Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимическая характеристика тканей трупа человека в состоянии жировоска и ее судебно-медицинское значение

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимическая характеристика тканей трупа человека в состоянии жировоска и ее судебно-медицинское значение"



■\Л

На правах рукописи

МЛНУЛИК Андреи Фсдосович

БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТКАНЕЙ ТРУПА ЧЕЛОВЕКА В СОСТОЯНИИ ЖИРОВОСКА И ЕЕ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ

ЗНАЧЕНИЕ

03.00.04 -Биохимия 14.00.24. - Судебная медицина

Автореферат диссертации па соискание ученой пепсин кандидата медицинских паук

Ростов-на-Дону 1998

Работа выполнена в Ростовском государственном медицинском университете

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ: Лауреат Государственной премии РФ. заслуженный деятель науки РФ, член -корреспондент РАЕ. доктор медицинских наук, профессор ШЕПЕЛЕВ А. П. Доктор медицинских наук, профессор АКОПОВ В.И.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: Заслуженный деятель науки РФ. доктор медицинских наук, профессор ПАШИНЯН Г. А.

Доктор медицинских наук, старший научный сотрудник ТРАПЕЗОНЦЕВА Р. А.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Кубанская государственная медицинская академия

Защита состоится «_» «_» 1998 г. в_часов

на заседании диссертационного совета Д 084.53.01 при Ростовском государственном медицинском университете (344022. г.Ростов-на-Дону, Нахичеванскпй пер.. 29)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан «_» «_» 1998 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, доцент КОРГАНОВ Н.Я.

Общая характеристика работы, актуальность работы. 4 Среди ведущих проблем современной судебной медицины особое место занимает исследование трупных изменений. Изучение трупных изменений с применением лабораторных диагностических методов, в частности, биохимических, позволяет получить объективную картину постмортальных изменений в тканях трупов людей с целью использования ах для решения вопросов (о давности наступления смерти, характере повреждений,...), поставленных судебно-следственными органами.

К поздним трупным изменениям относят жировоск, под которым понимается консервирующее труп изменение мягких тканей, происходящее при отсутствии гнилостного разложения и заключающееся в превращении мягких тканей трупа в особого рода вещество, имеющее своеобразный вид (Роигсгои, 1789; Д.П.Косоротов, 1914; С.С. Самищенко, 1996).

В конце XIX века появились первые попытки объяснить механизм образования жировоска, как процесс изменения жирных кислот (стеариновой и пальмитиновой) (Э.Цильнер, 1885; М.С.ОгШл, 1884; Ж.Бриан, 1859). В единичных работах (О.Прокоп, 1966г.; Н.Со1оис1а, 1991г. и др.) механизм образования жировоска связывается с действием токсинов микроорганизмов.

Проведенный нами анализ секционного материала Бюро СМЭ МЗ РО показал, что в ряде случаев при исследовании трупа судебно-медицинскими экспертами жировоск вообще не диагностируется или просто не упоминается. Изредка за жировоск принимается ткань, не подвергшаяся омылению. Данные из разных регионов СНГ (Бюро СМЭ Махачкалы, Ашгабада, Кишинева, Кемерово, Читы), где за многие годы при судебно-медицинском исследований не зарегистрирован ни один труп в состоянии жировоска, позволяют полагать, что так обстоит дело не только в Ростовской области. Отмечено, что даже в случаях несомненного жировоска большинство судебно-медицинских экспертов его не описывают. В отличие от обязательного в судебной медицине тре-

бования объективного обоснования каждого вывода при указании на жировоск доказательств каких-либо его объективных признаков не приводится. В связи с вышеизложенным было интересно выявить и зафиксировать объективные признаки жировоска, попытаться объяснить механизм его образования.

Все вышеизложенное и стало предпосылкой для изучения этого позднего консервирующего труп изменения.

Цслыо настоящей работы является комплексное изучение структурно-биохимических закономерностей превращения трупных тканей в жировоск, обоснование роли перекисного окисления липидов в механизме его образования, разработка комплекса диагностических признаков для распознавания и объективного доказательства жировоска при судебно-медицинском исследовании трупа

Для достижения этого были поставлены следующие задачи:

1) Дать диагностическую оценку морфологическим и физико-химическим признакам жировоска и методам его исследований, приводимым в судебно-медицинской литературе.

2) Определить основные биохимические изменения тканей при образовании жировоска в подкожно-жировой клетчатке трупа человека и сравнить их с составом неизмененной аналогичной тканью.

3) Изучить биохимические свойства полученного в эксперименте жировоска и провести сравнительную оценку его с жировоском, возникшим в естественных условиях.

4) Дать объяснение механизму образования жировоска, основанному на результатах, полученных с использованием современных биохимических методов исследований, и установить возможность ориентировочного определения давности образования жировоска.

5) Подготовить практические рекомендации для судебно-медицинских экспертов по исследованию тканей трупа человека, находящихся в состоянии

ировоска. \

Научная иовизна

Впервые проведено комплексное изучение структурно-шохимических изменений трупных тканей в состоянии жировоска (ткани в »стоянии жировоска имеют беловато - желтоватый цвет, бугристую сухова-ую поверхность, запах старого сала; на бумаге оставляют жирные или жи-»оподобные следы, плавятся в огне, плавают в воде; растворяются в 96° эти-говом спирте, хлороформе и диэтиловом эфире; увеличение содержания пиффовых оснований, пальмитиновой, стеариновой и миристиновой жирных ;ислот; снижение содержания всех липидных фракций, олеиновой и [инолевой жирных кислот), доказана идентичность естественного и экспериментального жировоска и объяснен механизм его образования. Изучены пока-¡атели липидного состава неизмененной подкожно-жировой клетчатки трупа кловека. Впервые проанализированы признаки жировоска и методы его ис-:лсдований, приводимые в судебно-медицинской литературе.

Теоретическая значимость На основании результатов исследований предложено объяснение ме-;анизма образования жировоска, основанное на результатах современных »юхимических методов исследований (одним из ведущих механизмов герехода трупных тканей в жировоск является свободнорадикальное жисление липидов).

Практическая значимость

Разработаны критерии для распознавания и объективного доказатель-тва наличия жировоска в трупном материале, использования их для установ-сения наиболее раннего срока образования жировоска (комплекс морфологи-сеских физических, химических и биохимических признаков).

Апробация работы: Результаты работы были доложены и обсуждены на IV Всероссий-

ском съезде судебных медиков во Владимире (1997 г.).. расширенном заседании общества судебных медиков Ростовской области (1998 г.), совместном совещании кафедр клинической биохимии №1 и судебной медицины РГМУ, 1 и 2 научных сессиях (1997, 1998 гг.) и конференциях молодых ученых и специа-. листов РГМУ (1995,1996,1997, 1998 гг.).

Внедрение в практику:

Полученные данные внедрены в работу танатологического отдела Бюро СМЭ МЗ РО, используются в учебном процессе кафедры судебной медицины РГМУ. По материалам диссертации опубликовано 11 журнальных статей и информационное письмо организационно-методического отдела Бюро СМЭ МЗ РО (1997).

Основные положения выносимые па защиту:

1) Визуальные и физико-химические признаки жировоска имеют достоверное диагностическое значение только при выявлении всего комплекса этих признаков.

2) Экспериментальный жировоск по своим совокупным признакам идентичен естественно полученному жировоску.

3) Биохимические признаки (увеличение содержания шиффовых оснований, пальмитиновой, стеариновой и миристиновой жирных кислот и снижение содержания всех лшщцных фракций, олеиновой и линолевой жирных кислот) являются наиболее показательными критериями превращения тканей в жировоск.

4) Свободнорадикальное окисление липидов является одним из ведущих механизмов в процессе перехода тканей в жировоск.

5) Морфологическая картина жировоска, выявляемая при гистологическом исследовании, может дать информацию об органной принадлежности тканей, иногда о характере повреждений или патологических изменениях, но для доказательства жировоска использоваться не может.

Структура и объем диссертации:

Диссертационная работа изложена на 125 страницах машинописного текста, иллюстрирована 1 схемой, 20 фотографиями, 7 рисунками и 14 таблицами. Список литературы включает в себя 186 источников, из которых 126 отечественных и 60 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1.Объектом настоящего исследования явились трупы людей в состоянии естественного жировоска, исследование которых проводилось в морге Бюро СМЭ МЗ РО (14 трупов); музейные препараты кафедры судебной медицины РГМУ (5 препаратов); экспериментальный жировоск, полученный в лабораторных условиях на разных этапах своего образования (75 препаратов); атероматозно измененные ткани (9 препаратов), забор которых производили в патологоанатомическом отделен™ РГМУ. В качестве контроля использовали кожу с подкожно-жировой клетчаткой трупов людей, давность смерти которых - до 24 часов, скончавшихся от различных причин; акты судебно-медицинского исследования трупов людей в состоянии жировоска, экспертиза которых проводилась в Бюро СМЭ МЗ РО за последние 20 лет.

2. Моделирование экспериментального 'жировоска.

2.1. Вырезали кусочки органов и тканей из трупов людей в первые сутки после смерти размером 4,0x4,0x4,0 см.: кожа с подкожно-жировой клетчаткой из различных областей тела (живот, ягодицы, бедра - N=30); органы (печень, сердце, головной мозг, почки, легкие, селезенка - N=30)); мышечная ткань (N=30). Образцы тканей помещали на различный срок (от 1 дня до 3 лет) в следующие условия: в воду (термостат, t°=24°C); в вод}' (термостат, t0=28°C); во влажную землю (термостат, t°=24D); во влажную землю (термостат, t°=28°C); в воду (t° окружающей среды от -5°С до +10 °С).

2.2. Для исключения возможного влияния микроорганизмов на образование жировоска кусочки подкожно-жировой клетчатки из трупов людей в

первые сутки после смерти помещали в кипяченую горячую \(°=70°С\ воду (0,3 л) и обрабатывали в течение 30 мин. ультрафиолетовым светом. Пробы помещали в термостат а°=24°С и 1°=28°С) \№=24\.

2.3. Для изучения влияния прооксидангов (ионов железа) на скорость образования жировоска участки кожи с подкожно-жировой клетчаткой (давность смерти людей до 24 часов) помещали в «ржавую» воду\Ы= 10\. Для получения «ржавой» воды брали металлические гвозди (N=12) длиной 10,0 см и заливали 0,5 л воды сроком на 3 недели.

2.3. Для изучения влияния антиоксидантных веществ на образование жировоска кусочки подкожно-жировой клетчатки от трупов людей в первые сутки после смерти обкатывали 5 мл 50% масляного а-токоферола ацетата и помещали на 24 часа в этот же раствор. В дальнейшем эти кусочки \К=10\ помещали в воду (термостат, 1°=24°С).

3. Для сравнения жировоска с контрольным экземпляром и определения диагностических критериев первого, а также для сравнения жировоска с атероматозно измененными тканями проводили:

3.1. Визуальное исследование с целью определения цвета тканей, бугристости и других особенностей поверхности \Ы=120\.

3.2. Непосредственное стереомикроскопическое исследование с помощью стереомикроскопа (МБС-9) при увеличении 12х и 16х \Ы=120\. Этим методом уточнялся характер поверхности тканей: бугристость, наличие волос и волосяных фолликулов, их расположение относительно эпидермиса, сухость поверхности тканей, наличие и характер волокон и жировых долек.

3.3. Исследование физическими методами IV = /20\: механическим (ощупывание - для выявления плотности тканей, легкости выдергивания волос с волосяными фолликулами, разрезания и растирания тканей между пальцами); термическим (для выявления плавления и горения тканей в состоянии жировоска); путем погружения в воду - для выявления плавучести.

3.4. Химическое исследование заключается в изучении растворимости измененных тканей в различных растворителях: 96° этиловом спирте, диэти-ловом эфире и хлороформе \N=120\:.

3.5. Гистологическое исследование измененных тканей проводили стандартными гистологическими методиками: делали срезы на замораживающем микротоме, которые проводили обычной проводкой. Парафиновые срезы окрашивали: пикрофуксином по Ван-Гизон, гематоксилин-эозином, резорцин фуксином, серебрением по Футу, по Пэрлсу, Суданом-Ш \N=396\.

3.6. Биохимические методы исследования.

3.6.1. Выделение липидов производили по методу J.Folch et al., 1957.

3.6.2. Разделение липидов производили методом тонкослойной хроматографии. Определение экстенсивного показателя соотношения классов липидов проводили унифицированным фосфованилиновым методом \N=39\.

3.6.3. Содержание фосфолипидов оценивали по количеству в образцах фосфора по S.Issao, 1967\N=I20\.

3.6.4. Жирно-кислотный спектр изучаемого материала определяли методом газожидкостной хроматографии. Исследования проводили на приборе "Цвет-164" на капиллярной медной колонке с внутренним диаметром колошей 0,25 мм, длиной 40 м, наб1гтой полярной фазой Reoplex-400 \N=83\.

3.6.5. Содержание белка оценивали по методу Бредфорда, 1989

\N=97\.

3.6.6. Определение содержания шиффовых оснований (ШО) производили на приборе "Hitachi F-3000 Fluorescence spectrophotometer" флуориметри-чески (B.Fletcher et al.,1973) \N=97\.

3.6.7. Определение содержания диеновых конъюгатов производили на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 235 нм (R.O.Recknagel, A.K.Choshal, 1966) \N=120\.

3.6.8. Для выявления МДА нами предложена модификация классического метода (И. Д.Стальной и Т.Г.Гаришвили, 1977) \Ы=120\.

3.7. Статистическую обработку полученных результатов производили по методу непрямых разностей (Н.Ф.Нскляев, 1968г.) \Ы=120\.

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ:

При получении жировоска кожи с подкожно-жировой клетчаткой, мышц и органов в экспериментальных условиях во влажной земле жировоск получить не удалось, так как ткани подвергались гнилостному разрушению. При помещении кусочков подкожно-жировой клетчатки в условиях эксперимента в воду жировоск образовывался всегда. При помещении кусочков органов или мышц в землю они так же подвергались гнилостному расплавлению. При помещении аналогичных кусочков в воду они или подвергались гнилостному расплавлению, или превращались в слизеобразное вещество (из 30 проведенных исследований в 7 случаях) с характерным запахом жировоска. Проведение исследования слизеобразного вещества с запахом жировоска было затруднено ввиду невозможности отделения этого вещества от окружающей среды.

Таким образом, можно констатировать, что различные условия окружающей среды по-разному влияют на скорость образования жировоска: жировоск образуется лучше из подкожно-жировой клетчатки, во внутренних органах он образуется очень редко; повышенная температура ускоряет процесс образования жировоска, а пониженная - замедляет; ионы железа способствуют образованию жировоска; антиоксиданты тормозят образование жировоска.

Анализируя акты судебно-медицинских исследований трупов людей, проведенных экспертами Бюро СМЭ МЗ РО, мы установили, что ежегодно эксперты работают с 1 - 6 трупами в состоянии жировоска, что составляет примерно 0,04 - 0,2% в год. Как было замечено, эксперты, производя исследование таких трупов, объективно не доказывают наличия описываемого явле-

ния, а приводят сразу заключение - «жировоск». Есть основания полагать, что в отдельных случаях жировоск не упоминается, кроме того, вопреки требованию к объективизации выводов, почти не приводятся доказательств этого явления.

Результаты визуального исследования позволяют выявить следующие характерные признаки жировоска: ткань имеет плотную или полумягкую консистенцию, серовато-белый цвет, иногда с желтоватым оттенком, реже, под воздействием гуминовых веществ отмечается серовато-бурый цвет; имеет запах прогорклого сыра или тухлого сала. Жировоск может напоминать творожистую массу, известь, воск, стеарин. Появление упомянутых признаков зависит от различных условий образования и хранения жировоска. Поверхность жировоска крупнобугристая, иногда покрыта прозрачным жироподобным жидким веществом, оставляющим пятна на фильтровальной бумаге. При хранении трупов или их частей в состоянии жировоска на воздухе ткань становится желтовато-бежевой.

Метод непосредственной стереомикроскопии позволяет выявить следующие признаки: поверхность имеет неровный бугристый рельеф; слои дермы не различимы; рисунок рогового слоя эпидермиса отсутствует; гиподерма имеет плохо выраженное дольчатое строение; соединительно-тканные волокна выглядят в виде «паутинки», сосуды имеют белый цвет и резко уменьшены в диаметре. При стереомикроскопии хорошо различимы особенности ран, кровоизлияний или других прижизненных изменений.

Физические и химические пробы позволяют установить, что волосы легко выделяются с поверхности кожи без повреждения волосяных луковиц: кусочек ткани в состоянии жировоска плавает в воде; плавится при воздействии пламени, горит в высохшем состоянии; почти полностью растворяется в спирте, эфире или хлороформе, образуя желтоватого цвета жидкость, оставляющую на бумаге жирные следы.

Гистологическое исследование тканей в состоянии жировоска не выявляет специфических признаков пригодных для диагностики. Вместе с тем, при подозрении на прижизненное повреждение в зоне изъятого кусочка тканей они могут быть выявлены. Гистологическое исследование даст возможность различать некоторые структурные элементы той ткани, из которой образовался жировоск.

Исследование жировоска биохимическими методами позволило выявить ряд характерных признаков свойственных жировоску.

1. Содержание общих липидов и липидных фракций в свежей жировой ткани так же, как и всех липидных фракций, значительно больше, чем в жировоске. При исследовании жировоска естественного и экспериментального происхождения отмечено практически полное соответствие фракций липидов. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Фракции липидов жировоска естественного и искусственного про-

исхождения (%)

Фракции Липидов Свежая жировая ткань Жировоск

Естественный Эксперимент.

Общие липиды 95.48+0.41 80.80Ю.64" 81.9211,41"

Фосфолипиды 1,19+0,17 Следы Следы

МАГ 1.48+0.09 0,9810,07" 0.9910.07*

ДАТ 1.61±0,09 0,9910,06* 1,06Ю,09*

ТАГ 32,9210,27 29,4010.57 29,4010.61

Холестерин 2,2710,09 1,7410,1 Г 1,7210,13*

Эфиры ХС 24,0210,27 . 20.6810,45 20.84Ю.35

ВЖК 14,03К),19 11,3710,25 11,5910,25

Эфиры ВЖК 17,9410,12 15,7710,18 15,92+0,30

Примечание: МАГ - моноацилглицериды, ДАТ - диацилглицериды, ВЖК - высшие жирные кислоты, ТАГ - триацилглицериды, ХС - холестерин.

* - р<0,05 в сравнении со свежей тканью.

Как видно из данных, представленных в таблице 1, содержание общих

липидов, как в естественном, так и в экспериментально полученном жировоске

примерно одинаково и достоверно ниже, чем в неизмененной ткани.

Обращает на себя внимание практически полное отсутствие фосфо-липидной фракции как в естественном, так и в экспериментально полученном жировоске. Если установленное снижение уровня практически всех липидных фракций в жировоске в целом соответствует общему снижению концентрации липидов, то фосфолипидная фракция в жировоске практически не выявляется. С нашей точки зрения это явление может служить косвенным подтверждением участия процессов свободнорадикального окисления в генезе образования жировоска, так как фосфолипиды являются наиболее реальным объектом сво-боднорадикальной атаки и благодаря особенностям их химического строения значительно облегчен их гидролитический распад.

2. Содержание жирных кислот в естественном и экспериментальном жировоске идентичны. Установлено, что в жировоске встречаются почти все жирные кислоты, характерные для интактной ткани.

Наиболее часто в исследуемом материале встречались следующие жирные кислоты: миристиновая (Смо), пальмитиновая (С160), паль-митоолеиновая (С^О, стеариновая (Сш>), олеиновая (С,*,) и линолевая (С^). Сведения о составе жирных кислот в жировой ткани трупа человека и в жировоске (в % относительно всех жирных кислот) приведены в таблице 2.

При анализе приведенных в таблице данных обращает на себя внимание, что выявленные изменения носят выраженный разнонаправленный характер. Наиболее заметно значительное возрастание в жировоске содержания пальмитиновой кислоты; в меньшей степени возрастает уровень миристи-новой и стеариновой кислот. Отчетливо прослеживается снижение концентрации олеиновой и, в особенности, линолевой кислот.

Таким образом, исследованиями показано, что в ходе образования жировоска происходит постепенное повышение относительного содержания насыщенных жирных кислот и соответствующее снижение содержания ненасыщенных жирных кислот. По нашему мнению, описанные изменения могут

соответствовать картине постепенной деструкции моно- и полиненасыщенных жирных кислот в ходе свободнорадикальных процессов, сопровождающихся относительным повышением содержания насыщенных жирных кислот в измененных тканях.

Таблица 2 - Количественный состав жирных кислот в жировой ткани трупа человека и в жировоске (% от общего количества жирных кислот)

ВЖК Свежая жировш ткань Жировоск

Экспериментальный Зстест-зенный

1 нед. Змее. 4 мес. > мес. 1 год 2-3 г

Сио 1,20± 0,11 1,60± 0,10 2,40± 0,10* 2,60± 0,50* 3,00± 3,10* 3,50± 0.10* 4,2+ 0,90* 4,60± 1,10*

ClG:0 23,00± 3,80 30,3± 1,90* 33,90i 2.10* 34,60± 5,90* 1-2,6+ 1,20* 44,90± 0.90* 47,6+ 6,50* 46.90+ 6.50*

C16.1 4,80± 0,70 4,60± 0,20 4,50± 0,30 4,70± 0,40 1,50+ 0.60 4,70+ 0,Ю* 4,40+ 0,20 4,70± 0,70

С180 4,50± 0,20 4,60+ 0,10 6,20+ 0.30* 6,60± ЗЛО* 7,60± 3.20* 8.60± 0.50* 10,2± 2,30* 9,40± 1.30*

Cl8:I 42,60± 1,80 40,7+ 2,80 38,40± 6,40 43,70± 2,20 39,3± 6,60 36,20± 1,10 34,4± 5.90 32,9± 7.40

Cl8:2 24,90± 1.90 18,6± 1,70 8,80± 1,00* 7,40± 1,50* 3,50± 3,20* 2,10+ 0,40* 1,70± 0,11* 1,80+ 0,70*

Примечание: ВЖК - высшие жирные кислоты, * - р<0,05 в сравнении со свежей тканью.

3. Содержание фосфолипидов в жировоске демонстрируется в таблице 3. На первый взгляд может показаться, что представленные в таблице данные свидетельствуют о том, что при образовании жировоска происходит постепенное увеличение фосфолипидной фракции (заметное на всем протяжении эксперимента и особенно выраженное в естественном жировоске). Естественно, эти данные вступают в противоречие с ранее описанными результатами количественного хроматографического разделения липидных фракций жировоска (таблица 1). По нашему мнению, это кажущееся противоречие является лишь следствием конкретных особенностей использованных нами методик: если при хроматографическом разделении ли-

пидных фракций мы измеряли содержание тех или иных представителей класса липидов в процентном их отношении по массе, то в случае количественного определения ФЛ измерялось относительное содержание фосфора. При разрушении фосфолипндов вследствие перекисных процессов относительное содержание фосфора в абсолютных цифрах не изменится, а на фоне снижения концентрации жирных кислот (и липидов, в состав которых они входят) может возрасти, кроме этого, лизофосфатиды имеют меньшую молекулярную массу чем фосфолипиды, поэтому в 1гр. липидов содержится больше молекул лизо-фосфолипидов, чем фосфолипндов.

Свежая жировая ткань Жировоск

Экспериментальный Естественный

3 мес. 4 мес. 6 мес. 1-2 года

ФЛ, мг/г липидов 148,70± 7.80 282,58± 9,00* 307,50+ 8,80* 341,78+ 20,17* 372,40+ 53,50* 456,80± 51,00*

Примечание: ФЛ - фосфолипиды, * - р<0,05 в сравнении со свежей тканью.

Таким образом, на данном этапе исследований мы продемонстрировали концентрацию фосфора в ходе образования жировоска, что может являться подтверждением элиминации органических соединений из тканей.

4. Развитие перскисного окисления липидов изучали путем определения содержания диеновых конъюгатов, малонового он альдегида и ишффо-вых оснований (ШО). Результаты исследований приведены в таблице 4, 5, 6.

Изучение содержания первичных продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов) в тканях трупа человека в состоянии жировоска (таблица 4) позволило обнаружить достоверное их накопление, при этом в динамике эксперимента содержание диеновых конъюгатов наростало в зависимости от длительности хранения.

Перекиси липидов являются сравнительно неустойчивыми веществами, легко подвергающимися распаду, поэтому результаты количественного анализа

гидроперекисей отражают лишь стационарные концентрации этих продуктов I липидных системах. Более устойчивыми являются вторичные продукты ПОЛ Малоновый диальдегид является одним из таких соединений. Полученньк результаты измерения содержания МДА приведены в таблице 5.

Таблица 4 - Содержание диеновых конъюгатов в свежей подкожно-жировой

клетчатке и жировоске.

Свежая Жировоск

жир. Экспериментальный Естест-

Ткань 1 нед. 1 мес. 3 мес. 6 мес. 1 год 3 года венный.

ДК 66,27± 7,00 100,46+ 4,39* 101,93+ 14,18* 123,05± 13,24* 137,38± 3,63* 158,53+ 9,37* 184,97+ 28,36* 193,36± 27,27*

Примечание: ДК - диеновые конъюгаты, относительных единиц /г общих ли-пидов; * - р<0,05 в сравнении со свежей тканью.

Таблица 5 - Содержание малонового диальдегида в свежей подкожно-

жировой клетчатке и жировоске.

Свежая жировая ткань Жировоск

Экспериментальный Естественный.

1 нед. 1 мес. 3 мес. 6 мес. 1 год 3 года

МДА 19,84+ 3,74 12,03± 0,97* 8,01+ 1,71* 3,57+ 1,20* 1,90± 0,10* 1,40± 0,19* 0,64+ 0,58* 0,87± 0,73*

Примечание: МДА - малоновый диальдегид, относительных единиц /г общих липидов; * - р<0,05 в сравнении со свежей тканью.

Уменьшение содержания МДА в процессе развития экспериментального жировоска очевидно связано с усилением его превращения и может свидетельствовать о полном переходе МДА в шиффовы основания.

При определении конечных продуктов ПОЛ (шиффовых оснований видно, что на протяжении всего времени образования экспериментальной жировоска отмечается достоверное их повышение. Полученные результата измерения содержания шиффовых оснований приведены в таблице 6.

Таблица 6 - Содержание шиффовых оснований в свежей подкожно-жировой

клетчатке и в жировоске.

Свеж. Жир. Ткань Жировоск

Экспериментальный Естественный

3 дня 10 дней 20 дней 30 дней 45 дней 60 дней 6 месяцев 1 год 3 года

104,54 + ¡0,11 161,32 + 16,2* 222,68 + 32,85* 207,16 ± 21,94* 348,85 + 48,14* 740,91 ± 63,73* 861,99 + 62,55* 1252,44 + 43,71* 1622,20 + 96,4* 5463,05 + 1938,62* 7225,53 ± 1312,37*

Примечание: ШО - шиффовы основания, % по отношению к стандарту на 1 г липида. * - р<0,05 в сравнении со свежей тканью.

Указанные изменения продуктов ПОЛ являются прямым доказательством участия процессов свободнорадикального окисления липидов в образовании жировоска.

5. Содержание белка в жировоске. Полученные нами в ходе этих исследований результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Содержание белка в подкожно-жировой клетчатке и жировоске

Свежая жир. Ткань Жировоск

Экспериментальный Естестве нный

3 дня 10 дней 20 дней 30 дней 45 дней 3 мес. 1 год года

Белок, мг/г ОЛ 30,45 ± 0,65 26.89 ± 0,68 21,36 ± 1,03* 19,96 ± 0.45* 17,69 ± 1.24* 18,00 ± 0,37 9.13 + 1,85* 7,33 + 2.75* 3,70 ± 2,78* 2,49 ± 2,31*

Примечание: ОЛ - общие липиды, * - р<0,05 в сравнении со свежей тканью.

Как следует из представленных в таблице данных, при образовании жировоска происходит относительное снижение содержания в ткани свободного белка. Представляется возможным предполагать, что уменьшение содержания растворимого белка очевидно обусловлено усилением автолитических процессов, а также возможно связано с образованием комплексов белка с продуктами ПОЛ. Эти данные могут являться косвенным свидетельством участия

процессов перекисного окисления липидов в образовании жировоска, как в естественных условиях, так и в условиях эксперимента.

6. Результаты биохимического исследования атером.

Изучая жировоск на кафедре патологической анатомии РГМУ, мы обратили внимание, что атеромы по своим морфологическим и физико-химическим свойствам схожи с изучаемыми нами тканями.

Таблица 8 - Отдельные показатели химического состава атером

Фосфолипиды* 479,6б±11,37

Диеновые конъюгаты**** 163,72±28,99

Малоновый диальдегид**** 1.10±0,82

Шиффовы основания** 4066,101712,50

Белок*** 3,20±0,82

Липидный спектр (%)

Общие липиды 82,20±2,00

Фосфолипиды 0,63+0,43

Моноацилглицериды 0,99+0,08

Диацилглицериды 0,99±0,08

Триацилглицериды 29,70±0,50

Холестерин 1,70+0,06

Эфиры холестерина 20.70±0.36

Высшие жирные кислоты 11,40+0,18

Эфиры высших жирных кислот 15,9010,18

Примечание: * - мг/г общих липидов; ** - % по отношению к стандарту на 1 мг липида; *** - мг/г общих липидов; **** - относительных единиц /г общих липидов.

Для изучения химического состава атером были определены: липид-ный спектр; содержание фосфолипидов (по фосфору); содержание диеновых конъюгатов, малонового диальдегида, шиффовых оснований, белка. Полученные результаты отражены в таблице 8.

Как следует из представленных в таблице данных, практически все показатели химического состава атером соответствуют показателям естест-

венного и экспериментально полученного жировоска сроком около 3 лет. \

Учитывая, что в образовании атером перекисные процессы играют ведущую роль (В.0.ЛаиХин, 1985) можно полагать, что соответствие физико-химических показателей жировоска и атером, свидетельствует о верности предположения о значении свободнорадикальных процессов в образовании жировоска.

ВЫВОДЫ:

1) Характерные признаки жировоска, выявляемые с помощью визуального, стереомикроскопического, физического и химического исследований (беловато - желтоватый цвет, бугристая суховатая поверхность, запах старого сала, плотные ткани растираются между пальцами, на бумаге оставляют жирные гаи жироподобные следы, плавятся в огне, плавают в воде, растворяются в 96° этиловом спирте, хлороформе и диэтиловом эфире) имеют диагностическое значение лишь в комплексе, при четкой выраженности совокупных признаков.

2) Гистологическое исследование жировоска может дать информацию об органной принадлежности ткани и характере повреждений (за счет сохранения соединительно-тканной строммы), но для доказательства превращения тканей в жировоск использоваться не может.

3) Полученный в эксперименте жировоск по совокупным признакам (морфологическим, физико-химическим и биохимическим) идентичен естественному жировоску.4) Наиболее объективными показателями превращения тканей в жировоск является совокупность результатов биохимических исследований: увеличение содержания шиффовых оснований, пальмитиновой, стеариновой и миристиновой жирных кислот; снижение содержания всех липидных фракций, олеиновой и линолевой жирных кислот.

5) Одним из ведущих механизмов перехода трупных тканей в жировоск является свободнорадикальное окисление липидов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1- Доказать наличие жировоска молено при четкой выраженности всех основных ниже перечисленных признаков: визуальных (беловато - желтоватый цвет, бугристая суховатая поверхность, запах старого сала), физических (плотные ткани растираются между' пальцами, на бумаге оставляют жирные или жироподобные следы, плавятся в огне, плавают в воде), химических (растворяются в 96° этиловом спирте, хлороформе и диэтиловом эфире).

2- Чаще всего судебно-медицинские эксперты при работе с трупами в состоянии жировоска не наблюдают четкой выраженности всех выше перечисленных признаков, в этом случае необходимо применять биохимические методы исследования для доказательства жировоска (определять содержание шиффовых оснований, липидный и жирнокислотный спектр).

3- Гистологическое исследование тканей в состоянии жировоска выявляет признаки прижизненного нанесения повреждений, органной структуры тканей. Для доказательства жировоска оно использоваться не может.

4- Наши результаты показали, что биохимические показатели экспериментального жировоска давностью образования 1 год совпадают с естественным жировоском с этой же давностью. Вот почему мы полагаем, что^ используя наши сведения, можно предположительно решать вопрос о давности образования жировоска. Проведенные нами исследования биохимического состава жировоска в разные сроки его образования позволяют ориентировочно судить о давности образования жировоска, что помогает решать вопрос о давности пребывания трупа в конкретных условиях.

Согласно нашим результатам, полученным в условиях эксперимента, можно условно выделить 4 срока образования жировоска: 3-4 месяца, б месяцев, 1 год, 2-3 года. Биохимические показатели экспериментального жировоска в эти сроки представлены в таблице 9.

Таблица 9 - Давность образования экспериментального жировоска.

Срок образования жировоска

Показатель 3-4 месяца 6 месяцев 1 год 2-3 года

Жирные кислоты

Миристиновая 2.6+0,5 3,0+0,1 3,5+0,1 4,5±1.2

Пальмитиновая 34,6±5,9 42,6+1,2 44.9±0.9 46,75±6,65

Стеариновая 6,6±3,1 7,6±0,2 8.610,5 10,2±2,3

Олеиновая 43,7+2,2 39,3±6,6 36,2±1,1 32,9±7,4

Линолевая 7,4±1,5 3,5±0,2 2,1+0,4 1,8±0,7

Шиффовы основания

% по отношению к стандарту на 1 г лшщца 900± 62 1252,44± 43,71 1622,20± 96,41 6031,16± 2506,74

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Некоторые данные исследования тканей трупа человека в состоянии жировоска.// Программа и аннотации докладов дня науки студентов, молодых ученых и специалистов РОДНМИ (49 итоговая научная конференция). -Ростов-на-Дону.- 1995.-С. 142.

2. Показатели изучения жировоска методом газожидкостной хроматографии // Программа и аннотации докладов дня науки студентов, молодых у ченых и специалистов РОДНМИ (50 итоговая научная конференция). - Ростов-на-Дону.-1996.-С. 128.

3. Биохимические исследования липидов тканей трупа человека в состоянии жировоска (И.М.Ставиский) -. // Судебно-медицинская экспертиза, - N1. -М.:Медицина. 1996.-С. 14-15.

4. Значение визу ального и стереомикроскопического исследования жировоска (В.И.Акопов) -. // Вопросы судебной медицины и экспертной практики (Сборник научных трудов). - Чита, 1996. - С. 24 - 28.

5. Об ошибке в теории образования жировоска // Тезисы докладов 1 научной сессии РГМУ. - Ростов-на-Дону, 1996. - С. 43.

6. Состав шиффовых оснований в трупной ткани человека // Программа и

га-

аннотации докладов дня науки студентов, молодых ученых и специалистов 4 РГМУ (51 итоговая научная конференция). - Ростов-на-Дону, 1997. - С. 178.

7. Возможности идентификации тканей трупа человека в состоянии жировоска. (В.И.Акопов) -. // Современные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Выпуск IX. - Ижевск: Экспертиза, 1997. - С. 62 - 64.

8. Доказательство наличия жировоска в трупе. (В.И.Акопов) -. // Судебно-медицинская экспертиза, N 2. - М.: Медицина, 1997. - С. 16.

9. Продукты перекисного окисления липидов в процессе образования жировоска. // Программа и аннотации докладов дня науки студентов, молодых ученых и специалистов РГМУ (52 итоговая научная конференция). - Ростов-на-Дону, 1998.-С. 113.

10. Гистологическое изучение тканей трупа человека в состоянии жировоска. (Л.М.Семашкевич) -. // Тезисы докладов 2 научной сессии РГМУ. - Ростов-на-Дону, 1998. - С.37-38.

11. Сравнительная оценка результатов биохимического исследования атером и тканей трупа человека в состоянии жировоска. (В.И.Акопов) -. // Тезисы докладов 2 научной сессии РГМУ. - Ростов-на-Дону, 1998. - С. 37.