Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Антиокислительные свойства соевых продуктов. Использование соевого молока для коррекции окислительного стресса и гиперлипидемий

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Антиокислительные свойства соевых продуктов. Использование соевого молока для коррекции окислительного стресса и гиперлипидемий"

На правах рукописи

АКСЕНОВА Татьяна Валерьевна

АНТИОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ СВОЙСТВА СОЕВЫХ ПРОДУКТОВ. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СОЕВОГО МОЛОКА ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА И ГИПЕРЛИПИДЕМИЙ.

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Владивосток - 2006г.

Работа выполнена в ГОУ ВПО Амурская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Бородин Е.А.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Попов A.M. кандидат биологических наук Жукова Н.В.

Ведущая организация:

НИИ медицинской климатологии и восстановительного лечения СО РАМН

Защита состоится «27» октября 2006г. в 10-00 на заседании диссертационного совета Д 005.005.01. при ТИБОХ ДВО РАН по адресу: 690022, г.Владивосток, пр-т 100-лет Владивостоку 159. Тел. 4232-31-16-44, факс 4232-31-40-50.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН по адресу: 690022, г.Владивосток, пр-т 100-лет Владивостоку 159.

Автореферат разослан «_»_2006г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

кандидат химических наук

Г.И. Прокопенко

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Эпидемиологические данные, результаты экспериментов, выполненных на животных, и клинических исследований свидетельствуют, что систематическое употребление в пищу продуктов из сои в значительной степени уменьшает риск возникновения весьма распространенных и грозных заболеваний таких как некоторые формы злокачественных новообразований (Messina et al., 1998), атеросклероз и ИБС (Тутельян и соавт., 2002; Okamoto, Horisawa, 2006), гипертоническая болезнь (Yang et al., 2005), ожирение (Manzoni et al., 2005), холестериновая желчнокаменная болезнь (Белоновская, Кпяшторная, 1992), язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (Алексеенко и соавт., 2004), кишечные инфекции (Молочный и соавт., 2004), алиментарная дистрофия (Chandrasekhar, 2004), сахарный диабет (Мещерякова и соавт., 2002), болезни почек (Fair et al., 2004), нейродегенеративные заболевания (Lee et al., 2005), постменопаузальный синдром (Cassidy et al., 2006). Ведущий специалист по использованию соевых продуктов с целью лечения и профилактики заболеваний М. Мессина рекомендует взрослым людям ежедневно получать в составе соевых продуктов 10-25г соевого белка и 30-100мг изофлавоноидов (Messina, Messina, 2003). Благоприятное действие продуктов из сои на здоровье человека связывается, прежде всего, с эстрогенными и антиэстрогенными эффектами изофлавоноидов (Barnes, 2004) и в меньшей степени с действием ингибиторов протеаз (Kennedy, 1998). В то же время, не уделяется должного внимания действию присутствующих в соевых бобах природных антиоксидантов, которое может обеспечивать эффективность продуктов из сои в предупреждении заболеваний, связанных с активацией процессов свободно-радикального окисления.

Цель работы: исследование антиокислительных свойств соевых продуктов и выяснение возможности использования соевого молока в качестве средства коррекции окислительного стресса и дислипопротеидемий.

Список сокращений: АОА - антиокислительная активность; АОС - антиокислительная система; апо-Е- апопротеин Е; БА - Ы-альфа-бензокп-Ь-аргинин; БАЭЭ - N-альфа-бензоил-L-аргинин этиловый эфир; Гл-6-Ф ДГ - глюкозо-6-фосфат дегидрогеназа; ИБС -ишемическая болезнь сердца; ЛПВП - липопротеиды высокой плотности; ЛПВП-ХС -лилопротеидов высокой плотности холестерин; ЛПНП - липопротеиды низкой плотности; ЛПНП -ХС- липопротеидов низкой плотности холестерин; ЛПОНП - липопротеиды очень низкой плотности; МДА - малоновый диальдегид; НАДФ* - окисленный никотинамидаденин-динуклеотид фосфат; НАДФН- восстановленный никотинамидадениндинуклеотид фосфат; ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты; ПОЛ - перекисное окисление липидов; ТБК - тиобарбитуровая кислота; ТХУ -трихлоруксусная кислота; ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота; TNF alpha- фактор некроза опухолей, альфа фракция.

Задачи исследования:

1. исследовать химический состав соевых бобов и некоторых пищевых продуктов из сои, выпускаемых производителями Амурской области (соевая мука, тофу, соевое молоко), а именно, определить содержание белка, ингибитора трипсина, общих липидов, триглицеридов, фосфолипидов, стеринов, природных антиоксидантов (токоферолы, p-каротины, аскорбиновая кислота), продуктов ПОЛ (диеновые конъюгаты, гидропероксиды);

2. провести сравнительное исследование состава липидов (общие липиды, триглицериды, фосфолипиды, жирнокислотный состав) содержания стеринов, антиоксидантов (токоферолы, р-каротины, аскорбиновая кислота) и продуктов окислительной модификации липидов в соевом и коровьем молоке;

3. исследовать устойчивость к окислительной модификации и АО А соевого и коровьего молока в условиях in vitro;

4. исследовать АОА соевого молока в условиях in vivo при инициировании окислительного стресса в организме крыс введением CCI4, для чего определить в крови и в печени животных содержание продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов, гидроперекисей липидов, ТБК-реактивных продуктов), содержание и активность компонентов АОС (витамина Е, каталазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, церулоплазмина, антиокислительную активность и окисляемость сыворотки крови);

5. выяснить эффективность использования соевого молока в комплексной терапии больных ИБС как диетического средства для защиты от окислительного стресса и коррекции гиперлипидемии. Для этого определить в сыворотке крови больных при поступлении в стационар и по окончанию курса лечения содержание общего холестерина, ЛПВП-холестерина, триглицеридов, фосфолипидов, диеновых конъюгатов, гидропероксидов, ТБК-реактивных продуктов, церулоплазмина, витамина Е, окисляемость и АОА сыворотки крови.

6. с целью ответить на вопрос - в какой мере антиоксидантный эффект соевого молока в условиях in vivo обусловлен присутствующими в его составе токоферолами провести сравнительное исследование антиоксидантного эффекта равных количеств токоферолов, поступающих в организм здоровых молодых людей в составе соевого молока и фармацевтического препарата ацетата токоферола.

Научная новизна. В настоящей работе впервые предпринята попытка связать полезные для здоровья эффекты соевых продуктов с их антиокислительными свойствами. Установлено, что для соевых продуктов характерно высокое содержание фосфолипидов, ПНЖК, особенно кислот омега-3 серии и витамина Е. Впервые установлено, что соевое молоко устойчиво к окислительной модификации, проявляет высокую АОА в условиях in vitro и оказывает антиоксидантный эффект in vivo при введении крысам СС14. Впервые установлены антиоксидантный и гиполипидемический эффекты соевого молока при использовании его в комплексной терапии больных ИБС и показано, что гиполипидемический эффект соевого молока преимущественно выявляется у мужчин и при стенокардии, но не при инфаркте миокарда. Впервые показано, что в реализацию антиокислительного эффекта соевого молока в условиях in vivo значительный вклад вносит увеличение содержания витамина Е в крови.

Практическая значимость. В настоящей работе установлена возможность использования соевых продуктов в качестве средств коррекции окислительного стресса и показана эффективность использования соевого молока в комплексной терапии больных ИБС (патент на изобретение «Способ лечения дислипопротеидемий» № 2195949 от 10.01.2003г.). В более широком плане обоснована целесообразность употребления в пищу продуктов из сои, как источника природных антиоксидантов, полезных для здоровья продуктов.

Внедрение. По результатам настоящей работы издано методические пособие «Применение соевых напитков в качестве средств диетотерапии при лечении и профилактике ишемической болезни сердца», Благовещенск (2002), получен патент на изобретение «Способ лечения дислипопротеидемий» № 2195949 от 10.01.2003г. Способ лечения дислипопротеидемий с использованием соевых продуктов внедрен в практику работы кардиологического отделения 1-ой муниципальной больницы г.Благовещенска. Основные результаты настоящей работы используются в учебном процессе на ряде кафедр АГМА.

Апробация работы. Результаты настоящего исследования доложены и обсуждены на международном симпозиуме «Питание 21 века: медико-биологические аспекты, пути оптимизации», Владивосток (1999), международном симпозиуме «Актуальные вопросы кардиологии», Томск (200), 8-ом и 9-ом Российско-Японских международных медицинских симпозиумах, Благовещенск (2000), Канадзава (2001), Китайско-Российском фармацевтическом форуме «Исследование лекарств, используемых в традиционной терапии», Харбин (2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах и состоит из введения, 3 разделов (обзор литературы,

материалы и методы исследования, результаты собственных исследований и их обсуждение) и выводов. Работа иллюстрирована 1 рисунком и 22таблицами. Список литературы включает 272 источника, из них 45 отечественных и 227 зарубежных.

Положения, выносимые на защиту.

1. Особенности липидного состава соевых продуктов (высокое содержание фосфолипидов, низкое содержание триглицеридов, высокое содержание ПНЖК и особенно кислот омега-3 серии) и высокое содержание антиоксиданта — витамина Е позволяют рекомендовать эти продукты в качестве средств защиты от окислительного стресса и коррекции гиперлипидемий.

2. Соевое молоко устойчиво к окислению и проявляет высокую АОА в условиях in vitro и in vivo при развитии окислительного стресса у экспериментальных животных.

3. Соевое молоко проявляет антиоксидантный и гиполипидемический эффекты при использовании его в комплексной терапии больных ИБС. Последний эффект зависит от пола пациентов и нозологической формы болезни.

4. В реализацию антиокислительного эффекта соевого молока в условиях in vivo значительный вклад вносит увеличение содержания витамина Е в крови при приеме соевого молока.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалами настоящего исследования явились пищевые соевые продукты, производимые в Амурской области. В качестве экспериментальных животных использованы беспородные белые крысы. Клинические исследования проведены с группой, включающей 48 больных ИБС, находящихся на стационарном лечении в кардиологическом отделении 1-ой муниципальной больницы г. Благовещенска. В контрольную группу вошел 21 больной (16 мужчин и 5 женщин), в возрасте от 42 до 52 лет. 27 больных, из них 22 мужчин и 5 женщин, в возрасте от 40 до 60 лет вошли в опытную группу. В группу здоровых людей вошли 17 практически здоровых людей, преимущественно из медицинского персонала 1-ой муниципальной больницы г. Благовещенска, в возрасте от 31 года до 62 лет, 10 мужчин и 7 женщин.

Экстракцию липидов из различных образцов проводили методами Блайя-Дайера и Фолча (Кейтс, 1975). Активацию ПОЛ у крыс in vivo вызывали подкожным введением CCU (Владимиров, Арчаков, 1972). ПОЛ in vitro инициировали внесением в инкубационную смесь ионов Fe2+ в присутсивии аскорбата или НАДФН. Окисляемость сывороток крови,

соевого и коровьего молока определяли по накоплению ТБК-реактивных продуктов (Бородин и соавт., 1992). АОА сывороток крови, соевого и коровьего молока оценивали in vitro по способности тормозить ПОЛ в суспензии микросом (Бородин и соавт., 1992). Активность ингибитора трипсина в солянокислых экстрактах из соевых продуктов измеряли по торможению скорости гидролиза трипсином БАЭЭ (Нартикова, Пасхина, 1977). Активность Гл-6-ФДГ определяли спектрально (Бородин и соавт., ' 1992), каталазы по образованию окрашенного комплекса Н2Ог с молибдатом аммония (Королюк и соавт., 1988), содержание церулоплазмина по окислению р-фенилендиамина (Колб, 1976). Содержание белка в щелочных экстрактах из соевых продуктов определяли биуретовым методом (Бородин и соавт., 1984). В липидных экстрактах определяли содержание общих липидов гравиметрическим методом, триглицеридов с использованием стандартного набора химреактивов «Триглицериды» фирмы La Chema (Чехия), фосфолипидов по Фн, (Бородин и соавт., 1984), стеринов по цветной реакции с FeCI3 (Бородин и соавт., 1984), токоферолов по способности восстанавливать FeCl3 в присутствии дипиридила (Кисилевич, 1972), диеновых конъюгатов по поглощению при 233 нм (Стальная, 1977), гидроперекисей липидов по способности окислять ионы Fe2+ (Романова, Стальная, 1977). Содержание ТБК-реактивных продуктов определяли колориметрически по поглощению при 532 нм (Владимиров, Арчаков, 1972). Содержание общего холестерина, ЛПВП-ХС и общих триглицеридов в сыворотках крови определяли с помощью стандартных наборов фирмы ESPOO (Финляндия). Исследование жирнокислотного состава липидов методом ГЖХ метиловых эфиров жирных кислот проведено д.м.н., проф. С.В.Хотимченко в лаборатории химии липидов ИБМ ДВНЦ ДВО РАН.

Полученные результаты были подвергнуты статистической обработке с использованием общепринятых программ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Содержание белка, активность ингибитора трипсина, липидный состав, содержание некоторых антиоксидантов и продуктов ПОЛ в исследованных пищевых продуктах из сои

Содержание белка в исследуемом образце сои составило 385 мг/г в расчете на сырой вес. В образцах полножирной, липоксигеназной и особенно в полуобезжиренной соевой муки содержание белка несколько выше, а в соевом молоке и соевом сыре «тофу» значительно меньше (табл. 1).

Табл.1 Содержание белка и активность ингибитора трипсина в соевых бобах и соевых пищевых продуктах

Продукт Белок (мг/г), (мг/мл) Ингибитор трипсина (ИЕ/г), (ИЕ/мл) Ингибитор трипсина (ИЕ/мг белка)

Соевые бобы 385 1740 4,52

Соевая мука полножирная 415 450 1,08

Соевая мука Липоксигеназная 417 1640 3,93

Соевая мука полуобезжиренная 427 308 0,72

Соевое молоко исходное 28,5 177 6,21

Соевое молоко пастеризованное 28,5 103 3,61

Соевое молоко стерилизованное 28,5 38 1,33

«Тофу» 161 154 0,96

Активность ингибитора трипсина в образце сырой сои составила 1740ИЕ/г. Практически такая же активность ингибитора сохранялась в образце липоксигеназной соевой муки, технология производства которой не предусматривает высокотемпературного воздействия. В образцах полножирной и полуобезжиренной муки активность ингибитора составила 26% и 17%, соответственно, от исходной в сырой сое. В пастеризованном молоке сохранилось 58%, а в стерилизованном 21,5% активности ингибитора трипсина по сравнению с исходным соевым молоком, не подвергнутым воздействию высоких температур. С учетом полученных нами данных при производстве соевого молока на Благовещенском городском молочном комбинате использовалась только стерилизационная технология (табл. 1).

Главными липидами соевых бобов и исследованных нами соевых продуктов являются триглицериды, содержание которых на порядок превышает содержание фосфолипидов и на два порядка содержание стеринов (табл.2), а главными антиоксидантами — токоферолы (табл. 3). Содержание последних в образцах сырой сои и полножирной соевой муки практически одинаково, составляя 380 и 370 мкг/г продукта, соответственно, или 1,85 и 1,64 мг/г масла. В других продуктах содержание токоферолов в расчете на единицу продукта значительно меньше, однако, в расчете на г масла во всех исследованных образцах оно весьма схожее и варьирует в пределах 1,4-2,0 мг/г.

Табл. 2 Содержание триглицеридов, фосфолипидов и стеринов в соевых бобах и соевых пищевых продуктах

Продукт Общие липиды (мг/г), (мг/мл) Триглицериды (мг/г), (мг/мл) Фосфо-липиды (мг/г) (мг/мл) Стерины (мг/г) (мг/мл)

Соевые бобы 206 181 15.4 1.7

Соевая мука полножирная 226 201 18.5 1.7

Соевая мука липоксигеназная 218 175 19.2 1.7

Соевая мука полуобезжиренная 137 117 14,2 1,30

Соевое молоко 13 11.1 0.86 0.19

«Тофу» 61 51.7 5.53 0.94

Табл. 3. Содержание некоторых витаминов-антиоксидантов в соевых бобах и соевых пищевых продуктах

Продукт Токоферолы Р-каротины мкг/г, мкг/мл Аскорбиновая кислота мкг/г, мкг/мл

мкг/г, мкг/мл мг/г масла ммоль/моль масла

Соевые бобы 380 1,85 3,80 19 70

Соевая мука полножирная 370 1,64 3,37 13 97

Соевая мука липоксигеназная 310 1,41 2,92 15 101

Соевая мука полуобезжиренная 265 1,94 3,99 10 110

Соевое молоко 21 1,69 3,47 Следы 15

«Тофу» 124 2,03 4,17 Следы 51.7

В соевом масле на 1000 молекул липидов приходятся 3-4 молекулы токоферолов. Содержание р-каротинов в исследованных образцах сои и соевой муки в 20-30 раз ниже содержания токоферолов, а в соевом молоке и тофу р-каротины практически не определяются. Содержание аскорбиновой кислоты в сое (70 мкг/г) и соевых продуктах (15-110 мкг/г) невелико и соевые продукты не играют существенной роли в качестве источника этого витамина для человека.

В исследованном образце сои и образцах соевых продуктов определяются первичные продукты окислительной модификации липидов — диеновые конъюгаты и гидропероксиды (табл.4). На 1000 молекул липидов приходится от 2 до 7 сопряженных двойных связей и менее одной гидроперексиной группы.

Табл.4. Содержание диеновых конъюгатов и гидроперекисей липидов в исследуемых образцах соевых пищевых продуктов

Диеновые конъюгаты Гидроперекиси липидов

Продукт нмоль/г, ммоль/моль нмоль/г, моль/моль

нмоль/мл масла нмоль/мл масла

Соевые бобы 1690 7,28 160 0,69

Соевая мука полножирная 940 3,68 130 0,51

Соевая мука липоксигеназная 870 3,53 97 0,39

Соевая мука полуобезжиренная 690 4,46 110 0,71

Соевое молоко 26 1,77 14 0,95

«Тофу» 122 1,77 34 0,97

Таким образом, благодаря присутствию комплекса антиоксидантов соевые продукты могут быть использованы для коррекции процессов ПОЛ в организме. Для последующих исследований in vitro и in vivo нами было выбрано соевое молоко с учетом того, что это готовый к употреблению пищевой продукт с достаточно большим сроком хранения, не требующий предварительной кулинарной обработки. В связи с этим мы провели более детальное исследование его липидного состава и антиокислительных свойств. Для сравнения аналогичные показатели определяли в животном молоке — коровьем, а отдельные показатели и в женском.

Лииидный состав, содержание некоторых антиоксидантов и продуктов ПОЛ в соевом и животном молоке

Отличительная особенность соевого молока по сравнению с коровьим - несколько большее содержание фосфолипидов (0.86 мг/мл по отношению к 0.78мг/мл) и значительно меньшее содержание триглицеридов (11 и 32 мг/мл, соответственно). В результате отношение фосфолипиды/триглицериды в соевом молоке в 3 раза выше, чем в коровьем, что представляется важным диетическим преимуществом соевого молока. Содержание стеринов всоевом молоке (0,38 мг/мл) выше,

чем в коровьем (0,20 мг/мл), но следует иметь в виду, что в соевых бобах содержатся растительные стерины - р-ситостерин (52-58% от общего содержания стеринов) кампестерин (16-24%) и стигмастерин (16-19%) (СшШопе, 2003). а не холестерин. В женском молоке содержание триглицеридов (23 мг/мл) промежуточное между соевым и коровьим молоком, а содержание фосфолипидов (1,23 мг/мл) и стеринов (0,56 мг/мл) выше, чем в двух других видах молока.

Анализ жирнокислотного состава липидов двух видов молока показал, что коровье и соевое молоко характеризуются выраженными различиями жирнокислотного состава липидов, которые могут иметь существенное значение для их диетических свойств (табл.5). 1) общее содержание предельных жирных кислот в коровьем молоке (63,8%) в 3,7 раза выше, чем в соевом (17,8%); 2) общее содержание мононенасыщенных жирных кислот также выше в коровьем молоке и составляет 30,4% по отношению к 21,5% в соевом; 3) общее содержание ПНЖК в соевом молоке (61,2%) в 10,6 раз выше, чем в коровьем, где оно составляет только 5,7%; 4) содержание ПНЖК п-3 серии, благоприятных в плане профилактики сердечно-сосудистых заболеваний (Васьковский, 1996), в соевом молоке в 4,2 раза выше, чем в коровьем (8,53% и 2,03%, соответственно); 5) липиды соевого молока менее разнообразны по жирнокислотному составу и в них отсутствуют низшие жирные кислоты (С<10), содержащиеся в качестве минорных компонентов в липидах коровьего молока; 6) главными жирными кислотами липидов соевого молока являются линолевая (18:2п-6) (52%), олеиновая (18:1п-9) (18%) и пальмитиновая (16:0) (12%), а коровьего — пальмитиновая (16:0) (25%), олеиновая (18:1п-9) (21%) и стеариновая (18:0) (14%); 7) специфичными минорными жирными кислотами коровьего молока являются 4:0, 8:0, 10:0, 12:1, 14:1, 15:0-изо, 15:0-антиизо, 16:0-изо, 16:1п-9, 16:2, 17:0-изо, 17:1, 18:1-транс, 19:0 и 18:4п-3, а соевого - 18:ЗпЗ, 10:1п-9 и 22:0 (табл. 5).

Высокое содержание ПНЖК, особенно п-3 серии, представляет весьма важное диетическое преимущество растительного соевого молока по сравнению с животным коровьим молоком.

По сравнению с коровьим молоком в соевом в 1,6 раза выше содержание токоферолов (19 и 12 мкг/мл, соответственно) и в 1,7 раза ниже содержание аскорбиновой кислоты (3,6 и 4, 4 мкг/мл, соответственно), р-каротины в обоих видах молока обнаруживаются в следовых количествах. При анализе исходного присутствия продуктов ПОЛ в двух видах молока было установлено, что содержание диеновых конъюгатов в коровьем молоке (15,2 ннмоль/мл) в 2,5 раза выше, чем в соевом (6,1 ннмоль/мл), а гидропероксиды не определяются в обоих продуктах. В последующем, мы отмечали, что в процессе хранения в холодильнике обоих видов молока окисление коровьего молока протекает быстрее.

Таблица 5. Жирнокислотный состав липидов коровьего и соевого молока (% от суммы жирных кислот)

Жирные кислоты Коровье молоко Жирные кислоты Соевое молоко

4:0 3.28

6:0 2.02

8:0 0.48

10:0 2.22

12:0 2.63 12:0 0.11

12:1 0.10 14:0 0.22

14.0-изо 0.19 15:0 0.06

14:0 9.24 16:0 11.80

14:1 0.69 16:1п-7 1.92

15:0-изо 0.38 17:0 0.11

15:0-антиизо 0.68 18:0 4.34

15:0 1.20 18:1п-9 18.05

16:0-изо 0.33 18:1п-7 1.32

16:0 25.37 18:2п-6 51.88

16:1п-9 1.21 18:2п-4 0.82

16:1п-7 0.40 18:3п-6 0.73

17:0-изо 0.56 18:3п-3 7.80

16:2 0.52 20:0 0.32

17:0 0.65 20:1п-9 0.20

17:1 0.28 22:0 0.32

18:0 14.18

18:1п-9 21.14

18:1п-7 4.51

18:1-транс 2.07

18:2п-6 2.60

18:2п-4 0.60

19:0 0.23

18:3п-3 1.05

18:4п-3 0.98

20:0 0.21

Окисляемость и АОА соевого и коровьего молока in vitro

Окисляемость соевого и коровьего молока практически не различалась, причем скорость НАДФН-зависимого ПОЛ была на порядок выше, чем аскорбат-зависимого. В отличие от этого, АОА соевого молока,

оцениваемая по торможению аскорбат-зависимого ПОЛ в микросомах печени, в 5,3 раза превосходила АОА коровьего молока в аналогичных условиях. АОА соевого молока при инициировании НАДФН-зависимого ПОЛ по абсолютной величине в 2,5 раза превосходила таковую коровьего молока, но отмеченные различия не имели статистической достоверности (табл.6).

Табл. 6. Окисляемость и АОА соевого и коровьего молока

Продукт Аскорбат-зависимое ПОЛ НАДФН-зависимое ПОЛ

Окисляемость (нмоль МДА мин"1 мл"1) АОА (%) Окисляемость (нмоль МДА мин"1 мл'1) АОА (%)

Соевое молоко 0,28±0,17 10,9±2,5 2,63±0,17 5,96±2,63

Коровье молоко 0,48±0,18 57,3±9,3* 2,80±0,09 14,25±5,18

* - различия значений показателя в соевом и коровьем молоке достоверны (р<0,05).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о достаточно высоких антиокислительных свойствах соевого молока, что можно связать в первую очередь с высоким содержанием в нем токоферолов. На этом основании соевое молоко можно рекомендовать в качестве диетического средства для коррекции состояний, сопряженных с активацией ПОЛ. В последующих опытах с активацией процессов ПОЛ у крыс in vivo мы постарались получить экспериментальные доказательства правильности подобного утверждения.

Исследование антиокислительных свойств соевого молока in vivo при активации процессов ПОЛ у крыс введением CCI4.

Белые крысы одного помета после окончания естественного вскармливания были разделены на три группы: 1-я - интактная; 2-я -контрольная; 3-я — опытная. Все животные находились на стандартной диете вивария. Животные опытной группы дополнительно получали соевое молоко в количестве 10 мл/сутки. Через четыре месяца у крыс контрольной и опытной группы инициировали активацию ПОЛ подкожным введением СС14. Эвтаназию животных проводили на четвертые сутки от начала введения яда путем декапитации.

Введение животным яда сопровождалось активацией ПОЛ и накоплением его продуктов в печени: содержание диеновых конъюгатов увеличилось в 2,2 раза, а ТБК-продуктов - в 1,5 раза. Уменьшение содержания гидроперекисей липидов по отношению к интактным животным может быть следствием разрушения перекисей и перехода их в

более устойчивые карбонильные продукты. У животных опытной группы, получавших соевое молоко перед введением СС14, в печени выявились минимальные признаки активации ПОЛ: диеновые конъюгаты увеличились только в 1,4 раза, а содержание гидроперекисей и ТБЬС-реактивных продуктов не изменилось (табл. 7).

Табл. 7. Содержание продуктов ПОЛ в печени крыс.

Показатель Интактные п=12 Контрольные (ССЦ) п=8 Опытные (СС14+молоко) N=9

Диеновые конъюгаты (нмоль/г) 535±11,7 1180±174 Риг <0,005 711±20,4 Р2-3 <0,05 р,_з<0,001

Гидроперекиси липидов (нмоль/г) 36,2± 1,32 28,0± 1,43 р,.2<0,02 38,8±2,59 Р2-3 <0,005 Р 1-з >0,1

ТБК-реактивные продукты (нмоль/г) 71,2±3,45 105±5,77 Рь2<0,001 74,6±9,29 Р2.з <0,02 Р 1-з >0,1

Р1_2 - достоверность различий между показателями интактной и контрольной группы; Р2_з - достоверность различий между показателями контрольной и опытной группы; Р|.3 - достоверность различий между показателями опытной и интактной группы.

Способность соевого молока предотвращать активацию ПОЛ в печени крыс при введении животным СС14 находит объяснение при исследовании состояния АОС печени. Введение СС14 сопровождается напряжением АОС и истощением ее мощности. Активность Гл-6-Ф ДГ возрастает в 1,3 раза у контрольных животных и не изменяется у опытных. Активность каталазы резко снижается в контрольной группе (в 6,2 раза) и в меньшей степени в контрольной (в 3,5 раза). Содержание церулоплазмина в печени контрольных крыс уменьшается в 4,1 раза, а у животных опытной группы в 1,5 раза и остается достоверно более высоким по сравнению с таковым у животных контрольной группы. Содержание витамина Е в печени уменьшается в 3 раза у животных, получавших ССЦ, и в 2 раза у животных, получавших ССЦ на фоне приема соевого молока. Таким образом, изменения АОС в печени крыс при введении ССЦ состоят в возрастании активности Гл-6-Ф ДГ, резком падении активности каталазы и уменьшении содержания церулоплазмина и витамина Е. Употребление соевого молока в значительной степени препятствует активации ПОЛ (табл. 8).

Табл. 8. Содержание и активность некоторых компонентов АОС в печени крыс

Показатель Интактные п=12 Контрольные (ССЦ) п=8 Опытные (СС14+молоко) п=9

Гл-6-Ф ДГ (нмопь НАДФН г1 с1) 29,7±2,10 38,5±3,16 Р1-2 <0,05 30,9±2,51 Р2-3<0,1 Р1-з>0,1

Катал аза (мкмоль Н2О2 г1 с1) 298±14,3 47,6±10,7 Р1-2 <0,001 83,7±11,0 Рг-з <0,05 Р.-з <0,001

Церулоплазмин (мкг/г) 21,6±2,18 5,22±2,86 р,.2 <0,005 14,8±1,78 Р2-3 <0,02 Р1-3 <0,05

Витамин Е (мкг/г) 318±12,0 106±12,8 Р1.2 <0,001 166±14,9 р2.3<0,01 Р.-з <0,001

Условные обозначения указаны в подписи к таблице 7.

Изменения содержания продуктов ПОЛ в крови крыс выражены в меньшей степени, чем в печени - содержание диеновых конъюгатов и гидроперекисей липидов не различается между группами, а содержание ТБК-реактивных продуктов увеличивается в 4,7 раза в контрольной группе и в 3,6 в опытной. Активность Гл-6-Ф-ДГ в крови животных контрольной и опытной групп снижена на 34% и 25%, а активность каталазы - на 42% и 20%, соответственно. Содержание церулоплазмина уменьшено в равной степени в обеих группах на 25%. Содержание витамина Е в крови возросло в контрольной группе в 1,24 раза, а в опытной в 2,2 раза. При исследовании окисляемости и АОА плазмы крови в группах животных единственное выявленное достоверное различие состояло в снижении АОА плазмы крови у контрольных крыс с 57,2± 1,67% у интактных до 40,7±6,50 (р<0,05). Полученные результаты свидетельствуют о способности соевого молока предотвращать активацию процесса ПОЛ при введении крысам ССЦ.

Исследование эффективности добавки в диету соевого молока в комплексной терапии ИБС

Нами проведено исследование влияния включения соевого молока (0,5л ежедневно) в диету больных ИБС, получающих стандартную медикаментозную терапию, на липидный профиль сыворотки крови и содержание в крови некоторых продуктов ПОЛ и антиоксидантов. Продолжительность курса лечения — 21 день.

Больные, вошедшие в контрольную (фармакотерапия) и опытную (фармакотерапия + соевое молоко) группы, на момент поступления в стационар не различались между собой по анализируемым'показателям содержания липидов в плазме крови и в то же время имели достоверные различия со здоровыми людьми (табл. 9).

Табл.9. Показатели липидного обмена в сыворотке крови в обследованных группах здоровых людей и больных ИБС.

Показатели Группы обследованных

Здоровые люди п=17 Контрольная п=21 Экспериментальная г п=27

до лечения после лечения до лечения после лечения

1 2 3 4 5

Общий холестерин (ммоль/л) 4,75+0,19 6,32±0,24 р,.2<0,001 5,91 ±0,22 Р2-3>0,1 Р 1-з<0,01 6,63±0,21 Рм<0,01 Р2-4>0,1 5,12±0,21 Р4-5<0,05 Р.-5>0,1 Рз-5<0,02

ЛПВП-ХС (ммоль/л) 1,71+0,13 1,20±0,10 р,.2<0,05 1,10+0,07 Р2-3>0,1 Р 1-з<0,001 1,18 ±0,06 Р1-4<0,01 Р2-4>0,1 1,34±0,07 Р4-5>0,1 Р.-5<0,05 Рз-5<0,02

Индекс атерогенности 1,91 ±0,15 4,76±0,45 Р1-2<0,01 4,51±0,32 Р2-3>0,1 р,.3<0,01 4,97±0,31 Рм<0,01 Р2-4>0,1 1 3,10±0,24 Р4-5<0,01 Рь5<0,05 Рз-5<0,01

Триглице- риды (ммоль/л) 1,2 5 ±0,20 2,13±0,32 Ры<0,02 1,85+0,18 Р2-3>0,1 Р1.з<0.05 2,05±0,26 Р1-4<0,02 Р2-4>0,1 1,57+0,18 Р4-5<0,1 Р1-5>0,1 Рз-5>0,1

Фосфо-липиды (ммоль/л) 2,67±0,21 2,93±0,16 Р1-2>0,1 2,94±0,17 Рг-з >0,1 Р1-з>0,1 2,91+0,13 Ры>0,1 Р}-4>0,1 3,17+0,14 Р4-5>0,1 Р1-5<0,1 Рз-5>0,1

В контрольной группе клиническое выздоровление не сопровождалось достоверными изменениями в содержании липидов в сыворотке крови. На момент выписки из стационара величины общего холестерина, ЛПВП-ХС, триглицеридов и индекса атерогенности не отличалось от таковых при поступлении и были достоверно выше по

отношению к группе здоровых людей. В отличие от контрольной группы в опытной к моменту окончания лечения произошли достоверные изменения в содержании липидов в сыворотке крови. Общий холестерин снизился на 23%. ЛПВП-ХС, хотя и не имел достоверных различий с исходными значениями, но по абсолютной величине был выше. В результате на 38% достоверно уменьшился индекс атерогенности. Отмечены тенденции к снижению содержания триглицеридов и увеличению содержания фосфолипидов. С учетом антиатерогенной роли фосфолипидов это изменение можно рассматривать как один из благоприятных эффектов применения соевых продуктов в лечении и профилактике атеросклероза и ИБС.

Наряду с анализом средних величин по обследуемым группам больных мы выяснили как изменились у больных экспериментальной группы после лечения показатели общего холестерина, ЛПВП-ХС и индекса атерогенности в зависимости от пола и нозологических форм ИБС.

Перед началом лечения анализируемые показатели не имели статистически достоверных различий у мужчин и женщин. Употребление соевого молока повлекло снижение общего холестерина в сыворотке крови лишь у мужчин с 6,61+0,24 до 4,98±0,20 ммоль/л (р<0,01). Уровень холестерина-ЛПВП после лечения не имел достоверных различий с исходным и у мужчин и у женщин, но у женщин абсолютные значения этого показателя были все же выше. За счет снижения общего холестерина индекс атерогенности у мужчин достоверно снизился в 1,5 раза с 4,45±0,44 до 3,01+0,24 (р<0,01).

При сопоставлении изменений этих же показателей в зависимости от нозологической формы установлено, что на момент поступления в стационар больные со стенокардией и инфарктом миокарда не имели достоверных различий по содержанию общего и ЛПВП-холестерина и индексу атерогенности. После проведенной медикаментозной терапии с дополнительным употреблением соевого молока уровень общего холестерина и индекс атерогенности достоверно снизились только в группе больных со стенокардией на 37% и 63%, соответственно, а у больных инфарктом миокарда отмечаемое уменьшение абсолютных величин этих показателей не было статистически достоверным. В обеих группах больных не выявлено достоверных изменений в содержании ЛПВП-ХС.

Нами не установлено статистически значимых различий между жирнокислотным составом липидов сывороток крови здоровых людей и больных ИБС, и поэтому не представляется возможным объяснять эффективность соевого молока в диетотерапии ИБС влиянием последнего на жирнокислотный состав липидов плазмы крови.

Больные ИБС, вошедшие в контрольную и опытную группы, на момент поступления в стационар не были полностью идентичны по содержанию отдельных продуктов ПОЛ в крови (табл.10). Тем не менее,

Табл. 10 Содержание продуктов ПОЛ и компонентов АОС в сыворотке крови в обследованных группах

Показатели Группы обследованных

Здоровые люди п=17 Контрольная п=21 Экспериментальная п=27

до лечения после лечения до лечения после лечения

1 2 3 4 5

Диеновые конъюгаты (нмоль/мл) 24,7±3,17 28,8±2,60 Р1-2>0,1 25,9±2,55 Р1-з>0,1 Рг-з>0,1 44,8±4,90 р1-4<0,01 р2.4<0,01 31,8±2,67 Р1-5<0,1 Р«<0,02 РЗ-5>0,1

Гидроперекиси липидов (нмоль/мл) 20,8+0,96 20,1+2,64 Р1-2>0,1 24,4±4,23 р,.3>0,1 Р2-3>0,1 36,7+7,50 Р1-4<0,05 Р2-4<0,05 20,7±0,70 Р1-5>0,1 Р«<0,05 Рз-5>0,1

ТБК-реактивные продукты (нмоль/мл) 5,53±0,89 8,14±0,98 Р1-2<0,05 7,25±0,86 Р1-з>0,1 Р2-3>0,1 7,75±0,96 Р1-4>0,1 Р2-4>0,1 6,51 ±0,62 Р1-5>0,1 р4.5>0,1 Рз-5>0,1

Окисляе- мость сыворотки нмольМДА мин'мл"1 2,87+0,07 2,32±0,07 Р1.2<0,001 2,43+0,07 рЬз<0,001 р2.3>0,1 3,41 ±0,29 Р1-4<0,1 Р2-4<0,001 2,72±0,14 Р1-5>0Д р4.5<0,1 Рз-5<0,01

Церуло-плазмин (мг/дд) 16,3±0,97 19,2+3,76 Р1-2>0,1 17,4+1,85 Р1-з>0,1 Рг-з>0,1 18,7+2,00 Р1.4>0,1 р2.4>0,1 16,9+1,13 Р1-5>0,1 Р4-5>0,1 РЗ-5>0,1

Витамин Е (мкг/мл) 12,5±1,2 7,7±0,51 Р.-2<0,01 8,0±0,46 рьз<0,01 Рг-з>0,1 9,7+1,90 Р1-4>0,1 Р2-4>0,1 17,0±2,90 Р1-5>0,1 Р4-5<0,01 Рз-5<0,01

это обстоятельство не повлияло на достоверность различий в содержании продуктов ПОЛ в крови больных ИБС обеих групп и группой здоровых людей. Полученные результаты позволяют констатировать активацию процесса ПОЛ в обеих группах больных ИБС к моменту поступления в стационар. У больных контрольной группы на активацию ПОЛ указывает увеличенное содержание в крови ТБК-реактивных продуктов и уменьшенное содержание витамина Е, а у больных опытной группы -увеличенное содержание диеновых конъюгатов, гидроперекисей липидов, тенденция к возрастанию окисляемости липидов сыворотки крови. Клиническое выздоровление больных контрольной группы, которым проводилась фармакотерапия, не сопровождалось какими-либо достоверными изменениями в содержании исследуемых продуктов ПОЛ и факторов АОС по отношению к исходным величинам. В отличие от этого, у больных экспериментальной группы к окончанию лечения содержание в сыворотке крови диеновых конъюгатов достоверно уменьшилось на 29%, а гидроперекисей липидов - на 44%. Отмечена тенденция к снижению окисляемости липидов сыворотки крови (табл.10).

Полученные результаты позволяют заключить, что прием соевого молока сопровождался антиоксидантным эффектом, в основе которого могло лежать увеличение содержания в крови витамина Е вследствие поступления его в организм с соевым молоком. Содержание витамина Е к моменту окончания лечения возрастало с 9,7мкг/мл при поступлении в стационар до 17,0мкг/мл, т.е. в 1,75 раза. Поскольку способность соевого молока увеличивать содержание в крови витамина Е может быть весьма существенной для понимания механизма его антиоксидантного действия in vivo, мы провели следующий эксперимент, направленный на объяснение причин указанного феномена.

Исследование влияния соевого молока и ацетата токоферола на содержание витамина Е, продуктов ПОЛ и липидный состав сыворотки крови у здоровых молодых людей

2 группы здоровых молодых людей в возрасте 17-19 лет по 13 человек каждая (8 девушек и 5 юношей) добровольно в течение 2 недель ежедневно принимали по стакану (0,25л) соевого молока (экспериментальная группа) либо 5 мг фармацевтического препарата витамина Е (ацетат токоферола) в виде масляного раствора (контрольная группа). Именно такое количество витамина Е содержится в стакане соевого молока. В остальном диета участников обеих групп не имела существенных различий. Перед началом и по окончанию эксперимента в утренние часы натощак из локтевой вены брали образцы крови. В сыворотке крови определяли содержание витамина Е и показатели, характеризующие состояние процессов ПОЛ и липидный спектр.

Табл.11 Влияние соевого молока и токоферолацета на содержание витамина Е, продуктов ПОЛ и липидный спектр сывороток крови у здоровых молодых людей.

Показатели Группы обследованных

Принимавшие витамин Е (п=13) Принимавшие соевое молоко(п=13)

Перед По Перед По

началом окончанию началом окончанию

эксперимента эксперимента эксперимента эксперимента

Витамин Е 9.26+0.71 10.8±0.74 7.84+0.41 10.6±0.77

(мг/л) Р1,2>0.1 Р1-з>0.1 Рз,4<0.005 Р2-4>0-1

Диеновые 23.3±1.42 20.9±2.58 31.2±5.0 22.5±2.09

конъюгаты (нмоль/мл) Р1,2>0.1 Р1-з>0.1 Рз.4>0.1 Р2-4>0.1

Гидроперекиси 5.82±1.09 3.10+0.51 7.47±1.51 3.73+0.80

липидов (нмоль/мл) Р1>2<0.05 Р1-з>0.1 РЗ>4<0.05 Р2-4>0.1

ТБК- 5.62±0.86 5.96±0.71 5.89+0.71 6.63+0.74

реактивные Р1,2>0.1 Р1-з>0.1 Р3,4>0.1

продукты (нмоль/мл) Р2-4>0.1

Окисляемость 1.17+0.037 1.22+0.042 1,20±0.047 1.26+0.056

сыворотки (нмоль МДА Р1,2>0.1 р,.3>0.1 Рз,4>0.1 Р2-4>0.1

мин"1 мл"1)

Общий 4.46±0.089 4.51+0.277 4.34+0.229 4.58+0.230

холестерин (ммоль/л) Р1.2>0.1 Р1-з>0.1 РЗ,4>0.1 Р2-4>0.1

Триглицериды 1.07+0.160 1.02±0.091 0.87+0.105 0.91+0.071

(ммоль/л) Р1,2>0.1 Р1-з>0.1 Рз,4>0.1 Р2-4>0.1

Фосфолипиды 2.06±0.122 1.91±0.060 1.75±0.06 1.79±0.093

(ммоль/л) Р1.2>0.1 Р1_з>0.18 Рз,4>0.1 Р2-4>0.1

На момент начала эксперимента контрольная и экспериментальная группа не имели достоверных различий ни по одному из исследуемых показателей. К окончанию эксперимента в группе студентов, принимавших витамин Е, увеличение его содержания в сыворотке крови с 9,2б±0,71 до 10,8±0,74 мг/л не было статистически

достоверным (р>0.1). Достоверное увеличение содержания витамина Е в крови к окончанию эксперимента отмечено только в экспериментальной группе - с 7.84±0,41 до 10.0±0,77 мг/л, т.е. почти на 30% (табл. 11).

Из 13 участников, принимавших соевое молоко, увеличение содержания витамина Е было выявлено у 11 человек, у 1 участника содержание витамина Е к окончанию эксперимента снизилось, а еще у 1 — не изменилось. В отличие от этого, в контрольной группе содержание его возросло только у 7 участников, у 3 оно снизилось, а у 3 — не изменилось. Как прием соевого молока, так и витамина Е здоровыми молодыми людьми сопровождался снижением содержания в крови гидроперекисей липидов. Участники обеих групп получали одинаковые количества витамина Е. Поэтому следует заключить, что витамин Е более полно всасывается в кишечнике при попадании в организм в составе липидной эмульсии (соевое молоко), нежели в виде капельки масла (фармацевтический препарат).

Прием, как соевого молока, так и витамина Е не оказал влияния на средние величины содержания холестерина, триглицеридов и фосфолипидов в сыворотке крови в обеих группах участников, что согласуется с результатами большинства исследований, согласно которым гиполипидемическое действие соевых продуктов проявляется только у лиц с исходно повышенным содержанием липидов. Содержание общего холестерина в обследуемых нами группах составило, соответственно, 4.46±0.32 и 4.34±0.23 ммоль/л и было в пределах величин возрастной нормы (табл. 11).

В результате проведения настоящего эксперимента нами установлено, что природный витамин Е, содержащийся в соевом молоке, лучше усваивается в желудочно-кишечном тракте, чем фармацевтический препарат ацетат токоферола и увеличением содержания витамина Е в организме в результате приема соевого молока можно объяснить наблюдаемый антиоксидантный эффект. Возможно в этот эффект вносят свой вклад и другие вещества, присутствующие в соевых бобах и обладающие антиокисдантными свойствами, например изофлавоноиды. Содержание главных изофлавоноидов сои генестеина и диадзеина в соевом молоке составляет, соответственно, 310 и 30 мкг/100 мл (Тутельян и соавт., 2003). Содержание витамина Е в использованном нами соевом молоке составило 1900 мкг/100 мл. Поэтому, с учетом содержания витамина Е и изофлавоноидов в соевом молоке вклад первого в антиоксидантный эффект будет определяющим.

выводы

1. Особенности липидного состава соевых продуктов (высокое содержание фосфолипидов, низкое содержание триглицеридов, высокое содержание ПНЖК и особенно кислот омега-3 серии) и высокое содержание антиоксиданта — витамина Е позволяют рекомендовать эти продукты в качестве средств защиты от окислительного стресса и коррекции гиперлипидемий.

2. Соевое молоко устойчиво к окислению и проявляет высокую АОА в условиях in vitro при инициировании ПОЛ в модельной системе.

3. Соевое молоко оказывает антиоксидантный эффект при введении крысам CCLt, что проявляется частичным предотвращением накопления ТБК-реактивных продуктов и снижения активности каталазы и церулоплазмина, содержания витамина Е в печени, частичным предотвращением снижения активности каталазы, Гл-6-Ф ДГ и АОА крови, увеличением содержания витамина Е в крови.

4. Соевое молоко проявляет антиоксидантный и гиполипидемический эффекты при использовании его в комплексной терапии больных ИБС, о чем свидетельствует:

• уменьшение окисляемости липидов плазмы крови, снижение содержания в крови продуктов ПОЛ — диеновых конъюгатов и гидроперекисей, увеличение содержания витамина Е;

• уменьшение содержания общего холестерина плазмы крови и индекса атерогенности.

5. Эффективность соевого молока в комплексной терапии больных ИБС зависит от пола пациентов и нозологической формы болезни. Гиполипидемический эффект соевого молока преимущественно выявляется у мужчин и при стенокардии, но не при инфаркте миокарда.

6. В реализацию антиокислительного эффекта соевого молока в условиях in vivo значительный вклад вносит увеличение содержания витамина Е в крови при приеме соевого молока.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бородин Е.А., Шабельский В.Е., Анищенко Н.И., Аксенова Т.В. Пищевые продукты из сои как продукты здоровья. В кн.: Питание 21 века: медико-биологические аспекты, пути оптимизации. Материалы международного симпозиума. Владивосток, 1999. С.65-66.

2. Меньшикова И.Г., Синицкая Г.П., Бородин Е.А., Аксенова Т.В. Изменения липидного состава крови под влиянием соевого молока у больных, перенесших инфаркт миокарда в молодом возрасте. В кн.: Актуальные вопросы кардиологии. Тезисы докладов международного симпозиума. Томск, 2000. С.91.

3. Аксенова Т.В., Ивченко А.Е., Синицкая Г.П., Меньшикова И.Г., Бородин Е.А. Использование соевого молока в коррекции окислительного стресса и гиперлипидемии у больных ишемической болезнью сердца. В кн.: Вопросы биологии и технологии возделывания сои на Дальнем Востоке России. Сб. науч. тр. РАСХН. Благовещенск, 2000. С.92-95.

4. Бородин Е.А., Аксенова Т.В., Анищенко Н.И. Пищевые продукты из сои. Новая роль. Вестник ДВО РАН, 2000, № 5, С.72-85.

5. Aksyonova T.V., Borodin Е.А. The lipid composition and the antioxidant properties of soy and cow milk In: YIII Russia-Japan International Medical Symposium. Abstracts. Blagoveshchensk, 2000. PP.401-402.

6. Бородин E.A., Доровских B.A., Аксенова T.B., Штарберг М.А. Липидный состав и антиокислительные свойства соевого молока в условиях in vitro и in vivo. Дальневосточный медицинский журнал, 2001, №4, С.26-30.

7. Borodin Е.А., Dorovskikh V.A., Aksyonova T.V., Shtarberg M.A., Belyi O.V. Soy milk is more effective in enhancing the blood vitamine E content and suppressing lipid peroxidation than the dietary vitamine E. In: Ninth Internatinal Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange. Program & Abstract (II) Supplement. Kanazawa, 2001. P.208.

8. Бородин E.A., Меньшикова И.Г., Лесик Н.В., Штарберг М.А., Матыцина Л.В., Аксенова Т.В. Применение соевых напитков в качестве средств диетотерапии при лечении и профилактике ИБС (методическое пособие). Благовещенск, 2002. 25с.

9. Аксенова Т.В., Е.А.Бородин, И.Г.Меньшикова, Г.П.Синицкая, А.Е. Ивченко. Способ лечения дислипопротеидемий. Патент на изобретение № 2195949, от 10.01.2003г. по заявке № 2001103769 от 08.02.2001г.

10. Borodin Е.А., Shtarberg М.А., Aksyonova T.V., Beloglazova I.G. Soy foods. Biological role and use in medicine. In: Studies on Drugs used in Traditional therapy. China and Russia Pharmaceutical forum. Harbin, 2004.

PP.20-26.

Соискатель

Т.В. Аксенова

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Аксенова, Татьяна Валерьевна

Список сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1. Общая характеристика продуктов из сои.

2. Антипитательные факторы соевых бобов и их возможный вклад в благоприятное действие продуктов из сои на здоровье человека.

2.1. Ингибиторы протеаз.

2.2.Изофлавоноид ы.

3. Возможная связь между употреблением в пищу соевых продуктов ^ и распространенностью ряда заболеваний. Использование продуктов из сои в диетотерапии.

3.1. Злокачественные новообразования.

3.2. Атеросклероз.

3.3. Гипертоническая болезнь.

3.4. Ожирение.

3.5. Желчнокаменная болезнь.

3.6. Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки.

3.7. Алиментарная дистрофия.

3.8. Сахарный диабет.

Д 3.9. Болезни почек.

3.10. Пременопауза, менопауза и постменопаузальный синдром

3.11. Нейродегенеративные заболевания.

3.12. Детское питание.

Глава II. Материалы и методы исследования.

11.1. Материалы.

II. 1.1. Характеристика обследуемых больных.

11.2. Реактивы.

11.3. Методы исследования.

11.4. Статистическая обработка материала.

Глава III. Результаты собственных исследований и их обсуждение.

III. 1. Содержание белка, активность ингибитора трипсина, липидный состав, содержание некоторых антиоксидантов и продуктов ПОЛ в исследованных пищевых продуктов из сои.

III.2 Липидный состав, содержание некоторых антиоксидантов и продуктов ПОЛ в соевом и животном молоке.

III.3. Исследование антиокислительных свойств соевого молока в условиях in vivo при активации процессов ПОЛ у крыс введением СС14.

Глава III.4. Исследование эффективности добавки в диету соевого молока в комплексной терапии ИБС.

Глава III.5. Исследование влияния соевого молока и ацетата окоферола на содержание витамина Е, продуктов ПОЛ и липидный состав сыворотки крови у здоровых молодых людей.

Выводы.

Литературный указатель.

Список сокращений

АОА - антиокислительная активность

АОС - антиокислительная система апо-Е - апопротеин Е

БА - Ы-альфа-бензоил-Ь-аргинин

БАЭЭ - N-альфа-бензоил-Ь-аргинин этиловый эфир

Гл-6-Ф ДГ - глюкозо-6-фосфат дегидрогеназа

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ЛПВП - липопротеиды высокой плотности

ЛПВП-ХС - липопротеидов высокой плотности холестерин

ЛПНП - липопротеиды низкой плотности

ЛПНП-ХС - липопротеидов низкой плотности холестерин

ЛПОНП - липопротеиды очень низкой плотности

МДА - малоновый диальдегид

НАДФ+ - окисленный никотинамидадениндинуклеотид фосфат

НАДФН - восстановленный никотинамидадениндинуклеотид фосфат

Общий-ХС - общий холестерин сыворотки крови

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ТБК - тиобарбитуровая кислота

ТХУ - трихлоруксусная кислота

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

TNF alpha - фактор некроза опухолей, альфа фракция

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антиокислительные свойства соевых продуктов. Использование соевого молока для коррекции окислительного стресса и гиперлипидемий"

Эпидемиологические данные, результаты экспериментов, выполненных на животных, и клинических исследований свидетельствуют, что систематическое употребление в пищу продуктов из сои в значительной степени уменьшает риск возникновения весьма распространенных и грозных заболеваний. К числу болезней, в профилактике которых определенную роль могут сыграть соевые продукты, следует отнести некоторые формы злокачественных новообразований (Messina et al., 1998; Zhou, 2004; Omoni, Aluko, 2005), атеросклероз и ИБС (Тутельян. и соавт., 2002; Okamoto, Horisawa, 2006), гипертоническую болезнь (Yang et al., 2005), ожирение (Lee et al., 2000; Manzoni et al., 2005), холестериновую желчнокаменную болезнь (Белоновская, 1987; Белоновская, Кляшторная, 1992), язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (Бульон и соавт., 1997; Алексеенко и соавт., 2004), кишечные инфекции (Молочный и соавт., 2004), алиментарную дистрофию (Chandrasekhar, 2004), сахарный диабет (Мещерякова и соавт., 2002; Anderson et al., 1998), болезни почек (Рябов и соавт., 2001; Fair et al., 2004), и нейродегенеративные заболевания (Lee et al., 2005). Систематическое употребление в пищу продуктов из сои позволяет женщинам облегчить протекание климактерического периода (Cassidy et al., 2006) и предотвратить последующее за наступлением менопаузы размягчение костей - остеопороз (Messina et al., 2000). Ведущий специалист по использованию соевых продуктов с целью лечения и профилактики заболеваний М. Мессина рекомендует взрослым людям ежедневно получать в составе соевых продуктов 10-25г соевого белка и 30-100мг изофлавоноидов (Messina, Messina, 2003).

Благоприятное действие продуктов из сои на здоровье человека связывается, прежде всего, с эстрогенными и антиэстрогенными эффектами изофлавоноидов (Setchell, 1998; Barnes, 2004) и в меньшей степени с действием ингибиторов протеаз (Kennedy, 1998а; 1998b). В то же время, не уделяется должного внимания действию присутствующих в соевых бобах природных антиоксидантов, которое может обеспечивать эффективность продуктов из сои в предупреждении заболеваний, связанных с активацией процессов свободно-радикального окисления.

В связи с изложенным целью нашей работы явилось исследование антиокислительных свойств соевых продуктов и выяснение возможности использования соевого молока в качестве средства коррекции окислительного стресса и дислипопротеидемий.

Поставленная цель предопределила необходимость решения следующих конкретных задач:

1) исследовать химический состав соевых бобов и некоторых пищевых продуктов из сои, выпускаемых производителями Амурской области (соевая мука, тофу, соевое молоко), а именно, определить содержание белка, ингибитора трипсина, общих липидов, триглицеридов, фосфолипидов, стеринов, природных антиоксидантов (токоферолы, Р-каротины, аскорбиновая кислота), продуктов ПОЛ (диеновые конъюгаты, гидропероксиды);

2) провести сравнительное исследование состава липидов (общие липиды, триглицериды, фосфолипиды, жирнокислотный состав) содержания стеринов, антиоксидантов (токоферолы, (3-каротины, аскорбиновая кислота) и продуктов окислительной модификации липидов в соевом и коровьем молоке;

3) исследовать устойчивость к окислительной модификации и АОА соевого и коровьего молока в условиях in vitro;

4) исследовать АОА соевого молока в условиях in vivo при инициировании окислительного стресса в организме крыс введением СС14,. для чего определить в крови и в печени животных содержание продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов, гидроперекисей липидов, ТБК-реактивных продуктов), содержание и активность компонентов АОС (витамина Е, каталазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, церулоплазмина, антиокислительную активность и окисляемость сыворотки крови);

5) выяснить эффективность использования соевого молока в комплексной терапии больных ИБС как диетического средства для защиты от окислительного стресса и коррекции гиперлипидемии. Для этого определить в сыворотке крови больных при поступлении в стационар и по окончанию курса лечения содержание общего холестерина, ЛПВП-холестерина, триглицеридов, фосфолипидов диеновых конъюгатов, гидропероксидов, ТБК-реактивных продуктов, церулоплазмина, витамина Е, окисляемость и АОА сыворотки крови.

6) с целью ответить на вопрос - в какой мере антиоксидантный эффект соевого молока в условиях in vivo обусловлен присутствующими в его составе токоферолами провести сравнительное исследование антиоксидантного эффекта равных количеств токоферолов, поступающих в организм здоровых молодых людей в составе соевого молока и фармацевтического препарата ацетата токоферола. Научная новизна. В настоящей работе впервые предпринята попытка связать полезные для здоровья эффекты соевых продуктов с их антиокислительными свойствами. Показано, что продукты из сои характеризуются благоприятным липидным составом, а именно, высоким содержанием фосфолипидов, низким содержанием триглицеридов, высоким содержанием ПНЖК, особенно кислот омега-3 серии, а также высоким содержанием витамина Е. Впервые установлено, что соевое молоко устойчиво к окислительной модификации, проявляет высокую АОА в условиях in vitro и оказывает антиоксидантный эффект in vivo при введении крысам ССЦ. Впервые установлены антиоксидантный и гиполипидемический эффекты соевого молока при использовании его в комплексной терапии больных ИБС и показано, что гиполипидемический эффект соевого молока преимущественно выявляется у мужчин и при стенокардии, но не при инфаркте миокарда. Впервые показано, что в реализацию антиокислительного эффекта соевого молока в условиях in vivo значительный вклад вносит увеличение содержания витамина Е в крови.

Практическая значимость. В настоящей работе установлена возможность использования соевых продуктов в качестве средств коррекции окислительного стресса и показана эффективность использования соевого молока в комплексной терапии больных ИБС (патент на изобретение «Способ лечения дислипопротеидемий» № 2195949 от 10.01.2003г.). В более широком плане обоснована целесообразность широкого употребления в пищу продуктов из сои, как источника природных антиоксидантов, полезных для здоровья продуктов.

Внедрение. Настоящая работа явилась частью исследований, выполненных в период 1999-2001гг. в рамках областной целевой программы «Пищевые продукты из сои как средства профилактики и лечения сердечно-сосудистых, онкологических и других заболеваний», профинансированной из областного бюджета. По итогам конкурса Дальневосточной межрегиональной выставки-ярмарки "АГРОПРОД-2002" на лучшую научно-техническую разработку автор работы в числе других участников реализации программы награжден Золотой медалью и Дипломом за разработку и внедрение указанной областной целевой программы.

По результатам настоящей работы создано и издано методические пособие «Применение соевых напитков в качестве средств диетотерапии при лечении и профилактике ишемической болезни сердца»,

Благовещенск (2002), получен патент на изобретение «Способ лечения дислипопротеидемий» № 2195949 от 10.01.2003г.

Способ лечения дислипопротеидемий с использованием соевых продуктов внедрен в практику работы кардиологического отделения 1-ой муниципальной больницы г. Благовещенска.

Основные результаты настоящей работы, вытекающие из них положения и выводы, используются в учебном процессе на ряде теоретических и клинических кафедр АГМА.

Апробация работы. Результаты настоящего исследования доложены и обсуждены на международном симпозиуме «Питание 21 века: медико-биологические аспекты, пути оптимизации», Владивосток (1999), международном симпозиуме «актуальные вопросы кардиологии», Томск (200), 8-ом и 9-ом Российско-Японских международных медицинских симпозиумах, Благовещенск (2000), Канадзава (2001), Китайско-Российском фармацевтическом форуме «Исследование лекарств, используемых в традиционной терапии», Харбин (2004).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Аксенова, Татьяна Валерьевна

Выводы

1. Особенности липидного состава соевых продуктов (высокое содержание фосфолипидов, низкое содержание триглицеридов, высокое содержание ПНЖК и особенно кислот омега-3 серии) и высокое содержание антиоксиданта - витамина Е позволяют рекомендовать эти продукты в качестве средств защиты от окислительного стресса и коррекции гиперлипидемий.

2. Соевое молоко устойчиво к окислению и проявляет высокую АОА в

I условиях in vitro при инициировании ПОЛ в модельной системе.

3. Соевое молоко оказывает антиоксидантный эффект при введении крысам ССЦ, что проявляется частичным предотвращением накопления ТБК-реактивных продуктов и снижения активности каталазы и церулоплазмина, содержания витамина Е в печени, частичным предотвращением снижения активности каталазы, Гл-6-Ф ДГ и АОА крови, увеличением содержания витамина Е в крови.

4. Соевое молоко проявляет антиоксидантный и гиполипидемический эффекты при использовании его в комплексной терапии больных ИБС, о чем свидетельствует:

I • уменьшение окисляемости липидов плазмы крови, снижение содержания в крови продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов и гидроперекисей, увеличение содержания витамина Е; • уменьшение содержания общего холестерина плазмы крови и индекса атерогенности.

5. Эффективность соевого молока в комплексной терапии больных ИБС зависит от пола пациентов и нозологической формы болезни. Гиполипидемический эффект соевого молока преимущественно выявляется у мужчин и при стенокардии, но не при инфаркте миокарда.

В реализацию антиокислительного эффекта соевого молока в условиях in vivo значительный вклад вносит увеличение содержания витамина Е в крови при приеме соевого молока.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Аксенова, Татьяна Валерьевна, Благовещенск

1. Алексеенко С.А., Крапивная О.В., Колтунов С.С. Использование соевого напитка «Нарине» в комплексной терапии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // Дальневосточный медицинский журнал. 2004. - №3. - С.72-73.

2. Балкина А.С., Селищева А.А., Сорокоумова Г.М., Ларионова Н.И. Взаимодействие нативного соевого ингибитора протеаз Боумана-Бирка и его гидрофобных производных с многослойными липосомами из соевых фосфолипидов // Биохимия. 2006. - Т.71. -№1. - С.84-89.

3. Белоновская Л.К. Влияние соевой диеты на химизм желчи у больных желчно-каменной болезнью // Здравоохранение Таджикистана. -1987. №6. - С.40-41.

4. Белоновская Л.К., Кляшторная О.С. Влияние соевых отрубей на спектр желчных кислот больных ЖКБ // Вопросы питания. 1992. -№4.-С. 15-17.

5. Бородин Е.А., Аксенова Т.В., Анищенко Н.И. Пищевые продукты из сои. Новая роль // Вестник ДВО РАН. 2000. - N 5. - С.72-85.

6. Бородин Е.А., Арчаков А.И., Лопухин Ю.М. Теоретическое обоснование использования ненасыщенных фосфолипидов для восстановления структуры и функции поврежденных биологических мембран // Вест. АМН СССР. 1985. - Вып.З. - С.84-90.

7. Бородин Е.А., Бородина Г.П., Доровских В.А и др. Перекисное окисление липидов в мембранах эритроцитов и микросом печени и антиокислительная система тканей крыс при длительном действии холода // Биологические мембраны. 1992. - Т.9. - №6. - С. 622-627.

8. Бородин Е.А., Бородина Г.П., Штарберг М.А. и др. Исследование влияния питательные соевых коктейлей и витамина Е набиохимические показатели крови у здоровых молодых людей // Дальневосточный медицинский журнал. 2003. - №3. - С. 14-17.

9. Бородин Е.А., Ланио М.Э., Маркин С.С. и др. Извлечение холестерина из теней эритроцитов фосфолипидами // Вопр. мед. химии. 1984. - Т. 2. - С.75-77.

10. Ю.Бульон В.В., Хныченко Л.К., Заводская И.С. и др. Использование диет, содержащих соевые белки, при терапии хронической язвы желудка // Вопросы питания. 1997. - № 4. - С.39-42.

11. Бульон В.В., Хныченко Л.К., Малышкин К.А. и др. Использование диет, включающие соевые продукты, при лечении экспериментальной алиментарной дистрофии // Вопросы питания. -1996. -№3.- С. 38-40.

12. Васьковский В.Е. Липиды // Соросовский образовательный журнал.- 1997. №3. - С.32-37.

13. З.Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 320 с.

14. Н.Высоцкий В.Г., Зилова И.С., Роль соевых белков в питании человека // Вопросы питания. 1995. - №5. - С.20-27.

15. Высоцкий В.Г., Яцышина Т.А., Каламкарова О.М. и др. Перспектива использования новых низкокалорийных продуктов на основе изолята соевого белка в профилактике и лечении обменных заболеваний // Вопросы питания. 1989. - №1. - С.25-28.

16. Григорьян О.Н., Луняков А.С., Ушаков В.В. и др. Использование специализированного продукта на основе сои в диетотерапии пищевой аллергии // Вопросы питания. 1995. - № 3. - С. 21-23.

17. Дербенева С.А., Погожева А.В., Васильев А.В. и др., Использование антиоксидантов с целью коррекции факторов коронарного риска у больных ишемической болезнью сердца // Вопросы питания. 2003.- №4. С. 17-20.

18. Ильинский Б.В. Профилактика, ранняя диагностика и лечение атеросклероза. Москва.: «Медицина», 1977. - 167 с.

19. Каламкарова О.М., Яцышина Г.А., Мещерякова В.А. и др. Влияние белков рациона на уровень холестерина крови // Вопросы питания. -1991.-№3.-С. 35-43.

20. Капрельянц Л.В., Киселев С.В., Иоргачева Е.Г. Изофлавоны сои и перспективы их терапевтического применения // Вопросы питания. -2003. №4. - С.36-41.

21. Кейтс М. Техника липидологии. М.: Мир, 1975. - 321 с.

22. Киреев Г.В., Наврузов С.Н., Юсупова А.А. и др. Изучение противоопухолевого действия соевых белков в эксперименте // Вопросы онкологии. 2004. - Т. 50. - №1. - С. 101-102.

23. Кисилевич Р.Ш., Скварко С.И. Об определении витамина Е в крови // Лабораторное дело 1972. №8. - С.473-475.

24. Климов А.Н. Опасно ли иметь в крови низкий холестерин или снижать его до низкого уровня? // Кардиология 1997. №9. - С.4-9.

25. Колб В.Г., Камышников B.C. Клиническая биохимия, М.: Минск, 1976.,-312 с.

26. Королюк М.Д., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Метод определения каталазы //Лабораторное дело. 1988. - №1. - С. 16-18.

27. Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.А. и др. Холестериноз. Холестерин биологических мембран. Теоретические и клинические аспекты М.: Медицина, 1983. - 352 с.

28. Ляпков Б.Г., Т.А. Яцышина, И.Ю. Федотова, О.М. Каламкарова Клинико-экспериментальные подходы к изучению гипохолестеринемического действия белков сои // Вопросы питания.- 1986. №2. - С.39-43.

29. Мансуров Х.Х., Рычагов Г.П., Курбанова М.А. и др., Влияние соевой муки на некоторые показатели функционального состояния желудка и регенерацию язвы у больных язвенной болезнью 12-перстной кишки // Клиническая медицина. 1988. - №7. - С.74-77.

30. Мещерская К.А., Бородина Г.П. Влияние бета-ситостерина на течение экспериментального атеросклероза у крыс и кроликов // Фармакология и токсикология. 1959. - N 5. - С.23-34.

31. Мещерякова В.А., Плотникова О.А., Шарафетдинов Х.Х. и др., Использование комбинированных продуктов с включением соевого белка в диетотерапии больных сахарным диабетом 2 типа // Вопросы питания. 2002. - №5. - С. 19-24.

32. Мещерякова В.А., Самсонов М.А., Парамонова Э.Г. и др. Значение качественного состава пищевых белков в диетотерапии больных ИБС // Вопросы питания. 1985. - №6. - С.3-8.

33. Мещерякова В.А., Шарафетдинов Х.Х., Плотникова О.А. и др. Клиническая оценка эффективности текстурированных соевых продуктов в диетотерапии больных ИНСД // Проблемы эндокринологии. 1999. - Т. 45. - №2. - С.6-9.

34. Молочный В.П., Заварцева Л.И., Тимохина Л.М. и др. Применение «Нарине» и «Бифисоина» в комплексной терапии острых кишечных инфекций у детей // Дальневосточный медицинский журнал. 2004.- №3. С. 74-75.

35. Моссе Дж., Перноле Дж. К. Запасные белки семян бобовых // Химия и биохимия бобовых / Ред. М.Н. Запрометов. М.: Агропромиздат, 1986. С. 213-248.

36. Мясников A.JI. Атеросклероз. Медгиз, Москва, 1960. - 443 с.

37. Нартикова В.Ф., Пасхина Т.С. Определение антитриптической активности в сыворотке крови человека // Современные методы в биохимии (Орехович В.Н. ред.). - М.: Медицина, 1977. - С. 188191.

38. Пересадина В.Р., Дмитриевская М.Н., Мальцев Г.Ю. и др. Использование пищевых антиоксидантов в коррекции метаболических нарушений у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями // Вопросы питания. 2004. - №3. - С.3-6.

39. Погожева А.В., Дербенева С.А., Павлючкова М.С. и др. Использование соевых белковых изолятов в коррекции факторов коронарного риска у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями // Вопросы питания. 2002. - №2. - С. 16-19.

40. Романова Л.А., Стальная И.Д. Метод определения гидроперекисей липидов с помощью тиоционата аммония // Современные методы в биохимии (Орехович В.Н. ред.). - М.: Медицина, 1977. - С.64-66.

41. Рябов С.И., Кучер А.Г., Григорьева Н.Д. и др. Влияние различных режимов малобелковой диеты на прогрессирование хронической почечной недостаточности и показатели состояния питания на додиализном этапе // Терапевтический архив. 2001. - №6. - С. 10-15.

42. Стальная И.Д. Метод определения диеновой коньюгации ненасыщенных высщих жирных кислот // Современные методы в биохимии. (Орехович В.Н. ред.). - М.: Медицина, 1977. - С.63-64.

43. Тутельян В.А., Павлючкова М.С., Погожева А.В. и др., Изучение метаболизма изофлавонов сои у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями // Вопросы питания. 2002. - №4. - С.20-22.

44. Тутельян В.А., Павлючкова М.С., Погожева А.В. и др., Применение фитоэстрогенов в медицине // Вопросы питания. 2003. - №2. - С.48-53.

45. Эндакова Э.А., Новгородцева Т.П., Светашев В.И. Модификация состава жирных кислот крови при мердечно-сосудистых заболеваниях. Владивосток: Дальнаука, 2002. - 296 с.

46. Agostoni С., Axelsson I., Goulet О. et al. Soy Protein Infant Formulae and Follow-On Formulae: A Commentary by the ESPGHAN Committee on Nutrition // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2006. - Vol.42, N4. -P.352-361.

47. Adlercreutz H., Mazur W. Phyto-oestrogens and Western diseases // Ann. Med. 1997. - Vol.29. - P.95-120.

48. Albertazzi P, Pansini F, and Bonaccorsi G, et al. The effect of dietary soy supplementation on hot flushes // Obstetrics & Gynecology. 1998. -Vol.91.-Nl.-P.6-ll.

49. Allison D.B., Gadbury G., Schwartz L.G. et al. A novel soy-based meal replacement formula for weight loss among obese individuals: a randomized controlled clinical trial // Eur J Clin Nutr. 2003. - N4. -P.514-522.

50. Anderson J.J., Anthony, M.S., Cline, J.M. et al. Health potential of soy isoflavones for menopausal women. // J. Public Health Nutr. 1999. -Vol2, N4. - P.489-504.

51. Anderson G.W., Blake J.E., Turner J. Et al. Effects of soy protein on renal function and proteinuria in patients with type 2 diabetes // Am. J. Clin. Nutr. 1998. Vol.68, N6. - P.1347-1353.

52. Anderson R.L., Wolf W.J. Compositional changes in tripsin ingibitors, phytic acid, saponins and isoflavones related to soybean processing // J. Nutr. 1995. Vol.125, N3. - P.581-588.

53. Anthony M.S. Soy and cardiovascular disease: cholesterol lowering and beyond. // J. Nutr. 2000.- Vol.130, N3, - P 662-663.

54. Atkinson С., Frankenfeld C.L., Lampe J.W. Gut bacterial metabolism of the soy isoflavone daidzein: exploring the relevance to human health // Exp. Biol. Med. (Maywood). 2005. - Vol.230, N3. - P. 155-170.

55. Azcoitia I., Moreno A., Carrero P. et al. Neuroprotective effects of soy phytoestrogens in the rat brain // Gynecol. Endocrinol. 2006. - Vol.22, N2. - P.63-69.

56. Badger T.M., Ronis M.J., Simmen R.C., Simmen F.A. Soy protein isolate and protection against cancer J. Am. Coll. Nutr 2005. - Vol.24, N2. P.146S-149S.

57. Barja de Quiroga G. Brown fat thermogenesis and exercise: two examples of physiological oxidative stress? // Free Radic Biol Med. 1992 - V.13, N4. - P.325-340.

58. Barnes S. Soy isoflavones phytoestrogens and what else? // J Nutr. -2004. - N5. - P.1225-1228.

59. Barnes S. The chemopreventive properties of soy isoflavonoids in animal models of breast cancer // Breast Cancer Res. Treat. 1997. Vol.46. -P. 169-179.

60. Bingham S.A., Atkinson C., Liggins J. et al. Phyto-oestrogenens: where are we now? // Br. J.Nutr. 1998. Vol.79. - P.393-406.

61. Birk Y.T. The Bowman-Birk inhibitor. Trypsin- and chymotrypsin-inhibitor from soybeans. // Int. J. Pept. Protein. Res. 1985. Vol25, N2. -P 113-131.

62. Boersma, В J., Barnes, S., Kirk, M. et al. Soy isoflavonoids and cancer -metabolism at the target site // J. Mutat. Res. 2001. - Vol.480-481. -P.121-127.

63. Borodin E.A. & Lopukhin Yu.M. .Physicochemical basis for phospholipid therapy in the management of cholesterosis // Soviet Medicine Reviews. Section B. Physicochemical Aspects of Medicine.

64. Ed. by Yu.M. Lopukhin. London: Harwood Academic Publishers GmbH, 1987. - Vol.1. P.205- 253.

65. Brandi M.L. Natural and syntetic isoflavones in the prevention and treatment of chronic diseases // Calcif. Tissue Int. 1997. Vol.61. - P.5-8.

66. Brandon D.L., Friedman M. Immunoassays of soy proteins // J. Agric. Food Chem. 2002. - Vol.50, N22. - P.6635-6642.

67. Bricarello L.P., Kasinski N., Bertolami M.C. et al. Comparison between the effects of soy milk and non-fat cow milk on lipid profile and lipid peroxidation in patients with primary hypercholesterolemia // Nutrition. -2004. N2. - P.200-204.

68. Bryant M., Cassidy A., Hill C. et al. Effect of consumption of soy isoflavones on behavioural, somatic and affective symptoms in women with premenstrual syndrome // Br. J. Nutr. 2005. - Vol.93, N5. P.713-719.

69. Bu L, Lephart ED. Soy isoflavones modulate the expression of BAD and neuron-specific beta III tubulin in male rat brain // Neurosci. Lett. 2005. -Vol.385, N2. -P.153-157.

70. Businco L., Bruno G., Giampietro P.G. Soy protein for the prevention and treatment of children with cow-milk allergy // Am. J. Clin. Nutr. 1998. Vol.68, N6.-P.1447-1452.

71. Campagnoli C., Abba C., Ambroggio S. et al. Polyunsaturated fatty acids (PUFAs) might reduce hot flushes: an indication from two controlled trials on soy isoflavones alone and with a PUFA supplement // Maturitas. 2005. - Vol.51, N2. - P. 127-134.

72. Cantani A., Lucenti P. Natural history of soy allergy and/or intolerance in children, and clinical use of soy-protein formulas // Pediatr. Allergy. Immunol. 1997. - Vol.8, N2. - P.59-74.

73. Cardoso J.R., Bao S.N. Effects of chronic exposure to soy meal containing diet or soy derived isoflavones supplement on semenproduction and reproductive system of male rabbits // Anim. Reprod. Sci. 2006. - Mar 10; Epub ahead of print.

74. Caron, M.F., White, C.M. Evaluation of the antihyperlipidemic properties of dietary supplements // Pharmacotherapy. 2001. - Vol.21, N4. -P.481-487.

75. Cartagena A.M. Soy protein: the next antihypertensive agent? // CMAJ. -2005. Vol.173, -N5. - )P.486.

76. Cassidy A., Albertazzi P., Lise Nielsen I. et al. Critical review of health effects of soyabean phyto-oestrogens in post-menopausal women // Proc. Nutr. Soc. 2006. - Vol.65, N1. - P.76-92.

77. Castiglioni S., Manzoni C., D'Uva A. Soy proteins reduce progression of a focal lesion and lipoprotein oxidiability in rabbits fed a cholesterol-rich diet // Atherosclerosis. 2003. - Vol.172, N12. - P.163-170.

78. Chacko B.K., Chandler R.T., Mundhekar A. et al. Revealing antiinflammatory mechanisms of soy isoflavones by flow: modulation of leukocyte-endothelial cell interactions // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. -.2005. Vol.289, N2. P.H908-915.

79. Chandrasekhar U. Soy proteins an ideal functional food for growth promotion // Asia Рас J Clin Nutr. - 2004. - N13. - P.l 18.

80. Chen A, Rogan WJ. Isoflavones in soy infant formula: a review of evidence for endocrine and other activity in infants // Annu Rev Nutr. -2004. N24. - P.33-54.

81. Chen S.W., Zhang L.S., Zhang H.M. et al. Effect of soy isoflavone on gene expression of leptin and insulin sensibitity in insulin-resistant rats // Beijing Da Xue Xue Bao. 2006. Vol.38, N2. - P. 197-200.

82. Cheng S.Y., Shaw N.S., Tsai K.S., Chen C.Y. The hypoglycemic effects of soy isoflavones on postmenopausal women J. Womens Health (Larchmt). - 2004. - Vol.13, N10. - P.1080-1086.

83. Chorazy, P.A., Himelhoch, S., Hopwood, N.J. et al. Persistent hypothyroidism in an infant receiving a soy formula: case report and review of the literature // J.Pediatrics. 1995. - Vol.96, N1. - P.148-150.

84. Chua R., Anderson K., Chen J., Ни M. Quality, labeling accuracy, and cost comparison of purified soy isoflavonoid products // J. Altern. Complement. Med. 2004. - Vol. 10, N6. - P. 1053-1060.

85. Cicero AF, Minardi M, Mirembe S. Effects of a new low dose soy protein/beta-sitosterol association on plasma lipid levels and oxidation // Eur. J. Nutr. 2004. - Vol.5, N8. - P.319-322.

86. Clawson G.A. Protease Inhibitors and Carcinogenesis A Review // Cancer Invest. - 1996. - Vol.14. - P.597-608.

87. Craig W.J. Phytochemicals: guardians of our health // J. Am. Diet. Assoc. 1997.-Vol.97.-P. 199-204.

88. Cupisti A., D'Alessandro C., Ghiadoni L. et al. Effect of a soy protein diet on serum lipids of renal transplant patients // J. Ren. Nutr. 2004. -Vol.14,N1.-P.31-35.

89. Davis J., Iqbal M.J., Steinle J. et al. Soy protein influences the development of the metabolic syndrome in male obese ZDFxSHHF rats // Horm. Metab. Res. 2005a. - Vol.37, N5. - P.316-325.

90. Davis J, Steinle J, Higginbotham D.A. et al. Soy protein influences insulin sensitivity and cardiovascular risk in male lean SHHF rats // Horm. Metab. Res. 2005b. - Vol.37, N5. -P.309-315.

91. Deibert P., Konig D., Schmidt-Trucksaess A. et al. Weight loss without losing muscle mass in pre-obese and obese subjects induced by a high-soy-protein diet // Int. J. Obes. Relat Metab. Disord. 2004. - Vol. 28, N10. - P.1349-1352.

92. De Lemos, M.L. Effects of soy phytoestrogens genistein and daidzein on breast cancer growth // J. Ann. Pharmacother. 2001. - Vol.35, N9. -P.l 118-1121.

93. De Lumen BO. Lunasin: a cancer-preventive soy peptide Nutr. Rev. -2005.-Vol.63, N1.-P.16-21.

94. Demonty I, Lamarche B, Jones' PJ. Role of isoflavones in the hypocholesterolemic effect of soy // Nutr. Rev. 2003. - Vol.61, N1. -P. 189-203.

95. Den Tonkelaar I., Keinan Boker L., Veer P.V. et al. Urinary phytoestrogens and postmenopausal breast cancer risk // J.Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2001. - Vol.10, N3. - P 223-228.

96. Desroches S., Mauger J.F., Ausman L.M. et al. Soy protein favorably affects LDL size independently of isoflavones in hypercholesterolemic men and women. 2004. - Vol.134, N3. - P.574-579.

97. Djuric Z., Chen, G., Doerge D.R. et al. Effect of soy isoflavone supplementation on markers of oxidative stress in men and women // J. Cancer Lett. -2001. Vol 172, N1. - P 1-6.

98. Dunn A.V. Incorporating soy protein into a low-fat, low-cholesterol diet // J. Cleve Clin J. Med. 2000. - Vol67, N10. - P.767-772.

99. Engelman H.M., Alekel D.L., Hanson L.N. et al. Blood lipid and oxidative stress responses to soy protein with isoflavones and phytic acid in postmenopausal women // Am. J. Clin. Nutr. 2005. - Vol.81, N3. -P.590-596.

100. Espinosa-Martos I., Ruperez P. Soybean oligosaccharides. Potential as new ingredients in functional food. // Nutr. Hosp. 2006. -Vol.21, N1. - P.92-96.

101. Etcheverry P., Hawthorne K.M., Liang L.K. et al. Effect of beef and soy proteins on the absorption of non-heme iron and inorganic zinc in children. J. Am. Coll. Nutr. // 2006. Vol.25, N1. - P.34-40.

102. Exner M., Hermann, M., Hofbauer R. Et al. Genistein prevents the glucose autoxidation mediated atherogenic modification of low density lipoprotein //J. Free Radic. Res. 2001. - Vol34, N1. - P 101-112.

103. File S.E., Hartley D.E., Elsabagh S. et al. Cognitive improvement after 6 weeks of soy supplements in postmenopausal women is limited to frontal lobe function // Menopause. 2005. - Vol.12, N2. - P. 193-201.

104. Fair D.E., Ogborn M.R., Weiler H.A. et al. Dietary soy protein attenuates renal disease progression after 1 and 3 weeks in Han:SPRD-cy weanling rats // J. Nutr. 2004. - Vol.134, N1. - P.1504-1507.

105. Faqi AS, Johnson WD, Morrissey RL, et. al. Reproductive toxicity assessment of chronic dietary exposure to soy isoflavones in male rats // Reprod Toxicol. 2004. - Vol. 18, N1. - P.605-611.

106. Final report of the amended safety assessment of PEG-5, -10, -16, -25, -30, and -40 soy sterol // Int. J. Toxicol. 2004. - 23 Suppl. 2 -P.23S-47S.

107. Forsythe W.A. Soy protein, thyroid regulation and cholesterol metabolism // J. Nutr. 1995. - Vol.25, N3. - P.619-623.

108. Franzon R., Chiarani F., Mendes R.H. et al. Dietary soy prevents brain (Na, K)-ATPase reduction in streptozotocin diabetic rats // Diabetes Res. Clin. Pract. 2005. - Vol.69, N2. - P. 107-112.

109. Gardner C.D., Messina M., Lawson LD., et. al. Soy, garlic, and ginkgo biloba: their potential role in cardiovascular disease preventionand treatment // Curr. Atheroscler Rep. 2003. - Vol.5, N11. - P.468-475.

110. Garrido A., De la Maza M.P., Hirsch S., Valladares L. Soy isoflavones affect platelet thromboxane A(2) receptor density but not plasma lipids in menopausal women // Maturitas. 2006. - Jan 13; Epub ahead of print.

111. Giampietro P.G., Bruno G., Furcolo G. et al. Soy protein formulas in children: no hormonal effects in long-term feeding // J. Pediatr. Endocrinol. Metab. 2004. - Vol. 17, N2. - P. 191 -196.

112. Goddard I.W. Soy-induced brain atrophy? // J. Anti Aging Med. -2003. Vol.6, N4. - P.335-336.

113. Golbitz, P. Traditional soyfoods: processing and products // J. Nutr. 1995. - Vol.125, N3. - P.570-572.

114. Gunstone F.D. Soy (soya) bean oil // Encyclopedia of food sciences and nutrition / Ed. by B. Caballero. Amstrdam: Acad. Press, 2003. P.5375-5379.

115. He J., Gu D., Wu X. et al. Effect of soybean protein on blood pressure: a randomized, controlled trial. // Ann. Intern. Med. 2005. -Vol.143, Nl.-P.l-9.

116. Head K.A. Ipriflavone: an important bone-building isoflavone // Altern. Med. Rev. 1999. - Vol.4. - P. 10-22.

117. Hellerstein M. T. Antimitotic peptide characterized from soybean: role in protection from cancer? // J. Nutr. Rev. 1999. - Vol.57, N11. - P 359-361.

118. Hermansen K, Dinesen B, Hoie LH, et. al. Effects of soy and other natural products on LDL:HDL ratio and other lipid parameters: a literature review // Adv. Ther. 2003. - N1. - P.50-78.

119. Hermansen K., Hansen В., Jacobsen R. Et al. Effects of soy supplementation on blood lipids and arterial function inhypercholesterolaemic subjects // Eur. J. Clin. Nutr. 2005. - Vol.59, N7. -P. 843-850.

120. Hillnjan G.G., Forman Sarkar, F.H. et al. Genistein potentiates the radiation effect on prostate carcinoma cells // J. Clin. Cancer Res. 2001.- Vol.7, N2. P.382-390.

121. Hilpert KF, Kris-Etherton PM, West SG. Lipid response to a low-fat diet with or without soy is modified by C-reactive protein status in moderately hypercholesterolemic adults // J. Nutr. 2005. - Vol.135, N5/- P.1075-1079.

122. Hirose K., Imaeda N., Tokudome Y. Soybean products and reduction of breast cancer risk: a case-control study in Japan // Br. J. Cancer 2005. - Vol. 11, Vol.93, N1. - P. 15-22.

123. Ho S.Y., Schooling M., Hui L.L. Soy consumption and mortality in Hong Kong: Proxy-reported case-control study of all older adult deaths in 1998 -// Prev. Med. 2006. - Apr. 20. - Epub ahead of print.

124. Hodgson J.M., Puddey I.B., Beilin L.J et al. Supplementation with isoflavonoid phytoestrogens does not alter serum lipid concentrations: A randomized controlled trial in humans // J. Nutr. 1998. - Vol.128, N4. -P.728-732.

125. Hoie L.H., Graubaum H.J., Harde A. et al. Lipid-lowering effect of 2 dosages of a soy protein supplement in hypercholesterolemia // Adv. Ther. 2005. - Vol.22, N2. - P. 175-86.

126. Horiuchi T. Soy protein intake and bone mineral density // Clin. Calcium. 2005. - Vol.15, N9. -P.1507-1513.

127. Huang Y, Cao S, Nagamani M et al. Decreased circulating levels of tumor necrosis factor-alpha in postmenopausal women during consumption of soy-containing isoflavones J. Clin. Endocrinol. Metab.- 2005. Vol.90, N7. P.3956-3962.

128. Humfrey C.D. Phytoestrogens and human health effects: weighing up the current evidence // Nat. Toxins. 1998. - Vol.6. - P.51-59.

129. Hutchins A.M., Mclver I.E., Johnston C.S. Soy isoflavone and ascorbic acid supplementation alone or in combination minimally affect plasma lipid peroxides in healthy postmenopausal women // J/ Am/ Diet Assoc. 2005a. - Vol.105, N7. - P.l 134-1137.

130. Hutchins AM, Mclver IE, Johnston CS. Hypertensive crisis associated with high dose soy isoflavone supplementation in a postmenopausal woman: a case report // BMC Womens Health. 2005b. -Vol.23.-P., N5.-P9.

131. Iritani N., Sugimoto N., Fukuda H. et al. Dietary Soybean Protein Increases Insulin Receptor Gene Expression in Wistar Fatty Rats when Dietary Polyunsaturated Fatty Acid Level Is Low // J. Nutr. 1997. -Vol.127, N6. - P.1077-1083.

132. Jaffe W.G., Planchert A., Paez-Pumar J.I. et al. New studies on the toxic factor of raw beans (Faseolus vulgaris) // Arch. Venez. Nutr. 1955.- Vol.6.-P.195-205.

133. Jayne-Williams D.J., Burgess C.D. Further observation on the toxicity of navy beans (Faseolus vulgaris) for Japanese quail (Coturnix japonica) // J. Appl. Bacteriol. 1974. - Vol.37. - P.149-169.

134. Jochum M., Machleidt W., Fritz H. Proteolysis-induced pathomechanisms in acute inflammation and related therapeutic approaches // Agents. Actions. Suppl. 1993. - Vol.42. - P.51-69.

135. Jones P.J, Ntanios F. Comparable efficacy of hydrogenated versus nonhydrogenated plant sterol esters on circulating cholesterol levels in humans //Nutr. Rev. 1998. - Vol.56, N8. - P.245-248.

136. Kanazawa Т., Osanai Т., Zhang X.S. et al. Protective effects of soy protein on the peroxidizability of lipoproteins in cerebrovascular diseases //J. Nutr. 1995. - Vol.125, N3. - P.639-646.

137. Kawakami Y., Tsurugasaki W., Yoshida Y. et al. Regulative actions of dietary soy isoflavone on biological antioxidative system and lipid metabolism in rats // J. Agric. Food Chem. 2004. Vol.24, N3. -P.1764-1768.

138. Kayden H., Traber M. Absorption, lipoprotein transport, and regulation of plasma concentrations of vitamin E in humans // J. Lipid Res. 1993. Vol. 34. - P.343-358.

139. Kennedy A.R. Chemopreventive agents: protease inhibitors // Pharmacol. Ther. 1998a. - Vol.78. - P. 167-209.

140. Kennedy A.R. The Bowman-Birk inhibitor from soybeans as anticarcinogenic agent // Am. J. Clin. Nutr. 1998b. - Vol.68, N6. -P.1406-1412.

141. Kerwin SM. Soy saponins and the anticancer effects of soybeans and soy-based foods // Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents. 2004. -Vol.4, N5. - P.263-272.

142. Khan N., Sultana S. Abrogation of potassium bromate-induced renal oxidative stress and subsequent cell proliferation response by soy isoflavones in Wistar ats. // Toxicology. 2004. - Vol.201, N9. - 173184.

143. Khan N., Sultana S. Induction of renal oxidative stress and cell proliferation response by ferric nitrilotriacetate (Fe-NTA): diminution by soy isoflavones // Chem. Biol. Interact. 2004. - Vol.149, N8. - P.23-35.

144. Kikuchi Y., Shimamura Y., Hirokado M. et al. Daily intake of isoflavones based on the market basket method // Shokuhin Eiseigaku Zasshi. 2001. - Vol.42, N2. - P. 122-127.

145. Kim H., Peterson T.G., Barnes S. Mechanisms of action of the soy isoflavone genistein: emerging role for its effects via transforming growth factor beta signaling pathways // Am. J. Clin. Nutr. 1998. - Vol.68, N6. -P.1418-1425.

146. Kim H., Xia, H., Li, L., Gewin J. Attenuation of neurodegeneration-relevant modifications of brain proteins by dietary soy // Biofactors. 2000. - Vol.12, N1. - P.243-250.

147. Koba K, Liu JW, Bobik E Jr et al. Effect of phytate in soy protein on the serum and liver cholesterol levels and liver fatty acid profile in rats. Biosci Biotechnol Biochem. 2003. - Vol.67, N1. - P. 15-22.

148. Kobayashi H., Yoshida R., Kanada Y. et al. Suppression of lipopolysaccharide-induced cytokine production of gingival fibroblasts by a soybean, Kunitz trypsin inhibitor J. Periodontal Res. - 2005a. -Vol.40, N6.-P.461-468.

149. Kobayashi H., Yoshida R., Kanada Y. et al. A soybean Kunitz trypsin inhibitor reduces tumor necrosis factor-alpha production in ultraviolet-exposed primary human keratinocytes Exp. Dermatol. -2005b. - Vol.14, N10. - P.765-774.

150. Kobayashi H., Yoshida R., Kanada Y. et al. Dietary supplementation of soybean kunitz trypsin inhibitor reduceslipopolysaccharide-induced lethality in mouse model // Shock. 2005c. -Vol.23, N5. -P.441-447.

151. Koeppel M.C., Sayag J. Proteolytic enzymes and their inhibitors // Allerg. Immunol. Paris. 1993. - Vol.25, N7. - P.286-288.

152. Kok L., Kreijkamp-Kaspers S., Grobbee D.E. et al. A randomized, placebo-controlled trial on the effects of soy protein containing isoflavones on quality of life in postmenopausal women // Menopause. -2005. Vol. 12, N. 1. - P.56-62.

153. Lee C.Y., Isaac H.B., Wang H. et al. Cautions in the use of biomarkers of oxidative damage; the vascular and antioxidant effects of dark soy sauce in humans. Biochem Biophys Res Commun // 2006. Apr 20; Epub ahead of print.,

154. Lee M., Kim I. Soy protein and obesity // Nutrition. 2000. -Vol.16,N6.-P. 459-460.

155. Lee Y.B., Lee H.J., Sohn H.S. Soy isoflavones and cognitive function // J. Nutr. Biochem. 2005. - Vol.16, N11. - P.641-649.

156. Lichtenstein A.H. Soy protein, isoflavones and cardiovascular diseasese risk//J. Nutr. 1998. - Vol.128. - P. 1589-1592.

157. Liener I.E., Implications of antinutritional components in soybean foods // J. Crit .Rev. Food. Sci. Nutr. 1994. - Vol.34, N1. - P.31-67. -P.213-248.

158. Lin Y, Meijer GW, Vermeer MA, Trautwein EA. Soy protein enhances the cholesterol-lowering effect of plant sterol esters in cholesterol-fed hamsters // J. Nutr. 2004. - Vol.134, N1. - P. 143-148.

159. Liu J., Chang S.K., Wiesenborn D. Antioxidant properties of soybean isoflavone extract and tofu in vitro and in vivo // J/ Agric/ Food Chem. 2005. - Vol.53, N6. - P.2333-2340.

160. Lonnerdal В., Nutritional aspects of soy formula // Acta Paediatr. -1994.-Vol.402.-P.105-108.

161. Lukaczer D., Deann J.L., Lerman R.H. et al. Effect of a low glycemic index diet with soy protein and phytosterols on CVD risk factors in postmenopausal women // Nutrition. 2006. - Vol.22, N2. -P.104-113.

162. Lusas, E.W., Riaz, M.N. Soy protein products: processing and use // J. Nutr. 1995.- Vol.125, N3. - P.573-580.

163. Lutchman D., Pillay S., Naidoo R. et al. Evaluation of the buffering capacity of powdered cow's, goat's and soy milk and non-prescription antacids in the treatment of non-ulcer dyspepsia. // S. Afr. Med. J. 2006. -Vol.96, N1.-P.57-61.

164. Ma Y., Chiriboga D., Olendzki B.C. et. Effect of soy protein containing isoflavones on blood lipids in moderately hypercholesterolemic adults: a randomized controlled trial // J. Am. Coll. Nutr. -.2005. Vol.24, N4. - P. 275-85.

165. MacDonald R.S., Guo J., Copeland J. Environmental influences on isoflavones and saponins in soybeans and their role in colon cancer J. Nutr. - 2005. - Vol.135, N5. - P.1239-1242.

166. Mahn K., Borras C., Knock G.A. Dietary soy isoflavone induced increases in antioxidant and eNOS gene expression lead to improved endothelial function and reduced blood pressure in vivo // FASEB J. -2005. Vol.19, N12. - P.1755-7175.

167. Mangels A.R., Messina V. Considerations in planning vegan diets: infants // J. Am. Diet. Assoc. 2001. - Vol.101, N6. - P670-677.

168. Manzoni M.S., Rossi E.A., Carlos I.Z. et al. Fermented soy product supplemented with isoflavones affected fat depots in juvenile rats //. Nutrition. 2005 Vol.21 N10 - P. 1018-24

169. Matsushita H., Kobayashi M., Tsukiyama R., Yamamoto K. In vitro and in vivo immunomodulating activities of Shoyu polysaccharides from soy sauce // Int. J. Mol. Med. 2006. - Vol.17, N5. - P.905-909.

170. McVeigh B.L., Dillingham B.L., Lampe J.W., Duncan A.M. Effect of soy protein varying in isoflavone content on serum lipids in healthy young men // Am. J. Clin. Nutr. 2006. - Vol.83, N2. - P.244-251.

171. Merritt R.J., Jenks B.H. Safety of soy-based infant formulas containing isoflavones: the clinical evidence // J. Nutr. 2004. - Vol.134, N5. - P.1220-1224.

172. Messina M.J. Modern applications for an ancient bean: soybeans and the prevention and treatment of chronic diseas // J. Nutr. 1995. -Vol.125, N3.-P.567-569.

173. Messina M.J. Legumes and soybeans: overview of their nutritional profiles and health effects // J. Am. J. Clin. Nutr. 1999. - Vol.70, N3. -P.439-450.

174. Messina M.J. Emerging evidence on the role of soy in reducing prostate cancer risk // Nutr. Rev. 2003. - Vol.61, N4. - P. 117-131.

175. Messina M., Barners S. The role of soy products in reducing risk of canser//J. Nat. Cancer Inst. 1991. - Vol.83. - P.541-546.

176. Messina M., Bennink, M. Soyfoods, isoflavones and risk of colonic cancer: a review of the in vitro and in vivo data // J. Baillieres Clin. Endocrinol. Metab. 1998. - Vol.12, N4. - P.707-728.

177. Messina M, Messina V. Provisional Recommended Soy Protein and Isoflavone Intakes for Healthy Adults: Rationale // Nutr Today. -2003. Vol.38, N5. - P.100-109.

178. Messina M., Messina, V. Soyfoods, soybean isoflavones, and bone health: a brief overview // J. Ren. Nutr. 2000. - Vol.10, N2. - P.63-86.

179. Messina M., Redmond G. Effects of soy protein and soybean isoflavones on thyroid function in healthy adults and hypothyroid patients: a review of the relevant literature // Thyroid. 2006. - Vol.16, N3. - P.249-258.

180. Mezei O, Banz WJ, Steger RW et al., Soy isoflavones exert antidiabetic and hypolipidemic effects through the PPAR pathways in obese Zucker rats and murine RAW 264.7 cells // J. Nutr. 2003. -Vol.133, N5.-P.1238-1243.

181. Milerova J., Cerovska J., Zamrazil V. et al. Actual levels of soy phytoestrogens in children correlate with thyroid laboratory parameters // Clin. Chem. Lab. Med. 2006. - Vol.44, N2. - P.171-174.

182. Miyake Y., Sasaki S., Ohya Y. et al. Soy, isoflavones, and prevalence of allergic rhinitis in Japanese women: the Osaka Maternal and Child Health Study // J. Allergy Clin. Immunol. 2005. - Vol.115, N6.-P.l 176-1783.

183. Mori M., Sagara M., Ikeda K. et al. Soy isoflavones improve bone metabolism in postmenopausal Japanese women // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol 2004. - Vol.31, Suppl 2. - P.S44-46.

184. Morita Т., Oh-hashi A., Takei K. et. al. Cholesterol-Lowering Effects of Soybean, Potato and Rice Proteins Depend On Their Low Methionine Contents In Rats Fed a Cholesterol-Free Purified Diet // J. Nutr. 1997. - Vol.127, N3. - P.470-477.

185. Munro I.C., Harwood M., Hlywka J.J. et al., Soy isoflavones: a safety review //Nutr. Rev. 2003. - Vol.61, N1. - P. 1-33.

186. Nagasawa A., Fukui K., Kojima M. et al. Divergent effects of soy protein diet on the expression of adipocytokines // Biochem Biophys Res Commun. 2003. - Vol.28, N7. - P.909-914.

187. Nagata С., Shimizu H., Takami R. et al. Association of blood pressure with intake of soy products and other food groups in Japanese men and women // Prev. Med. 2003. - Vol.36, N6. - P.692-697.

188. Nagata C., Takatsuka N., Kurisu Y. et al. Decreased Serum Total Cholesterol Consentration Is Associated with High Intake of Soy Products in Japanese Men and Women // J. Nutr. 1998. - Vol.128. -P.209-213.

189. Neurath H. Proteolytic enzymes past and present: The second golden era // Protein Science. 1994. - Vol.3. - P.1734-1739.

190. Neurath H. Proteolytic enzymes, past and future // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - V. 96. P. 10962-10963.

191. Nicolosi R.J., Rogers E.J. Regulation of plasma lipoprotein levels by dietary triglicerides enriched with different fatty acids // Med. Sci Sports Exerc. 1997. - Vol.29. - P. 1422-1428.

192. Okamoto K., Horisawa R. Soy products and risk of an aneurysmal rupture subarachnoid hemorrhage in Japan // Eur. J. Cardiovasc. Prev. Rehabil 2006. Vol.13, N2. - P.284-287.

193. Omoni AO, Aluko RE. Soybean foods and their benefits: potential mechanisms of action // Nutr Rev. 2005. - Vol.63, N8. - P.272-83.

194. Pan Y., Anthony M., Watson S., et. al. Soy phytoestrogens improve radial arm maze performance in ovariectomized retired breeder rats and do not attenuate benefits of 17beta-estradiol treatment // Menopause. -2000. Vol.7, N4. - P.230-235.

195. Park E, Shin JI, Park OJ, Kang MH. Soy isoflavone supplementation alleviates oxidative stress and improves systolic blood pressure in male spontaneously hypertensive rats // J. Nutr. Sci. Vitaminol. (Tokyo). 2005 - Vol.51, N4. - P.254-259.

196. Patisaul H.B., Blum A., Luskin J.R., Wilson M.E. Dietary soy supplements produce opposite effects on anxiety in intact male andfemale rats in the elevated plus-maze // Behav. Neurosci. 2005. -Vol.119, N2. - P.587-594.

197. Pedraza-Chaverri J., Barrera D., Hernandez-Pando R. Soy protein diet ameliorates renal nitrotyrosine formation and chronic nephropathy induced by puromycin aminonucleoside // Life Sci. 2004. - Vol.74, N8. -P.987-999.

198. Potter S.M. Overview of proposed mechanisms for the hypocholesterolemic effect of soy // J. Nutr. 1995. - Vol.125, N 3. -P.606-611.

199. Potter S.M. Soy protein and cardiovascular disease: the impact of bioactive components in soy // Nutr. Rev. 1998. - Vol.56. - P.231-235.

200. Puente X.S., Lopez-Otin C.A Genomic Analysis of Rat Proteases and Protease Inhibitors. // Genome Res. 2004. - V. 14. - P.609-622.

201. Quak S.H., Tan S.P. Use of soy-protein formulas and soyfood for feeding infants and children in Asia // Am. J. Clin. Nutr. 1998. - Vol.68, N6. - P.1444-1446.

202. Ravindranath MH, Muthugounder S, Presser N, et.al. Anticancer therapeutic potential of soy isoflavone, genistein // Adv. Exp. Med. Biol. 2004. - Vol.546. - P.121-165.

203. Reinwald S., Weaver C.M. Soy isoflavones and bone health: a double-edged sword? // J. Nat. Prod. 2006. - Vol.69, N3. - P.450-459.

204. Ricketts M.L., Moore D.D., Banz W.J. et al. Molecular mechanisms of action of the soy isoflavones includes activation of promiscuous nuclear receptors. A review // J. Nutr. Biochem. 2005. -Vol.16, N6. - P.321-330.

205. Ringseis R., Matthes В., Lehmann V. et al. Peptides and hydrolysates from casein and soy protein modulate the release of vasoactive substances from human aortic endothelial cells Biochim. Biophys. Acta. - 2005. - Vol.1721, N1-3.- P.89-97.

206. Rosier Olimpio Pereira I., Saes Parra Abdalla D. Soy isoflavones reduce heat shock proteins in experimental atherosclerosis Eur. J. Nutr. - 2006. - Vol.45, N3. - P.178-186.

207. Sacks F.M., Lichtenstein A., Van Horn L. et al. Soy protein, isoflavones, and cardiovascular health: an American Heart Association Science Advisory for professionals from the Nutrition Committee // Circulation. 2006. - Vol.113, N7. - P.1034-1044.

208. Sagara M., Kanda Т., Jelekera M. et al. Effects of dietary intake of soy protein and isoflavones on cardiovascular disease risk factors in high risk, middle-aged men in Scotland // J. Am. Coll. Nutr. 2004. - Vol.23, N1. - P.85-91.

209. Saito M. Effect of soy peptides on energy metabolism in obese animals // Nutr. Sci. 1991. - N12. - P.91.

210. Santti R., Makela S., Strauss L. Et al. Phytoestrogens: potential endocrine disruptors in males // Toxicol. Ind. Health. 1998. - Vol.14. -P.223-237.

211. Sarkar FH, Li Y. Soy isoflavones and cancer prevention // Cancer Invest. 2003. - Vol.21, N5. - P.744-757.

212. Setchell K.D. Phitoestrogens: the biochemistry, phisiology, and implications for human health of soy isoflavones // Am. J. Clin. Nutr. 1998. Vol.68. - N6. - P.1333-1346.

213. Setchell K.D., Cassidy A. Dietary isoflavones: biological effects and relevance to human health // J. Nutr. 1999. - Vol.129, N3. - P.758-767.

214. Sfakianos J., Coward L., Kirk M. et al. Intestinal Uptake and Biliary Excretion of the Isoflavone Genistein in Rats // J.Nutr. 1997.-Vol.127.-P. 1260-1268.

215. Sirtori C.R., Lovati M.R., Manzoni C. et. Al. Soy and cholesterol reduction: clinical experience // J. Nutr. 1995. - Vol.125, N3. - P.598-605.

216. Slavin J. T. Nutritional benefits of soy protein and soy fiber // J. Am. Diet Assoc. 1991. - Vol.91, N7. - P.816-819.

217. Sonee M., Sum Т., Wang C., et. al. The soy isoflavone, genistein, protects human cortical neuronal cells from oxidative stress // Neurotoxicology. 2004. - Vol.25, N5. - P.885-891.

218. Song T, Lee SO, Murphy PA, et. al. Soy protein with or without isoflavones, soy germ and soy germ extract, and daidzein lessen plasma cholesterol levels in golden Syrian hamsters // Exp. Biol. Med. (Maywood). 2003. - Vol.228, N9. - P. 1063-1068.

219. Soroka N., Silverberg D.S., Gramland M. et al. Comparison of a vegetable-based (soya) and an animal-based low protein diet inpredialysis chronik renal failure patients // Nephron. 1998. - Vol.79, N2. - P.10556-1065.

220. Soulsby ME, Phillips B, Chowdhury P. Brief communication: Effects of soy-protein diet on elevated brain lipid peroxide levels induced by simulated weightlessness // Ann Clin. Lab. Sci. 2004. - Vol.34, N1. -P.103-106.

221. Spector D., Anthony M., Alexander D., et. al. Soy consumption and colorectal cancer // Nutr Cancer. 2003. - Vol.47, N1. - P.l-12.

222. Spence L.A., Lipscomb E.R., Cadogan J. The effect of soy protein and soy isoflavones on calcium metabolism in postmenopausal women: a randomized crossover study // Am. J. Clin. Nutr. 2005. - Vol.81, N4. -P.916-922.

223. Stephenson T.J., Setchell K.D., Kendall C.W. et al. Effect of soy protein-rich diet on renal function in young adults with insulin-dependent diabetes mellitus // Clin. Nephrol. 2005. - Vol.64, N1. - P. 1-11.

224. Sugiyama K., Yamakawa A., Kumazawa A. et. al. Methionine Content of Dietary Proteins Affects the Molecular Species Composition of Plasma Phosphatidylcholine in Rats Fed a Cholesterol-Free Diet // J. Nutr. 1997. - Vol.127. - P.600-607.

225. Symolon H., Schmelz E.M., Dillehay D.L., Merrill A.H. Dietary soy sphingolipids suppress tumorigenesis and gene expression in 1,2-dimethylhydrazine-treated CF1 mice and ApcMin/+ mice // J. Nutr. -2004. Vol.134, N5. - P.l 157-1161.

226. Tham D.M., Gardner C.D., Haskell W.L. Clinical review 97: Potential health benefits of dietary phytoestrogens: a review of the clinical, epidemiological, and mechanistic evidence // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1998. - Vol.83, N7. - P.2223-2235.

227. This P., DeLaRochefordiere A., Clough K. et al. Phytoestrogens after breast cancer // J. Endocr. Relat. Cancer. 2001. - Vol.8, N2. -P129-134.

228. Tikkanen M.J., Adlercreutz H. Dietary soy-derived isoflavone phytoestrogens. Could they have a role in coronary heart disease prevention? // Biochem. Pharmacol. 2000. - Vol.60, N1. - P.l-5.

229. Tonkelaar I., KeinanBoker L., Veer P.V. et al. Urinary phytoestrogens and postmenopausal breast cancer risk // J.Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2001. - Vol.10, N3. - P.223-228.

230. Trock В J, Hilakivi-Clarke L, Clarke R. Meta-analysis of soy intake and breast cancer risk // J. Natl. Cancer. Inst. 2006. - Vol. 98, N7. -P.459-471.

231. Tuohy P.G. Soy infant formula and phytoestrogens // J. Paediatr. Child. Health. 2003. - Vol.39, N6. - P.401-405.

232. Turner R., Baron Т., Wolffram S. Effect of circulating forms of soy isoflavones on the oxidation of low density lipoprotein // Free Radic Res. 2004. - Vol.38, N2. - P.209-216.

233. Uenishi K. Recommended soy and soy products intake to prevent bone fracture and osteoporosis -// Clin Calcium. 2005. - Vol.15, N8. -P.1393-1398.

234. Verkasalo, P.K., Appleby, P.N., Allen, N.E. et al. Soya intake and plasma concentrations of daidzein and genistein: validity of dietary assessment among eighty British women (Oxford arm of the European

235. Prospective Investigation into Cancer and Nutrition) // J. Br. J. Nutr. -2001. Vol.86, N3. - P.415-421.

236. Vincent A., Fitzpatrick, L.A. Soy isoflavones: are they useful in menopause? // J. Mayo Clin. Proc. 2000. - Vol.75, N11.- P. 1174-1184.

237. Vitolins M.Z., Anthony M., Burke G.L. Soy protein isoflavones, lipids and arterial disease // J. Curr. Opin. Lipidol. 2001. - V. 12, N4. -P.433-437.

238. Wagner JD, Schwenke DC, Greaves KA Soy protein with isoflavones, but not an isoflavone-rich supplement, improves arterial low-density lipoprotein metabolism and atherogenesis // Arterioscler Thromb Vase Biol. 2003. - Vol.23, N12. - P.2241-2246.

239. Watanabe S., Yamaguchi M., Sobue T. et al. Pharmacokinetics of Soybean Isoflavones in Plasma, Urine and Feces of Men after Ingestion of 60 g Baked Soybean Powder (Kinako) // J.Nutr. 1998. -Vol. 128.-P.1710-1715.

240. Wiseman A. Crohn's disease leading to bowel cancer may be avoided by consumption of soya isoflavones: adjunct-chemotherapy with oxaliplatin // Med. Hypotheses. 2006. - Vol.66, N5. - P.934-935.

241. Wang Y, Jones P.J., Ausman L.M., Lichtenstein A.H. Soy protein reduces triglyceride levels and triglyceride fatty acid fractional synthesis rate in hypercholesterolemic subjects // Atherosclerosis. 2004. -Vol.173, N2.-P. 269-275.

242. Wang H., Murphy P.A. Iasoflavone composition of American and Japanese soybeans in Iowa: effects of variety, crop, year and location // J. Agric. Food Chem. 1994. - Vol.42. - P. 1674-1677.

243. Wardle E.N. Soyprotein diet therapy in renal disease // Nephron. -1998.-Vol.78.-P.328-331.

244. Washburn S, Burke GL, Morgan T, et al. Effect of soy protein supplementation on serum lipoproteins, blood pressure, and menopausalsymptoms in perimenopausal women // Menopause. 1999. - Vol.6, N1. -P. 7-13.

245. Watanabe S., Yamaguchi M., Sobue T. Et al. Pharmacokinetics of Soybean Isoflavones in Plasma, Urine and Feces of Men after Ingestion of 60 g Baked Soybean Powder (Kinako) // J. Nutr. 1998. - Vol.128. -P.l 710-1715.

246. Watkins B.A., Reinwald S., Li Y., Seifert M.F. Protective actions of soy isoflavones and n-3 PUFAs on bone mass in ovariectomized rats // J. Nutr. Biochem. 2005. - Vol.16, N8. -P.479-488.

247. Weggemans RM, Trautwein EA. Relation between soy-associated isoflavones and LDL and HDL cholesterol concentrations in humans: a meta-analysis // Eur. J. Clin. Nutr. 2003. - Vol.57, N8. - P.940-946.

248. Weisburger J.H. Antimutagenesis and anticarcinogenesis, from the past to the future // J. Mutat. Res. 2001. - Vol.480-481. - P.23-35.

249. Wiedemann H.P., Stoller J.K. Lung disease due to alpha 1-antitrypsin deficiency//Curr. Opin. Pulm. Med. 1996. - Vol.2, N2.-P.155-160

250. Wiseman H. Duffy R. New advances in the understanding of the role of steroids and steroid receptors in disease // J. Biochem. Soc. Trans. 2001. Vol.29, N2. - P.205-209.

251. Wu A.H., Ziegler R.G., Nomura A.M. et al. Soy intake and risk of breast cancer in Asians and Asian Americans // Am. J. Clin. Nutr. 1998. - Vol.68. Suppl., N6. - P.1437S-1443S.

252. Yamamoto S , Sobue T , Kobayashi M. Soy, isoflavones, and breast cancer risk in Japan // J. Natl. Cancer Inst. 2003. - Vol.95, N12. - P.906-913.

253. Yan L., Spitznagel E.L. Meta-analysis of soy food and risk of prostate cancer in men Int. J. Cancer. - 2005. - Vol.117, N4. - P.667-669.

254. Yan Zhang, Gui-Juan Wang, Tong T. Song et al. Urinary Disposition of the Soybean Isoflavones Daidzein, Genistein and Glicitein Differs among Humans with Moderate Fecal Isoflavone Degradation Activity // J. Nutr. 1999. - Vol.129. - P.957-962.

255. Yang G, Shu XO, Jin F. et al. Longitudinal study of soy food intake and blood pressure among middle-aged and elderly Chinese women. Am. J. Clin. Nutr. // 2005. Vol.81, N5/ - P. 1012-1017.

256. Yoshiki Y., Kudou, S., Okubo, K. Relationship between chemical structures and biological activities of triterpenoid saponins from soybean // J. Biosci. Biotechnol. Biochem. 1998. - Vol.62, N12. - P.2291-2299.

257. Young V.R. Soy protein in relation to human protein and amino acid nutrition // J. Am. Diet Assoc. 1991. - Vol.91, N7. - P.828-835.

258. Yun J., Oh S.R., Lee H.K. et al. Effect of genistein analogs on oxygen radical production in leukocytes stimulated by unopsonized zymosan // Planta Med. 2001. - Vol.67, N3. - P.274-276.

259. Zhang X, Shu X.O., Gao Y.T. Soy food consumption is associated with lower risk of coronary heart disease in Chinese women // J. Nutr. -2003. Vol.133, N9. - P.2874-2878.

260. Zhang M, Xie X, Lee AH, Binns CW. Soy and isoflavone intake are associated with reduced risk of ovarian cancer in southeast china // Nutr. Cancer. 2004. - Vol.49, N2. - P. 125-130.

261. Zhao J.H., Arao Y., Sun S.J. et al. Oral administration of soy-derived genistin suppresses lipopolysaccharide-induced acute liverinflammation but does not induce thymic atrophy in the rat Life Sci. // 2006. - Vol.78, N8. - P.812-819.

262. Zhou J.R. Soy and the prevention of lifestyle-related diseases // Clin Exp Pharmacol Physiol. 2004. - Dec.31 - Suppl 2 - :P.S 14-29.

263. Zhuo X.G., Melby M.K., Watanabe S. Soy isoflavone intake lowers serum LDL cholesterol: a meta-analysis of 8 randomized controlled trials in humans // J. Nutr. 2004. - Vol.134, N9. - P.2395-2400.

264. Zoppi G., Guandalini S. The story of soy formula feeding in infants: a road paved with good intentions // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1999. - Vol.28, N5. - P.541-543.