Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных"

\\

'¡; N

На правах рукописи

КУДИНОВА Татьяна Анатольевна

Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

" 2 ЛЕИ 2010

Москва-2010

004615692

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Грязнева Татьяна Николаевна.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Бедоева Залихан Михайловна; доктор ветеринарных наук Литвинов Алексей Михайлович

Ведущая организация - ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ).

Защита состоится «ЯЗ » часов на заседании

диссертационного совета Д.220.042.01 в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23. тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан «

Ученый секретарь ЙЧИШ^^^^'

диссертационного совета , //• ^ х /л Гнездилова Л.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Дерматомикозы животных представляют серьезную меди--социальную проблему во многих странах мира, так как больные животные часто ужат источником заражения людей.

По данным отечественных и зарубежных авторов, на дерматомикозы приходится оло 60% от всех болезней, проявляющихся поражениями кожи. Кроме того, про-сс часто осложняется патогенной бактериальной микрофлорой (Маноян М.Г., 05; Литвинов А.М., 2009; Gupta А., 2001; Wilson Т., 2005 и др.). Большую роль в возникновении кожных заболеваний играет низкая резистент->сть организма, хроническое течение ряда бактериальных, вирусных и паразитар-ix болезней, неблагоприятные экологические факторы, наличие эктопаразитов, удовлетворительные санитарно-гигиенические условия в местах содержания и [гула животных, раневые инфекции (Саркисов А.Х., 1997; Никифоров Л.И., 2002). Несмотря на обеспеченность ветеринарии специфическими препаратами, наруж-1ми и системными фармакологическими средствами, проблема лечения животных и дерматомикозах по-прежнему актуальна.

Поэтому, оценка эффективности новых противогрибковых средств является акту-ьной задачей для ветеринарии.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - определение антимикробной тивности, безопасности и терапевтической эффективности препарата Миковелт и дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных. Для решения были поставлены следующие задачи:

1. Определить противогрибковую и бактерицидную активность Миковелта in vii.

2. Определить острую и хроническую токсичность препарата.

3. Изучить противогрибковое и бактерицидное действие Миковелта при дермато-[козах и раневых инфекциях экспериментальных животных.

4. Определить противовоспалительное и ранозаживляющее действие Миковелта.

5. Определить эффективность обеззараживающего и пролонгированного действия иковелта при обработке кожи инъекционного и операционного полей у мелких машних животных.

6. Определить терапевтическую эффективность Миковелта при дерматомикозах

сельскохозяйственных и мелких домашних животных.

7. Составить проект нормативной документации на препарат Миковелт с цел регистрации его для применения на территории РФ.

Научная новизна работы. Впервые, для ветеринарной практики предложено ] вое лекарственное средство Миковелт на основе отечественной антимикробной с; станции Велтон (0,1%), изопропилового спирта (70%) и метиленовой сини (0,045е обладающее противогрибковой и бактерицидной активностью и предназначен! для лечения разных видов животных при дерматомикозах и раневых инфекциях.

Доказано, что субстанция Велтон может быть использована в качестве основн< компонента лекарственных средств для наружного применения при трихофип микроспории, эпидермофитозе и кандидозе в концентрации не менее 62,5 мкг/мл.

Установлено, что препарат Миковелт безвреден для животных и не обладает с< сибилизирующими и кумулятивными свойствами.

Установлено, что дерматомикозы у собак в 46,9% случаев вызывает Т.уеггисози в 40,6% случаев - Т.теп1а§горЬу1ез, в 12,5% случаев - М.сагш. Причиной дерма: микозов кошек в 59,3% случаев является М.сатв, в 29,6% случаев - M.gypseum) 11,1% случаев Т.теп(а§горЬу1е5. В 100% случаев телята, больные дерматомикозан были заражены Т.уеггисоБит, лошади - Т.едшпит, овцы - Т.теШ^орЬ^ез.

Доказано, что терапевтическая эффективность Миковелта при дерматомикозах раневых инфекциях крупного рогатого скота, лошадей, овец, собак, кошек, кро.1 ков, морских свинок, белых крыс и белых мышей составляет 100% при наружи применении препарата 1 раз в день 3 дня подряд.

Практическая значимость полученных результатов. Для применения в 1 теринарии в качестве лекарственного противогрибкового и антибактериально средства для лечения животных при дерматомикозах и раневых инфекциях, об] ботки инъекционного и операционного полей предложен высокоэффективный безвредный препарат Миковелт, который прошел широкие производственные исп тания в животноводческих хозяйствах и ветеринарных клиниках.

На базе НПО «Велт» (г. Оренбург) создана автоматизированная технологичес» линия промышленного производства препарата Миковелт. Получены опытные < рии Миковелта, которые прошли производственные испытания.

Результаты исследований включены в проект СТО 71954720-0005-2010 на лекг ственное средство Миковелт.

Разработан проект инструкции по применению лекарственного средства Миковелт гтеринарии.

í опытах на кроликах, морских свинках, белых крысах и белых мышах показана вредность и антимикробная активность препарата Миковелт, что подтверждено ами, утвержденными в установленном порядке.

; опытах на крупном рогатом скоте, лошадях, овцах, собаках и кошках изучен ;анизм действия лекарственного средства Миковелт, дана оценка его влияния на анизм животных при дерматомикозах и раневых инфекциях, показана высокая апевтическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержден-ли руководителями хозяйств и ветеринарных клиник Москвы, Московской и некой областей.

езультаты исследований по применению лекарственного средства Миковелт при матомикозах и раневых инфекциях разных видов животных используются в бном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплине «Микробиология», ичный вклад соискателя. Автору принадлежит непосредственное осуществле-исследований по изучению противогрибковой и бактерицидной активности Ми-елта in vitro и in vivo, острой и хронической токсичности препарата, определение шевтической эффективности Миковелта при дерматомикозах и раневых инфек-х разных видов животных, разработка нормативной документации на Миковелт, низ и обобщение полученных результатов.

пробация результатов диссертации. Основные результаты исследований из-:ены в 2 научных отчетах («Экспериментальные испытания безопасности и ан-икробной активности препарата Миковелт», «Изучение лечебно-профилакти-<ой эффективности препарата «Миковелт» при дерматомикозах и раневых ин-циях животных») и представлены на XV Ветеринарном конгрессе, секции «Бога крупного рогатого скота» (Москва, 2007), на рабочем совещании Националь-о союза «Медико-биологическая защита» (Москва, 2007), на V Международном шозиуме «ЕС-Россия: сотрудничество в области биотехнологии, сельского, лес-э, рыбного хозяйства и пищи в 7 Рамочной Программе» (г. Пущино, Московской ., 2008), на V Международной конференции «Наука и образование для целей безопасности» (г. Пущино, Московской обл., 2008), на выставке, посвященной 1етию ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2009), на выставке «Звезда Подмоско-(Раменское, Московской обл., 2010), на Российской агропромышленной вы-

ставке «Золотая 0сень-2010» (Москва, 2010), на совещании сотрудников НИИ би, цидов и нанобиотехнологий (Москва, 2010).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 4 статьи, в т.ч. 2 стать в научных журналах (Достижения науки и техники АПК, Жизнь без опасностей) и - в сборниках научных трудов.

Структура диссертационной работы. Материалы диссертации изложены на 18 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собс венные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практическс использование полученных научных результатов, рекомендации по использовани! научных выводов, список использованной литературы (143 источника, из которы 101 отечественных и 42 иностранных авторов). Работа содержит 42 таблицы, 39 pi сунков и 15 страниц приложений.

Основные положения и результаты, выносимые на защиту:

1. Миковелт обладает высокой противогрибковой и антибактериальной активнс стъю в отношении широкого спектра патогенных грибов и бактерий in vitro и i vivo.

2. Препарат Миковелт безвреден для животных и согласно ГОСТ 12.1.007-7 «Классификация опасности веществ по степени воздействия на организм», относи-ся к 4 классу малоопасных веществ.

3. Миковелт — эффективное лекарственное средство при дерматомикозах и ран( вых инфекциях разных видов животных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена с 2006 по 2010 гг. на кафедре микробиологии ФГОУ ВП МГАВМиБ. Ряд экспериментов были проведены в НИИ биоцидов и нанобиотехн< логий и ООО «НПО «ВЕЛТ». Эксперименты на животных проводили в ООО «В« Био Сервис» (г. Москва), ООО «Вет Зоо Сервис» (г. Москва), КФХ «Корнево» (Ис ринский р-н, Московской обл.), в овцеводческом хозяйстве института биотехнол( гии (Кыргызстан), в ветеринарном Центре пос. Красково (Люберецкий р-н, Mockoj ской обл.), в СХПК «Верещаки», Новозыбковского района, Брянской обл., а также виварии кафедры микробиологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, лицензированной по р боте с микроорганизмами III-IV групп патогенности.

Миковелт - лекарственное средство в форме раствора, содержащее в качестве де'

вующего вещества субстанцию Велтон (0,1%), в качестве вспомогательных ком-энентов - изопропиловый спирт (70%), метиленовый синий (0,045%) и воду. В экспериментах по изучению острой и хронической токсичности, а также лечеб-э-профилактической эффективности Миковелта при дерматомикозах и раневых яфекциях животных были использованы 150 белых мышей, 30 белых крыс, 30 мор-сих свинок, 10 кроликов, 27 телят в возрасте 6-8 месяцев, 18 рабочих лошадей, 322 щы тонкорунной породы, 52 собаки и 28 кошек разных пород и возрастов. Антимикробную активность Миковелта изучали с использованием следующих ^льтур тест-штаммов микроорганизмов: E.coli 11229, S.aureus 6538, P.aeruginosa 5412, B.cereus 10702, C.sporogenes 272, C.albicans 10231, T.vemicosum 480, .violace-um 11, T.mentagrophytes 210, M.gypseum 37, M.canis 474, M.lanosum 22, .rubrum 64, A.niger 9642, Cladosporium spp., Mucor spp.

Исследования проводили в соответствии с Руководством по экспериментальному юклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2005) и др. Противогрибковую активность Миковелта в лабораторных условиях изучали на оделях дерматомикозов белых мышей, морских свинок и кроликов, вызываемых грматофитами родов Trichophyton, Microsporon и Epidermophyton, а также на мо-глях кандидоза белых мышей и кроликов.

Лечебно-профилактическую эффективность Миковелта при дерматомикозах у ивотных оценивали в опытах на телятах, лошадях, овцах, собаках и кошках. Экспериментальные данные обрабатывали методом корреляционного, вариацион-ого и факторного статистического анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Определение бактерицидной и противогрибковой активности Миковелта in vitro

Антибактериальную активность Миковелта in vitro оценивали в отношении 48 -

асовых культур тест-штаммов - Escherichia coli 11229, Staphylococcus aureus 6538,

seudomonas aeruginosa 15412, Bacillus cereus 10702, Clostridium sporogenes 272. Ис-

педования проводили качественными методами: суспензионный, капельный и дис-

о-диффузный.

Эшерихии, стафилококки, синегнойная палочка, бациллы, кандиды и клостридии огибали в присутствии Миковелта через 1 мин. экспозиции, гибель B.cereus и

C.sporogenes наступала при 3-минутной экспозиции. Коэффициент эффективности бактерицидного действия Миковелга составил 100%.

Определение противогрибковой активности Миковелта в отношении дрожжеподобных грибов рода Candida

Противогрибковую активность Миковелта in vitro оценивали в отношении 24 - часовой культуры тест-штамма Candida albicans 10231.

С помощью качественного суспензионного метода было установлено, что Мико-велт вызывает гибель кандид при экспозиции 1 мин. При использовании капельного метода определения противогрибковой активности, Миковелт оказывал фунгицид-ное действие на кандиды при экспозиции 3 мин.

Таблица 1. Зоны ингибирования роста культуры тест-штамма Candida albicans 10231 препаратом Миковелт в сравнительном аспекте

Использование диско-диффузного метода позволило опреде-ить зоны ингибирования роста Миковелтом культуры тест-штамма Candida albicans 10231 (табл. 1).

Из данных таблицы следует, что Миковелт проявляет наиболее высокую антимш робную активность в отношении кандид. Коэффициент эффективности фунгицщ ного действия Миковелта составил 100%.

Определение противогрибковой активности Миковелта методом двукратных серийных разведений в жидкой среде

Противогрибковую активность Миковелта in vitro изучали также методом дв} кратных серийных разведений в жидкой среде Сабуро. Исходное разведение Микс велта содержало действующее вещество в концентрации 10000 мкг/мл. Затем полз чали ряд следующих разведений, мкг/мл - 1000; 500; 250; 125; 62,5; 31,2; 15,0; 1,'. 3,8; 1,9.

В каждую пробирку вносили взвесь культур тест-штаммов грибов T.verru-cosun T.violaceum, T.mentagrophytes, M.gypseum, M.canis, M.lanosum, E.rubrum, A.nige Cladosporium spp., Mucor spp., в концентрации 100 млн.грибковых тел/мл и культ! вировали при 27°С на 14 дней.

Культура тест-штамма Зона отсутствия роста, мм

Candida albicans 10231 24,8±0,2

Escherichia coli 11229 14,5±0,1

Staphylococcus aureus 6538 20,6+0,6

Pseudomonas aeruginosa 15412 21,9+0,2

Bacillus cereus 10702 11,6+0,5

Clostridium sporogenes 272 12,5±0,2

Было установлено, что Миковелт в концентрациях 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,2, 15,0 и 7,5 обладает фунгицидной активностью в отношении культур Т.уеггисозиш, Т.ую1асеит, Т.тепШ^орЬугеБ, M.gypseum и М.сашв; в концентрациях 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,2 и 15,0 -МЛапозиш, Е.гиЬгиш и А.ш§ег; в концентрациях - 1000, 500,250,125 и 62,5 - Оаскюрогшт Брр. и Мисог эрр.

Следовательно, рабочая концентрация препарата Миковелт, обладающая фунги-цидным действием в отношении возбудителей микозов и плесневых грибов должна составлять не менее 62,5 мкг/мл (или 0,06 мг/мл.).

Определение противогрибковой активности Миковелта методом диффузии в агар Сабуро

Для подтверждения фунгицидной активности Миковелта в концентрации 0,06 мг/мл был использован метод диффузии в агар Сабуро.

На поверхность агара Сабуро наносили взвесь культуры определенного тест-штамма гриба и равномерно растирали ее шпателем по поверхности агара. На поверхность агара Сабуро в опытных чашках накладывали алюминиевое кольцо, в которое затем капали препарат Миковелт в разведении 0,06 мг/мл.

Было установлено, что Миковелт диффундировал в агар Сабуро и задерживал рост культур тест-штаммов грибов. Ни в одной опытной чашке через 14 дней роста грибов не наблюдалось. В контрольных чашках Петри на агаре Сабуро грибы интенсивно развивались и образовывали воздушный мицелий.

Определение острой и хронической токсичности препарата Миковелт на организм лабораторных животных

Острую и хроническую токсичность Миковелта изучали при поступлении его в желудок и через органы дыхания, определяли его местно-раздражающее действие на кожу и слизистые оболочки глаз, кожно-резорбтивное и аллергенное действие.

При введении различных концентраций Миковелта белым мышам в желудок и в брюшную полость клинической картины отравления и гибели животных не наблюдалось.

По ингаляционной опасности в насыщающих концентрациях Миковелт относится к 4 классу малоопасных веществ.

При однократном нанесении на неповрежденную кожу кроликов Миковелт не проявляет острой токсичности и местно-раздражающего действия, а при многократ-

ном использовании - вызывает слабую эритему. Аппликации Миковелта на поврем денную кожу белых крыс ускоряют заживление ран в 2 раза.

При многократной обработке Миковелгом 5% кожного покрова белых мышей и] токсикации организма не происходит.

У животных не было выявлено контактного сенсибилизирующего действия Мик< велта, у белых мышей, получавших препарат в возрастающих концентрациях пер< рально в течение 4 месяцев, клинических признаков интоксикации не наблюдалось.

Согласно «Классификации опасности веществ по степени воздействия на орг; низм», которая входит в ГОСТ 12.1.007-76, препарат Миковелт относится к 4 класс малоопасных веществ.

Токсикологическое действие Миковелта на организм сельскохозяйственных и мелких домашних животных

Токсикологическое действие препарата Миковелт на организм сельскохозяйс венных и мелких домашних животных изучали на телятах швицкой породы в во: расте 6 месяцев и на 8 собаках разных пород и возрастов.

В области крупа у животных выбривали участок размером 15x15 см. В течение дней на него наносили по 30 мл препарата. Определяли гематологические и биох! мические показатели (табл. 2).

Таблица 2. Влияние Миковелта на биохимические показатели крови телят

Срок наблюдения Белок, г/л Глюкоза, ммоль/л ЛДГ, МЕ МДГ, МЕ

До опыта 73,2±5,0 4,53±0,05 209±10,2 28,1±5,2

1 сутки 72,5±3,5 4,52±0,02 209±8,6 28,6±4,9

5 суток 72,4±5,6 4,55±0,01 210±12,5 27,8±5,5

10 суток 72,8±6,0 4,52±0,03 212±12,5 27,1±5,0

Показатели крови телят до опыта и во все дни исследований практически не ра: личались и существенно не изменялись в ходе эксперимента. У собак были получ< ны аналогичные данные.

Изучение антимикробного действия Миковелта при раневых инфекциях у белых мышей и кроликов

Оценку бактерицидного действия Миковелта in vivo проводили в отношении ш кусственно нанесенной смешанной культуры тест-штаммов бактерий, вызывающи гнойную патологию у животных - E.coli 11229, S.aureus 6538, P.aeruginosa 15412.

На 2 день с начала постановки опыта от мышей опытной группы культуры тест-таммов не были выделены. В контрольной группе на 3 день с начала постановки шта пало 50% животных. От погибших мышей выделяли исходные культуры тест-таммов бактерий во все дни исследований.

У кроликов в области лопатки с двух сторон выстригали участки кожи размером с5 см. С опытного и контрольного участков кожи отбирали смывы для определены естественной контаминации кожи микрофлорой. Затем кожу левого участка обкатывали Миковелтом, с последующей экспозицией 1 и 3 мин. Кожу правого уча--ка аналогично обрабатывали стерильной водой. Затем с опытного и контрольного гастков кожи вновь отбирали смывы для определения концентрации естественной икрофлоры после обработки. Затем на кожу контрольного и опытного участков шосили по 1 мл суспензии смешанной культуры тест-штаммов бактерий, в кон-;нтрации культуры каждого штамма 109 м.кл./мл и вновь обрабатывали опытный теток Миковелтом (табл. 3).

Таблица 3. Бактерицидное действие Миковелта при обработке кожи кроликов с экспозицией 3 мин.

контаминация кожи микроорганизмами Микрофлора Количество микроорганизмов на коже, КОЕ Кср эффективности, %

до обработки после обработки

опыт контроль

;тественная Общее число 324122 0 256±34 100

Грамположительная 144±15 0 93118 100

Грамотрицательная 118±12 0 107110 100

скусственно шесенная Е.соП 11229 475±42 0 420130 100

Э-аигеиБ 6538 390125 0 340124 100

Р.аеп^това 15412 385±35 0 362120 100

Как следует из полученных данных, Миковелт обладает 100% эффективностью ж обеззараживании кожи экспериментальных животных как в отношении естест-:нной, так и искусственно нанесенной бактериальной микрофлоры. Бактерицид-зе действие Миковелта наступает не позднее 3 мин экспозиции.

Изучение противогрибковой эффективности Миковелта на моделях кандидозной инфекции у белых мышей и кроликов

У белых мышей и кроликов скарифицировали кожу в области спины и втирали в

<ны суспензию культуры тест-штамма С.а1Ысаш 1023 в концентрации 109 м.кл./мл.

Животным опытных групп 1 раз в день в течение 3 дней ежедневно на поврежденную и обсемененную кандидами кожу наносили Миковелт.

На 2 день с начала постановки опыта от животных опытных групп культура кандиды с обработанной Миковелтом поверхности кожи не была выделена. В контрольных группах от всех животных выделяли исходную культуру тест-штамма C.albicans.

Таким образом, Миковелт обладает 100% эффективностью при обеззараживании кожи экспериментальных животных зараженной культурой тест-штамма C.albicans 1023. Фунгицидное действие Миковелта наступает не позднее 3 мин экспозиции.

Изучение эффективности Миковелта на моделях дерматомикозов у морских свинок и кроликов

Применение Миковелта при дерматомикозах у морских свинок и кроликов, вызываемых дерматофитами родов Trichophyton и Microsponm. Культуры тест-штаммов Trichophyton verrucosum 480, Trichophyton violaceum 11, Trichophyton mentagrophytes 210, Microsporum gypseum 37, Microsporum canis 474 и Microsporon lanosum 22 втирали в скарифицированные участки кожи морских свинок. На 7-10-й день после заражения у морских свинок развивалась грибковая инфекция.

В опытных группах животных Миковелт наносили на пораженные участки кожи по 0,5 мл 1 раз в день 7 дней подряд, 2 раза в день 3 дня подряд и 1 раз в день 3 дня подряд.

Наиболее эффективным способом лечения морских свинок оказалась обработка животных 1 раз в день 3 дня подряд. При этом выздоровление животных наступало, в среднем, на 12-й день с начала постановки опыта, что на 5 дней раньше, чем при обработке 1 раз в день 7 дней подряд и на 4 дня раньше, чем при обработке 2 раза в день 3 дня подряд (рис. 1).

Длительность процесса самовыздоровления у животных контрольных групп с момента появления первых клинических признаков грибковой инфекции составила, в среднем 45 суток.

У кроликов опытных и контрольных групп на наружной поверхности обоих ушей скарифицировали кожу и втирали в ранки кашицу из культуры тест-штамма определенного гриба.

Первые признаки заболевания трихофитией и микроспорией у кроликов как опыт-

V, так и контрольных групп возникали на 6-8 сутки после заражения. Срок выздоровления, су т.

1 раз в день 7 дней 2 раза в день 3 дня 1 раз в день 3 Способ подряд подряд дня подряд обработки

Рис. 22. Сроки выздоровления морских свинок, обработанных Миковелтом разными способами

(животные, зараженные: I - T.verrucosum 480; 11 - T.violaceum 11; III - Т.mentagrophytes 210; IV - M.gypseum 37; V - M.canis 474; VI - M.lanosum 22)

"роликов опытной группы лечили Миковелтом, втирая его в пораженные участки ш 1 раз в день 3 дня подряд. Контрольным животным аналогично втирали стельную дистиллированную воду.

Миковелт обладал 100% эффективностью в отношении возбудителей трихофитии шкроспории, т.к. за период наблюдения кролики всех опытных групп полностью щоравливали. На 3-5 день после первой обработки кроликов Миковелтом при-ки воспаления на пораженных участках исчезали, через 7-10 дней после третьей >аботки пораженная кожа кроликов полностью эпителизировалась. У контрольных животных самовыздоровление наступало через 35-40 дней.

Эффективность Миковелта при дерматомикозе морских свинок, вызванном эпидермофитоном

Для инфицирования морских свинок использовали порошкообразную культуру

abrum 64, которую втирали в боковую поверхность тела морских свинок опытной

контрольной групп после скарификации кожи.

В первой опытной группе сразу же после заражения морских свинок обрабатывали Миковелтом с профилактической целью, втирая препарат в зараженное место 1 раз в день 3 дня подряд. Во второй опытной группе животных, у которых появились клинические признаки эпидермофитоза обрабатывали Миковелтом аналогично.

Было установлено, что у животных, которым препарат применяли сразу после заражения, клинические признаки болезни не развивались, мицелий гриба в соскобах кожи после обработки Миковелтом не обнаруживался.Морские свинки терапевтической группы выздоравливали на 12 сутки после обработки, в то время, как животные контрольных групп самовыздоравливали на 32 сутки с начала постановки опыта.

Таким образом, Миковелт обладает 100% лечебно-профилактической эффективностью при эпидермофитозе морских свинок.

Изучение бактерицидного, противовоспалительного и ранозаживляющего

действия Миковелта при раневых инфекциях у лабораторных животных

Оценку бактерицидного действия Миковелта при раневых инфекциях лабораторных животных проводили в экспериментах на кроликах в отношении естественной и искусственно нанесенной культуры тест-штамма Е.соП 11229.

Установлено, что Миковелт обладает 100% эффективностью при обеззараживании кожи экспериментальных животных как в отношении естественной, так и искусственно нанесенной микрофлоры при экспозиции 3 мин. |

Противовоспалительное действие Миковелта определяли методом онкометрии, с использованием белых крыс.

Как следует из полученных данных (рис. 2), Миковелт оказывал местное противовоспалительное действие на организм крыс.

!031 "Тез

5 2--—933-1 |1-19- 0,78--[

£ 1гГЫ , г |И , г шш

о и 1 1 1

1 3 24 '

Время, ч ,

□ - Контроль И . Опыт

Рис. 2. Динамика местного противовоспалительного действия Миковелта |

на организм белых крыс

Показатель величины отека лапок крыс опытной группы через 24 часа после обра-отки Миковелтом был в 2Д раза меньше, чем в контрольной группе животных. Ранозаживляющее действие Миковелта изучали при скарификации кожи у кро-иков и белых мышей, при нанесении кроликам линейных кожных разрезов и ис-усственном образовании абсцессов.

Применение Миковелта ускоряет процесс заживления искусственно нанесенных ш у кроликов (табл. 4).

Таблица 4. Показатели ранозаживляющего действия Миковелта

Группа животных Средний исходный линейный размер раны, мм Средний линейный размер раны в день наблюдения, мм

5 день 10 день 15 день

Зпытная 25±1,0 8,0±0,5 3,2±0,5 0

(онтрольная 25±1,0 22,5±2,0 19,2 ±0,5 10,5 ±1,0

Р>0,05 Р<0,05 Р<0,001

Как следует из данных таблицы, в опытной группе животных через 5 дней с наша постановки опыта длина раны уменьшилась на 68%, к 10 дню - на 87,2%, к 15 до с начала постановки опыта рана у кроликов полностью эпителизировалась и на ! месте начинала нарастать шерсть (100%-ный эффект).

За период наблюдения самовыздоровления у кроликов контрольной группы не эоисходило.

Результаты опытов в тесте с заживлением линейных кожных ран у кроликов покали, что Миковелт оказывает достоверно выраженный ранозаживляющий эффект -юцесс заживления ран ускоряется в 3 раза, по сравнению с контролем. Исследования по изучению ранозаживляющего действия Миковелта в сравни-ельном аспекте проводили на кроликах и телятах.

Животным в области ягодичной мышцы справа делали вырезы кожного покрова сруглой формы, поверхностной и глубокой подкожной фасции, повреждая при ом поверхностную ягодичную мышцу. Диаметр раны составлял около 3 см. Через \ ч после нанесения разреза обрабатывали рану препаратом Миковелт, вторую уппу животных обрабатывали аналогично Зоомиколем, животных третьей группы >рабатывали Ламизилом.

У кроликов, обработанных Миковелтом заживление проходило по первичному гажению и к 28 дню исследований рана зажила с полным отторжением струпа. Раны у кроликов, обработанных Зоомиколем, хотя и заживали по первичному на-

тяжению, но эпителизация завершилась лишь к 36-му дню. Эпителизация ран у кр ликов, обработанных Ламизилом, завершалась к 40 дню исследований.

У телят к 14 дню процент площади ран, обработанных Миковелтом, состав! 46%, у контрольных животных - 69%.

Таким образом, Миковелт обладает бактерицидным, противовоспалительным ранозаживляющим действием при раневых инфекциях у лабораторных и сельское зяйственных животных. Эффективность обеззараживания кожи Миковелтом соста ляет 100%. Противовоспалительное действие Миковелта в 2 раза превышает показ тели в контрольной группе животных. Препарат ускоряет процесс заживления и кусственно нанесенных не инфицированных ран в 2 раза, инфицированных ран - в раза, по сравнению с контролем. При заражении животных суспензией культур тес штаммов эшерихий, стафилококка, синегнойной палочки и кандиды, на участкг кожи, обработанных Миковелтом, абсцессы не развивались.

Оценка эффективности обеззараживающего и пролонгированного

действия Миковелта при обработке кожи инъекционного и операционш го полей у мелких домашних животных

Эффективность обеззараживающего действия Миковелта при обработке ко» инъекционного и операционного полей изучали в отношении естественной микр> флоры кожи собак.

Установлено, что Миковелт обладает высокой антимикробной активностью в о ношении возбудителей раневых инфекций животных - эшерихий, стафилококке кандид, протея, бацилл и микроскопических грибов, выделенных с поверхности ю жи мелких домашних животных. Препарат обеззараживает кожу в местах инъекщ и операционного поля у 100% исследованных собак через 3-5 мин. после обработ! и обладает пролонгированным действием в течение не менее 3 часов.

Терапевтическая эффективность Миковелта при дерматомикозах сельскохозяйственных животных

Терапевтическая эффективность препарата Миковелт при трихофитии крупна го рогатого скота. Для определения терапевтической эффективности Миковея при дерматомикозах крупного рогатого скота были проведены исследования на т лятах швицкой породы в возрасте 6-8 месяцев в количестве 27 гол., больных трих' фитией, вызванной Т.уеггисовит.

Пораженные участки кожи у телят обрабатывали препаратом Миковелт 1 раз в :нь 3 дня подряд.

Применение Миковелта способствовало выздоровлению телят через 10 сут. после 1чала лечения. Миковелт не раздражал кожу животных, способствовал восстанов-:нию волосяного покрова и был безвреден для животных. Использование Мико-;лта позволяло визуально определить площадь обработанных участков кожи, бла->даря тому, что входящая в состав препарата метиленовая синь окрашивает в синий !ет кожу животных.

Терапевтическая эффективность Миковелта при трихофитии лошадей. Для оп-¡деления терапевтической эффективности Миковелта при трихофитии лошадей лло отобрано 18 голов животных, причиной болезни которых явился гриб equinum. Кроме того, из соскобов кожи лошадей были выделены эшерихии, ста-илококки, псевдомонады, вызывающие раневые инфекции.

Миковелт наносили на пораженные участки кожи лошадей с помощью ватно-1рлевого тампона 1 раз в день 3 дня подряд.

На 5 день после применения Миковелта на обработанных препаратом поверхно-ях кожи у лошадей образовывалась тонкая ороговевшая корочка, состоящая из торгнутых организмом пораженных дерматофитами клеток эпителия и погибших юр Trichophyton. После удаления или самоотслаивания корочек, под ними обнашивали молодой, не пораженный возбудителем эпителий.

Препарат Миковелт обладал противозудным, обезболивающим, смягчающим дей-вием и способствовал восстановлению волосяного покрова у леченных животных. Терапевтическая эффективность препарата «Миковелт» при трихофитии овец. зучение терапевтической эффективности Миковелта при трихофитии овец было юведено на 322 овцах, зараженных T.mentagrophytes.

Пораженные участки кожи у овец обрабатывали препаратом Миковелт 1 раз в ;нь 3 дня подряд.

Применение Миковелта уже после однократной обработки способствовало исчез->вению у овец зуда в области пораженных трихофитоном участков кожи, общее »стояние овец улучшалось - овцы перестали беспокоиться и тереться о различные >едметы головой, охотно выходили на пастбище. На 5 день после обработки в со-;обах кожи овец, взятых с обработанных Миковелтом участков, T.mentagrophytes, также сопутствующая бактериальная микрофлора не были выделены.

Таким образом, препарат Миковелт производства ООО «НПО BEJIT» облада. высокой фунгицидной активностью в отношении грибов из рода Trichophyton - во будителей трихофитии крупного рогатого скота, телят и овец. Терапевтическая эф фективность применения Миковелта при лечении телят, лошадей и овец, больнь трихофитией, составила 100%. Все телята выздоровели на 10 сутки, лошади - на сут после начала лечения, овцы - на 5 сутки. Миковелт обладает противозудны; обезболивающим, смягчающим действием и способствует восстановлению волос ного покрова у леченных животных.

Терапевтическая эффективность Миковелта при трихофитии и микроспории мелких домашних животных

Изучение терапевтической эффективности препарата Миковелт проводили с и пользованием больных трихофитией и микроспорией собак и кошек.

Из 32 обследованных собак 4 собаки (12,5%) были заражены M.canis, 13 соб; заражены T.mentagrophytes (40,6%), 15 собак заражены T.verrucosum (46,9%).

Из 27 больных кошек 8 были заражены M.gypseum (29,6%), от 3 кошек выдел ли T.mentagrophytes (11,1%), 16 кошек были заражены M.canis (59,3%).

M.canis T.mentag- T.verruco-rophytes sum Рис. 3. Уровень зараженности обследованных собак

M.gypseum M.canis T.mentagrophytes

Рис. 3. Уровень зараженности обследованных кошек

Терапевтическая эффективность применения препарата Миковелт при лечен; собак и кошек, больных трихофитией и микроспорией, составила 100%. Все живс: ные выздоровели на 5 сутки после начала лечения.

Изучение фармакокинетики и сроков выведения остаточных количеств Миковелта из организма крупного рогатого скота и овец после его курсового применения

Были проведены исследования молока коров, а также мяса коров и овец, леченных ковелтом, на наличие компонентов препарата и определение сроков ожидания [ молочной и мясной продукции после курсового применения средства.

Было установлено, что в исследуемых пробах молока, говядины и баранины следы ¡станции Велтон отсутствуют.

Сроки ожидания для молочной и мясной продукции после применения Миковелта утствуют и молоко и мясо можно использовать без ограничений.

ВЫВОДЫ

1. Новое лекарственное средство Миковелт, включающее в качестве основного ¡ствующего вещества отечественную антимикробную субстанцию Велтон, а в естве вспомогательных компонентов - изопропиловый спирт и метиленовый си-Í, является эффективным препаратом для наружного применения при дерматоми-ах и раневых инфекциях разных видов животных.

. Концентрация субстанции Велтон в препарате Миковелт, обладающая противо-[бковым и антибактериальным действием в отношении возбудителей дерматоми-;ов и раневых инфекций животных, должна составлять не менее 62,5 мкг/мл. . По параметрам острой токсичности Миковелт относится к 4 классу малоопас-х веществ и не обладает видовой чувствительностью. При длительном примене-i препарат не проявляет сенсибилизирующего, кожно-резорбтивного и кумуля-iHoro действия, не влияет на морфологический состав крови животных, не вызы-гг аллергических реакций и изменений антитоксической функции печени.

4. Лекарственное средство Миковелт обладает in vitro противогрибковой активно-|Ю в отношении культур C.albicans, T.vermcosum, T.violaceum, T.mentagrophytes, gypseum, M.canis, M.lanosum, E.rubrum, A.niger, плесневых грибов Cladosporium »., Mucor spp. и бактерицидной активностью в отношении E.coli, S.aureus, eruginosa, B.cereus, C.sporogenes. Коэффициент эффективности противогрибково-и бактерицидного действия Миковелта при экспозиции 3 мин. составляет 100%.

5. От телят, больных дерматомикозами, выделяли Trichophyton verrucosum, от л шадей - Trichophyton equinum, от овец - Trichophyton mentagrophytes. От собак поражениями кожи в 46,9% случаев выделяли Trichophyton verrucosum, в 40,6' случаев - Trichophyton mentagrophytes, в 12,5% случаев - Microsporum canis. С больных дерматомикозами кошек выделяли в 59,3% случаев Microsporum canis, 29,6% случаев - Microsporum gypseum, в 11,1% случаев Trichophyton mentagri phytes.

6. Для лечения разных видов животных, больных трихофитией, микроспорией эпидермофитозом, Миковелт необходимо применять наружно 1 раз в день 3 ду. подряд. При этом больные морские свинки выздоравливают на 12 суг. после обр; ботки, кролики и телята - на 10 сут., лошади, овцы, собаки и кошки - на 3-5 су Контрольные животные самовыздоравливали на 35-45 сутки с начала постановк опыта.

7. Миковелт обладает противовоспалительным и ранозаживляющим действие: при раневых инфекциях у лабораторных и сельскохозяйственных животных. Проп-вовоспалительное действие Миковелта в 2 раза превышает показатели в контрол! ной группе животных. Препарат ускоряет процесс заживления искусственно наш сенных не инфицированных ран в 2 раза, а инфицированных ран - в 3 раза, по cpai нению с контролем. Эффективность применения препарата 1 раз в день 3 дня по; ряд для лечения животных при раневых инфекциях составляет 100%.

8. Миковелт обеззараживает кожу в местах инъекций и операционного поля 100% исследованных собак через 3-5 мин. после обработки и обладает пролонгирс ванным действием в течение не менее 3 часов.

9. Компоненты Миковелта не накапливаются в молоке и в мясе крупного рогатого скота и овец, сроки ожидания для молочной и мясной продукции после применения препарата отсутствуют и молоко, говядину и баранину можно использовать без ограничений.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

1. По результатам исследований составлены и утверждены в установленном порядке 2 научных отчетах: промежуточный отчет «Экспериментальные испытания безопасности и антимикробной активности препарата Миковелт»; заключитель-

ля отчет «Изучение лечебно-профилактической эффективности препарата «Ми->велт» при дерматомикозах и раневых инфекциях животных».

2. Результаты исследований включены в проект СТО 71954720-0005-2010 на ле-фственное средство Миковелт.

3. Разработан проект инструкции по применению лекарственного средства Мико-ят при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных.

4. В опытах на кроликах, морских свинках, белых крысах и белых мышах, прово-шых в условиях вивария кафедры микробиологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, ли-¡нзированной по работе с микроорганизмами Ш-ГУ групп патогенности, показана :звредность, противогрибковая и бактерицидная активность препарата Миковелт.

5. В опытах на крупном рогатом скоте, лошадях, овцах, собаках и кошках изучен зханизм действия препарата Миковелт, дана оценка его влияния на организм жи->тных при использовании при дерматомикозах и раневых инфекциях, показана вы-жая лечебно-профилактическая эффективность препарата, что подтверждено ак-ми, утвержденными руководителями хозяйств (КФК «Корнево», Истринского р-I, Московской обл.; СХПК «Верещаки», Новозыбковского района, Брянской обл., геменное овцеводческое хозяйство института биотехнологии Национальной ака-:мии Кыргызской Республики) и ветеринарных клиник (ООО «Вет Био Сервис» Москва); ООО «Вет Зоо Сервис» (Москва); ветеринарный Центр пос. Красково, юберецкого р-на, Московской обл.).

6. Результаты исследований по применению лекарственного средства Миковелт >и дерматомикозах и раневых инфекциях животных используются в учебном прочее в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплине «Микробиология» для студентов жультета ветеринарной медицины и ветеринарно-биологического факультета.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать лекарственное средство Миковелт зооветспециалистам и вла-шьцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при обработке секционных и операционных полей; профилактике инфицирования ран кожи, >дкожной клетчатки и слизистых оболочек животных; для лечения сельскохозяй-венных, мелких домашних и лабораторных животных при трихофитии, микроспо-ш, эпидермофитозе и раневых инфекциях.

2. Рекомендовать препарат Миковелт ветеринарным специалистам для приме! ния в качестве противогрибкового, антибактериального, противовоспалительного ранозаживляющего средства при дерматомикозах и раневых инфекциях животных.

3. Миковелт рекомендуется для применения в качестве антисептического средст для профилактики послеоперационных осложнений и предупреждения развит гнойной патологии.

4. Результаты исследований по изучению бактерицидной и фунгицидной актив! ста Миковелта, а также по определению острой и хронической токсичности при рата и оценке его лечебно-профилактической эффективности на разных видах я вотных рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплинам «Микр биология», «Биотехнология» и «Ветеринарная хирургия» в высших учебных заве; ниях по специальностям 111201 «Ветеринария» и 110401 «Зоотехния».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Грязнева Т.Н., Кудинова Т.А., Иванова Е.Б. Изучение биоцидных свойств щ парата Миковелт в отношении дерматофитов //Жизнь без опасностей. Здоров] профилактика, долголетие.- 2007, № 4,- С. 96-97.

2. Перспективные инновационные проекты, обеспечивающие биобезопаснос сельскохозяйственной продукции /Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Водолажский B.j Спиридонов A.B., Чекмарев С.А., Кудинова Т.А. //Наука и образование для цел биобезопасности: Сб. науч. тр.- Пущино: ИЦ «Биоресурсы и экология»,- 2008.49-53.

3. Использование нанотехнологий для создания биоцидов ветеринарного назна1 ния /Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Водолажский В.А., Спиридонов A.B., Кудино Т.А. //Материалы V международного Симпозиума «ЕС-Россия: сотрудничество области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи в 7 Рамс ной Программе».- Пущино: ИЭМ.- 2008.- С. 22-24.

4. Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Кудинова Т.А. Новый биоцид Миковелт и его п; менение при дерматомикозах животных //Достижения науки и техники АПК,- 200 №3,- С. 31-32.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 18.11.2010 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов (495)730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кудинова, Татьяна Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Распространенность дерматомикозов на территории России.

1.2. Восприимчивость разных видов животных к возбудителям трихофитии и микроспории.

1.3. Биопрепараты для специфической профилактики дерматомикозов и их эффективность.

1.4. Терапевтические средства, применяемые при лечении больных дерматомикозами животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Определение бактерицидной и противогрибковой активности Миковелта in vitro.

2.2.1.1. Определение бактерицидной активности Миковелта в отношении тест-штаммов бактерий.

2.2.1.2. Определение противогрибковой активности Миковелта в отношении дрожжеподобных грибов рода Candida.

2.2.1.3. Определение противогрибковой активности Миковелта методом двукратных серийных разведений в жидкой среде.

2.2.1.4. Определение противогрибковой активности Миковелта методом диффузии в агар Сабуро.

2.2.2. Определение острой и хронической токсичности препарата Миковелт на организм лабораторных животных.

2.2.3. Токсикологическое действие Миковелта на организм сельскохозяйственных и мелких домашних животных.

2.2.4. Изучение антимикробного действия Миковелта прираневых инфекциях у белых мышей и кроликов.

2.2.5. Изучение противогрибковой эффективности Миковелта на моделях кандидозной инфекции у белых мышей и кроликов.

2.2.6. Изучение эффективности Миковелта на моделях дерматомикозов у морских свинок и кроликов.

2.2.6.1. Применение Миковелта при дерматомикозах у морских свинок и кроликов, вызываемых дерматофитами родов Trichophyton и Microsporum.

2.2.6.2. Эффективность Миковелта при дерматомикозе морских свинок, вызванном эпидермофитоном.

2.2.7. Изучение бактерицидного, противовоспалительного и ранозаживляющего действия Миковелта при раневых инфекциях животных.

2.2.8. Оценка эффективности обеззараживающего и пролонгированного действия Миковелта при обработке кожи инъекционного и операционного полей у животных.

2.2.9. Терапевтическая эффективность Миковелта при дерматомикозах сельскохозяйственных животных.

2.2.10. Терапевтическая эффективность Миковелта при трихофитии и микроспории мелких домашних животных.

2.2.11. Изучение фармакокинетики и сроков выведения остаточных количеств Миковелта из организма крупного рогатого скота и овец после его курсового применения.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных"

Актуальность темы. Дерматомикозы. животных представляют серьезную медико-социальную проблему во многих странах мира, так как больные животные часто служат источником заражения людей (2, 11, 67).

В последние годы дерматомикозы разных видов животных приобретают все более широкое распространение на территории РФ. Это связано с ростом у населения числа мелких домашних животных; увеличением численности бродячих животных, служащих основным источником возбудителей; с высокой восприимчивостью собак и кошек к заражению; недостаточной эффективностью специфических средств профилактики дерматомикозов; высокой заболеваемостью животных дерматитами, которые осложняются грибковыми инфекциями. Все эти факторы способствуют поддержанию неблагополучия по дерматомикозам животных в городах и других населенных пунктах России (7, 15, 28, 34, 59, 92).

Наиболее часто у сельскохозяйственных и домашних животных возбудителями трихофитии являются виды грибов рода Trichophyton: T.verrucosum, T.equinum, Т. mentagrophytes и Т. gallinae; микроспории — рода Microsporum: M.canis (M.lanosum), M.gypseum, M.equinum (19, 23, 26, 30, 41, 85, 103, 112).

По данным ряда отечественных учёных (35, 37, 38, 54, 71), в настоящее время зафиксировано 18 видов дерматофитов, вызывающих дерматомикозы у мелких домашних животных.

Маноян М.Г. с соавт. (51) считают, что на дерматомикозы приходится 55% от всех болезней, проявляющихся поражениями кожи.

Гордиенко JI.H. (28), проведя статистические исследования по заболеваемости животных дерматитами, считает что заболеваемость животных дерматомикозами составляет - 73%.

По наблюдениям Gaskel R. и Bennet М. (20) ведущая роль при дермато-микозах принадлежит Microsporum canis (более 90% кожных болезней кошек и 50-70% собак) и Trichophyton mentagrophytes (70 и 60% соответственно).

Дерматомикозы, ранее считавшиеся спорадическими заболеваниями, в настоящее время протекают в виде эпизоотий. Индекс заболеваемости среди собак и кошек составляет 1592-6003 (13, 22, 35, 49, 53, 56, 97).

Основными источниками возбудителей микроспории и трихофитии являются больные животные, которые заражают здоровых контактным путем. Заражение происходит в основном через поврежденные участки кожи - трещины, царапины, ссадины и др. Важную роль в передаче возбудителей играют зараженные помещения, мебель, предметы ухода, снаряжение (ошейники, шлейки, намордники и др.). Особую опасность для животных и человека представляют инфицированные бездомные собаки и кошки (11, 24, 61, 87).

Большую роль в возникновении кожных заболеваний играет низкая резистентность организма, хроническое течение ряда вирусных и паразитарных инфекций, неблагоприятные экологические факторы, наличие эктопаразитов, неудовлетворительные санитарно-гигиенические условия в местах содержания и выгула животных (35, 51, 66, 72, 95, 116, 123, 127, 128).

Кроме того, многие авторы отмечают, что при ввозе в страну племенного скота из-за рубежа, он, как правило, заболевает трихофитией, а применение вакцины ЛТФ-130 не приносит ощутимых результатов. В дальнейшем на фоне пониженной резистентности организма такие животные заболевают другими инфекционными болезнями, например, некробактериозом, и их выбраковывают (49, 63, 77, 79, 81, 82, 91).

Несмотря на существование многочисленных современных наружных и системных фармакологических средств, их терапевтическая эффективность остается достаточно низкой, поэтому проблема лечения дерматомикозов по-прежнему актуальна не только для ветеринарии, но и для медицины (35, 139).

Следует учесть, что вакцины против дерматофитозов (Вакдерм, Поли-вак-ТМ, Микродерм и др.) рекомендуется применять мелким домашним животным с 1-1,5-месячного возраста. Однако новорожденные животные очень чувствительны к возбудителям и болеют дерматомикозами, иногда в тяжелой форме, а иммунная система у них еще не сформировалась (35, 68, 70, 99).

По данным Саркисова А.Х. с соавт. (77), имеются случаи неэффективности вакцинотерапии у некоторых пород кошек, в частности, персидских.

Головина Н.П. с соавт. (25) указывают, что лечебная эффективность вакцины Поливак-ТМ у слабых, истощенных животных, имеющих нарушение обмена веществ и пораженных эктопаразитами, снижается. Применение вакцины Вакдерм у самок не рекомендуется во второй половине беременности.

В настоящее время появилось значительное количество новых специфических лечебно-профилактических средств как отечественного, так и зарубежного производства для борьбы с дерматомикозами. Часто противогрибковые препараты имеют высокую стоимость, рассчитаны на длительный период применения и имеют ряд противопоказаний, что делает их малодоступными для использования ветеринарными специалистами и владельцами животных.

В связи с вышеизложенным, важным является создание новых, экологически безопасных противогрибковых препаратов для наружного применения, обладающих как фунгицидной, так и антибактериальной активностью, имеющих низкую себестоимость, высокую терапевтическую эффективность, отсутствие противопоказаний.

Поэтому, разработка и оценка эффективности новых противогрибковых средств для наружного применения является актуальной задачей для ветеринарной науки и практики.

Цель и задачи исследований. Цель исследований — определение антимикробной активности, безопасности и терапевтической эффективности препарата Миковелт при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных.

Для решения были поставлены следующие задачи:

1. Определить противогрибковую и бактерицидную активность Мико-велта in vitro.

2. Определить острую и хроническую токсичность препарата.

3. Изучить противогрибковое и бактерицидное действие Миковелта при дерматомикозах и раневых инфекциях экспериментальных животных.

4. Определить противовоспалительное и ранозаживляющее действие Миковелта.

5. Определить эффективность обеззараживающего и пролонгированного действия Миковелта при обработке кожи инъекционного и операционного полей у мелких домашних животных.

6. Определить терапевтическую эффективность Миковелта при дерматомикозах сельскохозяйственных и мелких домашних животных.

7. Составить проект нормативной документации на препарат Миковелт с целью регистрации его для применения на территории РФ.

Научная новизна работы.

1. Впервые, для ветеринарной практики предложено новое лекарственное средство Миковелт на основе отечественной антимикробной субстанции Велтон (0,1%), изопропилового спирта (70%) и метиленовой сини (0,045%), обладающее противогрибковой и бактерицидной активностью и предназначенное для лечения разных видов животных при дерматомикозах и раневых инфекциях.

2. Доказано, что субстанция Велтон может быть использована в качестве основного компонента лекарственных средств для наружного применения при трихофитии, микроспории, эпидермофитозе и кандидозе в концентрации не менее 62,5 мкг/мл.

3. Установлено, что препарат Миковелт безвреден для животных и не обладает сенсибилизирующими и кумулятивными свойствами.

4. Установлено, что дерматомикозы у собак в 46,9% случаев вызывает T.verrucosum, в 40,6% случаев - T.mentagrophytes, в 12,5% случаев - M.canis.

Причиной дерматомикозов кошек в 59,3% случаев является М.сашБ, в 29,6% случаев - М^урБеиш, в 11,1% случаев T.mentagrophytes. В 100% случаев телята, больные дерматомикозами, были заражены Т.уеггисозшп, лошади -Т^шпшп, овцы - Т.теп1а§горЬу1ез.

5. Доказано, что терапевтическая эффективность Миковелта при дерма-томикозах и раневых инфекциях крупного рогатого скота, лошадей, овец, собак, кошек, кроликов, морских свинок, белых крыс и белых мышей составляет 100% при наружном применении препарата 1 раз в день 3 дня подряд.

Практическая значимость полученных результатов.

1. Для применения в ветеринарии в качестве лекарственного противогрибкового и антибактериального средства для лечения животных при дер-матомикозах и раневых инфекциях, обработки инъекционного и операционного полей предложен высокоэффективный и безвредный препарат Мико-велт, который прошел широкие производственные испытания в животноводческих хозяйствах и ветеринарных клиниках.

2. На базе НПО «Велт» (г. Оренбург) создана автоматизированная технологическая линия промышленного производства препарата Миковелт. Получены опытные серии Миковелта, которые прошли производственные испытания.

3. Результаты исследований включены в проект СТО 71954720-00052010 на лекарственное средство Миковелт.

4. Разработан проект инструкции по применению лекарственного средства Миковелт в ветеринарии.

5. В опытах на кроликах, морских свинках, белых крысах и белых мышах показана безвредность и антимикробная активность препарата Миковелт, что подтверждено актами, утвержденными в установленном порядке.

6. В опытах на крупном рогатом скоте, лошадях, овцах, собаках и кошках изучен механизм действия лекарственного средства Миковелт, дана оценка его влияния на организм животных при дерматомикозах и раневых инфекциях, показана высокая терапевтическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств и ветеринарных клиник Москвы, Московской и Брянской областей.

7. Результаты исследований по применению лекарственного средства Миковелт при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплине «Микробиология».

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат непосредственное осуществление исследований по изучению противогрибковой и бактерицидной активности Миковелта in vitro и in vivo, острой и хронической токсичности препарата, определение терапевтической эффективности Миковелта при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных, разработка нормативной документации на Миковелт, анализ и обобщение полученных результатов.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований изложены в 2 научных отчетах («Экспериментальные испытания безопасности и антимикробной активности препарата Миковелт», «Изучение лечебно-профилакти-ческой эффективности препарата «Миковелт» при дерматомикозах и раневых инфекциях животных») и представлены на XV Ветеринарном конгрессе, секции «Болезни крупного рогатого скота» (Москва, 2007), на рабочем совещании Национального союза «Медико-биологическая защита» (Москва, 2007), на V Международном Симпозиуме «ЕС-Россия: сотрудничество в области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи в 7 Рамочной Программе» (г. Пущино, Московской обл., 2008), на V Международной конференции «Наука и образование для целей биобезопасности» (г. Пущино, Московской обл., 2008), на выставке, посвященной 90-летию ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2009), на выставке «Звезда Подмосковья» (Раменское, Московской обл., 2010), на Российской агропромышленной выставке «Золотая 0сень-2010» (Москва, 2010), на совещании сотрудников НИИ биоцидов и нанобиотехнологий (Москва, 2010).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 4 статьи, в т.ч. 2 статьи в научных журналах (Достижения науки и техники АПК, Жизнь без опасностей) и 2 - в сборниках научных трудов.

Структура диссертационной работы. Материалы диссертации изложены на 180 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практическое использование полученных научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (143 источника, из которых 101 отечественных и 42 иностранных авторов). Работа содержит 42 таблицы, 39 рисунков и 15 страниц приложений.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Кудинова, Татьяна Анатольевна

4. ВЫВОДЫ

1. Новое лекарственное средство Миковелт, включающее в качестве основного действующего вещества отечественную антимикробную субстанцию Велтон, а в качестве вспомогательных компонентов - изопропиловый спирт и метиленовый синий, является эффективным препаратом для наружного применения при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных.

2. Концентрация субстанции Велтон в препарате Миковелт, обладающая противогрибковым и антибактериальным действием в отношении возбудителей дерматомикозов и раневых инфекций животных, должна составлять не менее 62,5 мкг/мл.

3. По параметрам острой токсичности Миковелт относится к 4 классу малоопасных веществ и не обладает видовой чувствительностью. При длительном применении препарат не проявляет сенсибилизирующего, кожно-резорбтивного и кумулятивного действия, не влияет на морфологический состав крови животных, не вызывает аллергических реакций и изменений антитоксической функции печени. ЛД50 Миковелта для белых мышей составляет более 6000 мг/кг.

4. Лекарственное средство Миковелт обладает in vitro противогрибковой активностью в отношении культур C.albicans, T.verrucosum, T.violaceum, T.mentagrophytes, M.gypseum, M.canis, M.lanosum, E.rubrum, A.niger, плесневых грибов Cladosporium spp., Mucor spp. и бактерицидной активностью в отношении E.coli, S.aureus, P.aeruginosa, B.cereus, C.sporogenes. Коэффициент эффективности противогрибкового и бактерицидного действия Миковелта при экспозиции 3 мин. составляет 100%.

5. От телят, больных дерматомикозами, выделяли Trichophyton verruco-sum, от лошадей - Trichophyton equinum, от овец - Trichophyton mentagrophytes. От собак с поражениями кожи в 46,9% случаев выделяли Trichophyton verrucosum, в 40,6% случаев - Trichophyton mentagrophytes, в 12,5% случаев - Microsporum canis. От больных дерматомикозами кошек выделяли в 59,3% случаев Microsporum canis, в 29,6% случаев - Microsporum gypseum, в 11,1% случаев Trichophyton mentagrophytes.

6. Для лечения разных видов животных, больных трихофитией, микроспорией и эпидермофитозом, Миковелт необходимо применять наружно 1 раз в день 3 дня подряд. При этом больные морские свинки выздоравливают на 12 сут. после обработки, кролики и телята - на 10 сут., лошади, овцы, собаки и кошки - на 3-5 сут. Контрольные животные самовыздоравливали на 35-45 сутки с начала постановки опыта.

7. Миковелт обладает противовоспалительным и ранозаживляющим действием при раневых инфекциях у лабораторных и сельскохозяйственных животных. Противовоспалительное действие Миковелта в 2 раза превышает показатели в контрольной группе животных. Препарат ускоряет процесс заживления искусственно нанесенных не инфицированных ран в 2 раза, а инфицированных ран - в 3 раза, по сравнению с контролем. Эффективность применения препарата 1 раз в день 3 дня подряд для лечения животных при раневых инфекциях составляет 100%.

8. Миковелт обеззараживает кожу в местах инъекций и операционного поля у 100% исследованных собак через 3-5 мин. после обработки и обладает пролонгированным действием в течение не менее 3 часов.

9. Компоненты Миковелта не накапливаются в молоке и в мясе крупного рогатого скота и овец, сроки ожидания для молочной и мясной продукции после применения препарата отсутствуют и молоко, говядину и баранину можно использовать без ограничений.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

1. По результатам исследований составлены и утверждены в установленном порядке 2 научных отчетах: промежуточный отчет «Экспериментальные испытания безопасности и антимикробной активности препарата Миковелт»; заключительный отчет «Изучение лечебно-профилактической эффективности препарата «Миковелт» при дерматомикозах и раневых инфекциях животных».

2. Результаты исследований включены в проект СТО 71954720-00052010 на лекарственное средство Миковелт.

3. Разработан проект инструкции по применению лекарственного средства Миковелт при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных.

4. В опытах на кроликах, морских свинках, белых крысах и белых мышах, проводимых в условиях вивария кафедры микробиологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, лицензированной по работе с микроорганизмами III-IV групп патогенности, показана безвредность, противогрибковая и бактерицидная активность препарата Миковелт.

5. В опытах на крупном рогатом скоте, лошадях, овцах, собаках и кошках изучен механизм действия препарата Миковелт, дана оценка его влияния на организм животных при использовании при дерматомикозах и раневых инфекциях, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств (КФК «Корнево», Истринского р-на, Московской обл.; СХПК «Ве-рещаки», Новозыбковского района, Брянской обл., племенное овцеводческое хозяйство института биотехнологии Национальной академии Кыргызской Республики) и ветеринарных клиник (ООО «Вет Био Сервис» (Москва); ООО «Вет Зоо Сервис» (Москва); ветеринарный Центр пос. Красково, Люберецкого р-на, Московской обл.).

6. Результаты исследований по применению лекарственного средства Миковелт при дерматомикозах и раневых инфекциях животных используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплине «Микробиология» для студентов факультета ветеринарной медицины и ветеринарно-биологического факультета.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать лекарственное средство Миковелт зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства* при обработке инъекционных и операционных полей; профилактике инфицирования ран кожи, подкожной клетчатки и слизистых оболочек животных; для лечения сельскохозяйственных, мелких домашних и лабораторных животных при трихофитии, микроспории, эпидермофитозе и раневых инфекциях.

2. Рекомендовать препарат Миковелт ветеринарным специалистам- для применения в качестве противогрибкового, антибактериального, противовоспалительного и ранозаживляющего средства при дерматомикозах и раневых инфекциях животных.

3. Миковелт рекомендуется для применения в качестве антисептического средства для профилактики послеоперационных осложнений и предупреждения развития гнойной патологии.

4. Результаты исследований по изучению бактерицидной и фунгицидной активности* Миковелта, а также по определению острой и хронической токсичности препарата и оценке его лечебно-профилактической эффективности на разных видах животных рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплинам «Микробиология», «Биотехнология» и «Ветеринарная хирургия» в высших учебных заведениях по специальностям 111201 «Ветеринария» и 110401 «Зоотехния».

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Кудинова, Татьяна Анатольевна, Москва

1. Антонов Б.И., Яковлева Т.Ф., Дербинова В.И. Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимические и микологические.- М.: Агропромиз-дат.- 1989.- 324 с.

2. Аравийский Р.А., Горшкова Г.И. Практикум по медицинской микологии // СПб.: СПбМАПО, 1995.-40 с.

3. Архипов А. А. Лечение собак с синдромом аллопеции // Ветеринария. -1999.-№ 7.- 53-55.

4. Афанасьева И. Применение антимикробных изделий для профилактики гнойных и грибковых заболеваний кожи // Медицина труда и промышленная экология. 2002- № 11.- С. 31 -34.

5. Афиногенова Г.Е. Чашечный метод оценки эффективности дезинфек-тантов и антисептиков //Методическое пособие.- СПб: СПбМА.- 2000.- С. 57.

6. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. М.: Агропромиздат.- 1962.

7. Барадиев Б.Н. Трихофития северных оленей и меры борьбы с ней (стригущий лишай).- Якутск: Якутское книжное издательство, 1991.- 320 с.

8. Белов А.Д., Чижов В.А., Данилов Е.П. Болезни собак: под ред. Д.А. Белова // Инфекционные болезни. Дерматомикозы. М.: Колос, 2002. - Гл. 6. -С. 240-243.

9. Белова В.И., Волков Ю.П. Основные направления исследований в разработке дезинфицирующих и антисептических средств /Научные основы дезинфекции и стерилизации Сб.науч.тр.- М.: ММА.-2001,- С. 13-18.

10. Беспалов В.Л. Идентификация дерматофитов с помощью тест- системы Derma-Kit // Ветеринария. 2003. - № 3 - 20-23.

11. Следовательно, рабочая концентрация препарата Миковелт, обладающая фунгицидным действием в отношении возбудителей микозов и плесневых грибов должна составлять не менее 62,5 мкг/мл (или 0,06 мг/мл.).

12. По нашему мнению, Миковелт во многих случаях может заменить антибиотики.

13. Поэтому, к определению острой и хронической токсичности мы подошли со всей ответственностью и провели широкомасштабные испытания Миковелта по определению его безвредности для разных видов животных.

14. По ингаляционной опасности в насыщающих концентрациях средство Миковелт относится к 4 классу малоопасных веществ. Учитывая назначения и область применения Миковелта, ингаляционная опасность его маловероятна.

15. Миковелт при нанесении на кожу животных не проявлял острой токсичности, что соответствует 4 классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76.

16. На неповрежденную кожу экспериментальных животных Миковелт при однократном применении не оказывал токсического и местно-раздражаю-щего действия, а при многократном использовании вызывал слабую эритему.

17. Мы считаем, что покраснение кожи у животных после использования Миковелта происходило в результате реакции макрофагов, которые реагировали на молекулы Миковелта, проникающие глубоко в кожу, и вызывали клеточную реакцию.

18. При однократном и многократном применении на поврежденную кожу экспериментальных животных Миковелт не оказывал токсического и местнораздражающего действия. Препарат ускорял процессы заживления ран в 2 раза.

19. При воздействии на слизистые оболочки, роговицу и коньюнктиву глаз животных препарат Миковелт относится к 4 классу малоопасных веществ.

20. В результате проведенных исследований было установлено, что при многократной обработке Миковелтом 5% кожного покрова животных интоксикации организма не происходило. Следовательно, препарат Миковелт не обладает кожно-резорбтивным действием.

21. Миковелт при длительном применении не влиял на морфологический состав крови, не вызывал изменений антитоксической функции печени и аллергических реакций у экспериментальных животных.

22. При длительном применении препарат не оказывал существенного влияния на гомеостаз организма экспериментальных животных, не проявлял кумулятивного действия и не обладал хронической токсичностью.

23. Было установлено, что в исследуемых пробах говядины и баранины следы клатрата дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом отсутствуют.

24. От одной забитой на мясо коровы на 3 сут. лечения Миковелтом было отобрано из разных участков туши 5 проб мяса, каждая проба весом 100 г.

25. Аналогично, по 5 проб мяса было отобрано от 1 забитой овцы, которую в течение 3 сут. лечили Миковелтом.

26. Всего было исследовано 10 проб мяса от крупного рогатого скота и овец.

27. Внешний вид и цвет мяса определяли визуальным осмотром, запах и вкус органолептически.

28. Было установлено, что исследуемые пробы мяса, полученные от животных, леченных Миковелтом, имеют характерный для говядины и баранины цвет и консистенцию.

29. Посторонний запах и вкус определяли у свежей говядины и баранины, а также в период варки мяса в течение 30 мин.

30. Было установлено, что говядина и баранина, полученные от леченных Миковелтом животных, имеет специфический для мяса приятный запах и вкус, мясной бульон прозрачный и ароматный. Посторонние запахи не были выявлены.

31. Для определения в мясе клатрата дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом использовали качественный метод, основанный на двухфазном титровании в присутствии смешанного индикатора.

32. При проведении исследований по 100 г свежего мяса пропускали через мясорубку, заливали 100 мл дистиллированной воды, интенсивно перемешивали в течение 5 мин. и отжимали мясную вытяжку.

33. Исследования проводили так же, как описано выше.

34. Животным контрольной группы в количестве 10 голов Миковелт не применяли.

35. Ежедневно, в утреннее и вечернее доение, от коров опытной и контрольной групп отбирали по 200 мл проб молока и проводили его исследования.

36. Внешний вид и цвет молока определяли визуальным осмотром, запах -органолептически.

37. При определении внешнего вида и цвета молока, его наливали в количестве 25 мл в пробирку из прозрачного стекла с внутренним диаметром 30 мм и вместимостью 50 мл и просматривали в проходящем свете.

38. Было установлено, что молоко от коров опытной и контрольной групп представляет собой непрозрачную жидкость беловатого цвета.

39. Посторонний запах и вкус определяли у свежевыдоенного молока и во время кипячения 100 мл молока в течение 10 мин.

40. Было установлено, что молоко, полученное от опытных и контрольных животных, имеет специфический для молока приятный запах и вкус.

41. Для определения в молоке клатрата дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом использовали метод двухфазного титрования в присутствии смешанного индикатора.

42. Исследование мяса коров и овец, леченных Миковелтом, на наличие компонентов препарата и определение сроков ожидания для мясной продукции после применения средства.

43. Было проведено исследование мяса, полученного от коров и овец, которых лечили Миковелтом, на содержание в мясе клатрата дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом.

44. Миковелт прошел широкие клинические испытания в ветеринарной практике и зарекомендовал себя как эффективное и безвредное противомик-робное средство.

45. Однако, на рынке ветеринарных препаратов предлагаются разнообразные лекарственные средства для лечения животных при дерматомикозах, но все они имеют противопоказания и должны применяться с осторожностью.

46. Как указывает Meunier F. (124), до недавнего времени проблема нарастающей антибиотикорезистентности раневой микрофлоры как в медицине, так и в ветеринарии решалась путем использования антибиотиков нового по

47. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

48. Профилактика и лечение дерматомикозов животных до сих пор остается серьезной проблемой ветеринарии.

49. Повысить качество лечебно-профилактических мероприятий при дерма-томикозах животных возможно путем совершенствования методологии местной терапии и применения эффективных антимикробных средств.

50. На сегодняшний день получить подобные биоциды возможно только с применением биоцидных субстанций нового поколения (44).

51. Бирюкова М.В. Микроспория кошек (этиология, диагностика и лечение): Автореф. дис. канд. вет. наук.- М., 1999.- 18 с.

52. Бурмистров С. Зооантропонозы, общая беда /Собаки и кошки в одной обложке 2000-2001: Справочник для владельцев домашних животных.-М.: Зооинформ, 2000.- С. 26-27.

53. Бучин П.И., Новокшенов B.C. Определение степени взаимного повышения антимикробной активности антисептиков при их сочетании //Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия.- М.: ООО «Издательский дом «Вести».- 2005.- Т. 7.- № 2.- С. 22-23.

54. Важенина Е.Г. Распространение поверхностных микозов у собак на территории юга Западной Сибири // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Материалы 4-ой межрегиональной научно-практической конференции.- Омск: ОмГАУ.- 2005.- С. 77-81.

55. Важенина Е.Г. Лечение собак при дерматомикозах и демодекозе, осложненном дерматомикозом / Е.Г. Важенина // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Материалы 5-ой межрегиональной научно-практической конференции. Омск: ОмГАУ.- 2006.- С. 256-259.

56. Важенина Е.Г. Выживаемость возбудителя трихофитии в различных условиях внешней среды /Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Материалы 5-ой межрегиональной научно-практической конференции.-Омск: ОмГАУ.- 2006. С. 259-262.

57. Гаскелл P.M., Беннет М. Справочник по инфекционным болезням собак и кошек .- М.: Аквариум, 2000. 224 с.

58. Егорова Т.А., Клунова С.М., Живухина Е.А. Основы биотехнологии //Учеб. пособие для высш. пед. учеб. заведений. М.: Издательский центр «Академия», 2003.- 208 с.

59. Глотова Т.И. Вспышка микроспории у домашних кошек //Ветеринария.- 1997.- № 11.- С. 47-48.

60. Глотова Т.И. Дерматомикозы собак и кошек в условиях города // Ветеринария домашних животных.- 2005.- № 2- С. 23-24.

61. Головина Н., Красота JI., Галушко JL Живые грибные вакцины против дерматомикозов // Животноводство России.- 2003.- № 5.- С. 20-21.

62. Головина Н.П., Красота JI.A., Галушко JI.X. Микотические болезни лошадей /Материалы IX Московского международного ветеринарного конгресса.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2001.- С. 312315.

63. Гордиенко JI.H. Скрытые формы дерматомикозов у собак, содержащихся муниципальном приюте /Диагностика, лечение, профилактика болезней животных: Сб. науч. тр.- Омск: ИВМ Ом ГАУ. 1999. - С. 29-30.

64. Гордиенко JI.H., Пильщик Е.В., Овчеренко H.A. Зооантропонозы мелких домашних животных в мегаполисе г. Омска / /Материалы IX Московского международного ветеринарного конгресса.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2001.- С. 24.

65. Горячкина Е.И. Микроспория кошек сравнительные аспекты.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2003.- С. 21-22.

66. Государственный стандарт Союза ССР. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. ГОСТ 12.1.007-76,- М., 1984.- 4 с.

67. Грязин В.Н. Этиологические аспекты дерматитов собак и кошек в Новосибирске /Актуальные вопросы ветеринарии: Материалы научно практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ. - Новосибирск: НГАУ.- 2001.- С. 109-110.

68. Дроздов А.И. Методы выделения антигенов из патогенных грибов.-JL: Медицина.- 1971,- 33 с.

69. Зубарева И.М. Анализ эпизоотической картины дерматомикозов собак и кошек в Усть-Каменогорске /Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Сб.науч.тр. Новосибирск: НГАУ.- 2003. - С. 73-74.

70. Ишкаева Д.Р., Юсупова JLM. Биологическая активность производных бензофуроксана /Новые фармакологические средства в ветеринарии: Материалы научн.-практ. конф. СПб.: СПбГАВМ, 2002.- С. 57.

71. Кашкин П.Н. Дерматомикозы.- JL: Медгиз.- 1950.- 227 с.

72. Кашкин П.Н. Медицинская микология.- JL: Медгиз.- 1962.- 344 с.

73. Костин В.В. Словарь ветеринарных микологических и микотоксико-логических терминов.- М.: Россельхозиздат.- 1987.- 79 с.

74. Кривошеин Ю.С. Изучение мутагенного и канцерогенного действия антимикробных поверхностно-активных веществ //Антибиотики.- 1984,- № 7.

75. Кузнецов А.Ф. Ветеринарная микология.- СПб.: Издательство «Лань».- 2001.-416 с.

76. Лабусова Н.И. Стимуляция поствакцинального иммунитета при трихофитии крупного рогатого скота: Автореф. соиск. — канд. вет. наук // Минск, 2004, 21 с.

77. Лештаева A.B. Лечение мелких домашних животных, больных дер-матомикозами / Материалы IX Московского международного ветеринарного конгресса.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2001.- С. 15.

78. Липин A.B. Ветеринарный справочник: традиционные и нетрадиционные методы лечения собак. Дерматомикозы. — М.: Колос, 2002. — Ч. 5, гл. И.-С. 272-278.

79. Литвинов A.M. Дерматофитозы кошек и собак (профилактика и лечение) //Ветеринария. -2000.- Вып. 11.- С. 51-53.

80. Ллойд Д.Х., Марш К.А. Оптимизация состояния кожи и шерсти у собак / Waltham Focus: Спец. выпуск. Внимание коже и шерсти. 2001. - Т.Н. -№ 1.-С. 18-26

81. Лященко Т.А., Маркина H.A. Эпизоотологические особенности микозов домашних животных /Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Новосибирск: НГАУ.- 2003. С. 56-59.

82. Маноян М.Г., Овчинников P.C., Гайнуллина А.Г. Отбор штаммов грибов, перспективных для изготовления вакцины против дерматофитозов лошадей /Сборник научных трудов ВГНКИ,- Т. 66.- 2005.- С. 287-295.

83. Маноян М.Г., Савицкая М.Е. Изучение проблемы дерматофитозов спортивных лошадей в Москве и Подмосковье / Материалы IX Московского международного ветеринарного конгресса.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2001.- С. 315-317.

84. Масимов H.A., Лукьяновский В.А., Беляков И.М.Дерматомикозы: в кн. Здоровье вашей собаки .- М.: Нива России.- 1999.- С. 83-88.

85. Мюллер Э., Леффлер В. Микология: Пер. с нем.- М.: Мир.- 1995.341 с.

86. Нахмансон В.М., Бурба Л.Г. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных.- М.: Агропромиздат.-1990.-216 с.

87. Никитушкина H.A. Клинико-эпизоотологические особенности дерма-томикозов у собак и кошек, совершенствование схем их лечения /Автореф. дис. — канд. вет. наук. Новосибирск, 2008.-18 с.

88. Никифоров Л.И. Диагностика дерматофитозов животных: Метод, указ. М.: МГАВМиБ.- 2002.- 21 с.

89. Никифоров Л.И. Лабораторная диагностика дерматофитозов: Метод, указ. М.: МГАВМиБ.- 2000.- 17 с.

90. Новикова Т.В. Зоонозные дерматомикозы на территории Вологодской области /Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Материалы Сибирского Международного Ветеринарного конгресса. — Новосибирск: НГАУ.-2005.-С. 49-50.

91. Овчинников P.C., Плеских С.А., Мохина Т.Н. Грибы, изолированные из кожных поражений собак и кошек /Материалы X международного ветеринарного конгресса,- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.-2002.-С. 282-283.

92. Овчинников P.C., Маноян М.Г., Савицкая М.Е. Этиологическая структура дерматомикозов лошадей /Сборник научных трудов ВГНКИ.- Т. 66.- 2005.- С. 280-286.

93. Овчинникова Е.А. Роль мониторинга безопасности лекарственных средств в решении проблемы их рационального использования //Качественная клиническая практика.- 2003.- № 4.- С. 88-95.

94. Осидзе Д.Ф. Ветеринарные биопрепараты.- М.: Колос.- 1981,- 560 с.

95. Патерсон С. Кожные болезни кошек /Пер. с англ.- М.: «Аквариум ЛТД».- 2002.- 168 с.

96. Патерсон С. Кожные болезни собак /Пер. с англ. М.: «Аквариум ЛТД».- 2003.- 176 с.

97. Петрович C.B. Микозы животных,- М.: Росагропромиздат, 1989.174 с.

98. Позднякова О.Н., Махновец E.H., Решетникова Т.Б. Эпидемиология зооантропофильных дерматомикозов в городе Новосибирске /Проблемы медицинской микологии: Сб.науч.тр.- 2003.- Т.5.- № 2.- С. 64.

99. Поляков И.Д. Клиническое проявление дерматомикозов у собак и кошек / Материалы XII международного московского конгресса по болезням мелких домашних животных. М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2004.-С. 100-101.

100. Равилов Р.Х. Проблемы борьбы с инфекциями мелких домашних животных / Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Материалы Сибирской международной научно-практической конференции.- Новосибирск: НГАУ.- 2004.-С. 69-71.

101. Радчук H.A. Ветеринарная микробиология и иммунология /Возбудители микозов. М.: Агропромиздат.- 1991.- Ч. 3.- С. 342-348.

102. Разнатовский К.И., Родионов А.Н., Котрехова Л.П. Дерматомикозы: Руководство для врачей /Учеб. пособие для системы послевуз. проф. образования врачей.- СПб.: ИД СПбМАПО,- 2006.-183 с.

103. Родионов И.Н. Грибковые заболевания кожи: руководство для врачей.- Санкт Петербург: Наука и жизнь.- 2000.- С. 288.

104. Рукавишникова В.М. Современные особенности клиники и лечения микроспории //Лечащий врач,- 2001.- № 4.- С. 12-13.

105. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ /Под общей редакцией Хабриева Р.У.- 2-изд., перераб. и доп.- М.: ОАО «Издательство «Медицина».- 2005.- 832 с.

106. Саркисов А.Х., Королева В.П., Квашнина Е.С. Диагностика грибных болезней животных.- М.: Колос.- 1971.- 144 с.

107. Саркисов А.Х., Коромыслов Г.Ф., Овдиенко Н.П. Применение вакцин против дерматомикозов животных // Ветеринария. 1997. - № 6. — С. 13-15.

108. Саттон Д. Фотергилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. — М.: Мир.- 2001. — 486 с.

109. Соловьев Н.П. Применение и развитие новых подходов в профилактике и вакцинотерапии дерматомикозов крупного рогатого скота и северных оленей в Республике Саха // Ветеринарная патология.- 2003.-№ 1.- С.166-167.

110. Сосновский А.Т. Яговдик Н.З., Белугина И.Н. Дерматологический справочник.- Минск: Высш. Школа.- 2001.- 734 с.

111. Спесивцева H.A. Микозы и микотоксикозы животных.- М.:, Сельхоз-гиз.- 1960.-215 с.

112. Спесивцева H.A. Микозы и микотоксикозы: 2-е изд., испр. и доп.-М.: Колос.- 1964.- 519 с.

113. Старченков C.B. Болезни собак и кошек: Учебное пособие.- СПб.: Издательство «Лань».- 2001.- 560 с.

114. Степанова Ж.В., Гребенюк В.Н., Воробьева И.А. Диагностические ошибки при зооантропонозной трихофитии // Вестник дерматологии и венерологии. 2001. - № 6.- С. 36-38.

115. Тремасов М.Я. Дерматомикозы (дерматофитозы) // БИО: Журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств.- 2003.- № 9.-С. 19-21.

116. Тропин В.В. Опыт применения препаратов Траумель и Энгистол при терапии трихофитии и микроспории у кошек // Ветеринарная патология.-2003.-№ 4 (8).- С. 71-73.

117. Тугунова Т.Б. Клинико-эпизоотологические и этиологические особенности проявления дерматофитозов собак и кошек в условиях крупного города, совершенствование схем лечения- кошек при микроспории / Автореф. дис. канд. вет. наук. — Новосибирск, 2004.-22 с.

118. Тугунова Т.Б. Применение наружных противогрибковых препаратов при микроспории кошек /Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных: Матер, междун. науч.-практ. конф.: Сб. науч. тр. Троицк: УГАВМ.- 2005.- С. 198-201.

119. Урбан В.П., Сафин М.А., Сидорчук A.A. Практикум по эпизоотологии и инфекционным болезням с ветеринарной санитарией.- М.: Колосс.2002. 216 с.

120. Устинцева Ю.Ю. Дерматомикозы мелких животных в Якутии / Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Материалы Сибирского Международного Ветеринарного конгресса. Новосибирск: НГАУ.- 2005.- С. 60-61.

121. Фахретдинова Х.С., Медведева Е.А., Бурханова Н.Р. Динамика дер-матомикозов в республике Башкортостан в 1938-2003 гг. //Проблемы медицинской микологии.- 2004.- Т. 6.- № 2.- С. 124-125.

122. Ханис А.Ю. Микроспория собак и кошек: Дис. канд. вет. наук.- М., 1991, 164 с.

123. Ханис, А.Ю. Метод определения вирулентности дерматофитов // Ветеринария.- 2003.- № 8.- С. 20-22.

124. Харченко С.Н., Литвин В.П., Тарабара И.М. Справочник по микозам и микотоксикозам сельскохозяйственных животных.- Киев: Урожай.- 1982.168 с.

125. Хохряков М.К. Вредные и полезные грибы.- Л.: Колос.- 1969.- 110 с.

126. Цыганко A.B. Микроспория кошек и собак // Ветеринарная клиника.2003. -№ 1(08).-С. 21-25.

127. Черкай З.Н. Эффективность лекарственных форм анандина при микозах собак // Ветеринария.- 2006.- № 12.- С. 50-52.

128. Шагаев Д.В., Посашкова Е.С. Болезни кожи у собак // Ветеринария. -2003.-№4.-С. 51-52.

129. Юинг Г. Инструментальные методы химического анализа: Пер. с англ.- М.: Мир.- 1989.- 128 с.

130. Юсупова JI.M., Гарипов Т.В., Ишкаева Д.Р. Ветфуроксан — новое средство для лечения саркоптоидозов и дерматомикозов животных // Ветеринарный врач. 2002. - № 2.- С. 77-79.

131. Abu-Samra М. Т., Imbabi S. Е, El Sheikh Mangoub Brit, veter. J., 2005, 132, 6, 627-631.103 .Atlas of clinical fungi, 2nd edtion. G.S. de Hoog, J. Guarro, J. Gene, M.J. Figueras. Universitet Rovire i Virgili, Reus. Spain, 2000.

132. Coleman С. H. Vet. Rec., 2004, 81,11, 251-254.

133. Colombo S., Comegliani L. Efficacy of itraconazole as a combined continuous-pulse therapy in feline dermatophytosis: preliminary results in ninecases// Vet. Dermatol.- 2001,- Dec.l2(6).-P.347-50.

134. Edgar G. E., Keast J. C. Austr. vet. J., 2004, 16, 120-122.

135. Enshin A.V., Avdienco A.N. Comparative methos of treatment dermato-mycosis of dogs. //Military veterinary institute Pokrov, Russia, 2003, p. 335-338.

136. Fox M. W. Vet. Rec, 2003, 73, 914.

137. Green H. F. Vet. Rec, 2005, 72, 48, 1098.

138. Hornby H. E. Vet. J, 2002, 76, 210-226.

139. Jubb К. V. F, Kennedy P. C. Pathology of domestic animals, end, dit. by Acad. Press, New York, 2003, 697 p.

140. Jubb K, Kennedy P, Palmer N. Pathology of Domestic Animals. San-Diego, California, Academic Press, 1993.

141. Kammerlocher A. A, Mammo A. E. Vet. Med. small Anim. Clin, 2004, 60, 1, 65-68.

142. Kane G. J., Dowing W., Wilson A. J. Vet. Rec., 2005, 67, 779.

143. Kelley D. C., Huston K., Imes G. D., Weide K. D. Vet. Med. small Anim. Clin, 2005, 59, 2, 175-178.

144. King N. W, Frasier C. E. O, Garsia F. C, Wolf L. A., Williamson M. E. -Lab. Anim. Sci, 2006 21, 76-74.

145. Kozuh Erzen N, Kuzner J, Drobnic-Kossorok M.The development of the method for the determination of terbinafine in cat's plasma and hair// Pflu-gers Arch.- 2000.- 440.-P.168-170.

146. Le Riche P. D. Austr. vet. J, 2006, 44, 2, 64-67.

147. Lloyd D. H. Brit. vet. J, 2000, 131, 1, 115-119.

148. Lloyd D. H, OjoM. O.-Brit. vet. J, 2001, 120, 1, 108-114.

149. Lyman C. A., Walsh T. S.//Systemically administered antifungal agents. A review of their clinical pharmacology and therapeutic applications.-Drugs 44.1992.- 9-35.

150. Maraki S, Tselentis Y. Survey on the epidemiology of Microsporum canis infections in Crete, Greece over a 5-year period// Int J Dermatol.- 2000.-39(l).-P.21-22.

151. Meunier F. Zukumftpersrectiven der antimykotischen. // Therapie Mycoses, 1994, v. 37, Supp 1.2, s. 77-82.

152. Migaki G, Seibold H. R. Amer. J. vet. Res, 1999, 37, 10, 1225-1227.

153. Moule G. R, Southerland A. K. Austr. vet. J, 2001, 23, 3, 95.

154. Myging N. Ringworm in dogs and cats. Copenhagen, Denmark, 1979.

155. Nakamura Y. Dermatomycosis in human and animals// S.Watanabe, A.Hasegawa/Nippon Ishinkin Gakkai Zasshi.- 1999.- P.40-43.

156. Nisbet D. I, Bannatyne C. C. Vet. Rec, 2005, 67, 713-715.130.0duye O. O. World, anim. Rev, 1998, 16, 13-17.

157. Paterson S. Miconazole/chlorhexidine shampoo in controlling dermato-phytosis in cats// J Small Anim Pract.- 2000.- 41(4).-P.160-163.

158. Pier A.C., Moriello K.A. Parasitic relationship between Microsporum canis and the cat// Med Mycol.- 1998.-№ 36.- P.271-275.

159. Pier A.C. Dermatophytoses due to domestic animals// Rev Med Brux,-2000.-№21 (4).-P.34-37.

160. Raabe P., Mayser P. Demonstration of Malassezia furfur and M. sympo-dialis together with M. pachydermatis in veterinary specimens// Mycoses.-1998.-41(11-12).-P. 493-500.

161. Soltys M. A. In «Bacteria and fungi pathogenic to man and animals», edit, by Battlere, Tindall and Cox, 2003, 469-472.

162. Taylor W. W. Jr., Ohman J. L. Jr., Lowell F. C. Zoophilic dermatophytes. BBC Books, London, 1992.

163. Toman M., Svoboda M. Secondary immunodeficiency in dogs with enteric, dermatologic, infectious or parasitic diseases// Zentralb 1 Veterinarmed.-1998.-45 (6).-P. 321-334.

164. Tucker W. E. Pract. Vet., 2006, 38, 143-145.

165. Warin R. P., Champion R. H. Dermatomycoses, London, Saunders, 1974.

166. Watson D. R., Walton A. M. Vet. Med. small Anim. Clin., 2003, 68, 8, 844-846.

167. Weber A., Schliesser T. Vet. med., 2001, B. 18, 1, 17, 546-556.

168. White S. Equine bacterial and fungal skin diseases / S. White // Clinical programme proceedings of Fifth world congress of veterinary dermatology. Vienna, Austria.-2004.-P.290-295.

169. Wilson T. M., Dykes R. W., Tsai K. S. J. Amer.' vet. Med. Assoc., 2005, 161,6,611-617.