Антитела к нативной ДНК в развитии атопической бронхиальной астмы у детей школьного возраста

Курбанов, Рустем Альбертович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антитела к нативной ДНК в развитии атопической бронхиальной астмы у детей школьного возраста
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Антитела к нативной ДНК в развитии атопической бронхиальной астмы у детей школьного возраста"

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный университет им В И. Ульянова-Ленина»

На правах рукописи

Курбанов Рустем Альбертович

АНТИТЕЛА К НАТИВНОЙ ДНК В РАЗВИТИИ АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У ДЕТЕЙ ШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА

03 00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 3 МАЙ 2007

Казань - 2007

003063082

Работа выполнена в лаборатории биохимии нуклеиновых кислот Казанского государственного университета имени В И Ульянова-Ленина и в Татарском государственном гуманитарно-педагогическом университете

Научный консультант доктор биологических наук,

профессор Винтер Виктор Георгиевич!

Научный руководитель доктор биологических наук

Абрамова Зинаида Ивановна

Официальные оппоненты доктор ветеринарных наук, профессор,

Хазипов Нариман Залилович (заведующий кафедрой биохимии, Казанская государственная Академия ветеринарной медицины имени Н Э Баумана

доктор медицинских наук Мустафин Ильшат Ганиевич (заведующий кафедрой биохимии, Казанский государственный медицинский университет, г Казань)

Ведущая организация- ГОУ ВПО Ижевская государственная

медицинская академия (г Ижевск)

Защита состоится 17 мая 2007 года в « 13°° » часов на заседании диссертационного совета Д212 081 08 при Казанском государственном университете по адресу. 420008, г Казань, ул Кремлевская, 18, главное здание, ауд 209

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке имени Н И Лобачевского Казанского государственного университета

Автореферат разослан " " апреля 2007 г

Ученый секретарь диссертационного Совета,^-? /7

доктор биологических наук

Абрамова 3 И

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

В последнее время отмечается повсеместный рост заболеваемости бронхиальной астмой (БА), в том числе среди детей По социально-экономическому ущербу, влиянию на качество жизни пациентов она вышла на одно из первых мест среди болезней человека У детей отмечается более ранняя манифестация и утяжеление течения БА, рост инвалидизирующих ее форм (Балаболкин,2003)

Несмотря на большое число исследований, посвященных различным аспектам патогенеза БА, многие вопросы развития этого тяжелого заболевания остаются еще малоизученными

Работами последних лет показана сложность иммунологических нарушений при БА, которые не ограничиваются лишь взаимодействием аллергена с антителами (AT) класса IgE (Busse and Rosenwasser, 2003) Важное значение, как оказалось, имеет аутоиммунный феномен, который проявляется при некоторых вариантах БА Более того, по данным литературы имеются предположения, что аллергия и аутоиммунитет могут иметь общие механизмы в патогенетических путях (Rottem and Shoenfeld, 2003)

Несмотря на активное развитие фундаментальных представлений об аутоиммунитете, в дифференциальной диагностике и мониторинге аутоиммунных заболеваний сохраняется ряд проблем, сдерживающих разработку стандартизованной системы диагностических и прогностических критериев оценки развития и прогрессирования заболевания Одной из таких проблем является феномен поликлональности и полиспецифичности аутоантител (ААТ), лежащий в основе современных представлений об аутоиммунитете и составляющий основу концепции этиопатогенеза аутоиммунных форм патологии (Сучков и др, 2004) Особое место среди них занимают ААТ к ДНК, присутствие которых в сыворотке крови давно используется как клинический признак аутоиммунных заболеваний Вместе с тем, наличие в организме ДНК-связывающих ААТ независимо от концентрации и фенотипа не является фактором, достаточным для запуска аутоиммунного процесса (Thomas et al, 2002)

Изучение аутоиммунного статуса весьма актуально, так как данных об аутоиммунном характере астмы относительно немного, например, практически не изучено образование и роль AT к нДНК, уровень внкДНК и ЦИК в сыворотке и их связь с тяжестью болезни

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы явилось исследование формирования аутоиммунного компонента - AT к нДНК при атопической бронхиальной астме (АБА) у детей школьного возраста

В соответствии с основной целью исследования были поставлены следующие задачи

] Определить уровень содержания АТ к нДНК в периферической крови детей с АБА

2 Провести корреляционный анализ показателей содержания АТ к нДНК в сыворотке крови детей с АБА в зависимости от степени тяжести, пола, сезона обследования и возраста

3 Определить концентрацию внеклеточной ДНК в периферической крови детей с АБА

4 Изучить корреляционную зависимость концентрации внеклеточной ДНК от степени тяжести, пола, сезона обследования, возраста и уровня АТ к нДНК в периферической крови детей с АБА

5 Исследовать наличие ДНК-гидролизующей активности среди АТ к

нДНК

6 Определить концентрацию и молекулярный размер циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови детей с АБА различной степени тяжести

Научная новизна

В работе впервые исследованы уровень АТ к нДНК в сыворотке крови детей-школьников с АБА различной степени тяжести и изучена их связь с возрастом больных, половой принадлежностью, сезоном обследования и степенью тяжести заболевания Впервые установлена прямая корреляция между уровнем содержания АТ к нДНК в сыворотке детей с АБА и степенью тяжести заболевания

Во всех исследованных образцах сыворотки крови детей с АБА обнаружена внкДНК, концентрация которой коррелирует с уровнем АТ к нДНК

В сыворотках крови детей со средней и тяжелой персистирующей астмой выявлена ДНК-абзимная активность, характерная для цитотоксических АТ к нДНК

В сыворотке крови детей с АБА были обнаружены патогенные ЦИК (мелко-и среднедисперсных размеров), в их составе показано присутствие АТ к нДНК Степень увеличения концентрации ЦИК и уменьшения их дисперсности коррелирует со степенью выраженности патологии

Научно-практическая значимость работы

Обнаружение АТ к нДНК в сыворотке периферической крови при АБА, анализ ДНКазной активности АТ к нДНК и изучение динамики изменения размеров ЦИК может служить дополнительным критерием при диагностике астмы и оценки эффективности проводимого лечения у детей критических возрастных периодов

Положения, выносимые на защиту.

1 Уровень АТ к нДНК и наличие абзимов в сыворотке крови детей с АБА связан с прогрессированием тяжести заболевания

2 Динамика изменения молекулярного состава (размеров) ЦИК является ведущей и может иметь диагностическую значимость при характеристике заболевания

3 АБА является парадигмой аутоиммунного заболевания

Апробация работы.

Основные результаты исследований докладывались на 10-ой Международной Пущинской школе-конференции «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006), научно-практической конференции молодых ученых Казанской государственной медицинской академии в 2006 г, VI научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов научно-образовательного центра Казанского государственного университета «Материалы и технологии XXI века» (Казань, 2006), научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2004), научно-практической конференции молодых ученых Казанского государственного педагогического университета в 2004 г, посвященной к 100-летию О Д Курмаева

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 141 страницах машинописного текста, включает 29 рисунка и 1_7 таблиц Ссостоит из введения, 4 глав, выводов и списка литературы, включающего 258 ссылок, из которых 71 на отечественные, 1_В7 на зарубежные работы

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Объект исследования В работе были использованы образцы сывороток крови детей школьного возраста (п = 193) из аллергологического отделения Детской Республиканской Клинической Больницы (ДРКБ, г Казань) с диагнозом «атоническая бронхиальная астма» Диагноз ставился на основании данных аллергологического анамнеза, положительных результатах кожного тестирования, положительного ответа в провокационных ингаляционных пробах, повышенного уровня общего ^Е в сыворотке крови Отрицательным контролем служили сыворотки 21 относительно здорового подростка, предоставленные Дубъязской участковой больницей Высокогорского района РТ В качестве положительного стандарта использована сыворотка крови больных системной красной волчанкой (СКВ) - пациентов Республиканской Клинической Больницы (РКБ, г Казань)

Кровь отбирали из локтевой вены в стерильные пробирки (в количестве 5-7 мл) и инкубировали при 37°С в течение 1-1,5 часов для формирования сгустка Образовавшийся сгусток отслаивали от стенок пробирки, после чего кровь инкубировали в течение 2-3 часов при 4°С для ретракции сгустка Сыворотку декантировали и центрифугировали на центрифуге МР\У-210 в течение 5 минут при 1500 об/мин Надосадочную жидкость отделяли и снова центрифугировали при 5000 об/мин в течение 2 0 минут для полного удаления оставшихся клеточных элементов Сыворотку со следами гемолиза отбраковывали Полученную сыворотку разливали на аликвоты и хранили в замороженном состоянии при - 20°С

Определение антител к нативной ДНК методом иммуноферментного анализа Определение уровня содержания антител к нДНК проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА), оптимизированным ранее в лаборатории Казанского государственного университета

В качестве антигена использовали лиофилизированную нДНК эритроцитов цыплят Исследуемые образцы сывороток крови инкубировали при 56°С в течение 40 мин для инактивации белков системы комплемента и диссоциации иммунных комплексов Для выявления в лунках планшета антител, связавшихся с ДНК, использовали конъюгированные с пероксидазой антитела против человека фирмы "Сорбент ЛТД" (конъюгат) ИФА проводили по следующей схеме В лунки активированных ультрафиолетовым светом планшетов (облучение в течение 2 часов на расстоянии 15 см от источника) вносили раствор ДНК (10 мкг/мл) на 0,1М фосфат - 0,05М цитратном буфере рН 5,0 (ЦБ) Планшеты с сорбируемой ДНК инкубировали в течение ночи при комнатной температуре, после чего не связавшуюся ДНК трижды отмывали фосфатно-солевым буфером с твином (ФСБТ) Далее в подготовленные планшеты вносили образцы сыворотки крови, разведенные ФСБТ в соотношении 1 100, после чего планшеты инкубировали в течение 1,5 часов при 37°С, а затем 0,5 часа при 4°С По окончании инкубации

планшеты трижды промывали ФСБТ и вносили рабочий раствор конъюгата, приготовленный на ФСБТ После внесения раствора конъюгата планшеты инкубировали и промывали, как описано выше После указанных манипуляций планшеты несколько раз ополаскивали дистиллированной водой и вносили субстратную смесь, приготовленную на ЦБ и содержащую 0,05% Н202 и 0,4мкг/мл орто-фенилендиачина Планшеты с субстратной смесью инкубировали в течение 0,5 часа в темноте при комнатной температуре, после чего измеряли уровень ответа цветной реакции ИФА на спектрофотометре "Multiskan" в единицах оптической плотности при длине волны 492 нм (ОП492)

Определение концентрации внеклеточной ДНК Определение концентрации внеклеточной ДНК проводили флуориметрическим методом с применением красителя Hoechst 33342 (бисбензимид) в качестве флуорохрома (De Barro et al, 1995) Уровень флуоресценции растворов измеряли в кварцевых кюветах объемом 0,6 мл на флуоресцентном спектрофотометре «Hitachi MPF-4» (Япония) при длине волны возбуждения 358 нм и длине волны эмиссии 458нм Чувствительность прибора настраивали таким образом, чтобы раствор, содержащий 1,25 мкг/мл ДНК и 0,24 мкг/мл Hoechst, давал максимальный ответ флуоресценции (85-90 отн ед) При определении уровня флуоресценции ДНК в растворах учитывали также и флуоресценцию раствора Hoechst (0,24 мкг/мл) в TNE-буфере

Определение ДНКазной активности антител к ДНК Для обнаружения и изучения ДНК-гидролизующей активности анти-ДНК AT сыворотки крови проводили реакцию in vitro В качестве субстрата использовали коммерческий препарат ДНК плазмиды pBR322, выделенной из штамма Е coli XL-lBlue («СибЭнзим», Россия)

В таблице 1 приведена пропись компонентов инкубационной пробы

Таблица 1. Стандартная инкубационная проба

Контроль Опыт

Плазмидная ДНК, 12 5 мкг/мл 5 мкл 5 мкл

Сыворотка крови, 1 50 — 5 мкл

Гидролизующий буфер 5 мкл —

Объем реакционной пробы 10 мкл 10 мкл

Исходный препарат плазмидной ДНК и образцы сывороток крови разводили на гидролизующем буфере 25 мМ трис-HCl, рН 7,5, 5 мМ MgCl2 6Н20, 50 мМ NaCl

Реакцию гидролиза проводили в динамике, отбирая пробы через кратные промежутки времени (2, 4 и 8 ч) при 37°С ДНК-гидролизующую способность антител к ДНК оценивали по превращению суперскрученной ДНК плазмиды pBR322 в кольцевую и линейную формы Оценку результатов гидролиза плазмидной ДНК pBR322 осуществляли методом электрофореза в агарозном геле и обработкой по программе «Scion Image»

Электрофоретический анализ плазмидной ДНК рВЯ322 в агарозном геле Проведение электрофореза осуществляли согласно рекомендациям Маниатиса идр (1984)

Электрофорез проводили в горизонтальном 0,7% агарозном геле, приготовленном на ТВЕ (трис-боратный) буфере (0,09М трис-ОН, 0,09М борная кислота, 0,002М ЭДТА, рН 8 0-8 2) Перед проведением электрофореза в исследуемые пробы добавляли 1,0 мкл 0,25% раствора красителя бромфенолового синего (БФС) на 50%-ном глицерине В лунки геля осторожно вносили весь объем образцов (10 мкл), устанавливали напряжение 3 В/см За ходом электрофореза следили по движению красителя Через 4 часа напряжение отключали Гель окрашивали путем вымачивания его в буфере ТВЕ, содержащем 1 мкг/мл бромистого этидия в течение 15 минут

Для оценки результатов гель фотографировали в проходящем УФ-свете, используя оранжевый светофильтр

Определение содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом преципитации в полиэтиленгликоле (ПЭГ") Содержание ЦИК в сыворотке крови определяли по методу Наэкоуа и др (1978) и Гриневич (Гриневич и Алферов, 1981) Метод основан на селективной преципитации комплексов антиген-антитело в 4,17% ПЭГ с молекулярной массой 6000, с последующим фотометрическим определением плотности преципитата

Для проведения реакции готовили два раствора Раствор 1 - это 0,1 М боратный буфер рН = 8,4 (3,41 г борной кислоты, 4,275 г буры растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1 л) Раствор 2 готовили путем растворения 10 г реактива ПЭГ-6000 в 240 мл раствора 1 В пробирку вносили 0,3 мл сыворотки, добавили 0,6 мл раствора 1, тщательно перемешивали и переносили по 0,3 мл в 2 пробирки В одну из них приливали 2,7 мл раствора 1 (контроль), в другую - 2,7 мл раствора 2 (опыт) Содержимое пробирок перемешивали и оставляли на 60 мин при комнатной температуре Затем определяли оптическую плотность образцов на СФ-46 в кюветах размером 1 х 1 см при 450 нм Высчитывали разность показателей ОП, результат выражали в единицах оптической плотности

Выделение ЦИК методом преципитации в ПЭГ За основу получения ЦИК из сывороток крови детей с АБА нами был взят метод ВаЬагап и др (1984) иОоМаидр (2004)

0,5 мл сыворотки инкубировали с 0,5 мл 7,5 % ПЭГ в 0 1М боратном буфере в течение 1 часа при 4°С Образовавшийся осадок промывали дважды раствором 3,5 % ПЭГа в 0,1М буфере, центрифугировали при 2500 об/мин в течение 20 мин при 4°С и впоследствии суспендировали в 0,5 мл фосфатно-солевого буфера (ФСБ) Суспензия ЦИК в ФСБ была затем растворена в 0,1М боратном буфере и использована для электрофореза в полиакриламидом геле

Электрофоретический анализ белков ЦИК в полиакриламидном геле Анализ белкового состава ЦИК исследовали методом электрофореза в полиакриламидном геле, содержащем ОБ-Ыа (ЬаешшЬ, 1970) Гели, содержащие 3% и 11% акриламида (концентрирующий и разделяющий, соответственно), готовили с использованием 30% раствора акриламида и 0 8%

раствора метиленбисакриламида Буфер концентрирующего геля содержал 0,125М трис-HCl (рН 6,8), буфер разделяющего геля - 0,375М трис-HCl (рН 8,8) Для полимеризации гелей использовали катализаторы - ТЕМЕД и персульфат аммония - каждый в количестве 0,025% К анализируемому образцу добавляли раствор для разведения проб 0,125М трис-НС1, 1% глицерин, 6% ДСН, 5% 2-меркаптоэтанол, 0,05% бромфеноловый синий (рН 6,8), в количестве 1/10 от объема вносимой пробы Электрофорез проводили в вертикальном направлении при силе тока 30 мА в электродном буфере следующего состава 0,025М трис, 0Д92М глицин, 0,1% ДСН, (рН 8,3) По окончании электрофореза гель фиксировали в течение ночи в 20% растворе этанола на 7% СН3СООН, после чего промывали и окрашивали 0,04% раствором кумасси G-250 на 35% НС104

Статистический анализ Определяли величину асимметрии и эксцесса для оценки характера распределения данных Так как распределение признака в большинстве выборок отличалось от нормального, для характеристики каждой выборки использовали показатели - медиана и перцентили (2,5, 25, 75, 97,5) Для сравнения данных применяли дисперсионный анализ, используя критерии Манна-Уитни и Крускала-Уоллиса, предусмотренные для сравнения ранжированных значений (Лакин, 1990, Акберова, 2004), с поправкой Бонферрони (Акберова, 2004) для исключения эффекта множественных сравнений Взаимосвязь между параметрами оценивали с помощью коэффициента корреляции Спирмена (Лакин, 1990) Статистическая обработка выполнена с помощью пакета программ «Excel Office 2000»

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Содержание антител к нДНК в сыворотке крови детей с атопической бронхиальной астмой Нами исследовано содержание AT к нДНК в сыворотке крови детей школьного возраста с АБА Группа пациентов, находившаяся под наблюдением, включала 193 человека в возрасте от 7 до 17 лет, среди них мальчиков - 133, девочек - 60 Контролем служили результаты 21 относительно здорового подростка (15-17 лет) (табл 2)

Таблица 2 Характеристика обследованного контингента

Характеристика группы Дети е АБА (п -193) Контроль

Мальчики 133 (68,91%) 21

Девочки 60 (31,09%)

Девочки Препубертатный период Пубертатный период 32(16,5%)

28(14,51%)

Мальчики Препубертатный период Пубертатный период 72 (37,31%)

61 (31,62%)

Сведения об уровнях содержания АТ к нДНК в сыворотке крови обследованных представлены на рис. 1.

0,7 ■

р = 0,06

$ 0,6

I, 0,5 -■ и

§ 0,4 3

* 0,3 ■■ <

со

£ 0.1

здоровые лети с АБА

Рис.1. Уровень содержания АТ к нДНК у относительно здоровых лиц и детей с АБА

Обращает на себя внимание разброс индивидуальных показателей у детей с АЬА. Среди относительных здоровых - от 0,02 до 0,22 отн.ед. Причем у 57 (29,5%) обследованных лиц уровень ААТ-^С к нДНК составил от 0,02 до 0,1 отн.ед, у 86 (44,56%) - от 0,1 до 0,2 отн ед., у 25 (12,95%) - от 0,2 до 0,3 и у 25 (12,95%) - от 0,3 до 0,7 отн.ед. в отличие от группы относительно здоровых лиц, содержание АТ к нДНК в которой составило от 0,03 до 0,1 у 12 человек (57,15%), от 0,1 до 0,2 у 6 человек (28,57%) и от 0,2 до 0,25 у 3 человек (14,28%).

Таблица 3. Уровень содержания ЛАТ к нДНК (А) и динамика изменения количества антител у детей с АБА и относительно здоровых лиц (Б): [-] — здоровые, [---------] — с АБА.

Аитн-ДНК АТ (отн. сд.) Лица(%) с

АЬА Контроль

0,02-0.1 29.5 57.15

0.11 -0,3 57,51 42,85

0,31 -0.7 12.95 -

Уровень АТ к нДНК (отм.»д.|

Как следует из таблицы 3, высокое содержание анти-ДНК АТ в крови характерно только для группы детей с АБА (и 13%) В контрольной группе почти у 60% обследованных лиц в крови обнаружен низкий уровень содержания АТ к нДНК Обращает на себя внимание динамика изменения уровня АТ у относительно здоровых лиц и больных с АБА

Далее был исследован характер распределения уровня АТ к нДНК при прогрессировании АБА, т е при легком, среднем и тяжелом течениях заболевания Из рис 2 видно, что наблюдается значимая тенденция роста уровня содержания АТ к нДНК по мере усугубления течения АБА (р<0,01)

Р < 0,01

___ 08

3 0,7 -

1 0,6 -

= 0,5 • ч:

* 04 -

< 0,3

I 02

а 0,1 >

+ + + +

здоровые легкая

средняя

Степени тяжести АЕА

Рис 2. Распределение уровней АТ к нДНК у обследованного контингента по степени тяжести АБА в общей выборки (—Ме)

По данным литературы при сравнительном анализе результатов иммунологического обследования смешанной группы детей в возрасте от 1 до 15 лет отклонения средних показателей нивелируются от подобных у здоровых доноров В то же время показано, что картина заболевания у детей с АБА может зависеть от пола больных (Васнева, 2003) Поэтому мы изучили уровень содержания АТ к нДНК у девочек и мальчиков

5 07 т

? 06 -■ а

£Г 05 --| 04 -■

* 03 Й 02 £01 +

о £

р-0,57

Пол подростка

Рнс.З. Уровень содержания АТ к нДНК у детей с АБА

Для более полной характеристики распределения выборки индивидуальных показателей уровня содержания АТ к нДНК у подростков разного пола использовали Ме, 2,5-й, 25-й, 75-й и 97,5-й перцентипи (перг/) (95%-ный доверительный интервал), между которыми расположено 95% значений уровня содержания АТ к нДНК (рис 3)

Достоверной разницы в уровне содержания АТ к нДНК в сыворотке у девочек (Ме = 0,14 отн ед , 2,5-й перц = 0,04 отн ед , 25-й перц = 0,10 отн ед , 75-й перц = 0,21 отн ед , 97,5-й перц = 0,45 отн ед) и мальчиков (Ме = 0,14огн ед , 2,5-й перц = 0,05 отн ед , 25-й перц = 0,09 отн ед , 75-й перц = 0,19 отн ед , 97,5-й перц = 0,49 отн ед ) обнаружено не было (р = 0,57) (рис 3)

Поэтому изучили изменение уровня содержания АТ к нДНК у подростков разного пола в зависимости от тяжести АБА

По данным, представленным в таблице 4, видно, что различия в уровне содержания АТ к нДНК в крови становятся достоверными (р<0,05) у подростков с АБА средней и тяжелой степени

Таблица 4. Характеристика значимости результатов

Степень тяжести АБА Количество(п) Медиана (Ме) Р

6 9 с? ?

Легкая 56 22 0.12 0 10 0 30

Средняя 32 13 0 16 0 10 0.03

Тяжелая 45 25 0 14 0 20 0.05

Связано ли достоверное изменение количества АТ в сыворотке крови подростков только с прогрессированием тяжести астмы или с физиологическим состоянием детей в критические возрастные периоды7

Для этого были изучены изменения в количестве АТ к нДНК в сыворотке крови детей в препубертатный (7-11 лет у девочек и 8-12 лет у мальчиков) и пубертатный (12-16 лет у девочек и 13-17 у мальчиков) периоды (табл 5)

Таблица 5. Значимость различий в уровне антител к нДНК в сыворотке подростков

Возрастной период 3 ?

Препубертатный период (7-11 лет) п = 72 п = 32 0,019

Медиана

0,15 0.12

Пубертатный период (12-17 лет) п = 61 п = 28 0,013

Медиана

0,13 0,17

Р (пртуиертатныи пубертатный) 0 075 0,18

Сравнение результатов по количеству АТ в сыворотке детей в пре - и пубертатный периоды показало, что возрастные особенности, по-видимому, не ВЛИЯЮТ на уровень АТ К нДНК при АБА (Апрепубсртатный / пубертатный) = 0,075 у мальчиков и Р(„ри1>б^ртагнь.й / тбертатный) = 0.18 у девочек), однако различия в количестве АТ у девочек и мальчиков соответствующих возрастных периодов были достоверны = 0,019 в препубертатный период и = 0,013 в

пубертатный период

На рис 4 представлены результаты по уровню содержания АТ к нДНК в крови детей с АБА критических возрастных периодов в зависимости от степени тяжести заболевания

Препубертатный период

5 04 ■ £

£ оз • <

| 05-| 01-о

р-0 26

0 7

± 1)5

* 03

* 01

Пубертатный период

|С2-8

Рис.4. Сравнение изменения уровней АТ к нДНК в сыворотке детей с АБА в критические возрастные периоды жизни (препубертатный и пубертатный)

Результаты говорят о достоверности различий в уровнях АТ к нДНК между легким и тяжелым течением АБА Только у мальчиков препубертатного периода различия в уровнях АТ к нДНК в сыворотке были (по Ме) не достоверны

Поэтому, выявленные нами изменения уровней содержания АТ к нДНК у детей с АБА в различных возрастных группах были подвергнуты корреляционному анализу В частности, мы изучили корреляционную

зависимость между уровнем АТ в сыворотке детей с АБА не только от пола и возраста, но и сезона года и тяжести течения болезни (рис 5)

С помощью методов корреляционного анализа было показано, прямая корреляционная зависимость средней степени наиболее вероятно установлена между уровнем АТ к нДНК и тяжестью бронхиальной астмы (/>=0,0005)

Рис 5 Объединенные результаты корреляционной зависимости между уровнем АТ к нДНК и возрастом (А), полом детей с АБА (Б), сезоном течения болезни (В), степенью тяжести (Г) астмы

Таким образом, уровень анти-нДНК значимо увеличивается при прогрессировании тяжести астмы, а так как известно, что обладают способностью фиксироваться в тканях, можно предположить, что это является одним из механизмов поражения тканей-мишеней при прогрессирующем течении заболевания и развития аутоиммунного варианта АБА

Концентрация внеклеточной ДНК Использовав метод корреляционного анализа, мы проследили за изменениями концентрации внкДНК в зависимости от возраста детей с АБА, половой принадлежности лиц, времени обследования и степени тяжести АБА в общей группе детей (п = 141)

Было установлено, что концентрация внкДНК в сыворотке крови детей с АБА, по-видимому, не зависит от выше перечисленных факторов, о чем свидетельствуют данные рис 6

§30 ? 25 £ 20 I 15 | 10 си 5 I о!

а »141 г-0 07

Р3 = ЗЕ 05 р "042

» ♦ ♦ *

• ♦ ♦ ♦ » ♦ ' *

♦ « | 1 ' I ч

»««пйПШ*

5 10 15

Вп)|)аст(вщцах)

1 «О

Ь35

Щ зо-

5 го Я И"

е-ю

а 5

а= 141 -0,06

И = 0,005 | Р = 0,45 ^

ьн

Сети

легкая средкяя тяжелая Степень тяжести АБА

Рис 6. Зависимость между концентрацией внкДНК возрастом (А), полом детей с АБА (Б), сезоном течения болезни (В), степенью тяжести (Г) астмы

Однако нами была обнаружена значимая прямая корреляционная зависимость между концентрацией внкДНК и уровнем АТ к нДНК (рис 7) Обращает на себя внимание значение р (0,00006), что выражает очень высокую корреляционную связь между данными показателями

О 01 0 2 03 04 05 0 6 07 08 Уровень ДАТ к ДНК (отм ед )

Рис 7 Зависимость между концентрацией внкДНК и уровнем ААТ к иДНК

Мы проследили изменение корреляционной связи между уровнем АТ к нДНК и внкДНК у больных легким, средним и тяжелым течениями АБА (рис 8) Из рисунка 8 следует, что при легкой степени тяжести АБА корреляция между этими показателями не наблюдается (р = 0,09) При средней степени тяжести АБА между концентрацией внкДНК и уровнем АТ к нДНК появляется достоверная прямая корреляционная зависимость (р=0,02) При тяжелой степени АБА положительная корреляция между указанными показателями приобретает еще более высокую значимость (р = 0,005) Т е прослеживается тенденция роста корреляционной зависимости между концентрацией внкДНК и уровнем АТ к нДНК при прогрессировании АБА

45 -40 -

25 -

< 20 -г

ги

I 10

п-62 rs = 0 22

р = 0 09

02 0,3 уровень

О 4 0 5 0 5 аат к днк (оти ед)

а - 28 г, = 0 45

Р - 0 02

02 03 04 0,5 06 Уровень ААТ К ДНК (о? и ед >

с -s 35

Ж 30

< s 25

i 20

I 10

п = 50 г,= 040

р — 0 005

02 03 04 05 06 уровень аат к днк <01М ед )

Рис 8 Корреляционная зависимость изменения концентрации внкДНК от уровня АТ к ДНК на разных степенях тяжести АБА

Выше мы показывали, что уровень АТ к нДНК достоверно увеличивается по мере прогрессирования АБА — от легкой к тяжелой Полученные данные о высокой степени зависимости между уровнем АТ к нДНК и концентрацией внкДНК позволяют предположить ДНК-зависимый характер иммунного ответа при АБА Большая зависимость концентрации внкДНК от уровня ААТ к нДНК при тяжелой степени АБА, чем при легкой сопоставляется с более высоким уровнем АТ к нДНК при тяжелой степени АБА, чем при легкой На антиген-зависимый характер образования АТ к нДНК указывают и данные литературы (Mohan et al ,2001, Williams et al ,2001, Kubota et al, 2001, Сучков и др , 2004)

Д1 IK'-i илроличмошая ак i hbiwc i ь _А [__к нДИК при атомической

бронхиальной аоме \ детей. Впервые природные каталитически активные АТ были обнаружены в крови пациентом с бронхиальной астмой к аазоактивнейл} нейропептиду (ViP-иептплу} (Paul et al., 1989), а даем Л"Г с: ДНКазной активностью - в кропи больных СКВ и других заболеваний (Nevinsky and Buneva, 2003).

В связи с этими данными обнаруженные AT к нДНК в периферической крови детей с АБА были изучена на наличие каталитической активности.

Д! I Казной активность А"! к нДНК оценивалась по их способ нос ги превращать субстрат - суперспиральную Д1 IK pBR322 (1) - в кольцевую III ) и лилейную (III) формы (рис.9).

'. 4 s ;гг1 кия

1 4 я CJSt.THJiil

к4

2 4 8 wpiMji. ч ■ Н^С.ЬШ CltijrHt ЛЬ А

Рис.9. ДНК-гиаролизуюшая способность АТ к нДНК > детей с АБА ( г и - ) в зависимости оч степени тяжести шболевании:

Субсграт рНК 322: К1 - субстрат + сыворотка о! носитель»о -здорового подростка; К2 субстрат в трис41С1 §5мМ. рН 7.5 без активаторов; КЗ субстрат - сыворолка больного АЬА (0 и реакции). К4 субстрат без сыворотки в ги дролизирующем буфере (трие-НС! 25иМ. р}/ 7,5 /М^СЬ 5**МЛМаС1 50мМ) через 3 ч реакции.

Если посмотреть на дорожки 2-4. 6-8 и 10-12 (рис.9), видно как падает количество сунерсниральной ДНК (I форма) и нарастает количество продуктов ее расщепления, особенно, кольцевой (II форма) ДНК на протяжении 8 часов реакции.

Следует отметить, что наиболее активными оказались АТ из сыворотки крови больных со средне-тяжёлой степенью АБА. Наибольшие различия в активности АГ проявляются в первые 2ч реакции. Через 2ч фракция кольцевой

ДНК составляет уже свыше 80% У отдельных образцов уровень кольцевой ДНК достигает через 4ч 93,2% и через 8ч снижается до 91,8%, при этом количество линейной формы (III) возрастает с 3,5 до 6,5% Этот факт так же позволяет обратить внимание на характеристику средней тяжести АБА

Различия по характеру расщепления субстрата и степени активности между AT из сывороток периферической крови девочек и мальчиков показаны на рис 10

Рис. 10. Степень гидролиза ДНК плазмиды рВЯ 322 ДНК-абзимами сывороток

крови девочек и мальчиков с АБА на разных степенях тяжести (- - легкое течение,------- среднее течение,---- тяжелое течение)

Как следует из результатов рис 10 анти-ДНК AT сыворотки крови больных с АБА обладают ДНК-гидролизующей активностью По характеру гидролиза плазмидной ДНК pBR 322 следует, что эти абзимы премущественно расщепляют одноцепочечные участки, так как только через 8ч реакции появляется фракция линейной ДНК (III форма) в количестве 3 - 6,5% от суммарной фракции суперспиральной формы (I) ДНК

Существенной динамики в уровне активности в зависимости от тяжести АБА не обнаружено

Таким образом, установлены признаки аутоиммунного развития у детей с АБА средней и тяжелой степени - наличие АТ к нДНК с каталитической активностью в сыворотке периферической крови В связи с этим анализ ДНКазной активности АТ к нДНК может стать дополнительным критерием при характеристике течения астмы, ее тяжести и, возможно, оценке эффективности проводимого лечения

Содержание и белковый состав циркулирующих иммунных комплексов в крови у детей больных атопической бронхиальной астмой Нами исследовано содержание ЦИК в сыворотке крови детей школьного возраста с АБА Группа доноров, находившаяся под наблюдением, включала 173 человека в возрасте от 7 до 17 лет, среди них мальчиков - 133, девочек - 60 Контролем служили 11 относительно здоровых подростка (15-17 лет)

Результаты исследований (рис 11) свидетельствуют о том, что в крови детей с АБА наблюдается достоверное, по сравнению с контролем, повышение концентрации ЦИК (по значениям Ме 0,03 СФ-ед - у здоровых лиц и 0,06 СФ-ед - у детей с АБА)

I о 15-+

р - У 00001

»дороаы* больные АБА

Рис.11 Содержание ЦИК в крови детей с АБА и в контрольной группе

Далее мы решили исследовать содержание ЦИК в крови детей с АБА в зависимости от степени тяжести заболевания (рис 12)

0,2 0,15 0 1

0 05 -0

Степени тлжести АБА

Рис 12 Концентрации ЦИК в сыворотке крови детей больных АБА на разных степенях тяжести («—» Ме)

Изменения средних уровней ЦИК (по Мё) в сыворотке крови детей при легкой, средней и тяжелой степенях АБА не были однотипными Концентрация ЦИК в сыворотке возрастала в 1,8 раза при легком, в 1,6 - при среднем и в 2 раза при тяжелом течении АБА В работе (Рудык, Барановский, 1984) при изучении содержания ЦИК при тяжелом течении неатопической БА было показано, что если пределы колебания концентрации ЦИК у больных в 1,3-1,6 раза выше по сравнению со здоровыми, следует считать эти показания зоной риска развития аутоиммунных реакций Если концентрация их превышает эту величину, то наличие аутоиммунного компонента становится достоверным

Одной из важных характеристик ЦИК является их размер (ЫегИп, 2000) При анализе соотношения иммунных комплексов различной молекулярной массы наиболее патогенными считают ЦИК средних размеров, которые образуются при незначительном избытке антигена (Чернушенко и др, 2002) Содержание патогенных субфракций в общей популяции ЦИК оценивали методом ПВ Стручкова и соавт [1985], основанным на определении коэффициента размера ЦИК по формуле К=К2/К], где К) и К2 - концентрации ЦИК, осажденных соответственно 3% и 4% ПЭГ Для определения размеров ЦИК были приняты следующие критерии комплексы считали крупными при 1<К<1,1. средними-при 1,1<К<1,5, мелкими-при К>1,5

При определении размера ЦИК у детей с АБА было установлено, что у 85,6% детей с АБА в крови и встречаются мелкие и средние по размеру ЦИК Причем, у больных с легкой степенью преобладали мелкие комплексы (62,12%), со средней и тяжелой степенями астмы - комплексы среднего размера (59% и 51,7%, соответственно) В контрольной группе у 86% лиц встречались комплексы крупного размера, а у 14 % - ЦИК среднего размера (табл 5)

Таблица 6. Встречаемость ЦИК среди детей с АБА в зависимости от молекулярной массы (п - количество детей)

Размер ЦИК Степень тяжести АБА Контроль

Легкая (п = 66) Средняя (п = 39) Тяжелая (п =58)

Мелкие п = 41 (62,12%) п = 10 (25,64%) п = 24 (41.38%) п = 0 (0%)

Средние п= 15 (22,72%) п = 23 (59%) п = 30 (51,7%) п = 2 (14%)

Крупные п= 10(15,16%) п = 6 (15,36%) п = 4 (6,92%) | п = 12 (86%)

Определенное диагностическое значение имеет коэффициент аутоиммунизации (КА), предложенный Рудыком и Барановским (Рудык и Барановский, 1984), который определяют по формуле к А = С,тк

l[lth [ f Kin:/*/ * )

При Кд равном 1,5 - 4,0 считается доказанным участие иммунопатологических реакций в патогенезе болезни, в том числе и аутоиммунной патологии

Определение Кл при легком, среднем и тяжелом течениях астмы по значениям Ме концентраций ЦИК в сыворотке крови детей с АБА и контрольной группе показала, что коэффициент аутоиммунизации составляет в среднем 1,8, что показывает участие иммунопатологических реакций в патогенезе АБА

Итак, проведенные исследования показали, что у детей больных АБА

- отмечается повышение концентрации ЦИК,

- происходит изменение соотношения ЦИК в сторону преобладающего формирования ЦИК мелко- и среднедисперсных размеров,

-степень уменьшения дисперсности коррелирует с тяжестью астмы

Еще в ранних работах были предприняты попытки найти связь между уровнем сывороточных иммуноглобулинов и ЦИК (Вщеоп ег а1, 1977) Позднее было выявлено, что образование ЦИК зависит от АТ, принадлежащих к различным классам иммуноглобулинов (Вельбри и др , 1988, Иванов и др , 2004) При воспалительных процессах отмечали прямую корреляцию между уровнем ЦИК и ^М, при аутоиммунных заболеваниях наблюдалась положительная корреляция между уровнем ЦИК и ^О

Методом ИФА нами было показано, что у детей с АБА повышен уровень АТЛцв к нДНК С помощью методов корреляционного анализа мы выявили статистически достоверную прямую зависимость образования ЦИК от АТ к нДНК (рис 13) Как было показано выше, у больных АБА в крови преобладают патогенные мелко- и среднедисперсных размеров ЦИК Иммунные комплексы среднемолекулярной массы могут активировать систему комплемента по альтернативному пути, и тем самым способствует поддержанию воспалительного процесса в бронхолегочной системе (Чернушенко и Фещенко, 2002, Фролов и Соцкая, 2003)

Рис.13. Зависимость между уровнем ААТ к нДНК (А) и антигена-нДНК (Б) и концентрацией ЦИК в сыворотке крови детей с АБА

У больных АБА выявлено наличие в циркуляции средних, наиболее патогенных ЦИК, которые образуются при незначительном избытке антигена В норме происходит процесс постоянного укрупнения ЦИК за счет эквивалентного соотношения антигенов и антител и, соответственно, их элиминация В связи с этим следует отметить, что мы обнаружили прямую корреляционную связь между концентрацией ЦИК и уровнем АТ к нДНК и обратную - между концентрацией ЦИК и концентрацией внкДНК в крови, что

позволяет сделать предположение об отсутствии эквивалентного соотношения антигенов и антител при прогрессировании тяжести астмы

Обращает на себя внимание отсутствие корреляционной связи как между циркулирующими АТ к нДНК и ЦИК, так и между циркулирующей ДНК и ЦИК в отсутствии патологии Это дает основание предполагать, что циркулирующие иммунные комплексы и антитела к ДНК как результат развития аутоиммунных реакций играют существенную роль в патогенезе поздних осложнений астмы

ВЫВОДЫ

1 У детей с атопической бронхиальной астмой в сыворотке крови присутствуют антитела к нативной ДНК Уровень анти-ДНК ^С значимо увеличивается при прогрессировании тяжести астмы, а так как известно, что ]gG обладает способностью фиксироваться в тканях, можно предположить, что это является одним из механизмов поражения тканей-мишеней при прогрессирующем течении заболевания

2 В сыворотке крови детей с АБА концентрация внеклеточной ДНК коррелирует с уровнем АТ к нДНК, причем корреляционная зависимость возрастает в зависимости от степени выраженности патологии, что может говорить о ДНК-зависимом иммунном ответе при АБА

3 При средней и тяжелой персистирующей АБА АТ к нДНК проявляют ДНК-гидролизующую активность

4 В сыворотке крови детей с АБА -отмечается повышение концентрации ЦИК,

-происходит изменение соотношения ЦИК в сторону формирования мелко- и среднедисперсных размеров,

-степень увеличения концентрации ЦИК и уменьшения их дисперсности коррелирует с тяжестью течения АБА

5 Коэффициент аутоиммунизации (1,8) у исследуемой группы свидетельствует о наличии аутоиммунных механизмов развития АБА у детей критических возрастных периодов

Итак, концепция относительно ведущей роли иммунных процессов в патогенезе АБА имеет широкое признание, вместе с тем диагностическая и прогностическая значимость отдельных показателей иммунной системы оставалась недостаточно изученной, в частности, накопление в жидких средах организма анти-ДНК ^С, абзимов с ДНКазной активностью, внкДНК и ЦИК Полученные в данной работе результаты позволяют говорить, что они играют несомненную роль в патогенезе аутоиммунных процессов при АБА

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Аддисон, Д Изучение аутоиммунного ответа при бронхиальной астме / В А Солозобова, P.A. Курбанов, 3 И Абрамова, В Г Винтер // Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии Материалы научно-практической конференции Казань, 17-18 июня 2004 г Труды молодых ученых / Под ред Р Г Василова - М «Русская панорама», 2004 -С 4-9

2 Курбанов, P.A. Иммунная система организма Атопические и аутоиммунные заболевания Апоптоз / P.A. Курбанов, 3 И Абрамова // Рус -Деп в ВИНИТИ -№1623 -В 2005 -73 с

3 Курбанов, P.A. Уровень аутоантител к ДНК при бронхиальной астме у детей ювенильного возраста / P.A. Курбанов, 3 И Абрамова // Рус - Деп в ВИНИТИ -№1622 - В 2005 -25 с

4 Курбанов, P.A. Характеристика уровней аутоантител к нативной ДНК и внеклеточной ДНК у детей школьного возраста при бронхиальной астме // Научно-практическая конференция молодых ученых Тезисы докладов Казань, 19 апреля 2006 г / Под ред д м н , профессора А П Цибулькина - Казань, 2006 -С 17-19

5 Курбанов, P.A. Изучение гидролизующей активности антител к ДНК и ДНКаз лимфоцитов больных бронхиальной астмой / P.A. Курбанов, М М Д Нсангу // VI Научная конференция молодых ученых, аспирантов и студентов научно-образовательного центра Казанского государственного университета «Материалы и технологии XXI века» Тезисы докладов Казань, 28 апреля 2006 г - Казань Казанский государственный университет им В И Ульянова-Ленина,

2006 - С 67

6 Курбанов, P.A. Изучение уровня антител к ДНК и внеклеточной ДНК при бронхиальной астме / P.A. Курбанов, 3 И Абрамова // Биология-наука XXI века сб тез / 10-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых - Пущино, 2006 - С 26

7 Курбанов, P.A. Аутоантитела к нативной ДНК при атопической бронхиальной астме у детей /Р А Курбанов, 3 И Абрамова, В Н Цибулькина, Г М Зайнетдинова // Казанский медицинский журнал - 2007 - Т 88 - № 3 -С 224-228

8 Курбанов, P.A. Содержание внеклеточной ДНК в периферической крови у детей критического возрастного периода при атопической бронхальной астме / P.A. Курбанов, 3 И Абрамова // Ученые записки Казанского государственного университета -2007 -Т 149 -Кн 1 -С 17-25

9 Fakhrullin, R F Quartz crystal microbalance immunosensor for the detection of antibodies to double-stranded DNA / R F Fakhrullin, V G Vinter, A Zamaleeva, M Matveeva, R A Kourbanov et al // Analytical and Bioanalytical Chemistry - March,

2007 - Published online -Article DOI 10 1007/s00216-007-1230-2

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ - антиген

AT - антитело

ААГ — аутоантиген

A AT - аутоантитело

АБА - атопическая бронхиальная астма

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

внкДНК - внеклеточная дезоксирибонуклеиновая кислота

нДНК - нативная дезоксирибонуклеиновая кислота

ИК - иммунный комплекс

ИФА - иммуноферментный анализ

КАТ - каталитическое антитело

Отн ед - относительные единицы

ОП492 - оптическая плотность при длине волны 492 нм в реакции ИФА

ПЭГ - полиэтиленгликоль

СКВ - системная красная волчанка

СФ-ед - спектрофотометрические единицы

ФСБТ - фосфатно-солевой буфер с твином

ЦБ - цитратный буфер

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

VIP (Vasoactive Intestinal Peptide) - вазоаюгивный кишечный нейропептид

e-mail bio-tem@mail ru Факс +7(843)2387121

Отпечатано в ООО «Печатный двор» г Казань, VI Журналистов, 1/16, оф 207

Те7 272-74-59, 541-76-41, 541-76-51 Лицензия ПД№7-0215 от 01 И 2001 г Выдана Поволжским межрегиональным территориальным управ чение и МПТР РФ Подписано в печать 10 04 2007г Уел п л 1,5 Заказ № К-6358 Тираж 100 зкз Формат 60x841/16 Бумага офсетная Печать -ризография

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Курбанов, Рустем Альбертович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. УЧАСТИЕ НЕКОТОРЫХ ЗВЕНЬЕВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ В РАЗВИТИИ АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У ДЕТЕЙ.

1.1. Механизмы развития бронхиальной астмы у детей.

1.1.1. Иммунологические механизмы развития бронхиальной астмы у детей.

1.1.2. Аутоиммунные нарушения при бронхиальной астме.

1.2. Аутоантитела к ДНК.

1.2.1. Возможные механизмы образования ДНК-связывающих аутоантител.

1.2.2. Феномен кросс-реактивности аутоантител к ДНК.

1.2.3. Биологическая роль аутоантител к ДНК.

1.3. Циркулирующая в крови внеклеточная ДНК.

1.3.1. Обнаружение внеклеточной ДНК.

1.3.2. Происхождение внеклеточной ДНК.

1.3.3. Биологическая роль внеклеточной ДНК.

1.4. Каталитические антитела.

1.4.1. Открытие новых функций антител.

1.4.2. Причины возникновения природных аутоантител с нуклеазной активностью.

1.4.3. Возможная биологическая роль природных абзимов человека.

1.5. Циркулирующие иммунные комплексы.

1.5.1. Структура и свойства циркулирующих иммунных комплексов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антитела к нативной ДНК в развитии атопической бронхиальной астмы у детей школьного возраста"

Актуальность исследования. В последнее время отмечается повсеместный рост заболеваемости бронхиальной астмой (БА), в том числе среди детей. По социально-экономическому ущербу, влиянию на качество жизни пациентов она вышла на одно из первых мест среди болезней человека. У детей отмечается более ранняя манифестация и утяжеление течения БА, рост инвалидизирующих ее форм (Балаболкин, 2003).

Несмотря на большое число исследований, посвященных различным аспектам патогенеза БА, многие вопросы развития этого тяжелого заболевания остаются ещё малоизученными.

Работами последних лет показана сложность иммунологических нарушений при БА, которые не ограничиваются лишь взаимодействием аллергена с антителами (AT) класса IgE (Busse and Rosenwasser, 2003). Важное значение, как оказалось, имеет аутоиммунный феномен, который проявляется при некоторых вариантах БА. Более того, по данным литературы имеются предположения, что аллергия и аутоиммунитет могут иметь общие механизмы в патогенетических путях (Rottem and Shoenfeld, 2003).

Несмотря на активное развитие фундаментальных представлений об аутоиммунитете, в дифференциальной диагностике и мониторинге аутоиммунных заболеваний сохраняется ряд проблем, сдерживающих разработку стандартизованной системы диагностических и прогностических критериев оценки развития и прогрессирования заболевания. Одной из таких проблем является феномен поликлональности и полиспецифичности аутоантител (ААТ), лежащий в основе современных представлений об аутоиммунитете и составляющий основу концепции этиопатогенеза аутоиммунных форм патологии (Сучков и др., 2004). Особое место среди них занимают ААТ к ДНК, присутствие которых в сыворотке крови давно используется как клинический признак аутоиммунных заболеваний. Вместе с тем, наличие в организме ДНК-связывающих ААТ независимо от концентрации и фенотипа не является фактором, достаточным для запуска аутоиммунного процесса (Thomas et al., 2002).

Изучение аутоиммунного статуса весьма актуально, так как данных об аутоиммунном характере астмы относительно немного, например, практически не изучено образование и роль ААТ к нДНК и их связь с тяжестью болезни.

Целью настоящей работы явилось исследование формирования аутоиммунного компонента - AT к нДНК при атопической бронхиальной астме (АБА) у детей школьного возраста.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Определить уровень содержания AT к нДНК в периферической крови детей с АБА.

2. Провести корреляционный анализ показателей содержания AT к нДНК в сыворотке крови детей с АБА в зависимости от степени тяжести, пола, сезона обследования и возраста.

3. Определить концентрацию внеклеточной ДНК в периферической крови детей с АБА.

4. Изучить корреляционную зависимость концентрации внеклеточной ДНК от степени тяжести, пола, сезона обследования, возраста и уровня AT к нДНК в периферической крови детей с АБА.

5. Исследовать наличие ДНК-гидролизующей активности среди AT к нДНК

6. Определить концентрацию и молекулярный размер циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови детей с АБА различной степени тяжести.

Научная новизна. В работе впервые исследованы AT к нДНК в сыворотке крови детей школьников с АБА различной степени тяжести и показана их связь с возрастом больных, половой принадлежностью, сезоном обследования и степенью тяжести заболевания.

Во всех исследованных образцах сыворотки крови детей с АБА обнаружена внкДНК, концентрация которой коррелирует с уровнем AT к нДНК.

В сыворотках крови детей со средней и тяжёлой астмой выявлена ДНК-абзимная активность, характерная для цитотоксических AT к нДНК.

В сыворотке крови детей с АБА были обнаружены патогенные ЦИК (мелко-и среднедисперсных размеров), в их составе показано присутствие AT к нДНК. Степень увеличения концентрации ЦИК и уменьшения их дисперсности коррелирует со степенью выраженности патологии.

Практическая значимость. Обнаружение AT к нДНК в сыворотке периферической крови при АБА, анализ ДНКазной активности AT к нДНК и изучение динамики изменения размеров ЦИК может служить дополнительным критерием при диагностике астмы и оценки эффективности проводимого лечения у детей критических возрастных периодов.

Положения, выносимые на защиту

1. Уровень AT к нДНК и наличие абзимов в сыворотке крови детей с

АБА связан с прогрессированием тяжести заболевания.

2. Динамика изменения молекулярного состава (размеров) ЦИК является ведущей и может иметь диагностическую значимость при характеристике заболевания.

3. АБА является парадигмой аутоиммунного заболевания.

Апробация работы. Основные результаты исследований докладывались на 10-ой Международной Пущинской школе-конференции «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006); научно-практической конференции молодых ученых Казанской государственной медицинской академии в 2006 г.; VI научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов научно-образовательного центра Казанского государственного университета «Материалы и технологии XXI века» (Казань, 2006); научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2004); научно-практической конференции молодых ученых Казанского государственного педагогического университета в 2004г., посвященной к 100-летию О.Д. Курмаева.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Курбанов, Рустем Альбертович

112 ВЫВОДЫ

1. У детей с атопической бронхиальной астмой в сыворотке крови присутствуют антитела к нативной ДНК. Уровень анти-ДНК IgG значимо увеличивается при прогрессировании тяжести астмы.

2. В сыворотке крови детей с АБА концентрация внеклеточной ДНК коррелирует с уровнем AT к нДНК, причем корреляционная зависимость возрастает в зависимости от степени выраженности патологии.

3. При средней и тяжелой персистирующей АБА AT к нДНК проявляют ДНК-гидролизующую активность.

4. В сыворотке крови детей с АБА

-отмечается повышение концентрации ЦИК;

-происходит изменение соотношения ЦИК в сторону формирования мелко- и среднедисперсных размеров;

-степень увеличения концентрации ЦИК и уменьшения их дисперсности коррелирует с тяжестью течения АБА.

5. Коэффициент аутоиммунизации (1,83) у исследуемой группы свидетельствует о наличии аутоиммунных механизмов развития АБА у детей критических возрастных периодов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Курбанов, Рустем Альбертович, Казань

1. Акберова, Н.И. Сравнение данных. II. Непараметрические критерии значимости / Н.И. Акберова. Казань: Издательство КГУ, 2004. - 50 с.

2. Андрюкин, А.А. К оценке иммунной реактивности больных бронхиальной астмой / А.А. Андрюкин, В.Ф. Маринин, Е.Г, Настюкова, О.Н. Хозембо // Клин. мед. 1984. - Т. 62. - № 12. - С. 3740.

3. Астафьева, Н.Г. Бронхиальная астма у подростков / Н.Г. Астафьева // Аллергология. 2005. - № 2. - С.41-49.

4. Балаболкин, И.И. Бронхиальная астма у детей / И.И. Балаболкин // Intern. J. Immunorehab. 1999. -№ 11. - С. 208-213.

5. Балаболкин, И.И. Эндоназальная специфическая иммунотерапия детей с бронхиальной астмой, обусловленной бактериальной сенсибилизацией / И.И. Балаболкин, Н.В. Юхтина, В.В. Ботвиньева // Педиатрия. 1999, 15, с. 62-64.

6. Балаболкин, И.И. Атопические заболевания у детей: современная концепция патогенеза и терапия / И.И. Балаболкин // Вестн. Рос. А.М.Н. 2003. - № 8. - С. 30-34.

7. Белан, Э.Б. Th-фенотип иммунного ответа как фактор риска развития бронхиальной астмы у детей раннего возраста / Э.Б. Белан // Цитокины и воспаление. 2004. - Т. 3. - № 4. - С. 50-52

8. Богорад, А.Е. Роль генетических факторов в развитии бронхиальной астмы у детей / А.Е. Богорад // Пульмонология. 2002. - Т. 12. - № 1. -С.47-56.

9. Ю.Васнева, Ж.П. Возрастные особенности систем общего и специфического иммунитета у детей с атопической бронхиальной астмой Поволжского региона / Ж.П. Васнева // Клин. лаб. диагн. -2003. -№12. -С.44-47.

10. П.Вельбри, С.К. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов и иммуноглобулинов для характеристики патологического процесса / С.К. Вельбри, A.JI. Лиллеорг, С.Л. Линдстрем // Лаб. Дело. 1988. -№5.-С. 7-11.

11. Вершигора, А.Е. Общая иммунология: Учебное пособие / А.Е. Вершигора. Киев: Высшая школа, 1990. - 735. с.

12. П.Владимиров, В.Г. Внеклеточная ДНК крови после облучения / В.Г. Владимиров, Л.И. Тищенко, Е.А. Суркова, И.Н. Васильева // Радиационная биол. радиоэкология. 1993. - Т. 33. - Вып. 3 (6). - С. 854-860.

13. Н.Владимиров, В.Г. Внеклеточная ДНК и ее значение для современной медицины / В.Г. Владимиров, И.Н Васильева, Л.А. Шарова // Клин, медицина и патофизиология. 1998. - № 1-2. - С. 112-119.

14. Гевондян, Н.М. Авидитет антител G класса в патогенезе атопического дерматита / Н.М. Гевондян, B.C. Гевондян, И.Б. Трофимова и др. // Аллергология. 2003. - № 3. - С. 17-23.

15. Герасимов, И.Г. Оптимизация метода определения концентрации циркулирующих иммунных комплексов различной величины / И.Г. Герасимов, Е.В. Зоркова // Клиническая лабораторная диагностика. -2001,-№7.-С. 48-49.

16. Грабар, П. Аутоантитела и иммунологические теории / П. Грабар // Онтогенез,- 1975. Т.6. -№ 2. - С. 115-126.

17. Гриневич, Ю.А. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных / Ю.А. Гриневич, А.Н. Алферов // Лаб. Дело. -1981.-№ 8.-С. 493-496.

18. Дранник, Г.Н. // Клиническая иммунология и аллергология: Учебное пособие / Г.Н. Дранник. М: ООО «Медицинское информационное агенство», 2003. - 604 с.

19. Коляденко, В.Г. Роль циркулюючих 1мунних комплекав в утворенш "хибного кола" патогенезу акашхштично1 пухирчатки / В.Г. Коляденко, П.В. Федорич // Укра'шський журнал дерматолог^', венерологи, косметологи 2002. - № 1. - С. 9-12.

20. Константинова, Н.А. Иммунные комплексы и повреждение тканей / Н.А. Константинова М.: Медицина, 1996. - 166 с.

21. Крушевский, В.Д. Размеры циркулирующих иммунных комплексов у больных хроническим бронхитом при использовании различных способов лечения / В.Д. Крушевский, С.В. Гирин, Р.В. Рубцов и др. // Укр. пульмонол. журн. 1997. -№ 1. - С. 33-35.

22. Куделя, JI.M. Состояние системного и местного иммунитета у больных с поздней астмой / JI.M. Куделя, Л.Д. Сидорова, С.В. Сенников, В.А. Козлов // Пульмонология. 2003. - Т. 13. - № 5. - С. 24-31.

23. Куммер, Ф. Дифференциальная диагностика бронхиальной астмы и хронической обструктивной болезни легких / Ф. Куммер // Тер. арх. -1995.-№ 12.-С. 66-71.

24. Курбанов, А.К. Пуриновый обмен при бронхиальной астме / А.К. Курбанов // Пульмонология. 2000. - Т. 10. - № 2. - С. 13-19.

25. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. - 352с.

26. Лебедев, К.А. Иммунограмма в клинической практике / К.А. Лебедев, Понякина И.Д. М.: Наука, 1990. - 224 с.

27. Лебедева, Т.Н. Циркулирующие иммунные комплексы в диагностике аллергической реакции иммунокомплексного типа / Т.Н. Лебедева, А.В. Соболев, С.В. Минина и др. // Клин. лаб. диагностика. 2004. - № 11.-С.11-13.

28. Лыкова, Е.А. Нарушения микрофлоры кишечника и иммунитета у детей с аллергическими дерматитами и их коррекция / Е.А. Лыкова, А.О. Мурашова, В.М. Бондаренко и др. // Росс, педиатрич. жур. -2000.-№2. -С. 20-24.

29. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук. М.: Мир, 1984. -399 с.

30. Маркина, О.А. Аутоантитела у детей с хроническими воспалительными заболеваниями лёгких / О.А. Маркина, Н.Е. Ястребова, Н.П. Ванеева и др. // Жур. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 2001. - № 6. - С. 52-55.

31. Мельницкая, С.Н. Аутоиммунные механизмы в патогенезе бронхиальной астмы и хронической пневмонии / С.Н. Мельницкая, Г.Б. Федосеев, Н.М. Сосенкова, К.Н. Крякунов // Клин. мед. 1973. - Т.51-№2.-С. 21-25.

32. Милевская С.Г. Характеристика иммунных комплексов у больных псориазом / С.Г. Милевская, Г.В. Потапова // Вест, дерматол. и венерол. 1998. -№ 5. - С. 35-37.

33. Насонов, E.JI. Взаимосвязь аутоиммунной и иммунокомплексной патологии: современное состояние проблемы / E.JI. Насонов, В.В. Сура // Тер. арх. 1984. -№ 10. - С. 4-10.

34. Насонов, E.JI. Современные подходы к иммунологической диагностике аутоиммунных и иммунокомплексных болезней / E.JI. Насонов, В.В. Сура // Тер. арх. 1988. - № 6. - С. 144-150.

35. Невзорова, Т.А. Особенности ДНК-гидролизующей активности антител при системной красной волчанке / Т.А. Невзорова, Д.А Темников., В.Г. Винтер//Биохимия.-2003.-Т. 68.-№ 12.-С. 1616-1623.

36. Невзорова, Т.А. ДНК-гидролизующая активность антител к ДНК при системной красной волчанке: Дис. . канд. биол. наук: 03.00.04, защищена 24.03.05: утв. 03.06.05 / Невзорова Татьяна Александровна. -Казань, 2005.-170 с.

37. Невинский, Г. А. Природные каталитически активные антитела (абзимы) в норме и при патологии / Г.А. Невинский, Т.Т. Канышкова,

38. B.Н. Бунева//Биохимия.-2000.-Т. 65.-№ 11.-С. 1473-1487.

39. Невинский, Г.А. Каталитически активные антитела и их возможная биологическая функция / Г.А. Невинский, Т.Г. Канышкова, Д.В. Семёнов, В.Н. Бунева // Вестник Российской АМН. 2001. - № 2.1. C.38-45.

40. Паньков, В.Н. Изменение уровня внеклеточной ДНК и свободных полиаминов в крови больных хроническим миелолейкозом / В.Н. Паньков, Л.Д. Ворончихина, В.Т. Демьянова и др. // Гематол. и трансфузиол. 1988. - № 8. - С. 45-47.

41. Паттерсон, Р. Аллергические болезни. Диагностика и лечение / Р. Паттерсон, Л.К. Греммер, П.А. Гинбергер // под ред. А.Г. Чучалина. М: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2000. - 768 с

42. Плейфэр, Дж. // Наглядная иммунология. Пер. с англ. / Дж. Плейфэр. -М.: Гэотар Медицина, 1998. 96 с.

43. Подлубная, Л.С. Значение показателей нуклеинового обмена у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких / Л.С. Подлубная // Врач. дело. 1977. -№11.- С.93-94.

44. Преображенская, О.В. Структура хроматина / О.В. Преображенская, В.Т. Карпов, А.Д. Мирзабеков // Жур. всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева. 1984. - Т. 29. - № 2 - С. 171 - 175.

45. Ревматические болезни. Руководство для врачей / Под ред. В.А. Насоновой, Н.В. Бунчука. М.: Медицина, 1997. - 520 с.51 .Ройт, А. Основы иммунологии / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. М: Мир, 2000. - 592 с.

46. Рудык, Б.И. Сравнительная оценка изучения содержания иммунных комплексов при инфаркте миокарда, бронхиальной астме и ревматоидном артрите / Б.И. Рудык, П.В. Барановский // Тер. арх. -1984.-№10.-С. 17-19.

47. Сальников, К.В. Экстрахромосомная ДНК в клетках млекопитающих / К.В. Сальников //Цитология. 1990 - Т. 32 - № 11. - С. 1061 - 1071.

48. Самсыгина, Г.А. Содержание ИЛ-1а, ФНО- а и ИФН-у в сыворотке крови у детей, больных бронхиальной астмой, в приступном периоде различной степени тяжести / Г.А. Самсыгина, А.В. Лаврентьев, О.В. Зайцева // Астма. 2000. - № 1. - С. 36-44.

49. Стручков, П.В. Скрининг-тест для оценки патогенных свойств циркулирующих иммунных комплексов / П.В. Стручков, Н.А. Константинова, В.В. Лаврентьев, А.Г. Чучалин // Лаб. дело. 1985. - №7. -С.410-412.

50. Сура, В.В. Клинико-патогенетические закономерности развития болезней иммунных комплексов / В.В. Сура, Е.Л. Насонов, И.А. Борисов, Е.Б. Тимофеева // Тер. арх. 1980. - № 12. - С. 3-10.

51. Сучков, С.В. ДНК-абзимы и их каталитические свойства / С.В. Сучков, А.Г. Габибов // Вопросы биол., мед. и фармац. химии. 2001. - № 3. -С. 14-19.

52. Сучков, С.В. Молекулярные основы патогенности ДНК связывающих аутоантител. / С.В. Сучков, Т.Е. Наумова, Е.Б. Третьяк // Иммунология,- 2004. - № 2. - С. 115-119.

53. Татарченко И.П. Системная красная волчанка и инфекционный эндокардит: грани сходства и различия / И.П. Татарченко, В.Т. Комаров // Тер. арх. 2002. - Т. 74. - № 4 - С. 39-42.

54. Федосеев, Г.Б. К вопросу о некоторых этиопатогенетических механизмах развития бронхиальной астмы / Г.Б. Федосеев, Г.П. Хлопотова, М.А. Петрова, В.И. Левая // Тер. арх. 1984. - № 10. -С.111-115.

55. Фещенко, Ю.1. Хрошчш обструктивш захворювання легень / Ю.1. Фещенко // Укршнський пульмонолопчний журнал. 1997. - № 1. -С.5-9.

56. Фещенко, Ю.И. Бронхиальная астма одна из главных проблем современной медицины / Ю.И. Фещенко // Укршнський пульмонолопчний журнал. - 2000. - № 2, дополнение. - С. 13-15.

57. Фролов, В.М. Циркулирующие иммунные комплексы и фагоцитарная активность моноцитов у больных хроническим бронхитом при проведении дифференцированной иммунокоррекции / В.М. Фролов,

58. Я.А. Соцкая // Украшський пульмонолопчний журнал. 2003. - № 3. -С. 28-30.

59. Хаитов, P.M. Диснуклеоцидоз и иммунологические расстройства / P.M. Хаитов, A.M. Земсков, В.М. Земсков // Иммунология. 1996. - №3. -С. 7-10.

60. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидоро-вич. М.: Медицина 2000. - 432 с.

61. Ходарев, Н.Н. Специфичность фрагментации ДНК-плазмиды pBR322 Ca/Mg-зависимой эндонуклеазой клеточных ядер лимфоцитов человека / Н.Н. Ходарев, А.Ю. Морозов, И.А. Соколова и др. // Мол. генетика, микробиология и вирусология. -1998. № 9. - С. 26-32.

62. Хохлов, A.JI. Патология лёгких у больных системной красной волчанкой / A.J1. Хохлов, С.М. Чугунная, А.В. Аршинов и др. // Тер. арх. 2005. - № 3. - С. 28-33.

63. Шевчук, Н.А. Времяразрешенный иммунофлуоресцентный анализ на ДНК и исследование содержания ДНК в сыворотке человека / Н.А. Шевчук // Вопросы мед. химии. 2001. - Т. 47. - Вып. 4. - С. 2-5.

64. Alberdi, F. Cross-reaction of lupus anti-dsDNA antibodies with protein translation factor EF-2 / F. Alberdi, J. Dadone, A. Ryazanov et al. // Clin. Immunol. 2001. - Vol. 98. - No.2. - P. 293-300.

65. Anania, A. Immunologic aspects of allergic and non-allergic asthma / A. Anania, S. Fassio, G. Cascio // Minerva Med. 1998. - Vol. 89. - No.3. - P. 49-56.

66. Anker, P. The role of extracellular DNA in the transfer of information from T to В human lymphocytes in the course of an immune response / P. Anker, D. Jachertz, M. Stroun et al. // J. Immunogenetics. 1980. - Vol. 7. -n0.6.-P. 475-481.

67. Asghar, S.S. Therapeutic inhibition of the complement system. Y2K update / S.S. Asghar, M.C. Pasch // Front. Biosci. 2000. - Vol. 5. - N0.8. - P. 6381.

68. Babaian, R.J. Immune complexes in urine and serum of patients with bladder cancer / R.J. Babaian, D.A. Watson, J.M. Jones // J. Urol. 1984. -Vol. 131.-No.3.-P. 463-466.

69. Bakunts, G. Antigen composition of circulating immune complexes in the blood of patients with hemorrhagic strokes / G. Bakunts , A. Arakelyan, A. Boyajyan, Poghosyan A. // Westnik IAELPS. 2001. - Vol. 42. - No.l.- P. 97-99.

70. Barnes, K.C. Elements for common genetic elements in allergic disease / K.C. Barnes // J. Allergy Clin. Immunol. 2000. - Vol. 106. - P. 192-200

71. Bijl, M. Anti-CD3-induced and anti-Fas-induced apoptosis in systemic lupus erythematosus (SLE) / M. Bijl, G. Horst, P.C. Limburg, C.G. Kallenberg // Clin. Exp. Immunol.-2001.-Vol. 123-No.l.-P. 127-132.

72. Bjorksten, B. Risk factors in early childhood for the development of atopic diseases / B. Bjorksten // Allergy. 1994. - No.49. - P. 400-407.

73. Bolten, W.W. Diagnose, Therapie und Prognose der Kollagenosen am Beispiel des Lupus erythematodes / W.W Bolten, E. Waldorf-Bolten // Versicherungsmedizin. 2004. - Bd. 56. -Nu.4. - S. 163-169.

74. Boya, P. Antioxidant status and glutathione metabolism in peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis С / P. Boya, A. de la Pena, Beloqui O. et al. // J. Hepatol. 1999. - Vol. 31. - No.5. - P. 808814.

75. Bradley, J. Clinical Immunology / J. Bradley, J. McCluskey. Oxford University Press, 1997. - 588 c.

76. Branda, R.F. Immune stimulation by an antisense oligomer complementary to the rev gene of HIV-1 / R.F. Branda, A.L. Moore, L. Mathews et al. // Biochem. Pharmacol. 1993. - Vol. 45. - No. 10. - P.2037-2043.

77. Bruns, A. Nucleosomes are major T and В cells autoantigens in systemic lupus erythematosus / A. Bruns, S. Blass, G. Hausdorf et al. // Arthritis Rheum. 2000. - Vol. 43. - P. 2307-2315.

78. Busse, W.W. Mechanisms of asthma / W.W. Busse, L.J. Rosenwasser // J. Allergy Clin. Immunol. 2003. - Vol. 111. - Suppl. 3. - P. 799-804.

79. Cabral, A.R. Autoantibodies in systemic lupus erythematosus / A.R. Cabral, D. Alarcon-Segovia // Curr. Opin. Rheumatol. 1998. - Vol. 10. - No.5. -P. 409-416.

80. Cardinale, A. Evidence for proteasome dysfunction in cytotoxicity mediated by anti-Ras intracellular antibodies / A. Cardinale, I. Filesi, S. Mattei, S. Biocca // Eur. J. Biochem. 2003. - Vol. 270. - No. 16. - P. 3389-3397.

81. Cassidy, R.A. Effect of DNA target sequence on triplex formation by oligo-2'-deoxy- and 2'-0-methylribonucleotides / R.A. Cassidy, N. Puri, P.S. Miller//Nucleic Acids Res. -2003. Vol. 31. -No.14. -P. 4099-4108.

82. Cengic, M. Importance of determination of circulating immune complexes in systemic lupus erythematosus / M. Cengic, S. Rasic // Med. Arch. 2002. - Vol. 56. - No.5-6. - P. 267-270.

83. Ceppellini, R. A DNA-reacting factor in serum of a patient with lupus erythematosus diffusus / R. Ceppellini, E. Polli, F. Celada // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1957. - Vol. 96. - P. 572-574.

84. Chedevergne, F. The role of inflammation in childhood asthma / F. Chedevergne, M. Le Bourgeois, J. de Blic, P. Scheinmann // Arch. Dis. Child. 2002. - Vol. 82.Suppl. 2. - P. 116-119.

85. Chen, J.S. Possible Origin of extrachromosomal DNA from human lymphocytes following in vitro treatment by phytohemagglutinin /J.S. Chen, M.G. Chen // Annals of the New York Academy of Sciences. 2001. -Vol.945.-P. 289-291.

86. Chen, Z. Circulation DNA: biological implications for cancer metastasis and immunology / Z. Chen, A. Fadiel, F. Naftolin // Med. Hypotheses. 2005. -Vol. 65. - No.5. - P.956-961

87. Chimenti, D. Induction of anti-DNA antibodies in preautoimmune NZBxNZW F1 mice by immunization with a DNA-DNase I complex / D. Chimenti, B. Marchini, S. Manzini // J. Autoimmun. 2000. - Vol. 15. -No.l.-P. 9-13.

88. Chiu, T.W. Plasma cell-free DNA as an indicator of severity of injury in burn patients / T.W. Chiu, R. Young, L.Y. Chan et al. // Clin. Chem. Lab. Med. 2006. - Vol. 44. - No. 1. - P. 13-17.

89. Coca, A.F. On the classi-fication of the phenomena of hypersensitivity? / A.F. Coca, R.A. Cooke // J. Immunol. 1923. - Vol. 8. -P. 163-171.

90. Cochrane C.G. Molecular assembly in the contact phase of the Hageman factor system / C.G. Cochrane, J.H. Griffin // Am. J. Med. -1979.- Vol. 67. -No.4. —P. 657-664.

91. Cook, H.T. Complement deficiencies, lupus and apoptosis / H.T. Cook // Adv. Nephrol. Necker Hosp. 2001. - Vol. 31. - P. 29-41.

92. Craig, W.Y. The distribution of antinuclear antibody titers in "normal" children and adults / W.Y. Craig, T.B. Ledue, A.M. Johnson, R.F. Ritchie // J. Rheumatol. 1999. - Vol. 26. - No.4. - P. 914-919.

93. De Barro, P.J. Geographic and microgeographic genetic differentiation in two aphid species over southern England using the multilocus (GATA)4 probe / P.J. De Barro, T.N. Sherratt, G.R. Carvalho et al. // Mol. Ecol. 1995. - Vol. 4. - No3. - P. 375-382.

94. Deligezer, U. Circulating fragmented nucleosomal DNA and caspase-3 mRNA in patients with lymphoma and myeloma / U. Deligezer, N. Erten, E.E. Akisik, N. Dalay // Exp. Mol. Pathol. 2006. - Vol. 80. - No. 1. - P. 72-76.

95. Demoly, P. Le ou les genes de l'asthme allergique? / P. Demoly, J. Bousquet, Ph. Godard., F.B. Michel // La Presse Med. 1993. - Vol. 22. -P. 817-821.

96. Desai, D.D. Antigen-specific induction of antibodies against native mammalian DNA in nonautoimmune mice / D.D. Desai, M.R. Krishnan, J.T. Swindle, T.N. Marion // J. Immunol. 1993. - Vol. 151. - No.3. - P 16141626.

97. Digeon, M. Detection of circulating immune complexes in human sera by simplified assays with polyethylene glycol / M. Digeon, M. Laver, J. Riza, J.F. Bach // J. Immunol. Methods. 1977. - Vol. 16. - No.2. - P. 165183.

98. Egner, W. The use of laboratory tests in the diagnosis of SLE / W. Egner // J. Clin. Pathol. 2000. - Vol. 53. - No.6. - P. 424-432.

99. Eguchi, K. Apoptosis in autoimmune diseases / K. Eguchi // Intern. Med. 2001. - Vol. 40. - No.4. - P. 275-284.

100. Elkayam, O. Auto-antibody profiles in patients with active pulmonary tuberculosis / O. Elkayam, D. Caspi, M. Lidgi, R. Segal // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2007. - Vol. 11.- No.3. - P. 306-310.

101. Erb, K.J. The role of Th2 type CD4+ T cells and Th2 type CD8+ T cells in asthma / K.J. Erb, G. Le Gros // Immunol. Cell. Biol. 1996. -Vol.74.-No.2.-P. 206-208.

102. Escaja, N. Structures and stabilities of small DNA dumbbells with Watson-Crick and Hoogsteen base pairs / N. Escaja, I. Gomez-Pinto, M. Rico et al. // Chembiochem. 2003. - Vol. 4. - No.7. - P. 623-632.

103. Fishelson, Z. Complement and apoptosis / Z. Fishelson, G. Attali, D. Mevorach // Mol. Immunol. 2001. - Vol. 38. - No.2-3. - P. 207-219.

104. Fujimori, K. Autoantibodies in bronchial asthma / K. Fujimori, E. Suzuki, M. Arakawa // Arerugi. 1996. - Vol. 45. - No.7. - P. 655-659.

105. Gabibov, A.G. Catalytic autoantibodies in clinical autoimmunity and modern medicine / A.G. Gabibov, N.A. Ponomarenko, E.B. Tretyak et al. // Autoimmun. Rev: 2006. - Vol. 5. - No.5. - P. 324-330.

106. George, J. Beta2 glycoprotein I containing immune-complexes in lupus patients: association with thrombocytopenia and lipoprotein (a) levels / J. George, B. Gilburd, P. Langevitz // Lupus. 1999. - Vol. 8. - No.2. -P.l 16-120.

107. Giacona, M.B. Cell-free DNA in human blood plasma: length measurements in patients with pancreatic cancer and healthy controls / M.B.

108. Giacona, G.C. Ruben, K.A. Iczkowski et al. // Pancreas. 1998. -Vol. 17.-P. 89-97.

109. Gilkeson, G.S. Induction of cross-reactive anti-dsDNA antibodies in preautoimmune NZB/NZW mice by immunization with bacterial DNA / G.S. Gilkeson, A.M. Pippen, D.S. Pisetsky // J. Clin. Invest. 1995. -Vol.95.-No.3.-P. 1398-1402.

110. Gill, J.M. Diagnosis of systemic lupus erythematosus / J.M. Gill, A.M. Quisel, P.V. Rocca, D.T. Walters // Am. Fam. Physician. 2003. - Vol. 68.-P. 2179-2186.

111. Golda, R. The presence and structure of circulating immune complexes in patients with prostate tumors / R. Golda, Z. Wolski, M. Wyszomirska-Golda et al. // Med. Sci. Monit. 2004. - Vol. 10. - No.3. -P. 123-127.

112. Gramatikova, S. Pyridoxal-5-phosphate-dependent catalytic antibodies / S. Gramatikova, B. Mouratou, J. Stetefeld et al. // J. Immunol. Meth. 2002. - Vol. 269. - No. 1 -2. - P. 99-110.

113. Greidinger, E.L. Autoantibodies in the pathogenesis of mixed connective tissue disease / E.L. Greidinger, R.W. Hoffman // Rheum. Dis. Clin. North. Am. 2005. - Vol. 31.- No.3. - P. 437-450.

114. Hamilton, T.C. Ribonucleic acid in plasma from normal adults and multiple myeloma patients. / T.C. Hamilton, A.G. Smith, Ch.A. Griffin // Klin.Wachr. 1979. - Vol. 57, No.9. - P. 451-456.

115. Haskova, V. Simple method of circulating immune complex detection in human sera by polyethyleneglycol precipitation / V. Haskova, J. Kaslik, I. Riha et al. // Z. Immunitatsforsch. Immunobiol. 1978. - Vol. 154. -No.4. - P. 399-406.

116. Herrmann, M. Etiopathogenesis of systemic lupus erythematosus / M. Herrmann, R.E. Voll, J.R. Kalden // Immunol. Today. 2000. - Vol. 21. -No.9.-P. 424-426.

117. Hilz, M.J. Diabetic somatic polyneuropathy. Pathogenesis, clinical manifestations and therapeutic concepts / M.J. Hilz, H. Marthol, B. Neundorfer // Fortschr. Neurol. Psychiatr. 2000. - Bd. 68. - Nu.6. - S. 278-288.

118. Holt, P.G. Immunoprophylaxis of atopy: light at the end of the tunnel? / P.G. Holt // Immunol Today. 1994. - Vol. 15. - P. 484-489.

119. Howard G.M. Differential diagnosis of retinoblastoma. A statistical survey of 500 children. II. Factors relating to the diagnosis of retinoblastoma / G.M. Howard, Ellsworth R.M. // Am. J. Ophthalmol. 1965. - Vol. 60. -No.4.-P. 618-621.

120. Inoue, H. The role of putrescine in modulation of DNA synthesis in regenerating liver of rats pretreated with 5-azacytidine / H. Inoue, Y. Konishi, Y. Takeda, A. Cihak // J. Biochem. (Tokyo) 1981. - Vol. 89. -No.3. - P. 861-869.

121. Irishok, A. Extracellular nucleic acids as possible messengers in regulatory information transfer from immune system to non-lymphoid tissues / A. Irishok // Med. hypotheses. 1995. - Vol. 44. - No.6. - P.435-438.

122. Jenks, W.P. Catalysis in Chemistry and Enzymology / Jenks W.P. -N.Y.: McGraw-Hill, 1969. P. 288.

123. Jodo, S. CD95 (Fas) ligand-expressing vesicles display antibody-mediated, FcR-dependent enhancement of cytotoxicity / S. Jodo, A.M. Hohlbaum, S. Xiao et al. // J. Immunol. 2000. - Vol. 165. - No.10. -P.5487-5494.

124. Johnson, P.J. Plasma nucleic acids in the diagnosis and management of malignant disease / P.J. Johnson, Y.M. Lo // Clin Chem. 2002. - Vol. 48. -No.8. - P. 1186-1193.

125. Jones, C.A. Does atopic disease start in foetal life? / C.A. Jones, J.A. Holloway, J.O. Walker // Allergy. 2000. - Vol. 55. -No.l.-P. 2-10.

126. Jung, T. Mechanisms of deficient interferon-gamma production in atopic disease / T. Jung, R. Moessner, K. Dieckhoff et al. // Clin. Exp. Allergy. 1999. - Vol. 29. -No.7. - P. 912-919.

127. Kaneko, M. Allergen-specific IgGl and IgG3 through Fc gamma RII induce eosinophil degranulation / M. Kaneko, M.C. Swanson, G.J. Gleich, H. Kita//J. Clin. Invest. 1995.-Vol. 96.-No.6.-P. 2813-2821.

128. Kanyshkova, T.G. Multiple enzymic activities of human milk lactoferrin / T.G. Kanyshkova, Babina S.E., Semenov D.V. et al. // Eur. J. Biochem. 2003. - Vol. 270. -No.16. -P.3353-3361.

129. Kaplan, A.P. Chemokines and the late-phase reaction / A.P. Kaplan, P. Kuna // Allergy. 1998. - Vol. 53. - No.45. - P. 27-33.

130. Krieg, A.M. CpG DNA induces sustained IL-12 expression in vivo and resistance to Listeria monocytogenes challenge / A.M. Krieg, L. Love-Homan, A.K. Yi, J.T. Harty // J. Immunol. 1998. - Vol. 161. - No.5. -P.2428-2434.

131. Kubota, Т. Activation of autoreactive T cells that help nucleobindin-injected mice produce anti-DNA antibodies / T. Kubota, N. Watanabe, T. Kaneko et al. // Immunol. Lett. 2001. - Vol. 75. - No.2. - P. 111-115.

132. Kubota, T. Mechanisms of anti-DNA antibody production / T. Kubota // Mod. Rheumatol. 2002. - Vol. 12. - P. 300-304.

133. Kwon, M.H. Production and characterization of an anti-idiotypic single chain Fv that recognizes an anti-DNA antibody / M.H. Kwon, M.S. Lee, K.H. Kim et al. // Immunol. Invest. 2002. - Vol. 31. - No.3-4. -P.205-218.

134. Lacroix-Desmazes, S. Self-reactive antibodies (natural autoantibodies) in healthy individuals / S. Lacroix-Desmazes, S.V. Kaveri, L. Mouthon et al. // J. Immunol. Methods 1998. - Vol. 216. - No. 1-2. - P. 117-137.

135. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. 1970. - Vol. 227-P. 680-685.

136. Lafer, E.M. Z-DNA-specific antibodies in human systemic lupus erythematosus / E.M. Lafer, R.P. Valle, A. Moller et al. // J. Clin. Invest. -1983. Vol. 71. - No.2. - P. 314-321.

137. Lee Т.Н. Quantitation of Genomic DNA in Plasma and Serum Samples: Higher Concentrations of Genomic DNA Found in Serum than in Plasma / Т.Н. Lee, L. Montalvo, V. Chrebtow, M.P. Busch // Transrusion. -2001.-Vol. 41.-P. 276-282.

138. Lemieux, R. Autoantibody-induced formation of immune complexes in normal human serum / R. Lemieux, R. Bazin // Curr. Pharm. Des. -2006.-Vol. 12.-No.2.-P. 173-179.

139. Li, L. Catalytic activity of anti-thyroglobulin antibodies / L. Li, S. Paul, S. Tyutyulkova et al. // J. Immunol. 1995. - Vol. 154. - No.7.- P. 3328-3332.

140. Liang, H. Activation of human В cells by phosphorothioate oligodeoxynucleotides / H. Liang, Y. Nishioka, C.F. Reich et al. // J. Clin. Invest. 1996. - Vol. 98. - No.5. - P. 1119-1129.

141. Lidor, Y. Autoimmune antibodies in intrinsic (non-atopic) asthma / Y. Lidor, M. Topilsky, S.A. Spitzer, H. Yehoshua // Ann. Allergy. 1980. -Vol. 44.-No.5.-P. 296-298.

142. Lim, P.L. Pathogenic autoantibodies: emerging insights into tissue injury / P.L. Lim, M. Zouali // Immunol. Lett. 2006. - Vol. 103. - No. 1. -P. 17-26.

143. Mackay, I.R. Autoimmunity. Thoughts for the millennium / I.R. Mackay, J. Van de Water, M.E. Gershwin // Clin. Rev. Allergy Immunol. -2000. Vol. 18. - No.l. - P. 87-117.

144. Madaio, M.P. Cellular penetration and nuclear localization of anti-DNA antibodies: mechanisms, consequences, implication and applications / M.P. Madaio, K. Yanase // J. Autoimmun. 1998. - Vol. 11. - P. 535-538.

145. Makowski, G.S. Selective detection of autoimmune antibodies to single- and double-stranded DNA by enzyme immunoassay / G.S. Makowski, M. Ramsby // Ann. Clin. Lab. Sci. 2003. - Vol. 33 (2). - P. 142-148.

146. Mandel, P. Les acides nucleiques du plasma sanguin chez l'homme / P. Mandel, P. Metais // C. R. Acad. Sci. Paris 1948. - Vol. 142. - P. 241243.

147. Mannik M., Arend W.P., Hall A.P. Gilliland B.C. Studies on antigen-antibody complexes. I. Elimination of soluble complexes from rabbit circulation // J. Exp! Med. 1971. - Vol. 133. - No.4.- P. 713-739.

148. Marchalonis, J.J. Natural recognition repertoire and the evolutionary emergence of the combinatorial immune system / J.J. Marchalonis, S.

149. Kavery, S. Lacroix-Desmazes, M.D. Kazatchkine // FASEB J. 2002. -Vol. 16.-P. 842-848.

150. Marsh, D.G. Atopic allergy: a model for studying the genetics of immune response in man / Marsh, D.G., Bias W.B. Birth. Defects Orig. Artie. Ser. 1976. - Vol. 12. - No.6. - P. 223-237.

151. McHugh N.J. Systemic lupus erythematosus and dysregulated apoptosis-what is the evidence? / N.J. McHugh // Rheumatology (Oxford). -2002. Vol. 41.- No.3. - P. 242-245.

152. Menon, P. Antinuclear antibodies and anticytoplasmic antibodies in bronchial asthma / P. Menon, V. Menon, B.C. Hilman et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1989. - Vol. 84. - P. 937-943.

153. Mevorach D. Systemic lupus erythematosus and apoptosis: a question of balance // Clin. Rev. Allergy Immunol. 2003. - Vol. 25. - No. 1. - P. 49-60.

154. Mihal, V. Circulating immune complexes in children with bronchial asthma and recurrent diseases of the respiratory tract / V. Mihal, J. Rovensky, K. Chmelo et al. // Cesk. Pediatr. 1979. - Vol. 34. - No.4. -P. 196-197.

155. Misaki, Y. Mechanism of autoantibody production / Y. Misaki // Rinsho Byori. 2001. - Vol. 49. - No.6. - P. 566-570.

156. Miwa, T. Crry, but not CD59 and DAF, is indispensable for murine erythrocyte protection in vivo from spontaneous complement attack / T. Miwa, L. Zhou, B. Hilliard et al. // Blood. 2002. - Vol. 99. - P. 37073716.

157. Miyawaki, S. Present status and problem to measure autoantibodies-antinuclear antibodies / S. Miyawaki // Rinsho Byori. 2001. - Vol. 49. -n0.6-C. 575-579.

158. Mohan, C. Anti-subnucleosome reactivities in systemic lupus erythematosus (SLE) patients and their first-degree relatives / C. Mohan, F. Liu, C. Xie, R.C. Jr. Williams // Clin. Exp. Immunol. 2001. - Vol. 123. -No.l.-P. 119-126.

159. Мок, C.C. Pathogenesis of systemic lupus erythematosus / C.C. Мок, C.S. Lau // J. Clin. Pathol. 2003. - Vol. 56. - P. 481-490.

160. Nahm, D.H. Presence of circulating autoantibodies against bronchial epithelia cell in patients with nonatopic asthma / D.H. Nahm, H. Yim, H.J. Lee et al. // J. Korean Med. Sci. 2000. - Vol. 15. -No.6. - P. 631-634.

161. Nangaku, M. Mechanisms of immune-deposit formation and the mediation of immune renal injury / M. Nangaku, W.G. Couser // Clin. Exp. Nephrol. 2005. - Vol. 9. -No.3 - P. 183-191.

162. Nevinsky G.A., Kanyshkova T.G., Semenov D.V. et al. Secretory immunoglobulin A from healthy human mothers' milk catalyzes nucleic acid hydrolysis // Appl. Biochem. Biotechnol. 2000. - Vol. 83. - P. 115-130.

163. Nevinsky, G.A. Human catalytic RNA- and DNA-hydrolyzing antibodies / G.A. Nevinsky, V.N. Buneva // J. Immunol. Methods. 2002. -Vol. 269.-P. 235-249.

164. Nevinsky, G.A. Catalytic antibodies in healthy humans and patients with autoimmune and viral diseases / G.A. Nevinsky, V.N. Buneva // J. Cell. Mol. Med. 2003. - Vol. 7. - No.3. - P. 265-276.

165. Nezlin, R. A quantitative approach to the determination of antigen in immune complexes / R. Nezlin // J. Immunol. Methods. 2000. - Vol. 237-No.l-2.-P. 1-17.

166. O'Hehir, R.E. Direct evidence for a functional role of HLA-DRB1 and DRB3 genes products in recognition of Dermatophagoides spp (house dustmite) by helper T lymphocytes / R.E. O'Hehir, J.R. Lamb // Int. Immunol. -1990.-Vol. 2.-P. 885-892.

167. Ouarzane, M. Novel opportunities for therapeutic targeting in systemic autoimmune diseases / M. Ouarzane, Zouali M. // Methods Mol Biol. 2007. - Vol. 361. - P. 285-297.

168. Ouerghi O., Touhami A., Othmane A. et al. Investigating specific antigen/antibody binding with the atomic force microscope // Biomol. Eng. -2002.-Vol. 19.-P. 183-188.

169. Park, H.S. Role of circulating immune complex in aspirin-sensitive asthma / H.S. Park, D.H. Nahm // Korean J. Intern. Med. 1998 - Vol. 13 -No.l.-P. 51-55.

170. Pascual, M. Another function of erythrocytes: transport of circulating immune complexes / M. Pascual, J.A. Schifferli // Infiisionstherapie Und Transfusionsmedizin.- 1995.-Vol. 22.-I. 5.-P. 310-315.

171. Paul, S. Catalytic hydrolysis of vasoactive intestinal peptide by human autoantibody / S. Paul, D.J. Voile, C.M. Beach et al. // Science. 1989. -Vol. 244.-P. 1158-1162.

172. Paul S. Autoantibody catalysis: no longer hostage to Occam's razor / S. Paul // Ann. N.Y, Acad. Sci. 1998. - Vol. 865. - P. 238-246.

173. Paul S. Catalytic activity of anti-ground state antibodies, antibody subunits, and human autoantibodies / S. Paul // Appl. Biochem. Biotechnol. 1994. - Vol. 47. - No.2-3 - P. 241-255.

174. Pauling, L. Molecular architecture and biological reactions / L. Pauling // Chem. Eng. News. 1946. - Vol. 24. - P. 1375-1377.

175. Paulo, S. A. High-Resolution Imaging of Antibodies by Tapping-Mode Atomic Force Microscopy: Attractive and Repulsive Tip-Sample Interaction Regimes / S.A. Paulo, R. Garcia // Biophys. J. 2000. - Vol. 78. - P. 15991605.

176. Peat, J.K. House dust mite allergens: a major risk factor for childhood asthma in Australia / Peat J.K., Tovey E., Toelle B.G. et al. //Am. J. Resp. Crit. Care Med.-1996.-Vol. 153.-P. 141-146.

177. Peat J.K. Primary and secondary prevention of allergic asthma / J.K. Peat, B. Bjorksten // Eur. Resp. J. 1998. - Vol. 27. - P. 28-34.

178. Pisetsky, D.S. The immunologic properties of DNA / D.S. Pisetsky // J. Immunol. 1996. - Vol. 156. - No.2. - P. 421-431.

179. Pisetsky, D.S. Specificity and immunochemical properties of antibodies to bacterial DNA / D.S. Pisetsky // Methods. 1997. - Vol. 11.-P. 55-61.

180. Pisetsky, D.S. Anti-DNA and autoantibodies / D.S. Pisetsky // Curr. Opin. Rheumatol. -2000. Vol. 12. - No.5. - P. 364-368.

181. Pisetsky, D.S. Immune response to DNA in systemic lupus erythematosus / D.S. Pisetsky // Isr. Med. Assoc. J. 2001. - Vol. 3. -No. 11.-P. 850-853.

182. Poverenny, A.M. Interactions of protein (antibodies) with the deoxyribonucleic acid molecule / A.M. Poverenny, A.S. Sainko, V.G. Kreier, V.A. Nasonova // Nature. 1966. - Vol. 211. - No.55. - P. 12971298.

183. Presta, L.G. Engineering antibodies for therapy / L.G. Presta // Curr. Pharm. Biotechnol. 2002. - Vol. 3. - No.3. - P. 237-256.

184. Puccetti, A. Anti-DNA antibodies bind to DNase I / A. Puccetti, M.P. Madaio, G. Bellese, P. Migliorini // J. Exp. Med. 1995. - Vol. 181. - P. 1797-1804.

185. Putterman, С. New approaches to the renal pathogenicity of anti-DNA antibodies in systemic lupus erythematosus / C. Putterman // Autoimmun. Rev.-2004.-Vol.3.-P. 7-11.

186. Ramaswamy,. H. Purification and characterization of a high molecular weight ribonuclease from human milk / H. Ramaswamy, Ch.V.B. Swamy, M.R. Das //J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268. -No.6. - P. 4181-4187.

187. Ramsey, B.W. Consensus conference: practical applications of Pulmozyme. September 22, 1993. / B.W. Ramsey, H.L. Dorkin // Pediatr Pulmonol. 1994. - Vol. 17. - No.6. - P. 404-408.

188. Reichlin, M. Characterization of anti-dsDNA antibodies: cross-reaction with SnRNP polypeptides and cell-binding abilities / M. Reichlin, B. Hahn, E. Koren // The Immunologist. 1995. - Vol. 3. - No.3. - P. 8488.

189. Rogala, B. Allergen specific-IgG4 in circulating immune complexes in patients with inhalant allergy undergoing specific immunotherapy / B. Rogala, J. Jarzab, B. Rymarczyk, B. Tluczykont // Wiad. Lek. 2004. - Vol. 57.-No.3-4.-P. 123-130.

190. Romagnani S. Human TH1 and TH2 subsets: doubt no more / S. Romagnani // Immunol. Today. 1991. - Vol. 12. - N.8. - P. 256-257.

191. Rottem, M. Asthma as a paradigm for autoimmune disease / M. Rottem, Y. Shoenfeld // Int. Arch. Allergy Immunol. 2003. - Vol. 132. -No.3.-P.210-214.

192. Rougier, J.P. Pathogenesis of immune glomerulonephritis / J.P. Rougier,P. Ronco//Rev. Prat.-2003.-Vol. 53.-No.18.-P. 1998-2004.

193. Rubin, R.L. Anti-DNA activity of IgG F(ab)'2 from normal human serum / R.L. Rubin, R.I. Carr // J. Immunol. 1979. - Vol. 122. - P. 16041607.

194. Rougier, J.P. Pathogenesis of immune glomerulonephritis / J.P. Rougier, P. Ronco // Rev. Prat. 2003. - Vol. 53. - No.18. - P. 1998-2004.

195. Segal, R. Suppression of experimental systemic lupus erythematosus (SLE) in mice via TNF inhibition by an anti-TNFalpha monoclonal antibody and by pentoxiphylline / R. Segal, M. Dayan, H. Zinger, E. Mozes // Lupus.- 2001. Vol. 10. - No. 1. - P. 23-31.

196. Sehgal, V. Naturally occurring anti-native DNA antibodies in SLE binding Z-DNA / V. Sehgal, R. Ali // Indian J. Med. Res. 1990. - Vol.92.-P. 1604-1607.

197. Shak S. Recombinant human DNase I reduces the viscosity of cystic fibrosis sputum. / S. Shak, DJ. Capon, R. Hellmiss // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990. - Vol. 87. -No.23. -P.9188-9192.

198. Sharma S., Smith R., Al-Hameed F. Fibrothorax and severe lung restriction secondary to lupus pleuritis and its successful treatment by pleurectomy // Can. Respir. J. 2002. - Vol. 9. - No.5. - P. 335-337.

199. Sherer, Y. Autoantibody explosion in systemic lupus erythematosus: more than 100 different antibodies found in SLE patients / Y. Sherer, A. Gorstein, M.J. Fritzler, Y. Shoenfeld // Semin. Arthritis Rheum. 2004. -Vol. 34.-P. 501-537.

200. Shlomchik, M. Anti-DNA antibodies from autoimmune mice arise by clonal expansion and somatic mutation / M. Shlomchik, M. Mascelli, H.Shan et al. // J. Exp. Med. 1990. - Vol. 171. - No. 1. - P.265-292.

201. Shuaib Nasser, S.M. Inflammatory cell populations in bronchial biopsies from aspirin-sensitive asthmatic subjects / S.M, Shuaib Nasser, R. Pfister, P.E. Christie // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1996. - Vol. 153. -No.l.-P. 90-96.

202. Shuster, A.M. DNA hydrolyzing autoantibodies / A.M. Shuster, G.V. Gololobov, O.A. Kvashuk et al. // Science. 1992. - Vol. 256. - P. 665667.

203. Silva, J.M. Presence of tumor DNA in plasma of breast cancer patients: clinicopathological correlations / J.M. Silva, G. Dominguez, J.M. Garcia et al. // Cancer Res. 1999. - Vol. 59. - No.13. - P. 3251-3256.

204. Soltis, R.D. The effect of serum immunoglobulin concentration on immune complex detection by polyethylene glycol / R.D. Soltis, D.E. Hasz // J. Immunol. Methods. 1983. - Vol. 57. - No. 1-3. - P. 275-282.

205. Song, Y.W. Molecular and genetic characterization of two anti-DNA autoantibodies derived from patients with systemic lupus erythematosus / Y.W. Song, H.A. Kim, E.B. Lee et al. //Pheumatol. Int. 1998. -Vol. 17.-P. 223-228.

206. Stollar, B.D. Immunochemical approaches to gene probe assays. / B.D. Stollar, A. Rashtchian // Anal. Biochem. 1987. - Vol. 161. - No.2. -P. 387-94.

207. Stroun M. About the possible origin and mechanism of circulating DNA apoptosis and active DNA release / M.Stroun, J.Lyautey, C.Lederrey et al. //ClinicaChimica Acta.-2001.- Vol. 313.-No.1-2.-P.139-142.

208. Sun, Y. Peptide mimicking antigenic and immunogenic epitope of double-stranded DNA in systemic lupus erythematosus / Y. Sun, K.Y. Fong, M.C. Chung, Z.J. Yao // Int. Immunol. 2001. - Vol. 13. - No.2. - P. 223232.

209. Szczeklik, A. Autoimmune phenomena in bronchial asthma with special reference to aspirin intolerance / A. Szczeklik, E. Nizankowska, A.

210. Serafin // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1995 - Vol. 152. - No.6. -P.1753-1756.

211. Taback, B. Quantification of circulating DNA in the plasma and serum of cancer patients / B. Taback, D.S. Hoon, S.J. O Day // Ann. N.Y. Acad. Sci.-2004.-Vol. 1022.-P. 17-24.

212. Takahashi, M. Solubilization of antigen-antibody complexes: a new function of complement as a regulator of immune reactions / M. Takahashi, S. Takahashi, S. Hirose // Progr. Allergy. 1980. - Vol. 27. - P. 134-166.

213. Taro Shirakawa, Deichmann K.A., Kenji Izuhara et al. Atopy and asthma: genetic variants of IL-4 and IL-13 signalling / Taro Shirakawa, K.A. Deichmann, Kenji Izuhara [et al.] // Immunol. Today. 2000. - Vol. 21. -No.2.-P. 60-64.

214. Thomas, J.W. The natural autoantibody repertoire of nonobese diabetic mice is highly active / J.W. Thomas, Kendall P.L., Mitchell H.G. // J. Immunol. 2002. - Vol. 169. - No. 11. - P. 6617-6624.

215. Tirosh, A. Autoimmune diseases in asthma / A. Tirosh, D. Mandel, F.B. Mimouni et al. // Ann. Intern. Med. 2006. - Vol. 144. - No. 12. - P. 877-883.

216. Trendelenburg, M. Apoptosis and Clq: possible explanations for the pathogenesis of systemic lupus erythematosus / M. Trendelenburg, J.A. Schifferli // Z. Rheumatol. 2000. - Bd. 59. - Nu.3. - S. 172-175.

217. Viau, M. B-lymphocytes, innate immunity, and autoimmunity / M. Viau, M. Zouali // Clin. Immunol. 2005. - Vol. 114. -No.l. - P. 17-26.

218. Virchow, J.C. Jr. T cells and cytokines in bronchoalveolar lavage fluid after segmental allergen provocation in atopic asthma / J.C. Jr. Virchow, C. Walker, D. Hafher et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995. -Vol.151.-No.4.-P. 960-968.

219. Vivanco, F. The covalent interaction of C3 with IgG immune complexes / F. Vivanco, E. Munoz, L. Vidarte, C. Pastor // Mol. Immunol. -1999. Vol. 36 -No.13-14. - P. 843-852.

220. Voskuyl, A.E. Diagnostic strategy for the assessment of rheumatoid vasculitis / A.E. Voskuyl, J.M. Hazes, A.H. Zwinderman et al. // Ann. Rheum. Dis. 2003. - Vol. 62. -No.5. - P. 407-413.

221. Wahren, M. IgM and IgG subclass distribution of human anti-Ro/SSA 60 kDa autoantibodies / M. Wahren, N.R. Ringertz, I. Pettersson // Scand. J. Immunol. 1994.-Vol. 39.-No.2.-P. 179-183.

222. Weigle, W.O. Relationship of circulating antigen-antibody complexes, antigen elimination, and complement fixation in serum sickness / W.O. Weigle, F.J. Dixon Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1958. - Vol. 99. - No.l. -P. 226-231.

223. Weir, A.N. Formatting antibody fragments to mediate specific therapeutic functions / A.N. Weir, A. Nesbitt, A.P. Chapman et al. // Biochem. Soc. Trans. 2002. - Vol. 30. -No.4. - P. 512-516.

224. Wiederkehr, F. Analysis of circulating immune complexes isolated from plasma, cerebrospinal fluid and urine / F. Wiederkehr, M.R. Bueler, D.J. Vonderschmitt // Electrophoresis. 1991. - Vol. 12. - No.7-8. - P. 478486.

225. Wikinson, R.W. Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: a flow cytometry-based assay using fluorophores / R.W. Wikinson, A.E. Lee-MacAiy, D. Davies et al. // J. Immunol. Meth. 2001. - Vol. 258. - No.l-2.-P. 183-191.

226. Williams R.C. Immune Complexes in Clinical and Experimental Medicine / R.C. Williams. Harvard University Press, Cambridge, Massachusetts, 1980. -565 p.

227. Wilton, J.M. Suppression by IgA of IgG-mediated phagocytosis by human polymorphonuclear leucocytes / J.M. Wilton // Clin. Exp. Immunol. 1978. - Vol. 34. - No.3. - P. 423-428.

228. Xu, Y. Fc gamma Rs modulate cytotoxicity of anti-Fas antibodies: implications for agonistic antibody-based therapeutics / Y. Xu, A.J. Szalai, T. Zhou et al. // J. Immunol. 2003. - Vol. 171. - No.2. - P. 562-568.

229. Yanase, К. Receptor-mediated cellular entry of nuclear localizing anti-DNA antibodies via myosin 1 / K. Yanase, R.M. Smith, A. Puccetti et al. // J. Clin. Invest. 1997. - Vol. 100. - No. 1. - P. 25-31.

230. Ye, Y.M. Cytokeratin autoantibodies: useful serologic markers for toluene diisocyanate-induced asthma / Y.M. Ye, D.H. Nahm, C.W. Kim et al. // Yonsei Med. J. 2006. - Vol. 47. - No.6. - P. 773-781.

231. Yeh, T.M. Deoxyribonuclease-inhibitory antibodies in systemic lupus erythematosus / T.M. Yeh, H.C. Chang, C.C. Liang et al. // J. Biomed. Sci.-2003.-Vol. 10.-P. 544-551.

232. Young, R.P. HLA-DR and HLA-DP haplotypes and immunoglobulin E responses to common major allergens / R.P. Young, J.W. Dekker, B.P. Wordsworth et al. // Clin Exp. All. 1994. - Vol. 24. - P. 431-439.

233. Zouali, M. В cell tolerance to self in systemic autoimmunity / M. Zouali // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.). 2001. - Vol. 49. - No.5. -P. 361-365.

Информация о работе

Курбанов, Рустем Альбертович
кандидата биологических наук
Казань, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Антитела к нативной ДНК в развитии атопической бронхиальной астмы у детей школьного возраста - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы