Активность ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторые биохимические показатели у больных ишемическим инсультом и в эксперименте

Левашова, Ольга Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Активность ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторые биохимические показатели у больных ишемическим инсультом и в эксперименте
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Активность ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторые биохимические показатели у больных ишемическим инсультом и в эксперименте"

003054443

На правах рукописи ---------- — ---------

Левашова Ольга Анатольевна

АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ ОБМЕНА РЕГУЛЯТОРНЫХ ПЕПТИДОВ И НЕКОТОРЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ У БОЛЬНЫХ ИШЕМИЧЕСКИМ ИНСУЛЬТОМ И В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

03,00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2007

003054443

Работа выполнена в Центральной научно-исследовательской лаборатории Государственного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Пензенский институт усовершенствования врачей Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Генгин Михаил Трофимович

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Кухтевич Игорь Иванович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук С.Л. Стволинский

доктор биологических наук, профессор С.П. Сяткин

Ведущая организация: Нижегородская медицинская академия

Защита состоится « » 2007 г. в ч

на заседании Диссертационного Совета Д.212.203.13 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8, медицинский факультет

Автореферат разослан « » 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Т.П. Лагуткина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Сосудистые нарушения головного мозга - одна из ведущих причин заболеваемости, смертности и инвалидизации в России. Ежегодно инсульт развивается более чем у 450 тыс. человек, из которых примерно 35 % умирает в остром периоде заболевания. Инвалидизация вследствие инсульта занимает первое место среди всех причин первичной инвалидности. В последние десять лет в России ежегодно регистрируется около 400 ООО тысяч инсультов, практически это население большого города, причем на ишемические повреждения мозга приходится 70-80 [Гусев Е.И., 2003]. В связи с этим выяснение биохимических особенностей течения острой церебральной ишемии и разработка на их основе методов диагностики, профилактики и лечения являются одной из главных проблем современной медицины.

Однако не выясненной остается роль нейропептидов, и в особенности ферментов, участвующих в их синтезе и распаде при ишемических поражениях мозга. Ангиотен-зинпревращающий фермент (АПФ), участвующий в генезе ангиотензина II (А II) и деградации брадикинина, рассматривается как один из основных регуляторов сердечнососудистой системы. С его участием связан риск критического повышения уровня артериального давления (АД), нарушения мозгового кровообращения и развитие инсульта. Действие ангиотензина II не ограничивается только вазоконстрикторными эффектами. Доказано, что этот пептид увеличивает образование активных форм кислорода и может усиливать оксидантный стресс [Laursen J.B., 1997], участвует также развитии воспалительной реакции [Das U.N., 2005].

Другой фермент - карбоксипептидаза N, - также как и АПФ, инактивирует бради-кинин, который является ключевым компонентом каллекреин-кининовой системы и характеризуется способностью снижать кровяное давление, увеличивать скорость местного кровотока, повышать проницаемость сосудов и гематоэнцефалического барьера [Drapeau G., 1991]. Кроме того, фермент вовлекается в процессинг энкефалинов и эн-дорфинов, т.е. может влиять на ограничение стрессорной реакции [Skidgel R., 2004; Matthews K.W.. Drouin S.M., 2004]. Роль КП N при острых нарушениях мозгового кровообращения ишемического генеза практически не изучена.

Неоднозначна роль оксида азота (NO) при патологических состояниях, включая и ишемическое повреждение головного мозга. 'Это вещество способно оказывать как ци-топротективное действие, так и цитотоксическое. Протективное действие связано с ва-

зодилатацией, модуляцией активности КМОА-рецепторов (Ы-метил-О-аспартат). Однако образующийся в повышенных концентрациях N0, оказывает нейротоксическое действие [Башкатова В.Г. и соавт., 1998; Горрен А.К. и соавт., 1998].

Не исключено, что количество N0 в свою очередь может зависеть от активности КП N. которая высвобождает аргинин, являющийся субстратом ЫО-синтаз.

Активация свободнорадикальных процессов при ишемии мозга приводит к развитию оксидантного стресса, являющегося одним из универсальных механизмов повреждения тканей [Биленко М.В., 1989; Завалишин И.А. и соавт., 1996; Болдырев А.А., 2001]. В связи с этим представляет интерес исследование у больных ишемическим инсультом процессов свободнорадикального окисления (СРО).

Многочисленные экспериментальные исследования показали, что среди механизмов вторичного поражения ткани важное место занимают реакции локального воспаления. Характер этих реакций отражают белки острой фазы, которые позволяют определить выраженность ишемического процесса и прогнозировать восстановление неврологических нарушений. Поскольку локальное воспаление замыкает порочный круг формирования мозговой недостаточности, представляет интерес изучение динамики белков острой фазы у больных ишемическим инсультом.

Сложность и противоречивость процессов ишемического повреждения требуют комплексной оценки биохимических показателей, отражающих метаболические процессы у больных с острой недостаточностью мозгового кровообращения. Такой подход позволит более полно выявить зависимость изучаемых показателей от тяжести ишемического процесса у больных с острым нарушением мозгового кровообращения.

В связи с вышеизложенным, нами были проведены исследования по изучению комплекса биохимических параметров у больных ишемическим инсультом: изучение активности ферментов обмена регуляторных пептидов (АПФ и КП 1М), показателей нитроксидэргической, оксидантной систем и воспалительной реакции.

Целью настоящего исследования явилась комплексная оценка биохимических показателей в прогнозе течения и исхода ишемического инсульта.

В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи.

1. Оценить динамику активности ферментов обмена регуляторных пептидов в крови у больных ишемическим инсультом.

2. Изучить динамику биохимических показателей, характеризующих отдельные этапы метаболического каскада (нитроксидэргическую, оксидантную системы, воспалительную реакцию) у больных ишемическим инсультом.

3. Изучить исследуемые показатели в крови и мозге при моделировании фокальной ишемии у крыс и сопоставить их с изменениями в мозговой ткани для понимания механизмов на уровне мозга.

4. Определить биохимические параметры, наиболее четко характеризующие тяжесть ишемического процесса.

5. Выявить корреляционные связи тяжести заболевания с биохимическими показателями больных ишемическим инсультом.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые дана оценка активности ферментов обмена регуляторных пептидов - АПФ и КП N - у больных ишемическим инсультом в остром периоде заболевания. Установлено, что в группе пациентов с тяжелым и крайне тяжелым вариантом течения заболевания активность АПФ повышалась в начале развития инсульта и значительно снижалась в 1 сутки. При отсутствии положительной динамики в восстановлении неврологических функций активность фермента оставалась повышенной.

Установлена разнонаправленная динамика содержания нитрит-аниона в зависимости от восстановления неврологических нарушений; у пациентов с отсутствием положительной динамики концентрация показателя не превышала значения группы контроля на протяжении всего периода наблюдения, в то время как улучшение состояния больных сопровождалось повышением его концентрации.

Полученные результаты представляют интерес в расшифровке механизмов неврологических нарушений и в частности роли ферментов обмена регуляторных пептидов в этом процессе. Практическое применение полученных данных может способствовать повышению качества диагностики и разработки условий для совершенствования терапевтической тактики.

Положения, выносимые на защиту.

1. Ишемия головного мозга сопровождается изменением активности ферментов обмена регуляторных пептидов как в сыворотке крови, так и в мозговой ткани

2. Среди исследуемых параметров изменение активности АПФ в большей степени отражает тяжесть.

3. Снижение концентрации нитрит-аниона как ближайшего стабильного метаболита оксида азота у больных ишемическим инсультом может служить критерием тяжести заболевания.

4. Наиболее четко отражающие отдельные этапы метаболического каскада, являются тесты на определение ТБК-активных продуктов, люминолзависимая хемилю-минесценция, СРБ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на I Всероссийской конференции по проблемам цереброваскулярной патологии и инсульта (Москва, 2003), на итоговых конференциях профессорско-преподавательского состава ПГПУ (2003,2004,2005), на Междунар. конференциях «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Гурзуф,2006), «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности центральной нервной системы», (Пенза, 2006). По теме диссертации опубликовано 7 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из 6 разделов: введение, обзор литературы по теме диссертации, материалы и методы исследования, результаты, обсуждение. Работа изложена на 127 страницах, иллюстрирована 3 рисунками, 21 таблицей. Список литературы содержит 286 наименований на русском и иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа была выполнена на базе Пензенского городского противоинсультного центра. В исследование было включено 77 больных, поступивших в течение первых 12 часов от начала заболевания, с симптомами ишемического инсульта в системе каротид-ных артерий в период с 2001 по 2005 г.г. Критериями исключения больных из исследования являлось наличие тяжелой декомпенсированной соматической патологии: сердечной, легочной, почечной, печеночной недостаточности, декомпенсированного сахарного диабета, воспалительных заболеваний. Контрольную группу составили 30 клинически здоровых добровольцев в возрасте 25 - 60 лет.

Клиническое обследование пациентов проводилось доцентом кафедры неврологии ГОУ ДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (зав. кафедрой д.м.н., проф. Кух-6

тевич И.И.) к.м.н. Золкорняевым И.Г. Обследование пациентов проводили в первые часы заболевания, 1, 3, 7 и 14 сутки.

Для оценки тяжести неврологического дефицита больных использовалась шкала Оргогозо [Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001]. На основании исходного суммарного балла шкалы Оргогозо больные подразделялись на группы по тяжести ишемического инсульта (табл. 1).

Таблица 1. Оценка тяжести инсульта по шкалам

Шкала Оргогозо Норма Легкий Средний Тяжелый Крайне тяжелый

100 Более 65 41-64 26-40 Менее 25

Начальное разделение было сохранено в течение всего периода наблюдения. Характеристика обследованных пациентов представлена в табл. 2.

_Таблица 2. Характеристика изученной группы больных._

Тяжесть инсульта

Показатель Легкий и средний (п=51) Тяжелый и крайне тяжелый (п=26)

Возраст, годы 56,0±7,87 58,45±8,5

Мужчины, 30 (58,8) 19(73,1)

Женщины, % 21 (41,2) 7 (26,9)

Артериальная гипертензия (%) 22(43,1) 15 (57,6)

Сахарный диабет (%) 5 (9,8) 3(11,5)

ИБС (%) 18(35,3) 11 (42,3)

Инфаркт миокарда в анамнезе (%) 7(13,7) 6 (23,0)

Инсульт в анамнезе (%) 10(19,6) 5 (19,2)

Для подтверждения ишемического характера инсульта, определения его локали-

зация и размеров ишемического очага в первые 6 суток от начала заболевания применялись методы нейровизуапизации - компьютерная томография (КТ) и магниторезо-нансная томография (МРТ) головного мозга, выполненные по стандартной методике.

Экспериментальная часть работы по моделированию фокальной ишемии проведена совместно с доцентом кафедры биохимии ПГПУ им. В.Г. Белинского к.б.н. Фир-стовой Н.В.

Объектом исследования служили головной мозг и сыворотка 58 самцов крыс линии Вистар в возрасте 6 месяцев массой 220-270 г. При моделировании воспроизводили основной патофизиологический процесс - неполную ишемию с последующей реперфу-зией с использованием тиопентала натрия в дозе 40-45 мг/кг, растворенным в 1 мл физиологического раствора. Окклюзию воспроизводили путем одномоментной перевязки внутренней сонной артерии (ВСА). Животных декапитировапи через 2 ч (1 группа), 1 сутки (2 группа) и 3 сутки (3 группа) после операции. Реперфузионное повреждение вызывали снятием клипсы после окклюзии. Декантацию осуществляли через 1 час по-

еле восстановления кровотока (4 группа), 1 сутки (5 группа) и 3 сутки (6 группа). В контрольной группе проведено рассечение кожного покрова и затем наложены швы. Группы животных представлены в табл. 3.

Таблица 3. Группы экспериментальных животных

Группа животных Тип вмешательства

1 группа 2-часовая окклюзия

2 группа 1 сутки после окклюзии

3 группа 3 сутки после окклюзии

4 группа 1 часовая окклюзия + 1 часовая реперфузия

5 серия 1 сутки после окклюзии с последующим восстановлением кровотока

6 группа 3 сутки после окклюзии с последующим восстановлением кровотока

7 группа Контрольная группа животных

Для определения активности ферментов сыворотку очищали от низкомолекулярных нингидринположительных компонентов гель-фильтрацией на сефадексе G-25. Активность АПФ в сыворотке крови определяли по образованию Gly-Arg из карбобензок-си-Gly-Gly-Arg при рН=8,2, как активность, ингибируемую каптоприлом по разности оптической плотности проб, содержащих и не содержащих каптоприл, и выражали в нМоль продукта реакции, образовавшегося за 1 мин на 1 мг белка, в 1 % гомогенате мозга крыс (гиппокамп и большие полушария) - флюориметрическим методом по отщеплению аргинина от субстрата дансил-фен-ала-арг, при этом активность фермента выражали как разность в приросте флюоресценции в пробах содержащих и не содержащих каптоприл. Активность КП N определяли с использованием в качестве субстрата гиппурил-аргинина по разности оптической плотности проб, содержащих и не содержащих ионы кобальта, и выражали в нМоль продукта реакции, образовавшегося за 1 мин на 1 мг белка. Концентрацию СРБ определяли иммунотурбидиметрическим методом с использованием реактивов фирмы «Diasis». Концентрацию нитрит-аниона как стабильного метаболита оксида азота определяли по реакции Грисса [Голиков П.П., 2000]. Концентрацию ТБК-активных продуктов определяли по методу Uchiyama М., Mihara М. (1978). Для оценки показателей свободно-радикального окисления применялся хемилюминесцентный метод с использованием прибора ХЛМ-003.

Данные представлены в виде медианы и интерквартильного размаха от 25 (low quartile) до 75 квартиля (high quartile) [Платонов А.Е., 2000]. Сравнение между группами было выполнено с использованием теста Манна-Уитни, при сравнении более 2 групп применялся тест Крускала - Уоллиса [Боровиков В.П., 1998]. Для исследования взаимосвязей выполнялся корреляционный анализ Спирмена. Различия считались ста-

тистически значимыми при р<0,05. Все статистические расчеты проводились с помощью пакета программ '^а^эиса 5,5".

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Активность АПФ в крови у больных ишемическим инсультом в остром периоде

В основе развития ишемии мозга лежит нарушение кровообращения. В связи с этим первостепенное значение приобретает изучение биохимических процессов, лежащих в основе вазомоторных реакций, возникающих в ответ на церебральную ишемию. Важнейшими регуляторами кровотока признаны ренин-ангиотензиновая и каллекреин-кининовая системы. Ключевым ферментом, связывающим эти системы, является АПФ. Данные, полученные при исследовании активности АПФ у больных ишемическим инсультом в различные сроки наблюдения, представлены в табл. 4.

Таблица 4. Динамика активности АПФ у больных ишемическим инсультом (в нмоль

Группа Время после инсульта

Первые часы 1 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки

1 группа (п=51) 3,4 ** (2,59-3,8) 2,98 (2,48-4,26) 2,94 (2,72-3,69) 3,48 (2,71-3,8) 3,52 (2,8-4,1)

2 группа (п=26) 4,74* (3,84-5,84) 2,36* (1,87-2,97) 3,28 (2,44-5,31) 3,17 (1,77-5,62) 3,16 (2,36-3,59)

Контроль (п=30) 3,46(2,84-3,8)

* - достоверно по сравнению с контролем, р< 0,05; *» - достоверно по сравнению со 2 группой, р< 0,05.

Как следует из данных табл. 4, у больных инсультом легкой и средней степени тяжести (1 группа) активность АПФ на протяжении всего периода достоверно не отличалась от группы контроля. В то время как у пациентов 2 группы эти показатели претерпевали значительные изменения. Так, отмечается повышение активности фермента в первые часы наблюдения и снижение в 1 сутки мониторинга. На 3, 7 и 14 сутки активность АПФ у больных с тяжелой формой инсульта претерпевала значительные изменения, что, возможно, отражает исход заболевания: восстановление неврологических нарушений или тяжелую инвалидизацию.В зависимости от тяжести состояния, выраженности неврологических нарушений и динамики процесса пациенты 2-ой группы были разделены на две подгруппы: 2а - наличие положительной динамики (п=15) и 26 - ее отсутствие (п=11). Данные представлены на рис. 1.

Рисунок 1. Динамика активности АПФ у пациентов 2 группы

Как следует из данных, представленных на рис. 1, у обследованных пациентов повышение активности АПФ в начале заболевания и снижение к 1 сут выявлено в обеих подгруппах. В последующие дни наблюдения активность АПФ у пациентов с минимальным восстановлением неврологических нарушений имела тенденцию к увеличению. Статистически значимыми различия между подгруппами были на 7 сутки исследования (р=0,033). В то же время у пациентов с благоприятным исходом активность фермента в последующие дни наблюдения достоверно не отличалась от показателей контрольной группы.

Полученные результаты свидетельствуют о существовании зависимости тяжести инсульта и активностью АПФ. Повышение активности фермента может быть связано с активацией циркулирующей ренин-ангиотензиновой системы (РАС), усиленной наработкой А II и деградацией брадикинина. Известно, что А II является одним из факторов индукции стресса [Watanabe Y., 1996; Платонова И.А., 2003], что, возможно, объясняет повышение активности АПФ в первые часы заболевания у больных 2 группы. К числу экспериментально доказанных эффектов А II относится способность увеличивать образование активных форм кислорода [Laursen J.В., 1997], активировать ядерный фактор транскрипции, который стимулирует экспрессию адгезивных молекул, цитокинов, бел-ков-хематтрактантов [Hernandez-Presa М., 1997], активность НАДН- и НАДФ-оксдазы [Griendling К.К., 1994]. Образующийся в повышенной концентрации А II, вероятно, стимулирует воспаление и, возможно, участвует в регуляции гибели клеток по механизмам некроза и апоптоза, а также регулирует проницаемость тканей, активирует иммунное воспаление [Suzuki Y., 2003]. По мнению В Н. Титова и соавт. (2005), умеренное повышение концентрации А II способствуют удалению из крови небольших количеств эндогенных патогенов. Однако механизмы этого процесса пока не изучены. По-10

скольку основным источником сывороточного АПФ являются клетки сосудистого эндотелия, предполагается, что уровень фермента может отражать повреждение эндотелия [Matucci-Cerinic М., 1992]. АПФ участвует в деградации кининов, эффекты которых сводятся к вазодилатации сосудов, повышению проницаемости гематоэнцефалического барьера. Значение кининообразования в реперфузионных ишемических повреждениях мозга неоднократно подтверждено в эксперименте [Пасхина Т.С., 1982; Семенютин В.Б. и соавт., 1997]. Снижение активности АПФ в первые сутки инсульта в группе тяжелых больных может быть следствием повышенного кининообразования. Экспериментальные данные свидетельствуют о значительной роли этого процесса в патогенезе нарушения мозгового кровообращения, особенно в период реперфузии. Активация кал-лекреин-кининовой системы с высвобождением кининов ведет к дилатации церебральных сосудов, гиперемии и развитию вазогенного отека [Варлоу Ч.П. и соавт., 1998; Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001]. Необходимо также учитывать, что активность АПФ в сыворотке крови предопределена генетически, поскольку показано существование двух аллелей гена АПФ, представленных удлиненным (I, insertion) или укороченным (D, deletion) фрагментами ДНК [Rigat В., 1992]. Однако в отношении больных ишемией мозга эти данные противоречивы: до сих пор не представлено убедительных данных о непосредственном влиянии полиморфизма АПФ на вероятность возникновения мозговых катастроф [Моляка Ю.К., 1998; Визир А.Д., и соавт., 2002].

Активность КП N в крови у больных ишемическим инсультом в остром периоде

Основным субстратом для КП N является брадикинин, биологическией эффект которого проявляется в виде вазодилатации, повышении проницаемости ГЭБ и инсули-ноподобного действия. Он способствуют увеличению притока крови и улучшению усвоения кислорода и глюкозы тканью мозга при ишемии [Пасхина Т.С., 1982; Уэйр Е.К., Ривс Д., 1995]. Однако при возобновлении кровотока повышенное кининообразование может привести к гиперреперфузии и вазогенному отеку мозга [Zubkov Y.N. et al., 1995], вызывать дисфункнию церебральной микроциркуляции [Unterberg А., 1984]. Активность КП N у больных ишемическим инсультом представлена в табл. 5.

Таблица 5. Динамика активности КП N у больных ишемическим инсультом

Время после инсульта

Группа Перв. часы 1 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки

1 группа 6,45 ** 6,37 5,93 6,1 5,7

(п=51) (5,6-7,1) (5,13-7,49) (4,96-6,83) (5,17-7,46) (4,9-7,52)

2 группа 4,0* 4,87 5,62 5,32 6,0

(п=2б) (3,43-5,45) (4,35-6,12) (5,27-6,43) (4,46-7,63) (5,15-7,47)

Контроль (п=30) 5,64 (5,28-7,05)

* -достоверно по сравнению с контролем, р< 0,05; ** - достоверно по сравнению со 2 группой, р< 0,05

У пациентов 1 группы выявлено повышение активности фермента в первые часы заболевания, в то время как у больных с тяжелой формой ишемического инсульта наблюдалось снижение. В первые сутки заболевания в этой группе пациентов активность КП N также имела тенденцию к снижению

Таким образом, изучение динамики активности КП N у больных ишемическим инсультом в остром периоде выявило разнонаправленную динамику в первые часы развития заболевания: повышение в группе пациентов с инсультом легкой и средней тяжести и снижение в группе с тяжелой формой заболевания.

Свободнорадикальные процессы в крови у больных ишемическим инсультом

Оксидантный стресс является одним из ведущих факторов повреждения мозга при ишемии [Биленко М.В., 1989; Владимиров Ю.А., 1998; Зозуля Ю.А. и соавт., 2000; Панкин В.З. и соавт., 2000; Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001]. Оценка показателей, характеризующих свободнорадикальной окисление, осуществлялась по определению концентрации нитрит-аниона (Н/А), ТБК-активных продуктов. Данные по исследованию H/A у больных ишемическим инсультом представлены в табл. 6. Таблица 6. Содержание нитрит-аниона у больных ишемическим инсультом (в мкг/мл)

Время после инсульта

Группа Перв. часы I сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки

1 группа 0,436 0,434 0,419 0,404 0,368

(п=51) (0,362-0,472) (0,348-0,5) (0,389-0,430) (0,355-0,495) (0,305-0,422)

2а группа 0,418 0,485 0,506* 0,542* 0,496

(п=15) (0,333-0.553) (0,426-0,566) (0,435-0.643) (0,473-0,590) (0,430-0,470)

26 группа 0,400 0,389** 0,386** 0,359** 0,440

(n= II) (0,329-0,502) (0,343-0,480) (0,250-0.425) (0,276-0,476) (0,390-0,420)

Контроль 0,405 (0,359-0.435)

* - достоверно по сравнению с контролем, р< 0,05; * - достоверно по сравнению с группой 2а в тот же период исследования, р< 0.05

Показатели H/A у пациентов 1 группы статистически не отличались от контроля.

Во 2-ой группе выявлено 2 типа динамики. 1-ый тип соответствовал восстановлению

неврологических нарушений (группа 2а), 2-ой тип - отсутствие положительной динамики (группа 26). Эти данные представлены на рисунке 2.

Рис.2. Динамика уровня №А у больных 2 группы

—•—Группа 2а —И—Группа 26 --контроль

Возможно, что высокие концентрации нитрит-аниона, свидетельствующие о наработке повышенного количества оксида азота, препятствуют вазоспазму и способствуют восстановлению неврологических функций. Тяжелая церебральная ишемия, по-видимому, сопровождается снижением синтеза оксида азота вследствие стойкого вазоспазма. Известно, что сосудистый тонус регулируется динамическим балансом вазоконстрикторов и вазодилататоров [Herman К., 1986; Griendling К.К., 1993; Dzau V., 2001]. Значительное увеличение нитрит-аниона у больных группы 2а может свидетельствовать об экспрессии индуцибельной NO-синтазы. Эта изоформа фермента играет ведущую патофизиологическую роль в реализации функций активированных макрофагов, которые способны синтезировать оксид азота в количестве, на несколько порядков больше, чем клетки эндотелия [Radomski M.W., 1990].

Таким образом, тяжело протекающая церебральная ишемия сопровождается низкими концентрациями нитрит-аниона в крови, а при благоприятном течении заболевания выявлено повышенное содержание этого вещества.

Многочисленные экспериментальные данные свидетельствуют об активации процессов ПОЛ у больных с ишемическими поражениями мозга [Биленко М.В., 1989; Федорова Т.Н. и соавт., 1999; Зозуля Ю.А. и соавт., 2000; Cherubini А., 2005]. Данные по изучению ТБК-АП представлены в табл. 7.

Таблица 7. Показатели ТБК-АП продуктов у больных ишемическмм инсультом

Группа Время после инсульта

Первые часы | 1 сутки 3 сутки 7 ем ки 14 сутки

1 группа (п=51) 2,7 .(1.53-3,2) 2.4 .(1,67-3,38) 2,26.(1,4-2,7) 2.35.(1,0-2,6) 1,06 (0,9-1,43)

2 группа (п=26) 3,68.(1,01-43?) ; 3.15 »(1,74-3.5) 2,5.(1,5-3.8) 3.45»(3.0-4,9) 3,66.(2,97-4,1)

Контроль (п=30) 1,3 (0,82-1.8)

* - достоверно по сравнению с контролем, р<0,05.

Как следует из данных таблицы, выявлена активация ПОЛ в сыворотке крови у больных ишемическим инсультом практически на всех этапах наблюдения. У пациентов с инсультом легкой и средней степени тяжести нормализация ТБК-АП наблюдалась к 14-м суткам. У больных 2 группы (тяжелый и крайне тяжелый инсульт) концентрация ТБК-активных продуктов была повышенной на протяжении всего периода наблюдения. Максимальное увеличение отмечалось в первые часы развития заболевания и 1 сутки, что, видимо, отражает биохимические процессы, происходящие в мозге, вследствие ре-перфузии. Во 2-ой группе обследованных пациентов значительная активация процессов ПОЛ наблюдалась на 7 и 14 сутки, что, возможно, свидетельствует о срыве компенсаторных возможностей организма и снижении антиоксидантной защиты [Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001]. Обнаружена положительная корреляционная зависимость между уровнем СРБ как показателем воспаления и ТБК-АП в различные сроки наблюдения. Вероятно, что в основе деструкции мозговой ткани лежит усиление свободнорадикаль-ных процессов и развитие воспалительной реакции. Согласно современным представлениям СРО, (ПОЛ - вариант СРО) - этап воспаления [Титов В.Н. и соавт., 2003, 2004, 2005]. Этот процесс позволяет путем окисления модифицировать эндогенные патогены и денатурировать их для поглощения фагоцитами.

Таким образом, изучение процессов СРО у больных ишемическим инсультом показало их роль в патогенезе заболевания. Корреляционная зависимость между продуктами ПОЛ и СРБ отражает активность неспецифической реакции воспаления.

Исследование уровня С-реактивного белка у больных ишемическим инсультом

Важную роль в молекулярных и клеточных механизмах ишемического повреждения мозга играет воспаление [Гусев Е.И. и соавт., 1999; Дамбинова С.А. и соавт., 2001; ВаПозП^щекН. е1 а!., 2003; Нагтпс1оп В.В., еГ а!., 2004; №роИ М. е1 а!., 2005]. Локальная ишемия мозга, появление очага деструкции с гибелью нейронов вызывает острую асептическую воспалительную реакцию. Характерным признаком воспаления, ведущего к повреждению тканей, являются положительные острофазные белки, в т.ч. и С-реактивный белок (СРБ) [Полевщиков А.В., Назаров П.Г.. 1998; Насонов Е.А., 1999]. Динамика изменения СРБ представлена в табл. 8.

Группа Время после инсульта

Первые часы 1 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки

1 группа 18,45* 19,75* 21,5* 19,3* 10,47

(п=51) (5,5-32,45) (12,0-26,9) (10,25-28,75) (8,0-25,0) (2,0-13,0)

2 группа 40,2» 46,0* 40,25* 37,0* 33,0*

(п=26) (25,0-54,0) (30,0-47,5) (26,0-57,0) (33,0-41,0) (10,2-41,0)

Контроль 6,5 (1,8-8,2)

* - достоверно по сравнению с контролем, р < 0,05

Проведенное обследование показало, что концентрация СРБ как в 1, так и 2 группе была достоверно повышена по сравнению с группой контроля во все периоды наблюдения. Исключение составили показатели концентрации на 14 сутки заболевания у больных с легким и средним вариантом заболевания (1 группа): к 14-м суткам наблюдалась нормализация показателя, что сопровождалось увеличением суммарного клинического балла. Максимальное увеличение отмечено у больных с тяжелым течением заболевания до 3-х суток, с тенденцией к понижению к 7 и 14-м суткам. У пациентов этой группы значения этого показателя к 14-му дню исследования значительно варьировали, что, вероятно, отражало восстановление неврологических нарушений или отсутствие положительной динамики.

Полученные в нашем исследовании данные подтверждают прогностическую значимость СРБ как традиционного маркера соматических воспалительных процессов. Из данных литературы известно, что концентрация СРБ в спинномозговой жидкости больных ишемическим инсультом в остром периоде заболевания коррелировала с выраженностью патологического процесса и клиническим исходом инсульта [Гусев В.И., Скворцова В.И., 2001]. Определение СРБ в сыворотке крови больных инсультом в связи с большей доступностью биологического материала, обладает не меньшей информативностью и прогностической значимостью в связи с оперативностью, простотой и экономической доступностью.

Т.о., определение концентрации СРБ у больных ишемическим инсультом подтверждает наличие воспалительной реакции и является достоверным тестом оценки тяжести заболевания.

Активность АПФ в сыворотке крови экспериментальных животных на модели неполной ишемии головного мозга крыс

Решению медико-социальных проблем, возникающих в связи с распространенностью инсульта, способствует изучение механизмов шболевания на различных экспери-

ментальных моделях. Строение сосудов мозга, их топография, молекулярная и клеточная биология нервных клеток грызунов имеет высокую степень гомологии с приматами. Это и обусловило изучение активности ферментов обмена регуляторных пептидов в крови и мозговой ткани экспериментальных животных. Активность АПФ при экспериментальной ишемии в сыворотке крови крыс представлена в табл. 9.

Табл. 9. Активность АПФ в крови крыс (в нмоль продукта реакции на мг белка)

Воздействие на мозг Время после ишемии Контроль

2 часа 1 сутки 3 сутки

Окклюзия 6,7* (4,93-7,48) 5,89* (4,9-6,2) 3,98 (2,6-5,36) 3,87 (3,39-4,58)

Реперфузия 5,82 * (4,63-5,93) 4,63 (3,44-5,82) 4,16 (3,75-4,56)

* - достоверно по сравнению с контролем, р < 0,05

Как следует из данных таблицы, активность АПФ достоверно отличалась от группы контроля после 2-х часовой окклюзии, в первые сутки после окклюзии и 2-х часовой реперфузии. Повышение активности АПФ в сыворотке крови экспериментальных животных, вероятно, обусловлено наработкой А II. Из данных литературы известно, что повышенное количество пептида, вероятно, стимулирует воспаление, возможно, участвуя и в регуляции соотношения двух вариантов гибели клеток - некроза и апопто-за [Проскуряков С.Я., 2002]. Кроме того, А II усиливает локальный синтез хемиаттрак-тантов, миграцию лейкоцитов из крови в интиму и медию per diapedesis, ускоряет в тканях дифференцировку моноцитов в макрофаги [Suzuki Y., 2003]. По мнению В.Н. Титова и соавт. (2005), А II участвует в воспалительной реакции, усиливая его, стимулирует секрецию АФК, цитокинов и молекул адгезии.

Не исключено, что увеличение активности АПФ в сыворотке крови при экспериментальной ишемии обусловлено повышенным образованием А II. Это, по-видимому, является неспецифической реакцией организма на повреждающее действие ишемии, причем повышение активности АПФ в наших исследованиях регистрируется как после окклюзии, так и реперфузии.

Свободнорадикальные процессы при моделировании ишемии

Избыточный синтез оксида азота и оксидантный стресс являются основными звеньями последнего этапа формирования очагового некроза головного мозга, при котором происходят необратимые изменения. Это звено каскада характеризуется накоплением высокотоксичных соединений, приводящих к гибели клетки. 16

Данные по определению нитрит-аниона (НА) в крови крыс представлены в табл. 10.

Таблица 10. Динамика содержания нитрит-аниона в сыворотке крови экспериментальных животных (в мкг/мл) __

Воздействие на мозг Время после ишемии Контроль

2 часа 1 сутки 3 сутки

Окклюзия 0,450* (0,438-0,453) 0,513" (0,473-0,553) 0,481 (0,465-0,491) 0,487 (0,485-0,490)

Реперфузия 0,508 "(0,491-0,526) 0,504 (0,482-0,510) 0,436 (0,405-0,67)

* - достоверно по сравнению с контролем (р<0,05); ** - достоверно по сравнению с 1 группой (р<0,05).

Исследование нитрит-аниона в сыворотке крови крыс показало, что наибольшие изменения в содержании этого реагента выявлены на 1 сутки после 2-часовой окклюзии, что, вероятно, обусловлено активацией индуцибельных ЫО-синтаз, источником которых являются в основном нейтрофилы и макрофаги. Реактивные изменения последних вызваны активацией микроглии, повышением синтеза провоспалительных факторов и молекул клеточной адгезии [Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989]. Восстановление кровоснабжения мозга после ишемии - реперфузия, реоксигенация - влечет за собой вторичное, реперфузионное повреждение. Возвращение мозгового кровотока позже, чем через 2 мин после устранения окклюзии уже не означает его нормализации [Зозуля Ю.А. и соавт., 2000]. В ишемизированных и реперфузионных тканях образуются токсичные производные кислорода, в т.ч. и N0. В нашем эксперименте показано, что концентрация нитрит-аниона была понижена после 2-х часовой окклюзии, в то время как на 1 сутки концентрация изучаемого реагента повышалась. Поскольку наибольшее повреждающее действие оказывают именно реперфузионные процессы, сопровождающиеся значительным приростом АФК, в нашем эксперименте увеличение концентрации нитрит-аниона зарегистрировано уже на начальном этапе наблюдения.

Таким образом, обнаружена разнонаправленная динамика изменения сывороточной концентрации нитрит-аниона в эксперименте с окклюзией и реперфузией.

В патогенезе ишемии мозга окислительный стресс, гиперпродукция свободных радикалов и других АФК играют роль необходимого звена в деструкции мембран, гибели нейронов и действуют как специфические сигнальные молекулы [Титов В.Н., 2005; Бако А. е1 аЦ 2005]. В эксперименте уже с 5 минуты ишемии регистрируется повышение всех продуктов ПОЛ - первичных и вторичных [Зозуля Ю.А. и соавт.. 2000]. Наибольшая активация процессов с участием свободных радикалов характерна для периода реперфузии [Биленко М.В., 1989], хотя в ряде экспериментальных работ показано усиление ПОЛ и в период ограничения доступа кислорода [Федорова Т.Н., 1999]. Акти-

вация процессов ПОЛ в очаге ишемии подтверждается не только увеличением ТБК-АП, но усилением процессов ХМЛ [Колпикова О.С., 2003]. В нашей работе проанализированы данные эксперимента по изучению ТБК-АП и показателей хемилюминесценции в сыворотке крови крыс в различные сроки после окклюзии и реперфузии. Данные по изучению содержания ТБК-АП представлены в табл. 11.

Воздействие на мозг Время после ишемии Контроль

2 часа 1 сутки 3 сутки

Окклюзия 1,99(1,23-2,76)* 3,0 (2,43-3,58) * 2,6(1,84-2,7)* 1,12 (1,1-1,2)

Реперфузия 3,9 (2,46-5,4) * 3,1 (2,46-3,7)* 3,1 (2,46-3,48) *

* - достоверно по сравнению с контролем, р <0,05

При исследовании динамики ТБК-активных продуктов выявлено их увеличение во всех сериях эксперимента. Причем реперфузионные процессы в мозге сопровождались наиболее выраженными изменениями. Поскольку наибольшее повреждающее действие оказывают именно реперфузионные процессы, сопровождающиеся значительным приростом АФК. Данные по исследованию ХМЛ отражены в табл.12. Таблица 12. Динамика показателей хемилюминесценции крови при моделировании

ишемии головного мозга (в отн. ед.)

Воздействие на мозг Время после ишемии Контроль

2 часа 1 сутки 3 сутки

Окклюзия 3,18* (2,37-5,8) 1,8* (1,5-2,1) 1,8* (1,53-1,9) 0,72 (0,32-1,28)

Реперфузия 2,86* (2,63-3,0) 1,58* (1,33-1,66) 1,74 (0,86-1,96)

* - достоверно по сравнению с группой контроля. р<0,05.

Значения ХМЛ, отражающие процессы образования свободных радикалов, также выявили определенную зависимость. Так, максимальные изменения этого показателя наблюдались после 2-часовой окклюзии и 2-часовой реперфузии. Повышенными эти значения сохранялись и в последующих сроках эксперимента. Статистически не достоверными эти показатели по сравнению с контролем были лишь на 3 сутки реперфузии.

Таким образом, изучение хемилюминесценции при моделировании ишемии головного мозга подтверждает роль свободнорадикальных процессов в развитии этой патологии. Наибольшие изменения были зарегистрированы после 2-х часовой окклюзии и окклюзии с последующей реперфузией. Данный метод исследования процессов СРО является достаточно надежным и перспективным в силу его чувствительности. Он может быть использован при оценке СРО у больных с острой ишемией головного мозга.

Т.о., проведенные эксперименты продемонстрировали активацию процессов СРО при моделировании ишемии головного мозга крыс. Наибольшие изменения выявлены в группах после 2-часовой окклюзии и окклюзии+реперфузия.

Исследование активности АПФ в мозге крыс

Для сопоставления полученных в клинических условиях данных и уточнения биохимических процессов, изучена активность АПФ в различных отделах мозга крыс. Исследование фермента в гиппокампе и больших полушариях в эксперименте обусловлено тем, что эти участки мозга в используемой модели подвержены различному влиянию ишемии: в большей мере этому патологическому процессу подвержены большие полушария. Данные по изучению активности АПФ представлены в табл. 13.

Таблица 13. Активность АПФ в гиппокампе и больших полушариях крыс при мо-

Воздействие на мозг, Гиппокамп Большие полушария

время после ишемии

2 ч 0,029 (0,023-0,031) 0,022 (0,018-0,024)

• X Ы п 1 сутки 0,018 (0,016-0,02) * 0,034 (0,028-0,037)*

О 5 3 сутки 0,003 (0,001-0,007) * * 0,06 (0,04-0,07)*

2 ч 0,024 (0,02-0,026)* 0,039(0,031-0,046)

А сс о к С « 1 сутки 0,017 (0,011-0,019) * 0,05 (0,043-0,056)*

а- -е- 3 сутки 0,021 (0,014-0,022)* 0,019(0,018-0,024)

Контроль 0,031 (0,028-0,033) 0,024 (0,018-0,027)

* - достоверно по сравнению с группой контроля, р<0,05; ** - достоверно по сравнению с группой контроля, р<0,01

Как следует из таблицы, уменьшение активности фермента выявлено в гиппокампе после окклюзии во все сроки исследования. Однако статистически значимое отличие отмечено на 1 и 3 сутки. Аналогичная динамика активности АПФ наблюдается и после 2-х часовой реперфузии, 1 и 3 сутки эксперимента. Окклюзия ВСА в течение 2 ч не влияла на активности АПФ в больших полушариях мозга крыс. На первые сутки после окклюзии активность фермента достоверно превышала показатели группы контроля, а на третьи сутки эксперимента достигала максимальных значений. Реперфузионные процессы, происходящие в больших полушариях после 2 ч окклюзии и на 1 сутки, приводили к увеличению активности фермента. К 3-м суткам эксперимента активность АПФ в исследуемом отделе мозга снижалась и статистически не отличалась от значений группы контроля.

Повышение активности АПФ в мозге экспериментальных животных может быть обусловлено наработкой субстанции Р, которая является субстратом фермента. Так, в

работе Stumm R.K. (2001) показано, что тахикинины, могут быть вовлечены в процессы гипервозбуждения и дестабилизации нейрональной динамики, нейровоспаления вследствие глобальной ишемии головного мозга. Через 2 дня после окклюзии отмечалось существенное увеличение мРНК препротахикиниа А, самого вещества Р и NK1 рецепторов. Автор предполагает, что ишемия головного мозга связана с изменением баланса нейропротекторных и нейротрофических факторов, значительная роль в этом процессе принадлежит тахикининам. Известно, что эффект А II реализуется через определенные рецепторы [De Gasparo М., 1995; Преображенский Д.В., 1997]. В настоящее время идентифицировано 4 типа рецепторов, однако в литературных источниках обсуждается роль рецепторов 1-го (ATI) и 2-го (АТ2) типа. Именно через эти рецепторы реализуется большинство сосудистых эффектов А II. Расположение рецепторов, их активация и/или ингибирование является определяющим в реализации физиологических функций А II.

На модели окклюзии СМА крыс с последующей реперфузией показано, что селективный антагонист ATI рецепторов кандесартан, предупреждал уменьшение кровоснабжения в краевой зоне ишемии и значительно уменьшал зону инфаркта [Nishimura Y. et al., 2000]. Антагонист ATI рецептора TCV-116, предупреждал дисфункцию эндотелия, препятствуя адгезии нейтрофилов [Ito Н. et al., 2001]. Исходя из вышеизложенного, можно предположить, что активность АПФ в мозге в определенной степени определяется и экспрессией рецепторов.

Известно, что А II взаимодействует с АФК, выработка которых усиливается при реперфузионных процессах, что усугубляет уже имеющиеся ишемические повреждения и придает им необратимый характер [Sean Р. et al., 2003]. Повышение активности АПФ в серии эксперимента с окклюзией и последующей реперфузией, по-видимому, может отражать развитие окислительного стресса в мозговой ткани.

Данные ряда исследований свидетельствуют о том, что закономерности, описывающие роль периферической РАС не могут быть перенесены на системы центральной регуляции, ввиду существования определенной автономии и биохимической специфичности АПФ в мозге и на периферии [Lansillo J.J. et al., 1985; Гомазков O.A., 1999; Ген-гинМ.Т., 2002].

Т.о., определение активности АПФ в мозге экспериментальных животных при моделировании фокальной ишемии показало его разнонаправленную динамику в зависимости от изучаемого отдела мозга. В гиппокампе активность АПФ была снижена, в

то время как в больших полушариях - повышена. Исследование активности АПФ в различных отделах мозга крысы свидетельствует о вовлеченности фермента в процессы ишемизации нервной ткани и может служить мишенью для терапии.

В нашей работе проведено определение концентрации нитрит-аниона (Н/А) в го-могенате мозговой ткани. Полученные результаты представлены в таблице 14.

Таблица!4. Концентрация Н/А гомогенате (большие полушария) (в мкг/мл)

Воздействие на мозг Время после ишемии Контроль

2 часа 1 сутки 3 сутки

Окклюзия 0,478 (0,445-0,509) 0,496*(0,464-0,507) 0,455 (0,439-0,482) 0,460 (0,455-0,491)

Реперфузия | 0,406* (0,4-0,446) 0,419* (0,407-0,454) 0,451 (0,433-0,509)

* - достоверно по сравнению с группой контроля, р<0,05

Как следует из данных таблицы, увеличение концентрации Н/А в мозге крыс наблюдалось на 1 сутки после окклюзии. Не выявлено статистически значимых отличий по сравнению с группой контроля исследуемого компонента после 2-х часовой окклюзии, а также на 3 сутки после перевязки ВСА. Анализ динамики содержания нитрит-аниона в гомогенате мозга при реперфузии показывает, что при окклюзиии ВСА крыс увеличение концентрации этого реагента приходится на период в первые часы эксперимента и 1 сутки. Это в определенной мере подтверждает исследования, где прямые измерения проводившиеся в мозге крыс как при фокальной, так и при глобальной ишемии, показали возрастание концентрации оксида азота [Викторов И.В., 2000] уже в первые минуты фокальной ишемии и затем постепенное снижение в течение часа до исходной [Викторов И.В., 2000]. Параллельные измерения активности синтазы оксида азота продемонстрировали ее возрастание, хотя тип фермента не идентифицирован.

В отсроченном постишемическом периоде (1 сутки) повышение концентрации нитрит-аниона обусловлено, по-видимому, активацией глии, макрофагов и нейтрофи-лов. В пользу этого предположения свидетельствуют данные Zhang Z.J. (1993) по им-муноцитохимическому выявлению eNOS: при фокальной ишемии ее активность возрастает в течение 1 часа, достигает максимума к 1 суткам. Поскольку основная масса нейронов не содержит NO-синтаз в значительном количестве, увеличение NO в гомогенате мозга крыс обусловлено, вероятно, либо активацией микроглиальных клеток, либо экзогенными источниками NO (макрофаги, нейтрофилы).

Таким образом, концентрация Н/А как ближайшего стабильного метаболита оксида азота при моделировании фокальной ишемии имеет разнонаправленную динамику

в условиях ишемического и реиерфузиониого повреждения ткани мозга. Реперфузион-ные процессы в мозге сопровождаются снижением концентрации Н/А.

Сравнение данных, полученных при исследовании пациентов с ишемическим инсультом и в эксперименте, показало их принципиальное сходство. Тяжелая церебральная ишемия сопровождается повышением активности АПФ в сыворотке крови. При моделировании патологического процесса обнаружено повышение активности фермента как при окклюзии (через 2 ч, на 1 сутки), так и реперфузии (2 ч).

Анализ данных по определению нитрит-аниона показал, что отсутствие положительной динамики у больных ишемическим инсультом сопровождается выраженным снижением изучемого показателя, в то время при хорошем прогнозе его уровень был повышен. Изучение концентрации метаболита оксида азота на модели ишемии показало его увеличение. Это, вероятно, обусловлено тем, что крысы линии Вистар, возможно, являются достаточно устойчивыми к ишемизации мозга.

Изучение СРО как у больных ишемическим инсультом, так и в эксперименте показало их активацию, которая зависела от тяжести заболевания, стадии процесса (окклюзия или реперфузия).

На основании полученных результатов исследования и литературных данных нами предложена схема, учитывающая взаимодействие исследованных показателей и их роль в развитии молекулярно-биохимических процессов, лежащих в основе ишемии.

АПФ -

1ТЙП — ГИИЖРИНР МПЧГПЙПГО ЮПППОТОК'Я

ТГЯП — ГЛ\ГГЯМЯТНЯЯ /ПКТЯИТПТПКЧШЧНЛСТК»

1ТЯМ — Н Н V Т П II КМ1 Р Т П Ч Н П

Р Н Я к* О II .1 Р Н И С С Я

4 1ТЯП — Я ЮТИ И Я ПИЯ ИНУТПИ 1С.П РТОЧ н м \ Лрпмрнтпи

5 1ТЯП — ППГ*кП11Р11ИР ГИИТР1Я N0 И ПЯ7ПНТНР ПКТИПЯНТНПГП ГТПРГГЯ

6 этап — экспрессия генов

7 этап - «отдаленные» последствия ишемии (реакции местного воспаления, микроваскулярные нарушения, повреждения ГЭБ)

7-8 -ггяпк! - япоптт

( \ с м л I . Влияние А II Ф и К П N на этапы ишемического каскада

Выводы.

1. Выявлено повышение активности АПФ у пациентов с тяжелым вариантом течения ишемического инсульта в первые часы и снижение на 1 сутки развития заболевания, активность КП N в той же группе обследованных снижалась в первые часы исследования.

2. Тяжелая церебральная ишемия с минимальным восстановлением неврологических функций сопровождается снижением концентрации ближайшего стабильного метаболита оксида азота в крови - нитрит-аниона.

3. Ишемия головного мозга сопровождается усилением процессов свободнорадикального окисления, что выражается в увеличении концентрации МДА в зависимости от тяжести заболевания.

4. Повышение концентрации СРБ в первые часы и сутки исследования является неблагоприятным прогностическим признаком: наибольший прирост имел место у пациентов с тяжелой инвалиди-зацией.

5. При моделировании неполной ишемии головного мозга активность АПФ в крови экспериментальных животных повышалась как после 2-х часовой окклюзии, в 1 сутки (на 73 % и 52 % соответственно), так и после реперфузии (на 50 %).

6. Окклюзия и реперфузия оказывала разнонаправленное действие на активность АПФ в различных отделах головного мозга крыс: понижение активности в гиппокампе и повышение в больших полушариях как при окклюзии, так и реперфузии.

7. Окклюзионные и реперфузионные процессы при моделировании ишемии головного мозга сопровождались усилением свободнорадикальных процессов, что нашло отражение в повышении концентрации ТБК-активных продуктов (окклюзия и 1 сутки после, а также во все периоды наблюдения после реперфузии), увеличении показателей хемилюминесценции (окклюзия, 1 суг и репер-фузия), а также в активации кислородзависимого метаболизма нейтрофилов. Повышением концентрации нитрит-аниона в крови сопровождались реперфузионные процессы в мозговой ткани крыс.

8. Показано принципиальное сходство изменений активности ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторых биохимических показателей у больных ишемическим инсультом и при экспериментальной ишемии.

9. Показателями, отражающими тяжесть ишемического инсульта в острейшем периоде (в первые часы), может служить повышение активности АПФ. снижение концентрации нитрит-аниона, а в остром периоде СРП и активация свободно-радикальных процессов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кухтевич И.И., Золкорняев И.Г., Левашова O.A. Вазоактивные ферменты при ишемической болезни мозга. // Материалы VIII Всероссийского съезда неврологов, 21-24 мая, 2001, Казань, с. 251. -0,1 п.л.-доля авторского участия 30 %.

2. Левашова O.A., Золкорняев И.Г., Артюшина Н.В., Дружинина Т.А.Изменение концентрации С-реактивного белка в остром периоде инсульта. // Материалы юбилейной IX научно-практ. конференции ПИУВ МЗ РФ с участием регионов России "Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных", 20-21 июня 2002 г, Пенза, с 337-339. - 0,3 п.л. - доля авторского участия 50 %.

3. Кухтевич И.И., Золкорняев И.Г., Левашова O.A. Оценка нитроксидэргической системы как маркера ишемического инсульта. // Материалы I Всероссийской конференции по проблемам цереброваскулярной патологии и инсульта, 22-24 сентября,2003, Москва. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова, «Инсульт» (приложение к журналу), с. 133. - 0,1 п.л. - доля авторского участия - 50 %.

4. Золкорняев И.Г., Кухтевич И.И., Левашова O.A. Показатели воспаления и свободнорадикаль-ного окисления в остром периоде ишемического инсульта. // Материалы конф. «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакол. и экологии», 31 мая-10 июня, 2006, Гурзуф, с. 310-312. - 0,3 п.л. - доля авторского участия - 30 %.

5. Левашова O.A., Золкорняев И.Г., Алешина Н.И., Лапатухин В.Г., Генгин М.Т.Динамика активности ангиотензин-превращающего фермента в остром периоде церебральной ишемии. //10-я Пущинская школа-конференция молодых ученых, посвящен. 50-летию Пущинского научного центра РАН, 17-21 апреля, 2006, с. 82. - 0,1 п.л. - доля авторского участия - 50 %.

6. Фирстова Н.В., Левашова O.A., Золкорняев И.Г., Петрушова О.П., Баженова Е.С., Семибрато-ва Н.К. Активность ангиотензин-превращающего фермента отделов мозга на модели неполной ишемии мозга у крыс. // 10-я Пущинская школа-конференция молодых ученых, посвящен. 50-летию Пущинского научного центра РАН, 17-21 апреля, 2006, с. 84. - 0,1 п.л. - доля авторского участия - 30 %.

7. Левашова O.A., Золкорняев И.Г., Кухтевич И.И., Генгин М.Т., Козлов A.A. Динамика активности ферментов обмена регуляторных пептидов в остром периоде ишемического инсульта. // Материалы Международной конф. «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС», 25-27 сентября, Пенза, с. 127. - 0,1 п.л. - доля авторского участия - 40 %.

Левашова Ольга Анатольевна (Россия). Активность ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторые биохимические показатели у больных ишемичееким инсультом и в эксперименте.

Исследованы активность ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), карбоксипеп-тидазы N (КП N), метаболит оксида азота (нитрит-анион), ТБК-активные продукт (ТБК-АП) и уровень С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови больных ишемичееким инсультом в динамике. На модели неполной ишемии изучена активность АПФ в крови и мозге крыс, уровень нитрит-аниона, ТБК-АП, хемилюминесценция. Выявлено повышение активности АПФ у пациентов с тяжелым течением заболевания в первые часы и снижение в 1 сутки, активность КП N в той же группе обследованных снижалась в первые часы. Тяжелая церебральная ишемия сопровождается снижением нитрит-аниона. Показана зависимость уровня ТБК-АП и СРБ от тяжести заболевания. Окклюзия и реперфузия в эксперименте оказывала разнонаправленное действие на активность АПФ в различных отделах мозга крыс: понижение в гиппокампе и повышение в больших полушариях. Показано принципиальное сходство изменения активности ферментов обмена регуляторных пептидов и изученных параметров у больных ишемичееким инсультом и при моделировании ишемии.

Olga A. Levashova. (Russia). Activity of enzymes of an exchange regulative peptides and some biochemical parameters at patients with ischemic stroke and in experiment.

Activity angiotensin-converting of enzyme (ACE), carboxypeptidase N (CP N), a metabolite nitric oxide (nitrite-anion), TBA-active product (TBA-AP) and a level C-reactive protein (CRP) in whey of blood patients by an ischemic insult in dynamics. Activity ACE in blood and brain of rats, a level nitrite-anion, TBA-AP, chemiluminescence is studied on model of an incomplete ischemia. Increase of activity ACE at patients with heavy current of disease is revealed. At the first hours and decrease per 1 day, activity CP N in the same group surveyed decreased at the first hours. The heavy cerebral ischemia is accompanied by decrease nitrite-anion. Dependence of level TBA-AP and CRP from weight of disease is shown. Occlusion and reperfusion in experiment rendered different action of activity ACE in various departments of a brain of rats: downturn in hippocampus and increase in greater hemispheres. Basic similarity of change of activity of enzymes of exchange regulative peptides and the studied parameters at sick is shown b\ an ischemic stroke and at modeling an ischemia.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Левашова, Ольга Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клинико-биохимические аспекты ишемического повреждения мозга.

1.1.2. Роль оксида азота и других свободных радикалов при ишемии мозга.

1.1.3. Постишемическое воспаление.

1.2. Ферменты обмена регуляторных пептидов и их роль в патологии мозга.

1.2.1.Ангиотензинпревращающий фермент: локализация, тканевая специфичность.

1.2.1.1. Участие ангиотензинпревращающего фермента в обмене регуляторных пептидов.

1.2.1.2. Роль ангиотензинпревращающего фермента в патологии мозга.

1.2.2. Карбоксипептидаза N: локализация, тканевая специфичность, участие в обмене регуляторных пептидов, роль в патологии мозга.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Общая характеристика обследованных больных.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента.

2.2.1.1. Метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента в крови.

2.2.1.2. Метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента в мозге.

2.2.2. Метод определения активности карбоксипептидазы N.

2.2.3. Метод определения содержания белка.

2.2.4. Метод определения концентрации С-реактивного белка.

2.2.5. Метод определения нитрит-аниона.

2.2.6. Метод определения ТБК-активных продуктов.

2.2.7. Метод определения функциональной активности нейтрофилов.

2.2.8. Метод определения хемилюминесценции.

2.3. Моделирование фокальной ишемии.

2.4. Методы статистической обработки.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1.Активность ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторые биохимические показатели у больных ишемическим инсультом.

3.1.1. Исследование активности ферментов обмена регуляторных пептидов у больных ишемическим инсультом.

3.1.1.1. Активность ангиотензинпревращающего фермента у больных ишемией головного мозга в остром периоде.

3.1.1.2. Активность карбоксипептидазы N у больных ишемией головного мозга в остром периоде.

3.1.2. Свободнорадикальные процессы у больных ишемическим инсультом.

3.1.2.1. Исследование концентрации нитрит-аниона в остром периоде ишемического инсульта.

3.1.2.2. Исследование ТБК-активных продуктов у больных ишемическим инсультом.

3.1.2.3. Исследование показателей кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у больных ишемическим инсультом

3.1.3. Исследование уровня С-реактивного белка у больных ишемическим инсультом.

3.2. Исследование активности ангиотензинпревращающего фермента и некоторые биохимические показатели в сыворотке крови при экспериментальной ишемии головного мозга.

3.2.1. Активность ангиотензинпревращающего фермента в сыворотке крови экспериментальных животных на модели неполной ишемии головного мозга крыс.

3.2.2. Показатели свободнорадикльного окисления при моделировании ишемии головного мозга.

3.2.2.1. Исследование динамики нитрит-аниона в сыворотке крови экспериментальных животных.

3.2.2.2. Исследование динамики ТБК-активных продуктов при моделировании ишемии головного мозга.

3.2.2.3. Исследование динамики показателей хемилюминесценции при моделировании ишемии.

3.2.2.4. Исследование динамики кислородзависимого метаболизма нейтрофилов.

3.3. Исследование активности ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторых биохимических показателей в мозге экспериментальных животных при ишемическом повреждении головного мозга.

3.3.1. Исследование активности ангиотензинпревращающего фермента в мозге крыс.

3.3.2. Исследование динамики нитрит-аниона в мозговой ткани при моделировании неполной ишемии.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Активность ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторые биохимические показатели у больных ишемическим инсультом и в эксперименте"

Сосудистые заболевания головного мозга - одна из ведущих причин заболеваемости, смертности и инвалидизации в России. Ежегодно инсульт развивается более чем у 450 тыс. человек, из которых примерно 35 % умирает в остром периоде заболевания. В России смертность от цереброваскулярных заболеваний одна из самых высоких в мире: в 2000 году она составила 319,8 на 100 000 населения [24, 25, 26, 61, 62]. Инвалидизация вследствие инсульта занимает первое место среди всех причин первичной инвалидности. В последние десять лет в России ежегодно регистрируется около 400 000 тысяч инсультов, практически население большого города, причем на ишемические повреждения мозга приходится 70-80 %. В нашей стране проживает свыше 1 млн. человек, перенесших инсульт, при этом третью часть их составляют лица трудоспособного возраста, к труду же возвращается каждый пятый больной [62]. В связи с этим выяснение биохимических особенностей течения острой церебральной ишемии, разработка на их основе методов диагностики, профилактики и лечения являются одной из главных проблем современной медицины.

Исследования последних лет доказали, что гибель нервной ткани при ишемии мозга происходит в результате каскада патобиохимических и патофизиологических процессов [59, 60, 61]. В большинстве случаев инсульту предшествуют сложные и длительные изменения кровоснабжения и метаболизма в головном мозге. Считается, что ключевым звеном в развитии этих реакций является глутамат-кальциевый каскад. Исходом каскадных реакций является формирование инфаркта, происходящим по двум механизмам: некроза и апоптоза.

Современные исследования свидетельствуют о том, что в патогенезе мозговой ишемии задействовано большое количество факторов - гипоксия, дефицит макроэргических соединений, реперфузионные повреждения, реакция воспаления. Эти процессы имеют динамический характер, что сопровождается вовлечением разнородных механизмов на различных этапах ишемического каскада, их неоднозначностью в различные периоды патологического процесса.

Однако не выясненной остается роль нейропептидов, и в особенности ферментов, участвующих в их синтезе и распаде при ишемических поражениях мозга. Ангиотензинпревращающий фермент (КФ 3.4.15.1, АПФ), участвующий в образовании ангиотензина II и деградации брадикинина, рассматривается как один из основных регуляторов сердечно-сосудистой системы. С его экспрессией связан риск критического повышения уровня артериального давления (АД), нарушения мозгового кровообращения и развитие инсульта. Действие ангиотензина II не ограничивается только вазоконстрикторными эффектами. Доказано, что этот пептид увеличивает образование активных форм кислорода и может усиливать оксидантный стресс [210], участвует в развитии воспалительной реакции [161].

Другой фермент - карбоксипептидаза N (КФ 3.4.12.7, КП N) - также как и АПФ, инактивирует брадикинин, который является ключевым компонентом каллекреин-кининовой системы и характеризуется способностью снижать кровяное давление, увеличивать скорость местного кровотока, повышать проницаемость сосудов и гематоэнцефалического барьера [171]. Кроме того, фермент вовлекается в процессинг энкефалинов и эндорфинов, т.е. может влиять на ограничение стрессорной реакции [219, 255]. Роль КП N при острых нарушениях мозгового кровообращения ишемического генеза практически не изучена.

Неоднозначна роль оксида азота (N0) при патологических состояниях, включая и ишемическое повреждение головного мозга. Этот высокореактивное вещество способно оказывать как цитопротективное, так и цитотоксическое действие. N0 представляет собой нестабильный свободный радикал, продуцируемый за счет активации различных ферментов - N0синтаз. Протективное действие связано с вазодилатацией, модуляцией активности NMDA-рецепторов (N-метил-О-аспартат). Однако образующийся в повышенных концентрациях N0, оказывает нейротоксическое действие. Несмотря на большую значимость оксида азота в патогенезе острых нарушений мозгового кровообращения, не используются биохимические тесты для его оценки.

Активация свободнорадикальных процессов при ишемии мозга приводит к развитию оксидантного стресса, являющегося одним из универсальных механизмов повреждения тканей. В связи с этим представляет интерес исследование у больных ишемическим инсультом процессов свободнорадикального окисления (СРО).

Количество N0 в свою очередь может зависеть от активности КП N, которая высвобождает аргинин из пептидов, являющихся субстратом N0-синтаз.

Многочисленные экспериментальные исследования показали, что среди механизмов вторичного поражения ткани важное место занимают реакции локального воспаления. Характер этих реакций отражают белки острой фазы, которые позволяет определить выраженность ишемического процесса и прогнозировать восстановление неврологических нарушений. Поскольку локальное воспаление замыкает порочный круг формирования мозговой недостаточности, представляет интерес изучение динамики белков острой фазы у больных ишемическим инсультом.

Сложность и противоречивость процессов ишемического повреждения требует комплексной оценки показателей, отражающих метаболические процессы у больных с острой недостаточностью мозгового кровообращения, поскольку биохимические изменения предшествуют клиническим. Такой подход позволит выявить зависимость изучаемых показателей от тяжести ишемического процесса у больных с острым нарушением мозгового кровообращения.

В связи с вышеизложенным, нами была проведены исследования по изучению комплекса биохимических параметров: исследование активности ферментов обмена регуляторных пептидов (АПФ и КП N), показателей нитроксидэргической, оксидантной систем и воспалительной реакции.

Для сравнения полученных данных в клинических условиях и более глубокого изучения компонентов метаболического каскада последние изучены на модели фокальной ишемии в эксперименте на животных. Полученные данные позволяют определить взаимосвязь между изучаемыми показателями в крови и ткани мозга и выявить роль отдельных его звеньев в развитии ишемии головного мозга, что может служить основой для разработки методов адекватной и точной диагностики, а также коррекции обменных процессов.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи.

1. Оценить динамику активности ферментов обмена регуляторных пептидов у больных ишемическим инсультом.

3. Оценить исследуемые показатели при моделировании фокальной ишемии у крыс и сопоставить их с изменениями в мозговой ткани у экспериментальных животных.

4. Определить биохимические параметры, наиболее четко характеризующие тяжесть ишемического процесса.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые изучена активность ферментов обмена регуляторных пептидов - АПФ и КП N - у больных ишемическим инсультом в остром периоде заболевания. Обнаружено, что в группе пациентов с тяжелым и крайне тяжелым вариантом течения заболевания активность АПФ повышалась в начале развития инсульта и резкое снижалась в 1 сутки. При отсутствии положительной динамики в восстановлении неврологических функций активность фермента оставалась повышенной.

Проведено исследование показателей, характеризующих процессы свободнорадикального окисления в режиме мониторинга. Показано, что ишемия головного мозга характеризуется активацией СРО и зависит от тяжести заболевания. Установлена разнонаправленная динамика содержания нитрит-аниона в зависимости от восстановления неврологических нарушений; у пациентов с отсутствием положительной динамики концентрация показателя не превышала значения группы контроля на протяжении всего периода наблюдения. Выявлена корреляционная зависимость между активностью КП N и уровнем нитрит-аниона.

Полученные результаты представляют интерес в понимании механизмов неврологических нарушений и роли ферментов обмена регуляторных пептидов в этом процессе, а также позволили определить тесты, отражающие отдельные этапы метаболического каскада развития ишемии головного мозга. Практическое применение полученных данных может способствовать повышению качества диагностики и разработки условий для совершенствования терапевтической тактики. Применение метода хемилюминесценции для оценки процессов СРО в эксперименте показало возможность его использования в практическом здравоохранении: в качестве теста для оценки активности свободнорадикальных процессов.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на I Всероссийской конференции по проблемам цереброваскулярной патологии и инсульта (Москва, сентябрь, 2003), на итоговых конференциях профессорско-преподавательского состава Пензенского государственного педагогического университета (2003, 2004, 2005), «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Гурзуф, 2006), «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности центральной нервной системы», (Пенза, 2006).

По теме диссертации опубликовано 7 работ.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Ишемия головного мозга сопровождается изменением активности ферментов обмена регуляторных пептидов как в сыворотке крови, так и в мозговой ткани.

2. Наибольшую значимость при ишемической патологии головного мозга имеет определение активности АПФ в сыворотке крови.

3. Снижение концентрации нитрит-аниона как ближайшего стабильного метаболита оксида азота у больных ишемическим инсультом свидетельствует о тяжести заболевания.

4. Тестами, наиболее четко отражающие отдельные этапы метаболического каскада, являются определение ТБК-активных продуктов, люминолзависимая хемилюминесценция, СРБ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Левашова, Ольга Анатольевна

выводы

1. Выявлено повышение активности АПФ у пациентов с тяжелым вариантом течения ишемического инсульта в первые часы и на 1 сутки развития заболевания, активность КП N в той же группе обследованных снижалась в первые часы исследования.

3. Ишемия головного мозга сопровождается усилением процессов свободно-радикального окисления, что выражается в увеличении концентрации МДА в зависимости от тяжести заболевания.

7. Окклюзионные и реперфузионные процессы при моделировании ишемии головного мозга сопровождались усилением свободнорадикальных процессов, что нашло отражение в повышении концентрации ТБК-активных продуктов (окклюзия и 1 сутки после, а также во все периоды наблюдения после реперфузии), увеличении показателей хемилюминесценции (окклюзия, 1 сут и реперфузия), а также в активации кислородзависимого метаболизма нейтрофилов. Повышением концентрации нитрит-аниона в крови сопровождались реперфузионные процессы в мозговой ткани крыс.

9. Показателями, отражающими тяжесть ишемического инсульта в острейшем периоде (в первые часы), может служить повышение активности АПФ, снижение концентрации нитрит-аниона, а в остром периоде СРБ и активация свободно-радикальных процессов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Левашова, Ольга Анатольевна, Пенза

1. Авакян Г.Н. Ишемический инсульт. Лечащий врач. - № 5. - 1998. -http://www.osp.ru/doctore.

2. Александрова Е.В., Новиков А.А., Насонов Е.А. Высокочувствительные методы определения С-реактивного белка. Клин. лаб. диагностика. - 2004. -№ 11. - С. 16-22.

3. Альтшулер Б.Ю., Ройтман А.П., Долгов В.В. Методические аспекты определения ангиотензинпревращающего фермента. Клин. лаб. диагностика. - № 12. - 2000. - С. 10-14.

4. Андреев А.Ю., Кушнарева Ю.Е., Старков А.А. Метаболизм активных форм кислорода в митохондриях. Биохимия. - т. 70, вып. 2. - 2005. - С. 246-264.

5. Арзамасцев А.П., Северина И.С., Григорьев Н.Б., Граник В.Г. Экзогенные доноры оксида азота и ингибиторы NO-синтаз (химический аспект) // Вестн. РАМН. 2003. - № 12. - С. 88-95.

6. Арнхольд Ю. Свойства, функции и секреция миелопероксидазы человека. Биохимия. - 2004. - Т. 69, вып. 1. - С. 8-15.

7. Ашмарин И.П., Каменская М.А. Нейропептиды в симпатической передаче. // Итоги Н. и Т. (ВИНИТИ. Сер. Физиология человека и животных). -1988. -184 с.

8. Ашмарин И.П., Королева С.В. Закономерности взаимодействия и функциональный континуум нейропептидов (на пути к единой концепции). -Вестн. РАМН. № 6. - 2002. - С. 40-48.

9. Ашмарин И.П., Стукалов П.В. Нейрохимия. М.: Изд-во Инст. Биомед. Химии РАМН. - 1996.

10. Бархатова В.П., Суслина З.А. Основные направления нейропротекции при ишемии мозга. // Невролог, журнал. № 4. - 2002. - С. 42-50.

11. Башкатова В.Г., Раевский К.С. Оксид азота в механизмах повреждения мозга, обусловленных нейротоксическим действием глутамата. Биохимия. - 1998. - т. 63, вып. 7. - С.1020-1028.

12. Белова JI.A. Ангиотензин II -образующие ферменты. Биохимия. -2000.-т. 65, вып. 12.-С. 1589-1599.

13. Беридзе М.З., Мегрилишвили М.К., Шакаришвили P.P. Динамика азотзависимого оксидантного стресса в острой стадии ишемического инсульта. Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. Инсульт (приложение к журналу). Вып. 13. - 2005. - С. 58-62.

14. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М., Медицина. 1989. - 368 с.

15. Биленко М.В., Тельпухов В.И., Чураков Т.Д. Влияние ишемии и реперфузии головного мозга крыс на процессы ПОЛ и защитный эффект антиоксидантов. Бюл. эксперим. биологии и медицины,- 1988. - № 4.- С. 394-397.

16. Бодыхов М.К., Федоров В.Н., Скворцова В.И. Свободные радикалы при ишемии мозга. Инсульт. - № 10. - 2004. - С. 33-38.

17. Болдырев А. А. Окислительный стресс и мозг. Соровский образовательный журнал. - 2001. - Т. 7, № 4. - С. 21-28.

18. Болдырев А.А., Юнева М.О. Новые подходы к исследованию нейрональной клетки. Соровский образовательный журнал. - 2004. - Т. 8, №2.-С. 7-14.

19. Боровиков В.П. Популярное введение в программу Statistica. М.: КомпьютерПресс. - 1998. - 267 с.

20. Брюне Б., Сандау К., А. фон Кнетен. Апоптотическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации и антагонистические сигнальные пути. -Биохимия. т. 63, вып. 7. - 1998. - С. 966-975.

21. Ванин А.Ф. Оксид азота в биологии: история, состояния и перспективы исследований. // Биохимия. 1998. - вып. 7. - С. 867-869.

22. Ванин А.Ф. Оксид азота в биомедицинских исследованиях. // Вестн. РАМН. 2000. - № 4. - С. 41-44.

23. Ванхутте П.М. Эндотелийзависимые вазомоторные реакции и торможение активности АПФ. Кардиология. - № 11. -1996. - С. 71-79.

24. Варлоу Ч.П., Деннис М.С., Ж. Ван Гейн и др. Инсульт. Практическое руководство для ведения больных. // Пер. с англ. Спб.: Политехника 1998; 374 с.

25. Верещагин Н.В., Моргунов В.А., Гулевская Т.С. Патология головного мозга при атеросклерозе и артериальной гипертонии. М.: Медицина, 1997.

26. Верещагин Н.В., Суслина З.А. Инсульт в зеркале медицины и общества. Вестник РАМН. - 2003. - № 11. - С. 48-55.

27. Вернигора А.Н., Никишин Н. Н., Генгин М.Т. Протеолитические ферменты и регуляция уровня активных нейропептидов. Биохимия. - 1995. -т. 60, вып. 10.-С. 1575-1580.

28. Вернигора А.Н., Никишин Н.Н., Генгин М.Т. О взаимосвязи между активностью карбоксипептидазы Н и ангиотензинпревращающего фермента. Биохимия. - 1995. - т. 60. - вып. 1. - С.

29. Вернигора А.Н., Генгин М.Т. Протеолитические ферменты: субклеточная локализация, свойства и роль в обмене нейропептидов// Биохимия. 1996. - т. 61, № 5. - С. 771-785.

30. Вернигора А.Н., Генгин М.Т. Основные (отщепляющие остатки аргинина и лизина) металлокарбоксипептидазы тканей млекопитающих: структура, свойства и функции) // Укр. биохим. журнал. 1998. - т. 70, № 4. -С. 16-24.

31. Визир А.Д., Визир А.Е., Березин А.Е. Связь между генетическим полиморфизмом ангиотензинпревращающего фермента и риском развития инсульта. Журнал АМН Украины. - 2002. - т. 8, № 2. - С. 269-281.

32. Викторов И.В. Роль оксида азота и других свободных радикалов в ишемической патологии мозга. Вестник РАМН. - 2000. - № 4. - С. 5-10.

33. Вилков Г.А., Мартисорян В.В., Трапезонцева Р.А. и др. Кининовая и плазминовая система сыворотки крови и спинномозговой жидкости у больных рассеянным склерозом и шизофренией. Журнал невропатологии и психиатрии. - 1989. - т. 89, № 7. - с. 23-27.

34. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты. // Вестн. РАМН. 1998. - № 8. - С. 43-51.

35. Владимиров Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции. // Соровский образоват. журнал. 1999. - № 6. - с. 25-32.

36. Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и азота: значение для диагностики, профилактики и терапии. Биохимия. - 2004. - т. 69, вып. 1. -С. 5-7.

37. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Мажуль JI.M. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов по тесту с тиобарбитуровой кислотой. // Вопр. мед. химии. 1987. - Вып. 4. - С. 118122.

38. Ганнушкина И.В. Мозговое кровообращение при разных видах циркуляторной гипоксии мозга. Вестн. РАМН. - 2000. - № 9. - С. 22-27.

39. Генгин М.Т. Особенности структурно-функциональной организации и физико-химические свойства нелизосомальных петидгидролаз мозга животных // Дисс. на соискан. учен, степени д.б.н. Москва, 2002.

40. Генгин М.Т., Вернигора А.Н. Ферменты процессинга опиоидных пептидов и методы определения их активности.// Укр. биохим. журнал. -1994.-Т. 66,№2.- С. 3-17.

41. Генгин М.Т., Вернигора А.Н., Никишин Н.Н. и соавт. Влияние каптоприла и резерпина на активность ферментов обмена некоторых регуляторных пептидов. Вопр. Мед. Химии. - 1995. - т. 41, вып. 5. - С. 3739.

42. Генгин М.Т., Вернигора А.Н. 40 лет изучения ангиотензинпревращающего фермента: проблемы и достижения. -Украинский биохим. журнал. 1998. - вып. 70, № 2. - С. 2-14.

43. Голиков П.П., Николаева Н.Н. Экспресс-метод определения активности АПФ в сыворотке крови. Клин. лаб. диагностика. -№ 1.- 1998. -С. 11-13.

44. Голиков П.П., Пахомова Г.В., Утешев Н.С. и соавт. Динамика содержания конечного продукта оксида азота нитрита в различных биологических жидкостях при перитоните. Вестн. интенсивн. терапии. -2000.-№4.-С. 31-32.

45. Голиков П.П. Оксид азота в клинике неотложных заболеваний. М.: Медпрактика-М. - 2004. - 179 с.

46. Гольдштейн Н. Активные формы кислорода как жизненно необходимые компоненты воздушной среды. Биохимия. - 2002. - т. 67, вып. 2-С. 194-204.

47. Гомазков О.А. Функциональная биохимия регуляторных пептидов. -М: Наука. 1993.-160 с.

48. Гомазков О.А. Ангиотензинпревращающий фермент в кардиологии: молекулярные и функциональные аспекты. Кардиология. - № 7. - 1997. - С. 58-63.

49. Гомазков О.А., Калинина Е.В. Ангиотензин-превращающий фермент: бинарная активность, ингибиторы и функциональная роль кининового звена. -Успехи современ. биологии. 1997.-т. 117, вып. 2.-С. 172-183.

50. Гомазков О.А. Нейропептиды универсальные регуляторы. Почему? (Эссе в постулатах, пояснениях, иллюстрациях). - Природа. - 1999. - № 4.

51. Гомазков О.А. Пептиды в кардиологии. Биохимия. Физиология. Патология. Информация. Анализ. М.: Материк Альфа. - 2000 г. - 143 с.

52. Гомазков О.А. Нейропептиды и ростовые факторы мозга. М., 2002. -239 с.

53. Горбачев В.И., Ковалев В.В. Роль оксида азота в патогенезе поражений центральной нервной системы. Инсульт. - № 7. - 2002. - С. 9-16.

54. Гордеева А.В., Звягильская Р.А., Лабас Ю.А. Взаимосвязь между активными формами кислорода и кальцием в живых клетках. Биохимия. -2003.- т. 68, вып. 10.-С. 1318-1322.

55. Горрен А.К., Майцер А.К. Универсальная комплексная энзимология синтазы оксида азота. // Биохимия. 1998. - Вып. 7. - С. 870-880.

56. Гуревич К.Г., Шимановский Н.Л. Оксид азота: биосинтез, механизм действия, функции. Вопр. биол. мед. и фарм. химии. - 2000. - № 4. - С. 1622.

57. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Коваленко А.В., Соколов М.А. Механизмы повреждения ткани мозга на фоне острой фокальной ишемии. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. № 2. - 1999. - С. 65-70.

58. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Журавлева Е.Ю., Яковлева Е.В. Механизмы повреждения ткани мозга на фоне острой фокальной ишемии. // Журнал неврологии и психиатрии. № 5. - 1999. - С. 55-61.

59. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М.: Медицина. -2001.-326 с.

60. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Мартынов М.Ю. Церебральный инсульт: проблемы и решения. Вестн. РАМН. - 2003. - № 11. - С. 44-48.

61. Гусев Е.И. Проблема инсульта в России. Журнал неврологии и психиатрии. Инсульт (приложение к журналу). - 2003. - вып. 9. - С. 3-5.

62. Дамбинова С.А., Одинак М.М., Скулябин Д.И., Хунтеев Г.А., Скворцова В.И. Лабораторные методы при эпилепсии и нарушениях мозгового кровообращения. // Журнал неврологии и психиатрии. № 1. -2001.-С. 58-64.

63. Друх В.М., Фархутдинов P.P., Загидуллин Ш.З. Метод изучения хемилюминесценции лейкоцитов цельной крови. Клин. лаб. диагностика. -№ 12.-2004.-С. 41-43.

64. Дубинина Е.Е, Гавровская С.В., Кузьмич Е.В., Леонова Н.В. Окислительная модификация белков: окисление триптофана и образование битирозина в очищенных белках с использованием системы Фентона. -Биохимия. 2002. - т. 67, вып. 3. - С. 413-421.

65. Елисеева Ю.Е., Барсукова И.С., Орехович В.Н. Обнаружение ингибиторов карбоксикатепсина (ангиотензин-1-превращающего фермента) в лейкоцитах человека // Докл. АН. СССР. 1988. - Т. 302. - С. 992-994.

66. Завалишин И.А., Захарова М.Н. Оксидантный стресс общий механизм повреждения при заболеваниях нервной системы. - Журн. невропатологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. - № 2. - 1996. - С. 111-114.

67. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б. Шергин С.М. Окислительный стресс. -Новосибирск. 1993.

68. Зозуля Ю.А., Барабой В.А., Сутковой Д.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита головного мозга М.: «Знание-М». -2000 г.-344 с.

69. Зоров Д.Б., Банникова С.Ю., Белоусов В.В. и др. Друзья или враги. Активные формы кислорода и азота. Биохимия. - 2005. - т. 70, вып. 2. - С. 265-272.

70. Зотова И.В., Затейщиков Д.А., Сидоренко Б.А. Синтез оксида азота и развитие атеросклероза. Кардиология. - № 4. - 2002. - С. 58-67.

71. Ивашкин В.Т., Драпкина О.М. Клиническое значение оксида азота и белков теплового шока. М., «Геотар- Мед», 2001, 88 с.

72. Карпюк В.Б., Черняк Ю.С., Шубич М.Г. Лабораторный мониторинг состояния нитроксидэргической вазорелаксации при субарахноидальном кровоизлиянии. Клин. лаб. диагностика. - 2000. - № 5. - С. 16-18.

73. Кикнадзе М.П. Ренин-ангиотензиновая система сердца. Кардиология.- 1995. № 3. - С . 56-58.

74. Кольдиц М. Участие ангиотензина II в осуществлении отрицательных эмоциональных реакций. // Журн. высш. нервн. деятельности. 1985. - т. 35. -С. 280-287.

75. Колпикова О.С. Состояние свободнорадикального окисления при ишемическом инсульте и оценка антиокислительной активности препаратов // Дисс. на соискан. учен, степени к.м.н. Уфа, 2003.

76. Корнев А.В., Коротаев А.А. С-реактивный белок в клинике («Ниокард»- новый метод для традиционного теста). Клин. лаб. диагностика. - № 6. -1999.-С. 37-40.

77. Кост О.А., Гринштейн С.В., Никольская И.И. Выделение солюбилизированной и мембранной форм соматического АПФ каскадной афинной хроматографией. Биохимия. - 1997. - т. 62. - вып. 3. С.

78. Котов А.В., Толпыго С.М., Певцова Е.И. Регуляторные пептиды в системных механизмах целенаправленного поведения: опыт изучения физиологической активности. Вестник РАМН. - 2005. - № 8. - С. 30-36.

79. Кратнов А.Е. Состояние кислородзависимого метаболизма фагоцитов и антиоксидантной защиты плазмы крови при острых коронарных синдромах в зависимости от исхода в период госпитализации. Клин. лаб. диагностика. -№6.-2002.-С. 6-13.

80. Крыжановский Г.Н. Общая патофизиология нервной системы. // Пат. физиол. 1990. - № 4.- С. 48-54.

81. Кузнецова Т.В., Staessen Jan A., Wang J.G., Petrov V. и др. Полиморфизм (типа вставка/отсутствие вставки) гена ангиотензипревращающего фермента и риск сердечно-сосудистых заболеваний. Кардиология. - 1998. - № 7. - С. 61-70.

82. Курашвили Л.В., Косой Г.А., Захарова И.Р. Современное представление о перекисном окислении липидов и антиокидантной системе при патологических состояниях. Методическое пособие. - 2003. - Пенза. -93 с.

83. Кухтевич И.И. Ишемический инсульт. М., Медицина. - 2006. - 170 с.

84. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободно-радикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы. Кардиология. -2000. - № 7. - С. 48-59.

85. Максимович Н.Е. Использование L-аргинина и ингибиторов образования оксида азота для коррекции воспалительного процесса в мозге крыс при его ишемии-реперфузии. Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2004. - № 3. - С. 14-17.

86. Марков Х.М. О биорегуляторной системе L-аргинин окись азота. -Патолог, физиология и эксперим. терапия. - 1996. - № 1. - С. 34-39.

87. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. 2 тома, 1988.

88. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск, 1989.

89. Маянский Д.Н. Хроническое воспаление. М.: Медицина, 1991.- 271 с.

90. Малыгина Н.А., Костомарова И.В., Криводубская Т.Ю. и др. Анализ полиморфизма гена ангиотензинпревращающего фермента у больных ишемической болезнью сердца и гипертонией. Кардиология. - 2000 . - № 4. -С. 19-22.

91. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Реутов В.П. Оксид азота и NO-синтазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях (обзор). Биохимия. - т. 65, вып. 4. - 2000. - С. 485-504.

92. Моляка Ю.К., Петрук С.В., Кирьянов С.А., Джибладзе Д.Н. и др. Анализ ассоциаций полиморфизма в гене АПФ при ишемическом инсульте. -Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. № 6. - 1998. - С. 3537.

93. Насонов E.JL, Баранов А.А., Шилкина Н.П. Маркеры активации эндотелия (тромбомодулин, антиген фактора Виллебранда и ангиотензинпревращающий фермент): клиническое значение. Клин, медицина. -№ 11.- 1998. - С. 4-9.

94. Насонов Е.А. Маркеры воспаления и атеросклероз: значение С-реактивного белка. Кардиология. - № 2. - 1999. - С. 81-85.

95. Ольбинская Л.И., Голоколенова Г.М., Кузнецов В.А. Каллекреин-кининовая система: значение при недостаточности кровообращения и влияние ингибиторов ангиотензин -1 превращающего фермента. С. 88-91.

96. Пасхина Т.С. Компенсаторные и патогенетические функции каллекреин-кининовой системы в норме и при некоторых заболеваниях. -Вестник АМН. 1982. - № 9. - С. 50-55.

97. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы. М.: Издательство РАМН. -2000. - 52 с.

98. Платонова И.А. Роль стресс-реализующей и нейроиммуноэндокринной системы в патогенезе ишемического инсульта. Автореф. Дисс.канд мед. Наук. - 2003 г.

99. Полевщиков А.В., Назаров П.Г. С-реактивный белок и сывороточный амилоид Р: роль в иммунорегуляции. Иммунология. - 1998. - № 4 - С. 4-10.

100. Преображенский Д.В., Сидоренко Б.А., Сополева Ю.В., Иосава И.К. Физиология и фармакология ренин-ангиотензиновой системы. -Кардиология. 1997. № 11 - С. 91-95.

101. Проскуряков С.Я., Габай B.JI., Коноплянников А.Г. Некроз активная, управляемая форма программируемой клеточной гибели. - Биохимия. - 2002. -Т. 67,№4.- С. 467-491.

102. Пшенникова М.Г., Смирин Б.В., Бондаренко О.Н. и др. Депонирование оксида азота у крыс разных генетических линий и его роль в антистрессорном эффекте адаптации к гипоксии. Рос. Физиологич. Журнал им. И.М. Мечникова. - 2000. - т. 86. - № 2. - - с.

103. Раевский К.С., Башкатова В.Г., Ванин А.Ф. Роль оксида азота в глутаматэргической патологии мозга. // Вестник РАМН. 2000. - № 4. - С. 11-15.

104. Реутов В.П., Сорокина Е.Г. NO-синтазная и нитритредуктазная компоненты цикла оксида азота. Биохимия. - 1998. - Т. 63, вып. 7. - с. 1029-1040.

105. Реутов В.П. Биохимическое предопределение NO-синтазной и нитритредуктазной компонент цикла оксида азота. Биохимия. - Т. 64, вып. 5.-С. 634-651.

106. Реутов В.П. Медико-биологические аспекты циклов оксида азота и супероксидного анион радикала. Вестник РАМН. - 2000. - № 4. - С. 35-41.

107. Реутов В.П. Цикл оксида азота в организме млекопитающих и принцип цикличности (обзор). Биохимия. - 2002. - Т. 67, Вып. 3. - С. 353-377.

108. Реутов В.П., Сорокина Е.Г., Косицин Н.С., Охотин В.Е. Проблема оксида азота в биологии и медицине и принцип цикличности. М.: Наука, 2003.-96 с.

109. Рулева Н.Ю., Кузин В.М., Мартынов М.Ю. и соавт. Маркеры воспаления, аутоантитела и характер исхода у больных с острым ишемическим инсультом. Инсульт. - 2004. - № 12. - С. 60-65.

110. Рябов Г.А., Азизов Ю.М. Роль оксида азота как регулятора клеточных процессов при формировании полиорганной недостаточности. Анест. и реанимат. - 2001. - № 1. - С. 8-12.

111. Салиева P.M., Яновский К. и соавт. Пептид, вызывающий дельтасон, как фактор повышающий содержание вещества Р в гипоталамусе и устойчивости крыс к эмоциональному стрессу. // Журн. высш. нервн. деятельности. 1991. - Т. 41. - № 3. - С.558-563.

112. Северина И.С. Растворимая гуанилатциклаза в молекулярных механизмах физиологических эффектов оксида азота. Биохимия. - 1998. -т. 63, вып. 7. - С. 939-947.

113. Скворцова В.И. Ишемический инсульт: патогенез ишемии, терапевтические подходы. //Неврологический журнал.- 2001.-№ З.-С. 4-9.

114. Скулачев В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло. Рос. Журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - № 1. - 1999. - С. 12-18.

115. Смирнин В.Б., Ванин А.Ф., Малышев И.Ю. и др. Депонирование оксида азота в кровеносных сосудах in vitro. Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1999. - т. 127, № 6. - С. 629-632.

116. Сорокина Е.Г., Пинелис В.Г., Реутов В.П. и соавт. Материалы Международ. Конгресс патофизиологов. М., 1996. - С. 187.

117. Суслина З.А. Ишемические нарушения мозгового кровообращения и система простаноидов (клинико-биохимическое исследование) : Дисс. . д-ра мед. наук. М., 1991.

118. Суслина З.А., Верещагтн Н.В., Пирадов М.А. Подтипы ишемических нарушение мозгового кровообращения: диагностика и лечение// Consilium Medicum.-Т. 3.,№ 5.-2001.

119. Титов В.Н. Осипов В.Г. Атеросклероз. Роль эндогенного воспаления, белков острой фазы и жирных кислот. М., 2003.

120. Титов В.Н., Близнюков О.П. С-реактивный белок: физико-химические свойства, методы определения и диагностическое значение. Клин. лаб. диагностика. - № 4. - 2004. - С. 3-9.

121. Титов В.Н. С-реактивный белок: гетерогенность и функциональная связь с окислительным стрессом как с маркером воспаления. Клин. лаб. диагностика. - № 7. - 2004. - С. 3-12.

122. Титов В.Н., Ощепкова Е.В., Дмитриев В.А. Эндогенное воспаление и биохимические аспекты патогенеза артериальной гипертонии. // Клин. лаб. диагностика. № 5. - 2005. - С. 3-10.

123. Титов В.Н., Лисицин Д.М. Регуляция перекисного окисления in vivo как этапа воспаления. Олеиновая кислота, захватчики активных форм кислорода и антиоксиданты. // Клин. лаб. диагностика. 2005 - № 6. - С. 312.

124. Токсанбаева С.Ж. Иммунорегуляторные свойства С-реактивного белка: Автореф. Дис . канд. мед. наук. М., 1985.

125. Турпаев К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов. Биохимия. - 2002. - т. 67, вып. 3. - С. 339-352.

126. Уэйр Е.К., Ривс Д. Физиология и патофизиология легочных сосудов. М.: Медицина. 1995.

127. Фархутдинов P.P., Лиховских В.А. Хемилюминесцентные методы исследования свободнорадикального окисления в биологии и медицине. -Уфа.-1995.-С. 11-20.

128. Фархутдинов P.P. Исследование хемилюминесценции биологического материала и оценка антиокислительной активности на приборе ХЛМ-003. -Методические рекомендации. Уфа. - 2005 г.

129. Федорова Т.В., Александров М.В., Соколовский В.В., Папаян Л.П. и др. Агрегация клеток и окислительный стресс в патогенезе ишемического инсульта. Инсульт. - № 10. - 2004. - С. 39-45.

130. Федорова Т.Н., Болдырев А.А., Ганнушкина И.В. Перекисное окисление липидов при экспериментальной ишемии мозга. Биохимия. -1999.-Т. 64, вып. 1.-С. 94-98.

131. Фирстова Н.В. Влияние предшественника лей-энкефалина на активность ферментов обмена регуляторных пептидов головного мозга и периферических органов крыс в норме и при эмоциональном болевом стрессе. // Дисс.канд. биол. наук. Пенза, 1999.

132. Хаспеков Л.Г., Онуфриев М.В., Лыжин А.А. и соавт. Влияние ишемии на активность синтазы оксида азота в органотипической культуре тканигиппокампа. В кн.: Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция, Материалы 2-й Всерос. Конференции. - М., 1999; 81.

133. Черняк Б.В., Плетюшкина О.Ю., Изюмов Д.С. Биоэнергетика и смерть. Биохимия. - 2005. - т. 70, вып. 2. - С. 294-301.

134. Чехонин В.П., Лебедев С.В., Петров С.В. и др. Моделирование фокальной ишемии головного мозга. Вестник РАМН. - 2004. - № 3 . - С. 47-54.

135. Чумаченко П.В., Ходакова Т.Г., Данилов С.М. Ангиотензинпревращающий фермент в моноцитах/макрофагах сосудистой стенки. Кардиология. - № 8. - 1998. - С. 51-55.

136. Шанин Ю.Н., Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике. Элби-СПб. - 2003.- 128 с.

137. Шерстнев З.В., Скворцова В.И., Грудень М.А. Белок HLDF и антитела к нему как молекулярные патогенетические факторы и новые маркеры острых нарушений мозгового кровообращения. // Инсульт. 2004. - № 12. -С. 53-59.

138. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. М.: Изд-во НИИ Биомед. Химии. - 2000. - 366 с.

139. Энциклопедия клинических лабораторных тестов / Под ред. Н. Тица. -М.: Лабинформ, 1997. 1250 с.

140. Яхно Н.Н., Парфенов В.А. Ишемические острые нарушения мозгового кровообращения. // Consilium medicum. 2000. - т.2. - № 12.

141. Akermann A., Fernandez-Alfonso М., Sanchez Rojas R. Modulation of angiotensin-converting enzyme by nitric oxide. // Br. J. Pharmacol. 1998. - Vol. 124.-P. 291-298.

142. Barton B.E. The biological effects of interleukin 6. // Med. Res. Rev. 1996. - Vol. 16, N 1. - P. 87-109.

143. Bartosik-PsujekH., Belniak E., Stelmasiak Z. Markers of inflammation in cerebral ischemia. //Neurol Sci. 2003. - Vol.24. - N 4. - P. 279-280.

144. Bernstein K.E., Martin B.M., Edvards -A.S., Bernstein E.A. Mouse angiotensin-converting enzyme is a protein composed of two homologous domains. // -J. Biol. Chem.- 1989.-Vol. 264.-P. 11945-11951.

145. Cao H., Hegele R.A. DNA polymorphism and mutations in CPN1, including the genomic basis of carboxypeptidase N deficiency. // J. Hum. Genet. 2003. -Vol. 48. N1.-P. 2-20.

146. Catto A., Carter A.M., Barret J.H. et al. Angiotensin-converting enzyme insert/deletion polymorphism and cerebrovaskular disease // Stroke. 1996. - N 27.-P. 435-440.

147. Cicinelli E., Ignarro L., Schonauer L., Matteo M., Galantino P. Different plasma revels of nitric oxide in arterial and venous blood. // Clin Physiol. 1999. -Vol. 19.-N5.-P. 440-442.

148. Chartrain N.A., Geller D.A., Kotty H.H. Molecular cloning, structure and chromosomal localization of the human inducible nitric oxide synthase gene. // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269. - P. 6765-6772.

149. Cherubini A, Ruggiero C., Polidori M.C. et al. Potential markers of oxidative stress in stroke. //Free Radic. Biol. Med. 2005. - Vol. 39. - N 7. - P. 841-852.

150. Cody R.J. The integrated effects of angiotensin II.// J. Cardiol. 1997. -Vol. 6, N. 79 (5A).-P. 6-11.

151. Cooke J.P., Dzau V.J. Nitric oxide synthase: Role in the genesis of vascular disease. // Annu. Rev. Med. 1997. - Vol. 177. - P. 193-200.

152. Das U.N. Angiotensin-II behaves as an endogenous pro-inflammatory molecule //J. Assoc. Physicians India. 2005. - N 53. - P. 472- 476.

153. De Gasparo M., Husain A., Alexander W. et. al. Proposed update of angiotensin receptor nomenclature// Hypertension. 1995. - N 25. - P. 924-927.

154. Derad I., Pietrowsky R., Dodt С et al. Enhanced psychophysiological signs of attention after angiotensin-converting ensyme inhibiton by captopril // Psychophysiology. 1996. -N 33. - P. 295-301.

155. Dendorfer A., Wolfrum S., Wagemann M., Qadri F., Dominiak P. Pathways of bradykinin degradation in blood and plasma of normotensive and hypertensive rats. // Am J Physiol Heart Circ Physiol.- 2001. Vol. 280. - P. 2182-2188.

156. Devies M.G., Fulton G.J., Roberts J.M. Clinical biology of nitric oxide // Brit. J. Surg. 1995. - Vol. 82. - P. 1598-1610.

157. Di Napoli, Papa F. Angiotensin-converting enzyme inhibitor use is associated with reduced plasma concentration of C-reactive protein in patients with first-ever ischemic stroke. // Stroke. 2003. - Vol. 34. - N. 12. - P. 2922 -2929.

158. Di Napoli M, Papa F. Systemic inflammation, blood pressure, and stroke outcome. // J. Clin. Hypertens (Greenwich). 2006. - Vol. 8, N 3. - P. 187-194.

159. Drapeau Guy, Chow Ana, Ward Patricke E. Metabolism of bradykinin analogs by angiotensin I converting enzyme and carboxypeptidase N // Peptides. -1991.-Vol. 12.-N3.-P. 631-638.

160. Dzau V. Theodore Cooper Lecture: Tissue angiotensin and pathobiology of vascular disease: a unifying hypothesis. // Hypertension.- 2001. Vol. 37. - N 4. -P. 1047-105.

161. Ehlers M.R., Riordan J. Angiotensin-converting enzyme. Biochemistry and molecular biology. // Hypertension. Pat

162. Fiacher L., Brown M. Central regulation of stress responses. Regulation of the autonomic neurons system and visceral function by corticotrophin releasing factor-41. //Beillieres. Clin. Endocrin. Metabol. 1991. - Vol.5. - P. 35-50.

163. Forstermann U., Schmidt H.W. Isoforms of nitric oxide synthase. Characterization and purification from different cell types.//Biochem.Pharmacol. -1991.-Vol. 42.-P. 1849-1857.

164. Goetz R.M., Holtz J. Enhanced angiotensin-converting enzyme activity and impaired endothelium- dependent vasodilatation in aortae from hypertensive rats: evidence for a causal link. // Clinical. Science. 1999. - Vol. 97. - P. 165-174.

165. Govantes С., Marin J. Effect of angiotensin-converting ensyme inhibitors on quality of life in hypertensive patients. // Pharmacodynamic basis. Fundam Clin Pharmacol. 1996. - Vol. 10. - P. 400-405.

166. Griendling K.K., Murphy T.J., Alexander R.W. Molecular biology of the renin-angiotensin system.//Circulation. 1993.-Vol. 87.-P. 1816-1826.

167. Griendling K.K., Miniere C.A., Ollerenshav J.D. Alexander R.W. Angiotensin II stimulates NADH and NADPH oxidase activity in cultured vascular smooth muscle cells. //Circ Res.- 1994.-Vol. 74.-P. 1141-1148.

168. Guy J.L., Lambert D.W., Warner F.J., Hooper N.M., Turner A.J. Membrane-associated zinc peptidase families: comparing ACE and ACE2 // Biochim Biophys Acta. 2005. - Vol. 1751, N 1. - P. 2-8.

169. Gunthrie G.Jr. Angiotensin receptors: Physiology and pharmacology. // Clin. Cardiol. 1995. - Vol. 18. - P. 29-34.

170. Halliwell В., Gutteridge J.M., Cross C.E. Free radicals, antioxidants and human disease: Where are we now? // J. Lab. Clin. Med. 1992. - Vol. 119. - P. 598-620.

171. Hamidon B.B., Sapiah S., Nawawi H., Raymond A.A. The prognostic value of C-reactive protein (CRP) levels in patients with acute ischaemic stroke. // Med. J. Malaysia. 2004 - Vol. 59, N 5. - P. 631-637.

172. Henderson L.M., Chemppell J.B. NADF oxydase of neutrophils. // Biochim Biophys. Acta. 1996. - Vol. 1273. - P. 87-107.

173. Herman K., Schaechtelin G., Marin-Grez M. Kinins in cerebrospinal fluid: Reduced concentration in spontaneously hypertensive rats. // Experiential. 1986 - Vol. 42. - N 11-12.-P. 1242-1244.

174. Hossman K.A. Viability thresholds and the penumbra of focal ischemia // Ann Neurol. 1994. - Vol. 36, N 4. - P. 557-565.

175. Hooper N.M., Turner A.J. Phosphatidylinositol-glycan-tailed membrane proteins: the biochemistry of glycolipid anchors. // Trans. Biochem. Soc. 1989. -Vol. 17.-P. 660-661.

176. Hooper N.M. Angiotensin-converting enzyme implications from molecular biology for its physiological function. // Int. J. Biochem. 1991. - Vol. 23. - N. 7-8.-P. 641-647.

177. Hooper N.M., Turner A.J. An ACE structure. // Nat Struct Biol. 2003. -Vol. 10, N3. P. 155-157.

178. Hubert C., Houot A., Corvol P. et al. Structure of angiotensin-converting enzyme//J. Biol. Chem.-1991.- Vol.226.- P. 15377-15383.

179. Inflammation and Stroke (Feuerstein, G.Z., ed.) (2001) in Progress in Inflammation Research (Parham, M.J., ser. ed.), Birkhauser Verlag, Basel-Boston-Berlin, 356 p.).

180. Ito H., Takemori K., Suzuki T. Role of angiotensin II type 1 receptor in the leucocytes and endothelial cells of brain microvessels in the pathogenesis of hypertensive cerebral injury. //J Hypertension. 2001. - Vol. 19. - P. 591-597.

181. Jonson M.L., Billiar T.R. Roles of nitric oxide in surgical infection and sepsis. // World J. Surg. 1998. - Vol. 22. - P. 186-197.

182. Kakinuma Y., Hama H., Sugiyama F. et al. Anti-apoptotic action of angiotensin fragments to neuronal cells from angiotensinogen knock-out mice. // Neurosci Lett. 1997. - Vol. 232, N 3. - P. 167-170.

183. Kambayashi Y, Bardhan S, Takahashi K, Tsuzuki S, Inui H, Hamakubo T, Inagami T. Molecular cloning of a novel angiotensin II receptor isoform involved in phosphotyrosine phosphatase inhibition. // J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268. -P. 24543-24546.

184. Kamii H., Mikawa S., Murakami K. et al. Effects of nitric oxide synthase inhibition on brain infarction in SOD-1-transgenic mice following transient focal cerebral ischemia.//Cereb. Blood Flow Metab. 1996. - Vol. 16.-P. 1153-1157.

185. Kario K., Kanai N., Saito K. et al. Ischemic stroke and the gene for angiotensin converting enzyme in Japanesey Hypertensive. // Circulation. -1996. -Vol. 93.-P. 1630-1633.

186. Kase R., Sekine R., Katayama Т., Takagi H., Hazato T. Hydrolysis of neo-kyotorphin (Thr-Ser-Lys-Tyr-Arg) and Met. enkephalin-Arg6-Phe7 by angiotensin-converting enzyme from monkey brain // Biochem. Pharmacol. 1986. - Vol. 35. - P. 4499-4503.

187. Kato H., Kogure K. Biochemical and molecular characteristics of the brain with developing cerebral infarction. Cell mol. neurobiol. - 1999. - Vol. 19. - P. 93-108.

188. Kavanaugh W.M., Williams L.T. An alternative to SH2 domains for binding tyrosine-phosphorylated proteins // Sciens.- 1994.-Vol. 266.- P. 1862-1865.

189. Keilhoff G. Foreword basic research on nitric oxide (NO). // Cell Mol. Biol. (Noisy-le-grand). 2005. - Vol. 51. - N 3. - P. 245.

190. Kinouchi H., Kamii H., Mikawa S., Epstein C.J., Yoshimoto Т., Chan P.H. Role of superoxide dismutase in ischemic brain injury: a study using SOD-1 transgenic mice // Cell Mol Neurobiol. 1998. - Vol. 18, N 6. - P. 609-620.

191. Klahr A.R., Morrissey. Angiotensin II and gene expression in the kidney // Am. J. Kidney Dis. 1998.-Vol. 31. N l.-p 171-176.

192. Kloner R.A., Bolli R., Marban E., Reinlieb L., Braunwald E. Medical and cellular implications of stunning, hibernation, and preconditioning: an NHLBI workshop // Circulation. 1998. -N 97. P. 1848-1867.

193. Kontos H.A. Vaskular Endotelium. Physiological Basis of Clinical Problems. Series A: Life science. Eds. J.D. Catravas et al. New York, London 1991.-Vol. 208, P. 47.

194. Lansillo J.J., Stevens J., Dazarattu Y., Yotsumoto H., Fanburg B.L. Angiotensin converting enzyme from human tissues, physiochemical, catalytic and immunological properties // J. Biol. Chem. - 1985. - Vol. 260. - N. 28. - P. 14938-14944.

195. Laursen J.B., Rajagopolan S., Galis Z. et al. Role of superoxide in angiotensin II-induced but not catecholamine-induced hypertension. // Circulation. 1997.-95:58-593.

196. Lippoldt A., Paul M., Fuxe K., Ganten D. The brein renin-angiotensin system: Molecular mechanisms of cell to cell interactions. // Clin Exp Hypertens 1995.-Vol. 17.-P. 251-266.

197. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. // Protein measurement with the Folin phenol reagent. // J. Boil. Chem. 1951. - Vol. 193, N 1. - P. 265-275.

198. Lumenta D.B, Plesnila N., Klasner B. et al. Neuroprotective effects of a postischemic treatment with a bradykinin B2 receptor antagonist in a rat model of temporary focal cerebral ischemia. // Brain Res. 2006. - Vol. 1069, N 1. - P. 227-234.

199. Mackenz L., Graham A J., Merilli J.E. The Neurology of NO and OH, The New York Academy of Sciences II- 1994 Vol. 3. - P. 436-446.

200. Maksimovich N.E., Zinchuk V.V., Maslakov D.A. The degree of oxidative stress in the rat brain during ischemia and reperfusion in conditions of correction of the L-arginine-NO system. // Neurosci Behav Physiol. 2006. - Vol. 36, N 4. -P. 373-378.

201. Marc K.S., Davis T.P. Stroke: development, prevention and treatment with peptidase inhibitors. // Peptides. 2000. - Vol. 21, N 12. - P. 1965-1973.

202. Masaru Iwai et al. Possible inhibition of Focal Cerebral Ischemia by Angiotensin II Type 2 Receptor Stimulation. // Circulation. 2004. - Vol. 110. -P. 843-848.

203. Matthews K.W., Mueller-Ortiz S.L., Wetsel R.A. Carboxypeptidase N: a pleiotropic regulator of inflammation. // Mol. Immunol. 2004. - Vol. 40, N 11.-P. 785- 793.

204. Matucci-Cerinic M., Jaffa A., Kahaleh В. M. Angiotensin converting enzyme: an in vitro marker of endothelial injury // J. Lab. Clin. Med. 1992. -Vol. 120-P. 428-433.

205. Moncada S., Palmer R.M., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology. // Pharmacol Rev. 1991. - Vol. 43, N 2. -P. 109-142.

206. Mihara M., Uchiyama M., Fukuzawa K. Thiobarbituric acid value on fresh homogenate of rat as a parameter of lipid peroxidation in aging, CC14 intoxication, and vitamin E deficiency.// Biochem. Med. 1980. - Vol. 23. - P. 302-311.

207. Missler U., Wiesmann M., Friedrich C. et al. S-100 and neurospecific enolase concentrations in blood as indicators of infraction of volume and prognosis in acute ischemic stroke. // Stroke. 1997. - Vol. 28. - P. 1956-1960.

208. Mukoyama M., Nakajima M., Horiuchi M., Sasamura H., Pratt R.E„ Dzau V.J. Expression cloning of type 2 angiotensin II receptor reveals a unique class of seven-transmembrane receptors. // J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268. - P. 24539— 24542.

209. Nakane H., Miller F.J Jr., Faraci F.M., Toyoda K., Heistad D.D. Gene transfer of endothelial nitric oxide synthase reduces angiotensin II-induced endothelial dysfunction // Hypertension. 2000. - Vol. 35, N 2. - P. 595-601.

210. Nishimura Y., Ito Т., Kiyama H. Angiotensin II (ATI) blockade normalizes cerebrovaskular autoregulation and reduces cerebral ischemia in spontaneously hypertensive rats. // Stroke. 2000. - Vol. 31. - N 10. - P. 2478-2485.

211. Olney J.W.E. McGeer, J.W. Olney, P. McGeer (eds.) Neurotoxcity of excitatory aminoacids: Kainic // Acid as tool in Neurobiology. New Jork . 1978. -P. 95-121.

212. Oparil S., Oberman A. Nontraditional cardiovascular risk factors.// Am. J. Med. Sci. 1999. - Vol. 317. - P. 193-207.

213. Padilla N.D., Bleeker W.K., Lubbers Y. et al. Rat C-reactive protein activates the autologous complement system // Immunology. 2003. - Vol. 21. -P. 564-571.

214. Pasceri V., Cheng J.S., Willerson J.T., Yeh E.T. Modulation of C-reactive protein-mediated monocyte chemoattractant protein-1 induction in human endothelial cells by anti-atherosclerosis drugs. // Circulation. 2001. - Vol. 16. -P.1992

215. Pasceri V., Willerson J.T., Yeh E.T. Modulation of vascular inflammation in vitro and in vivo by peroxisome proliferator-activated receptor-gamma activators.// Circulation. 2001. - Vol. 102. - P. 2165-2168.

216. Piechowski-Jozwiak В., Bogousslavsky J. Antihypertensive and lipid lowering treatment in stroke prevention: current state and future. // Acta Neurol Belg. 2005. - Vol. 105, N 2. - P. 57-61.

217. Ping A., Chun Z.X., Xue X.Y. Bradykinin preconditioning induces protective effects against focal cerebral ischemia in rats. // Brain Res. 2005. - Vol. 1059, N 2. - P. 105-112.

218. Quagraine M.O., Tan F., Tamei H., Erdos E.G., Skidgel R.A. Plasmin alters the activity and quaternary structure of human plasma carboxypeptidase N. // Biochem. 2005. - Vol. 388. -P. 81-91

219. Radomski M.W., Palmer R.M., Moncada S. Glucocorticoids inhibit the expression of an inducible, but not constitutive, nitric oxide synthase in vascular endothelial cells. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol. 87. - P. 1004310047.

220. Rallidis L.S„ Vikelis M., Panagiotakos D.B. et al. Inflammatory markers and in-hospital mortality in acute ischaemic stroke. // Atherosclerosis. 2005. -Epub ahead of print.

221. Reams G.P. Angiotensin converting enzyme in renal and cerebral tissue and implications for successful blood pressure management. // Am. J. Cardiol. 1992. -Vol. 69.-P. 59-64.

222. Ravindran J., Shuaib A. High extracellular GABA levels in hippocampus-as a mechanism of neuronal protection in cerebral ischemia in adrenalectomized gerbils // Neurosci Lett 1994. - Vol. 176, N 2. - P. 209-211.

223. Richardson G., Hicks S., О Byrne S. et. al. The ingestion of inorganic nitrate increases gastric S-nitrosothiol levels and inhibits platelet function in humans // Nitric Oxide. 2002. - Vol. 7. - P. 24-26.

224. Rigat В., Hubert C., Corvol P., Soubri Tiret er F. PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene (DCP 1) (dipeptidyl carboxypeptidase 1). // Nucleic Acids Res. 1992. -Vol. 20.-P. 1433.

225. Rigat В., Hubert С., Alhenz-Gelas F. Et al. An I/D polymorphism in the ACE gene according for half the variance of serum enzyme levels // J. Clin. Invest. -1990.-Vol. 86.-P. 1343-1346.

226. Ritter 0., Schuch K., Brede M. et al. AT2 receptor activation regulates myocardial eNOS expression via the calceneurin-NF-AT- pathway. // FASEB J. -2003.-Vol. 17.-P. 283-285.

227. Saavedra J.M., Benicky J., Zhou J. Angiotensin II: multitasking in the brain. // J. Hypertens. Suppl. 2006. - Vol. 24, N l.-P. 131-137.

228. Saito A., Maier C.M., Narasimhan P. et al. Oxidative stress and neuronal death/survival signaling in cerebral ischemia. // Mol. Neurobiol. 2005. - Vol. 31. -P. 105-116.

229. Sierra C, de la Sierra A. Antihypertensive, cardiovascular, and pleiotropic effects of angiotensin-receptor blockers. // Curr Opin Nephrol Hypertens. 2005 Vol. 14, N5.-P. 435-441.

230. Scheinberg P. The biologic basis for the treatment of acute stroke // Neurology. 1991. - Vol. 41. - P. 1867-1873.

231. Schelman W.R., Kurth J.L., Berdeaux R.L. et al. Angiotensin II type-2 (AT(2)) receptor-mediated inhibition of NMD A receptor in neuronal cells. // Mol. Brein. Res. 1997. - Vol. 48. - P. 197-205.

232. Schild L., Reiser G. Oxidative stress is involved in the permeabilization of the inner membrane of brain mitochondria exposed to hypoxia/reoxygenation and low micromolar Ca2+. // FEBS J. 2005. - Vol. 272, N 14. - P. 3593-3601.

233. Schinini-Kerth V.B. Vascular biosynthesis of nitric oxide: effect hemostasis and fifrynolisis.// Transfiis. Clin. Biol. 1999. - Vol. 6. - P. 353-363.

234. Schulz E., Tsilimingas N., Rinze R. et. Al. Functional and biochemical analysis of endothelial disfunction and NO/cGMP signaling in human blood vessels with and without nitroglycerin pretreatment // Circulation. 2002. - Vol. 105.-P. 1170-1175.

235. Schulz R., Heusch G. Angiotensin II type 1 receptors in cerebral ischaemia-reperfusion: initiation of inflammation. // J. Hypertens Suppl. 2006. - Vol. 24. N l.-P. 123-129.

236. Sean P. Didion, Frank M. Faraci Angiotensin II Produces Superoxide-Mediated Impairment of Endothelial Function in Cerebral Arterioles // Stroke. -2003.-Vol. 34.-P. 2038

237. Skeggs L.T., Kahn J.R., Schumway N.P. The preparatia and function of hypertensin converting enzyme . // J. Exp. Med. 1956. - Vol. 103. - P. 295-299.

238. Skidgel R. A., Jonson A. R., Erdos E. G. Hydrolysis of opioid hexapeptides by carboxipeptidase N in cell membranes. // Biochim. Pharmacol., 1984. - Vol. 37, N21.-P. 3471-3478.

239. Skidgel R.A., Erdos E.G. Angiotensin converting enzyme (ACE) and neprilysin hydrolyze neuropeptides: a brief history, the beginning and follow-ups to early studies // Peptides. 2004. Vol. 25, N. 3. - P. 521-525.

240. Snyder S.H., Bredt D.S. Biological roles of nitric oxide // Sci. Am. -1992. -Vol. 3. P. 286-292.

241. Star R.A. Southwestern internal medicine conference: Nitric Oxide // Am. J. Med. Sci. 1993. - Vol. 306. - P. 348-358.

242. Stolarek R., Kulf P. Kurmanowska Z., Nowak D. Effect of various agonists on nitric oxide generation by human polymorphonuclear leucocytes. // Int. Clin. Lab. Res. 1998. - Vol. 28. - P. 104-109.

243. Sugawara T, Fujimura M, Noshita N. et al. Neuronal death/survival signaling pathways in cerebral ischemia. // NeuroRx. 2004. Vol. 1, N l.-P. 1725.

244. Suzuki Y., Ruiz-Ortega M., Lorenzo 0. et al. // Int. J. Biochem. Cell Bioll. Inflammation and angiotensin II. 2003. - Vol. 35. - P. 881 - 890.

245. Tani M. Angiotensin converting enzyme in human brain discrete localization and biochemical properties. // J Heart J. 1991. - Nol. 32, N. 2. - P. 189-201.

246. Thomas Walther et al. Ischemic injury in experimental stroke depends on angiotensin II // The FASEB Journal. 2002. - Vol. 16. - P. 169-176.

247. Tiret L., Rigat В., Visvikis S. et al. Evidence from combined segregation and lincade analyses that a variant of the angiotensin 1-converting enzyme (ACE) gene controls plasma ACE levels. // Am J Human Genet. 1992. - Vol. 51. - P. 197-205.

248. Tuncer N., Tuglular S., Kilic G., Sazci A., Us O., Kara I. Evaluation of the angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism and the risk of ischaemic stroke. // J Clin Neurosci. 2006. - V. 13, N 2. - P. 224-227.

249. Uchiyama M., Mihara M. Determination of malonaldehyde precursor in tissues by thiobarbituric acid test. // Analyt. Biochem. -1978, v. 86. - P. 271278.

250. Ueda S., Weir C.J., Inglis G.C. et al. Lack of association between angiotensin converting enzyme gene insert/deletion polymorphism and stroke. // J. Hypertens.- 1995.-Vol. 13.-P. 1597-1601.

251. Unger T. The role of the renin-angiotensin system in the development of cardiovascular disease. // Am J Cardiol. 2002. - Vol. 89. - P. 3-9.

252. Unterberg A., Wahl M., Baethmann A. Abstr Kinin84 Savannah International Congress 1984; P. 143.

253. Wang X., Yang H., Raizada M.K. Angiotensin II increases vesicular trafficking in brain neurons. // Hipertension. 2001. - Vol. 37. - P. 677-682.

254. Warner F.J., Lew R.A., Smith A.I., Lambert D.W., Hooper N.M., Turner A.J. Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2), but not ACE, is preferentially

255. Suzuki Y., Ruiz-Ortega M., Lorenzo O. et al. // Int. J. Biochem. Cell Bioll. Inflammation and angiotensin II. 2003. - Vol. 35. - P. 881 - 890.

256. Tani M. Angiotensin converting enzyme in human brain discrete localization and biochemical properties. // J Heart J. 1991. - Nol. 32, N. 2. - P. 189-201.

257. Thomas Walther et al. Ischemic injury in experimental stroke depends on angiotensin II // The FASEB Journal. 2002. - Vol. 16. - P. 169-176.

258. Tiret L., Rigat В., Visvikis S. et al. Evidence from combined segregation and lincade analyses that a variant of the angiotensin 1-converting enzyme (ACE) gene controls plasma ACE levels. // Am J Human Genet. 1992. - Vol. 51. - P. 197-205.

259. Tuncer N., Tuglular S., Kilic G., Sazci A., Us O., Kara I. Evaluation of the angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism and the risk of ischaemic stroke. // J Clin Neurosci. 2006. - V. 13, N 2. - P. 224-227.

260. Uchiyama M., Mihara M. Determination of malonaldehyde precursor in tissues by thiobarbituric acid test. // Analyt. Biochem. -1978, v. 86. - P. 271278.

261. Ueda S., Weir C.J., Inglis G.C. et al. Lack of association between angiotensin converting enzyme gene insert/deletion polymorphism and stroke. // J. Hypertens.- 1995.-Vol. 13.-P. 1597-1601.

262. Unger T. The role of the renin-angiotensin system in the development of cardiovascular disease. // Am J Cardiol. 2002. - Vol. 89. - P. 3-9.

263. Unterberg A., Wahl M., Baethmann A. Abstr Kinin84 Savannah International Congress 1984; P. 143.

264. Wang X., Yang H., Raizada M.K. Angiotensin II increases vesicular trafficking in brain neurons. // Hipertension. 2001. - Vol. 37. - P. 677-682.

265. Watanabe Т., Fujioka Т., Hashimoto M., Nakamura S. Stress and brain angiotensin II receptors. // Crit Rev Neurobiol. 1998. - Vol. 12. - N 4. - P. 305317.

266. Watanabe Y., Ishigame Т., Iwamoto T. et al. Association analyses of polymorphism for the angiotensin converting enzyme gene in patients with cerebral infraction in Japan. J. Hypertens. - 1996. - Vol. 1-14:32.

267. White B.C., Sullivan J.M., Degracia D.J., Oneil B.J. et al. Brain ischemia and reperfusion: molecular mechanism of neuronal injury. J. neurol. sci. - 2000. -Vol. 179.-P. 1-33.

268. Whorton A.R., Young S.L., Data J.L. et al. Mechanism of bradykinin-stimulated prostacyclin synthesis in porcine aortic endothelial cells // Biochem Biophys Acta. 1982. - Vol. 712. - P. 79-87.

269. Wiencken A.E., Casgrande V.A. Endothelial nitric oxide synthetase (eNOS) in astrocytes: another source of nitric oxide in neocortex. // Glia. 1999. -Vol. 26. - P. 280-290.

270. Williams T.A., Hooper N.M., Turner A.J. Characterization of neuronal and endothelial forms of angiotensin converting enzyme in pig brain. // J. Neurochem. 1991.-Vol. 57,N l.-P. 193-199.

271. Yan C., Kim D., Aizawa Т., Berk B.C. Functional Interplay Between Angiotensin II and Nitric Oxide. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 2003. Vol. 23, N 1. - P. 26-36.

272. Yamakodo M. Protective vascular effect of angiotensin receptor blocker (ARB). // Nippon Rinsho. 2000. 2002 C>ct;60(10):2020-7.

273. Yasunari K., Maeda K., Nakamura M., Yoshikawa J. Oxidative stress in leukocytes is a possible link between blood pressure, blood glucose, and C-reacting protein. // Hypertension. 2002 . - Vol. 1; N 39. - P. 777-780.

274. Zausinger S. Bradykinin receptor antagonists in cerebral ischemia and trauma. // IDrugs. 2003. - Vol. 6, N10. - P. 970-975.

275. Zhang Z.J., Chopp M., Zaloga C., Pollock J.S. The temporal profiles of ICAM-1 protein and mRNA expression after transient MCA occlusion in the rat. // Stroke. 1993. - Vol. 24. - P. 2016-2021.

276. Zhang J., Rui Y.C., Yang P.Y., Lu L., Li T.J. C-reactive protein induced expression of adhesion molecules in cultured cerebral microvascular endothelial cells. // Life Sci. 2006. - Epub ahead of print.

277. Zhou J., Pavel J., Macova M. et al. ATI Receptor Blockade Regulates the Local Angiotensin II System in Cerebral Microvessels From Spontaneously Hypertensive Rats. // Stroke. 2006. - Epub ahead of print

278. Zubkov Yu.N., Semenyutin V.B., Lomova I.P., Makevniva L.G. Reperfusion complication development and cerebral intravascular kinins formation in rats model forebrain ischemia//Proc. of 10 th European Congress of Neurosurg.-Berlin, 1995.-P.281.

Информация о работе

Левашова, Ольга Анатольевна
кандидата биологических наук
Пенза, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Активность ферментов обмена регуляторных пептидов и некоторые биохимические показатели у больных ишемическим инсультом и в эксперименте - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы