Бабезиоз собак

Балагула, Татьяна Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Бабезиоз собак
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Бабезиоз собак"

На правах рукописи

БАЛАГУЛА ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА

РГб од

1 о ш ш

БАБЕЗИОЗ СОБАК

(БИОЛОГИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ, ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ПАТОГЕНЕЗ И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР

БОРЬБЫ)

03.00.19- ПАРАЗИТОЛОГИЯ, ГЕЛЬМИНТОЛОГИЯ

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветерннаринарных наук

Москва 2000

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.

Научный руководитель - Заслуженный деятель наук РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Акбаев М.Ш.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Сафиуллин Р.Т. кандидат ветеринарных наук Казаков H.A.

Ведущая организация: Институт паразитологии Российской академии наук.

Защита состоится "-/У" лии-8 2000г. в часов на

заседании диссертационного совета Д 120.36.02 защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23,тел.:377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии. Автореферат разослан " 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Брылина В.Е.

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Бабезиоз, вызываемый простейшим Babesia canis является одним из распространённых заболеваний собак, до сих пор наносящий значительный экономический ущерб служебному собаководству и частным владельцам животных. В последнее время инвазия имеет тенденцию к более широкому распространению. Этому способствуют носительство бабезий в организме переболевших собак (Ива-нюшин Б.И.,1973 и др.), трансовариальная циркуляция в клещах-переносчиках, а также продолжительная диапауза инвазированной фазы клеща.

К В. canis, кроме собак, восприимчивы: енотовидная собака, лисица, волк и др., играющие важную роль в сохранении возбудителя в природе в условиях Нечерноземья. (Степанова Н.И., Казаков H.A., Заблоцкий В.Т., 1982., Крылов М.В.,1996 и др.).

К настоящему времени недостаточно изучены: патология, возникающая в результате взаимоотношений паразита-хозяина; механизмы, подавляющие рост и развитие возбудителя в организме; отсутствуют средства специфической профилактики бабезиоза, слабо разработана химиопрофилактика.

Изучением механизмов возникновения и проявления иммунитета при бабезиозе собак и носительства занимались ряд исследовате-лей(Колабский H.A., Гайдуков А.Х., Тарвердян Т.Н., 1963; Гайдуков А.Х.,1964; Ли П.Н., I960, 1961, 1963; Колабский H.A., Гайдуков А.Х., Шумилов Б.В.,1973),тем не менее сроки сохранения возбудителя в организме собак после переболевания, характер иммунологической перестройки организма требуют дальнейшего изменил.

За рубежом вопросам иммунного статуса при бабезиозе у собак уделяется больше BHHMaHna(Ristic M.,1981;Schetters., 1991; Adachi К., 1993 и др.).

На сегодняшний день в нашей стране нет технологий изготовления антигена и серологических методов диагностики бабезиоза собак. В литературе мы не обнаружили и данных, касающихся динамики паразите-мии в связи с синтезом антител при данном заболевании. Учитывая широкое распространение бабезиоза в различных регионах страны, недостаточность знаний многих аспектов заболевания, а также мер борьбы с ним, то изучение данной темы, безусловно, является актуальным.

Цель и задачи исследования. Перед нами была поставлена цель -изучить некоторые аспекты биологии Babesia canis и особенности эпизоотологии заболевания в условиях г. Москвы и Московской области; изучить иммунологическии статус организма при бабезиозе и тем самым усовершенствовать меры борьбы с бабезиозом собак. Для этого следовало решить следующие задачи: -воспроизвести бабезиоз у собак в экспериментальных условиях; -изучить эпизоотологические особенности бабезиоза собак в условиях г. Москвы и Московской области;

-изучить клинико-гематологические и биохимические показатели при различном течении бабезиоза в динамике инвазии;

-изучить патологоморфологические изменения в организме при бабезиозе;

—определить условия, влияющие на тяжесть переболевания и степень паразитемии у заражённых животных;

-отработать методику выделения возбудителя Babesia canis из крови спленэктомированных доноров и приготовить антиген;

-изучить активность полученного антигена, динамику сывороточных антител у больных животных и паразитоносителей с использованием серологических реакций- реакции длительного связывания комплемента (РДСК) и иммуноферментного анализа (ИФА) и изучить их чувствительность;

—определить лечебно-профилактическую эффективность верибена при экспериментальном бабезиозе.

Научная новизна. Изучены и обобщены сведения о распространении, сезонной и возрастной динамике бабезиоза собак в условиях г. Москвы и Московской области. Отработаны методы воспроизведения бабезиоза в экспериментальных условиях. Изучены клинико-гематологические и биохимические показатели при разной тяжести течения экспериментального бабезиоза в динамике инвазии. Разработаны условия для получения высокой паразитемии у доноров с целью приготовления антигена.

Разработан метод приготовления антигена для серологической диагностики бабезиоза собак. Впервые изучена динамика антителообразо-вания у экспериментально заражённых Babesia canis животных с помощью РДСК и ИФА и показана её взаимосвязь с динамикой паразитемии. Выявлено, что ИФА является более чувствительным тестом при бабезиозе собак, чем РДСК. Рекомендована оптимальная доза, сроки и кратность применения верибена с лечебной и профилактической целью.

Практическое значение работы. 1 .Установлены первичные сроки заражения, особенности распространения и развития инвазии в сезонно-возрастном аспекте в условиях г. Москвы и Московской области. 2.Разработаны методы воспроизведения бабезиоза у собак в экспериментальных условиях. 3.Решение поставленных задач позволяет определить глубину патологии и разработать научно-обоснованные методы специфическом и патогенетической терапии бабезиоза у собак.

4.Изучены динамика антителообразования, а также причины, определяющие тяжесть переболевания и степень паразитемии.

5.Разработанный метод приготовления антигена имеет практическое значение для ранней диагностики заболевания и паразитоносительства. б.Определена высокая диагностическая достоверность ИФА при бабезиозе собак. 7.Испытание токсичности верибена дало возможность предложить препарат в дозе 3,1 мг/кг по ДВ с лечебной и профилактической целью при бабезиозе собак.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертационной работы доложены на совещаниях кафедры паразитологии МГАВМиБ им. К.И.Скрябина в 1998-1999гг.; на 7 международной конференции по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных, 1999г.; на конференции, посвященной 80-летию МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. 1999г.; на конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. И.В. Орлова; на объединённой сессии Координационного совещания по ветеринарной гельминтологии,2000г. Основные материалы диссертации отражены в четырех научных статьях.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 230 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, список литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 45 таблицами, 49 рисунками. Библиографический указатель включает 240 источников литературы, из которых 120 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту диссертации:!.Результаты изучения распространения, сезонной и возрастной динамики бабезиоза собак в условиях г. Москвы и Московской области.

2. Результаты экспериментального заражения собак Babesia canis и условия, влияющие на тяжесть течения болезни и выраженность парази-темии. 3. Результаты изучения морфологических и биохимических показателей крови, а также патологоморфологических изменений при различной тяжести течения бабезиоза. 4. Результаты изучения динамики антителообразования методами РДСК и ЙФА при экспериментальном бабезиозе у собак. 5.Результаты испытания различных доз верибе-на при бабезиозе собак с лечебной и профилактической целями.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы исследований

Работу выполняли с 1996 по 1999 гг. на кафедре паразитологии и инвазионных болезней животных МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, в лабораториях протозоологии, молекулярной биологии и биохимии ВИЭВ в лаборатории препаративной биохимии антигенов ГНЦ Института Иммунологии МЗ РФ, в ветеринарных клиниках г. Москвы и Московской области.

Распространение, сезонно-возрастную динамику бабезиоза, сроки первичного заражения изучали в Московской области и округах г. Москвы путём анализа данных лабораторий; общего клинического обследования и микроскопирования мазков крови от 264 естественно больных собак, а также сбора клещей, снятых с животных.

В экспериментах использовали здоровых собак после их карантини-рования. Под опытами находилось 56 собак от 1,5 месячного до 5 летнего возраста разного пола, а также 11 спленэктомированных собак, в возрасте от 5 мес. до 2 лет. Перед постановкой опытов животные в течение 7 дней подвергались клиническим, гематологическим и копроло-гическим исследованиям.

Морфологические показатели крови изучали по общепринятым методикам. Мазки крови фиксировали и окрашивали по Романовскому-Гимза. Интенсивность паразитемии выражали в процентах путём учёта поражённых эритроцитов к общему числу эритроцитов или в численном выражении паразитов на 100 полей зрения микроскопа (п.з.м.).

Исходным материалом для заражения служила кровь от естественно больной собаки. В дальнейшем проводили пассажирование возбудителя. Заражение проводили в/в. п/к, в/м и внугрибрюшинно инвазирован-ной кровью в количестве 3-15 мл с учётом веса собаки. Спленэктомированных собак заражали внутривенно инвазированной кровью в количестве 4-15 мл.

Кровь для пассажа брали на следующие сут после появления паразитов в крови, а при тяжелом состоянии донора - в день их обнаружения. Спленэктомию проводили по известной методике в соответствующих условиях.

Общий белок определяли рефрактометрически, процент вычисляли потабл!ще Рейса. Белковые фракции определяли электрофоретически в

Активность аспартатаминотрансферазы(АСТ) и аланинаминотранс-феразы(АЛТ) в сыворотке крови определяли динитрофенилгидразино-вым методом Райтмана-Френкеля (1956). Активность псевдохолинэсте-разы в сыворотке крови изучали унифицированным методом с субстратом ацетилхолинхлоридом (1974).

На наличие антител против бабезий сыворотку крови исследовали в РДСК и ИФА с антигеном, приготовленным нами из B.canis, а также изучали динамику Т и В- лимфоцитов в крови экспериментально заражённых собак. Приготовление антигена проводили по методу Степано-

вой Н.И.(1963) и по разработанной нами методике. РДСК ставили согласно методическим рекомендациям, разработанным ВИЭВ(1984). При отработке твердофазного метода ИФА использовали бабезийный антиген, конъюгат против иммуноглобулинов собаки меченый перок-сидазой, позитивные и негативные сыворотки собак, а также субстратную смесь. Рабочее разведение конъюгата составляло 1:500.

Субстратную смесь готовили с использованием ортофенилендиамина в концентрации 0,4 mg/ml на цитратно-фосфатном буфере(0,02 М).

Каталитическую активность пероксидазы определяли фотометрическим методом. Регистрацию оптической плотности проводили при 490 нм. Результаты ИФА обрабатывали с помощью программы "Cyclop".

Выделение лимфоцитов из периферической крови собак осуществляли по методу A.Boyum, 1986.Количество Т-лимфоцитов определяли в реакции спонтанного розеткообразования по методу Jondal, 1984. Идентификацию B-лимфоцитов проводили по методу Mendes,1973.

Патологоморфологические исследования проводили по общепринятым методикам. Из внутренних органов павших животных готовили мазки-отпечатки, которые фиксировали и окрашивали по Романовско-му-Гимза. С целью выявления гемосидерина в органах гистосрезы окрашивали по Перлсу, докрашивание проводили эозином .Все полученные результаты обрабатывали статистически по Стьюденту.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Эпизоотология бабезиоза собак в условиях г. Москвы и Московской области.

Изучение эпизоотологии заболевания в течение 1995-1999гг. показало повсеместное распространение бабезиоза в г. Москве и Московской области. За весь период было зарегистрировано 3392 больных бабезио-зом собак, в т.ч. 3128- в г. Москве и 264- в районах Московской области.

За 1995-99гг.наибольшее число заболевших собак было зарегистрировано в Южном Юго-Западном и Западном округах г. Москвы (от 2,35 до 44,32%). В Юго-Восточном и Северо-Западном округах отмечали также ежегодное заболевание собак с колебаниями в отдельные годы. Меньшее число заболевших животных приходится на Восточный, Северный и Зеленоградский округа (от 0,14% до 10,16%). За период исследований с больных собак было снято 168 клещей, из них: 135-принадпежащих к p.Dermacentor-переносчикам возбудителя и 33-принадлежащих к p.Ixodes.

Установили, что в настоящее время, имеется тенденция к распространению клещей-переносчиков на территории Москвы, чему способствует возросшее количество собак(около 1,5 млн), бездомных собак(около 20 тыс.)-резервуаров инвазии, грызунов-прокормителей клещей, а также особенности экологии города-мегаполиса. Распространению бабезиоза способствует отсутствие методов диагностики паразитоноситель-ства, приводящее к бесконтрольному ввозу в Москву и область животных- бабезионосителей-источников инвазии для переносчиков.

Распространение заболевания в МО (1995-1999гг.) изучали на 264 собаках, заражённых возбудителем бабезиоза в следующих районах: Вос-кресенском-55; Егорьевском-44- Шатурском-54;Подольском-35; На-

§о-Фоминском-36; Чеховском-40. При этом, за указанный период наи-

олее неблагополучными оказались районы: Воскресенский, Шатурский и Егорьевский, где заболеваемость варьировала от 14,6 до 32%. Б целом, в Москве и МО за 1995-1999гг. наибольшее количество больных

бабезиозом собак выявлено в 1997(1312 собак-38,7%) и в 1998г. (1505 собак- 44 4%).

За 1995-99гг. заболеваемость собак бабезиозом имела характер дву-вершинной кривой с пиками инвазии :в 1995-96гг. - в конце 1-2 декадах мая и 1-2 декадах сентября; в 1997-98гг. - в 1-2 декадах июня и в 12 декадах сентября. В 1999г. максимальное (37,2%) количество больных собак регистрировали в конце1-2 декадах сентября.

Собаки первично заражаются возбудителем бабезиоза в конце 2-началеЗ декады апреля. В единичных случаях бабезиоз регистрировали в последних числах марта (1997-0,08%; 1998-0,07%). Массовое же заражение животных происходит в 1-2 декадах мая. По нашим данным, бабезиоз встречался у собак в отдельные годы в июле(1996г. — 0,93%; 1997 - 2,44%; 1998 — 2,72%),хотя процент заболеваемости здесь ниже, чем в остальные сезоны года.

Наиболее оптимальными для заражения собак являются температуры окружающей среды от 12-13°С до 21°С, при которых клещи более активны. Из 264 собак, больных бабезиозом 154(58,3%) были самцы, а 110(41 7%) — самки. Возрастная динамика болезни выглядела следующим образом: в возрасте 4-5 мес. - 0,75%; от 6 мес. до 1 года - 20,4%; от 1 до 3 лет- 33,3%; от 3 до 6 лет- 26,5%; от 6 до 8 лет- 13,6%; старше 8 лет- 5,3%.

Низкий процент заболеваемости щенков 4-5 мес. объясняется их вакцинацией против ряда инфекционных болезней, что требует карантини-рования и изоляции собак от биотопов клещей.

2.2.2. Заражение доноров и условия, влияющие на тяжесть переболевания и степень паразитемии

Исходным материалом для выделения возбудителя и получения антигена служила кровь экспериментально заражённых собак. При этом мы обратили внимание на факторы, способствующие сокращению инкубационного периода и получению максимальной паразитемии.

Первый опыт был поставлен на 10 собаках 1-Х) в возрасте 1,5-5 лет. Животных № 1-У заражали в/в кровью по 5,5,8,10 и 10 мл соответственно в зависимости от веса животного. При этом наблюдали лёгкое переболевание собак с температурой на 3-4 сут до 39-40°С и единичными паразитами в мазках крови, которые исчезали на следующий день.

При подкожном заражении собак № У1-Х кровью по 15 мл клинические признаки бабезиоза не были отмечены. Единичных паразитов выявляли на 4-9 сут(иногда на10-12)и на следующие сут их не обнаруживали.

Второй опыт был проведён на 19 собаках в возрасте1,5-7 мес., которых заражали в/в, п/к, в/м и внутрибрюшинно кровью по 3-10 мл в зависимости от веса собаки. Наименьший инкубационный период - 1,52,5 сут - наблюдался при внутривенном заражении. У щенков, зараженных в/м, бабезии появились на 3 сут, а у щенков, зараженных п/к, период инкубации равнялся 3-5сут. При внутрибрюшинном заражении инкубационный период составил 4-6 сут. В наших опытах продолжительность инкубационного периода варьировала при однотипном способе заражения, одинаковых объёме инвазированной крови и дозе паразитов, что свидетельствует о влиянии индивидуальной реактивности организма на течение и проявление инвазионного процесса.

При заражении животных №9 и 10(1) 3-5 лет и щенка №3 3-х мес. возраста кровью по 5 и 3 мл соответственно от остробольной собаки было отмечено, что у взрослых животных клинические признаки бабе-

зиоза и паразитемия были выражены слабо по сравнению с таковыми у щенка №3.

Мы установили, что при хранении гепаринизированной инвазирован-ной крови при 1=+2-4°С в течение 2-х сут паразиты теряют исходную вирулентность. Так, у щенков №22 и №24, заражённых этой кровью с паразитемией 1.1% отмечали увеличение продолжительности инкубационного периода до 9 сут(вместо 2-5), слабость проявления клинических признаков и снижение паразитемии до 0,96%.

Таким образом установлено, что тяжесть течения болезни и степень паразитемии у реципиентов зависит главным образом от их возраста, реактивности организма и вирулентности возбудителя. В опытах паразитемия у животных в среднем составляла 0,04-1,9%. Такая кровь не могла быть использована в качестве исходной для приготовления антигена, в связи с чем для получения максимальной паразитемии мы проводили спленэктомию опытных животных.

Опыт 1. Собак №6,11,12(У) и 13(У) заразили кровью от остробольных собак по 5,5,4 и 5 мл соответственно; первых трёх-через 48ч., а четвёртую — через 24ч. после спленэктомии. На вторые сут после заражения паразитемия у животных составила 5,5%;6,3%;27,3% и 4,5% соответственно.

Опыт 2. Собак №13(1У) и №14(1У) в возрасте двух лет заразили спустя 245 сут после спленэктомии кровью от остробольной собаки по 5 мл каждой. На 3-е сут после заражения паразитемия у животных составляла 10,5% и 9% соответственно. Таким образом, даже после длительного промежутка времени (после удаления селезёнки) паразитемия у этих животных была высокой.

Опыт 3. Щенок №2 в возрасте 5 мес. был заражён через 48 ч. после спленэктомии 15 мл крови, взятой от переболевшего щенка №1, у которого на момент заражения паразитов в мазках крови не обнаруживали. Тем не менее уже на 2-е сут после заражения паразитемия у щенка №2 составила 0,9%.

Собаки №10(У) и №11(У) в возрасте 5 и 6 мес. соответственно были спленэктомированы и на следующие сут заражены внутривенно кровью по 6 мл от собаки-паразитоносителя №7(У) с длительностью носитель-ства возбудителя 110 сут. На 5-е сут после заражения у щенка №10(У) паразитемия составила 1,5%, на 6-е - 9,2%;у щенка №11(У) этот показатель составил на 6-е сут 0,75%, на 7-е сут - 8.5%, которые на следующие сут резко снизились до 1,5% и 2,3% соответственно.

Опыт 4.У собак №1 и №7(У) спленэктомию проводили спустя 19 и 110 сут после заражения с целью выявления паразитоносительства. Однако, клинико-гематологические исследования в течение последующих 2-х месяцев показали отсутствие клинических признаков бабезиоза и паразитов в крови.

Установлено, что для проявления максимальной паразитемии в первых двух группах собак потребовалось 2 и 3 дня, в то время как у щенков №10(У) и 11 (V) этот срок увеличился до 5 и 6 сут, что связано со снижением вирулентности возбудителя по мере увеличения срока его сохранения в организме переболевшего животного-донора.

Проведя несколько серии экспериментов, установлено, что при заражении спленэктомированных животных доза крови и исходная паразитемия донора оказывают большее влияние на паразитемию реципиента, чем при заражении интактных животных.

Таким образом, наши исследования показали, что для получения максимальной паразитемии в целях приготовления антигена необходимо

проводить заражение только спленэктомированных собак внутривенно инвазированной кровью спустя 24-48 ч. после операции.

2.2.3.Патогенная роль Babesia canis при экспериментальном бабезиозе собак

2.2.3.1.Симптомокомплекс у интактных и спленэктомированных собак при экспериментальном заражении возбудителем бабезиоза.

Сопоставление клинических показателей со степенью выраженности гематологических, биохимических, иммунологических и патологомор-фологических изменений в динамике инвазии позволяет полнее определить нарушения обмена веществ хозяина под воздействием паразита.

Подооная работа была проведена нами у собак без удале-ния(интактных) и с удалением селезёнки(спленэктомированных).

Под наблюдением находились 35 собак, в т.ч. 24-интактных в возрасте 1,5-7 мес. и 11 спленэктомированных, в возрасте от 5 мес. до 2 лет. Контролем служили шесть клинически здоровых собак в возрасте 3-6 мес.

Исследования показали, что продолжительность инкубационного периода и тяжесть течения болезни у больных интактных собак зависела не столько от дозы и способа введения инвазированной крови, сколько от индивидуальной реактивности реципиента и исходной вирулентности возбудителя.

В целом, у экспериментально заражённых собак мы регистрировали острое и подострое течения бабезиоза. При этом тяжесть переболева-ния, выраженность клинических признаков и продолжительность болезни несколько отличались. Характерными клиническими признаками были отмечены повышение температуры: при остром течении бабезиоза до 39,5-40°С на 3-4сут после заражения, а при подостром-до 39,5-39,8°С на 5-7 сут, что обычно совпадало с первичным обнаружением паразитов в мазках крови; анемия и желтушность видимых слизистых оболочек, склеры, конъюнктивы и непигментированных участков кожи, которая при подостром течении проявлялась менее ярко, чем при остром. Отмечали частичное или полное отсутствие аппетита, рвоту и кровавый понос, особенно при остром течении бабезиоза. Гемоглобинурию разной степени интенсивности наблюдали либо в день появления паразитов в мазках крови, либо на следующие сутки.

Установлено, что течение болезни у спленэктомированных животных значительно отличается от такового у интактных собак. При заражении животных через 24-48ч. и даже 245 сут после спленэктомии от остробольных бабезиозом собак уже к началу 2-Зх сут после заражения регистрировали гемоглобинурию и повышение температуры до 40-41°С.

У спленэктомированных животных, заражённых от собаки, с длительностью бабезионосительства 110 сут, регистрировали, во-первых, удлинение инкубационного периода до 5-6 сут и, во-вторых, даже при наличии гемоглобинурии и высокой паразитемии(8,5-9,2%) отмечали кратковременное повышение температуры до 39,4ЪС и весь комплекс признаков, характерных для бабезиоза.

В целях изучения морфологии бабезий в динамике заболевания у интактных и спленэктомированных собак, ежедневно готовили мазки крови. Размеры паразитов измеряли отдельно у каждой из форм. Паразитов, с размерами 1,5-2,5x1,5-1,7мкм относили к мелким; 2,6-3,07x1,71-2,25 мкм-к средним, а 3,08-4,81x1,79-2,7 мкм и выше - к крупным.

У остробольных собак в начальный период заболевания преобладали неправильные формы паразитов размерами 4,52±0,1х2,46±0,1мкм и

2,98±0,05х2,21±0,09мкм соответственно, а также округлые размером 2,06±0,07мкм.

В пик инвазии количество крупных и средних грушевидных парных

$орм увеличивалось, в то время как крупных паразитов неправильной

ормы — снижалось. Среди округлых форм паразитов возрастало количество крупных и снижалось средних и мелких паразитов. Количества паразитов овальной, грушевидной (одиночных, не связанных) и непра-вильной(парных) форм закономерно возрастали...

При подостром течении бабезиоза количество паразитов оказалось меньше, чем при остром течении инвазии.В начальный период заболевания в крови чаще встоечались паразиты неправильной формы размеров 2,98±(),05х2,21±0,09мкм, грушевидные парные не связанные друг с другом формы-4,12±0,04x2,11±0,09мкм и реже грушевидные парные связанные-3,97±0,09х2,13±0,06мкм.

В пик инвазии в мазках преобладали грушевидные и неправильные формы паразитов.

У спленэктомированных собак общее количество паразитов в мазках крови значительно превышало таковое у интактных животных. При этом, в 1-е сут появления паразитов, они имели, в основном, неправильную и грушевидную(парные, связанные и не связанные друг с другом) формы. На следующие сут количество всех форм паразитов увеличилось в среднем на 60%, за исключением мелких паразитов неправильной формы.

2.2.3.2.Изучение морфологии крови у собак при разной тяжести течения экспериментального бабезиоза. При анализе данных морфологии крови у экспериментально заражённых животных с учётом тяжести течения оолезни(острое и подострое) установлена некоторая вариабельность в динамике количества эритроцитов, эозинофилов, лейкоцитов и гемоглобина в процессе переболевания.

Так, к 5-м сут после заражения при остром течении бабезиоза среднеарифметические показатели количества эритроцитов -3,68±0,72млн/мкл, эозинофилов-53±2,4/мкл, лейкоцитов

7,55+1,2тыс/мкл, уровня гемоглобина-81,97±1,78г/л снизились на 50,4%,73,1%,17,6% и 27,4% по сравнению с контролем.

При подостром течении средние количества эритроцитов, эозинофилов и гемоглобина к 13-м сут после заражения составля-ли:3,23±0,37мкн/мкл, 58,81±4,8/мкл и 61,41±3,13г/л, что на 54,5%,67,6% и 45,7% были ниже таковых у контрольных. Количество лейкоцитов возросло в 3,6 раз по сравнению с контролем. В лейко-грамме наблюдали увеличение палочкоядерных и юных форм нейтро-филов, лейкопению и моноцитоз.

2.2.3.3.Биохимические показатели крови у больных животных. Результаты биохимических исследовании показали, что при остром течении бабезиоза уровень общего белка к концу инкубационного периода повышался до 7,05±0,12г%, а в дальнейшем снижался до 4,28±0,18г%(против контроля 6,43± 0,18г% и 6,52±0,13х% соответственно). К 5-м сут после заражения установили достоверное снижение альбуминов до 40Д2±0,27% и увеличение а и Р-глобулинов до 17,85±0,11% и 22,85±0,23% соответственно. Среднее значение количества у-глобулинов у опытных животных на 12,02% оыло ниже таковых у контрольных.

При подостром течении установлено достоверное снижение уровня общего белка и альбуминов до 4,8±0,13г% и 39,19±0,21% соответст-

венно, а также увеличение а,Р и у-глобулинов на 5,4%;31,2% и 24% по сравнению с контролем. Альбумин-глобулиновое соотношение при

<*- А А Л i I Л

остром и подостром течениях бабезиоза составляло в среднем 0,9 1±0,3 / и 0,64±0,35 и было достоверно ниже таковых у контрольных.

Среднеарифметические показатели активности ACT и AJIT при остром течении составили 40,4±3,99мЕ/л и 49,84±5,21мЕ/л, что в 2 и 2,28 раз превышало контрольные данные. При подостром течении бабезиоза среднеарифметические значения активности ACT (33,79±3,86мЕ/л) и AJIT (38,68±3,32мЕ/л) в 1,7 и 1,9 раз превышали контрольные данные.

Активность псевдохолинэстеразы за весь период у больных животных снизилась до 342К8±113,5(против контроля 4180,69±114,42 мЕ/л) при остром течении бабезиоза и до 3373,94±116,27мЕ/л(против 4163,9± 20,б1мЕ/л)-при подостром, что свидетельствует о поражении паренхимы печени и мышцы сердца.

2.2.3.4. Патологоморфологические изменения при экспериментальном бабезиозе. С целью изучения сущности структурно-функциональных изменений в организме собак при бабезиозе мы провели патологоморфологические исследования сердца, лёгких, печени, почек, селезёнки, головного мозга, а также мазков-отпечатков из этих органов. Патматериал был собран от 17 животных.

Характерными патологоанатомическими признаками при всех случаях бабезиоза являлись анемия и желтушность тканей; увеличение селезёнки, печени и дряблость её паренхимы; переполнение желчного пузыря желчью коричневого, оранжево-зелёного цвета; дряблость миокарда; крепитирующая или тестоватая консистенция лёгких; желто-коричневый, серо-розовый или интенсивно красный цвет почек и незначительную дряблость их паренхимы. В миокарде и печени отмечали явления острой застойной гиперемии и зернистой дистрофии; в лёгких-острой застойной гиперемии, отёка и альвеолярной эмфиземы, в поч-ках-острого серозного гломерулонефрита и зернистой дистрофии; отмечено полнокровие селезёнки; гиперемия, периваскулярный отёк и кровоизлияния в участках головного мозга.

Наибольшие отложения гемосидерина отмечены в селезёнке, печени, эпителии и содержимом почечных канальцев.

При исследовании мазков-отпечатков из поражённых органов, наибольшую паразитемию и полиморфизм возбудителей обнаруживали в почках, печени и селезёнке. У спленэктомированных собак наибольшее количество паразитов отмечали в мазках-отпечатках лёгких, почек и печени, в то время как в препаратах сердца и лимфатических узлах инвазия была меньше.

2.2.4. Методы выделения Babesia canis из крови больных бабезнозом собак и приготовление антигена

Исходным материалом для получения антигена служила кровь спленэктомированных доноров, которых обескровливали при максимальной паразитемии. Обработку крови проводили в день её взятия или не позднее следующего дня. Из крови собак №2,6 и 11 с паразитемией 0,9%; 5,5% и 6,3% соответственно антиген готовили по методике, предложенной для приготовления анаплазменного и нутталлийного антиге-нов(Степанова Н.И.,1963).При этом, в наших опытах происходила большая потеря возбудителя.

Анализируя результаты предыдущего опыта, выделение возбудителя из крови собак №12(V),13(1V) и 13(V) с паразитемией 27,3%; 10,5% и

4,5% соответственно мы проводили по разработанной нами методике с использованием щадящих режимов обработки крови.

2.2.5. Сравнительное изучение активности антигенов, приготовленных разными методами

Готовые серии антигенов проверяли на активность, специфичность и определяли их рабочие титры в РДСК и ИФА. При титровании антигенов проводили сравнительную оценку их качества в зависимости от уровня исходной паразитемии и метода их приготовления.

Проведя ряд серологических исследовании по РДСК мы установили, что несмотря на высокую паразитемию крови(5,5% и 6,3%),рабочие титры антигенов, полученных из неё по методу Степановой Н.И., были самые низкие(1:2). Естественно, такие антигены не могли быть использованы в серологических реакциях.

Активность антигенов, полученных по нашей методике из крови с па-разитемией 27,3% и 4,5% составляла в РДСК 1:16 и 1:8 соответственно. Из этого следует, что степень активности антигенов находится в прямой зависимости от метода их приготовления. Использование щадящих режимов обработки крови с возбудителями позволило нам сохранить высокую исходную паразитемию крови доноров и отметить прямую зависимость между ней и активностью полученных антигенов.

Активность антигенов, полученных из крови с паразитемией 27,3%; 10,5% и 4,5% мы также изучали в ИФА. Реакцию ставили на полистироловых планшетах фирмы "Огетег" путём последовательного внесения в лунки по 100 мкл антигена, 40% фетальной жидкости на ФСБ(0,01М; рН=7,4), сыворотки, конъюгата и субстрата. В качестве наиболее активного был взят антиген, полученный из крови с паразитемией 27,3%, диагностический титр которого составил 1:10.

2.2.6. Динамика сывороточных антител у экспериментально заражённых собак к возбудителю бабезиоза

2.2.6.1. Динамика комплементсвязывающих антител при исследовании в РДСК. Изучение динамики сывороточных антител проводили с учётом развития паразитемии, тяжести процесса, стадии переболе-вания и паразитоносительства. Результаты серологических исследований сывороток крови животных до заражения во всех случаях были отрицательными.

При сопоставлении данных микроскопических и серологических исследований при подостром течении бабезиоза с благоприятным исходом заболевания отмечено, что рост царазитемии и комплементсвязывающих антител не являются двумя параллельными реакциями. Снижение количества паразитов или полное их отсутствие в крови к 8-10 сут после заражения совпадало с первичным выявлением антител в разведениях сыворотки 1:5(+)-1:10(+). Наибольшие титры антител-от 1:5(#) до 1:80(+) отмечали в период между 20-35 сут. К 45-50 сут регистрировали уменьшение титров антител до 1:20(++)-1:10(++), которые продолжали снижаться и к 60-65 сут достигали 1:5 (+)-Г.Ш (+), удерживаясь на таком уровне до 80 сут (срок наблюдения).

Таким образом обнаружение паразитов в периферической крови предшествовало обнаружению антител методом РДСК в сыворотке. При этом, наивысший титр антител отмечался после регистрации максимального количества паразитов в крови. У собак, павших в результате переболевания бабезиозом, отмечали отсутствие специфических антител даже в низких титрах на фоне роста паразитемии. Считаем, что у животных, погибающих от бабезиоза, защитные факторы иммунитета, в

том числе и гуморальные, резко ослабевают, что обуславливает бурный рост иаразитемии и развитие патологических процессов.

2.2.6.2. Динамика накопления антител, выявляемых с помощью

ИФА. При остром течении бабезиоза на 5-е сут после заражения показатели оптической плотности(ОП), соответствующие уровню титров антител, составляли 0,569±0,03, что на 17,3% превышало исходные данные.

При подостром течении бабезиоза с благоприятным исходом установили достоверное увеличение ОП на 3-й сут после заражения до 0,873±0,02, что в 2,1 раза превышало исходную. Максимальный уровень антител регистрировали на 32-35 сут после заражения, когда ОП в 3,8 раз превышала исходные данные. После этого срока показатели ОП постепенно снижались, достигая на 60-65сут-1,088±0,02.

В связи с этим отметим, что наиболее высокую степень-иммунного ответа мы регистрировали у животных, впоследствии выздоровевших от бабезиоза, чем у тех, у которых заболевание протекало тяжело и заканчивалось летально. При этом титр антител достигал максимума только в период паразитоносительства

Это подтверждается результатами исследований относительного содержания Т- и В-лимфоцитов, которые показали повышение их уровня на 7-8 сут до 54,52±2,6% и 16,0±1,3% соответственно, что в 1,2 и 1,6 раз превышало контрольные. К 14-21 сут уровень Т и В-клеток незначительно снизился до 49,70+2,3% и 14,4±1,2%.На 40-43 сут содержание Т- и В-лимфоцитов возросло на 23% и 22,4% против контрольных данных.

При анализе результатов клинических, серологических, гематологических исследований установлено, что одним из факторов, обуславливающих слабое развитие паразитемии и клинических признаков является быстрый рост титров антител, а также активизация клеточных факторов, которые, вероятно, подавляют размножение возбудителя в организме и соответственно развитие патологических процессов.

С целью изучения динамики специфических антител при реинвазии мы провели серию опытов на животных №7(V) и №37, вторично заразив их спустя 29 и 21 сут и третий раз спустя 20 сут после вторичного заражения. Инвазионным материалом каждый раз служила кровь с па-разитемией: 1-0,23% и 0,67%; 2-27,3% и 3-1,2%, которую первые два раза вводили подкожно в количестве по 5 мл, а третий раз — внутривенно по 6 и 8 мл соответственно. Контролем при 2-ном и 3-ном заражении служили животные №38 и №16 в возрастеЗ-4 мес., которых заражали однократно 5 и 6 мл крови соответственно.

После 1-ного заражения у подопытных собак отмечали кратковременный подъём температуры до 39,4-39,7°С, незначительное угнетение, а в мазках крови-единичных паразитов. На 10-13е сут состояние животных нормализовалось. В результате комплексных исследований, проведённых после 2-ного и 3-ного заражения в течение 20 и 60 сут соответственно, клинически каких либо отклонений у собак не выявили. Серологические исследования показали, что на 25-29 сут после 1-ного заражения показатели ОП(1,687±0,04)в 3,5 раза превышали исходные. На 512 сут после 2-ного заражения титры антител резко снизились, при этом ОП составила 1,198±0,08 и 0,711±0,02 соответственно. После 3-ного заражения уровень антител увеличивался вплоть до 6-10 сут, а затем снижался к 30-38 сут. в связи с чем регистрировали колебания ОП с 1,383±0,02 до 1,093±0,06. К 60-65 сут после заражения ОП составила 1,391±0,02, что в 2,9 раза превышало исходные данные(0,485±0,09).

Таким образом, введение большей дозы возбудителя при реинвазии способствовало резкому снижению титров антител, возникших в ответ на первичное заражение. Это можно объяснить, видимо, тем, что максимальная паразитемия подавляет реактивность организма и, следовательно, процессы антителообразования. Тем не менее, содержание антител в сыворотке крови реципиента, возникших в ответ на первичное введение возбудителя, оказалось достаточным для того, чтобы предотвратить размножение паразитов в организме и развитие симптомоком-плекса при реинвазии, в то время как для неиммунного животно-го(№38) эта доза оказалась смертельной.

2.2.7. Испытание верибена при бабезиозе у собак. Наши исследования на спонтанно заражённых собаках, а также данные большинства практикующих ветеринарных врачей показали, что применение верибена для лечения бабезиоза в рекомендуемых дозах 3,5-4,2 мг/кг по ДВ проблематично, поскольку они обладают выраженными побочными реакциями в организме животных.

С целью изыскания оптимальной дозы препарата мы провели исследования в экспериментальных условиях на 18 больных и контрольных животных. В первом опыте использовали 6 собак, экспериментально заражённых В. canis, которым препарат вводили в дозах 4,2 и 3,5 мг/кг по ДВ. На 11 сут. после введения препарата в дозе 4,2мг/кг по ДВ показатели эритроцитов-3,45±0,13млн/мкл и гемоглобина-55,2±1,2г/л мало отличались от исходных; количество лейкоцитов возросло до 39,2±0,09(против 6,75+1,2тыс/мкл). До и после введения препарата эо-зинофилы не выявляли. После введения верибена в дозе 3,5мг/кг по ДВ больным животным отмечалась та же тенденция в динамике гематологических показателей. В первом и втором случаях к 3-м сут после применения препарата паразитов в мазках крови не выявляли. При этом регистрировали угнетение, отсутствие аппетита, отёки, нарушение координации движений, саливацию, кровоизлияния.

Дальнейшие исследования проводили на 12 здоровых(контрольных) собаках Препарат вводили в дозах 2,5-3,5 мг/кг по ДВ двукратно с интервалом 3 сут.

На 6-7 сут после введения верибена в дозе 3,5 мг/кг по ДВ регистрировали повышение количества лейкоцитов до 34,12±0,67тыс/мкл и снижение-эозинофилов. Число эритроцитов на 19,2% было ниже исходного. Активность ACT и АлТ увеличилась до 37,48±2,08мЕ/л и 39,19±2,4мЕ/л (против 19,6±2,5мЕ/л и 20,48±2,2 мЕ/л соответственно). При этом регистрировали расстройство жевания, отёчность, расстройство координации движении и другие признаки интоксикации.

Таким образом, и на контрольных(здоровых) животных установлено, что введение верибена в рекомендуемой дозе 3,5 мг/кг по ДВ вызывает развитие целого ряда побочных реакций, свидетельствующих о глубоком нарушении морфофункционального состояния органов. Патолого-морфологически — в сердце, головном мозге, в основных органах де-токсикации — печени и почках, отмечены явления дистрофического характера, что в совокупности и обуславливает гибель животных.

В отличие от указанных доз, однократное и двукратное введение препарата контрольным животным с интервалом 3-е сут в дозах 2,5;3,0 и 3,1 мг/кг по ДВ не вызвало изменений клинико-гематологических и биохимических показателей, развития патологических процессов и нарушения функциональной активности органов и систем.

Таким образом, считаем, что оптимальной дозой верибена, не вызывающей побочных реакций в организме собак является доза 3,1 мг/кг по

ДВ. После определения оптимальной дозы верибена мы поставили цель определить её профилактическую эффективность. В опыте использовали 6 клинически здоровых животных в возрасте 5-7 мес. которым препарат вводили внутримышечно в дозе 3.1 мг/кг по ДВ: животным №39,40,41-за 10 сутдо заражения, а №42,43,44- за 5 сут до заражения. Собак заражали одновременно подкожным введением крови с парази-темией 1,5% по 5 мл каждой. Контролем служили 3 собаки, заражённые по той же схеме без предварительного введения верибена.

Исследования показали, что наиболее эффективным оказалось введение препарата животным за 5 сут до заражения. В течение 30 сут после заражения паразитов в мазках периферической крови мы не обнаруживали. При этом, клинико-гематологические показатели находились в пределах физиологических норм. С другой стороны, у контрольных собак, а также у животных, которым препарат ввели за 10 сут до заражения регистрировали признаки, характерные для бабезиоза, что обусловило введение им верибена в дозе 3,1 мг/кг по ДВ с лечебной целью. К 2-3 сут после применения препарата паразитов в мазках периферической крови животных не выявляли. На 25-30 сут клинико-гематологические показатели приблизились к физиологическим нормам.

Таким образом установлено, что применение верибена в дозе 3,1 мг/кг по ДВ с профилактической целью эффективно при введении животным за 5 сут до заражения и не эффективно - за 10 сут.

Выводы

1 .Бабезиоз собак - широко распространённое заболевание в Южном, Западном и Юго-Западном округах г. Москвы. При этом, наиболее неблагополучным за период 1995- 1999гг. являлся Южный округ, где зарегистрировали максимальное количество больных животных. В Московской области за указанный период наиболее неблагополучными оказались Воскресенский, Шатурский и Егорьевский районы.

2.Сезонная динамика бабезиоза зависит от ландшафтно-климатических условий местности и особенностей температурных колебаний в году. Так, в изучаемом регионе бабезиоз первично регистрируется в конце второй-середине третьей декады апреля при температуре окружающей среды около 12°С, достигая максимума инвазии в первои-второй декадах мая и осенью-в первой-второй декадах сентября. Распространение бабезиоза имеет значительную вариабельность в пределах ± 10-20 сут. в отдельные годы, где лимитирующим фактором служит температура окружающей среды как весной, так и осенью.

3.При всех случаях заражения собак возбудителем бабезиоза заболевание протекает остро и подостро, при этом происходят значительные нарушения общего состояния и морфофункциональной деятельности систем и органов больного:

- при остром течении бабезиоза па пятые сут после заражения установлено достоверное уменьшение количества эритроцитов до 1,73±0,93млн/мкл; уровня гемоглобина-до 40,3±1,9г/л; лейкоцитов до 5±1,2тыс/мкл. При этом увеличиваются палочкоядерные формы и ме-тамиелоциты и в 2,3 раза - моноциты; число лимфоцитов и эозинофи-лов снижается; общии белок, альбумины и у- глобулины у больных собак достоверно снижаются по сравнению с данными контрольных животных;

- при подостром течении бабезиоза установлено увеличение количества лейкоцитов до 32,98±0,1тыс/мкл и показателей а, р и у- глобулинов.

4.При бабезиозе установлены глубокие дистрофические изменения в паренхиматозных органах и центральной нервной системе, которые сопровождаются достоверным повышением активности ACT и АЛТ и снижением — псевдохолинэстеразы как при остром, так и при подост-ром течениях.

5.При остром течении бабезиоза в начальный период заболевания в крови преобладали крупные и средние неправильные формы, а также мелкие округлые формы паразитов. В пик инвазии преобладающими являлись одиночные неправильные, крупные и средние грушевидные парные формы паразитов; при подостром течении инвазии преобладающими являлись грушевидные парные связанные и мелкие грушевидные не связанные формы паразитов.

6.Вирулентность Babesia cams зависит от многих факторов, в т.ч. от возраста собак, количества пассажей и длительности хранения крови больного животного. Пассажирование возбудителя через организм взрослых собак и хранение его в крови при +2-4°С более двух суток резко снижает вирулентность возбудителя, что позволяет говорить о нецелесообразности использования указанных приёмов в целях экспериментального воспроизведения бабезиоза. Степень паразитемии у реципиентов зависит от возраста и реактивности организма животного.

7 .Для приготовления антигена наиболее приемлемой оказалась взвесь возбудителя, выделенная по предложенной нами методике из крови спленэктомированных животных в период наивысшей паразитемии.

8.Изучение диагностической ценности серологических реакций -РДСК и ИФА при бабезиозе у собак показало большую чувствительность последней, при этом установлено: антитела первично в сыворотке крови выявляются к концу инкубационного периода; по мере роста паразитемии и проявления клинических признаков бабезиоза титр антител повышается; рост титров антител и максимальный их уровень соответствует улучшению общего состояния больных собак и паразитоноси-тельству соответственно.

9.Верибен в дозе 3,1мг/кг по ДВ при одно и двукратных инъекциях с интервалом 3 сут оказывает лечебную эффективность при бабезиозе собак. Протективное действие вериоена в дозе 3,1 мг/кг лимитировано пятью сутками до заражения.

В рекомендуемых в печати дозах 3,5мг/кг и 4,2мг/кг по ДВ верибен обладает выраженным токсическим действием, что приводит к гибели животных.

Сведения о практическом использовании полученных автором результатов.

1.Данные диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекции и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре паразитологии и инвазионных болезней животных МГАВМиБ им.К.И. Скрябина.

2.На базе лаборатории препаративной биохимии антигенов ГНЦ Института Иммунологии МЗ РФ получен антиген для проведения серологических исследований при бабезиозе собак.

3.В результате испытания антигена при диагностике бабезиоза и ба-безионосительства у собак с использованием РДСК и ИФА установлена специфичность и активность полученного антигена, что подтверждено актом от 20.10.99.

4. Результаты испытания верибена используются в работе ветеринарной клиники ООО «Витус» г. Москвы; Городской ветеринарнои станции по борьбе с болезнями животных г. Химки; в ветеринарной клини-

ке «АСВЕТ» г. Одинцово Московской области; в ветеринарной клинике при кафедре биологии и патологии мелких домашних и экзотических животных МГАВМиБ им.К.И. Скрябина.

Рекомендации по использованию научных выводов

Исходя из наших комплексных исследований в условиях г. Москвы и Московской области с целью усовершенствования мер борьбы с бабе-зиозом, рекомендуем проводить следующие мероприятия:

1.Для предотвращения нападения клещей выгул животных производить на более открытых участках лесных массивов с третьей декады апреля и по октябрь включительно; рекомендуем в течение всего периода нападения клещей после выгула собак осматривать поверхность тела животного, использовать гребень с плотным расположением зубцов для вычёсывания клещей, которых необходимо уничтожать в растворах инсектоакарицидов.

2.С целью профилактики заражения клещей, а также диагностики па-разитоносительства, рекомендуем проводить серологические исследования собак в ноябре и марте методом ИФА.

3.На основании результатов сравнительного испытания токсичности верибена рекомендуем использовать в качестве лечебной дозу 3,1мг/кг по ДВ вместо указанных в инструкции доз - 3,5 и 4,2мг/кг по ДВ.

4.Исследования позволяют рекомендовать разработанный нами метод приготовления антигена для РДСК и ИФА:

- в целях получения максимальной паразитемии проводить заражение только спленэктомированных животных внутривенно инвазированной кровью спустя 24-48 часов после операции;

- для проведения экспериментальных исследований при бабезиозе проводить заражение собак, средний возраст которых должен составлять 1,5-7 месяцев.

б.На основании результатов исследований диагностической ценности двух серологических реакций- РДСК и ИФА при бабезиозе у собак рекомендуем для диагностики заболевания и бабезионосительства использовать ИФА.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 .Балагула Т.В., Акбаев М.Ш. Симптомокомплекс у интактных и спленэктомированных собак при экспериментальном бабезиозе.//Проблемы инфекционных и инвазионных болезней в животноводстве на современном этапе. //Сб. научных трудов МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина., 1999.-С.279 - 280.

2.Балагула Т.В., Зяблоикий В.Т., Акбаев М.Ш. Эпизоотология бабезиоза собак в условиях г.Москвы и Московской области.//Сб. научных трудов МГУПБ, 1999.-С.29-31.

3.Балагула Т.В., Акбаев М.Ш. К методике заражения собак возбудителем бабезиоза// Сб. трудов седьмой международной конференции по проблемам ветеринарии мелких домашних животных. 1999.-С. 134-138.

4. Балагула Т.В. Пироплазмоз собак. //Друг. - 1998.№6. С. 54.

Сдано в производство Ризограф Заказ 126 Тираж 100

Типография Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина 109, Москва, ул. Академика Скрябина, 23

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Балагула, Татьяна Викторовна

ВВЕДЕНИЕ

1. Обзор литературы 9 1.1 .Краткая климато-географическая характеристика

Московской области 9 1.2.Историческая справка о возбудителе и распространении болезни

1.3.Эпизоотология бабезиоза собак в Нечернозёмной зоне

1.4.Морфология и биология Babesia canis

1.5.Симптомокомплекс и течение болезни

1.6.Патогенная роль возбудителя бабезиоза в организме собак

1.7.Иммунитет при бабезиозе у собак

1.8.Патологоморфологические изменения 43 * 1.9.Лечебно-профилактическиемероприятия

2.Собственные исследования

2.1.Материалы и методы

2.1.1. Характеристика опытных животных , •

2.1.2. Методы исследований

2.2.Результаты исследований 61 2.2.1.Эпизоотология бабезиоза собак в условиях г.Москвы и Московской области 61 2.2.1.1 .Распространение бабезиоза собак 61 2.2.1.2. Сезонная и возрастная динамика заболевания 77 2.2.2.Заражение доноров и условия, влияющие на тяжесть переболевания и выраженность паразитемии

2.2.3.Патогенная роль Babesia canis при экспериментальном бабезиозе собак

2.2.3.1.Симптомокомплекс.у интактных и спленэктомированных собак при экспериментальном заражении возбудителем бабезиоза

2.2.3.2.Изучение морфологии крови у собак при разной тяжести течения экспериментального бабезиоза

2.2.3.3.Биохимические показатели крови у больных животных

2.2.3.4.Патологоморфологические изменения при экспериментальном бабезиозе

2.2.4.Методы выделения Babesia canis из крови больных бабезиозом собак и приготовление антигена

2.2.5.Сравнительное изучение активности антигенов, приготовленных разными методами

2.2.6. Динамика сывороточных антител у экспериментально заражённых собак к возбудителю бабезиоза 159 2.2.6.1. Динамика комплементсвязывающих антител при исследовании в РДСК 159 2.2.6.2. Динамика накопления антител, выявляемых с помощью ИФА

2.2.7.Испытание верибена при бабезиозе у собак

2.2.7.1.Сравнительное испытание верибена в дозах

2,5-4,2мг/кг по ДВ

2.2.7.2. Лечебно-профилактическая эффективность верибена

Введение Диссертация по биологии, на тему "Бабезиоз собак"

Собака-это животное, которое можно поставить рядом с лошадью в историческом развитии человечества. Она была первым животным, приручённым человеком 15-20 тыс. лет тому назад.

Безусловно, собака имеет много общего с волком, шакалом и их гибридами, что интересно в практическом отношении с учётом наличия у них ряда общих паразитов.

Необходимо указать, что ранее в протозоологической практике, собак использовали как лабораторный объект, в связи с чем их заражали возбудителем Babesia canis и на примере бабезиоза собак изучали некоторые вопросы биологии, иммунитета, мер борьбы и профилактики, подразумевая их идентичность при ряде пироплазмидозов животных.

Однако в настоящее время общепризнанно, что при всех кровепаразитар-ных болезнях, включая и бабезиоз собак, существуют особенности патогенеза и иммунитета, свойственные определённым заболеваниям и видам животных, что исключает единый унифицированный подход к изучению этих вопросов, а тем более приравнивание данных, полученных при бабезиозе у собак, например, к бабезиозу крупного рогатого скота.

Нужно отметить, что на нынешнем этапе люди(особенно население города) собаке придают особое значение. К сожалению, болезни собак инфекционной, инвазионной и незаразной этиологии до сих пор наносят значительный экономический ущерб служебному собаководству и частным владельцам собак.

В этой связи отметим, что среди паразитарных болезней собак особое место занимает бабезиоз - трансмиссивное заболевание, вызываемое беспигментным эндоглобулярным простейшим Babesia canis из семейства Babesii-dae, клинически характеризующееся лихорадкой, анемией и желтушностью конъюнктивы, склеры, видимых слизистых оболочек, гемоглобинурией, расстройствами функций сердечно-сосудистой, дыхательной и пищеварительной систем, оканчивающиеся, как правило, при несвоевременном лечении, гибелью животных.

Переносчиками возбудителя бабезиоза собак в условиях центральных областей Нечерноземья являются клещи рода Dermacentor: D.pictus и D. mar-ginatus, распространённые повсеместно, что и обуславливает широкое распространение бабезиоза.

Заболевание встречается в Средней зоне Европейской части России, в Киевской, Московской, Саратовской, Омской, Новосибирской и других областях, на Урале, в Крыму, на Кавказе (Марков А.А., 1957 и др.).

В последнее время имеется тенденция к возрастанию экстенсивности инвазии. Одним из факторов, обуславливающих поддержание эпизоотических очагов является длительное, до 1 года носительство бабезий в организме однократно переболевших собак(Иванюшин Б.И., 1973, Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Шумилов Б.В., 1973.), во время которого возможны рециди-bbi(Sergent, Donatien, Parrot, Lestoguard,1930). Кроме того, для Babesia canis свойственна трансовариальная циркуляция в клещах рода Dermacentor, что создаёт условия для длительной сохраняемости возбудителя в организме переносчиков. Этому способствует также и продолжительная-до дв>^х лет-диапауза инвазированной фазы клеща, что лишний раз доказывает большое эпизоотологическое значение клещей как резервентов инвазии в природе.

К возбудителю, кроме собак, восприимчивы: Canis aureus(maKaji), Canis latrans(KofioT), Canis 1ирш(волк), Canis(Thos) adustus(inaKan полосатый), Canis (Thos) mesomelas(niaKan чепрачный), Nyctereutes procyonoides (собака енотовидная), Vulpes vulpes(nncHua), которые играют весьма важную роль в поддержании клещевых очагов, тем самым способствуя сохранению возбудителя в природе(Степанова Н.И., Казаков Н.А., Заблоцкий В.Т., 1982, Крылов М.В., 1996 и др.).

К настоящему времени относительно хорошо изучены морфобиологиче-ские особенности Babesia canis, клинические признаки и течение болезни, некоторые аспекты эпизоотологии бабезиоза собак, предложен ряд химиоте-рапевтических препаратов для лечения(Якимов B.JL, 1931; Иванюшин Б.И., Шумилов Б.В., 1971; Колабский Н.А.,1960,1971;Гайдуков А.Х., 1957,1960; Никольский С.Н.,1990; Лебедева В.Л.,1992; Popovic N.A., Ristic М., 1970, 1981; Schetters ТН„ 1991, 1993; Jacobson L.S.,1994 и др.).

Однако проблема борьбы с бабезиозом ещё далека от разрешения, что объясняется, главным образом, недостаточностью знаний сущности патологии, возникающей в ответ на взаимоотношение паразита и хозяина. Кроме того, недостаточно изучены механизмы, подавляющие рост и развитие возбудителя в организме, обуславливающие тем самым не только индивидуальные различия проявления заболевания как при первичном заражении так и при реинвазиях, но и благодаря которым организм становится невосприимчивым к возбудителю.

Кроме того, до сих пор в нашей стране нет средств специфической профилактики бабезиоза. Что же касается химиопрофилактики, то она также не достаточно разработана. Поэтому в настоящее время единственно доступным способом профилактики является уничтожение или предупреждение нападения клещей на животных как механическими, так и химическими способами.

Одним из основных факторов защиты организма являются специфические антитела. Тем не менее, выявить их наличие и проанализировать значение гуморального фактора иммунитета стало возможным лишь только после того, как была доказана принципиальная возможность использования серологических реакций при пироплазмидозах (Schindler R., Dennig Н.К., 1960;

Ristic M.,1981; Schetters Th. Р.М.Д991Д993; Adachi K, Ueno Ch., Makimura S., 1993 и др.).

Несмотря на то, что изучением механизмов возникновения и проявления иммунитета при бабезиозе собак и носительства отечественные исследователи занимались в течение ряда лет (Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Тар-вердян Т.Н., 1963; Гайдуков А.X., 1957; Ли П.Н., 1976; Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Шумилов Б.В.,1973; Никифоренко В.И.,1976) некоторые важные вопросы, касающиеся сроков сохранения возбудителя в организме собак после переболевания, характера иммунологической перестройки организма и взаимоотношений паразита и хозяина требуют дальнейшего изучения.

За рубежом проблеме иммунологического статуса при бабезиозе у собак уделяется гораздо больше внимания(Ма111егЬе W.D.,1956; Ristic М., 1981; Molinar Е., et.al.1982; Schetters Th. P.M., Kleuscens J., 1991; Adachi K., 1993 и ДР-)

В настоящее время общеизвестно, что при бабезиозе собак иммунные реакции являются общефизиологической защитной функцией организма, основу которой составляют клеточные и гуморальные факторы. В ответ на внедрение паразита происходит иммунологическая перестройка макроорганизма, что указывает на необходимость использования иммунологических ме- | тодов изучения патогенеза и механизмов развития иммунитета, для ранней диагностики заболевания и, особенно, носительства, протекающего дли- ( тельное время без выраженных признаков болезни. ^

На сегодняшний день в нашей странег^серологические методы диагностики бабезиоза собак не разработаны. Более того, нет отработанных методик, позволяющих получитьувысокую степень паразитемии у собак с целью приготовления антигена. Соответственно, нет и разработанной Технологии изготовления антигена. В 1972 г. Иванюшиным Б.И. был получен антиген от

У) больных бабезиозом собак, использованный авторомЁ реакции диффузной преципитации в геле, применение которой, однако, не вышло за рамки лабораторных испытаний. Кроме того, в литературе мы не обнаружили данных, касающихся^цинамики паразитемии в связи с синтезом антител при бабезиозе собак.

Всё вышеизложенное свидетельствует о необходимости изучения особенностей эпизоотологии заболевания, некоторых вопросов биологии возбудителя, а также разработки методов приготовления высокоактивного и специфичного антигена для серологической диагностики бабезиоза собак. Если учесть широкое распространение бабезиоза в различных регионах страны, а также недостаточность знаний в области биологии возбудителя и вызываемой им патологии в организме животных, а также эпизоотологии заболевания и мер борьбы, то изучение данной темы, безусловно, является актуальным.

Цель и задачи исследования:

В процессе выполнения настоящей работы перед нами была поставлена цель-изучить некоторые аспекты биологии возбудителя Babesia canis и особенности эпизоотологии заболевания в условиях г.Москвы и Московской области; изучить иммунологический статус организма при бабезиозе и тем самым усовершенствовать меры борьбы с бабезиозом собак. Для этого следовало решить следующие задачи: -воспроизвести бабезиоз у собак в экспериментальных условиях; -изучить эпизоотологические особенности бабезиоза собак в условиях г.Москвы и Московской области;

-изучить клинико-гематологические и биохимические показатели при различном течении бабезиоза в динамике инвазии; -изучить патологоморфологические изменения в организме при бабезиозе; -определить условия, влияющие на тяжесть переболевания и степень пара-зитемии у заражённых животных;

-отработать методику выделения возбудителя Babesia canis из крови спле-нэктомированных доноров и приготовить антиген;

-изучить активность полученного антигена, динамику сывороточных антител у больных животных и паразитоносителей с использованием серологических реакций-реакции длительного связывания комплемента (РДСК) и иммуноферментного анализа (ИФА);

-определить лечебно-профилактическую эффективность верибена при экспериментальном бабезиозе.

Научная новизна.

Изучены и обобщены сведения о распространении, сезонной и возрастной динамике бабезиоза собак в условиях г. Москвы и Московской области.

Отработаны методы, позволяющие воспроизвести бабезиоз в экспериментальных условиях.

Изучены клинико-гематологические и биохимические показатели при разной тяжести течения экспериментального бабезиоза в динамике инвазии.

Разработаны условия для получения высокой паразитемии у доноров с целью приготовления антигена.

Разработан метод приготовления антигена для серологической диагностики бабезиоза собак. Впервые изучена динамика антителообразования у экспериментально заражённых В.canis животных с помощью двух серологических реакций-РДСК и ИФА и показана её взаимосвязь с динамикой паразитемии. Выявлено, что ИФА является более чувствительным серологическим тестом при бабезиозе собак, чем РДСК.

Практическое значение работы.

1. Установлены первичные сроки заражения, особенности распространения и развития инвазии в сезонно-возрастном аспекте в условиях г.Москвы и Московской области.

2.Разработаны методы воспроизведения бабезиоза у собак в экспериментальных условиях.

3.Решение поставленных задач позволяет определить глубину патологии и разработать научно-обоснованные методы специфической и патогенетической терапии бабезиоза у собак.

5.Разработанный метод приготовления антигена имеет практическое значение для ранней диагностики заболевания и паразитоносительства.

6. Определена высокая диагностическая достоверность ИФА при бабезиозе собак.

7.Испытание верибена дало возможность предложить препарат в дозе 3,1 мг/кг по ДВ с лечебной и профилактической целью при бабезиозе собак.

Апробация полученных результатов.

Материалы диссертационной работы доложены на совещаниях кафедры паразитологии и инвазионных болезней животных МГАВМиБ им. К.И.Скрябина в 1998-1999г.г.; на 7 международной конференции по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных, 1999г.; на конференции, посвященной 80-летию МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, 1999г.; на конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. И.В. Орлова; на объединённой сессии Координационного совещания по ветеринарной гельминтологии, Центрального совета Общества гельминтологов России и секции "Инвазионные болезни животных" РАСХН, 2000г.

Основные материалы диссертации отражены в четырех научных статьях.

Основные положения, выносимые на защиту диссертации.

1. Результаты изучения распространения, сезонной и возрастной динамики бабезиоза собак в условиях г. Москвы и Московской области.

2. Результаты экспериментального заражения собак Babesia canis и условия, влияющие на тяжесть течения болезни выраженность паразитемии.

3.Результаты изучения морфологических и биохимических показателей крови, а также патологоморфологических изменений при различной тяжести течения бабезиоза.

4.Результаты изучения динамики антителообразования методами РДСК и ИФА при экспериментальном бабезиозе у собак.

5.Результаты испытания различных доз верибена при бабезиозе собак с лечебной и профилактической целями.

1. Обзор литературы.

1.1. Краткая климато-географическая характеристика Московской области.

Московская область была образована в составе Российской Федерации 14 января 1929г. Она расположена в центральной части Восточно-европейской равнины, в междуречье Волги и Оки, на границе смешанных и широколиственных лесов. В целом, для Московской области характерен равнинный рельеф с чередованием холмистых возвышенностей и плоских низин. В северной части области с юго-запада на северо-восток простирается московская возвышенность, высотой до 270-310 м. над уровнем моря. Наиболее чётко холмистый рельеф выражен в её Клинско - Дмитровской гряде. Северный край возвышенности более крутой, расчленён долинами рек на отдельные холмы, чередующиеся с плоскодонными, нередко заболоченными впадинами. К северу от Московской возвышенности лежит Верхневолжская низменность (120-150 м.) - плоская, невысокая, заболоченная равнина с грядами и слабохолмистыми дюнами. В её пределах выделяются отдельные низины - Шашинская на северо-западе, Дубнинская - на северо-востоке. На юге Московская возвышенность плавно переходит в Москворецко-Окскую равнину(150-180м) с малопересечёнными водоразделами и развитым эрозионным рельефом по долинам рек. Юго-восточная часть Московской области занята западной частью Мещёрской низменности - плоской, сильно заболоченной, местами бугристой равниной (120-150м). Южная часть Московской области занята северной частью Среднерусской возвышенности (150-200 м.), расчленённой долинами рек и густой овражно-балочной сетью.

Климат области умеренно-континентальный с умеренно-холодной зимой и с тёплым летом.

Средняя температура января минус 10-15 градусов, июля-плюс 18-20 градусов. В отдельные зимы морозы могут достигать минус 30-35 градусов, с максимумом летних температур в июле плюс 35-40 градусов. Среднегодовое количество осадков 450-650 мм, причём наиболее увлажнёнными являются северные и западные районы Московской области, а наименее-юго-восточные районы. Продолжительность вегетационного периода 130-140 суток. Реки Московской области целиком принадлежат бассейну Волги.

В Московской области преобладают древесно-подзолистые почвы различного механического состава, с невысоким естественным плодородием, требующие известкования и внесения удобрений. На Мещёрской и Верхневолжской низменностях преобладают подзолисто-болотистые и болотистые почвы лёгкого состава, нуждающиеся в мелиорации. На юге расположены светло-серые сильно оподзоленные почвы, а на крайнем юге - серые лесные почвы.

Московская область характеризуется значительной площадью лесов(более 1,9млн.га), в которых сохранились лось, куница, чёрный хорёк, барсук, лисица, кабан, заяц-беляк и другие звери. В западных и восточных районах расположены наиболее обширные массивы лесов, в составе которых преобладают берёза, осина, ель и сосна. В северной части области господствуют леса из берёзы, осины с примесью широколиственных пород.

1.2. Историческая справка о возбудителе и распространении болезни.

Babesia canis была обнаружена впервые в Милане (Piana и Galli-Valerio, 1895) у собаки с высокой температурой, желтухой и гемоглобинурией. R.Koch в 1898 г. в Восточной Германской Африке наблюдал у собак маля-риеподобное заболевание и обнаружил при этом паразитов, более или менее сходных с паразитами малярии человека. В последующем подобное заболевание было описано в 1899 г. в Южной Африке(НШ:с11еоп, 1899). Возбудитель бабезиоза собак был описан в этой же стране учёными Carrington, Purvis и Carwright-Reed.

В Южной Африке это заболевание наблюдали: Spreul, 1894; Robertson, 1902; Theiler,1903. Celli изучал его в Ломбардии и в Римской провинции (1900). В этом же году Marchoux установил у собак этого возбудителя в Сенегале и, следуя номенклатуре, предложенной Kaveran, назвал его Piroplasma canis (1900). Leblanc (1900), а затем Almy и Nocard (1901) обнаружили его во Франции у больной собаки в клиниках Альфорской ветеринарной школы.

В последующем подобные образования в мазках крови больных туземных и английских собак были описаны в Индиифе^еИу, 1904;Lingard и Jennings, 1904; James, 1905; Webb, 1905; Christophers, 1907).

О широком распространении бабезиоза собак в Индии, особенно среди импортированных, свидетельствуют данные Pease и Gunn(1908). В 1910 г. Patton идентифицировал возбудителя в Мадрасе с новым паразитом P.gibsoni.

Имеются многочисленные сведения об обнаружении возбудителя и вызываемой им болезни в различных весьма отдаленных местностях. В Венгрии его описал Wetzl (1904), в этом же году Martinez описал возбудителя в Пор-то-Рико, Memmo, Martoglio и Adani (1905) - в Эритрее, Wilbert (1905) - во Французской Западной Африке.

В Китае (Шантунг) бабезиоз был описан Martini (1907), a Leutpold (1908) наблюдал высокую смертность собак в немецких владениях восточной Африки.

Eggerbrecht (1908) установил заболевание у собаки в Tsingtau, a Mathis (1909) обнаружил возбудителя в крови у местных и импортированных собак в Тонкине.

В последующие годы бабезиоз собак был описан в Багдаде и Алеппо (Wenyon, 1911), на Золотом Берегу (Macfie, 1915), в Панаме (Clare, 1918).

На территории России возбудитель бабезиоза собак впервые был выявлен и описан Якимовым B.JI.(1909) в Петербурге у собаки, привезенной с Северного Кавказа и почти одновременно с ним Любинецким В.Л.(1909) в Киеве. Затем заболевание было диагностировано Джунковским А. И. и Лу-сом К. К. в 1909 г. в Закавказье.

Кроме этих открытий, появились сообщения об обнаружении заболевания в Сибири-Оболдуев Г.А., 1910; Орлов Н.П.,1926;в Саратове-Виноградов К.Н.; в Пятигорске-Белавин B.C. В Уральске заболевание было описано Якимовым В.Л., Аманжуловым, Белицером А.В. и Марковым А.А.,1929( цит. по Якимову В.Л., 1931).

Имеющиеся литературные данные прошлых лет свидетельствуют о том, что возбудитель бабезиоза собак был представлен следующими видами, от пироплазмы собак Piroplasma canis, найденной Piana и Galli-Valerio (1895), были отделены паразиты собак в Южной Америке- Rangelia vitalii, в Индии -Achromaticus gibsoni и в Британской Восточной Африке - Rossiella rossi.

В 1910 г. Nuttall Q.H. описал у шакалов в Восточной Африке внутриэрит-роцитарных паразитов как новый вид и назвал Piroplasma rossi. В дальнейшем он дал о нем дополнительную информацию и заменил родовое имя Piroplasma именем Rossiella. Однако Neitz и Steyn (1947), сличившие африканского и европейского паразитов, указали на идентичность весьма существенных морфологических признаков, что дало основание считать их за один вид, каковым и в том и в другом случае должен быть Babesia canis.

В дальнейшем явилось очевидным, что существуют несколько локальных штаммов, передающихся клещами рода Dermacentor в Европе, клещами Rhipicephalus sanguineus в тропических, субтропических и южных регионах и клещами Haemaphysalis leachi в Африке и определяющих, при прочих равных условиях, неодинаковую тяжесть болезни(1Л1епЬе^ G.,1989;Itoh N. et al. ,1989).

Помимо этого, по данным иностранной литературы, различия между штаммами обуславливаются специфичностью переносчиков возбудителей, их ареалом и, что самое главное, отсутствием перекрестного HMMyffirreTa(Ishibashi Т., Sunaga F.,1995).

Reichenow Е.(1935) выделил в качестве самостоятельных видов паразитов, передающихся клещами R.sanguineus и рода Dermacentor и отметил, как весьма характерную особенность более крупные размеры первого паразита и дал ему видовое название Babesia major. Поскольку это название уже было дано паразиту крупного рогатого скота (Sergent Ed. et al, 1926), он впоследствии заменил его именем Babesia vogeli (1937). Собаки, иммунные к В.canis, остаются чувствительными к В.gibsoni, а собаки, зараженные

B.vogeli, не резистентны к инвазии B.canis(KpbLJiOB М.В.,1996). Тем не менее, некоторые авторы (Poisson, 1953) считают B.vogeli синонимом B.canis.

Возбудитель бабезиоза собак в Австралии был впервые обнаружен в г. Таунсвилл у щенков и взрослых собак (Hill and Bolton, 1966). Авторы описали болезнь и крупных грушевидных возбудителей, располагающихся в эритроцитах и, кроме того, экспериментально доказали возможность его переноса посредством клещей Rhipicephalus sanguineus. В дальнейшем это заболевание было описано Callow(1984)y щенков дикой собаки динго(цит. по Irwin P.J., Hutchinson G.W.,1991).

В настоящее время накопившиеся экспериментальные материалы по изучению морфологических и биологических свойств возбудителя бабезиоза собак (Крылов М.В., 1978,1996) дают основание считать Achromaticus gibsoni синонимами В.gibsoni, a E.rossi, Rossiella rossi, Piroplasma canis - синонимами Babesia canis (Patton, 1910), B.major - синонимом B.vogeli (Reichenow E., 1935).

Положение возбудителя бабезиза собак в системе простейших.

Положение пироплазмид в системе простейших долгое время оставалось спорным. Франса (1910) помещал семейство Piroplasmidae вместе с семейством Plasmodidae в класс Sporozoa, в порядок Coccidiomorpha, в подпорядок Haemosporidia.

Исходя из работ Киношита (Kinoshita, 1907), Брейна и Хиндла (Brein, Hin-dle, 1908), которые описали якобы жгутиковые стадии при развитии в позвоночном хозяине у B.canis, Дю-Туа (Du-Toit P.J., 1918) относил пироплазмид к Flagellata(uht. по Степановой Н.И. и др., 1982).

Однако последующие исследования показали полное отсутствие жгутиков у различных форм пироплазмид как в позвоночном, так и беспозвоночном хозяевах, а, между тем, наличие жгутиков и для большинства эластичной оболочки-кутикулы, которая определяет постоянную, обычно удлиненную форму тела, являются критериями для отнесения организмов в класс Flagel-lata. Таким образом, отсутствие этих признаков у пироплазмид делает невозможным включение их в класс Flagellata.

По классификации, предложенной Веньоном (Wenyon С.М., 1926) возбудителя бабезиоза собак вместе с другими возбудителями пироплазмидозов в начале 30-х годов относили к Типу Protozoa (Goldfuss, 1820),

Подтипу Plasmodroma (простейшие, которые передвигаются при помощи жгутиков или псевдоподий и размножаются половым или бесполым делением)

Классу Sporozoa,

Отряду Coccidia,

Подотряду Piroplasmidea,

Семейству Piroplasmidae, Роду Piroplasma (Patton, 1895), Подроду Piroplasma s.str., Виду P.canis.

В основу данной систематики были положены данные о морфологии, биологии возбудителей, наличии полового процесса в организме клеща, парази-тировании в эритроцитах крови позвоночного хозяина и ряд других сходных признаков.

Однако, когда в дальнейшем вопрос о наличии полового процесса у пиро-плазмид был поставлен под сомнение (Regendanz P.,Reichenow Е., 1933; Regendanz P., 1936; Short W.L., 1936; Петров В.Г.,1939; Хейсин Е.М., Муратов Е.А., 1959; Хейсин Е.М., 1963,1968; Крылов М.В., 1965), они были исключены из класса Sporozoa и в связи с чем, по мнению Догеля В.А, Полянского Ю.И., Хейсина Е.М. (1962); Regendanz. P., Reichenow Е.(Степанова Н.И.,1982), их следовало поместить в подкласс Rhizopoda класса Sarcodina, а, по мнению Piekarski G. (1954) - в класс Haemamoebida, характерной особенностью которого является паразитизм в эритроцитах позвоночных и отсутствие у простейших пигмента. Абрамов И.В. (1961) считал, что пироплазмид необходимо выделить в отдельный класс Piroplasmidea. В дальнейшем, проанализировав данные ультраструктуры и учитывая общность отдельных черт ультратонкого строения, Levine N.D. создал новый подтип Apicomplexa и выделили пироплазмид в самостоятельный класс Piro-plasmea Levine (1961), отряд Piroplasmida, в котором автор выделил только одно семейство Babesiidae с одним родом Babesia.

Колабский Н.А. (1977) полагает, что наиболее правильно относить пироплазмид к классу Sporozoa, отряду Piroplasmida, обосновывая это рядом сходных черт в ультратонкой организации пироплазмид и кокцидий и, как следствие, это позволяет предположить наличие у них сходных путей эволюции. Главное морфологическое отличие этих групп паразитических организмов заключается в отсутствии коноида, что может быть связано с приспособлением к паразитированию в эритроцитах.

По мнению Абрамова И.В., Дьяконова Л.П.(1977);Дъяконова Л.П., Орлова И.В., Абрамова И.В.(1985) в семействе Babesiidae необходимо выделить самостоятельный род Piroplasma, мотивируя это некоторыми морфологическими особенностями, на основании чего возбудитель пироплазмоза собак должен иметь родовое название Piroplasma canis.

Крылов М.В.(1994,1996),считая критерии для выделения самостоятельного рода Piroplasma недостаточно обоснованными, предлагает оставить за рассматриваемой группой паразитов одно родовое название Babesia Star-covici, 1893.

Таким образом, основываясь на данных по биологии, ультраструктуре, жизненном цикле пироплазмид, Крыловым М.В. (1996) предложена современная систематика, отражающая новейшие научные достижения в изучении этих простейших, согласно которой возбудитель бабезиоза собак относится к

Царству Protista, Haeckel, 1866;

Типу Sporozoa, Leuckart, 1897(Syn.: Apicomplexa Levine, 1970);

Классу Coccidea, Leuckart, 1879;

Подклассу Piroplasma, Levine, 1961;

Отряду Piroplasmida, Wenyon, 1926;

Семейству Babesiidae, Poche, 1913 (Syn.: Piroplasmidae, Franca, 1910);

Роду Babesia, Starcovici, 1893;

Виду Babesia canis, Piana, Galli-Valerio, 1895

Syn.: Achromaticus canis, Piana, Galli-Valerio, 1895;

Pyrosoma bigeminum var canis, Piana, Galli-Valerio, 1895;

Piroplasma canis, Piana, Galli-Valerio, 1895;

Babesia rossi ,Nuttall, 1910;

P.rossi ,Nuttall, 1910;

Rossiella rossi ,Nuttall, 1910).

Учитывая вышеизложенное, мы намерены придерживаться в своей работе современных взглядов на систематику пироплазмид, представленную Крыловым М.В. в монографии «Определитель паразитических простейших», 1996 и именовать возбудителя заболевания Babesia canis, а заболевание, соответственно, «бабезиоз собак».

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Балагула, Татьяна Викторовна

4. Выводы

1. Бабезиоз собак - широко распространённое заболевание в Южном, Западном и Юго-Западном округах г.Москвы. При этом, наиболее неблагополучным за период 1995-1999г. г. являлся Южный округ, где зарегистрировали максимальное количество больных животных.

В Московской области за указанный период наиболее неблагополучными оказались Воскресенский, Шатурский и Егорьевский районы.

2.Сезонная динамика бабезиоза зависит от ландшафтно-климатических условий местности и особенностей температурных колебаний в году. Так, в изучаемом регионе бабезиоз первично регистрируется в конце второй-середине третьей декады апреля при температуре окружающей среды около 12°С, достигая максимума инвазии в первой-второй декадах мая и осенью-в первой-второй декадах сентября. Распространение бабезиоза имеет значительную вариабельность в пределах ± 10-20 сут в отдельные годы, где лимитирующим фактором служит температура окружающей среды как весной, так и осенью.

-при остром течении бабезиоза на пятые сут после заражения установлено достоверное уменьшение количества эритроцитов до 1,73±0,93млн/мкл; уровня гемоглобина-до 40,3±1,9г/л; лейкоцитов-до 5±1,2тыс/мкл. При этом увеличиваются палочкоядерные формы и метамиелоциты и в 2,3 раза-моноциты; число лимфоцитов и эозинофилов снижается; общий белок, альбумины и у-глобулины у больных собак достоверно снижаются по сравнению с данными контрольных животных;

-при подостром течении бабезиоза установлено увеличение количества лейкоцитов до 32,98±0,1тыс/мкл и показателей а, |3 и у- глобулинов.

4.При бабезиозе установлены глубокие дистрофические изменения в паренхиматозных органах и центральной нервной системе, которые сопровождаются достоверным повышением активности ACT и АЛТ и снижением -псевдохолинэстеразы как при остром, так и при подостром течениях.

5.При остром течении бабезиоза в начальный период заболевания в крови преобладали крупные и средние неправильные формы, а также мелкие округлые формы паразитов. В пик инвазии преобладающими являлись одиночные неправильные, крупные и средние грушевидные парные формы паразитов;при подостром течении инвазии преобладающими являлись грушевидные парные связанные и мелкие грушевидные не связанные формы паразитов.

6.Вирулентность Babesia canis зависит от многих факторов, в т.ч. от возраста собак, количества пассажей и длительности хранения крови больного животного. Пассажирование возбудителя через организм взрослых собак и хранение его в крови при + 2-4°С более двух суток резко снижает вирулентность возбудителя, что позволяет говорить о нецелесообразности использования указанных приёмов в целях экспериментального воспроизведения бабезиоза.

Степень паразитемии у реципиентов зависит от возраста и реактивности организма животного.

7. Для приготовления антигена наиболее приемлемой оказалась взвесь возбудителя, выделенная по предложенной нами методике из крови спленэктомированных животных в период наивысшей паразитемии.

8.Изучение диагностической ценности серологических реакций - РДСК и ИФА при бабезиозе у собак показало большую чувствительность последней, при этом установлено: антитела первично в сыворотке крови выявляются к концу инкубационного периода; по мере роста паразитемии и проявления клинических признаков бабезиоза титр антител повышается; рост титров антител и максимальный их уровень соответствует улучшению общего состояния больных собак и паразитоносительству соответственно.

9.Верибен в дозе 3,1 мг/кг по ДВ при одно и двукратных инъекциях с интервалом 3 сут оказывает лечебную эффективность при бабезиозе собак.

Протективное действие верибена в дозе 3,1 мг/кг лимитировано пятью сутками до заражения.

5. Сведения о практическом использовании полученных автором научных результатов

1. Данные диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре паразитологии и инвазионных болезней животных МГАВМиБ им. К.И.Скрябина.

3.В результате испытания антигена при диагностике бабезиоза и бабезио-носительства у собак с использованием РДСК и ИФА установлена специфичность и активность полученного антигена, что подтверждено актом от 20.10.99г.

4.Результаты испытания верибена используются в работе ветеринарной клиники ООО «Витус+» г.Москвы; в ветеринарной клинике «АСВЕТ» г.Одинцово Московской области; в городской ветеринарной станции по борьбе с болезнями животных г.Химки; в ветеринарной клинике «Ветцентр» при кафедре биологии и патологии мелких домашних и экзотических животных МГАВМиБ им. К.И.Скрябина.

6. Рекомендации по использованию научных выводов

Исходя из наших комплексных исследований в условиях г. Москвы и Московской области с целью усовершенствования мер борьбы с бабезиозом рекомендуем проводить следующие мероприятия:

1-для предотвращения нападения клещей выгул животных производить на более открытых участках лесных массивов с третьей декады апреля и по октябрь включительно;

-рекомендуем в течение всего периода нападения клещей после выгула собак осматривать поверхность тела животного, использовать гребень с плотным расположением зубцов для вычёсывания клещей, которых необходимо уничтожать в растворах инсектоакарицидов.

2. С целью профилактики заражения клещей, а также диагностики парази-тоносительства, рекомендуем проводить серологические исследования собак в ноябре и марте методом ИФА.

3.На основании результатов сравнительного испытания токсичности верибена рекомендуем использовать в качестве лечебной дозу 3;1 мг/кг по ДВ вместо указанных в инструкции доз - 3,5 и 4,2мг/кг по ДВ.

4.Исследования позволяют рекомендовать разработанный нами метод приготовления антигена для РДСК и ИФА:

-в целях получения максимальной паразитемии проводить заражение только спленэктомированных животных внутривенно инвазированной кровью спустя 24-48 часов после операции;

-для проведения экспериментальных исследований при бабезиозе проводить заражение собак, средний возраст которых должен составлять 1,5-7 месяцев.

6.На основании результатов исследований диагностической ценности двух серологических реакций-РДСК и ИФА при бабезиозе у собак рекомендуем для диагностики заболевания и бабезионосительства использовать ИФА.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Балагула, Татьяна Викторовна, Москва

1. Абрамов И.В. и Дуранов B.C. Изменение вирулентности возбудителей бабезиоза овец и пироплазмоза собак лучами Рентгена(инвитро) // Природ-ноочаг. болезни и вопр. паразитологии в респ. Средн. Азии и Казахстана -Душанбе, 1969. вып. 5,- С.89-90.

2. Абрамов И.В., Дьяконов Л.П. Современные данные по систематике пиро-плазмид/ААрахнозы и протозойные болезни с.-х. Животных: Научн. Тр. /ВАСХНИЛ. -М.: Колос, 1977. -С. 87-96.

3. Акбаев М.Ш. Мениезиозы овец(патогенез, вопросы биологии, эпизоото-огии и разработка лечебно-профилактических мероприятий): Дис. докт. вет. наук.-М., 1986.-544с.

4. Александров Н.А. О противогемоспоридиозных мероприятиях //Ветеринария.-1955.-№ 3.-С.47.

5. Алфеев Н.И. Биология и экология клещей D.marginatus//Ленингр. пиро-попл. ст. Труды.-1939.-С.66.

6. Алфеев Н.И. К вопросу о сезонной активности D.marginatus в условиях бывшей Западной области в различных этапах в развитии этого явления. //Ленингр. пиропл. Ст.-1939.-С.81.

7. Алфеев Н.И. К вопросу о значении изоляции и смены пастбищ в борьбе с клещами D.marginatus. //Ленингр. пиропопл. ст. Труды.-1939.-С. 89.

8. Баранников В.Д. Чувствительность возбудителя пироплазмоза собак к радиации //ВИЭВ. Труды,- М.,1970.-Т.38.-С.82-85.

9. Биохимия животных. Чечеткин А.В., Головацкий И.Д., и др. М.:Высш. шк, 1974.-511с.

10. Ю.Гаджиева И.А., Новгородцева С.В. Этиопатогенетические основы терапии бабезиоза собак. //Паразиты и паразитар. болезни в Зап. Сиб. Новосибирск, 1996.-С. 32-33.

11. П.Ганиев И.М., Аливердиев А.А. Атлас иксодоидных клещей.-М.: Колос, 1968.-С.77.

12. Гайдуков А.Х. Серологические методы исследования при бабезиеллезе крупного рогатого скота. //Ленингр.вет.ин-т. Сб. работ,- Л., 1965.-Вып. XXVII.-C. 144-149.

13. Гайдуков А.Х. Изучение вирулентных свойств возбудителя пироплазмоза собак (Piroplasma canis Piana et Galli-Valerio, 1895)при пассажировании: /Автореф. дис. канд. вет. наук.-Л., 1957.-С. 17.

14. Георгиу X. Диагностическая ценность ИФА и РНГА при анаплазмозе. //Соврем. Пробл. Протозоологии: Тез. IV съезда ВОПР,- Л.,1987.-С. 125126.

15. Георгиу X., Степанова Н.И. Серологические реакции для диагностики анаплазмоза -//Ветеринария,- 1987,- № 5.-С.43-45.

16. Георгиу X. Экспериментальный анаплазмоз овец(симптомокомплекс, иммуноло-гические реакции): Дис. канд. вет. наук,- М., 1980.-С. 139.

17. Губайдуллин J1.C. Лечебные свойства пиральдина и иммунитет при пироплазмозе собак. //Труды/ ВИЭВ.-1957.-Т.XXI.-С.296-313.

18. Гуревич Д.И., Колабский Н.А., Шумилов Б.В. Динамика некоторых биохимических показателей крови при пироплазмозе собак/ Ленингр. вет. ин-т: Сб. науч. Работ.-1969.-Вып. 30.-С.21-27.

19. Гуревич Д.И., Носков Г.Н., Шумилов Б.В. Концентрация глютатиона и вакат-кислорода в крови собак при пироплазмозе/Ленингр. вет. ин-т. Сб.науч.работ,- 1971.-Вып. 31.-С.30-32.

20. Дзасохов Г. С. Диагностика протозойных болезней животных // Моск. вет. акад. Труды.-М., 1958. -117с.

21. Дзасохов Г.С. Диагностика протозойных болезней животных.-М., 1959.-415с.

22. Дзасохов Г. С. О некоторых закономерностях при протозойных заболеваниях домашних животных//Науч. конф. по протозоолог. пробл.: Тез. докл -Л., 1960.-С.23-25.

23. Дзасохов Г.С. Профилактика протозойных болезней животных.-М. Колос, 1964.-403с.

24. Дуранов B.C. Изучение действия ионизирующих излучений на возбудителей бабезиоза овец, пироплазмоза собак и клещей переносчиков Rh.bursa: Дис. канд. вет. наук,-М.,-1966.-187с.

25. Дьяконов А.П. Взаимоотношение бабезиид и тейлериид с клещами и некоторые закономерности эпизоотического процесса. //Соврем, пробл. Протозоологии: Тез. IV съезда ВОПР,-Л., 1987.-С. 198-199.

26. Дъяконов Л.П. Изучение белкового состава сыворотки крови овец, больных бабезиеллозом. Труды ВИЭВ, 25,1961.

27. Егоров A.M.,Осипов А.П.Дзантиев Б.Б.,Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа.-М.:Высш.шк., 199. -288с.

28. Ефремов Н.А. Пероральное заражение собак В.canis. //Современные проблемы протозоологии: Тез. докл. IV съезда ВСПР,- Л., 1987.-С.200.

29. Ефремова Е.А. и др. Терапевтическая эффективность этидия бромистого при пироплазмозе собак. // Паразиты и паразитар. болезни в Зап. Сиб. -Новосибирск, 1996.-С. 44-45.

30. Золотарев Н.А., Золотарева В.М., Елагин В.И. О природной очаговости пироплазмоза собак и енотов в Дагестане//Дагест.СХИ. Труды. -1971. -Т. 21, вып. 2.-С.30-31.

31. Иванюшин Б.И. К вопросу о методике приготовления антигена из пироплазм. //Материалы 1-го съезда ВОПР.- Баку, 1971.-С.214-215.

32. Иванюшин Б.И. Изучение некоторых вопросов иммунитета при экспериментальном пироплазмозе собак. //Автореф. дис. канд. вет. наук,- Л., 1971,-15с.

33. Иванюшин Б.И. О пироплазмозе собак разного возрастаУ/ Материалы 2-го съезда ВОПР,- Киев, 1976,- Ч.З.-С. 42-43.

34. Исследования по иммунологии. //ВОЗ. Докл. 5-ти научных групп, Женева, 1965.-119с.

35. Капланский С.Я. Изменения белков сыворотки крови, их специфичность и клиническое значение. Тезисы докл. 1-го Всесоюзн. Биохим. Съезда, М -Л.,1964.

36. Капустин В.Ф. Атлас паразитов крови животных и клещей иксодид. М., 1955.-215с.

37. Карташев М.В. Исследование зараженности клещей Dermacentor возбудителем пироплазмоза лошадей в различных природно-хозяйственных условиях средней полосы СССР//ВИЭВ. Труды.-Т. XXI.-M., 1957.-С. 210-220.

38. Касавина Б.С., Горкин В.З. Микроэлектрофоретическое исследование белков сыворотки крови в клинической биохимии. Вопросы мед химии.,2, 1957.

39. Кербабаев Э.Б. Основы ветеринарной акарологиии. Методы и средства борьбы с клещами //ВИГИС. Труды.-Т. 34.-М., 1998,- С.92-136.

40. Кирилловских В.А. Инсектоакарицидные препараты, используемые в ветеринарии и животноводстве. (Конструирование,стандартизация и при-зводство). -М., 1998. -328с.

41. Клёнова И.Ф.,Илюхина И.Н.,Написанова Л.А. Зарубежные ветеринарные препараты в России. 1999-2000.Справочник.-М., 1999.-320с.

42. Колабский И.А. Гемоспоридиозы сельскохозяйственных животных. М,-Л., 1951.-36с.

43. Колабский И.А. О развитии гемоспоридий сем. Piroplasmidae в организме позвоночных животных// Ленингр. НИВИ. Сб. работ.-1954.-Вып. XIV.-С.9.

44. Колабский И. А. Опыты по иммунизации крупного рогатого скота при бабезиеллезе //Ленингр. вет. ин-т. Сб. работ.-1954.-Вып. XIV.-С.5.

45. Колабский И.А., Гайдуков А.Х. Разработка метода консервирования крови с целью сохранения в ней возбудителей пироплазмоза собак и бабезиоза крупного рогатого скота //10-е сов. по паразитолог, пробл. и природ.-очаг. бол.-1959,- Вып.2.-С.246.

46. Колабский И.А., Гайдуков А.Х., Тарвердян Т.Н. Некоторые данные о размножении пироплазм в организме позвоночных животных. //Науч. Конф. По протозоолог. пробл.:Тез. докл.-Л., 1960.-С. 17-18.

47. Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Тарвердян Т.Н., Песков Н.М. Испытание консервированной вакцины при бабезиеллезе крупного рогатого скота и пироплазмозе собак //Науч. конф. по протозоолог. пробл.: Тез. докл.,- Л., 1960.-С.74-75.

48. Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Илюшечкин Ю.П. Испытание химио-профилактических свойств азидина при бабезиеллозе крупного рогатого скота// Ленингр. вет. ин-т. Сб. работ.-1965,-Вып. XXVII,-С. 158-169.

49. Колабский Н.А., Иванюшин Б. И. О влиянии лучей Ренгена на организм животных, иммунных к пироплазмидозам //ВОПР. Матер. 1-го съезда.-Баку. 1971.-С. 220-222.

50. Колабский Н.А.,Гайдуков А.Х., Шумилов Б.В. Иммунитет при пироплаз-мидозах домашних животных //Иммунитет с.-х. жив.: Науч. тр.-1973 -С.373-376.

51. Колабский Н.А. Положение возбудителей пироплазмидозов в системе простейших//Арахнозы и протозойные бол. с.-х. жив.: Науч. тр./ ВАСХ-НИЛ.-М.: Колос, 1977.-С.96-108.

52. Конюхов М.П. К изучению патогенеза анаплазмоза овец //ВИЭВ. Труды,-М., 1957.-Т. XXI.-C. 155-173.

53. Красов В.М., Омаров Ж.К. Получение антигенов для серологической диагностики некоторых протозойных болезней // Арахнозы и протозойные болезни сельскохозяйственных животных: Труды ВАСХНИЛ,- М.: Колос, 1977.-С. 167-170.

54. Крылов М.В. Развитие и некоторые биологические особенности пиро-плазмид: Дис. докт. биол. наук,-Л., 1965.-320с.

55. Крылов М.В., Крылова Н.П., Костенко Л.А. Некоторые вопросы проблемы активной иммунизации при пироплазмидозах //ВОПР. Матер. 1-го съезда,-Баку, 1971.-С.226-228.

56. Крылов М.В. Некоторые данные по циклу развития P.bigemimrm в позвоночном хозяине //Природная очаговость бол. и вопр. паразитологии.-1975 -Т.4.-160с.

57. Крылов М.В. Происхождение кровепаразитизма у Piroplasmida //Фауна и систематика одноклет. жив-х.-Л.,1978.-Т.78.-С.6-15.

58. Крылов М.В. Возбудители протозойных болезней домашних животных и человека. -Спб., 1994. -Т. 2. -267с.

59. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших.-Спб., 1996.-602с.

60. Лебедева В.Л. Тинкториальные особенности нуклеиновых кислот Пироплазма канис. //Вклад молод, учен, и спец. в науч.-тех. прогресс в с.-х. пр-ве: Тез. докл. межвуз. науч.-практ. конф. Фрунзе, 1990.-Ч.2.-С. 135-136.

61. Лебедева В.Л. Морфологические и цитохимические показатели иммунных реакций при пироплазмозе собак//Диагн., леч., профил. инваз. и ин-фекц. заболев, с.-х. жив-х. Ставрополь, 1991.-С. 19-22.

62. Лебедева В.Л. Морфологические особенности сверхострого (молниеносного) течения пироплазмоза собак. //Диагн., леч., профил. инваз. и инфекц. заболев, с.-х. жив-х: Сб. науч. тр. Ставрополь, 1992.-С.20-22.

63. Лебедева В.Л. Морфологические проявления пироплазмоза новорожденных щенков собак // Диагн., леч., профил. инваз. и инфекц. заболев, с.-х. жив-х. Ставрополь, 1992.-С. 23-26.

64. Лебедева В.Л. Сравнительный анализ активности нуклеиновых кислот при пироплазмозе собак. //Диагн., леч., профил. инваз. и инфекц. заболев, с.-х. жив-х: Сб. науч. тр. Ставрополь, 1992.-С.27-33.

65. Лебедева В.Л. Морфологическая диагностика пироплазмоза собак: Рек. для вет. врачей/Ставроп. СХИ. Ставрополь, 1992.-23с.

66. Лебедева В.Л. Пироплазмоз собак // Цитология. 1992.-Т.34, № 4.-С.85.

67. Лебедева В.Л. Возрастные особенности регенерации у собак в условиях патологии//Морфолог, показ, продукт, жив-х. Ставрополь, 1993.-С.33-36.

68. Лебедева В.Л. Шик-реакция тканей собак при пироплазмозе // Диагн., патогенез, патоморфология и профил. болезней с.-х. жив-х. Воронеж, 1993.-С.81.

69. Лебедева В.Л. Плазмоцитарная реакция у собак при пироплазмозе. // Диагн., леч. и профил. заболев, с.-х. жив-х. Ставрополь, 1994.-С. 25-29.

70. Лебедева В.Л. Патоморфология пироплазм при различных течения спонтанного пироплазмоза собак// Диагн., леч. и профил. заболев, с.-х. жив-х. -Ставрополь, 1994.-С.31-33.

71. Лебедева В.Л. Проявление гемоспоридиоза при различных течениях спонтанного пироплазмоза собак. //Диагн. леч. и профил. заболев, с.-х. жив-х. Ставрополь, 1994.-С. 84-88.

72. Ли П.Н. Изучение обмена веществ у овец при бабезиозе //ВИЭВ. Труды. -М.,1957.-T.XXI.-C. 142-154.

73. Ли П.Н., Кан П.Т. О сроках инокуляии животным пироплазмид иксодо-выми клещами //ВОПР. Матер. 2-го съезда ВОПР,- Киев, 1976.-Ч.З.-С. 62 -64.

74. Ли П.Н.,Радионов И.И. Электрофоретические исследования белковых фракций крови овец при бабезиеллёзе. Ветеринария,5,1958.

75. Малахов А.Г. Электрофоретическое исследование сыворотки крови у крупного рогатого скота при экспериментальном ящуре. Авто-реф.дисс.,М.,1956.

76. Марков А.А., Петрашевская Е.Н., Калмыков Е.С. Пироплазмозы сель-ско-хозяйственных животных: диагностика, лечение, профилактика.-М., 1935.-С. 128-128.

77. Марков А.А. Курчатов В.И. Мероприятия по борьбе с иксодовыми клещами. //Ветеринария.-1949,- № 3.-С.4.

78. Марков А.А. Кровепаразитарные заболевания сельскохозяйственных животных и принципы борьбы с ними в СССР //ВИЭВ. Труды,- М., 1957,-Т.21.-С.3-33.

79. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники.-Л., 1969.-423с.

80. Метелкин А.И., Марков А.А., Казанский И.И. Ветеринарная протозоология // Вет. паразитология и инваз. бол. дом. жив-х / Под ред. К.И. Скрябина.-М., 1939.-С. 11-223.

81. Методические рекомендации по изучению и разработке мер борьбы с протозойными болезнями животных,- М., 1984.-59с.

82. Мирзабеков K.JL Иммуно-биологические и морфологические свойства B.colhica, P.bigiminum, P.beliceri и серологические методы диагностики пиро-плазмидозов: Дис. канд. вет. наук.-М., 1975.-196с.

83. Никифоренко В.И. Получение серологически активных антигенов из пироплазмид и их практическое применение //Материалы 2-го съезда ВОПР.- Киев, 1976.-4.3.-C.73.

84. Павлова Н.В.Изучение эпизоотологии нутталлиоза лошадей в средней зоне Европейской части СССР // ВИЭВ. Труды.-1957.-Т.21.-С. 199-209.

85. Павлова Н.В., Восприимчивость лисиц к пироплазмозу собак //ВИЭВ. Труды.-1963.-Т. XXVIII.-C.239.

86. Паразитарные болезни сельскохозяйственных животных/Дьяконов Л.П., Орлов И.В., Абрамов И.В. и др.-М.: Агропромиздат, 1985.-383с.

87. Петров В.Г. К вопросу о развитии B.bovis в организме клещей I.ricinus. // Ленингр. пироплазмоз. ст.:Труды.-1939.-С.58.

88. Петров Р.В. Иммунология и иммуногенетика.- М.: Медицина, 1976,-335с.

89. Петров Р.В. Иммунология.-М.: Медицина, 1983.-368с.

90. Плотников Н.Н. Патогенез // Описторхоз.-М., 1953.-С.48-74.

91. Простяков А. П. Диспротеинемия при экспериментальном пироплазмозе собак: //Автореф. дис. канд. биол. наук,-Л., 1956.-18с.

92. Протозойные болезни сельскохозяйственных животных/Степанова Н.И., Казаков Н.А., Заблоцкий В.Т. и др.-М.: Колос, 1982.-352с.

93. Радкевич П.Е. Оценка действия сердечных средств при пироплазмозе крупного рогатого скота и собак //Ветеринария.-I960, №3.-С.25-29.

94. Радкевич П.Е. Электрокардиографические данные о действии пиральдина на сердечную деятельность здорового и больного пироплазмозом крупного рогатого скота // ВИЭВ. Труды.-1962. Т. XXVI, М.-С.215.

95. Радкевич П.Е. Сравнительная эффективность действия сердечных веществ при пироплазмозе собак //ВИЭВ. Труды,- 1961.-Т. XXV.-С.152.

96. Свешникова А.Ф. Испытание акарицидных свойств фенотиазина на клещах p.Dermacentor. // Свердл. НИИВСТ Труды.-1958.-С. 193.

97. Степанова Н.И. Иммунитет и серологическая диагностика анапламозов и тейлериозов рогатого скота: Дис. докт. биол. наук.-М., 1971.-400с.

98. Степанова Н.И., Тимофеев Б.А. Иммунитет к некоторым протозойным заболеваниям //ВНИИТЭИСХ. Обзор. информ.-М., 1972.-С.5-18.

99. Степанова Н.И., Петровский В.В. Серологическая диагностика нуттал-лиоза лошадей //Ветеринария.-1975.- № 1.-С.56-58.

100. Степанова Н.И. Перспективы использования иммунологических реакций при изучении пироплазмидозов животных // Матер. 2-го съезда ВОПР.-Киев, 1976.-Ч.З.-С. 103-104.

101. Свирская С.А. О значении диких животных в эпизоотологии бабезиоза. // Ленингр. НИВИ. Сб. трудов.-1951.-Вып. 4.-С.140.

102. Страшнов Д.А. Изучение химиопрофилактических и стерилизующих свойств беренила при экспериментальном пироплазмозе собак //Ставр.СХИ. Науч. тр.-1975.-Вып. 38.-Т.5.-С.9-10.

103. Юб.Судаченков В.В. Вопросы иммунитета и вакцинации при бабезиозе крупного рога того скота // ВИЭВ. Труды.-Т. XXVIII.-1963.-С. 177.

104. Тимофеев Б.А. Роль кининовой системы и криофибриногенных комплексов в патогенезе протозойных заболеваний животных: (обзор) // С.-х. биология,- М.:Колос, 1981.-Т. 16, № 5,-С.652-660.

105. Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София, 1961.

106. Топарская В.П. Физиология и патология углеводного,липидного и белкового обмена. М.,1962.

107. Фримель Г. Иммунологические методы.-М., 1987.-427с.

108. Хейсин Е.М., Муратов. Некоторые данные о строении, жизненном цикле и систематическом положении пироплазмид //10-е совещ. по паразитолог. пробл. и природ.-очаг, болезням.-1959.-Вып.2.-С. 10.

109. Хейсин Е.М. О положении пироплазм в системе простеших //ВИЭВ. Труды.-1963.-Т. XXVIII.-С.40.

110. Хейсин Е.М. Некоторые данные о строении P.bigeminum и P.canis. //Паразитология. 1968.-Т.2, вып. 1.-С. 77-82.

111. Пб.Шамрай Е.Ф., Пащенко А.Е. Клиническая биохимия. М.:Медицина, 1970.-335с.

112. П.Шахматов Г.Н. Серотерапия и серопрофилактика при гемоспоридиозах крупного рогатого скота //Науч. конф. По протозоолог. пробл.: Тез. докл,-Л., 1960.-С.73-74.

113. Шумилов Б.В. Изменение вирулентности полевого штамма p.canis и динамика некоторых биохимических показателей крови припироплазмозе собак: Автореф. дис. канд. вет. наук,-JL, 1971.-19с.

114. Цзян Цзай-Цзе. Морфологическая и биологическая характеристика неполовозрелых фаз развития клещей рода Dexonacentor Koch., 1844. Фауны Европейской части СССР: Автореф. дис. канд.техн.наук,-Л., 1960.

115. Якимов В.Л., Болезни домашних животных, вызываемые простейшими. -Л.,1931.-863с.121 .Abdullahi S. U., Sannusi A. Canine babesiosis. In: Kirk RW(ed) Current Veterinary Therapy 9 Small Animal Practice W.B. Saunders, Philadelphia.-1986.-P. 1096-1098.

116. Abdullahi S.U., Mohammed A. A., Trimnell A. R. Clinical and haematological findings in 70 naturally occurring cases of canine babesiosis.// J. of Small Animal Practice.-1990.-Vol.31.-P. 145-147.

117. Adachi K. et. all Isolation of Babesia gibsoni piroplasms from infected erythrocytes of dogs.//J. Vet. Med. Science.-1993.-Vol.55, №3.-P.487-490.

118. Aikawa M.,Sterling C.Intracellular Parasitic Protozoa.Academic Press,New Yorc.-l 974. Vol.54.

119. Aikawa M., Miller L.H., Johnson J., Rabbege J. Erythrocyte entry by malarial parasites: a moving junction between erythrocyte and parasite.// J. Cell Biol.-1978,-Vol.77.-P.72.

120. Anderson J.F., Magnarelli L. A., Sulrer A. J. Canine babesiosis: inderect fluorecent antibody test for a North American isolate of Babesia gibsoni. //Am. J. Vet. Res.-1980.-Vol.41.-P.2102.

121. Basson P.A., Pienaar J.G. Canine babesiosis: a report on the pathology of three cases with special reference to the cerebral form.// J.S. Afr. Vet. Med. Ass.-1965,-Vol.36.-P.333-341.

122. Bautista C.R., Kreier J.P., Effect of immune serum on the growth of Babesia in hamster erythrocytes in short-term culture.// Infect. Immun.-1979.-Vol. 23.-P.470.

123. Bautista C.R., Kreier J.P., The action of macrophages and immune serum on growth of Babesia microti in short- term cultures.//Tropenmed. Parasitol -1980 .-Vol. 31.-P.313.

124. Beugnet F., Chardonnet L. Nouveaux cas de babesiose canine en Nouvelle-caledonie.// Rev. EL. Med. Vet. N.-C.- 1993, №17,- P. 17-20.

125. Bland-van den Berg. Management of Babesia canis infection and its complications.// Proceedings, Premieres Rencontres Veterinaires Internationales du Limousin.-1992.-P.9-26.

126. Botha H. The cerebral form of babesiosis in dogs.// J. S. Afr. Vet. Med. Ass.-1964.-Vol.35.-P.27-28.

127. Brizard A., Dorchies Ph., et. al. Recherche de Piroplasma canis par la Fluorescence: Comparaison avec la methode de Pappenheim.// Revue Med. Vet.-1968.-Vol 119, №4,- P.357-359.

128. Breitschwerdt E.B., Malone J.B., Mac Williams P., Levy M.G. Babesiosis in the greyhound.//J.Am. Vet.Med.Ass.-1983.-Vol.182.-P.978.

129. Brown W.G., Zhao S., et. al. Babesia bovis- specific CD4+ T cell clones from immune cattle express either the ThO or TH1 profile cytokines.// Revue D" Elevage et de Medicine veterinaire des Pays tropicaux.- 1993.-Vol.46, №1-2.-P.65-69.

130. Brumpt E. Transmission de la piroplasmose canine Francaise par le Dermacentor reticulatus. Embolies parasitaires dans les capillaires de T'encephale.// Bull. Soc. Pathol. Exot.-1919.-Vol.12.-P.651.

131. Buttner D.W., Vergleichende Untersuch ung der Feinstruktur von Babesia gibsoni und Babesia canis.// Tropenmed Parasitol.-1968.-Vol.19.-P.330.

132. Button C. Fluid therapy in canine babesiosis.// J.S. Air. Vet. Assoc., 1976, vol. 47, p.281-287.

133. Cuille M.J., Darraspen M.E. Formes atypigues et formes chronigues de la piroplasmose du chien.// Revue Generate de Medecine Veterinaire.-1927.-Vol.36.-P.433-443.

134. Cultivation of Babesia bigemina in medium supplemented with eguin serum. /Fish L., Pipano E., Shkap V., Frank M. //Veterinary medicine.-1993.-Vol.48, №3,-P. 117-118.

135. Dale J., Ohlsson K., et. al. Intravascular yemolysis and ultrastructural changes of erythrocytes in lethal canine endotoxic shock.// Eur. Surg. Res.-1980.-Vol. 12,-P.39.

136. Engvall E., Perlmann P. Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA. Ill Quantitation of specific antibodies by enzyme labelled anti- immunoglobulin in antigen coated tubes.// J. Immunol.-1972.-Vol.109.-P.129.

137. Erp E.E., Smith R.D., et. al. Continuous in vitro cultivation of Babesia bovis.// Am. J. Vet. Res.- 1980.-Vol.41.-P.1141.

138. Eureby J., Moreau Y., et.al., Rxperimentation des proprietes antipiroplasmigues de I'lmidocarb sur Babesia canis, agent de la piroplasmose canine en Europe.// Bull. Acad.Vet. France.-1980.-Vol. 53.-P.475.

139. Farwell G.E., LeGrand E.K.,et. al. Clinical observation on Babesia gibsoni and Babesia canis infections in dogs. //J.Am.Vet. Med. Ass.-1982,- Vol.180, №5 -P.507-511.

140. Freeman M.J., Kirby В. M., Sullivan L.J. Hypotensive shock syndrome associated with acute Babesia canis infection in a dog.// J. Am. Vet. Med. Ass.-1994.-Vol.204.-P.94-96.

141. Frerichs W.M., Holbrook A.A., Johnson A.J., Eguine piroplasmosis: complement fixation titers of horses injected with Babesia caballi.// Am. J.Vet.Res.-1969.-Vol.30.-P.697.

142. Frerichs W.M., Holbrook A.A. Feeding mechanisms of Babesia egui.// J. Protozool.-1974.-Vol.21.-P.707.

143. Gerritsen J. G. Acute renal failure in severe chloroguine resistant falciparum malaria.//Intensive Care Medicine.-1992.-Vol.l8.-P.177-179.

144. Gorenflot A., Brasseur P., et. al. Cytological and immunological responses to Babesis divergens in different hosts: ox, gerbil, man.// J. Parasittol.-1991.-Vol. 77 -P.3-12.

145. Gray J.S., Langley R.J., Brophy P.O., Gannon P. Vaccination against bovine babesiosis with drug- controlled live parasites.// Veterinary Record.-1989.-Vol.15 -P.369-372.

146. Groves M.G., Vanniasingham J.A.Treatment of Babesia gibsoni infections with phenamidine isethionate.// Vet.Rec.-1970.-Vol.86.-P.8.

147. Groves M.G.,Dennis G.L. Babesia gibsoni:field and laboratory studies of canine infections.// Exp.Parasitol.-1972.-Vol.31.-P.153.

148. Guelfi J.F., Dubois F., et. al. Exploration of hemostasis on dogs affected by babesiasis.//Rev. Med. Vet.-1984.-Vol.135.-P.699.

149. Hadani A., Theodor O. Factors affecting the rate infection of Hyalomma excavatum numphs with Nuttallia danii.// J. Protozool.-1973.-Vol.20.-P.532.

150. Van Heerden J. The transmission of Babesia canis to the wild dog Lycaon pictus ( Temminck) and blackbacked jackal Ganis mesomelas ( Schreber).// J.S. Afr. Vet. Assoc.-1980.-Vol.51.-P.l 19.

151. Hirato K., Ninomiya N., Studies on the complement fixation reaction for eguine piroplasmosis. //Jpn. J.Vet.Sci.-1945.-Vol.l.-P.204.

152. Itoh N., Itoh S. Serum iron, unsaturated iron binding capacity, and total iron binding capacity in dogs with Babesia gibsoni infection.// J. Vet. Med. Assoc.-1992.-Vol.45, №12.-P.950.

153. Jacobson L. S. Cerebral ataxia as a possible complication of babesiosis in two dogs.// J.S. Aft. Vet. Ver.-1994.-Vol.65, №3. -P.130-131.

154. Jacobson L.S., Clark I. A. The pathophysiology of canine babesiosis to an old puzzle.// J. S. Afr. Vet. Assoc.-1994.-Vol.65, №3.-P.134-145.

155. Jones E. Patterns of resistanse in anaplasmosis.// J. Amer. Vet. Med. Ass.-1968.-Vol.153.-P.2.

156. Jouner L.P., Davies S.F.M., Kendall S.B. Chemotherapy of Babesiosis.In Experimental Chemotherapy. Vol. 1, Schnitzer R.J. and Hawking F.,Eds.,Academic Press,New York.-1963.-P.603.

157. Junlong Z., Zhongling L. Study on continuous cultivation in vitro of Babesia bovis parasitized in the blood of Buffalo. //Chinese J. Of animal and veterinary sciences.-1991 .-Vol.22, №4.-P.339.

158. Ladda R., Aikawa W. Penetretion of erythrocytes by merozoites of mammalian and avian malarial parasites.// J. Parasitol.-1969.-Vol.55.-P.633.

159. Levy M.G., Ristic M. Babesia bovis: Continuous cultivation in a Microaerophilous stationary phase culture.// Science.- 1980.-Vol.207.-P.1218-1220.

160. Levy M.G., Clabaugh G., Ristic M. Age resistance in bovine babesiosis: role of blood factors in resistance to Babesia bovis.// Infect. Immun.-1982.-Vol.37.-P.27.

161. Mahoney D.F.Bovine babesiosis: preparation and assessment of complement fixing antigen.// Exp.Parasitol.-1967.-Vol.20.-P.232.

162. Malherbe W. D., Parkin B. S. Atypical symptomatology in Babesia canis infection.//J. S. Afr. Vet. Med. Assoc.-1951.-Vol. 22.-P.25-61.

163. Malherbe W. D. The manifestations and diagnosis of Babesia infections.// Annals of the New Yore Academy of Sciences.-1956.-Vol.64.-P.128-146.

164. Malherbe W. D. Clinical pathological studies of Babesia canis infection in dogs. The effect on bilirubin metabolism. //J.S. Afr. Vet. Med. Assoc.-1965,- Vol. 36.-P.569-573.

165. Malherbe W. D., Immelman A., Haupt W.H. The diagnosis and treatment of acid base deranged dogs infected with Babesia canis. // J. S. Afr. Vet. Ass.-1976,-Vol.47.-P.29-33.

166. Martinod S., Brossard M., and Moreau Y. Immunity of dogs against B.canis , its vector tick Dermacentor reticulatus, and Ixodes ricinus in endemic area.//J. Parasitol.-1985.-Vol.71.-P.269.

167. Matthewman L.A., Kelly P.J. et. al. Infections with Babesia canis and ehrlichia canis in dogs in Zimbabwe.// The Vet. Record.-1993.-Vol.133, №14. -P.344-346.

168. Meeusen E., Lloyd S., Soulsby E.J.L. Babesia microti in mice. Adoptive transfer of immunity with serum and cells.// Aust. J.Exp. Biol. Med. Sci.-1984.-Vol.62.-P.551.

169. Meeusen E., Lloyd S., Soulsby E.J.L. Antibody levels in adoptively immunized mice after infection with Babesia microti or injection with antigen fractions.// Aust. J.Exp. Biol. Med. Sci.-1985.-Vol.63.-P.261.

170. Molinar E., James M.A., Kakoma I., Holland C.J., fhd Ristic M. Antigenic and immunogenic studies on cell culture-derived Babesia canis.// Vet. Parasitol., 1982 -Vol.10.-P.29.

171. Montealegre F., Levy M.G., Ristic M., James M.A. Growth inhibition of Babesia bovis in culture by secretions from bovine mononuclear phagocytes.// Infect. Immun.-1985.-Vol.50.-P.523.

172. Moon M.L., Greenlee P. G., Burk R. L. Uremic pneumonitis- like syndrome in ten dogs.// J. Am. Animal Hospital Assoc.-1986.-Vol.22.-P.687-691.

173. Moore D.J., Williams M.C. Disseminated intravascular coagulation: a complication of Babesia canis infection in the dog.// J.S.A. Vet. Ass.-1979.-Vol. 50.-P.265-275.

174. Morita Т., et all. Reactivity of anti-erythrocyte antibody induced by Babesia gibsoni infection against aged erythrocytes.// Vet. Parasitology.-1995.-Vol. 58, №4.-P. 291-299.

175. Murase Т., Maede Y. Increased erythrophagocytic activity of macrophages in dogs with Babesia gibsoni infection.// Jpn. J. Vet. Sc.-1990.-Vol.52.-P.321-327.

176. Namikawa K., Kunihiro A. & Kanno Y. Method for detecting Babesia gibsoni in erythrocytes.// J. Jpn. Vet. Med. Ass.-1993.-Vol. 46, №6.-P.483.

177. Nott S E., O'Sullivan W., Gero A.M., et. al. Routine screening for potential babesicides using cultures of Babesia bovis.// International J. For Parasitology.-1990.-Vol.20, №6.-P.797-802.

178. Nuttall G.H., Hadwen S. The successful drug treatment of canine piroplasmosis, together with observation upon the effect of drugs on Piroplasma canis. //Parasitol .-1909.-Vol.2.-P.156.

179. Pages J.P. Epidemiologic et pathogenie de la babesiose du chien.// Proceedings,

180. Piercy S. E. Hyper-acute canine babesia.// The Vet. Record.- 1947.-Vol.59. -P.612-613.

181. Popovic N.A., Ristic M. Diagnosis of canine babesiosis by a gel precepitation test.//Am. J. Vet. Res.-1970,-Vol.31.-P.2201.

182. Pudney M. Cultivation of Babesia. Recent developments in control of anaplasmosis, babesiosis and cowdriosis.// Proceedings of a workshop held at ILRAD Nairobi, Kenya.-1991,- P. 129-140.

183. Purnell R.E.,Hendry D.J., Bidwell D.E., Turp P. Microplate enzyme linked immunosorbent assay for antibody to Babesia divergens in cattle., Vet. Rec.-1976.-Vol. 99.-P.102.

184. Purchase H.S. Cerebral babesiosis in dogs.// The Vet. Record.-1947.-Vol. 59.-P.269-270.

185. Reichenow E. Ubertragungsweise und entwicklung der Piroplasmen.// Zent ralbl. Bakteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Hyg. Abt. I. Orig.-1935.-Vol.135. (Beiheft).-P.108.

186. Ristic M., Sibinovic S. Serologic diagnosis of Babesia bigemina infection in cattle by the inderect fluorescent antibody test.// Res. Vet. Sc.-1964.-Vol.9.-P.557.

187. Ristic M., Kreiner J.R.// Babesiosis, Eds., Academic Press, New York.-1981.

188. Roher D.P., Anderson J.F., and Nielsen S.W. Experimental babesiosis in coyotes and coydogs.//Am. J. Vet. Res.-1985.-Vol.46.-P.256.

189. Rudzinska M.A., Trager W. Intracellular phagotrophy in Babesia rodhaini as revealed by electron microscopy.// J. Protozool.-1962.-Vol.9.-P.279.

190. Rudzinska M.A., Trager W. The fine structure of intraerythrocytic merozoites in Babesia microti.// Fed. Proc. Fed. Am. Soc. Exp. Biol.-1974.-Vol.33.-P.445.

191. Ruff M.D., Fowler J.L.,et.al. Action of certain antiprotozoal compounds against Babesia gibsoni in dogs.// Am.J.Vet.Res.-1973.-Vol.34.-P.641.

192. Sanders D. A. Observations on canine babesiosis ( Piroplasmosis).// J. Am. Vet. Med. Ass.-1937.-Vol.90.-P.27-40.

193. Schetters Th. P.M., Kleuscens J., et. al. Vaccination of dogs against Babesia canis infection using antigens from culture supernatants with emphasis on clinical babesiosis.// Vet. Parasitology.-1994.-Vol.52.-P.219-233.

194. Schindler R., Dennig H.K. Versuche rum Nachweis von Antikorpern gegen Babesien mit der Komplementbindungsreaktion.//Z. Tropenmed. Parasitol.-1960 -Vol.13.-P.80.

195. Selye H. The stress of life/-New York: Mc. Grow-Hill.-1956.-325p. 218.Sergent Ed. Latent infection and Premunition. In.- "Immunity to Protozoa"., Blackwell.Oxford.-1963.

196. Shakespeare A.S. The incidence of canine babesiosis amongst sick dogs presented to the onderstepoort Veterinary academic hospital.// J.S. Afr. Vet. Ass.-1995.-Vol.66, №4.-P.247-250.

197. Sibinovic K.H., MacLeod R., Ristic M., et. al. A study of some of the physical, chemical and serologic properties of antigens from sera of horses, dogs and rats with acute babesiosis.//J. Parasitol.- 1967.-Vol.53.-P.919.

198. Stewart C.G. A comparison of the efficacy of isometamidium, amicarbalide and diminazene against Babesia canis in dogs and the effect on subseguent immunity.// J.S. Afr. Vet. Ass.-1996.-Vol.67, №2.-P.47-51.

199. Tamura Т., Takahashi K., Sonada M., Koiwa M. The inderect fluorescent antibody test as a method for detecting antibody in dogs infected with Babesia gibsoni.// J. Coll.Dairy.-1980.-Vol.8.-P.249.

200. Taliaferro W. The role of the spleen in hemolisin production in rabits receiving multiple antigen infection.// J. Infect. Dis.-1950.-Vol. 87.-P.351.

201. Taylor J.H, Cuthrie A.J., Leisewitz A. The effect of endogenously produced carbon monoxide on the oxygen status of dogs infected with Babesia canis.// J.S. Afr .Vet. Assoc.-1991.-Vol.62, №4.-P. 153-155.

202. Taylor J.H., Guthrie A.I. et al. The effect of Babesia canis induced haemolysis on the canis haemoglobin oxygen dissociation curve. //J.S. Afr. Veter. Assoc.-1993.-Vol.64, №4.-P.141-143.

203. Taylor J.H., et.al. Electrophoretic separation of canine haemoglobin in dogs with babesiosis.// J.S. Afr. Vet. Ass.-1995.-Vol.66, №4.-P.219-221.

204. Timms P., Stewart N. P. Growth of Babesia bovis parasites in stationary and suspension cultures and their use in experimental vaccination of cattle.// Research in Vet. Science.-1989.-Vol. 47, №3.-P.309-314.

205. Uilenberg G., Verdiesen P.A., Zwart D. Imidocarb: a chemoprophylactic experiment with Babesia canis.// Vet. Q.-1981 .-Vol.3.-P.l 18.

206. Uilenberg G., Franssen F.F.J, et. al. Three groups of Babesia canis distinguished and a proposal for nomenclature.// The Vet. Quarterly. -1989.-Vol.11, №1.-P.33-40.

207. Vaccination of dogs against Babesia canis infection using parasite antigens from in vitro culture./ Schetters Th. P.M., Kleuskens J., Scholters N., Bos H.J. // Parasite Immunol.-Vol.l4.-P.295-305.

208. Vflherbe W.D., et. al. The diagnosis and treatment of acid-base deranged dogs infected with Babesia canis.// J. S. Afr. Vet. Assoc.-1976.-Vol. 47. P.29-33.

209. Weiland G., Kratzer I. Fluoreszenz- und enzymserologische Untersuchungen zum Nachweis der- latenten Hundebabesiose.// Berl. Muench. Tieraerztl. Wochenschr.-1979.-Vol.92.-P.398.

210. Wright I.G.,An electron microscopic study of intravascular agglutination in the cerebral cortex due to Babesia argentina infection.// Int. J. Parasitol.-1972.-Vol.2. -P.209.

211. Wright I.G. Ultrastructural changes in Babesia argentina-infected erythrocytes in kidney capillaries. //J. Parasitol.-1973.-Vol.59.-P.735.

212. Wright I.G., Goodger B.V.JMckenna R.V., Mahoney D.F. Acute Babesia bovis infection: a study of the vascular lesions in kidney and lung. //Z. Parasitenkd.-1979.-Vol.60.-P.19.

213. Wright I.G., White M., et. al. Babesia bovis: isolation of protective antigen by using monoclonal antibodies.// Infection and Immunity.-1983.-Vol.41, №1.-P.244-250.

214. Yamane I., Tbomford J.W., et. all., Evaluation of the inderect fluorescent antibody test for diagnosis of Babesia gibsoni infections in dogs. //American I. of Vet. Research.-1993.-Vol. 54, №10.-P.1579-1584.

215. Yamane I. The recent studies on Babesia gibsoni infections in dogs: special emphasis on an epidemiological study in California, USA.// Bulletin of the National Institute of Animal Health.-1995,- №101.-P. 1-13.

216. Zager R.A., Gamelin L. M. Pathogenetic mechanisms in experimental haemoglobinuric acute renal failure.// Am. J. of Physiology.-1989.-Vol.256.-P.446-455.

217. Zwart D., Brockelsby D.W., Babesiosis: non- specific resistance, immunulogical factors and pathogenesis.//Adv. Parasitol.-1979.-Vol. 17.-P.50.

Информация о работе

Балагула, Татьяна Викторовна
кандидата ветеринарных наук
Москва, 2000
ВАК 03.00.19

Диссертация

Бабезиоз собак - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы