Влияние трансплантации мезенхимных стволовых клеток на течение экспериментального инсульта у крыс

Павличенко, Наталья Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние трансплантации мезенхимных стволовых клеток на течение экспериментального инсульта у крыс
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Влияние трансплантации мезенхимных стволовых клеток на течение экспериментального инсульта у крыс"

САНКТ-ПЕТЕРБУГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи /

Павличенко Наталья Николаевна

□03462Э30

ВЛИЯНИЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА ТЕЧЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИНСУЛЬТА У

КРЫС

03.00.25 — Гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург — 2008

Работа выполнена на кафедре цитологии и гистологии Санкт-Петербургского Государственного 'Университета, в отделе морфологии Института Экспериментальной медицины РАМН, на базе ООО "Транс-Технологии"

Научный руководитель;

профессор, доктор биологических наук Харазова Александра Давидовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Краснощекова Елена Ивановна

доктор биологических наук Самойлович Марина Платоновиа

Ведущая организация:

Санкт-Петербургский Государственный Университет им. академика И. П. Павлова

минут

на заседании совета Д 212.232.12 но защите докторских и кандидатских диссертаций при Санкт-Петербургском Государственном Университете по адресу: 199034 Санкт-Петербург, Университетская наб. 7/9, СПбГУ, биолого-почвенный факультет, кафедра генетики и селекции, аудитория 1.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. М. Горького Санкт-Петербургского Государственного Университета

Автореферат разослан". 11- " (Р&^ЬалЛ 200| г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

кандидат биологических наук Л. А. Мамон

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Изучение возможности и эффективности применения стволовых клеток в терапии различных заболеваний - одна из наиболее актуальных задач современной биологии и медицины. Клеточные технологии в настоящее время позволяют разрабатывать принципиально новые подходы для лечения ряда патологических состояний и заболеваний, сопровождающихся необратимыми повреждениями тканей и органоз. В качестве агентов для клеточной терапии предлагают использовать эыбрпопальные и фетальпые стволовые клетки, клетки пуповиппой крови, а также стволовые клетки взрослого организма (Викторов И. В. и др., 2002; Borlongau et al., 1998; Park, 2000; Chen J. et al., 2001; Li et al., 2002; Kang et al., 2003; Vogel et al., 2003; Vendrame et al., 2004).

Первоначально исследования проводили на плюрипотентпых эмбриональных стволовых клетках (ЭСК). Однако к тому времени, когда были получены первые липии ЭСК, появились свидетельства существования стволовых клеток (СК) взрослого организма. За последнее десятилетие эти СК были обнаружены даже в тех тканях, в которых, как считалось, пе происходит самообновления и репарации, например, в сердце и головном мозге (Репин В. С., 2001; Паню-шин и др., 2006; Tondreau Т et al., 2004).

Одним из видов СК взрослого организма являются мезенхимные стволовые клетки (МСК). Их основным источником является костный мозг. В настоящее время разработаны и апробированы методики выделения МСК, их дальнейшего культивирования и паращивания in vitro до необходимого количества с сохранением свойств (Малайцев В. В., 2002; Александрова Н. А. и др., 2006; Jaiswal et al, 2000; Ferrari et al., 1998; Pittenger et al, 1999; Sanchez-Ramos et al., 2000; Woodbury et al, 2000; Deng et al., 2001; Woodbury et al., 2002). Это позволяет использовать в клеточной терапии аутологпчные МСК и избежать проблем с иммунной совместимостью трансплантата и реципиента.

Экспериментально доказано, что МСК - это мультипотентные клетки, способные дифференцироваться in vitro в остеогенном, хондорогенном и адипоцитарном направлениях (Фрц-деиштейн и Петракова, 1966; Фридешнтейи и др., 1970; Фридепштейн, 1995; Pittenger et al., 1999).

Позднее была установлена способность МСК дифференцироваться в кардиомиоцитарном и мноцитарном направлениях (Ferrari G et al., 1998; Fukuda К, 2001). В экспериментах с перевязкой коронарной артерии на модели инфаркта миокарда в нашем научном коллективе изучено влияние трансплантации МСК па течение патологического процесса в сердце. Установлено, что введение МСК ускоряло течение воспалительной реакции и повышало васкуляризацию зоны ищемического повреждения (Кругляков и др., 2004).

Одним из самых распространенных заболеваний человека в настоящее время считается ишемическхгй инсульт головного мозга. В большинстве развитых стран он занимает 2-3 место в структуре смертности, и первое место среди причин утраты трудоспособности. Около 10 % больных после инсульта остаются инвалидами. Постинсультные осложнения связаны с необратимой потерей нервной ткани после эпизода инсульта (Гусев Е. И., Скворцова В. И., 2001).

На основании полученных в недавнее время данных о способности МСК дифференцироваться in vitro в нейроны, астроциты и олигодендроциты (Kopen et al, 1999; Woodbury D, et al., 2000; Sanchez-Ramos et al., 2000; Black et at., 2001; Woodbury et al.,"2002;) были предприняты попытки использования МСК для лечения нейродегенеративных заболеваний и повреждений центральной первной системы (Подгорный О. В. и др., 2004; Александрова М. А. и др.. 2004; Корочюга JI. И. и др., 2005; Сухих Г. Е и др., 2007; Li et al, 2001; Lu et al., 2001; Mahmood et al., 2001; Hess et al., 2002; Lindvall et al., 2005, 2006). Однако восстановление утраченного фрагмента мозга посредством дифференцировки в пейроны какого-либо клеточного материала (в том числе и МСК) не удавалось еще никому в мировой практике. При лечении инсульта стоят задачи восстановить кровообращение в ишемнзированной ткани, поддержать жизнеспособность поврежденных нейронов и предотвратить их дальнейшую диффузную гибель, свести к минимуму постинсультные осложнения. Максимально хорошие результаты получают при начале ренерфузионных и терапевтических мероприятий в первые 3-6 часов после начала заболевания (время "терапевтического окна"). Однако на практике не всегда удается в такие сжатые

сроки доставить пациента в клинику, поставить диагноз и начать лечение. Поэтому возможность отложить начало терапии на несколько дней без ущерба для конечного результата -актуальнейшая задача экспериментальной биологии и медицины.

В опытах на животных проведены трансплантации сингенных или ксеногенных МСК как непосредственно в место повреждения головного мозга (Корочкин Л. И., 2004; Онищенко Н. А., 2004; Мшшга, T. et al., 2005; Jin, H. К. et'al., 2002; Modo, M. et al., 2003), так и системно в кровь (Chu, К. et al., 2004; Vendrame, M. 2004; Borlcngan, С. V. et al., 2004). Полученные данные разноречивы. Ксеногенные трансплантаты, введенные непосредственно в мозг, подвержены иммунной реакции отторжения, при введении в кровь клетки могут придти к месту повреждения только после повреждения гематоэнцефалического барьера (ГЭБ). В единичных работах показано, что МСК, введенные в кровоток в день моделирования шпемического инсульта, диф-фузно распределялись в мозге. При этом увеличивалась плотность микроеосудистой сети в пограничной с повреждением зоне, и улучшались результаты поведенческого и неврологического тестирования животных. Однако следует отметать, что в подавляющем большинстве работ была проведена реперфузия пережатого мозгового сосуда, т. е. искусственно восстановлено кровообращение в ишемизированной зоне. Клеточная терапия перманентной ишемии головного мозга, по нашим данным, исследована недостаточно. К настоящему времени не установлено, когда МСК, введенные в венозную кровь, попадают в головной мозг, распределение МСК в мозге, динамика деструктивных и репаративных процессов в нервной ткани на фоне действия введенных МСК, механизмы действия МСК на поврежденную нервную ткань. В связи с этим мы провели комплексный анализ влияния внутривенной трансплантации сингенпых МСК на головной мозг крыс после ишемического инсульта.

Цели и задачи исследования

Целью данной работы являлось изучение влияпия трансплантации сипгенных МСК на головной мозг при экспериментальном ишемическом инсульте у крыс, смоделированном посредством окклюзии средней мозговой артерии (ОСМА).

Для достижения поставленной цели работы были сформулированы следующие экспериментальные задачи:

1. Выделить и охарактеризовать мезенхимные стволовые клетки крысы, выяснить потенции МСК к дифференцировке в нейрональном направлении in vitro и in vivo

2. Изучить морфологические изменения в головном мозге крысы при ишемическом инсульте '

3. Изучить локализацию сингенных донорских МСК в поврежденном мозге при внутривенной трансплантации

4. Изучить морфологические изменения в головном мозге крысы при ишемическом инсульте после внутривенной трансплантации МСК

Основные положения, выносимые на защиту

1. МСК крысы способны к дифференцировке в направлении нейронального ряда in vitro. При локальном введении МСК в интактный головной мозг крысы не выявлено дифферепцпровки трансплантированных клеток в нейроны

2. МСК, введенные внутривенно на четвертый день после операции, имеют тропизм к поврежденной зоне и способны проникать через поврежденный ГЭБ

3. Внутривенное введение МСК ускоряет процессы асептического воспаления и образования рубца

4. Трансплантированные в кровеносное русло МСК стимулируют пролиферацию клеток в субэпендимной зоне латеральных желудочков головного мозга

5. Внутривенная трансплантация МСК оказывает цейропротекторное и ангиогенное воздействие на зону ишемической полутени после окклюзии средней мозговой артерии и способствует уменьшению объема повреждения

Научная новизна работы

Впервые получены данные о дейетзин МСК на клетки головного мозга, не располагающиеся в непосредственной близости к очагу ишемии. Экспериментально показано, что при внутривенном введении МСК менее выражена диффузная гибель клеток мозга в ответ па ишемию.

Зарегистрировано распределение внутривенно введенных МСК в субэпендимной зоне боковых желудочков мозга после ишемического инсульта.

Впервые продемонстрировано ускорение процессов асептического воспаления и образования глиальпого рубца в головном мозге после инсульта и трансплантации МСК в кровоток животного. Впервые выявлено, что после ОСМА в случае введения МСК в кровоток животных наблюдается сохранение структуры хвостатого ядра и сосудистого сплетения, уменьшение степени выраженности расширения бокового желудочка головного мозга.

Теоретическое и практическое значение работы

Теоретическое значение работы состоит в том, что получены повые данные о путях воздействия экзогенных МСК на шпемизированную ткань головного мозга (ускорение процесса воспаления, активация ангиогеиеза, нейропротекторное влияние). Полученные результаты служат развитию современных представлений о миграции и функционировании МСК. С практической точки зрения, результаты работы могут служить основой для разработки нового терапевтического подхода для лечения парушепий мозгового кровообращения с помощью внутривенного введения МСК.

Апробация работы

ГГо теме диссертация опубликовано 6 статей в журналах, реко.мецдованных ВАК, а также в журнале "Brain Research". Основные положения работы доложены п обсуждены на международной конференции общества клеточных терапевтов "International Society for Cellular Therapy" (Vancouver, Canada, 2005), на международной конференции общества клеточных терапевтов "International Society for Cellular Therapy" (Berlin, Germany, 2006), па международной конференции общества клеточных терапевтов "International Society for Cellular Therapy" (Sydney, Australia, 2007), на Британско-Российском совещании "Stem cells: Policy, Research, and Innovations. European Union - Russian FederatioB Perspectives" (Москва, 2007), на Всероссийском симпозиуме "Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии" (Москва, 2007 г.), Всероссийской научной конференции "Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении" (Москва, 2007).

Объём и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения экспериментальных данных, обсуждения результатов, выводов, заключения и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 180 страницах машинописного текста и иллюстрирована 55 рисунками и 3 таблицами.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

Выделение, культивирование и фенотипирование МСК крысы

Костный мозг выделяли из бедерных костей крыс. Для этого в стерильных условиях удаляли эпифизы бедренных костей, диафизы промывали средой культивирования аМЕМ (Hyclone, Новая Зеландия) с 20% сыворотки крови эмбрионов коров (Gibco, США) и 100 мкг/мл пенициллина/стрептомицина (Gibco, США). Полученный смыв помещали в чашки Петри (Sarstedt, Германия). Через 48 часов культуру два раза промывали раствором ФСБ (фосфатно-солевой буфер; 20 мМ фосфатный буфер, рН 7,4) для удаления неадгезивных фор-менпых элементов крови. Далее клетки культивировали при 37°С и 5% СОг> Пересев культуры проводили каждые 7 суток с исходной плотностью 1,27х103 клеток/см2. Для отделения клеток от субстрата использовали раствор трипсина и ЭДТА (Hyclone, Новая Зеландия). Замену питательной среды проводили каждые трое суток.

МСК крыс окрашивали антителами против негативного маркера CD45 (Beckton Dickinson, США) и антителами против позитивных маркеров CD90 и CD108 (Beckton Dickinson, США). Клетки снимали с чашек раствором трипсина и ЭДТА (Hyclone, Новая Зеландия), промывали два раза раствором ФСБ. После отмывки помещали в раствор моноклональных антител, конъюгированных с флуорохромом, в разведении 1:20 и инкубировали в течение часа в темноте. Затем клетки промывали ФСБ два раза и проводили фенотипирование на проточном цитофлуориметре FACSscan (Beckton Dickinson, США), Процедуру проводили после первого, второго и третьего пересева культуры.

Дифференцировка МСК крысы в ортодоксальных направлениях и фенотипирование дифференцированных производных

Дифференцировку МСК вызывали при помощи обработки коктейлями ростовых факторов и морфогенов (Pittenger et al., 1999; Muraglia et al., 2000; Fukuda, 2000). Обработке подвергали монослой МСК. Для остеогенной дифференцировки в стандартную среду культивирования добавляли 10~2 М ,0-глицерофосфата натрия, Ю-8 М дексаметазона и 2x10"'' М аскорбиновой кислоты. Для хондрогенной дифференцировки - 1 нг/мл трансформирующего ростового фактора-3/3 и 2х10~4 М аскорбиновой кислоты. Для индукции адипоцитарной дифференцировки среду культивирования меняли на содержащую 1% сыворотки крови эмбрионов коров, 10~э М инсулина и Ю-7 М дексаметазона. Обработку индукторами проводили в течение 2 недель, в течение этого времени каждые 3 суток половину среды культивирования заменяли на свежую. Морфологические изменения клеток оценивали при помощи микроскопа (Leica, Германия).

Анализ экспрессии маркерных генов в дифференцированных МСК проводили с помощью обратной транскрипции и последующей нолимеразвой цепной реакции (ОТ-ПЦР). Для этого из дифференцированных клеток выделяли тотальную РНК, и при помощи обратной транскрип-тазы и поли-А праймера ревертировали матричную РНК. Затем проводили полимеризацию полученной кДНК со специфическими праймерами и полимеразную цепную реакцию. Продукт реакции анализировала методом электрофореза в агарозном геле. Использовали следующие специфические праймеры: ген фибронектина в качестве маркера недифференцированных МСК, гены остеопонтина и остеокальцина — маркеры остеогенной дифференцировки, ген леп-тина, ген родственного комплементу белка адипоцитов (adipocyte complement-related protein) и ген липид-связывающего белка адипоцитов (adipocyte lipid-binding protein) — маркеры адипо-генной дифференцировки, ген коллагена 1 — маркер хрящевой дифференцировки. Праймеры подбирали по последовательностям мРНК, опубликованным па сайте Национального института Здоровья (США).

Дифференцировка МСК крысы в нейрональном направлении

Дифференцировке в нейрональном направлении in vitro подвергали МСК после второго пересева культуры. Для индукции дифференцировки использовали ростовой фактор нейротрофии-3 (NT3). МСК наращивали до плотного монослоя. Затем в стандартную среду культивирования добавляли нейротрофин-3 так, чтобы его финальная концентрация составила 2,5х10~6 г/мл. Обработку индуктором дифференцировки продолжали 2 нед. При этом половину среды культивирования меняли каждые 3 сут. Фенотипирование полученных производных было проведено путем окрашивания клеток антителами против белковых маркеров нейронов:

специфического ядерного белка нейронов (NeuN) (Chemicon, США), нейрофибриллярного белка отростков (Tau) (Chemicon, США), миелии-олнгодендроцнт специфического белка (MOSP) (Chemicon, США), глнального фибриллярного кислого белка (GFAP) (Chemicon, США). Для иммупогистохимических исследований клетки на чашках промывали 2 раза раствором ФСБ, обрабатывали 0,1% раствором сапонина в течение 1 ч, затем добавляли раствор моноклопаль-ных антител (разведение 1:100). Далее клетки промывали 2 раза ФСБ и на 30 мин переносили в раствор биотиниляровапцых вторичных антител. После очередной промывки ФСБ клетки обрабатывали раствором стрептавццин — перокепдазы в течение 15 мин, еще раз промывали ФСБ и папосшш па клетки раствор 3, З-диамшгобешидина (DAB) (Sigma, США). Течеиие реакции контролировали визуально с помощью микроскопа (Leica, Германия). Окрашенные препараты заключали в пермаунт по стандартной методике. Морфологические изменения оценивали визуально с помощью микроскопа. Окрашивание МСК крыс флуорохромом РКН26

Для окрашивания флуорохромом РКН26 использовали МСК крыс после второго пересева культуры. Их выращивали до плотного монослоя, далее в среду культивирования добавляли РКН26 (Moieculai Probes, США) в концентрации 1 мкг/мл на 4S ч. Затем клетки промывали раствором ФСБ и культивировали в среде без РКН пе менее 4 ч. Окрашенные МСК снимали с чашек раствором трипсина и ЭДТА, центрифугировали при 450g в течение 10 мин. Полу-ченпый осадок дважды промывали ФСБ и суспендировала в питательной среде без сыворотки (аМЕМ +100 мкг/мл пенициллина/стрептомицина) с финальной концентрацией 5х10б клеток в 100 мкл. Эффективность окрашивания МСК оценивали с помощью флуоресцентного микроскопа Axioscope (Zeiss, Германия).

Введение МСК крысы в мозг интактным животным

Все хирургические процедуры проводили под кетаминовым наркозом (70 мг/кг). На голове крысы разрезали кожу и при помощи бормашины делали в черепе отверстие примерно 1 мм в диаметре. Вскрывали твердую мозговую оболочку. Через полученное отверстие с помощью ипсулинового шприца вводили в ткань мозга 200000 МСК в 20 мкл питательной среды аМЕМ. Операционную рану упитали.

Моделирование экспериментального ишемического инсульта головного мозга

Ишемический инсульт у подопытных животных был смоделирован посредством окклюзии средней мозговой артерии (ОСМА). Во время операции и до выхода из наркоза температура тела животных поддерживалась на уровне 37°С. Голова животного с помощью ушных кернов и зубного зажима фиксировалась в стереотакснческом аппарате. С левой стороны от латерального края глазницы до ушной раковины разрезали кожу, расширяли поверхность раны. При этом обнажалось овальное отверстие (foramen ovale) тройничного нерва. С помощью бормаши-цы под контролем операционного микроскопа это отверстие расширяли до размеров примерно 4x4 мм. Вскрывалась твердая мозговая оболочка. Тонким стальным крючком, закрепленным в микроманипуляторе, слегка приподнимали среднюю мозговую артерию. Производили ее электрокоагуляцию на протяжении 2-3 мм. Операционную рану ушивали. Для работы было создано три группы экспериментальных животных:

1. Группа ложнооперированных животных, у которых проводилась вся вышеизложенная процедура по моделированию инсульта за исключением электрокоагуляцин средней мозговой артерии. Количество животных - 13 шт.

2. Группа контрольных животных, у которых моделировали инсульт и через трое суток в хвостовую вену вводили 100 мкл питательной среды аМЕМ. Количество животных -59 шт.

3. Группа животных клеточной терапии, у которых моделировали инсульт и через трое суток проводили трансплантацию МСК (предварительно окрашенных флуорохромом РКН) в 100 мкл питательной среды аМЕМ. Введение МСК осуществлялось в хвостовую вену. Количество животных - 41 шт.

Ложнооперированных животных выводили из опыта через 42 сут после ОСМА, животных контрольной группы — через 1, 2, 3, 5, 7, 21, 35 и 42 сут, животных in группы клеточной терапии — через 7, 21, 35 и 42 сут после ОСМА.

Фиксация материала

Животные подвергались перфузии через левый желудочек сердца 4% раствором пара-формальдегида в ФСБ (рН=7,2). После декапитации извлекали головной мозг и вырезали сегмент, включающий видимую зону повреждения и интактные краевые зовы. Вырезанный блок разрезали пополам по зоне повреждения: половину блока фиксировали по стандартной методике в параформальдегиде, другую половину использовали для определения флуоресцентно меченых МСК. Для этого образцы мозга помещали в раствор криопротектора - сахарозы на 1 сут. Затем кусочки ткани охлаждали в парах азота в течение 10 с, погружали в жидкий азот на 1 ч и помещали в холодильную камеру с температурой -70°С.

Выявление флуоресцентно меченых МСК

Детекцию меченых флуорохромом РКН 26 МСК проводили с помощью флуоресцентного мдкроскопа (Leica, Германия) на срезах головного мозга толщиной 7 мкм, изготовленных на криостатном микротоме Bright (Bright, Великобритания).

Морфологический анализ

Парафиновые срезы головного мозга толщиной 7 мкм изготавливали по общепринятой методике, окрашивали толуидиновым синим по методу Ниссля. Структуры мозга идентифицировали по атласу "The Rat Brain in stereotaxic coordinates" (Paxinos, Watson, 1998). Определяли некротический очаг в левом полушарии головного мозга, поврежденные структуры, оценивали состояние пограничной и неповрежденной зон.

Иммуногистохимические методы исследования срезов головного мозга

Иммупогистохимнчески изучали Ki-67 (маркер пролиферирующих клеток), NeuN, GFAP и фактор фон Виллебраита (vWF). После депарафипизировалия и гидратации срезов, проведенных по стандартной методике, срезы инкубировали с первичными антителами во влажных камерах. Время инкубации подбирали индивидуально для каждого антптела. При необходимости перед инкубацией с первичными антителами проводили блокировку, а также процедуру теплового демаскирования антигена. Блокировку проводили 5% БСА (Serva, США) на ФБС в течение 20 минут или 12% сыворотки крови свиней (Dako, Дания) в течение 10 минут при комнатной температуре. Для демаскирования антигена применяли инкубацию срезов в цит-ратном буфере (рН=6,0) с 0,01% Tween 20 на водяной бане при температуре 95"С в течение 25 минут. Для выявления первичных антител к Ki67, GFAP и NeuN был использован 2-х ступенчатый стрептавидин-биотиновый метод, реализованный в наборе LSAB 11+ (Dako, Дания). Инкубированные с первичными антителами срезы промывали в ФСБ три раза в течение 10 минут, наносили необходимое количество вторичных антител и инкубировали с ними во влажных камерах при комнатной температуре. Вторичные антитела смывали, срезы промывали в ФСБ. Затем наносили конъюгат стрептавидина и пероксидазы, оставляли во влажных камерах при комнатной температуре. По истечении определенного срока конъюгат смывали, срезы промывали ФСБ. Затем на срезы наносили рабочий раствор DAB+ (Dako). Образование окрашенного продукта гистохимической реакция контролировали под микроскопом и останавливали промывкой в дистиллированной воде до появления фопа. Один из трех срезов на стекле подкрашивали толуидиновым синим по Нисслю или астровым синим в. течение 1-2 минут при комнатной температуре, промывали дистиллированной водой в течение 1-2 минут. Препараты дифференцировали в 96" этаноле, обезвоживали в двух порциях абсолютного этанола, просветляли в трех порциях орто-ксилола (по 2-3 минуты в каждом реагенте), Затем заключали в пермаунт или канадский бальзам и исследовали под микроскопом. Для выявления первичных антител к vWF использовали набор Envision+ (Dako, Дания). Инкубированные с первичными антителами срезы промывали в ФСБ три раза в течение 10 минут, затем наносили необходимое количество раствора из набора Envisiori+ и инкубировали с ними во влажных камерах при комнатной температуре в течение 30 минут. По истечении этого срока раствор смывали, срезы промывали ФСБ. После промывки на срезы наносили рабочий ралтвор DAB+. Образование окрашенного продукта гистохимической реакции, подкрашивание одного из трех срезов и заключение препаратов проводили по описанной выше схеме.

Морфометрическая оценка объема поврежденной ткани головного мозга и количества сосудов

Из блоков ткапи мозга после парафиновой фиксации 6 животных из каждой группы, декапитированных через 6 кед после ОСМА, изготавливали серийные срезы толщиной 7 мкы. Изображение целого среза получали с,использовапием сханлера Epson. Площади нпсилате-ралыюго (Shiic) и контралатсрального (Эконтр) полушарий при помощи программы PhotoM определяли па каждом 15 срезе. Объем повреждения ткани мозга (Уповр) расчитывали по формуле: Уповр = £„ (Эконтр - Snnc) х L,

где En - сумма площадей повреждения ткани мозга па п срезах, L — толщина 15 срезов, которая равпа 105 мкм.

Подсчет сосудов проводили на срезах, окрашенных антителами против vVVF, в пограничной с повреждением зоне, в симметричных по отношению к ней участках неповрежденного полушария и в удалепных от повреждения зонах М1-М2 обоих полушарий через 6 педель после ОСМА. В каждом из этих участков случайным образом выбирали 10 полей зреаия под микроскопом Leica (Leica, Германия) при увеличении 40х и изготавливали фотографии с использованием цифровой камеры DFC-100 (Leica, Германия). При помощи программы PhotoM подсчитывали количество сосудов в каждом поле зрения. Все полученные количественные дан-иые были обработаны в программе Statistica (Stat Soft Inc). Тестирование животных в водном лабиринте Морриса

Оценивали способность животного находить скрытую под водой платформу, основываясь на внешних ориентирах. Использовали бассейн с жесткими пластиковыми стенками диаметром 145 см и глубиной 50 см, который располагался на поддоне па высоте 50 см от пола в центре помещении. Ориентиры для животных (прямоугольники синего и зеленого цвета) были размещены на стенах в случайном порядке и постоянно находились на своих местах на протяжении всего периода обучения всех групп животных. Помещение освещалось рассеянно 2 лампами по 250 Вт. Бассейн заполнялся водой (t = 24±1°С) до высоты 25 см. До проведения тестирования в течение 6 дней каждое животное помещали в бассейн и фиксировали время поиска платформы. Если животное за 120 с не обнаруживало платформу, то экспериментатор сам помещал туда крысу. Животное оставляли на платформе 30 с. Ежедневно каждое животное выполняло 4 попытки из разных стартовых точек. Наблюдение траектории плавания производили с помощью ввдеоустановки. Тестирование опытных животных в водном лабиринте начинали через 2 и 5 недель после ОСМА и проводили в течение 6 дней.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Характеристика культур МСК крыс

Анализ популяции культивированных in vitro МСК, выделенпых иэ стромы костного мозга крыс, после второго пассажа показал, что она состояла из: 3 - 5% CD45+ - клеток (клеток гематопоэтического ряда), 96 - 97% CD90+ - клеток (собственно МСК) и 15% CD106+ - клеток. Общепринятым фенотипом МСК для человека и мыши является CD34-, CD45-, CD44+, CD90+, CD105+, CD106+ (Guo et al., 2001). Таким образом, наши данные по наличию поверхностных маркеров соответствуют описанным ранее в литературе. Дифференцировка МСК in vitro в ортодоксальных и нейрональном направлениях, фенотипирование полученных производных

При дифференцировке МСК в остеогеяжш, аднпоцитарлом и хоццрогенном направлениях отмечали изменения их морфологии: наблюдали лппидиые капли в клетках (при адипоци-тарной дифференцировке), поля минерализации па поверхности мопослоя клеток (остеогенная дифференцировка), формирование в культуре шарообразного скопления клеток (хондроцитар-иая дифференцировка). Экспрессия маркерных генов при дифференцировке в этих направлениях усиливалась (лептияа, ALBP, ACRP при адипогенной дифференцировке, коллагена II прихондорогенной, остеопоггогаа и остеокальцинаприостеогенной). В недифференцированных МСК мРНК фибронектина экспресснровалась на высоком уровне. Этот уровень значительно снижался при индукции дифференцировки в любом направлении. Полученные данные свидетельствуют о том, что культивируемые клетки соответствовали общепризнанным критериям для идентификации МСК. Для оценки дифференцировка МСК в нейрональном направлении

использовали антитела к маркерным белкам клеток нервной ткани: нейронов (Таи - белок отростков нейронов, ассоциированных с микротрубочками, NeuN - ядерный белок нейронов) и глиальных клеток (MOSP - специфический белок мембран олигодендроцитов, GFAP - главный белок цитоскелета клеточных отростков астроглии). Прп добавлении в среду культивирования индуктора пейрональной дифференцировки NT3 через 2 недели воздействия МСК окрашиваг лись антителами на MOSP, NeuN и Таи, но не наблюдали реакции с антителами на GFAP. Таким образом, были выявлены белки нейронов и олигодендроцитов, но не астроглиальных клеток.

Локальное введение МСК в интактный мозг крыс

При введении как среды культивирования (контрольная группа), так и МСК в интактный мозг наблюдали повреждепные клетки, расположенные по треку иглы в неокортексе и в гиппокампе а также глиальную реакцию в коре илсилатерального полушария.

У всех животных, которым были введены МСК, по границе нанесенного иглой повреждения наблюдали большое количество мелких сосудов, чего не отмечали у животных группы контроля. Известно, что МСК обладают ангиогенным эффектом (Wu et al., 2007). Усиление апгиогенеза потенциально может оказывать положительный эффект на ограниченное восстановление нервной ткани после инсульта.

У двух животных, которым были введены МСК, наблюдали крупное скопление, состоящее из нескольких видов морфологически отличающихся друг от друга клеток. Клетки этого скопления не окрашивались антителами против NeuN, то есть не были нейронами. Хотя к настоящему моменту описаны выживание и даже дифференцнровка в нейрональном направлении локально введенных в интактиый мозг МСК в нейроны (Azizi et al, 1998; Munoz-Elias G et al, 2004; Irons H. et al, 2004; J. Deng et al., 2006), существует ряд работ, в которых показано, что трансплантированные клетки гибнут (Barker R. A. et ai, 2004; Coyne T. M. et al., 2006). В нашей работе мы не наблюдали дифференцировки МСК в интактном мозге взрослых животных, однако и массовой гибели клеток, сопровождаемой воспалением и глиозом, также не отмечали. Не наблюдали и появления злокачественных новообразований.

Выявляемая гибель нейронов, прилежащих к месту введения клеток и глиальная реакция по треку иглы свидетельствует о том, что этот способ трансплантации МСК является операцией, травмирующей головной мозг. Для дальнейшей работы нами было выбрано внутривенное введение МСК. Известно, что МСК обладают тропизмом к костному мозгу. Ранее в экспериментах мы показали, что МСК, введенные внутривенно, через 3 суток локализуются в поврежденной зоне сердечной мышцы (Кругляков и др., 2004). Таким образом, как полученные нами, так и литературные данные подтверждают гипотезу о том, что МСК осуществляют направленную миграцию к очагу тканевого воспаления. Известно, что МСК характеризуются высоким уровнем экспрессии CXCR4 - рецептора к SDF-1 (stromal cell derived factor) (Bhakta S., Hong P., Кос О., 2006). Это вещество синтезируется клетками стромы костного мозга. Концентрация данного фактора значительно повышается в поврежденных участках ткани, что может объяснять возможный механизм миграции клеток в зону тканевого воспаления. Распределение МСК в головном мозге крыс, перенесших операцию ОСМА

Меченые флуорохромом РКН26 МСК появлялись в головном мозге на 3 сутки после внут-рнвенного введения. Флуоресцирующие клетки были обнаружены в основном вокруг сосудов как коры большого мозга, так и хвостатого ядра. На срезе вокруг одного сосуда наблюдали от 1 до 5 флуоресцирующих клеток. Небольшое количество флуоресцирующих клеток обнаружили в субэпендимной зоне боковых желудочков мозга как илсилатерального, так и контралатераль-ного полушарий. В белом веществе наружной капсулы и мозолистого тела флуоресцирующие клетки выявлены не были. Описаниое распределение МСК сохранялось в течение 6 недель наблюдения без заметных изменений.

Как известно, ОСМА нарушает целостность гематоэнцефалического барьера. Максимальная проницаемость ГЭБ после ишемического инсульта у крыс наблюдается через 48 часов после операции ОСМА (Chen СН, 2006). В наших опытах у животных из группы контроля наблюдали появление периваскулярных муфт через 3 суток после ОСМА. Это косвенно ' :>.•-тельствует о том, что в это время ГЭВ раскрыт. На основании этого мы перенесли внутривенетю трансплантацию МСК на 3 сутки после ОСМА.

Сравнительная морфологическая характеристика головного мозга после ОСМА в группах контроля и клеточной терапии

Морфологическое исследование головного мозга показало, что уже через 1 сутки после ОСМА в большей части неокортекса (первичная и вторичная слуховая и соматосенсорная кора, инсулярная кора), наружной капсуле и Головке хвостатого ядра развивался обширный некроз. На вторые сутки начиналась инфильтрация очага некроза клетками воспаления, на третьи сутки вокруг сосудов пограничной области появлялись периваскулярные муфты, состоящие из лейкоцитов. На 5 сутки на границах некротического очага был хорошо выражен лейкоцитарный вал. К 1 неделе наблюдения появлялись первые признаки отличий в динамике постипсультных процессов в мозге опытных животных, которым трансплантировали МСК. У них очищение от тканевого детрита отмечалось по всей зоне некроза, в сравнении с мозгом животных группы контроля, у которых этот процесс еще только начипался.

После ОСМА в субэпендимной зоне боковых желудочков головного мозга маркер клеточной пролиферации (белок Ю67) выявлял иммунореактпвные клетки. Число и распространенность пролиферирующях клеток значительно возрастали у опытных животных после трансплантации МСК, что свидетельствует об активации процессов пролиферации введенными стволовыми клетками. .Активация деления клеток субэпевдимной зоны после ОСМА была выявлена ранее (Arvidsson et al., 2002; Darsalia et al., 2005; Thored et al., 2006). Более того, была продемонстрирована возможность миграции вповь образованных клеток к области повреждения. Эти клетки окрашивались антителами против нейрональных маркеров (в частности, NeuN), что свидетельствовало об ах дифференцировке в нейрональном направлении.

В наших исследованиях мы не обнаружили в делящихся клетках субпепдимной зоны белка NeuN. Известно, что многие прогениторные клетки во время деления не экспрессируют белков, характерных для зрелых дифференцированных клеток. Маркерные белки, свойственные определенному типу клеток начинают синтезироваться позже, когда процессы пролиферации уже завершены. Возможно, в нашем случае делящиеся клетки еще пе экспрессироваля маркерные белки зрелых нейронов. Arvidsson и коллеги (Arvidsson A. et al., 2002) и Jin я коллеги (Jin К. et al., 2001) показали, что делящиеся клетки не реагируют с антителами к NeuN, что согласуется с нашими данными, по экспрессируют doublecortin, белок прогениторпых клеток нейрональной лшши. Мы полагаем, что пролиферацию клеток в субэпевдимной зоне и их миграцию к поврежденпой области мозга можно расценивать как ограниченную репарацию нервной ткана. Увеличение количества пролиферирующих клеток повышает эффективность этого процесса.

Через 2 нед в мозге животных группы контроля очищение ткани мозга от поврежденных фрагментов еще продолжалось. У животных из группы клеточной терапии процессы асептического воспалепия и очищения тканей мозга от погибших меток были уже полностью завершены. Таким образом, трансплантация МСК через 3 сут после эпизода инсульта значительно ускорила течение воспалительной реакции. Известно, что МСК in vitro способны секретнровать набор факторов, стимулирующих (IL-1, TNF - tumor necrosis factor), регулирующих (IL-11) и ии-гибирующих (bTGF - transforming growth factor) воспалительные процессы (Majumdar M. et al., 1998; Deans R. et al., 2000). Мы полагаем, что и in vivo МСК принимают участие в регуляции процессов воспалепия посредством выделения вышеназванных агентов осуществляя паракрин-ную функцию.

Внутривенное введение МСК ускоряло также образование глиального рубца. В группе клеточной терапии на этом сроке между некротическим участком и пограничной с ним зоной наблюдали клетки астроглии, расположенные в 1 - 3 ряда. Этот начавший образовываться рубец окрашивался антителами против .маркера активированной астроглии GFAP. Известно, что глиальный рубец препятствует регенерации. Но, кроме того, его формирование способствует стабилизации ткани мозга после инсульта: митотически делящиеся астроциты окружают поврежденную зону и вновь образованные сосуды, способствуя восстановлению гематоэнцефа-лического барьера, предупреждая сильную воспалительную реакцию и ограничивая клеточную дегенерацию (Silver, Miller, 2004).

Через 4 нед у животных как контрольной, так и опытной групп в ряде случаев развились постипсультные осложнения: расширение желудочков и гидроцефалия. Внутривенное введение МСК после ОСМА снижало выраженность постинсультных осложнений: уменьшался размер

ликворо-глиальных кист и было менее выражено расширение просвета бокового желудочка мозга в поврежденном полушарии. Увеличение объема желудочка может оказывать негативное воздействие на течение инсульта, механическое сдавливание прилежащих к желудочку тканей вызывает гибель нейронов. Причиной гидроцефалии является дисбаланс между выработкой ликвора и его резорбцией. В нашей работе мы отметшш, что после ОСМА у крыс происходит нарушение морфологической структуры сосудистого сплетения. Известно, что ишемии головного мозга оказывает негативное влияние на сосудистое сплетение, основной функцией которого является выработка ликвора ( Oldendorf, W. H., 1972). Именно его повреждение вызывает гидроцефалию. У животных да группы клеточной терапии сосудистое сплетение было повреждено меньше, в большинстве случаев оно сохраняло близкую к нормальной морфологию. Возможно, именно сохранением структуры сосудистого сплетения можно объяснить меньшее проявление гидроцефалии у животных из этой группы.

Иммуногистохимический анализ с использованием антител к GFAP показал, что через 6 нед после ОСМА в мозге животных как из группы контроля, так и клеточной терапии наблюдался сформированный глво - соединительнотканный рубец. В группе контроля мощный глиоз затрагивал пограничную зону, неокортекс и хвостатое ядро. В группе клеточной терапии количество астроцитов было существенно меньше, рубец пе деформировал ткань. Краткая морфологическая характеристика некротического очага и пограничных с ним зон приведена в таб. 1.

Мы полагаем, что трансплантированные МСК оказывают непосредственное нейропро-текторное действие на нервную ткань. В нашей работе в группе клеточной терапии как на ранних стадиях развития инсульта, так и через б недель после ОСМА, практически все нейроны в граничащей с повреждением зоне головного мозга были морфологически сохранны, тогда как в контрольной группе на границе выявляли только поврежденные или погибшие нервные клетки. Окраска ядер этих клеток антителами NeuN показала, что в группах клеточной терапии жизнеспособные нейроны находились непосредственно рядом с границей повреждения. Для области, располагающейся в непосредственной близости от ядра инсульта, в 1981 был введен специальный термин - пенумбра (J. Astrup, В. К. Siesjo, L. Symon, 1981). Это область умеренной гипоперфузии, в которой нарушено проведение электрического сигнала, но сохранена целостность клеточных мембрап. Считается, что этот участок, по крайней мере некоторое время после эпизода инсульта, остается жизнеспособным. Нервная ткань в пенумбре страдает от ишемии, я хотя изменения в клетках потенциально обратимы, за счет гибели клеток этой зоны может происходить увеличение объема поврежденной ткани. Это случается, если ие происходит ре-перфузии или своевременно не проведена терапия (О. Touzani, S. Roussel and E. T. MacKenzie, 2001; I. Ferrer and A. M. Planas, 2003). Таким образом, сохранение жизнеспособных нейронов по границе очага ишемии является важной задачей в терапии инсульта. In vitro показано, что после добавления в клеточную культуру экстракта тканей поврежденного мозга МСК продуцировали такие факторы, как VEGF (vascular endothelial growth factor), BDNF (brain - derived neurotrophic factor), NGF (nerve growth factor) и bFGF (basic fibroblast growth factor) (Chen et al., 2002 a, b; Li et al., 2002). Эти вещества обладают нейротрофическим действием, предотвращают апоптоз клеток (Chen et al., 2003) и активируют ангиогенез (Zhang et al., 2002). В некоторых исследованиях отмечалось уменьшение количества апоптотических клеток в пограничной с повреждением зоне при введении МСК (J. Chen et al., 2003). Возможно, МСК продуцируют упомянутые факторы и in vivo вблизи поврежденной зоны. Вероятно, и в этом случае реализуется паракринная функция МСК.

Кроме того, в мозге животных как из группы контроля, так я го группы клеточной терапии наблюдали диффузную гибель нейронов неокортекса в удаленных от очага некроза участках обоих полушарий. Эта реакция мозга на прекращение кровотока была гораздо менее выражена в группе клеточной терадии.

Таблица 1. Сравнительная морфологическая характеристика некротического очага и пограничных зон

группы/срокл наблюдения 1 неделя после ОСМА 2 недели после ОСМА 4 недели после ОСМА 6 недель после ОСМА

Группа контроля (О СМ А + введение среды культивирования внутривенно) зопа некроза зона некроза зона некроза - полностью закончен процесс очищения от некротических масс - наблкадаются ллкворо-глиалшые кисты пограничная с повреждением зона зона некроза

- начало очшцения некротических масс в отдельных участках пограничная с повреждением зона - продолжается очищение от некротических масс - начало образования ликворо-глиальных кист пограничная с иовреждением зопа — полностью завершен процесс формирования кист пограничная с повреждением зопа

- широкий лейкоцитарный вал - небольшое количество неупорядоченно расположенных клеток активированной астроглии - выраженная инфильтрация лейкоцитами, иейтрофилами - гибель нейронов удаленные от повреждения участки - сформирован рубец, наблюдается сильный г л поз - повреждение нейронов удаленные от повреждения участки ыпеклатер&льшло полушария

- инфильтрация нейтрофвлами п макрофагами - пачало образования рубца - гибель нейронов удаленные от повреждения участки ипсилатерального полушария - продолжается образование рубца - гибель нейронов удаленные от повреждения участки

ипсилатерального полушария - диффузная гибель нейронов - расширение бокового желудочка - наблюдается слабо выраженная диффузная гибель пейропов - расширение бокового желудочка - нарушение структуры сосудистого сплетения

ипсилатерального полушария - диффузная гибель нейронов - незначительная пролиферация клеток субэиендцшюй зоны - диффузная гибель нейронов - незначительная пролиферация клеток субэпендимной зоны

Группа клеточной терапии (ОСМА+5 млн мск внутривенно) зона некроза зона некроза зона некроза зона некроза

— процесс очищения от некротических масс идет по всей зоне некроза пограничная с повреждением зона - полностью закончен процесс очищения от некротических масс - наблюдается образование ликворо-глиальных кист пограничная с повреждением зона - це отмечается инфильтрации лейкоцитами - продолжается образование рубца - небольшое количество поврежденных нейронов удаленные от повреждения участки ипсилатерального полушария - практически не выявляется диффузная гибель нейронов - деление большого количества клеток в субэпендимпой зоне - полностью сформированы кисты меньшего размера, чем в группе контроля пограничная с повреждением зона - полностью сформированы кисты меньшего размера, чем в группе контроля пограничная с повреждением зона

- узкий лейкоцитарный вал - упорядочений расположенные клетки активированной астроглии (пачало образования рубца) - инфильтрация лейкоцитами практически не выявляется - количество поврежденных нейронов невелико удаленные от повреждения участки ипсилатерального полушария - практически не выявляется диффузная гибель нейронов - значительная пролиферация клеток субэпендлмной зоны - полностью сформирован рубец - гибель нейронов выражена слабо удаленные от повреждения участки ипсилатерального полушария - практически не выявляется диффузная гибель нейронов - расширение бокового желудочка выражено слабее, чем в группе контроля - полностью сформирован рубец, глцоз выражен слабее - большинство нейронов морфологически сохранно удаленные от повреждения участки ипсилатерального полушария - не наблюдается диффузной гибели нейронов - расширение бокового желудочка выражено слабее - сосудистое сплетение сохраняет свою нормальную структуру

Объем поврежденного после ОСМА участка и васкуляризация пограничных областей

Объем участка головного мозга, занятого кистой и гляо-соединителънотканным рубцом, через 6 недель после ОСМА у животных из группы контроля составил 28±1,3 мм3. У животных из группы клеточной терапии объем этого участка был равен 24±1,08 мм3. Таким образом, объем повреждения мозга в группе клеточной терапии был примерно в 1,2 раза меньше, чем у животных контрольной группы (различия достоверны при Р>0,05). Количество сосудов в ип-силатераяьном полушарии по границе повреждения в неокортексе и в хвостатом ядре в группе контроля составило в среднем 14±0.5 иа поле зрения размером 15 мкм2. В группе клеточной терапии это зпачепие достигает 25±1.1 сосудов на поле зрения. В коптралатеральном полушарии количество сосудов на поле зрения в группе контроля и группе клеточной терапии составило 9,7±0.7 и 19±1.1 соответственно.

В работах Чена и коллег, а также Захарека и коллег показано, что внутривенное введение МСК крысам стимулировало продукцию VEGF и образование новых капилляров в пограничной с повреждением зоне при шнемическом поражении головпого мозга (Chen et al, 2003; A. Zacharek et al., 2007). Таким образом, внутривенная трансплантация МСК активировала образование сосудов в пограничной с повреждением зоне. Активация ангиогенеза способствует восстановлению микроциркуляции, следовательно, и метаболизма в шпемизированной ткани мозга до физиологического уровня. Это одна из причин сохранения жизнеспособности нейронов в пограничной с повреждением зоне. Поведенческое тестирование животных

Трансплантация МСК животным после ОСМА значительно повлияла на их поведение в водном лабиринте Морриса. Животные контрольной группы затрачивали в несколько раз. больше времени на поиск платформы как во время первого испытания, начатого через 2 недели после ОСМА, так и во время второго испытания, начатого через 5 недель после ОСМА, по сравнению с ложнооперированными жиеотньши и крысами из группы клеточпой терапии. Животные из группы клеточной терапии уже к 5 дню первой сессии обучения вырабатывали оптимальвую стратегшо поиска платформы и успешно использовали ее цосле 2х недельного перерыва. При этом эти животные затрачивали столько же времени на поиск платформы, сколько и ложнооперированные. Животные же контрольной группы так практически и не достигали критерия обученности за 6 недель. Тест в водном лабиринте Морриса свидетельствует о том, что ищемический инсульт приводит к существенному нарушению когнитивных функций у животных: они не утрачивают способность к обучению, по за 6 недель не могут выработать оптимальную тактику поведения во время тестирования. Применение клеточной терапии позволило восстановить обучаемость и краткосрочную и долговременную память животных до уровня ложнооперированных крыс уже к конпу 3 недели после ОСМА. Мы считаем, что полученный эффект был оказан за счет предотвращения гибели нервной ткани в пограничной зоне после применения клеточной терапии.

Таким образом, в данной работе показано, что внутривенное введение МСК оказывает положительное воздействие на состояние структур головного мозга после ишемического инсульта, вызванного ОСМА.

ВЫВОДЫ

1. МСК способны к днфференцировке в направлении нейронального ряда in vitro. При локальном введении МСК в пнтактный головной мозг крысы дифференцировки в нейроны не обнаружено.

2. МСК, введенные внутривенно на третий день после операции, достигают головного мозга, располагаясь в субэпендимной зоне и в ткани головного мозга за пределами сосудистой стенки, что свидетельствует о прохождении через поврежденный ГЭВ.

3. Внутривенное введение МСК приводит к завершению процесса асептического воспаления в зоне повреждения головного мозга в более ранние сроки и ускоряет образоваяие глиального рубца.

4. Ведение МСК значительно увеличивает количество пролиферирующих клеток в субэпендимной зоне латеральных желудочков головного мозга.

5, Внутривенная трансплантация МСК предотвращая вторичную гибель нейронов в зоне ишемической полутепи, активирует ангиогенеэ в данной области, способствуя максимальной сохранности структур головного мозга.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Соколова И. Б., Федотова О. Р., Зинькова Н. Н., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Влияние трансплантации мезепхимальиых стволовых клеток па когнитивные функции крыс после ишемического инсульта //Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2004. - Л'1 4. -С. 202-205

Коржевский Д. Э., Гилерович Б. Г., Зинькова Н. Н., Григорьев И. П., Отеллии В. А. Иммуноцитохимичеекое выявление нейронов головного мозга с помощью селективного маркера NeuN //Морфология. - 2005. - № 128. - С. 77-80

Зинькова Н. Н., Гилерович Е. Г., Соколова И. В., Шведова Е. В., Билибина А. А,, Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Терапия ишемического инсульта головпого мозга у крыс с помощью мезенхимных стволовых клеток. //Цитология. - 2007. - № 7. - С. 566-575

Зинькова Н. Н., Гилерович Е. Г., Соколова И. Б., Билибина А. А., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Влияние трансплантации мезенхимальных стволовых клеток на постинсультные процессы в головном мозге крыс. //Сборник тезисов. III Всероссийский симпозиум "Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии". - 2007. - С. 22-23

Зинькова Н. Н., Гилерович Е. Г., Соколова И. Б., Билибина А. А., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Иымуногистохимическое исследование воздействия мезенхимальных стволовых клеток на постипсультные процессы в головном мозге крыс. //Сборник тезисов. III Всероссийский симпозиум "Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии". -2007. - С. 23-24

Зинькова Н. Н., Гилерович Е. Г., Соколова И. Б., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Клеточная терапия ишемического инсульта у крыс. /'/Сборник тезисов. Ежегодная Всероссийская научная конференция "Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении". - 2007. - С. 70-71

Зинькова Н. Н., Гилерович Е. Г., Соколова И. Б., Шведова Е. В., Бшпзбипа А. А., Кругляков П. В., Польтцев Д. Г. Влияние трансплантации мезенхимных стволовых клеток на динамику морфологичеких изменений в головном мозге крыс после ишемического инсульта. //Цитология. - 2007. - К' 11. - С. 923-932

Соколова И. Б., Зинькова Н. Н., Билибина А. А., Кругляков П. В., Гилерович Е. Г., Полынцев Д. Г., Отеллин В. А. Возможности применения клеточной терапии при лечении ишемического инсульта в эксперименте. //Клеточпая трансплантология и тканевая инженерия. - 2007. - № 2. - С. 54-62

Zinkova N., Krouglyakov P., Sokolova I., Vijde S., Kreslavsky Т., Cherednichenko N., Kislyakova Т. V., Polyntsev D. G. The effect of syngenic mesenchymal stem cells intravenous administration on the neurological, behavioral and pathomorphological consequences of stroke in rats. Book of abstracts. 11th Annual ISCT Meeting, Vancouver, Canada, May, 2005, № 175

Sokolova I., Fedotova O., Zinkova N., Krouglyakov P., Polyntsev D. G. Effect of mesenchymal stem cell transplantation on cognitive functions in rats with ischemic stroke. Bull Exp Biol Med., October, 2006, 142(16) - pp.511-514

Zinkova N., Krouglyakov P., Sokolova I., Vijde S., Shvedova E., Kreslavsky Т., Kislyakova Т. V., Gilerovich E. G., Polyntsev D. G. The effect of syngenic mesenchymal stem cells intravenous administration on the lesion size and vascularity of the adjacent areas after experimental stroke in rats. Book of abstracts. 12th Annual ISCT Meeting, Berlin, Germany, May, 2006, № 252

Zinkova N., Krouglyakov P., Sokolova I., Vijde S., Shvedova E., Alexandrov G., Kislyakova Т. V., Gilerovich E. G., Polyntsev D. G. Intravenously injected mesenchymal stem cells distribution ia the

rat brain after an ischemic stroke. Book of abstracts. 12th Annual ISCT Meeting, Berlin, Germany, May, 2006, № 253

Zinkova N., Gilerovich E. G., Sokolova I., Vijde S., Shvedova E., Alexandrov G., Krouglyakov P., Kislyakova T. V., Polyntsev D. G. Mesenchymal stem cells therapy for experimental ishemic stroke in rats. British-Russian workshop in association with the European Commission Stem cells: policy, research, and innovations. Book of abstracts. European Union - Russian Federation Perspectives, March, 2007

Zinkova N.. Sokolova I., Krouglyakov P., Vijde S., Shvedova E., Alexandrov G., Gilerovich E. G., Polyntsev D. G. An influence of mesenchymal stem cells intravenous transplantation on the dynamic changes of rat brain tissue morphology after experimental ischemic stroke. Book of abstracts. 13th Annual ISCT Meeting, Sydney, Australia, June 2007, № 209

Pavlichenko N., Sokolova I., Vijde S., Shvedova E., Alexandrov G., Krouglyakov P., Fedotova. O., Gilerovich E. G., Polyntsev D. G., Otellin V. A. Mesenchymal stem cells transplantation could be beneficial for treatment of experimental ischemic stroke in rats. Brain Res, July, 2008, 14(1233) -pp.203-213

Подписано в печать 15.01.09. Формат 60x84/16, Усл. печ. л. 0,93. Тираж 100. Заказ № 92

Типография Издательства СПбГУ. 190066, Санкт-Петербург, Средний пр., 41

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Павличенко, Наталья Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Цели и задачи исследования

Основные положения, выносимые на защиту

Научная новизна работы

Теоретическое и практическое значение работы

Апробация работы

Глава 1. Аналитический обзор литературы

1.1. Ранние изменения при ишемии головного мозга

1.2. Воспаление и глиальная реакция

1.2.1. Воспаление

1.2.2. Глиальная реакция

1.3. Реорганизация ткани после ишемического инсульта. Ограниченная репарация в головном мозге.

1.4. Зона ишемической полутени

1.5. Современные методы лечения инсульта

1.5.1 Улучшение перфузии

1.5.2 Нейропротекция

1.5.3. Клеточная терапия инсульта 34 1.5.4 Мезенхимные стволовые клетки как агент клеточной терапии '

Глава 2. Материал и методы исследования

2.1. Эксперименты in vitro 49 2.1.1 Выделение и культивирование мезенхимных стволовых клеток из стромы костного мозга крыс

2.1.2. Фенотипирование мезенхимных стволовых клеток крыс

2.1.3. Дифференцировка in vitro в ортодоксальных направлениях

2.1.4. Дифференцировка in vitro в нейрональном направлении

2.1.5. Окрашивание мезенхимных стволовых клеток крыс флуорохромом РКН

2.2. Эксперименты in vivo

2.2.1. Введение МСК в мозг интактным животным

2.2.2. Моделирование экспериментального ишемического инсульта головного мозга

2.2.3. Введение МСК животным с экспериментальным инсультом

2.2.4. Фиксация тканей головного мозга

2.2.5. Выявление флуоресцентно меченых МСК в тканях головного мозга

2.2.6. Морфологический анализ тканей головного мозга

2.2.7. Иммуногистохимическое окрашивание срезов головного мозга

2.2.8. Морфометрическая оценка объема дефекта головного мозга и количества сосудов в поврежденном и неповрежденном полушарии

2.2.9. Поведенческое тестирование животных в водном лабиринте Морриса

Глава 3. Результаты исследований

3.1. Характеристики МСК крысы in vitro

3.1.1. Фенотипирование МСК

3.1.2. Дифференцировка МСК в ортодоксальных направлениях in vitro

3.1.3. Дифференцировка MCK в нейрональном направлении in vitro

3.1.4. Окрашивание клеток флуорохромом РКН

3.2. Характеристика головного мозга после локального введения МСК в мозг интактных крыс

3.3. Морфологическая характеристика головного мозга крысы после экспериментального ишемического инсульта

3.3.1. Распределение меченых флуорохромом РКН 26 клеток в ткани мозга

3.3.2. Характеристика структуры головного мозга ложнооперированных животных

3.3.3. Характеристика структуры головного мозга после окклюзии средней мозговой артерии (группа контроля)

3.3.4. Характеристика структуры головного мозга после окклюзии средней мозговой артерии группа клеточной терапии)

3.3.5. Морфометрическое исследование головного мозга

3.3.6. Поведенческое тестирование животных

Глава 4. Обсуждение полученных результатов 132 ВЫВОДЫ 153 СПИСОК РАБОТ, ОБУБЛПКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 154 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список использованных сокращений:

BDNF - brain-derived neurotrophic factor bFGF - basic fibroblast growth factor

CNTF - ciliary neurotrophic factor

COX-2 - циклооксигеназа

DCX - doublecortin

Dil - липофильный краситель Dil

ELAM-1 - endothelial leukocyte adhesion molecule

FGF - фактор роста фибробластов

FSK - форсколин

GFP - зеленый флуоресцирующий белок HIF-1 - hypoxia-inducible factor-1 ICAM-1 - intercellular adhesion molecule TL - интерлейкин IL-lra-IL-1 receptor antagonist iNOS - индуцибельная NO-синтаза LFA-1 - leukocyte function-associated antigen MCP-1 - monocyte chemoattractant protein Meis2 и Pbx Tuj 1 иНи

МНС 1 - молекула главного комплекса гистосовместимости первого класса

MRF-1 - microglial response factor

NeuN - маркерный белок нейронов NeuN

NG2 - протеогликан NG

NGF - nerve growth factor

NMDA и АМРА - рецепторы и ингибиторы пресинаптического высвобождения глутамата N0 - оксид азота

PDGF - ростовой фактор тромбоцитов РКН 26 - липофильный краситель РКН rt-PA - рекомбинантный тканевой активатор плазминогена

STAT - signal transducers and activators of transcription

TGF-P - трансформирующий фактор роста (

TNF-a - фактор некроза опухолей

VCAM-1 - vascular cell adhesion molecule

VEGF - фактор роста эндотелия сосудов

VLA-4 - very late antigen

БТШ-70 - белок теплового шока

ВКМ - внеклеточный матрикс

ГСК - гематопоэтические стволовые клетки

ГФКБ - глиальный фибриллярный кислый белок

ГЭБ - гематоэнцефалический барьер

ДАГ - диацилглицерол

И-З-ф - инозитол-три-фосфат

КОЕ - колоний-образующая единица

МСК - мезенхимные стволовые клетки

НСК - нейрональные стволовые клетки

ОСМА - окклюзия средней мозговой артерии

СВЗ - субвентрикулярная зона

СК - стволовые клетки

ФСБ - фосфатно-солевой буфер

ФСК - фетальные стволовые клетки

ЦНС - центральная нервная система

ЭСК - эмбриональные стволовые клетки

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние трансплантации мезенхимных стволовых клеток на течение экспериментального инсульта у крыс"

Актуальность проблемы

Клеточные технологии в настоящее время позволяют разрабатывать принципиально новые подходы для лечения ряда заболеваний, сопровождающихся необратимыми повреждениями тканей и органов. В качестве агентов для клеточной терапии могут быть использованы эмбриональные и фетальные стволовые клетки, клетки пуповинной крови, а также стволовые клетки взрослого организма [2, 75, 238, 177, 154, 173, 143, 171].

Первоначально исследования проводили на плюрипотентных эмбриональных стволовых клетках (ЭСК). Однако к тому времени, когда были получены первые линии ЭСК, появились свидетельства существования стволовых клеток (СК) взрослого организма. За последнее десятилетие эти СК были обнаружены даже в тех тканях, в которых, как считалось, не происходит самообновления и репарации, например, в сердце и головном мозге [20, 19, 64].

Одним из видов СК взрослого организма являются мезенхимные стволовые клетки (МСК). Их основным источником является костный мозг. В настоящее время разработаны и апробированы методики выделения МСК, их дальнейшего культивирования и наращивания in vitro до необходимого количества с сохранением свойств [14, 88, 28, 218, 216, 26, 29, 169, 299]. Это позволяет использовать в клеточной терапии аутологичные МСК и избежать проблем с иммунной совместимостью трансплантата и реципиента.

Экспериментально доказано, что МСК - это мультипотентные клетки, способные дифференцироваться in vitro в остеогенном, хондорогенном и адипоцитарном направлениях [123, 124, 122, 216].

При более углубленном анализе была установлена способность МСК дифференцироваться в кардиомиоцитарном и миоцитарном направлениях [217, 126]. В экспериментах с перевязкой коронарной артерии на модели инфаркта миокарда в нашем научном коллективе изучено влияние трансплантации МСК на течение патологического процесса в сердце. Установлено, что введение МСК ускоряет течение воспалительной реакции и повышает васкуляризацию зоны ишемического повреждения [21].

На основании полученных в недавнее время данных о способности МСК дифференцироваться in vitro в нейроны, астроциты и олигодендроциты [192, 29, 26, 57, 299] были предприняты попытки использования МСК для лечения нейродегенеративных заболеваний и повреждений центральной нервной системы [159, 284, 11, 15, 287, 174, 288, 60, 195, 196].

Известно, что одним из самых распространенных заболеваний человека считается ишемический инсульт головного мозга. В большинстве развитых стран он занимает 2-3 место в структуре смертности, и первое место среди причин утраты трудоспособности. Около 10 % больных после инсульта остаются инвалидами. Пост-инсультные осложнения связаны с необратимой потерей нервной ткани после эпизода инсульта [5].

Головной мозг, в отличие от других органов, обладает особенностями структурно-функциональной организации, что в первую очередь объясняется существованием внутримозговых барьеров. В экспериментах на животных проведены трансплантации клеточного материала различных типов (фетальных нейронов головного мозга, фетальных нейронов, культивированных in vitro в нейросферах, а также сингенных или ксеногенных МСК) как непосредственно в место повреждения головного мозга [12, 17, 53, 175, 285], так и системно в кровь [104, 171, 73]. Полученные данные разноречивы. Ксеногенные трансплантаты, введенные непосредственно в мозг, подвержены иммунной реакции отторжения, при введении в кровь клетки могут придти к месту повреждения только при раскрытии гематоэнцефалического барьера (ГЭБ). Для экспериментального изучения действия МСК на головной мозг мы использовали модель инсульта, вызванного окклюзией средней мозговой артерии (ОСМА).

Эта модель имеет несколько особенностей, делающих ее весьма удобной для морфологического и морфометрического анализа изменений, происходящих в нервной ткани при внутривенной трансплантации МСК. Повреждения головного мозга при ее применении вызывают ишемический инсульт. Модель ОСМА дает стабильные результаты, у животных повреждаются одни и те же структуры головного мозга, при этом получаемое повреждение имеет значительные размеры [22]. Использование данной модели позволяет оценить некротический очаг, его очищение и образование рубца, а также проследить изменения в зоне ишемической полутени. Последнее особенно важно, поскольку граничащая с повреждением зона, в которой не нарушено кровоснабжение, подвергается негативному воздействию из-за происходящих в ишемическом очаге патологических процессов. За счет повреждения и гибели клеток в области ишемической полутени размер поврежденного в результате инсульта участка мозга может значительно увеличиваться. Изучение изменений, происходящих в этой области, и влияния на нее трансплантированных клеток является важной задачей при разработке методов клеточной терапии.

Проведенные на данный момент единичные исследования действия стволовых клеток на некротический очаг не охватывают весь спектр проблем, связанных с применением этого нового подхода для лечения инсульта. Не установлены механизмы действия МСК на поврежденную ткань, способы их проникновения в мозг при внутривенной трансплантации и распределение введенных клеток в мозге. Неизученными остаются динамика деструктивных и репаративных процессов в нервной ткани, происходящих на фоне действия введенных МСК, не проанализированы морфологические изменения на границе некротического очага в области ишемической полутени.

Цели и задачи исследования

Целью данной работы являлось изучение влияния трансплантации сингенных МСК на головной мозг при экспериментальном ишемическом инсульте у крыс.

Для достижения поставленной цели работы были сформулированы следующие экспериментальные задачи:

2. Изучить морфологические изменения в головном мозге крысы при ишемическом инсульте

3. Изучить локализацию сингенных донорских МСК в поврежденном мозге при внутривенной трансплантации

Основные положения, выносимые на защиту

1. МСК крысы способны к дифференцировке в направлении нейронального ряда in vitro. При локальном введении МСК в интактный головной мозг крысы не выявлено дифференцировки трансплантированных клеток в нейроны

3. Внутривенное введение МСК ускоряет процессы асептического воспаления и образования рубца

5. Внутривенная трансплантация МСК оказывает нейропротекторное и ангиогенное воздействие на зону ишемической полутени после окклюзии средней мозговой артерии и способствует уменьшению объема повреждения

Научная новизна работы

Впервые получены данные о действии МСК на клетки головного мозга, не располагающиеся в непосредственной близости к очагу ишемии. Экспериментально показано, что при внутривенном введении МСК менее выражена диффузная гибель клеток мозга в ответ на ишемию.

Экспериментально зарегистрировано распределение внутривенно введенных МСК в субэпендимной зоне латеральных желудочков мозга после ишемического инсульта.

Впервые экспериментально продемонстрировано ускорение процессов асептического воспаления и образования глиального рубца в головном мозге после инсульта и трансплантации МСК в кровоток животного.

Впервые выявлено сохранение морфологической структуры хвостатого ядра и сосудистого сплетения после ОСМА в случае введения МСК в кровоток животных.

Показано уменьшение степени выраженности такого постинсультного осложнения, как расширение ипсилатерального желудочка головного мозга.

Теоретическое и практическое значение работы

Результаты диссертационного исследования могут быть использованы для дальнейшего изучения процессов репарации при различных видах повреждений и заболеваний головного мозга, а также исследования участия в восстановительных процессах стволовых клеток взрослого организма. С практической точки зрения, результаты работы могут служить основой для разработки нового терапевтического подхода для лечения нарушений мозгового кровообращения с помощью внутривенного введения МСК.

Апробация работы

По теме диссертации опубликовано 6 статей в журналах, рекомендованных ВАК, а также в журнале "Brain Research". Основные положения работы доложены и обсуждены на международной конференции общества клеточных терапевтов "International Society for Cellular Therapy" (Vancouver, Canada, 2005), на международной конференции общества клеточных терапевтов "International Society for Cellular Therapy" (Berlin, Germany, 2006), на международной конференции общества клеточных терапевтов "International Society for Cellular Therapy" (Sydney, Australia, 2007), на Британско-Российском совещании "Stem cells: Policy, Research, and Innovations. European Union - Russian Federation Perspectives." (Москва, 2007), на Всероссийском симпозиуме "Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии" (Москва, 2007 г.), Всероссийской научной конференции "Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении" (Москва, 2007).

Объём и структура диссертации

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Павличенко, Наталья Николаевна

ВЫВОДЫ

1. МСК способны к дифференцировке в направлении нейронального ряда in vitro. При локальном введении МСК в интактный головной мозг крысы дифференцировки в нейроны не обнаружено.

2. МСК, введенные внутривенно на четвертый день после операции, достигают головного мозга, располагаясь в субэпендимной зоне и в ткани головного мозга за пределами сосудистой стенки, что свидетельствует о прохождении через поврежденный ГЭБ

3. Внутривенное введение МСК приводит к завершению процесса асептического воспаления в зоне повреждения головного мозга в более ранние сроки и ускоряет образование глиального рубца

4. Введение МСК значительно увеличивает количество пролиферирующих клеток в субэпендимной зоне латеральных желудочков головного мозга.

5. Внутривенная трансплантация МСК предотвращая вторичную гибель нейронов в зоне ишемической полутени, активирует ангиогенез в двнной области, способствуя максимальной сохранности структур головного мозга

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Соколова И.Б., Федотова O.P., Зинькова H.H., Кругляков П.В., Полынцев Д.Г. Влияние трансплантации мезенхимальных стволовых клеток на когнитивные функции крыс после ишемического инсульта //Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2004. - № 4. - С. 202-205

Коржевский Д.Э., Гилерович Е.Г., Зинькова H. Н., Григорьев И.П., Отеллин В.А. Иммуноцитохимическое выявление нейронов головного мозга с помощью селективного маркера NeuN //Морфология. - 2005. - № 128. - С. 77-80

Зинькова H. Н., Гилерович Е. Г., Соколова И. Б., Шведова Е. В., Билибина А. А., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Терапия ишемического инсульта головного мозга у крыс с помощью мезенхимных стволовых клеток //Цитология. - 2007. - № 7. - С. 566-575

Зинькова H. Н., Гилерович Е.Г., Соколова И. Б., Билибина А. А., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Влияние трансплантации мезенхимальных стволовых клеток на постинсультные процессы в головном мозге крыс //Сборник тезисов. III Всероссийский симпозиум "Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии". - 2007. - С.22-23

Зинькова H. Н., Гилерович Е.Г., Соколова И. Б., Билибина А. А., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Иммуногистохимическое исследование воздействия мезенхимальных стволовых клеток на постинсультные процессы в головном мозге крыс. //Сборник тезисов. III Всероссийский симпозиум "Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии". - 2007. - С.23-24

Зинькова H. Н., Гилерович Е.Г., Соколова И. Б., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Клеточная терапия ишемического инсульта у крыс //Сборник тезисов. Ежегодная Всероссийская научная конференция "Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении". - 2007. - С.70-71

Зинькова H. Н., Гилерович Е.Г., Соколова И. Б., Шведова Е. В., Билибина А. А., Кругляков П. В., Полынцев Д. Г. Влияние трансплантации мезенхимных стволовых клеток на динамику морфологичеких изменений в головном мозге крыс после ишемического инсульта. //Цитология. - 2007. - № 11. - С. 923932

Соколова И. Б., Зинькова H. Н., Билибина А. А., Кругляков П. В., Гилерович Е. Г., Полынцев Д. Г., Отеллин В. А. Возможности применения клеточной терапии при лечении ишемического инсульта в эксперименте //Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2007. - № 2. - С. 54-62

Zinkova N., Krouglyakov P., Sokolova I., Vijde S., Kreslavsky T., Cherednichenko N., Kislyakova T. V., Polyntsev D.G. The effect of syngenic mesenchymal stem cells intravenous administration on the neurological, behavioral and pathomorphological consequences of stroke in rats. Book of abstracts. 11th Annual ISCT Meeting, Vancouver, Canada, May, 2005, № 175

Zinkova N., Krouglyakov P., Sokolova I., Vijde S., Shvedova E., Kreslavsky T., Kislyakova T. V., Gilerovich E. G., Polyntsev D. G. The effect of syngenic mesenchymal stem cells intravenous administration on the lesion size and vascularity of the adjacent areas after experimental stroke in rats. Book of abstracts. 12th Annual ISCT Meeting, Berlin, Germany, May, 2006, № 252

Zinkova N., Krouglyakov P., Sokolova I., Vijde S., Shvedova E., Alexandrov G., Kislyakova T. V., Gilerovich E. G., Polyntsev D. G. Intravenously injected mesenchymal stem cells distribution in the rat brain after an ischemic stroke. Book of abstracts. 12th Annual ISCT Meeting, Berlin, Germany, May, 2006, № 253

Zinkova N., Gilerovich E. G., Sokolova I., Vijde S., Shvedova E., Alexandrov G., Krouglyakov P., Kislyakova T. V., Polyntsev D. G. Mesenchymal stem cells therapy for experimental ischemic stroke in rats. British-Russian workshop in association with the European Commission Stem cells: policy, research, and innovations. Book of abstracts. European Union - Russian Federation Perspectives, March, 2007

Zinkova N., Sokolova I., Krouglyakov P., Vijde S., Shvedova E., Alexandrov G., Gilerovich E. G., Polyntsev D. G. An influence of mesenchymal stem cells intravenous transplantation on the dynamic changes of rat brain tissue morphology after experimental ischemic stroke. Book of abstracts. 13th Annual ISCT Meeting, Sydney, Australia, June 2007, № 209

Pavlichenko N., Sokolova I., Vijde S., Shvedova E., Alexandrov G., Krouglyakov P., Fedotova O., Gilerovich E. G., Polyntsev D. G., Otellin V. A. Mesenchymal stem cells transplantation could be beneficial for treatment of experimental ischemic stroke in rats. Brain Res, July, 2008, 14(1233)

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Павличенко, Наталья Николаевна, Санкт-Петербург

1. Биологические основы и перспективы терапии стволовыми клетками / Е. Б. Владимирская и др. Москва.: Медпрактика-М, 2005. - 391 с.

2. Викторов И. В. Медико-биологические аспекты применения стволовых клеток / И. В. Викторов, Г. Т. Сухих // Вестник РАМН. 2002. - №4. -Вып. 24-30 - " •

3. Влияние сроков трансплантации мезенхимных стволовых клеток на репарацию сердечной мышцы крыс после инфаркта / П. В. Кругляков и др. // Цитология. 2005. - №47. - Вып. 5. - С. 404-416

4. Гамбарян Л. С. Гиппокамп. Физиология и морфология / Л. С. Гамбарян, И. Н. Коваль. Ереван.: Издательство АН Армянской ССР, 1973. - 50 с.

5. Гусев Е. И. Ишемия головного мозга / Е. И. Гусев, В. И. Скворцова . -изд-во Медицина, 2001. 328 с.

6. Жаботинский Ю. М. Нормальная и патологическая морфология нейрона / Ю. М. Жаботинский. Л.: Медицина, Ленингр. отд-ние, 1965. - 323 с.

7. Ипатов П. В. Первая помощь при неотложных состояниях с испльзованием карманных аптечек. / П. В. Ипатов, А. В. Кротов, С. А. Бойцов // Болезни сердца и сосудов. Актуальные и спорные вопросы. -2007. №2. - Вып. 1.-С.

8. Клеточная терапия мозгового инсульта / С. С. Рабинович и др. // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2005. - №1. - Вып. 2528

9. Коржевский Д. Э. Структурные основы становления гематоликворного барьера у человека / Д. Э. Коржевский, В. А. Отеллин // Успехи физиологических наук. 2002. - №33. - Вып. 4. - С. 43-52

10. Корочкин Л. И. Стволовые клетки в нейрогенетике / Л. И. Корочкин // Генетика. 2004. - №40. - Вып. 6. - С. 787-793

11. З.Лосева Е. В. Нейротрансплантация фетальных тканей икомпенсаторно-восстановительные процессы в центральной нервной системе реципиентов / Е. В. Лосева // Успехи физиологических наук. -2001. №32. - Вып. 1. - С. 19-37

12. Малайцев В. В. Современные представления о биологии стволовой клетки / В. В. Малайцев, И. М. Богданова, Г. Т. Сухих // Арх Патологии. 2002. - №64. - Вып. 4. - С. 7-11

13. Мезенхимальные стволовые и прогениторные клетки.Биологические свойства и перспективы использования / Г. Т. Сухих и др. // Физиологический журнал. 2007. - №53. - Вып. 1. - С. 62-76

14. Паюшина О. В. Мезенхимные стволовые клетки: источник фенотип и потенции к дифференцировке / О. В. Паюшина, Е. И. Домарацкая, В. И. Старостин // Изв. РАН, вер. биол. 2006. - №1. - С. 6-25

15. Репин В. С. Эмбриональная стволовая клетка (от фундаментальной биологии к медицине) / В. С. Репин // Успехи физиологических наук. -2001. -№32.-Вып. 1.-С. 3-18

16. Терапия экспериментального инфаркта миокарда у крыс с помощью трансплантации сингенных мезенхимных стволовых клеток / П. В. Кругляков и др. //Цитология. 2004. - №46. - Вып. 12. - С. 1043-1054

17. A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction / S. T. Chen et al. // Stroke. 86. - Vol. 17. - Issue 4. - pp. 738743

18. A small proportion of mesenchymal stem cells strongly expresses functionally active CXCR4 receptor capable of promoting migration to bone marrow / R. F. Wynn et al. // Blood. 2004. - Vol. 104. - Issue 9. - pp. 2643-5

19. Abbott, N. J. Inflammatory mediators and modulation of blood-brain barrier permeability / N. J. Abbott // Cellular and Molecular Neurobiology. 2000.

20. Vol. 20. Issue 2. - pp. 131-147

21. Adult bone marrow stromal cells differentiate into neural cells in vitro / J. Sanchez-Ramos et al. // Experimental Neurology. 2000. - Vol. 164. -Issue 2. - pp. 247-256

22. Adult bone marrow stromal cells in the embryonic brain: engraftment, migration, differentiation, and long-term survival / G. Munoz-Elias et al. // Journal of Neuroscience. 2004. - Vol. 24. - Issue 19. - pp. 4585-4595

23. Adult human mesenchymal stem cell differentiation to the osteogenic or adipogenic lineage is regulated by mitogen-activated protein kinase / R. K. Jaiswal et al. // Journal of Biological Chemistry. 2000. - Vol. 275. - Issue 13.-pp. 9645-9652

24. Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons / D. Woodbury et al. // Journal of Neuroscience Research. 2000. - Vol. 61. - Issue 4. - pp. 364-70

25. Adult stem cell plasticity / R. Poulsom et al. // Journal of Pathology. -2002. Vol. 197. - Issue 4. - pp. 441-456

26. Aggarwal, S. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses / S. Aggarwal, M. F. Pittenger // Blood. 2005. - Vol. 105. -Issue 4. - pp. 1815-22

27. Alexanian, A. R. Neural stem cells induce bone-marrow-derived mesenchymal stem cells to generate neural stem-like cells via juxtacrine and paracrine interactions / A. R. Alexanian // Experimental Cell Research. -2005. Vol. 310. - Issue 2. - pp.383-391

28. Allan, S. M. Interleukin-1 and neuronal injury / S. M. Allan, P. J. Tyrrell, N. J. Rothwell // Nature Reviews Immunology. 2005. - Vol. 5. - Issue 8. -pp.629-640

29. Alterations in metabolism and gap junction expression may determine the role of astrocytes as "good samaritans" or executioners / R. Farahani et al.

30. Glia. 2005. - Vol. 50. - Issue 4. - pp. 351-361

31. Altieri, M. Update on stroke / M. Altieri, A. Rocco, G. L. Lenzi // Current Opinion in Psychiatry. 2005. - Vol. 18. - Issue 3. - pp.331-3344

32. Alvarez-Buylla, A. Identification of neural stem cells in the adult vertebrate brain / A. Alvarez-Buylla, B. Seri, F. Doetsch // Brain Research Bulletin. -2002. Vol. 57. - Issue 6. - pp.751-758

33. Angiopoietinl/Tie2 and VEGF/Flkl induced by MSC treatment amplifies angiogenesis and vascular stabilization after stroke / A. Zacharek et al. // Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 2007. - Vol. 27. - Issue 10.-pp. 1684-1691

34. Arumugam, T. V. Stroke and T-cells / T. V. Arumugam, D. N. Granger, M. P. Mattson // NeuroMolecular Medicine. 2005. - Vol. 7. - Issue 3. - pp.229242

35. Aschner, M. Immune and inflammatory responses in the CNS: modulation by astrocytes / M. Aschner 11 Toxicology Letters. 1998. - Vol. 102-103. -Issue 283-7

36. Astrocytes and stroke: networking for survival? / M. F. Anderson et al. // Neurochemical Research. 2003. - Vol. 28. - Issue 2. - pp. 293-305

37. Astrocytic and neuronal fate of mesenchymal stem cells expressing nestin / S. Wislet-Gendebien et al. 11 Brain Research Bulletin. 2005. - Vol. 68. -Issue 1-2. - pp. 95-102

38. Astrup, J. Thresholds in cerebral ischemia the ischemic penumbra / J. Astrup, B. K. Siesjo, L. Symon // Stroke. - 1981. - Vol. 12. - Issue 6. -pp.723-725

39. Autologous mesenchymal stem cell transplantation in stroke patients / O. Y. Bang et al. // Annals of Neurology. 2005. - Vol. 57. - Issue 6. - pp. 874882

40. Autologous mesenchymal stem cell transplantation induce VEGF and neovascularization in ischemic myocardium / Y. L. Tang et al. // Regulatory Peptides. 2004. - Vol. 117. - Issue 1. - pp. 3-10

41. Baker R. A. Immune problems in central nervous system cell therapy / Baker R. A., Widner H. // Neuro Rx. 2004. - Vol. 1. - Issue 472-481

42. Baksh, D. Adult mesenchymal stem cells: characterization, differentiation, and application in cell and gene therapy / D. Baksh, L. Song, R. S. Tuan // Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2004. - Vol. 8. - Issue 3. -pp.301-316

43. Barker, R. A. Immune problems in central nervous system cell therapy / R. A. Barker, H. Widner // NeuroRx. 2004. - Vol. 1. - Issue 4. - pp. 472-481

44. Barry, F. P. Biology and clinical applications of mesenchymal stem cells / F. P. Barry // Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 2003. - Vol. 69. - Issue 3. - pp.250-256

45. Barry, F. P. Mesenchymal stem cells: clinical applications and biological characterization / F. P. Barry, J. M. Murphy // International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 2004. - Vol. 36. - Issue 4. - pp.568-584

46. Basic fibroblast growth factor (bFGF) injection activates the glial reaction in the injured adult rat brain / F. Eclancher et al. // Brain Research. 96. -Vol. 737. - Issue 1-2. - pp. 201-214

47. Bishop, A. E. Embryonic stem cells / A. E. Bishop, L. D. Buttery, J. M. Polak// Journal of Pathology. 2002. - Vol. 197. - Issue 4. - pp.424-429

48. Black, I. B. Adult rat and human bone marrow stromal stem cells differentiate into neurons /1. B. Black, D. Woodbury // Blood Cells, Molecules, and Diseases. 2001. - Vol. 27. - Issue 3. - pp.632-636

49. Blesch, A. Neurotrophic factors, gene therapy, and neural stem cells for spinal cord repair / A. Blesch, P. Lu, M. H. Tuszynski // Brain Research Bulletin. 2002. - Vol. 57. - Issue 6. - pp.833-838

50. Blood-brain barrier: structural components and function under physiologic and pathologic conditions / Y. Persidsky et al. // Journal of Neuroimmune

51. Pharmacology. 2006. - Vol. 1. - Issue 3. - pp. 223-236

52. Bone marrow as a source of endothelial cells and NeuN-expressing cells After stroke / D. C. Hess et al. // Stroke. 2002. - Vol. 33. - Issue 5. - pp. 1362-1368

53. Bone marrow origin of myofibroblasts in irradiation pulmonary fibrosis / M. W. Epperly et al. // American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 2003. - Vol. 29. - Issue 2. - pp. 213-224

54. Bone marrow stem cells regenerate infarcted myocardium / D. Orlic et al. // Pediatric Transplantation. 2003. - Vol. 7 Suppl 3. - Issue 86-88

55. Bone marrow-derived endothelial progenitor cells participate in cerebral neovascularization after focal cerebral ischemia in the adult mouse / Z. G. Zhang et al. // Circulation Research. 2002. - Vol. 90. - Issue 3. - pp. 284288

56. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells already express specific neural proteins before any differentiation / T. Tondreau et al. // Differentiation. 2004. - Vol. 72. - Issue 7. - pp. 319-326

57. Bongso, A. History and perspective of stem cell research / A. Bongso, M. Richards // Best Practice and Research Clinical Obstetrics and Gynaecology.- 2004. Vol. 18. - Issue 6. - pp.827-842

58. Brass, L. M. Bone marrow for the brain? / L. M. Brass // Experimental Neurology. 2006. - Vol. 199. - Issue 1. - pp. 16-19

59. Brevican and phosphacan expression and localization following transient middle cerebral artery occlusion in the rat / G. Haddock et al. // Biochemical Society Transactions. 2007. - Vol. 35. - Issue Pt 4. - pp. 692694

60. Broderick, J. P. Treatment of acute ischemic stroke: Part I: recanalization strategies / J. P. Broderick, W. Hacke // Circulation. 2002. - Vol. 106. -Issue 12. - pp.1563-1569

61. Broderick, J. P. Treatment of acute ischemic stroke: Part II: neuroprotection and medical management / J. P. Broderick, W. Hacke // Circulation. 2002.- Vol. 106. Issue 13. - pp. 1736-1740

62. Cao, Q. Stem cell repair of central nervous system injury / Q. Cao, R. L. Benton, S. R. Whittemore // Journal of Neuroscience Research. 2002. -Vol. 68. - Issue 5. - pp.501-510

63. Caplan, A. I. Mesenchymal stem cells as trophic mediators / A. I. Caplan, J. E. Dennis // Journal of Cellular Biochemistry. 2006. - Vol. 98. - Issue 5.pp.1076-1084

64. Carmeliet, P. Angiogenesis in life, disease and medicine / P. Carmeliet // Nature. 2005. - Vol. 438. - Issue 7070. - pp.932-936

65. Central nervous system entry of peripherally injected umbilical cord blood cells is not required for neuroprotection in stroke / C. V. Borlongan et al. // Stroke. 2004. - Vol. 35. - Issue 10. - pp. 2385-2389

66. Cerebral blood flow threshold of ischemic penumbra and infarct core in acute ischemic stroke: a systematic review / E. Bandera et al. // Stroke. -2006. Vol. 37. - Issue 5. - pp. 1334-1339

67. Cerebral ischemia and CNS transplantation: differential effects of grafted fetal rat striatal cells and human neurons derived from a clonal cell line / C. V. Borlongan et al. //Neuroreport. 98. - Vol. 9. - Issue 16. - pp. 37033709

68. Chalela, J. A. Update on stroke / J. A. Chalela, J. G. Merino, S. Warach // Current Opinion in Neurology. 2004. - Vol. 17. - Issue 4. - pp.447-451

69. Chang, Y. C. Regenerative therapy for stroke / Y. C. Chang, W. C. Shyu, S. Z. Lin, H. Li // Cell Transplantation. 2007. - Vol. 16. - Issue 2. - pp. 171181

70. Characterization and expression analysis of mesenchymal stem cells from human bone marrow and adipose tissue / R. H. Lee et al. // Cellular Physiology and Biochemistry. 2004. - Vol. 14. - Issue 4-6. - pp. 311-324

71. Characterization of the expression of MHC proteins in human embryonic stem cells / M. Drukker et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2002. - Vol. 99. - Issue 15. - pp. 9864-9869

72. Chemokines, mononuclear cells and the nervous system: heaven (or hell) is in the details / N. M. Rebenko-Moll et al. // Current Opinion in Immunology. 2006. - Vol. 18. - Issue 6. - pp. 683-689

73. Chen, J. Intracerebral transplantation of bone marrow with BDNF after MCAo in rat / J. Chen, Y. Li, M. Chopp // Neuropharmacology. 2000. -Vol. 39. - Issue 5. - pp.711-716

74. Chopp, M. Treatment of neural injury with marrow stromal cells / M. Chopp, Y. Li // Lancet Neurology. 2002. - Vol. 1. - Issue 2. - pp.92-100

75. Circulating mesenchymal stem cells / C. A. Roufosse et al. // International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 2004. - Vol. 36. - Issue 4. - pp. 585-597

76. Circulating skeletal stem cells / S. A. Kuznetsov et al. // Journal of Cell Biology. -2001. Vol. 153. - Issue 5. - pp. 1133-40

77. Clinical outcome following acute ischaemic stroke relates to both activation and autoregulatory inhibition of cytokine production / H. C. Emsley et al. // BioMedCentral Neurology. 2007. - Vol. 7. - Issue 5

78. Conget, P. A. Phenotypical and functional properties of human bone marrow mesenchymal progenitor cells / P. A. Conget, J. J. Minguell // Journal of Cellular Physiology. 1999. - Vol. 181. - Issue 1. - pp.67-73

79. Croll, S. D. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in seizures: a double-edged sword / S. D. Croll, J. H. Goodman, H. E. Scharfman // Advances in Experimental Medicine and Biology. 2004. - Vol. 548. - Issue 57-68

80. Croll, S. D. Vascular growth factors in cerebral ischemia / S. D. Croll, S. J. Wiegand//Molecular Neurobiology. 2001. - Vol. 23. - Issue 2-3. - pp.121135

81. Cytokine and chemokine inter-regulation in the inflamed or injured CNS / T. Owens et al. // Brain research. Brain research reviews. 2005. - Vol. 48. -Issue 2. - pp. 178-184

82. D'Amour, K. A. Genetic and functional differences between multipotent neural and pluripotent embryonic stem cells / K. A. D'Amour, F. H. Gage // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of

83. America. 2003. - Vol. 100. - Issue Suppl 1. - pp.11866-11872

84. Danton, G. H. Inflammatory mechanisms after ischemia and stroke / G. H. Danton, W. D. Dietrich // Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 2003. - Vol. 62. - Issue 2. - pp.127-136

85. Deans, R. J. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses / R. J. Deans, A. B. Moseley // Experimental Hematology. 2000. - Vol. 28. -Issue 8. - pp.875-884

86. Dennis, J. E. Origin and differentiation of human and murine stroma / J. E. Dennis, P. Charbord // Stem Cells. 2002. - Vol. 20. - Issue 3. - pp.205-214

87. Devine, S. M. Role of mesenchymal stem cells in hematopoietic stem cell transplantation / S. M. Devine, R. Hoffman // Current Opinion in Hematology. 2000. - Vol. 7. - Issue 6. - pp.358-3 63

88. Dezawa, M. Insights into autotransplantation: the unexpected discovery of specific induction systems in bone marrow stromal cells / M. Dezawa // Cellular and Molecular Life Sciences. 2006. - Vol. 63. - Issue 23. - pp.2764-2772

89. Dezawa, M. Treatment of neurodegenerative diseases using adult bone marrow stromal cell-derived neurons / M. Dezawa, M. Hoshino, C. Ide // Expert Opinion on Biological Therapy. 2005. - Vol. 5. - Issue 4. - pp.427435

90. Differentiation of adult bone marrow stem cells into neuroprogenitor cells in vitro / B. J. Kim et al. // Neuroreport. 2002. - Vol. 13. - Issue 9. -pp. 1185-1188

91. Dirnagl, U. Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view / U. Dirnagl, C. Iadecola, M. A. Moskowitz // Trends in Neurosciences. 1999. -Vol. 22. - Issue 9. - pp.391-397

92. Distribution and in situ proliferation patterns of intravenously injected immortalized human neural stem-like cells in rats with focal cerebral ischemia / K. Chu et al. // Neurosciences Research. 2004. - Vol. 50. -Issue 4. - pp. 459-465

93. Dynamic of distribution of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells after transplantation into adult unconditioned mice / C. Allers et al. // Transplantation. 2004. - Vol. 78. - Issue 4. - pp. 503-508

94. Dystrophin expression in the mdx mouse restored by stem cell transplantation / E. Gussoni et al. // Nature. 99. - Vol. 401. - Issue 6751. -pp. 390-394

95. Effect of basic fibroblast growth factor treatment on brain progenitor cells after permanent focal ischemia in rats / K. Wada et al. // Stroke. -2003. Vol. 34. - Issue 11. - pp. 2722-2728

96. Effect of brain edema on infarct volume in a focal cerebral ischemia model in rats / T. N. Lin et ah. // Stroke. 93. - Vol. 24. - Issue 1. - pp. 117121

97. Effect of duration of osmotherapy on blood-brain barrier disruption and regional cerebral edema after experimental stroke / C. H. Chen et ah. // Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 2006. - Vol. 26. - Issue 7. -pp. 951-958

98. Elkind, M. S. Inflammation, atherosclerosis, and stroke / M. S. Elkind // Neurologist. 2006. - Vol. 12. - Issue 3. - pp. 140-148

99. Ellison, J. A. Matrix remodeling after stroke. De novo expression of matrix proteins and integrin receptors / J. A. Ellison, F. C. Barone, G. Z. Feuerstein // Annals of the New York Academy of Sciences . 1999. - Vol. 890. - Issue 204-222

100. Ennis, S. R. The effects of cerebral ischemia on the rat choroid plexus / S. R. Ennis, R. F. Keep // Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism.- 2006. Vol. 26. - Issue 5. - pp.675-683

101. Fawcett, J. W. The glial scar and central nervous system repair / J. W. Fawcett, R. A. Asher // Brain Research Bulletin. 1999. - Vol. 49. - Issue 6.- pp.377-391

102. Feghali, C. A. Cytokines in acute and chronic inflammation / C. A. Feghali, T. M. Wright // Frontiers in Bioscience. 1997. - Vol. 2. - Issue d 12-26

103. Felling, R. J. Enhanced neurogenesis following stroke / R. J. Felling, S. W. Levison // Journal of Neuroscience Research. 2003. - Vol. 73. - Issue 3. - pp.277-283

104. Ferguson, K. L. Growth factors: can they promote neurogenesis? / K. L. Ferguson, R. S. Slack // Trends in Neurosciences. 2003. - Vol. 26. -Issue 6. - pp.283-285

105. Ferrara, N. Angiogenesis as a therapeutic target / N. Ferrara, R. S. Kerbel // Nature. 2005. - Vol. 438. - Issue 7070. - pp.967-974

106. Ferrer, I. Signaling of cell death and cell survival following focal cerebral ischemia: life and death struggle in the penumbra /1. Ferrer, A. M. Planas // Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 2003. -Vol. 62. - Issue 4. - pp.329-339

107. Friedenstein, A. J. Marrow stromal fibroblasts / A. J. Friedenstein // Calcified Tissue International. 1995. - Vol. 56 Suppl 1. - Issue S17

108. Friedenstein, A. J. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells / A. J. Friedenstein, 1.1. Piatetzky-Shapiro, K. V. Petrakova // Journal of Embryology and Experimental Morphology. 1966. - Vol. 16. - Issue 3. -pp.381-390

109. Friedenstein, A. J. The development of fibroblast colonies in monolayer cultures of guinea-pig bone marrow and spleen cells / A. J. Friedenstein, R. K. Chailakhjan, K. S. Lalykina // Cell and Tissue Kinetics. -1970. Vol. 3. - Issue 4. - pp.393-403

110. Fujimoto, E. Histochemical study of the differentiation of microglial cells in the developing human cerebral hemispheres / E. Fujimoto, A. Miki, H. Mizoguti // Journal of Anatomy. 1989. - Vol. 166. - Issue 253-264

111. Fukuda, K. Development of regenerative cardiomyocytes from mesenchymal stem cells for cardiovascular tissue engineering / K. Fukuda // Artificial Organs. 2001. - Vol. 25. - Issue 3. - pp.187-193

112. Functional integration of embiyonic stem cell-derived neurons in hippocampal slice cultures / F. Benninger et al. // Journal of Neuroscience. 2003. - Vol. 23. - Issue 18. - pp. 7075-7083

113. Functional integration of embryonic stem cell-derived neurons in vivo / M. Wernig et al. // Journal of Neuroscience. 2004. - Vol. 24. - Issue 22. -pp. 5258-5268

114. Garden, G. A. Microglia biology in health and disease / G. A. Garden, T. Moller // Journal of Neuroimmune Pharmacology. 2006. - Vol. 1. - Issue 2. - pp. 127-137

115. Gebicke-Haerter, P. J. Microglia in neurodegeneration: molecular aspects / P. J. Gebicke-Haerter // Microscopy Research and Technique. -2001. Vol. 54. - Issue 1. - pp.47-58

116. Gene and cell replacement via neural stem cells / H. T. Kim et al. // Yonsei Medical Journal. 2004. - Vol. 45 Suppl. - Issue 32-40

117. Generalized potential of adult neural stem cells / D. L. Clarke et al. // Science. 2000. - Vol. 288. - Issue 5471. - pp. 1660-1663

118. Generation of neural progenitor cells from whole adult bone marrow / P. Kabos et al. // Experimental Neurology. 2002. - Vol. 178. - Issue 2. -pp. 288-293

119. Ghashghaei, H. T. Neuronal migration in the adult brain: are we there yet? / H. T. Ghashghaei, C. Lai, E. S. Anton // Nature Reviews Neuroscience. 2007. - Vol. 8. - Issue 2. - pp. 141-151

120. Gliosis and brain remodeling after treatment of stroke in rats with marrow stromal cells / Y. Li et al. // Glia. 2005. - Vol. 49. - Issue 3. - pp. 407-417

121. Global test statistics for treatment effect of stroke and traumatic brain injury in rats with administration of bone marrow stromal cells / M. Lu et al. // Journal of Neuroscience Methods. 2003. - Vol. 128. - Issue 1-2. - pp. 183-190

122. Goodell, M. A. Multipotential stem cells and 'side population' cells / M. A. Goodell // Cytotherapy. 2002. - Vol. 4. - Issue 6. - pp.507-508

123. Goodell, M. A. Stem cells: is there a future in plastics? / M. A. Goodell // Current Opinion in Cell Biology. 2001. - Vol. 13. - Issue 6. -pp.662-665

124. Greenberg, D. A. From angiogenesis to neuropathology / D. A. Greenberg, K. Jin // Nature. 2005. - Vol. 438. - Issue 7070. - pp.954-959

125. Hawkins, B. T. Pathophysiology of the blood-brain barrier: animal models and methods / B. T. Hawkins, R. D. Egleton // Current Topics in Developmental Biology. 2007. - Vol. 80. - Issue 277-309

126. Hematopoietic origin of microglial and perivascular cells in brain / D. C. Hess et al. // Experimental Neurology. 2004. - Vol. 186. - Issue 2. - pp. 134-144

127. Heng, B. C. Transplanted human embryonic stem cells as biological 'catalysts' for tissue repair and regeneration / B. C. Heng, H. Liu, T. Cao // Medical Hypotheses. 2005. - Vol. 64. - Issue 6. - pp. 1085-1088

128. Heterogeneity among human bone marrow-derived mesenchymal stem cells and neural progenitor cells / W. Vogel et al. // Haematologica. -2003. Vol. 88. - Issue 2. - pp. 126-133

129. Heterotypic adherence between murine leukemia/lymphoma cells and marrow stromal cells involves a recognition mechanism with galactosyl and mannosyl specificities / H. S. Juneja et al. // Experimental Hematology. -92. Vol. 20. - Issue 4. - pp. 405-11

130. High-potential human mesenchymal stem cells / C. Lange et al. // Stem Cells and Development. 2005. - Vol. 14. - Issue 1. - pp. 70-80

131. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells / K. Le Blanc et al. // Experimental Hematology. 2003. - Vol. 31. - Issue 10. - pp. 890-896

132. Hopkins, S. J. The pathophysiological role of cytokines / S. J. Hopkins // Legal medicine (Tokyo, Japan). 2003. - Vol. 5 Suppl 1. - Issue S45-57

133. Hossmann, K. A. Pathophysiology and therapy of experimental stroke / K. A. Hossmann // Cellular and Molecular Neurobiology. 2006. - Vol. 26. -Issue 7-8.-pp. 1057-1083

134. Huang, J. Inflammation in stroke and focal cerebral ischemia / J. Huang, U. M. Upadhyay, R. J. Tamargo // Surgical Neurology. 2006. -Vol. 66. - Issue 3. - pp.232-245

135. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells / P. A. Zuk et al. // Molecular Biology of the Cell. 2002. - Vol. 13. - Issue 12. - pp. 4279-4295

136. Human bone marrow stem cells exhibit neural phenotypes and ameliorate neurological deficits after grafting into the ischemic brain of rats / L. R. Zhao et al. // Experimental Neurology. 2002. - Vol. 174. - Issue 1. -pp. 11-20

137. Human bone marrow stromal cell cultures conditioned by traumatic brain tissue extracts: growth factor production / X. Chen et al. // Journal of Neuroscience Research. 2002. - Vol. 69. - Issue 5. - pp. 687-691

138. Human feeders support prolonged undifferentiated growth of human inner cell masses and embryonic stem cells / M. Richards et al. // Nature Biotechnology. 2002. - Vol. 20. - Issue 9. - pp. 933-936

139. Human marrow stromal cell therapy for stroke in rat: neurotrophins and functional recovery / Y. Li et al. // Neurology. 2002. - Vol. 59. -Issue 4. - pp. 514-523

140. Human mesenchymal stem cells differentiate to a cardiomyocyte phenotype in the adult murine heart / C. Toma et al. // Circulation. 2002.- Vol. 105. Issue 1. - pp. 93-98

141. Human mesenchymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep / K. W. Liechty et al. // Nature Medicine. 2000. - Vol. 6. - Issue 11. - pp. 1282-1286

142. Human mesenchymal stem cells maintain transgene expression during expansion and differentiation / K. Lee et al. // Molecular Therapy. 2001. -Vol. 3. - Issue 6. - pp. 857-866

143. Human neural stem cell transplantation promotes functional recovery in rats with experimental intracerebral hemorrhage / S. W. Jeong et al. // Stroke. 2003. - Vol. 34. - Issue 9. - pp. 2258-2263

144. Human neural stem cells normalize rat behavior after hypoxia / O. V. Podgornyi et al. // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2004.- Vol. 137. Issue 4. - pp. 348-351

145. Human reserve pluripotent mesenchymal stem cells are present in the connective tissues of skeletal muscle and dermis derived from fetal, adult, and geriatric donors / H. E. Young et al. // Anatomical Record. 2001. -Vol. 264. - Issue 1. - pp. 51-62

146. Hypoxia promotes murine bone-marrow-derived stromal cell migration and tube formation / B. Annabi et al. // Stem Cells. 2003. - Vol. 21,-Issue 3. -pp. 337-347

147. Identification of fetal mesenchymal stem cells in maternal blood: implications for non-invasive prenatal diagnosis / K. O'Donoghue et al. // Molecular Human Reproduction. 2003. - Vol. 9. - Issue 8. - pp. 497-502

148. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human firsttrimester fetal blood, liver, and bone marrow / C. Campagnoli et al. //

149. Blood. 2001. - Vol. 98. - Issue 8. - pp. 2396-2402

150. Imaging the ischaemic penumbra / J. V. Guadagno et al. // Current Opinion in Neurology. 2004. - Vol. 17. - Issue 1. - pp. 61-67

151. In vitro chondrogenesis of bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells / B. Johnstone et al. // Experimental Cell Research. 98. -Vol. 238. - Issue 1. - pp. 265-272

152. In vitro differentiation of human processed lipoaspirate cells into early neural progenitors / P. H. Ashjian et al. // Plastic and Reconstructive Surgery. 2003. - Vol. 111. - Issue 6. - pp. 1922-1931

153. Infusion of human umbilical cord blood cells in a rat model of stroke dose-dependently rescues behavioral deficits and reduces infarct volume / M. Vendrame et al. // Stroke. 2004. - Vol. 35. - Issue 10. - pp. 2390-2395

154. Initial observations on the effect of medium composition on the differentiation of murine embryonic stem cells to alveolar type II cells / H. J. Rippon et al. // Cloning and stem cells. 2004. - Vol. 6. - Issue 2. - pp. 4956

155. Interactions between human adipose stromal cells and mouse neural stem cells in vitro / S. K. Kang et al. // Brain Research. Developmental Brain Research. 2003. - Vol. 145. - Issue 1. - pp. 141-149

156. Intraarterial administration of marrow stromal cells in a rat model of traumatic brain injury / D. Lu et al. // Journal of Neurotrauma. 2001. -Vol. 18.-Issue 8.-pp. 813-819

157. Intracerebral xenotransplantation of GFP mouse bone marrow stromal cells in intact and stroke rat brain: graft survival and immunologic response / H. Irons et al. // Cell Transplantation. 2004. - Vol. 13. - Issue 3. - pp. 283-294

158. Intravenous administration of human umbilical cord blood reduces behavioral deficits after stroke in rats / J. Chen et al. // Stroke. 2001. -Vol. 32. - Issue 11. - pp. 2682-2688

159. Intravenous bone marrow stromal cell therapy reduces apoptosis and promotes endogenous cell proliferation after stroke in female rat / J. Chen et al. // Journal of Neuroscience Research. 2003. - Vol. 73. - Issue 6. - pp. 778-786

160. Intravenously Administered Bone Marrow Cells Migrate to Damaged Brain Tissue and Improve Neural Function in Ischemic Rats / J. Wu et al. // Cell Transplantation. 2008. - Vol. 16. - Issue 10. - pp. 993-1005

161. Ischemic cerebral tissue and MCP-1 enhance rat bone marrow stromal cell migration in interface culture / L. Wang et al. // Experimental Hematology. 2002. - Vol. 30. - Issue 7. - pp. 831-836

162. Ischemic rat brain extracts induce human marrow stromal cell growth factor production / X. Chen et al. // Neuropathology. 2002. - Vol. 22. -Issue 4. - pp. 275-279

163. Isolation and characterization of multipotential mesenchymal stem cells from feline bone marrow / D. R. Martin et al. // Experimental Hematology. 2002. - Vol. 30. - Issue 8. - pp. 879-886

164. Isolation of human mesenchymal stem cells: bone marrow versus umbilical cord blood / K. Mareschi et al. // Haematologica. 2001. - Vol. 86.-Issue 10.-pp. 1099-1100

165. Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin / J. G. Toma et al. // Nature Cell Biology. 2001. - Vol. 3. - Issue 9. - pp. 778-784

166. Isolation of neural stem cells from the forebrain of deceased early postnatal and adult rats with protracted post-mortem intervals / Y. Xu et al. // Journal of Neuroscience Research. 2003. - Vol. 74. - Issue 4. - pp. 533540

167. Isolation of neural stem cells from the postnatal cerebellum / A. Lee et al. // Nature Neuroscience. 2005. - Vol. 8. - Issue 6. - pp. 723-729

168. Jander, S. Imaging inflammation in acute brain ischemia / S. Jander, M. Schroeter, A. Saleh // Stroke. 2007. - Vol. 38. - Issue 2 Suppl. - pp.642645

169. Kaur, C. Blood brain barrier in hypoxic-ischemic conditions / C. Kaur, E. A. Ling // Current Neurovascular Research. 2008. - Vol. 5. - Issue 1. -pp.71-81

170. Kernie, S. G. Brain remodeling due to neuronal and astrocytic proliferation after controlled cortical injuiy in mice / S. G. Kernie, T. M. Erwin, L. F. Parada // Journal of Neuroscience Research. 2001. - Vol. 66.1.sue 3. pp.317-326

171. Kim, J. S. Cytokines and adhesion molecules in stroke and related diseases / J. S. Kim // Journal of the Neurological Sciences. 1996. - Vol. 137. - Issue 2. - pp.69-78

172. Komitova, M. On neural plasticity, new neurons and the postischemic milieu: an integrated view on experimental rehabilitation / M. Komitova, B. B. Johansson, P. S. Eriksson // Experimental Neurology. 2006. - Vol. 199. - Issue 1. - pp.42-55

173. Kristian, T. Calcium in ischemic cell death / T. Kristian, B. K. Siesjo // Stroke . 1998. - Vol. 29. - Issue 3. - pp.705-718

174. Kunkel, T. A. DNA replication fidelity / T. A. Kunkel, K. Bebenek // Annual Review of Biochemistry. 2000. - Vol. 69. - Issue 497-529

175. Lindvall, O. Stem cell therapy for human brain disorders / O. Lindvall, Z. Kokaia // Kidney International. 2005. - Vol. 68. - Issue 5. -pp.1937-1939

176. Lindvall, O. Stem cells for the treatment of neurological disorders / O. Lindvall, Z. Kokaia // Nature. 2006. - Vol. 441. - Issue 7097. - pp. 10941096

177. Ling, E. A. The origin and nature of ramified and amoeboid microglia: a historical review and current concepts / E. A. Ling, W. C. Wong // Glia. -1993. Vol. 7. - Issue 1. -pp.9-18

178. MacDonald, J. F. Paradox of Ca2+ signaling, cell death and stroke / J. F. MacDonald, Z. G. Xiong, M. F. Jackson // Trends in Neurosciences. -2006. Vol. 29. - Issue 2. - pp.75-81

179. Mahmood, A. Intravenous administration of marrow stromal cells (MSCs) increases the expression of growth factors in rat brain after traumatic brain injury / A. Mahmood, D. Lu, M. Chopp // Journal of Neurotrauma. 2004. - Vol. 21. - Issue 1. - pp.33-39

180. Mahmood, A. Marrow stromal cell transplantation after traumatic brain injury promotes cellular proliferation within the brain / A. Mahmood, D. Lu, M. Chopp //Neurosurgery. 2004. - Vol. 55. - Issue 5. - pp.11851193

181. Mapping transplanted stem cell migration after a stroke: a serial, in vivo magnetic resonance imaging study / M. Modo et al. // Neuroimage. -2004. Vol. 21. - Issue 1. - pp. 311-317

182. Marrow stromal cells transplanted to the adult brain are rejected by an inflammatory response and transfer donor labels to host neurons and glia / T. M. Coyne et al. // Stem Cells. 2006. - Vol. 24. - Issue 11. - pp. 2483-2492

183. Martino, G. The therapeutic potential of neural stem cells / G. Martino, S. Pluchino // Nature Reviews Neuroscience. 2006. - Vol. 7. -Issue 5. - pp.395-406

184. MCP-1, MIP-1, IL-8 and ischemic cerebral tissue enhance human bone marrow stromal cell migration in interface culture / L. Wang et al. // Hematology. 2002. - Vol. 7. - Issue 2. - pp. 113-117

185. Mendes, S. C. Mesenchymal progenitor cells localize within hematopoietic sites throughout ontogeny / S. C. Mendes, C. Robin, E. Dzierzak // Development. 2005. - Vol. 132. - Issue 5. - pp.1127-1136

186. Mesenchymal stem cells enhance wound healing through differentiation and angiogenesis / Y. Wu et al. // Stem Cells. 2007. - Vol. 25. - Issue 10. - pp. 2648-2659

187. Mesenchymal stem cells participate in angiogenesis and improve heart function in rat model of myocardial ischemia with reperfusion / J. Tang et al. // European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 2006. - Vol. 30. -Issue 2. - pp. 353-361

188. Mesenchymal stem cells reside within the connective tissues of many organs / H. E. Young et al. // Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 95. - Vol. 202. -Issue 2. - pp. 137-144

189. Mesenchymal stem cells spontaneously express neural proteins in culture and are neurogenic after transplantation / J. Deng et al. // Stem Cells. 2006. - Vol. 24. - Issue 4. - pp. 1054-1064

190. Microarray analysis of acute and delayed gene expression profile in rats after focal ischemic brain injury and reperfusion / X. C. Lu et al. // Journal of Neuroscience Research. 2004. - Vol. 77. - Issue 6. - pp. 843-857

191. Microglial cell population dynamics in the injured adult central nervous system / R. Ladeby et al. // Brain research. Brain research reviews. 2005. - Vol. 48. - Issue 2. - pp. 196-206

192. Microvascular structure after embolic focal cerebral ischemia in the rat / D. C. Morris et al. // Brain Research. 2003. - Vol. 972. - Issue 1-2.pp. 31-37

193. Minguell, J. J. Mesenchymal stem cells / J. J. Minguell, A. Erices, P. Conget // Experimental Biology and Medicine (Maywood). 2001. - Vol. 226. - Issue 6. - pp.507-520

194. Molecular diversity of astrocytes with implications for neurological disorders / R. M. Bachoo et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2004. - Vol. 101. - Issue 22. - pp. 8384-8389

195. Mullen, R. J. NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates / R. J. Mullen, C. R. Buck, A. M. Smith // Development. 1992. - Vol. 116.-Issue 1. - pp.201-211

196. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells / M. F. Pittenger et al. // Science. 99 . - Vol. 284. - Issue 5411. - pp. 143-147

197. Muraglia, A. Clonal mesenchymal progenitors from human bone marrow differentiate in vitro according to a hierarchical model / A. Muraglia, R. Cancedda, R. Quarto // Journal of Cell Science. 2000. - Vol. 113 (Pt 7).-Issue 1161-1166

198. Muscle regeneration by bone marrow-derived myogenic progenitors / G. Ferrari et al. // Science. 98. - Vol. 279. - Issue 5356. - pp. 1528-1530

199. Nakashima, K. Mechanisms underlying cytokine-mediated cell-fate regulation in the nervous system / K. Nakashima, T. Taga // Molecular Neurobiology. 2002. - Vol. 25. - Issue 3. - pp.233-244

200. Nedergaard, M. Role of glial cells in cerebral ischemia / M. Nedergaard, U. Dirnagl // Glia. 2005. - Vol. 50. - Issue 4. - pp.281-286

201. Nestin expression after experimental intracerebral hemorrhage / T. Nakamura et al. // Brain Research. 2003. - Vol. 981. - Issue 1-2. - pp. 108-117

202. Nestin-positive mesenchymal stem cells favour the astroglial lineage in neural progenitors and stem cells by releasing active BMP4 / S. Wislet-Gendebien et al. // BMC Neuroscience. 2004. - Vol. 5. - Issue 33

203. Neurologic and neuropathology outcome after middle cerebral artery occlusion in rats / L. Persson et al. // Stroke. 89. - Vol. 20. - Issue 5. - pp. 641-645

204. Neuronal differentiation of bone marrow-derived stromal stem cells involves suppression of discordant phenotypes through gene silencing / H. Egusa et al. // Journal of Biological Chemistry. 2005. - Vol. 280. - Issue 25.-pp. 23691-23697

205. Neuronal replacement from endogenous precursors in the adult brain after stroke / A. Arvidsson et al. // Nature Medicine. 2002. - Vol. 8. -Issue 9. - pp. 963-970

206. Neurons derived from human mesenchymal stem cells show synaptic transmission and can be induced to produce the neurotransmitter substance P by interleukin-1 alpha / K. J. Cho et al. // Stem Cells. 2005. - Vol. 23. -Issue 3. - pp. 383-391

207. Nonstimulated human uncommitted mesenchymal stem cells express cell markers of mesenchymal and neural lineages / J. J. Minguell et al. // Stem Cells and Development. 2005. - Vol. 14. - Issue 4. - pp. 408-414

208. Novel markers for the prospective isolation of human MSC / H. J. Buhring et al. // Annals of the New York Academy of Sciences. 2007. -Vol. 1106.-Issue262-271

209. Novel therapies for acute ischemic stroke / R. R. Leker et al. // Israel Medical Association Journal. 2006. - Vol. 8. - Issue 11. - pp. 788-792

210. Nuclear transfer of adult bone marrow mesenchymal stem cells: developmental totipotency of tissue-specific stem cells from an adult mammal / Y. Kato et al. // Biology of Reproduction. 2004. - Vol. 70. -Issue 2. - pp. 415-418

211. O'Donoghue, K. Fetal stem cells / K. O'Donoghue, N. M. Fisk // Best Practice and Research Clinical Obstetrics and Gynaecology. 2004. - Vol. 18. - Issue 6. - pp.853-875

212. Odorico, J. S. Multilineage differentiation from human embryonic stem cell lines / J. S. Odorico, D. S. Kaufman, J. A. Thomson // Stem Cells.- 2001. Vol. 19. - Issue 3. - pp. 193-204

213. Owen, M. Stromal stem cells: marrow-derived osteogenic precursors / M. Owen, A. J. Friedenstein // Ciba Foundation Symposium. 1988. - Vol. 136. - Issue 42-60

214. Panickar, K. S. Astrocytes in cerebral ischemic injury: morphological and general considerations / K. S. Panickar, M. D. Norenberg // Glia. 2005.- Vol. 50. Issue 4. - pp.287-298

215. Park, K. I. Transplantation of neural stem cells: cellular & gene therapy for hypoxic-ischemic brain injury / K. I. Park // Yonsei Medical Journal. 2000. - Vol. 41. - Issue 6. - pp.825-835

216. Passier, R. Origin and use of embryonic and adult stem cells in differentiation and tissue repair / R. Passier, C. Mummery // Cardiovascular Research. 2003. - Vol. 58. - Issue 2. - pp.324-335

217. Paxinos G. ,Watson Ch.Paxinos G. The rat brain in stereotaxic coordinates. New York: Academic Press; 1998:474.

218. Pekny, M. Astrocyte activation and reactive gliosis / M. Pekny, M. Nilsson // Glia. 2005. - Vol. 50. - Issue 4. - pp.427-434

219. Persidsky, Y. Model systems for studies of leukocyte migration across the blood brain barrier / Y. Persidsky // Journal of Neurovirology. - 1999. -Vol. 5. - Issue 6. - pp.579-590

220. Persistent production of neurons from adult brain stem cells during recovery after stroke / P. Thored et al. // Stem Cells. 2006. - Vol. 24. -Issue 3. - pp. 739-747

221. Phenotypic and functional comparison of cultures of marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) and stromal cells / M. K. Majumdar et al. // Journal of Cellular Physiology. 98. - Vol. 176. - Issue 1. - pp. 57-66

222. Pittenger, M. F. Mesenchymal stem cells and their potential as cardiac therapeutics / M. F. Pittenger, B. J. Martin // Circulation Research. 2004. -Vol. 95. - Issue l.-pp.9-20

223. Plasticity of cultured mesenchymal stem cells: switch from nestin-positive to excitable neuron-like phenotype / S. Wislet-Gendebien et al. // Stem Cells. 2005. - Vol. 23. - Issue 3. - pp. 392-402

224. Postnatal bone marrow stromal cells elicit a potent VEGF-dependent neoangiogenic response in vivo / A. Al-Khaldi et al. // Gene Therapy.2003. Vol. 10. - Issue 8. - pp. 621-9

225. Properties of a fetal multipotent neural stem cell (NEP cell) / J. Cai et al. // Developmental Biology. 2002. - Vol. 251. - Issue 2. - pp. 221-240

226. Pro-regenerative properties of cytokine-activated astrocytes / C. M. Liberto et al. // Journal of Neurochemistiy. 2004. - Vol. 89. - Issue 5. -pp.1092-1100

227. Protective mechanisms of adenosine in neurons and glial cells / P. Schubert et al. // Annals of the New York Academy of Sciences. 97. -Vol. 825.-Issue 1-10

228. Pulsinelli, W. A. Temporal profile of neuronal damage in a model of transient forebrain ischemia / W. A. Pulsinelli, J. B. Brierley, F. Plum // Annals of Neurology. 1982. - Vol. 11. - Issue 5. - pp.491-498

229. Rat bone marrow mesenchymal stem cells express glial markers and stimulate nerve regeneration / M. Tohill et al. // Neuroscience Letters.2004. Vol. 362. - Issue 3. - pp. 200-203

230. Regeneration of hippocampal pyramidal neurons after ischemic brain injury by recruitment of endogenous neural progenitors / H. Nakatomi et al. // Cell. 2002. - Vol. 110. - Issue 4. - pp. 429-441

231. Regeneration of ischemic cardiac muscle and vascular endothelium by adult stem cells / K. A. Jackson et al. // Journal of Clinical Investigation. -2001,- Vol. 107. Issue 11. - pp. 1395-1402

232. Reyes, M. Characterization of multipotent adult progenitor cells, a subpopulation of mesenchymal stem cells / M. Reyes, C. M. Verfaillie // Annals of the New York Academy of Sciences. 2001. - Vol. 938. - Issue 231-233; discussion 233-235

233. Rice, C. M. Adult stem cells—reprogramming neurological repair? / C. M. Rice, N. J. Scolding // Lancet. 2004. - Vol. 364. - Issue 9429. - pp. 193199

234. Rippon, H. J. Embryonic stem cells / H. J. Rippon, A. E. Bishop // Cell Proliferation. 2004. - Vol. 37. - Issue 1. - pp.23-34

235. Roberts, I. Mesenchymal stem cells /1. Roberts // Vox Sanguinis. -2004. Vol. 87 Suppl 2. - Issue 38-41

236. Rodda, S. J. Embryonic stem cell differentiation and the analysis of mammalian development / S. J. Rodda, S. J. Kavanagh, J. Rathjen, P. D. Rathjen // International Journal of Developmental Biology. 2002. - Vol. 46. - Issue 4. - pp.449-458

237. Role and function of matrix metalloproteinases in the differentiation and biological characterization of mesenchymal stem cells / F. Mannello et al. // Stem Cells. 2006. - Vol. 24. - Issue 3. - pp. 475-481

238. Role of T lymphocytes and interferon-gamma in ischemic stroke / G. Yilmaz et al. // Circulation. 2006. - Vol. 113. - Issue 17. - pp. 2105-2112

239. Sasai, Y. Generation of dopaminergic neurons from embryonic stem cells / Y. Sasai // Journal of Neurology. 2002. - Vol. 249. - Issue Suppl 2. -pp.II41-44

240. Saving the ischemic penumbra: potential role for statins and phosphodiesterase inhibitors / F. Sallustio et al. // Current vascular pharmacology. 2007. - Vol. 5. - Issue 4. - pp. 259-265

241. Schwartz, M. Macrophages and microglia in central nervous system injury: are they helpful or harmful? / M. Schwartz // Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 2003. - Vol. 23. - Issue 4. - pp.385-394

242. Sell, S. Stem cell origin of cancer and differentiation therapy AS. Sell // Critical Reviews in Oncology/Hematology. 2004. - Vol. 51. - Issue 1. -pp. 1-28

243. Seshi, B. Human bone marrow stromal cell: coexpression of markers specific for multiple mesenchymal cell lineages / B. Seshi, S. Kumar, D. Sellers // Blood Cells, Molecules, and Diseases. 2000. - Vol. 26. - Issue 3. -pp.234-246

244. Shi, H. Cerebral tissue oxygenation and oxidative brain injury during ischemia and reperfusion / H. Shi, K. J. Liu // Frontiers in Bioscience. -2007. Vol. 12. - Issue 1318-1328

245. Silver, J. Regeneration beyond the glial scar / J. Silver, J. H. Miller // Nature Reviews Neuroscience. 2004. - Vol. 5. - Issue 2. - pp. 146-156

246. Slack, J. M. Stem cells in epithelial tissues / J. M. Slack // Science. -2000. Vol. 287. - Issue 5457. - pp.1431-1433

247. Specific induction of neuronal cells from bone marrow stromal cells and application for autologous transplantation / M. Dezawa et al. // Journal of Clinical Investigation. 2004. - Vol. 113. - Issue 12. - pp. 1701-1710

248. Stocum, D. L. Stem cells in regenerative biology and medicine / D. L. Stocum // Wound Repair and Regeneration. 2001. - Vol. 9. - Issue 6. -pp.429-442

249. Stoll, G. Inflammation and glial responses in ischemic brain lesions / G. Stoll, S. Jander, M. Schroeter // Progress in Neurobiology. 1998. - Vol. 56. - Issue 2. - pp. 149-171

250. Stroke-induced neurogenesis in aged brain / V. Darsalia et al. // Stroke. 2005. - Vol. 36. - Issue 8. - pp. 1790-1795

251. Survivin-dependent angiogenesis in ischemic brain: molecular mechanisms of hypoxia-induced up-regulation / E. M. Conway et al. // American Journal of Pathology. 2003. - Vol. 163. - Issue 3. - pp. 935-946

252. Swanson, R. A. Astrocyte influences on ischemic neuronal death / R. A. Swanson, W. Ying, T. M. Kauppinen // Current Molecular Medicine. -2004. Vol. 4. - Issue 2. - pp.193-205

253. Temporal and spatial differences of PSA-NCAM expression between young-adult and aged rats in normal and ischemic brains / K. Sato et al. // Brain Research. 2001. - Vol. 922. - Issue 1. - pp. 135-139

254. The dynamic in vivo distribution of bone marrow-derived mesenchymal stem cells after infusion / J. Gao et al. // Cells Tissues Organs. 2001. - Vol. 169. - Issue 1. - pp. 12-20

255. The profile of gene expression of human marrow mesenchymal stem cells / W. A. Silva et al. // Stem Cells. 2003. - Vol. 21. - Issue 6. - pp. 661-669

256. TNF-alpha and IL-8 in acute stroke and the modulation of these cytokines by antiplatelet agents / A. Al-Bahrani et al. // Current Neurovascular Research. 2007. - Vol. 4. - Issue 1. - pp. 31-37

257. Torres-Alemán, I. Serum growth factors and neuroprotective surveillance: focus on IGF-1 /1. Torres-Aleman // Molecular Neurobiology. 2000. - Vol. 21. - Issue 3. - pp.153-160

258. Touzani, O. The ischaemic penumbra / O. Touzani, S. Roussel, E. T. MacKenzie // Current Opinion in Neurology. 2001. - Vol. 14. - Issue 1. -pp.83-88

259. Transplantation of cultured neural cells from human fetuses into thebrain of rats exposed to acute hypoxia / M. A. Aleksandrova et al. // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2004. - Vol. 137. - Issue 3. - pp. 262-265

260. Transplantation of neural stem cells modulates apolipoprotein E expression in a rat model of stroke / M. Modo et al. // Experimental Neurology. 2003. - Vol. 183. - Issue 2. - pp. 320-329

261. Transplanted bone marrow generates new neurons in human brains / E. Mezey et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003. - Vol. 100. - Issue 3. - pp. 1364-1369

262. Treatment of stroke in rat with intracarotid administration of marrow stromal cells / Y. Li et al. // Neurology. 2001. - Vol. 56. - Issue 12. - pp. 1666-1672

263. Treatment of traumatic brain injury in female rats with intravenous administration of bone marrow stromal cells / A. Mahmood et al. // Neurosurgery. 2001. - Vol. 49. - Issue 5. - pp. 1196-1203; discussion 12031204

264. Trendelenburg, G. Neuroprotective role of astrocytes in cerebral ischemia: focus on ischemic preconditioning / G. Trendelenburg, U. Dirnagl // Glia. 2005. - Vol. 50. - Issue 4. - pp.307-320

265. Tsai, R. Y. Plasticity, niches, and the use of stem cells / R. Y. Tsai, R. Kittappa, R. D. McKay // Developmental Cell. 2002. - Vol. 2. - Issue 6. -pp.707-712

266. Turley, K. R. Molecular mechanisms in the pathogenesis and treatment of acute ischemic stroke / K. R. Turley, L. H. Toledo-Pereyra, R. U. Kothari // Journal of Investigative Surgery. 2005. - Vol. 18. - Issue 4. -pp.207-218

267. Wang, Q. The inflammatory response in stroke / Q. Wang, X. N. Tang, M. A. Yenari // Journal of Neuroimmunology. 2007. - Vol. 184. -Issue 1-2. - pp.53-68

268. Watt, F. M. Out of Eden: stem cells and their niches / F. M. Watt, B. L. Hogan // Science. 2000. - Vol. 287. - Issue 5457. - pp. 1427-1430

269. Weinstein, P. R. Molecular identification of the ischemic penumbra / P. R. Weinstein , S. Hong, F. R. Sharp // Stroke. 2004. - Vol. 35. - Issue 11 Suppl 1. - pp.2666-2670

270. Weissman, I. L. Stem and progenitor cells: origins, phenotypes, lineage commitments, and transdifferentiations /1. L. Weissman, D. J. Anderson, F. Gage // Annual Review of Cell and Developmental Biology. -2001. Vol. 17. - Issue 387-403

271. Wobus, A. M. Embryonic stem cells: prospects for developmental biology and cell therapy / A. M. Wobus, K. R. Boheler // Physiological Reviews. 2005. - Vol. 85. - Issue 2. - pp.635-678

272. Wulf, G. G. Somatic stem cell plasticity: current evidence and emerging concepts / G. G. Wulf, K. A. Jackson, M. A. Goodell // Experimental Hematology. 2001. - Vol. 29. - Issue 12. - pp. 1361-1370

273. Young, H. E. Adult stem cells / H. E. Young, A. C. Black Jr // The anatomical record. Part A, Discoveries in molecular, cellular, and evolutionary biology. 2004. - Vol. 276. - Issue 1. - pp.75-102

274. Zhang, J. Genetics of human hydrocephalus / J. Zhang, M. A. Williams, D. Rigamonti // Journal of Neurology. 2006. - Vol. 253. - Issue 10. -pp.1255-1266

275. Zwalca, T. P. A germ cell origin of embryonic stem cells? / T. P. Zwaka, J. A. Thomson // Development. 2005. - Vol. 132. - Issue 2. -pp.227-233

Информация о работе

Павличенко, Наталья Николаевна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2008
ВАК 03.00.25

Диссертация

Влияние трансплантации мезенхимных стволовых клеток на течение экспериментального инсульта у крыс - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы