — 1999. — Vol. 11 (5). —P. 1523—1534.

224. Boado R. J. In vivo upregulation of the blood-brain barrier GLUT1 glucose transporter by brain-derived peptides // Europ. J. Neurol. — 1999. — Vol. 6, suppl. 3. —P. 37—46.

225. Boldyrev A., Johnson P., Carpenter D. Natural mechanisms of protection of neurons against oxidative stress // Recent Res. Devel. Comp. Biochem. Physiol. —2000.—Vol. 1. —P. 91—103.

226. Boldyrev A., Song R., Djatlov V. Neuronal cell death and reactive oxygen species // Cell Mol. Neurobiol. — 2000. — Vol. 20. — P. 433—450.

227. Bon C. L. M., Garthwaite J. On the role of nitric oxide in hippocampal long-term potentiation // J. Neurosci. — 2003. — Vol. 23, № 2. — P. 1941— 1948.

228. Bourre J. M. Effects of nutrients (in food) on the structure and function of the nervous system: update on dietary requirements for brain. Part 1: micro-nutrients // J. Nutr. Health Aging. — 2006. — Vol. 10 (5). — P. 377—385.

229. Brain ischemia and reperfusion: molecular mechanisms of neuronal injury / B. C. White et al. // J. Neurol. Sci. — 2000. — Vol. 179 (SI—2). — P. 1—33.

230. Butterworth J., Tennant M. C., Yates C. M. Brain enzymes in agonal state and demencia // Biochem. Soc. Trans. — 1990. — Vol. 17, № 1. — P. 208—209.

231. Calcium-depended regulation of the nitric oxide synthase activity / P. G. Gunasekar et al. // J. Neurochem. — 1995. — Vol. 65. — P. 2016— 2021.

232. Caponas D. Glyceryl trinitrate and acute uterine relaxation: a literature review // Anaesth. Intensiv. Care. — 2001. — Vol. 29, № 2. — P. 163—177.

233. Casanueva E., Viteri F. E. Iron and oxidative stress in pregnancy // J. Nutr.— 2003. — Vol. 133, suppl.2. — P. 1700—1708.

234. Cataldo A. M., Broadwell R. D. Cytochemical identification of cerebral glycogen and glucose-6-phocphate activity under normal and experimental conditions: I. Neurons and glia // J. Electron. Microsc. Tech. — 1996. — № 3. — P. 413—437.

235. Cellular Response Against Oxidative and Nitrosative Stress: Role of Selenium, Tellurium, Zinc and Cooper / L.-O. Klotz et al. // J. Nutr. — 2003. — Vol. 133. —P. 203—282.

236. Chao C. R., Hohimer A. R., Bissonette J. M. The effect of electrocortical state on cerebral carbohydrate metabolism in fetal sheep // Developmental Brain Research. — 1990. — Vol. 49. — P. 1—5.

237. Characterization and distribution of nitric oxide synthase in the human brain during normal ageing / D. Blum-Degen et al. // Brain. Res. — 1999. — Vol. 834 (1). —P. 128—135.

238. Choi Y. B. Reactive oxygen intermediates during programmed cell death induced in the thymusof the Ts (1716) 65 Dn mouse's murine model Forhuman Down's syndrome // J. Immunol. — 1999. — Vol. 163 (10). — P. 5399—5410.

239. Chronic hypoxia increases the NO contribution of acetylcholine vasodilatation of the fetal quinea pig heart / L. P. Thompson et al. // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. — 2000. — Vol. 279, № 5. — P. 1813— 1820.

240. Classen H G. Magnesium orotate — experimental and clinical evidence // Rom. Intern. Med. — 2004. — Vol. 42 (3). — P. 491—501.

241. Cognitive impairment related changes in the elemental concentration in the brain of old rat / R. F. B. Serpa et al. // Spectrochimica Fcta Part B: Atomic Spectroscopy. — 2006. — Vol. 61. — P. 1219—1223.

242. Cole T. B., Martynova A. Interaction of Nutrition and BingeEthanol Treatment on Brain Damage and Withdrawal // J. Biomed. Sci. — 2001. — №8(1).—P. 134—142.

243. Colorimetric determination of citrulline residues in proteins / K. Sugavara et al. // Analytical Biochemistry. — 1998. — Vol. 265. — P. 92—96.

244. Comparison of the relaxation effect in vitro of nitroglycerin vs. fenoterol on human myometrial strips / M. David et al. // J. Perinat. Med. — 2000. — Vol. 28, № 3. — P. 232—242.

245. Coronary microvascular protection with Mg2+: effects on intracellular calcium regulation and vascular function / N. Matsuda et al. // Am. J. Physiol. —1999. — Vol. 276 (4 pt. 2). — P. 1124—1130.

246. Crompton M. The mitochondrial permeability transition pore and its role in cell death // Biochem. — 1999. — № 341. — P. 233—249.

247. Cuajungco M. P., Lees G. J. Zinc metabolism in the brain relevance to human neurodegenerative disorders // Neurobiol. Dis. — 1997. — Vol. 4. — P. 1387.

248. Cwalisz K., Garfield R. E. Role of nitric oxide in implantation and menstruation // Hum. Reprod. — 2000. — Suppl. 3. — P. 96—111.

249. Dai Z., Canary J. W. Tailoring tripodal ligands for zinc sensing // New J. of Chemistry. — 2007. — Vol. 31, № 10. —P. 1708—1718.

250. Dawson T. M., Dawson V. L. Isolated cerebral and cerebellar mitochondria produce free radicals when expose to elevated Ca++ and NO: implication for neurodegeneration // J. Neurochem. — 1994. — Vol. 63, № 3. — P. 584— 591.

251. Delenge F. Optimal iodine nutrition during pregnancy, lactation and the neonatal period // Int. J. Endocrinol. Metab. — 2004. — № 2. — P. 1—12.

252. Demajo M., Josanov-Stankov O., Dujic I. Content of microelements in the rat pineal gland at different ages and the effects of selenium supplementation // Arch. Biol. Sci (Beelgrad). — 2006. — Vol. 58, № 2. — P. 68—75.

253. Denritic plasticity in the adult rat following middle cerebral artery occlusion and Nogo-a neutralization / C. M. Papadopoulos et al. // Cereb. Cortex. — 2006. — Vol. 16 (4). — P. 529—536.

254. Dietz R. M., Shuttleworth C. W., Weiss J. H. Zn2+ influx is critical for some forms of spreading depression in brain dices // J. of Neuroscience. — 2008. — Vol. 28, № 32. — P. 8014—8024.

255. Ding D., Moskowitz S. I., Li R. Acidosis induces necrosis and apoptosis of cultured hippocampal neurons // Exp. Neurol. — 2000. — Vol. 162, № 1. — P. 1—12.

256. Distribution of lead in the brain tissues from DNTC patients using synchrotron radiation microbeams / A. Ide-Ektessabi et al. // Nuclear Instruments and Methods Research Section B. — 2005. — Vol. 241, № 1—4. — P. 681—684.

257. Disturbances of magnesium concentrations in various brain areas in Alzheimer's disease / E. Andrasi et al. // Magnes. Res. — 2000. — Vol. 13. — P. 189—196.

258. Dorup I., Skaiaa K., Sorensen K. E. Normal pregnancy is associated with enhanced endothelium-depended flow-mediated vasodilatation // Am. J. Physiol. — 1999. — Vol. 276, № 3, pt. 2. — P. 821—825.

259. Dose finding study of intravenous magnesium sulphate in transient focal cerebral ischemia in rats / T. Westermaier et al. // Acta Neurochim (Wien). — 2005. — Vol. 147. — P. 525—532.

260. Dunaway G. A., Rasten T. P. Physiological implications of the alteration of 6-phosphofructo-1 -kinase isozyme pools during brain development and aging // Brain. Res. — 1998. — Vol. 456, № 2. — P. 310—316.

261. Dworkin M. B., Dworkin-Pastl E. Regulation of carbon flux from amino acids into sugar phosphates in xenopus embryos // Deb. Biol. — 1990. — Vol. 138, № 1. —P. 174—187.

262. Dynamics of activity of monoamine oxidase B and antioxidant defense enzymes in human brain during postnatal ontogeny / I. A. Volchegorskii et al. // Bui. of Experimental Biology and Medicine. — 2006. — Vol. 142, №2, —P. 194—201.

263. Effects of cadmium exposure during pregnancy on trace elements in fetal rat liver and kidney / J.-I. Kuriwaki et al. // Toxicology Letters. — 2005. — Vol. 156, № 3. — P. 369—376.

264. Effects of nitric oxide and carbon monoxide on uterine contractility during human and rat pregnancy / M. Longo et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. — 1999. —Vol. 181, №4. —P. 981—988.

265. Electroiencephalography in infants with periventricular leucomalacia: prognostic features at preterm and term age // E. Biagoni et al. // S. Child. Werolog. — 2000. — Vol. 2. — P. 1—6.

266. Elinder C. G. Biological monitoring of metals. — Geneva : WHO, 1994. — 80 p.

267. Ernst R. K. Molecular cloning, characterization and expression of a novel human neural sphingomyelinase // J. Biol. Chem. — 1999. — Vol. 274 (52). —P. 37407—37412.

268. Exhaled nitric oxide levels in patients with atopic cough and cough variant asthma / M. Fujimura et al. // CHEST. — 2008. — Vol. 134, № 5. P. 990—995.

269. Farina M., Ribeiro M. L., Franchi A. Nitric oxide synthases in pregnant rat uterus // Reproduction. — 2000. — Vol. 121, № 3. — P. 403—407.

270. Fas-induced B cell apoptosis requires an increase in free cytosolic magnesium as an early event / M. M. Chien et al. // J. Biol. Chem. — 1999. — Vol. 274 (11). — P. 7059—7066.

271. Fedrizzi E. Eye-movement disorders and visual-perceptual impairment in diplegic children born preterm: a clinical evaluation // Dev. Med. Child. Neurol. — 1998. — Vol. 40 (10). — P. 682.

272. Ferrer I. Cell death in the normal developing brain, and follow ionizing radiation, methylazoxy methanol acetate, and hypoxemia in the rat // Neuropa-thol. Appl. Neurobiol. — 1996. — Vol. 22. — P. 489—494.

273. Fetal cerebral and peripheral circulatory responses to hypoxia after nitric oxide synthase inhibition / A. P. Harris et al. // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. —2001. —Vol. 281, № 2. —P. 381—390.

274. Frausto da Silva J. J. R., Wiliams R. J. P. The Biological chemistry of the elements (The inorganic chemistry of the life). — London : University of Oxford, 2001. —574 p.

275. Gagnon R. Placental insufficiency and its consequences // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. —2003. —Vol. 110, suppl. 1. —P. 99—107.

276. Geissler C., Powers H. Human Nutrition. — Edinburgh, 2006. — 764 p.

277. Glial-neuronal transfer of arginine and S-nitrosothiols in nitric oxide transmission / K. Q. Do et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. — 2002. — Vol. 962, № 1. —P. 81—92.

278. Glutamate increases glycogen content and reduced glucose utilization in primary astrocyte culture / R. A. Swanson et al. // J. Neurochem. — 1990. — № 54. — P. 490—496.

279. Gold A. B., Herrmann N., Lanctot K. L. Lithium and its neuroprotective and neurotrophic effects: potential treatment for post-ischemic stroke sequelae // Curr. Drug. Targets. — 2011. — Vol. 12 (2). — P. 243—255.

280. Grima G., Benz B., Do K. Q. Glutamate induced release of nitric oxide precurser, arginine, from glial cells // Eur. J. Neurosci. — 1997. — Vol. 248. —P. 2258—2265.

281. Growth and fertility rates in the offspring of pregnant rats treated with L-omega nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME), a nitric oxide inhibitor / A. G. Witlin et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. — 2002. — Vol. 186, № 1. —P. 8993.

282. Haberland C. Clinical neuropathology. — New York : Demos Medical Publishing, LLC, 2007. — 324 p.

283. Hatton G. I. Glial-neuronal interactions in the mammalian brain // Adv. Physiol. Edu. — 2002. — Vol. 26. — P. 225—237.

284. Herrington J. Dominant role of mitochondria in clearance of large Ca++ Loads from rat adrenal chromaffin cells / J. Herrington et al. // Neuron. — 1996, —Vol. 16.—P. 219—228.

285. Hetzel B. S. Iodine and neuropsychological development // International Council for Control of Iodine Deficiency Disorders. — Australia, 2000. — Vol. — 130 (2S suppl.). — P. 493—495.

286. Hohorst H. J. Methoden der enzymatischen analyse. — Berlin, 1970. — Bd. II. —P. 1425—1429.

287. Horn F. Methods of enzymatic analysis. — New York, 1965. — Vol. 7. — P. 878—881.

288. Horning M. S., Blakemore L. J., Trombley P. Q. Endogenous mechanisms of neuroprotection: role of zinc, copper, and carnosin // Brain Res. — 2000. — Vol. 852 (1).—P. 56—61.

289. Hoshino K., Ogawa K., Hishitani T. Successful uses of magnesium sulfate for torsades de pointes in children with long QT syndrome // Pediatr. Int. — 2006. — Vol. 48 (2). — P. 112—117.

290. Hovdenak N. Zinc Sulfate supplementation improves thyroid function in hypozincemic Downchildren // Biol. Trace Elem. Res. — 1999. — №67(3). —P. 257—268.

291. Hyperoxic exposure leads to nitrative stress and ensuing microvascular degeneration and diminished brain mass and function in the immature subject / M. Sirinyan et al. // J. of Cerebral Circulation. — 2006. — Vol. 37, № 11. —P. 2807—2815.

292. Iannello S., Belflore F. Hypomagnesemia. A review of pathophysiological, clinic and therapeutical aspects // Paminerva Med. — 2001. — Vol. 43, №3, —P. 177—209.

293. In vivo regulation of vasomotoricity by nitric oxide and prostanoids during gestation / N. Boujedaini et al. // Eur. J. Pharmacol. — 2001. — Vol. 427, №2. —P. 143—149.

294. Increased gray matter volume in lithium-treated bipolar disorder patients / R. B. Sassi et al. // Neurosci Lett. — 2002. — Vol. 329 (2). — P. 243— 245.

295. Induction of metallothionein 1 by phenolic antioxidants requires metal-activated transcription factor 1 (MTF-1) and zinc / Y. Bi et al. // Biochem. J. — 2004. — № 380, Pt. 3. — P. 695—703.

296. Induction of nitric oxide / A. G. Estevez et al. // Science. — 1999. — № 286. — P. 2498—2500.

297. Inhibitory effect of a brain derived peptide preparation on the Ca2+-depended protease, calpain / R. Wronski et al. // J. Neural. Transm. — 2000, —Vol. 107. —P. 145—157.

298. Intrauterine growth restriction and pregnancy outcome / L. Driul et al. // Minerva Gynecol. — 2008. — Vol. 60, № 5. — P. 231—238.

299. Intraventricular ascorbic acid administration decreases hypoxic-ischemic brain injury in newborn rats / S. Miura et al. // Brain. Res. — 2006. — Vol. 1095, № 1. —P. 159—166.

300. Investigation of the optimum conditions for measurement of human lactate dehydrogenase activity / T. Hirano et al. // Jap. J. Clin. Chem. — 1987. — Vol. 16, №4.—P. 179—187.

301. Investigation of extracellular L-citrulline concentration in the striatum during alcohol with drawal in rats / M. Z. Goren et al. // Neurochem. Res. — 2002, —Vol. 26, № 12. —P. 1327—1333.

302. Jones C. T., Rolph T. P. Metabolism during fetal life: a functional assessment of metabolic development // Phisyol. Rev. — 1995. — Vol. 65, №2. —P. 357—430.

303. Klatzo I. Pathophysiologic aspects of cerebral ischemia // The nervous system. — New York : Raven Press, 1995. — Vol. 29, № 2. — P. 223—229.

304. Kraus M. M., Prast H. Involvement of nitric oxide, cyclic GMP and phosphodiesterase 5 in excitatory amino acid and GABA release in the nucleus accumbens evoked by activation of the hippocampal fimbria // Neurosci. — 2002, — Vol. 112, №2, —P. 331—343.

305. Kristian T., Siesjo B. K. Calcium in ischemic cell death // Stroke. — 1998. — Vol. 29. —P. 705—718.

306. Kudrin A. Trace elements and Molecular Mechanism of Programmed Cell Death // International Science Publishing. — Cambrige, 2002. — 520 p.

307. Kudrin A., Gromova O. Two Faces of the Zinc in the Brain // Trace Elements and Electrolytes. — 2003. — № 3. — P. 16—19.

308. Lamprecht W., Trautschoild I. Metods of enzymatic analysis. — New York; London, 1965. —P. 543—551.

309. Lech T., Garlicka A. Value of magnesium and calcium inserum and hair of children and adolescents with neurological disease // Przegl. Lek. — 2000. — Vol. 57 (7—8). — P. 378—381.

310. Leviton A., Paneth N., Reuss M. Maternal Infection, Fetal Inflammatory Response, and Brain Damage in Very Low Birth Weight Infants // Pediat. Res. — 1999. — Vol. 45. — P. 1—5.

311. Li W. Mg2+ antagonism of Ni(2+) — induced in microtubule assembly and cellular thiol homeostasis // Toxicol. Appl. Pharmacol. — 1996. — Vol. 136(1). —P. 101—111.

312. Linder M. Biochemistry of copper. — New York; London : Plenum Press, 1991. —524 p.

313. Lipton P. Ischemic Cell Death in Brain Neurons // Physiological Reviews. — 1999. — Vol. 79, № 4. — P. 1431—1568.

314. Lithium-induced gray matter volume increase as a neural correlate of treatment response in bipolar disorder: a longitudinal brain imaging study / I. K. Lyoo et al. // Neuropsychopharmacol. — 2010. — Vol. 35, № 8. — P. 1743—1750.

315. Liu Y., Zhang J. Recent development in NMDA receptors // Chin. Med. J. Engi. —2000, —Vol. 113, № 10. —P. 948—956.

316. Lynn E. G., Happily Vaz. R., AU-Yeung K. K. Magnesium tanshi-noate B (MTB) inhibits low density lipoprotein oxidation // Life Sci. — 2001. — Vol. 68, № 8. — P. 903—912.

317. Ma C., Zhuang Y., Xu Y. The effects of inhibition of nitric oxide synthesis on vasoregulatory factors in pregnant rats // Zhongua Fu Chan Ke Za Zhi. — 1999. — Vol. 34, № 9. — P. 521—524.

318. Magistretti P. J. Neuron-glia metabolic couplinge and plasticity // J. Exper. Biol. — 2006. — Vol. 209. — P. 2304—2311.

319. Maiese K., Swiriduk M., Ten-Broeke M. Cellular mechanisms of protection by metabotropic glutamate receptors during anoxia and nitric oxide toxicity // J. Neurochem. — 1996. — Vol. 66. — P. 2419—2428.

320. Maiese K., Swiriduk M., Ten-Broeke M. Mechanism of autoregulation NMDA receptors by phosphorilation pathway // J. Neutochem. — 1996. — Vol. 66. —P. 2419—2428.

321. Manganese intoxication decreases the expression of manganoproteins in the rat basal ganglia: an immunohistochemical study / M. Morello et al. // Brain Research Bulletin. — 2007. — Vol. 74, № 6. — P. 406—415.

322. Martinelli G. P. T., Friedrich V. L., Holstein G. R. L-citrulline immunostain-ing identifies nitric oxide production sites within neurons // Neuroscience. — 2002. — Vol. 114, № 1.—P. 111—122.

323. Maternal magnesium sulfate and the development of neonatal periventricular leucomalacia and intraventricular hemorrhage / J. C. Canterino et al. // Ob-sted-Gynecol. — 1999. — Vol. 93 (3). — P. 396—402.

324. Mcllwain H., Mcllwain H., Rodnight R. Practical neurochemistry. — London, 1962.—P. 189—210.

325. Minura Y., Furuya K. Mechanisms of adaptation to hypoxia in energy metabolism in rats //J. Am. Coll. Surg. — 1995. — Vol. 181, №5.—P. 437— 443.

326. Miranda-Vizuete A., Damdimopoulos A. E., Spyrou G. The mitochondrial thioredoxin system // Antioxidants & Redox Signaling. — 2000. — № 2. — P. 801—810.

327. Mishra O. P., Delivoria-Paradopoulus M. NMDA receptor and neonatal hypoxic brain injury // Res. Rev. — 2001. — Vol. 7, № 4. — P. 249—253.

328. Modulation of mitochondrial function by endogenous Zn2+ pools / S. L. Sensi et al. // Proceedings of the National Academy of the Sciences of he United States of America. — 2003. — May 13, № 100 (10). — P. 6157— 6162.

329. Moncada S. Nitric oxide and cell // Respir. Physiol, and Patol. Verk Kon. Acad. Genelsk Belg. — 2000, — Vol. 62, №3. —P. 171—179.

330. Neerhof M. G., Thaete L. G. The fetal response to chronic placental insufficiency // Semin. Perinatol. — 2008. — Vol. 32. — P. 201—205.

331. Neural mitochondrial Ca2+ capacity impairment precedes the onset of motor symptoms in G93A Cu/Zn — superoxide dismutase mutant mice / M. Damiano et al. // J. of Neurochemistry. — 2006. — Vol. 96, № 5. — P. 1349— 1361.

332. Neurodegeneration with brain iron accumulation, type 1 is characterized by alpha-, beta- and gamma-synuclein neuropathology / J. E. Galvin et al. // Am. J. Pathol. — 2000. — Vol. 157 (2). — P. 361—368.

333. Neuroprotection from NMDA excitotoxic lesion by Cu/Zn superoxide dismutase gene delivery to the postnatal rat brain by a modular protein vector / H. Peluffo et al. // BMC Neuroscience. — 2006. — Vol. 7. — P. 1471 — 2202.

334. Neuroprotective actions of lithium / R. Hashimoto et al. // Seishin Shinkei-gaku Zasshi. — 2003. — Vol. 105 (1). — P. 81—86.

335. Neuroprotective effect of magnesium on lipid peroxidation and axonal functions after experimental spinal cord injury / T. Suzer et al. // Spinal Cord.— 1999. — Vol. 37. — P. 480^84.

336. Neurotrophic effects of Cerebrolysin in animal models of excitotoxicity / I. Veinbergis et al. // J. Neural. Transm. Suppl. — 2005. — № 59. — P. 273—280.

337. Nitric Oxide for treatment of threatened preterm labor / B. Leszczynska-Gorzelak et al. // Int. J. Gynaecol. Ostet. — 2001. — Vol. 73, № 3. — P. 201—206.

338. Nitric oxide synthases in the human cervix at term pregnancy and effects of nitric oxide on cervical smooth muscle contractility / E. Ekerhovd et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. — 2000. — Vol. 183, № 3. — P. 610—616.

339. Nonoxidative glucose consumption during focal physiological neural activity / P. T. Fox et al. // Science. — 1998. — № 241. — P. 462^164.

340. Nyakas C., Buwalda B., Luiten P. D. M. Hypoxia and brain development // Prog. Neurobiol. — 1996. —Vol. 49(1). —P. 1—51.

341. Onichenko L. S., Gaikova O. N., Ianishevskii S. N. Changes in the focus of experimental ischemic stroke under the influence of neuroprotective drugs // Morfologiia. — 2006. — Vol. 13, № 6. — P. 40—46.

342. Ottersen O. P. Exitatory amino acids neurotransmitters: anatomical system // Exitatory amino acid antagonist / ed. B. S. Medrum. — Oxford : Blackwell Scientific, 1991. —P. 14—38.

343. Phenna S., Chad J. E. Nuclear calcium gradients in cultured rat cells // J. Physiol. (Lond.). — 1995, —Vol. 486. —P. 149—161.

344. Prenatal hypoxia-ischemia alters expression and activity of nitric oxide synthase in the young rats brain and causes learning deficits / Z. Cai et al. // Brain Res. Bull. — 1999. — Vol. 49, № 5. — P. 359—365.

345. Primary sensory and forebrain motor systems in the newborn brain are preferentially damaged by hypoxia-ischemia / L. J. Martin et al. // J. Comp. Neurol. — 1997. — Vol. 377. — P. 262—285.

346. Protective effects of chronic lithium treatment against spatial memory retention deficits induced by the protein kinase All inhibitor H-89 in rats / M. Sharifzadeh et al. // Pharmacology. — 2007. — Vol. 80 (2—3). — P. 158—165.

347. Reduced nitric oxide is involved in prenatal ischemia-reduced tolerance to neonatal hypoxic-ischemic brain injury in rats / F. Xiao et al. // Neuroscience Letters. — 2000. — Vol. 285, № 1. — P. 5—8.

348. Rho J., Shanker R. The pharmacologic basis antiepileptic drug action // Epilepsia. — 1999. — Vol. 40. — P. 1471—1483.

349. Richardson B. S., Bocking A. D. Metabolic and circulatory adaptation to chronic hupoxia in the fetus // Comp. Biochem. Physiol, a Mol. Integr. Physiol. — 1998.—Vol. 119, №3. —P. 717—723.

350. Richardson B. S., Patrick J. E., Abduljabbar H. Cerebral oxidative metabolism in the fetal lamb: relationship to electrocortical state // Am. J. Obstetr. Gynecol. — 1995. —Vol. 153. — P. 426—431.

351. Role of chelating agents for prevention, intervention and treatment of exposures to toxic metals Environ / R. A. Goyer et al. // Health Perspect. — 2005. —Vol. 103. —P. 1048—1052.

352. Sameshima H., Ikenoue T. Long-term magnesium sulfate treatment as protection against hypoxic-ischemic brain injury in seven-day-old rats // Am. J. Obstet. Gynecol. — 2001. — Vol. 184 (2). — P. 185—190.

353. Sengupta T., Dutta C., Dasgupta J. Developmental changes of TCA cycle enzymes in human fetal brain // Indian J. Biochem. Biophys. — 1998. — Vol. 25. —P. 404—407.

354. Serum chromium does not predict glucose tolerance in late pregnancy / E. J. Gunton et al. // Am. J. Clinic. Nutr. — 2001. — Vol. 72. — P. 99— 104.

355. Sher E. S., Xu X. M., Adams P. M. The effects of thyroid hormone level and action in developing brain: are these targets for the actions of polychlorinat-ed biphenyls and dioxins? // Toxicol. Ind. Health. — 1998. — Vol. 14, № 1—2. — P. 121—158.

356. Silveria R. C., Procianoy R. S. Interleukin-6 and tumor necrosis factor-alpha levels in plasma and cerebrospinal fluid of term newborn infants with hy-poxic-ischemic encephalopathy // Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. — 2003. — Vol. 88. — P. 501—504.

357. Skalny A., Vyatchanina E. Zn protects derangement of alcoholized rat brain macro- and trace elements (TE) content // Cell. Biol. Toxicol. — 2008. — Vol. 24, suppl. 1. — P. 68—69.

358. Sladek S. M., Magness R. R., Conrad K. P. Nitric oxide and pregnancy // Am. J. Physiol. — 1997. — Vol. 272. — P. 441—463.

359. Smythies J. Hypothesis «Redox-regulation» ionotropic NMDA receptors // Eur. J. Pharmacol. — 1999. — Vol. 370. — P. 1—7.

360. Stefanidou M., Maravelias C., Spiliopoulou C. Zinc: A multipurpose trace element // Archives of Toxicology. — 2006. — Vol. 80, № 1. — P. 1—9.

361. Synchrotron-based infrared and X-ray imaging shows focalized accumulation of Cu and Zn co-localized with B-amyloid deposits in Alzheimer's disease / L. M. Miller et al. // J. of Structural Biology. — 2006. — Vol. 155, № 1, —P. 30—37.

362. Takeda A., Ishiwatari S., Okada S. Manganese uptake into rat brain during development and aging // J. Neurosci. Res. — 1999. — Vol. 56. — P. 93—98.

363. Tan Y., Zhang W., Lu B. Treatment of intrauterine growth retardation with magnesium sulfate // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. — 2000. — Vol. 35(11). —P. 664—666.

364. Tarohda T., Yamamoto M., Amamo R. Regional distribution of manganese, iron, copper, and zinc in the rat brain during development // Anal, and Bioanal. Chem. — 2004. — Vol. 380, № 2. — P. 240—246.

365. Thaete L. G, Neerhof M. G, Silver R. K. Differential effects of endothelin A and B receptor antagonism on fetal growth in normal and nitric oxide-deficient rats // J. Soc. Gynecol. Investig. — 2001. — Vol. 8, № 1. — P. 18—23.

366. The effect of nitroglycerin on the gravid uretus in sheep and rabbits / P. B. Langevin et al. // Anesth. Analg. — 2000. — Vol. 90, № 2. — P. 337—343.

367. The effect of preconditioning on the Cu, Zn superoxide dismutase expression and enzyme activity in rat brain at the early period after severe hypobar-ic hypoxia / S. A. Stroev et al. // Neuroscience Research. — 2005. — Vol. 53, № 1.—P. 39—47.

368. The influence of lipogenic and lipolytic conditions of the pentose pathway dehydrogenases in rat-kidney-cortex / J. Peragon et al. // Arch. Int. Physiol, and Biochim. — 1990. — Vol. 98, № 5. — P. 283—290.

369. The selenium status of women with a hystory of reccurent miscarriage / A. S. Al-Kunani et al. // B. J. O. G. — 2001. — Vol. 108. — P. 1094— 1097.

370. Tiboni G. M., Giampietro F. Inhibition of nitric oxide synthesis causes preterm delivery in the mouse // Hum. Reprod. — 2000. — Vol. 15, № 8. — P. 1838—1842.

371. Torshin I. Yu. Bioinformatics in the post—genomic era: physiology and medicine: Nova Biomedical Books. — New York, 2007. — P. 1—20.

372. Trombley P. Q., Horning M. S. Zinc and cooper influence excitability of rat olfactory bulb neurons by multiple mechanisms // J. Neurophysiol. — 2001. —№86, —P. 1652—1660.

373. Trotti D., Danbolt R., Volterra A. Glutamate transporters are oxidant-vulnerable: a molecular link between oxidative and excitotoxic neurodegeneration // Trends in Pharmacological Sciences. — 1998. -— Vol. 19. — P. 328—334.

374. Umbach J. A. Lithium enhances secretion from large dense-core vesicles in nerve growth factor-differentiated PC 12 cells // Neurochem. — 2005. — Vol. 94, №5.—P. 1306—1314.

375. Uzbekov M. G., Bubnova N. I., Kulikova G. V. Effect of prenatal lead exposure on superoxide dismutase activity in the brain and liver of rat fetuses // Bui. of Experimental Biology and Medicine. — 2007. — Vol. 144, № 6. — P. 783—785

376. Walker D. On the presence of two soluble glucose-phosphorylation enzymes in adult liver and the development of one these after birth // Biochim. Bio-phys. Acta. — 1963. — Vol. 77. — P. 209.

377. Wiesinger H. Arginine metabolism and synthesis of nitric oxide in the nervous system // Prog. Neurobiol. — 2001. — Vol. 64. — P. 365—391.

378. Xu K., Dong M., Zhou J. Changes of maternal and umbilical in patients with the intrauterine growth retardation // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. — 2000. — Vol. 35, № 12. — P. 715—716.

379. Ying X., Chen Y., Ding J. The relation between placental pathologic changes and serum nitric oxide levels of maternal and umbilical blood in intrauterine growth retardation // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. — 1999. — Vol. 34, №4. —P. 217—219.

380. Young W. Review of lithium effects on brain and blood // Cell. Transplant. — 2009. — Vol. 18 (9). — P. 951—975.

381. Zhang L., Xiao D., Bouslough D. B. Long-term high-altitude hypoxia increases plasma nitrate levels in pregnant ewes and their fetuses // Am. J. Obstet. Gynecol. — 1998.—Vol. 179, №6, Pt. 1. —P. 1594—1598.

382. Zheng W., Ren S., Graziano J. H. Manganese inhibits mitochondrial aco-nitase: a mechanism of manganese neurotoxicity // Brain Res. — 2001. — Vol. 799.—P. 334—342.

383. Zhu Y., Carvey P. M., Ling Z. Age-related changes in glutathione and gluta-thione-related enzymes in rat brain // Brain. Res. — 2006. — Vol. 1090, № 1. —P. 35—44.

384. Zinc modulation of glycine receptors in acutel isolated rat CA3 neurons / E.-J. Park et al. // Life Sciences. — 2008. — Vol. 83, № 5—6. — P. 149— 154.

385. Zinc-histidine complex protects cultured cortical neurons against oxidative stress-induced damage / R. J. Williams et al. // Neuroscience Letters. — 2004. —Vol. 371, №2—3. —P. 106—110.

386. Zink homeostasis in the hippocampus of zinc-deficient young adults rats / A. Takeda et al. // Neurochem. Int. — 2001. — № 46. — P. 221—225.