Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

БИОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ РОДА ASCHERSONIA И PAECILOMYCES FUMOSO-ROSEUS В СВЯЗИ С БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТОЙ РАСТЕНИЙ ОТ СОСУЩИХ ВРЕДИТЕЛЕЙ (HOMOPTERA: ALEYROD1DAE, APHIDIDAE)

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "БИОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ РОДА ASCHERSONIA И PAECILOMYCES FUMOSO-ROSEUS В СВЯЗИ С БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТОЙ РАСТЕНИЙ ОТ СОСУЩИХ ВРЕДИТЕЛЕЙ (HOMOPTERA: ALEYROD1DAE, APHIDIDAE)"

/1-Х363І

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ и меня к. А. ТИМИРЯЗЕВА

На правах рукописи

СОСНОВСКА ДАНУТА

УДК 632.7 : «32.937.01

БИОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ РОДА А5СНЕК501М1А И РАЕС1ЬОМУСЕ8 гиМОЗО-РОЗЕив В СВЯЗИ С БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТОЙ РАСТЕНИЙ ОТ СОСУЩИХ ВРЕДИТЕЛЕЙ (НОМОРТЕРА: АЬЕУРООЮАЕ, АРНШШАЕ)

Специальность 06.01.11 — защита растений от вредителей и болезней

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 1990

Работа выполнена на кафедре энтомологии Московской ордена Ленина, л ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственной академии нм. К. А. Тимирязева.

Научный руководитель — кандидат биологических наук, доцент В. М. Соломатин.

Официальные оплоненты: доктор биологических . «аук С, С. Ижевский, кандидат сельскохозяйственных наук В. Ф. Плотников.

Ведущее предприятие — Университет Дружбы народов им. П. Лумумбы.

Защита диссертации состоится « ¿¿¿^¿¿Л-. . . .

1990 г. в « /¿/ъ час. «мин. на заседании специализированного совета К-120,35.03 в Московской сельскохозяйственной академии нм. К. А. Тимирязева.

Адрес; 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 47, Ученый совет ТСХА.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ ТСХА.

Автореферат разослан

«/Л* . • . 1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета —

доцент __ _ _

Н. К. Торянская

• ОКцлл ХпЯАКТЬНЮТИл РАБОТЫ ' Актуальность пгоблемы. ,Одна из задач, стоящая перед тружениками сельского хозяйства - повышение урожайности овощных КуЛЬТур. Б последние годы в связи с увеличением ппоцадел зь^^енного грунта s спецкали эированных овощеводческих хсэяиотзах вокруг промышленных городов и интенсификацией тепличного производства, резко возросла вредоносность тепличной белокрылки / Trialeurodes vapora-riorum / и различных видов тлей, особенно бахчевой /Aphis gosay-pii /. Поэтому очень важна хорошо организованная интегрированная защита растение от вредителей и болезней, позволяющая сократить объем применяемых химических препаратов, которые отрицательно^вли-яют на фитосгнитарное состояние. '

Значительное уменьшение степени загрязнения возможно при использовании биологических средств. Большие потенциальные возможности имеет микробиологическое направление в защите растений, в частности, использование гнтомопатогенных грибов. К настоящему времени-выявлено более 750 видов этих грибов. /Павлкшш, 1568/. Применение нашпи лишь 12 видов и лишь ó из них зарегистрированы как коммерческие препараты.•Следует отметить крайне ограниченный ассортимент микробиопрепаратов. .

В закрытом грунте больной практический интерес представляют грибы рода Asch er« oala , как, узкоспецифичные патогены личинок различных ВИДОВ белокрылOK / , Aleyxodinea /. Б регуляции численности . бахчевой тли хорошие результаты показал гриб Раесllomycea fumoso-гоэsua который также зарекомендовал себя достаточно элективным средством ограничения численности ХМелеЕОЛ тли в открытом грунте.

Патология насекомых, .вызываемая грибными заболеваниями, довольна подробно освещена в. научных работах,.однако большинство из них- ■ В отношении грибов родаАвсЬегаоп1а * и Paecilcmycea.-- касаются вопросов вирулентности, их'специфичности, , особенностей г.р;^ленетая и зна-

- £ -

читедьно менее изучены их пищевые потребности, хотя это ваяно на начальник отапах разработки технологии получения микробиологических препаратов. ' ' • ■ ■ 1!ыетю этим вопросам было посвяцено наае исследование.

Цель и палачи исследований. Целью исследований являлось изучение био£изиологических особенностей грибов рода;Ло<5Ьвгаоп1а и гриба Рае с Ноту о ея гшчово-говеия > а также возможностей практического применения аиерсонии в регуляции численности тепличной бело-кршки, а Р.Гилооо-гоеейа - бахчевой и хмелевой тлей. . .

' В работе изучались следующие вопросы: ;

- особенности углеводного и азотного питания грибов рода АвсЬогво-п!»и: Р.Гитоэо-гоавив ¡^тамм 83-5, -

- влияние углеводного и азотного питание ра жизнеспособность спор . ■ асерсонии Кубинской оранжевой втаим "Т", 1 • 1

- подбор дегевол питательной среды для культивирования грибов,

. - определение вирулентности штамма'иТп на тепличной белокрыяке в лабораторных условиях, * . *

- изучение возможностей применения штамма 83-5 в борьбе с бахчевой тлей, в закритом грунте, ■ ^

- испытание в полевых условиях биопрепарата- на основе р.Гшвоао- '' гоаеиа штамм 63-5 с разными добавками против-хмелевое тли на хме- -легих плантациях. ■ ' /

Научная новизна тзайоты; На основании изучения биофизиологических особенностей грибов рода АеоЬегяоп!» и Р.Гивоао-гоа еие впер- '* вые установлены их количественные и качественные потребности в источниках углерода и азота.

Для азиатских {оры гриба аьерсония получено, уравнение .'регрессии, на основании которого когно для*определенных' концентрации гякяозы 1 прогнозировать возыокньц уровень спороосразования. . . ■ ■ . '*' *

Предложена дешевая среди вместо тради:жонно'испольауемого пивного

сусла. Сна содержит 10« фруктового порошка / высуженная к измельченная вцккмка, полученная при производстве яблочного сока/ / Еоз-несенскэд, :.!ироненко, IS&2; Побокад, 15Б2/, I,5-i,5ri соевоп муки, 0,Ьл гидролизата'хлопкового ¡срэта. и по качеству не уступает кс-пользуеуо:: на практике среде. -

Изолированы два новых атамма: термостойкий а^ерсснни Кубгаскод оранзсевол /£тамм "Т"/ и ï? 63-5 гриба Р. rwnos o-roseus . Показана возможность использования их в закрытом грунте в снижении численности тепличное белокрыяки и бахчевой таи.

Впервые показана возможность применения ï.fumoso-roeeus стамм . £3-5 в регуляции численности хмелевол тли на плантациях хмеля на Украине. , * -

Практическая значимость работы заключается в том, что прослежена закономерность развития грибов в зависимости от разного коли- . чества углеводов и органических источников азота в среде, что важно для прогнозирования уровня спороношения в зависимости от определенного количества компонентов среды. '

Подобранные новые питательные среды состоят из доступных для производства и дешевых компонентов, что имеет существенное значение на начальных этапах разработки.технологии получения и практического использования биопрепарата* • . ;

Полученные атаммы энтонопатогенных грибов можно рекомендовать для тарокого использования в интегрированной защите растения в.теплицах» a атаым £3-5 гриба ?,fuœoso-roeeue гажке и в производственных условиях для защиты .эвделя от хмелевой тли,

АгггюПаг.ия -работы. ¡Материалы исследование были доложены в 19£9 г, на июньское и декабрскоа конференциях молодых учёных в Московской сельскохозяйственно1* академии.. им;К. А. Тимирязева;1

Стпукту&а и объём работы. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного.текста,^ состоит из »ведения, обзора литер-лтуры,

материалез и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и рекомендацил производству, списка литературы содержащего 212 наименования, в том числе 43 иностранных авторов. Работа ¡илвстрирована 7 рисунками, 8 фотографиями и 35 таЕ лигами* /б таблиц в приложении/,

• COlüKF-iAKHE РАБОТЫ ' • %

Введение. Обращено внимание на сокросекке применения ядохимикатов в оаднте раотенк4 от вредителе.* и болезней в связи с охраной OKpy:*aicu;e:t среды и показана перспективность микробиологических . средств зй™;:ты, a именно гнтсиопатогеюшх грибов.

Глора Т. Обзор литература.

Б стоя главе приводятся сведения о значении энтомопатогенных . грибов в ограничении численности вредных'насекомых. Особое внима- -ние'уделено систематике, морфологии, симптомах поражения, условиямИ методам К1'ЛЬТИВИрОВОНИЯ, особенностям применения и эффективности грибов рода Aschereonia и РаовИошуавв fumoao-roaeue Приведены данные-с влиянии питательных сред на рост и спорообразование энто^ «опатогеннах грибов* Рассмотрены. Оиоэкология иыетоды борьбы в СССР иэа рубежом с тепличной белокраакоя"бахчевой и хмелевой тлями.,

Глава 2. Материал и метода1 ^исследование. . .' •

/ -

Работа проводилась в* IS67-I-&S0 гг. на кафедре энтомологии. ,, TOCA и ка базе Лаборатории микробиологических средств защиты рас-. *' тения ЫИЙ Еиотехнологии в Москве. " \

. Объектом исследовании, явились граба рода Aecharaonis ; Вьетнамская красная / A.placenta f.vletn&miea В. and Bp/ . '/, У.ндий-.' • екая кремовая / A.tamurai р.Непп.1 /. ^ораа Нубкнская' оранже-' , вая /A.aleyrodie Petoh. / и стамм термостойкий , "Т", полученный нами в лабораторных- условиях, а также íaeoilomyoes fumoao-roeeu« , штамм £3-5, полученный способом монононидиального рассева." ' ■ ■Б работе изучались сл^душие-углеводы;"глшоэа, Фруктоза,'; лак-

тоза, мальтоза, сахароза^ глицерин, крахмалы - кукурузная и картофельный. Проверено влияние разных концентрации глвкозц: 20, 40, £0, Є0, ICO и IZO г/л /2, 4, 6, 6, 10 и 12??/ на рост и спорообразование азиатских çopM аш ереонил,

' і'з органических источников азота исследовали соевую, рубнув муку, костный клей и различные их комбинации, рК среды доводили до 5,8-G. Питательные среды стерилизовали в'* автоклаве при реяи«е 0,8 атм. 40 мин., после чего их разливали в стеклянные чаиш Петри диаметром S см. Посев грибов на твердую среду проводился способом точечного нанесения спорового материала снятого тонкой стерильной иглой с пикния и мицелия. Часки Петри с аі;ерсоние:> помечали в тер-' мальную комнату при температур« 25°С и люминесцентном освещении. Повторность опытов 5-кратная. Площадь колоний ааерсонии определялась косвенно - методом взвешивания. Площадь колония Р.Гшцозо-Г Os виз определяли, измеряя их диаметр. Количество спор определяли в камере Горлева,

Анализ жизнеспособности спор проводили на жидкое питательной среде, содержащей : 85Í глюкозы, в которую переносили небольшое количество спорового материала. Каплю отса среды помекали в камеру Го-ряева, ставили во влажную камеру и через 24 часа определяли о помощь» микроскопа количество пророешх спор.

ІНтамм "Т" алерсонии' К.оранжевой выращивали на щдкоч питательной среде, на электрокачалке. После 5 днеа полученные глубинны! ино-кулят гриба вносили с разным,разбавлением 'водоя в жидкую среду состава: IOîi фруктова? порошок, 4,5л соевая ыука, 0,55£ гидролизат хлопкового шрота /хлопковый гидролизат/ и разливали в чашки Петри.

, Оценка смертности личинок теплично* белокрылки от применения ашерсонии К. оранжевой цтамм "Т" проверялась в лабораторных условиях. Листья огурца опрыскивали суспензией биопрепарата; содер»аи;е* 5 х І07 спор в І. ші. Споры снимались с пивного сусла и со среды;

- б -

содеркида Юл фруктового пороска, 1,5,'і соевой, муки к 0,5:і,гвдро- , лизата хлопкозого крота. Повторность 7-кратнед.

Вирулентность ¡атакма 83-5 гриба р.Гияоао-говвиа проверялась в лаборйторак условиях. Титром спор 5 х 10 и 10 в І мк суспен- • зик инфицировали гуеенігц 5-6 возраста вощсшо^ моли / Саііегіа

оеііспеїіа І методе« погружения. З контроле погружали гусениц з стерильную ЕОДу, _

Проверялось влияние двух сред; пивного сусла /ІСїі сахара/ и 10* (Їрукїоеого пороска, соевой і^ки, гидролиэата хлопко-

вого крота на вирулентность Р.Гшвово-говеия ■ стами ЄЗ-5 на гусеницах 5-6 возраста озимой совки І Легоііа вейв-Ьит'Л Применяли две концентрации спор:; 4 х І07 и 16 х.їо' в і ил суспензии.

Биологическая г^сктизность Р.Гивюво-гоавие иламм ЄЗ-5 на бахчевой тле определялась в теплицах колхоза им. С.Ц.Кирова Московской области в ГйбЭ г. Растения обрабатывал и опрыскивателей 03Г-4С0 суспензией спор 5 х 10 в I ил. Учётпроводился-через 7 днея на : 25 растениях. В качестве добавки приценялся тритон Х-114.

Полевые испытания гламыа 33-5,гриба 'Р.Гитово-говв'ив' против- . .хмелевой тли проводили в 1558-1539 гг; на сортоиспытательной хив- ■■ леплантации и на сиолоке хмеля с/ молодыми, растениями в Житомире на-' Украине. Растений обрабатывались с■ помощью' ручного опрыскивателя. : Учёт проводился■ через 3 к,7 суток о помощьюхалетяк о.квадратным' отверстием площадь» І сх^. Б качестве добавок в' 1983 г.. применяли^ ' імпортний '»цульгатор - тритон-Х-ІІ4 в■ концентрации 0,С5<!,' глицерин.-' - І'Л'и молочный.обрат - р 1569 г;-в качестве добавок применяли , опктнш образец, полученный из Ш2ЇІАВ,- в концентрации 0,С5й и кар-бокекметидцелпадозу ) / - 0,15*. Эталоном служил применяет« -' в Житомирской области бактериальный.препарат БТБ-202. растений без обработки являлись контролем. Повторность опатов. 10-кратная. - ■ Статистическая обработка результатов прсьодал^сь по.стад'пртЧ

itam методикам / Лакин, IS60 /.

Р£ЗУлЬТ.Ш ЙСЗЯЕСВДВС. Глава 3.1. Изучение Сио^изиологических особенностей грибов рода Aecbersoaia I.I. Влияние углеводного питания на рост кслсний и спорообразование Нами проверялись несколько различных углеводов. Результаты исследований показали, что азиатские ¿ормы агерсонии наиболее интенсивно спороносят на глюкозе-/табл.1/. Форма В.красная дает на этом компоненте выход спор на IG0 сь? - 17,2 х 10®, И.кремовая - ■ S0,С х I09. Неплохой титр спор получен на среде с глицерином: 13,3 х 10^/ICO см2 и-13,5 X 109/100 см2 соответственно. Нмгчень- . иий выход спор подучен на лактозе. - Это объясняется теу, что грибы слабо её ассимилируют, так как входящая в её состав галактоза плохо усваивается. По раздору наибольшая шгсязддь получена на глюкоое и мальтозе для ^ормы В,красной - 2,8 см** и на мальтозе для £ормы И.кремовоа - 2,6 сн^.

Надо отметить, что в некоторых случаях отсутствует коррелятивная зависимость мезду вегетативным роотоы и спорообразованием. Например, на глицерине наблюдается наименьшая площадь колоний у обеих фор», а спорообразование в этом случае сдно из больших /табя.1/.

Для обоснованного подбора питательных сред необходимо определение оптимальных концентраций, обеспечивающих массовое спорообразование гриба. Тая как наиболее благоприятным источником углеводного питания для азиатских форм асерсонии лвляетоя 4S гДОЗДза, било изучено влияние на рост и спорообразование других лоннеитраний. Наиболее высокий титр спор на 100 см^ получен при:&i концентрации для ^ормн Е.красноя - 9,3 X icfi и при концентрации для topvu И.кремовой - 10^» Увеличение концентрации глюкозы Егсе й% Еыэиггет

уменьшение с по рооброэ о£ анияКо ^томеру колота наблюдается обратная связь - уменьшение пяоадда С увеличением кониектредта. Экспериментальные данные хорого алпронскмкруются уравнением параболы; -ля 1орш Б.красное у- -3,-34 + С.ЗЭх - О.-СОМх2,' а для фэрыы И.кре-ново:1. у= -25,61 + 1,89х--0,0134х2.- Начисленные кривые покаэьтаят,' что спорообразование увеличивается до концентрации глюкозы 6-Вй, а потом уменьшается. £ти криэие кмеот практическое значение при прогнозировании возможного уровня спорообразов^ния для определенных концентраций глюкозы /в пределах от до

Таблица I

Влияние углеводного питания на рост колоний и спорообразование у грибов рода ji.ee Ьб^иоп^к - Азиатские $ормы /18 сутни/ ; '

: цр.распер"колонииі

Еарианты г/л

•В.К.

Ор.* выход спо£ - цлрдЛОО см^

З.К.-

И.К;

Глюкоза

Мальтоза

Лактоза

Сахароза

Глицерин

40 2,3*0,10

38 2,8*0,05

.40 2,3*0,08 38

2,5*0;07 2,6*0(22

1,8*0,07 ' 2,6*0,08. ' 2,-4І0;їб '

17/2*0*31 .20*6*0^78 5^0*0^09.'.'. 2*7*0,24 2і2*0)00/ 1(1-0)01 6(і±0їі5,

41 1,6*0,19 1,2*0,18 , 13/3*0*26. І3#5*0,80

ирщіечакие; е,л. - форма вьетнамская красна^ и.-і£Г - <еош£1-~ 1 ' Иццийсхая кремовая , • ,

;,С азиатскими формами эдерсокии сравнивали игами- Т" адерсонии Н;оранжевой. Этот итаыи был отселектирован нами в лабораторных условиях при температуре 32°с< которая является критической для гриба; Нам удалось получить колонию* которая сохранила хороший рост и спорообразование при температуре 32°Сі йаяасту» температура в теплицах повидается ■ вше 32°С; 5то одероівает лр:шененне аигероонии * так ках гриб В этих условиях становится неэффективным* Поэтому пол')

ченныЛ нами crasoi "Т" имеет практическое значение.

По углеводному питани» для шта-^а "Т" наблюдалась другая .картина, чем у азиатских íopy. Наиболее высокий титр спор на ICO см2 получен ка мальтозе - 17,3 х 1С?, глюкозе - 12,£ х 1С® и са-

я

харозе -Их 10 , сти результаты статистически не различаются / Р? О,Со /. Следует ответить, что найме Hbnntí титр спор набл&цал- • ся на лактозе, как и у азиатских ¿орк. Ко размеру нанСольпик;! бкли колонии на сахарозе - 2,5 см^.

1.2. Влияние источников азота на рост и спорообразование Азотное питание грибов по своему значению не уступает углег водному. Па проверенных нам;: разлкчгагх органических источников

л

азота, наиболее интенсивное спорообразование на 100 cií** у формы К, оранжевой гстамн *ПТ" наблюдалось на 4,5л /45 г/л/ соевой муке -11,2 х 10^, Гриб также хорошо растёт на смешанных источниках азота: на рыбной муке и 1% корковых дроягках титр спор составил 7 х I09 /ICO см2, на I?; рыбнод муке .и IX coesoí муке - 10,6 х Ю9Л00 ем^, а на соевой цуяе и ^0,75^ кормовых дрожжах - II х Ю9/1С0 см2.

Проверялось также влияние минеральных источников азота. Азер-сония на них растёт .слабо и не дает споро»осенил. .

Быстрорастущая потребность в биопрепаратах, предназначенных для борьбы с .вредителями сельскохозяйственных культур, требует под-

дедевых питательных сред для массового культивирования пато-дона. ^эульт^ьг.исследовакий показали, что глюкоза обеспечивает (Наилучлую .onopw/iRitHa аперсонии, Однако является дорогостоящим про-„■ДУКтоц, :Лркме}1ш)ив .которого в производстве повышает себестоимость (Препарата..Б свд£}и .с. этим представлялось необходимым подобрать еа ¡перспективную для промышленного использования замену, удовлетворя-:щую физиологическим потребностям культуры и обеспечивающую высокий титр спор в препарате.

При подборе состава среды в качестве источника углеводного пи-

тения Ci¿" исследован ípyrromtí порохок, в которой глюкоза составляет а в качестве источника азота была проверена соевая цука, как детевая .? оруа органического азота, богатая белке«. Подыгранная нам;:.Среда состава: IC)S /100 г/л/ фруктом:? порошок, . I.5K / ТО г/л/ соевая мука, /5 кл/л/ гидролкзат хлопкового сро-та, сравнивалась с рекоыендовишо>1 средо.1 для'культивирования а^ерсонии - пивные суслом, содержалам ±0'А сахара.

Наибольшее спорообразование на 100 см" получено на пивном сусле - £0,3 х /габл.2/. На предложенной среде синод спор бич получен на 1,6 х I09 меньке, но статистически.оти результаты оказались не существенны /?> 0,СЬ/, Кроме того, оказалось, что хлоп- ■ ковш. гидролизат стииулирует спорообразование* Оно больше более

чем в два раза по сравнению со средой, в которой это? компонент'

■ * '

отсутствует' /табл.2/.- Елияние хлопкового гидролязата на увеличение . спороиосения показывает опыт с другими формами ашерсонии. У форма., В.краснок он увеличивает спороиошение в 3,6 раза, а у $ормы К.орш* жевой в два раза; - ^

i j ■ ■ ; Таблица 2. *

Показатели развития асерсснииукубинскоаорамжевой штамм "Т" на гглвном сусле' и средах о фрукт овод порошком

/П'суми/^ "- ^ - - : •'

.Варианта г/л 1 Ср.раамвр -| - колонии« I-. -см®'. - ' ' j Ср. ваход спор,■ \ '•!:., ' ЛШрД/IOO CM^ ■■"

Ф.П.ЮО+С.МЛб ' 0,4*0,06 7,8*0,68 а '

С;П.100+С.ХЛв+Х.Г.6 V ' • 0,6*0,01< '. '' 'lB,7±l|si б ; •:

п.с.' ,. ..■• ■ . . 0,6*0,01 ' /л/ 20,3-1,81 б , .

Примечание! > фруктовый, йорошок: СЛ. соевая мука, Х.Г.'-*-. \ хлопковый гидролизат, П.С. - пивное сусло ■ .,

Проверялось такте влияние других концентраций <*,рук?орого пороша на с поро образован;:® йорглг К.ераіненой Етгк,: "Г". Результати опкта показывают, 'что концентрація фруктового порошка от 4л до 13?-не оказывает существенного влияния на спорообразосение.

слияние углеводного н азотного питания на грізне способность спор

При оценке биопрепарата, крско споро образования и вирулентно--сти,. оценивается киэнеспособность спор. Споры а^ерсонии К.оранжевой ггтаїм "Г", полученные с разных углеводов, хранились в холодильнике. Через месяц хранения проверялась их яизнеспособность. Сказалось, что спору с кальтозк проросли только на 2$54, тогда как с глюкозы проросло 6W спор. Продуктивность спорообразования с поправкой на жизнеспособность составляет на глюкозе 8,7 х 10® спор/1СО сц*^ и статистически отличается от всох остальных результатов, полученных на других углеводах. Стог результат показывает; что при выборе-'источника углеводного питания для хранения спор <£оркы К,оранжевой следует;предпочитать глвкозу» При выборе концентрации фруктового пороюка следует'лредпочит&ть концентрации наименьшую' - 4fi, при которой'споры лучше сохраняют-свою жизнеспособность«

■ * 1.4. .Изучение глубинно-поверхностного выр&чявания гриба Результаты опыта показывают, что ¡стаым "Ти аігерсонии Кубинской оранжееоК'дает наибольший выход спор на жидкой питательной среде, состояшея из 104 фруктового порошка, 4,5Я соевой муки и 0,5л ги--дролизата хлопкового грота при внесении в среду 20 «л кнокулята -без; разбавления'водой.' Причем наибольшее спорообразование набіл»- ,' дается при количестве среды - 20 мл на чашку Петре. При 10 мл сре- ■ дн-на-чашку спорообразование;.в 3,о раз ігеньое»

1.5.:. Оценка вирулентно сти-' АэоЬ»гао»1& aleyrodl«, штамм "Г" ' ' ■ V'- -■ ,, Против' тепличной белокрклки 'i.TftpOreriOrum / на огур-"'..цахв- лаборатории-условиях -- . . .,'■

Б лабораторных условиях проверяли вирулентность полученного шта'-ма "Г" (Горж К.оранжевой. Суспензией спор /в концентрации 5 х 10^ в І мл/ обрабатывали с помощью ручного опрыскивателя листья огурца, что на 10 сутки визвало fc8,0;¡ гио'ель личинок тепличной бег локршнв /табл.3/. результаты опьгга показывают, что питательные среды не ЛЛКЯ2Т на вирулентность спор. Вирулентность спор, получениях со среду, содеркацел ЇС;і фруктового порошка, I,5íí соевое муки и 0,ой гидролизата хлопкового ьрота - £3,9>- и статистически не отличается от гирулентностк спор, полученных с пивного .сусла г- S4;55t •/табл.3/»

.Таблица ,3

Смертность личинок тепличной белокрыяки от прихе.-нения а^ер сотій Кубинское оранжево« штакм "Т" на огурцах в лабораторных условиях /10 сутки/

і ьр. яоличе-г ср;количе.^"——-------

: ство вреди-:ство вредаг Варианты :теяя, ? :теля, , Р Гибель

•всего/см^ :мёртвые/см^ : jí

í t z

1 Контроль I , 24,9±2,Б5 ' 0,2±0,10 0,8^0,58 /Сез обработки/ ■

2 Контроль 2 - . ^

■ /во^Г* тритон , 24,2*2,37 . .30.,

3 ССІЇ /=0 клн/мл/. ' 24,4±4,43 6,9*2ДЗ- г8,3*ЗЛ0 /без тритона/ .

4 ССК /¿О млн/мл/ 26,1-2,62 23,2*2,57 Єв,9±2,52'

■с тритон Х-100 * '

5- ССК /50 млн/ш/ 21,3-0,75 I8,C±0,57 64,5*2,23 + тритон Х-100 " .

Примечание: ССК - суспензия спорового концентрата;

3,4 вар, - споры со среды} Юл фруктовый поросок, 0,ЬгЛ гилролизат хлопкового шрота,. I,S;í соевая мука 5 вар. - споры со среды: пивное сусло

- ІЗ -

2/ Изучение б КО, 113 ИОЛОГ1МЄ С НИХ особенностей Рае С11 оту о ее ^Шйв^'мКШ йтсьол £3-5

2 Л .' Влияние углеводного питания на рост колония к споро-

í

образование - -

* - .Результаты исследование показали, что наибольший еыход спор * гриб дает на ICO cií на глюкозе - 22,7 х 30®, кукурузном крахмале— 21,*3 х 10®, ^руктезе - ¡19,6 х IG9 /табл.4/. Ьти данные статистически не отличаются /Р> 0,05/, но тенденция наблюдается такая уан у . агаерсонии - наибольшй титр ссор был получен на глюкозе. Наименьшей выход сгюр был на картофельном крахмале. Наиболее Ьлаголрият-нш источником углеводного'питания дня вегетативного роста является глицерин. В »том случае площадь одной колонии 5,1 си^.

Таблица 4.

Влияние углеводного питания на рост колония и спорообразование у їаеоіїопіусез fuBoao-ro««ua стамм £3-5.

/6 сутки/ '

• , , . Варианты г/Л , * * » . Ср.размер колонии, • см2 ' : Ср. выход спор : млвц/ТСО см2

•Глюкоза 40 3,6*0,24 £2,7*1,89 а

Л Фруктоза 40 ; з,4*о,зз , К,6-0,69 а

■ Мальтоза . ■36 . 3,7^0,15 19,3і!,53 а

. Лактоза : ,' 3,1*0,12 14,6*1,08 б

Сахароза за - ' 3,8*0,25 . 14,9*0,01 <í

Глицерин - - 41 5, ІІ0,20' 13,5*0,72 б

Крахмал картофельный 40 ; : 3,6*0,45 10,7*0(65 в

. Крахмал *-■ кукурузный ' 40' • 3.3±0,20 21,3*1,28 а

Проверено влияние на рост и спорообразование других концентраций. гдккозу, фруктозы, мальтозы, глицерина и кукурузного крахмала в пределах от 1,5л до 6,'í. Оказалось, что наибольшую спору.тя-цив дает концентрация г. только для глицерина она меньше и составляет *'•

2.2. Ьликнио источников азота на Соне углеводов на рост

и с пссос Сраз оваше ^

Проверялась органические и югнерэлыше источники азота. На ор-гак^чесюос источниках азота наиболысЪ выход спор на 100 см2 получен на соевол муке в концентрации 4,5;-í /45 г/л/ с гадролизатом хлопкового грота - 0,5л /£кл/л/ на фоне I0.-S /100 r/л/ фруктового поро-Ека - Ь0,5 х 10®. £такм 63-5. гриба Р.fumoso-roeвив также успешно растёт на костном'клее при концентрации 3J» /30 г/л/ - титр спор 11,6 х Ю9/Ю0 см2.

На основе проверенных компонентов подобрана деагевая питательная среда, содеркацод Юл фруктового порошка, 4,5:í соевой муки и ■0,5К гидроллзата хлопкового ¡крота, которую сравнивали с агариэован-ньы пианам сусяс&ь Результаты исследований показывают, что средний- . выход спор на одну колонию почти в-два раза больсе на предложенной нами среде, чей на пивном сусле. Кроме этого, проверялись другие.кон-. .центрации ípyi:rOEcro порошка в пределах от 4й до 10.^, Оказалось, что уменьшение концентрации но оказывает существенного влияния на. спорообразование., При концентраций фруктового порошка получен средних выход спор на 100 см2'- 3.x 10®, а при 4>¡ концентрации -2,5 х 1С9.

■ Гриб плохо растет в спороносна»; на средах, вюшчаюших минеральные источники азота. ..".*'■

2.3. Сценка вирулентности гриба на гусеницах'озимой совки

¿«rotis segetum/ и вощинной моли /Gallería mellonella / Вирулентность штамма £3-5 гриба Р.fumoso-roaeua проверялась

- ІЬ -

s лабораторних условиях. При концентрации спор 5 х I07 в I ил он вызвал 7&К гибели'гусениц вссинноч моли. Повышение и^ехциошюл 'нагрузки до IGS в'І мл увеличило гибель гусениц до

Проверялась также віірулентность гриба ка гусеницах оз;ко>. совки,, причём споры снимались с двух сред: -предложении среды, содержащей ICW фруктового пороака, соевой муки , 0,£;: гндрсли-зата хлопкового ь*рота,. и с пивного сусла. Результаты опыта поназывают, что питательные среда существенно не пликкт на вирулентность гриба..

2.4..Оценка возможности использован/л гриба для подавления численности хмелевой тли /Phorodoa humuli / в производственных условиях 3, полевых условиях показана перспективность применения ¡^омма 63-5, гриба P.funoao-roaeua против хмелевой тли. Б ICGC г. титр

О

суспензии 1С спор/мл обеспечил биологическую объективность около '9CÜ ва 7 сутки. В 1969 г. эта-эффективность была ыенкге и составила 8IK на. 3 сутки /табл.5/. На 7 сутки она уменьшилась до 7JÜ, Возможно это связано с применением других добавок в препарате, что обусловило уменьшение объективности-гриба. Даяьнейеие исследования продолжаются Институток биотехнологии. Уменьшение концентрации препарата в два раза /о 0,06« до 0,G3Sí/ при прочих равных условиях снижает■биологическую эффективность до £Є,5Н, что не отличается от контроля 2 /табл.5/. Применение суспензии спорового концентра- * та'без добавок не элективно," что объясняется плохое удерживае-мостью капель.на-нижней поверхности листьев. Применение бактер-'пального- препарата КГБ в качестве средства борьбы о хмелевод тлей ставит под"сомнение оту рекомендацию, поскольку биологическая: оф-фективность'даке в заведомо аавщенной дозе /I* -ная.суспензия/ не прсьі^ала 3,3;з на 3 сутки. ., '

. ^ - . Результаты отого опыта говорят о тсм.^что дальнейшая работа

по отбору более вирулентных Еяадаов-продуцектоз'и соеериенствова-ншо препаратинньх весьма перспективна для перехода к использованию экологически 'чистых биологических средств зениты хмеля от хыелево/. тли.

Таблица 5 ■

Результаты полезкх испытаний биопрепарата на основе гриба Р.Гмлюво-говвио итемм 63-5 с разными добавками против хмелевой тли в ллтсм^фе /Украинская ССР - 3 сутки/ ■/КЁ9 г./

плотность тли на см^ листа

Йо1 обработки: после оора-■ ит. ; ботки, шт.

ЕЗ

54

Г . 2

5 4

Контроль I /без обработки/

Контроль 2 /ШВ Р 3, КМЦ 0,1555/

ССК б*ез добавок /О, Об?;/

ССК /О.ОоЯ/, ПАВ

с з - ка , о, 15;; ■

ССК /О.ОЗя/, ПАВ

юз- о,сь:с, к.а

0,15*

Зталон ВГЗ - 155

16,5*3,12 18,0*4,01 О

23,743,81 10,5-1,79 55,8*6,89 а

19,7*3,2? 21,0*3,67 О

29,644,78 5,5-0,81 61,414,83 6

16,943,87'' 7,041,44 66,548,92 а

22,742,04" 22,0*2,60 3,345,06 в

Примечание: ССК - суспензия спорового концентрата, БЗ - биологическая .эффективность

2.5. Использование, гриба .против бахчевой тли /АрЫв еоаэури!/

на огурцах в тепличных условиях- • . . Стамм 83-5 гриба - Р.Гитоао-гоаеие. енгегает численность бахчевой .тли. Опыт, проведенная1 в закрытом грунте* показал высокую биологическую э$йектилностъ - 87Я /табл.6/. Если не учитывать пять

листьев, на которых ¡х-локтиеность была невысоко," /от 10 до 6?;i/, то на £0 листьях из 25 /ЕОЯ/ биологическая эффективность составила 85-1CC/S. Результата опыта достоверны в suchen степени / Р< , 0,001/. •

Таблица Ö

Объективность Р. Гитов о-гоа виз пггеißt ЬЗ-5 против бахчевол тли на о гурдах в тепледсх колхоза км. С.Кирова, Еалакахинского района, "ооновской области /7 сутки/, /15£9'г.

Варианты - с.р.кол-Ео s тлея до обра-: ботки, : ст./лист : Cq.ko.i-bo тлея после обработки et./дист- * Вд 1

Контроль /без:обработки/ 51,9*6,15 44,9-5,67 15*2,4 .

ССК /50 шш/мл/, . тритон Х-ІІ4 ■ . 72,1*7,45 ' 8,2*3,49 87*6,4

■ Глава 4. Заключение, ■

Наші был,испольэояан'комплексныа подход к подбору питатель- '

нюс сред для выращивания грибов, учитывающий количественные дотре-.'

»-

•бности культуры в различных источниках углеводного и азотного питания и их заменители. Етоиыеет важное значение на начальных этапах производства биопрепаратов. Учитывая доступность сред.и невысокую их стоимость, мы подобрали среду,, в состав которой входит

ІСМ фруктового порошка, 5?« соевод муки и 0,5?! гидрояиэата

-хлопкового шротам Состав среда оказался сходным для обоих изучаемых видов грибов. Она повидимому имеет универсальныя характер, так-как на неЯ хорошо растут и спрроносят разные формы грибов рода Ааоїіегаоаіа иР.Гитово-гоаеиз штамм 83-5. Кроме того, она по: сравнение с т радиционно используемым* пиьным суслом более экономична /дешевле в 30 раз/.' *

' Изучение количественных потребностей грибов показало, что ной-

- ІЗ -

боль!£гл т::тр спор вти-грибы дают на ICW фруктовом пороюсе. Лругие концентрации в пределах от 4* до I3J4 не оказывая? существенного влияния на с коро ношение. Но с учетом хранения препарата рекомендуется использовать наименьшую концентраті» фруктового порошка -4%, поскольку в этом случае споры, лучке сохраняют свою жизнеспособность,

; Разные потреСности грибов и в источниках азота. А^ерсония луч -lio споровосит при концентрации ссево'Л ууки І.5Й-В среде, аГ.Лшо-eo-roaeua шт£йЫ 63-5 при концентрации 4,5'і, Гцдролйэат хлопкового сгрота Е концентрации 0,5,-í стимулирует спорообразование у обоих гри Сов. - -

Получений® нами атокма очень перспективны, ійтамм "Т" ашерсо-нии НубкнскоЛ оранжевой спороносит при температуре +32°С, что имеет значение а тепличных условиях, так как при етой температуре пре параты на основе ааерсоний обычно мало эффективны против тешгичной белокрьики. ь'таму 63-5 гриба р.Гииоэо-гозвчв перспективен кая регулятор численности бахчевой тли в зшфытои грунте, так и хмелевой тли на хмелевых плантациях на Украине.

ЕЫЕОда '

1. Еьщолено два новых штакма: термостойкий "Г" акерсонии Ку -бинскоП оракгевоя, которн? растёт при:температуре 32°С и Р ЄЗ-5 гриба Рае oil ошусеа Гцтоа o-roaewa, которш дает обильное спороиошение на бахчевол и хмелевой тлях,

2. Установлено, что наиболее благоприятными источниками углеводного питания для спорообразования являются глюкоза для азиатских форм акерсоюш к мальтоза для штамма "Т" <Jopm Кубинской оранжевое, Целесообразно использовать исходную концентрацию глюкозы в среде не вьеє 6-6/S. 5Э-5,гриба Р.Гшвво-говеиа хорошо ассимилирует глюкозу, фруктозу,-мальтозу и кукурузный крахмал.

о. 'Лучз:м источником азота, обеспечиракцим высокую споруляций, для обоих сяаммов является соевая іука в концентрацій 4,5:-=.

4, Для культивирования грибов подоорана более дешевая среда вместо традиционно используемого пивного сусла. Для стамча Т" ашерсонии Кубинской оранжевой в состав среди входил 10% фрукто- ■ вого порошка, 1,5/£ соевой муки и гидролизата хлопкового гро-

q і

та. Наибольший титр спор - 38,7 х 10 /100 см**, Для стсмма 83-5 гриба P.fiimoaft-roeeue среда вклтает: ICW ç-руктового порокка, 4,5Л соевой муки и 0,5í¡ гидролизата хлопкового ьрота, На отой средо средний выход спор - 5 х 10*°/100 смг.

5.. При оперативном использовании биопрепарата на основе сггам-ма Т" аізарсонии Кубинской оранжевой следует применять концентрацию фруктового порошка в предложенной среда на уровне Ю.Ч, При расчёте на возможное хранение следует использовать меньшую концентрацию этого компонента, а именно 4Л; поскольку спори лучше хранятся,. ,

' . 6, Лабораторными опытами установлено; что лродложенная среда ■ и пивное-сусло практически не влияют на вирулентность штамма "Г" ашорсбнии КубиНскоя оранжевой и ктамма 83-5 гриба p.runo«o-roeeue* -. '7,. Смертность личинок тепличной белокрьики в лабораторных ус- ' ловиях 0т применения штамма Т" ашерсонии Кубинской оранжевой в кон центрации.& хЮ7 спор/мл составляет 89Ü. ' '

8» Ltsí« 83-5 гриба Р.Гшаоао-гозвио обеспечиьает . в закрытом грунте гибель бахчевой тли на уровне SG;í при,титре суспензии 5 х 10 спор/мл» Установлено* что этот штамм способен ограничивать численность хмелевод- тли в открытом грунте на хмелевых плантациях в їл--ToWpcKOf; области. Его биологическая эффективность при концентра-ЦИИ-.СПОР 10®.в,1 мл суспензии составила еЫ.

\. /V ; РЬКС^.ЧДйУ}і1І,ГіГО^ЬОДЛБУ' : ' Для массово^ наработки биопрепаратов на основе грибов рода Aechereoñi» предлагается среди- следующего-с ост ива: ICtî ¿руктового :поропка, 1,5*А соевой муки аС.бй гидролиза« хлопкового '¿рота, в да

РаеоНотуоеэ fumoso-roaeua - I0?¡ фруктового порошка, 4,5!í соєво?, муки и 0,5,4 г'.ідролизата 'хлопкового мрота.

ГриСк родаАасіївгзопіа форма КуСинская. оранжевая штамм "Т" и РіГитовo-roaeua итаам 83-5 рекомендуется применять в закрытом грунте в интегрированной системе-забить* от тепличной белокрыяки. /Т • vepoyariorum / и бахчевой тли /A.gossypil./ соответственно*'

Против хмелевой тли на хмелевых плантациях в -Житомирекой области рекомендуется проводить'опрнскиівание' споровой суспензией гриба Р.fйшово-rозвивштамм 63-5» Титр, рабочей' суспензии 10® спор в I мл.

iu> ил

Объем 1'/4 п, л.

Заказ 1264.

Тираж 100

Типография Московской с.-х. академии им. К. А, Тимирязева 127550, Москва И-550, Тимирязевская ул.. 44