Белковые трансактиваторы гена интерлейкина-2 из ядер клеток селезенки и головного мозга

Гришина, Татьяна Васильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Белковые трансактиваторы гена интерлейкина-2 из ядер клеток селезенки и головного мозга
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Белковые трансактиваторы гена интерлейкина-2 из ядер клеток селезенки и головного мозга"

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

Гришина Татьяна Васильевна

БЕЛКОВЫЕ ТРАНСАКТИВАТОРЫ ГЕНА ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 ИЗ ЯДЕР КЛЕТОК СЕЛЕЗЕНКИ И ГОЛОВНОГО МОЗГА

03 00 04 - биохимия

ООЗ 1 г'ЬИЭ {

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2007

003175857

Работа выполнена в лаборатории химии белка Отдела биохимии НИИ Физиологии им академика А А Ухтомского и на кафедре биохимии Санкт-Петербургского государственного университета

Научный руководитель- кандидат биологических наук, доцент

Мюльберг Александр Альфредович

Официальные оппоненты- доктор биологических наук, профессор

Арутюнян Александр Вартанович

доктор биологических наук, профессор Маслова Марина Николаевна

Ведущая организация: Петербургский институт ядерной физики им Б П Константинова РАН (ПИЯФ РАН)

Защита диссертации состоится « »И^О^Х^Я^ 2007 г часов на

заседании диссертационного совета Д. 212 232 09 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Санкт-Петербургском государственном университете (СПбГУ) по адресу 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб, д 7/9

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке им, А М Горького Санкт-Петербургского государственного университета

Автореферат разослан « » ОСУ^-^/^2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор 3 И Крутецкая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последнее время большое внимание уделяется роли щшжияов в коммуникации между центральной нервной (ЦНС) и иммунной систем (ИС) (Szelenyi, 2001, Harnsch, 2002, Amsman & Merali, 2003, Sternberg, 2006, Мюльберг, Гришина, 2006) Однако из поля зрения исследователей выпал такой аспект проблемы нейроиммуномодуляции, как анализ механизмов нейроиммунных взаимодействий на уровне регуляции транскрипции цитокиновых генов специфическими белковыми трансфакторами Хорошей моделью для изучения подобных механизмов может служить ген инпгерлейкина-2 (IL-2), который кодирует структуру одного из ключевых медиаторов иммунной системы и является важным модулятором нейроналыюй и нейроэндокринной функций (Hanisch, 2001, Gaffen & Liu, 2004, Steinman, 2004) Хорошо известны трансфакгоры гена IL-2 (NFAT, АР-1, NF-кВ, Oct и другие) и нукяеотвдные последовательности, образующие высокоэффективный транскрипционный комплекс, в состав которого входят еще неидентифицированые белковые факторы с относительно низкой молекулярной массой (Jam е а., 1993, Jassen е а., 1993, Gamty е а., 1994) Состав и природа транскрипционного комплекса гена IL-2 в клетках ЦНС до конца не изучены Более того, структурная идентичность IL-2 и его рецепторов в клетках иммунной системы и клетках ЦНС остается предметом дискуссии (Harnsch, 2001, 2002) В связи с этим представлялось актуальным исследовать возможность осуществления взаимодействия между ЦНС и ИС на молекулярном уровне через регуляцию экспрессии гена IL-2 белковыми факторами

Цель данной работы состоит в выявлении и изучении природы и функции белковых трансфакторов, являющихся общими для клеток нервной и иммунной систем и осуществляющих регуляцию экспрессии гена /1-2 в Т-лимфоцитах

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи исследования

1 Выделить и охарактеризовать белки из ядер различных клеток головного мозга (астроциты, нейроны, микроглия) и ядер клеток селезенки иммунизированных крыс, способные активировать экспрессию гена интерлейкина-2,

2 Изучить способность выделенных полипептидов к формированию стабильных и специфических комплексов с проксимальным (от +39 до -151 п н) и дистальным (от -152 до -548 п н ) участками промотора гена IL-2 и оценить природу их взаимодействия с этими

3 Оценить природу ядерных белков из клеток селезенки и головного мозга иммунизированных крыс посредством вестерн-блотт гибридизации с поликлональными антителами к трансфакторам семейств АР-1 (с-/оя и сцип),

4 Осуществить анализ И-концевых аминокислотных последовательностей полипептидов, общих для клеток нервной и иммунной систем, с последующим поиском гомологий в банке компьютерных данных по первичной структуре белков,

5 Исследовать действие выделенных белков на продукцию 1Ь-2-подобного ростового фактора в культуре Т-лимфоцитов селезенки мыши,

участками,

6 Изучить роль ядерных белков из клеток селезенки и головного мозга иммунизированных крыс в регуляции активности промотора гена IL-2 в Т-клетках линии Jurkat, тран сфецированных плазмидой pIt-2-LUC,

7 Оценить влияние белковых факторов на синтез мРНК IL-2 в культуре Т-лимфоцитов селезенки мьппи,

8 Исследовать механизм действия выделенных белков при иммуносупрессии, вызванной иммуяодепрессангом циклоспорином A (CsA) и кммобилизационным стрессом, Научная новизна Впервые выделены и охарактеризованы белки, стимулирующих

экспрессию гена интерлейкина-2 (/1-2) в культуре Т-лимфоцитов т vitro на уровне синтеза мРНК IL-2 Фракции ядерных белков из клеток селезенки (ЯБС) и различных клеток головного мозга (ЯБМ) содержат полипептиды с одинаковой молекулярной массой (Mr) 13,5, 17,5, 18 и 19 кДа Установлено, что эти полипептиды образуют стабильные и специфические комплексы, как с проксимальным (от +39 до -151 па), так и с дистальным (от -152 до -548 пн) участком промотора гена IL-2, определена природа их взаимодействия с регуляторной ДНК гена IL-2 Вестерн-блоттинг ЯБС и ЯБМ с поликлональными антителами к компонентам трансфактора АР-1, а также анализ N-коицевых аминокислотных последовательностей полипепгидов с Mr 13,5-19 кДа в составе ЯЬС и поиск гомологий в банке компьютерных данных по первичной структуре белков позволил сдмать ряд заключений о природе этих полипептидов Установлено, что ЯБС и ЯБМ активируют 1L-2 промотор репортерного гена pIL-2-LUC, трансфецированного в клетки Jurkat, и стимулируют синтез мРНК 1L-2 в культуре переживающих Т-лимфоцитов Применение двух моделей иммуносупрессии, вызванной действием цитостатика CsA и иммобилизационным стрессом, показало, что подавление иммунного ответа в каждом случае связано с воздействием на различные механизмы передачи трансмембранного сигнала при активации Т-лимфоцитов и на продукцию специфических трансфакторов IL-2 гена

Научно-практическое значение. Полученные данные о ЯБС и ЯБМ, обладающих специфическим сродством к промоторно-энхансерной области гена IL-2 и ре1улирующих синтез IL-2 мРНК, после расшифровки N-концевых аминокислотных последовательностей могут быть использованы при создании препаратов корригирующих экспрессию гена IL-2 при иммунодефицитах, вызванных различными патологическими факторами Основные положения, выносимые на защиту

1 Фракции ЯБС и ЯБМ иммунизированных крыс содержат полипептвды с одинаковыми молекулярными массами 13,5, 17,5, 18 и 19 вДа, обладающие способностью специфически взаимодействовать in vitro с регуляторной ДНК гена интерлейкина-2

2 ЯБС и ЯБМ обладают способностью стимулировать продукцию IL-2-подобного ростового фактора и активировать экспрессию гена люциферазы, находящегося под промотором гена 1L-2

3 Ядерные белки из клеток селезенки и головного мозга иммунизированных крыс стимулируют синтез мРНК 1L-2 в культуре переживающих Т-лимфоцитов селезенки мыши

4 ЯБС и ЯБМ оказывают защитный эффект при имм> носупрессии, вызванной иммунодепрессантом циклоспорином А ЯБМ также показывают стресс-протекторный эффект

5 Ядерные бедки из клеток селезенки и различных клеток головного мозга иммунизированных крыс имеют антигенные детерминанты, сходные с таковыми транскрипционных факторов семейства АР-1 (c-fos и c-jwi)

Апробация диссертации Материалы научно-исследовательской работы докладывались и обсуждались на Всероссийском симпозиуме по структуре и функции клеточного ядра (1993), конференции молодых физиологов и биохимиков России (1995), Всероссийской конференции «Механизмы синаптической передачи», а также на международных конференциях (6-th INWIN, Geneva, 1995 и 21-th European Conference of phychosomatic Research, France, 1996)

Публикации. Результаты диссертации опубликованы в 9 статьях и 10 тезисах докладов Структура диссертации. Диссертация изложена на /(^/страницах, состоит из разделов «Введение», «Обзор литературы», «Методы исследования», «Результаты исследования», «Обсуждение результатов», «Выводы» Список литературы включает источника.

Диссертация проиллюстрирована^^ рисунками и 1 таблицей

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Трансформация клеток E.coh плазмидными ДНК Использовали клетки Б colt (штамм НВ101), трансформированные рекомбинантными ДНК плазмиды pIL-2-LUC, включающей промоторно-энхансерную область гена IL-2 (587 п н), а также клетки, трансформированные рекомбинантными ДНК плазмиды рАА1213, содержащей полноразмерную копию кДНК гена IL-2 человека (550 п н) Трансформацию Е coli плазмидными ДНК, выделение, элеирофорез и рестрикцию ДНК проводили по методу Маниатиса (Маниатис и сотр, 1984)

Получение рестрикционных фрагментов гена /£-2. Промоторно-энхансерную область гена IL-2 получали рестрицированием плазмиды pIL-2-LUC по двум й»и?Д/-сайтам Фрагмент ДНК (587 п я.) выделяли из легкоплавкой агарозы, затем его рестрицировали по Hmfl-сайту и выделяли проксимальный (от +39 до -151 п н ) и дистальный (от -152 до -548 п н) фрагменты промотора. Мечение фрагментов ДНК осуществляли при помощи дигоксигенинового набора Dig-Labelmg and Detection Kit фирмы «Boehnnger Mannheim» (Boehnnger Mannheim, 1990) Для выделения полноразмерной копии кДНК гена IL-2 плазмиду pAA12J3 рестрицировали по сайтам BamHI и SalGI, смесь фрашентов ДНК разделяли электрофоретически, кДНК вьщаляли из геля и метили при помощи дигоксигенинового кита.

Выделение и фракционирование ядер Крыс-самцов линии Вистар иммунизировали внутрибрюшинным введением эритроцитов барана (1-5109 клеток/мл стерильного физиологического раствора) в течение б дней Выделение ядер из клеток селезенки осуществляли ультрацентрифугированием в ступенчатом градиенте гипертонического раствора сахарозы (1,6—2,3 М) по методу Блобела и Потгера в модификации Тата (Tata, 1974) Тотальный препарат ядер из клеток головного мозга получали ультрацентрифугированием в 2,06 М растворе сахарозы

по методу Лоутруп-Рейна и Мак Евена (Lovtmp-Rein & McEwen, 1966) Ядра астроцитов, нейронов и микроглии выделяли ультрацентрифугированием тотального препарата в ступенчатом градиенте сахарозы (2-2,2—2,4-2,6-2,8 М) Ядерные фракции контролировали фаза-контрастной микроскопией (Lovtrup-Rern & McEwen, 1966)

Выделение и фракционирование белковых экстрактов из ядер клеток головного мозга и селезенки осуществляли по методу Шапиро и сотр (Shapiro е а., 1988) с незначительными модификациями Концентрацию белка определяли по методу Шеффнера (Schafher & Weissman, 1973) Выход 7 - 10 мг ЯБС и 100 - 200 мкг ЯБМ из 400 - 500 мг ядер

Диск-электрофорез ЯБМ и ЯБС вели по методу Леммли в 15% ПААГ в буфере 0,025 М трис-0,192 М глицин-0,1% ДЦС-Na, pH 8,3 (Laemmli, 1970) Катионный диск-электрофорез ЯБМ, ЯБС и тотальных гистонов проводили в 15% ПААГ в присутствии мочевины по методу Спикера (Spiker, 1980)

Элекгроблоттинг и формирование комплексов ДНК-белок. После электрофоретического разделения по методу Леммли белки ядерных экстрактов переносили на нитроцеллюлозную мембрану типа Hybond С extra «Amersham», размер пор 0,45 мкм, методом электроблотганга (Towbm е а, 1979) После переноса белков мембрану преинкубировали в габридизационном буфере, а затем обрабатывали гибридизационным буфером, содержащим I мкг Dig-ДНК, в течение 1 ч Мембраны промывали, высушивали и комплекс белок-ДНК визуализировали, применяя реакцию иммунопреципитации (Boehnnger Mannheim, 1990)

Вестерн-блотгинг ЯБС и ЯБМ с поликлональнымн антителами к компонентам трансфактора АР-1 После разделения ядерных белков и последующего переноса на нитроцеллюлозную мембрану осуществляли вестерн-блотгинг с антителами к е-_/ии/АР-1 (АЬ-1) «Calbiochem» (концентрация антител 1 мг/мл) или с антителами ar&L-c-fos «Sigma» (концентрация антител 1 мг/мл) Вестерн-блотгинг проводился с использованием стандартного набора фирмы «Calbiochem» Антитела c-junlAPA (Ab-1), am-c-fos, или контрольные нормальные антитела кролика разводили 1 500 или 1 1000 раз буфеиом TBST

Получение и инкубация Т-лимфоцитов Т-лимфоциты мышей линии СБА получали по методу Гущина (Гущин, 1992) Стимуляцию Т-лимфоцитов осуществляли КонА или KoHA+pIL-2 Белковые факторы добавляли в инкубационную среду в сочетании с указанными стимуляторами или без них

Трансфекция и стимуляция Т-клеток Т-клетки линии Jurkat, субклон J32, после культивации в среде RPMI1640 со всеми добавками разводили до 1,5 106 клеток на мл и трансфецировали 4 мкг ДНК pIL-2-LUC, используя DEAE-декстрановый и хлороквиновый метод (Siebenlist е а., 1986) Трансформированные клетки собирали центрифугированием, промывали и ресуспевдировали в среде RPMI1640 (105 клеток на мл) В среду вносили белки ядерного экстракта или их хроматографические фракции (0,3-0,6 нг/мл на 10s клеток), клетки инкубировали в течение 16-18 ч при 37°С, 100% влажности и 5% С02 Для индукции синтеза IL-2 в среду добавляли КонА (2 мкг/мл) и клетки дополнительно инкубировали в течение 24 ч

Определение люцаферазной активности в лизатах трансформированных клеток определяли по методу Вильямса и сотр (Williams е а., 1989) Тотальную световую эмиссию измеряли при помощи люменометра SKB (Новосибирск)

Выделение мРНК IL-2 Вьщеление тотальной мРНК осуществляли по методу Шомзинского и Сахи (Chomezynski & Sacchi, 1987) Осадок мРНК растворяли в 5 мкл стерильной деионизированной воды и наносили на фильтр (0,45 мкм, Schleicher and Schuell ВА85) После закрепления РНК на фильтре огясигом при 80°С в течение 30 мин проводили предгибридизацию фильтра в свежеприготовленном гибридизационном буфере, а затем проводили гибридизацию в буфере, содержащем дигоксигенин-меченный фрагмент кДНК гена IL-2 Гибридизацию проводили в течение ночи при 37°С Комплексы Dig-ДНК-мРНК выявляли при помощи реакции иммунопреципитации (Boehnnger Mannheim, 1990) Степень окрашивания пятен, пропорциональное количеству мРНК IL-2, оценивали на денситометре марки LKB Ultrascan XL Law Dencytometer

Модель стресса, разработанная Гущиным и Неустроевой (1989) заключалась в обездвиживании мышей линии СВА, и лишением их пищи и воды.

Статистический анализ результатов Данные 5-6 экспериментов обрабатывали с помощью методов вариационной статистики Достоверность различий между группами оценивали по i-критергао Стьюдента или по непараметрическому критерию Вилконсона для связанных выборок. Во всех расчетах за достоверность принимали 95% уровень значимости (р<0,05) (Глотов и др, 1982)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Физико-химическая характеристика ядерных белков из клеток селезенки и различных клеток головного мозга крыс. Взаимодействие ЯБС и ЯБМ с иромоторной областью гена IL-2 m vitro Экстракты ядерных белков клеток селезенки и различных клеток головного мозга выделяли одинаковым способом, путем двукратного высаливания белков возрастающими концентрациями сульфата аммония Диск-электрофорез в 15% ПААГ-0,1% ДДС-Na фракций ЯБС и ЯБМ показал, что в состав ЯБС входят полипептиды с Mr 13,5, 17,5, 18, 19 и ~ 45 кДа, а также следовые количества белков, обладающих более высокими молекулярными массами. ЯБМ представлены более широким спектром белков Наиболее выраженные полосы соответствуют полипепгидам с Mr 13,5, 17,5, 18, 19, 37, 48 и 75 кДа (Рис 1А) Существенно, что спектры полипептидов ЯБМ качественно идентичны как н тотальном препарате ядер головного мозга, так и в ядрах клеток мозга, которые играют главенствующую роль в модуляции нейрональных и нейроэндокринных функций в ЦНС (Рис 1В) (Hanisch, 2001)

Показано, что в составе ЯБМ и ЯБС имеются белки с одинаковыми молекулярными массами 13,5, 17,5, 18 и 19 кДа Не исключено, что эти белки являются идентичными для ЯБС и ЯБМ. В пользу этого предположения говорит способность ЯБС и ЯБМ проявлять сходные транс-активирующие свойства, как будет показано далее В составе ЯБС иногда выявляется фракция с Mr 11 кДа Появление этой фракции связано с увеличением срока хранения ядер или препаратов

ЯБС при -70°С. Существенно, что при активации иммунного ответа спектр белков, экстрагируемых из ядер клеток головного мозга, представлен большим числом различных полипептидов по сравнению с аналогичным спектром протеинов, извлекаемых из ядер клеток селезенки. Это может быть связано с ткане-специфической регуляцией гена 1Ь-2 в головном мозге.

1 2 3 4 5 6 7

Рис. 1. Диск-электрофорез белков ядерных экстрактов клеток селезенки и головного мозга иммунизированных крыс в 15% ПААГ с 0,1% ДДС-Na.

А — тотальный препарат ядерных белков из клеток головного мозга и селезенки; Б - препараты ядерных белков из различных типов клеток головного мозга;

/ - тотальный препарат ЯБМ; 2 - белковый экстракт из ядер клеток селезенки; 3, 7 - белки-маркеры: БСА -67 кДа; ОВЛ - 45 кДа; химотрипсиноген А - 25 кДа; миоглобин - 17,8 кДа; РНКаза - 13,5 кДа; 4 - белкн ядерных экстрактов из клеток глии головного мозга; 5 - белки ядерных экстрактов из клеток нейронов головного мозга; 6- белки ядерных экстрактов из клеток астроцитов головного мозга.

Оценка взаимодействия этих протеинов с различными фрагментами ДНК промотора JL-2 показала, что полипептиды с Mr 13,5—19 кДа специфически и стабильно связываются, как с проксимальным (от +39 до -151 п.н.), так и с дистальным (от -152 до -548 п.н.) участками промотора и что в основе этих взаимодействий лежат преимущественно гидрофобные контакты между белками и ДНК. ЯБМ с Mr 36 и 75 кДа образуют стабильные комплексы, как с проксимальным, так и с дистальным фрагментами регуляторной ДНК гена за счет электростатических взаимодействий; ЯБМ с Mr 48 кДа взаимодействует специфически только с проксимальным участком промотора посредством гидрофобных контактов (Рис. 2 и 3).

По молекулярным массам и по природе взаимодействий с регуляторной ДНК гена IL-2 ЯБМ с Mr 36 и 75 кДа могут быть идентичны c-jun (36 кДа) и гетеродимеру c-jm/c-fos (75 кДа). Как показали кристаллографические исследования Гловера и Гаррисона (Glover & Harrison, 1995) во взаимодействиях N-терминальных регионов c-jun и c-fos с последовательностями ДНК главенствующую роль играют электростатические взаимодействия. Это заключение согласуется и

А Б В Г Д кДа

СТ ЯБМ ЯБС ЯБМ ЯБС ЯБМ ЯБС ЯБМ ЯБС ЯБС ЯБМ

Рис. 2. Формирование комплексов ЯБС и ЯБМ с дигоксигенин-меченным дистальным Нт]7-фрагментом регуляторной ДНК гена (от -152 до -548 п.и.).

СТ- стандарты молекулярного веса (67 кДа, 45 кДа, 25 кДа, 17,8 кДа, 13,5 кДа); А — контрольная часть нитроцеллюлозной мембраны, окрашенная амидошварцем 1ОВ; Б - в отсутствие конкурентной ДНК в буфере для гибридизации (0,1 М ЫаС1);

В - в присутствии 500-кратного избытка гетерологичной ДНК (рестрикционной смеси ДНК фага УЕсоВ! и ДНК фага Х/ШпсШГ);

Г - в присутствии 5-кратного избытка гомологичной ДНК (промоторной ДНК гена 1Ь-2, рестриьсированной Яш/7);

Д- при концентрации 0,4 М №С1 в буфере для гибридизации.

А Б В Г Д кДа

Ш* ^ ^ : 13 5

шф шщ ч®»

.__< ь, ..........

ЯБМ ЯБС ЯБМ ЯБС ЯБМ ЯБС ЯБМ ЯБС ЯБМ ЯБС

Рис. 3. Формирование комплексов ЯБС и ЯБМ с дигоксигенин-меченым проксимальным .№л/7-фрагментом регуляторной ДНК гена 1Ь-2 (от +39 до -151 п.н.).

А - контрольная часть нитроцеллюлозной мембраны, окрашенная амидошварцем 10В;

Б - в присутствии 500-кратного избытка гетерологичной ДНК (фрагментов ДНК фага Л);

В - в присутствии 5-кратного избытка гомологичной ДНК (промоторной ДНК гена 1Ь-2, рестрицированной

тф).

Г- при концентрации 0,1 М ЫаС1 в буфере для гибридизации; Д - при концентрации 0,4 М ЫаС1 в буфере для гибридизации.

с результатами вестерн-блоттинга ЯБМ с поликлональными антителами к c-jun и c-fos компонентам трансфактора АР-I Установлено, что ЯБМ с Mr 36 кДа содержат антигенные детерминанты, подобные антигенным детерминантам c-jun Наряду с этим ЯБМ с Mr 75 кДа обладал антигенными детерминантами, соответствующим таковым, как c-jun, так и c-fos компонентам АР-1 Все это хорошо согласуется и с природой сайтов связывания трансфактора АР-1 Известно, что три сайта связывания АР-1 фактора локализуются в проксимальной части промотора гена IL-2, а один сайт связывания находится на дистальном конце этого промотора При этом дистальный АР-1 - связывающий сайт, ARRE 2, обладает слабой связывающей способностью, тогда как проксимальные, в том числе ARRE 1 - сильной (Macian еа., 2001) Именно этим можно объяснить тот факт, что ЯБМ с Mr 36 и 75 кДа менее прочно связываются с дистальным участком промоторной ДНК гена IL-2 Что касается полипептидов с Mr 13,5-19 кДа, то ЯБМ и ЯБС с Mr 17,5, 18 и 19 кДа содержат антигенные детерминанты, соответствующие таковым c-jun, тогда как полипептиды с Mr 13,5 кДа их не содержат Вероятно, это обусловлено особенностями первичной структуры указанных белков

В лаборатории дх.н. ТВ Овчинниковой Института биоорганической химии РАН был проведен анализ N-концевых аминокислотных последовательностей полипептидов с Mr 13,5, 18 и 19 кДа, входящих в состав ЯБС Определена последовательность 10 N-концевых аминокислот и проведен компьютерный поиск в библиотеке данных по первичным структурам белков Установлено, что ЯБС с молекулярной массой 13,5 и 19 кДа имеют N-концевую аминокислотную последовательность PEPAKSAPAP, которая обладает 100% гомологией с таковой гистона Н2Ь Хотя молекулярный вес гистона Н2Ь практически равен таковому ЯБС с Mr 13,5 кДа, последние, очевидно, образуются в результате протеолитической деградации С-концевого фрагмента ЯБС с Mr 19 бДа Можно допустить, что в этом фрагменте и находятся антигенные детерминанты, анологичные таковым c-jun Отметим также, что N-концевые последовательности ЯБС с Mr 13,5 и 19 кДа обладают 50%-ной гомологией с С-концевым фрагментом нуютеосому-связывающего домена HMGN2 протеина (РЕРКРККААР) (Bustm, 2001) Таким образом, ЯБС с Mr 13,5 и 19 кДа нельзя отнести к гистонам Н2Ь Очевидно также, что потеря С-концевого фрагмента полипептцда с Mr 19 кДа лишает его N-концевой участок антигенных детерминант, способных взаимодействовать с поликлональными антителами к c-jun

N-концевая последовательность ЯБС с Mr 18 кДа имеет состав AAPKSAPTTG и обладает 80%-ной гомологией с последовательностью AARKSAPATG гистона НЗ, простирающейся с 25 по 34 остаток этого белка Если из молекулярного массы гистона НЗ вычесть эти 24 а о, то Mr протеина становится равной ~13,5 кДа, что практически соответствует массе ЯБС с Mr 13,5 кДа. Но ЯБС с Mr 13,5 кДа является укороченным аналогом ЯБС с Mr 19 кДа Кроме того, в ЯБС с Mr 18 кДа остаток Arg3 гистона НЗ заменен на Pro, который не входит в группу взаимозаменяемых остатков Любопытно, что в составе N-концевых последовательностей ЯБС с Mr 19 и 18 кДа имеются два фрагмента (PAKSAPAP и APKSAPTT соответственно), гомология которых составляет около 70% В совокупности эти данные ясно говорят о том, что ЯБС с Mr 13,5, 18 и 19

кДа не относятся к гистонам Н2Ь и НЗ Прямым подтверждением этого заключения явились результаты диск-электрофореза ЯБС и тотальных гистонов в 15% ПААГ в кислой среде в присутствии мочевины Что же касается ЯБМ с Mr 13,5-19 кДа, то определить бе., пробелов достаточно протяженные N-концевые последовательности этих протеинов к настоящему времени не удалось Тем не менее, идентичность физико-химических характеристик ЯБМ и ЯБС с Mr 13,519 кДа, специфичности и природы их взаимодействий с различными участками промотора IL-2 гена, сходство антигенных детерминант и способностей стимулировать экспрессию этого гена говорят о высокой степени сродства этих полипептидов

Сопоставляя ЯБС и ЯБМ с пистонами, следует также учесть, что при выделении ЯБМ и ЯБС в настоящей работе использовали растворы с ионной силой 0,38 М и рН 7,9, которые способны извлечь из хроматина (но не ядер) только гистон HI (Tsanev, 1980), не обнаруженный в составе ЯБС и ЯБМ Как показали опыты по хроматографии ЯБС на колонке сефарозы (см ниже), фракция ЯБС с Mr 13,5-19 кДа характеризуется достаточно высоким содержанием триптофана, который отсутствует в гистонах всех типов Известно также, что гистоны оказывают ингибирующий эффект на экспрессию генов в различных модельных системах, использующих клетки (Гранстайн, 1992), тогда как нами было показано стимулирующее действие ЯБС и ЯБМ на экспрессию гена IL-2 в культуре переживающих Т-лимфоцитов, и этот эффект проявляется в случае малых количеств (нанограммы) вносимых белков (см. далее) Отметим также, что в состав NFAT/AP-1 комплекса, формируемого на соответствующем композитном элементе ДНК активированных Т-лимфоцитов, входят, по данным ряда авторов, и белки с низкими молекулярными массами(Гат е а, 1993, Jassen е а., 1993, Gamty е а., 1994) Не исключено, что эти белки участвуют в посадке комплексных факторов на специфические сайты ДНК и что эти компоненты присутствуют в составе ЯБС и ЯБМ Исходя из вышеизложенного, можно здпустить, что все полипептиды ЯБС и ЯБМ, образующие стабильные комплексы с ДНК промотора гена IL-2, являются еще неидентифицврованными трансфакгорами, участвующими в регуляции экспрессии этого гена Это заключение подтверждается результатами опытов по активации промотора гена IL-2 и синтеза мРНК IL-2 в культуре покоящихся Т-лимфоцитов

В первой серии этих экспериментов нами использовалась очищенная фракция ЯБС, выделенная из тотального препарата FPLC д б н Т Б Казаковой Детекция FPLC-хроматографии ЯБС велась по двум параметрам наличию пептидной связи (измерение поглощения УФ при длине волны 214 нм) и по содержанию триптофана (измерение при 285/335 нм) Измерение поглощения при длине волны 285/335 нм выявило в экстракте ЯБС четыре фракции пептидов (Ф!, Ф2, ФЗ и Ф4), обладающих высоким содержанием триптофана. Молекулярные массы этих фракций составляли 66 кДа, 23-30 кДа, 8-16 кДа и менее 5 кДа Максимальное содержание гршгтофана приходилось на фракцию ФЗ Эти фракции были лиофилизированы и предоставлены нам для последующих экспериментов Некоторое несовпадение молекулярных масс полипептидов, выявляемых двумя методами хроматографическим и элекгрофоретическим, можно объяснить различной разрешающей способностью этих методов и различной степенью погрешности

определения молекулярных масс Тем не менее, молекулярные массы полипептидов в обоих случаях достаточно близки (8-16 кДа ФЗ и 11-19 кДа для ЯБС) Близость значений молекулярных масс и способность проявлять транс-активирующие свойства, как было показано нами в дальнейших экспериментах, позволяет полагать, что белки фракции ФЗ и ЯБС с Мг 11-19 кДа являются одними и теми же полипептидами

Последующие исследования проводились совместно с сотрудником Отдела общей патологии и патофизиологии Института экспериментальной медицины РАМН кб н Головко О И, что нашло отражение в совместных публикациях

Роль ядерных белков из клеток селезенки и различных клеток головного мозга в регуляции активности промотора гена 1Ь-2

Установлено, что ЯБМ и ЯБС инициируют продукцию мРНК 1Ь-2 в культуре «покоящихся» Т-лимфоцитов селезенки мыши Максимальный стимулирующий эффект наблюдали через 6 ч после начала инкубации клеток с травсфакторами при концентрации 0,1 нг/мл/106 клеток для ЯБС, для ЯБМ эта концентрация простиралась от 10 до 0,1 нг/мл/106 клеток, составляя в среднем 0,5 нг/мл/106 клеток То, что концентрация ЯБМ, вызывающая активирующий эффект, аналогичный таковому ЯБС, почти на два порядка превышает концентрацию последнего, можно объяснить содержанием в препарате ЯБМ более широкого спектра белков Очевидно, что стимулирующее действие могут оказывать только протеины с Мг 75, 48, 36 и 13,5-19 кДа, но их относительная концентрация в белковом экстракте невелика. Кроме того, ЯБМ выделяли из суммарной популяции клеток головного мозга иммунизированных крыс, а не из клеток, непосредственно продуцирующих интерлейкин-2 Известно, что доля таких клеток в головном мозге незначительна (НатзсЬ, 2001), и поэтому в препаратах ЯБМ могут присутствовать факторы, подавляющие активацию гена 1Ь-2

Прямым подтверждением этого предположения являются опыты на Т-клетках линии Мгкаг, трансфецированных плазмидой рИ-2-ШС и обработанных КонА после внесения ЯБС или ЯБМ В этих опытах бьио установлено, что ФЗ-фракция с Мг 8-16 кДа, выделенная из ЯБС БРЬС-хроматографией, и тотальные препараты ЯБМ в количестве 0,3 нг/мл/105 клеток и 0,6 нг/мл/105 клеток, соответственно, увеличивали продукцию люциферазы к 8 и 16 раз выше, чем в контроле (Рис 4) Единственно разумньм объяснением, этой неодинаковой способности ЯБМ и ЯБС активировать промотор гена 1Ь-2, может быть наличие в ЯБМ компонентов АР-1 трансфактора. Благодаря этому ЯБМ могут более полноценно участвовать в формировании функционального протеинового комплекса на промоторе по сравнению с ЯБС Что же касается наличия ингибиторов активности промотора в составе ЯБМ, то аюгивация Т-клегок КонА, по-видимому, нивелирует их эффект

Сопоставляя результаты, полученные в этих двух сериях экспериментов, нельзя не отметить, что активирующий эффект ЯБС и ЯБМ на промотор гена 1Ь-2 оказывается обращенньм по сравнению с их стимулирующим воздействием на синтез мРНК 1Ь-2 в модельной системе Т-клеток Тотальные ЯБМ оказываются более мощными активаторами промотора гена 1Ь-2, чем ЯБС

с Мг 13,5-19 кДа. Вероятно, что это происходит в результате внесения излишнего количества ЯБС, т.к. впоследствии было показано, что оптимальной концентрацией ЯБС является 0,1 нг/мл/106 клеток, а не 0,3 нг/мл/106 клеток.

Рис. 4. Влияние ЯБС и ЯБМ на люциферазную активность Т-клеток линии Jurkat, трансформированных рекомбинантной плазмидой plL-2-LUC.

1 - нетрансформированные клетки, активированные КонА в отсутствие белковых факторов; 2-6 - клетки, трансформированные рекомбинантной плазмидой pJL-2-LUC: 2 - клетки, активированные КонА в отсутствие белковых факторов (контроль); 3—6 — в присутствии белковых факторов: 3-5 — FPLC-фракции ЯБС: 3 - Ф2, (0,6 нг/105 клеток), 4 - ФЗ, (0,3 ht/10s клеток), 5 - Ф4, (0,6 нг/105 клеток), 6- ЯБМ, (0,6 Hr/10s клеток).

* — достоверное отличие от контроля по t-критерию Стьюдента (р<0,05)

Способность ЯБМ и ЯБС образовывать стабильные комплексы с регуляторной ДНК гена IL-2, стимулировать синтез мРНК IL-2 в Т-лимфоцитах и активировать его промотор побуждают нас сделать вывод о проникновении этих трансфакторов в ядро и непосредственном участии их в сборке инициирующего белкового транскрипционного комплекса на промоторной ДНК. Существенно, что, проникая в ядро и взаимодействуя с регуляторной ДНК, ЯБС и ЯБМ могут восполнять потерю определенных трансфакторов гена IL-2, вызванную ингибированием путей активации транскрипцию этих факторов соответствующими воздействиями.

Аргументом в пользу данного предположения могут служить опыты по активации экспрессии гена IL-2 в Т-лимфоцитах белковыми факторами на фоне внесения в ростовую среду CsA. Из литературы известно (Serfling е.а., 2000; Macian е.а., 2001), что CsA ингибирует Са2+-зависимую фосфатазу кальцинейрин, препятствуя перемещению NFAT в ядро. Как показали эти опыты, КонА+р[Ь-2 был способен ослаблять нммуносупрессорное действие CsA только на 5%, тогда как ЯБМ и ЯБС - в среднем на 28 и 45% соответственно (Рис. 5). Очевидно, что наблюдаемый эффект обусловлен проникновением изучаемых трансфакторов в ядро, где они могут участвовать в формировании функционального белкового комплекса, заменяя недостающие NFAT. Что такая замена возможна, подтверждают и эксперименты по активации экспрессии репортерного гена LUC, находящегося под промотором гена IL-2, трансфакторами ЯБС с Мг 13,518 кДа. Вероятно, что в рассматриваемых опытах основную роль в замещении NFAT также играют ЯБМ и ЯБС с Мг 13,5-19 кДа, поскольку роль ЯБМ с Air 36 и 75 кДа в силу их

относительно малого количества представляется не столь существенной Если бы ЯБС и ЯБМ взаимодействовали с ТСЯ как антигены, они бы вызывали выброс Са2+ из внутриклеточного депо, но не могли бы стимулировать активность №АТр/с Способность ЯБС и ЯБМ поддерживать синтез мРНК 11.-2 в присутствии СзА может служить веским доказательством проникновения ЯБС и ЯБМ через плазматическую мембранну

При иммуносупрессии, вызванной иммобилизационным стрессом, Т-лимфоциты продуцировали мРНК в ответ на стимуляцию ЯБМ или ЯБС в других соотношениях, чем при иммуносупрессии, вызванной СяА При внесении ЯБС в ростовую среду Т-лимфоцитов животных, подвергнутых иммобилизационному стрессу, продукция мРНК 1Ь-2 заметно снижалась, в то время как на стимуляцию продукции мРНК П.-2 полипептидами ЯБМ иммобилизационный стресс влиял в значительно меньшей степени Стресс подавлял активирующие свойства ЯБС в среднем на 45%, а ЯБМ в среднем на 12,5% (Рис 5) Таким образом, анализ влияния иммуносупрессии, вызванной стрессом и СзА, на синтез мРНК 11,-2 под действием ЯБМ и ЯБС, показал различный характер изменений Это объясняется тем, что при стрессе повышается уровень глюкокортикоидов, которые негативно регулируют продукцию П.-2, супрессируя, по крайней мере, частично транскрипцию ОТ-кВ и АР-1 факторов (Агштап & МегаЬ, 2003) Поскольку ЯБМ содержат в своем составе сцип и с-/оз факторы, а возможно и р50 компонент №-кВ (ЯБМ с Мг 48 кДа, взаимодействующий с проксимальным участком промотора гена 1Ь-2), то они и должны оказывать более сильный протекторный эффект на синтез мРНК 11.-2 в Т-лимфоцитах мышей, претерпевших иммобилизационный стресс

СП ^ □ Е2 га

Контроль Норма СаЛ Стресс Стресс + СзА

Рис.5. Влияние иммуносупрессии на синтез мРНК ГЬ-2 Т-лнмфоцитами селезенки мыши в присутствии КонА+рП_-2, ЯБС или ЯБМ.

1 - инкубация клеток в среде без добавок (фоновые значения), 2-6 - инкубация клеток в присутствии 2 -КонА+р1Ь-2 3 - ЯБС (10 нг/мд), 4 - ЯБС (0,1 нг/мл), 5 - ЯБМ (10 нг/мл), 6 - ЯБМ (0 1 нг/мл) * — достоверное отличие от контроля по {-критерию Счъюдента (р<0,05)

Использование двух моделей иммуносупрессии, вызванной СэА и иммобилизационным стрессом, показывает, что подавление иммунного ответа в каждом случае связано о участием различных механизмов передачи трансмембранного сигнала при активации Т-лимфоцитов, в каждом из которых активируются специфические трансфакторы - регуляторы экспрессии гена Я,-2 Подтверждением этому может служить тот факт, что при комбинированной иммуносупрессии, вызванной иммобилизационным стрессом и действием СбА, происходит полное подавление продукции мРНК 1Ь-2, как в случае активации КонА + р1Ь-2, так и в ответ на стимуляцию ЯБС или ЯБМ

Все эти результаты позволяют заключить, что в экстрактах ЯБС и ЯБМ содержаться протеины, стимулирующие действие которых на экспрессию гена 11,-2 в Т-клетках опосредуется, как Са2*-зависимым, так протеин-киназными путями Так, полипептиды ЯБС и ЯБМ с Мг 13,5-19 кДа могут выступать в качестве коактиваторов гена И-2 при нарушении увеличения внутриклеточного Са2+, замещая №АТ при сборке функционального транскрипционного комплекса. В свою очередь, ЯБМ с Мг 36 и 75 кДа являются, очевидно, с-}чп и гетеродимером с-]ип/с-/о$ соответственно, в активации транскрипции которых участвуют МАР-киназьые пути и которые формируют транскрипционный фактор АР-1 (Купакю & АугисЬ, 2001) Хотя истинная природа этих полипептидов может быть установлена только после определения их полной аминокислотной последовательности, влияние не только ЯБС, но и ЯБМ на экспрессию гена 11-2 в Т-клетках, несомненно Особенно четко это проявляется в случае активации промотора гена Я.-2 полипептидами ЯБС и ЯБМ с Мг 13,5-19 кДа.

Таким образом, совокупность полученных данных подтверждает ранее высказанное нами предположение о существовании общих для ЦНС и иммунной системы механизмов регуляции экспрессии гена 1Ь-2 на уровне ядерных белковых трансакгивирующих факторов

ВЫВОДЫ

1 Из ядер клеток селезенки и ядер различных клеток (астроцитов, нейронов, глиапьных клеток) головного мозга иммунизированных крыс выделены активные фракции белков (ЯБС и ЯБМ), стимулирующих экспрессию гена интерлейкина-2 (/1.-2) Показано наличие общих фракций белков с молекулярной массой (Мг) 13,5, 17,5, 18 и 19 кДа в составе ЯБС и ЯБМ Электрофоретические спектры ЯБМ и более гетерогенны, чем спектры ЯБС Помимо белков с Мг 13 5-19 кДа в них доминируют протеины с Мг 36,48, и 75 кДа.

2 ЯБС и ЯБМ с Мг 13,5-19 кДа и ЯБМ с М- 36 и 75 кДа образуют стабильные комплексы, как с проксимальным (от + 39 до - 151 п н ), так и с дистальным фрагментом (от-152 до-548 п н ) регуляторной ДНК гена /Х-2, ЯБМ с М- 48 кДа взаимодействуют специфически только с проксимальным фрагментом промотора гена 11-2 Полипептиды с Мг 13 5 - 19 кДа и ЯЬМ с Мг 48 кДа взаимодействуют с регуляторной ДНК гена 11-2 посредством гидрофобных контактов, для ЯБМ с Мг 36 и 75 кДа эти взаимодействия электростатические

3 Вестерн-блотгинг ЯБС и ЯБМ с поликлональными антителами к c-jun и c-fos компонентам трансфакгора АР-1 показал, что ЯБС и ЯБМ с Mr 17,5, 18 и 19 кДа, а также ЯБМ с Mr 36 и 75 кДа обладают антигенными детерминантами, сходными с таковыми c-jun ЯБМ с Mr 75 кДа имеют также антигенные детерминанты, подобные таковым c-fos

4 Проведен анализ N-кондевых аминокислотных последовательностей полипептвдов ЯБС с Mr 13,5, 18 и 19 кДа и поиск гомологий в банке компьютерных данных Сравнительный анализ полученных результатов не позволяет отнести эти полипептиды к белкам определенного класса, в том числе и к гистонам

5 Показана способность ЯБС и ЯБМ стимулировать продукцию IL-2 подобного ростового фактора Т-лимфоцигами

6 Показано активирующее действие ЯБС и ЯБМ на промотор гена IL-2 в модельной системе Т-лимфоцитов линии Jurkat, трасфецированных ДНК рекомбинантной пдазмиды pIL-2-LUC

7 Методом rfof-гибридизации выявлено стимулирующее влияние ЯБС и ЯБМ на экспрессию гена [L-2 в культуре переживающих Т-лимфоцитов селезенки мыши. Установлено, что максимальное содержание мРНК IL-2 достигалось при концентрации протеинов, равной 10"8- 10"to г/мл/106 клеток, через 6 ч после начала инкубации

8 В условиях иммуносупрессии, вызванной циклоспорином А, добавление ЯБС и ЯБМ к культуре Т-лимфоцитов селезенки мыши снижает ингибирующий эффект цитостатика в среднем на 45% и 28% соответственно

9 Применение модели иммобилизационного стресса позволило установить, что в Т-лимфоцитах стрессированных животных при стимуляции KoHA+pIL-2, содержание мРНК IL-2 снижается в среднем на -30% Стресс подавлял активирующее действие ЯБМ всего на -4% при концентрации полипептидов, равной 0,1 нг/мл/106 клеток

10 Комбинированная иммуносупрессия, вызванная иммобшгазационным стрессом и воздействием циклоспорина А, приводит к полному подавлению синтеза мРНК IL-2, в том числе и при внесении в инкубационную среду ЯБС И ЯБМ

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 ТВ Kasakova OI Golovko, АА Mulberg TV Gnshtna. LS Neustroeva, EA Korneva Possible mechanisms of some peptide regulatory action ai the level of mterleukme-2 gene // 20-th Meeting of tbe FEBS - Budapest, Hungary - 1990 - P-No 106 - P 42

2 ТВ Казакова, А А Мюльберг, С В Буров, О И Головко, ТВ Гришина. ВЫ Морозов, ЛЧ Неустроева, Г В Гущин Иммуномодулируюпще пептиды, регуляция экспрессии гена ингерлейкина-2 и возможные ее механизмы // Бюлл эксп. биоп и медицины - 1991 - Т CXII, №7 - С 89-91

3 Казакова Т Б, Мюльберг А А , Бурое С В Головко О И. Гришина ТВ. Каоандашов Э.А. ¡Натекая ГС Нейро-иммунные взаимодействия на уровне гена интерлейкина-2 // XI Всеросс Симп. по струюуре и функциям клеточного ядра. - Цитология - 1993 - Т 35, №10 - С 75

4 Казакова ТВ, Гришина ТВ. Головко ОН Гущин Г В., Мюльберг А А Активация транскрипции гена ингерлейкина-2 ядерными факторами селезенки и мозга иммунизированных крыс // Бюлл. эксп биол и медицины -1994 -Т II7, №5 -С 523-527

5 Kasakova T, Burov С, Golovko О, Gnshina Т. Lebedeva L, Mulberg A , Novikova N, Perevozchicov A Role of protein and peptide immimomodulators in the regulation of interleukme-2 gene activity // In Materials of Conference Abst of6-thINWIN - Geneva -1995 -P29

6 Golovko ОI у Lebedeva L V, Novikova N S, Gnshina T V. Mulberg A A , Kasakova T В Trans-activation iunction of nuclear protems from spleen and brain cells of immunized rats // In abstr of Environmental Pollution (ICEP'95) and Neuroimmune Interaction and Environment (ICONE'95) - St -Petersburg, Russia -1995 -PI12

7 Гришина ТВ. Головко О И Активация транскрипции гена интерлейкина-2 белковыми факторами из ядер клеток головного мозга иммунизированных крыс ft Конф молодых физиолог и биохим России "Биохимические и биофизические механизмы физиологических функций" — С-Петербург — 1996 -С54

8 Гришина ТВ. Мюльберг АЛ, Головко ОИ, Новикова НС, Носов МА, Овчинникова ТВ, Потапенко НА , Корнева Е.А , Казакова Т Б Физико-химическая характеристика ядерных белков из клеток головного мозга и селезенки крыс, регулирующих экспрессию гена ингерлейкина-2 // Нейрохимия - 1996 -Т 13, выл 2 - С 90-97

9 Головко О И, Гришина ТВ. Новикова Н С, Носов МА , Мюльберг А А, Корнева Е А, Казакова ТБ Регуляция экспрессии гена ингерлейкина-2 ядерными факторами из ткани головного мозга н селезенки крыс в культуре Т-лимфоцитов в норме и при иммуносупрессии // Нейрохимия - 1996 -Т 13, вып.3 -С 195-205

10 Т Kasakova, О Golovko, Т Gnshina, М Nosov, N Novikova, A Mulberg The effects of H-2 transfactors from spleen and brain on EL-2 mRNA expression in T-cells under stressful conditions //21-th European Conference of phychosomatic Research - Bordeaux, France -1996 P42

11 Гришина ТВ. Головко О И Ядерные трансфакторы селезенки и мозга иммунизированных крыс, регулирующие экспрессию гена интерлейкина-2 в норме и при иммуносупрессии // Третья Всеросс медико-биолог конф молодых исследователей «Человек и его здоровье» - С-Петербург - 2000 С 46-47

12 Гришина ТВ, Головко ОИ, Казакова ТВ, Мюльберг А А Белковые трансактиваторы гена ингерлейкина-2, однотипные для ядер иммунокомпетентных клеток и клеток ЦНС // Вестник

СПбГУ -2000 -серЗ, вып.4, №27 -С 45-61

13 Гришина ТВ Транс-активация гена ннтерлейкина-2 ядерными белками клеток селезенки и мозга // Шестая С-Петербург Ассамблея молодых ученых и специалистов - Изд-во СПбГУ -2001-С 43

14 Гришина ТВ. Мюльберг А А, Сеник О В Белки - трансактиваторы гена интерлейкина-2, однотипные для ядер клеток селезенки и головного мозга иммунизированных крыс // сборник мат Всеросс Конф «Механизмы синаптической передачи» - Москва - 2004 -С 31

15 Мюльберг А А, Гришина Т В, Головко О И, Казакова Т Б Ядерные белки из клеток головного мозга и селезенки иммунизированных крыс как регуляторы экспрессии гена интерлейкина-2 // Сб Нервная система. «Биохимические и молекулярно-биологические основы физиологических функций» - С-Петербург Изд-во С -Петерб ун-та.-2004 -вып37 -С 199-219

16 Мюльберг АА, Гришина ТВ Цитокины как медиаторы нейроиммунных взаимодействий // Успехи физиолог наук. - Изд-во Наука - 2006 - Т 37, № 1 - С 18-27

17 Мюльберг А А, Гришина ТВ. Сеник О В Характеристики ядерных протеинов из клеток головного мозга и селезенки крыс регулирующих экспрессию гена интерлейкина-2 // Нейрохимия - 2006 -Т 23, №3 -С. 185-198

18 Мюльберг А А, Гришина ТВ, Сеник О В Ядерные белки из клеток головного мозга и селезенки иммунизированных крыс, активирующие экспрессию гена ингерлейкина-2 // Матер конф «Нейроспецифические метаболэты и этимологические основы деятельности ЦНС» - Пенза -2006 -С 103

19 A A Myulberg,, TV Gnshina. О V Senik Characteristics of nuclear proteins from cells of rat brain and spleen which regulate interleukin-2 gene expression // Neurochemical Journal - 2007 -VI, Kal -P 5365

Подписано в печать 27 09 07 Формат 60x841/16

Бумага офсетная Печать офсетная Уел печ листов 0,93 Тираж 70 экз Заказ №64

ЦОП типографии Издательства СПбГУ 199061, С-Петербург, Средний пр, д41

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гришина, Татьяна Васильевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность проблемы

1.2. Цель и задачи исследования

1.3. Научная новизна

1.4. Научно-нрактическое значение

1.5. Основные положения, выносимые на защиту

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Регуляция врожденного иммунитета центральной нервной системы

2.1.1. Регуляция иммунитета, опосредованная НРА осью Гормональная петля обратной связи между иммунной системой и ЦНС Эффекты глюкортикоидов на функции и перемещение иммунных клеток

2.2. Региональный контроль иммунитета симпаптической нервной системой

2.2.1. Эффекты с н е на адаптивный иммунитет

2.2.2. Эффекты норадреналина и нейропептида Y на врожденный иммунитет

2.3. Цитокины и центральная нервная система

2.3.1. Цитокины как медиаторы нейроиммунных взаимодействий

2.3.2. Пути активации провоспалительных цитокинов в микроглии

2.3.3. Эффекты интерлейкина-2 на ЦНС

2.4. Генеральные механизмы активации Т-лимфоцитов

2.4.1. TCR-сигнализация Т-клеточный рецептор (TCR) -2- Активация тирозин киназ Сборка сигналосомы Т-клеточного рецептора Липидные рафты в Т-клеточной сигнализации Генерация Са""-сигнала, активация транскрипционного фактора NF-A Т МАР-киназные пути, активация транскрипционных факторов NF-KB и АР-1 TCR-индуцированное изменение актинового цитоскелета

2.4.2, СО28-костимуляция

2.4.3. Иммунологический синапс Формирование SMACs. Перераспределение молекул адгезии и TCR в процессе формирования SMACs Роль TCR сигнализации в формировании SMACs

2.5. Регуляция экспрессии гена интерлейкина-

2.5.1. Интерлейкин-2 (IL-2) и его рецептор

2.5.2. Ген интерлейкина2. Регуляторные сайты и транскрипционные факторы NF-ATтранскрипционные факторы АР-1 транскрипционные факторы NF-KB транскрипционные факторы Октамер-связывающие протеины Oct-1 и Oct-

2. CREB Spl/Egrl GABP Nil-2a SATBl

2.5.3. К6-активаторы транскрипции цитокиновых генов Архитектурные протеины HMGA Транскрипционные ко-активаторы СВР ирЗОО

2.5 А. Структура хроматина минимального промотора IL-2 гена в покоящихся и активированных Т-клетках Позиционированная нуклеосома на промоторе IL-2 гена Гипотетический комплекс «энхансеосомы», собираемый на IL-2 промоторе -3- МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Трансформация клеток Е.соИ плазмидной ДНК с применением хлористого кальция

3.2. Выделение плазмидной ДНК из Е.соИ методом щелочной экстракции

3.3. Расщепление ДНК эндонуклеазами рестрикции

3.4. Электрофорез рестрикциопных фрагментов ДНК в агарозном геле

3.5. Выделение рестрикционных фрагментов ДНК из лекгоплавкой агарозы

3.6. Мечение ДНК-фрагментов дигоксигениновым методом

3.7. Выделение и фракционирование ядер

3.8. Выделение белковых экстрактов из ядер

3.9. Диск-электрофорез ЯБС и ЯБМ в полиакриламидном геле в присутствии ДДС-Na

0. Диск-электрофорез ЯБМ, ЯБС и препарата тотальных гистонов в 15% НААГ в кислых буферных растворах с присутствием 2,5 М мочевины

1. Электроблоттинг и формирование комплексов ДНК-белок

2. Вестерн-блоттинг ЯБС и ЯБМ с поликлональными антителами к компонентам трансфактора АР-

3. Нолучение и инкубация лимфоцитов

4. Реакция бласт-трансформации Т-лимфоцитов

5. Онределение люциферазной активности

6. Выделение мРНК IL-2 и оценка ее количества методом c/oгибpидизaции

7. Выявление комплекса Dig-ДНК-мРНК и Dig-ДНК-белок

8. Модель стресса

9. Статистический анализ результатов исследования

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Выделение и физико-химическая характеристика ядерных белков из ткани головного мозга и селезенки крыс -

2. Взаимодействие ЯБС и ЯБМ с ДНК промотора гена IL-

2. Локализация участков связывания

4.3. Оценка взаимодействия ЯБМ и ЯБС с поликлональными антителами к компонентам трансфактора АР-

4.4. Комитогенное действие ЯБС и ЯБМ в реакции бласттрансформации Т-лимфоцитов

4.5. Трансактивирующее действие ЯБМ и ЯБС на промотор гена IL-2 в модельной системе Jurkat клеток, трансфецированных плазмидной ДНК pIL-2-LUC

4.6. Стимуляция ЯБС и ЯБМ синтеза мРНК IL-2 в культуре Т-лимфоцитов

4.7. Действие ЯБС и ЯБМ в присутствии иммунодепрессанта циклоспорина А

4.8. Влияние ЯБС и ЯБМ на синтез мРНК IL-2 Т-лимфоцитами животных, подвергнутых иммобилизационному стрессу

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

6. ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Белковые трансактиваторы гена интерлейкина-2 из ядер клеток селезенки и головного мозга"

1.1. Актуальность проблемы Центральная нервная и иммунные системы (ЦНС и ИС) являются главными адантивными системами организма. Во время иммунного ответа ЦНС и ИС поддерживают обширные коммуникации друг с другом и этот процесс важен для поддержания гомеостаза организма. ЦНС-опосредованная регуляция иммунитета осуществляется через системные, региональные и локальные пути. Как известно, клеточные и молекулярные компоненты врожденной иммунной системы обеспечивают первую линию защиты против вторгшихся патогенов (Cook е.а., 2004) через узнавание патоген- ассоциированных молекулярных паттернов и начальные неспецифические иммунные и гуморальные ответы (Beutler, 2005). Периферическая нервная система обеспечивает эту первую линию обороны по локальным сайтам воспаления посредством высвобождения сенсорными нервными окончаниями нейропептидов (кортикотропин-релизинг гормон, субстанция Р и CGRP), которые обычно увеличивают локальные воспалительные ответы, стимулируя медиаторы продукцию и цитокины провоспалительных впоследствии цитокинов. Иммунные врожденной высвобождаются иммунной системой и включают региональные нервные и системные нейроэндокринные ответы. Симпатическая (или адренэргическая) нервная система (СНС) и парасимпатическая (или холинэргическая) нервная система (ПНС) обычно регулирует воспаление па региональном уровне посредством иннервации иммунных органов и клеток. Будучи активированной СНС поставляет преимущественно несинаптически нейротранситтеры и ко-трансмиттеры (норадреналин, АТР и аденозин) иммунным органам и клеткам. Эту же роль выполняет мозговой слой надпочечников, секретирующий свободно циркулирующий адреналин. Активируя различные адренэргические -10- и пуринэргические рецепторы иммунных клеток, эти трансмиттеры стимулируют продукцию анти- или цровоспалительных цитокинов и N 0 Поскольку регуляция освобождения нейротрансмиттеров из нервных окончаний осуществляется по принципу обратной связи, изменение содержания любого из них в экстраклеточном пространстве вносит вклад в конечный иммунологический эффект (Hasko Szabo, 1998; Szelenyi, 2001). Этот эффект в основном сводится к подавлению врожденных иммунных ответов. Аналогичное воздействие на врожденный иммунитете" оказывает ПНС посредством освобождения ацетилхолина из эфферентных фибрилл n.vagus. Являясь главным нейротрансмиттером ПНС, ацетилхолин рецепторами связывается и подавляет с никтиноподобными и мускариновыми цитокинов продукцию провоспалительных иммунными клетками и органами. Паконец, нейроэндокринные ответы контролируют воспаление на системном уровне посредством гипоталамусгипофиз-надпочечники (ПРА) оси через антивоспалительные эффекты глюкокортикоидов, освобождаемых из коры надпочечников. Активность ИРА-ОСИ напрямую зависит от уровня провоспалительных цитокинов в головном мозгу. Благодаря этому формируется нейроэндокринная петля обратной связи между ЦНС и иммунной системой (Elenkov е.а., 2000; Steinman, 2004; Stemberg, 2006). Цитокины, синтезируемые в головном мозге и поставляемые иммунной системой, осуществляют взаимодействия между иммунной системой и ЦНС. Они контролируют множество физиологических и патологических процессов в головном мозге, т.е. являются как иммунорегуляторами, так и пейромодуляторами. Взаимодействуя с ЦНС различными путями, цитокины, в первую очередь провоспалительные, вовлекаются в нейротоксические и нейродегенеративные повреждения ЦНС и нарушения ее физиологических функций. Они вызывают «стресс-подобные» эффекты в ЦНС, влияют на активность НРА-оси, синтез и утилизацию моноаминовых нейротрансмиттеров (дофамина, серотонина и норадреналина) и продукцию -11 вторичных мессенджеров (N0 и простагландинов). Эти воздействия могут осуществлять перекрестную сенсибилизацию, что усиливает нейроэндокринные эффекты в ответ на более поздние стрессорные вызовы. Важную роль в ряде этих процессов играют микроглия, астроциты и взаимодействия гипоталамуса и передней доли гипофиза, определяющие Thl и Th2 ответы (Aloisi, 2001; Szelenyi, 2001; Hanisch, 2002; Anisman Merali, 2003; Мюльберг, Гришина, 2006). Таким образом, нейроиммунные взаимодействия изучены к настоящему времени достаточно полно и всесторонне. Однако из поля зрения многих исследователей как выпал анализ такой аспект проблемы нейроиммуномодуляции, механизмов нейроиммунных взаимодействий на уровне регуляции транскрипции цитокиновых генов специфическими белковыми трансфакторами. Хорошей моделью для изучения подобных механизмов может служить ген 1L-2, который кодирует структуру ключевого медиатора иммунной системы и важного модулятора нейрональной и нейроэндокринных функций (Hanisch, 2001; Gaffen Liu, 2004; Steinman, 2004). Из литературы известны трансфакторы гена IL-2 (NFAT, АР-1, NF-KB, Oct и другие), нуклеотидные последовательности, узнаваемые этими факторами, и некоторые особенности их новедения в лимфоидных клетках (Stemberg, 2006). Известно также, что эти трансактиваторы представляют собой высокомолекулярные протеины, образующие высокоэффективный транскрипционный комплекс, и что в состав этого комплекса входят еще неидентифицированые белковые факторы с относительно низкой молекулярной массой (Jain е.а., 1993; Jassen е.а., 1993; Garrity е.а., 1994). Состав и природа транскрипционного комплекса гена 1L-2 в клетках ЦНС до конца не изучены. Более того, структурная идентичность IL-2 и его рецепторов в клетках иммунной системы и клетках ЦИС остается предметом дискуссии (Hanisch, 2001). К настоящему времени в нейрональных и глиальных клетках головного мозга наиболее полно изучены -12- киназные пути активации транскрипционных факторов АР-1 (c-jun и c-fos), NF-AT и NF-KB (Ryu е.а., 2000; Hanisch, 2001; Hidding е.а., 2002; Koistinaho е.а., 2002), нейропротекторные и нейродегенеративные эффекты которых исследованы недостаточно и зависят от множества молекулярных взаимодействий в ЦНС (Herdegen Waetzig, 2001). Однако остается не ясным, обусловлены ли эти эффекты участием перечисленных трансфакторов в активации гена IL-2. Более того, эндогенный синтез IL-2 в ЦНС остается предметом дискуссии (Hanisch, 2001; 2002). Не исключено, что разрушение гематоэнцефалического барьера периферическими провосналительными цитокинами IL-ip и TNF-a может позволить циркулирующим в крови цитокинам, в том числе и IL-2, проникнуть через паренхиму мозга и получить доступ к их рецепторам, экспрессируемым на популяциях пейрональных и глиальных клеток (Aloisi е.а., 2000; Hanisch, 2001). В связи с вышеизложенным представлялось актуальным исследовать возможность осуществления взаимодействия между ЦНС и ИС на молеуклярном уровне через регуляцию экспрессии гена IL-2 белковыми факторами. 1.2. Цель и задачи исследования Цель данной работы состоит в выявлении и изучении природы и функции белковых трансфакторов, являющихся общими для клеток нервной и иммунной систем и осуществляющих регуляцию экспрессии гена 1L-2 в Тлимфоцитах. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи: 1. Выделить и охарактеризовать белки из ядер различных клеток головного мозга (астроциты, нейроны, микроглия) и ядер клеток селезенки иммунизированных крыс, способные активировать экспрессию гена интерлейкина-2; -13- Изучить способность выделенных полипептидов к формированию стабильных и специфических комплексов с проксимальным (от +39 до -151 п.н.) и дистальным (от -152 до -548 п.н.) участками промотора гена ИЛ-2 и оценить природу их взаимодействия с этими участками; 3. Оценить природу ядерных белков из клеток селезенки и головного мозга иммунизированных крыс посредством вестерн-блотт гибридизации с ноликлональпыми антителами к трансфакторам семейств АР-1 {c-fos и c-jun). 4. Осуществить анализаГ" N-концевых аминокислотных последовательностей полипептидов, общих для клеток нервной и иммунной систем, с последующим поиском гомологии в банке компьютерных данных по первичной структуре белков. 5. Исследовать действие 2-подобного выделенных фактора белков на продукцию ILв культуре Т-лимфоцитов ростового селезенки мыши; 6. Изучить роль ядерных белков из клеток селезенки и головного мозга иммунизированных крыс в регуляции активности промотора гена IL-2 в Т-клетках линии Jurkat, трансфецированных плазмидой pIL-2LUC; 1. Оценить влияние белковых факторов на синтез мРНК IL-2 в культуре Т-лимфоцитов селезенки мыши; 8. Исследовать механизм действия выделенных белков при иммуносупрессии, вызванной иммунодепрессантом циклоспорином А (CsA) и иммобилизационным стрессом; -14- .3. Научная новизна результате научно-исследовательской работы из ядер клеток селезенки и ядер различных клеток головного мозга иммунизированных крыс были внервые выделены и охарактеризованы белки, стимулирующих" экспрессию гена интерлейкина-2 {IL-2) в культуре Т-лимфоцитов in vitro на уровне синтеза мРНК IL-2. Фракции ядерных белков из клеток селезенки (ЯБС) и различных клеток головного мозга (ЯБМ) содержат нолинентиды с одинаковыми молекулярными массами {Mr) 13,5, 17,5, 18 и 19 кДа. Эти полипеитиды образуют стабильные и специфические комплексы, как с проксимальным (от +39 до -151 п.н,), так и с дистальным (от -152 до -548 п.н.) участком промотора гена IL-2 в присутствии гомологичной или гетерологичной конкурентной ДНК и при высоких ионных силах. Сопоставление электрофоретических спектров белков, выделенных из ядер различных клеток головного мозга (астроцитов, нейронов, глиальных клеток), показало, что они качественно одинаковы, не отличаются от спектра полипептидов тотальных ЯБМ и более гетерогепны, чем спектры ЯБС. ЯБМ с Mr 36 и 75 кДа формируют специфический комплекс, как с проксимальным, так и с дистальным участком промотора гена IL-2; ЯБМ с Mr 48 кДа взаимодействуют специфически только с проксимальным участком промотора гена IL-2. Полипептиды с Mr 13,5 19 кДа и ЯБМ с Mr 48 кДа взаимодействуют с регуляторной ДНК IL-2 гена посредством гидрофобных контактов; для ЯБМ с Mr 36 и 75 кДа эти взаимодействия электростатические. Вестерн-блоттинг ЯБС и ЯБМ с поликлональными антителами к c-jun и c-fos показал, что ЯБС и ЯБМ с Mr 17,5, 18 и 19 кДа, а также ЯБМ с Mr 36 и 75 кДа обладают антигенными детерминантами, сходными с таковыми c-jun. ЯБМ с Mr 75 кДа имеют также антигенные детерминанты, подобные таковым c-fos. Вестерн-блоттинг ЯБС и ЯБМ с поликлональными антителами -15- к компонентам трансфактора АР-1, анализ N-концевых аминокислотных последовательностей полииептидов с Mr 13,5, 18 и 19 к Да в составе ЯБС и поиск гомологии в банке компьютерных данных по первичной структуре белков позволил сделать ряд заключений о природе этих полипептидов. Установлено, что ЯБС и ЯБМ активируют IL-2 промотор репортерного гена pIL-2-LUC, трансфецированного в клетки Jurkat и стимулируют синтез мРНК IL-2 в культуре переживающих Т-лимфоцитов в 3,7 и 2,3 раза эффективнее, чем в контроле. Применение двух моделей иммуносупрессии, вызванной действием цитостатика CsA и иммобилизационным стрессом показало, что подавление иммунного ответа в каждом случае связано с воздействием на различные механизмы передачи трансмембранного сигнала при активации Тлимфоцитов и на продукцию специфических трансфакторов IL-2 гена. При иммуносупрессии, вызванной CsA, ЯБС и ЯБМ ослабляли негативное действие цитостатика и поддерживали содержание мРНК IL-2 на достаточно высоком уровне. При иммобилизационном стрессе ЯБС и ЯБМ обладают некоторым стресс-протекторным действием. 1.4. Научно-практическое значение Полученные данные о ЯБС и ЯБМ, обладающих специфическим сродством к промоторной области гена интерлейкина-2 и регулирующих экспрессию гена IL-2 на уровне транскрипции мРНК, после расшифровки Nконцевых аминокислотных последовательностей и дальнейшего уточнения первичной структуры белков могут быть использованы при создании препаратов коррегирующих экспрессию гена IL-2 при иммунодефицитах, вызванных различными патологическими факторами. Возможно, применение аналогов белковых трансфакторов обеспечить -16- участников нейроиммунных коррекцию взаимодействий может многонаправленную процессов на уровне активации экспрессии гена при нарушении функций нервной и иммунной систем. 1.5. Основные положения, выносимые на защиту 1. Фракции ядерных белков из клеток селезенки (ЯБС) и различных клеток головного мозга (ЯБМ) иммунизированных крыс содержат общие полипептиды с молекулярными массами (Mr) 13,5, 17,5, 18 и 19 кДа, обладающие способностью специфически взаимодействовать ш vitro с регуляторной ДНК гена интерлейкина-2. 2. ЯБС и ЯБМ обладают способностью стимулировать продукцию IL-2нодобного ростового фактора и активировать экспрессию гена люциферазы, находящегося под промотором гена IL-2. 3. Ядерные белки из клеток селезенки и головного мозга иммунизированных крыс стимулируют синтез мРНК IL-2 в культуре переживающих Т-лимфоцитов селезенки мыщи. 4. ЯБС и ЯБМ оказывают защитный эффект при иммуносунрессии, вызванной иммунодепрессантом циклоспорином А. ЯБМ также показывают некоторый стресс-протекторный эффект. 5. Ядерные белки из клеток селезенки и различных клеток головного мозга иммунизированных крыс имеют антигенные детерминанты, сходные с таковыми транскрипционных факторов семейства АР-1 (c-fos и c-jun). -17-

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гришина, Татьяна Васильевна

6. выводы

1. Из ядер клеток селезенки и ядер различных клеток (астроцитов, нейронов, глиальных клеток) головного мозга иммунизированных крыс выделены активные фракции белков (ЯБС и ЯБМ), стимулирующих экспрессию гена интерлейкина-2 (1Ь-2). Показано наличие общих фракций белков с молекулярной массой (Мг) 13,5, 17,5, 18 и 19 кДа в составе ЯБС и ЯБМ. Электрофоретические спектры ЯБМ и более гетерогенны, чем спектры ЯБС. Помимо белков с Мг 13,5-19 кДа в них доминируют протеины с Мг 36, 48, и 75 кДа.

2. ЯБС и ЯБМ с Мг 13,5-19 кДа и ЯБМ с Мг 36 и 75 кДа образуют стабильные комплексы, как с проксимальным (от + 39 до - 151 п.н.), так и с дистальным фрагментом (от -152 до -548 п.н.) регуляторной ДНК гена 1Ь-2; ЯБМ с Мг 48 кДа взаимодействуют специфически только с проксимальным фрагментом промотора гена 1Ь-2. Полипептиды с Мг 13,5 - 19 кДа и ЯБМ с Мг 48 кДа взаимодействуют с регуляторной ДНК гена 1Ь-2 посредством гидрофобных контактов; для ЯБМ с Мг 36 и 75 кДа эти взаимодействия электростатические.

3. Вестерн-блоттинг ЯБС и ЯБМ с поликлональными антителами к с-]ип и с-^оу компонентам трансфактора АР-1 показал, что ЯБС и ЯБМ с Мг 17,5, 18 и 19 кДа, а также ЯБМ с Мг 36 и 75 кДа обладают антигенными детерминантами, сходными с таковыми с-]ип. ЯБМ с Мг 75 кДа имеют также антигенные детерминанты, подобные таковым с-/с>5.

4. Проведен анализ >1-концевых аминокислотных последовательностей полипептидов ЯБС с Мг 13,5, 18 и 19 кДа и поиск гомологий в банке компьютерных данных. Сравнительный анализ полученных результатов не позволяет отнести эти полипептиды к белкам определенного класса, в том числе и к гистонам.

5. Показана способность ЯБС и ЯБМ стимулировать продукцию 1Ь-2 подобного ростового фактора Т-лимфоцитами.

-147

6. Показано активирующее действие ЯБС и ЯБМ на промотор гена IL-2 в модельной системе Т-лимфоцитов линии Jurkat, трасфецированных ДНК рекомбинантной плазмидыpIL-2-LUC.

7. Методом ¿/о?-гибридизации выявлено стимулирующее влияние ЯБС и ЯБМ на экспрессию гена IL-2 в культуре переживающих Т-лимфоцитов селезенки мыши. Установлено, что максимальное содержание мРНК IL-2 достигалось при концентрации протеинов, равной 10"8- Ю"10 г/мл/106 клеток, через 6 ч после начала инкубации.

8. В условиях иммуносупрессии, вызванной циклоспорином А, добавление ЯБС и ЯБМ к культуре Т-лимфоцитов селезенки мыши снижает ингибирующий эффект цитостатика в среднем на 45% и 28% соответственно.

9. Применение модели иммобилизационного стресса позволило установить, что в Т-лимфоцитах стрессированных животных при стимуляции КонА+р1Ь-2, содержание мРНК IL-2 снижается в среднем на ~ 30%. Стресс подавлял активирующее действие ЯБМ всего на ~ 4% при концентрации полипептидов, равной 0,1 нг/мл/106 клеток.

10. Комбинированная иммуносупрессия, вызванная иммобилизационным стрессом и воздействием циклоспорина А, приводит к полному подавлению синтеза мРНК IL-2, в том числе и при внесении в инкубационную среду ЯБС И ЯБМ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гришина, Татьяна Васильевна, Санкт-Петербург

1. Глотов Н.В., Животинский Л.А., Хоеанов Н.В., Хромов-Борисов H.H. Биометрия // Л.: Изд-во ЛГУ, 1982. 264 с.

2. Головко О.И., Гришина Т.В., Мюлъберг A.A. и др. Регуляция экспрессии гена интерлейкина-2 ядерными факторами из ткани головного мозга и селезенки крыс в культуре Т-лимфоцитов в норме и при иммуносупрессии // Нейрохимия. 1996. Т. 13. вып. 3. С. 195-205.

3. Гранстайн М.М. Гистоны регуляторы генов // В мире науки. 1992. № 11-12. С. 150-158.

4. Гришина Т.В., Головко О.И., Казакова Т.Б., Мюлъберг A.A. Белковые трансактиваторы гена интерлейкина-2, однотипные для ядер иммунокомпетентных клеток и клеток ЦНС // Вестник СПбГУ. 2000. сер. 3. вып. 4. №27. С. 44-61.

5. Гришина Т.В., Мюлъберг A.A., Головко О.И. и др. Физико-химическая характеристика ядерных белков из клеток ткани головного мозга и селезенки крыс, регулирующих экспрессию гена интерлейкина-2 // Нейрохимия. 1996. Т. 13. вып. 2. С. 90-97.

6. Гущин Г.В. Адренергические и холинергические механизмы регуляции функций лимфоидных клеток // Дисс. д-ра мед. наук. С-Петербург. 1992. 197 с.

7. Гущин Г.В., Неустроева JI.4. Продукция интерлейкина-2 в ходе иммунного ответа у мышей // Всесоюзн. конф. «Стресс и иммунитет». Л. 1989. С. 115-116.

8. Казакова Т.Б., Гришина Т.В., Головко О.И., Мюлъберг A.A., и др. Активация транскрипции гена интерлейкина-2 ядерными факторами селезенки и мозга иммунизированных крыс // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1994. Т. 117. № 5. С. 523-526.

9. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование // М. Мир. 1984. С. 480.

10. Мюлъберг A.A., Гришина Т.В. Цитокины как медиаторы нейроиммунных взаимодействий // Успехи физиологических наук. 2006. Т. 37. № 1. С. 1827.

11. Мюлъберг A.A., Гришина Т.В., Сеник О.В. Характеристики ядерных протеинов из клеток головного мозга и селезенки крыс, регулирующих экспрессию гена интерлейкина-2 // Нейрохимия. 2006. Т.23 № 3. С. 185198.

12. Agarwal S.K., Marshall G.D. Dexamethasone promotes type 2 cytokine production primarily through inhibition of type 1 cytokines // J. Interferon Cytokine Res. 2001. V. 21. № 3. P. 147-155.

13. Ait-Si-Ali S., Carlisi D., Ramirez S. et al. Phosphorylation by p44 MAP Kinase/ERKl stimulates CBP histone acetyl transferase activity in vitro // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. V. 262. № 1. P. 157-162.

14. Ait-Si-Ali S., Ramirez S., Barre F.Xet al. Histone acetyltransferase activity of CBP is controlled by cycle-dependent kinases and oncoprotein El A // Nature. 1998. V. 396. № 6707. P. 184-186.

15. Aloisi F. Immune function of microglia// Glia. 2001. V. 36. № 2. P. 165-179.

16. Aloisi F., Penna G., Polazzi E. et al. CD40-CD154 interaction and IFN-gamma are required for IL-12 but not prostaglandin E2 secretion by microglia during antigen presentation to Thl cells // J. Immunol. 1999. V. 162. № 3. P. 1384-1391.

17. Aloisi F., Ria F., Adorini L. Regulation of T-cell responses by CNS antigen-presenting cells: different roles for microglia and astrocytes // Immunol. Today. 2000. V. 21. № 3. P. 141-147.

18. Anisman H., Kokkinidis L., Merali Z. Interleukin-2 decreases accumbal dopamine efflux and responding for rewarding lateral hypothalamic stimulation // Brain Res. 1996. V. 731. № 1-2. P. 1-11.

19. Anisman H., Merali Z. Cytokines, stress and depressive illness: brain-immune interactions // Ann. Med. 2003. V. 35. № 1. P. 2-11.

20. Anisman H., Merali Z. Cytokines, stress, and depressive illness // Brain. Behav. Immun. 2002. V. 16. № 5. P. 513-524.

21. Anselmi C., Bocchinfuso G., De Santis P. et al. A theoretical model for the prediction of sequence-dependent nucleosome thermodynamic stability // Biophys. J. 2000. V. 79. № 2. P. 601-613.

22. Asensio V.C., Campbell I.L. Chemokines in the CNS: plurifunctional mediators in diverse states // Trends Neurosci. 1999. V. 22. № 11. P. 504-512.

23. Atsuta J., Plitt J., Bochner B.S., Schleimer R.P. Inhibition of VCAM-1 expression in human bronchial epithelial cells by glucocorticoids // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. V. 20. № 4. P. 643-650.

24. Attema J.L., Reeves R., Murray V. et al. The human IL-2 gene promoter can assemble a positioned nucleosome that becomes remodeled upon T cell activation // J. Immunol. 2002. V. 169. № 5. P. 2466-2476.

25. Auphan N., DiDonato J.A., Rosette C. et al. Immunosuppression by glucocorticoids: inhibition of NF-kappa B activity through induction of I kappa B synthesis // Science. 1995. V. 270. № 5234. P. 286-290.

26. Bagga R., Michalowski S., Sabnis R. et al. HMG I/Y regulates long-range enhancer-dependent transcription on DNA and chromatin by changes in DNA topology //Nucleic Acids Res. 2000. V. 28. № 13. P. 2541-2550.

27. Balasingam V., Tejada-Berges T., Wright E. et al. Reactive astrogliosis in the neonatal mouse brain and its modulation by cytokines // J. Neurosci. 1994. V. 14. № 2. P. 846-856.

28. Batchelor A.H., Piper D.E., de la Brousse F.C. et al. The structure of GABPalpha/beta: an ETS domain- ankyrin repeat heterodimer bound to DNA // Science. 1998. V. 279. № 5353. P. 1037-1041.

29. Bazan J.F. Unraveling the structure of IL-2 // Science. 1992. V. 257. № 5068. P. 410-413.

30. Beck R.D., King M.A., Ha G.K et al. IL-2 deficiency results in altered septal and hippocampal cytoarchitecture: relation to development and neurotrophins //J. Neuroimmunol. 2005a. V. 160. № 1-2. P. 146-153.

31. Beck R.D., Wasserfall C., Ha G.K. et al. Changes in hippocampal IL-15, related cytokines, and neurogenesis in IL-2 deficient mice // Brain Res. 2005b. V. 1041. №2. P. 223-230.

32. Benschop R.J., Nieuwenhuis E.E., Tromp E.A. et al. Effects of beta-adrenergic blockade on immunologic and cardiovascular changes induced by mental stress // Circulation. 1994. V. 89. № 2. P. 762-769.

33. Benveniste E.N., Herman P.K., Whitaker J.N. Myelin basic protein-specific RNA levels in interleukin-2-stimulated oligodendracytes // J. Neurochem. 1987. V. 49. №4. P. 1274-1279.

34. Benveniste E.N., Merrill J.E. Stimulation of oligodendraglial proliferation and maturation by interleukine-2 //Nature. 1986. V. 321. № 6070. P. 610-613.

35. Benveniste E.N., Nguyen V.T., O'Keefe G.M. Immunological aspects of microglia: relevance to Alzheimer's disease // Neurochem. Int. 2001. V. 39 № 5-6. P. 381-391.

36. Beutler B. The Toll-like receptors: analysis by forward genetic methods // Immunogenetics. 2005. V. 57. № 6. P. 385-392.

37. Bianchi M., Panerai A.E. Interleukin-2 enhances scopolamine-induced amnesia and hyperactivity in the mouse // Neuroreport. 1993. V. 4. № 8. P. 1046-1048.

38. Blobel G., Potter V. Nuclei from rat liver: isolation method that combines purity with high yield // Science. 1966. V. 154. № 757. p. 1662-1665.

39. Bodor J., Bodorova J., Gress R.E. Suppression of T cell function: a potential role for transcriptional repressor ICER // J. Leukoc. Biol. 2000. V. 67. № 6. P. 774-779.

40. Boehringer Mannheim // Applications Manual: DIG-DNA Labeling and Detection nonradioactive (kit). 1990. V. 8. №. 1093657. P.63.

41. Bordoli L., Husser S., Luthi U. et al Functional analysis of the p300 acetyltransferase domain: the PHD finger of p300 but not of CBP is dispensable for enzymatic activity // Nucleic Acids Res. 2001. V. 29. № 21. P. 4462-4471.

42. Bromley S.K., Burack W.R., Johnson K.G. et al. The immunological synapse //Annu. Rev. Immunol. 2001. V. 19. P. 375-396.

43. BrouillardF., Cremisi C.E. Concomitant increase of histone acetyltransferase activity and degradation of p300 during retinoic acid-induced differentiation of F9 cells //J. Biol. Chem. 2003. V. 278. № 41. P. 39509-39516.

44. Brown D.A., London E. Structure and function of sphingolipid- and cholesterol-rich membrane rafts // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. № 23. P. 17221-17224.

45. Brunetti A., Manfioletti G., Chiefari E. et al Transcriptional regulation of human insulin receptor gene by the high-mobility group protein HMGI(Y) // FASEB J. 2001. V. 15. № 2. P. 492-500.

46. Bugeon L., Dallman M.J. Costimulation of T cells // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. V. 62. № 4. Pt 2. P. S164-S168.

47. Bustelo X.R. Vav proteins, adaptors and cell signaling // Oncogene. 2001. V. 20. №44. P. 6372-6381.

48. Bustin M. Regulation of DNA-dependent activities by the functional motifs of the high-mobility-group chromosomal proteins // Mol. Cell Biol. 1999. V. 19. № 8. P. 5237-5246.

49. Butscher W.G., Haggerty C.M., Chaudhry S., Gardner K. Targeting of p300 to the interleukin-2 promoter via CREB-Rel cross-talk during mitogen and oncogenic molecular signaling in activated T-cells // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. № 29. P. 27647-27656.

50. Butscher W.G., Powers C., Olive M. et al Coordinate transactivation of the interleukin-2 CD28 response element by c-Rel and ATF-1/CREB2 // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. № 1. P. 552-560.

51. Cantrell D. T cell antigen receptor signal transduction pathways // Annu. Rev. Immunol. 1996. V. 14. P. 259-274.

52. Carey M. The enhanceosome and transcriptional synergy // Cell. 1998. V. 92. № 1. P. 5-8.

53. Catez F., Brown D.T., Misteli T., Bustin M. Competition between histone HI and HMGN proteins for chromatin binding sites // EMBO Rep. 2002. V. 3. № 8. P. 760-766.

54. Chan H.M., La Thangue N.B. p300/CBP proteins: HATs for transcriptional bridges and scaffolds // J. Cell Sci. 2001. V. 114. Pt 13. P. 2363-2373.

55. Chen C.J., Deng Z., Kim A.Y. et al. Stimulation of CREB binding protein nucleosomal histone acetyltransferase activity by a class of transcriptional activators // Mol. Cell Biol. 2001. V. 21. № 2. P. 476-487.

56. Chen H., Lin R.J., Xie W. et al. Regulation of hormone-induced histone hyperacetylation and gene activation via acetylation of an acetylase // Cell. 1999. V. 98. №5. P. 675-686.

57. Chen L., Glover J.N., Hogan P.G. et al. Structure of the DNA-binding domains from NFAT, Fos and Jun bound specifically to DNA // Nature. 1998. V. 392. №6671. P. 42-48.

58. Cherukuri A., Dykstra M., Pierce S.K. Floating the raft hypothesis: lipid rafts play a role in immune cell activation // Immunity. 2001. V. 14. № 6. P. 657660.

59. Chinenov Y., Kerppola T.K. Close encounters of many kinds: Fos-Jun interactions that mediate transcription regulatory specificity // Oncogene. 2001. V. 20. № 19. P. 2438-2452.

60. Cho H., Orphanides G., Sun X. et al. A human RNA polymerase II complex containing factors that modify chromatin structure // Mol. Cell Biol. 1998. V. 18. №9. P. 5355-5363.

61. Chomezynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem. 1987. V. 162. № LP. 156-159.

62. Comb M,, Birnberg N.C., Seasholtz A. et al. A cyclic AMP- and phorbol ester-inducible DNA element // Nature. 1986. V. 323. № 6086. P. 353-356.

63. Cook D.N., Pisetsky D.S., Schwartz D.A. Toll-like receptors in the pathogenesis of human disease // Nat. Immunol. 2004. V. 5. № 10. P. 975979.

64. Crabtree G.R., Olson E.N. NFAT signaling: choreographing the social lives of cells // Cell. 2002. V. 109. P. S67-S79.

65. Craig J.C., Schumacher M.A., Mansoor S.E. et al.Consensus and variant cAMP-regulated enhancers have distinct CREB-binding properties // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. № 15. P. 11719-11728.

66. Dantzer R., Aubert A., Bluthe R.M. et al. Mechanisms of the behavioural effects of cytokines // Adv. Exp. Med. Biol. 1999. V. 461. P. 83-105.

67. Davidson D., Bakinowski M., Thomas M.L. et al. Phosphorylation-dependent regulation of T-cell activation by PAG/Cbp, a lipid raft-associated transmembrane adaptor//Mol. Cell Biol. 2003. V. 23. № 6. P. 2017-2028.

68. Davis R.J. Signal transduction by the JNK group of MAP kinases // Cell. 2000. V. 103. P. 239-252.

69. De Cesare D., Fimia G.M., Sassone-Corsi P. Signaling routes to CREM and CREB: plasticity in transcriptional activation // Trends Biochem. Sci. 1999. V. 24. №7. P. 281-285.

70. Decker E.L., Skerka C., Zipfel P.F. The early growth response protein (EGR-1) regulates interleukin-2 transcription by synergistic interaction with the nuclear factor of activated T cells // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. № 41. P. 26923-26930.

71. Delon J., Germain R.N. Information transfer at the immunological synapse // Curr. Biol. 2000. V. 10. № 24. P. R923-R933.

72. Devos R., Plaetinck G., Cheroutre H. et al. Molecular cloning of human interleukin 2 cDNA and its expression in E. coli // Nucleic Acids Res. 1983. V. 11. № 13. P. 4307-4323.

73. Dhalluin C., Carlson J.E., Zeng L. et al. Structure and ligand of a histone acetyltransferasebromodomain //Nature. 1999. V. 399. № 6735. P. 491-496.

74. Dunn C., Wiltshire C., MacLaren A., Gillespie D.A. Molecular mechanism and biological functions of c-Jun N-terminal kinase signalling via the c-Jun transcription factor// Cell Signal. 2002. V. 14. № 7. p. 585-593.

75. Dustin M.L. Role of adhesion molecules in activation signaling in T lymphocytes //J. Clin. Immunol. 2001. V. 21. № 4. P. 258-263.

76. Dustin M.L., Cooper J.A. The immunological synapse and the actin cytoskeleton: molecular hardware for T cell signaling // Nature Immunology. 2000. V. 1. № 1. P. 23-29.

77. Eckenberg R., Moreau J.L., Melnyk O., Theze J. IL-2R beta agonist PI-30 acts in synergy with IL-2, IL-4, IL-9, and IL-15: biological and molecular effects //J. Immunol. 2000. V. 165. № 8. P. 4312-4318.

78. Efrat S., Kaempfer R. Control of biologigically active interleukin-2 messenger RNA formation in induced human lymphocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. V. 81. P. 2601-2605.

79. Elenkov I. J., Wilder R.L., Chrousos G.P., Vizi E.S. The sympathetic nerve-an integrative interface between two supersystems: the brain and the immune system // Pharmacol Rev. 2000. V. 52. № 4. P. 595-638.

80. Frauwirth K.A., Thompson C.B. Regulation of T lymphocyte metabolism // J. Immunol. 2004. V. 172. № 8. P. 4661-4665.

81. Fujita 7!, Shibuya H., Ohashi T. et al. Regulation of human interleukin-2 gene: functional DNA sequences in the 5' flanking region for the gene expression in activated T lymphocytes // Cell. 1986. V. 46. № 3. P. 401-405.

82. Gaffen S.L., Liu K.D. Overview of interleukin-2 function, production and clinical applications // Cytokine. 2004. V. 28. № 3. P. 109-123.

83. Garrity P., Chen D., Rothenberg E., Wold B. II Interleukin-2 transcription is regulated in vivo at the level of coordinated binding of both constitutive and regulated factors. // Mol. Cell. Biol. 1994. V. 14. № 3. P. 2159-2169.

84. Gashler A., Sukhatme V.P. Early growth response protein 1 (Egr-1): prototype of a zinc-finger family of transcription factors // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 1995. V. 50. P. 191-224.

85. Germain R.N. The T cell receptor for antigen: signaling and ligand discrimination//!. Biol. Chem. 2001. V. 276. № 38, P. 35223-35226.

86. Ghosh S., Karin M. Missing pieces in the NF-kB puzzle // Cell. 2002. V. 109. P. S81-S96.

87. Ghosh S., May M.J., Kopp E.B. NF-kappa B and Rel proteins: evolutionarily conserved mediators of immune responses // Annu. Rev. Immunol. 1998. V. 16. P. 225-260.

88. Girdwood D., Bumpass D., Vaughan O.A. et al P300 transcriptional repression is mediated by SUMO modification // Mol. Cell. 2003. V. 11. № 4. P. 1043-1054.

89. Glabinski A.R., Ransohoff R.M. Chemokines and chemokine receptors in CNS pathology // J. Neurovirol. 1999. V. 5. № 1. P. 3-12.

90. Glover J.J., Harrison S.C. Crystal structure of the heterodimeric bZIP transcription factor c-Fos-c-Jun bound to DNA 11 Nature. 1995. V. 373 № 6511. P. 257-261.

91. Goldsmith M.A., Lai S.Y., Xu W. et al. Growth signal transduction by the human interleukin-2 receptor requires cytoplasmic tyrosines of the beta chain and non-tyrosine residues of the gamma c chain // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. №37. P. 21729-21737.

92. Goldsmith, M.A., Greene W.C. in The Cytokine Handbook // Academic Press. Ed. Thomson A. London. 1994. P. 57-80.

93. Gonzalez G.A., Montminy M.R. Cyclic AMP stimulates somatostatin gene transcription by phosphorylation of CREB at serine 133 // Cell. 1989. V. 59. № 4. P. 675-680.

94. Granucci F., Vizzardelli C., Pavelka N. et al. Inducible IL-2 production by dendritic cells revealed by global gene expression analysis // Nat. Immunol. 2001. V. 2. №9. P. 882-888.

95. Haddad J.J., Saade N.E., Safieh-Garabedian B. Cytokines and neuro-immune-endocrine interactions: a role for the hypothalamic-pituitary-adrenal revolving axis // J. Neuroimmunol. 2002. V. 133. № 1-2. P. 1-19.

96. Hanisch U.K. II Effects of interleukin-2 and interferons on the nervous system. // In: Ader R., Felten D.L., Cohen N., edsitors. Psychoneuroimmunology. San Diego: Academic Press. 2001. P. 585-631.

97. Hanisch U.K. Microglia as a source and target of cytokines // Glia. 2002. V. 40. №2. P. 140-155.

98. Hanisch U.K., Neuhaus J., Rowe W. et al. Neurotoxic consequences of central long-term administration of interleukin-2 in rats // Neuroscience. 1997. V. 79. № 3. P. 799-818.

99. Hanisch U.K., Prinz M., Angstwurm K. et al. The protein tyrosine kinase inhibitor AG 126 prevents the massive microglial cytokine induction by pneumococcal cell walls // Eur. J. Immunol. 2001. V. 31. № 7. P. 2104-2115.

100. Hanisch U.K., Quirion R. Interleukin-2 as a neuroculatory cytokine // Brain Res. Brain Res. Rev. 1995. V. 21. № 3. P. 246-284.

101. Hanisch U.K., Seto D., Quirion R. Modulation of hippocampal acetylcholine release: a potent central action of interleukin-2 // J. Neurosci. 1993. V. 13. № 8. P. 3368-3374.

102. Hasko G., Szabo C. Regulation of cytokine and chemokine production by transmitters and co-transmitters of the autonomic nervous system // Biochem Pharmacol. 1998. V. 56. № 9. P. 1079-1087.

103. Haus-Seuffert P., Meisterernst M. Mechanisms of transcriptional activation of cAMP-responsive element-binding protein CREB // Mol. Cell Biochem. 2000. V. 212. № 1-2. P. 5-9.

104. Hayley S., Wall P., Anisman H. Sensitization to the neuroendocrine, central monoamine and behavioural effects of murine tumor necrosis factor-alpha: peripheral and central mechanisms // Eur. J. Neurosci. 2002. V. 15. № 6. P. 1061-1076.

105. Heppner F.L., Prinz M., Aguzzi A. Pathogenesis of prion diseases: possible implications of microglial cells //Prog. Brain. Res. 2001. V. 132. P. 737-750.

106. Herdegen T., Waetzig V. AP-1 proteins in the adult brain: facts and fiction about effectors of neuroprotection and neurodegeneration // Oncogene. 2001. V. 20. № 19. P. 2424-2437.

107. Hidding U., Mielke K, Waetzig V. et al. The c-Jun N-terminal kinases in cerebral microglia: immunological functions in the brain // Biochem. Pharmacol. 2002. V. 64. № 5-6. P. 781-788.

108. Himes S.R., Reeves R., Attema J. et al. The role of high-mobility group I(Y) proteins in expression of IL-2 and T cell proliferation // J. Immunol. 2000. V. 164. №6. P. 3157-3168.

109. Ho I.C., Kim J.I., Szabo S.J., Glimcher L.H. Tissue-specific regulation of cytokine gene expression // Cold Spring. Harb. Symp. Quant. Biol. 1999. V. 64. P. 573-584.

110. Hoffmeyer A., Avots A., Flory E. et al. The GABP-responsive element of the interleukin-2 enhancer is regulated by JNK/SAPK-activating pathways in T lymphocytes // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. № 17. P. 10112-10119.

111. Hong W., Kim A.Y., Ky S. et al. Inhibition of CBP-mediated protein acetylation by the Ets family oncoprotein PU.l // Mol. Cell. Biol. 2002. V. 22. № 11. P. 3729-3743.

112. Hsu H.C., Matsuki Y., Zhang H.G. et al. The Fas signaling connection between autoimmunity and embryonic lethality // J. Clin. Immunol. 2001. V. 21.№ LP. 1-14.

113. Z.Jain J., Miner Z., Rao A. Analysis of the preexisting and nuclear forms of nuclear factor of activated T cells // J. Immunol. 1993. V. 151. № 2. P. 837848.

114. Johnson J.D., Campisi J., Sharkey C.M. et al. Adrenergic receptors mediate stress-induced elevations in extracellular Hsp72 // J. Appl. Physiol. 2005. V. 99. №5. P. 1789-1795.

115. Johnson K.R., Lehn D.A., Elton T.S. et al. Complete murine cDNA sequence, genomic structure, and tissue expression of the high mobility group protein HMG-I(Y) // J. Biol. Chem. 1988. V. 263.№34.P. 18338-18342.

116. Kalergis A.M., Boucheron N., Doucey M.A. et al. Efficient T cell activation requires an optimal dwell-time of interaction between the TCR and the pMHC complex//Nat. Immunol. 2001. V. 2. № 3. P. 229-234.

117. Kalkhoven E., Teunissen H., Houweling A. et al. The PHD type zinc finger is an integral part of the CBP acetyltransferase domain // Mol. Cell. Biol. 2002. V. 22. № 7. P. 1961-1970.

118. Kane L.P., Lin J., Weiss A. Signal transduction by the TCR for antigen // Curr. Opin. Immunol. 2000. V. 12. № 3. P. 242-249.

119. Kazakova T., Golovko 0., Gushchin G., Mulberg A. et al. Transactivation of interleukin-2 gene via nuclear proteins from spleen and brain cells // Biotechnol. Therapeutics. 1993. V. 4. № 1-2. P. 63-76.

120. Kee B.L., Arias J., Montminy M.R. Adaptor-mediated recruitment of RNA polymerase II to a signal-dependent activator // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. № 5.V. 2373-2375.

121. Keyse S.M. Protein phosphatases and the regulation of mitogen-activated protein kinase signaling // Curr. Opin. Cell Biol. 2000. V. 12. № 2. P. 186192.

122. Kiefer F., Vogel W.F., Arnold R. Signal transduction and co-stimulatory pathways // Transpl. Immunol. 2002. V. 9. № 2-4 P. 69-82.

123. Kolch W. Meaningful relationships: the regulation of the Ras/Raf/MEK/ERK pathway by protein interactions // Biochem. J. 2000. V. 351. Pt 2. P. 289-305.

124. Korzus E., Torchia J., Rose D.W. et al. Transcription factor-specific requirements for coactivators and their acetyltransferase functions // Science. 1998. V. 279. № 5351. P. 703-707.

125. Krawczyk C., Penninger J.M. Molecular controls of antigen receptor clustering and autoimmunity // Trends Cell Biol. 2001a. V. 11. № 5. P. 212220.

126. Krawczyk C., Penninger J.M. Molecular motors involved in T cell receptor clusterings//!. Leukoc. Biol. 2001b. V. 69. № 3. P. 317-330.

127. Kroemer G., Andreu J.L., Gonzalo J.A. et al. Interleukin-2, autolerance, and autoimmunity //Adv. Immunol. 1991. V. 50. P. 147-235.

128. Kundu T.K., Palhan V.B., Wang Z. et al. Activator-dependent transcription from chromatin in vitro involving targeted histone acetylation by p300 // Mol. Cell. 2000. V. 6. №3. P. 551-561.

129. Kuo C.T., Leiden J.M. Transcriptional regulation of T lymphocyte development and function // Annu. Rev. Immunol. 1999. V. 17. P. 149-187.

130. Lacosta S., Merali Z., Anisman H. Influence of interleukin-lbeta on exploratory behaviors, plasma ACTH, corticosterone, and central biogenic amines in mice // Psychopharmacology (Berl). 1998. V. 137. № 4. P. 351361.

131. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriofage T4 //Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.

132. Lang K, Drell T.L., Niggemann B. et al. Neurotransmitters regulate the migration and cytotoxicity in natural killer cells // Immunol. Lett. 2003. V. 90. №2-3. P. 165-172.

133. Larhammar D. Structural diversity of receptors for neuropeptide Y, peptide YY and pancreatic polypeptide // Regul. Pept. 1996. V. 65. № 3. P. 165-174.

134. Latour S., Veillette A. Proximal protein tyrosine kinases in immunoreceptor signaling// Curr. Opin. Immunol. 2001. V. 13. № 3. P. 299-306.

135. Lenardo M., Chan K.M., Hornung F. et al Mature T lymphocyte apoptosis -immune regulation in a dynamic and unpredictable antigenic environment // Annu. Rev. Immunol. 1999. V. 17. P. 221-253.

136. Leo A., Schraven B. Adapters in lymphocyte signaling // Curr. Opin. Immunol. 2001. V. 13. № 3. P. 307-316.

137. XAl.Levite M., Cahalon L., Hershkoviz R. et al. Neuropeptides, via specific receptors, regulate T cell adhesion to fibronectin // J. Immunol. 1998. V. 160. №2. P. 993-1000.

138. Lewis C.M., Broussard C., Czar M.J., Schwartzberg P.L. Tec kinases: modulators of lymphocyte signaling and development // Curr. Opin. Immunol. 2001. V. 13. № 3. P. 317-325.

139. Lewis T.S., Shapiro P.S., Ahn N.G. Signal transduction through MAP kinase cascades//Adv. Cancer Res. 1998. V. 74. P. 49-139.

140. Liu S.K., Berry D.M., McGlade C.J. The role of Gads in hematopoietic cell signalling // Oncogene. 2001. V. 20. № 44. P. 6284-6290.

141. Loh C., Shaw K.T., Carew J. et al. Calcineurin binds the transcription factor NFAT1 and reversibly regulates its activity // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. № 18. P. 10884-10891.

142. Lovtrup-Rein H., McEwen B.S. Isolation and fractionation of rat brain nuclei //J. Cell Biol. 1966. V. 30. P. 405-415.

143. Ma A. Pleiotropic functions of IL-15 in innate and adaptive immunity // Mod. Aspects Immunobiol 2000. V. 1. P. 102-104.

144. Macian F., Lopez-Rodriguez C., Rao A. Partners in transcription: NFAT and AP-1 // Oncogene. 2001. V. 20. № 19. P. 2476-2489.

145. Madden K.S., Sanders V.M., Felten D.L. Catecholamine influences and sympathetic neural modulation of immune responsiveness // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1995. V. 35. P. 417-448.

146. Maestroni G.J., Mazzola P. Langerhans cells beta 2-adrenoceptors: role in migration, cytokine production, Th priming and contact hypersensitivity // J. Neuroimmunol. 2003. V. 144. № 1-2. P. 91-99.

147. Malek T.R. The main function of IL-2 is to promote the development of T regulatory cells // J. Leukoc. Biol. 2003. V. 74. № 6 P. 961-965.

148. Marmorstein R., Roth S.Y. Histone acetyltransferases: function, structure, and catalysis//Curr. Opin. Genet. Dev. 2001. V. 11. № 2. P. 155-161.

149. Martinez-Balbas M.A., Bauer U.M., Nielsen S.J. et al. Regulation of E2F1 activity by acetylation // EMBO J. 2000. V. 19. № 4. P. 662-671.

150. Matyszak M.K., Citterio S., Rescigno M., Ricciardi-Castagnoli P. Differential effects of corticosteroids during different stages of dendritic cell maturation // Eur. J. Immunol. 2000. V. 30. № 4. P. 1233-1242.

151. Mayr B., Montminy M. Transcriptional regulation by the phosphorylation-dependent factor CREB // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2001. V. 2. № 8 P. 599609.

152. McGuire K.L., Iacobelli M. Involvement of Rel, Fos, and Jun proteins in binding activity to the IL-2 promoter CD28 response element/AP-1 sequence in human T cells//J. Immunol. 1997. V. 159. №3. P. 1319-1327.

153. Medema J.P., Borst J. T cell signaling: a decision of life and death // Hum Immunol. 1999. V. 60. № 5. P. 403-411.

154. Mennicken F., Maki R., de Souza E.B., Quirion R. Chemokines and chemokine receptors in the CNS: a possible role in neuroinflammation and patterning // Trends Pharmacol. Sci. 1999. V. 20. № 2. P. 73-78.

155. Miyamasu M., Misaki Y., Izumi S. et al. Glucocorticoids inhibit chemokine generation by human eosinophils // J. Allergy. Clin. Immunol. 1998. V. 101. Ptl.P. 75-83.

156. Miyazaki T., Liu Z.J., Kawahara A. et al. Three distinct IL-2 signaling pathways mediated by bcl-2, c-myc, and lck cooperate in hematopoietic cell proliferation // Cell. 1995. V. 81. № 2. P. 223-231.

157. Montminy M.R., Sevarino K.A., Wagner J.A. et al Identification of a cyclic-AMP-responsive element within the rat somatostatin gene // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83. № 18. P. 6682-6686.

158. Morgan D.A., Ruscetti F.W., Gallo R. Selective in vitro growth of T lymphocytes from normal human bone marrows 11 Science. 1976. V. 193. № 4257. P.1007-1008.

159. YlX.Moser M., De Smedt T., Sornasse T. et al. Glucocorticoids down-regulate dendritic cell function in vitro and in vivo I I Eur. J. Immunol. 1995. V. 25. № 10. P. 2818-2824.

160. Munshi N., Agalioti T., Lomvardas S. et al. Coordination of a transcriptional switch by HMGI(Y) acetylation // Science. 2001. V. 293. № 5532.P. 11331136.

161. Nakajima T., Uchida C., Anderson S.F. et al. Analysis of a cAMP-responsive activator reveals a two-component mechanism for transcriptional induction via signal-dependent factors // Genes Dev. 1997. V. 11. № 6. P. 738-747.

162. Nakamura Y., Russell S.M., Mess S.A. et al. Heterodimerization of the IL-2 receptor beta- and gamma-chain cytoplasmic domains is required for signaling//Nature. 1994. V. 369. № 6478. P. 330-333.

163. Nau R., Bruck W. Neuronal injury in bacterial meningitis: mechanisms and implications for therapy// Trends Neurosci. 2002. V. 25. № 1. P. 38-45.

164. Neish A.S., Anderson S.F., Schlegel B.P. et al. Factors associated with the mammalian RNA polymerase II holoenzyme // Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. №3. p. 847-853.

165. Nelson B.H., Willerford D.M. Biology of the interleukin-2 receptor // Adv. Immunol. 1998. V. 70. P. 1-81.

166. Nemni R., Iannaccone S., Quattrini A. et al. Effect of chronic treatment with recombinant interleukin-2 on the central nervous system of adult and old mice // Brain Res. 1992. V. 591. № 2. P. 248-252.

167. Nissen M.S., Reeves R. Changes in superhelicity are introduced into closed circular DNA by binding of high mobility group protein I/Y // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. №9. P. 4355-4360.

168. Otero G.C., Merrill J.E. Cytokine receptors on glial cells // Glia. 1994. V. 11. №2. P. 117-128.

169. Ozaki K., Leonard W.J. Cytokine and cytokine receptor pleiotropy and redundancy // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. № 33. P. 29355-29358.

170. Pan W., Banks W.A., Kastin A.J. Permeability of the blood-brain and blood-spinal cord barriers to interferons // J. Neuroimmunol. 1997. V. 76. № 1-2. P. 105-111.

171. Peng S.L., Gerth A.J., Ranger A.M., Glimcher L.H. NFATcl and NFATc2 together control both T and B cell activation and differentiation // Immunity. 2001. V. 14. № l.P. 13-20.

172. Peterson B.R., Sun L.J., Verdine G.L. A critical arginine residue mediates cooperativity in the contact interface between transcription factors NFAT and AP-1 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93. № 24. P. 13671-13676.

173. Petitto J.M., Streit W.J., Huang Z. et al. Interleukin-2 gene deletion produces a robust reduction in susceptibility to experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice // Neurosci. Lett. 2000. V. 285. № 1. P. 66-70.

174. Phillips K., Luisi B. The virtuoso of versatility: POU proteins that flex to fit // J. Mol. Biol. 2000. V. 302. № 5. P. 1023-1039.

175. Prochiantz A., Theodore L. Nuclear/grows factors // Bio. Essays. 1995. V. 17. № l.P. 39-44.

176. Qian D., Weiss A. T cell antigen receptor signal transduction // Curr. Opin. Cell Biol. 1997. V. 9. № 2. P. 205-212.

177. Quinn P.G. Mechanisms of basal and kinase-inducible transcription activation by CREB // Prog. Nucleic Acid. Res. Mol. Biol. 2002. V. 72. P. 269-305.

178. Raber J., Sorg O., Horn T.F. et al Inflammatory cytokines: putative regulators of neuronal and neuro-endocrine function // Brain Res. Brain Res. Rev. 1998. V. 26. № 2-3. P. 320-326.

179. Radhakrishnan /., Perez-Alvarado G.C., Parker D. et al. Solution structure of the KIX domain of CBP bound to the transactivation domain of CREB: a model for activator:coactivator interactions // Cell. 1997. V. 91. № 6. P. 741752.

180. Rao S., Gerondakis S., Woltring D., Shannon M.F. c-Rel is required for chromatin remodeling across the IL-2 gene promoter // J. Immunol. 2003. V. 170. №7. P. 3724-3731.

181. Reeves R. Molecular biology of HMGA proteins: hubs of nuclear function // Gene. 2001. V. 277. № 1-2. P. 63-81.

182. Reeves R., Leonard W.J., Nissen M.S. Binding of HMG-I(Y) imparts architectural specificity to a positioned nucleosome on the promoter of the human interleukin-2 receptor alpha gene // Mol. Cell Biol. 2000. V. 20. № 13. P. 4666-4679.

183. Refaeli Y., Van Parijs L., London C.A. et al. Biochemical mechanisms of IL-2-regulated Fas-mediated T cell apoptosis // Immunity. 1998. V. 8. № 5. P. 615-623.

184. Rudd C.E. Adaptors and molecular scaffolds in immune cell signaling // Cell. 1999. V. 96. № l.P. 5-8.

185. Ryu J., Pyo H., Jou I., Joe E. Thrombin induces NO release from cultured rat microglia via protein kinase C, mitogen-activated protein kinase, and NF-kappa B // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. № 39. P. 29955-29959.

186. Sacedon R., Vicente A., Varas A. et al. Early differentiation of thymic dendritic cells in the absence of glucocorticoids // J. Neuroimmunol. 1999. V. 94. № 1-2. P. 103-108.

187. Saeed R. W., Varma S., Peng-NemeroffT. et al. Cholinergic stimulation blocks endothelial cell activation and leukocyte recruitment during inflammation // J. Exp. Med. 2005. V. 201. № 7. P. 1113-1123.

188. Sakai N., Kaufman S., Milstien S. Parallel induction of nitric oxide and tetrahydrobiopterin synthesis by cytokines in rat glial cells // J. Neurochem. 1995. V. 65. №2. P. 895-902.

189. Saneto R.P., Altman A., Knobler R.L. et al. Interleukin 2 mediates the inhibition of oligodendrocyte progenitor cell proliferation in vitro // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83. № 23. P. 9221-9225.

190. Sawada M., Suzumura A., Marunouchi T. Induction of functional interleukin-2 receptor in mouse microglia // J. Neurochem. 1995. V. 64. № 5. P. 19731979.

191. Scaffidi C., Kirchhoff S., Krammer P.H., Peter M.E. Apoptosis signaling in lymphocytes // Curr. Opin. Immunol. 1999. V. 11. № 3. P. 277-285.

192. Schafner A., Weissman D. Detection of membrane bound proteins // Anal. Biochem. 1973. V. 56. P. 502-511.

193. Schiltz R.L., Mizzen C.A., Vassilev A. et al. Overlapping but distinct patterns of histone acetylation by the human coactivators p300 and PCAF within nucleosomal substrates // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. № 3. P. 1189-1192.

194. Schumacher M.A., Goodman R.H., Brennan R.G. The structure of a CREB bZIP.somatostatin CRE complex reveals the basis for selective dimerization and divalent cation-enhanced DNA binding // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. № 45. P. 35242-35247.

195. Schwarz H., Villiger P.M., von Kempis J., Lotz M. Neuropeptide Y is an inducible gene in the human immune system // J. Neuroimmunol. 1994. V. 51. № l.P. 53-61.

196. Seigel L.J., Harper M.E., Wong-Staal F. et al Gene for T-cell growth factor: location on human chromosome 4q and feline chromosome B1 // Science. 1984. V. 223. № 4632. P. 175-178.

197. Serfling E., Avots A., Neumann M. The architecture of the interleukin-2 promoter: a reflection of T lymphocyte activation // Biochim. Biophys. Acta. 1995. V. 1263. P. 181-200.

198. Serfling E., Berberich-Siebelt F., Chuvpilo S. et al. The role of NF-AT transcription factors in T cell activation and differentiation // Biochim. Biophys. Acta. 2000. V. 1498. P. 1-18.

199. Seto D., Kar S., Quirion R. Evidence for direct and indirect mechanisms in the potent modulatory action of interleukin-2 on the release of acetylcholine in rat hippocampal slices//Br. J. Pharmacol. 1997. V. 120. №6. P. 1151-1157.

200. Sewell W.A., Scurr L.L., Orphanides H. et al. Induction of interleukin-4 and interleukin-5 expression in mast cells is inhibited by glucocorticoids // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1998. V. 5. № 1. P. 18-23.

201. Sgarra R., Rustighi A., Tessari M.A. et al. Nuclear phosphoproteins HMGA and their relationship with chromatin structure and cancer // FEBS Lett. 2004. V. 574. № 1-3. P. 1-8.

202. Shapiro D.J., Sharp P.A., Wahli W.W. et al. A high efficiency Hela cell nuclear transcription extract//DNA. 1988. V. 7. № 1. P. 47-55.

203. Shaulian E., Karin M. AP-1 as a regulator of cell life and death // Nat. Cell Biol. 2002. V. 4. № 5. P. E131-E136.

204. Shibasaki F., Price E.R., Milan D., McKeon F. Role of kinases and the phosphatase calcineurin in the nuclear shuttling of transcription factor NF-AT4 //Nature. 1996. V. 382. № 6589. P. 370-373.

205. Song C., Merali Z., Anisman H. Variations of nucleus accumbens dopamine and serotonin following systemic interleukin-1, interleukin-2 or interleukin-6 treatment//Neuroscience. 1999. V. 88. № 3. P. 823-836.

206. Soutoglou E., Katrakili N., Talianidis I. Acetylation regulates transcription factor activity at multiple levels // Mol. Cell. 2000. V. 5. № 4. P. 745-751.

207. Sperlagh B., Hasko G., Nemeth Z., Vizi E.S. ATP released by LPS increases nitric oxide production in raw 264.7 macrophage cell line via P2Z/P2X7 receptors //Neurochem. Int. 1998. V. 33. № 3. P. 209-215.

208. Spiker S. A modification of the acetic acid-urea system for use in microslab polyacrylamide gel electrophoresis //Anal. Biochem. 1980. V. 108. № 2. P. 263-265.

209. Steinman L. Elaborate interactions between the immune and nervous systems //Nat. Immunol. 2004. V. 5. № 6. P. 575-581.

210. Sternberg E.M. Neural regulation of innate immunity: a coordinated nonspecific host response to pathogens // Nat. Rev. Immunol. 2006. V. 6. № 4. P. 318-28.

211. SzelenyiJ. Cytokines and the central nervous system // Brain. Res. Bull. 2001. V. 54. №.4. P. 329-338.

212. Taniguchi T. Cytokine signaling through nonreceptor protein tyrosine kinases // Science. 1995. V. 268. № 5208. P. 251-255.

213. Taniguchi T., Matsui H., Fujita T. et al Structure and expression of a cloned cDNA for human interleukin-2 //Nature. 1983. V. 302. № 5906. P. 305-310.

214. Tata J.R. Isolation of nuclei from liver and other tissues // Methods Enzymol. 1974. V. 31.PtA. P. 253-262.

215. Tessari M.A., Gostissa M., Altamura S. et al Transcriptional activation of the cyclin A gene by the architectural transcription factor HMGA2 // Mol. Cell Biol. 2003. V. 23. № 24. P. 9104-9116.

216. Thome M., Acuto O. Molecular mechanism of T-cell activation: role of protein tyrosine kinases in antigen receptor-mediated signal transduction // Res. Immunol. 1995. V. 146. № 4-5. P. 291-307.

217. Timmerman L.A., Clipstone N.A., Ho S.N. et al Rapid shuttling of NF-AT in discrimination of Ca2+ signals and immunosuppression // Nature. 1996. V. 383. № 6603. P. 837-840.

218. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some application // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. V. 76. № 9. P. 4350-4354.

219. Tsanev R. Role of histones in cell differentiation. In: Eukaryotic Gene Regulation // Ed. Kolodny G.M. CRC Press. Florida. 1980. V. II. P. 62-112.

220. Turrin N.P., Gayle D., Ilyin S.E. et al Pro-inflammatory and antiinflammatory cytokine mRNA induction in the periphery and brain following intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide // Brain Res. Bull. 2001. V. 54. № 4. P. 443-453.

221. Turrin N.P., Plata-Salaman C.R. Cytokine-cytokine interactions and the brain // Brain Res. Bull. 2000. V. 51. № 1 P. 3-9.

222. Van Parijs L., Abbas A.K. Homeostasis and self-tolerance in the immune system: turning lymphocytes off// Science. 1998. V. 280. № 5361. P. 243248.

223. Vo N., Goodman R.H. CREB-binding protein and p300 in transcriptional regulation // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. № 17. P. 13505-13508.

224. Wang H., Yu M., Ochani M. et al. Nicotinic acetylcholine receptor alpha7 subunit is an essential regulator of inflammation // Nature. 2003. V. 421. № 6921. P. 384-388.

225. Ward S.G., Cantrell D.A. Phosphoinositide 3-kinases in T lymphocyte activation // Curr. Opin. Immunol. 2001. V. 13. № 3. P. 332-338.

226. Werlen G., Jacinto E., Xia Y., Karin M. Calcineurin preferentially synergizes with PKC-theta to activate JNK and IL-2 promoter in T lymphocytes // EMBO J. 1998. V. 17. № 11. P. 3101-3111.

227. Widlund H.R., Kuduvalli P.N., Bengtsson M. et al Nucleosome structural features and intrinsic properties of the TATAAACGCC repeat sequence // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. № 45. P. 31847-31852.

228. Widlund H.R., Vitolo J.M., Thiriet C., Hayes J.J. DNA sequence-dependent contributions of core histone tails to nucleosome stability: differential effects of acetylation and proteolytic tail removal // Biochemistry. 2000. V. 39. № 13. P. 3835-3841.

229. Willerford D.M., Chen J., Ferry J.A. et al. Interleukin-2 receptor alpha chain regulates the size and content of the peripheral lymphoid compartment // Immunity. 1995. V. 3. № 4. P. 521-30.

230. Williams T.M., Burlein J.E., Ogden S. et al. Advantages of firefly luciferase as a reporter gene: application to the interleukine-2 gene promoter // Anal. Biochem. 1989. V. 176. № 1. P. 28-32.

231. Woiciechowsky C., Asadullah K, Nestler D. et al. Sympathetic activation triggers systemic interleukin-10 release in immunodepression induced by brain injury // Nat. Med. 1998. V. 4. № 7. P. 808-813.

232. Wonerow P., Watson S.P. The transmembrane adapter LAT plays a central role in immune receptor signaling // Oncogene. 2001. V. 20. № 44. P. 62736283.

233. Wong M.L., Sternberg E.M. Immunological assays for understanding neuroimmune interactions //Arch. Neurol. 2000. V. 57. № 7. P. 948-952.

234. Workman J.L., Kingston R.E. Alteration of nucleosome structure as a mechanism of transcriptional regulation // Annu. Rev. Biochem. 1998. V. 67. P. 545-579.

235. Wu X., Spiro C., Owen W.G., McMurray C.T. cAMP response element-binding protein monomers cooperatively assemble to form dimers on DNA // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. № 33. P. 20820-20827.

236. Xu W., Chen H., Du K et al. A transcriptional switch mediated by cofactor methylation // Science. 2001. V. 294. № 5551. P. 2507-2511.

237. YangL., Cohn L., Zhang D.H. et al. Essential role of nuclear factor kappaB in the induction of eosinophilia in allergic airway inflammation // J. Exp. Med. 1998. V. 188. №9. P. 1739-1750.

238. Yang S.H., Sharrocks A.D., Whitmarsh A.J. Transcriptional regulation by the MAP kinase signaling cascades // Gene. 2003. V. 320. P. 3-21.

239. Yang-Yen H.F., Chambard J.C., Sun Y.L., et al. Transcriptional interference between c-Jun and the glucocorticoid receptor: mutual inhibition of DNA binding due to direct protein-protein interaction // Cell. 1990. V. 62. № 6. P. 1205-1215.

240. Yasui D., Miyano M., Cai S. et al. SATB1 targets chromatin remodelling to regulate genes over long distances // Nature. 2002. V. 419. № 6907. P. 641645.

241. Yasui D.H., Genetta T., Kadesch T. et al. Transcriptional repression of the IL-2 gene in Th cells by ZEB // J. Immunol. 1998. V. 160. № 9. P. 4433-4440.

242. Yie J., Merika M., MunshiN. et al. The role of HMG I(Y) in the assembly and function of the IFN-beta enhanceosome // EMBO J. 1999. V. 18. № 11. P. 3074-3089.

243. Yuan L. W., Giordano A. Acetyltransferase machinery conserved in p300/CBP-family proteins // Oncogene. 2002. V. 21. № 14. P. 2253-2260.

244. Yuan L.W., Soh J.W., Weinstein I.B. Inhibition of histone acetyltransferase function of p300 by PKCdelta // Biochim. Biophys. Acta. 2002. V. 1592. № 2. P. 205-211.

245. Zamzami N., Kroemer G. The mitochondrion in apoptosis: how Pandora's box opens //Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2001. V. 2. № 1. P. 67-71.

246. Zeyda M, Stulnig T.M. Lipid Rafts & Co.: an integrated model of membrane organization in T cell activation // Prog. Lipid. Res. 2006. V. 45. № 3. P. 187202.

247. Zhang Q., Yao H., Vo N., Goodman R.H. Acetylation of adenovirus E1A regulates binding of the transcriptional corepressor CtBP // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. № 26. P. 14323-14328.

248. Zurawski S.M., Vega F.Jr., Doyle E.L. et al. Definition and spatial location of mouse interleukin-2 residues that interact with its heterotrimeric receptor // EMBO J. 1993. V. 12. № 13. P. 5113-5119.

Информация о работе

Гришина, Татьяна Васильевна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Белковые трансактиваторы гена интерлейкина-2 из ядер клеток селезенки и головного мозга - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы