Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биохимические аспекты индукции дифференцировки и апоптоза клеток линии К562
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия
Автореферат диссертации по теме "Биохимические аспекты индукции дифференцировки и апоптоза клеток линии К562"
На правах рукописи УДК 591 81 612 014
Зыкина Наталья Сергеевна
БИОХИМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИНДУКЦИИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ И АПОПТОЗА КЛЕТОК ЛИНИИ К562
Специальность 03 00 04 - биохимия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
003163102
ПЕТРОЗАВОДСК 2007
003163102
Работа выполнена на кафедре молекулярной биологии, биологической и органической химии Петрозаводского государственного университета и в лаборатории экологической биохимии Института биологии Карельского Научного Центра РАН
Научный руководитель доктор биологических наук, профессор, чл -корр РАН
НЕМОВА Нина Николаевна
Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор
ОЛЕИНИК Евгения Константиновна
доктор биологических наук, профессор
ЗАХАРОВА Людмила Алексеевна
Ведущая организация Институт биохимии им А Н Баха РАН
Защита состоится «8» ноября 2007 г в 15 00 часов на заседании Диссертационного Совета КМ 212 087 01 при Карельском государственном педагогическом университете по адресу 185035, г Петрозаводск, ул Пушкинская, д 13, ауд 113 главного корпуса
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Карельского государственного педагогического университета
Автореферат разослан « г
Ученый секретарь
Диссертационного Совета, к м н Л Малкиель А И
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования Биохимические механизмы регуляции пролиферации, дифференцировки и апоптоза имеют основополагающее значение не только при нормальном функционировании основных процессов жизнедеятельности организма, но и при развитии патологических состояний, в том числе злокачественных опухолей В клеточных линиях, полученных из различных новообразований человека, сохраняются опухолеспецифические изменения генома и особенности, характерные для исходных опухолевых клеток Это позволяет использовать опухолевые клеточные линии в качестве адекватных моделей для исследования механизмов биохимических процессов, а также тестирования и оценки эффективности противоопухолевых препаратов (Drexler, MacLeod, 2003, Shoemaker, 2006) Одной из таких экспериментальных моделей является эритромиелолейкозная линия человека К562
Известно, что многие химические реагенты, в том числе противоопухолевые, способны индуцировать дифференцировку опухолевых клеток как m vivo, так и in vitro, в ряде случаев сопровождающуюся запуском апоптотических процессов (Волкова и др, 2003, Mengubas et al, 1996, Robertson et al, 1997, Terui et al, 1998) Механизм действия таких соединений может быть различным Например, алкилирующие агенты (циклофосфан, дипин, тиофосфамид, митомицин С), образующие с ДНК или РНК прочные ковалентные связи, нарушают их синтез и вызывают гибель клеток (Wang et al, 1996, Белоусов и др ,
1997, Maanen et al, 2000, Регистр лекарственных средств России , 2006, Mignone, Weber, 2006) Другие соединения (метотрексат, цитарабин, флюдара-бин, 5-фторурацил, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, сульфамиды) могут выступать в качестве антиметаболитов ключевых молекул клетки, в том числе основных метаболических ферментов ДНК- и/или РНК-полимераз, ферментов гликолиза и пентозофосфатного цикла, карбоксиангидраз, Са2+-зависимых ферментов (Chunduru et al, 1993, Bretner et al, 1999a, Bretner et al, 1999b, Гершанович,
1998, Подцубная, 1999, Supuran et al, 2004, Tiwan et al, 2005, Sampath et al, 2006)
В настоящее время установлено, что к числу первостепенных биохимических маркеров апоптоза относится изменение активности каспаз (caspases, cys-teinyl aspartate-specific proteinases) Модуляция активности этих ферментов является ключевым фактором в процессах индукции/ингибирования апоптоза Кроме того, показано, что некоторые каспазы способны трансактивироваться при индукции дифференцировки (Pandey et al, 2000) Пандей и соавт (Pandey et al, 2000) показали, что при дифференцировке клеток линии U937, индуцированной ТФА (12-О-тетрадеканоилфорболацетат), происходит выход цитохрома с из митохондрий и активация каспазы-3 При дифференцировке клеток про-миелоцитарного лейкоза HL-60 и клеток остеосаркомы, индуцированной рети-ноевой кислотой и тритерпеноидом (CDDO), соответственно, также отмечено увеличение функциональной активности каспаз-3, -8 и -9 (Doule et al, 2002, Ito et al, 2001) Кроме того, функциональная активность каспаз и других цистеино-вых и сериновых протеиназ во многом определяет чувствительность опухолевых клеток к неспецифическому цитотоксическому лизису (ЧЦТ-лизису) есте-
ственными киллерными клетками (ЕКК) организма (Laskay, Kiesslmg, 1986, Ве-noist et al, 1989, Prado et al, 1995) Поэтому изучение биохимической регуляции таких клеточных функций как пролиферация, дифференцировка и апоптоз на уровне вторичных и третичных мессенджеров, а также поиск химических соединений, способных регулировать указанные клеточные процессы, представляет несомненный интерес не только для изучения специфики развития и функционирования опухолевой клетки, но и для ведения эффективной химиотерапии
Цель настоящей работы состояла в изучении биологического действия ряда структурно различных ксенобиотиков на индукцию или ингибирование процессов дифференцировки и/или апоптоза опухолевых клеток К562 и модуляцию их чувствительности к НЦТ-лизису ЕКК В качестве химических реагентов нами были выбраны тимидин, бутират натрия, диметилсульфоксид (ДМСО), хинолин (0, в том числе его jV-оксидированные производные (хино-лин-1-оксид - QO, 4-нитрохинолин-1-оксид - 4-NQO), циклофосфан, производные тиазофосфола (2-третбутиламино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ин, 2-анилино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ин) В задачи исследования входило
1 Изучить цитотоксическое и антипролиферативное действие на клетки К562 химических реагентов с известным механизмом действия, а также новосинте-зированных производных тиазофосфола, определить ЕСю,
2 На основе данных по токсичности определить дифференцирующую активность нетоксичных доз каждого из исследуемых соединений, а также комбинаций Q, QO, 4-NQO с индукторами эритроидной дифференцировки (тими-дином, бутиратом натрия и ДМСО) по отношению к клеткам К562 При изучении дифференцирующего действия реагентов определить основные белки и ферменты эритроидного и миелоидного путей дифференцировки опухолевых клеток,
3 Изучить влияние химических реагентов на модуляцию активности каспаз в клетках К562 как возможных участников расхождения путей передачи сигнала от процессов дифференцировки к апоптозу,
4 На основе полученных данных исследовать влияние производных тиазофосфола на процессы окисления и восстановления цитохрома с как одного из основных посредников передачи сигнала апоптоза в клетке,
5 Провести сравнительный анализ биологического действия исследуемых химических реагентов на клетки родительской линии К562 и сублинии, экс-прессирующей температурочувствительный мутантный белок р53 Val 135 (.K562/ts-p53),
6 Определить модулирующее действие ксенобиотиков и их комбинаций на чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису лейкоцитами человека
Научная новизна Впервые изучено дифференцирующее и апоптогенное действие производных тиазофосфола на клетки линии К562 Показано, что третбутиламиновое производное индуцирует эритроидную дифференцировку клеток К562, в клетках имеет место активация каспаз-3 и -9 с последующим запуском апоптоза Напротив, анилиновое производное ингибирует эритроидную
и индуцирует моноцито-макрофагальную дифференцировку опухолевых клеток, при этом регистрируется активация каспаз-3, -8, -9 и последующее развитие апоптоза Нами показано, что переключение процессов клеточной диффе-ренцировки с одного пути на другой, например, с эритроидного на моноцито-макрофагальный, влечет за собой переключение работы каспаз и модуляцию процессов апоптоза в клетках К562
Впервые экспериментально определено влияние сочетанного действия индукторов эритроидной дифференцировки клеток К562 и ^-оксидированных производных хинолина на чувствительность опухолевых клеток к НЦТ-лизису лейкоцитами периферической крови (ЛПК) человека, установлено, что и диф-ференцировка, и апоптоз вносят вклад в модуляцию НЦТ-лизиса клеток-мишеней клетками-эффекторами
Впервые изучено влияние сочетанного действия тимидина, бутирата натрия и ДМСО с yV-оксидированными производными хинолина на модуляцию эритроидной дифференцировки и апоптоза в клетках K562/ts-p53 Показано, что при обработке клеток сублинии эритроидными индукторами синтез гемоглобина значительно усиливается по сравнению с клетками родительской линии К562 Кроме того, в клетках с мутантным р53 Val 135 процессы апоптоза также протекают активнее
Теоретическая и практическая значимость работы Выполненная работа представляет как теоретический, так и практический интерес в области клеточной биологии и молекулярной медицины Для изучения сочетанного действия индукторов различных путей дифференцировки опухолевых клеток на ряд важнейших клеточных функций - пролиферацию, апоптоз, чувствительность к НЦТ-лизису эндогенными ЕКК - использовалась модельная система Значительное количество противоопухолевых соединений обладают дифференцирующей активностью по отношению к клеткам опухолей in vivo и опухолевых клеток in vitro, проявляющуюся в зависимости от дозы используемого препарата и условий обработки В связи с этим, нами показано, что при обработке опухолевых линий, например, клеток линии К562, индукторами эритроидной и миелоидной дифференцировки может наблюдаться подавление пролиферации, индукция и ингибирование апоптоза и модуляция чувствительности клеток к НЦТ-лизису ЕКК Таким образом, при клиническом использовании противоопухолевых агентов необходимо учитывать эффекты изменения целого ряда клеточных функций, возникающие под действием (или на фоне) каждого из составляющих комбинации Кроме того, результаты исследований могут быть использованы в учебных курсах по биохимии и молекулярной биологии, для написания учебных и методических пособий, а также монографической литературы
Апробация работы Результаты исследований были представлены на III съезде Биохимического Общества (Военно-медицинская Академия, С -Пб, 2002), 7ой Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука 21го века» (Пущино, 2003), 8ой Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука 21го века» (Пущино, 2004) По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ
Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, четырех глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, обсуждение), заключения и выводов общим объемом 192 страницы машинописного текста В работу входит 32 рисунка и 13 таблиц Список литературы содержит 54 отечественных и 364 англоязычных источника
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Обзор литературы состоит из четырех разделов, включающих современные сведения о противоопухолевых гетероциклических соединениях, а также о механизмах индукции химическими реагентами дифференцировки и апоп-тоза клеток опухолевых линий и изменении чувствительности клеток опухолевых линий к НЦТ-лизису ЕКК дифференцирующими агентам
Материалы и методы В работе использовали клетки человеческой эритромиелолейкозной линии К562 (Всероссийский банк клеточных культур, Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург) Сублинии клеток К562, устойчивые к действию QO и 4-NQO, получены и охарактеризованы на кафедре молекулярной биологии, биологической и органической химии Петрозаводского государственного университета Линия K562/ts-p53 любезно предоставлена профессором Копниным Б П (ГУ Российский онкологический научный центр им НН Блохина РАМН)
1 Культивирование клеток линии К562 проводили в полной среде 89% RPMI 1640 с добавлением 11% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глютамина, 40 мкг/мл гентамицина сульфата, 50 мкМ 2-меркаптоэтанола Культуры засевали в 24-луночные (96-луночные) микропланшеты в объеме 1 мл (3 мл) среды при начальной плотности посева 105—106 клеток на лунку, соответственно, и инкубировали в течение 2-4-х суток в присутствии (или без) изучаемых химических реагентов Схемы инкубации предусматривали обработку клеток единичными соединениями, либо сочетанием нескольких соединений, в этом случае использовалась как совместная, так и последовательная обработка клеток реагентами
2 Определение ECSo клеток проводили по методу Tsuruo и сотр (1981)
3 Численность клеток К562 подсчитывали с помощью камеры Горяева, процент жизнеспособности оценивали по тесту с трипановым синим
4 Определение внутриклеточной концентрации гемоглобина проводили с помощью бензидиновой пробы (Andersson et al, 1979) Далее [Hb], пересчитывали на 105 клеток К562
5 Определение активности ферментов синтеза и распада гема. Активность 5-аминолевулинатсинтетазы проводили по методу Granick (1966) Пробы содержали 0,2 мл клеточного лизата и 2,8 мл буфера-АЛК (150 мМ трис-НС1, рН 7,4, 100 мМ глицин, 10 мМ ЭДТА, 0,2 мМ пиридоксаль-5-фосфат) Производные тиазофосфола добавляли в пробы одновременно с клеточным лиза-том, конечная концентрация реагентов составила 105 М Далее пробы инкубировали 60 мин при 37°С Образующуюся в ходе инкубации АЛК переводили в форму пиррола кипячением в течение 10 мин в присутствии ацетилаце-тона и определяли спектрофотометрически при длине волны 350 нм Актив-
ность фермента выражали в нМ 5-AJIK / чх 1 мг белка Активность гемокси-геназы проводили по методу King и соавторов (1978) Пробы содержали 0,3 мл клеточного лизата, 0,2 мл метгемальбумина (0,033 мМ гемина и 0,0025 мМ бычьего сывороточного альбумина), 2,5 мл 0,1 М фосфатного буфера Производные тиазофосфола добавляли в пробы одновременно с клеточным лизатом, конечная концентрация реагентов составила 105 М Далее пробы инкубировали 25 мин при 37°С Активность фермента рассчитывали по количеству образовавшегося билирубина с использованием коэффициента молярной экстинции при 468 нм равного 0,04 М ~'хсм и выражали в нМ билирубина в 1 мин на 1 мг белка
6 Фенотипирование маркеров моноцито-макрофагальной (мегакарнопн-тарной) дифференцировки клеток проводили с помощью непрямой имму-нофлуоресценции с использованием моноклональных антител (CON, CD41), меченых ФИТЦ (флуоресцеинизотиоцианат) (Jackon, Warner, 1986)
7 Определение характера повреждений ДНК (1- и 2-нитевые разрывы) проводили по изменению параметров флуоресценции двух ДНК-тропных красителей бромистого этидия (EtBr) и 4,6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) (Иванов, 1992, Анисимов и др , 1999а) ДНК в нуклеоидном виде получали по методу Кука и Бразелла (Cook, Brazell, 1978) Измерения флуоресценции красителей при соответствующих длинах волн возбуждения и эмиссии проводили на приборе ФМ-Ц-2 Находили AEtBr и ADAPI, характеризующие изменение флуоресценции красителей при связывании с ДНК по формуле
AEtBr (ADAPI) = 1,-12- (/3 - U), где // - интенсивность флуоресценции пробы, содержащей клеточный лизат и EtBr (DAPI) в буфере, 12 - интенсивность флуоресценции клеточного лизата в буфере, I} - интенсивность флуоресценции EtBr (DAPI) в буфере, 14 - интенсивность флуоресценции буфера
8 Определение суммарной внутриклеточной концентрации никотинамид-ных коферментов [NAD++NADH\, проводили по методу Ниссельбаума и Грина (Nisselbaum, Green, 1969)
9 Определение активности каспаз проводили стандартным методом согласно прилагаемой инструкции с использованием специфических субстратов, меченных флуоресцентной меткой (7-амино-4-трифлуорометилкумарин - Л FC), детектируемой по изменению флуоресценции или оптической плотности Клетки К562 (106 клеток) снимали с лунок микропланшет, дважды отмывали фосфатным буфером, добавляли к клеткам 50 мкл литического буфера, приготовленного смешиванием 920 мкл H2Oa„CT, 40 мкл 25-кратного реакционного буфера и 10 мкл каждого из четырех ингибиторов ФМСФ (фенилметан-сульфонилфторида) (35 мг/мл), пепстатинаЛ (1 мг/мл), апротинина (1 мг/мл) 25-Кратный реакционный буфер включал следующие компоненты 250 мМ ХЕПЕС, pH 7,4, 50 мМ ЭДТА, 2,5% ЧАПС (3-((3-хлорамидопропил)диметиламмонио)-1-пропансульфонат), 125 мМ дитиот-реитол Далее клетки трижды замораживали в атмосфере жидкого азота, затем клеточный лизат центрифугировали на микроцентрифуге при 17000 G
(4°С) в течение 30 мин, собирали супернатант (образец) Определение активности каспаз-3, -8 и -9 проводили в реакционном буфере путем смешивания образца и соответствующего специфического субстрата Субстрат для каспа-зы-3 - DEVD (Asp-Glu-Val-Asp), для каспазы-8 - Leu-Glu-Thr-Asp, для каспа-зы-9 - LETD (Leu-Glu-Thr-Asp) Определение количества отщепленного AFC проводили на СФ-46 при 395 нм через 30, 60, 90, 120, 150 и 180 мин после начала реакции Далее строили график, демонстрирующий изменение активности каспаз в зависимости от времени инкубации образца и соответствующего субстрата В работе также использовали ингибитор каспазы-3 z-VAD-FMK
10 Определение чувствительности опухолевых клеток к НЦТ-лизису лейкоцитами человека. Лейкоциты периферической крови (ЛПК) человека выделяли из крови здоровых мужчин с помощью двухступенчатой процедуры, включающей фракционирование на градиенте фикола-гипака, с последующим лизисом эритроцитов дистиллированной водой Тест неспецифической цитотоксичности ЛПК человека (клетки-эффекторы - КЭ) по отношению к клеткам К562 (клетки-мишени - КМ), инкубированным с индукторами и меченным ''Я-уридином, ставили по прописи (Сорокин и др , 1991, Аниси-мов, Болотников, 1998) Время инкубации культур со стимуляторами до постановки НЦТ-теста во всех вариантах составляло 2 суток Цитотоксический индекс (ЦИ, %) рассчитывали по формуле
ЦИ = 1 - (имп/мин) в опытных пробах / (имп/мин) в контрольных пробаххЮО %,
где за контроль принимали культуры клеток К562, меченные 5Я-уридином и не содержащие ЛПК человека
11 Проведение ПЦР-анализа в режиме реального времени. Выделение полноразмерной поли(А)+-мРНК проводили на магнитных частицах в присутствии ДНК-азы, согласно инструкции производителя (Силекс, Москва) Первую цепь кДНК синтезировали из поли(А)+РНК (0,5 jig) используя гап-dom(dT)i5 праймер и M-MLV обратную транскриптазу (набор ОТ-ПЦР) Первую цепь кДНК использовали в качестве матрицы для ПЦР с геноспецифиче-скими праймерами и Та^-полимеразой Были использованы следующие праймеры для каспазы-3 (5'-CTT-GGT-AGA-TCG-GCC-ATC-TGA-AAC-3', 5'-GGT-CCC-GTA-CAG-GTG-TGC-TTC-GAC-3'), для каспазы-9 (5'-ААС-ТАА-CAG-GCA-AGC-AGC-AA-3', 5'-TTT-CTG-GGC-GGT-CAG-GTC-3') (компьютерная программа по подбору праймеров Primer Primier 5) и для ^-глобина (5'-GAA-GAG-CCA-AGG-ACA-GGT-AC-3', 5'-GTC-TCC-TTA-AAC-CTG-TCT-TG-3') (Kim Y -J et al, 2005) Реакционная смесь для ПЦР в объеме 30 мкл содержала 2 мкл кДНК, 0,2 мМ каждого dNTP, 100 нМ геноспецифиче-ского праймера, 1 ед 7ад-полимеразы, 2,5 мкл 10-кратного буфера для Taq-полимеразы Условия ПЦР денатурация - 2 мин при 94°С, отжиг - 1 мин при 60°С, полимеризация - 1 мин при 72°С, количество циклов - 35, достраивание фрагментов - 10 мин при 72°С Полученные продукты реакции разделяли в 6% полиакримамидном геле, используя трис-боратный буфер ПЦР продук-
ты окрашивали 1% раствором бромистого этидия и визуализировали в проходящем УФ свете, используя низкомолекулярный (501-67 bp) маркер длин фрагментов pUC19IMsp I 12 Анализ влияния различных химических реагентов на процессы восстановления и окисления цитохрома с проводили спектрофотометрически Конечная концентрация цитохрома с в пробе составляла 2,5 мг/мл Восстановление цитохрома с проводили цистеином в соотношении 1 30, инкубируя смесь в течение 30 минут при 37°С Окисление восстановленной формы цитохрома с проводили в присутствии пероксидазы и Н2О2 (конечная концентрация 0,03 мкг/мл и 0,002%, соответственно) в течение 2 минут Влияние циклофосфана, третбутиламинового и анилинового производных тиазофос-фола (5х10"5М) на процессы восстановления и окисления цитохрома с изучали в обозначенных условиях после 15-ти минутной преинкубации при 37°С окисленной или восстановленной формы белка с указанными реагентами В качестве контроля использовались пробы, не содержащие цитохром с Измерения оптической плотности реакционной смеси проводили на СФ-46 при длинах волн в диапазоне от 300 нм до 590 нм
Достоверность полученных результатов оценивали по /-критерию Стью-дента, а также с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни
Хинолин (Q) получен из Adrich Chemical Со (Milwaukee, США), хинолин-1-оксид (QO) и 4-нитрохинолин-1 -оксид (4-NQO) предоставлены к х н , доцентом кафедры молекулярной биологии, биологической и органической химии ПетрГУ Андреевым В П Производные тиазофосфола (2-анилино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ин и 2-третбутиламино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ин) любезно предоставлены кх н , ст научным сотрудником Института органической и физической химии им А Е Арбузова Казанского НЦ РАН Хайловой Н А
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Биологическая активность Л/-оксидированных производных хиноли-на по отношению к клеткам К562 В первой серии экспериментов нами изучено влияние /^-оксидированных производных хинолина на пролиферацию, дифференцировку и апоптоз, а также чувствительность клеток линии К562 к НЦТ-лизису лейкоцитами человека
Из результатов следует, что при использовании низких концентраций реагентов (ниже ЕС5о) клеточная пролиферация ко 2-м су ткам инкубации была полностью подавлена, но жизнеспособность клеток оставалась достаточно высокой Индекс пролиферации для Q, QO и 4-NQO составил 0,44, 0,49 и 0,43, соответственно При дальнейшем культивировании (до 4-х суток) падала только жизнеспособность, динамика численности клеток не изменялась (рис 1) Подобное биологическое действие исследуемых гетероциклов может являться результатом ковалентного связывания с ДНК метаболитов указанных соединений с образованием стабильных моноаддуктов (Сейц, Князев, 1986, Heron-Milhavet et al, 2001) Появление в клетках подобных аддуктов приводит, как правило, к
•ъ 700 h
£ х 600 i о ><
0 * 500 ■
1 ц 400 ^
5 I 300 ^
p S 200 I 5 ioo
О i—
s* a.
m
2 3
реагенты
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Рис. 1. Численность и жизнеспособность клеток К562, обработанных в течение 2-х и 4-х суток инкубации (J, QO и 4-NQO
1 - необработанные клетки К562 (контроль); 2 - клетки, инкубированные с О: i с QO\ 4-е 4-NQO Начальная плотность посева составила 105 клеток/лунку
Столбиками обозначена численность клеток; треугольниками - жизнеспособность. Светлые столбики и треугольники отражают данные 2-х суточной инкубации с указанными реагентами (концентрация Q составила 0,3 мкМ, QO - 10 мкМ, 4-NQO - 1 нМ), тёмные столбики и треугольники - 4-х суточной (концентрация Q составила 0,1 мкМ, 00-10 мкМ, 4-NQO - 0,1 нМ)
* достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,01) ** достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,05)
остановке клеточного цикла и индукции другого процесса, например, диффе-ренцировки и/или апоптоза.
Нами показано, что к 4-м суткам инкубации значимое снижение концентрации гемоглобина (р<0,01) в опухолевых клетках наблюдалось при обработки QO и 4-NQO. Наибольшим ингибирующим действием на клетки К562 обладал 4-NQO-. концентрация гемоглобина в клетках составила - 0,070±0,002 мкг/105 клеток (уровень [Hb], в контрольных клетках - 0,098±0,003 мкг/10 клеток). Указанные реагенты стимулируют экспрессию маркеров моноцито-макрофагальной и мегакариоцитарной дифференцировок клеток К562, о чём свидетельствует достоверное увеличение (р<0,01) экспрессии CD 14- и CD41-антигенов на поверхности клеток.
Индукция дифференцировки может повлечь за собой образование 1- и 2-нитевых разрывов в молекуле ДНК (Sugiura et al., 1984) с последующей активацией процессов апоптоза и/или репарации. Известно, что апоптоз и репарация являются энергозависимыми процессами, т. е. протекают с потреблением ATP, а также никотинамидных коферментов, внутриклеточный уровень которых в свою очередь может контролировать протекание как апоптоза, так и репарации (Richter et al., 1996). На 2-е сутки наблюдалась выраженная индукция повреждений ДНК опухолевых клеток (р<0,01) только при инкубации с 4-NQO, тогда как при дальнейшей (до 4-х суток) инкубации с изучаемыми соединениями параметры флуоресценции ДНК-тропных красителей значимо возрастали и становились достоверными для всех трёх реагентов. Определение внутриклеточной концентрации никотинамидных коферментов на 2-е сутки показало достоверное снижение [NAD'+NADH], при обработке 4-NQO, но не Q или QO, что коррелирует с результатами по изменению флуоресценции ADAPJ и AEtBr.
Инкубация клеток с хинолиноксидом или 4-нитрохинолин-1-оксидом приводила к значимому увеличению (р<0,01) активности каспаз-3, -8, -9, тогда как при обработке клеток хинолином активировалась только каспаза-8. Выше было отмечено, что хинолин не влиял на дифференцировку клеток К562, поэтому отмеченное увеличение параметров флуоресценции ADAPI и AEtBr и снижение [NAD*+NADH\i при обработке Q, указывают на запуск процессов апоптоза клеток.
Использование дифференцирующих агентов в клинической практике может приводить к индукции у опухолевых клеток фенотипа множественной лекарственной устойчивости, что в свою очередь является основной причиной неэффективности применения многих цитостатиков и появления резистентного к индуктору клона (Krishna, Mayer, 2000). Одним из альтернативных подходов по преодолению фенотипа множественной лекарственной устойчивости может стать поиск таких соединений, которые способны существенно усилить дифференцировку резистентных опухолевых клеток (Prados et al., 1998). Итогом такой дифференцировки может быть замедление темпов пролиферации и индукция/подавление апоптоза. В связи с этим нами была определена экспрессия генов основных участников апоптоза - каспаз - в клетках K562/QO и К562/4-NQO. По данным ПЦР было выявлено достоверное снижение (р<0,01) экспрессии генов каспаз-3 и -9 в обозначенных сублиниях по сравнению с клетками родительской линии (рис. 2 а, б), что может быть одним из объяснений развития устойчивости опухолевых клеток к этим реагентам.
0,9 0,6
0,3
о
сублинии
S О
о а
х &
сублинии
Рис. 2. Относительная экспрессия гена каспаз 3 (а) и 9 (б) в сублиниях К5621()0 и K562/4-NQO 1 - экспрессия гена соответствующей каспазы в клетках родительской линии К562 (контроль); 2 - в клетках сублинии К562!<20\ 3 - в клетках сублинии K562l4-NQO
Относительная экспрессия гена (¿1С,) определяется исходя из экспрессии гена в конгроле, которая принимается за единицу; дс[=2с,<контром>-с,<от1та)
* достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,01)
Из данных, представленных на рис. 3, следует, что только обработка клеток приводит к достоверному повышению (р<0,05) их чувствительности к НЦТ-лизису ЛПК человека.
4-NQO
QO
Q
контроль
О 50 100 150 200
цитотоксический индекс, %
Рис. 3. Влияние обработки клеток К562 Q, QO, 4-NQO на их чувствительность к неспецифическому цитотокси-
ческому лизису лейкоцитами человека
Концентрация Q - 0,3 мкМ, QO - 10 мкМ, 4-NQO - 1 нМ
По горизонтали: отношение ЦИ клеток-эффекторов с клетками опытных культур к таковой контрольных клеток без обработки, % (величина ЦИ с контрольными клетками принята за 100%). Соотношение клеток-эффекторов и клеток-мишеней 50:1. Время инкубации 2-е суток * достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,01)
Биологическая активность /V-оксидированных производных хиноли-на в комбинации с индукторами эритроидной дифференцировки по отношению к клеткам К562. В данной серии экспериментов в качестве эритро-идных индукторов дифференцировки клеток К562 были использованы тими-дин, бутират натрия и ДМСО. Для оценки влияния /V-оксидированных производных хинолина в комбинации с эритроидными индукторами нами были определены те же параметры, что и в предыдущей серии экспериментов.
Ко 2-м суткам инкубации жизнеспособность клеток К562 достоверно снижалась при обработке следующими комбинациями: Q (4-М20)+тимидин (р<0,05 и р<0,01, соответственно), Q (4-NQO)+6yvwpaT натрия (р<0,01), 4-NQO+ДМСО (р<0,05). К 4-м суткам только при использовании комбинаций Q (£0)+ДМС0 жизнеспособность клеток значимо не отличалась от проб, содержащих ДМСО. Пролиферация опухолевых клеток во всех исследуемых нами вариантах была полностью блокирована. Токсический эффект рассмотренных комбинаций реагентов по отношению к клеткам на 4-е сутки обработки выглядит следующим образом (табл. 1). Наиболее сильное действие на клетки К562 оказала комбинация 4-NQO+6ympar натрия. При культивировании с этими веществами жизнеспособность клеток к 4-м суткам составила 31,02±2,92% по сравнению с бутират-обработанными клетками 87,18±0,72%. Наименьший токсический эффект наблюдался в случае комбинации QO+ДМСО (индекс пролиферации - 0,61).
Интересно отметить, что комбинации производных хинолина с бутиратом натрия и тимидином значительнее снижают жизнеспособность клеток К562 по
Таблица 1
Снижение жизнеспособности клеток К562, обработанных N оксидированными производными хинолина в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО в течение 4 х суток инкубации
Комбинация реагентов Процент снижения жизнеспособности по сравнению с клетками, обработанными только эритроидным индуктором, %
4-NQO+6yiYipm натрия 56,16
£}+бутират натрия 48,95
4-А^0+тимидин 33,27
ßO+бутират натрия 31,26
РО+тимидин 29,08
0+тимидин 21,23
4-NQO+J\UCQ 11,14
0+ДМСО 3,18
ЙО+ДМСО 1,11
сравнению с вариантами, содержащими в качестве эритроидного индуктора ДМСО
Нами также было рассмотрено влияние поочередной обработки клеток К562 Л'-оксидированными производными хинолина и тимидином (рис 4 а, б, в) на жизнеспособность клеток В случае первоначальной обработки клеток эрит-роидным индуктором и последующей - Q, QO или 4-NQO, не наблюдалось достоверного отличия от вариантов, инкубированных с комбинациями данных соединений Если клетки К562 обрабатывались сначала Q и 4-NQO, а потом тимидином (рис 4 а, в), наблюдалось значительное снижение жизнеспособности клеток (до 45,96±1,25% и 32,73±1,15%, соответственно) по сравнению с клетками, обработанными по схеме М-оксид+тимидин (тимидишТУ-оксид) Инкубация сначала с хииолинксидом, а потом с тимидином оказалась наименее токсичной для клеток К562 (повышение жизнеспособности до 79,94±1,43% против 64,24±1,35% контрольных клеток) Исходя из полученных данных, можно предположить, что первоначальная обработка опухолевых клеток Q и 4-NQO делает их более чувствительными к цитотоксическому действию тимидина При замене в данных вариантах Q или 4-NQO на QO подобного эффекта не обнаружено
Как было отмечено выше, хинолин не влиял на синтез гемоглобина в клетках К562, а хинолиноксид и 4-нитрохинолин-1-оксид достоверно снижали [НЬ], в клетках Данные, полученные при сочетанной обработке опухолевых клеток хинолином и эритроидными индукторами, свидетельствуют о том, что этот реагент также не модулировал эритроидную дифференцировку, индуцированную тимидином, бутиратом натрия или ДМСО QO и 4-NQO в сочетании с тимидином и ДМСО способны полностью блокировать индуцирующее действие последних на синтез гемоглобина in vitro (рис 5 а, б) В комбинациях указанных соединений с бутиратом натрия полного блока дифференцировки не на-
100 80 60 40 20 О
необработанные О + тимидин тимидин/О О/тммидин
клетки (контроль)
б
необработанные СЮ + тимидин тммидин/СЮ ОО/тимидин клетки (контроль)
100 | 80
|| 60
С 40
I 20
I 0
необработанные клетки
4-ИСЗО + тимидин (контроль)
тимидин/4-ШО 4-ЫОО/тимидин
Рис. 4. Жизнеспособность клеток К562 при поочерёдной обработке тимидином и (>, ()() или 4-М()() Концентрация тимидина составила 2 мМ, () - ОД мкМ, <20 - 10 мкМ, 4-N00 - 0,1 нМ. Сначала клетки К562 были инкубированы 2 суток с тимидином, затем отмыты и обработаны в, £О или 4-N00 на последующие 2 суток. Параллельно исследованы варианты с первоначальной обработкой ()0 или 4-?•<()() (2 суток) и последующей - тимидином (2 суток). В качестве контроля использованы пробы, культивируемые с комбинацией Ы-оксид+тимидин в течение 4 суток.
* достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,01)
блюдалось, однако, было отмечено достоверное снижение (р<0,01) синтеза гемоглобина по сравнению с клетками, культивируемыми только с бутиратом натрия (рис. 5 в). В полученных нами сублиниях клеток К562, устойчивых к действию QO и 4-NQO, базальный уровень синтеза гемоглобина не отличался от
\ИЬ] , |.1К'г/10! клеток
0,16 0,12 0,08 0,04 0
6
[НЬ]., мкгЮ5 клеток_
1 2 3 4 5
комбинации реагентов
в
У А-
У Т*
/ 1 ■
/ 1 ■
/ и.
1 2 3 4 5
комбинации реагентов
✓
/ /
я _
[НЬ]., и кг 10 клеток
комоинацпи реагентов
Рис. 5. Концентрация гемоглобина в клетках К562, обработанных тимидином (а), бутиратом натрия (б) и ДМСО (в) и комбинациями этих индукторов с (5, С?0 и в течение 4-х суток инкубации
1 - необработанные клетки К562\ 2 - клетки, культивируемые с индуктором (контроль); 3-е индуктором и 4 - с индуктором и ОО; 5-е индуктором и 4-N<20
Концентрация тимидина и бутирата натрия составила 2 мМ, ДМСО - 0,5%, - 0,1 мкМ, {)() - 10 мкМ, 4-NQO -0,1 нМ
* достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,01)
синтеза белка в клетках родительской линии. В отличие от родительской линии, обработанной комбинациями индукторов и указанных Л^-оксидов хинолина, более сильное индуцирующее действие на сублинии К562/()0 и K562¡4-NQO оказывал тимидин. Следует отметить, что ()() и 4-.Ы()0 в комбинациях с эритроид-ными индукторами подавляли действие последних на клетки К562, однако в сублиниях К562/<20 и К562!4-Ы(¿О, обработанных тимидином, бутиратом натрия или ДМСО, имеет место более выраженная индукция синтеза гемоглобина.
Обработка клеток К562 комбинациями тимидина и бутирата натрия с изучаемыми Диоксидами хинолина на 2-е сутки приводит к достоверному усиле-
нию (р<0,01) флуоресценции Е/Вг и ВАР] при связывании с ДНК опухолевых клеток по сравнению с клетками, обработанными только эритроидными агентами К 4-м суткам инкубации клеток с комбинациями ДМСО и £)» ЯО. 4-И()0 достоверное увеличение (р<0,01) параметров отмечено для ВАР], значимое увеличение АЕШг - только для комбинации ДМС0+4-Ы()0 (табл 2) Снижение концентрации никотинамидных коферментов наблюдалось при обработке клеток всеми изучаемыми комбинациями за исключением двух, а именно ДМСО+0 и ДМСО+0О
Таблица 2
Параметры ЛйАР! и АЕ/Вг флуоресценции нуклеоидов клеток К562, обработанных ДМСО, а также комбинациями ДМСО с Q, QO и 4-№00 в течение 4-х суток
Реагент ADAPI AEtBr
необработанные клетки 21,9 ± 0,6 4,7 ± 0,2
ДМСО (0,5%) (контроль) 28,9 ±0,9 3,4 ± 0,6
ДМСО+ОШ мкМ) 37,9 ± 1,6* 4,5 ± 1,3
ДМСО+рО (Ю мкМ) 35,2 ± 1,2* 4,4 ± 0,9
ДМСО+4-NQO (0,1 нМ) 56,5 ±1,4* 12,1 ±0,4*
Примечание * достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,01)
При обработке клеток К562 тимидином имело место увеличение активности каспаз-3 и -9 Добавление к индуктору 4-К<20 также активировало каспазу-8 При инкубации клеток К562 с ДМСО и комбинациями индуктора с ()0 или 4-N(20 наблюдалось достоверное повышение (р<0,01) активности только каспа-
время протекания реакции, мин
Рис 6 Изменение активности каспазы-3 в клетках К562, обработанных ДМСО и комбинациями индуктора с N-оксидами хинолина в течение 2-х суток инкубации
1 - базовый уровень активности каспазы для необработанных клеток (контроль), 2 - активность каспазы в клетках, обработанных ДМСО (0,5%), 3 - ДМСО и QO (10 мкМ), 4 - ДМСО и 4-NQO{l\\U) По оси ординат изменение поглощения отщеплённого 4FC, определенное на СФ-46 при 395 им
Обработка опухолевых клеток комбинациями эритроидных индукторов с 4-NQO, а также комбинацией тимидина с QO приводила к достоверному увели-
чению (р<0,01) чувствительности клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека. Так, цитотоксический индекс для обработанных тимидином в комбинациях с Q, QO или 4-NQO клеток составил 110,5+8,2%, 137,8+3,4% и 178,5+10,2%, соответственно (ЦИ для тимидин-обработанных клеток - 110,2+7,1%).
Биологическая активность /V-оксидированных производных хиноли-на в комбинации с индукторами эритроидной дифференцировки по отношению К клеткам K562ltS-p53. Опухолевый супрессор р53 является центральным компонентом внутриклеточной охранной системы, предотвращающей размножение и накопление в организме аномальных клеток. Являясь транскрипционным фактором, активированный р53 изменяет экспрессию ряда генов-мишеней, продукты которых регулируют продвижение по клеточному циклу, дифференцировку и апоптоз. В результате активация р53, вызываемая различными внутриклеточными изменениями, приводит либо к остановке клеточного цикла в G¡ и G2 периодах, либо к гибели клетки. Нарушения функции р53 являются наиболее универсальным молекулярным изменением в различных новообразованиях человека. В клетках многих опухолевых линий, к которым относится и К562, р53 инактивирован, что делает их удобными моделями при внедрении гена р53 дикого типа для изучения функций этого опухолевого су-прессора.
В настоящем исследовании нами было изучено влияние температурочув-ствительного мышиного р53, мутантного по Val 135, на дифференцировку и процессы апоптоза клеток К562 при обработке /V-оксидами хинолина в комбинации с эритроидными индукторами. Данный белок при 37°С имеет типичные характеристики мутантного р53, а при 32°С приобретает конформацию и свойства белка дикого типа. Инкубация клеток K562/ls-p53 (5><105 клеток/мл) в присутствии тимидина при 32°С (рис. 7) приводит к значимому усилению (р<0,01) синтеза гемоглобина в клетках {[Hb]¡ составила 0,194±0,003 мкг/105 клеток про-
£
0,2 /
0,16 / *
0,12 / п -
0,06 / L
0.04 / / 1
2 3
реагенты
Рис. 7. Концентрация гемоглобина в клетках К562/пео и К562Нз-р53, обработанных тимидином и комбинацией
индуктора с £Ю в течение 2-х суток при 32°С
Светлые столбики - К562/пео (контроль); серые - К5б2и$-р53
1 - необработанные клетки; 2 - клетки, культивируемые с тимидином; 3-е тимидином и О Концентрация тимидина составила 2 мМ, ()0- 10 мкМ * достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,01)
тив 0,118±0,004 мкг/105 клеток в тимидин-обработанной родительской линии) Культивирование клеток K562/ts-p53 при 37°С подобного эффекта не обнаружило Известно, что обработка клеток опухолевых линий тимидином сопровождается генотоксическим стрессом, в частности истощением внутриклеточного пула дезоксинуклеозидтрифосфатов, что приводит к активации транскрипции р53 (Reynolds et al, 1979) Полученные данные подтверждают ранее отмеченную способность опухолевого супрессора усиливать эритроидную дифферен-цировку клеток (Chyhcki et al, 2000а, Chylicki et al, 2000b) Данные по определению активности каспазы-3 в клетках К5б2/пео и K562/t-sp53 в условиях обработки тимидином, представленные на рис 8, а также тот факт, что добавление ингибитора фермента приводило к достоверному снижению концентрации гемоглобина в опухолевых клетках, свидетельствуют об участии этой каспазы в тимидин-опосредованной дифференцировке клеток К562
время протекания реакции, мин
Рис 8 Изменение активности каспазы-3 в клетках К5621пео и K562/tsp53, обработанных тимидином в течение 2-х суток при 32°С
1 - базовый уровень активности каспазы для клеток К562!пео, 2 - для клеток K562(ts-p53, 3 - активность каспазы в клетках К562!пео, обработанных тимидином (2 мМ), 4 - активность каспазы в клетках K562Us-p53, обработанных тимидином (2 мМ)
По оси ординат изменение поглощения отщепленного AFC, определённое на СФ-46 при 395 нм
Обработка клеток K562lts-p53 тимидином при 32°С приводила к значимому повышению активности каспазы-9 Известно, что этот фермент является инициатором митохондриапьного (6с/-2-зависимого) пути апоптоза, а транскрипционный фактор р53 изменяет экспрессию гена bcl-2 Нами показано, что процент клеток К562, ушедших в апоптоз при инкубировании с тимидином, возрастает 2-3% - в тимидин-обработанных клетках К562/пео и 10-20% - в K562ltsp53 Следует также отметить, что при культивировании K562/ts-p53 с QO апоптоз регистрировался в 35-40% клеток Добавление тимидина или бути-рата натрия в систему увеличивало процент апоптозных клеток до 40-50% Однако, при использовании в качестве эритроидного индуктора ДМСО подобного эффекта не наблюдалось, кроме того, в клетках наблюдалось ингибирование активности каспазы-9 Действие ДМСО на клетки может осуществляться через модуляцию состава и распределения цитоплазматических а-РНП-частиц, осу-
ществляющих нуклеолиз мРНК некоторых транскрипционных факторов Вероятно, ДМСО в нашей системе инактивирует р53, что отражается на развитии апоптоза, вызванного обработкой QO
Биологическая активность производных тиазофосфола по отношению к клеткам К562 Обработка клеток К562 варьирующими концентрациями циклофосфана, 2-третбутиламино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ина (третбутиламинового производного) и 2-анилино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ина (анилинового производного) позволила рассчитать величины ЕС;о для каждого соединения (табл 3) Из результатов следует, что максимальной токсичностью в указанных условиях обладало третбутиламино-вое производное тиазофосфола Изучаемые реагенты к 4-м суткам инкубации проявляли однотипные индексы пролиферации (0,14) и значимо снижали (р<0,01) жизнеспособность опухолевых клеток
Таблица 3
Концентрация циклофосфана и производных тиазофосфола, приводящие к 50%-ной гибели клеток К562 в течение 2-х суток инкубации (ЕС50)
Реагент ЕСю, мкМ
циклофосфан 251,18
2-третбутиламино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ин 180,21
2-анилино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ин 198,02
Примечание клетки инкубировали в течение 2 х суток с варьирующими концентрациями указанных реагентов, после чего определялась жизнеспособность клеток по тесту с трипановым синим
Влияние циклофосфана и производных тиазофосфола на процессы диффе-ренцировки было неоднотипным Так, циклофосфан и третбутиламиновое производное тиазофосфола индуцировали эритроидную дифференцировку ([///>], в обработанных реагентами клетках составила 0,132±0,003 мкг/105 клеток и 0,128±0,002 мкг/105 клеток, соответственно, против 0,094±0,004 мкг/105 клеток в контроле) Процент СБ 14*-клеток достоверно увеличивался (р<0,01) только в случае с анилиновым производным тиазофосфола (45,4±1,2% против 36,7±1,7% в контроле) Данные по влиянию указанных ксенобиотиков на 5-аминолевулинат-синтетазу и гемоксигеназу (рис 9, 10) позволяют предположить, что индукция эритроидной дифференцировки клеток К562 циклофосфа-ном и третбутиламиновым производным тиазофосфола обусловлена активированием ферментов синтеза гемоглобина, а ингибирование этого пути дифференцировки анилиновым производным тиазофосфола - ингибированием ферментов синтеза и активацией ферментов распада белка
Циклофосфан, третбутиламиновое и анилиновое производные тиазофосфола, как представители алкшшруюцщх агентов, способны вызывать 1- и 2-нитевые разрывы в ДНК, что приводит к достоверному увеличению флуоресценции (р<0,01) ДНК-тропных красителей Внутриклеточная концентрация ни-котинамидных коферментов значимо (р<0,05) снижается при обработке каж-
Ф
5 а
й
■в- ц -о 2
12 10
2 3
реагенты
4
Рис. 9. Активность 5-аминолевулинат-синтетазы при обработке циклофосфаном и трстбутиламиновым и анилиновым производными тиазофосфола
I - активность фермента без обработки реагентами (контроль); 2 - в присутствии циклофосфана; 3 - третбутиламинового производного; 4 - анилинового производного Концентрация реагентов во всех случаях составляла 30 мкМ * достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,01)
II
о — 2 ™ „ о. х го
a, s *
о
s -0 £ §
я 5
X
> й
О. ID
S ь.
С S
S -
2 3 4
реагенты
Рис. 10. Активность гемокеигеназы при обработке циклофосфаном и третбутнламиновым и анилиновым производными тиазофосфола
I - активность фермента без обработки реагентами (контроль); 2 в присутствии циклофосфана; 3 - третбути-ламинового производного; 4 - анилинового производного Концентрация реагентов во всех случаях составляла 30 мкМ * достоверное отличие от контроля в отдельной серии опытов (р<0,0!)
дым из исследуемых соединений. Увеличение активности каспаз-3, -8 и -9 свидетельствует о развитии процессов апоптоза в опухолевых клетках.
Одним из участников 6с/-2-зависимого пути апоптоза является митохонд-риальный белок цитохром с. Его нормальное функционирование обеспечивает клетку достаточным количеством АТР. Нами было изучено влияние циклофосфана, третбутиламинового и анилинового производных тиазофосфола на процессы восстановления и окисления цитохрома с in vitro. Полученные данные представлены на рис. 11 (а, б). В присутствии третбутиламинового и анилинового производных тиазофосфола в концентрации 5x10"5 М процесс восстанов-
длина волны, нм
длина волны, нм
Рис. 11. Влияние третбутиламинового (а) и анилинового (б) производных тиазофосфола на процесс восстановления цитохрома с цистеином
1 - спектр поглощения производного тиазофосфола; 2 - спектр поглощения производного тиазофосфола с цистеином; 3 - исходный спектр поглощения цитохрома с\ 4 - спектр поглощения восстановленного цитохрома с; 5 - спектр поглощения цитохрома с после внесения производного тиазофосфола; 6 - спектр поглощения восстановленного в присутствии производного тиазофосфола цитохрома с
Концентрация цитохрома с в пробах - 2,5 мг/мл, третбутиламинового (анилинового) производного тиазофосфола - 5* 10'5 М.
Соотношение в пробе цитохрома с и цистеина 1:30
ления цитохрома с цистеином тормозился (на 25% и на 40%, соответственно). Циклофосфан подобного эффекта на восстановление белка не оказывал. Ни один из трёх исследуемых ксенобиотиков не влиял на процесс окисления цитохрома с пероксидазой. Графики, характеризирующие окисление цитохрома с без и в присутствии ксенобиотиков, значимо не отличались друг от друга.
Результаты по изменению чувствительности клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека под действием циклофосфана и двух производных тиазофосфола свидетельствуют о том, что только обработка третбутиламиновым производным приводила к достоверному усилению (р<0,05) чувствительности клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека. ЦИ для опытных клеток составил 141,3±10,2% против 100,0±12,5% для необработанных реагентами клеток.
Таким образом, результаты настоящего исследования свидетельствуют о том, что обработка клеток К562 изучаемыми ксенобиотиками приводит к индукции различных путей дифференцировки и апоптоза, а также к усилению чувствительности опухолевых клеток к НЦТ-лизису ЛПК человека Реализация эритроидной дифференцировки сопровождается повышением уровня синтеза гемоглобина и активности ключевого фермента синтеза гема - <5-аминолевулинатсинтетазы, а также каспазы-3 Миелоидная дифференцировка связана с экспрессией на поверхности маркеров моноцито-макрофагального (CD14), мегакариоцитарного (CD41) путей и активацией гемоксигеназы Использование эритроидных индукторов в сочетании с N-окисдами хинолина может усиливать или ослаблять апоптогенный эффект последних на клетки При обработке клеток с мутантным р53 Val 135 ксенобитиками наблюдалось усиление синтеза гемоглобина и активности каспаз
ВЫВОДЫ
1 При обработке клеток К562 ^-оксидированными производными хинолина и их комбинациями с эритроидными индукторами наблюдается изменение уровня жизнеспособности клеток наиболее токсичным для клеток является
4-NQO (ЕС¡0=1,05 мкМ), наименее - QO (ЕС}о=Ъ 16,23 мкМ), самой нетоксичной комбинацией по отношению к клеткам выступает QO+ДМСО Инкубация с индукторами дифференцировки сопровождается снижением или полным подавлением пролиферации опухолевых клеток Жизнеспособность клеток в зависимости от используемого индуктора и концентрации варьирует от 30 до 95%
2 Индукция эритроидной дифференцировки клеток наблюдается при обработке тимидином, бутиратом натрия, ДМСО, циклофосфаном, 2-третбутиламино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ином В клетках повышается синтез гемоглобина и увеличивается активность ключевого фермента синтеза гема -
5-аминолевулинатсинтетазы При индукции эритроидной дифференцировки также регистрируется повышение активности каспазы-3 Миелоидная дифференцировка индуцируется при инкубации с QO, 4-NQO, 2-анилино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ином, что сопровождается экспрессией на поверхности маркеров моноцито-макрофагального (CD14), мегакариоцитарного (CD41) путей и активацией гемоксигеназы
3 Наиболее сильный апоптогенный эффект по отношению к клеткам проявляют 4-NQO, бутират натрия, циклофосфан, производные тиазофосфола Инкубация клеток с iV-оксидированными производными хинолина и производными тиазофосфола сопровождается повышением активности каспаз-3, -8, -9 ДМСО ингибирует каспазы-8, -9 и блокирует апоптоз, индуцированный QO, 4-NQO Напротив, тимидин и бутират натрия способствуют протеканию процессов апоптоза, индуцированного УУ-оксидированными производными хинолина
4 Производные тиазофосфола способны существенно тормозить реакции восстановления, но не окисления митохондриального цитохрома с Это отражается на функционировании электрон-транспортной цепи митохондрий
5 В клетках линии K562/ts-p53, экспрессирующих температурочувствительный мутантный р53 Va! 135, при 32°С эритроидная дифференцировка и апоптоз протекают более интенсивно по сравнению с клетками родительской линии
6 Чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису лейкоцитами человека усиливается при обработке 4-NQO, третбутиламиновым производным тиазофосфо-ла и бутиратом натрия, а также при сочетанном действии на клетки QO, 4-NQO и эритроидных индукторов
ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЮЩИЕ РАБОТЫ
1 Волкова Т О , Сак Н.С.1, Малышева И Е , Немова Н Н Поиск новых модуляторов электронтранспортной функции белков системы цитохромов в эритро-лейкемических клетках человека К562 // III съезд Биохимического Общества - С -Петербург - 2002 - С 65-66
2 Волкова Т О , Сак Н.С.', Малышева И Е Взаимосвязь цитохромов с и P-4S0 в реакциях метаболизма yV-содсржащих гетероциклических соединений / 7ая Пущинская школа-конф молодых ученых «Биология - наука 21го века» Секция «Молекулярная биология и биохимия» - Пущино -2003 - С 41
3 Волкова Т О , Малышева И Е , Зыкина H С., Кожевникова М Н Влияние N-оксидированных производных хинолина на активность микросомальных А^ОРЯ-оксидоредуктаз и концентрацию никотинамидных коферментов в клетках линии К562 / 8м Пущинская школа-конф молодых ученых «Биология - наука 21го века» Секция «Общая и функциональная биохимия» - Пущино - 2004 - С 72
4 Волкова Т О, Малышева И Е, Зыкина Н.С. Модуляция активности каспаз в клетках К562 в условиях обработки бутиратом, изобутиратом и изовалератом натрия // Вестник молодых ученых Серия «Науки о жизни» - 2004 - вып 1 -С 72-76
5 Волкова Т О , Зыкина Н.С., Малышева И Е , Немова H H Клеточные механизмы индукции апоптоза в эритромиелолейкозной линии человека К562 при обработке производными ximonnH-iV-oKCHfla // Биомедицинская химия -2006 - Т 52, № 2 - С 180-187
6 Volkova Т О , Zykina N.S., Malysheva I Е , Nemova N N Cell mechanisms for apoptosis induction in K562 human erythroleukemia cell line treated with quino-line-A-oxidcs derivatives // Biochemistry (Supplement Senes В Biomedical chemistry) -2007 -V 1(1) -P 82-86
1 Волкова T О , Зыкина H.C., Немова H Н Участие опухолевого супрессора р53 в индукции эритроидной дифференцировки клеток линии К562 II Цитология - 2007 - Т 49, № 9 - С 45
1 Сак НС- она же Зыкина II С (свидетельство о заключении брака 1-ГИ № 526426)
&АЛК ДМСО ЕКК ЛПК
НЦТ-лизис
ЦИ
АРС АТР ЭАР1
ЕС5о
Е1Вг ЩЬ],
[ЫАйУ+МА01[],
О <20
ПРИНЯТЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ
- <5-аминолевулиновая кислота
- диметилсульфоксид
- естественные киллерные клетки
- лимфоциты периферической крови
- неспецифический (не зависимый от антигенов главного комплекса гистосовместимости) цитотоксический лизис
- цитотоксический индекс
- 7-амино-4-трифлуорометилкумарин
- аденозинтрифосфат
- 4,6-диамидино-2-фенилиндол
- концентрация вещества, приводящая к 50%-ной гибели клеток
- бромистый этидий
- внутриклеточная концентрация гемоглобина
- внутриклеточная концентрация никотинамидных ко-ферментов
- 4-нитрохинолин-1-оксид
- хинолин
- хинолин-1-оксид
Подписано в печать 05 10 07 Формат 60x847)6 Бумага офсетная Уч -изд л 1 Тираж 100 экз Изд № 235 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ПЕТРОЗАВОДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
Отпечатано в Издательстве ПетрГУ 185910, г Петрозаводск, пр Ленина, 33
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зыкина, Наталья Сергеевна
Принятые сокращения
Введение
Глава 1. Обзор литературы13
1.1. Гетероциклические соединения в онкологии. Молекулярные механизмы действия
1.2. Биохимические механизмы индукции дифференцировки клеток опухолевых линий
1.2.1. Дифференцировка клеток линии К
1.2.2. Дифференцировка клеток других опухолевых линий гематопоэтического происхождения
1.3. Биохимические механизмы индукции апоптоза клеток опухолевых линий
1.3.1. Индукторы, маркеры и пути реализации апоптоза в клетках линии К
1.3.2. Индукторы, маркеры и пути реализации апоптоза в клетках других опухолевых линии гематопоэтического происхождения
1.4. Модуляция чувствительности клеток опухолевых линий к НЦТ-лизису ЕКК дифференцирующими агентами
Глава 2. Материалы и методы исследования63
Глава 3. Результаты исследования70
3.1. Биологическая активность А^оксидированных производных хинолина по отношению к клеткам К
3.1.1. Влияние /^-оксидированных производных хинолина на пролиферацию и жизнеспособность клеток К
3.1.2. Влияние /^-оксидированных производных хинолина на дифференцировку клеток К562 (определяемые маркеры: внутриклеточная концентрация гемоглобина, мембранные антигены - СИ 14, С041)
3.1.3. Влияние ЛГ-оксидированных производных хинолина на процессы апоптоза клеток К562 (определяемые маркеры: активность каспаз, внутриклеточная концентрация никотинамидных коферментов, характер повреждений
3.1.4. Влияние //-оксидированных производных хинолина на чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека
3.2. Биологическая активность ТУ-оксидированных производных хинолина в комбинации с индукторами эритроидной дифференцировки по отношению к клеткам К
3.2.1. Влияние //-оксидированных производных хинолина в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на пролиферацию и жизнеспособность клеток К
3.2.2. Влияние //-оксидированных производных хинолина в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на дифференцировку клеток К562 (определяемые маркеры: внутриклеточная концентрация гемоглобина, мембранные антигены - СИ]4, С041)
3.2.3. Влияние //-оксидированных производных хинолина в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на процессы апоптоза клеток К562 (определяемые маркеры: активность каспаз, внутриклеточная концентрация никотинамидных коферментов, характер повреждений ДНК)
3.2.4. Влияние //-оксидированных производных хинолина в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека
3.3. Биологическая активность ^-оксидированных производных хинолина в комбинации с индукторами эритроидной дифференцировки по отношению к клеткам К562/^-р
3.3.1. Влияние //-оксидированных производных хинолина в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на дифференцировку клеток K562/îs-p53 (определяемые маркеры: внутриклеточная концентрация гемоглобина)
3.3.2. Влияние jV-оксидированных производных хинолина в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на процессы апоптоза клеток K562/îs-p53 (определяемые маркеры: активность каспаз, внутриклеточная концентрация никотинамидных коферментов, характер повреждений
3.4. Биологическая активность производных тиазофосфола по отношению к клеткам К
3.4.1. Влияние производных тиазофосфола на пролиферацию и жизнеспособность клеток К
3.4.2. Влияние производных тиазофосфола на дифференцировку клеток К562 (определяемые маркеры: внутриклеточная концентрация гемоглобина, активность ¿-аминолевулинат-синтетазы и гемоксигеназы, мембранные антигены - CD14,
CD41)
3.4.3. Влияние производных тиазофосфола на процессы апоптоза клеток К562 (определяемые маркеры: активность каспаз, внутриклеточная концентрация никотинамидных коферментов, характер повреждений ДНК)
3.4.4. Влияние производных тиазофосфола на чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека
Глава 4. Обсуждение результатов116
Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические аспекты индукции дифференцировки и апоптоза клеток линии К562"
Биохимические механизмы регуляции пролиферации, дифференцировки и апоптоза имеют основополагающее значение не только при нормальном функционировании основных процессов жизнедеятельности организма, но и при развитии патологических состояний, в том числе злокачественных опухолей. В клеточных линиях, полученных из различных новообразований человека, сохраняются опухолеспецифические изменения генома и особенности, характерные для исходных опухолевых клеток, что позволяет использовать опухолевые клеточные линии в качестве адекватных моделей для исследования механизмов биохимических процессов, а также тестирования и оценки эффективности противоопухолевых препаратов (Drexler, MacLeod, 2003; Shoemaker, 2006). Одной из таких экспериментальных моделей является эритромиелолейкозная линия человека К562.
Известно, что многие химические реагенты, в том числе противоопухолевые, способны индуцировать дифференцировку опухолевых клеток как in vivo, так и in vitro, в ряде случаев сопровождающуюся запуском апоптотических процессов (Волкова и др, 2003; Mengubas et al., 1996; Robertson et al., 1997; Terni et al., 1998). Механизм действия таких соединений может быть различным. Например, алкилирующие агенты (циклофосфан, дипин, тиофосфамид, митомицин С), образующие с ДНК или РНК прочные ковалентные связи, нарушают их синтез и вызывают гибель клеток (Wang et al., 1996; Белоусов и др., 1997; Maanen et al., 2000; Регистр лекарственных средств России., 2006; Mignone, Weber, 2006). Другие соединения (метотрексат, цитарабин, флюдарабин, 5-фторурацил, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, сульфамиды) могут выступать в качестве антиметаболитов ключевых молекул клетки, в том числе основных метаболических ферментов: ДНК- и/или РНК-полимераз, ферментов гликолиза и пентозофосфатного цикла, карбоксиангидраз, Са2+-зависимых ферментов (Chunduru et al., 1993; Bretner et al., 1999a; Bretner et al., 1999b; Гершанович, 1998; Поддубная, 1999; Supuran et al., 2004; Tiwari et al., 2005; Sampath et al., 2006).
В настоящее время установлено, что к числу первостепенных биохимических маркеров апоптоза относится изменение активности каспаз (caspases, cysteinyl aspartate-specific proteinases). Модуляция активности этих ферментов является ключевым фактором в процессах индукции/ингибирования апоптоза. Кроме того, показано, что некоторые каспазы способны трансактивироваться при индукции дифференцировки (Pandey et al., 2000). Пандей и соавт. (Pandey et al., 2000) показали, что при дифференцировке клеток линии U937, индуцированной ТФА (12-0-тетрадеканоилфорболацетат), происходит выход цитохрома с из митохондрий и активация каспазы-3. При дифференцировке клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60 и клеток остеосаркомы, индуцированной ретиноевой кислотой и тритерпеноидом (CDDO) соответственно, также отмечено увеличение функциональной активности каспаз-3, -8 и -9 (Doule et al., 2002; Ito et al., 2001). Кроме того, функциональная активность каспаз и других цистеиновых и сериновых протеиназ во многом определяет чувствительность опухолевых клеток к неспецифическому цитотоксическому лизису (НЦТ-лизису) естественными киллерными клетками (ЕКК) организма (Laskay, Kiessling, 1986; Benoist et al., 1989; Prado et al., 1995). Поэтому изучение биохимической регуляции таких клеточных функций как пролиферация, дифференцировка и апоптоз на уровне вторичных и третичных мессенджеров, а также поиск химических соединений, способных регулировать указанные клеточные процессы, представляет несомненный интерес не только для изучения специфики развития и функционирования опухолевой клетки, но и для ведения эффективной химиотерапии.
В связи с этим, цель настоящей работы состояла в изучении биологического действия ряда структурно различных ксенобиотиков на индукцию или ингибирование процессов дифференцировки и/или апоптоза опухолевых клеток К562 и модулировать их чувствительность к НЦТ-лизису ЕКК. В качестве химических реагентов нами были выбраны: тимидин, бутират натрия, диметилсульфоксид (ДМСО), хинолин (Q), в том числе его N-оксидированные производные (хинолин-1-оксид - QO, 4-нитрохинолин-1-оксид - 4-NQO), циклофосфан, производные тиазофосфола (2-третбутиламино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ин, 2-анилино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ин).
В задачи исследования входило:
1. Изучить цитотоксическое и антипролиферативное действие на клетки К562 химических реагентов с известным механизмом действия, а также новосинтезированных производных тиазофосфола, определить
2. На основе данных по токсичности определить дифференцирующую активность нетоксичных доз каждого из исследуемых соединений, а также комбинаций Q, QO, 4-NQO с индукторами эритроидной дифференцировки (тимидином, бутиратом натрия и ДМСО) по отношению к клеткам К562. При изучении дифференцирующего действия реагентов определить основные белки и ферменты эритроидного и миелоидного путей дифференцировки опухолевых клеток;
3. Изучить влияние химических реагентов на модуляцию активности каспаз в клетках К562 как возможных участников расхождения путей передачи сигнала от процессов дифференцировки к апоптозу;
4. На основе полученных данных исследовать влияние производных тиазофосфола на процессы окисления и восстановления цитохрома с как одного из основных посредников передачи сигнала апоптоза в клетке;
5. Провести сравнительный анализ биологического действия исследуемых химических реагентов на клетки родительской линии К562 и сублинии, экспрессирующей температурочувствительный мутантный белок р53 Val 135 (.K562/ts-p53);
6. Определить модулирующее действие ксенобиотиков и их комбинаций на чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису лейкоцитами человека. Научная новизна: Впервые изучено дифференцирующее и апоптогенное действие производных тиазофосфола на клетки линии К562. Показано, что третбутиламиновое производное индуцирует эритроидную дифференцировку клеток К562, в клетках имеет место активация каспаз-3 и -9 с последующим запуском апоптоза. Напротив, анилиновое производное ингибирует эритроидную и индуцирует моноцито-макрофагальную дифференцировку опухолевых клеток, при этом регистрируется активация каспаз-3, -8, -9 и последующее развитие апоптоза. Нами показано, что переключение процессов клеточной дифференцировки с одного пути на другой, например, с эритроидного на моноцито-макрофагальный, влечёт за собой переключение работы каспаз и модуляцию процессов апоптоза в клетках К562.
Впервые экспериментально определено влияние сочетанного действия индукторов эритроидной дифференцировки клеток К562 и TV-оксидированных производных хинолина на чувствительность опухолевых клеток к НЦТ-лизису лейкоцитами периферической крови (ЛПК) человека; установлено, что и дифференцировка, и апоптоз вносят вклад в модуляцию НЦТ-лизиса клеток-мишеней клетками-эффекторами.
Впервые изучено влияние сочетанного действия тимидина, бутирата натрия и ДМСО с //-оксидированными производными хинолина на модуляцию эритроидной дифференцировки и апоптоза в клетках K562/ts-p53. Показано, что при обработке клеток сублинии эритроидными индукторами синтез гемоглобина значительно усиливается по сравнению с клетками родительской линии К562. Кроме того, в клетках с мутантным р53 Val 135 процессы апоптоза также протекают активнее.
Теоретическая и практическая значимость работы: Выполненная работа представляет как теоретический, так и практический интерес в области клеточной биологии и молекулярной медицины, который заключается в изучении с использованием модельной системы сочетанного действия индукторов различных путей дифференцировки опухолевых клеток на ряд важнейших клеточных функций -пролиферацию, апоптоз, чувствительность к НЦТ-лизису эндогенными ЕКК. Значительное количество противоопухолевых соединений обладают дифференцирующей активностью по отношению к клеткам опухолей in vivo и опухолевых клеток in vitro, проявляющуюся в зависимости от дозы используемого препарата и условий обработки. В связи с этим, нами показано, что при обработке опухолевых линий, например, клеток линии К562, индукторами эритроидной и миелоидной дифференцировки может наблюдаться подавление пролиферации, индукция и ингибирование апоптоза и модуляция чувствительности клеток к НЦТ-лизису ЕКК. Таким образом, при клиническом использовании противоопухолевых агентов необходимо учитывать эффекты изменения целого ряда клеточных функций, возникающие под действием (или на фоне) каждого составляющих комбинации. Кроме того, результаты исследований могут быть использованы в учебных курсах по биохимии и молекулярной биологии, для написания учебных и методических пособий, а также монографической литературы.
Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Зыкина, Наталья Сергеевна
выводы
1. При обработке клеток К562 ^-оксидированными производными хинолина и их комбинациями с эритроидными индукторами наблюдается изменение уровня жизнеспособности клеток: наиболее токсичным для клеток является 4-ЫОР (ЕС5(г 1,05 мкМ), наименее - ОР (ЕС50=316,23 мкМ); самой нетоксичной комбинацией по отношению к клеткам выступает ()0+ДМСО. Инкубация с индукторами дифференцировки сопровождается снижением или полным подавлением пролиферации опухолевых клеток. Жизнеспособность клеток в зависимости от используемого индуктора и концентрации варьирует от 30 до 95%.
2. Индукция эритроидной дифференцировки клеток наблюдается при обработке тимидином, бутиратом натрия, ДМСО, циклофосфаном, 2-третбутиламино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ином. В клетках повышается синтез гемоглобина и увеличивается активность ключевого фермента синтеза гема - 5-аминолевулинатсинтетазы. При индукции эритроидной дифференцировки также регистрируется повышение активности каспазы-3. Миелоидная дифференцировка индуцируется при инкубации с 00, 4-^00, 2-анилино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ином, что сопровождается экспрессией на поверхности маркеров моноцито-макрофагального (СЭ14), мегакариоцитарного (С041) путей и активацией гемоксигеназы.
3. Наиболее сильный апоптогенный эффект по отношению к клеткам проявляют: 4-NQO, бутират натрия, циклофосфан, производные тиазофосфола. Инкубация клеток с ^-оксидированными производными хинолина и производными тиазофосфола сопровождается повышением активности каспаз-3, -8, -9. ДМСО ингибирует каспазы-8, -9 и блокирует апоптоз, индуцированный 00, 4-^00. Напротив, тимидин и бутират натрия способствуют протеканию процессов апоптоза, индуцированного //-оксидированными производными хинолина.
4. Производные тиазофосфола способны существенно тормозить реакции восстановления, но не окисления митохондриального цитохрома с. Это отражается на функционировании электрон-транспортной цепи митохондрий.
5. В клетках линии K562/ts-p53, экспрессирующих температурочувствительный мутантный р53 Val 135, при 32°С эритроидная дифференцировка и апоптоз протекают более интенсивно по сравнению с клетками родительской линии.
6. Чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису лейкоцитами человека усиливается при обработке 4-NQO, третбутиламиновым производным тиазофосфола и бутиратом натрия, а также при сочетанном действии на клетки QO, 4-NQO и эритроидных индукторов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Целью настоящей работы являлось изучение биологического действия ряда структурно различных ксенобиотиков на индукцию или ингибирование процессов дифференцировки и/или апоптоза опухолевых клеток К562 и модулировать их чувствительность к НЦТ-лизису ЕКК.
В работе предполагалось подобрать условия и оптимальные схемы обработки клеток К562 химическими реагентами, в результате которых наблюдалась бы индукция дифференцировки и/или апоптоза и показать влияние индуцированных процессов на чувствительность клеток к НЦТ-лизису лейкоцитами периферической крови человека. Предстояло определить основные маркеры эритроидного и миелоидного путей дифференцировки опухолевых клеток, а также проследить влияние химических реагентов на модуляцию активности каспаз и цитохрома с, как основных участников апоптоза и возможных участников расхождения путей передачи сигнала от процессов дифференцировки к апоптозу. Кроме того, предстояло определить влияние опухолевого супрессора р53 на биологическое действие ЛГ-оксидированных производных хинолина по отношению к клеткам К562.
В ходе проведённых исследований нами было установлено, что изучаемые химические реагенты могут являться модуляторами процессов эритроидной (тимидин, бутират натрия, ДМСО, циклофосфан и третбутиламиновое производное тиазофосфола) и миелоидной 0, 4-NQO и анилиновое производное тиазофосфола) дифференцировки клеток К562. Выбор того или иного пути дифференцировки сопровождается изменением активности основных ферментов метаболизма гема (<5-АЛК-синтетазы и гемоксигеназы), а также активацией определённых групп каспаз, в частности каспазы-3.
Нами впервые предпринята попытка определить возможный механизм апоптогенного действия производных тиазофосфола на клетки К562. Указанные соединения являются интересными с точки зрения их биологических эффектов на клетки, поскольку имеют в своём составе несколько центров функциональной активности, определяющих плейотропность действия реагентов. Установлено, что изучаемые ксенобиотики могут существенно тормозить реакции восстановления, но не окисления цитохрома с. В свою очередь в зависимости от того, в какой форме (окисленной или восстановленной) цитохром с находится в цитоплазме клеток, метаболизм ксенобиотиков может ускоряться или замедляться, что существенно влияет на процессы развития апоптоза.
Нами показано усиление эритроидной дифференцировки и апоптоза при трансфекции р53 в клетки К562. Обработка клеток K562/ís-p53 тимидином, бутиратом натрия и ДМСО приводит к увеличению внутриклеточной концентрации гемоглобина и процента клеток, ушедших в апоптоз. При инкубации клеток с тимидином или бутиратом натрия (но не ДМСО), а также с комбинациями QO и эритроидными индукторами (кроме ДМСО) происходит активация каспазы-3 и -9, что указывает на bcl-2-зависимый путь развития апоптоза в клетках К562.
Нами впервые экспериментально определено влияние сочетанного действия индукторов эритроидной дифференцировки клеток К562 и N-оксидированных производных хинолина на чувствительность опухолевых клеток к НЦТ-лизису лейкоцитами периферической крови человека. Установлено, что и дифференцировка, и апоптоз вносят вклад в модуляцию НЦТ-лизиса клеток-мишеней клетками-эффекторами. Сходные закономерности ответа опухолевых клеток на обработку химическими соединениями могут иметь место и в условиях in vivo человека, получающего антиопухолевые препараты, стимулирующие дифференцировку клеток. Это действие в определённых условиях может сочетаться с повышением чувствительности опухолевых клеток к литическому действию ЕКК. При этом не исключено, что данный эффект может сохраняться при использовании нетоксичных или малотоксичных для организма доз препарата.
В связи с вышеизложенным необходимо указать, что некоторые аспекты работы требуют дальнейшего изучения. Используемые в исследовании химические реагенты имеют в большинстве случаев различное химическое строение, что обуславливает различие внутриклеточных мишеней действия дифференцирующих агентов и неоднотипность путей их метаболизма. Последние, как известно, приводят к появлению целого ряда производных, дифференцирующие потенции которых могут различаться. Поэтому важным является изучение энзиматических путей биодеградации и биотрансформации химических реагентов. Известно, что за метаболическую активацию большого количества ксенобиотиков отвечают в основном гемсодержащие монооксигеназы, локализованные в эндоплазматическом ретикулуме, например, цитохромы системы Р-446-455. В связи с этим, целесообразно изучить процессы биотрансформации ксенобиотиков микросомами и определить спектр образующихся метаболитов. Помимо того, в зависимости от происхождения опухолей, биохимические эффекты одного и того же соединения на клетки могут быть различны. Перспективным, в понимании действия ксенобиотиков на опухолевые клетки, представляется изучение вторичных и третичных мессенджеров передачи сигнала при дифференцировке и апоптозе. Другая проблема заключается в возникновении множественной лекарственной устойчивости неопластических клеток к противоопухолевым препаратам, что ведёт к изменению программ дифференцировки и апоптоза. В связи с этим, кажется целесообразным более детальное изучение биохимических показателей процессов в клетках сублиний, устойчивых к действию ксенобиотиков. Наконец, ещё одна проблема, имеющая отношение к клинической практике, состоит в изучении биохимической основы модуляции НЦТ-лизиса ЕКК при действии различных реагентов.
Таким образом, понимание биохимических и молекулярных аспектов протекания таких клеточных процессов как пролиферация, дифференцировка и апоптоз, а также поиск химических соединений, способных регулировать указанные клеточные процессы, представляет несомненный интерес не только для изучения специфики развития и функционирования опухолевой клетки, но и для ведения эффективной химиотерапии.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зыкина, Наталья Сергеевна, Петрозаводск
1. Абелев Г.И. а-Фетопротеин: взгляд в биологию развития и природу опухолей // Соросовский образовательный журнал. 1998. -№9. - С. 8-13.
2. Алесенко A.B., Соловьёв A.C. и др. Роль продуктов сфингомиелинового цикла в развитии апоптоза, индуцированного через рецепторы Fas и фактора некроза опухоли-а// Известия АН. Серия биологическая. 1998. - № 2.
3. Анисимов А.Г., Болотников И.А. Интерлейкин-2 и стауроспорин отменяют ингибирование неспецифической цитотоксичности спленоцитов крыс высокими дозами форболмиристатацетата // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1996. - Т. 122, №10. - С. 394-398.
4. Обработка синхронизированных клеток К562 тетрафторалюминатом не модулирует флуорисценцию бромистого этидия и 4',6-диамидино-2-фенилиндола при связывании с нуклеотидной ДНК // Цитология. 1999а. - Т. 41,№8.-С. 680-684.
5. Анисимов А.Г., Волкова Т.О., Чекмасова A.A. и др. Химически индуцированная дифференцировка клеток опухолевых линий // Онтогенез. -2002.-Т. 33, №5.-С. 325-341.
6. Анисимов А.Г, Чекмасова A.A., Волкова Т.О. и др. Обработка клеток К562 тимидином на фоне дексаметазона повышает чувствительность опухолевых клеток к литическому действию лейкоцитами человека // Цитология. 2001. -Т. 43, №1.-С. 76-81.
7. Белоусов Ю.Б, Моисеев B.C., Лепахин В.К. Клиническая фармакология и фармакотерапия. Руководство для врачей: 2-е изд., исп. и доп. 1997. -Москва. - Универсум Паблишинг.
8. Бычков М.Б. Топотекан ингибитор топоизомеразы I - новый противоопухолевый препарат // Современная онкология. - 1999. - Т. 1, №1.
9. И.Волкова Т.О., Малышева И.Е, Немова H.H. Влияние форбол-12 миристат-13-ацетата на модуляцию апоптоза в эритролейкемических клетках человека К562 при обработке рядом химических реагентов // Цитология. 2003. - Т. 45, №9. -С. 859.
10. Волкова Т.О., Малышева И.Е, Немова H.H. Сравнительный анализ дифференцирующего и апоптогенного действий цитидина, тимидина и гуанозина на клетки эритромиелолейкозной линии человека К562 // Вопр. мед. химии. 2002. - Т. 48, №6. - С. 586-593.
11. Волкова Т.О., Малышева И.Е, Немова H.H. Форбол-12 миристат-13-ацетат ингибирует апоптоз в эритролейкемических клетках К562, индуцированный рядом нуклеозидов // Онтогенез. 2005. - Т. 36, №1. - С. 18-25.
12. Волкова Т.О., Немова H.H. Молекулярные механизмы апоптоза лейкозной клетки. 2006. - М.: Наука. - 205 с.
13. Гунин А.Г. Гистология в таблицах и схемах. 2005. - М.: Медицинское информационное агентство. - 192 с.
14. Гуторов С.Л., Семенов H.H., Загрекова Е.И. Новые лекарства в лечении солидных опухолей // РМЖ. 2001. - Т. 9, № 22.
15. Епифанова О.И. Лекции о клеточном цикле. 1997. - М.: КМК scientific press. -144 с.
16. Ефимцева Е.В., Михайлов С.Н. Дисахаридные нуклеозиды // Успехи химии. -2004. Т. 73, №4. - С. 435-448.
17. Иванов С.Д. Пострадиационные реакции ДНК нуклеотидов лейкоцитов крови: детектирование, закономерности, диагностическое и прогностическое значение: Автореф. д-ра биол. наук. 1992. - СПб. - 40 с.
18. Иммунология: в 3-х т. / под редю У. Пола. 1989. - М.: Мир. - Т. 3. - 360 с.
19. Клиническая онкогематология: Руководство для врачей. 2001. - М.: Медицина. - 576 с.
20. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия: учеб. для студентов вузов, обуч. по напр. 655500 (биотехнология). 2004. - М.: Дрофа. - 639 с.
21. Копнин Б.П. Механизмы действия онкогенов и опухолевых супрессоров: Ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза // Биохимия. 2000. - Т. 65, № 1.-С. 5-33.
22. Копнин Б.П. Неопластическая клетка: основные свойства и механизмы их возникновения // Практ. Онкология. 2002. - Т. 3, № 4. - С. 235-239.
23. Куцый М.П., Кузнецова Е.А., Газиев А.И. Участие протеаз в апоптозе // Биохимия. 1999.-Т. 64, №2. - С. 453-466.
24. Лушников У.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). 2001. - М.: Медицина. -192 с.
25. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. 1993. - М.: Мир.-Т. 2.-415 с.
26. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух томах. 1998. - Харьков: Торсинг. - Т. 2. - 592с.
27. Менткевич Г.Л. Достижения и проблемы лекарственного лечения детей с онкогематологическими заболеваниями // Материалы Второй ежегодной Российской онкологической конференции «Современные тенденции развития лекарственной терапии опухолей». Москва. - 1998.
28. Михайлов А.Т. Эмбриональные индукторы. 1988. - М.: Наука. - 216 с.
29. Михайлопуло И.А. Химия, стереохимия и биохимия дезоксифторпроизводных Л-пентофураноз: некоторые наблюдения и перспективы // Наука и инновации. -2004,- №7.- С. 24-35.
30. Поддубная И.В. Реальность и перспективы лекарственной терапии неходжкинских лимфом // Современная онкология. 1999. - Т. 1, №1.
31. Преображенская М.Н. Перспективы создания новых противоопухолевых антибиотиков // Биоорган, химия. 1998. - Т. 24. - С. 644-662.
32. Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств: энциклопедия. 2006. - Вып. 15. - М.: РЛС 2007. - 1488 с.
33. Робинсон М.В., Труфакин В.А. Апоптоз клеток иммунной системы // Успехи соврем, биологии. 1991. - Т. 111, №2. - С. 246-259.
34. Рукавицын О. А., Поп В. П. Хронические лейкозы: монография. 2004. - М.: Бином. - 240 с.
35. Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний. 2005. - М.: Практическая медицина. - 704 с.
36. Рыжов С.В., Новиков В.В. Молекулярные механизмы апоптотических процессов // Рос. биотерапевт, журн. 2002. - Т. 1, № 3. - С. 27-33.
37. Сейц И.Ф., Князев П.Г. Молекулярная онкология: руководство для врачей. -1986. JL: медицина. - 352 с.
38. Семененя И.Н. Естественные киллерные клетки (ЕКК) как звено в иммунной системе организма // Иммунология. 1994. - №4. - С. 4-6.
39. Сорокин A.M., Чекнёв С.Б., Кузнецов В.П. Иммуномодулирующая активность отечественных медицинских природных препаратов интерферона // Иммунология. 1991. - №1. - С. 17-20.
40. Харченко В.П., Кузьмин И.В. Рак лёгкого. Фундаментальные проблемы и клинические перспективы. Руководство для врачей. М.: Наука. - 1994.
41. Химиотерапия опухолевых заболеваний. Руководство под ред. Н.И.Переводчиковой. 2000. - М.
42. Цикл лекций по детской онкологии. 2001.-Т. 2 (ст. 38). - С. 163-175.
43. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. 1999. - М.: Мир. -372 с.
44. Alemany M., Levin J. The effects of arsenic trioxide (As203) on human megakaryocyte leukemia cell lines. With a comparision of its effects on other cell lineages // Leuk. Lymphoma. 2000. - V.38 (1-2). - P. 153-163.
45. Amundson S.A., Myers T.G., Fornace A.J. et al. Roles for p53 in growth arrest and apoptosis: Putting on the brakes after genotoxic stress // Oncogene. 1998. - V. 17, №25.-P. 3287-3299.
46. Anandan S.K., Ward J.S., Brokx R.D., Denny T., Bray M.R., Patel D.V., Xiao X.Y. Design and synthesis of thiazole-5-hydroxamic acids as novel histone deacetylase inhibitors // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007. - Epub ahead of print.
47. Andersson L.C., Nilsson K., Gahmberg C.G. K562 a human erythroleukemic cell line // Intern. J. Cancer. - 1979. - V. 23. - P. 143-147.
48. Andreeff M., Jiang S., Zhang X. et al. Expression of Bcl-2-related genes in normal and AML progenitors: changes induced by chemotherapy and retinoic acid // Leukemia. 1999.-V. 13 (11).-P. 1881-1892.
49. Arita K., Kobuchi H., Utsumi T. et al. Mechanism of apoptosis in HL-60 cells induced by n-3 and n-6 polyunsaturated fatty acids // Biochem Pharmacol. 2001. -V. 62 (7).-P. 821-828.
50. Arita K., Yamamoto Y., Takehara Y. et al. Mechanisms of enhanced apoptosis in HL-60 cells by L/F-irradiated n-3 and n-6 polyunsaturated fatty acids // Free Radic Biol Med. 2003. - V. 35 (2). - P. 189-199.
51. Augenlight L.H., Bordonaro M., Heerdt B.G., Mariadason J., Velcich A. Cellular mechanisms of risk and transformation // Annals of the New York Academy of Sciences. 1999. - V. 889. - P. 20-31.
52. Azuma A., Huang P., Matsuda A., Plunkett W. 2'-C-Cyano-2'-deoxy-l-/?-D-arabino-pentofuranosylcytosine: a novel anticancer nucleoside analog that causes both DNA strand breaks and G2 arrest // Mol Pharmacol. 2001a. - Vol. 59, Issue 4. - P. 725731.
53. Azuma A., Huang P., Matsuda A., Plunkett W. Cellular pharmacokinetics and pharmacodinamics of the deoxycitidine analog CNDAC II Biochem Pharmacol. -2001b. -Jun 15; 61(12).-P. 1497-1507.
54. Bahram F., Wu S., Oberg F., Liischer B., Larsson L.-G. Posttranslational regulation of Myc function in response to phorbol ester/interferon-y-induced differentiation of v-Myc-transformed U-937 monoblasts // Blood. 1999. - V. 93, № 11. - P. 39003912.
55. Baliga B.S., Mankad M., Shah A.K. et al. Mechanism of differentiation of human erythroleukemic cell line K562 by hemin // Cell Prolif. 1993. - V. 26. - P. 519-559.
56. Benoist H., Madoulet C., Jardillier J.C., Desplaces A. Adriamycin induced resistance of sensitive K562 cells to natural killer lymphocyte attack // Cancer Immunol Immunother. 1985.-V. 20(2).-P. 122-128.
57. Bernardi P., Brockemeier K.M., Pfeiffer D.R. Recent progress on regulation of the mitochondrial permeability transition pore: a cyclosporin-sensitive pore in the inner mitochondrial membrane//J. Bioenerg. Biomembr.- 1994.-V. 26. P. 509-517.
58. Blanc-Brude O.P, Mesri M, Wall N.R. et al. Therapeutic targeting of the survivin pathway in cancer: initiation of mitochondrial apoptosis and suppression of tumor-associated angiogenesis // Clin Cancer Res. 2003. - V. 9 (7). - P. 2683-2692.
59. Brewer G. Regulation of c-myc mRNA decay in vitro by a phorbol ester-inducible, ribosome-associated component in differentiating megakaryoblasts // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275, Is. 43. - P. 33336-33345.
60. Brown G, Choudhry M.A, Durham J, Drayson M.T, Michell R.H. Monocytically differentiating HL-60 cells proliferate rapidly before they mature // Exp Cell Res. -1999.-V. 253 (2).-P. 511-518.
61. Budd R.C. Death receptors couple to both cell proliferation and apoptosis // J. Clin. Invest. 2002. - V. 109, № 4. - P. 437-442.
62. Buscemi G, Carlessi L., Zannini L, Lisanti S, Fontanella E., Canevari S., Delia D. DNA Damage-Induced cell cycle regulation and function of novel Chk2 phosphoresidues // Molecular and Cellular Biology. 2006. - V. 26, № 21. - P. 7832-7845.
63. Casini A., Scozzafava A., Mastrolorenzo A., Supuran C.T. Sulfonamides and Sulfonylated derivatives as anticancer agents // Current Cancer Drug Targets. 2002. - V. 2 (№1). - P. 55-75.
64. Chang H.Y., Yang X. Proteases for cell suicide: functions and regulation of caspases // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. - V. 64, № 4. - P. 821-846.
65. Charrad R.-S., Gadhoum Z., Qi J. et al. Effects of mt\-CD44 monoclonal antibodies on differentiation and apoptosis of human myeloid leukemia cell lines // Blood. -2002. V. 99, № 1. - P. 290-299.
66. Chegwidden W.R., Spencer I.M. Sulphonamide inhibitors of carbonic anhydrase inhibit the growth of human lymphoma cells in culture // Inflammopharmacol. -1995.-V.3.-P. 231-239.
67. Cheng T., Wang Y., Dai W. Transcription factor egr-1 is involved in phorbol 12-myristate 13-acetate-induced megakaryocyte differentiation of K562 cells // J Biol Chem. 1994. - V. 269 (49). - P. 30848-30853.
68. Chiu L.C., Wan J.M., Ooi V.E. Induction of apoptosis by dietary polyunsaturated fatty acids in human leukemic cells is not associated with DNA fragmentation // Int J Oncol. 2000. - V. 17 (4). - P. 789-796.
69. Choi Y.J., Park J.W., Suh S.I., Mun K.C. et al. Arsenic trioxide-induced apoptosis in U937 cells involve generation of reactive oxigen species and inhibition of Akt II Int. J. Oncol. 2002. - V. 21. - P. 603-610.
70. Chylicki K., Ehinger M., Svedberg H., Gullberg U. Characterization of the molecular mechanisms for /?55-mediated differentiation // Cell Growth & Differentiation. -2000a.- V. 11.-P. 561-571.
71. Chylicki K„ Ehinger M., Svedberg H., Bergh G., Olsson I., Gullberg U. p53-Mediated differentiation of the erythroleukemia cell line K562 II Cell Growth & Differentiation. 2000b. - V. 11. - P. 315-324.
72. Collins S.J. The HL-60 promyelocyte leukemia cell line: proliferation, differentiation, and cellular oncogene expression // Blood. 1987. - V. 70, Is. 5. - P. 1233-1244.
73. Cook P.R., Brazell I.A. Spectrofluorometric measurement of the binding of ethidium to superhelical DNA from cell nuclei // Eur. J. Biochem. 1978. - V. 84. -P. 465-477.
74. Cultraro C.M., Bino T., Segal S. Function of the c-Myc antagonist Mad I during a molecular switch from proliferation to differentiation // Mol. Cell Biol. -1997.-V. 17.-P. 2353-2359.
75. Dai Y., Rahmani M., Grant S. Proteasome inhibitors potentiate leukemic cell apoptosis induced by the cyclin-dependent kinase inhibitor flavopiridol through a SAPKIJNK- and AT^/fa/^-dependent process // Oncogene. 2003. - V. 22 (46). -P. 7108-7122.
76. Danilenko M., Wang X., Studzinski G.P. Carnosic acid and promotion of monocytic differentiation of HL60-G cells initiated by other agents // J Natl Cancer Inst. 2001. - V. 93 (16). - P. 1224-1233.
77. Das B., Mondragon M.O., Tao S.-Z. et al. Preferential interaction of novel tumor surface protein (p38,5) with naive natural killer cells // J. Exp. Med. 1997. -V. 185.-P. 1735-1742.
78. Dass D., Pintucci G., Stern A. MAPK-dependent expression ofp21 (WAF) and p27 (kip\) in PMA-induced differentiation of HL-60IIFEBS. 2000. - V. 472, № 1. -P. 50-52.
79. De Maria R., Lenti L., Malisan F. et al. Requirement for GD3 ganglioside in CD95- and ceramide-induced apoptosis // Science. 1997. - V. 277. - P. 1652-1655.
80. Defacque H., Sevilla C., Piquemal D., Rochette-Egly C., Marti J., Commes T. Potentiation of FD-induced monocytic leukemia cell differentiation by retinoids involves both RAR and RXR signaling pathways // Leukemia. 1997. - V. 11 (2) - P. 221-227.
81. Deming P.B., Schafer Z.T., Tashker J.S. et al. Bcr-Abl-mediated protection from apoptosis downstream of mitochondrial cytochrome c release // Mol. Cell. Biol. 2004. - V. 24 (23). - P. 10289-10299.
82. Dirsch V.M., Antlsperger D.S.M., Hentze H., Vollmar A.M. Ajoene, an experimental anti-leukemic drug: mechanism of cell death // Leukemia. 2002. - V. 16, № i.p. 74-83.
83. Domaratskaia E.I., Bueverova E.I., Paiushina O.D., Starostin V.I. Alkylating damage by dipin of hematopoietic and stromal cells of the bone marrow // Izv Akad Nauk Ser Biol. 2005. -№3. - C. 267-272.
84. Donehower R.C., Dees E.C., Baker S.D., Summerson L., Carducci M.A., Izumi T., Kobayashi T. A phase I study of CS-682, an oral antimetabolite, in patients with refractory solid tumors // Proc Am Soc Clin Oncol. 2000. - V. 19. - P. 196a.
85. Dorsey J.F., Cunnick J.M., Mane S.M., Wu J. Regulation of the Erk2-Erkl signaling pathway and megakaryocyte differentiation of Bcr-Abl(+) K562 leukemic cells by Gab2 II Blood. 2002. - V. 99, № 4. - P. 1388-1397.
86. Doyle B.T., O'Neill A.J., Newsholme P. et al. The loss of IAP expression during HL-60 cell differentiation is caspase-independent // J. Leukoc. Biol. 2002. -V. 71.-P. 247-254.
87. Drexler H.G., MacLeod R.A. Leukemia-lymphoma cell lines as model systems for hematopoietic research // Ann. Med. 2003. - V.35 (6). - P. 404-412.
88. Earnshaw W.C., Martins L.M., Kaufmann S.H. Mammalian caspases: structure, activation, substrates, and functions during apoptosis // Annu Rev Biochem. 1999. - V. 68. - P. 383-424.
89. Estey E. Treatment of refractory AML // Leukemia. 1996. - V. 10. - P. 932936.
90. Fantappie O., Solazzo M., Lasagna N., Platini F., Tessitore L., Mazzanti R.P-glycoprotein mediates celecoxib-induced apoptosis in multiple drug-resistant cell lines // Cancer Res. 2007. - V.67 (10). - P. 4915-4923.
91. Fernandez M.G., Troiano L., Moretti L. et al. Early changes in intramitochondrial cardiolipin distribution during apoptosis // Cell Growth & Differentiation. 2002. - V. 13. - P. 449-455.
92. Ferri K.F., Kroemer G. Control of apoptotic DNA degradation // Nat. Cell Biol. 2000. - V.2. - P. 63-64.
93. Fisherman J.S., Osborn B.L., Chun H.G. Choloroquinoxaline sulfonamide: a sulfanilamide antitumor agent entering clinical trials // Invest. New Drugs. 1993. -V. 11.-P. 1-9.
94. Franklin C.C., Kraft A.S. Conditional expression of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) phosphatase MKP-1 preferentially inhibits p38 MAPK and stress-activated protein kinase in U937 cells // J Biol Chem. 1997. - V. 272 (27). -P. 16917-16923.
95. Franklin C.C., Kraft A.S. Constitutively active MAP kinase kinase (MEK1) stimulates SAP kinase and c-Jun transcriptional activity in U937 human leukemic cells // Oncogene. 1995. - V. 11 (11). - P. 2365-2374.
96. Gao N., Dai Y., Rahmani M. et al. Contribution of disruption of the nuclear factor-^ pathway to induction of apoptosis in human leukemia cells by histone deacetylase inhibitors and flavopiridol // Molecular Pharmacology. 2004. - V. 66. -P. 956-963.
97. Garson D., Dokhelar M.C., Vainchenker W. et al. Protective effects of differentiation inducers on natural killer sensitivity of K562 cells: Analysis at a single-cell level // Cell Immunol. 1983. - V. 78. - P. 400-406.
98. Gery S., Park D.J., Vuong P.T. et al. RTP801 is a novel retinoic acid-responsive gene associated with myeloid differentiation // Exp Hematol. 2007. - V. 35 (4).-P. 572-578.
99. Gillis R.C., Daley B.J., Enderson B.L. et al. Inhibition of 5-lipoxygenase induces cell death in anti-inflammatory fatty acid-treated HL-60 cells // JPEN J Parenter Enteral Nutr. 2004. - V. 28 (5). - P. 308-314.
100. Gillis R.C., Daley B.J., Enderson B.L., Karlstad M.D. Eicosapentaenoic acid and gamma-linolenic acid induce apoptosis in HL-60 cells // J Surg Res. 2002. - V. 107(1).-P. 145-153.
101. Gillis R.C., Daley B.J., Enderson B.L., Kestler D.P., Karlstad M.D. Regulation of apoptosis in eicosapentaenoic acid-treated HL-60 cells // J Surg Res. 2007. - V. 137 (1). -P. 141-150.
102. Golden M., Demsey R.A., Mier J.W. et al. The effect of differentiation inducers on the sensitivity of two myeloid cell lines to natural killer (NK) cellmediated lysis // Intern. J. Immunopharmacol. 1983. - V. 5. - P. 411-419.
103. Granick S. The induction in vitro of the synthesis of delta-aminolevulinic acid synthetase in chemical porphyria: a response to certain drugs, sex hormones, and foreign chemicals// J Biol Chem.- 1966. V. 241 (6).-P. 1359-1375.
104. Green D.R., Reed J.C. Mitochondria and apoptosis // Science. -1998. V. 281.-P. 1309-1312.
105. Gulbins E., Jekle A., Ferlinz K. et al. Physiology of apoptosis // Am. J. Physiol. Renal Physiol. -2000. V. 279. - P. 605-615.
106. Gumina G., Song G.Y., Chu C.K. ¿-Nucleosides as chemotherapeutic agents // FEMS Microbiol Lett. 2001. - Aug 7; 202(1). - P. 9-15.
107. Gwaltney S.L.II, Imade H.M., Li Q., Gehrke L., Credo R.B., Warner R.B., Le J.Y., Kovar P., Frost D., Ng S.C., Sham H.L. Antimitotic Agents // Bioorg. Med. Chem. Lett.-2001.-V. 11.-P. 1671-1673.
108. Hanaoka K., Suzuki M., Kobayashi T., Tanzawa F., Tanaka K., Shibayama T., Miura S., Ikeda T., Iwabuchi H., Nakagawa A., Mitsuhashi Y., Hisaoka M., Kaneko
109. M., Tomida A., Wataya Y., Nomura T., Sasaki T., Matsuda A., Tsuruo T., Kurakata S. Antitumor activity and novel DNA-self-strand-breaking mechanism of CNDAC and its iW-palmitoyl derivative (CS-682) II Int J Cancer. 1999. - Jul 19; 82(2). - P. 226-236.
110. Hass R., Giesse G., Meyer G. et al. Differentiation and retrodifferentiation of U937 cells: reversible induction and suppression of intermediate filament protein synthesis // Eur. J. Cell Biol. 1990. - V. 51. - P. 265-271.
111. Henriksson M., Luscher B. Proteins of the Myc network: Essential regulators of cell growth and differentiation // Adv Cancer Res. 1996. - V. 68. - P. 109.
112. Herberman R.B. Cancer immunotherapy with natural killer cells // Semin Oncol. 2002. - V. 3 (7). - P. 27-30.
113. Herrera R., Hubbell S., Decker S., Petruzzelli L. A role for the MEK/MAPK pathway in PA£4-induced cell cycle arrest: modulation of megakaryocyte differentiation of K562 cells // Exp Cell Res. 1998. - V. 238 (2). - P. 407-414.
114. Horton M.A., Cedar S.H., Maryanka D. et al. Multiple differentiation programs in K562 erythroleukemia cells and their regulation // Progr. Clin. Biol. Res. 1983.-V.134.-P. 305-322.
115. Horvat-Switzer R. D., Thompson A.A. Stromal contact inhibits effects of phorbol esters but does not inhibit staurosporine induced megakaryocyte differentiation in K562 cells // Blood (ASH Annual Meeting Abstracts). 2005. - V. 106.-Abstract 4315.
116. Hosmane R.S. Ring-expanded ("Fat") nucleosides as broad-spectrum anticancer and antiviral agents // Curr. Top Med Chem. 2002. - Oct; 2(10). - P. 1093-1109.
117. Houghton P.J., Houghton J.A. Antitumor diarylsulfonylureas: novel agents with unfulfilled promise // Invest. New Drugs. 1996. -V. 14. - P. 271-280.
118. Hu J.H., Stamatoyannopoulos G., Song C.-Z. Regulation of globin gene expression and erythroid differentiation by Sp/KLF factors // Blood (ASH Annual Meeting Abstracts). 2005. - V. 106. - Abstract 4241.
119. Hu W.H., Johnson H., Shu H.B. Activation of NF-kappaB by FADD, Casper, and caspase-8 // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275. - P. 10838-10844.
120. Huang D.-Y., Kuo Y.-Y., Lai J.-S., Suzuki Y., Sugano S., Chang Z.-F. GATA-1 and NF-y cooperate to mediate erythroid-specific transcription of Gfi-IB gene // Nucleic Acids Research. 2004. - V. 32 (13). - P. 3935-3946.
121. Huang H.-f., Chen Y.-z., Wu Y. Mitochondria-dependent apoptosis induced by a novel amphipathic photochemotherapeutic agent ZnPcS2P2 in HL-60 cells // Acta Pharmacologica Sinica. 2005. - V. 26 (9). - P. 1138-1144.
122. Huang M., Wang Y., Collins M., Mitchell B.S., Graves L.M. All 1126 induces differentiation of human myeloid leukemia K562 cells by depletion of intracellular CTP pools // Molecular Pharmacology. 2002. - V. 62, Is. 3. - P. 463472.
123. Huang P., Plunkett W. Fludarabine- and gemcitabine-induced apoptosis: Incorporation of analogs into DNA is a critical event // Cancer Chemother Pharmacol. -1995. V. 36. - P. 181-188.
124. Huang P., Chubb S., Hertel L.W., Grindey G.B., Plunkett W. Action of 2',2'-difluorodeoxycytidine on DNA synthesis // Cancer Res. 1991. - V. 51. - P. 61106117.
125. Ikezoe T., Chen S.S., Heber D., Taguchi H., Koeffler H.P. Baicalin is a major component of PC-SPES which inhibits the proliferation of human cancer cells via apoptosis and cell cycle arrest // Prostate. 2001. - V. 49 (4). - P. 285-292.
126. Ito Y., Pandey P., Sporn M.B. et al. A novel triterpenoid CDDO induced apoptosis and differentiation of human osteosarcoma cells by caspase-8 dependent mechanism//Mol. Pharmacol. -2001.- V. 59.-P. 1094-1099.
127. Iwatani M., Ikegami K., Kremenska Y., Hattori N., Tanaka S., Yagi S., Shiota K. Dimethyl sulfoxide has an impact on epigenetic profile in mouse embryoid body // Stem Cells. 2006. - V. 24 (11). - P. 2549-2556.
128. Jack M.T., Woo R.A., Hirao A. et al. Chk2 is dispensable for /?53-mediated (//-arrest but is required for a latent /755-mediated apoptotic response // PNAS. -2002. V. 99, № 15. - P. 9825-9829.
129. Jack M.T., Woo R.A., Motoyama N. et al. DNA-dependent protein kinase and checkpoint kinase 2 synergistically activate a latent population of p53 upon DNA damage // J. Biol. Chem. 2004. - V. 279 (15). - P. 15269-15273.
130. Jackon A., Werner N. Preparation, staining, and analysis by cytometry of peripheral blood leukocytes // Manual of clinical laboratory immunology. 1986. -3rd ed. Wash. (D.C.): Amer. Soc. For Microbiology. - P. 226-235.
131. Jacquel A., Herrant M., Legros L., Belhacene N., Luciano F., Pages G., Hofman P., Auberger P. Imatinib induces mitochondria-dependent apoptosis of the
132. Bcr-Abl positive K562 cell line and its differentiation towards the erythroid lineage // FASEB J. 2003. - V. 17 (14). - P. 2160-2162.
133. James S.Y., Williams M.A., Kelsey S.M., Newland A.C., Colston K.W. The role of vitamin D derivatives and retinoids in the differentiation of human leukaemia cells // Biochem Pharmacol. 1997. - V. 54 (5). - P. 625-634.
134. Jensen M.R., Factor V.M., Thorgeirsson S.S. Regulation of cyclin G/ during murine hepatic regeneration following Dipin-induced DNA damage // Hepatology. -1998.-V. 28 (2).-P. 537-546.
135. Ji Y., Studzinski G.P. Retinoblastoma protein and CCAAT/qnhancer-binding protein beta are required for 1,25-dihydroxyvitamin Dj-induced monocytic differentiation of HL-60 cells // Cancer Res. 2004. - V. 64 (1). - P. 370-377.
136. Joe Y.S., Jeong J.-H., Yang S. et al. ATR, PML, and CHK2 play a role in arsenic trioxide-induced apoptosis // J. Biol. Chem. 2006. - V. 281, Is. 39. - P. 28764-28771.
137. Johnson V.L., Ko S.C., Holmstrom T.H. et al. Effector caspases are dispensable for the early nuclear morphological changes during chemical-induced apoptosis // J Cell Sci. 2000. - V. 113 (17). - P. 2941-2953.
138. Kanda H., Takatori S., Matsuda A., Sasaki T., Tanaka M., Fukushima M., Wataya Y. Cytotoxic mechanisms of new antitumor nucleoside analogues, 3'-ethynylcytidine (ECyd) and 3'-ethynyluridine (EUrd) II Nucleic Acids Symp Ser. -1997.-V. 37.-P. 137-138.
139. Kang C.D., Han C.S., Kim K.W., Do I.R., Kim C.M., Kim S.H., Lee E.Y., Chung B.S. Activation of NF-kappaB mediates the PM4-induced differentiation of K562 cells // Cancer Lett. 1998. - V. 132 (1-2). - P. 99-106.
140. Kang C.D, Lee B.K, Kim K.W., Kim C.M, Kim S.H., Chung B.S. Signaling mechanism of PMA-induced differentiation of K562 cells // Biochem Biophys Res Commun. 1996. - V. 221 (1). - P. 95-100.
141. Kaye S.B. New antimetabolites in cancer chemotherapy and their clinical impact//Br J Cancer.- 1998.-V. 78 (Suppl 3). P. 1-7.
142. Kim H.J, Mun J.Y, Chun Y.J. et al. ^ox-dependent apoptosis induced by ceramide in HL-60 cells // FEBS Lett. 2001a. - V. 505 (2). - P. 264-268.
143. Kim S.S, Chae H.S, Bach J.H. et al. p53 Mediates ceramide-induced apoptosis in SKN-SH cells // Oncogene. 2002. - V. 21 (13). 2020-2028.
144. Kim Y.-J, Park H.-J, Yoon S.-H, Kim M.-J, Leem K.-H, Chung J.-H, Kim H.-K. Anticancer effects of oligomeric proanthocyanidins on human colorectal cancer cell line, SNU-C4 II World J Gastroenterol. 2005. - V. 11 (30). - P. 46744678.
145. King R.F.G., Broun S.B. The mechanism of catabolism. A study of hem breakdown in spleen microsomal fraction and in a model system by 018 labeling and in a model substitution//Biochem. J., 1978. V. 174. -N. l.-P. 103-109.
146. Ко L.J., Prive C. p53: puzzle and paradigm // Genes Develop. 1996. - V. 10, №9.-P. 1054-1072.
147. Koeffler H.P., Golde D.W. Human myeloid leukemia cell lines: a review // Blood. 1980. - V. 56 (3). - P. 344-350.
148. Koehler L., Hass R., Wessel K. et al. Altered arachidonic acid metabolism during differentiation of the human monoblastoid cell line U937 II Biochim. Biophys. Acta. 1990.-V. 1042.-P. 395-403.
149. Kohgo S., Horie H., Ohrui H. Synthesis of 4'-C-ethynyl-beta-£>-arabino- and 4'-C-ethynyl-2'-deoxy-beta-D-ribo-pentofuranosyl pyrimidines, and their biological evaluation // Biosci Biotechnol Biochem. 1999. - Jun 63(6). - P. 1146-1149.
150. Kovalenko T.A., Kharitonchik L.A., Rogozhina O.G., Vrzhesinskaia O.A., Kodentsova V.M., Stroev E.A., Seleznev N.G. The effect of ftalazol on the body allowance in rats of B-group vitamins // Eksp. Klin.Farmakol. 1999. - V. 62 (1). -P. 48-49.
151. Kremenetskaya O.S., Logacheva N.P., Baryshnikov A.Y., Chumakov P.M., Kopnin B.P. Distinct effects of various p53 mutants on differentiation and viability of human K562 leukemia cells // Oncol Res. 1997. - V. 9 (4). - V. 155-166.
152. Krishna R., Mayer L.D. Multidrug resistance (MDR) in cancer. Mechanisms, reversal using modulators of MDR and the role of MDR modulators in influencing the pharmacokinetics of anticancer drugs // Eur J Pharm Sci. 2000. - V. 11 (4). - P. 265-283.
153. Kuo H.C., Kuo W.H., Lee Y.J., Wang C.J., Tseng T.H. Enhancement of caffeic acid phenethyl ester on all-trans retinoic acid-induced differentiation in human leukemia HL-60 cells // Toxicol Appl Pharmacol. 2006. - V. 216 (1). - P. 80-88.
154. Laskay T., Kiessling R. Interferon and butyrate treatment leads to a decreased sensitivity of NK target cells to lysis by homologous but not by heterologous effector cells // Nat. Immun. Cell Growth Regul. 1986. - V. 5. - P. 211-220.
155. Leary J.F., Ohlsson-Wilhelm B.M., Giuliano R. et al. Multipotent human hematopoietic cell line K562: Lineage-specific constitutive and inducible antigens // Leuk. Res.-1987.-V. 11 (9).-P. 807-815.
156. Lee C.H., Yun H.J., Kang H.S. Kim H.D. ERK/MAPKpathway is required for changes of cyclin D1 and B1 during phorbol 12-myristate 13-acetate-induced differentiation of K562 cells // IUBMB Life. 1999. - V. 48 (6). - P. 585-591.
157. Levade T., Jaffrezou J.P. Signaling sphingomyelinases: which, where, how and why? // Biochim. Biophys. Acta. 1999. - V. 1438. - P. 1-17.
158. Lotem J., Sachs L. Control of apoptosis in hematopoiesis and leukemia by cytokines, tumor suppressor and oncogenes // Leukemia. 1996. - V. 10. - P.925-931.
159. Lozzio C.B., Lozzio B.B. Human chronic myelogenous leukemia cell with positive Philadelphia chromosome // Blood. 1975. - V. 45. - P. 321-334.
160. Luisi-DeLuca C., Mitchell T., Spriggs D., Kufe D.W. Induction of terminal differentiation in human K562 erythroleukemia cells by arabinofuranosylcytosine // J Clin Invest. 1984. - V. 74 (3). - P. 821-827.
161. Maanen M.J., Smeets C.J., Beijnen J.H. Chemistry, pharmacology and pharmacokinetics of A^A^A^-triethylenethiophosphoramide (thioTEPA) // Cancer Treat Rev. 2000. - V. 26 (4). - P. 257-268.
162. Mahdavi M., Yazdanparast R. Gnidilatimonoein from Daphne mucronata induces differentiation and apoptosis in leukemia cell lines // Arch Pharm Res. -2007.-V. 30 (2).-P. 177-181.
163. Marcinkowska E., Garay E., Gocek E., Chrobak A., Wang X., Studzinski G.P. Regulation of C/EBPbeta isoforms by MAPK pathways in HL-60 cells induced todifferentiate by 1,25-dihydroxyvitamin D3 II Exp Cell Res. 2006. - V. 312 (11). -P. 2054-2065.
164. Marzo I., Perez-Galan P., Giraldo P., Rubio-Felix D., Anel A., Naval J. Cladribine induces apoptosis in human leukaemia cells by caspase-dependent and -independent pathways acting on mitochondria // Biochem J. 2001. - Nov 1; 359 (Pt 3).-P. 537-546.
165. Matsuda A., Nakajima Y., Azuma A., Tanaka M., Sasaki T. 2'-C-cyano-2'-deoxy-l-/?-D-arabinofuranosyl-cytosine (CNDAC): design of a potential mechanism-based DNA-strand-breaking antineoplastic nucleoside // J Med Chem. 1991a. - V. 34.-P. 2917-2919.
166. Matsuda A., Sasaki T. Antitumor activity of sugar-modified cytosine nucleosides // Cancer Sci. 2004. - Feb 95(2). - P. 105-111.
167. Matsuda A., Azuma A. 2'-C-Cyano-2'-deoxy-l-beta-.£>-arabinofuranosylcytosine (CNDAC): A mechanism-based DNA-strand-breaking antitumor nucleoside // Nucleosides Nucleotides. 1995. - V. 14. - P. 461-471.
168. McGahon A., Bissonnette R., Schmitt M. et al. BCR-ABL maintains resistance of chronic myelogenous leukemia cells to apoptotic cell // Blood. 1994. - V. 83 (12), Is. 5-P. 1179-1187.
169. McGee M.M., Hyland E., Campiani G. et al. Caspase-3 is not essential for DNA fragmentation in MCF-7 cells during apoptosis induced by the pyrrolo-1,5-benzoxazepine, PBOX-6IIFEBS Lett. 2002. - V. 515 (1-3). - P. 66-70.
170. McGuckin C.P., Forraz N., Liu W.M. Diaminofluorene stain detects erythroid differentiation in immature haemopoietic cells treated with EPO, IL-3, SCF,
171. TGFbetal, MIP-1 alpha and INF gamma II Eur. J. Haematol. 2003. - V. 70. - P. 106-114.
172. Meinhardt G., Eppinger E., Sehmidmaier R. Effects of novel modulators of protein kinase C activity upon chemotherapy-induced differentiation and apoptosis in myeloid leukemic cells // Anticancer Drugs. 2002. - V. 13, № 7. - P. 725-733.
173. Mengubas K., Riordan F.A., Hoffbrand A.V. et al. Co-ordinated downregulation of bcl-2 and bax expression during granulocytic and macrophage-like differentiation of the HL-60 promyelocytic leukemia cell line // FEBS Lett. -1996.-V. 394.-P. 356-360.
174. Mese H., Sasaki A., Nakayama S. et al. The role of caspase family protease, caspase-3 on cisplatin-induced apoptosis in cisplatin-resistant A431 cell line // Cancer Chemother Pharmacol. 2000. - V. 46 (3). - P. 241-245.
175. Mignone R.G., Weber E.T. Potent inhibition of cell proliferation in the hippocampal dentate gyrus of mice by the chemotherapeutic drug thioTEPA II Brain Res. 2006. - V. 1111 (1). - P. 26-29.
176. Miranda M.B., McGuire T.F., Johnson D.E. Importance of MEK-ll-2 signaling in monocytic and granulocytic differentiation of myeloid cell lines // Leukemia. 2002. - V. 16 (4). - P. 683-692.
177. Mlejnek P., Kuglik P. Induction of apoptosis in HL-60 cells by N(6)-benzyladenosine // J Cell Biochem. 2000. - V. 77 (1). - P. 6-17.
178. Moon N.-S., Di Stefano L., Dyson N. A gradient of epidermal growth factor receptor signaling determines the sensitivity of rbfl mutant cells to £2F-dependent apoptosis // Molecular and Cellular Biology. 2006. - V. 26, № 20 - P. 7601-7615.
179. Moosavi M.A., Yazdanparast R., Sanati M.H. et al. 3-Hydrogenkwadaphnin targets inosine 5'-monophosphate dehydrogenase and triggers post-Gy arrest apoptosis in human leukemia cell lines // Int J Biochem Cell Biol. 2005a. - V. 37 (11).-P. 2366-2379.
180. Moosavi M.A., Yazdanparast R., Sanati M.H. et al. The cytotoxic and antiproliferative effects of 3-hydrogenkwadaphnin in K562 and jurkat cells is reduced by guanosine // J Biochem Mol Biol. 2005b. - V. 38 (4). - P. 391-398.
181. Muñoz-Alonso M.J., Acosta J.C., Richard C., Delgado M.D., Sedivy J., León Lp21Cipl andp27Kipl induce distinct cell cycle effects and differentiation programs in myeloid leukemia cells // J. Biol. Chem. 2005. - V. 280, Is. 18. - P. 18120-18129.
182. Murata D., Endo Y., Obata T., Sakamoto K., Syouji Y., Kadohira M., Matsuda A., Sasaki T. A crucial role of uridine/cytidine kinase 2 in antitumor activity of 3'-ethynyl nucleosides // Drug Metab Dispos. 2004. - Oct 32(10). - P. 1178-1182.
183. Nagano A., Kakutani T., Matumoto Y., Ebara Y., Kanja K., Kankawa S., Wataya Y. The molecular mechanisms of 5-fluoro-2'-deoxyuridine induced cell death //Nucleic Acids Symp Ser. 1997. - V. 37. - P. 135-136.
184. Nagata S. Apoptotic DNA fragmentation // Exp. Cell Res. 2000. - V. 256. -P. 12-18.
185. Namavati U.B., Pawliezak R., Doniger J., Gladwin M.T. et al. Oxidant-induced cell death in respiratory epithelial cells is due to DNA damage and loss of ATP II Exp. Lung. Res. 2002. - V. 28 (2). - P. 591-607.
186. Nisselbaum J.S., Green S.A. A simple ultramicromethod for determination of pyridine nucleotides in tissue // Anal. Biochem. 1969. - V. 27. - P. 212-217.
187. Nurse P. Universal control mechanism regulating onset of A/-phase // Nature (Lond). 1990. - V. 344. - P. 503-508.
188. Obata T., Endo Y., Murata D., Sakamoto K., Sasaki T. The molecular targets of antitumor 2'-deoxycytidine analogues // Curr Drug Targets. 2003. - May 4(4). -P. 305-313.
189. Obata T., Endo Y., Tanaka M., Uchida H., Matsuda A., Sasaki T. Deletion mutants of human deoxycytidine kinase mRNA in cells resistant to antitumor cytosine nucleosides // Jpn J Cancer Res. 2001. - Jul; 92(7). - P. 793-798.
190. Oberg F., Botling J., Nilsson K. Functional antagonism between vitamin D3 and retinoic acid in the regulation of CD 14 and CD23 expression during monocytic differentiation of U937 cells // J. Immunol. 1993. - V. 150. - P. 3487-3492.
191. Ochiai E. Aromatic amino N-oxides. 1967. - Amsterdam: Elsevier. - 450 p.
192. Ohlsson-Wilhelm B.M., Farley B.A., Kosciolek B., La Bella S., Rowley P.T. K562 human erythroleukemia cell variants resistant to growth inhibition by butyrate have deficient histone acetylation // Am. J. Hum. Genet. 1984. - V. 36 (6). - P. 1225-1238.
193. Osawa M., Yamaguchi T., Nakamura Y., Kaneko S., Onodera M., Sawada K.i., Jegalian A., Wu H., Nakauchi H., Iwama A. Erythroid expansion mediated by the Gfl-IB zinc finger protein: role in normal hematopoiesis // Blood. 2002. - V. 100, №8.-P. 2769-2777.
194. Osborn M.T., Berry A., Ruberu M. S., Ning B., Bell L.M., Chambers T.C. Phorbol ester induced MDR1 expression in K562 cells occurs independently of mitogen-activated protein kinase signaling pathways // Oncogene. 1999. - V. 18 (42).-P. 5756-5764.
195. Osti F., Corradini F.G., Hanau S., Matteuzzi M., Gambari R. Human leukemia K562 cells: induction to erythroid differentiation by guanine, guanosine and guanine nucleotides // Haematologica. 1997. - V. 82 (4). - P. 395-401.
196. Otani M., Yoshida S., Yoshioka-Hiramoto A. et al. The dNTP imbalance death // Nucleic Acids Symp Ser. 1991. - V. 25. - P. 111-112.
197. Owa T., Nagasu T. Novel sulphonamide derivatives for the treatment of cancer // Exp. Opin. Ther. Patents. 2000. - V. 10. - P. 1725-1740.
198. Owa T., Yoshino H., Okauchi T., Yoshimatsu K., Ozawa Y., Sugi N.H., Nagasu T., Koyanagi N., Kitoh K. Discovery of novel antitumor sulfonamides targeting G, phase of the cell cycle // J. Med. Chem. 1999. - V. 42. - P. 3789-3799.
199. Palozza P., Serini S., Torsello A. et al. Mechanism of activation of caspase cascade during beta-carotene-induced apoptosis in human tumor cells // Nutr Cancer. -2003. -V. 47(1).-P. 76-87.
200. Pandey P., Nakazawa A., Ito Y. et al. Requirement for caspase activation in monocytic differentiation of myeloid leukemia cells // Ibid. 2000. - V. 19. - P. 3941-3947.
201. Park B., Fikring S., Smitkwick B. Infection and nitroblue-tetrazolium reduction by neurophils // Lancet. 1988. - V. 2. - P. 532-534.
202. Park J.-I., Choi H.-S., Jeong J.-S., Han J.-Y., Kim I.-H. Involvement of p38 kinase in hydroxyurea-induced differentiation of K562 cells // Cell Growth & Differentiation. 2001. - V. 12. - P. 481-486.
203. Park M.T., Kang J.A., Choi J.A. et al. Phytosphingosine induces apoptotic cell death via caspase 8 activation and Bax translocation in human cancer cells // Clin Cancer Res. 2003. - V. 9 (2). - P. 878-885.
204. Perkins C.L., Fang G„ Kim C.N., Bhalla K.N. The role of Apaf-1, caspase-9, and bid proteins in etoposide- or paclitaxel-induced mitochondrial events during apoptosis // Cancer Res. 2000a. - V. 60 (6). - P. 1645-1653.
205. Perkins C., Kim C.N., Fang G. et al. Arsenic induces apoptosis of multidrug-resistant human myeloid leukemia cells that express Bcr-Abl or overexpress MDR, MRP, Bcl-2, or Bcl-Xi II Blood. 2000b. - V. 95 (3). - P. 1014-1022.
206. Perkins C., Kim C.N., Fang G., Bhalla K.N. Overexpression of Apaf-1 promotes apoptosis of untreated and paclitaxel- or etoposide-treated HL-60 cells // Cancer Res. 1998. - V. 58 (20). - P. 4561-4566.
207. Petrosillo G., Ruggiero F.M., Paradies G. Role of reactive oxygen species and cardiolipin in the release cytochrome c from mitochondria // The FASEB Journal. -2003.-V. 17.-P. 2202-2208.
208. Pinkoski M.J., Brunner T., Green D.R. et al. Fas and Fas ligand in gut and liver // Am. J. Physiol. Gastrointest. 2000. - V. 278. - P. 354-366.
209. Piwocka K., Vejda S., Cotter T.G. et al. Bcr-Abl reduces endoplasmic reticulum releasable calcium levels by a 5c/-2-independent mechanism and inhibits calcium-dependent apoptotic signaling // Blood. -2006. V. 107 (10). - P. 40034010,
210. Plo I., Liao Z.Y., Barcelo J.M. et al. Association oïXRCCl and tyrosyl DNA phosphodiesterase (Tdpl) for the repair of topoisomerase /-mediated DNA lesions // DNA Repair (Amst). 2003. - V. 2. - P. 1087-1100.
211. Podack E.R., Kupfer A. T-cell effector functions: mechanisms for delivery of cytotoxicity and help // Annu. Rev. Cell Biol. 1991. - V. 7. - P. 479-504.
212. Powers J.T., Hong S.K., Mayhew C.N. et al. E2F1 uses the ATM signaling pathway to induce p53 and Chk2 phosphorylation and apoptosis // Molecular Cancer Research. 2004. - V. 2. - P. 203-214.
213. Prado I.B., Laudanna A.A., Carneiro C.R. Susceptibility of colorectal-carcinoma cells to natural-killer-mediated lysis: Relationship to CEA expression and degree of differentiation // Intern. J. Cancer. 1995. - V.61. - P. 854-860.
214. Prados J., Melguizo C., Marchai J.A., Vêlez C., Alvarez L., Arânega A. Therapeutic differentiation in a human rhabdomyosarcoma cell line selected for resistance to actinomycin D // Int J Cancer. 1998. - V. 75 (3). - P. 379-383.
215. Pusapati R.V., Rounbehler R.J., Hong S. et al. ATM promotes apoptosis and suppresses tumorigenesis in response to Myc II PNAS. -2006. V. 103 (5). - P. 1446- 1451.
216. Queva C., Hurlin P.J., Foley K.P., Eisenman R.N. Sequential expression of the MAD family of transcriptional repressors during differentiation and development // Oncogene. 1998. - Feb 26; 16 (8). - P. 967-977.
217. Quéva C., McArthur G.A., Ramos L.S., Eisenman R.N. Dwarfism and dysregulated proliferation in mice overexpressing the MYC antagonist MAD1 II Cell Growth & Differentiation. 1999. - V. 10. - P. 785-796.
218. Racke F.K., Wang D., Zaidi Z., Kelley J., Visvader J, Soh J.W., Goldfarb A.N. A potential role for protein kinase C-epsilon in regulating megakaryocyte lineage commitment // Ibid. 2001. - V. 276, № 1. - P. 522-528.
219. Rae J.M., Soukhova N.V., Flockhart D.A., Desta Z. Triethylenethiophosphoramide is a specific inhibitor of cytochrome P450 2B6: implications for cyclophosphamide metabolism // Drug Metab Dispos. 2002. - V. 30 (5).-P. 525-530.
220. Ragg S.J., Kaga S., Berg K.A. et al. The mitogen-activated protein kinase pathway inhibits ceramide-induced terminal differentiation of a human monoblastic leukemia cell line, U937// J Immunol.- 1998,-V. 161 (3).-P. 1390-1398.
221. Rathmell J.C., Thomson C.B. The central effectors of cell death in the immune system // Annu. Rev. Immunol. 1999. - V. 17. - P. 781-828.
222. Regulus P., Duroux B., Bayle P.A., Favier A., Cadet J., Ravanat J.L. Oxidation of the sugar moiety of DNA by ionizing radiation or bleomycin could induce the formation of a cluster DNA lesion // Proc Natl Acad Sci USA.- 2007. -Epub ahead of print.
223. Reynolds E.C., Harris A.W., Finch L.R. Deoxyribonucleoside triphosphate pools and differential thymidine sensitivities of cultured mouse lymphoma and myeloma cells // Biochim. biophys. acta. 1979. - V. 561. - P. 110-123.
224. Richter C., Schweizer M., Cossarizza A. et al. Control of apoptosis by the cellular A TP level // FEBS Lett. 1996. - V. 378, №2. - P. 107-110.
225. Richter T., Schwab M., Eichelbaum M., Zanger U.M. Inhibition of human CYP2B6 by AfA^A^-triethylenethiophosphoramide is irreversible and mechanism-based // Biochem Pharmacol. 2005. - V. 69 (3). - P. 517-524.
226. Robert G.H., White E., Phillips E.S., Lillycrop K.A. The expression of the developmentally regulated proto-oncogene Pax-3 is modulated by N-Myc II J. Biol. Chem. 2002. - V. 277, Is. 38. - P. 34815-34825.
227. Robertson K.A., Hill D.P., Xu Y. et al. Downregulation of apurinic/apyrimidinic endonuclease expression is associated with the induction of apoptosis in differentiating myeloid leukemia cells // Cell Growth Differ. 1997. -V. 8 (4).-P. 443-449.
228. Rogoff H.A., Pickering M.T., Frame F.M. et al. Apoptosis associated with deregulated E2F activity is dependent on E2F1 and AtmlNbsllChk2 II Molecular and Cellular Biology. 2004. - V. 24, № 7. - P. 2968-2977.
229. Rupinder S.K., Gurpreet A.K., Manjeet S. Cell suicide and caspases // Vascul. Pharmacol. 2007. - V. 46 (6). - P. 383-393.
230. Saunders L.R., Verdin E. Ornithine decarboxylase activity in tumor cell lines correlates with sensitivity to cell death induced by histone deacetylase inhibitors // Mol Cancer Ther. 2006. - V. 5. - P. 2777-2785.
231. Saven A., Piro L. D. 2-Chlorodeoxyadenosine: a newer purine analog active in the treatment of indolent lymphoid malignancies // Ann Intern Med. 1994. - V. 120.-P. 784-791.
232. Scaffidi C., Fulda S., Srinivasan A., Friesen C., Li F., Tomaselli K.J., Debatin K.-M., Krammer P.H., Peter M.E. Two CD95 (APO-llFas) signaling pathways // EMBO J. 1998. -V. 17.-P. 1675-1687.
233. Scozzafava A., Owa T., Mastrolorenzo A., Supuran C.T. Anticancer and antiviral sulfonamides // Curr Med Chem. 2003. - Jun; 10(11). - P. 925-953.
234. Scozzafava A., Mastrolorenzo A., Supuran C.T. Arylsulfonyl-A^V-diethyl-dithiocarbamates: a novel class of antitumor agents // Bioorg. Med. Chem. Lett. -2000.-V. 10.-P. 1887-1891.
235. Scozzafava A., Mastrolorenzo A., Supuran C. T. Arylsulfonyl-iV,Af-dialkyl-dithiocarbamates as tumor cell growth inhibitors: novel agents targeting ^-tubulin // J. Enz. Inhib. 2001. - V. 16. - P. 55-64.
236. Shelly C., Petruzzelli L., Herrera R. PMA-induced phenotypic changes in K562 cells: MAPK-dependent and -independent events // Leukemia. 1998. - V. 12. -P. 1951-1961.
237. Shoemaker R.H. The NCI-60 human tumor cell line anticancer drug screen // Nature Reviews. Cancer. 2006. - V. 6 (10). - P. 813-823.
238. Simonova V.S., Samusenko A.V., Filippova N.A., Tevyashova A.N., Lyniv L.S., Kulik G.I., Chekhun V.F., Shtil A.A. Olivomycin induces tumor cell apoptosis and suppresses/?55-induced transcription // Bull Exp Biol Med. 2005. - V. 139 (4). -P. 455-459.
239. Smith H.J., Nicholls P.J., Simons C„ Le Lain R. Inhibitors of steroidogenesis for the treatment of hormone-dependent cancers//Exp. Opin. Ther. Patents. 2001. -V. 11.-P. 789-824.
240. Solazzo M., Fantappie O., Lasagna N., Sassoli C., Nosi D., Mazzanti R. P-gp localization in mitochondria and its functional characterization in multiple drug-resistant cell lines // Exp Cell Res. 2006. - V.312 (20). - P. 4070-4078.
241. Stennicke H.R., Salvesen G.S. Caspases: enemies within // Biochim. Biophys. Acta. 2000. - V. 1477. - P. 299-306.
242. Storkus W.J., Dawson J.R. 5-cell sensitivity to natural killing: Correlation with target cell stage of differentiation state of activation // J. Immunol. 1986. - V. 136.-P. 1542-1547.
243. Studzinski G.P., Rathod B., Wang Q.M. et al. Uncoupling of cell cycle arrest from the expression of monocytic differentiation markers in HL-60 cell variants // Exp Cell Res. 1997. - V. 232 (2). - P. 376-387.
244. Subhashini J., Mahipal S.V., Reddy M.C. et al. Molecular mechanisms in C-phycocyanin induced apoptosis in human chronic myeloid leukemia cell line-.K5<52 // Biochem Pharmacol. 2004. - V. 68 (3). - P. 453-462.
245. Sugiura M., Fram R., Munroe D„ Kufe D. DNA strand scission and ADP-ribosyltransferase activity during murine erythroleukemia cell differentiation // Dev. Biol. -1984.-V. 104 (2).-P.484-488.
246. Sundstrom C., Nilsson K. Establishment and characterization of a human histiocytic lymphoma cell line (U9S7) II International Journal of Cancer. 1976. - V. 17, Is. 5.-P. 565-577.
247. Supuran C.T., Scozzafava A. Carbonic anhydrase inhibitors // Curr. Med. Chem. Immunol., Endoc. Metab. Agents. 2001. - V. 1. - P. 61 -97.
248. Supuran C.T., Casini A., Scozzafava A. Protease inhibitors of the sulfonamide type: anticancer, antiinflammatory, and antiviral agents // Med Res Rev. 2003. -Sep; 23(5).-P. 535-558.
249. Svingen P.A., Loegering D., Rodriquez J. et al. Components of the cell death machine and drug sensitivity of the national cancer institute cell line panel // Clinical Cancer Research. 2004. - V. 10. - P. 6807-6820.
250. Sylvester P.W., Shah S. Intracellular mechanisms mediating tocotrienol-induced apoptosis in neoplastic mammary epithelial cells // Asia Pac J Clin Nutr. -2005.-V. 14 (4).-P. 366-373.
251. Tanaka M., Matsuda A., Terao T., Sasaki T. Antitumor activity of a novel nucleoside, 2' -C-cyano-2' -deoxy-1 -beta-D-arabinofuranosylcytos ine (CNDA C) against murine and human tumor // Cancer Lett. 1992. - May 30; 64(1). - P. 67-74.
252. Tanaka M., Tabata S., Matsuda A., Fukushima M., Eshíma K., Sasaki T. Antitumor effect and mechanism of a novel multifunctional nucleoside, 3'-ethynylnucleoside, on human cancers // Gan To Kagaku Ryoho. 1997. - Feb; 24(4). -P. 476-482.
253. Terui Y., Furukawa Y., Kikuchi J. et al. Bcl-x is a regulatory factor of apoptosis and differentiation in megakaryocyte lineage cells // Exp. Hematol. -1998.-V. 26.-P. 236-244.
254. Tiwari K.N., Fowler A.S., Secrist J.A. 3rd Synthesis and biological activity of 2'-deoxy-4'-thio-pyrazolo3,4-d.pyrimidine nucleosides // Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2005. - V. 24(5-7). - P. 911-914.
255. Tong B., Grimes H.L., Yang T.-Y., Bear S. E., Qin Z., Du K., El-Deiry W.S., Tsichlis P.N. The Gfi-1B proto-oncoprotein represses p21WAF1 and inhibits myeloid cell differentiation // Mol Cell Biol. 1998. - V. 18, № 5. - P. 2462-2473.
256. Torrano V., Chernukhin I., Docquier F., D'Arcy V., León J., Klenova E., Delgado M.D. CTCF regulates growth and erythroid differentiation of human myeloid leukemia cells // J. Biol. Chem. 2005. - V. 280, Is. 30. - P. 28152-28161.
257. Tsuruo T., Iida H., Tsukagoshi S. et al. Overcoming of vincristine resistance in F388 leukemia in vivo and in vitro through enchanced cytotoxicity of vincristine and vinblastine by verapamil//Cancer. 1981.-V. 41.-P. 1967-1972.
258. Uchikubo Y, Hasegawa T, Mitani S, Kim H.S, Wataya Y. Mechanisms of cell death induced by 5-fluoro-2'-deoxyuridine (FUdR) necrosis or apoptosis after treated with FudR II Nucleic Acids Res Suppl. 2002. - V. 2. - P. 245-246.
259. Ueda N, Tsukahara N, Watanabe T. ER-34410, a structurally novel sulfonamide as a potential and injectable antitumor agent // Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 1995. - V. 36. - Abstract 2290.
260. Vrana J.A, Saunders A.M., Chellappan S.P. et al. Divergent effects of bryostatin 1 and phorbol myristate acetate on cell cycle arrest and maturation in human myelomonocytic leukemia cells (U937) II Differentiation. 1998b. - V. 63 (l).-P. 33-42.
261. Walczak H„ Krammer P.H. The CD95 (APO-l/Fas) and the TRAIL (.APO-2L) apoptosis systems // Exp. Cell Res. 2000. - V. 256. - P. 58-66.
262. Wang Q., Fan S., Eastman A., Worland P.J., Sausville E.A., O'Connor P.M. UCN-01: a potent abrogator of G2 checkpoint function in cancer cells with disrupted p53 IIJ Nat Cancer Inst. 1996. - Jul 17; 88(14). - P. 956-965.
263. Wang Q., Salman H., Danilenko M., Studzinski G.P. Cooperation between antioxidants and 1,25-dihydroxyvitamin D3 in induction of leukemia HL-60 cell differentiation through the JNKIAP-l/Egr-1 pathway // J Cell Physiol. 2005. - V. 204 (3). - P. 964-974.
264. Wang Q., Wang X., Studzinski G.P. Jun iV-terminal kinase pathway enhances signaling of monocytic differentiation of human leukemia cells induced by 1,25-dihydroxyvitamin D3IIJ Cell Biochem. 2003a. - V. 89 (6). - P. 1087-1101.
265. Wang S., Wang Z„ Grant S. Bryostatin 1 and UCN-01 potentiate 1 -fi-D-arabinofuranosylcytosine-induced apoptosis in human myeloid leukemia cells through disparate mechanisms // Molecular pharmacology. 2003b. - V. 63, Is. 1. -P. 232-242.
266. Wang X., Studzinski G.P. Activation of extracellular signal-regulated kinases (ERKs) defines the first phase of 1,25-dihydroxyvitamin Dj-induced differentiation of HL-60 cells // J Cell Biochem. 2001a. - V. 80 (4). - P. 471-482.
267. Wang X., Studzinski G.P. Inhibition of p38MAP kinase potentiates the JNKISAPK pathway and AP-1 activity in monocytic but not in macrophage or granulocytic differentiation oí HL-60 cells // J Cell Biochem. 2001b. -V. 82 (1). -P. 68-77.
268. Wang X., Wang T.T., White J.H., Studzinski G.P. Induction of kinase suppressor of Ras-1 (KSR-1) gene by l-a-25-dihidroxyvitamin D3 in human leukemia
269. HL-60 cells through a vitamin D response element in the 5'-flanking region // Oncogene. 2006b. - V. 25(53). - P. 7078-7085.
270. Wang X.H., He S.Y., Zhang Y., Xu J, Feng Q., Li L., Mi L., Chen Z.N. DMSO arrested hybridoma cells for enchanced antibody production // Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao. 2004. - V. 20 (4). - P. 568-571.
271. Wang Z., Wang S., Dai Y. et al. Bryostatin 1 increases 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine-induced cytochrome c release and apoptosis in human leukemia cells ectopically expressing Bcl-XL H J Pharmacol Exp Ther. 2002. - V. 301 (2).-P. 568-577.
272. Wataya Y., Futagami M., Naito T., Uchikubo Y., Yokogawa T., Takenaka K., Kim H.S., Matsuda A., Fukushima M., Kitade Y. Anticancer molecular mechanism of 3'-ethynylcytidine (ECyd) II Nucleic Acids Res Suppl. 2001. - V. 1. - P. 233234.
273. Wataya Y., Hwang H., Nakazawa T. et al. Molecular mechanism of cell death induced dNTP pool imbalance // Nucleic Acids Symp Ser. 1993. - V. 29. - P. 109110.
274. Werkmeister J.A., Pross H.F., Roder J.C. Modulation of K562 cells with sodium butyrate. Assotiation of impared NK susceptibility with sialic acid and analysis of other parameters // Intern. J. Cancer. 1983. - V. 32. - P. 71-78.
275. Whittaker M., Floyd C.D., Brown P., Gearing A.J.H. Design and therapeutic application of matrix metalloproteinase inhibitors // Chem. Rev. 1999. - V. 99. - P. 2735-2776.
276. Witt 0., Sand K., Pekrun A. Butyrate-induced erythroid differentiation of human K562 leukemia cells involves inhibition of ERK and activation of p38 MAP kinase pathways // Blood. 2000. - V. 95, № 7. - P. 2391-2396.
277. Woessmann W., Mivechi N.F. Role of ERK activation in growth and erythroid differentiation of K562 cells // Exp. Cell Res. 2001. - V. 264 (2). - P. 193-200.
278. Wolf B.B., Green D.R. Suicidal tendencies: apoptotic cell death by caspase family proteinases // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274, № 29. - P. 20049-20052.
279. Wolf D., Rotter V. Major deletions in the gene encoding the p53 tumor antigen cause lack ofp53 expression in HL-60 cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1985.-V. 82 (3).-P. 790-794.
280. Wong W.W.-L., MacDonald S., Langler R.F., Penn L.Z. Novel synthetic organosulfur compounds induce apoptosis of human leukemic cells // Anticancer Res. 2000. - V. 20. - P. 1367-1374.
281. Wu J., Suzuki H., Akhand A. A et al. Modes of activation of mitogen-activated protein kinases and their roles in cepharanthine-induced apoptosis in human leukemia cells // Cell Signal. -2002b. V. 14 (6). - P. 509-515.
282. Wu J., Suzuki H., Zhou Y.W. et al. Cepharanthine activates caspases and induces apoptosis in Jurkat and K562 human leukemia cell lines // J Cell Biochem. -2001.-V. 82 (2).-P. 200-214.
283. Wu X., Chen J. Autophosphorylation of checkpoint kinase 2 at serine 516 is required for radiation-induced apoptosis // J. Biol. Chem. 2003. - V. 278, Is. 38. -P. 36163-36168.
284. Yamamoto S., Tamai H., Ishisaka R., Kanno T., Arita K., Kobuchi H., Utsumi K. Mechanism of alpha-tocopheryl succinate-induced apoptosis of promyelocytic leukemia cells // Free Radic Res. 2000. - V. 33 (4). - P. 407-418.
285. Yang S., Jeong J.-H., Brown A.L. et al. Promyelocytic leukemia activates Chk2 by mediating Chk2 autophosphorylation // J. Biol. Chem. 2006. - V. 281, Is. 36.-P. 26645-26654.
286. Yao C., Works K., Austin G.E. Role of transcription factor HBP1 in human leukaemic cell proliferation, apoptosis and differentiation // Blood (ASH Annual Meeting Abstracts). 2004. - V. 104. - Abstract 3556.
287. Yazdanparast R., Moosavi M.A., Mahdavi M. et al. 3-Hydrogenkwadaphnin from Dendrostellera lessertii induces differentiation and apoptosis in HL-60 cells // PlantaMed.-2005.- V. 71 (12).-P. 1112-1117.
288. Yoshimatsu K., Yamaguchi A., Yoshino H., Koyanagi N., Kitoh K. Mechanism of action of E7010, an orally active sulfonamide antitumor agent: inhibition of mitosis by binding to the colchicine site of tubulin // Cancer Res. -1997.-V. 57.-P. 3208-3213.
289. Yoshioka A., Tanaka S., Hiraoka O., Koyama Y., Hirota Y., Wataya Y. The mechanism of dNTP-unbalanced cell death induced by 5-fluorouracil and its derivatives//Nucleic Acids Symp Ser. 1985. - V.16. -P. 245-248.
290. Yu C., Krystal G., Dent P. et al. Flavopiridol potentiates STI571 -induced mitochondrial damage and apoptosis in BCR-ABL-positive human leukemia cells // Clin Cancer Res. 2002a. - V. 8 (9). - P. 2976-2984.
291. Yu C., Rahmani M., Almenara J. et al. Histone deacetylase inhibitors promote 5T/57/-mediated apoptosis in 577577-sensitive and -resistant Bcr/Abt human myeloid leukemia cells // Cancer Res. 2003a. - V. 63 (9). - P. 2118-2126.
292. Yu C., Rahmani M., Conrad D. et al. The proteasome inhibitor bortezomib interacts synergistically with histone deacetylase inhibitors to induce apoptosis in Bcr/Abt cells sensitive and resistant to STI571II Blood. 2003b. - V. 102 (10). - P. 3765-3774.
293. Yuksel S., Saydam G., Uslu R. et al. Arsenic trioxide and methylprednisolone use different signal transduction pathway in leukemic differentiation // Leuk. Res. -2002.-V. 26.-P. 391-398.
294. Zhang J.-W., Peng H., Du Z.-W. Identification, characterization of a novel zinc finger protein (HZF1) gene and its roles in erythroid and megakaryocyte differentiation II Blood (ASH Annual Meeting Abstracts). 2005. - V. 106. -Abstract 4237.
295. Zhang L., Insel P.A. The pro-apoptotic protein Bim is a convergence point for cAMPIprote'm kinase A- and glucocorticoid-promoted apoptosis of lymphoid cells // J. Biol. Chem. 2004. - V. 279, Is. 20. - P. 20858-20865.
296. Zhang M., Endo Y., Sasaki T. Determinants in chemosensitivity of oncogene-transformed NIH3T3 cells to 2'-C-cyano-2'-deoxy-l-beta-D-arabino-pentofuranosylcytosine 11 Int J Oncol. 1999. - Mar; 14(3). - P. 543-549.
297. ZhaoY., Tan J., Zhuang L. et al. Inhibitors of histone deacetylases target the Rb-E2F1 pathway for apoptosis induction through activation of proapoptotic protein Bimll PNAS.-2005.-V. 102, №44.-P. 16090-16095.
-
Зыкина, Наталья Сергеевна
-
кандидата биологических наук
-
Петрозаводск, 2007
-
ВАК 03.00.04
- Получение и характеристика сублиний клеток К562, резистентных к модуляторам процессов дифференцировки
- Цитотоксическое и апоптогенное действие индукторов дифференцировки клеток линии К562
- Процессы модуляции апоптоза клеток К562 при обработке индукторами эритроидной и миелоидной дифференцировки
- Изменения состава и ферментативных активностей протеасом при апоптозе в клетках К562
- Свободнорадикальные механизмы в развитии лекарственной резистентности опухолевых клеток
