Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические маркеры в селекции и разведении карповых и осетровых рыб

ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Биохимические маркеры в селекции и разведении карповых и осетровых рыб"

На правах рукописи

Демкина Наталья Викторовна

БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ В СЕЛЕКЦИИ И РАЗВЕДЕНИИ КАРПОВЫХ И ОСЕТРОВЫХ РЫБ

03.00.10 - ихтиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Рыбное 2005

Работа выполнена в лаборатории генетики и селекции Всероссийского научно-исследовательского института пресноводного рыбного хозяйства (ВНИИПРХ)

Официальные оппоненты:

доктор сельскохозяйственных наук Привезенцев Юрий Алексеевич доктор биологических наук Волчков Юрий Андреевич ^

доктор биологических наук Никоноров Сергей Иванович

Ведущая организация: Московское отделение Федерального селекционно-генетического центра

Защита диссертации состоится 15 марта 2005 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 307.003.01 при Федеральном Государственном унитарном предприятии «Всероссийский научно-исследовательский институт пресноводного рыбного хозяйства» по адресу: 141821, Московская область, Дмитровский район, п. Рыбное.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИПРХ. Автореферат разослан «/&» февраля 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Задача увеличения производства и расширения ассортимента рыбной продукции требует выведения новых пород традиционных объектов аквакультуры, таких, как карп, и доместикации "диких" видов, в том числе создания племенных стад осетровых рыб, зачастую уже не воспроизводящихся в природе. В Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию (2003 г.) внесено 12 пород и типов карпа, 6 пород форели, 3 породы толстолобиков, 1 - тиляпии, 3 породы бестера. В качестве породы "одомашненная форма"", что возможно лишь для объектов рыбоводства, представлены белый и черный амур, белуга, веслонос, пелядь, стерлядь, сибирский и русский осетры. В описании каждой породы представлена генетическая характеристика этой группы рыб.

Особое значение в настоящее время приобретает создание коллекционных стад осетровых рыб и сохранение в них всего имеющегося спектра генетической изменчивости. Обеднение генофонда может привести к исчезновению охраняемых видов. С другой стороны, генофонды природных популяций могут стать источником ценного материала для выведения пород одомашненных осетровых и товарного разведения. Обеднение генофондов приводит к утере желательных свойств культурных пород рыб, снижению приспособленности в диких популяциях.

Появление многочисленных работ по изучению биохимического полиморфизма объектов аквакультуры продиктовано необходимостью оценить генетический потенциал существующих групп (Кирпичников, 1987). Использование электрофоретических вариантов полиморфных белков в качестве генетических маркеров позволяет идентифицировать отдельные популяции, маркировать стада, отводки или потомства индивидуальных скрещиваний, выявлять родственные связи между группами, следить за изменениями, происходящими в процессе селекции, эксплуатации, акклиматизации или доместикации различных групп рыб.

Цель исследования: изучить возможности использования продуктов белковых и ферментных локусов в качестве биохимических маркеров в селекции и разведении карповых и осетровых рыб.

В задачи исследования входило следующее:

1) выбор биохимических маркеров для проведения генетического мониторинга в племенных группах карпа и сазана (Cyprinus carpio Linnaeus, 1758);

2) изучение генотипического и аллельного разнообразия различных породных групп карпа (московского чешуйчатого и разбросанного, ангелинского чешуйчатого и разбросанного, селекционных групп среднерусского карпа, немецкого, тремлянского, лахвинского карпов);

3) использование данных биохимического тестирования для выявления засорения в маркированных отводках карпа и сазана;

4) анализ изменений в генетической структуре селекционных групп карпа в процессе селекции;

5) изучение влияния процесса криконсервации спермы рыб на полноту воспроизведения генетической гетерогенности групп;

6) оценка возможности использования полиморфных и видоспеци-фичных мономорфных белковых и ферментных систем у белого (Ну-pophtalmichthys molitrix (Valenciennes, 1844) и пестрого (Aristichthys nobilis (Richardson, 1846) толстолобиков;

7) поиск биохимических маркеров у веслоноса (Polyodon spathula (Walbaum, 1792) и описание биохимического полиморфизма его стад;

8) выявление биохимических маркеров сибирского осетра (Acipenser baerii Brandt, 1869), пригодных для генетического мониторинга племенных стад и изучение характера их наследования; ■

9) выявление биохимических маркеров стерляди (Asipenser ruthenus Linnaeus, 1758), пригодных для генетического мониторинга племенных стад и изучение характера их наследования.

Научная новизна. Проанализированы и обобщены многолетние данные по частотам аллелей полиморфных белковых локу-

сов в различных селекционных группах карпа. Выявлены изменения генетической структуры как внутри селекционных поколений среднерусского карпа, московских и ангелинских чешуйчатых и разбросанных карпов, так и в процессе селекции каждой из этих пород. Проведено сравнение изменений генотипической структуры в различных породных группах карпа и поиск связи этих изменений с условиями проведения отбора. Показано, что снижение генетической изменчивости в селекционных группах среднерусского карпа обусловлено, в первую очередь, генетическим дрейфом при малой эффективной численности маточных стад.

Продемонстрирована возможность использования биохимических маркеров для выявления "засорения" племенного материала карпа, белого и пестрого толстолобиков.

Впервые описан полиморфизм систем, пригодных для прижизненного тестирования у веслоноса: сывороточных альбуминов и эс-тераз. Отмечены различия по частотам генотипов и аллелей, вызванные генетическим дрейфом, в группах веслоноса, разводимого в разных хозяйствах Краснодарского края. Показано, что у производителей веслоноса НПЦ "Биос" сохранились все известные аллели двух полиморфных локусов, то есть поддерживается весь спектр генетической изменчивости.

Описаны полиморфные ферментные системы сибирского осетра и стерляди. Впервые проведен гибридологический анализ наследования этих систем. Предложен набор полиморфных белковых локу-сов, которые можно использовать в работах по генетическому мониторингу заводских стад сибирского осетра и стерляди с применением прижизненного тестирования рыб весом более 100 г.

Проанализированы различия в требованиях к проведению генетического мониторинга в природных популяциях рыб, при селекционных работах и работах по разведению и доместикации новых видов. Определены критерии выбора биохимических маркеров. Проведен гибридологический анализ наследования аллелей полиморфных локусов у карпа, белого и пестрого толстолобика, сибирского осетра и стерляди.

Практическая значимость. В течение 27 лет (с 1976 по 2004 год) осуществлен контроль за "чистотой" маркированных племенных отводок среднерусского карпа с помощью прижизненного тестирования этих групп по биохимическим маркерам. На ЦЭБ ВНИИПРХ "Якоть" заложена генетически маркированная (генами чешуйного покрова S и п, а также нулевым аллелем локуса Му-3) линия амурского сазана. Обоснована необходимость большой эффективной численности племенных групп рыб для поддержания исходной генетической изменчивости групп и сохранения редких аллелей (использование нескольких десятков производителей в каждом селекционном поколении). Получены данные по отсутствию сцепления между моно-морфными видоспецифичными локусами, используемыми в качестве биохимических маркеров у белого и пестрого толстолобиков, что повышает возможность определения межвидовых гибридов второго поколения до 99%. С помощью биохимических маркеров выявлены межвидовые гибриды между белым и пестрым толстолобиком в отделении "Белоозерское" рыбхоза "Селец" Республики Беларусь. На основании результатов диссертационной работы разработаны и опубликованы рекомендации "Использование биохимических маркеров в генетических исследованиях и селекции растительноядных рыб" и методические указания по использованию биохимических маркеров для оценки генетического разнообразия стад карпа, сибирского осетра и стад стерляди (2001).

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации были представлены на коллоквиумах лаборатории генетики и селекции (1977-2001 гг.), на отчетных сессиях научно-методического и ученого советов ВНИИПРХ (1995-2004 гг.), на Всесоюзной конференции молодых ученых "Научно-технический прогресс и проблемы рыбного хозяйства" (Москва, 1978), на 2-м Всесоюзном совещании по биохимической генетике, кариологическому полиморфизму и мутагенезу у рыб (Ленинград, 1978), на 2-м и 3-м Всесоюзных совещаниях по генетике, селекции и гибридизации рыб (Ростов-на-Дону, 1981 и Тарту, 1986), на VI съезде Всесоюзного общества генетиков и селекционеров (Минск, 1992), на 3-й международной ихтиогематологиче-ской конференции (Lytomysl, 1993), на научно-методической международной конференции "Современная аквакультура проблемы обра-

зования и освоения новейших технологий" (Рыбное, 1996), на 1 Конгрессе ихтиологов России (Астрахань, 1997), на международном совещании по проблемам рыбоводства (Минск, 1998), на 1-й научно-практической конференции "Проблемы современного товарного осетроводства" (Астрахань, 1999), на 2-м международном симпозиуме "Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре (Адлер, 1999), на IX Всероссийской конференции "Экологическая физиология и биохимия рыб" (Ярославль, 2000), на международной научно-практической конференции "Аквакультура начала XXI века" (Рыбное, 2002).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 39 печатных работ, в том числе 4 методических разработки и 1 авторское свидетельство.

Структура и объем диссертации. Рукопись диссертации состоит из введения, 10 глав, выводов и списка литературы. Работа изложена на стр. машинописного текста, содержит 36 таблиц, 2?- Ри_ сунка. В списке литературы источников, из них на русском языке.

Глава 1. Использование биохимических маркеров в разведении и популяционных исследованиях рыб (обзор литературы).

В качестве биохимических маркеров разных видов рыб обычно используют электрофоретические варианты белков, обусловленные разными аллелями одних и тех же генов. То есть, исследуют белковые продукты полиморфных локусов. При определении принадлежности к тому или иному виду (или при выявлении межвидовых гибридов) в качестве маркеров могут быть использованы мономорфные видоспецифичные белки и ферменты. Электрофоретический анализ основан на том, что различные белки отличаются друг от друга молекулярным весом, структурой, формой молекул, величиной поверхностного электростатического заряда. В связи с этим разные белки перемещаются в однородном электрическом поле с различной скоростью, т.е. обладают неодинаковой подвижностью (Маурер, 1971).

Гистохимическое окрашивание блоков гелей, проводимое после окончания электрофореза, позволяет получить электрофореграммы в виде наборов полос (фракций), соответствующих различным белкам (Корочкин и др., 1977). При этом выявленные белки могут быть мо-номорфными (не подверженными индивидуальной изменчивости) или полиморфными. Генетический характер наблюдаемого полиморфизма может быть подтвержден только проведением гибридологического анализа (постановкой индивидуальных скрещиваний), поскольку кроме генетической обусловленности, наблюдаемая индивидуальная изменчивость может быть возрастной, сезонной, а также относящейся к случаям конформационных (ненаследственных) изменений или к псевдополиморфизму (например, вызванному протеолизом) (Безруков, 1987).

Высокая гетерозиготность полиплоидного организма обеспечивает ему большую экологическую пластичность, стабильность онтогенетического развития. Нужно, вероятно, говорить о границах оптимальной гетерозиготности (Алтухов, 1989; Алтухов и др., 1991; Духарев и др., 1987). Средний уровень гетерозиготности популяции по всем локусам обычно не превышает 0,3 независимо от величины эффективной численности (Кимура, 1985).

Имеются определенные трудности в интерпретации электрофо-ретических картин у полиплоидных видов. Они связаны с дупликацией локусов, кодирующих тот или иной фермент, вследствие увеличения плоидности. Однако, в процессе последующей эволюции часть дуплицированных локусов подвергалась вторичной диплоидизации. В результате в геноме некоторых рыб встречаются как дуплициро-ванные, так и недуплицированные локусы. Отмечено, что более примитивные виды (например, осетровые) имеют тенденцию сохранять больше дуплицированных локусов, в то время как виды, эволюцион-но более молодые (карповые),' обнаруживают диплоидизацию - потерю экспрессии многих дуплицированных генов, то есть вместо продуктов четырех генов мы видим активные продукты двух генов. Предполагается, что она обусловлена фиксацией нулевых аллелей как структурных, так и регуляторных генов.

Перспективы применения данных биохимической генетики в аквакультуре различны. Это:

- выявление межвидовых гибридов (Бурлаков и др., 1973; Паюсова, Целикова, 1983; Паюсова, Шубникова, 1986; Семенова, Слынь-ко,1986, 1988; Черфас, Трувеллер, 1978; Vuorinen et al.,1988 и др.);

- установление филогенетических связей отдельных видов и популяций рыб (Коваль, 1988; Осинов, 1990а; Callegarini, 1978; Ferguson, 1989; Renaud et al., 1986 и др.);

- изучение внутривидовой изменчивости по частотам аллелей и генотипов (Алтухов и др., 1983,1987; Бойко, 1997; Гагальчий, 1986 а,б; Кирпичников, 1978; Кирпичников, Муске,1981; Ненашев, Тихомирова, 1987; Паюсова, Целикова, 1986; Салменкова и др., 1989; Beardmore, Ward, 1978; Mitton, Koehn, 1975 и др.);

- изучение антропогенного влияния на промысловые стада рыб; влияние промысла и искусственного воспроизводства (Андрияше-ва, 1987; Никоноров и др., 1989; Рябова, 1984; Чихачев, Цветнен-ко,1984; Ferguson, 1989; Koljonen, 1989; Sugama et al., 1988; Taggart, Ferguson, 1986,);

- генетический мониторинг изменений, происходящих в процессе селекции, акклиматизации, доместикации (Андрияшева, Локшина, 1987; Бружинскас, Жалюнене, 1978; Галаган, 1973; Гросс и др., 1989а; Локшина, Андрияшева, 1981; Паюсова, Целикова, 1986; Щер-бенок, Зонова, 1986; Slechtovä et. al., 1998);

- генетическое маркирование стад и линий(Катасонов и др., 1980; Смишек, 1978; Щербенок, 1986; Brody et al., 1976; Kalal, 1977; Moav etal., 1976; Sraisek, 1973; Valenta et al., 1985);

- поиск корреляций генотипов полиморфных локусов с хозяйственно-ценными признаками. Подобные исследования проведены на карпе (Балахнин, Сол оматина, 1970), форели (Reinitz, 19776), белого амура (Безруков, 1987в), фундулюса (Powers et al., 1979), кижуча ^с Inture, Jonson, 1977), нерки (Варнавская, Дубынин, 1987), севрюги (Чихачев, 1985), пеляди (Андрияшева, 1989) и многих других видов. Установлена положительная корреляция между уровнем гетерозиготно-сти и плодовитостью, длиной тела, скоростью роста, жизнеспособностью, отрицательная корреляция между гетерозиготностью и вариа-

бильностью морфологических признаков (Leary et.al., 1983; Локши-на и др., 1987; Картавцев и др., 1990; Калнин, Калнина, 1991; Пак,1991).

Биохимический полиморфизм карповых рыб изучен достаточно хорошо. Наибольшее число работ посвящено описанию полиморфных белковых локусов у карпа ((Балахнин, Галаган, 1973; Кирпичников, 1987; Кишш, 1979; Паавер, 1983; Пак, 1991; Сапрыкин 19796, 1980а, 1985а; Щербенок, 1986; Brody et а1., 1979; Creyssel et а1., 1964,1966; Valenta et а1., 1976 и многие другие), сазана (Паавер, 1979,1983), белого и пестрого толстолобиков (Ненашев, Рыбаков, 1976,1978; Паюсова и др., 1979,1988а; Чихачев и др., 1980; Безруков, Бердышев, 1983 и т.д), серебряного карася (Бельченко, Глазко, 1985; Чернова и др., 1987), буффало (Куринный, 1984; Паюсова и др., 1989).

Изучению популяционной генетики лососевых, сиговых и ха-риусовых рыб посвящено большое количество многолетних исследований (Алтухов, Варнавская, 1983; Алтухов и др., 1987, 1997; Анд-рияшева и др., 1983; Гагальчий, 1986; Голованова и др., 1997а, 2000; Животовский и др., 1987; Макоедов,1999; Осинов, 1988; Павлов, 2000; Рябова1977; Салменкова и др., 1989; Семенова, Слынько, 1987, 1988 и др.).

Отечественные работы по генетическому мониторингу осетровых относятся в большинстве своем к исследованию естественных популяций на основе изменчивости сывороточных белков или гемо-глобинов (Гераскин, 1986; Кузьмин, Лукьяненко, 1982, 1984; Лукья-ненко, Лукьяненко, 1988; Лукьяненко и др., 1969, 1971, 2002 и др.), полиморфные ферментные локусы изучены у севрюги (Рябова и др., 1984; Серов, Никоноров, 1988), русского осетра (Цветненко и др., 1987; Кузьмин, Кузьмина, 1987) и ряда других (Кузьмин, 1991).

Возможность использования биохимических маркеров для идентификации различных групп рыб или установления степени их близости обсуждалась не раз (Богданов и др., 1989; Глазко, 1985). В целях идентификации возможно и применение системного анализа изменчивости фенотипов (Тюрин и др., 2002). Новым этапом стало применение ДНК-технологий в идентификации генотипов, выявлении

генетических маркеров популяций и видов (Барминцев, 2000; Голованова и др., 2001).

Необходимо отметить, что при изучении биохимического полиморфизма природных популяций рыб для сбора проб обычно используют выборки достаточно большой численности, безвозвратно изымаемые из обследуемого стада. Исследуют обычно ферменты, экспрессирующиеся в различных органах и тканях (мышцы, печень, сердце, хрусталик глаза). Кровь, как правило, не используют, так как это значительно затрудняет сбор материала. При проведении генетического мониторинга племенных стад объектов пресноводной аква-культуры ввиду относительно небольшой численности и высокой ценности племенных рыб обычно приходится ограничиваться прижизненным сбором проб, что требует использования в исследованиях, в первую очередь, полиморфных систем, продукты которых можно выявлять в крови (сыворотке и эритроцитах), а также в мышцах. В связи с этим перечни полиморфных систем, используемых в популя-ционных исследованиях или при организации генетического мониторинга процессов разведения, селекции, доместикации могут значительно отличться.

Глава 2. Материал и методы исследований.

Работу проводили в лаборатории генетики и селекции ВНИИПРХ в 1976-2004 гг.

Материалом для изучения послужили карпы различных породных групп, белый и пестрый толстолобики, веслонос, сибирский осетр и стерлядь. Отводки среднерусского карпа, а также немецкий карп, амурский сазан, потомки японских цветных карпов были исследованы на центрально-экспериментальной базе (ЦЭБ) ВНИИПРХ "Якоть", начиная с 1976 г. В 1980 г. сюда же из рыбхоза "Пара" Рязанской обл. личинками были завезены парские карпы, их дальнейшая селекция была направлена на создание внутрипородных типов "Московский чешуйчатый" и "Московский разбросанный". Сбор проб сыворотки крови ангелинских карпов осуществляли на Анге-линском опытном участке ВНИИПРХ Краснодарского края. Местом изучения белорусских карпов были выбраны рыбхозы "Лахва" и

"Тремля", где проводили направленную селекционно-племенную работу с этими группами (Таразевич, Илясов, 1992). Белый и пестрый толстолобики были исследованы на рыборазводном заводе "Горячий Ключ" Краснодарского края и в отделении "Белоозерское" рыбхоза "Селец" Республики Беларусь. Изученные пробы тканей веслоноса были собраны в хозяйстве "Горячий Ключ", специализированном рыборазводном заводе растительноядных рыб (СРЗРР) Краснодарского края, а также в хозяйстве "Биос" Астраханской обл. Сибирского осетра и стерлядь исследовали на Конаковском заводе товарного островодства (КЗТО), где созданы коллекционные стада сибирского осетра ленской, байкальской и обской популяций, различных популяций стерляди. Общий объем собранного и изученного материала представлен в таблице 1.

Соотношение количества исследованных рыб и взятых проб демонстрирует проведение прижизненного мониторинга селекционного материала. Исследовали в основном пробы крови, реже - пробы белых скелетных мышц. Сбор проб сыворотки крови и мышц осуществляли, используя типовые методики (Лиманский и др., 1986, Паюсова и др., 1988), перевозили пробы в термосах или сосудах Дюара со льдом, хранили при температуре от -4 до -18 С0.

Анализ полиморфных белковых локусов карпа, сазана, весло-носа, проводили методом вертикального диск-электрофореза в поли-акриламидном геле (ПААГ) по прописям Дэвиса (1964) с некоторыми модификациями. Пользовались камерой конструкции К.А. Трувелле-ра и Г.Н.Нефедова (1974). Кроме того, при анализе экстрактов тканей сибирского осетра и стерляди использовали электрофорез в ПААГе по методу Пикока (Peacock et al., 1965), часть ферментов выявляли горизонтальным электрофорезом в блоках гидролизованного крахмала (Smithies, 1955) в непрерывной (Clayton, Tretiak, 1972) или прерывистой (Ridgeway et al., 1970) буферных системах.

Окраску на белки и ферменты проводили, используя типовые методики (Салменкова, Малинина, 1976). Гели отмывали и хранили в 7% уксусной кислоте.

Критериями выбора биохимических маркеров для генетического мониторинга племенных групп рыб для нас являлись (по степени важности):

1) возможность прижизненного сбора проб;

2) отсутствие индивидуальной сезонной и возрастной изменчивости по данному локусу;3) наличие данных гибридологического анализа о характере наследования продуктов данного локуса;

4) возможность одновременного получения электрофоретических спектров продуктов двух и более полиморфных локусов в параллельных пластинах геля;

Таблица 1. - Объем изученного материала.

Название группы (вида) рыб Годы исследования Количество изученных

поколений селекции генераций рыб, шт. проб, шт. ЭФ спектров, шт.

Среднерусский карп 19762003 6 30 2631 3423 7087

Московский (парский) карп 19862003 5 12 990 1271 3799

Ангелинские (краснодарские) карпы 19762003 7 20 1721 2593 4826

Другие группы карпа 19771999 2 25 2300 2517 4127

Амурский сазан 19762003 5 603 996 1872

Белый толстолобик 19881998 — 4 176 203 284

Пестрый толстолобик 19881998 9 309 566 1389

Веслонос 1990-96, 2000 9 398 398 796

Сибирский осетр 19972004 - 6 636 964 4692

Стерлядь 19982004 - 5 601 832 5607

Итого 19762004 20 125 10375 13673 34479

5) отсутствие псевдополиморфизма (возникает при широкой субстратной специфичности);

6) невысокая стоимость реактивов для выявления ферментных и белковых продуктов полиморфных локусов;

7) относительная простота идентификации генотипов.

Полиморфные и мономорфные белковые и ферментные системы сокращенно обозначали прописными буквами. Указывая их локусы, буквосочетание выделяли курсивом, первая буква в таком случае была прописной, остальные - строчными.

Список обозначений основных исследованных белковых и ферментных систем и локусов:

ALB, Alb - альбумин;

АРН, Aph - щелочная фосфатаза;

GPI, Gpi-1,2 - глюкозо-6-фосфатизомераза;

EST, Est-1, Est-2-неспецифическая эстераза;

LDH, Zdh-лактатдегидрогеназа;

MDH, Mdh -В1, Mdh -В2 - малатдегидрогеназа;

MY, Му-3 - миогены;

PGDH, Pgdh-1,2 - 6-фосфоглюконатдегидрогеназа;

PGM, Pgm-2,3 - фосфоглюкомутаза;

PRALB, Pralb -преальбумины;

SOD, Sod - супероксиддисмутаза;

TF, Tf- трансферрин.

Аллели полиморфных локусов обозначали буквами латинского алфавита (карп, веслонос) или цифрами (сибирский осетр, стерлядь) и размещали надстрочным индексом рядом с названием аллеля (например, Tf, Pgm-4). Генотипы (фенотипы) обозначали буквами или цифрами - АА, Аа, 12,22.

При оценке распределения частот генотипов и аллелей в селекционных и племенных группах рыб не проводили сравнения с теоретически ожидаемым в соответствии с формулой Харди-Вайнберга

распределением поскольку изучаемые группы не соответствовали ни одному из введенных авторами ограничений - не имели большой численности, у них отсутствовала панмиксия, всегда подвергались действию отбора и т.л.

Статистическую обработку материалов, построение графиков и диаграмм проводили с использованием программы Microcoft Excel, 2000.

Глава 3. Биохимический полиморфизм стад карпа и сазана.

Для оценки генетической изменчивости стад карпа, по нашему мнению, достаточно использовать даже относительно небольшое число высокополиморфных локусов (от 4 до 8 аллелей на локус, 18 степеней свободы для предложенного набора из 4 локусов).

Приведено описание биохимического полиморфизма по четырем полиморфным локусам - трансферрина (Tf), двух локусов эстера-зы (Est-1, Est-2) и миогенов (Му-3) различных селекционных (среднерусские, московские, ангелинские, тремлянские, лахвинские) и коллекционных (немецкие, гибриды с японскими) групп карпа, а также амурского сазана, выращенного на ЦЭБ "Якоть".

Исключительно высока генетическая изменчивость карпов и сазанов по локусу трансферрина. Максимальное количество - девять аллелей ^обнаружено у амурского сазана. Основными из них являются у, £ а, Ъ, с, d, е, а также аллели с промежуточной подвижностью J, </ , обозначаемые иногда как а и с\ По некоторым данным, с учетом промежуточных вариантов, число выделяемых фракций трансферрина еще больше (до 20) (Сапрыкин, 1985; Щербенок, Галанов, 1985), однако гибридологический анализ наследования был проведен не для всех электрофоретических вариантов с промежуточной подвижностью. У культурных карпов, прошедших длительный отбор и не скрещивавшихся с амурским сазаном (немецкие, галицийские, карпы фресинет), встречаются только три аллеля Tf- а, Ъ, с (рис. 1).

В сыворотке крови и мышцах карпа активен локус Est-1. В настоящее время выявлено 4 аллеля локуса Est-1 - а, Ъ, с, Z (Трувеллер и

др., 1974; Щеглова, Илясов, 1979; Демкина, 1993) (рис.2). В мышцах проявляется и другой локус эстераз с меньшей электрофоретиче-

§ё

V

тшг ЩШ* ЩШЬ Ргва!

+

1 2 3 4 5 6 <23456

СКОЙ

Рис. 1. Электрофореграмма (А) и схема (Б) трансферринов карпа. Генотипы: 1 - СС, 2 - АО, 3 - АС, 4 - СС (видно наложение альбуми-

А Б

■мками» * * . ■* * ЕвМ

12 3 12 3

нового пятна на зону трансферрина), 5 - ВС, 6 - ВВ.

Рис.2. Электрофореграмма (А) и схема (Б) фракций эстераз: генотипы: £&-/: 1 - АА, 2 - АВ, 3 - СС; Ез1-2: 1 - ВВ, 2 - СО, 3 - СО.

- фракция - продукт гена, ^га - фракция - "тень".

подвижностью (Еъ1-2), в котором найдено 4 аллеля, в том числе и нулевой аллель (Московкин и др., 1973; Черфас, Трувеллер, 1978; Паа-вер, 1983) (рис.2). Эстераза-! карпа (Еяг-Г) является термо нестабильной системой и даже непродолжительное хранение приводит к образованию минорных фракций - "теней" в результате разрушения молекул фермента.

Миогены (МуЗ). Существование двухаллельной системы (Му-3А и Му-3') в третьей зоне миогенов впервые было показано группой сотрудников МГУ (Трувеллер и др., 1973). Доминантный аллель

Му-3 обуславливает образование белковой фракции в зоне Му-III, а рецессивный аллель Му-З является нулевым - то есть белковая фракция отсутствует (рис.3).

Рис. 3. Электрофореграмма (А) и схема (Б) фракции миогенов. Генотипы (Му-Ш): 1 - АА, 2 - Аа, 3 - аа (гомозигота по нулевому аллелю).

Гетерозигота Аа в зоне Му-Ш отличается от гомозиготы АА меньшей интенсивностью фракции. Причиной частого использования системы миогенов стала значительная географическая изменчивость сазана по частотам аллелей этого локуса.

Обычно для оценки уровня генетической изменчивости применяют три критерия: долю полиморфных генов (Р), среднюю гете-розиготность особи, рассчитанную на один локус (н), и среднее число аллелей на локус (А). Использовать долю полиморфных локусов как характеристику генетической изменчивости локальных стад карпа - прием едва ли эффективный, так как список полиморфных локу-сов - характеристика вида в целом и вряд ли будет сильно меняться внутри его. Среднюю гетерозиготность для этих же целей можно применять только с учетом возраста исследованных рыб (см. гл.5). Использование числа аллелей высокополиморфных локусов как характеристики генетической гетерогенности более показателен.

Среднерусский карп. Работы по созданию породы среднерусского карпа начаты в 1963 г. (Головинская, 1969) на принципах синтетической селекции. Отводки среднерусского карпа являются потомками четырех карповых групп: украинских (У), нивских (Н), курских (К) и загорских (3). Создание отводок, в каждой из которых сочеталась бы наследственность трех или четырех групп (3-НК, ЗУ-НК и др.) имело целью повысить генетическую гетерогенность исходного материала.

Первоначально в отводках среднерусского карпа было выявлено 3 основных аллеля трансферрина: а, Ь, с. У загорских карпов встречался и аллель й. У одного карпа ЗУ-НУ был найден Т/. Во всех отводках преобладал аллель Т/, вторым по частоте встречаемости был Т/. Особое место занимает созданная позднее группа Нем/У -HKD, отличавшаяся в первом поколении селекции высоким уровнем генетической изменчивости (6 аллелей Т/ и 4 аллеля Е$1-1), что обусловлено ее происхождением, а именно, наличием наследственности немецких, украинских, нивских, курских и японских карпов.

Не во всех отводках среднерусского карпа были отмечены все 4 аллеля локуса Е$1-1 ('аллель z встречался только у загорских карпов и в группе Нем/ У-НК^.

Парский карп. Порода парского карпа создана на базе рыбхоза "Пара" Рязанской обл. и состоит из двух отводок: М и УМ, первая из которых несет 50%, а вторая - 25% наследственности амурского сазана (Головинская, Боброва, 1982; Боброва, 1986). На ЦЭБ "Якоть"

парский карп впервые был завезен заводскими личинками в 1980 г. В 1989 г. была зарегистрирована порода "Парский карп", а в 2002 г. статус селекционного достижения получил созданный на основе отводки М тип "Московский чешуйчатый карп" (для I-II зон рыбоводства), в 2004 г. подана заявка на селекционное достижение "Московский разбросанный карп" (создан на основе группы УМ).

Парские (московские) карпы обладают наиболее высокой генетической изменчивостью по полиморфным локусам трансферрина (7)0, эстераз (Est-1 и Est-2) и миогенов (Му-3) среди трех изученных пород карпа селекции ВНИИПРХ. У парских карпов было выявлено 8 аллелей трансферрина (а, а\ b, с, с\ d, Z, у), характер наследования которых подтвержден данными гибридологического анализа. Аллели Tfa, Tfc, Tfy, Tfz обнаружены не во всех исследованных генерациях, что обусловоено «эффектом основателя». У московских карпов отмечены все известные аллели локусов Est-1, Est-2, My-3.

Ангелинские карпы. В рыбхозе "Ангелинский" Краснодарского края под руководством В.С.Кирпичникова и Ю.И.Илясова (Кирпичников и др. 1987) селекционеры вели работу, направленную на повышение устойчивости карпа к краснухе. В 1999 г. были зарегистрированы породы "Ангелинский чешуйчатый карп" и "Ангелинский зеркальный карп". На первых этапах селекции ангелинских карпов локус Тf в отводках М (ангелинские зеркальные) и Р (ропшинские) был представлен аллелями а, Ь, с, с в отводке УР (ангелинские чешуйчатые) встречались также единичные особи, несущие аллель Tf. В каждой из групп найдены все 4 аллеля локусов Est-1, Est-2 и оба аллеля Му-3. Вместе с тем, различия по распределению частот аллелей и особенно частот генотипов этих локусов были довольно значительны. У местных и ропшинских карпов преобладал медленный аллель сывороточных эстераз (Est-lb) и только у украинско-ропшйнских -быстрый аллель(Est-f).

Белорусские карпы. У белорусских карпов из рыбхозов "Лахва" и "Тремля присутствовало по семь аллелей: а, Ъ, с, с d, z и у и по 18 генотипов Т£ Это свидетельствует как о высокой степени генетической гетерогенности по этому локусу, так и о доле наследственности амурского сазана, что подтверждается и данными о происхождении

этих групп карпа (Таразевич, Илясов,1992). В локусе Est-1 часто встречаются аллели а и Ь, редко - аллель с. Результаты исследования локуса миогенов показывают повышенную частоту встречаемости Му-3 аа у лахвинских карпов, несколько ниже она у тремлянских, что также говорит о присутствии наследственности амурского сазана.

Коллекция ЦЭБ ВНИИПРХ "Якоть". В разное время на центрально-экспериментальной базе ВНИИПРХ содержались и содержатся группы карпа и сазана, используемые в процессе селекции этой породы. Это немецкие карпы, амурский сазан, карпы-хромисты (гибриды с японскими карпами) и контрольная популяция (Ко). Получены характеристики биохимического полиморфизма всех этих групп. Показано, что наибольшее число аллелей трансферрина встречается в группах азиатского происхождения (амурский сазан, гибриды с японскими карпами), наименьшее - у немецкого карпа, прошедшего длительную селекцию. Было выявлено засорение группы Ко, что сделало невозможным ее использование в качестве контроля при селекции среднерусского карпа.

Общее количество аллелей Tf, выявленное нами в различных группах карпа, девять:у, г, а, а Ь, с с, d, e. Аллели Tfa c d, е, z у встречались только у амурских сазанов или у карпов, несущих наследственность амурского сазана, что соответствует литературным данным.

Проведен гибридологический анализ наследования генотипа Tf АА ранее обозначавшегося как Т/Ж. Показано, что он состоит из двух независимо наследуемых фракций с близкой подвижностью, идентификация которых облегчается при увеличении длины пробега. Носители аллеля Т/* имеют пониженную относительную приспособленность. В разные годы проведен гибридологический анализ характера наследования других аллелей трансферрина (у, г, а„ Ь, с, d,)и эстеразы-1 (аЬ, с, г) у карпа.

Глава 4. Генетическое маркирование групп карпа и сазана.

Данные о биохимическом полиморфизме среднерусского карпа были использованы для генетического маркирования отводок. В ка-

честве "генетических меток" были выбраны наиболее часто встречающиеся типы трансферринов. Уже при получении первого поколе-нияселекции (БО в 1974 г., отводка ЗУ-НУ была маркирована генотипом Т/АА, а отводка ЗУ-НК - Т/СС. В 1978 г. все производители 3-НК, использованные для получения второго поколения селекции (Бг), были подобраны по генотипу Т/ АА. Между собой отводки с биохимическим маркером Т/АА различаются типом чешуйного покрова: карпы ЗУ-НУ чешуйчатые, а 3-НК - разбросанные. Карпы ЗУ-НК были представлены разбросанными карпами, а среди загорских в первых поколениях селекции встречались чешуйчатые, линейные, разбросанные и даже голые особи (сейчас - только чешуйчатые). В 1977 г. была предпринята попытка "насыщения" загорской отводки трансферрином с!. С этой цепью отбирали преимущественно производителей первого поколения, несущих аллель что привело к увеличению частоты встречаемости аллеля (с 0,262 в родительской группе до 0,351 у годовиков второго поколения селекции). У загорских производителей третьего поколения частота достигла 0, 484, что делало технически возможным полное маркирование этой отводки. Однако, целесообразность маркирования типом трансфер-рина, редко встречающимся в природных условиях, вызвала определенные сомнения и не была осуществлена. У производителей загорских карпов пятого поколения селекции частота встречаемости алле-ля Т/ не превышает 0,050.

Для того, чтобы исключить случайное "засорение" племенного материала, среднерусских карпов в каждом поколении селекции тестировали по биохимическим маркерам дважды: сеголетков (или годовиков) и производителей, отобранных для участия в воспроизводстве отводки. Единичные особи с несвойственными для этих отводок генотипами Т/ были обнаружены среди производителей 3-НК в 1984г. и 1988 г., ЗУ-НК - в 1985 г., 1989 г., ЗУ-НУ - в 1976 г. и 1-979 г. По результатам прижизненного тестирования таких производителей выбраковывали из маточного стада. В 1979 г. среди сеголетков ЗУ-НУ и в 1996 г. в группе ЗУ-НК было обнаружено сильное засорение, вызванное, очевидно, попаданием молоди из другого пруда. В связи с этим в 1980 г. было повторно осуществлено воспроизводство отвод-

ки ЗУ-НУ и выращенные сеголетки после проверки на чистоту были использованы для дальнейшей селекции.

Можно отметить, что использование генетического маркирования селекционных отводок среднерусского карпа позволило не только выявлять засорение племенного материала, но в ряде случаев, и определять его источник. Так, сочетание типа трансферрина СС с разбросанным типом чешуйного покрова у особи, обнаруженной среди карпов 3-НК, позволило предположить, что источник засорения -карп из отводки ЗУ-НК. В отводке ЗУ-НК в 1985 г. был обнаружен один самец с генотипом TfAA (скорее всего, 3-НК), и 1989 г. - самец с генотипом TfAD (в этот период такой генотип был характерен только для загорских карпов). В настоящее время аллель Tfна. ЦЭБ «Якоть» встречается только у парских (московских) карпов.

Создана генетически маркированная линия амурского сазана. Амурский сазан был завезен в Подмосковье в 1975 г. и прошел несколько поколений воспроизводства в местных условиях, без проведения отбора. К середине 90-х г. в группе сазана изредка стали появляться особи с иными вариантами чешуйного покрова, что свидетельствовало о попадании в стадо сазано-карповых гибридов. Для того, чтобы восстановить генетическую чистоту имеющегося племенного стада амурского сазана и обеспечить возможность ее надежного контроля в дальнейшем, в 1996-1997 гг. заложена генетически маркированная линия амурского сазана (АСМ), гомозиготная по двум маркерным системам: генам чешуйного покрова (доминантному ал-лелю S и рецессивному аллелю п) и рецессивному (нулевому) аллелю локуса миогенов Му-З, что свойственно амурскому сазану из естественных водоемов. Использование двойной генетической метки (SSNN, Му-3 аа) дает возможность с высокой степенью надежности контролировать "чистоту" племенного материала, исключая его случайное засорение. Интересно, что в результате маркирования экстерьер рыб и частоты полиморфных аллелей изменились в сторону усиления черт, свойственных амурскому сазану

Глава 5. Изменение генетической структуры групп карпа в процессе селекции.

Изучение биохимического полиморфизма, проводимое на протяжении нескольких десятилетий, продемонстрировало снижение генетической гетерогенности в некоторых селекционных группах карпа (табл. 2).

У среднерусских карпов были исследованы все генерации с 1 по 4 поколений селекции, у парских (московских) и ангелинских карпов - по 1-3 генерации (из 2 - 6) в каждом из поколений селекции. Аллели Т/а, Т/с, Т/у, Т/' были выявлены не во всех исследованных группах парского карпа. Поскольку частота их встречаемости в целом по стаду изначально очень невелика, очевидно, их носителей можно обнаружить не в каждой генерации. У парских (московских) чешуйчатых карпов в последних поколениях селекции не во всех генерациях выявлены "редкие" аллели Т/у и Т/а.

У московских разбросанных карпов не отмечено потери ни одного из существовавших аллелей изученных полиморфных локусов.

Не найдено свидетельств обеднения генофонда и в группах ангелинских карпов. Анализ изменения генетической гетерогенности среднерусских карпов затруднен тем, что ряд отводок маркирован типами трансферрина. Кроме того, исходная гетерогенность большинства отводок среднерусского карпа была ниже, чем у парских и ангелинских карпов. В то же время именно у среднерусских карпов отмечена утрата наибольшего числа известных с начала селекции аллелей (не менее одного аллеля с начальной частотой встречаемости более 0,005 в каждой группе).

К элементарным факторам микроэволюции, которые могут быть причиной снижения генетического разнообразия, следует отнести отбор (естественный или искусственный), генетический дрейф и миграции генов (Кайданов, 1996). Как случаи миграции генов можно воспринимать удаление части особей с нежелательными типами трансферрина при проведении генетического маркирования среднерусского карпа. Однако исчезновение аллелей других локусов Е1-1, Ез^2) происходило не в момент маркирования групп типами трансферрина, а 1-2 поколения спустя.

Следовательно, нельзя признать миграцию генов причиной обеднения генофонда среднерусского карпа. Нами рассмотрены так-

же условия проведения отбора (чем жестче отбор, тем больше могут быть потери разнообразия в группе) и воспроизводства групп (чем меньше эффективная численность популяции, тем сильнее влияние генетического дрейфа и больше изменения частот аллелей, вплоть до их потери или фиксации).

Таблица 2 - Аллели полиморфных белковых локусов,

встречавшиеся в различных селекционных группах карпа

Группа Полиморфные локусы, аллели

Tf Est-1 Est-2 Му-3

а а Ъ с с' d z У а ь с z 0 а Ь с А а

Тарские карпы

Москов. чеш. п г «» П 0 «» «» ® П «» «» «» «» «» П «» П «»

Москов. разб. П 0 «» «» «» «» «» 0 П п «» «» «» «» П «» п «»

Среднерусские карпы

3-НК М 0 m m 0 m 0 0 0 п 0 0 «» «» П г «» П

ЗУ-НК 0 0 0 М 0 0 0 0 «» П 0 0 «» «» П «» «» П

ЗУ-НУ М 0 0 ш ш 0 0 0 п П 0 0 п «» П «» п «»

Загорские п 0 0 П 0 «» 0 0 П п 0 «» п «» П «» п «»

Нем/У-НК° п 0 «» П 0 0 ® 0 «» «» R «» «» «» П «» «» п

Ангелинские карпы

Ангелин. зерк. П 0 «» «» R 0 0 0 п п «» R «» «» П «» «» п

Ангелин. чеш. П 0 «» «» R г 0 0 п «» R 0 «» «» П «» п п

Ропшинские П 0 «» п R 0 0 0 п п R 0 «» «» П «» «» п

Примечание. Обозначения: «»- частота встречаемости данного алле-ля изменяется в различных генерациях и поколениях селекции, но составляет более 0,005; 0- аллель утрачен в процессе селекции; R "редкий" аллель; частота встречаемости менее 0,005; ® - аллель стал "редким" в процессе селекции; г - "редкий" аллель утрачен в процессе селекции; m - аллель утрачен в процессе маркирования; М - аллель является генетической меткой данной группы, 0 - аллель никогда не встречался в данной группе; П- аллель является преобладающим; п -аллель был преобладающим ранее.

Самый напряженный отбор (около 9%) применяли в селекции парских (московских) карпов, несколько ниже (13-16%) была напряженность отбора у ангелинских карпов, гораздо большую часть рыб (18-25%) сохраняли при селекции среднерусских карпов. Следовательно, не жесткость отбора в данном случае определяла уровень снижения генетического разнообразия.

Проявление генетического дрейфа усиливаются при малой эффективной численности популяции. Количество производителей, использованных для воспроизводства в каждом селекционном поколении, было наибольшим у парских карпов, коэффициент инбридинга (Б) составил 5,18% за 9 поколений селекции у московских чешуйчатых карпов и 5,22% за 7 поколений у московских разбросанных. У ангелинских чешуйчатых и зеркальных карпов коэффициент инбридинга составлял, соответственно -11,53% и 12,65%. Наибольшие значения коэффициента инбридинга отмечены у среднерусских карпов -от 18,43 до 25,52% за 4 поколения селекции.

Таким образом, можно сделать вывод, что основной причиной снижения генетической гетерогенности селекционных групп явилось не проведение жесткого отбора, а малая эффективная численность популяций.

Анализ динамики частот генотипов у среднерусских карпов показывает тенденцию увеличения доли гетерозигот по локусам Т/ (при отсутствии маркирования типом трансферрина) и Ш-1 у производителей каждого следующего селекционного поколения. В качестве примера приведены данные по загорскому карпу, поскольку в этой группе не проведено маркирование типом трансферрина (рис. 4) и у карпов ЗУ-ИГУ (рис.5).

Поколения селекции

Рис. 4. Доля гетерозигот по локусу Т[в селекционных поколениях загорского карпа.

Рис. 5. Доля гетерозигот по локусу Est-1 в селекционных поколениях карпов отводки ЗУ-НУ.

Обращает на себя внимание тот факт, что у рыб возрастом до года доля гетерозигот по локусам Tf и Est-1 повышается в последующих поколениях селекции повышается, но никогда не превышает этот показатель у родителей (обычно ниже, чем у производителей родительского поколения, но выше, чем у сеголетков предыдущего поколения). Сравнение правомерно, поскольку изученные селекцион-

ные поколения среднерусского карпа были представлены одной генерацией, т. е. мы исследовали родительские группы и потомство.

В разных отводках (3, ЗУ-НУ, ЗУ-НК) наблюдалось и увеличение гетерозиготности по локусу Ш-1 от производителей первого поколения селекции к четвертому и пятому. Это связано, видимо, с проведением отбора по массе тела.

В отводке 3-НК в связи с малым количеством производителей, использованных для воспроизводства в результате случайного подбора самцов и самок частота аллеля Ев- у годовиков 3-НК четвертого поколения достигла 0,970, а выросшие производители оказались уже полностью маркированы генотипом Ш-1 ВВ ("эффект основателя") (рис.6).

1 2 3 4 5

Поколения селекции

Рис. 6. Доля гетерозигот по локусу Ш-1 в селекционных поколениях карпов отводки 3-НК.

Тенденцию к увеличению количества гетерозигот в онтогенезе (у двухлетков по сравнению с сеголетками) по локусам Т/ и Ев1-1 наблюдали в двух из трех исследованных генераций белорусского карпа (рис.7), по локусу Т/ - у ангелинских зеркальных карпов старших возраст ных групп по сравнению с младшими (рис.8).

1 2

Выборки

Рис 7. Изменение доли гетерозигот по локусам Т/ и Е$1-1 в генерации 1990 г. у тремлянских чешуйчатых карпов. Возраст особей в выборке 1 - сеголетки, в выборке 2 -двухлетки.

80

40 ■>-■-1 -1

1 2 3 Выборки

Рис 8. Изменение доли гетерозигот по локусу Т/ в генерации 1990 г. ангелинского зеркального карпа. Возраст особей в выборке 1 -годовики, в выборке 2 -двухгодовики, 3- семигодовики.

К сожалению, проследить динамику гетерозигот у ангелинских и парских карпов удавалось редко, т.к. каждое поколение селекции этих пород было представлено несколькими генерациями и получен-

ные данные оказывались несопоставимыми, если исследованные рыбы представляли разные генерации.

Сходные явления наблюдаются при селекции пеляди (Локшина, Андрияшева,1981). На основе изучения последствий массового отбора различной напряженности по массе тела даже разработан метод повышения гетерозиготности популяций сиговых рыб (Андрияшева, 1987). Снижение количества гетерозигот у сеголетков по сравнению с родительской группой, очевидно, является отражением того, что на начальных этапах онтогенеза идет отбор в пользу гомозигот.

Явление балансирующего отбора, когда на ранних стадиях жизненного цикла идет отбор против гетерозигот по ферментным локу-сам, а в более старшем возрасте - в пользу гетерозигот, описано у горбуши (Животовский и др., 1987). Увеличение среднего уровня ге-терозиготности с возрастом обнаружено в популяциях фундулюса (Mitton,Koehn,1975) и камбалы (Beardmore, Ward, 1978). Уменьшение генотипического разнообразия и увеличение гетерозиготности с возрастом в процессе развития и воспроизводства внутривидовых группировок диплоидных организмов охарактеризовано Л.А.Животовским и В.А.Духаревым (1985) как "сжатие" и "расширение" генетической изменчивости.

В процессе селекции значительно снизилось генотипическое разнообразие по локусу Tf во всех группах ангелинских карпов, преобладающим стал быстрый аллель Est-f, частоты встречаемости генотипов и аллелей локусов Tf и Est-1 во всех отводках значительно сблизились, различия между ними стали недостоверными. Все это позволяет сделать вывод о произошедшей консолидации групп по биохимическим маркерам под действием селекции на устойчивость к краснухе.

Глава 6. Исследование генетической гетерогенности потомств карпа,-полученных с использованием дефростированной спермы.

Использование криоконсервации спермы как метода сохранения ценного генетического материала различных видов рыб, требовало решения вопроса о влиянии этого метода на генетическую структуру воспроизводимой популяции. Понижение оплодотворяющей способности спермы после криоконсервации свидетельствует о

происходящем отборе - ведь только часть изначально полученных спермиев участвует в образовании зигот. Хотя очевидно, что основным критерием отбора является криоустойчивость гамет (спермиев), однако нельзя исключить возможность того, что отобранные гаметы будут несколько отличаться от исходной совокупности и по другим качественным характеристикам.

Было проведено сравнение потомств карпа, полученных с применением криоконсервации спермы и без нее по частотам некоторых биохимических маркеров. Первое индивидуальное скрещивание было выполнено в 1993 г. Для получения разнокачественного потомства были отобраны производители разного происхождения: самка загорского карпа и цветной самец (гибрид с японскими карпами). Все полученные сеголетки имели светлый рисунок на голове и спине (ген D), что исключало возможность засорения.

Половину икры оплодотворяли нативной спермой, а вторую половину - спермой того же самца, но подвергнутой кратковременному замораживанию по стандартной методике (Цветкова и др., 2001). Выращивание опытных (полученных с применением дефростирован-ной, т.е. подвергнутой кратковременному замораживанию, а затем размораживанию спермы) и контрольных потомств проводили раздельно в двух повторностях (4-х прудах).

По частотам генотипов и аллелей трансферрина различия между эмпирическими и теоретически ожидаемыми распределениями были достоверны и в опытной (р<0,05) и в контрольной (р<0,01) группах при объединении двух повторностей. Анализ распределения генотипов эстераз в потомствах первого индивидуального скрещивания показал недостоверность различий между эмпирическими и теоретически ожидаемыми данными в опытной и контрольной группах (в среднем по двум повторностям). Вместе с тем, эмпирические распределения частот генотипов Est-1 в опыте и в контроле достоверно отличались друг от друга (р<0,05).

Таким образом, анализ частот генотипов двух полиморфных ло-кусов потомств первого индивидуального скрещивания показал:

- и в контрольном и в опытном потомстве обнаружены все возможные генотипы трансферрина (Т/) и эстеразы сыворотки крови (М-1);

- имеются достоверные различия в распределении частот генотипов трансферринов и эстераз в контрольной и опытной группах.

Однако, отмеченные различия в распределении частот генотипов и аллелей двух полиморфных локусов могли быть как следствием применения дефростированной спермы, так и следствием выращивания контрольных и опытных рыб в разных прудах, хотя и в двух по-вторностях.

Для выяснения этого вопроса в 1994 году было поставлено второе скрещивание. В данном случае использовали производителей карпа, выращенных из икры, осмененной дефростированной спермой. Схема постановки опыта осталась прежней, однако, число проанализированных биохимических маркеров возросло до четырех за счет эстеразы мышц (Ш-2) и миогенов (Му-3). Пробы отбирали у годовиков карпа, что позволило последние полгода жизни содержать помеченных контольных и опытных рыб в одном пруду.

Результаты биохимического тестирования годовиков опытного и контрольного потомств карпа по 4 полиморфным локусам представлены в таблице 3. Генотипы трансферрина у пары производителей, использованной во втором скрещивании - АВ и В2, сывороточных эстераз (Ез1-1) - АВ (у обоих особей), пробы мышц у производителей не брали.

Как видно из таблицы 3, все возможные в потомствах индивидуального скрещивания генотипы наблюдались как у опытных, так и у контрольных годовиков. В распределении генотипов и аллелей полиморфных локусов Т/, Ш-1, и Му-3 достоверных различий между опытной и Контрольной группой не обнаружено.

В тоже время," отличия в распределении генотипов Ез1-2 и Му-3 от ожидаемого и в контроле, и опыте высоко достоверны (р<0,001) и однотипны, что свидетельствует об одинаковом направлении действия естественного отбора в опытной и контрольной группах.

При постановке индивидуальных скрещиваний подтвержден характер наследования аллелей Т/г, Еэи1г Е$и2ь , Ез1-2 0. Выявлен дефицит гетерозигот по локусу Му-3, что делает невозможным расчет частот аллелей на основании частоты встречаемости гомозиготы по нулевому аллелю и использования формулы Харди-Вайнберга.

Таблица 3. Частоты генотипов (%) и аллелей полиморфных белковых локусов в потомствах второго индивидуального скрещивания

Генотипы, аллели Опыт Контроль Теоретически ожидаемое

Локус Т/

Генотипы ВВ 19,6 30,6 25,0

АВ 21,6 22,4 25,0

М 21,6 24,5 25,0

ЪЪ 37,2 22,4 25,0

Аллели Ра 0,216 0,235 0,250

0,490 0,530 0,500

I* 0,294 0,235 0,250

Локус Ез1-1

Генотипы АА 34,7 36,3 25,0

ВВ 29,7 25,5 25,0

АВ 35,6 38,2 50,0

Аллели Ра 0,525 0,554 0,500

0,475 0,446 0,500

Локус £¿¿-2

Генотипы 00 22,0 19,2 25,0

ВВ 58,0 57,7 25,0

ВО 20,0 23,1 50,0

Аллели Р° 0,320 0,308 0,500

РЬ 0,680 0,692 0,500

Локус Му-3

Генотипы АА 56,8 46,2 25,0

АО 21,6 28,8 50,0

• 00 21,6 25,0 25,0

Аллели Ра 0,676 0,606 0,500

0,324 0,394 0,500

Таким образом, результаты анализа биохимических маркеров потомств второго индивидуального скрещивания продемонстрировали отсутствие достоверных различий между группами годовиков карпа, полученными с применением нативной и дефростированной спермы как по набору генотипов, так и по частотам встречаемости генотипов и аллелей четырех исследованных полиморфных локусов, что позволяет сделать вывод об отсутствии влияния криоконсервации на полноту воспроизведения генетического разнообразия у карпа.

Глава 7. Моно- и полиморфные системы в генетическом мониторинге стад белого и пестрого толстолобиков.

Рыбам дальневосточного комплекса и, в первую очередь, растительноядным, принадлежит важная роль в решении проблемы повышения продуктивности прудового, тепловодного и пастбищного рыбоводства. Использование белого и пестрого толстолобиков в качестве объектов поликультуры в нашей стране началось с конца 50-х годов 20 века (Виноградов, Ерохина, 1999). Контроль за поддержанием генетической гетерогенности маточных стад двух видов толстолобиков осуществить трудно в связи с низкими показателями генетической изменчивости, характерными для них (н =0,03, р =0,07).

Полиморфными локусами у белого толстолобика являются эсте-раза мышц, лактатдегидрогеназа печени и трансферрины (сыворотка крови). У пестрого толстолобика не найдено полиморфизма и по ло-кусам эстеразы мышц и лактатдегидрогеназы печени. Изучение распределения фракций трансферрина в потомствах индивидуальных скрещиваний белого и пестрого толстолобиков не позволило раскрыть характер наследования этих белков. Как было показано М. Ва-лентой с соавторами (Уа1еП:а й. а1., 1977; 81гаШ й. а1., 1983) у толстолобиков к молекуле трансферрина присоединяются остатки сиаловой кислоты.

Реальную угрозу созданию высокопродуктивных маточных стад белого и пестрого толстолобиков представляет в настоящее время засорение маточных стад гибридами между этими видами.

Выявление гибридов толстолобиков по морфологическим признакам (окраске тела, строению жаберного аппарата, длине киля и грудных плавников) требуют определенного навыка и позволяют

распознать, как правило, только гибридов первого поколения Возвратные (реципрокные) гибриды (FB) И гибриды второго и последующих поколений обычно сильно уклоняются в сторону одного из родительских видов и остаются неопознанными.

Решение этой проблемы требует таких методов контроля за чистотой маточных стад и ремонта обоих видов, которые позволяют прижизненно идентифицировать отдельных особей по их генотипу. В качестве генетических меток в подобных случаях применяют биохимические маркеры - мономорфные видоспецифичные белки. Исследования электрофоретических спектров ферментов и структурных белков белого и пестрого толстолобиков позволили рекомендовать в

Таблица 4. Результаты проверки стада растительноядных рыб из ОРХ "Селец" на чистоту происхождения по биохимическим маркерам и морфотипу

Вид Возраст, лет, пол п Количество гибридов, выявленных по биохимическим маркерам, шт. Доля гибридов, %

1-му 2-м 3-м 4-м 5-ти 1+мор-фотип 2+мор-фотип

ПТ 1 50 2 ' - - - - - - 4,0

ПТ 3 50 11 1 3 2 9 - - 52,0

ПТ* 3 50 7 - - 1 - - - 16,0

ПТ 4 30 3 - - - - - - 10,0

ПТ 5 26 2 - - - - - - 7,7

ПТ 9 30 3 - - - - - 1 13,3

ПТ ?<? 31 - - - - - - - 0,0

БТ 5 4 1 - - - - - - 50,0

БТ $<? 20 - - - - - - - 0,0

Гибриды $<? 2 - - - - - 2 - 100,0

Гибриды 96 1 1 100,0

*Примечание: пестрые толстолобики, завезенные из Одессы

качестве биохимических маркеров для идентификации гибридов между белым и пестрым толстолобиками преальбумины (Pralb), мио-гены (My-IVи My-V), супероксиддисмутазу (Sod) и щелочную фос-фатазу (Aph) (Паюсова, Целикова, 1983; Паюсоваидр., 1988). При этом гибрид»! первого поколения (Fj) можно выявить в 100% случаев, а вероятность определения гибридов F2 и возвратных гибридов FB была оценена как 50% (Паюсова, Целикова, 1983).

Проведенные в 1998 г. работы по генетической экспертизе племенных стад пестрого и белого толстолобиков из ОРХ "Селец" (таблица 4) позволили определить, что племенной материал засорен,

в основном, не гибридами первого поколения,, a F2 и FB. Кроме того, было продемонстрировано отсутствие сцепления между используемыми биохимическими маркерами, т.к. в изученных группах рыб отмечали особей, чье гибридное происхождение было выявлено по спектрам лишь одного из мономорфных локусов (Pralb, или Sod, или My-V, или My-IV). Это повышает вероятность выявления гибридов F2 в стадах исходных видов до 99%.

Глава 8. Гетерогенность стад веслоноса в России.

Веслонос - единственный представитель отряда осетрообразных, питающийся планктоном. В настоящее время разработана технология искусственного разведения веслоноса и его выращивания в прудах в условиях Краснодарского края (Мельченков, Виноградов, 1991). Исследований биохимического полиморфизма веслоноса в нашей стране до 1990 года не проводилось. Работы иностранных авторов на эту тему немногочисленны. В наиболее информативной работе американских исследователей (Carlson et al., 1982) описано 15 белковых систем, кодируемых 35-ю локусами. Уровень генетической изменчивости у велоноса оказался низким, большинство локусов (33 из 35 или 94%) мономорфны. Полиморфизм обнаружен лишь у креатинки-назы глаза (Ск-В) и фосфоглюкомутазы мышечной ткани (Pgm-1). Однако, судя по приведенным авторами частотам аллелей, локус Pgm-1 тоже практически мономорфен. У всех исследованных особей веслоноса из пяти рек системы Миссисипи отмечен лишь медлен-

ный аллель локуса Pgm-1 и только у рыб из реки Алабама был об-р$доадйн>йнцв«рьш1яялв^е (шнвстовррэрнановднднцв^е).

Достаточно полно изучен американскими авторами субъединичный состав лактатдегидрогеназы (LDH) веслоноса. Так же, как и у американского осетра Scaphirhynchus albus, у веслоноса отмечено три субъединицы LDH - A4, В4 (активны в большинстве тканей) и С4 (наиболее активна в почках) (Horowitz, Whitt, 1972; Markert et ab, 1975; Fisher et al., 1980).

Исследование других белковых систем показало, что аспартата-минотрансфераза, алкогольдегидрогеназа, глкжозо-6-

фосфатдегидрогеназа, глюкозофосфоизомераза, малатдегидрогеназа кодируются каждая двумя локусами, эстераза - четырьмя, а суперок-сиддисмутаза - одним. Все локусы мономорфны (Fisher et al., 1980; Carlson et al., 1982).

Следует отметить, что проанализировав 35 локусов из разных тканей (мышцы, печень, почки, сердце, глаза) авторы совершенно не исследовали сыворотку крови. Между тем, хорошо известно, что многие белковые системы сыворотки крови у осетровых рыб, такие как альбумины, трансферрины, преальбумины, эстеразы полиморфны (Алтухов, 1974; Кирпичников, 1979; Лукьяненко и др.; Кузьмин, 1996).

Поэтому основное внимание в нашей работе мы уделили изучению полиморфизма белков сыворотки крови. В 1990-96 гг. были собраны пробы крови разновозрастных особей веслоноса двух стад - из хозяйства "Горячий Ключ" и специализированного рыборазводного завода растительноядных рыб (СРЗРР).

Как видно из таблицы 5, в выборках веслоноса из "Горячего Ключа" преобладающим аллелем является Albb, значения частоты встречаемос-ти каждого из трех аллелей эстеразы близки к 0,3, однако преобладает аллель Est (табл.6). Стадо СРЗРР характеризовалось более высокой частотой встречаемости Alb" и невысокая частота ал-леля Esf (0,187). Доля гетерозиготных генотипов по этому локусу составляла 66,7%, это показывает, что тенденции к гомозиготизации не наблюдалось. Интересно, что по обоим полиморфным локусам доля гетерозигот у производителей веслоноса в стаде СРЗРР была вы-

ше, чем у сеголетков (по локусу Alb - 50,0% у производителей и 43,8% у сеголетков; по локусу Est - соответственно 72,2% и 63,3%).

Таблица 5. Частоты генотипов (%) и аллелей альбумина у веслоноса

из разных хозяйств России

Год сборг проб (возраст, пет) Генотипы Alb п Частоты аллелей

АА вв сс AB ВС АС а Ь с

"Горячий Ключ"

1990(1) 11,0 34,1 3,7 20,7 28,0 2,4 82 0,226 0,585 0,189

1993 (<1) 5,4 27,0 13,5 5,4 32,4 16,2 37 0,162 0,459 0,378

Всего 9,2 31,9 6,7 16,0 29,4 6,7 119 0,206 0,546 0,248

СРЗРР

1995, $(J 11,1 33,3 5,6 27,8 11,1 11,1 18 0,306 0,527 0,167

1995,0+ 28,1 25,0 3,1 28,1 6,3 9,4 32 0,468 0,422 0,110

Всего 22,0 28,0 4,0 28,0 8,0 10,0 50 0,410 0,460 0,130

1996 31,6 5,3 - - 3,8 26,3 19 0,447 0,237 0,316

НПЦ "Биос"

2000, 26(9) 0,0 45,4 0,0 18,2 0,0 36,3 11 0,273 0,545 0,182

2000(1) 80,0 20,0 0,0 0,0 0,0 0,0 5 0,800 0,200 0,0

Всего 25,0 37,5 0,0 12,5 0,0 25,0 16 0,437 0,437 0,125

Снижение количества гетерозигот у сеголетков веслоноса по сравнению с родительской группой, возможно, является проявлением балансирующего отбора.

Результаты изучения биохимического полиморфизма веслоноса свидетельствуют, что несмотря на единое происхождение стад "Горячего Ключа" и СРЗРР, генетический дрейф в этих группах привел к различиям в распределении частот генотипов и аллелей двух полиморфных локусов. Вместе с тем, генетическая гетерогенность поддерживалась на достаточно высоком уровне.

В 2000 г. мы получили небольшое количество (16 шт.) проб сыворотки крови веслоноса из НПЦ "Биос". Маточное стадо в этом хозяйстве состоит из рыб, выращенных из личинок веслоноса, завезен-

ных из рыбхоза "Горячий Ключ". Несмотря на малое количество поступивших для анализа проб, у производителей веслоноса из НПЦ "Биос" отмечены все известные аллели альбумина и эстеразы сыворотки крови (табл. 5, 6), что делает возможным воспроизведение всего спектра генетической изменчивости по данным локусам.

Таблица 6. Частоты генотипов (%) и аллелей сывороточной эстеразы

у веслоноса из разных хозяйств России.

Год сбора проб, (возраст, пет) Генотипы п Частоты аллелей

АА вв сс АВ ВС АС а Ъ с

"Горячий Ключ"

1990(1) 18,3 22,6 22,6 16,1 12,9 7,5 93 0,301 0,371 0,328

1993(<1) 2,7 37,8 8,1 13,5 27,0 1,8 37 0,149 0,581 0,270

Всего 13,8 26,9 18,5 15,4 16,9 8,5 130 0,258 0,431 0,312

1996 0,0 10,0 50,0 0,0 35,0 5,0 20 0,025 0,275 0,700

СРЗРР

1995, 0,0 22,2 5,6 33,3 33,3 5,6 18 0,194 0,555 0,251

1995(<1) 3,3 26,7 6,7 10,0 33,3 20,0 30 0,183 0,483 0,334

Всего 2,1 25,0 6,3 18,7 33,3 14,6 48 0,187 0,510 0,303

1996 0,0 26,3 26,3 10,5 26,3 10,5 19 0,105 0,447 0,447

НПО "Биос"

2000, 0,0 27,3 27,3 9,1 27,3 9,0 И 0,091 0,454 0,454

2000(1) 0,0 80,0 20,0 0,0 0,0 0,0 5 0,100 0,900 0,0

Всего 0,0 43,8 18,7 12,5 18,7 6,2 16 0,094 0,594 0,312

Глава 9. Использование биохимических маркеров для оценки генетического разнообразия стад сибирского осетра.

Современное состояние запасов осетровых России характеризуется катастрофическим положением, связанным с резким уменьшением их численности. В результате антропогенных нагрузок в последние десятилетия резко сократилась численность осетровых рыб в во-

доемах России. 8 из 11 обитающих в России видов осетровых рыб полностью или частично внесены в Красную книгу РФ. Основным, а иногда и единственным, источником формирования и поддержания запасов этих видов является заводское воспроизводство. Важность поддержания генетической гетерогенности формируемых популяций неоднократно подчеркивалась рядом авторов (Баранникова и др., 2000). В состоянии депрессии находятся многие стада сибирского осетра (Рубан, 1998).

Задача поддержания генетического разнообразия при воспроизводстве предполагает наличие хорошей базы данных по генетической изменчивости вида и осуществление мониторинга естественных популяций, маточных и коллекционных стад (Аллендорф, Риман и Ат-тер, 1991). Цель - свести к минимуму влияние инбредной депрессии от близкородственного скрещивания и обеспечить тем самым кратковременную программу выживания и сохранения численности.

Наряду с этим нужна долговременная программа поддержания генетического разнообразия, связанная с созданием многих искусственных популяций одного вида, где сохранялись бы различные сочетания редких аллелей полиморфных локусов.

Особенность генетики сибирского осетра заключается в том, что этот вид является октаплоидным (Васильев, 1985). В результате по-липлоидизации хромосомы и находящиеся в них локусы у предковой формы были дуплицированы. Однако, в процессе последующей эволюции часть дуплицированных локусов подверглась вторичной дип-лоидизации. В результате в геноме сибирского осетра встречаются как дуплицированные, так и недуплицированные локусы.

Методами электрофореза в полиакриламидном и крахмальном геле исследовано 15 ферментных систем, из них пригодными для целей генетического мониторинга оказалось-шесть - фосфоглюкомутаза (PGM), фосфоглюкоизомераза (GPI), 6-фосфоглюконатдегидрогеназа (PGDH), малатдегидрогеназа (MDH), изоцитратдегидрогеназа (ГОН), глицерол-3-фосфатдегидрогеназа (G3PDH), лактатдегидрогеназа (LDH).

Выявлены различия в распределении частот аллелей некоторых полиморфных локусов у сибирского осетра ленской, байкальской и

обской популяций (табл.7) из стада КЗТО (Конаковского завода товарного осетроводства).

Таблица 7. Частоты аллелей полиморфных локусов в заводских стадах сибирского осетра из разных _популяций _

Аллели полиморфных локусов Осетр сибирский байкальский Осетр сибирский ленский, генерации 1999 2003 Осетр сибирский обский

1 2 3 Доля гетерозигот 6-Р%с1-1,2

0,523 0,417 0,481 0,318

0,347 0,524 • 0,250 0,470

0,130 0,059 0,269 0,212

0,589 0,548 0,519 0,575

1 2 Доля гетерозигот

1,0 0,306 0,420

0,0 0,694 0,580

0,0 0,425 0,800

3 4 Доля гетерозигот

1,0 0,741 -

0,0 0,259 -

0,0 0,384 -

1 2 3 Доля гетерозигот Рят-2,3 (1,2)

0,307 0,095 0,033 0,187

0,380 0,900 0,641 0,740

0,313 0,005 0,326 0,073

0,663 0,181 0,521 0,386

1 2 Доля гетерозигот ММ-1,2

0,015 0,186 0,269 -

0,985 0,814 0,730 -

0,663 0,181 0,462 -

1 2 Доля гетерозигот Ш-2,3

- - 0,337

- - 0,663

- - 0,430

Для работ по прижизненному генетическому мониторингу стад сибирского осетра рекомендованы четыре системы - лактатде-гидрогеназа (LDH), малатдегидрогеназа (MDH), фосфоглюкомутаза (PGM) и 6-фосфоглюконатдегидрогеназа (PGDH). Характер наследования этих локусов изучен в потомствах индивидуальных скрещиваний.

Глава 10. Использование биохимических маркеров для оценки генетического разнообразия стад стерляди.

Вопрос о сохранении генофонда стерляди становится жизненно важным для существования этого вида.

Стерлядь является тетраплоидом (Васильев, 1985). Для таких видов тоже имеются известные сложности в интерпретации электро-форетических картин. Отмечено, что более примитивные виды (например, осетровые) имеют тенденцию сохранять больше дуплициро-ванных локусов, в то время как виды, более эволюционировавшие (карповые), обнаруживают диплоидизацию - потерю экспрессии многих дуплицированных генов. Предполагается, что она обусловлена фиксацией нулевых аллелей как структурных, так и регуляторных генов, то есть вместо продуктов четырех генов мы видим активные продукты двух генов. Отсутствие диплоидизации проявляется в виде существования так называемых изолокусов, когда во всех четырех локусах могут быть сегрегированы одни и те же аллели.

Было изучено 15 ферментных систем стерляди: аспартатами-нотрансфераза (ААТ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназа (G-3PDH), лактатдегидрогеназа (LDH), малатдегидрогеназа (MDH), 6-фосфоглюконатдегидрогеназа (PGDH), аконитаза (АСО), малик энзим (ME), алкогольдегидрогеназа (ADH), глюкозо-6-фосфатизомераза (GPI), изоцитратдегидрогеназа (IDH), супероксиддисмутаза (SOD), эстераза (EST), эстераза D (EST-D), фосфоглюкомутаза (PGM), фума-ратдегидрогеназа (FH).

Полиморфными оказались 6-фосфоглюконатдегидрогеназа, ако-нитаза, эстераза, фумараза, фосфоглюкомутаза, глюкозо-6-

фосфатизомераза, глицерол-3-фосфатдегидрогеназа, лактатдегидро-геназа, малатдегидрогеназа, алкогольдегидрогеназа и малик энзим.

Для изучения характера наследования полиморфных систем было поставлено несколько вариантов индивидуальных скрещиваний стерляди. Активность некоторых из изученных систем оказалась очень слабой, характер наследования других расшифровать не удалось, некоторые были активны лишь в мышцах или печени. Нашей основной задачей было выявление генетического полиморфизма ферментов, активных в крови. Три системы, активные в эритроцитах (PGDH, GPI, MDH) могут быть рекомендованы для дальнейшей работы по прижизненному анализу генотипов.

Таблица 8. Частоты аллелей полиморфных локусов у волжской стерляди Конаковского завода

Локусы п-4 ММ-1,2 Ык-4

Аллели 1 2 3 4 1 2 1 2 1 2 3

Частоты аллелей 0,356 0,173 0,375 0,096 0,250 0,750 0,943 0,057 0,802 0,155 0,043

Доля ге-герозигот 0,635 0,227 0,227 0,310

Выводы:

1. Методом электрофореза в полиакриламидном геле исследован биохимический полиморфизм локусов Т/ Еъ1-2 и Му-3 у раз-

ных племенных групп среднерусского, ангелинских и московских (парских) лахвинских, тремлянских, немецких карпов, амурского сазана и гибридов с японским карпом. Наибольшей генетической изменчивостью по изученным локусам обладает амурский сазан, наименьшей - немецкий карп.

2. Генетическое маркирование отводок среднерусского карпа генотипами ^позволяет не только обнаруживать засорение селекционного материала, но в ряде случаев, и определять его источник.

3. Анализ набора аллелей полиморфных локусов Т/Е&1-1 и Му-3 и их частот позволил выявить присутствие наследственности амурского сазана в отводках парского и краснодарского карпа, у белорусских карпов и в группе

4. Анализ динамики частот генотипов Е&1-1 в четырех отводках среднерусского карпа выявил повышение доли гетерозиготных особей в процессе селекции от первого поколения селекции к пятому. Аналогичное увеличение гетерозиготных по локусу Т/генотипов отмечено в селекционных поколениях загорских карпов, не маркированных типом Т/.

5. Отбор по признакам продуктивности у карпа приводит к увеличению в онтогенезе количества особей, гетерозиготных по транс-ферринам и сывороточным эстеразам. У производителей карпа отмечено повышение доли гетерозигот по локусам Т/ и Е&1-1 по сравнению с рыбами младших возрастных групп во всех отводках среднерусского и у московского чешуйчатого карпа. Аналогичная тенденция наблюдается при сравнении сеголетков и двухлетков лахвин-ских и тремлянских карпов, разновозрастных групп ангелинских карпов. По локусам Еъ1-2 и Му-3 подобных изменений не отмечено.

6. В различных генерациях ангелинских, московских и среднерусского карпов выявлено проявление "эффекта основателя". Уменьшение в процессе селекции генетического разнообразия групп зависит

от условий проведения отбора. Основной причиной снижения генетической гетерогенности селекционных групп явилось не проведение жесткого отбора, а малая эффективная численность популяций, то есть небольшое число производителей, используемых для воспроизводства и малое (1-2) количество генераций в каждом селекционном поколении.

7. Жесткий суммарный отбор по двум направлениям (на устойчивость к краснухе и по темпу роста) привел к консолидации неродственных по происхождению породных групп: ангелинских чешуйчатых (УР) и ангелинских зеркальных (М) карпов. Частоты генотипов и аллелей локусов Т/ и ЕМ-1 у карпов, селекционируемых на устойчивость к краснухе (ангелинского чешуйчатого, ангелинского зеркального и ропшинского) в процессе селекции значительно сблизились.

8. Заложена генетически маркированная линия амурского сазана (АСМ), характеризующаяся гомозиготностью всех представителей по двум маркерным системам: генам чешуйного покрова (88пп) и нулевому аллелю локуса миогенов (Му-3 аа). Использование двойной маркерной системы дает возможность с высокой степенью надежности контролировать "чистоту" племенного материала, исключая его случайное засорение. Генетическое маркирование племенного стада привело к сопряженным изменениям других генетических систем. Повысилась встречаемость аллелей Ь и у локуса трансферрина. Несколько изменился экстерьер рыб в сторону усиления черт, свойственных амурскому сазану.

9. Проведен гибридологический анализ характера наследования аллелей сиг локуса Ш-1 и аллелей а, с, у и ъ локуса Т/у карпа, аллелей локусов Рдт-2,3; Pgdh-1,2; Ор1-1 и Ор1-2; ЬйН-4 и ИйНБ-1,2 у сибирского осетра, локусов Pgm-4; Pgdh-1,2; Срг-1,2 и Mdh-3,4 у

стерляди. Карпы, гомо- и гетерозиготные по трансферрину А', обладают пониженной относительной приспособленностью. Как при анализе распределения частот генотипов по локусу Му-3 в выборках из племенных стад карпа, так и при анализе потомств индивидуальных скрещиваний выявляется устойчивый дефицит гетерозигот по локусу Му-3, что делает невозможным расчет частот аллелей на основании

частоты встречаемости гомозиготы по нулевому аллелю и использования формулы Харди-Вайнберга.

10. Распределение генотипов 4-х полиморфных локусов - трансфер-ринов, эстераз мышц, эстераз сыворотки крови и миогенов в потом-ствах карпа, полученных с применением нативной и дефростирован-ной спермы, не отличаются друг от друга, что свидетельствует об отсутствии влияния процесса криоконсервации спермы на полноту воспроизведения генетической разнокачественности групп.

11. Использование спектров пяти мономорфных видоспецифичных белков и ферментов - преальбуминов, миогенов, супероксидцисмута-зы и щелочной фосфатазы позволяет выявить всех гибридов белого и пестрого толстолобиков первого поколения и более 99% межвидовых гибридов второго поколения. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии сцепления между этими локусами.

12. Уровень засорения межвидовыми гибридами стад белого и пестрого толстолобиков ОРХ "Селец" (Республика Беларусь) составляет в целом по хозяйству 17,2 %, что примерно соответствует данным, полученным в различных рыбоводных хозяйствах бывшего СССР. Среди производителей белого и пестрого толстолобиков частота встречаемости гибридов составила всего 5,4 %, что позволяет избавиться от засорения, проведя мечение и прижизненное тестирование производителей.

13. В сыворотке крови веслоноса активны полиморфные локусы альбуминов (3 аллеля) и эстеразы (3 аллеля). Электрофоретический анализ белковых продуктов этих локусов позволяет вести генетический мониторинг изменений в генетической структуре стад веслоноса.

14. У сибирского осетра из 15 исследованных ферментных систем пригодными для целей генетического мониторинга оказалось шесть -фосфоглюкомутаза (PGM), фосфоглюкоизомераза (GPI), 6-фосфоглюконатдегидрогеназа (PGDH), малатдегидрогеназа (MDH), изоцитратдегидрогеназа (ГОН), глицерол-3-фосфатдегидрогеназа (G3PDH), аконитаза (АСО). Для дальнейшей работы по прижизнен-

ному анализу генотипов у сибирского осетра могут быть рекомендованы PGDH, PGM, GPI, MDH.

15. У волжской стерляди выявлен полиморфизм восьми полиморфных ферментных систем из 15 исследованных: эстераз (EST), фума-ратдегидрогеназы (FH), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (G3PDH), глюкозо-6-фосфатизомеразы (GPI), лактатдегидрогеназы (LDH), ма-лат-дегидрогеназы (MDH), малик энзима (ME), 6-фосфоглюко-натдегидрогеназы (PGDH). Три системы, активные в эритроцитах (PGDH, GPI, MDH), могут быть рекомендованы для дальнейшей работы по прижизненному анализу генотипов.

Основные работы по теме диссертации:

1. Щеглова Н.В., Илясов Ю.И. К вопросу об эстеразах у карпа. // В кн.: Биохимическая и популяционная генетика рыб". - Л., 1979. -С.176-180.

2. Катасонов В.Я., Боброва Ю.П., Стояновский И.И., Щеглова Н.В. Состояние работ по селекции среднерусского карпа. // Сб. науч. тр. /Генетика и селекция рыб - М.: ВНИИПРХ, 1980. - Вып.28. - С. 324.

3. Катасонов В.Я., Ильина И.Д., Демкина Н.В., Трувеллер К.А. Использование биохимических маркеров в селекции среднерусского карпа.// Сб. науч. тр. / Генетические исследования, селекция и племенное дело в рыбоводстве - М.: ВНИПРХ, 1986. - Вып.48. - С. 1423.

4. Демкина Н.В., Демкин А.П. Возможность использования биохимических маркеров при двухлинейном разведении карпа в рыб-совхозе "Ставропольский".// Сб. науч. тр. / Генетические исследования, селекция и племенное дело в рыбоводстве. - М.: ВНИПРХ, 1986. -Вып.48. -С. 130-133.

5. Демкина Н.В. Биохимический полиморфизм отводки "М" пар-ского карпа, выращенной в условиях ЦЭБ "Якоть". // Сб. науч. тр. /

Вопросы селекции, генетики и племенного дела в рыбоводстве. -М.:ВНИПРХ, 1989.-Вып.58. -С. 12-16.

6. Демкина Н.В., Катасонов В.Я., Ильина И.Д., Трувеллер К.А. Увеличение гетерозиготности по локусам эстеразы и трансферрина в селекционных поколеиях среднерусского карпа. // Мат-лы VI съезда ВОГИС (Минск, 23-27 ноября 1992 г.). - М., 1992. - С. 51.

7. Демкина Н.В., Катасонов В.Я. Увеличение гетерозиготности в селекционных поколениях среднерусского карпа по локусам сывороточной эстеразы и трансферрина. // Сб. науч. тр. / Вопросы генетического и экологического мониторинга объектов рыбоводства. - М.: ВНИПРХ, 1992. - Вып. 68. -С. 23-29.

8. Демкина Н.В., Таразевич Е.В. Биохимический полиморфизм трансферринов и сывороточных эстераз лахвинского и тремлянского карпов. // Сб. науч. тр. / Вопросы генетического и экологического мониторинга объектов рыбоводства. - М.: ВНИПРХ, 1992. - Вып. 68. -С. 48-55.

9. Демкина Н.В. Биохимический полиморфизм различных породных групп карпа. / Автореферат канд. диссерт. - М.: ВНИИПРХ, 1993.-23 с.

10. Паюсова А.Н., Безруков В.Ф., Целикова Т.Н., Зюзин A.A., Демкина Н.В. Использование биохимических маркеров в генетических исследованиях и селекции растительноядных рыб (Рекомендации).// - М.: ВНИИПРХ, 1993. - 34 с.

11. Dyomkina N.V., Tsvetkova L.I. Investigations of the genetical heterogenety of carp generations reived by using of cryoconcervated sperm.// 3rd Ichtyochaematological Conference, Lytomysl, Czeech Republic, November 30 - December 2. - Lytomysl, 1993. - P. 14.

12. Демкина Н.В., Цветкова Л.И., Шарт Л.А. Генетическая гетерогенность потомств карпа, полученных с применением криоконсер-вированной спермы.// Рыбное хоз-во, сер. Аквакультура: Информ. пакет "Совр. аквакультура". - Вып 1. - М.: ВНИЭРХ, 1997. - С.79-80.

13. Демкина Н.В., Илясов Ю.И. Сертификация племенного материала у рыб: возможности и задачи. // Мат-лы межд. совещ. "Проблемы развития рыбн. Хоз-ва на внутр. водоемах в условиях перехода

на рыночн. отношения" (Минск , 1998). / Белорусское издат. това-щв0ЭКгй'дС^аГ?9898.С, 60Ш64.

14. Демкина Н.В. Снижение генетической изменчивости в селекционных поколениях карпа. // Мат-лы докл. 2 межд. симп. "Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре (Адлер, октябрь 1999). -Краснодар, 1999.-С. 33-34.

15. Мельченков Е.А., Демкина Н.В. Гетерогенность маточных стад веслоноса // Рыбоводство и рыболовство. - 2001, № 1. - С. 7778.

16. Багров A.M., Боброва Ю.П., Катасонов В.Я., Илясов Ю.И., Демкина Н.В. Рыбоводно-биологические особенности породы карпа "Парская" // Докл. Рос. академии с/х наук. - 2001. - № 2, март-апрель. -С. 42-45.

17. Боброва Ю.П., Катасонов В.Я., Демкина Н.В. Зональный тип породы парского карпа: московский чешуйчатый. // Сб. научн. тр. ВНИИПРХ. Вопросы генетики, селекции и племенного дела в рыбоводстве. - Вып. 76.- М.:ВНИРО, 2001- С.36-47.

18. Катасонов В.Я., Поддубная A.B., Дементьев В.Н., Демкина Н.В. Основные итоги селекции среднерусского карпа // Сб. научн. тр. ВНИИПРХ. Вопросы генетики, селекции и племенного дела в рыбоводстве. - Вып. 76. - М.:ВНИРО, 2001. - С. 47-59.

19. Катасонов В.Я., Поддубная A.B., Демкина Н.В. Формирование и рыбоводно-биологическая характеристика генетически маркированной линии амурского сазана (АСМ) // Сб. научн. тр. ВНИИПРХ. Вопросы генетики, селекции и племенного дела в рыбоводстве. -Вып. 76. - М.:ВНИРО, 2001. - С. 59-69.

20. Демкина Н.В. Сравнение различных по происхождению групп карпа по индексам генетического сходства, рассчитанным по частотам фенотипов и аллелей трансферрина и эстеразы // Сб. научн. тр. ВНИИПРХ. Вопросы генетики, селекции и племенного дела в рыбоводстве. - Вып. 76. - М.:ВНИРО, 2001. -С. 69-74.

21. Рябова Г.Д., Политов Д.В., Офицеров М.В., Малюченко О.П., Демкина Н.В., Шарт Л.А., Илясов Ю.И. Прижизненный анализ полиморфных белковых систем стерляди // Сб. научн. тр.

ВНИИПРХЛ Вопросы генетики, селекции и племенного дела в рыбоводстве. - Вып. 76. -М.:ВНИРО. 2001. - С. 95-107.

22. Рябова Г.Д., Политов Д.В., Офицеров М.В., Климонов В.О., Демкина Н.В., Шарт Л.А., Баранова H.A. Использование биохимических маркеров для оценки генетического разнообразия стад сибирского осетра. (Методические указания) // Сб. нормативно-технологической документации по аквакультуре. - М.: ВНИРО, 2001. -С.-106-118.

23. Рябова Г.Д., Политов Д.В., Офицеров М.В., Демкина Н.В., Шарт Л.А. Использование биохимических маркеров для оценки генетического разнообразия стад стерляди. (Методические указания) // Сб. нормативно-технологической документации по аквакультуре. -М.: ВНИРО, 2001.-С. 117-132.

24. Демкина Н.В., Шарт Л.А., Баранова H.A. Использование биохимических маркеров для оценки генетического разнообразия стад карпа. (Методические указания) // Сб. нормативно-технологической документации по аквакультуре.- М.: ВНИРО, 2001. -С. 133-149.

25. Боброва Ю.П., Катасонов В.Я., Демкина Н.В., Лаврухина СИ. Московский чешуйчатый карп. Авторское свид-во № 32383 от 18.02.2002.

26. Демкина Н.В. Использование биохимических маркеров в селекции и разведении объектов пресноводной аквакультуры. // Аква-культура начала XXI века: истоки, состояние, стратегия развития. / Мат-лы междунар. научно-практич. конференции. М.: ВНИРО. 2002. С.154-158.

27. Рябова Г.Д., Демкина Н.В., Баранова H.A., Илясов Ю.И. Исследование генетического полиморфизма сибирского обского осетра. // Актуальные вопросы пресн. Аквакультуры. Сб. научн. трудов. М.: ВНИРО. 2002. С. 117-120.

28. Демкина Н.В. Генетическое маркирование при селекции среднерусского карпа. // Зоотехния. - 2004. - № 6. - С. 12-13.

29. Багров A.M., Боброва Ю.П., Катасонов В.Я., Илясов Ю.И., Демкина Н.В. Рыбоводно-биологические показатели московского раз-

бросанного типа парской породы карпа. // Докл. Рос. академии с/х наук.- 2004.-№4.-С.56-58.

30. Демкина Н.В. Снижение генетического разнообразия племенных групп карпа в процессе селекции.. // Вестник РАСХН. - 2004. -№.-0.70-72.

31. Демкина Н.В. Биохимические маркеры в селекции и разведении объектов пресноводной аквакультуры: опыт ВНИИПРХ. // Рыбное хоз-во. 2004. -№ 6. - С. 47-48.

Отпечатано в полиграфическом агентстве «Литера» Оперативная полиграфия Москва, ул Зорге, д.20 Т/ф 198-70-53 Заказ № 356 Сдано в печать 7 02 2005 г Тираж 140 экз Гарнитура "Times" Объем 2 пл

506

%

/ .

' * »

2 21ППШ ' I /

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Демкина, Наталья Викторовна

Введение.

Глава 1. Использование биохимических маркеров в разведении и популяционных исследованиях рыб (литературный обзор).

1.1. Необходимость проведения генетического мониторинга популяций рыб в современных условиях.

1.2. Теоретические аспекты электрофоретического анализа полиморфизма белков.

1.3. Перспективы применения данных биохимической генетики в аквакультуре.

1.4. Биохимический полиморфизм основных объектов пресноводной аквакультуры.

1.4.1 .Карповые рыбы.:.

1.4.2.Лососевые рыбы.

1.4.3. Осетровые рыбы.

1.5. Поиск корреляций генотипов полиморфных локусов с хозяйственно-ценными признаками.

1.6. Использование биохимических маркеров для идентификации различных групп рыб.

1.7. Особенности изучения биохимического полиморфизма природных и культурных стад рыб.

1.8. Применение ДНК-технологий в идентификации генотипов.

Глава 2. Материал и методы.

Глава 3. Биохимический полиморфизм различных породных групп карпа.

3.1. Полиморфизм групп карпа и сазана по локусам Tf, Est-1, Est-2, Му-3.

3.2. Генетическая гетерогенность племенных групп карпа.

3.2.1. Среднерусский карп.

3.2.2. Коллекция ЦЭБ ВНИИПРХ "Якоть".

3.2.3. Парский карп.

3.2.4.Ангелинские карпы. v# 3.2.5. Белорусские карпы.

Гла^ва 4. Генетическое маркирование групп карпа и сазана.

4.1. Генетические маркеры в селекции среднерусского карпа.

4.2. Генетически маркированная линия амурского сазана (АСМ).

Глава 5. Изменение генетической структуры групп карпа в процессе селекции.

5.1. Сужение спектра генетической изменчивости групп в процессе селекции.

5.2. Связь изменений генетической структуры с условиями отбора.

5.3. Увеличение гетерозиготности по локусам Tf и Est-1 в процессе селекции и в старших возрастных группах карпа.

5.4. Консолидация ангелинских карпов по частотам генотипов 7/и Est-1.A

Глава 6. Генетическая гетерогенность потомств карпа, полученных с использованием дефростированной спермы.

Глава 7. Моно- и полиморфные системы в генетическом мониторинге стад белого и пестрого толстолобиков.

Глава 8. Гетерогенность стад веслоноса в России.

Глава 9. Использование биохимических маркеров для оценки генетического разнообразия стад сибирского осетра.

Глава 10. Прижизненный анализ полиморфных белковых систем стерляди.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические маркеры в селекции и разведении карповых и осетровых рыб"

Аквакультура является одной из важнейших отраслей народного хозяйства, непосредственно связанной с удовлетворением населения продуктами белкового питания. Развитие аквакультуры во многих странах мира идет быстрыми темпами, производство продуктов питания начинает соперничать с добычей в естественных водоемах. До недавнего времени основным поставщиком рыбной и нерыбной пищевой продукции в аквакуль-туре был мировой океан, возможности которого казались неограниченными. Однако, в настоящее время человечество сталкивается с явлениями истощения рыбных и нерыбных морских ресурсов под влиянием антропогенных факторов, многие из которых оказывают необратимое воздействие на океан и внутренние водоемы. Поэтому разведение рыб и других водных животных, выращивание водорослей, особенно ценных в удовлетворении пищевых потребностей человека и потребностей технических производств, становится вопросом сегодняшнего дня. К концу 20-го века аквакультура заняла 4 место в мире по производству мясной продукции (после свиноводства, производства говядины и мяса птицы). Крупнейшими производителями рыбной продукции стали страны Азии и, в первую очередь, Китай (Щелкунов, 2002). В России неоправданно мал сектор производства продукции пресноводной аквакультуры, в годы перестройки пришли в упадок или были ликвидированы многие рыбхозы. Укрепление и развитие отрасли должно быть связано с продолжением научных исследований по следующим направлениям:

1) выбор новых объектов разведения и создание технических устройств для содержания и ухода за ними;

2) создание специализированных кормов и комбикормовой промышленности для аквакультуры;

3) селекционно-генетическое улучшение объектов, создание спектра пород и гибридов, приспособленных к новым условиям обитания и интенсивной эксплуатации;

4) разработка способов и устройств для лечения и профилактитки болезней рыб и других водных организмов.

Культурные породы, кроссы или гибриды создаются путем длительного целенаправленного отбора в ряду поколений. Основные методы селекции - скрещивание и отбор по отдельно взятому признаку или комплексу признаков, заданных селекционной программой. В последние десятилетия селекционная работа в рыбоводстве достигла заметных успехов. В Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию (2003 г.) внесено 12 пород и типов карпа, 6 пород форели, 3 породы толстолобиков, 1 - тиляпии, 3 породы бестера, в качестве породы "одомашненная форма" представлены белый и черный амур, белуга, вес-лонос, пелядь, стерлядь, сибирский и русский осетры. В описании каждой породы должна быть представлена генетическая характеристика этой группы рыб.

Целью настоящей работы было изучение возможностей использования продуктов белковых и ферментных локусов в качестве биохимических маркеров в селекции и разведении карповых и осетровых рыб. В задачи исследования входило следующее:

1) выбор биохимических маркеров для проведения генетического мониторинга в племенных группах карпа и сазана (Cyprinus carpio Linnaeus, 1758);

2) изучение генотипического и аллельного разнообразия различных породных групп карпа (парского, московского чешуйчатого и разбросанного, ангелинского чешуйчатого и разбросанного, селекционных групп среднерусского карпа, немецкого, тремлянского, лахвинского карпа) и амурского сазана;

3) использование данных биохимического тестирования для выявления засорения в маркированных отводках карпа и сазана;

4) анализ изменений в генетической структуре селекционных групп карпа в процессе селекции;

5) изучение влияния процесса криконсервации спермы рыб на полноту воспроизведения генетической гетерогенности групп;

6) оценка возможности использования полиморфных и видоспецифичных мономорфных белковых и ферментных систем у белого (Hypophtalmichthys molitrix (Valenciennes, 1844) и пестрого (Aristichthys nobilis (Richardson, 1846)толстолобиков;

7) поиск биохимических маркеров у веслоноса (Polyodon spathula (Wal-baum,1792) и описание биохимического полиморфизма его стад;

8) выявление биохимических маркеров сибирского осетра (Acipenser baerii Brandt, 1869), пригодных для генетического мониторинга племенных стад и изучение характера их наследования;

9) выявление биохимических маркеров стерляди (Asipenser ruthenus Linnaeus, 1758), пригодных для генетического мониторинга племенных стад и изучение характера их наследования.

Работа выполнена в лаборатории генетики и селекции в рамках комплексных целевых программ "Пруд", "Амур" и контрактов ВНИИПРХ.

Автор приносит глубокую благодарность всему коллективу лаборатории генетики и селекции, в первую очередь, заведующему лабораторией, доктору биологических наук Юрию Ивановичу Илясову и его заместителю, доктору биологических наук Вячеславу Яковлевичу Катасонову за постоянную помощь в исследованиях. Автор глубоко признателен Лидии Александровне Шарт, Светлане Шакровне Михайловой, Юлии Павловне Бобровой, Людмиле Ивановне Цветковой, Алине Васильевне Под-дубной, Надежде Александровне Барановой, чьи поддержка и деловое сотрудничество способствовали написанию этой диссертации. Отдельная благодарность коллективу лаборатории, осетроводства и акклиматизации -Виноградову В.К., Мельченкову Е.А.;:Ситновой О.В., Бреденко М.В. за помощь в совместных исследованиях.

Автор приносит благодарность главному рыбоводу КЗТО Н.А. Ко-зовковой за проведение скрещивания стерляди и сибирского осетра и техническую помощь в ходе анализов, а сотрудникам института общей генетики (ИОГен РАН) Рябовой Г.Д., Офицерову М.В., Политову Д.В. - за сотрудничество при исследовании биохимического полиморфизма сибирского осетра и стерляди.

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Демкина, Наталья Викторовна

Выводы

1. Методом электрофореза в полиакриламидном геле исследован биохимический полиморфизм локусов Tf Est-1, Est-2 и Му-3 у разных племенных групп среднерусского, ангелинских и московских (парских) лахвинских, тремлянских, немецких карпов, амурского сазана и гибридов с японским карпом. Наибольшей генетической изменчивостью по изученным локусам обладает амурский сазан, наименьшей - немецкий карп.

2. Генетическое маркирование отводок среднерусского карпа генотипами 77"позволяет не только обнаруживать засорение селекционного материала, но в ряде случаев, и определять его источник.

3. Анализ набора аллелей полиморфных локусов Tf Est-1 и Му-3 и их частот позволил выявить присутствие наследственности амурского сазана в отводках парского и краснодарского карпа, у белорусских карпов и в группе К0.

4. Анализ динамики частот генотипов Est-1 в четырех отводках среднерусского карпа выявил повышение доли гетерозиготных особей в процессе селекции от первого поколения селекции к пятому. Аналогичное увеличение гетерозиготных по локусу ^генотипов отмечено в селекционных поколениях загорских карпов, не маркированных типом Tf

5. Отбор по признакам продуктивности у карпа приводит к увеличению в онтогенезе количества особей, гетерозиготных по трансферринам и сывороточным эстеразам. У производителей карпа отмечено повышение доли гетерозигот по локусам Tf и Est-1 по сравнению с рыбами младших возрастных групп во всех отводках среднерусского и у московского чешуйчатого карпа. Аналогичная тенденция наблюдается при сравнении сеголетков и двухлетков лахвинских и тремлянских карпов, разновозрастных групп ангелинских карпов. По локусам Est-2 и Му-3 подобных изменений не отмечено.

6. В различных генерациях ангелинских, московских и среднерусского карпов выявлено проявление "эффекта основателя". Уменьшение в процессе селекции генетического разнообразия групп зависит от условий проведения отбора. Основной причиной снижения генетической гетерогенности селекционных групп явилось не проведение жесткого отбора, а малая эффективная численность популяций, то есть небольшое число производителей, используемых для воспроизводства и малое (1-2) количество генераций в каждом селекционном поколении.

7. Жесткий суммарный отбор по двум направлениям (на устойчивость к краснухе и по темпу роста) привел к консолидации неродственных по происхождению породных групп: ангелинских чешуйчатых (УР) и ангелинских зеркальных (М) карпов. Частоты генотипов и аллелей локусов Tf и Est-1 у карпов, селекционируемых на устойчивость к краснухе (ангелинского чешуйчатого, ангелинского зеркального и ропшинского) в процессе селекции значительно сблизились.

8. Заложена генетически маркированная линия амурского сазана

АСМ), характеризующаяся гомозиготностью всех представителей по двум маркерным системам: генам чешуйного покрова (SSnn) и нулевому аллелю локуса миогенов (Му-3 аа). Использование двойной маркерной системы дает возможность с высокой степенью надежности контролировать "чистоту" племенного материала, исключая его случайное засорение. Генетическое маркирование племенного стада привело к сопряженным изменениям других генетических систем. Повысилась встречаемость аллелей b и у локуса трансферрина. Несколько изменился экстерьер рыб в сторону усиления черт, свойственных амурскому сазану.

9. Проведен гибридологический анализ характера наследования аллелей с и z локуса Est-1 и аллелей а, с, у и z локуса Tf у карпа, аллелей локусов Pgm-2,3; Pgdh-1,2; Gpi-1 и Gpi-2; Ldh-4 и MdhB-1,2 у сибирского осетра, локусов Pgm-4; Pgdh-1,2; Gpi-1,2 и Mdh-3,4 у стерляди. Карпы, гомо- и гетерозиготные по трансферрину А\ обладают пониженной относительной приспособленностью. Как при анализе распределения частот генотипов по локуру Му-3 в выборках из племенных стад карпа, так и при анализе потомств индивидуальных скрещиваний выявляется устойчивый дефицит гетерозигот по локусу Му-3, что делает невозможным расчет частот аллелей на основании частоты встречаемости гомозиготы по нулевому аллелю и использования формулы Харди-Вайнберга.

10. Распределение генотипов 4-х полиморфных локусов трансферринов, эстераз мышц, эстераз сыворотки крови и миогенов в потомствах карпа, полученных с применением нативной и дефростированной спермы, не отличаются друг от друга, что свидетельствует об отсутствии влияния процесса криоконсервации спермы на полноту воспроизведения генетической разнокачественности групп.

11. Использование спектров пяти мономорфных видоспецифичных белков и ферментов - преальбуминов, миогенов, супероксиддисмутазы и щелочной фосфатазы позволяет выявить всех гибридов белого и пестрого толстолобиков первого поколения и более 99% межвидовых гибридов второго поколения. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии сцепления между этими локусами.

12. Уровень засорения межвидовыми гибридами стад белого и пестрого толстолобиков ОРХ "Селец" (Республика Беларусь) составляет в целом по хозяйству 17,2 %, что примерно соответствует данным, полученным в различных рыбоводных хозяйствах бывшего СССР. Среди производителей белого и пестрого толстолобиков частота встречаемости гибридов составила всего 5,4 %, что позволяет избавиться от засорения, проведя мечение и прижизненное тестирование производителей.

13. В сыворотке крови веслоноса активны полиморфные локусы альбуминов (3 аллеля) и эстеразы (3 аллеля). Электрофоретический анализ белковых продуктов этих локусов позволяет вести генетический мониторинг изменений в генетической структуре стад веслоноса.

14. У сибирского осетра из 15 исследованных ферментных систем пригодными для целей генетического мониторинга оказалось шесть фосфоглюкомутаза (PGM), фосфоглюкоизомераза (GPI), 6фосфоглюконатдегидрогеназа (PGDH), малатдегидрогеназа (MDH), изоцитратдегидрогеназа (IDH), глицерол-3-фосфатдегидрогеназа (G3PDH), аконитаза (АСО). Для дальнейшей работы по прижизненному анализу генотипов у сибирского осетра могут быть рекомендованы PGDH, PGM, GPI, MDH.

15. У волжской стерляди выявлен полиморфизм восьми полиморфных ферментных систем из 15 исследованных: эстераз (EST), фумаратдегидрогеназы (FH), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (G3PDH), глюкозо-6-фосфатизомеразы (GPI), лактатдегидрогеназы (LDH), малат-дегидрогеназы (MDH), малик энзима (ME), 6-фосфоглюко-натдегидрогеназы (PGDH). Три системы, активные в эритроцитах (PGDH, GPI, MDH), могут быть рекомендованы для дальнейшей работы по прижизненному анализу генотипов.

Заключение

Общее количество аллелей Tf выявленное нами в различных группах карпа и сазана, девять: у, z, а, а\ Ь, с\ с, d, е. Аллели а\ с\ d, е, z, у встречались у амурских сазанов или у карпов, несущих наследственность амурского сазана, что соответствует литературным данным.

Из пород карпа селекции ВНИИПРХ наибольшей генетической гетерогенностью по исследованным локусам обладает парский карп и его внутрипородные типы (московский чешуйчатый и московский разбросанный). Исходно несколько ниже был уровень изменчивости у карпов, селекционируемых на устойчивость к краснухе (ангелинского чешуйчатого, ангелинского зеркального и ропшинского). У племенных групп среднерусского карпа отмечено наименьшее разнообразие по изученным системам. Исключение составляла лишь группа Нем/У -НЕС0.

Проведенное генетическое маркирование отводок среднерусского карпа генотипами ^"позволило следить за «чистотой» племенного материала и не только обнаруживать засорение, но в ряде случаев, и определять его источник.

Заложена генетически маркированная линия амурского сазана (АСМ), характеризующаяся гомозиготностью всех представителей по двум маркерным системам: генам чешуйного покрова (SSnn) и нулевому аллелю локуса миогенов (Му-3 аа). Использование двойной маркерной системы дает возможность с высокой степенью надежности контролировать "чистоту" племенного материала, исключая его случайное засорение.

Генетическое маркирование сазана привело к сопряженным изменениям других генетических систем. В частности, повысилась встречаемость аллеля Ь и так называемого "редкого" аллеля у локуса трансферрина. Несколько изменился экстерьер рыб в сторону усиления черт, свойственных амурскому сазану.

Изучение связи динамики аллельных частот полиморфных локусов в селекционных группах карпа разного происхождения с условиями селекции продемонстрировало, что наиболее важным фактором сохранения генетической гетерогенности является высокая эффективная численность популяции. При снижении генетической изменчивости группы даже значительное увеличение напряженности отбора не приводит к повышению продуктивных показателей.

Отбор по темпу роста привел к увеличению количества особей, гетерозиготных по локусам трансферрина (Tf) и сывороточной эстеразы (Est-1) и к достижению некоего оптимума по этому показателю (60-70%) в разных племенных группах карпа - у среднерусского карпа, у ангелинских и тремлянских карпов. Увеличение доли гетерозиготных особей наблюдается как в более старших возрастных группах (у производителей по сравнению с сеголетками), так и в более поздних поколениях селекции.

В пределах одного селекционного поколения в разных генерациях частоты аллелей могут заметно отличаться, что бывает обусловлено «эффектом основателя». В некоторых случаях это может привести к заметному сужению генетической изменчивости или даже к фиксации только одного аллеля, как это произошло у среднерусских карпов отводки 3-НК (фиксация аллеля Est-lb).

Жесткий суммарный отбор по двум направлениям (на устойчивость к краснухе и по темпу роста) привел к консолидации неродственных по происхождению породных групп ангелинских чешуйчатых (УР) и зеркальных (М) карпов.

Исследование биохимических маркеров в потомствах карпа, полученных с применением криоконсервации спермы и без нее, показало, что и в опытных, и в контрольных вариантах отмечены все возможные генотипы трансферрина, двух локусов эстеразы и миогенов. В распределении частот генотипов и аллелей четырех полиморфных локусов в группах годовиков карпа, полученных с помощью дефростированной и нативной спермы, достоверные различия отсутствуют. Выявленные достоверные отклонения частот генотипов Est-1, Est-2 и Му-3 от теоретически ожидаемых вызваны, по-видимому, действием естественного отбора.

У белого и пестрого толстолобиков не найдено полиморфных систем для использования в целях прижизненного мониторинга. Вместе с тем, анализ спектров пяти мономорфных видоспецифичных белков и ферментов -преальбуминов, миогенов, супероксиддисмутазы и щелочной фосфатазы позволяет выявить всех гибридов белого и пестрого толстолобиков первого поколения и более 99% межвидовых гибридов второго поколения. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии сцепления между этими локусами.

Уровень засорения межвидовыми гибридами стад белого и пестрого толстолобиков ОРХ "Селец" (Республика Беларусь) составляет в целом по хозяйству 17,2 %, что примерно соответствует данным, полученным в различных рыбоводных хозяйствах бывшего СССР. Среди производителей белого и пестрого толстолобиков частота встречаемости гибридов невелика (5,4 %), что позволяет избавиться от засорения, проведя мечение и прижизненное тестирование производителей.

В сыворотке крови веслоноса выявлены продукты полиморфных локусов альбуминов (3 аллеля) и эстеразы (3 аллеля). Электрофоретический анализ белковых продуктов этих локусов позволяет вести генетический мониторинг изменений в генетической структуре стад веслоноса.

У сибирского осетра и волжской стерляди исследовано по 15 ферментных систем или 33 и 29 локусов соответственно. Показатели уровня изменчивости у сибирского осетра: Р = 0,333, Н =0,082, А=1,273, у волжской стерляди - Р = 0,448 , Н =0,048, А=1,413 . На основе полученных данных и анализа результатов индивидуальных скрещиваний изданы методические указания по оценке генетического разнообразия у сибирского осетра и стерляди с помощью биохимических маркеров

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Демкина, Наталья Викторовна, Рыбное

1. Аббасов Р.Ю., Гаджиев Р.В., Талыбова А.Г. Изменение спектра белка и гемоглобина крови куринского лосося в онтогенезе. //Физиол. мор. животных. /Тез. докл. Всес. конф., Мурманск, 1989. /Апатиты, 1989. С. 57.

2. Абраменко М.И., Кравченко О.В., Великоиваненко А.Е. Генетическая структура популяций в диплоидно-триплоидном комплексе серебряного карася Carassius auratus gibelio в бассейне нижнего Дона.// Вопр. ихтиологии. 1997 - Т.З 7. - № 1.-С. 62-71.

3. Айала Ф.Х. Естественный отбор, генетический полиморфизм и стабильность Среды обитания. В кн.: Генетика и размножение морских животных. Владивосток, 1981, с.8-9.

4. Аллендорф Ф.У., Риман Н., Аттер Ф.М. Генетика и управление рыбным хозяйством/ Популяционная генетика и управление рыбным хозяйством. Ред. Риман Н., Аттер Ф. /М.: Агропромиздат. 1991. С. 15-36.

5. Алтухов Ю.П. Внутривидовое генетическое разнообразие: мониторинг и принципы сохранения // Генетика. -1995.- Т.31. №10. С.1333-1357.

6. Алтухов Ю.П., Корочкин Л.И., Рычков Ю.Г. Наследственное биохимическое разнообразие в процессах эволюции и индивидуального развития. Генетика, 1996, № 11, с. 1450- 1473

7. Алтухов Ю.П., Рычков Ю.Г. Генетический мономорфизм видов и его возможное биологическое значение. // Журн. общ. биологии. 1972. -Т.ЗЗ, №3. С.281-300.

8. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А., Омельченко Т.В., Ефанов В.Н. Генетическая дифференциация и популяционная структура горбуши Саха-лино-Курильского региона. // Биол. моря. 1983. -№ 2. - С. 46- 51.

9. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А., Омельченко В.Т. Популяционная генетика лососевых рыб. М.: Наука, 1997, 288 с.

10. Андрияшева М.А. Популяционно-генетический подход при искусственном воспроизводстве сиговых рыб. // Тез. докл. 5 съезда ВОГИС (Москва, 24-28 ноября 1987). / М., 1987. T.l. -С.13-14.

11. Андрияшева М.А. Исследование полиморфных белковых локусов и количественных признаков у рыб. // Генетика в аквакультуре. JL, Наука. - 1989.-С. 29-46.

12. Андрияшева М.А. Концепция сохранения генофонда природных популяций рыб. С.-П., ГосНИОРХ.- 1996.- 66 с.

13. Андрияшева М.А., Локшина А.Б. Популяционно-генетический подход при селекции пеляди (Coregonus pelrd). Сообщение 1. Метод повышения гетерозиготности стад по белковым локусам. // Генетика. 1987. -Т.23, № 12.-С. 2085-2097.

14. Афанасьев К.И., Сусков И.И., Алтухов Ю.П. Оценка частоты редких электрофоретических вариантов белков крови у детей с врожденной патологией. //Цитология и генетика. 1984. - Т. 18, № 2. - С. 129-131.

15. Багров A.M., Боброва Ю.П., Катасонов В.Я., Илясов Ю.И., Дем-кина Н.В. Рыбоводно-биологические особенности породы карпа "Парская" // Докл. Рос. академии с/х наук. 2001. - № 2, март-апрель. - С. 42-45.

16. Багров A.M., Боброва Ю.П., Катасонов В.Я., Илясов Ю.И., Демки-на Н.В. Рыбоводно-биологические показатели московского разбросанного типа парской породы карпа. // Докл. Рос. академии с/х наук. 2004.- № 4,-С.56-58.

17. Бакош Я. Совершенствование продуктивных свойств карпа путем гибридизации различных пород. Межд. симп. по генетике карпа. Сарваш, Венгрия, 1990, с.6.

18. Бакош Я., Краснаи 3., Терез М. Результаты селекционных и генетических исследований рыб в Венгрии. // Сб. научн. трудов / М.: ВНИИПРХ. 1978.-Вып. 20.-С. 125-139.

19. Балахнин И.А., Богданов J1.B., Лазовский А.А. Типы гемоглобина, трансферрина, преальбумина и содержание калия в крови карпов из рыбхоза "Волма" (БССР). // Вестн. зоол. 1973. -№ 2.- С.26-29.

20. Балахнин И.А., Галаган Н.П. Распределение и выживаемость особей с разными типами трансферрина в потомстве карпа при различных сочетаниях производителей. // Гидробиол. журн. 1972а. - Т.8, № 3. - С. 56-61.

21. Балахнин И.А., Галаган Н.П. Типы трансферрина Cyprinus carpio (L.) // Гидробиол.журн. 19726. - Т.8, № 6. - С. 108-110.

22. Балахнин И.А., Галаган Н.П. Семейный анализ гибридов китайского золотого карася (Carassius auratus) и карпа (Cyprinus carpio L.) по системе трансферринов. // Биохим. генетика рыб. JL, 1973. - С. 141-143.

23. Балахнин И.А., Романов Л.И. Распределение и генная частота типов трансферрина у беспородного карпа и амурского сазана. // Гидробиол. журн. 1971. - Т.7.-№ 3. - С.84-86.

24. Балахнин И.А., Соломатина В.Д. Типы трансферринов и их связь с некоторыми показателями экстерьера у карпов. // Гидробиол. журн. 1970. - Т.6, № 6. - С.56-61.

25. Бараева А.А. Степень расслоения мышечной ткани русского осетра с разлож. фенотипами альбуминов в речной период жизни // Физиолого-биохимический статус Волго-каспийских осетровых в норме и при расслоении мышечной ткани. Рыбинск, 1990, с. 146-149.

26. Баранникова И.А., Никоноров С.И., Белоусов А.Н. Проблема сохранения осетровых России в современный период //Тез. докл. межд. конф. "Осетровые на рубеже XXI века" (Астрахань, 11-15 сент. 2000 г.) /Астрахань, 2000. С.7-8.

27. Барменцев В.А. Молекулярно-генетические аспекты исследования полиморфизма ДНК осетровых с целью их идентификации и сертификации. //Тез. докл. межд. конф. "Осетровые на рубеже XXI века" (Астрахань, 11-15 сент. 2000 г.) /Астрахань, 2000. С120-121.

28. Барменцев В.А., Никоноров С.И. Молекулярно-генетическое типирование и видовая идентификация осетровых рыб. // Тез. докл. 1-й науч.-практ. конф. "Пробл. современ. товар, осетроводства", Астрахань., 24-25 марта, 1999.-Астрахань, 1999.-68-69.

29. Безруков В.Ф. Электрофоретический псевдополиморфизм: роль модификаций на примере протеолиза. // Генетика. 1987а. - T.XXIII.- -С.1290-1297.

30. Безруков В.Ф. Половой диморфизм электрофоретических спектров сывороточных белков растительноядных рыб. // Цитол. и генет. 19876. -21, № 3. - С.199-203.

31. Безруков В.Ф. Изоферменты эстераз белого амура и их изменчивость . // Цитол. и генет. 1987в. - 21, № 4. - С.293-297.

32. Безруков В.Ф., Бердышев Г.Д., Алексеенко В.Р. Устройство для элек"фофореза в вертикальных пластинах геля. // А.с. СССР N1096555. -Бюлл. откр. и изобретений. 1984. - № 2.

33. Беляев Д.К. Генетические аспекты доместикации животных //проблемы доместикации животных и растений. / М.:Наука,1972. С. 39-45.

34. Боброва Ю.П., Гарин А.Г. Рыбоводно-биологические показатели парского карпа V-VII поколений селекции // Сб. научн. трудов /М.: ВНИИПРХ. 1986. - Вып.48. - С. 114-121.

35. Боброва Ю.П., Елуфимова JI.A., Полянский А.А., Лаврухина С.И. Характеристика воспроизводительной способности самок парского карпа. // Сб. научн. трудов / М.: ВНИИПРХ. Вып.48. - С.122 -130.

36. Боброва Ю.П., Катасонов В.Я., Демкина Н.В. Зональный тип породы парского карпа: московский чешуйчатый. // Сб. научн. тр. ВНИИПРХ. Вопросы генетики, селекции и племенного дела в рыбоводстве. — Вып. 76.-М.:ВНИРО, 2001 С.36-47.

37. Богданов Л.А., Коваль Е.З., Черноиванов В.А. Рекомендации по использованию электрофоретических данных при межпопуляционных и межвидовых сравнениях. // Владивосток, 1980. 38 с.

38. Богерук А.К.Новые подходы к организации селекционно-племенного дела в рыбоводстве // Рыбоводство и рыболовство 2001- № 4 -С.14-16.

39. Богерук А.К. " Биологические и организационно-методические основы селекционно-племенного дела в рыбоводстве". Дис. на соиск. уч. степ, доктора наук. М., 2000.

40. Бойко Е.Г. Влияние селекционно-генетических и экологических факторов на структуру популяций карповых рыб. // Автореф. канд. диссерт. / Омск, 1997

41. Бружинскас И.В., Жалюнене А.-Д. Ю. Селекция и генетические исследования карпа в Литве. // Сб.научн.трудов / М.:ВНИИПРХ. 1978.-Вып. 20. - С.65-77.

42. Бурлаков А.Б., Макеева А.П., Рябов И.Н. Изоферментный состав гибридных и гиногенетических форм некоторых карповых рыб на ранних стадиях онтогенеза.//Биохимич. генетика рыб, Л., 1973. - С.85-90.

43. Варзегова С.А. Оценка селекционно-племенных качеств радужной форели по белкам плазмы крови. // Тез.докл. Всес. семин. По интенсиф. форелеводства, 16-18 нояб. 1987. М., 1987. - С.12.

44. Варнавская Н.В., Варнавский B.C., Сараванский О.Н. Полиморфизм пероксидазы в некоторых популяциях нерки Oncorhyncus nerka (Wal-baum) Камчатки. //Генетика. 1988. -24, № 10. - С.1866-1872.

45. Варнавская Н.В., Дубинин B.C. Уровень гетерозиготности по локусу фосфоглюкомутазы и его связь со скоростью роста у молоди нерки озера Курильского на разных этапах жизненного цикла. // Генетич. исслед. морск. гидробионтов. М., 1987. - С.36-43.

46. Васильев В.П. Эволюционная кариология рыб. М.: Наука. - 1985.300 с.

47. Васильев А.С. Полиморфизм и мономорфизм гемоглобина у представителей семейства осетровых по данным изоэлектрического фокусирования.// Тезисы докл. 3 Всес. совещ. по генетике, селекции и гибридизации рыб. Тарту, 9-11 сент., 1986. -М., 1986, С.31-32.

48. Васильев В.П., Соколов Л.И., Серебрякова Е.В. Кариотип сибирского осетра Acipenser baeri Brandt реки Лены и некоторые вопросы эволюции кариотипов осетрообразных// Вопр. ихтиологии. 1980.- Т.20. С.814.

49. Виноградов В.К., Ерохина Л.В. Новые формы и новые объекты промышленного рыбоводства// Тр. ВНИИПРХ, М., !973, т.21, с. 3-6.

50. Виноградов В.К., Ерохина Л.В.Повышение эффективности товарного рыбоводства // Рыбоводство и рыболовство, 1999,- №3.

51. Гагальчий Н.Г. Биохимический полиморфизм камчатской горбуши Oncjrhynchus gorbuscha (Walb.). Сообщение И. Частоты аллелей полиморфных локусов в генерации четного года. // Генетика. -1986. 22, №12. -С.2839-2846.

52. Галаган Н.П. О трансферринах дунайского сазана. // Гидробиол. журн. 1973. - Т.9, №2. - С.94-99.

53. Гераскин П.П. Итоги и перспективы физико-биохимических исследований осетровых.// Формир. запасов осетров, в условиях комплекс, ис-польз. водн. ресурсов./ Кратк. тез. науч. докл. к предстоящ. Всес. сов. в окт., 1986./Астрахань, 1986. С. 67-70.

54. Гинтовт В.Е., Новик И.Е. Генетические маркеры в птицеводстве. // Проблемы генетики, селекции и иммуногенетики животных. М., 1972.

55. Глазко В.И. Оценка дифференциации пород овец с помощью метода генетических расстояний. //Цитология и генетика, 1984. -Т. 18. -№2.1. С. 116-119.

56. Глазко В.И., Дымань Т.Н., Сипко Т.П., Кушнир А.В. участие маркеров структурных генов и анонимных последовательностей ДНК в генетической дифференциации p. Ovis. // Докл. РАСХН. 2001. - №2. - С.12-16.

57. Голованова Т.С., Варнавская Н.В., Мальдов В.Г., Никоноров С.И. Полиморфизм изоцитратдегидрогеназы (ИДГ) и аспартатаминотрансферразы (ААТ) белорыбицы по результатам скрещиваний. // Первый Конгресс ихтиологов России. М.: ВНИРО, 1997а. С. 350.

58. Голованова Т.С., Серов Д.В., Никоноров С.И., Мальдов В.Г., Вит-вицкая JI.B. Изучение причин отбора по локусу алкогольдегидрогеназы на ранних стадиях онтогенеза. // Первый Конгресс ихтиологов России. М.: ВНИРО, 19976.-С. 308.

59. Голованова Т.С., Мальдов В.Г., Новоселов А.П., Никоноров С.И. аллозимная изменчивость белорыбицы и нельмы Stenodus leucichthys. // Вопросы рыболовства.- 2000.-Т.1.-С.95-96.

60. Головинская К.А. Первые этапы создания породы среднерусского карпа. //Сб. по пруд, рыбоводству. /М.: ВНИИПРХ. 1969. - С.139--148.

61. Головинская К.А., Боброва Ю.П. Основные итоги и задачи дальнейшей селекции парского карпа. // Сб. научн. трудов/ М.: ВНИИПРХ.-1982.-Вып. 33.-C.3-31.

62. Головинская К.А., Катасонов В.Я., Боброва Ю.П., Попова А.А. Работы по созданию среднерусского карпа. // Мат-лы Всес. совещ. по орг-ции селекц.-плем. работы и улучш. содержания маточн. стад в рыбхозах страны./М.: ВНИИПРХ. 1975.-С. 15-29.

63. Грищенко В.И., Панков Е.Я., Обозная Э.И. Качественное обновление свойств клеток после криоконсервирования. // Успехи совр. биол.-1989.

64. Т.108. Вып. 2(5).-С. 299-309.

65. Гросс Р. О типах трансферрина и эстераз у производителей карпа (Cyprinus carpio L.) Ильматсалуской опытной станции по рыбоводству. // Сб. научн.тр. ЭстНИИ животноводства и ветеринарии. 1985. - № 56. -С.172-179.

66. Гросс Р.Э., Пукх М.Х., Тохверт Т.К. Оценка некоторых генетических и рыбохозяйственных показателей исходного материала для селекции эстонского карпа. // Генетика в аквакультуре. Д., Наука. - 1989а. - С. 196205.

67. Гросс Р.Э., Пукх М.Х., Тохверт Т.К. Генетическая и рыбохозяйст-венная оценка исходного материала для селекции эстонского карпа. // Селекция рыб. М., Агропромиздат. - 19896. - С.47-55.

68. Демкина Н.В. Биохимический полиморфизм отводки "М" пар-ского карпа, выращенной в условиях ЦЭБ "Якоть". // Сб. науч. тр. / Вопросы селекции, генетики и племенного дела в рыбоводстве. М.: ВНИПРХ, 1989. -Вып.58. -С. 12-16.

69. Демкина Н.В. Снижение генетической изменчивости в селекционных поколениях карпа. // Мат-лы докл. 2 межд. симп. "Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре (Адлер, октябрь 1999). Краснодар, 1999. - С. 33-34.

70. Демкина Н.В. Генетическое маркирование при селекции среднерусского карпа. // Зоотехния. 2004. - № 6. - С. 12-13.

71. Демкина Н.В. Снижение генетического разнообразия племенных групп карпа в процессе селекции. // Вестник РАСХН. 2004. -№ . - С.70-72.

72. Демкина Н.В. Биохимические маркеры в селекции и разведении объектов пресноводной аквакультуры: опыт ВНИИПРХ. // Рыбное хоз-во. 2004. -№ 6. -С. 47-48.

73. Демкина Н.В., Илясов Ю.И. Сертификация племенного материала у рыб: возможности и задачи. // "Проблемы рыбоводства."Мат-лы межд. со-вещ., (Минск , 1998). Белорусское издат. товарищество "Хата", 1998. - С. 60-64.

74. Демкина Н.В., Катасонов В.Я., Ильина И.Д., Трувеллер К.А. Увеличение гетерозиготности по локусам эстеразы и трансферрина в селекционных поколеиях среднерусского карпа. // Мат-лы VI съезда ВОГИС (Минск, 23-27 ноября 1992 г.). М., 1992. - С. 51.

75. Демкина Н.В., Паюсова А.Н., Целикова Т.Н., Ситнова О.В., Бре-денко М.В. Полиморфизм белков сыворотки крови у веслоноса (Polyodonspathula Walb.). // Тез.докл.1 Конгресса ихтиологов России (Астрахань, сент.1997). М.:ВНИРО, 1997. С. 353.

76. Демкина Н.В., Цветкова Л.И., Шарт Л.А. Генетическая гетерогенность потомств карпа, полученных с применением криоконсервированной спермы.// Рыбное хоз-во, сер. Аквакультура: Информ. пакет "Совр. аква-культура". Вып 1. - М.: ВНИЭРХ, 1997. - С.79-80.

77. Демкина Н.В., Шарт Л.А., Баранова Н.А. Использование биохимических маркеров для оценки генетического разнообразия стад карпа. (Методические указания) // Сб. нормативно-технологической документации по ак-вакультуре.- М.: ВНИРО, 2001. С. 133-149.

78. Доманчук В.В. Сравнительная рыбохозяйственная оценка карпа породной группы «фресинет» в условиях Молдовы. //Автореф. канд. дис. / М.:ВНИИПРХ, 1993.-24 с.

79. Дубинин Н.П., Алтухов Ю.П., Сусков И.И.и др. Экспериментальное обоснование принципов мониторинга генных мутаций у человека. //Докл. АН СССР, 1978.- Т.241№ 5. С. 1313 -1316.

80. Ельцов В.А., Сапрыкин В.Г., Толстоногов А.С. Генетическая структура стада парского карпа, формируемого в рыбхозе "Сускан". // Сб. научн. трудов./М.: ВНИИПРХ. 1985. - Вып.45. - С.70-76.

81. Жалюнене А.-Д. Ю. О типах трансферринов и сывороточных эстераз селекционируемых в Литве карпов. //Изучение и освоение водоемов Прибалтики и Белоруссии. Рига, Зинанте. 1980. - Т.1. - С, 148-150.

82. Жалюнене А.-Д.Ю. Трансферрины производителей карпов селекционно-племенного хозяйства "Шиловотас". // Интенсиф. Прудового рыбоводства Литвы. Вильнюс, 1983. - С.31-36.

83. Жалюнене А.-Д.Ю. Генетическая и морфологическая характеристика бубяйской породной группы карпов. // Биол. ресурсы водоемов бассейна Балт. моря. Вильнюс, 1987. - С.53-54.

84. Жалюнене А.-Д.Ю. Трансферрины карпов, выращиваемых в водоемах Литвы. //Acta hydrobiol. lituanica.- Вильнюс, 1988. 8. - С.13-21.

85. Жалюнене А.-Д. Ю. Полиморфизм трансферринов и эстераз сыворотки крови и зараженность карпов сосальщиками Dactylogyrus extensus и Diplostomum spathaceum. // Генетика в аквакультуре. -Л., Наука. 1989. -С.187-195.

86. Животовский Л.А. Интеграция полигенных систем в популяции. //М.: Наука, 1984- 183 с.

87. Животовский Л.А. О возможности использования генетических маркеров для ранней оценки продуктивности животных. // Генетика. 1976. - Т. 12. - № 1. - С.147-152.

88. Животовский Л.А., Духарев В.А. "Сжатие" генотипической изменчивости при стабилизирующем отборе и ее проявление на ранних стадиях онтогенеза. // Журн.общ.биол. 1985.- Т.46. -№ 1.- С.32- 40.

89. Животовский JI.А., Афанасьев К.И., Рубцова Г.А. Селективные процессы по ферментным локусам у горбуши Oncorhynchus gorbuscha (Wal-baum).// Генетика. 1987. -Т. 23. - № 10. - С.1876-1883.

90. Зак Т.С., Пак И.В. Повышенная жизнестойкость промышленных гибридов казахстанского карпа Cyprinus carpio L. // Вопр. ихтиол. 1987. - 27. - № 3. - С.521-523.

91. Иваненков В.В. Эстераза-2 в развитии вьюна (Misgurnus fossilis). Гетерогенность яиц вьюна по экспрессии аллельных генов эстеразы-2 //Биохимич. и популяционная генетика рыб. Л., 1979.- С.29-35.

92. Иваненко В.В., Камшилин И. Н. Различия в электрофоретической подвижности двух фракций сывороточного альбумина белуги, недетерминированные генетически//Генетика. 1984. -Т.20. - № 7. - С. 1211-1218.

93. Иваненко В.В., Камшилин И. Н. Негенетические различия в электрофоретической подвижности некоторых фракций сывороточного альбумина осетровых рыб//Генетика. 1985.-Т.21.- №10.-С. 1731-1739.

94. Иваненко В.В., Камшилин И. Н. О возможности использования фракций альбуминов осетровых рыб в качестве генетических маркеров для популяционных исследований // Вопросы ихтиологии. 1991. - Т. 31. - Вып. 2. - С. 324-332.

95. Иванова И.М., Кирпичников B.C., Ролле Н.Н. Изменчивость лактатдегидрогеназы (ЛДГ) у карпа и сазана Cyprinus carpio L. / / Биохим. генетика рыб. Л., 1973. - С.91-95.

96. Ильина И.Д. Связь генотипов белков крови со скоростью роста и выживаемостью селекционируемых отводок среднерусского карпа // Тез. докл. 1 Симп. по экол. биохимии рыб, Ярославль, окт. 1987 г./ Ярославль, 1987. -С.77-78.

97. Ильина Л.В. Влияние абиотических факторов в период эмбрионально-личиночного развития на некоторые биологические и генетические параметры субизолятов нерки озера Азабачьего // Рукопись, депонир. в ВИНИТИ 13.01.88, № 229-В88.

98. Илясов Ю.И., Шарт Л.А. Полиморфные генетические системы сыворотки крови и их связь с селекционными признаками у карпа // Биохим. и популяционная генетика рыб. Л., 1979. - С. 152-156.

99. Илясов Ю.И. Методические основы формирования коллекций осетровых // Рыбоводство и рыболовство. 2001. - №1. - С. 75 -76.

100. Кайданов Л.З. Генетика популяций. М.: Высш. шк., 1996, 320 с.

101. КарнауховГ.И., Чебанов М.С., Василиади В.Д. методические рекомендации по определению видовой принадлежности осетровых рыб элек-трофоретическим методом //Краснодар, 2003. 16 с.

102. Каталог пород, кроссов и одомашненных форм рыб России и СНГ//Составители: Богерук А.К., Евтихиева Н.Ю., Илясов Ю.И. М., 2001.206 с.

103. Катасонов В .Я. Использование японских карпов-хромистов для создания генетически маркированных линий карпа // Сб. научн. трудов./ М.: ВНИИПРХ. 1974. - Т.23. - С.10-19.

104. Катасонов В.Я., Боброва Ю.П., Стояновский И.И., Щеглова Н.В. Состояние работ по селекции среднерусского карпа. // Сб.научн.трудов. / М.: ВНИИПРХ. 1980. - Вып.28. - С.3-24.

105. Катасонов В.Я., Гомельский Б.И. Селекция рыб с основами генетики. ИМ., Агропромиздат. 1991. - 209 с.

106. Катасонов В.Я., Ильина И.Д., Демкина Н.В., Трувеллер К.А. Использование биохимических маркеров в селекции среднерусского карпа.// Сб. научн. трудов/М.: ВНИИПРХ. 1986а. - Вып. 48. - С. 14- -23.

107. Катасонов В .Я., Черфас Н.Б. Селекция и племенное дело в рыбоводстве. // М., Агропромиздат. 1986. - 183 с.

108. Кимура М. Молекулярная эволюция: теория нейтральности (пер. с англ.). // М., Мир. 1985. - 398с.

109. Кирпичников B.C. Цели и методы селекции карпа. // Изв. ГосНИ-ОРХ. 1966.-Т.61.-С.7-27.

110. Кирпичников B.C. Гомологическая наследственная изменчивость и эволюция сазана Cyprinus carpio L.// Генетика.- 1967.- N2.-C.34-47.

111. Кирпичников B.C. Биохимический полиморфизм и проблема так называемой недарвиновской эволюции. // Усп. совр. биол.- 1972.- Т.74, N2(5).-С.231-246.

112. Кирпичников B.C. Биохимический полиморфизм и вопросы микроэволюции у рыб. // Биохимич. генетика рыб. JL, 1973. - С.7- 23.

113. Кирпичников B.C. Приспособительный характер биохимического полиморфизма у рыб. //Сб.науч.тр./Ин-т цитологии АН СССР. -Л., 1974.-Вып.16.- С.320-322.

114. Кирпичников B.C. Генетические основы селекции рыб. // JL, Наука. 1979. -392 с.

115. Кирпичников B.C. Возникновение и поддержание биохимического полиморфизма в популяциях животных и растений. // Вопросы общей генетики. / Тр. 14-го Межд. генет. конгр.- М., 1981. С. 18-27.

116. Кирпичников B.C. Селекционно-генетические исследования рыб. // Вестн. АН СССР. 1986. - N 12. - С. 84-89.

117. Кирпичников B.C. Генетика и селекция рыб. // Л., Наука. 1987.520 с.

118. Кирпичников B.C., Муске Г.А. Популяционная генетика камчатской нерки Oncorhynchus nerka Walb. // Генетика и размножение морских животных. Владивосток, 1981. - С. 59-71.

119. Кирпичников B.C., Факторович К.А., Шарт JI.A. Селекция карпа на устойчивость к краснухе. // Изв. ГосНИОРХ. Л., 1976. - Т. 106.- - С.16-28.

120. Кишш Ш. Биохимическая характеристика сазана и местных пород карпа на территории Венгрии. // Тез. докл. II Всес. совещ. по биох. генетике, кариологическому полиморфизму и мутагенезу у рыб (Л., 14-17 марта 1978г.)./М., 1978.-С. 33.

121. Кишш Ш. Трансферрины карпа и сазана (Cyprinus carpio L.).// Биохимич. и популяц. генетика рыб. Л., 1979. - С. 172-176.

122. Книга А.А. Сравнительная характеристика распределения фено-вариантов эстераз сыворотки крови трех линий белорусского карпа. // Методы интенсиф. пруд, рыб-ва. / Тез. докл. конф. мол. ученых. М., 1984, -С. 120-124.

123. Коваль Е.З., Богданов Л.В. Биохимический полиморфизм девяти видов камбал в заливе Петра Великого. // Тез. докл. II Всес. совещания по биохим. генетике, кариологическому полиморфизму и мутагенезу у рыб (Л., 14-17 марта 1978 г.)./М., 1978. С.34-35.

124. Коваль Л.И. Изоферментный спектр эстераз у рыб семейства Carangidae. // Вопр. ихтиол. 1988. - 28, N3. - С. 509-512.

125. Корочкин А.И., Серов О.Л., Пудовкин А.И. и др. Генетика изо-ферментов. // М., Наука. 1977. - 275 с.

126. Костенко С.Г. Полиморфизм белков украинского карпа и амурского сазана. //Мат-лы II Всес.совещ. по генет.,селекц. И гибридизации рыб./Ростов-на-Дону, 1981. С. 148-149.

127. Кривцов В.Ф., Козовкова Н.А. Промышленные маточные стада осетровых рыб // Первый конгресс ихтиологов России: Тез.докл. -М.: ВНИРО, 1997.-С.282-283.

128. Крыжановский О.А., Маслова Н.И. Зависимость эффекта гетерозиса от комбинационной способности линий. // Селекция рыб. М., Агро-промиздат. - 1989. - С.86-92.

129. Кузьмин Е.В. Электрофоретический анализ мышечных и сывороточных белков различных но экологии видов осетровых рыб/ Автореф. канд. днсс. Л. 1991.25с.

130. Кузьмин Е.В. Альбуминовая система сыворотки крови осетрооб-разных в речной период жизни. //Вопросы ихтиол., 1996.- Т. 36.- №1.- С. 101-108.

131. Кузьмин Е.В., Кузьмина О.Ю. Полиморфизм мышечной малатде-гидрогеназы русского осетра. // Генет. исслед. мор. гидробионтов. М., 1987.-С. 16-23.

132. Кузьмин Е.В., Лукьяненко В.И. Гетерогенность и полиморфизм сывороточных альбуминов сибирского осетра енисейской популяции / V Всесоюз. конф. по экол. физиологии и биохимии рыб. Тез. докл. Киев. 1982.

133. Кузьмин Е.В., Лукьяненко В.И. Гетерогенность и полиморфизм сывороточных альбуминов сибирского осетра обской популяции / Осетровое хозяйство водоемов СССР. Астрахань. 1984.

134. Куринный С.А. Динамика активности малатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы на ранних стадиях эмбрионально-личиночного развития малоротого Ictiobus bubalus (Raf.). и черного Ictiobus niger

135. Agassiz). буффало и их реципрокных гибридов.// Научн.докл.высш. шк. Биол.н.- 1984.-№9.-57-61.

136. Лаугасте К.Э., Паавер Т.К., Хаберман Х.Х., Кирсипуу А.И., Там-мерт М.Ф. Изучение возможности повышения продуктивности прудовых рыб. // Отчет за 1980 г. по х/д с ВНИИПРХ. Выртсъервская лимнологическая станция. - 1980. - 44 с.

137. Левонтин Р. Генетические основы эволюции (пер. с англ.).// М.,Мир.- 1978.-351 с.

138. Лекявичюс Э. Элементы общей теории адаптации. Вильнюс: Мокслас.1986.- 273 с.

139. Лиманский В.В., Яржомбек А.А., Бекина Е.Н., Андронников С.Б. Инструкция по физиолого-биохимическим анализам рыбы. / М.:ВНИИПРХ.- 1986. 52 с.

140. Лобченко В.В., Курлыкин Г.С. Трансферрины карпов Молдавии. I. Типы трансферринов у разбросанной местной и украинской нивчанской линий. // Соверш. технол. выращ. рыб при высокой степени интенсификации. Кишинев, 1981. - С. 41-47.

141. Лобченко В.В., Куринный С.А., Доманчук В.В. Исследования полиморфизма трансферрина у карпов Молдавии. // Тез. докл. I Съезда гидробиол. Молдавии. / Кишинев, 1986. С.83-84.

142. Лобченко В.В., Куринный С.А., Стороженко С.С., Доманчук

143. B.И., Епур В.В. Некоторые итоги селекции прудовых рыб Молдавии. // Селекция рыб. М., Агропромиздат. - 1989. - С. 92-100.

144. Лукьяненко В.И., Лукьяненко В.В. Биохимический полиморфизм осетровых рыб //Тр. ин-та биол. внутр.вод АН СССР.-1988.-№ 55/58.-С.158-237.

145. Лукьяненко В.И., Попов А.В. Белковый состав сыворотки крови двух аллопатрических популяций сибирского осетра Acipenser baeri Br./ДАН СССР. 1969.Т. 186. С.233-235.

146. Лукьяненко В.И., Попов А.В., Мишин Е.А. Гетерогенность и полиморфизм альбуминов сыворотки крови у рыб //ДАН СССР. 1971. -Т.201. -С.737-740.

147. Локшина А.Б. Сравнительный электрофоретический анализ некоторых белков сиговых рыб. И Сб.науч.тр. ГосНИОРХ.- 1980. Вып. 153.1. C.46-57.

148. Локшина А.Б., Андрияшева М.А. Методы и результаты отбора при селекции пеляди. Сообщение И. Изменение генетической структуры стада при отборе.// Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1981. - - Вып. 174. - С. 71-80.

149. Локшина А.Б., Андрияшева М.А., Черняева Е.В. Связь гетерозиготности с некоторыми компонентами приспособленности у пеляди. //Сб.научн.тр. ГосНИОРХ. 1987. - Вып. 261. - С. 40-50.

150. Лукьяненко В.И., Васильев А.С., Лукьяненко В.В. Полиморфизм гемоглобина осетровых рыб. // Докл. АН СССР. 1986. - - 290, №1. -С. 254-256.

151. Лукьяненко В.И., Лукьяненко В.В. Биохимический полиморфизм осетровых рыб. // Тр. Ин-та биол. внутр. вод АН СССР. 1988. - № 55/58. - С. 158-237.

152. Макоедов А.Н. Кариология, биохимическая генетика и популяционная фенетика лососевидных рыб Сибири и Дальнего Востока: сравнительный аспект // М.: УМК "Психология", 1999. -291 с.

153. Маурер Г. Диск-электрофорез. // М., Мир. 1971. - 247 с.

154. Машуров A.M. Генетические маркеры в селекции животных. // М., Наука. 1980.- 318 с.

155. Межжерин С.В., Балахнин И.А. Скорость роста и возрастная дифференцировка электрофоретических спектров гемоглобина у карпов с разными генотипами трансферрина. // Цитол. и генет. 1985. - 19, № 2. - С. 119-124.

156. Межжерин С.В., Козиненко И.И. Генетическая структура, возрастные изменения белковых спектров, иммунный статус и устойчивость к краснухе в популяциях карпов. // Генетические основы селекции животных. -Киев, 1986.-С. 61-62.

157. Мельченков Е.А., Демкина Н.В. Гетерогенность маточных стад веслоноса // Рыбоводство и рыболовство. — 2001, № 1. С. 77-78.

158. Михайлова С.Ш. Проблемы эколого-генетического мониторинга процессов доместикации рыб // Сб. науч. тр. / Вопросы генетического и экологического мониторинга объектов рыбоводства. М.: ВНИПРХ, 1992. -Вып. 68. -С. 3-11.

159. Московкин Л.И., Трувеллер К.А., Масленникова Н.А., Романова Г.И. Распределение типов трансферринов и картина эстераз у карпа. // Био-химич. генетика рыб. Л., 1973. - С. 120-128.

160. Московкин Л.И., Масленникова Н.А. Биохимическая генетика карпа. // Отчет МГУ по х/д N 6 с ВНИИПРХ./ М., 1974. 22 с.

161. Неборачек С.И., Межжерин С.В., Безруков В.Ф. Опыт использования генетических маркеров в подборе родительских пар канального сома (Ictalurus punctatus) в садковом хозяйстве при Киевской ТЭЦ-5. //Тез.докл. респ.науч.-техн. конф./Кишинев, 1982.- С. 104.

162. Нейфах А.А., Абрамова Н.Б. Регуляция активности ферментов в развитии животных. // Биохимич. и популяционная генетика рыб.-Л., 1979. -С.18-23.

163. Немова Н.Н., Руоколайнен Т.Р., Крупнова М.Ю., Высоцкая Р.У., Сидоров B.C. Влияние экологических факторов на лизосомные ферменты рыб. // Биол.ресурсы водоемов бас. Балт. моря. Вильнюс, 1987. - С. 134-135.

164. Ненашев Г.А., Рыбаков Ф.Ю. К вопросу о связи типов эстераз сыворотки крови белого и пестрого толстолобиков с хозяйственноценными признаками.//Изв. ГосНИОРХ.- 1976.- Т. 107.- С. 60-64.

165. Ненашев Г.А., Рыбаков Ф.Ю. Генетическое разнообразие трансферрина и его связь с хозяйственно-ценными признаками у белого и пестрого толстолобиков.// Изв. ГосНИОРХ.- 1978.- Т.130.- С.112-118.

166. Ненашев Г.А., Тихомирова Г.И. Динамика аллельных частот генов трансферрина, эстеразы и а-глицерофосфатдегидрогеназы у сеголеток карпа в процессе их выращивания на теплых водах. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1987. - № 261. - С. 60-65.

167. Никоноров Офицеров М.В., Витвицкая Л.В., Лоенко А.А. Неконтролируемый генетический отбор лососей. Л.В. Рыбное хоз-во. 1989. - № 1.- С. 54-55.

168. Никоноров С.И., Витвицкая Л.В. Эколого-генетические проблемы искусственного воспроизводства осетровых и лососевых рыб // М.: Наука, 1993.-254 с.

169. Осинов А .Г. Кумжа (Salmo trutta L., Salmonidae) бассейнов Черного и Каспийского морей: популяционно-генетический анализ. // Генетика.- 1988. Т.24. - Вып. 12. - С.2172-2186.

170. Осинов А.Г. К проблеме происхождения севанской форели Salmo ischchan Kessler: популяционно-генетический подход. // Ж. общ. биол.- 1990а. Т.51. - Вып.6. - С.817-827.

171. Осинов А.Г. Некоторые данные об уровне генетической изменчивости и дифференциации форелей (Salmo trutta L.) Таджикистана // Вест. МГУ, биол. Сер. 16. - № 1. - С. 37-41.

172. Офицеров М.В., Витвицкая Л.В., Никоноров С.И., Голованова Т.С. Влияние заводского выращивания на генетическое разнообразие атлантического лосося // Ворп. ихтиологии. 1989;. - Т. 29. - Вып.5. - С. 871-874.

173. Офицеров М.В., Мальдов Д.Г. IDHP-3* как маркер неустойчивости к факторам внешней среды у атлантического лосося // Докл. РАН. -1994.-338 (1).-С. 134-137.

174. Паавер Т.К. О полиморфизме миогенов и некоторых ферментов у карпа (Cyprinus carpio L.). //Биохимич. и попул. Генетика рыб. JL, 1979. -С. 162-166.

175. Паавер Т.К. Генетический полиморфизм белков амурского сазана. // Генет., селекция и гибридиз. рыб. Ростов-на-Дону, 1981. - С. 48-49.

176. Паавер Т.К. Биохимическая генетика карпа.// Таллин, Валгус. -1983.- 122 с.

177. Паавер Т.К. Внутривидовая генетическая изменчивость карпа и радужной форели по биохимическим маркерам.// Сб.науч.тр. ГосНИОРХ. -1987.-№ 261.-С.51-59.

178. Паавер Т.К. Электрофоретическая изменчивость белков и генетические особенности выращиваемых в СССР породных групп и стад радужной форели Salmo gairdneri. // Вопр. ихтиол. 1988. - № 4. - С. 595-603.

179. Паавер Т.К., Гросс Р.Э. Генетическая изменчивость выращиваемых в Эстонии стад карпа Cyprinus carpio L. // Генетика. -1990. № 7. - С. 1269-1278.

180. Павлов С.Д. Аллозимная изменчивости генетическая дивергенция тихоокеанских форелей (род Parasalmo) западной Камчатки // Генетика. -2000. -36, № 9. С. 1251-1261.

181. Пак И.В. Генетическая дифференциация популяции казахстанского карпа и ее селекционное значение // Автореферат канд. диссерт. М.: ВНИИПРХ.- 1991.-20с.

182. Пак И.В., Цой P.M. Предварительная оценка генетической структуры восточно-казахстанского стада карпов (Cyprinus carpio L.) по некоторым белковым системам сыворотки крови и белых скелетных мышц // Сб.науч.тр./ М.: ВНИИПРХ. 1982. - Вып. 33. - С. 91-103.

183. Пак И.В., Цой P.M. Влияние интенсивной селекции на изменение генетической структуры линий карпа при смене поколений // Генетика. -1989. T.XXV, № 9. - С. 1645-1651.

184. Панкова Т.А., Сержант JI.A. Полиморфизм трансферринов и миогенов у карпов и сазанов Краснодарского края. // Тез. докл. II Всес. совещ. по биохим. генет., кариологич. полиморфизму и мутагенезу у рыб (Ленинград, 14-17 марта 1978г.)./М., 1978. С. 45.

185. Паюсова А.Н., Целикова Т.Н., Дудник Л.В. Электрофоретический анализ белков трех видов растительноядных рыб. // Экологич. физиология и биохимия рыб. Т.1. Астрахань, 1979. - С. 40-42.

186. Паюсова А.Н., Целикова Т.Н. Рекомендации по использованию биохимических маркеров для идентификации гибридов между белым и пестрым толстолобиками.// М.: ВНИИПРХ. 1983. - 24 с.

187. Паюсова А.Н., Целикова Т.Р. Полиморфизм тетразолий-оксидазы и изменчивость частот аллелей у белого амура Ctenopharyngodon idella (Val.) (Cyprinidae) в разных районах СССР. // Вопр. ихт. 1986.- 26, № 2. - С.239-245.

188. Паюсова А.Н., Безруков В.Ф., Целикова Т.Н., Зюзин А.А., Демкина Н.В. Использование биохимических маркеров в генетических исследованиях и селекции растительноядных рыб. (Рекомендации).// М.: ВНИИПРХ.-1988а.-33 с.

189. Паюсова А.Н., Целикова Т.Н. Генетическая структура толстолобика, вывезенного из Вьетнама. //Генетика, 1993. -Т.29.-№10.-С. 1685-1696.

190. Паюсова А.Н., Целикова Т.Н., Зюзин А.А. Анализ роли отбора в преобразовании генотипического состава стад толстолобиков в период постэмбрионального онтогенеза.// Пробл. микроэволюции.-М., 19886. С. 3132.

191. Паюсова А.Н., Шубникова Н.Г. Морфометрические признаки и их связь с биохимическими маркерами у толстолобика из Вьетнама. // Науч. докл. высш. шк. Биол. н. 1986. - № 11. - С. 82-88.

192. Плохинский Н.А. Алгоритмы биометрии. // Изд-во МГУ.1980.- 150 с.

193. Полякова Н.Е., Олейник А.Г. Изоферменты эстеразы D у симы Oncorhynchus masu. // Генетика. 1988. - 24, № 6. - С.1130-1131.

194. Попов А.В. Полиморфизм альбуминов популяций волжской стерляди // Рациональные основы ведения осетрового хозяйства, Волгоград,1981, с.206-207.

195. Привезенцев Ю.А., Пилиев С.А. Проблема сохранения генофонда в рыбоводстве // Селекция рыб / М.: Агропромиздат, 1989. С.220-226.

196. Пустовойт С.П. Генетическая изменчивость некоторых популяций кижуча Oncorhynchus kisutch (Walb.) Северо-Востока СССР // Рукоп. деп. в ВИНИТИ 23.03.89. № 2007-В89.

197. Рафиков Х.С. К методу выявления генетических вариантов трансферрина, гаптоглобина и гемоглобина после диск-электрофореза в по-лиакриламидном геле // Лабор. дело. 1977. - № 12. -С. 746.

198. Рубан Г.И. Структура вида и экология сибирского осетра Asipenser baerii Brandt. Автореф. докт. дис. М.,1998. 49 с.

199. Рябова Г.Д. Гентика изоферментов лактатдегидрогеназы тихоокеанских лососей. // Автореферат канд. диссерт. М., 1977. - 30 с.

200. Рябова Г.Д., Демкина Н.В., Баранова Н.А., Илясов Ю.И. Исследование генетического полиморфизма сибирского обского осетра. // Актуальные вопросы пресн. Аквакультуры. Сб. научн. трудов. М.: ВНИРО. 2002. С. 117-120.

201. Салменкова Е.А., Малинина Т.В. Применение электрофоретиче-ских методов в популяционно-генетических исследованиях рыб.//Типовые методики иссл-я прод-ти видов рыб в пределах ареала. Вильнюс, Мокслас. -1976.-4.II.-С. 82-92.

202. Салменкова Е.А., Омельченко В.Т., Рослый Ю.С. Различие в генетической структуре летней и осенней рас амурской кеты. // Генет. в аква-культуре. Л., 1989. - С. 80-86.

203. Сапрыкин В.Г. Система трансферринов карпов Урала. // Проблемы генетики и селекции на Урале. Свердловск, 1977а.- С.172- 173.

204. Сапрыкин В.Г. Влияние отбора по темпу роста на распределение фенотипов и генные частоты у сеголетков уральского карпа.// Проблемы генетики и селекции на Урале. Свердловск, 19776.- С. 173-174.

205. Сапрыкин В.Г. Трансферрины сыворотки крови карпов из озера Урефты Челябинской области. // Тр. Перм. лаб. ГосНИОРХ. Пермь, 1977в.-Т.1.-С. 119-123.

206. Сапрыкин В.Г. Жизнестойкость сеголетков карпа с разными типами трансферрина при зимовке в термальных водах Верхнетагильской ГРЭС. //Тр. Перм. лаб. ГосНИОРХ. Пермь, 1977г - Т.1. - С.130-135.

207. Сапрыкин В.Г. Камера для высоковольтного электрофореза в по-лиакриламидном геле. // Тр. Перм. лаб. ГосНИОРХ. Л., 1979а. - Вып. 2. - С. 154-156.

208. Сапрыкин В.Г. Электрофоретические спектры трансферрина амурского сазана (предварительное сообщение). // Мат-лы Всес. науч. конф. по интенсиф. рыбоводства во внутр. водоемах Сев. Кавказа. Ростов-на-Дону, 19796. - С. 195-196.

209. Сапрыкин В.Г. Типы трансферринов и их связь с устойчивостью карпа (Cyprinus carpio L.) к кислородному голоданию. // Биохим. и по-пуляц. генетика рыб. Д., 1979в. - С. 157-161.

210. Сапрыкин В.Г. Изменчивость трансферрина некоторых представителей Cyprinus carpio L. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1980а. - Вып.160. -С. 70-74.

211. Сапрыкин В.Г. Корреляция трансферринов с ростом карпов в различных условиях среды. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 19806. - Вып. 153. -С. 100-104.

212. Сапрыкин В.Г. Усовершенствованный прибор для диск-электрофореза в вертикальной пластине полиакриламидного геля. // Рыбо-хоз. изучение внутр. водоемов. JL, 1981. - С. 50-53.

213. Сапрыкин В.Г. Изучение системы трансферрина у карпа Cyprinus carpio L. I. Результаты генетико-популяционного анализа. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1985а. - № 219. - С. 141-155.

214. Сапрыкин В.Г. Связь трансферринов с массой сеголеток карпа, выращенных при разном уровне интенсификации. // Экол. изуч. гидробио-нтов Урала. Свердловск, 19856. - С. 39-59.

215. Сапрыкин В.Г. Изучение системы трансферрина у карпа Cyprinus carpio L. И. Связь с некоторыми компонентами жизнеспособности. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1986. - № 254. - С.51-68.

216. Сапрыкин В.Г., Кашковский В.В. Связь трансферринов сыворотки крови с зараженностью карпов Dactylogyrus extensus и Ichtiophthirius multifilus. // Сб. науч. тр. Перм. лаб. ГосНИОРХ. Л., 1979. - Вып. 2. - С. 85-87.

217. Сапрыкин В.Г., Рожнева Л.Г. Дифференциальная смертность сеголеток карпа с разными типами трансферрина в период зимовки. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1980. - Вып. 160. - С. 74-79.

218. Сапрыкин В.Г., Русанов В.В. Влияние условий выращивания на рост карпов с разными типами трансферрина. // Сб. науч. тр. Перм. лаб. ГосНИОРХ.- Л, 1979. Вып. 2. - С.89-95.

219. Седов С.И. К вопросу о корреляции некоторых признаков с типами полиморфного белка крови (трансферрина) у сазана, карпа и их гибридов. // Биохимич. генетика рыб. -Л., 1973.-С.144-146.

220. Седов С.И., Кривасова С.Б. Сравнительный анализ внутривидовой гетерогенности рыб Каспия по полиморфизму белков крови.// Биохимич. генетика рыб. Л., 1973. - С. 183-186.

221. Семенова С.К., Слынько В.И. Электрофоретическое определение гибридов между атлантическим лососем и кумжей. // Генет. исслед. мор. гидробионтов./ Матер. 3 Всес. совещ. по генет., селекции, гибридиз. рыб. Тарту, 9-12 сент., 1986. М., 1987. - С. 164-173.

222. Семенова С.К., Слынько В.И. Полиморфизм белков в популяциях атлантического лосося (Salmo salar L.), кумжи (S. trutta L.) и их гибридов. // Генетика. 1988. - 24, № 3. - С. 548-555.

223. Сержант JI.A. Электрофоретические исследования трансферринов западноукраинских карпов, выращиваемых в условиях Краснодарского края. // Генет., селекция и гибридиз. рыб. Ростов-на~Дону, 1981.- С. 152.

224. Сержант JI.A., Панкова Т.А. Полиморфизм трансферринов и миогенов у карпов и сазанов Краснодарского края. // Биохимич. и попул. генетика рыб. Л., 1979. - С. 167-171.

225. Сержант Л.А., Сапрыкин В.Г. Генофонд трансферринов карпа разного происхождения. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1984. - № 217.- С. 4449.

226. Сержант Л.А. рыбоводно-биологическая характеристика коллекционных стад карпа // Автореф. канд. дис. / Краснодар, 1996.-28 с.

227. Серов Д.В., Никоноров С.И. Механизм и факторы генетического отбора по локусам лактатдегидрогеназы у севрюги Asipenser stellatus Pallas.// Пробл. микроэволюции. М.,1988.- С.39-40.

228. Скворцов В.Н., Сапрыкин В.Г. Устойчивость сеголетков карпа с разными типами трансферрина к кислородному голоданию. // Проблемы генетики и селекции на Урале.- Свердловск, 1977.-С.174-176.

229. Смишек Ян. Генетические исследования у карпа в ЧССР. // Сб.науч.тр./ М.: ВНИИПРХ. 1978. - Вып.20. - С. 140-148.

230. Созинов А.А. Полиморфизм белков и его значение в генетике и селекции. // М., Наука. 1985. - 250 с.

231. Сулей М.Э., Уилкокс Б.А. Биология охраны природы: ее задачи и проблемы. // Биология охраны природы. М.: Мир. - 1983. - С. 10-27.

232. Сулимова Г.Е. ДНК-маркеры в генетических исследованиях: типы маркеров, их свойства и области применения. //Успехи совр. биол., 2004. — Т. 124.- №3.-С.260-271.

233. Таммерт М.Ф. Вариабельность трансферрина у карпа Cyprinus carpio L. // Биохимич. генетика рыб. JL, 1973. - С. 138-140.

234. Таннер Р.Х., Мяртинсон М.А. Простой прибор для сравнительного электрофореза большого числа проб в вертикальном блоке полиакрила-мидного геля. // Биохим. и попул. генетика рыб. JL, 1979. - С. 142-146.

235. Танькин В.В., Борякин В.А. Промышленное разведение гибридов осетровых рыб // Сб. научн. тр. ГосНИОРХ. 1983, N 195, с. 43-49.

236. Таразевич Е.В. Рыбохозяйственная и генетическая характеристика лахвинского карпа. // Автореферат канд. диссерт. М.: ВНИИПРХ. -1993.-29 с.

237. Таразевич Е.В., Илясов Ю.И. Рыбохозяйственная характеристика лахвинского карпа. // Сб. научн. трудов/ М.: ВНИИПРХ. - 1992. - Вып.68. -С.30-36.

238. Тимофеев А.В. Время проявления генов глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы у вьюна (Misgurnus fossilis). // Биохимич. и популяци-онная генетика рыб. JL, 1979. - С.24-28.

239. Тимофеев А.В., Нейфах А.А. Распределение активности глюкозо-6- -фосфатдегидрогеназы в зародышах вьюна в процессе развития. // Онтогенез. 1982. - Т. 13, № 5. - С. 530-533.

240. Тихомирова Г.И. Тканевая специфичность и наследование глюко-зо-6-фосфатдегидрогеназы у карпа (Cyprinus carpio L.). // Генетика. 1983.-Т.19, № 10. - С.1654-1659.

241. Тихомирова Г.И. Изозимные спектры и наследование электрофо-ретических вариантов фосфоглюкомутазы у Kapna(Cyprinus carpio L.). // Генетика. 1984а. - Т.20, №5. - С.821-825.

242. Тихомирова Г.И. Множественные формы s-малатдегидрогеназы и их наследование у карпа (Cyprinus carpio L.). //Генетика. 19846. - Т.28, № 5. - С.817-820.

243. Томиленко В.Г., Алексеенко А.А., Панченко С.М. и др. О зимо-устойчивости помесных и гибридных сеголетков карпа // Рыбн. хоз-во. — 1977.-№2.-С. 17-19.

244. Трувеллер К.А., Московкин Л.И., Масленникова Н.А., Акоев Н.Н. Биохимическая генетика карпа.// Отчет по х/д, МГУ. 1972.

245. Трувеллер К.А., Масленникова Н.А., Московкин Л.И., Романова Н.И. Изменчивость электрофоретической картины миогенов у карпа Су-prinus carpio L. //Биохим. генетика рыб.-Л., 1973.-С.113-118.

246. Трувеллер К.А., Московкин Л.И., Масленникова Н.А. Гибридологический анализ электрофоретических спектров эстераз карпа Cyprinus carpio L.// Сб.научн.трудов / М.:ВНИИПРХ. 1974. - Т. 23. - С.3-9.

247. Трувеллер К.А., Нефедов Г.Н. Многоцелевой прибор для вертикального электрофореза в параллельных пластинах полиакриламидного геля.// Докл. высш. школы, сер. биол. науки. 1974. - № - С. 137-140.

248. Турунина Н.В. Изменение эстеразной активности под действием некоторых фосфорорганических соединений. // Тез.докл. 1 Всес.конф. по рыбохоз. токсикол., Рига, дек. 1988./Рига, 1989. С.160-161.

249. Франклин Я.Р. Эволюционные изменения в небольших популяциях. //Биология охраны природы. М.: Мир. - 1983. - С. 160-176.

250. Цветкова Л.И., Докина О.Б., Пронина Н.Д., Миленко В ^.Технология криоконсервации и хранения в низкотемпературном банке спермы рыб // Сб. научно-технической документации по аквакультуре. / М.: ВНИРО, 2001. С.152-157.

251. Цветненко Ю.Б., Чихаев А.С., Бояркин В. А.// Генет. исслед. мор. гидробионтов: Матер. 3. Всес. совещ. по генет., селекции и гибридизации рыб. Тарту, сент. 1986. -М., 1987. -С. 23-36.

252. Цеков А. Полиморфные генетические системы мышечных миогенов карпа и возможности практического использования их в селекции в Болгарии. // Выращивание посадочного мат-ла рыб промышл. методами. / Мат-лы семинара СЭВ. Сазхаломбата, 1981.

253. Чернова В.И., Медведев В.И., Мухачев И.С. Генетическая изменчивость в шести ферментных системах двух видов карасей. // Тез.докл. 1 симп. по экол. биохимии рыб, Ярославль, окт. 1987. / Ярославль, 1987.-С. 209-211.

254. Черфас Н.Б., Трувеллер К.А. Исследования по диплоидному радиационному гиногенезу у карпа. Сообщение 3.//Генетика. 1978. - Т. 14. -С. 599-604.

255. Чихаев А.С. Комплексные исследования причин полиморфизма белков у рыб // Экологическая физиология и биохимия рыб. Киев, научн. зумне. 1982. Часть 4. - С. 33-35.

256. Чихаев А.С. Адаптационная и селективная ценность полиморфных белков у рыб // Тез.докл. 6 Всес. конф. По экологической физиология и биохимия рыб. Вильнюс, 1985, с. 262-263.

257. Чихачев А.С. Основы физиолого-биохимического и генетического мониторинга объектов марикультуры. // Рыбное хоз-во. -1991. № 12. -С.57-58.

258. Чихачев А.С., Цветненко Ю.Б. Оценка влияния искусственного воспроизводства и интродукции на генетическую структуру популяции азовских осетровых. // Воспр. рыб. запасов Касп. и Азов, морей. М., 1984. - С. 114-125.

259. Чихачев А.С., Цветненко Ю.Б., Поляруш В.П. Биохимический полиморфизм у растительноядных рыб. // Растительнояд. рыбы в пром. рыбоводстве. Ташкент, 1980. - С. 198.

260. Чутаева А.И., Лазовский А.А. Домбровский В.К. Частота аллелей наследственных типов трансферринов как показатель селекционной работы с карпом.// Вопросы рыбн. хоз-ва Белоруссии. 1973. - Т.9 - С. 50-54.

261. Чутаева А.И., Лазовский А.А., Домбровский В.К. Наследственные варианты эстеразы сыворотки крови у 3-х отводок белорусского карпа. //Вопросы рыбн. хоз-ва Белоруссии. 1974. - Т. 10. - С. 117- 120.

262. Чутаева А.И., Домбровский В.К., Гузюк С.Н., Лазовский А.А. Полиморфизм изобелинского карпа по некоторым белковым системам.// Основы биопродуктивности внутр. водоемов Прибалтики. Вильнюс, 1975. - С. 311-313.

263. Шарт JI.A., Илясов Ю.И. О типах трансферринов и эстераз у про изводителей карпа (Cyprinus carpio L.), селекционируемых на устойчивость к краснухе. //Биохим. и попул. генетика рыб. JL, 1979. - С. 147-151.

264. Шилин Н.И. Роль красной книги Рф и красных книг субъектов РФ в сохранении разнообразия осетровых России //Тез. докл. межд. конф. "Осетровые на рубеже XXI века" (Астрахань, 11-15 сент. 2000 г.) /Астрахань, 2000. С.33-34.

265. Щеглова Н.В., Илясов Ю.И. К вопросу об эстеразах у карпа. // Биохимич. и популяц. генетика рыб. Л., 1979. - С. 176-180.

266. Щепкин В.Я., Эмеретли И.В. Сезонные изменения активности лактатдегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы в тканях рыб с разными эко-лого-физиологическими особенностями. // Ж. эволюц. биохимии и физиол. -1986.-22, №6.-С. 532-536.

267. Щербенок Ю.И. Связь полиморфных систем эстераз и трансферринов с хозяйственно важными признаками у карпа. // Биохимич. генетика рыб.-Л., 1973.-С. 129-137.

268. Щербенок Ю.И. Гибридологический анализ наследования эстераз и трансферринов сыворотки крови ропшинского карпа. // Изв. ГосНИОРХ. -1976.-Т. 107-С. 48-53.

269. Щербенок Ю.И. Об идентичности типов трансферринов карпа различных популяций. //Тез.докл. II Всес. совещ. по биохим. генетике, ка-риологич. полиморфизму и мутагенезу у рыб (14-17 марта 1978 г., Ленинград)./ М., 1978а. С.55.

270. Щербенок Ю.И. Отбор на устойчивость к дефициту кислорода личинок карпа с разными генотипами трансферринов и эстераз. // Изв. ГосНИОРХ. 19786. - Т. 130.-С. 107-111.

271. Щербенок Ю.И. Анализ биохимического полиморфизма отводок местного и немецкого карпов в Черепецком тепловодном хозяйстве. // Сб. науч.тр. ГосНИОРХ. 1980а. - Вып. 150. - С. 58-65.

272. Щербенок Ю.И. Естественный отбор по трансферриновому и эс-теразному локусам ропшинского карпа в период зимовки. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 19806. - Вып. 153. - С. 94-99.

273. Щербенок Ю.И. Полиморфизм белков и генетическое маркирование вьетнамского карпа. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1986. - № 250. - С. 6670.

274. Щербенок Ю.И., Галанов О.А. Генетическая изменчивость некоторых белков карпа трех породных групп. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1985. -№219.-С. 133-140.

275. Щербенок Ю.И., Зонова А.С. О генетическом дрейфе при селекции карпа. // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. N 254. - С. 69-76.

276. Щербенок Ю.И., Пустовойт С.П. Изменчивость эстераз сыворотки крови карпа.// Генетика, селекция и гибридизация рыб. Ростов-на-Дону, 1981.-С. 57-58.

277. Яковенко Б.В., Грубинко В.В., Явоненко А.Ф. Малат-, лактат-, и сукцинатдегидрогеназная активность печени и белых мышц карпа в период зимовки. // Рукоп.,депонир. в ВИНИТИ. 21.04.89. - № 2646- В89.

278. Aebersold Р.В., Winans G.A., Teel D.J. et al. Manual for starchgel electrophoresis: A method for the detection of genetic variatin / NOAA Tecnical reports NMFS 61. 1987. P. 1-19.

279. Al-Hassan L.A.J., Webb C.J., Giama M., Miller P.J. Phosphoglu-cose isomerase polymorphism in the common goby, Pomatoschistus microps (Kroyer) (Teleostei: Gobiidae), around the British Isles. // J.Fish.Biol. 1987. -30, №3.-P. 281-298.

280. Beardmore J.A., Ward R.D. Polymorphism, selection and multilo-cus heterozygosity in the plaice, Pleuronectes platessa L. // Lect. Notes in Bio-mathematics. Berlin-Heidelberg, New York, 1978. V. 19. - P. 207-222.

281. Benedictis De P.A. Are populations characterized by their genes or by their genotypes? //The american Naturalist. 1978. - V.l 12, N 983. - P. 155175.

282. Birstein V.J., Hanner R., DeSalle R. Phylogeny of Acipenseriformes: cytogenetic and molecular approaches// Environment.Biol.Fish.-1997.- V.48.-P.127-155.

283. Bradley J., Grizzle J. Vitellogenin induction by estradiol in channel catfish, Ictalurus punctatus. // Gen. and Сотр. Endocrinol. 1989. - 736 № 1. -P. 28-39.

284. Brody Т., Moav R., Abramson Z.V., Hulata G., Wohlfart G. Application of electrophoretic genetic markers to fish breeding. П. Genetic variation within maternal half-sibs in carp. // Aquaculture. 1976. - 9, № 4. - P. 351365.

285. Brody Т., Kirsht D., Parag G., Wohlfarth G., Hulata G., Moav R. Biochemical genetic comparision of the Chinese and European rases of the common carp. // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. 1979. - V. 10, № 3. -P. 141-149.

286. Carlson D.M., Kettler M.K., Fisher S.E., Whitt G.S. Low genetic variability in puddlefish populations. // Copeia. 1982. - №3. -P.721-725.

287. Cautier A. Evolution et domestication/// Bull. Soc. Beige geol. 1983. -T.92.-№1/-P. 23-29.

288. Clayton J.W., Tretiak B.N. Amine-citrate buffers for pH control instarch electrophoresis // J. Fish. Res. Bd. Can.- 1972. -V. 29.-P. 1169-1172.

289. Creyssel R., Silberzahn P., Richard G., Manuel Y. Etude du serum carpe (Cyprinus carpio L.) par electrophorese en del d'amidon. // Bull. Soc. Chim. Biol. 1964. -46, № 1.-P.149-159.

290. Creyssel R., Richard G., Silberzahn P. Transferrin variants in carp serum. //Nature. 1966. - 212, № 5068. - P. 1362.

291. Czepai F. A togazdasagi ponty plasmafeherjeinek PAGE modezerrel megallapitott nehany alapadata. // Maquar allatorv. Lapja. 1980. - T. 35, № 11.-P. 783-786.

292. Engel W., Faust J., Wolf U. Isoenzyme polymorphism of the sorbitol dehydrogenase and the NADP-depended isocitrate dehydrogenase in the fish family Cyprinidae. // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. 1971. -№ 2. - P. 127-133.

293. Engel W., Schmidtke J., Vogel W., Wolf U. Genetic polymorphism of lactate dehydrogenase isoenzymes in the carp (Cyprinus carpio) apparently due to a "null allele". //Biochem. Genet. 1973. - 8, № 3. - P. 281289.

294. Ferguson A. Genetic differences among brown trout, Salmo trutta, stocks and their importance for the conservation and management of the species. // "Freshwather Biol." 1989. - 21, № 1. - P. 35-46.

295. Ferris S.D., Whitt G.S. Loss of duplicate gene expression after polip-loidisation//Nature. -1977.- V.265.- P.258.

296. Ferris S.D., Whitt G.S. Evolution of the differential regulation of duplicate genes after polyploidization // J. Mol. Evol.- 1979.

297. Fisher S.E., Shaklee J.B., Ferris D.S., Whitt G.S. Evolution of live multilocus isozyme systems in the chordates. /Genetica, 1980.-V.52/53/ P. 7385.

298. Fukayama S., Takahashi H., Matsubara Т., Нага A. Profiles of the female-specific serum protein in the Japanese river lamprey, Lampetrajaponica

299. Martens), and the sand lamprey, Lampetra reissneri (Dybowski), in relation to sexual maturation. // Сотр. Biochem. and Physiol. 1986. - V.84, №1.-P.45-48.

300. Hendecock D., Shleser R., Nelson K. Applications of biochemical genetics to aquaculture. //1. Fish.Res.Board.Can. 33 (4). - Part 2. - P. 1108-1119.

301. Herschberger W.K. Some physicochemical properties of transferrins in brook trout. // Trans. Amer. Fish. Soc. 1970. - 99, № 1. - P.207-218.

302. Hinterleitner S., Platzer U., Wieser W. Development of the activities of oxidative, glicolytic and muscle enzymes during early larval life in three families of freshwater fish. // J. Fish. Biol. 1987.-30, №3.-P. 315-326.

303. Horowitz J.J., Whitt G.S. Evolution of a Nervous System specific Lactate Dehydrogenase Izozyme in Fish // J/Exper. Zool. ,1972. -V. 180. -№1.- P. 13-32.

304. Markert C.L., Shaklee S.B., Whitt G.S. Evolution of a gene. //Science,1975.-V.189.-P. 102-144.

305. Mc Inture J.D., Johnson A.K. Relative yield of two transferrin phenotypes in coho salmon. // Progr. Fish Cult. 1977. - V. 39, № 2. - P. 175177.

306. Jones H., Perkins D. Metal-ion binding of human transferrin. // Biochem. and Biophys. Acta. // 1965. V. 100, N 1.

307. Kalal L. Prakticke vyuziti transferinu ke slechteni ryb.// Nas Chov. -1977.-C. 365-366.

308. Kimura M., Ohta Т. Protein polymorphism as a phase of molecular evolution. //Nature. Lond., 1971. - 229. - P. 467- 469.

309. King J.N., Jukes Т.Н. Non-Darvinian evolution: Random fixation of selectively neutral mutations. // Science. 1969. - V. 164, № 3881. - P. 788-798.

310. Kirpichnikov V.S., Ilyasov You.I. et.al. Selection of carp resistans to dropsy: results and prospects.// Inter. Symp. On coldwather fish culture (ISCFC). China, 19-23 sep. 1989. / Aquaculture. 1991. - P. 26-34.

311. Koljonen Maria-Liisa. Electrophoretically detectable genetic variation in natural and hatchery stocks of Atlantic salmon in Finland. // Hereditas. 1989.110, № l.-P. 23-25.

312. Leary F.M., Allendorf F.M., Knudsen K.L. Superior developmental stability of hetrozygotes at enzyme loci in salmon fishes. // Amer. Natur. 1984. - V. 124. - P. 540-551.

313. Levontin R.C. Genetic heterogeneity of electrophoretic alleles.// In: XIV Intern. Congr. genet., Contrib. Pap. Session, Abstr. Moskow, 1978. - 1.-P.467.

314. May В., Krueger C.C., Kincaid H.L. Genetic variation at microsatellite loci in sturgeon: primer sequence homology in Acipenser and Scaphirhynchus // Can.J. Aquat.Sci, 1997.- V.54. -P.1542-1547.

315. Marian Т., Krasnai Z., Bakos J. Transferrin polimorfizmus vizsgalat eredmenye magyarorszagi potypopulaciokban. // Halaszat. 1984. - 30, № 4. -112-113.

316. Mitton J.B., Grant M.C. Associations among protein heterozygosity, growth rate and developmental homeostasis. // Annu. Rev. Ecol. Syst.1984.-V. 15. -P. 479-499.

317. Mitton J.B., Koehn R.K. Genetic organization and adaptive response of allozymes to ecological variables in Fundulus heteroclitus. // Genetics. -1975.-V. 79, № 1. P.97-111.

318. Mitton J.B., Pierce B.A. The distribution of individual heterozygosity in natural populations.// Genetics. 1980. - V.95. - №4. - P.1043-1054.

319. Moav R., Hulata G., Wohlfarth G. Genetic differences between the

320. Chinese and European races of the common carp. // Heredity. 1975. - V. 34, № 3.-P. 323-330.

321. Moav R., Brody Т., Wohlfarth G., Hulata G. Applications of electro-phoretic genetic markers to fish breeding. I. Advantages and methods. // Aquacul-ture.- 1976.- V.9, № 3.- P. 217-228.

322. Nakajima M., Kita A., Fujio Y. genetic features of natural and cultured populations in masu salmon// Tohoku.j/Agr. Res. 1986. - V. 37. - №1-2. -P. 3142.

323. Nei M. Genetic distance between populations. // Amer. Natur. -1972. V. 106, N 949. - P. 283-292.

324. Nemcsok J., Asztalos В., Vig E., Orban L. The effect of an organophosphorous pesticide on the enzymes of carp (Cyprinus carpio L.). // Acta Biol, hung. 1987. - 38 , № 1. - P. 77-85.

325. NevoE., Bailes A., Ben-Shlomo R. The evolutionary significance of genetic diversity: ecological, demographic and life history correlates. // Evolutionary dynamics of genetic diversity. Haifa, 1984. - P. 13-213.

326. Norris A.T., Bradley D.G., Cunningham E.P. Microsatellite genetic variation farmed and wild Atlantic salmon (Salmo salar) populations // Dep. of Genetics, Trinity Col. Dublin 2. -1999. -180, 3-4. -247.

327. Peacock A.C., Bunting S.L., Queen K.G. Serum protein electrophoresis in acrylamide gel// Science. 1965. -V.147. P. 1451-1453.

328. Pfeiler E., Vrijenhoek R. Differential expression of the C4 isozyme of lactat dehydrogenase in developing bonefish (Albula sp.). // J.Exp. Zool. -1988.-246, №3.-P. 324-327.

329. Powers D., Greaney G., Place A. Physiological correlation between lactate dehysrogenase genotype and haemoglobin function in killifish. // Nature. -1979. 277, № 5693. - P. 240-241.

330. Reichenbach-Klince H.-H. Investigations on the serum polymorphism of trout and carp. // Genet, and Mutagenet. Fish.- Berlin e.a., 1973. P. 315-318.

331. Reinitz G.L. Inheritance of muscle and liver types of supernatant NADP-dependent isocitrate dehydrogenase in rainbow trout (Salmo gairdneri). -Biochem. Genet. 1977a. - 15, № 5- 6. - P. 445-454.

332. Reinitz G.L. Test for association of transferrin and lactate dehydrogenase phenotypes with weight gain in rainbow trout (Salmo gairdneri). // J. Fish Res. Bd. Can.- 19776.- V.34, № 12.- P. 2333- 2337.

333. Renaud С.В., Speers L.I., Qadri S.U., Mc Alister D.E. Biochemical evidance of speciation on the cod genus Gadus. // "Can. J. Zool." 1986. - 64, № 7.-P. 1563-1569.

334. Shaklee J.B., Kepes K.L., Whitt G. Specialized LDH isoenzymes: the molecular and genetic basis for the unique eye and liver LDH-s of teleost fishes. // J.Exptl. Zool. 1973. - V.185, N2. -P.217-240.

335. Shearer R.D., Mulley J.C. The Introduction and Distribution of the Carp, Cyprinus carpio L. in Australia. // Aust. J. Mar. Freshwather Res. 1978. -V. 29.-P. 551-563.

336. Smisek I. Vyuziti transferrinu v plemenitbe karpa. // Bule- tin VURH. -Vodinany, 1973. V. IX, № 1. - S. 19-24.

337. Starmach J. Electrophoretic separation of blood serum proteins on polyacrylamide gel in seven carp families. Acta hydrobiol. 1977. - 19, N 2.-P. 163-167.

338. Stratil A., Bobak В., Valenta M. Partial characterization of transferrins of some species of the family Cyprinidae. Сотр. Biochem. Physiol. — 1983. -Vol. 74B. №. 3. - P. 603-610.

339. Sugama К., Taniguchi N., Umeda S. An experimental study on genetic drift in hatchery population of red sea bream. // Bull. Jap. Soc. Sci. Fish. 1988. -54, №5.-P. 739-744.

340. Suzumoto B.K., Schreck C.E., Mc. Inture J.D. Relative resistance of three transferrin genotypes of coho salmon (Oncorhynchus kisutch) and their hematological responses to bacterial kidney disease. // J. Fish Res. Bd. Can.- 1977.-34, № l.-P. 1-8.

341. Szmyt E. Polimorphizm transferini u tarlakoow i kroczkow karpia. // Rocz. Nauk. robn. Ser.H. 1984. - B.100, № 4.-S.135-142.

342. Taggart J.B., Ferguson A. Electrophoretic evaluation of a supplemental stocking programme for brown trout, Salmo trutta L. / / " Aquacult. and Fish. Manag." 1986. - 17, № 2. - P. 155 -162.

343. Tako I. Carp. //Сайсю то сиику, Collect, and Breed. 1987. - 49, №8.-P. 355.

344. Тодоров M., Яблански Ц., Стайков Й. Трансферинови типове при културния шаран (Cyprinus carpio L.). // Генет. и селекция (НРБ). 1984. - 17, №4. - С. 230-234.

345. Тодоров М., Яблански Ц., Стайков Й. Трансферинови типове и ек-стериорни признаци при Cyprinus carpio L. // Генет. и селекция (НРБ). -1985.- 18, №2.-С. 152-156.

346. Utter F.M., Hodgins Н.О., Allendorf F.M. Biochemical genetic studies of fishes: potentialities and limitations. // Biochem. and biophys. respect, in mar. biol. London, New York, 1975.-V. 1. - P. 213-234.

347. Valenta M., Kalal L. Polymorphisms serovych transferrinu u karpa (Cyprinus carpio L.) a lina (Tinea tinea L.). //Sb. VZZ Fak Agron. Rada, Ser B. -Praga, 1968.-P. 93-103.

348. Valenta M., Stratil A., Slechtova V., Kalal K., Slechta V. Polymorphism of transferrin in carp (Cyprinus carpio L.): genetic determination, isolation and partial characterization. // Biochem. Genet. 1976. - V. 14, № 1-2. - P. 27-45.

349. Valenta M., Kalal K., Stratil A. Polymorphism and heterogeneity of transferrin in some species of the fish family Cyprinidae. // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. 1977. - V. 8, № 1. - P. 93-109.

350. Vrijenhoek R.C., Lerman S. Heterozygosity and developmental stability under sexual and asexual breeding systems. // Evolution. 1982. - V.36. -№ 4. - P. 768-776.

351. Vuorinen J., Luczynski M., Falkowski S. Hybiydyzacja siei i pelugi. II. Biochemiczna identyficacja narybku gatunkow rodzicielskich i ich hybry-dow. // Gosp. ryb. 1988. - 40, № 8-9. - C. 9-10.

352. WalawskiK. Relationship between transferrin polymorphism and the growth rate of carp (Cyprinus carpio L.). // Polske Arch. Hydrobiol. 1987. - N7 34, № 2. - P. 255-266.

353. Walawski K., Zyczko K., Biallowicz E., Sajjad I., Szczerbuk K.

354. The relationship between transferrin polymorphism and scale covering in carp (Cyprinus carpio L.). // Genet, pol. 1985. - 26, № 3. - P. 375-381.

355. Whitler R.E. Genetic consequences of Fertilizing Chinook Salmon (Oncorhynhus tsawytsha) Eggs with Pooled Milt. // "Aquaculture". 1988. -68, № l.-P. 15-25.

356. Рис. Эяектрофореграммы общего спектра белков крови у карпа. Альбуминовые фракции (Alb) разрушены многократным размораживанием проб сыворотки и на электрофореграмме находится ниже зоны активности трансферринов (Tf).,9 ф 9 Л- 9

357. Полиморфизм трансферрина в стадах сазана

358. Группа, происхождение Частоты аллелей трансферрина А Авторыа а ъ с > с d е z У X IR*

359. Ам. сазан (Украина, из р. Амур ) 0.12 0.09 0,150 - 0,640 - - - - - 4 Балахнин, Романов, 1971

360. Ам. сазан («Сус-кан» из Хаб. края) 0,450 0,070 0,160 0,050 0,120 0,130 0,010 - 23** Сапрыкин, 19796

361. Ам. сазан («Пара» из р. Амур ) 0,304 0,139 0,207 0,028 0,042 - 0,168 0,112 - - 7 Московкин, Масленникова, 1974

362. Ам. сазан («Пара» из р. Амур ) 0,380 0,120 0,25 0,040 - 0,190 0,020 - - 7 Трувеллер и др., 1991

363. Ам. сазан («Вилей-ка» из оз.Ханко) 0,230 0,210 0,280 - 0,00 - 0,05 0,050 0,080 - 7 Трувеллер и ДР., 1991

364. Ам. сазан ( из низовьев р. Амур) 0,160 0,020 0,200 0,020 - 0,020 0,020 - 0,560 30*** Сапрыкин, 1985а

365. Ам. сазан (Якоть» из р. Амур) 0,374 0,0 0,115 0,256 0,0 0,104 0,025 0,010 0,115 0,374 0,0 0,115 Демкина (1980)

366. Примечание: * ZR Сумма частот «редких» аллелей ,**-аллели и а, и с не разделены ***-в общее число аллелей включены варианты с промежуточной электрофоретической подвижностью, характер наследования которых не подтвержден гибридологическим анализом.к Й