Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Антитела к микросомальному антигену щитовидной железы у лиц, пострадавших в результате аварии на Чернобыльской АЭС

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Антитела к микросомальному антигену щитовидной железы у лиц, пострадавших в результате аварии на Чернобыльской АЭС"

«6 0

I РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК МЕДИЦИНСКИЙ РАДИОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи /

■ с\ ■ ■

ШИННАРКША Анна Петровна

АНТИТЕЛА К МШЮСШАЛЬНОМУ АНТИГЕНУ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ЛИЦ, ПОСТРАДАВШИХ В РЕЗУЛЬТАТЕ АВАРИИ НА ЧЕРНОБЫЛЬСКОЙ АЭС

03.00.01.- Радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Обнинск - 1994

Диссертационная работа выполнена в Медицинском радиологическом научном центре РАМЕ

Ч 4

Научный руководитель: доктор биологических наук профессор

А. М. Поверенный. Научный консультант: доктор медицинских наук профессор

Е. Г. Матвее нко. Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Э. П. Касаткина, доктор биологических наук Б.П.Суринов.

Ведущя организация: Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии Ш РФ.

Защита диссертации состоится " " ti.it^и^^ 1994 г. в 11 час. на заседании специализированного совета Д 001. И. 01 в Медицинском радиологическом научном, центре РАМН (249020, г. Обнинск Калужской области, ул. Королева, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Медицинского

радиологического научного центра РАМН. > •

Автореферат разослан " 1994 г.

4 Ученый секретарь специализированного совета

доктор медицинских наук & А. Куликов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Авария на Чернобыльской АЭС сопровождалась выбросом в окружающую среду больших количеств радиоактивных изотопов йода (Люцко, 1990). Поскольку йод обладает чрезвычайно высокой тропностью по отношению к щитовидной железе (ШЖ), наибольшую опасность представляло облучение этого органа ( Ильин, Архангельская, 1973; Василенко, 1987). Наиболее чувствительной к радиационному воздействию группой оказались дети и подростки, поскольку вследствие малых размеров и повышенной функциональной активности в ЩК детей формируются дозы значительно большие, чем у взрослых (Ильин и соавт. , 1988, 1991; Астахова и соавт., 1991; Махоп, 1985 ).

Одним из следствий воздействия радиоактивного йода на 1ЦЖ является инфильтрация ткани ШЖ лимфоидными клетками и появление аутоантител к тиреоидным антигенам ( Blagg, 1960; О'Gorman et al. ,1964; Einhorn et al. ,1966; McGregor et al. ,1979; Ingbar, Braverman, .1986; Kaplan et al. , 1988; Nagataki, 1989). Поэтому у людей, контактировавших с радиоактивным йодом в результате Чернобыльской аварии, можно ожидать развитие пострадиационной тиреоидной патологии, в основе которой лежат аутоиммунные реакции.

Известно, что радиационные тиреоидиты - одно из наиболее ранних проявлений воздействия радиации на ЩЖ (Kfexon et, al. , 1977). Доброкачественные узлы и тиреоидный рак развиваются значительно позже (5-40 лет) (Shore, 1980). Поэтому для ранней диагностики патологии Ш у лиц, контактировавших с радиацией в результате Чернобыльской аварии, обнаружение признаков тиреоидита является чрезвычайно важным.

Этим определяется актуальность выявления признаков аутоиммунных нарушений ШЖ у лиц, пострадавших в результате Чернобыльской аварии.

Важнешим показателем аутоиммунных тиреоидных заболеваний являются антитела к микросомальному антигену (MA) ЩЖ, обладающие цитотоксичееким действием по отношению к тиреоцитам (Amino et al. , 1976(A), id80; Hawkins et al. , 1980; Kohno et al., 1986-, Podien et al. , 199"). Высокий уровень этих антител ука-

- г -

зывает на процесс иммунологического разрушения ткани 1ЩК (Amino et al., 1980). Даже в случаях, когда не выявляются клинические признаки тиреоидита, обнаружена корреляция между наличием ан-тимикросомальных антител и лимфоидноЯ инфильтрацией ЩК (Wall, Kuroki, 1985).

Высокая радиочувствительность лимфоидной системы, с одной стороны, наличие значительных лучевых нагрузок, с другой стороны, а также длительные стрессы у лиц, пострадавших в результате аварии, могут приводить не только к серьезным нарушениям в состоянии ШД, но и значительным изменениями в системе иммунитета (Бабенко и соавт. , 1993; Конопля и соавт., 1993).

Аутоиммунный тиреоидит (АИТ), типичный органоспецифичес-кий аутоиммунный процесс . может сопровождаться системными аутоиммунными расстройствами (Holborow, I960; Hall, 1962; Druet, 1992), одним из показателей которых служит появление антител, реагирующих с ДНК (Поверенный, 1986). 3 связи с этим, специальный интерес представляло определение частоты встречаемости признаков системных аутоиммунных расстройств у пациентов с АИТ, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Целью настоящей работы явилось исследование частоты распространения антител к микросомальному антигену ШД у детей и подростков из пострадавших в результате Чернобыльской аварии районов для формирования групп риска в отношении аутоиммунных расстройств ШД , а также выявление антител к денатурированной ДНК ( являющихся показателем системных аутоиммунных процессов) у пациентов с аутоиммунными тиреоидитами, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях.

В связи с этим было необходимо решить следующие конкретные задачи:

1. Разработать методику определения антител к МА Щ1, основанную на реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), пригодную для скрининговых исследований.

2. Разработать иммуноферментный метод (ШМ) определения анти-микросомальных антител (более современный количественный метод)

3. Сравнить информативность разработанных методик с данными

коммерческих наборов и результатами ультразвукового исследования ¡¡¡Ж

4. Провести скрининг по выявлению антител к МА ПИ у детей и подростков, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях.

5. Определить уровни антител к денатурированной ДНК у пациентов с АИТ, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В результате проведенного исследования установлено, что частота обнаружения антимикросомальных антител у детей, имевших радиационную нагрузку на Щ, достоверно выше частоты встречаемости этих антител у детей, ШЖ которых не подвергалась действию радиоактивного йода. Показано, что признаки системных аутоиммунных расстройств, показателем которых служат антитела к денатурированной ДНК, достоверно чаще обнаруживаются у людей с АИТ, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях, чем у пациентов с АИТ из контрольного района.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Практическая значимость работы определяется разработкой простого, чувствительного, специфического варианта РПГА, пригодного для скрининговых исследований, а также ИФМ определения антимикросомальных антител. Полученные результаты о достоверном увеличении частоты встречаемости антимикросомальных антител у детей, имевших радиационную нагрузку на ЩЖ, а также данные об увеличении числа обследованных с повышенными уровнями этих антител в последние годы свидетельствуют о необходимости проведения тщательного диспансерного наблюдения за детьми из зон радиационного контроля.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ" НА ЗАЩИТУ:

1. Результаты разработанных иммунологических методик определения антител к МА ЩЖ адекватны результатам, полученным с помощью коммерческих тестов и данным ультразвукового исследования Ш.

2. Частота обнаружения антимикросомальных антител у-Детей и

подростков с радиационной нагрузкой на ЩЖ достоверно превышает этот показатель у лиц не контактировавших с радиоактивным йодом.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертационной работы представлены на научно - практической конференции "Ликвидация последствий загрязнения радионуклидами территории Калужской области в результате аварии лш Чернобыльской АЭС", Калуга, 1992 г.; Радиобиологическом съезде 20-25 сентября, Киев, 1993; международном семинаре "Проблемы смягчения последствий Чернобыльской катастрофы", Брянск, 1993.

Диссертационная работа апробирована на межлабораторной научной конференции экспериментального сектора МРНЦ РАМН 26 ноября 1993 г.

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на 120 страницах машинописного текста, состоит из введения, 3-х глав (обзор литературы, материал и методы исследования, результаты и обсуждение;, заключения и выводов. Работа содержит 12 рисунков и 11 таблиц. Список цитируемой литературы включает 177 источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основным материалом данного исследования служили сыворотки крови детей и подростков, проживающих в трех наиболее загрязненных радионуклидами в результате Чернобыльской аварии районах Калужской области. Сыворотки любезно предоставлены проф. Е.Г. Ыатвеенко (МРНЦ РАМН). Исследовано 12803 сыворотки крови детей и подростков из Жиздринского, Ульяновского и Хвастови-ческого районов. Исследовали также 144 сыворотки крови людей с различными тиреопатологиями, : проживавших в апреле-мае 1986 г. в пострадавшем в результате Чернобыльской аварии г. Коростене Житомирской области, любезно предоставленные В. С. Паршиным (МРНЦ РАМН). Сыворотки крови доноров и 109 пациентов с АКТ из контрольного района, были собраны в г. Боровске Калужской области. В качестве контрольных также использовали сыворотки

здоровых людей из донорского пункта МРВД РАМН. В качестве положительных стандартов использовали сыворотки сольных тиреои-дитом Хашимото из Московского эндокринологического научного центра. Исследованные сыворотки инактивировали прогреванием при БбоС в течение 30 минут.

Выделение МА. Микросомальную фракцию тиреоцитов выделяли путем дифференциального центрифугирования (Amino et al. , 1976, А) из ЩЖ больных диффузно-токсическим зобом. Для солюбилизации МА использовали озвучивание или обработку детергентами ( Amino et al. , 1976,А; Czarnocka et al. , 1985; Hirakawa et al. , 1985).

Характеристика препаратов МА. Для характеристики полученных препаратов МА использовали показатель R/Z ( Е 413/ Е 280), который в отдельных экспериментах варьировал от 0,15 до 0,20.

Электрофорез. Для сравнительного анализа препаратов МА, солюбилизированных разными способами, использовали электрофорез в полиакриламидном геле по Леммли (Laetmli,1968 ) с дитио-триэтолом. Препараты белков разделяли электрофоретически в вертикальных блоках 10 7. полиакриламидного геля , градиент сшивки 1:80-1:40, в присутствии додецилсульфата натрия используя электрофоретическое оборудование фирмы LKB (Швеция). В качестве маркеров молекулярного веса использовали стандарты фирмы "Pharmacia" ( Швеция).

йммуноблогтинг. После электрофоретического разделения МА из нефиксированного геля переносили электрофоретически на листы нитроцеллюлозы (Sehl ei her and Schul1, ФРГ) в соответствии с описанной методикой (Towbin et al., 1979), используя установку для электропереноса производства фирмы LKB (Швеция).

ИФМ определения антител к МА ИСТ. Иммуноферментное определение антимикросомальных антител осуществляли с помощью разработанного нами варианта ИФМ . В лунки с плоским дном полистироловых плат для микротит рования ( MaxiSorp, Nunc, Дания) или планшет "Медполимер", (Санкт-Петербург) предварительно облученных гамма-лучами 60-Со в дозе 3000 Гр, вносили по 100 мкл раствора МА в концентрации 10 мкг/ мл б 0.05М карбонатном буфере pH 9,5 (или.О,IM фосфатно-солевом буфере pH 7,4) ¡г инку-

- б -

бировали 18 часов при 4оС.

При определении класса иммуноглобулинов использовали анти-IgG, анти-IgM, анти-IgA человека, конъюгированные с пероксида-зой (Sevac,4exo-Словакия). Активность антител выражали в единицах оптической плотности при 492 нм. В качестве отрицательного контроля использовали пул сывороток крови доноров. Позитивными считали результаты, превышающие среднее значение плюс 2 стандартных отклонения, полученные при анализе сывороток крови здоровых людей.

Определение антимикросомальных антител в РПГА.

Для сенсибилизации использовали бараньи формалинизирован-ные эритроциты, которые, непосредственно перед совмещением с МА, обрабатывали танином. После удаления оставшегося танина к 51 суспензии эритроцитов в 0.15М фосфатном буфере с рН 6,4 добавляли МА в этом же буфере.

При анализе сывороток крови детей и подростков в первые две лунки полистироловых плат для микротитрования вносили по 100 мкл С4 капли), а в остальные ( с 3 по 12 лунку) по 50 мкл (2 капли) раствора для разведения сывороток. Затем в первые лунки добавляли по 25 мкл исследуемых сывороток с последовательным переносом из первой лунки во вторую, из второй в третью и т.д., каждый раз разводили сыворотку в 2 раза Исследуемые сыворотки вносили в первые лунки по 10 мкл и титровали по 25 мкл. После этого в каждую лунку добавляли по 1 капле сенсибилизированных эритроцитов и тщательно перемешивали содержимое осторожным встряхиванием платы. Плату накрывали крышкой и оставляли на 3 - 4 часа или на ночь при комнатной темпе* ратуре. Лэ прошествии этого времени определяли, минимальное разведение сыворотки, которое еще вызывало агглютинацию эритроцитов. Реакцию считали положительной при титре антител 1/160 и выше. Стандартизацию сенсибилизированных эритроцитов и контроль их качества в процессе работы осуществляли с помощью иммунной сыворотки. Для исключения ложноположительных реакций все сыворотки, дающие положительную реакцию, тестировали с несенсибилизированными эритроцитами.

Определение антитиреоидных антител с помощью наборов фирмы "Fuiirebio"( Япония). Коммерческие наборы, основанные на агглютинации желатиновых частиц, нагруженных МА или ткреогло-булином, использовали для отбора сывороток, содержащих антити-реоидные антитела и для стандартизации разрабатываемых иммунологических методик.

Определение антител к денатурированной ДНК (дДНК). Антитела к дДНК. определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа как описано ранее (Поверенный и соавт. , 1989). Использовали ДНК из тимуса теленка (Serva, ФРГ). ДНК денатурировали кипячением в течение 10 минут с последующим охлаждением на ледяной бане.

Вычисление стандартных ошибок средних значений выполняли по УрСаху, корреляционный анализ проводили с помощью непараметрического критерия Билкоксона (Урбах, 1964). Для оценки достоверности различий измеряемых показателей применяли критерий Стьюдента (Лакин, 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Одним из вероятных последствий повреждения ИЩ людей, проживавших в районах, пострадавших в результате Чернобыльской аЕарии, является развитие аутоиммунных тиреоидитов. Важнейший признак этого заболевания - появление в крови аутоантител к МА ШД Приступая к изучению распространения аутоиммунных расстройств ЩЖ у пострадавших в результате Чернобыльской аварии, мы должны были создать простой, недорогостоящий метод, пригодный для скрининговых исследований. Наиболее приемлемым методом для проведения скрининговых определений аутоантител является РИГА, которая обладает высокой чувствительностью и, в то же время, не требует для своего осуществления специального оборудования. Нами разработан метод определения антимикросомаяьных антител, основанный на РПГЛ. Кроме того разработан ИФМ определения антител к МА ЩЖ. Это более современный и сложный метод. Однако, с ' его помощью возможна более тонкая дискриминация уровней антител, определение их изотипического состава.

В ходе работы были определены оптимальные параметры приме-

нения РПГА и ИФМ. Найдены условия выделения МА, позволяющие создать более чувствительные варианты указанных методик. Показано, что при использовании в качестве тест-антигена микросо-мальной фракции ЩЖ, солюбилизированной дезоксихолатом натрия, чувствительность разработанных методик более высокая, чем при солюбилизации ультразвуковой обработкой.

Для оценки эффективности разработанных методик антитела к МА определяли с помощью коммерческих наборов фирмы "Fujirebio" (Япония) и с помощью разработанных ИФМ и РПГА. Коэффициент корреляции между результатами, полученными с помошью РПГА и коммерческого набора - 0,79 , с помощью ИФМ и коммерческого набора - 0,63 (р<0,001). Таким образом, имеется высокая корреляция между результатами, полученными с помощью разработанных методик и с помощью коммерческого агглютинационного теста

Так как наиболее широко, используемым методом, пригодным для оценки состояния ЩЕ является ультразвуковое исследование (УЗИ). было проведено сравнение информативности разработанных методик с результатами УЗИ ЩД при скрининге.популяции, проживавшей в районах, загрязненных радионуклидами в результате Чернобыльской аварии (табл.1).

С помощью ИФМ антимикросомальные антитела выявлены у 78 (81%) обследованных с локальными изменениями эхогенности 1ЩК и у 9 (90 %) обследованных - при диффузном снижении эхогенности ЩИ. С помощью РПГА - соответственно у 82 (85%) и 8 (80%) обследованных.: У пациентов с тиреоидитом Хашимото, диагноз которым ставился на основании заключения УЗИ ВД и цитологического исследования, антитела к МА с помощью двух методов выявлены у 92% обследованных (рис.1). Таким образом, показана высокая степень соответствия между заключением о наличии аутоиммунного процесса в 1Щ, сделанным на'основании УЗИ, и результатами анализа антимикросомальных антител с помощью ИФМ и РПГА. В ряде случаев иммунологические методики дополняют информацию, полученную с помошью УЗИ Так у 3 из 9 пациентов с гиперплазией, у 4 из 16 с узловым зобом и б из 27 с многоузловым зобом хотя бы

Табл. 1.

Антитела к МА Ш у пациентов с локальным и диффузным снижением эхогенности ЩЖ, выявляемые с помощью РЛГА и ДОМ.

Изменения при УЗИ ВД Результаты иммунологического исследования

ифм + иф^ + ифм - ти - РПГА + РПГА - РПГА + РПГА -

Локальное снижение эхогенности 73 ' 5 9 9

Диффузное снижение эхогенности 8 1 - 1

одним из методов были выявлены антимикросомальные антитела, что свидетельствует о наличии аутоиммунного компонента при указанных патологиях. Возможно, появление аутоантител предшествует развитию изменений в ШД, диагностируемых с помощью УЗИ.

С помощью разработанного варианта РЛГА с 1987 года было проведено скрининговое исследование по определению содержания антител к МА ЩЖ у детей и подростков, проживающих в трех наиболее загрязненных районах Калужской области:. Ульяновском, Хвастовическом и Жиздринском. Данные о динамике выявления лиц с повышенными титрами циркулирующих аутоантител к МА тиреоци-тов среди детей и подростков представлены на рис.2. На протяжении С лет после аварии количество их колебалось от. 4,8% до 1,2 X. Наибольшее число обследованных с повышенными уровнями антимикросомальных антител выявлено в первый год после аварии (4,8£). Причем этот, показатель достоверно отличался от значе-

1.(5 1.4

1.2 1.0

0 . 5

о.е

0.4

а.2

1 3 4 ' с с

N-51 ■Ц=18 N«27 Ы=5 Ы-11 Ы=46

£

"г&с ..г.-: Ь. Ч

■

а аоаа «

во в ■ •

__V__ - - ~ ТЬВПИ— —

'у тР" ;

Г •

1 • 2 4 5 6

II N=51 Н-16 Н=27 N=9 N-11 Ы=4В

1/73723 ■

1/15432 вио е^О

1/4608 ■ ■ Щ Щ ■

1/1152 • щачя)1 -

1/288 • ■ в» в «а вв

1/72 о в ■ в и я а ■ " вяв - в ада р*«

1/18 ■ а «а в вя а а а :::::: ; .... ав а вв а о вв оаав-

1/6 ■ * в ■ • В ::::::

Рис 1. Уровни антител к МА ЩК,- определяемые в ИФМ ( I) и РПГА (Ш в сыворотках пациентов с тиреоидитом Хашимото (1), узловым зобом (2), многоузловым зобом (3), гиперплазией (4), кистой (5) и доноров (6).

по оси ординат: I - оптическая плотность при 492нм II - титры антител ,

п=186? п=':021 л="»2? п=1Э10 п=1114 п=44е4

Рис. 2. Частота выявления антимикросомальных антител у детей при скрининговом обследовании в течение 6 лет. по оси абсцисс: п - число обследованных по оси ординат: количество (%) лиц с повышенным . титром антител

ний, регистрируемых во все последующие годы ( р(1987- 1988) <0,05; р( 1987-1989) <0,01; р( 1987-1990) <0,001; р( 1987-1991}< 0,01; р(1987-1992)<0,001). С 1987 г. наблюдалось достоверное снижение, ас 1991 г. вновь увеличение числа лиц с повышенными титрами антимикросомальных антител.

У большинства обследованных детей титры антимикросомальных антител были небольшие ( 1/160- 1/640 ) и лишь у 0,4% обследованных достаточно высокие - 1/1280 и выше. Однако учитывая, что аутоиммунные тиреоидине заболевания у детей до 10 лет встречаются крайне, редко (Маг10Ш еЬ а1. . . 1992) и антитела к МА в сыворотках детей обнаруживаются реже и в меньших титрах,

количества антител у детей может свидетельствовать о развитии в момент обнаружения аутоантител или в дальнейшем аутоиммунных расстройств ПИ. Принимая во внимание сведения о значительном увеличении риска лимфопролиферативных и миелопролиферативных заболеваний (Holm et al., 19^5; Maskovitz et al.,1992) при наличии АИТ, дети с повышенными уровнями антимикросомальных антител нуждаются в постоянном врачебном наблюдении.

Ранее в этих районах определение антимикросомальных антител не проводилось. Возможно, наблюдаемая ситуация может быть связана с особенностями проживания в данном регионе (например, наличие зобной эндемии). Благодаря имеющимся данным об индивидуальных поглощенных.дозах на Ш-детей от инкорпорированного радиойода,' полученным в ходе прямой дозиметрии в апреле-мае 1986 г. сотрудниками МРНЦ РАМН под руководством Е. Г. Матвеенко, В. Ф. Степаненко, Е. А. Испенкова, В. А. Питкевича , была оценена роль радиойода в индуцировании аутоиммунных расстройств ЩЖ детей из загрязненных районов. С этой целью был проведен анализ частоты обнаружения антител к МА у детей с радиационной нагрузкой на Щ л у детей, у которых не было зарегистрировано воздействия радиойода на ЩЖ.

Оказалось, что у 2916 обследованных не имело место облучение Щ Эта группа использована нами в качестве внутреннего контроля. Антимикросомальные антитела обнаружены у 27 детей этой группы, что составляет 0,9X обследованных (рис.3). При анализе частоты встречаемости антител к МА ШД в сыворотках крови обследованных с различной поглощенной дозой на ЩЖ наблюдалась следующая картина. Из 2824 детей с дозой до 30 сГр антитела присутствовали у 94 (3.3Z) человек. В группе с поглощенной дозой на ВД от 30 до 7.5 сГр из 2269 лиц было 63 (2,8Х) человека с повышенными титрами. От 75 до 200 сГр - 32 (2,6Х) из 1238 обследованных. Немногочисленная группа детей имела поглощенные дозы от 200 до 400 сГр ( 265 человек ) и от 400 до 500 сГр (38 человек ). В этих группах обнаружено соответственно 11 (4,2 %) и 3 (7,91) человек с циркулирующими антимикросо-

о/

/о

0.9

п

3.3

Г^

г . Ч

> 1 I 1

Г -.3

Ь'1 Г~4

/

2.8

п и

4.2

2.6

I' 1

!• i

\ 1 < ^

' -1

¡к

м А

1.

7.Э

I

¿•'Л ш

N

г—-3

г-га

Ьч2Э1в Н=22£Э Ы«123в Ь=2£5 1т=33

□ ' I

' п

Рис. 3. Частота встречаемости антимикросомальных антител у детей с различной поглощенной дозой на ЩЖ (II) ив контрольной группе (I).

по оси абсцисс: поглощенная доза, на ЩЖ (сГр) по оси ординат: число лиц (%) с повышенным титром антител л - число обследованных

мальными антителам!:. Причем, в каждой из групп с определенной дозой на ЩЖ частота встречаемости антимикросомальных антител в сыворотках была достоверно выше, чем в контрольной группе (р<0,001 - для всех сравниваемых групп, кроме группы с дозой

7 . -

- и -

ю -

123 С

ч

о оо о

ОО ОСОО ООО

540 -^И®®**1* СПГ) о

71П

^ и.'

ООО о

г = 0.357

0001; О СО О

200

300 400

500

600

Рис. 4. Взаимосвязь между логлощенной дозой на Ш и уровнями антимикросомальных антител по оси абсцисс: поглощенная доза на ШД (сГр) по оси ординат: тигры антител

от 400 до 500 сГр, для которой р<0,05). Таким образом, существует взаимосвязь между наличием радиационной нагрузки на ЩЖ и выявлением антимикросомальных антител в сыворотках крови детей. С увеличением дозы наблюдалась тенденция к увеличению количества лиц е повышенными уровнями антител, однако, достоверных различий внутри групп с -.различной радиационной нагрузкой не наблюдалось.

Особенностей в частоте встречаемости антител к МА с учетом пола и возраста детей с различной поглощенной дозой на ЩЖ и в контроле выявлено не было .

При выявлении зависимости между уровнями антимикросомаль-

о о

ных антител и поглощенной дозой на ЩЖ (рис.4) у детей и подростков из наблюдаемых районов Калужской области коэффициент корреляции составил 0,36 (р<0,01).

При сопоставлении результатов, полученных в 1992 г. в разных районах Калужской области, отличающихся по степени радиоактивного загрязнения, было выявлено достоверное (р<0,01) увеличение частоты встречаемости ¿штимикросомальных антител у обследованных из наиболее загрязненного Ульяновского района по сравнению с наименее загрязненным Жиздринским (табл. 2). Число обследованных с повышенными титрами антител составило 4,4% и 2,ЗХ соответственно. В Хвастовическом районе было выявлено 3,1 X лиц с циркулирующими антимикросомальными антителами.

Табл. 2.

Количество детей с повышенным титром антимикросомаяьных антител (%) из районов Калужской области, отличающихся по степени радиоактивного загрязнения.

Район ** средняя фактическая плотность радиоактивного загрязнения (Ки/кв. км) количество обследованных (%) с повышенными уровнями антител

Ульяновский *п=990 3,9 - 8,2 4,4

Хвастовический п=1704 2,2 - 4,7 3,1

Киздршский П-1770 1,9 - 4,а 2,3

- 16 -

*п - общее число обследованных

** - данные Калужского центра гидрометеорологии,

Роскомгидромета и института гигиены Санкт-Петербурга

Исследование изотилического состава антител к МА ЩЖ у пациентов, страдающих АИТ, из загрязненного и контрольного районов, а также у детей, проживающих в загрязненных радионуклидами районах, выявило преобладание антител ¡йй класса. Не обнаружено особенностей в спектре антигенов, выявляемых в им-муноблотте сыворотками крови данных групп обследованных.

В 1991 г. нами проведено исследование по выявлению признаков системных аутоиммунных расстройств у пациентов с АИТ, проживавших в первые месяцы после Чернобыльской аварии на территории, загрязненной радионуклидами. В качестве показателя наличия системных аутоиммунных расстройств определяли уровни антител к денатурированной ДНК (дДНК). Исследовано 99 сывороток людей, проживающих в г. Коростень Житомирской области (9 мужчин и 90 женшин в возрасте от 17 до 61 г.). Диагноз АИТ ставился на основании данных ультразвукового и цитологического исследования. В качестве контрольных исследовано 109 сывороток крови людей с АИТ, выявленных таким же образом , проживающих в г. Боровске Калужской области ( 2 мужчины и 107 женшин в возрасте от 12 до 61 г.).

Антимикросомальные антитела у пациентов из контрольного и загрязненного района были выявлены в 92% и'93Х случаев соответственно. Антитела к д ДНК (рис.5) достоверно чаще (р <:0,01) обнаруживались у лиц из загрязненного района (32,3 % из 99 обследованных) в сравнении с частотой их выявления у лиц с АИТ из контрольного района (14,6 % их 109 обследованных). Более: высокие уровни антител,, взаимодействующих с д ДНК, чаще выявлялись у лиц из загрязненного района. Так, в группу с низким уровнем антител попало 24, 2 7. сывороток крови пациентов из загрязненного и 12, 8%, - из контрольного районов , с средним уровнем - соответственно 5,1% и 1,8%, высокие уровни антител обнаружены только у пациентов из загрязненного района. Все

О/

/О +

30

80 + 40 20 +

67.7

/

24. 2

5. 1

0-0.4 0.4-0.7

3.0

>1

Е

432

О/ /О X

30 -•

80

.40 - ■

20

85.4

12.8 Р

1.8

3-0.4 0.4-0.7 Э.7-1 >1.0 р

432

□ : -

1ЙЗ 4-

Рис. 5. Уровни антител к д ДНК у пациентов с АИТ из . загрязненного (I) и' контрольного (11) районов, определяемые в ИФМ.

по оси абсцисс: оптическая плотность при'492 нм;' по оси ординат: число обследованных (7.) с негативной (-) и позитивной (+! реакцией в д ДНК тесте)

д ДНК позитивные сыворотки больных из контрольного района были позитивны и в микросомальном тесте. У пациентов из загрязненного района в 3 случаях из 32 ( 9,47.) д ДНК позитивные сыворотки не давали реакции с МА. Однако, в обоих случаях не выявлено корреляции (г- 0,21) между уровнями антител к д ДНК и МА.

Следовательно, имеется взаимосвязь между наличием органных и системных аутоиммунный реакций у пациентов, проживающих в районах, пострадавших в результате аварии. Возможно, одним из факторов развития аутоиммунных тиреоидных заболеваний у лиц из загрязненных радионуклидами территорий могут быть изменения в системе регуляции иммунного ответа под действием различных радионуклидов, а не только повреждающее действие радиойода на

т.

Полученные данные о роли радиационного фактора в появлении признаков органных и системных аутоиммунных расстройств у лиц из пострадавших в результате Чернобыльской аварии районов, подтверждают необходимость проведения постоянного диспансерного наблюдения за людьми, проживающими на этих территориях.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны иммунологические методики определения антител к МА ШЖ, основанные на реакции пассивной гемагглшинации и иммуноферментном анализе. Результаты определения антител с помощью разработанных методик согласуются с данными коммерческих тестов. „ _ .

2. Показана высокая корреляция между данными УЗИ о наличии аутоиммунного процесса в ШЖ и выявлением повышенных уровней антимикросомальных антител с помощью разработанных методик. Вариант РПГА в силу простоты и надежности может быть использован в скрининговых исследованиях для формирования групп риска в,отношении аутоиммунных расстройств ЩЖ.

3. Установлено достоверное увеличение частоты обнаружения антимикросомальных антител ,у детей с радиационной нагрузкой на ЩЖ (3,1 7.), в сравнении с частотой выявления этих антител у детей, действие радиоактивного йода на ЩЖ которых не зарегистрировано (0,9%).

4. Выявлена динамика в частоте обнаружения антител к МА ВД у детей и подростков из загрязненных радионуклидами в результате Чернобыльской аварии районов Калужской области на протяжении 6 лет после аварии. Максимальное количество обследованных с повышенными уровнями антимикросомальных антител обнаружено в первый год после аварии (4,8%), затем наблюдалось достоверное снижение, а с 1991г.- тенденция к увеличению числа лиц с повышенными титрами антител.

5. Антитела к денатурированной ДНК, являющиеся показателем системных аутоиммунных расстройств, достоверно чаще! определяются у людей с аутоиммунными тиреоидитами из загрязненного в результате аварии района ( 32,3%), в сравнении с выяв-ляемостью их у пациентов из контрольного района (14,6 X).

6. Данные о более частом обнаружении антимикросомальных антител у детей, имевших радиационную нагрузку на ЩЖ, а также выявленная тенденция увеличения количества обследованных с повышенными уровнями этих антител в последние годы свидетельствуют о необходимости проведение тщательного диспансерного наблюдения за детьми из пострадавших в результате аварии районов.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Поверенный А. М., Подгородниченко В. К,, Шинкаркина А. Е Ан-тимикросомальные антитела у лиц, проживающих в районах Калужской области //В сб.: Ликвидация последствий загрязнения радионуклидами территории Калужской области в результате аварии на Чернобыльской АЭС. - Калуга - 1992.- С. 40-41.

2. Поверенный А. М., Шинкаркина А. П., ■ Подгородниченко В. К., Паршин Е С., Цыб А. Ф. Иммунологические методы в эпидемиологическом мониторинге населения, подвергшегося радиационному

• воздействию в результате аварии на Чернобыльской АЭС // Радиационная биология. Радиоэкология. - 1993.- Т. 33, вып. 1(4). - С. 479 - 483.

3. Шинкаркина А. Г1 . Подгородниченко а К., Паршин ЕС.,' Поверенный А. М. Иммунологические методы для выявления аутоим-

мунных тиреоидитов у пострадавших в результате Чернобыльской аварии //В сб.: Радиобиологический съезд, Киев, 20-25 сентября 1993 г. - Пущино. - 1993. - С. 1149 - 1150.

4. Шинкаркина А. П., Подгородниченко к к., Паршин Е С., Поверенный А. М. Аутоиммунные тиреоидиты и системные аутоиммунные процессы у лиц, пострадавших в результате Чернобыльской аварии //В сб.: Материал^ международного семинара по проблемам смягчения последствий Чернобыльской аварии. - Россия, Брянск. - 1993. - С. 264.

5. Шинкаркина А. П. , Подгородниченко В. К , Поверенный А. М. Антитела к микросомальному антигену щитовидной железы у детей и подростков, подвергшихся радиационному воздействию в результате аварии на ЧАЭС //Радиационная биология. Радиоэкология. - 1994,- Т. 34, вып. 1. - С.

Лицензия ЛР № 040475 от 25.06.92 г.

Формат 60x901/16. Бумага типографская. Печать офсетная. УЧ.-ШД.Л. 1 Тираж 100 эи. Захаз№>2..5~

Отпечатано * типография государственного предприятия " Викинг" 249020, г. Обнинск Калужской обл., ул. Курчатова, 21