Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические характеристики антиоксидантной защиты организма собак

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические характеристики антиоксидантной защиты организма собак"

На правах рукописи

Вахта Алеся Александровна

БИОХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ ОРГАНИЗМА СОБАК.

03 00.04 - Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2008

003163413

Работа выполнена на кафедре органической и биологической химии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины»

Научный руководитель- доктор биологических наук, профессор

Карпенко Лариса Юрьевна

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор

Кармолиев Рафик Хакимович. кандидат биологических наук Бардюкова Татьяна Владимировна

Ведущая организация Институт сельского хозяйства и природных ресурсов (в составе Государственное образовательное учреждение высшего

профессионального образования «Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого»)

заседании диссертационного совета Д 220 042 04 при ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им К И Скрябина» (109472 г Москва ул Академика Скрябина д.23 тел. 377-93-83). С диссертацией можно ознакомится в библиотеке академии

Защита диссертации состоится

Автореферат разослан Ийр //чтоу mgavm.ru

г и размещен на сайте

Ученый секретарь Диссертационного совета

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ. 1.1.Актуальность проблемы. Свободнорадикальное окисление в норме является одним из необходимых факторов гомеостаза (Владимиров Б А, Азизова О А , Деев А И, 1991, Арутюнян и др, 2000, Хавинсон и др, 2003) Однако в настоящее время считается доказанным, что избыточное накопление продуктов свободнорадикального и перекисного окисления является также важным этиологическим фактором возникновения ряда хронических болезней (Журавлев А И, 1982,Осипов АН идр 1990, КармолиевРХ,2002)

В последние годы большое внимание уделяется изучению механизмов генерации и распространения свободных радикалов и возможности регуляции противостояния организма окислительному стрессу, так как возможность минимизовать окислительное повреждение клеток, позволяет снизить восприимчивость их к ряду патологических состояний (Зайцев ВГ, 1985, Эммануэль НМ, 1982, Меерсон ФЗ, 1989, Соколовский ВВ, 1993, Анисимов В Н ,2000,Скулачев В П, 2006)

Однако, вопрос о механизме генерации свободных радикалов в организме такого вида животных, как собака, а также вопрос о антирадикальной защите у этих животных изучен относительно мало

Имеющиеся немногочисленные данные, подтверждающие тот факт, что состояние антиоксидантной защиты зависит от породы, возраста и физиологического состояния (Hill RC et al ,1999, Harper EJ et al,1999, Анисимов В H и др, 1999) Однако данный вопрос изучен недостаточно, поэтому представляет интерес дальнейшее изучение состояния антиоксидантного статуса организма собак и выявление закономерностей, позволяющих влиять на ход патологических процессов, возникших в результате повреждающего действия окислительного стресса

Также представляет интерес изучение влияния лекарственных препаратов, обладающих антиоксидантным действием на организм при коррекции ряда состояний, сопровождающихся окислительным стрессом

1.2.Цели и задачи исследования. Целью наших исследований явилось изучение интенсивности процессов перекисного окисления липидов и состояние параметров антиоксидантной системы у собак крупных служебных пород в зависимости от возраста, а также изменение этих показателей при применение микроэлементного препарата «Гемовит»

Для решения поставленной цели были определены следующие задачи изучить возрастные изменения содержания продуктов перекисного окисления в сыворотке крови здоровых собак крупных служебных пород (первичных продуктов - диеновых конъюгатов и вторичных - малонового диальдегида, диенкетонов), изучить возрастные изменения активности антиоксидантных ферментов в сыворотке крови здоровых собак крупных служебных пород (активность супероксидцисмутазы, каталазы), изучить возрастные изменения содержания витаминов А, Е, С в сыворотке крови здоровых собак крупных служебных пород, изучить возрастные изменения содержания микроэлементов в сыворотке крови здоровых собак крупных служебных пород (содержание железа, меди), изучить влияние микроэлементного препарата «Гемовит» на интенсивность процессов перекисного окисления липидов путем определения продуктов перекисного окисления (малонового диальдегида, диенкетонов, диеновых конъюгатов), изучить влияние микроэлементного препарата «Гемовит» на активность антиоксидантных ферментов сыворотки крови собак (активность супероксиддисмутазы, каталазы), изучить влияние микроэлементного препарата «Гемовит» на концентрацию меди и железа

1.3.Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые определены показатели процессов перекисного окисления липидов здоровых собак крупных служебных пород, изменение данных показателей в

зависимости от возраста, показатели антиоксидантной защиты (активность СОД и каталазы, концентрацию витаминов А, Е, С) здоровых собак крупных служебных пород, изменение данных показателей в зависимости от возраста, впервые выявлено влияние применения препарата «Гемовит» на интенсивность процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантный статус организма собак, разработаны рекомендации по профилактике возрастного окислительного стресса у собак старше 7 лет с применением микроэлементного препарата «Гемовит»

1.4.Теоретическая и практическая значимость работы.

Выполненное исследование содержит решение актуальной проблемы -выяснение особенностей биохимических характеристик антиокисдантной защиты организма собак

Определение возрастного периода, характеризующегося снижением антиоксидантного статуса организма собак, позволит грамотно проводить коррекцию окислительного стресса и, тем самым, будет способствовать снижению риска развития и прогрессирования ряда патологических состояний, а также замедлить процессы интенсивного старения

Выявленное антиоксидантное действие препарата «Гемовит» позволяет рекомендовать данный препарат для коррекции и терапии состояний, сопровождающихся окислительным стрессом, в'частности, применение данного препарата у стареющих собак

По материалам собственных исследований издано методическое руководство «Характеристика антиоксидантной системы мелких домашних животных» (соавтор Карпенко Л Ю )

Результаты исследований реализованы в практике обучения студентов по дисциплинам биологическая химия и физиология сельскохозяйственных животных в ФГУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», а также в лечебно-профилактической и

диагностической работе ветеринарных клиник г. Санкт-Петербурга (соответствующие документы приложены к диссертации).

Материалы по изучению влияния микроэлементного препарата «Гемовит» использованы при подготовке документации для заявки на патент приоритет № 2007103767 от 01 02 2007 1.5.0сновные положения, выносимые на защиту:

1 Характеристика процессов перекисного и свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной защиты организма собак крупных служебных пород в зависимости от возраста

2 Влияние микроэлементного препарата «Гемовит» на состояние антиоксидантной защиты организма собак

1.6. Апробация Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе» (СанктПетербург,2004), XVI Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург,2004), П Международной межвузовской научно- практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке» (Санкт-Петербург,2004), конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины Белые ночи-2005» (Санкт-Петербург,2005), I конференции Северо-Западной ветеринарной ассоциации (Санкт-Петербург, 2005), научно-практической конференции молодых ученых и аспирантов ВБФ Московской государственной академии ветеринарной медицины им К И Скрябина «Современные проблемы биохимии и биофизики в биологии и медицине» (Москва, 2005), 1 международной конференции «Современный взгляд на проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Санкт-Петербург, 2005), 3 Международном симпозиуме «Физиологические основы повышения продуктивности млекопитающих, введенных в

зоокультуру» (Петрозаводск, 2005), Ветеринарном конгрессе по мелким домашним животным «Зоосфера 2006» (Санкт-Петербург, 2006), 4-ой Российской ветеринарной конференции «Современный взгляд на проблемы ветеринарной медицины», (Санкт-Петербург,2006), II Международной хирургической ветеринарной конференции (Санкт-Петербург, 2006), Всероссийской научно-практической конференции «Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, состоянием рациона, продуктивности, экологии, этологии» (Казань, 2006), на первой эндокринологической конференции ( Санкт-Петербург, 2007), ХШ, XIV, XV, XVI Международных Московских конгрессах по болезням мелких домашних животных (Москва,2004, 2005, 2006, 2007), научных международных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (Санкт-Петербург,2005 г, 2006 г, 2007 г ), 58,59,60,61 научных конференциях молодых ученых и студентов СПбГАВМ (Санкт- Петербург,2004, 2005, 2006, 2007), международной научно-практической и учебно-диагностической конференции «Актуальные проблемы диагностики внутренних незаразных болезней и терапии животных» (Витебск, 2007)

1.7.Публикаиии. По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ (три из которых в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ), одно методическое руководство и одни рекомендации

1.8.Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, главу материал и методы исследования, главы, отражающие результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические рекомендации Работа иллюстрирована 8 таблицами и 8 рисунками Указатель литературы включает 209 литературных источников, из которых 116 отечественных и 93 иностранных работ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Работа была выполнена на кафедре биохимии ФГУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» и питомниках ФГУ следственного изолятора № 5 (г.СПб п Горелово, ул Заречная, путик), ГУ исправительная колонии № 7 (г СПб, дача Долгорукова)

В первой части работы проведены исследования по изучению возрастных изменений показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантного статуса организма собак крупных служебных пород.

Исследования проводили на клинически здоровых кобелях крупных служебных пород (немецкие, кавказские, среднеазиатские овчарки), в возрасте 1-ого - 2-х, 3-х, 5-и, 7-и, 9-и лет В каждой возрастной группе количество животных 10 голов

Перед взятием крови проводили клинический осмотр животных и термометрию В каждую возрастную группу животные подбирались с учетом массы, уровня общего развития, особенностей содержания Кормление животных осуществлялось 2 раза в день на основе составленных с учетом массы и физиологического состояния рационами.

Во второй части работы проведены исследования по изучению влияния применения микроэлементного препарата «Гемовит» на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантного статуса организма собак старше 7 лет

Исследования проводили на группе (п=15) клинически здоровых животных крупных служебных пород (немецкие, кавказские, среднеазиатские овчарки) Перед взятием крови проводили клинический осмотр животных и термометрию В группу животные подбирались с учетом массы, уровня общего развития, особенностей содержания Кормление животных осуществлялось 2 раза в день на основе составленных с учетом массы и физиологического состояния рационами питомников.

Взятие крови осуществляли перед началом дачи препарата "Гемовит", через 3 недели после начала дачи препарата "Гемовит" Препарат давали с кормом в профилактической дозе 1,5 чайных ложки (20-25 капель на 10 кг массы животного) 1 раз в день в течение 3 недель

Состояние перекисного окисления липидов оценивали по содержанию в крови продуктов перекисного окисления липидов (малонового диальдегида, диеновых конъюгатов, диенкетонов), состояние антиоксидантной системы оценивали по содержанию в крови вторичных антиоксидантов (витаминов С, Е, А) и активности антиоксидантов- ферментов (супероксиддисмутазы, каталазы) Также проводили определение в крови содержания меди и железа

Полученные данные обработаны статистически с помощью пакета программ «статистика» для Windows

Концентрацию меди определяли колориметрическим методом с применениием диагностического набора фирмы «Био-ЛА-Тест»,концентрацию железа колориметрическим методом без депротеинизации с Nitro-PAPS определяли диагностическим набором НПФ «Абрис+», концентрацию малонового диальдегида определяли методом с тиобарбитуровой кислотой (Камышников В С , 2003), концентрацию диеновых конъюгатов и диенкетонов определяли модифицированным методом Плацера с соавтор (1976) (Камышников В С , 2003), определение содержания витамина Е проводили по методу Бессея в модификации по ВНИИНБЖ (Холод В М, Ермолаев ГФ, 1988), определение содержания витамина С проводили с использованием а-а-дипиридила и хлорным железом (Холод ВМ, Ермолаев ГФ, 1988), определение концентрации витамина А проводили по методике Бессея в модификации А А Анисовой (Холод В М , Ермолаев Г Ф , 1988), активность супероксиддисмутазы по методу торможения восстановления нитросинего тетразоля в присутствии НАД Н2 (Макаревич ОП, 1983), активность каталазы определяли методом перманганатометрии по Баху А Н , Зубкову С.З

(Конопатов Ю.В. и др., 1994), концентрацию общего белка определяли биуретовой реакцией с использованием диагностических наборов НПФ «Абрис+», количество эритроцитов определяли, используя, камеру Горяева (Кудрявцев A.A. и др., 1974).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Возрастные изменения концентрации продуктов перекисного окисления здоровых собак отражены на рисунках 1-2.

Рис.1. Содержание диеновых конъюгатов и диенкетонов в крови здоровых животных

9 лет 7 лет б лет | 3 года 1-2 года ед.А/мл 0

—J ■ими

1 1 .г.? ' < ...................SS

г .. .... .. . .-.шхаи МММ 0.23

'¿-.'-г г" '-.'''t^lc t.tä'yärXW&S ^ ' " * '!

■MSBäSÄlSi ■ВМНИ "18

"■^HMOBwaloos

!

цпшнмнн ИКН0.12

0,05

0,2

0,25

0,3

■ Диеновые конъюгаты,ед.А/мл

0 Диенкетоны, ед.А/мл

возраст 9 лет 7 лет 5 лет 3 года 1-2 года

Рис.2. Содержание малонового диальдегида в крови здоровых животных

■

ГИ; и

■18,0=

116,08

ш

МКМОЛЫЛ Г-,.. ПА

а МДА

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что содержание продуктов перекисного окисления липидов меняется с возрастом. Так, самое низкое содержание перекисных продуктов наблюдалось в 1-2 летнем возрасте. Далее к 3 годам концентрация малонового диальдегида увеличилась на 10,9%,

диенкетонов на 40%, диеновых конъюгатов на 25% К пяти годам заметно дальнейшее достоверное (Р < 0,05) увеличение содержания продуктов перекисного окисления соответственно по сравнению с 1 -2 летнем возрастом на 20,3%, 62,5 %, 33,3% и по сравнению с животными трехлетнего возраста на 10,6%, 37,5%, 11,1% соответственно Такая же тенденция наблюдается и в возрастные периоды с 5 до 7 лет и с 7 до 9 лет. В общем, концентрация продуктов перекисного окисления в период с 1 года да 9 лет достоверно увеличилась малоновый диальдегид в 1,5 раза, диенкетоны в 3,3 раза, диеновые конъюгаты в 2 раза Полученные данные указывают на то, что у животных с возрастом наблюдается усиление интенсивности процессов перекисного окисления липидов Наиболее заметно этот процесс проявляется у крупных животных после пяти лет

Результаты исследований по определению активности каталазы, каталазного числа, показателя каталазы представлены в таблице 1.

Таблица 1

Активность каталазы здоровых собак

Показатель, Ед из Возраст животных

1-2 года 3 года 5 лет 7 лет 9 лет

Количество эритроцитов, * 10 12/л 5,12 ±0,19 5,14 ± 0,12 6,76±0,1 * 7,9±0,42* 6,4±0,14*

Каталазное число, мг н2о2 0,24 ± 0,09 0,25 ± 0,07 0,65±0,02* 0,87±0,02* 0,62±0,07*

Показатель каталазы, Кат число/ Кол эр в 1 мкл крови 0,04 ±0,01 0,05 ±0,015 0,09±0,015* 0,11± 0,02* 0,09±0,03*

*статистически достоверно с результатом полученным в 1-2 летнем

возрасте (Р <0,05)

С возрастом каталазное число увеличивается (Р < 0,05). Минимальное каталазное число отмечается у собак в возрасте 1-2 лет В этом возрасте количество эритроцитов также самое низкое за весь исследуемый возрастной диапазон Далее идет постепенное увеличение количества эритроцитов и каталазного числа Если количество эритроцитов к 5 годам увеличилось в 1,3 раза, каталазное число в 2,6 раза К 7-летнему возрасту количество эритроцитов увеличилось в 1,5 раза, в то время как активность каталазы возросла в 3,6 раза. Всего активность каталазы с 1-2 летного возраста до 7 лет увеличилась на 72,4% К 9-летнему возрасту значение данных показателей снижается по отношению к 7-летнему возрасту активность каталазы на 18,9%, количество эритроцитов на 28, 7% Также представляет интерес определение показателя каталазы, который представляет собой отношение каталазного числа к количеству эритроцитов Показатель каталазы изменяется с возрастом так же, как и количество эритроцитов, что еще раз подтверждает тесную связь между этими показателями Действие целого ряда физико-химических факторов приводит к повышенному лизису эритроцитов через активацию перекисного окисления липидов Помимо этого активность данного фермента изменяется при ряде патологических процессов Перекись водорода, образующаяся как компонент перекисного окисления, разлагается в организме гемсодержащим ферментом - каталазой Увеличение активности данного фермента указывает на усиление перекисного окисления в организме Однако с 9-летнего возраста наблюдается снижение активности данного фермента, что на ряду с увеличением концентрации перекисных продуктов указывает на развитие окислительного стресса

Возрастные изменения активности супероксиддисмутазы представлены на рисунке 3

Рис. 3 Активность СОД и концентрация белка крови здоровых собак

1 -2 года 3 года 5 лет 7 лет 9 лет

—•— супероксиддисмутаза, е.у./мг белка в минуту -*— общий белок, г/л

Из представленного материала видно, что максимальная активность супероксиддисмутазы наблюдалась в пятилетнем возрасте, после чего отмечено достоверное снижение активности этого фермента в семилетнем возрасте на 22,6 % и в девятилетнем на 29,8% по отношению к максимальной активности в пятилетнем возрасте. Параллельно определяли уровень общего белка. Возрастной период с 3-х до 5-ти лет характеризовался тенденцией к увеличению содержания общего белка, однако статистически достоверным это повышение не являлось (Р> 0,05). Возрастной период с 5-ти до 7-ми лет характеризуется снижением общего белка в сыворотке крови собак на 4,5 %.

Возрастные изменения содержания меди и железа представлены в

таблице 2.

Анализ данных таблицы позволяет говорить о том, что концентрация железа увеличивается в течении жизни вплоть до 7-ми летнего возраста в 2,0 раза по сравнению с концентрацией в 1-2летнем возрасте. Далее наблюдается достоверное снижение концентрации данного микроэлемента еще на 13,8 % по отношению к 7-летнему возрасту.

Концентрация меди повышается до 5-летнего возраста в 1,8 раза по сравнению с 1-2-летнем возрастом У животных, более старших возрастных групп, отмечается снижение данного показателя по отношению к 5- летнему возрасту на 7,5% и 29,4% соответственно у 7-летних и 9-летних животных

Таблица № 2

Содержание железа и меди в крови у здоровых собак

Показатель, Ед из Возраст животных

1-2 года 3 года 5 лет 7 лет 9 лет

Железо, мкмоль/л 8,25 ±1,06 9,14 ±0,96 14,16±0,85* 16,67±0,67* 14,3±0,8*

Медь, мкмоль/л 14,36 ±0,09 15,0 ± 1,9 26,67±1,74* 24,8 ± 0,8* 20,6±0,7*

♦статистически достоверно с результатом полученным в 1-2 летнем

возрасте (Р <0,05)

В результате наших исследований мы отмечаем следующую возрастную динамику данных показателей Содержание в крови железа и меди с возрастом снижается Наиболее интенсивное снижение концентраций данных элементов наблюдается после 7-летнего возраста Во многом это обусловлено нарушением процессов всасывания и транспортировки меди и железа, которые обусловлены возрастными изменениями со стороны желудочно-кишечного тракта С возрастом у собак тонус мышц кишечника снижается, что располагает к замедлению транзитной функции пищеварительного тракта (Конопатов Ю В., Рудаков В В , 1996) Помимо этого отмечено, что основными переносчиками микроэлементов являются белки А наши исследования подтверждают данные о том, что с возрастом концентрация общего белка снижается

Возрастные изменения содержания витаминов А, Е, С в сыворотке крови собак представлены в таблице № 3

Таблица 3.

Возрастные изменение концентрации витаминов А, Е, С сыворотки крови

здоровых собак

Показатели Едиз 2 года 3-4 года 5-6 лет 7-8 лет Старше 9 лет

ВитаминА мкмоль/л 4,83±0,04 4,35±0,26 5,23±0 26* 4,53±0,09* 4,46±0,12*

Витамин Е мкмоль/л 9,2±0,23 18,4±0,34* 46,0± 1,69* 50,9±2,07* 41,4±1,1*

Витамин С мкмоль/л 28±1,0 42,0±1,0* 54,0±2,0* 62,0±5,0* 39,0±2,0*

"■статистически достоверно с результатом полученным в 1-2 летнем

возрасте (Р <0,05)

Для витамина А увеличение концентрации наблюдается до 5- летнего возраста (в 1,5 раза по отношению к 2-летнему возрасту), после данного возрастного периода наблюдается снижение данного показателя на 13,4% к семи годам и на 14,3% к 9 годам, относительно показателей у 5-летних животных Максимальная концентрация витаминов С и Е наблюдается у 7-летних животных У животных старше 7 лет отмечено достоверное снижение концентрации витамина Е в 1,1 раза, витамина С в 1,5 раза Для переноса витамина А необходимо адекватное количество ретинолпереносяшего белка Как отмечалось выше, после пятилетнего возраста отмечается снижение концентрации общего белка, чго может служить одной из причин снижения концентрации данного элемента Второй причиной, по нашему мнению, являются нарушения со стороны работы печени и поджелудочной железы С возрастом у собак наблюдается субклиническая печеночная недостаточность, что может отразиться на белково-синтетической функции печени (Уша Б В, 1976) Поджелудочная железа выполняет важную роль в липидном обмене (Старченков СВ, 2001), метаболиты которого играют большую роль в

транспорте жирорастворимых витаминов, поэтому наблюдаемые с возрастом изменения поджелудочной железы будут приводить к нарушениям всасывания данного вида витаминов.

Таким образом, возрастная динамика интенсивности процессов перекисного окисления липидов и степени антиоксидантной защиты выглядит следующим образом: в течение всего периода жизни животных наблюдается усиление интенсивности процессов перекисного окисления липидов, что отражает достоверное увеличение концентрации маркеров перекисного окисления липидов- продуктов ПОЛ: малонового диальдегида, диеновых конъюгатов и диенкетонов. При этом лишь до семилетнего возраста наблюдается компенсация со стороны антиоксидантной системы. Поэтому, собаки крупных служебных пород старше семи лет подвергаются действию окислительного стресса, что во многом и обуславливает начало развития процессов интенсивного старения собак крупных пород уже после 7-летнего возраста лет.

Экспериментальные данные по влиянию применения препарата «Гемовит» на интенсивность процессов перекисного окисления липидов представлены на рисунке 4-5.

Рис.4.Влияиие применения микроэлементного препарата "Гемовит" на концентрацию диенкетонов и диеновых конъгатов крови собак.

0 диеновые конъюгаты.едА/мл □ диенкетоны едА/мл

Рис. 5. Влияние микроэлементного препарата "Гемовит" на концентрацию малонового диальдсгида.

после применения гемовита до применения гемовита

и малоновый диальдвгид, шмоль/л

Из данных диаграмм 4,5 следует, что при применении микроэлементного препарата «Гемовит» происходит снижение концентрации МДА, диенкетонов, диеновых коиъюгатов на 30,6%, 25,0%, 47,0% соответственно. Эти данные указывают на снижение процессов перекисного окисления липидов при применении микроэлементного препарата «Гемовит».

Экспериментальные данные по влиянию применения препарата «Гемовит» на биохимические параметры антиоксидантной защиты организма собак представлены на рисунке 6-7.

Из данных диаграмм следует, что при применении микроэлементного препарата «Гемовит» наблюдается достоверное увеличение активности СОД крови собак на 14,8%. Параллельно отмечается увеличение концентрации составляющего компонента данного фермента - меди в 2,5 раза. Подобная тенденция отмечается и со стороны фермента каталаза. Активность данного фермента увеличилась на 30,8% при увеличении железа в 1,7 раз.

Рис. 7.Влияние микроэлеметного препарата "Гемовит" на концентрацию микроэлементов крови собах

после применения гемовита

до примнения гемовита

15 20 25 30 35 40

□ медь, мкмоль/л

I железо, мкмоль/л

Рис.7. Влияние применения микроэлементного препарата "Гемовит' на активность СОД и каталазы крови собак.

□ супероксиддисмутаза.у.е.белка в минуту а каталаза,ед. по Баху

Из полученных данных следует, что применение микроэлементного препарата «Гемовит» способствует повышению концентрации меди и железа, что в свою очередь приводит к увеличению активности таких ферментов-антиоксидантов как каталаза и супероксиддисмутаза. Увеличение активности данных ферментов сопровождается снижением концентрации продуктов перекисного окисления липидов, что указывает на снижение интенсивности процессов перекисного окисления липидов. Таким образом, микроэлементный препарат «Гемовит» обладает антиоксидантными свойствами и его применение

оправдано при коррекции состояний сопровождающихся окислительным стрессом.

4. ВЫВОДЫ.

1 Показатели перекисного окисления липидов у собак крупных служебных пород, подвергаются возрастным изменениям Концентрация данных показателей в течение жизни изменяется следующим образом возраст 1-2 года МДА 12,81 ± 0,8 мкмоль/л, диенкетоны 0,03 ± 0,005 едА/мл, диеновые конъюгаты 0,12 ± 0,04едА/мл, возраст 3 года МДА 14,37 ± 0,88 мкмоль/л, диенкетоны 0,05 ± 0,01едА/мл, диеновые конъюгаты 0,18 ± 0,05едА/мл, возраст 5 лет МДА 16,08 ± 0,6 мкмоль/л, диенкетоны 0,08 ± 0,02 едА/мл, диеновые конъюгаты 0,19 ± 0,05едА/мл, возраст 7 лет МДА 18,03 ± 0,61 мкмоль/л, диенкетоны 0,085 ± 0,03едА/мл, диеновые конъюгаты 0,23 ± 0,05 едА/мл, возраст старше 9 лет МДА 20,0 ± 0,9 мкмоль/л, диенкетоны 0,1± 0,03едА/мл, диеновые конъюгаты 0,24 ± 0,06 едА/мл.

Таким образом, минимальные концентрации данных компонентов отмечены у молодых животных По мере взросления концентрация их увеличивается, достигая максимума у животных старше 9 лет

2 Показатели антиоксидантной системы у собак крупных служебных пород, подвергаются возрастным изменениям Для собак крупных служебных пород характерны следующие значения показателей антиоксидантной защиты возраст 1-2 года СОД 10,6 ± 0,24е у /мг белка в мин, каталаза 0,24 ± 0,09 ед Баха, витамин А 4,83 ± 0,04 мкмоль/л, витамин Е 9,2 ± 0,23 мкмоль/л, витамин С 28 ± 1,0 мкмоль/л, возраст 3 года СОД 14,8 ± 0,3 е у /мг белка в мин, каталаза 0,25 ± 0,07 ед Баха , витамин А 4,35 ± 0,26 мкмоль/л, витамин Е 18,4 ± 0,34 мкмоль/л, витамин С 42,0 ± 1,0 мкмоль/л, возраст 5 лет СОД 23,5 ± 0,19 е у /мг белка в мин, каталаза 0,65 ± 0,02 ед Баха, витамин А 5,23 ± 0 26 мкмоль/л, витамин Е 46,0 ± 1,69 мкмоль/л, витамин С 54,0 ± 2,0 мкмоль/л, возраст 7 лет

СОД 18,18 ± 0,24 е у /мг белка в мин, каталаза 0,87 ± 0,021 ед Баха, витамин А 4,53 ± 0,09 мкмоль/л, витамин Е 50,9 ± 2,07 мкмоль/л, витамин 62,0 ± 5,0 С мкмоль/л, возраст старше 9 лет- СОД 16,5 ± 0,3 е у/мг белка в мин, каталаза 0,62 ± 0,07 ед Баха, витамин А 4,46 ±0,12 мкмоль/л, витамин Е 41,4 ± 1,1 мкмоль/л, витамин С 39,0 ±2,0 мкмоль/л

Таким образом, максимальная активность ферментов-антиокидантов наблюдается в период 5-7 лет, у более старых животных отмечается снижение активности данных веществ Аналогичная динамика характерна для концентрации витаминов А, Е, С,

3 Концентрация микроэлементов, входящих в состав антиоксидантных ферментов подвергается возрастным изменением Максимальная концентрация меди и железа наблюдается в 5-7 летнем возрасте (железо 16,67± 0,67 мкмоль/л, медь 26,67 ±1,74), затем наблюдается снижение концентрации данных веществ до 14,3 ± 0,8 мкмоль/л - железо, 20,6 ± 0,7 мкмоль/л медь

4 Микроэлементный препарата «Гемовит» обладает антиоксидантными свойствами, так как способствует снижению концентрации в крови продуктов перекисного окисления липидов (МДА от 22,2 ±0,6 до применения препарата до 17,0±0,45 мкмоль/л после применения препарата, диенкетонов от 0,15 ± 0,025 едА/ мл до применения препарата до 0,12± 0, 07 едА/ мл после применения препарата, диеновых конъюгатов от 0,25 ± 0,025 едА/ мл до применения препарата до 0,17 ± 0,07 едА/мл после применения препарата) и способствует повышению активности ферментов — антиоксидантов (СОД от 10,91 ± 0,3 е у /мг белка до применения препарата до 12,8 ±0,4 е у /мг белка в мин после применения препарата, каталазы от 0,09 ±0,05 ед. Баха до применения препарата до 0,13± 0,015 ед Баха после применения препарата) Данный препарат увеличивает концентрации микроэлементов, входящих в состав данных ферментов (меди от 15,0±0,04 мкмоль/л и железа 8,25±1,06

мкмоль/л до применения препарата до 37,5±2,4 мкмоль/л и 14,16 ±1,4 мкмоль/л соответственно, после применения препарата) 5. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ

ИССЛЕДОВАНИЯ.

1 По результатам исследования антиоксидантных свойств препарата «Гемовит» подана заявка на патент (приоритет №2007103767, от 01 02 2007)

2 По материалам собственных исследований изданы

а) Карпенко Л Ю , Вахта А А. Характеристика антиоксидантной системы мелких домашних животных/Учебно-методическое пособие - СПбГАВМ -Санкт-Петербург, 2005 -38 с

б) Карпенко Л Ю, Вахта А А Рекомендации по профилактике окислительного стресса у собак - СПб, Издательство СПбГАВМ, 2007 13 с

3 Материалы диссертации рекомендуется использовать для изучения процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты собак при различных патологических и физиологических процессах

4 Для профилактики возрастных изменений, вызванных окислительным стрессом у собак крупных пород старше 7 летнего возраста

5 Для разработки схем профилактики и лечения окислительного стресса различной этиологии

6 Основные положения диссертации рекомендуются использовать в курсе биохимии и физиологии в высших учебных заведениях, специализирующихся на подготовке ветеринарных врачей

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1 Вахта А А Некоторые аспекты состояния антиоксидантной системы собак/ А А Вахта// Научные труды молодых ученных аграрных вузов России -Якутск, 2003 - С 16-18

2 Карпенко ЛЮ Роль витаминов как антиоксидантов и их содержание в сыворотке крови здоровых собак/ Л Ю.Карпенко, А А Вахта // Материалы

Международной научно- производственной конференции «Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе» - СПб ,2004 -С 51-52 Вахта А.А Витамин С - один из факторов антиоксидантной защиты собак//Сборник научных трудов № 136 «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» - СПб, 2004 -С 3-4

Карпенко Л Ю Показатели антиоксидантной системы у собак/ Л Ю Карпенко, А А Вахта // Материалы ХП Международного конгресса по болезням домашних животных -М ,2004 -С 82-83.

Бахта А А Содержание витамина Е в сыворотке крови здоровых собак/А А. Вахта, Л Ю.Карпенко//Материалы XVI Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии», - СПб, 2004 -С 39-41

Бахта А А Роль витамина А как антиоксиданта, его содержание в сыворотке крови собак в норме и при патологии/ А А Бахта, Л Ю Карпенко, //Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им Н Э Баумана, том 179 -Казань, 2004 -С 29-34 Карпенко ЛЮ Содержание гасящих антиоксидантов в сыворотке крови, собак и лошадей/Л Ю Карпенко, А А Бахта// Материалы XIII Международного Московского конгресса по болезням мелких домашних животных -М ,2005 -С 55-56

Карпенко Л Ю Антиоксидантный статус здоровых собак /Л Ю Карпенко, А А Бахта, А А. Андреева //Материалы конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины Белые ночи-2005» - СПб ,2005 -С 29-31 Карпенко Л Ю Биохимическая оценка состояния антиоксидантной системы у собак /Л Ю Карпенко, А А Бахта// Материалы 3 Международного симпозиума «Физиологические основы повышения продуктивности млекопитающих, введенных в зоокультуру» - Петрозаводск, 2005 -С 88-90

ю Карпенко ЛЮ Продукты перекисного окисления липидов в сыворотке крови здоровых собак и лошадей / JIЮ Карпенко, А А Вахта// Тезисы докладов международного научно-практического конгресса «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», - СПб, 2005 -С 94-95

11 Вахта A.A. Оценка содержания естественных антиоксидантов в сыворотке крови различных видов животных/ A.A. Вахта // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им H Э Баумана Том 185 - Казань, 2006. -С 9-13

12 Вахта А А Возрастные особенности антиоксидантного статуса организма собак/А А Вахта // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им H Э.Баумана Том 185 - Казань, 2006 -С 13-17.

13 Карпенко ЛЮ. Некоторые аспекты фармакокоррекции окислительного стресса у собак/ Л Ю.Карпенко, А А Вахта // Материалы XV Международного конгресса по болезням домашних животных - M ,2007 -С 169-171

и Карпенко ЛЮ. Возрастные особенности антиоксидантного статуса организма мелких домашних животных/ Л Ю Карпенко, А А Вахта // Ученые записки учреждения образования «Витебская ордена «Знак почета» государственная академия ветеринарной медицины» Том 43, выпуск 1 -Витебск, 2007.-С 92-94.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бахта, Алеся Александровна

I. ВВЕДЕНИЕ.

И. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Активные формы кислорода и их значение.

1.1.2 Источники образования активных форм кислорода. в организме.

1.1.3. Физиологическая роль активных форм кислорода.

1.2. Свободнорадикальное окисление.

1. 2.1.Общая характеристика свободнорадикального окисления.

1.2.2. Перекисное окисление липидов.

1. 2.21 .Физиологическое значение перекисного окисления липидов.

1.3.Антиоксидантная защита.

НЕСОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.2. Возрастные изменения содержания продуктов перекисного окисления в сыворотке крови собак.

2.3. Возрастные изменения активности антиоксидантных ферментов в сыворотке крови собак.

2.3.1. Возрастные изменения активности супероксиддисмутазы в сыворотке крови собак.

2.3.2. Возрастные изменения содержания активности каталазы крови собак.

2.4. Возрастные изменения содержания микроэлементов в сыворотке крови собак.

2.5 Возрастные изменения содержания витаминов А,Е,С в сыворотке крови собак.

2.6. Влияние препарата "Гемовит" на активности активности супероксиддисмутазы и на концентрацию железа в сыворотке крови собак.

2.5.2. Влияние препарата "Гемовит" на активность каталазы крови собак и концентрацию меди.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические характеристики антиоксидантной защиты организма собак"

Актуальность темы.

Свободнорадикальное окисление в норме является одним из необходимых факторов гомеостаза (Владимиров Б.А., Азизова О.А., Деев А.И., 1991, , Арутюнян и др., 2000, Хавинсон и др, 2003). Однако в настоящее время считается доказанным, что избыточное накопление продуктов свободнорадикального и перекисного окисления является также важным этиологическим фактором возникновения ряда хронических болезней (Журавлев А.И.,1982, Осипов А.Н. и др. 1990, Кармолиев Р.Х.,2002).

В последние годы большое внимание уделяется изучению механизмов генерации и распространения свободных радикалов и возможности регуляции противостояния организма окислительному стрессу, так как возможность минимизовать окислительное повреждение клеток, позволяет снизить восприимчивость их к ряду патологических состояний (Зайцев В.Г., 1985, Эммануэль Н.М., 1982., Меерсон Ф.З. 1989, Соколовский В.В., 1993,Скулачев В.П, 1997., Анисимов В.Н.,2000).

Однако, вопрос о механизме генерации свободных радикалов в организме такого вида животных, как собаки, а также вопрос о антирадикальной защите у этих животных изучен относительно мало.

Имеющиеся немногочисленные данные, подтверждающие тот факт, что состояние антиоксидантной защиты зависит от породы, возраста и физиологического состояния (Hill R.C. et.al., 1999, Harper E.J. et.al, 1999,Анисимов В.Н.и др. 1999). Однако данный вопрос изучен недостаточно, поэтому представляет интерес дальнейшее изучение состояния антиоксидантного статуса организма собак и выявление закономерностей, позволяющих влиять на ход патологических процессов, возникших в результате повреждающего действия окислительного стресса.

Также представляет интерес изучение влияния лекарственных препаратов, обладающих антиоксидантным действием на организм при коррекции ряда состояний, сопровождающихся окислительным стрессом. Цели и задачи исследования.

Целью наших исследований явилось изучение интенсивности процессов перекисного окисления липидов и состояние параметров антиоксидантной системы у собак крупных служебных пород в зависимости от возраста, а также изменение этих показателей при применение микроэлементного препарата «Гемовит».

Для решения поставленной цели были определены следующие задачи:

- изучить возрастные изменения содержания продуктов перекисного окисления в сыворотке крови здоровых собак крупных служебных пород (первичных продуктов, диеновых конъюгатов и вторичных - малонового диальдегида, диенкетонов); изучить возрастные изменения активности антиоксидантных ферментов в сыворотке крови здоровых собак крупных служебных пород (активность супероксиддисмутазы, каталазы);

- изучить возрастные изменения содержания витаминов А, Е, С в сыворотке крови здоровых собак крупных служебных пород;

- изучить возрастные изменения содержания микроэлементов в сыворотке крови здоровых собак крупных служебных пород (содержания железа, меди);

- изучить влияние микроэлементного препарата «Гемовит» на интенсивность процессов перекисного окисления липидов путем определения продуктов перекисного окисления (малонового диальдегида, диенкетонов, диеновых конъюгатов);

- изучить влияние микроэлементного препарата «Гемовит» на активность антиоксидантных ферментов сыворотки крови собак (активность супероксиддисмутазы, каталазы);

- изучить влияние микроэлементного препарата «Гемовит» на концентрацию меди и железа.

Научная новизна.

В результате проведенных исследований впервые определены:

- показатели процессов перекисного окисления липидов здоровых собак крупных служебных пород, изменение данных показателей в зависимости от возраста; показатели антиоксидантной защиты (активность СОД и каталазы) здоровых собак крупных служебных пород, изменение данных показателей в зависимости от возраста;

- впервые выявлено влияние применения препарата «Гемовит» на интенсивность процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантный статус организма собак;

- разработаны рекомендации по профилактике возрастного окислительного стресса у собак старше 7 лет с применением микроэлементного препарата «Гемовит».

Теоретическая и практическая значимость работы.

Выполненное исследование содержит решение актуальной проблемы -выяснение особенностей биохимических характеристик антиокисдантной защиты организма собак.

На основании проведенных исследований впервые получены данные по следующим основным показателям, характеризующим состояние:

- антиоксидантной защиты собак крупных служебных пород (активность супероксиддисмутазы, активность каталазы, содержание витаминов А, Е, С);

- процессов перекисного окисления у собак крупных служебных пород (малонового диальдегида, диеновых конъюгатов, диенкетонов).

Определение возрастного периода, характеризующегося снижением антиоксидантного статуса организма собак, позволит грамотно проводить коррекцию окислительного стресса и, тем самым, будет способствовать снижению риска развития и прогрессировать ряда патологических состояний, а также предотвратить процессы интенсивного старения.

Выявленное антиоксидантное действие препарата «Гемовит» позволяет рекомендовать данный препарат для коррекции и терапии состояний, сопровождающихся окислительным стрессом, в частности, применение данного препарата у стареющих собак.

По материалам собственных исследований издано методическое руководство «Характеристика антиоксидантной системы мелких домашних животных» (соавтор Карпенко Л.Ю.).

Результаты исследований реализованы в практике обучения студентов по дисциплинам биологическая химия и физиология сельскохозяйственных животных в ФГУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», а также в лечебно-профилактической и диагностической работе ветеринарных клиник г. Санкт-Петербурга.

Материалы по изучению влияния микроэлементного препарата «Гемовит» использованы при подготовке документации для заявки на патент приоритет № 2007103767 от 01.02.2007.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Характеристика процессов перекисного и свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной защиты организма собак крупных служебных пород в зависимости от возраста.

2. Влияние микроэлементного препарата «Гемовит» на состояние антиоксидантной защиты организма собак.

Апробация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: - международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе» (СанктПетербург,2004)

- XVI Международной межвузовской научно- практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург,2004)

- II Международной межвузовской научно- практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке» (Санкт-Петербург,20 04)

- конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины Белые ночи-2005» (Санкт-Петербург,2005), I конференции Северо-Западной ветеринарной ассоциации (Санкт-Петербург, 2005)

- научно-практической конференции молодых ученых и аспирантов ВБФ Московской государственной академии ветеринарной медицины им. К.И. Скрябина «Современные проблемы биохимии и биофизики в биологии и медицине» (Москва, 2005)

- 1 международной конференции «Современный взгляд на проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных»(Санкт-Петербург, 2005)

- 3 Международном симпозиуме «Физиологические основы повышения продуктивности млекопитающих, введенных в зоокультуру» (Петрозаводск, 2005)

- Ветеринарном конгрессе по мелким домашним животным «Зоосфера 2006» (Санкт-Петербург, 2006), 4-ой Российской ветеринарной конференции «Современный взгляд на проблемы ветеринарной медицины» (Санкт-Петербург,2006)

- II Международной хирургической ветеринарной конференции (Санкт-Петербург, 2006), Всероссийской научно-практической конференции «Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, состоянием рациона, продуктивности, экологии этологии» ( Казань, 2006)

- на первой эндокринологической конференции (Санкт-Петербург, 2007)

- XIII, XIV, XV, XVI Международных Московских конгрессах по болезням мелких домашних животных (Москва,2004, 2005, 2006,2007)

- научных международных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (Санкт-Петербург,2005 г., 2006 г., 2007 г.)

- 58,59,60, 61 научных конференциях молодых ученых и студентов СПбГАВМ (Санкт- Петербург,2004, 2005, 2006, 2007) международной научно-практической и учебно-диагностической конференции «Актуальные проблемы диагностики внутренних незаразных болезней и терапии животных» (Витебск, 2007)

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ, три из которых в рецензируемых журналах, а также одно методическое руководство и одни рекомендации.

Внедрение результатов исследований.

По материалам собственных исследований издано методическое руководство «Характеристика антиоксидантной системы мелких домашних животных» (соавтор Карпенко Л.Ю.), изданы рекомендации по профилактике окислительного стресса у собак (соавтор Карпенко Л.Ю.)

Результаты исследований реализованы в практике обучения студентов по дисциплинам биологическая химия и физиология сельскохозяйственных животных в ФГУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Выявление антиоксидантных свойств микроэлементного препарата «Гемовит» позволило применять данный препарата для профилактики окислительного стресса у собак (на данный способ подана заявка на патент № 2007103767, приоритет 01.02.2007).

Структура и объем диссертации. и

Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, главу материал и методы исследования, главы, отражающие результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические рекомендации. Работа иллюстрирована 8 таблицами и 8 рисунками. Указатель литературы включает 116 отечественных и 93 иностранных работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Бахта, Алеся Александровна

IV. выводы.

1. Показатели перекисного окисления липидов у собак крупных служебных пород, подвергаются возрастным изменениям. Концентрация данных показателей в течение жизни изменяется следующим образом: возраст 1-2 года: МДА 12,81 ± 0,8 мкмоль/л; диенкетоны 0,03 ± 0,005 едА/мл; диеновые конъюгаты 0,12 ± 0,04едА/мл; возраст 3 года: МДА 14,37 ± 0,88 мкмоль/л; диенкетоны 0,05 ± 0,01 едА/мл; диеновые конъюгаты 0,18 ± 0,05едА/мл; возраст 5 лет: МДА 16,08 ± 0,6 мкмоль/л; диенкетоны 0,08 ± 0,02 едА/мл; диеновые конъюгаты 0,19 ± 0,05едА/мл; возраст 7 лет: МДА 18,03 ± 0,61 мкмоль/л; диенкетоны 0,085 ± 0,03едА/мл; диеновые конъюгаты 0,23 ± 0,05 едА/мл; возраст старше 9 лет: МДА 20,0 ± 0,9 мкмоль/л; диенкетоны 0,1± 0,03 едА/мл; диеновые конъюгаты 0,24 ± 0,06 едА/мл.

Таким образом, минимальные концентрации данных компонентов отмечены у молодых животных. По мере взросления концентрация их увеличивается, достигая максимума у животных старше 9 лет. 2. Показатели антиоксидантной системы у собак крупных служебных пород, подвергаются возрастным изменениям. Для собак крупных служебных пород характерны следующие значения показателей антиоксидантной защиты: возраст 1-2 года: СОД 10,6 ± 0,24е.у./мг белка в мин; каталаза 0,24 ± 0,09 ед. Баха; витамин А 4,83 ± 0,04 мкмоль/л; витамин Е 9,2 ± 0,23 мкмоль/л; витамин С 28 ± 1,0 мкмоль/л; возраст 3 года СОД 14,8 ± 0,3 е.у./мг белка в мин; каталаза 0,25 ± 0,07 ед. Баха ; витамин А 4,35 ± 0,26 мкмоль/л; витамин Е 18,4 ± 0,34 мкмоль/л; витамин С 42,0 ± 1,0 мкмоль/л; возраст 5 лет СОД 23,5 ± 0,19 е.у./мг белка в мин; каталаза 0,65 ± 0,02 ед. Баха; витамин А 5,23 ± 0.26 мкмоль/л; витамин Е 46,0 ± 1,69 мкмоль/л; витамин С 54,0 ± 2,0 мкмоль/л; возраст 7 лет СОД 18,18 ± 0,24 е.у./мг белка в мин; каталаза 0,87 ± 0,021 ед. Баха; витамин А 4,53 ± 0,09 мкмоль/л; витамин Е 50,9 ± 2,07 мкмоль/л; витамин 62,0 ± 5,0 С мкмоль/л; возраст старше 9 лет: СОД 16,5 ± 0,3 е.у./мг белка в мин; каталаза 0,62 ± 0,07 ед. Баха; витамин А

4,46 ±0,12 мкмоль/л; витамин Е 41,4 ± 1,1 мкмоль/л; витамин С 39,0 ±2,0 мкмоль/л.

Таким образом, максимальная активность ферментов-антиокидантов наблюдается в период 5-7 лет, у более старых животных отмечается снижение активности данных веществ. Аналогичная динамика характерна для концентрации витаминов А, Е, С,

3. Концентрация микроэлементов, входящих в состав антиоксидантных ферментов подвергается возрастным изменением. Максимальная концентрация меди и железа наблюдается в 5-7 летнем возрасте (железо 16,67± 0,67 мкмоль/л, медь 26,67 ±1,74), затем наблюдается снижение концентрации данных веществ до 14,3 ± 0,8 мкмоль/л - железо, 20,6 ± 0,7 мкмоль/л медь.

4. Микроэлементный препарата «Гемовит» обладает антиоксидантными свойствами, так как способствует снижению концентрации в крови продуктов перекисного окисления липидов (МДА от 22,2 ±0,6 до применения препарата до 17,0±0,45 мкмоль/л после применения препарата; диенкетонов от 0,15 ± 0,025 едА/ мл до применения препарата до 0,12± 0, 07 едА/ мл после применения препарата; диеновых конъюгатов от 0,25 ± 0,025 едА/ мл до применения препарата до 0,17 ± 0,07 едА/мл после применения препарата) и способствует повышению активности ферментов - антиоксидантов (СОД от 10,91 ± 0,3 е.у./мг белка до применения препарата до 12,8 ±0,4 е.у./мг белка в мин после применения препарата, каталазы от 0,09 ±0,05 ед. Баха до применения препарата до 0,13± 0,015 ед. Баха после применения препарата). Данный препарат увеличивает концентрации микроэлементов, входящих в состав данных ферментов (меди от 15,0±0,04 мкмоль/л и железа 8,25±1,06 мкмоль/л до применения препарата до 37,5±2,4 мкмоль/л и 14,16 ±1,4 мкмоль/л соответственно, после применения препарата).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1.- По результатам исследования антиоксидантных свойств препарата «Гемовит» подана заявка на патент (приоритет № 2007103767, от 01.02.2007).

2. По материалам собственных исследований изданы: а) Карпенко Л.Ю., Вахта А.А. Характеристика антиоксидантной системы мелких домашних животных/Учебно-методическое пособие.-СПбГАВМ.- Санкт-Петербург, 2005.-38 с. б) Карпенко Л.Ю., Вахта А.А. Рекомендации по профилактике окислительного стресса у собак .-СПб., Издательство СПбГАВМ, 2007.13 с.

3. Материалы диссертации рекомендуется использовать: для дальнейшего изучения процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты собак при различных патологических и физиологических процессах.

4. Для профилактики возрастных изменений, вызванных окислительным стрессом у собак крупных пород старше 7 летнего возраста.

5. Для разработки схем профилактики и лечения окислительного стресса различной этиологии.

6. Основные положения диссертации рекомендуются использовать в курсе биохимии и физиологии в высших учебных заведениях, специализирующихся на подготовке ветеринарных врачей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бахта, Алеся Александровна, Москва

1. Абрамова, Ж.И., Оксенгендлер, Г.И. Человек и противоокислительные вещества. Л.: Наука, 1985.230 с.

2. Аврамова, Т.В., Титова, Н.М., Коляго, Е.С. Антиоксидантная система в онтогенезе эритроцитов // X Всесоюзное совещ. по эвол. физиол. Л., 1990. с. 251.

3. Авцыр, А.П., Жаворонков, А.А., Риш, М.А., Строчкона, Л.С. Микроэлементозы человека.-М. Медицина, 1991.-196 с.

4. Авякан, А.Х. Новые молекулярные критерии оценки токсического действия регуляторов роста растений производных гидразина (активные формы кислорода как ключевые агенты в механизме токсичности): Автореф.дис. д-ра мед.наук.1990.45 с.

5. Анисимов, В.Н. Средства профилактики преждевременного старения(геропротекторы)// Успехи геронтологии.2000. Вып.4.С.55-74.

6. Анисимов, В.Н., Арутюнян, А.В., Опарина, Т.И. и др. Возрастные изменения активности свободнорадикальных процессов в тканях и крови крыс// Российский физиол. журнал, им. И.М.Сеченова. 1999.Т.84. №4.С.502-507.

7. Анисимов, В.П., Соколов, М.В. Эволюционная концепция в геронтологии. СПб.: Эскулап, 1999.130 с.

8. Арутюнян, А.В., Дубинина, Е.Е., Зыбина, Н.Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. Методические рекомендыции. СПб.: Фолиант, 2000.104 с.

9. Арчаков, А.И., Карузана, И.И. Окисление чужеродных соединений и проблемы токсикологии// Вест. АМН СССР. 1988.№1.С. 14-23.

10. П.Барабой, В.А., Брехман, И.И., Голотин, В.Г., Кудряшов Ю.Б., Перекисное окисление и стресс. СПб.: Наука, 1992, 148 с.

11. Белоус, A.M., Конник, К.Т. Физиологическая роль железа. Киев: Наук, думка, 1991.-103с.

12. Богач, П.Г., Курский, М.Д., Кучеренко, Н.Е., Рыбальченко, В.К. Структура и функции биологических мембран. — К., Вища школа, 1981. —336 с

13. Божков, А.И. Три дозозависимые стадии действия ионов меди на функциональную активность биологических систем // Биохимия. -1997, -62,№2,-с. 176-186.

14. Болдырев, А.А. Парадоксы окислительного метаболизма мозга// Биохимия. 1995.Т.60, Вып. 9. С.1536-1542.

15. Болдырев, А.А., Куклей, М.П. Свободные радикалы в нормальном и ишемическом мозге//Нейрохимия.1996.Т.13. вып. 4. С.271-278.

16. Бурлакова, Е.Б., Алесенко, А.В., Молочкина, Е.М., Пальмина, Н.П., Храпов Н.Г. Биоантиоксиданты в лучевых поражениях и злокачественном росте. М.: Наука, 1972, 252 с.

17. Ванини, А.Ф. Идентификация методом ЭПР комплексов двухвалентного железа с цистеином в биологических системах.// Биохимия. 1967. Т.32,№ 2.С.277-282.

18. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн. РАМН.1998.№ 7 .С.43-46.

19. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн. РАМН. 1998.№7.С.43-51.

20. Владимиров, Ю.А., Азизова, О.А., Деев, А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах // М.: ВИНИТИ, серия биофизика, 1991. Т. 29. 252 с.

21. Кабиров, Г.Ф., Логинов, Г.П., Хазипов, Н.З Хелатные формы биогенных металлов в животноводстве. -Казань издательство ФГОУ ВПО «КГАВМ», 2004.-c.23.

22. Гаврилов, O.K., Козинец, Г.И., Черняк, Н.Б. Клетки костного мозга и периферической крови (структура, биохимия, функции).-М.: Медицина, 1985.-286 с.

23. Газизов, В.З., Жданов, C.JL, Бояренцов, JI.E. Биохимические реакции перекисного окисления липидов и физиологические процессы антиоксидантной защиты организма плотоядных.-Киров.: 2001 -38 с.

24. Георгиевский, В.И., Анненков, Б.Н., Самохин, В.Т. Минеральное питание животных.- М.: Колос, 1979.-471 с.

25. Горбунова, Н.А. Эритродиез при экстремальных воздействиях и его роль в регенерации крови// Гематология и трансфузия.-№2.-1985.-с.23-27.

26. Григлевски, Р.Е. Участие свободных радикалов в преображениях эндотелиального простациклина и окиси азота // Новости фармации и медицины. 1997.№ 1-2. С. 2-8.

27. Денисов, Е.Т. Кинетика гомогенных химических реакций.М.: Высшая школа, 1980. 180 с.

28. Дубинина, Е.Е., Шугалей, Н.В. Окислительная модификация белков// Успехи современной биологии. 1993.Т. 113,вып.1.С.71-81.

29. Дудин, В.И. Теоретические аспекты взаимодействия а-токоферола с активными формами кислорода (обзор)// Тр. ВНИИФБиП с.-х. животных. 2003.-42.-С.250-260.

30. Журавлев, А.И. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии./Под ред. А.И. Журавлева. М.: Наука, 1982. 240 с.

31. Журавлев, А.И. Биоантиоксислители в животном организме// Биоантиоксислители. М.:Наука, 1975.С. 10-30.

32. Журавлев, А.И. Развитие идеи Б.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, 1982. С. 3-36.

33. Зб.Журавлев, А.И. Роль антиоксидантов в первичных радиобиологических эффектах// Роль перекисей и кислорода в начальных стадиях радиобиологического эффекта. М.: АН СССР; 1963. с.93-101.

34. Зайцев, В.В. Свободнорадикальные процессы и метаболизм гидроперекисей в гепатоцитах// Гепатоцит/ Под.ред. Л.Д. Лукьяновой. М.: Наука, 1985. С. 125-146.

35. Игнатов, П.Е. Иммунитет и инфекция.- М.: Время, 2002.С.138-142.

36. Ильюха, В.А. Использование супероксиддисмутазы и каталазы для тестирования физиологического состояния животных. Проблемы экологической физиологии пушных животных. Пертозаводск, 1994. с. 35-50.

37. Иммунология/ Под редакцией У.Пола. Т. 1. С. 116-119.

38. Каган, В.Е., Серебринова, Е.А., Бекалова, Р.А., и др. Взаимодействие а-токоферола и его производных с системой цитохрома Р -450// Тез. докл. Всесоюзной конф. «Цитохром Р-450 и охрана окружающей среды». Новосибарск, 1987.С.14.

39. Каган, В.Е., Смирнов, А.В., Саввов, В.М., Горкин, В.З. Перекисное окисление липидов в митохондриальных мембранах, индуцируемое ферментативным дезаминированиям эндогенных аминов// Вопросы мед. химии. 1984.№ 1 .С. 112-118

40. Казаков, Х.Ш. Хелаты экзогенных металлов с биогенными соединениями как стимуляторы иммунодинамических функций живого организма// Профилактика и лечение заболеваний сельскохозяйственных животных. Одесса, 1972.C.379-383.

41. Камышников, B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика: в 2 т. Т.2.С.195-211.

42. Карпенко, Л.Ю, Иммунологические аспекты патогенеза гломерулонефрита у собак.: Автореф. дис.доктора биологических наук.-М.,2000.с.4.

43. Кармолиев, Р.Х. Биохимические процессы при свободнорадикальном окислении и антилксидантной защите. Профилактика окислительного стресса у животных,, С.-х. биология, 2002, №2.-С. 19-28.

44. Карпенко, Л.Ю. Роль витаминов и минералов в обменных процессах у мелких домашних животных.-СПб, Издательство СПбГАВМ, 2005. 67 с.

45. Карпенко, Л.Ю., Конопатов, Ю.В., Карпенко, А.А. Биохимические основы рационального кормления мелких домашних животных.-Санкт-Петербург, 2006.с56-62

46. Катюхин, Л.Н. Реологические свойства эритроцитов, современные методы исследования// Физиологический журнал им. И.М. Сеченова.-Т.81.-№6.-1995 .-с. 122-129

47. Ковальский, В.В., Риш М.А. Биологическая роль меди в организме животных//Биологическая роль меди.М.:1970. С.34-45.

48. Козлов, Ю.П., Данилов, B.C., Каган В.Е., Ситковский, М.В. Свободнорадикальное окисление липидов в биологических мембранах. М.: МГУ,1972., 88 с.

49. Кокорев, В.А. Внутриутробное развитие свиней// Функц. морфол.болезней плодов и новорожденных животных/ Морд. гос. ун-т, -Саранск, 1993 .-с. 110-127.

50. Колб, В.Г., Камышников, B.C. Клиническая биохимия Минск. :Беларусь, -1976.С.217-220.

51. Кольман, Я., Рем, К.Г. Наглядная биохимия: Пер. с нем. — М., Мир, 2000. — 469 с.

52. Кольтовер, В.К. Свободнорадикальная теароя старения: современное состояние и перспективы// Успехи геронтологии. 1998. Вып. 2. С.37-42.

53. Конопатов, Ю.В., Рудаков, В.В. Биохимические показатели кошек и собак.-С-Пб, 1996.-40 с.

54. Кратнов, А.Е. Атеросклероз и ИБС: роль окислительного стресса.-Ярославль, 2003.-196 с.

55. Кудрявцев, А.А., Кудрявцева, JI.A. Клиническая гематологическая животных-М.: Колос, 1974.С.131-145.

56. Кузнецов, С.Г. Биохимические критерии обеспеченности животных минеральными веществами// С.-х.биол.Сер. Биол.животных.1991.№ 2.С.16-23.

57. Кулинский, В.И., Колеснеченко, JI.C. Обмен глутатиона// Успехи биол. химии.М.: Наука, 1990.Т.31.С.157-179.

58. Ланкин, В.З. Метаболизм липоперекисей в тканях млекопитающих // Биохимия липидови их роль в обмене веществ. М.:1981. С.75-95.

59. Ланкин, В.З., Тихазе, А.К., Беленков, Ю.Н. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологии.-М. 2001.-78с.

60. Ленинджер, А. Основы биохимии: В 3-х т. Т.2. — М., Мир, 1985. -368 с.

61. Лукьянова, Л.Д. Балмуханов, Б.С., Уголев, А.Т. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние. М.: Наука, 1982

62. Манорик, П.А. Разнолигандные биокоординационные соединения металлов в химии, биологии и медицине.- Киев: Наук, думка, 1991.-272с.

63. Манорик, П.А. Разнолигандные биокоординационные соединения металлов в химии, биологии, медицине. Киев: Наук.думка, 1991.-272с.

64. Меерсон, Ф.З. Адаптация к стрессовым ситуациям и стресс -лимитирующие системы организма// Физиология адаптационных процессов.М.: Наука, 1989.С.521-631.

65. Меерсон, Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных повреждецний сердца.М.: Медицина, 1984.266с.

66. Меныцикова, Е.В., Зенков, Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов//Усп. совр. биол. 1993. Т. 113. №4. С. 442-453

67. Метелица, Д.И. Активация кислорода ферментными системами. М.: Наука, 1982, 255с.

68. Методические указания к лабораторным занятиям по биохимии/ Составители Конопатов Ю.В., Рудаков В.В., Пилаева Н.В., Поспелов В.В., Федоров Б.М., СПб, 1994.С.19.

69. Мышкин, А.Е. Окисление гемоглобина// Успехи химии. 1984.Т.53.вып.6. С. 1045-1071.

70. Николаев, А.Ю., Лифшиц Н.Л. Артериальная гипертония у больных с терминальной почечной недостаточностью: патогенетические варианты, принципы лечения// Урология и нефрология, 1996.-№1.-с.44-48.

71. Ноздрюхина, Л.Р. Биологическая роль микроэлементов организме животных и человека.М.: Наука, 1977.-183 с.

72. Осипов, А.Н., Азизова, О.А., Владимиров, Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме// Успехи биол.химии.1990.Т.31. С. 180-208.

73. Панченко, Л.Ф., Герасимов, A.M., Антоненков, В.Д. Роль пероксисом в патологии клетки.М.: Медицина, 1981.207 с.

74. Пескин, А.В. Взаимодействие активного кислородас ДНК// Биохимия. 1997.Т.62.вып.12.С.1571-1578.

75. Пескин, А.В. О регуляторной роли активных форм кислорода//Биохимияю1998.Т.63,вып.9.С.1305-1308.8 5. Подберезкина, Н.Б., Осинская, Л.Ф. Биологическая роль супероксиддисмутазы // Укр. биохим. журн. Киев,1989. Т.61, №2.С.14-27.

76. Помогайло, А.Д. , Уфлянд, И.Е.Макромолекулярные металохелаты.-М.: Химия, 1991.-304 с.

77. Рыжов, А.А. Изменение лейкоцитарной формулы у щенков на фоне применения препарата «Гемовит»// Достяжение сельскохозяйственной науки развитию агропромышленного комплекса: Сб. науч. трудов.-Тверь, ТГСХА, 2004.- с.207-209

78. Рыжов, А.А. Карпенко, Л.Ю. Влияние микроэлеметного препарата «Гемовит» на биохимические показатели у собак// Материалы XI Московского международного конгресса, 2003г.-М., 2003.-с. 105-106.

79. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная терапия / В.К.Казимирко, В.И.Мальцев, В.Ю.Бутылин, Н.И.Горобец. — К.: Морион, 2004. — 160 с.

80. Селимова, Э.Н. Оценка интенсивности процессов перекисного окисления липидов крови здоровых лошадей//Материалы XV Московского Международного ветеринарного конгресса по болезням мелких домашних животных.- М., 2007. с. 151-152.

81. Скулачев, В.П. Нефосфорилирующее дыхание как механизм, предотвращающий образование активных форм кислорода // Молекулярная биология. 1995. Т. 29. №6. С. 1199-1209.

82. Скулачев, В.П. О биохимических механизмах эволюции и роли кислорода// Биохимия.1998.Т.63,вып.11.С. 1570-1579.

83. Скулачев, В.П. Старение организма особая биологическая функция, а не результат поломки сложной живой системы: биохимическое обоснование концепции Вейсмана// Биохимия. 1997.Т.62.вып. 11 .С. 13691399.

84. Соколовский, В.В. Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний// Международные медицинские обзоры. 1993 .№ 1. С. 1114.

85. Соколовский, В.В. Окислительно-восстановительные процессы в биохимическом механизме неспецифической реакции организма на действие экстремальных факторов// Антиоксиданты и терапия.Л.: ЛСГМИД984.С.5-19.

86. Старчеков, С.В. Болезни собак и кошек.-СПб.Из-во Лань, 2001.С 150161.

87. Тарусов, Б.Н. Основы биологического действия радиоактивных излучений. М.: Медиздат, 1954. 30 с.

88. Тимочко, М.Ф., Алексеевич, Я.И. Бобков, Ю.Г. и др. Особенности кислородного баланса в экстремальных условиях //Hypoxia Medical J.1996.№3. С. 8-12.

89. Тиунов, Л.А. Биохимические механизмы токсичности// Общие механизмы токсического действия.М.: Медицина, 1986.С. 114-204.

90. Тиунов, Л.А. Биохимические механизмы токсичности//Общие механизмы токсического действия. М.: Медицина, 1986.С.114-204.

91. Тиханин, В.В. Биохимические характеристики крови собак под влиянием пуриветина.- Автореф. дисс. . канн. биол. наук.- С-Пб.1997.-14 с.

92. Тиханин, В.В., Конопатов. Ю.В., Линин, А.Л. Белковый спектр сыворотки крови больших собак // Актуальные проблемы ветеринарной медицины/ Сб.трудов СПГАВМ.- Вып. 125.-1996.- с.75-76.

93. Уайт, А., Хендлер, Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии: в 3 томах. Т.2. — М., Мир, 1981. — 617 с.

94. Уайт, А., Хендлер, Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии: В 3-х томах. Т.З. Пер. с англ. — М., Мир, 1981. -726 с.

95. Уильяме, У. Металлы жизни.-М.:Мир, 1975.-236с.

96. Уша, Б.В. Ветеринарная гепатология.- М.: Колос, 1976.-263 с.

97. Фридович, И. //В кн.: Свободные радикалы в биологии (под. ред. У.Прайораю)-М.: Мир, 1979, Т.1.-С.272-314.

98. Хавинсон, В.В., Баринов, В.А., Арутюнян, А.В., Малинин, В.В .Свободнорадикальное окисление и старение. СПб.:Наука, 2003. 327с.

99. Хартон, П. Метод «комет» :новый метод оцунки профилактики повреждения ДНК у кошек с помощью диетотерапии.//Фокус. Том 11.№ 4 , 2001.с 28-29.

100. Холод, В.М., Ермолаев, Г.Ф. Справочник по ветеринарной биохимии. Минск.: Колос, 1988. ст. 133-139.

101. Хочачка, П., Семеро, Дж. Биохимическая адаптация. М.: Мир, 1988. 568 с.

102. Чевари, С., Андял,Т., Бенке, К., Штренгер, Я., Свободнорадикальные реакции и рак// Вопр. мед. химии., 1992.38.№5.С.4-5.

103. Эммануэль, Н.М., Лясковская Ю.Н. Торможение процессов окисления жиров. М.: Пищепромиздат, 1961. 355 с.

104. Эммануэль, Н.М. Антиоксиданты в пролонгировании жизни.Л.: Наука,1982.С.569-585.

105. Эммануэль, Н.М., Липчина, Л.П. Лейкоз мышей при воздействии ингибиторов цепных окислительных процессов.//Док.АН СССР.1958.Т.121.С.141-144.

106. Ames B.N., Shigenaga М.К., Hagen Т.М. Mitochondrial decay in aging// Biochim. Biochys. Acta Mol. Basis Disease. 1995. Vol. 1271 ,N. 1 .P. 165-170.

107. Aruoma O.I. Free radicals, oxidative stress, and antioxidants in human health and disease//JAOCS 1998. Vol.75.N 2. P.199-212.

108. Aruoma, O.I.Halliwell В., Gajeswki E., Dizdaroglu M. Copperion-dependent damane to the basses in DNA in the presence of hydrogen peroxide//Biochem. J. 1991. Vol.273.P.601-604.

109. Awhforth A., Michael J. E. Parenteral coppen in copperdeficiency diseases of animals//Nature, 1962,-195,N 484.-P/867-869.

110. Ayene I.S., Dodia C., Fisher A.B. Role of oxygen in oxidation of lipid and protein during ischemia/reperfusion in isolated perfused rat lung // Arch. Biochem. Biophys. 1992. V. 296. № l.P. 183-189.

111. Bannister J.V., Bannister W.H., and Rotilio G. (1987)CRC Crit. Rev. Biochem., 22,111-180.)

112. Bedwal R.S. Nair N.,Charma M.P., Mathur R.S. Selenium its biological perspectives// Med. Hypotheses, 1993.N2.P.150-159.

113. Bielski B.H.,Arudi P.L.,Sutherland M.W. Astadi of the reactivity of H02/02 with unsaturated fatty acids// J.Biol.Chem.l993.Vol.258. P.4759-4761.

114. Bielsky B.H. Chemistry of ascorbic acid radicals// Adv. Chem.Ser.1982. Vol.200. P.81-100

115. Blasa J.E. Energy requiments of dogs in cool condition// Canine Pract.- 1989.-№ 9.-P.10-15.

116. Boila R.J.,Delvin T.J., Drysdale R.A., Lilie L.E. Supplementary copper for grazing beef cattle: Injectable copper glycinate, and copper glycinate. And copper sulfate in free-chice mineral supplements// Canad.J.Anim. Sc., 1984.Vol.64.N3 .P.675-696.

117. Brosn D.H. ,Chidabaram M.Y. et.al. Design of iron (III) chelates in oral treatment of anemia: solution properties and absorption of iron (II) acetohydroxamate in anemia rats// Bioinorg. Chem., 1978,Vol. 9,N 3.P.255-275.

118. Brown D.A., Chidabaran M.Y. et al. Design of iron (III) chelates in oral treatment of anemia: solution properties and absorption of iron (II) acetohydroxamate in anemia rats//Biolorg/Chem.,1978,-9,№ 3.-P.225-275.

119. CerdaS.,Weitzman S.A. Influence of oxygen radical injury on DNA methylation// Mutat. Res. 1997.Vol.386. P.141-152.

120. Cotgeave I.A., Youhotsky -Gore I., Pathmanathan K. Effect of ethoxyquin on the longevity of C3H mice// Nature(London).1988.Vol.229.P.254-255.

121. Cotgreave I. A., Moldeus P., Orrenius S. Host biochemical defense mechanisms against prooxidants// Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1988. Vol.28. P. 189-212.

122. Cousins R.J. Absorption, transport, and hepatic metabolism of copper and zinc: special reference to metallothionein and ceruloplasmin//// Phisiol.Rev.,1985,-65,N 2.-P.238-309.

123. Cutler R.G. Evolutionary biology of aging and longevity in mammalian species// Ageing and cell function/ Ed. J.E .Johnson.N. Y.L. :Plenum press, 1984.P. 1 -147.

124. Cutler R.G. (1983). Gerontilogy, № 29,pp 113-120,

125. Cutler R.G. Oxidative stress: its potential relevance to human disease and longevity determinants//Age. 1995/Vol. 18.P.91 -96.

126. Del. Maestro R.F. An approach to free radicals in medicine and biology// Acta Physiol.scand.(Suppl.).1980.Vol.492.P.153-168.

127. Diliberto E.J., Dean G., Carter C., Allen P.L. Tissue, subcellular, and submitocondrial distributions of semidehydroascorbate reductase: possibleroli of semidehydroascorbate reductase in cofactor regeneration// J. Neurochem. 1982/Vol. 39. P.536-568.

128. Faa Gavino, Crisponi Quido Iron chelating agents in clinical practice// Cord.Chem.Rev., 1999, Vol. 184.N1 .P.291-310.

129. Frei B. Natural antioxidants in human health and disease. Orlando, FL: Academic Press.- 1993.

130. Frei В., Gaziano J.M. Content of antioxidants, preformed lipid hydroperoxides and cholesterol as predictors of the susceptibility of human LDL to metal ion-dependent and independent oxidation // J. Lipid Res. — 1993. —34. —P. 2135-2145

131. Frei В., Stocker R., Ames B.N. (1988) Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.

132. Fridovich I. Superoxide radical: an endogenous toxicant// Ann.Rev. Pharmacol. Toxicol. 1983.Vol. 23.P.239-257.

133. Fridovich, I( 1995)Annu. Rev. Biochem.,64, 97-112.

134. Frieden E. The evolution of metals as essential elements (with special reference to iron and copper)// Protein-Metal Interaction, 1974,N 4. -P. 1-31.

135. Gillard R.D., Lanseshire R.J., O'Brien P., Isomers of L-amino acids whith copper (II)/Part VI.Njvtl equilibria at high pH in copper(II): amino acid solutions//Transit.Metal.Chem., 1980,-5,N 6.-P.340-345.

136. Gitlin J.D., Schroeder J.J., Lec-Ambroge L.M., Cousins R.J. Mechanisms of coeruloplasmin biosinhtesis in normal and copper-defficient rats// Biochem. J.1992.282,N23.P.835-839.

137. Guest J.R. The Leeuwenhoek lecture, 1995. Adaptation to life wi thout oxygen // Phill. Trans. R. Soc. Lond. B.1995. V.350. P. 189-202.

138. Guttepidge J.M.Antioxidant properties of caeruloplasmin towards iron and coppen dependent oxygen radical formation// FEBS Lett. 1983. Vol. 157.P.30-40.

139. Gutteridge J.M. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of damage// Clinic. Chemistry.1995 Vol. 41.N 12. P.1819-1829.

140. Gutteridge J.M.C., Paterson S.K., Segal A.W., Halliwell B. Inhibition of lipid peroxidation by the iron binding protein lactoferrin// Biochem J. 1981. Vol.99.P.259-261.

141. Gutteridge J.M.Lipid peroxidants as biomarkers of tissue damage// Clinical.Chemistry. 1995.Vol.41. N 12.P.1819-1828.

142. Halliwell B, Gutterige J.M. Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease// Biochem. J. 1984 Vol. 219P. 1-14.

143. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Lipid peroxidation, oxygen radicals, cell damage, and antioxidant therapy // Lancet. — 1984. — P.1396-98.

144. Harman D. Aging: A theory based on free radicals and radiation chemistry// J.Geront. 1956. Vol. 1 l.P.298-300.

145. Harper E.J., Alblas J. Supplementation of dietary tocopherol increases plasma values outside the normal ranges // The Faseb J. vol. 13,№ 4, 671.17.

146. Harper E.J., Charton C.J., Skinner N.D. Total plasma antioxidant and superoxide dismutase status in dogs: are normal ranges influenced by breed? The FASEB J.,Vol.13,N 4, 446.17.

147. Harris E.D. Cellular copper transport and metabolism// Annu. Rev. Nutr. Vol 20.-Palo Alto (Calif),2000.-P.291-310.

148. Harris E.D. Regulation of antioxidant enzymes // FASEB. J. 1992. V. 6. № 9. P. 2675-2683

149. Hill R.C., Armstrong D. et. al. Some evidence for possible oxidative stress in trained greyhounds after short sprint race// The FASEB J.,Vol. 13,N 4,671.71.

150. Johnson P. Reactive oxygen species and their detoxification in animal tissues// Trends Сотр. Biochem. Physiol. 1993.Vol. 1.P.1011-1026.

151. Karlmark В. Relation of selenium to other antioxidants, with special reference to free radicals Pap. NJF Symp. «Prob.Selenium Anim.Nutr.» As. 19-20 Apr.,1993//Norw.J.Agr.Sci.Nl l.P.l 1-20.

152. Kirkman H.N.,Gaetani G.F. Catalase: a tetrameric enzyme with four tightly bound molecules of NADPH// Pros.Natl. Acid.Sci.USA. 1984. Vol.8 l.P.4343-4347.

153. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase halide - hydrogen peroxide antibacterial system// J. Bacteriol.-1968.-Vol.95.-P.2131.

154. Kreterman Ngugen S.A.,Crag A.,Raymond K.N.,Transferrin: the role of conformational changes in iron removal by chelators//J.Amer.Chem.Soc.,1993,N15.P.28-32.

155. Krinsky N.L. Membrane antioxidants // Ann. NY. Acad. Sci.— 1988. —551. —P. 17-33.

156. Lee C.M., Siendruch R., Aiken J.M. Age-associated alterations of the mitochondrial genome//Free Radical. Biol. Med.l997.Vol.22.P.1259-1269.

157. Mansouri A. Methemoglobinemia// Amer.J.Med.Sci.1985. Vol. 289.N 5.P.200-209.

158. Marklund S.L., Holme E.,Hellner L.Superoxide dismutase in extracellular fluids// Clin. Chim.Acta. 1982. Vol.125. P.41-51.

159. Marsault R., Frelin C. Activation by nitri oxide of guanylate cyclase in endothelial cell from brain capillaries// J. Neurochem. 1992. Vol.59.P 19511061.

160. Martilla R.J. ,Roytto M.,Lorentz H.,Rinne U.K. Oxigetoxici production in dismutation of superoxid anion by superoxide dismutase// J.nearal.transmiss. 1988. 74., N 2.Р.87-95/

161. Mc Cord, Fridovich, Superoxide dismutase. An enzymic function of erythrocuprein// J.Biol/Chmecl969. Vol.244. N 60.P.6049-6055.

162. McCord J.M. Superoxide radical: controversies, contradictions, and paradoxes // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1995. V. 209. №2. P. 112-117.

163. MisraH.P., Fridovich I. The generation of superoxide radical during the autoxidation of hemoglobin// J.Biol.Chem. 1972 Vol. 247.P.6960-6962.

164. Mullarkey CJ, Edelstein D, Brownlee M Free radical generation by early glycation products: a mechanism for accelerated atherogenesis in diabetes. Biochem Biophys Res Commun 1990 Dec 31 173:3 932-9

165. Nackerdien Z. Olinski R., Dizdaroglu DMA base damage in chromatin of y-irradiated cultured human cells// Free Radical. Res. Commun. 1992 Vol.16. P.259-273.

166. Neuman P.Z., Sass-Kortsak A. The state of copper in human serum: evidence for an amino acid-bound fraction// J. clin. Invest., 1967,- 46,N 4.-P.646-658.

167. Niki E. a-Tocohperol//Handbook of antioxidant/ Eds.E.Cadenas,L.Pacter.N.Y.:Marcel Dekker,Inc.,1996.P.3-25.

168. NohlH., Koltover V., Stoize K. Ischemia/reperfusions impairs mitochondrial energy conservation and triggees 02 release as a byproduct of respiration//Free Radical Res. Comms. 1993.Vol. 18.P.127-137.

169. О 'Halloran T.V.,Culotta V.C., Metalloshaperones, fn intracellular shuttle service for metal ions//J.Biol.Chem., 2000,-275,N 33.-P.25057-25060.

170. Oguran Y., Yamazaki J. Steady-state kinetics of the catalase reaction in the presence of cyanide// J.Biochem. 1983. Vol. 94.P.403-408.

171. Ozawa T. Genetic and functional changes in mitochondria associated with aging// Physiol.Rev. 1997.Vol.77,N2.P.425-464.

172. Papa S., Skulachev V.P. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging// Molec.Cell. Biochem. 1997. Vol.174. P.305-319.

173. Petrig R., Gascoyne P., McLfughin J.,Szent-Gyorgyi A. Enzime-controlled scavenging of ascorbyl and 2,6- dimethoxy-semiquinone free radicals in Ehrlich ascites tumor cells// Proc. Natl. Acad.Sci. USA., 1985

174. Pryor W.A.Squadrito G.L. The chemistry of peroxynitrite: a product from the reaction of nitric oxide with superoxyde// Am.J.Physiol.1995. Vol.268, №5. P.271-273.

175. Puntarulo S., Cederbaum A.I. Effect of oxygen concentration on microsomal oxidation of ethanol and generation of oxygen radicals // Biochem. J. 1988. V. 251. P. 787-794.

176. Regan L. The design of metal- binding siten in proteins // Ann. Rev. Biophys. and Вiomol.Struct., Vol 22.-Palo Alto (CaliQ,1992.-P.257-281.

177. Retsky K.L., Freeman M.W., Frei B. Ascorbic acid oxidation product(s) protect human low density lipoprotein against atherogenic modification // J. Biol. Chem. — 1993. — 268. — P. 1304-1309.

178. Salo D.C., Lin S.W., Paciflci R.E., Davies К J. Superoxide dismutase is preferentially degraded by a proteolytic system from red bloom cells following oxidative modification by hydrogen peroxide// Free Radic. Biol. Med. 1988. Vol. 5. N 5-6.P.335-339.

179. Sauer H., Wartenberg M, Hescheler J. (2001) Reactive Oxygen Species as Intracellular Messengers During Cell Growth and Differentiation. Cell Physiol Biochem; 11:173-186

180. Schmidt K., Bayer W. Zink in der Medizin aktueller wissenchafilicher Erkentisstand// Vita Min Spur, 1996.N4.P. 159-185.

181. Simmons S.R.,Karnovsky M.L. Iodination ability of various leikocytes and their bactericidal activity// J.Exp. Med.-1973.Vol. 138.P.44.

182. Sissoeff В., Grisvard J., Guisella E., Studies of metal ions DNA sequences//Propr. Biophys. andMol. Biol., 1976.,-31,N2.-P.165-199.

183. Skinner N.D. Martin D.J. Effect of a vitamin С supplement on plasma status in healthy cats. The FASEB Jornal, vol.13, № 4,671.17

184. Slot J.W., Geuze H.J., Freeman B.A., Crapo J.D. Intracellular localization of the cooper-zinc and manganese superoxide dismutase in rat liver parenchymal cells//Lab. Invest.1986. Vol. 55.P.363-371.

185. Smith D.W. Copper// Ann. Repts. Propr.Chem.A, 2002,-98.-P.213-234.

186. Sohal R.S., Dubey A.M. Mitochondrial oxidative damage, hydrogen peroxide release, and agig// Freeb Radical. Biol.Med. 1994. Vol. 16.P.621-626.

187. Sohal R.S., Sohal B.H. Hydrogen peroxide release by mitochondria increases during aging// Mech.Ageing Dev. 199l.Vol.57.P. 187-202.

188. Sohal R.S., Weindruch R. Oxidative stress, caloric restriction, and aging// Science. 1996. Vol.273. P.59-63.

189. Stocker R., Frei B. Endogenous antioxidant defences in human blood plasma. In: Sies H. ed. Oxidative stress: oxidants and antioxidants. London: Academic Press. — 1991. — P.213-243.

190. Stocks J., Gutteridge J.M., Sharp R.J., Dormandy T.L., The inhibition of lipid autoxidation by human serum and its relation to serum proteins and alpha tocopherol //Clin. Sci.Mol.Med. 1974. Vol.47. P.223-233.

191. Ursini F.,Maiorio M., Gregolin C. Phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase// Int. J.Tissue React. 1988. Vol. 8,N 2.P.99-103.

192. Vlessis AA; Bartos D; Muller P; Trunkey DD Role of reactive 02 in phagocyte-induced hypermetabolism and pulmonary injury. J Appl Physiol, 1995 Jan, 78:1, 112

193. Walshe J.M. (1995) Copper: Not too little, not too musch, but just right// J. Roy. Coll. Physicians London. 1995,- 29,N 4.-P.280-287.

194. Weiss S.J. Tissue destruction by neutrophils // New.Engl.J.Med.1989. Vol.320.N6. P.365-376.

195. Yan L.J., Levine R.L., Sohal R.S. Oxidative damage during aging targets mitochondrial aconitase// Proc. Natl.Acad. Sci. USA.1997.Vol.94.N 21.P.11168-11172.