Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Ауторегуляция прорастания спор почвенных грибов

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Ауторегуляция прорастания спор почвенных грибов"

На правах рукописи

□□3058 140

ТОЛСТИХИНА ТАТЬЯНА ЕВГЕНЬЕВНА ----

АУТОРЕГУЛЯЦИЯ ПРОРАСТАНИЯ СПОР ПОЧВЕННЫХ ГРИБОВ

Специальность 03 00 07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2007

003058140

Работа выполнена на кафедре биологии почв факультета почвоведения Московского государственного университета им М В Ломоносова

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор Л М. Полянская

Официальные оппоненты доктор биологических наук

А Н Лихачев кандидат биологических наук ТА Семенова

Ведущее учреждение Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им Г К Скрябина РАН

Защита диссертации состоится «_ /О » ^СССыЛ^ 2007 г в 15ч 30 мин в аудитории 199 на заседании диссертационного совета К501 001 05 в МГУ им М В Ломоносова по адресу. 119992, Москва, ГСП-2, Ленинские горы, МГУ им М В Ломоносова факультет почвоведения

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке факультета Почвоведения МГУ

Приглашаем Вас принять участие в обсуждении диссертации на заседании диссертационного совета по микробиологии и агрохимии в МГУ или прислать отзывы на автореферат в двух экземплярах, заверенные печатью по адресу 119992, Москва, ГСП-2, Ленинские горы, МГУ им М В Ломоносова, факультет почвоведения, Ученый совет.

Ученый секретарь диссертационного совета,

профессор ГМ Зенова

Автореферат разослан

Актуальность проблемы Фитопатогенные микроорганизмы -постоянные спутники сельскохозяйственного производства Значительная часть заболеваний вызывается разнообразными микромицетами Преимущественное внимание фитопатологов уделяется биологии фитопатогенных грибов и механизмам поражения растений Изучается и экология фитопатогенных популяций, но в этой области твердоусгановленных данных накоплено все еще недостаточно Между тем современное земледелие требует оптимизации борьбы с заболеваниями посевов, при этом критерии эффективности, экологической безопасности и рентабельности средств защиты растений входят друг с другом в противоречие Для совершенствования методов подавления фитопатогенных микроорганизмов необходимо знать причины вспышки их численности на тех или иных субстратах, а для этого непременно надо изучать механизмы регуляции численности этих популяций

Одним из перспективных методов профилактики заболеваний растений является применение живых препаратов микроорганизмов-антагонистов или конкурентов (Papavisas, 1985, Tronsmo, 1986) Этот метод позволяет минимизировать ущерб для окружающей среды и здоровья человека, уменьшая дозировки вносимых фунгицидов

Промышленные штаммы рода Trichoderma широко используются в сельскохозяйственной практике для контроля размножения популяций патогенных грибов в почве, а также на семенах различных растений, в ризосфере и филлосфере (Tronsmo and Hjeljord, 1998) Рекомендуется также использовать культуры Trichoderma для сохранения убранного урожая (Chet, 1987, Papavizas, 1985, Tionsmo, 1986) Перед потребителем микробных нреплраюв встает ряд практических трудностей Экономическая эффективность использования живого микробного препарата определяется вероятностью активной колонизации субстрата популяцией-интродуцечтом Конидии грибов рода Trichoderma чрезвычайно удобны для приготовления сухих препаратов, однако необходимо знать, какими факторами обусловливается прорастание конидий после внесения их в природное

местообитание Активно изучается влияние различных параметров внешней среды на поведение микробных популяций, однако в экологии значительную роль играет внутрипопуляционное взаимодействие В литературе имеются указания на существование механизмов ауторегуляции процесса активизации покоящихся форм микроорганизмов (Robinson et al, 1989, Триггер и др , 1991, Хохлов, 1988) Но большая часть этих работ посвящена бактериям В случае грибов информации еще недостаточно

Логично было предположить, что подобная ауторегуляция свойственна различным видам микромицетов, как фитопатогенных, так и используемых для защиты от патогенов

Целью настоящей работы является проверка характера внутрипопуляционной регуляции прорастания спор микромицетов и ее влияние на конкурентоспособность грибных популяции.

В задачи исследования входило-

1 Проверка наличия у разных видов грибов ауторегуляции прорастания конидий

2 Изучение зависимости прорастания конидий этих грибов от популяционной плотности

3 Установление различий в экологической стратегии между штаммами

4 Изучение взаимовлияния конидий различных культур на процессы прорастания

5 Установление влияния ауторегуляции на конкурентоспособность грибных популяций

Научная новизна. Установлена зависимость прорастания конидий всех изученных культур микромицетов от плотности их популяции Впервые разработаны и поставлены прямые эксперименты, моделирующие процессы взаимодействия фитопатогенов и культур рода Trichoderma, которые позволяют сдела!ь заключение о типе их взаимодействия Показано, что для культур рода Tnchoderma межштаммовые различия в зависимости прорастания спор от расстояния между ними были более значимы, чем межвидовые Впервые

установлено, что микромицеты рода Fusarium (и, вероятно, большинство фитопатогенов) являются более активными колонизаторами пространства, чем микромицеты рода Trichoderma В прямых экспериментах продемонстрировано, что при наложении ингибирующего воздействия культуры рода Trichoderma на культуру Fusarium oxysporum, ингибирование прорастания конидий рода Fusarium при высокой плотности популяции сглаживается, и напротив, проявляется кооперативный эффект

Практическая значимость. Проведенные в работе эксперименты и установленные общеэкологические закономерности механизмов внутрипопуляционной регуляции прорастания конидий Moryi быть полезны при разработке рекомендаций по использованию культур микромицетов в сельскохозяйственной практике. На основе полученных данных можно рассчитать оптимальные дозы внесения микробных препаратов, таких как «'[ риходермин» Выявленные различия на штаммовом уровне во внутрипопуляционной регуляции прорастания конидий нужно учитывать при определении оптималыюй дозы внесения Показана значимость предпосевной инокуляции семян растений конидиями микромицетов, использующихся для биологического контроля развития фитопатогенов, что связано со скоростями прорастания конидий

Апробация работы Результаты исследований были представлены на IX и X конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов» (Москва, 2002, 2003), 6-й и 7-й международных школах конференциях молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2002, 2003) и на заседаниях и научных семинарах кафедры биолосии почв факультета почвоведения МГУ

Публикации По результатам исследований опубликовано 6 работ, из них 2 экспериментальные статьи (журнал «Микробиология») и 4 тезисов на международных конференциях

Структура и объем работы. Диссертация изложена на страницах, содержит :Г таблиц и Ai рисунков, состоит из введения, литературного обзора,

описания объектов и методов исследований, i главы экспериментальных результатов, заключения, выводов и списка литературы (1%1 источников, из которых /ь~? англоязычных)

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 00-04-48029 и 04-0448640)

Хочу искренне поблагодарить сотрудников ВКМ ИБФМ им Г К Скрябина РЛН к б н Г Л Кочкину, Н Е Иванушкину, д б н ВС Гузева за практические советы и помощь в работе

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объекты исследования Исследованные культуры фитопатогенных микромицетов были получены из коллекции ВКМ ИБФМ РАН Три отобранных для работы штамма являются типичными представителями родов Fusarium, Botrytis и Bipolans Fusarium oxysporum FW387, Botrytis cinerea FW401, Bipolaris sorokiniana F3045

Культуры Trichoderma longibrachiatum Rifai FW826 и FW829 были выделены нами из ризопланы тепличных роз, Trichoderma harzianum Rifai FW827 - с корней отмершего растения, Trichoderma harzianum Rifai FW828 - со внутренней части корня

Методика приготовления препаратов. Для получения конидий микромицеты культивировали на агаризованной среде с пептоном и глюкозой (пептон - 5 г, глюкоза - 10 г, КН2Р04 - 1 г, MgS04 - 0,5 г, вода - 1 л, агар - 10 г) в течение 7 суток при 28сС Затем с помощью смыва получали суспензию конидий, которую трижды отмывали Н20, осаждая центрифугированием, и с помощью ультразвуковой обработки (УЗДН-1, 22 кГц, 0,44 А, 30 сек) получали монокопидиевую суспензию Микрокоиидии гриба F oxysporum F387 получали путем фильтрования суспензии через фильтр с диаметром пор 10 мкм Для определения жизнеспособности конидий грибов из моноконидиевой суспензии готовили препараты по стандартной методике (Методы почвенной микробиологии и биохимии, 1991) Суспензии конидий наносили

микропипеткой на тщательно обезжиренные предметные стекла (0,04 мл на препарат для фитопатогенных микромицетов и 0,02 мл - для культур рода Тпс}гос1егта) и равномерно распределяли петлей на площади 4 см2 Для одного образца готовили 12 препаратов и просматривали по 50 полей зрения в каждом Расчет количества конидий в 1 мл суспензии (популяционная плотность) проводили по формуле И= Б) а п/ V Бг, где N - число конидий в 1 мл суспензии, - площадь препарата (мкм2), а - количество конидий в одном поле зрения (усреднение производится по всем препаратам), п - показатель разведения суспензии, V - объем капли, наносимой на стекло (мл), - площадь поля зрения микроскопа (мкм2)

Плотность популяции и отсутствие признаков прорастания конидий определяли на препаратах, зафиксированных и окрашенных сразу после приготовления мазков Для установления способности конидий к прорастанию приготовленные препараты до высыхания мазков помещали во влажную камеру и инкубировали при температуре воздуха 28°С и влажности 100% в 1ечение 6, 15, 18, 24 и 39 часов После инкубирования препараты высушивали на воздухе, фиксировали и окрашивали калькофлуором белым (Полянская, 1988) Учет конидий производили на люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ И-3 Площадь поля зрения составляла 9800 мкм2 В качестве индекса обилия использовали среднее расстояние между конидиями г ="^1/4 т, где г — расстояние, ш — популяционная плотность в расчете на единицу площади (а/9800 мкм2) Число конидий культур рода ТпскосЗегта в поле зрения (а), равное 1, 5, 10 и 20 соответствовало популяционной плотности 2 10б, 1 107, 2 107 и 4 107 и среднему расстоянию между конидиями 156, 50, 35, 22, 15, 13, 11 и 8 мкм Для фитопатогенных микромицетов - 0,1, 1, 2, 5, 10, 15, 20 и 40 соответствовало популяционной плотности 1 103, ПО6, 2 106, 5 106, 1 107, 1,5 107, 2 107 и 4 107 конидий в 1 мл и среднему расстоянию между конидиями 156, 50,35,22, 15, 13, 11 и 8 мкм

Для показателя чиспенности конидий допя среднего квадратичного отклонения (5п-1) не превышала 10%

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Ауторегуляция прорастания конидий микромицстов рода Trichoderma

Конидии прорастают, образуя ростковые трубки, которые затем удлиняются, гифа начинает ветвиться, образуя микроколонии (рис 1) На рис 3 представлены данные по прорастанию конидий выделенного нами из ризосферы роз сорта "Grand Gala" штамма микромице!а рода Trichoderma (Т longibrachiatum FW826) Можно видеть, что процесс прорастания конидий во влажной камере зависит от их обилия и может быть описан с помощью уравнений логарифмической регрессии (R2 - коэффициенты корреляции) Прорастание конидий регистрируется к 15 часу инкубирования Уже на этом этапе наблюдаются существенные различия между препаратами При плотности конидий, составляющей 1 клетку в поле зрения, к 15 часу прорастает около 10% конидий, при плотности в 5 клеток наблюдается около 4% проросших конидий, а при плотности в 10 клеток - только 1,5% В дальнейшем наблюдается увеличение числа проросших конидий на всех препаратах в 4-6 раз, но в интервале 18-39 часов инкубирования процесс замедляется и после 39 часов затухает При плотности конидий 20 клеток в поле зрения не наблюдалось их прорастания в течение всего срока инкубирования

При исследовании прорастания конидий Т hatzianum FW827, выделенного из ризосферы роз сорта "Velvet", наблюдались сходные закономерности (рис 4) Прорастание конидий регистрировалось к 15 часу инкубирования, однако на этом этапе доля проросших конидий не так резко убывала с ростом числа клеток в поле зрения, как в первом эксперименте Для второго штамма также характерны замедление процесса увеличения доли проросших конидий в интервале 18-39 часов инкубирования и затухание этого процесса в дальнейшем В этом эксперименте также не наблюдалось

О ' ( т о ^^ О

* Г f О х \ V о о

Рис. 1. Процесс прорастания конидий микромицетов рода Тпскоскгта: а) начало опыта (конидии); б) прорастание спустя 15 часов (образование ростовой трубки); в, г, д) дальнейший рост; е) образование микроколонии. 800х.

3 о "Л ^ V vi © о

* "' * Ч|* о • 0 О о

Рис.2. Прорастание конидий F.oxysporum в зависимости от популяционной плотности (при низкой плотности прорастают и микро-и макроконидии (а, б), при плотности более 15 спор в поле зрения - исключительно макроконидии (в, г). Прорастание Botrytis cinerea (д) и ßipolaris surokiniana (е). 800х.

0 15 18 24 39

1В 1 конидия/поле зрения 10 | 42 76 78

□ 5 конидий/поле зрения 3,7 73,6 15 18

Н 10 конидий/поле 1,4 8,75 11 14,5

зрения

% ♦ 1 кон иди я/поле

100 зрения

у = 67,4и(х) - 158,1 Яг = 0,76 5 конвдшШпе

80 * 1 зрения • 10 конедий/поле

60 /Г зрения

40 у у = 12,51_л(х) -/ Йэ - 0,71 26,3

20 у = 12,11п(х)-28,6

п Рг= 0,83

4 0 I * 1 10 20 30 40 50 час

Рис.3, Содержание; проросших во влажной камере конидий Т.!оп?,1ЬгасИ 1а1 /ип Р \WS26 в зависимости от их плотности.

15 те 24 | 39

И 1 конидия/поле зрения 13 33 80,9 36,5

О 5 конидий/поле зрения 5,4 13 27,9 29

Н 10 конидий/поле зрения 4 16 19.4 22.4

с %

♦ 1 конидия/поле

100 - зрения

у=78,61п(х)-191 у 5 конидий/поле

Г?2 = 0,82 / X зрения

80 \ / Т • 10 конидий/поле

зрения

60

/ у = 24,81.п(х) - 58,4

40 / Р? = 0,80

20 у= 16,51_п(х)- 35,9

^ = 0,73

А — * Г 1 1

и ? г ■ — час

0 10 20 30 40 50

V >

Рис.4. Содержание проросших во влажной камере конидий Т. кагг1апшп К\V827 в зависимости от их плотности.

прорастания конидий при плотности 20 клеток в поле зрения

Другие закономерности наблюдались при изучении прорастания конидий Т harzianum FW828 и Т longibrachiatum FW829, выделенных из ризосферы роз сорта "Dallas", которые также начинали прорастать к 15 часу инкубирования (рис 5) Однако процесс прорастания конидий в этих случаях описывается уже уравнениями линейной регрессии (с достаточно высокими коэффициентами корреляции R2 = 0,78 - 0,96) Здесь также наблюдается выраженная зависимость доли проросших конидий от плотности их расположения на препарате в диапазоне от 1 до 5 клеток в поле зрения (однако при более низких конечных значениях доли проросших конидий к 39 часу инкубирования на препарате с плотностью расположения в 1 клетку в поле зрения) При этом в случае со штаммом Т longibrachiatum FW829 доля проросших конидий не убывает с увеличением плотности расположения в диапазоне от 5 до 10 клеток в поле зрения (рис 6) При плотности 20 клеток в поле зрения и более прорастание конидий также не регистрируется

На рис 7 представлены данные о зависимости процесса прорастания конидий изученных штаммов рода Trichoderma от среднего расстояния между коиидиями на препаратах Во всех случаях наиболее благоприятен вариант с расстоянием 50 мкм и в трех случаях из 4-х наименее благоприятен вариант с расстоянием в 15 мкм Наблюдаются различия между поведением популяций микромицетов, выделенных из ризосферы роз сортов "Giand Gala" и "Royal Velvet" и поведением популяций, выделенных из ризосферы роз сорта "Dallas" Для первых характерно более резкое возрастание доли прорастающих конидий при увеличении расстояния между ними

Таким образом, выявлены как сходство, так и различия между изученными штаммами микромицетов Общим экологическим свойством является наличие механизмов внутрипопуляционной регуляции прорастания конидий Можно полагать, что механизмом такой регуляции является реакция на концентрацию сигнальных метаболитов, зависящую от расстояния между клетками Таким сигнальным метаболитом может быть, в частности,

1 конвдия/поле зрения 5 конидий/поле зрения 10 конидий/поле зрения |

К

□

0

час

г~

%

100

80

♦ 1 конидия/поле зрения 5 конидий/поле зрения

• 10 конидий/поле зрения

60

40

20

0 ■

у= 1,03х-4,8 Н2= 0,84

10

20

30

40

у = 0,48х + 0,5 Р2 = 0,79

у = 0,29х + 1.1 ^ = 0,87

час

50

Рис.5. Прорастание конидий Т. Ьапкитт Р\У828 в зависимости от их плотности.

Рис.6. Прорастание конидий Т. 1аНфЬгсйгШатт Р\V829 зависимости ОТ их плотности.

у = 2,0465х -14 103 И2 = 0,9816

О Р\Л/826 FW827 О FW828 X FW829

у = 0,86х + 2,7 (З2 = 0,78

мкм

Рис 7 Зависимость относительного содержания проросших конидий штаммов рода ТпсИос^егта от среднего расстояния между конидиями (мкм)

у - 601-п(х) -127 О 65

% 100

90 80 -70 60 50 40 -ЗО 20 10 О

у = 2 Зх - 21

25 50

125 150 175

Рис 11 Зависимость относительного содержания проросших конидий некоторых фитопатогенных грибов от среднего расстояния между конидиями (мкм)

триметиламин (Robinson et al, 1989, Хохлов, 1988)

2 Прорастание конидий фнтопатогенных грибов

На рис 8 отражена динамика прорастания на препаратах конидий культуры микромицета F oxysporum Можно видеть, что процесс прорастания конидий во влажной камере зависит от их плотности Прорастание конидий регистрируется к 15 часу инкубирования Уже на этом этапе наблюдаются существенные различия между препаратами При плотности конидий, составляющей 1-5 клеток в поле зрения (среднее расстояние между конидиями 50-22 мкм), к 15 часу прорастает более 50% конидий, а при плошосги в 15 клеток (среднее расстояние между конидиями 13 мкм) - только 5,7% В дальнейшем к 18 часу инкубирования наблюдается увеличение доли проросших конидий на всех препаратах примерно в 1,5 раза При плотности 1 клетка к концу опыта прорастают практически все конидии, около 90% конидий прорастает и при плотности 5 клеток в поле зрения При плотности конидий 15 клеток к 24 часу инкубирования доля проросших конидий стабилизируется на уровне 16% и в дальнейшем не меняется При плотности конидий 20 клеток (среднее расстояние между конидиями 11 мкм) в поле зрения не наблюдалось их прорастания в течение всего срока инкубирования

Необходимо отметить, что при низкой плотности клеток прорастают пропорционально и микро- и макроконидии (рис 2а, б), а при плотности 15 клеток в поле зрения прорастают исключительно макроконидии (рис 2 в, г) Процесс прорастания конидий во всех случаях описывается уравнениями логарифмической регрессии (с достаточно высокими коэффициентами корреляции R2 = 0,91 - 0,95)

При исследовании прорастания конидий другого фитопатогенного микромицета — В cinerea характер прорастания был несколько иным (рис 2 д, е, рис 9) При расстоянии между конидиями 50 мкм к 18 часу доля проросших конидий достигает 50%, а при расстоянии 35 мкм - около 15% Однако во времени споры В cinerea прорастают активнее, чем споры F oxysporum Таким образом, по сравнению с F oxysporum, В cinerea оказался более

100 л

4 ш 18 24 36 48

К31 конидия : 55 87 97,5 97,5 97,5

(3 5 конидий 56 73 88 88 88

■ В 15 конидий I 57 12 16 16 16

100

ео

60

40 -

20

у = 49,81.п(х) + 10,8 а 0,91

у = 9,81п(х) + 0.11 Р!г = 0.95

О -

15 18 24 36 48 час ♦ 1 конидия 5 конидий д 15 конидий

Рис. 8. Содержание проросших во влажной камере конидий Р.охузрогит в зависимости от их плотности {конидии/ поле зрения).

и 15 18 24 36 : 48 час

И 1 kohi/ДИЯ 41 11 53 84 89 | 95

1 □ 5 конидий . . 13 32 35 37

%

100 -

40

24 36 48 5 КОНИДИЙ

Рис. 9, Содержание проросших во влажной камере конидий В.с'тагеа зависимос ти от их плотности (конидии/ поле зрения).

чувствительным к фактору популяциоииой плотности При повышении плотности с 1 до 5 клеток в поле зрения в первом случае количество проросших конидий снижается примерно на 10%, а во втором - в 3 раза А при плотности в 15 клеюк в поле зрения конидии культуры В cinerea не прорастали

Процесс прорастания конидий у микромицета В sorokiniana при плотности 1 клетка в поле зрения аналогичен процессам прорастания у описанных выше грибов (рис 10) Конидии прорастают к 15 часу инкубирования, доля проросших конидий в это время достигает 50% При плотности 0,1 клегка в поле зрения (среднее расстояние между конидиями 156 мкм) к 15 часу прорастает более 70%, к 18 часу доля проросших конидий в обоих вариантах достигает 100 или почти 100% и далее не меняется

Следует огметигь, что конидии этого гриба практически не красятся калькофлуором белым на слабо светящемся фоне можно рассмотреть темную крупную конидию, от которой отходят хорошо люминесцирующие ростовые трубки (рис 2 с) Уже к 15 часу инкубирования длина ростовых трубок может составлять 400-500 мкм, в то время как у культур F oxysporum и В cinerea длина ростовых трубок не превышает 50 мкм В конце опыта образуются хорошо сформированные микроколонии

IIa рис 11 представлено сравнение зависимостей прорастания конидий от среднего расстояния между конидиями на препаратах для изученных микромицетов Для всех культур наиболее благоприятен вариант с расстоянием 50 мкм и более, а для F oxysporum практически также хорош вариант с расстоянием в 35 мкм, в котором регистрируется свыше 80% проросших спор Можно видеть, что есть различия в поведении популяций микромицетов Для F oxysporum и В cinerea характерно более резкое возрастание доли прорастающих конидий при увеличении расстояния между ними

Таким образом, выявлены как сходство, так и различия между изученными родами микромицетов Общим экологическим свойством является наличие механизмов внутрипопуляционной регуляции прорастания конидий

Рис. 10. Содержание проросших и о влажной камере конидий В.зогоЫгаапа в зависимости от их плотности (конидии/ поле зрения).

3. Влияние культуры T.longibrachiatum на прорастание конидий F.oxysporum

В силу сложных взаимоотношений между микро- и макроконидиями культуры F oxysporum (при плотности более 15 конидий на препарате прорастают исключительно макроконидии) (рис 2 г) был отдельно изучен процесс прорастания микроконидий этой культуры На рис 12 отражена зависимость прорастания микроконидий F oxysporum от плотности клеток на препарате Как видим, микроконидии этого гриба начинают прорастать на 6 час инкубирования И процесс прорастания определяется плотностью популяции Так при плотности популяции 2 клетки в поле зрения уже на 6 час прорастает свыше 60% К концу опыта прорастает почти 100% конидий При среднем расстоянии между конидиями 15 мкм и менее проявляется эффект ауторегуляции к концу опыта прорастают не все конидии Следует отметить, что в этих вариантах процесс прорастания практически затухает к 15 часу При расстоянии между конидиями 8 мкм (40 конидий в поле зрения) процесс прорастания затухает еще раньше, к 12 часу развития, а количество проросших спор составляет при этом около 40% Из полученных данных следует, что во всех случаях наиболее благоприятен вариант с расстоянием 35 мкм

Полученные ранее данные о скорости прорастания конидий грибов рода Trichoderma (Полянская и др, 2004) не позволяют считать, что механизмом вытеснения фитопатогенов является конкуренция (Sivan, Chet, 1989, 'Ironsmo, Hjeljord, 1998) Постановка прямых экспериментов, моделирующих процессы взаимодействия фитопатогенов и культур рода Trichoderma, позволила изучить тип взаимодействия этих микромицетов

Для оценки сравнительной конкурентоспособности изучаемых популяций родов Fmarium и Trichoderma их споры наносили на препараты совместно При этом споры Trichodeima наносили из расчета 10 клеток в поле зрения (среднее расстояние 15 мкм), а споры Fusai шт из расчета 2 и 10 конидий в поле зрения (среднее расстояние 35 и 15 мкм) Как видим из рисунка 13-а, совместное внесение спор Fmarium и Trichoderma практически не повлияло на

10

15

20

25 час 30

Рис.12. Прорастание микроконидий Г. охузрогит в зависимости от их попуЛйционной плотности (I -2, 2 - 10^ 3-15 и 4 - 40 конидий в поле зрения).

"Л

%

100 80 60 40 20 0

т Ю

---- 0 24 30 34

0 22 26 45

час

Рис. 14. Прорастание спор T.longibrachiatum (плотность 10 конидий в поле зрения).

динамику прорастания микроконидий Foxysporum Превалирующим для последней культуры оставался фактор аутоингибирования При внесении микроконидий Foxysporum на препараты с уже развивающейся Т longibrachiatum (к этому времени проросло более 20% конидий) (рис 14) было выявлено ингибирующее воздействие культуры Т longibrachiatum на прорастание микроконидий Foxysporum в обоих вариантах внесения последней (рис 13-6)

Показательно, что конкурентоспособность культуры Fusarium в этом варианте опыта была выше при более высокой плотности на препарате, т е не только не наблюдалось аутоингибирования, но, напротив, проявился кооперативный эффект

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в экспериментах в наиболее простой форме моделирующих процессы первичной колонизации микромицетами таких субстратов, как прикорневая зона и корень растения, изучены процессы прорастания конидий микромицетов родов рода Trithoderma, часто используемых в сельскохозяйственной практике и культур родов Fusarium, Botrytis и Bipolaris, представительных для функциональной группы фитопатогенов

Для всех используемых в работе культур микромицетов характерен эффект ауторегуляции прорастания покоящихся форм (конидий) Следует отметить, что по силе эффекта ауюингибирования различия между штаммами Tnchodeima были выше, чем межвидовые и даже межродовые различия При этом культуры фитопатогенных микромицетов оказались более активными колонизаторами пространства, чем культуры рода Trichoderma конидии культур родов Fusarium, Botrytis и Bipolar/s значшельно быстрее прорастали при инкубировании препаратов, чем конидии культуры рода Trichoderma На смешанных препаратах при совместном внесении присутствие спор Trichoderma практически не повлияло па процесс прорастания конидий Fusarium Однако интродукция конидий Fusarium oxysporum в местообитание с

О 0 6 10 15 18 24

И 2 кл 0 64 90 92 96 ; 100

и 2 кл 0 21 31 31 32 34

I

Г'

%

б)

0 6 10 15 13 24

И 10 кл 0 40 47 60 81 88

□ 10 кл 0 30 39 40 40 40

Рис 14. Прорастание микрйконидий Р.охувротт при одновременном внесении с конидиями Т. 1оп$ЪгасЫаЫт (1) и на 24 час их прорастания (2):

а) плотность микроконидий Р.охуфогиШ 2 к л,/иоле зрений;

б) плотность микроконидий Р.охузрогит 10 кл./поле зрения;.

уже развивающейся культурой Trichoderma longibrachiatum показывает, что в этом случае послед1ИЯ может оказывать на культуру Fusarium oxysporum ингибирующее воздействие По-видимому, оптимальной стратегией использования культур Trichoderma в сельскохозяйственной практике является обеспечение им конкурентных преимуществ за счет, например, предпосевной инокуляции семян

Интересно, что удалось наблюдать, как в условиях реальной конкуренции культур Trichoderma и Fusarium, для культуры Fusarium уже теряет значение фактор аутоингибирования и проявляется кооперашвный эффект В дальнейшем целесообразно очертить граничные условия действия механизмов ауюрегуляции и кооперации в развитии различных культур микромицетов Это имело бы и фундаментальное, и прикладное значение

выводы

1 Установлен эффект внутрипопуляцнонной регуляции прорастания конидий у всех изученных культур микромицетов, который может быть описан как ауторегуляция прорастания спор грибов

2 Впервые показано, что для культур рода Trichoderma межштаммовые различия в экологической страте! ии были более значимы, чем межвидовые

3 Установлено, чго микромицегы родов Fusarium, Botrytis и В ¡polaris являются более активными колонизаторами пространства, чем микромицеты рода Trichoderma

4 Впервые показано, что культуры рода Trichoderma уступают в конкурентоспособности Fusarium, однако, при обеспечении культуре Trichoderma конкурентных преимуществ путем более раннего внесения, она может оказывать на культуру фигопагогена ингибирующее воздействие

5 Впервые показано, что при ингибирующем воздействии культуры Trichoderma на культуру Fusarium, для последней утрачивает значение фактор аутоингибирования и, напротив, проявляется кооперативный эффект

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Толстихина ТЕ Особенности развития конидий дейтеромицета рода Trichoderma / 6-я Путинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века», 2002, сб тезисов, с 64

Толстихина ТЕ Микромицеты рода Trichoderma и особенности их прорастания //Тез дохл Междунар конф Студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2002», М МГУ, 2002, с 114

Толстихина ТЕ Особенности прорастания конидий ряда фитопатогенных грибов //Тез докл Междунар конф Студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2003», М МГУ, 2003, с 78

Толстихина ТЕ Особенности прорастания некоторых фитопатогенных грибов //7-я Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века», 2003, сб тезисов, с 294

Полянская Л М , Толстихина Т Е , Кочкина Г А , Иванушкина Н Е , Ведина О Т , Звягинцев Д Г Ауторегуляция прорастания конидий микромицетов рода Trichoderma //Микробиология, 2004, т 73, №1, с 94-98

Полянская Л М , Толстихина ТЕ , Кочкина Г А , Иванушкина Н Е , Звягинцев Д Г Закономерности прорастания конидий фитопатогенных грибов //Микробиология, 2004, Т 73, №4, с 383-388

Отпечатано в копицентре «СТ ПРИНТ» Москва, Ленинские горы, МГУ, 1 Гуманитарный корпус www stprmt ru e-mail zakaz@stpnnt ru тел 939-33-38 Тираж 100 экз Подписано в печать 05 04 2007 г

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Толстихина, Татьяна Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.1

ГЛАВА 1. ПРОРАСТАНИЕ СПОР ГРИБОВ.5

1.1. Эндогенные факторы, влияющие на прорастание спор грибов.6

1.2. Экзогенные факторы, влияющие на прорастание спор грибов.9

1.3. Механизмы прорастания споргрибов.11

ГЛАВА 2. МИКРОБНЫЙ АНТАГОНИЗМ.18

ГЛАВА 3. ФИТОПАТОГЕННЫЕ МИКРОМИЦЕТЫ.24

3.1. Биология и экология грибов рода Fusarium.24

3.2. Биология и экология грибов рода Botrytis.39

3.3. Биология и экология грибов рода Bipolaris.46

ГЛАВА 4. ГРИБЫ РОДА TRICHODERMA И БИОЛОГИЧЕСКИЙ

КОНТРОЛЬ.51

ГЛАВА 5. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ.66

ГЛАВА 6. АУТОРЕГУЛЯЦИЯ ПРОРАСТАНИЯ КОНИДИЙ

МИКРОМИЦЕТОВ РОДА TRRICHODERMA.71

ГЛАВА 7. ЗАКОНОМЕРНОСТИ ПРОРАСТАНИЯ КОНИДИЙ

ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ.80

ГЛАВА 8. ВЛИЯНИЕ КУЛЬТУРЫ Т .LONGIB RA CHI А TUM НА

ПРОРАСТАНИЕ КОНИДИЙ F.OXYSPORUM.93

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ауторегуляция прорастания спор почвенных грибов"

Актуальность проблемы. Фитопатогенные микроорганизмы -постоянные спутники сельскохозяйственного производства. Значительная часть заболеваний вызывается разнообразными микромицетами. Преимущественное внимание фитопатологов уделяется биологии фитопатогенных грибов и механизмам поражения растений. Изучается и экология фитопатогенных популяций, но в этой области твердоустановленных данных накоплено все еще недостаточно. Между тем современное земледелие требует оптимизации борьбы с заболеваниями посевов, при этом критерии эффективности, экологической безопасности и рентабельности средств защиты растений входят друг с другом в противоречие. Для совершенствования методов подавления фитопатогенных микроорганизмов необходимо знать причины вспышки их численности на тех или иных субстратах, а для этого непременно надо изучать механизмы регуляции численности этих популяций.

Одним из перспективных методов профилактики заболеваний растений является применение живых препаратов микроорганизмов-антагонистов или конкурентов (Рарау1за8, 1985; Тгопзшо, 1986). Этот метод позволяет минимизировать ущерб для окружающей среды и здоровья человека, уменьшая дозировки вносимых фунгицидов.

Промышленные штаммы рода ТпсЬос1егта широко используются в сельскохозяйственной практике для контроля размножения популяций патогенных грибов в почве, а также на семенах различных растений, в ризосфере и филлосфере (Tronsmo and Hjeljord, 1998). Рекомендуется также использовать культуры Trichoderma для сохранения убранного урожая (Chet, 1987; Papavizas, 1985; Tronsmo, 1986). Перед потребителем микробных препаратов встает ряд практических трудностей. Экономическая эффективность использования живого микробного препарата определяется вероятностью активной колонизации субстрата популяцией-интродуцентом. Конидии грибов рода Trichoderma чрезвычайно удобны для приготовления сухих препаратов, однако необходимо знать, какими факторами обусловливается прорастание конидий после внесения их в природное местообитание. Активно изучается влияние различных параметров внешней среды на поведение микробных популяций, однако в экологии значительную роль играет внутрипопуляционное взаимодействие. В литературе имеются указания на существование механизмов ауторегуляции процесса активизации покоящихся форм микроорганизмов (Robinson et al., 1989; Триггер и др., 1991; Хохлов, 1988). Но большая часть этих работ посвящена бактериям. В случае грибов информации еще недостаточно.

Логично было предположить, что подобная ауторегуляция свойственна различным видам микромицетов, как фитопатогенных, так и используемых для защиты от патогенов.

Целью настоящей работы является проверка характера внутрипопуляционной регуляции прорастания спор микромицетов и ее влияние на конкурентоспособность грибных популяций.

В задачи исследования входило:

1. Проверка наличия у разных видов грибов ауторегуляции прорастания конидий.

2. Изучение зависимости прорастания конидий этих грибов от популяционной плотности.

3. Установление различий в экологической стратегии между штаммами.

4. Изучение взаимовлияния конидий различных культур на процессы прорастания.

5. Установление влияния ауторегуляции на конкурентоспособность грибных популяций.

Научная новизна. Установлена зависимость прорастания конидий всех изученных культур микромицетов от плотности их популяции. Впервые разработаны и поставлены прямые эксперименты, моделирующие процессы взаимодействия фитопатогенов и культур рода ТИскос1егта, которые позволяют сделать заключение о типе их взаимодействия. Показано, что для культур рода ТпсИос1егта межштаммовые различия в зависимости прорастания спор от расстояния между ними были более значимы, чем межвидовые. Впервые установлено, что микромицеты рода

Fusarium (и, вероятно, большинство фитопатогенов) являются более активными колонизаторами пространства, чем микромицеты рода Trichoderma. В прямых экспериментах продемонстрировано, что при наложении ингибирующего воздействия культуры рода Trichoderma на культуру Fusarium oxysporum, ингибирование прорастания конидий рода Fusarium при высокой плотности популяции сглаживается, и напротив, проявляется кооперативный эффект.

Практическая значимость. Проведенные в работе эксперименты и установленные общеэкологические закономерности механизмов внутрипопуляционной регуляции прорастания конидий могут быть полезны при разработке рекомендаций по использованию культур микромицетов в сельскохозяйственной практике. На основе полученных данных можно рассчитать оптимальные дозы внесения микробных препаратов, таких как «Триходермин». Выявленные различия на штаммовом уровне во внутрипопуляционной регуляции прорастания конидий нужно учитывать при определении оптимальной дозы внесения. Показана значимость предпосевной инокуляции семян растений конидиями микромицетов, использующихся для биологического контроля развития фитопатогенов, что связано со скоростями прорастания конидий.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Толстихина, Татьяна Евгеньевна

выводы

1. Установлен эффект внутрипопуляционной регуляции прорастания конидий у всех изученных культур микромицетов, который может быть описан как ауторегуляция прорастания спор грибов.

2. Показано, что для культур рода Trichoderma межштаммовые различия в экологической стратегии были более значимы, чем межвидовые.

3. Установлено, что микромицеты родов Fusarium и Bipolaris являются более активными колонизаторами пространства, чем микромицеты рода Trichoderma.

4. Впервые показано, что культуры рода Trichoderma уступают в конкурентоспособности Fusarium oxysporum, однако, при обеспечении культуре Trichoderma конкурентных преимуществ путем более раннего внесения, она может оказывать на культуру фитопатогена ингибирующее воздействие.

5. Впервые показано, что при ингибирующем воздействии культуры Trichoderma на культуру Fusarium, для последней утрачивает значение фактор аутоингибирования и, напротив проявляется кооперативный эффект.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в экспериментах в наиболее простой форме моделирующих процессы первичной колонизации микромицетами таких субстратов, как прикорневая зона и корень растения, изучены процессы прорастания конидий микромицетов рода Trichoderma, часто используемых в сельскохозяйственной практике и культур родов Fusarium, Botrytis и Bipolaris - представителей функциональной группы фитопатогенов. Проращивая конидии микромицетов на воде и при достаточном количестве кислорода, удалось исключить неоднозначное влияние факторов внешней среды на поведение исследуемых популяций (Hobot, Gull, 1980).

Разработка и постановка прямых экспериментов, моделирующих процессы взаимодействия фитопатогенов и культур рода Trichoderma, позволили сделать заключение о типе взаимодействия этих микромицетов.

Полноценная система ауторегуляции численности у микроорганизмов (в том числе микромицетов) должна включать следующие обратные связи: 1) положительная связь, обеспечивающая инициацию и рост культуры; 2) отрицательная связь, способствующая замедлению роста, его остановке и переадаптации культуры к новым условиям; 3) положительная связь, повышающая выживаемость при оптимальной для данных условий плотности культуры; 4) отрицательная связь, приводящая к снижению жизнеспособности, если плотность культуры превысила по какой-то причине оптимальный уровень (Вахитов, 2007).

Для всех используемых в работе культур микромицетов характерен эффект ауторегуляции прорастания покоящихся форм (по 4-му типу). Действие ауторегулятора определяется популяцонной плотностью. Это имеет важное для популяции регуляторное значение: прорастает такое количество конидий, которое соответствует емкости среды.

При расстояниях между конидиями 50 мкм и более споры всех изученных родов микромицетов успешно прорастали и образовывали к концу опыта сформированные микроколонии. При большей плотности популяции начинал сказываться эффект ауторегуляции: прорастало тем меньше спор, чем выше была популяционная плотность. Существовал порог плотности, когда прорастания не наблюдалось.

При этом культуры фитопатогенных микромицетов оказались более активными колонизаторами пространства, чем культуры рода Trichoderma: конидии культур родов Fusarium, Botrytis и Bipolaris значительно быстрее прорастали, чем конидии культуры рода Trichoderma. Это опровергает литературные данные о том, что микромицеты рода Trichoderma способны подавлять развитие фитопатогенов, занимая пространство первыми. (Tronsmo, 1989).

Для культур F.oxysporum и В. cinerea прорастание сильнее зависело от популяционной плотности и, соответственно, от расстояния между конидиями. Этот эффект может определяться как индивидуальным характером ауторегулятора, так и размерами конидий.

Показано, что у культуры рода Fusarium при высокой плотности популяции прорастают исключительно крупные, богатые запасом питательных веществ и снабженные плотной оболочкой макроконидии. Из этих данных можно сделать предположение, что для действия ауторегулятора важна проницаемость оболочки споры. Если в культуре присутствуют лишь микроконидии, то их прорастание начинается быстрее, чем при наличии макроконидий, и быстрее, чем у культуры рода Trichoderma. Процесс прорастания от ростовой трубки до микроколонии происходит более стремительно (Wadhwani, Strivastava, 1984).

При совместном внесении присутствие конидий Т. longibrachiatum практически не повлияло на процесс прорастания микроконидий F.oxysporum. Однако интродукция конидий F.oxysporum в местообитание с уже развивающейся культурой Т. longibrachiatum показывает, что в этом случае последняя может оказывать на культуру F.oxysporum ингибирующее воздействие.

По-видимому, оптимальной стратегией использования культур рода Trichoderma в сельскохозяйственной практике является обеспечение им конкурентных преимуществ. Такие преимущества может обеспечить, например, предпосевная инокуляция семян (Taylor, Harman, 1990).

Интересно, что удалось наблюдать, как в условиях реальной конкуренции культур T.longibrachiatum и Р.охузрогит, для последней теряет значение фактор аутоингибирования и проявляется кооперативный эффект. В дальнейшем целесообразно очертить граничные условия действия механизмов ауторегуляции и кооперации в развитии различных культур микромицетов. Это имело бы и фундаментальное, и прикладное значение.

Проведенные в работе эксперименты и установленные общеэкологические закономерности механизмов внутрипопуляционной регуляции прорастания конидий могут быть несомненно полезны при разработке рекомендаций по использованию культур микромицетов в сельскохозяйственной практике.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Толстихина, Татьяна Евгеньевна, Москва

1. Вахитов Т.Я. Регуляторные функции бактериальных экзометаболитов на внутрипопуляционном и межвидовом уровнях // Автореф. дис. .док. биол. наук. СПб: СПбГТИ (ТУ), 2007.23 с.

2. Великанов, JI.JI., Сидорова, И.И. Некоторые биохимические аспекты в экологии грибов // Успехи микробиологии 1983. Т. 18, с. 112-132

3. Дьяков, Ю.Т., Озерецковская, O.JL, Джавахия, В.Г., Багирова, С.Ф. Общая и молекулярная фитопатология /М. "Общество фитопатологов" 2001.301 с.

4. Клечковская, Е.А. Эколого-биохимическая характеристика Fusarium spp. на озимой пшенице в Причерноморской степи Украины // Микол. и фитопатол. 1999 Т.ЗЗ. вып.4

5. Кононенко, Г.П., Соболева H.A., Леонов, А.Н. Интенсивность биосинтеза монолиформина у изолятов Fusarium avenaceum и F. moniliforme // Прикл. биохим. и микробиол. 1996 Т.32. вып.З

6. Краснопольская, Л.М., Макеева, А.П., Соколова, Л.М., Садовская, В.Л. Образование гиббереллинов А4 и А7 штаммами гриба Fusarium moniliforme //Микробиология 1997 Т.66. с. 501-506

7. Курс низших растений, под ред. М.В. Горленко. / М.: Высшая школа. 1981. с. 461-472

8. Левитин, М.М., Иващенко В.Г., Шилова Н.П., Нестеров А.Н. Возбудители фузариоза колоса зерновых культур и формы проявления болезни на северо-западе России. // Микол. и фитопатол. 1994 Т. 28. с.58-64

9. Меденцев, А.Г., Акименко В.К. Влияние вторичных метаболитов и ингибиторов переноса электронов на биосинтез нафтохинонов грибом Fusarium decemcellulare// Микробиология 1997 Т. 66. с.773-778

10. Меденцев, А.Г., Баскунов, Б.П., Акименко В.К. Образование нафтохиноновых пигментов грибами Fusarium decemcellulare и ихвлияние на окислительный метаболизм продуцента // Биохимия 1988. Т. 53. вып.З

11. П.Меденцев, А.Г., Баскунов, Б.П., Акименко В.К. Механизм устойчивости грибов Fusarium decemcellulare к собственным пигментам // Биохимия 1989 Т. 54. вып.4

12. Методы почвенной микробиологии и биохимии. / М.: МГУ. 1991. 303 с.

13. Мир растений, под ред. A.JI. Тахтаджяна / М.: Просвещение 1991. т.2. 479 с.

14. Мирчинк Т.Г. Почвенная микология / М. :МГУ. 1988. 224 с.

15. Морозова, Е.В. Прорастание, хранение и химический состав конидий Aspergillus niger v. tieghem продуцента лимонной кислоты // Автореф. дис. .канд. биол. наук. Новосибирск, 2003. 24 с.

16. Мюллер, Э., Леффлер, В. Микология / М.: Мир 1995

17. Соколова, Г.Д. Клональная изменчивость токсигенности и вегетативная совместимость Fusarium graminearum II Микол. и фитопатол. 2000 Т. 34. вып.2

18. Полянская, Л.М., Тригер, Е.Г., Кожевин, П.А., Звягинцев, Д.Г. Ауторегуляция прорастания спор дейтеромицетов // Докл. АН СССР 1990. Т. 315, с. 729-730

19. Тригер, Е.Г., Полянская, Л.М., Кожевин, П.А. Микробные взаимодействия в почве (на примере некоторых популяций стрептомицетов и бактерий) // Микробиология. 1990. т.59. N4. с.688-694

20. Феофилова, Е.П., Терешина, В.М., Гарибова, J1.B., Завьялова, J1.A., Меморская, А.С., Марышова, Н.С. Прорастание базидиоспор Agaricus bisporus // Прикл. Бихимия и микробиология 2004. Т. 40, №2, с. 220-226

21. Хасанов, Б.А. Определитель грибов-возбудителей "гельминтоспориозов" растений из родов Bipolaris, Drechslera и Exserohilum / Ташкент Изд-во "Фан" Акад. наук респ. Узбекистан 1992

22. Шеховцев, А.Г., Элланская, И.А., Диголь, Д. Фузарии в почвах лесных фитоценозов Украины и некоторых регионов России // Микол. и фитопатол. 1998. Т.32, с. 79-85

23. Abd-El Moity, Т.Н., Papavizas, G.C., and Shatla, M.N. Introduction of New Isolates of Trichoderma harzianum Tolerant to Fungicides and Their Experimental Use for Control of White Rot of Onion // Phytopathology. 1982. V.72. N.4

24. Adrian, M., Jeandet, P., Veneau, J., Weston, L.A., Bessis, R. Biological activity of resveratrol, a stilbenic compound from grapevines, against Botrytis cinerea, the casual agent for grey mold // J. Chem. Ecol. 1997. V.23, pp.1689-1702

25. Lcorn, J.L. Generic concepts in Dreshslera, Bipolaris, and Exserohilum II Myhotaxon 1983. V. 17, pp. 1-86

26. Allen, P.S., The role of self-inhibitor in the germination of uredospores // Phytopathol. 1955. V. 45, pp. 259-262

27. Allen, P.S., Control of spore germination and infection structure formation in fungi // Phytopathol. 1976. V. 66, No 4, pp. 51-85

28. Amir, H., Pineau, R. Effects of Metals on the germination and growth of fungal isolates from new Caledonian ultramafic soils // Soil Biol. Biochem. 1998, V.30, No 14, pp. 2043-2054

29. Arbel, G., Katan, J., Katan T., Yarden, O. pathogenic variation among sub-population of Fusarium oxysporum f. sp. Radicis-lycopersici, the crown and root rot pathogen of tomato // Phytoparasitica 2001. V. 29, No 3, c.254

30. Arora, D.K., Pandey, A.K., Sritastva, A.K. Effects of heat stress on loss of C, germination and pathogenicity from chlamidospores of Fusarium oxysporum f.sp. ciceri II Soil. Biol. Biochem 1996,V. 28, No 3, pp. 399407

31. Azcon-Aguilar, C., Barea, J.M. Arbuscullar mycorrhizas and biological control of soil-borne plant pathogens an overview of the mechanisms involved // Mycorrhiza 1996. V. 6, pp. 457-464

32. Barak, R., Elad, Y., Mirelman, D., and Chet, I. Lectins: A Possible Basis for Specific Recognition in the Interaction of Trichoderma and Sclerotium rolfsii/l Phytopathology. 1985. V.75. pp.458-462

33. Barrios-Gonzalez, J., Martinez, C., Aguilera, A., Raimbaut, M. Germination of concentrated suspensions pf spores from Aspergillus niger II Biotechnology Letters 1989. V. 11, No 8, pp. 551-554

34. Bede, J.C., Tobe, S.S. Activity of insect juvenile Hormone III: seed germination and seedling growth studies // Chemoecology 2000. V. 10, pp. 89-97

35. Bell, D.K., Wells, H.D., and Markham, C.R. In Vitro Antagonism of Trichoderma species Against Six Fungal Plant Pathogens // Phytopathology. 1982. V.72. pp.379-382

36. Benitez, T., Villa, T.G., Acha, J.G. Effects of polytoxin D on germinatin, morphological development and biosynthesis of the cell wall of Trichoderma viride //Arch. Microbiol. 1976, V. 108, pp. 183-188

37. Brants, A., Earle, E.D. Transgenic tobacco cell cultures expressing a Trichoderma harzianum endochitinase gene release the enzyme into the medium // Plant Cell Rep. 2001. V. 20, pp. 73-78

38. Bruehl, G.W. Integrated Control of Siolborne Plant Pathogens: An Overview // Can. J. Plant Pathol. 1989. V.U. pp.153-157 (uht. no Tronsmo, Hjeljord, 1998)

39. Bruno, K.S., Aramayo, R., Minke, P.F., Metzenberg, R.I., Piamann, M. Loss of growth polarity and mislocalization of septa in Neurospora mutant altered in the regulatory subunit of cAMP-dependent protein kinase // EMBO 1996. V. 15, pp. 5772-5782

40. Bucci, T.J., Howard, P.C. Effect of Fumonisin Mycotoxins in Animals // J. Toxicol. Toxin Rev. 1996. V. 15, pp. 293-302

41. Burkhanova, G.F., Yarullina, L.G., Maksimov, I.V. The control of Wheat Defense Responses during inrection whith Bipolaris sorokiniana by chitooligosaccharides // Rus. J. Plant Pathol. 2007. V. 54, pp. 104-110

42. Cahagnier, B., Bakan B., Melcion, D., Richard-Molard, D. Influence of Metallic Ions on Trichothecens (DON, ADON) Production of Fusarium graminearum in Liquid Culture // Rev. med. vet. 1998. V.149, p. 517

43. Carter,R., Leonard, T.C. UK Ochratoxin A (OTA) and Fusarium Mycotoxin Surveillance 1994-1997//Rev. med. vet. 1998. V. 149, p. 700

44. Chen, H-J., Smith, D.L., Starret, D.A., Zhou, D., Tucker, M.L., Solomos, T., Gross K.C. Clonning and Characterisation of a Rhamnogalacturonan by Drobase Gene from Botrytis cinerea II Biochem. and Mol. Biol. Int. 1997. V.43, pp. 823-838

45. Cherif, M. and Benhamou, N. Cytochemical Aspects of Chitin Breakdown During the Parasitic Action of a Trichoderma sp. on Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici II Phytopathology 1990. V.80. pp. 1406-1414

46. Chet, I., Inbar, J., Hadar, Y., Fungal antagonists and mycoparasites / In Wicklow, S. (ed.) / Mycota environmental and Microbial Relationships 1997. Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg. V. IV, pp. 165-184

47. Choi, W., Dean, R.A. The adenylate cyclase gene MAC1 of Magnaporthe grisea controls appressorium formation and other aspects of growth and development // Plant Cell 1997. V. 9, pp. 1973-1983

48. Cohen-Kupiec, R., Broglie, K.E., Friesem, D., Broglie, R.M., Chet, I. Molecular characterization of a novel (3-1,3-exoglucanase related to mycoparasitism of Trichoderma harzianum II Gene 1999. V. 226, 147154

49. Cole, G.T. Ultrastructure of Conidiogenesis in Drechslera sorokiniana II Can. J. Bot. 1973. V.51, pp. 629-638

50. Damm, U., // Mitt. Biol. Bundesanst. Land- und Forwirt. Berlin-Pahlem. 1998 V. 357, pp. 90-91

51. Delp, P., 1980; mrr. no Tronsmo, Hjeljord, 1998

52. Dennis, P.B., Fumagalli, S., Thomas, G. Target of rapamycin (TOR): Balancing the opposing forces of protein synthesis and degradation // Curr. Opin. Genet. Dev. 1999. V. 9, pp. 49-54

53. Dijksterhuis J., Sanders M., Gorris L.G.M., Smid E.J. Antibiosis plays a role in the context of direct interactions during antagonism of Paenibacillus polymyxa towards Fusarium oxysporum II J. Appl. Microbiol. 1999. V.86.№1, pp. 13-21

54. Dobbs, C.G., Hinson W.H. A widespread fungistasis of soils // Nature 1953. V. 172, pp. 197-199

55. Doran, W.L. Effect of external factors of the germinayon of fungus spores // Bull. Torrey. Botan. Club 1922. V. 49, pp. 313-340

56. Drew, M.C., Lynch, J.M. Soil anaerobiosis, microorganisms and root function // Ann. Rew. Phytopathol. 1980. V. 18, pp. 37-67

57. Elad, Y., Barak, R., and Chet, I. Possible Role of Lectins in Mycoparasitism//J. Bacteriology. 1983. V. 154, pp. 1431-1435

58. Elad, Y., Evenses, K., Physiological aspects of resistance to Botrytis cinerea II II Phitopathol. 1995. V. 85, pp. 637-643

59. El-Ghaouth, A., Wilson, C.L., and Wisniewski, M Ultrastructural and Cytochemical Aspects of the Biological Control of Botrytis cinerea by Candida saitoana in apple fruit // Phitopathol. 1998. V. 88, pp. 282-291

60. Eshel, D., Gamliel, A., Katan, J., Grinstein, A. Evaluaion of soil fumigants on soilborne fungal pathogens in a controlled-environment system and in soil // Crop Protection 1999. V. 18, pp. 437-443

61. Evans, C.K., Macky R.D., Mirocha C.J., and Kolaczkowski, E.K. 1996 Phitopathology 86: №11

62. Fracchia, S., Garcia-Romera, I., Godeas, A., Ocampo, J.A. Effect of saprophytic iiingus Fusarium oxysporum on arbuscular mycorrhizal colonization and growth of plants in greenhouse and field trials // Plant and Soil 2000, v.223, pp.175-184

63. Gancedo, J.M. Yeast carbon catabolite repression // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. V. 62, pp. 334-361

64. Garret, S.D. Ecological Groups of Soil Fungi // New Phytol. 1951. V.50. No2 (iiht. no Mhphhhk, 1988)

65. Garrett, M.K., Robinson, P.M. A stable inhibitor of spore germination produced by fungi // Arch. Microbiol. 1969. V. 67, pp/ 370-378

66. Gokul, B., Lee, J.-H., Song, R.-B., Rhee, S.K., Kim, C.-H., Panda, T. Characterization and application of chitinases from Trichoderma harzianum A review // Bioprocess Eng. 2000. V. 23, pp. 691-694

67. Gonzalez-Urena, A., Orea, J.M., Montero, C., Jimenez, J.B. Improving postharvest resistance in fruit by external application of /raws-resverantol //J. Agric Food Chem 2003. V. 51, pp. 82-89

68. Griffin, G.J., Ford, R.H. Soil fungistasis: fungus spore germination in soil at spore densities corresponding to natural population levels // Can. J. Microbiol. 1974. V. 20, pp. 751-754

69. Grossbard, E. Antibiotic Production by Fungi on Organic Manures and in Soil // J.Gen.Microbiology. 1952. V.6. N4

70. Joseph, J.D., Means, A.R. Identification and characterization of two Ca /CaM-dependent protein kinases required for normal nuclear division in Aspergillus nidulans II J. Biol. Chem. 2000. V. 275, pp. 38230-38238

71. Harman, G.E., Myth and dormas of biocontrol changes in perceptions derived from research on Trichoderma harzianum T-22 // Plant Dis. 2000. V. 84, pp. 377-393

72. Hastie, J., 1979; uht. no Tronsmo, Hjeljord, 1998

73. Hobot, J.A., Gull, K. The identification of a self-inhibitor from Syncephalastrum racemosum and its effect upon sporangiospore germination // Antonie van Leeuwenhoek G. Microbiol. And Serol. 1980. V. 46, pp. 435-441

74. Hollomon, D.W. RNA synthesis during fungal spore germination // J. Gen. Microbiol. 1970. V. 62, pp. 75-87

75. Kapat, A., Zimand, G., Elad, Y. // Physiol, and Mol. Plant. Pathol. 1998. V. 52, pp. 127-137

76. Kollmann, A., Touton, I., Brault, A., Alvinerie, M., Galtier, P., Mougin, C. Effect of the endectocide ivermectin on filamentous fungi // Environ. Chem. Lett. 2004. V.l, pp/215-218

77. Kredics, L., Anthal, Z., Manczinger, L. Influence of water potential on growth, enzyme secretion and iv vitro enzyme activities of Trichoderma harzianum at different temperatures // Currient Microbiol. 2000. V. 40, pp. 310-314

78. Lamondia, J.A., Douglas, S.M. Sensitivity of Botrytis cinerea from Connecticut greenhouses to benzimidazole and dicarboximide fungicides //Plant. Dis. 1997. V.81, pp. 729-732

79. Langbauer, B., Richer, S. // Pflanzenschutzberichte 1996. V.56, pp. 119135

80. Lee, H.J., Brown, R.M.J. A comparative structural characterization of two cellobiohydrolases from Trichoderma reesei: a high resolution electron microscopy study // J. of Biotechnol. 1997. V. 57, pp. 127-136

81. Lingappa, B.T., Lingappa J. Effects of nutrients self-inhibiting on germination of conidia of Glomerella cingulata II J. of Microbiol. 1967.

82. Lingappa, B.T., Lingappa J. The nature of self-inhibition of germination conidia of Glomerella cingulata II J. Gen. Microbiol. 1966. V. 43, pp. 91-100

83. Lockwood, J.L. Soil fungistasis // Ann. Rew. Phytopathol 1964. V. 2, pp. 341-362

84. Logrieco, A., Moretti, A., Castella, G., Kostecki, M., Golinski, P., Ritieni, A., Chelkowski, J. Beauvericin Production by Fusarium Species // Appl. and Environ. Microbiol. 1998. V.64, pp. 3084-3088

85. Loo, M. Some required events in conidial germination of Neurospora crassa II Dev. Biol. 1976. V. 54, pp. 201-213

86. Macko, V., Stapless, R.C., Gershon H., Renwick, J.A.A. Self-inhibitor of bean rust uredospores: methyl-3,4-dimethoxycinnanate // Sciense 1970. V. 170, pp. 539-540

87. Macko, V., Stapless, R.C., Yaniv, Z., Granados, R.R. Self-inhibitor of fungal spore germination. In "The fungal spore: form and function". Weber, D.J., Hess, W.M. Edds., Wiley-Intersciense, New York 1976, pp. 73-98

88. Markovich, N.A., Kononova, G.L. Lytic Enzymes of Trichoderma and their role in plant diseases: a review // Appl. Biochem. Microbiol. 2003. V. 39, No 4, pp. 341-351

89. Martinez A., Obertello M., Pardo A., Ocampo J.A., Godeas A., Interactions between Trichoderma pseudokoningii strains and the arbuscular mycorrhizal fungi Glomus mosseae and Gigaspora rosea II Mycorrhiza 2004. V. 14, pp. 79-84

90. Meyer, W.L., Lax, A.R., Templeton, G.E., Brannon, M.J. The structure of gleosporon, a novel germination self-inhibitor from conidia of Colletotrichum gleosporidium II Tetrahsron Lett. 1983. V.24, pp. 50595062

91. Mirkes, P.E. Polysomes, ribonucleic acid, and protein synthesis during germination of Neurospora crassa conidia // J. Bacteriol. 1974. V. 62, pp. 75-87

92. Mora, A., Earle, E.D. Combination of Trichoderma harzianum endochitinase and a membrane-affecting fungicide on control of Alternaria leaf spot in transgenic broccoli plants // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001, V. 55, pp. 306-310

93. Munoz, G.A., Agosin, E., Cotoras, M., Martin, R.S., Volpe, D. Comparison of aerial and submerged spore properties for Trichoderma harzianum //FEMS Microbiol. Letters 1995. V. 125, pp. 63-70

94. Moliszewska, E., Pisarek, I., Influence of humic substances on the growfh of two phytopathogenic soil fungi // Env. Int. 1996. V. 22, pp. 579-584

95. Nakajima, H., Toratsu, Y., Fuyi, Y., Ichinoe, M., Hamasaki, T. Biosynthesis of sorokianin a phytotoxin of Bipolaris sorokiniana: evidence of mixed origin from the susquiterpene and TCA pathways // Tetrahedron Lett. 1998. V. 39, pp. 1013-1016

96. Nelson, E.B., Harman, G.E., Nash, G.T. Enhancement of Trichoderma-'mducQd Biological Control of Pythium Seed Rot and Pre-emergence Damping-off of Peas // Soil Biol. Biochem. 1988. V.20 pp.145-150

97. Nicholson, R.L., in: Colletotrichum: biology, pathology and control /Bailey, J.A., Jeger, M.J., eds/ CAB International, Wallingford 2000, pp. 186-202 (uht. no Osherov, May, 2001)

98. Nielson, K.A., Nicholson, R.L., Carver, T.L.W., Kunoh, H., Oliver, R.P. First touch: An immediate response to surface recognition in conidia of Blumeria graminis II Physiol. Plant. Pathol. 2000. V. 56, pp. 63-70

99. Obst, A., Lepschy-Von-Glessenthall, J., Beck, R. // Mitt. Biol. Bundesanst. Land- und Forwirt. Berlin-Pahlem. 1998. V. 357, pp. 85-86

100. Ortiz, A., Ortiz, S. In vitro evaluation of Trichoderma and Gliocladium antagonism against the symbiotic fungus of the teaf-cutting ant Atta cephalotes II Mycopathol. 2000. V. 150, pp.53-60

101. Osborn A., Preformed antimicrobial compounds and plant defense against fungial attack //Plant Cell 1996,V.8,pp. 1821-1831

102. Osherov, N., May, G.S. Conidial germination in Aspergillus nidulans requires RAS signalling and protein synthesis // Genetics 2000. V. 155, pp. 647-656

103. Osherov, N., May, G.S. The molecular mechanisms of conidial germination // FEMS Microbiol. Lett. 2001. V. 199, pp. 153-160

104. Papavizas, G.C. Survival of Trichoderma harzianum in Soil and in Pea and Bean Rhizospheres // Phytopathology. 1982. V.72. pp. 121-125

105. Papavizas, G.C. Trichoderma and Gliocladium: Biology, Ecology, and Potential for Biocontrol // Ann. Rev. Phytopathol. 1985. V.23. pp.2354

106. Park, D., Robinson, P.M. Isolation and bioassay of fungal morphogen // Nature 1964. V. 203, pp. 988-989

107. Patiño, B., Posado, M.L., González-Jaen, M.T., Vázquez, C. The Course of Pectin Degradation by Polygalacturonases from Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici II Microbios. 1997. V. 91, pp. 47-54

108. Paul, P.K., Sharma, P.D. Azadirachita indica leaf extract induses resistance in barley against lef stripe desease // Physiol, and Mol. Plant Pahtol. 2002. V. 61, pp. 3-13

109. Perello, A., Monaco, C., Simon, M.R., Sistema, M., Dal Bello, G. Biocontrol efficacy of Trichoderma isolates for tan spot of wheat in Argentina // Crop Protection 2003. V. 22, pp. 1099-1106

110. Plaza, G., Lukasik W., Ulfíg., K. Effect of cadmium on growth of potentially pathogenic soil fungi // Mycopathologia 1998. V. 141, pp. 93-100

111. Picco, A.M., Rodolfí, M. Pyricularia grisea and Bipolaris oryzae: a preliminary study on the occurrence of airborne spores in a rice field // Aerobiologia 2002. V. 18, pp. 163-167

112. Pollastro, S., Faretra, F., Di Canio, V., De Guido, A. Characterization and genetic analysis of Botryotinia fuckeliana (Botrytiscinerea) resistant to dichlofluanid // Eur. J. Plant Pathol. 1996. V. 102, pp. 607-613

113. Pontzen, R., Scheinpflug, H. Effects of triazole fungicides on sterol biosynthesis during spore germination of Botrytis cinerea, Venturia inaequalis and Puccinia graminis f. sp. tritici // Neth. J. PI. Path. 1989. V.95, suppl. 1, pp.151-160

114. Pratt, R.G., Enhancement of sporulation in species of Bipolaris, CurvuLaria, Drechslera, and Exserohilum by growth on cellulose-containing substrates //Mycopathol. 2006. V. 162, pp. 133-140

115. Rifai M. A. A revision of genus Trichoderma // Mycological papers. 1969. V.l 16. pp.15-56.

116. Robinson, P.M., Darrett, M.K. Identification of volatile sporostetic factors from cultures of Fusarium oxysporum // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1969. V. 52, pp. 293-299

117. Robinson, P., McKee, N., Tompson, L., Harper, D., Hamilton, J. Autoinhibition of Germination and Growgh of Geotrichum candidum II Micol. Res. 1989. V.93 pp.214-222

118. Robinson, P., Park D., Volatile inhibitors of spore germination produced by fungi // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1966. V.49, pp. 639-645

119. Robinson, P.M., Park D., Darrett, M.K. Sporestatic products of fungi II Trans. Brit. Mycol. Soc. 1968. V.51, pp. 113-124

120. Rosengaus, R.B., Lefebvre M.L., Traniello, J.F.A. Inhibition of fungal spore germination by Nasutitermes: evidence for a possible antiseptic role of soldiers defensive secretions // J. of Chem. Ecol. 2000. V. 26, No 1, pp. 21-39

121. Ruan, Y., Kotraiah, V., Straney, D.C. Flavonoids stimulate germination in Fusarium solani pathogenic on legumes in a manner sensitive to inhibitors of cAMP-dependent protein kinase // Mol. Plant-Microbe Interact. 1995. V.8, pp. 929-938

122. Saparrat, M.C.N., Martinez, M.J., Tournier, H.A., Cabello M.N., Arambarri, A.M. Production of ligninolytic enzymes by Fusarium solani strains isolated from different substrata // World J. Microb. & Biochech. 2000. V.16, pp. 799-803

123. Schmit, J.C., Brody, S. Biochemical genetics of Neurospora crassa conidial germination I I Bacteriol. Rev. 1976. V. 40, pp. 1-41

124. Shaw, B.D., Hoch, H.C. Ca regulation of Phyllosticta ampelicida pycnidiospore germination and appressorium formation // Fungal Genet. Biol. 2000. V. 31, pp. 43-53

125. Shephard, C.J., Handryk, M. Autoinhibitors of spore germination and sporulation in Peronospora tabacina Adam. // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1962. V. 45, p. 233

126. Shuxian, Li, Hartman G.L., Gray L.E. // Micologia 1998. V.90, pp. 414-421

127. Sivan, A., Elad, Y., Chet., I. Biological control effects of a new isolate of Trichoderma harzianum on Pythium aphanidermatum II Phytopathology 1984. V. 74, No. 4, p. 498-501

128. Sivanesan, A. Graminicolous Spicies of Bipolaris, Drechslera, Exserohilum and Their Teleomorphs / Wallingford, C-A-B International Micological Institute 1987

129. Smith, A.M. Ethylene as a cause of soil fungistasis // Nature 1973. V. 246, pp. 311-313

130. Smith, V.L., Wilcox, W.F., and Harman, G.E. Potential for Biological Control of Phytophtora Root and Crown Rots of Apple by

131. Trichoderma and Gliocladium spp. // Phytopathology. 1990. V.80. pp.880-884

132. Stadler, D.K., Chemotropism in Rhizopus nigricans: the staling reaction // J. Cellular Comp/ Physiol. 1952. V.39, pp. 449-474

133. Steele, S.D. Self-inhibition of artrospore germination in Geotrichum candidum II Can. J. Microbiol. 1973. V. 19, pp/ 943-947

134. Stinath, J., Bagyaray, C.J., Satyanayana, B.N. Enhanced growth and nutrition of micropropogated Ficus benjamina to Glomus mosseae with Trichoderma harzianum and Bacillus coagulans II World J. Microbiol. Biotechnol. 2003. V. 19, pp. 69-72

135. Sturz, A.V., Carter, M.R., Johnston, H.W. A review of plant disease, pathogen interactions and microbial antagonism under conservation tillage in temperate humid agriculture // Soil & Tillage Res. 1997. V.41, pp. 169-189

136. Sturz, A.V., Christie, B.R. Beneficial microbial allelopathies in the root zone: the management of soil quality and plant disease with rhizobacteria// Soil & Tillage Res. 2003. V. 72, pp. 107-123

137. Subramanian, C.V. Hyphomycetes / New Delhi Indian Council of Agricultural Research 1971

138. Takano, Y., Kikuchi, T., Kubo, Y., Hamer, J.K., Furusawa, L. // The Colletotrichum lagenarium MAP kinase gene CMK1 regulates diverse aspects of füngial pathogenesis // Mol. Plant-Microbe Interact. 2000. V. 13, pp. 374-383

139. Tantaoui, A., Ouinten, M., Geiger, J.-P., Fernandes, D. Characterization of a single clonal lineage of Fusarium oxysporum f.sp. albedinis causing bayoud disease of date palm in Morocco // Phytopathology 1996. V. 86, No. 7, pp. 787-791

140. Thibault, N., Burgat, V., Guerre, P. Les Fumonisines: Natur, Origine et Toxicité // Rev. med. vet. 1997. V.148, pp. 369-388

141. Toyota, K., Kitamura, M., Kimura, M. Suppression of Fusarium oxysporum f. sp. raphani PEG-4 in soil following colonization by other Fusarium spp. // Soil Biol. Biochem. 1995. V. 27, No 1, pp. 41-46

142. Toyota, K., Young, J.M., Ritz, K., Effects of soil matric potential and bulk density on the growth of Fusarium oxysporum f. sp. raphani // Soil Biol. Biochem. 1996. V. 28, No 9, pp. 1139-1145

143. Tong Yun-hui, Xi Jing-you, Chen Xi-jun 1999 Factors Stimulating Spore Germination of Botrytis cinerea Jangsu Agr. Res. 20: №4

144. Trinci, A.P.J., Watteker C. Self-inhibition of spore germination in Aspergillus nidulans // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1968. V. 51, pp. 594-596

145. Tronsmo, A. Biological and Integrated Controls of Botrytis cinerea on apple with Trichoderma harzianum II Biol. Control. 1991. V.l. pp.5962 (uht. no Tronsmo, Hjeljord, 1998)

146. Tronsmo, A. Effect of Fungicides and Insectecides on Growth of Botrytis cinerea, Trichoderma viride and 71 harzianum II Norwegian. J. Agric. Sci. 1989. V.3. pp.151-156 (uht. no Tronsmo, Hjeljord, 1998)

147. Tronsmo, A. Use of Trichoderma spp. In Biological Control of Necrotropic Pathogens / In N.J. Fokkema, J.v.d. Heuvel (eds.) / Microbiology of the Phyllosphere Cambrige. Cambrige University Press. 1986. pp.348-362 (uht. no Tronsmo, Hjeljord, 1998) •

148. Tronsmo, A. and Hjeljord, L.G. Biological Control with Trichoderma Species / In G.J. Boland, L.D. Kuykendall (eds.) / Plant-Microbe Interactions and Biological Control New York, Marcel Dekker, Inc. 1998, p.l 11-126

149. Tronsmo, A. and Hjeljord, L.G. Biological Control with Trichoderma Species, 1989

150. Vicedo, B., Leyva, M.O., Flors, V., Finiti, I., Amo, G., Waters, D., Real, M.D., Garcia-Augustin, P., Gonzalez-Bosch, C. Control of the phytopathogen Botrytis cinerea using adipic acid monoethyl ester // Arch. Microbiol. 2006, V. 184, pp.316-326

151. Viterbo, A., Haran, S., Friesem, D., Ramot, 0., Chet, Y. Antifungial activity of a novel endochitinase gene (chit36) from Trichoderma harzianum Rifai TM // FEMS Microbiol. Letters 2001. V. 200, pp. 169-174

152. Wadhwani, K., Stivastava, A.K. Fungi from otitis media of agricultural field workes // Mycopathol. 1984, V. 88, pp. 155-159

153. Wilson, C.L. and Pusey, P.l. Potential for Biological Control of Postharvest Plant Diseases // Plant. Dis. 1985. V.69. pp.375-378

154. Windham, M.T., Elad, Y., and Baker, R. A Mechanism for Increased Plant Growth Induced by Trichoderma spp. // Phytopathology. 1986. V.676 pp.518-521

155. Wright, J.M. The Production of Antibiotics in Soil // Ann. Appl. Biol. 1955. V.43. N2

156. Yedidia, I., Srivastva, A.K., Kapulnik, Y., Chet, I. Effect of Trichoderma harzianum on microelement concentration and increased growth of cucumber plants // Plant and Soil 2001, V/ 235, pp. 235-242