Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние кадмия на морфофункциональные характеристики эритроцитов

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Тугарев, Аркадий Александрович

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Краткая характеристика кадмия.

1.2. Современные представления о влиянии кадмия на некоторые физиологические системы организма.

1.3. Механизмы токсичности кадмия.

1.4. Влияние кадмия на систему крови.

1.4.1. Морфофункциональная характеристика эритроцитов.

1.4.2. Воздействие кадмия на морфофункциональные характеристики эритроцитов.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика исследуемого материала.

2.2. Методика проведения эксперимента в условиях in vitro.

2.3. Методика проведения эксперимента в условиях in vivo.

2.4. Методы оценки морфологии эритроцитов.

2.5. Методы оценки функциональных свойств эритроцитов.

2.6. Метод определения кадмия в крови.

2.7. Методы статистической обработки результатов.

Глава 3. Разработка новых методических подходов оценки морфофункционального состояния эритроцитов периферической крови методом прижизненной компьютерной фазометрии.

3.1. Оптимизация метода компьютерной фазовой морфометрии.

3.2. Характеристика прижизненных фазово-интерференционных портретов эритроцитов периферической крови человека и животных.

Глава 4. Изучение влияния ионов кадмия на морфофункциональные характеристики эритроцитов периферической крови в условиях in vitro.

4.1. Характеристика изменения морфофункциональных показателей эритроцитов периферической крови крыс под влиянием различных концентраций ионов кадмия.

4.2. Характеристика изменения морфофункциональных показателей эритроцитов периферической крови практически здоровых доноров под влиянием различных концентраций ионов кадмия.

Глава 5. Изучение влияния ионов кадмия на морфофункциональные характеристики эритроцитов периферической крови крыс в условиях in vivo.

Глава 6. Изучение влияния ионов кадмия на морфофункциональные характеристики эритроцитов периферической крови человека в условиях in vivo.

6.1. Характеристика изменений морфофункциональных показателей эритроцитов периферической крови человека в условиях хронической экзогенной интоксикации ионами кадмия.

6.2. Характеристика изменений морфофункциональных показателей эритроцитов периферической крови человека в условиях хронической эндогенной интоксикации.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние кадмия на морфофункциональные характеристики эритроцитов"

Актуальность темы исследования.

В настоящее время одним из наиболее грозных факторов нарушения экологического равновесия является постоянное повышение содержания тяжелых металлов в биосфере. Они поступают в окружающую среду при сжигании горючих ископаемых (угля и нефти), в составе выхлопных газов автотранспорта, в результате деятельности металлургических производств, а также из-за широкого применения ядохимикатов и удобрений [9, 17, 21, 30, 52]. Токсическое действие различных соединений тяжелых металлов преимущественно обусловлено взаимодействием с белками организма, поэтому их часто называют белковыми ядами [21, 31]. Одним из таких металлов является кадмий.

Металлический кадмий и его соединения широко применяются для производства пигментов, нанесения защитных покрытий, в качестве стабилизатора пластмасс (особенно ПВХ), при изготовлении аккумуляторов и сплавов [9, 21, 52]. В то же время он обладает чрезвычайно высокими токсичными свойствами, вызывая поражения различных органов и физиологических систем. Сегодня известно его повреждающее действие на костную (заболевание "итай-итай"), легочную, эндокринную, репродуктивную, сердечно-сосудистую системы и на кровь [9, 11, 19, 21, 36, 47]. Кроме того, установлено, что кадмий обладает онкогенными и мутагенными свойствами [8, 9, 82, 112] . Однако эти сведения весьма противоречивы. Не до конца изучен механизм действия кадмия; нет критериев, позволяющих оценивать степень его токсичности; не установлен минимальный порог чувствительности к Cd2+.

Особого внимания заслуживают исследования влияния ионов кадмия на форменные элементы крови, из которых наибольший интерес представляют эритроциты [28, 39, 45, 47, 76, 98, 116].

Эритроциты являются самой многочисленной популяцией клеток в системе крови, определяющих структуру кровотока. Их морфо-функциональные изменения сопровождаются нарушением текучести крови, что сказывается на кровоснабжении различных органов и тканей [40, 42]. В этой связи проблема влияния кадмия на кровь приобретает весьма актуальное значение.

Эритроцит — универсальная модель для изучения процессов, происходящих на клеточной мембране под действием самых различных агентов. Детальное исследование изменений морфофункциональных показателей эритроцитов под влиянием различных химических раздражителей, с которыми человек сталкивается в процессе естественных взаимоотношений с природой, позволяет полнее установить возможные последствия и определить наиболее эффективные пути их коррекции в условиях действия эколого-химических факторов окружающей среды. Поэтому исследование влияния кадмия на морфофункциональные свойства эритроцитов представляет особый интерес.

Анализ современных тенденций развития науки показывает, что на первый план выходят новейшие компьютерные технологии, которые обладают высокой точностью, чувствительностью, оперативностью и информативностью, позволяют объективизировать получаемую научную информацию, выявлять и оценивать новые аспекты влияния различных факторов на морфофункциональные показатели изучаемых цитообъектов [2, 26].

Достаточно перспективной в этом отношении является компьютерная фазовая морфометрия, основанная на комплексном оптико-геометрическом подходе к прижизненному анализу морфофункциональных характеристик форменных элементов периферической крови [1,5].

Все вышеизложенное определило направление выбранного исследования и методические подходы к реализации поставленных научных задач.

Целью настоящей работы явились изучение прижизненного морфофункционального состояния эритроцитов при кадмиевой интоксикации и разработка комплекса критериев для оценки токсического влияния ионов кадмия на красные клетки периферической крови человека и животных.

Задачи исследования.

Для выполнения поставленной цели нами были поставлены следующие задачи:

1. Оценить особенности прижизненного морфофункционального состояния эритроцитов периферической крови человека и животных (крыс) методом компьютерной фазовой морфометрии;

2. Изучить влияние различных концентраций ионов кадмия на морфофункциональные показатели эритроцитов крови крыс и человека в исследованиях in vitro;

3. Выявить особенности изменений морфофункциональных показателей эритроцитов крови крыс под действием различных концентраций кадмия в исследованиях in vivo;

4. Провести сравнительный анализ изменений морфофункциональных показателей эритроцитов в условиях развития токсической анемии различного генеза (на моделях кадмиевой и уремической интоксикации);

5. Выявить наиболее информативные критерии для объективной оценки морфофункциональных нарушений эритроцитов в условиях кадмиевой интоксикации с использованием метода прижизненной компьютерной фазометриии.

Научная новизна работы.

Впервые исследовано влияние ионов кадмия на морфофункциональные показатели эритроцитов методом прижизненной компьютерной фазометрии.

Приведено научное обоснование некоторых аспектов воздействия ионов кадмия на клетки периферической крови.

Предложен комплекс информативных критериев для оценки токсического влияния ионов кадмия на морфофункциональные показатели эритроцитов периферической крови человека и животных.

Выделены и охарактеризованы три периода ответной реакции организма крыс в условиях длительной хронической интоксикации препаратом хлорида кадмия: «период накопления», «латентный период» и «период адаптации».

Полученные результаты расширяют существующие представления об общих механизмах действия кадмия с учетом клеточного и субклеточного уровней реализации токсических эффектов, позволяют оценить роль компенсаторно-приспособительных возможностей живого организма в условиях прогрессирующей интоксикации.

Практическое значение работы.

Проведена оптимизация метода прижизненной фазовой морфометрии клеток периферической крови и апробация его на практике для проведения цитодиагностики развития токсических состояний, а также при оценке эффективности и адекватности проводимых лечебных мероприятий.

Результаты исследования вошли в учебное пособие «Применение эпрекса (эпоэтин-альфа) при анемии у больных с терминальной стадией хронической почечной недостаточности».

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях семинара академгруппы при академике В.Н.Шабалине (совместно с кафедрой биофизики МГУ им. М.В. Ломоносова) «Фазометрия клеток переферической крови» (1999 — 2002), XVIII и XX научно-практических конференциях «Морфометрия в диагностике болезней» (Москва, Россия, 2000, 2002), IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, Россия, 2002), всероссийской конференции «Нефрология и диализ» (Санкт-Петербург, Россия, 2003).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ и 2 статьи находятся в печати.

Объем и структура диссертации.

Работа изложена на 132 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 рисунками и 14 таблицами. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, четырех глав, отражающих результаты собственных исследований и их обсуждения, общего заключения и выводов. Список цитируемой литературы включает 54 отечественных и 134 зарубежных источника.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Тугарев, Аркадий Александрович

ВЫВОДЫ

1. Выявлены особенности прижизненного морфофункционального состояния эритроцитов человека и крыс. Установлено, что оптико-геометрических показатели (фазовые диаметр, периметр, высота, площадь и объем) красных клеток крови человека превышают аналогичные показатели эритроцитов крыс. При этом индекс сферичности эритроцитов человека на 20% ниже, чем у крыс.

2. Установлено, что при направленном воздействии ионы кадмия оказывают выраженное влияние на морфофункциональные параметры эритроцитов периферической крови человека и животных, вызывая дозозависимое снижение диаметра, периметра, площади и увеличение фазовой высоты. Наиболее чувствительными к действию кадмия являются молодые эритроциты - «макроциты». Красные клетки крови человека обладают большей устойчивостью к действию токсиканта.

3. В экспериментах in vivo выделены и охарактеризованы три периода ответной реакции организма крыс в условиях длительной интоксикации препаратом хлорида кадмия: «период накопления» с выраженными изменениями оптико-геометрических показателей и функциональных параметров эритроцитов; «латентный период» — этап скрытого действия кадмия на эритропоэз без явных изменений морфофункционального состояния циркулирующих клеток; «адаптационный период» — медленное прогрессирование кадмийиндуцированных изменений морфофункциональ-ных показателей эритроцитов.

4. Хроническая кадмиевая интоксикация вызывает развитие токсической анемии, для которой характерно: изменение метрических параметров циркулирующих эритроцитов (диаметра, периметра и высоты клеток); микроцитоз (повышение числа микроцитов за счет истощения групп нормоцитов и молодых клеточных форм — макроцитов); увеличение интенсивности перекисного окисления липидов эритроцитарных мембран и снижение кислотной резистентности клеток; эхиноцитоз и снижение деформируемости клеток.

5. Установлено, что для токсических анемий различного генеза характерно уменьшение, диаметра, периметра и площади эритроцитов, снижение индекса сферичности, повышение уровня перекисного окисления липидов. Отличительной особенностью экзогенной кадмиевой интоксикации является увеличение фазовой высоты и объема эритроцитов.

6. Разработан комплекс критериев оценки морфофункционального состояния эритроцитов на основе данных прижизненной компьютерной фазометрии (оптико-геометрические параметры клеток, популяционный состав, соотношение морфологических классов) и функциональной характеристики клеточных мембран (кислотная резистентность, уровень перекисного окисления липидов), позволяющих не только установить наличие токсической анемии, но и дифференцировать ее различные варианты.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы в связи с активной техногенной деятельностью человека зарегистрировано повышение содержания кадмия и его соединений в окружающей среде. Этот факт вызывает обоснованное беспокойство со стороны специалистов, поскольку ионы кадмия, обладая кумулятивными свойствами [19, 30], могут оказывать токсическое действие на различные физиологические системы организма человека и животных. Значительное число современных научных исследований посвящено изучению влияния кадмия на легочную, сердечно-сосудистую, выделительную, опорно-двигательную системы [9, 21, 36, 174]. Предпринимались попытки установить патологическое действие кадмия и на систему крови, в частности, на эритроциты [23, 28, 39, 60, 88, 98, 109, 118]. Это самая многочисленная популяция клеток в кровотоке, оказывающая непосредственное влияние на физиологию различных органов и тканей. В связи с этим, изучение токсического действия кадмия на морфофункциональные свойства эритроцитов представляет особый интерес.

Известно, что морфометрические показатели различных цитообъектов являются высокоинформативными и объективными критериями оценки их функционального состояния [1, 26]. В связи с этим, исследование изменений структурно-объемных параметров клеток крови с применением современных автоматизированных методов, обладающих высокой точностью, чувствительностью и оперативностью, может иметь значение в плане получения новой объективной научной информации, касающейся особенностей клеточного реагирования на действие повреждающих токсических факторов.

Данное исследование посвящено изучению прижизненных показателей морфофункционального состояния эритроцитов и разработке на их основе критериев оценки токсического действия кадмия на красные клетки периферической крови человека и животных.

Для выявления специфического действия кадмия на эритроциты были использованы два методических подхода:

Первый - исследование морфометрических показателей клеток с помощью новейшей методики компьютерной лазерной фазово-интерференционной микроскопии, позволяющей анализировать живые клетки крови, и электронной микроскопии для детального изучения формы, структуры и поверхностной архитектоники эритроцитов;

Второй - анализ функциональных параметров клеток: определение кислотной резистентности эритроцитов, как показателя их устойчивости к гемолизу, методом кислотных эритрограмм и выявление уровня активизации перекисного окисления липидов мембран эритроцитов с помощью хемилюминесценции.

На первом этапе нашего исследования была проведена оптимизация метода прижизненной компьютерной фазометрии, повышающая его эффективность как в плане проведения методики измерений, так и учета полученных результатов на качественно новом уровне: разработана оптимальная среда, обеспечивающая достаточно длительное сохранение формы эритроцитов. Новый рабочий раствор представляет собой смесь 6% гидроксиэтилированного крахмала (HES 200/0.5, Serum-Werk Bernburg AG, Германия) с плазмой крови в соотношении 20:1; в пакет программ для анализа морфофункционального статуса клеток внесены существенные коррективы: визуализация четкого оконтуривания границ эритроцита и возможность количественной оценки клеточных групп, различных по величине их максимального диаметра.

На основе полученной базы данных проведен многофакторный анализ результатов измерений и охарактеризованы фазово-интерференционные портреты живых эритроцитов периферической крови человека и животных. Важно подчеркнуть, что размерные параметры фазово-интерференционного портрета содержат информацию не только о пространственно-объемных характеристиках клетки, но и ее оптических свойствах, в частности, о внутриклеточной анизотропии. А поскольку величина показателя преломления, измеряемая в каждой точке цитообъекта, непосредственно зависит от концентрации, химического состава, агрегатного состояния внутриклеточного вещества, наличия или отсутствия органелл и включений, изменение любого из указанных условий находит отражение в локальных трансформациях фазового изображения клетки и, соответственно, ее размерных параметров [5].

Установлено, что эритроциты практически здоровых людей по сравнению с красными клетками крови крыс обладают большими диаметром, периметром, высотой, площадью и объёмом (на 20, 19, 18, 35 и 50%, соответственно). При этом величина отношения площади поверхности эритроцита к его объёму (S/V) - «индекс сферичности», позволяющая косвенно оценить степень деформируемости клеток, у эритроцитов крыс практически на 20% превышает аналогичный показатель эритроцитов человека (1,57 и 1,26, соответственно).

Анализ размерных показателей эритроцитов периферической крови крыс показал, что их популяция представлена, преимущественно, нормоцитами — зрелые клетки с диаметром 6 — 8 мкм - 62% от общего числа. Микроциты — клетки с диаметром менее 6 мкм составляют около 10%, а количество макроцитов - физиологически более молодых клеток с диаметром более 8 мкм - 28%).

В периферической крови человека содержание «нормоцитов» (клеток с диаметром 8—10 мкм), «макроцитов» (с диаметром более 10 мкм) и «микро-цитов» (с диаметром менее 8 мкм) составило 80, 14, 6%, соответственно. Такое распределение клеток по диаметру в популяции соответствует кривой нормального распределения, или кривой Прайс-Джонса [54]. При нарушении эритропоэза и различных видах анемии происходит сдвиг кривой Прайс-Джонса вправо (макроцитоз) или влево (микроцитоз). Более пологая ее форма, появляющаяся в результате увеличения числа как макроцитов, так и микроцитов, характерна для анизоцитоза.

По данным морфологического анализа, популяция эритроцитов условно здоровых лиц состоит из 87% дискоцитов, 4% эхиноцитов, 8% сфероцитов и около 1% овалоцитов. Установлено также, что большинство эритроцитов интактных животных являются дискоцитами 62%, эхиноциты и стоматоциты составляют 18% и 5%, соответственно. Характерной чертой переферической крови крыс является наличие субпопуляции гребневидных и мишеневидных клеток - 14% и практически полное отсутствие сфероцитов (0-1%).

Полученные результаты легли в основу формирования контрольных групп при проведения экспериментов по исследованию влияния ионов кадмия на клетки красной крови.

В опытах in vitro были изучены изменения морфофункционального статуса эритроцитов периферической крови белых крыс линии Вистар и практически здоровых людей под воздействием широкого диапазона концентраций хлорида кадмия.

Проведенные эксперименты позволили установить, что:

1. Ионы кадмия оказывают выраженное дозозависимое влияние на морфофункциональные параметры эритроцитов периферической крови человека и животных, вызывая снижение диаметра, периметра, площади клеток и увеличение их фазовой высоты. Наиболее значимые отличия изучаемых показателей наблюдаются при действии максимальных концентраций CdCl2 (Ю^М/л - 10"2М/л).

2. Наиболее лабильными показателями при действии ионов кадмия являются диаметр и периметр клеток, изменения которых статистически достоверны даже при действии минимальных концентраций токсиканта.

Достоверные изменения высоты и площади клеток наблюдаются только при в концентрации кадмия 1 ОМ/л и выше. Изменения объема клеток при действии всех изученных концентраций были незначительными и недостоверными, что свидетельствует о малозначимости этого параметра эритроцитов при действии на них ионов кадмия.

3. Реализация токсических эффектов кадмия сопровождается изменением характера распределения красных клеток по величине максимального диаметра. При повышении концентрации CdCb происходит увеличение процентного содержания микроформ эритроцитов за счет истощения групп макро- и нормоцитов. Полученные результаты свидетельствуют о том, что наиболее чувствительными к кадмию являются макроформы, реагирующие даже на наименьшую концентрацию. Остальные группы клеток остаются практически индифферентными к данной концентрации.

4. Эритроциты крови практически здоровых доноров менее чувствительны к действию ионов Cd , чем клетки крыс. Это находит отражение в меньшем изменении их морфометрических показателей (максимального диаметра, периметра, фазовой высоты, площади и объема). Перестройка популяционного состава эритроцитов доноров под действием Cd2+ имеет ту же направленность, что и в эксперименте с эритроцитами крыс, но выражена слабее. Не исключено, что такая устойчивость обусловлена более стабильной структурой цитоскелета красных клеток периферической крови человека.

Таким образом, выявленные изменения показателей красных клеток крови, включающие в себя дозозависимое снижение диаметра и периметра клеток, уменьшение индекса сферичности, увеличение фазовой высоты и повышение содержания микроформ эритроцитов позволяют дать объективную характеристику морфофункционального состояния клеток в условиях прямого воздействия токсиканта (Cd2+) и могут служить универсальными критериями оценки активности (токсичности) ионов кадмия.

В литературе имеются данные, что структурно-объемная организация эритроцитов, особенно цитоскелет, нарушается кадмием, аккумулирующимся в мембранной фракции [87, 99]. Проникновение ионов этого металла в клетку вызывает инактивацию тех звеньев метаболизма, которые принимают непосредственное участие в поддержании структурной целостности эритроцита, в частности процессов энергетического обмена [98, 119]. При этом кадмий, стимулируя перекисное окисление липидов и изменяя состояние антиоксидантной системы, способствует выраженной лабилизации клеточных мембран [98, 123, 125, 126, 137].

Все эти процессы нашли отражение в зарегистрированных нами изменениях морфометрических параметров эритроцитов. Подробный анализ размерных показателей (диаметра, периметра, высоты, площади и объема) как на уровне отдельного эритроцита, так и с учетом популяционной перестройки клеток, позволил количественно оценить уровень токсичности каждой из используемых концентраций хлорида кадмия.

Результаты, полученные в экспериментальных исследованиях in vitro, имеют большое практическое значение для оценки реакции системы крови, изъятой из организма при направленном действии на неё различных концентраций ионов кадмия. Однако они не могут быть автоматически перенесены на живой организм. В этой связи нами были проведены исследования по изучению морфофункциональных характеристик эритроцитов крыс в условиях экспериментальной хронической интоксикации животных различными дозами хлорида кадмия.

Для изучения специфического действия кадмия в условиях in vivo был проведен хронический 3-х месячный эксперимент на четырех группах крыс линии Вистар с исходной массой 300±20 грамм (возраст 3 месяца). Поскольку в естественных условиях для индивидуума, не имеющего производственного контакта с кадмием, основным источником его поступления в организм являются пищевые продукты и вода, хлорид кадмия добавляли к пище 3 раза в неделю в концентрациях 1, 10 и 100 мкг/кг массы тела.

При оценке влияния ионов кадмия на морфофункциональный статус эритроцитов животных учитывали содержание Cd2+ в периферической крови крыс, оптико-геометрические параметры и морфологические особенности эритроцитов, интенсивность перекисного окисления липидов клеточных мембран, кислотную резистентность красных клеток крови.

Величину показателей определяли перед началом эксперимента (фоновые показатели) и на протяжении затравки (кратность обследования 1 раз в месяц).

При воздействии кадмия в условиях хронического эксперимента in vivo нами выделено 3 стадии реализации токсических эффектов Cd : «период накопления», «латентный период» и «период адаптации».

Период накопления» ионов металла, соответствующий первому месяцу эксперимента, характеризовался разнонаправленным действием изучаемых концентраций CdCh на большинство клеточных показателей.

Кадмий в минимальной концентрации увеличивал диаметр, периметр и площадь эритроцитов по отношению к исходным значениям на 9,1, 9,3 и 17,5%, соответственно. Средняя и максимальная концентрации, напротив, снижали эти показатели в тех же пределах.

Фазовая высота и объем клеток возрастали более чем на 30% во всех исследуемых группах. Индекс сферичности эритроцитов снижался под воздействием минимальной, средней и максимальной концентраций тяжелого металла на 14, 30,6 и 11%, соответственно, что свидетельствует об уменьшении деформируемости клеток.

Низкая концентрация Cd2+ вызывала увеличение количества макроцитов и снижение нормоцитов по сравнению с контролем 1 месяца наблюдения в 1,3 и 1,8 раза, соответственно. Под влиянием средней и максимальной концентраций процент макроцитов уменьшался в 1,8 и 5 раз, соответственно, а количество нормоцитов увеличивалось. Обращает на себя внимание появление и прогрессирующее увеличение числа микроцитов в популяции эритроцитов при действии средней и максимальной концентраций тяжелого металла. Этот факт наглядно иллюстрирует развитие микроцитарной анемии под действием кадмия.

Ч|

По данным электронной мироскопии при дозе Cd 1 мкг/кг морфологический состав популяции эритроцитов практически не отличался от контрольной группы за исключением увеличения более чем в 2 раза числа гребневидных и мишеневидных эритроцитов. Повышение дозы ионов кадмия приводило к снижению содержания дискоцитов, особенно заметное при действии максимальной концентрации (в 3,2 раза), и росту количества эхиноцитов в 1,3 — 4 раза при действии средней и максимальной концентраций CdCl2, соответственно.

Параметры перекисной хемилюминесценции в этом периоде уменьшались при действии всех трех концентраций, подтверждая факт снижения перекисного окисления липидов в эритроцитах. Так, максимальная интенсивность свечения при действии минимальной, средней и максимальной концентрации хлорида кадмия составляла 86,8, 75,6 и 59,3% от контрольных значений, соответственно. Общая светосумма импульсов также снижалась в 1,4 - 2 раза.

Показатели кислотной резистентности эритроцитов в группах наблюдения изменялись прямо противоположно: при действии CdCl2 в концентрации 1 мкг/кг устойчивость клеток к кислотному гемолизу повышалась, а при действии CdCU в концентрации 10 и 100 мкг/кг снижалась.

Различия в действии малых и высоких доз хлорида кадмия, наблюдаемые в этом периоде, по-видимому, могут объясняться тем, что микроконцентрации токсиканта способствуют активации эритропоэза и обладают некоторым мембранопротективным действием на красные клетки крови. При увеличении концентрации Cd2+ эти эффекты полностью исчезают.

В «латентном периоде» (2-ой месяц эксперимента) наблюдались незначительные колебания оптико-геометрических показателей эритроцитов. Из них достоверными являлись лишь изменения параметров клеток, вызванные действием минимальной концентрации кадмия: снижение диаметра (на 5%), периметра (на 5,6%), площади (на 10,5%) и увеличение высоты и объема клеток (на 19,3% и 21,1%, соответственно). Уменьшение индекса сферичности, наблюдаемое под действием кадмия в течение всего эксперимента, в этом месяце достигало 73,8% от контрольных значений (CdCl2 - 1 мкг/кг).

Количество микро-, нормо- и макроцитов возвращалось к их контрольных значениям. Интересно отметить обнаружение субпопуляции микроцитов (7%) только при действии минимальной концентрации кадмия.

По данным электронной микроскопии в этом периоде восстанавливалось соотношение морфологических форм эритроцитов, характерное для контрольной группы.

Показатели хемилюминесценции возрастали, иллюстрируя более высокий уровень перекисного окисления липидов мембран клеток. Минимальная и средняя концентрации токсиканта увеличивали интенсиность хемилюминесценции (на 18 и 19%, соответственно) и общую светосумму импульсов (на 20 и 24%, соответственно).

Увеличение максимальной скорости (на 16 и 27%, соответственно) и сокращение времени гемолиза (на 10,5 и 11,5%, соответственно) свидетельствовали о снижении кислотной резистентности эритроцитов при действии CdCb в концентрациях 1 и 10 мкг/кг. Изменение этих параметров под влиянием кадмия в максимальной концентрации носило недостоверный характер.

Следует подчеркнуть, что отсутствие явных изменений морфометрических параметров эритроцитов не исключает скрытого токсического действия кадмия на эритропоэз в «латентном периоде».

Известно, что после воздействия кадмия в предшественниках эритроцитов - эритробластах происходит синтез металлотионинов -белковых тиопроизводных кадмия. Поскольку предварительно введённая доза индуцирует синтез металлотионинов, в дальнейшем большая часть поступающего в организм кадмия оказывается связанной с этими белками, и только меньшая способна воздействовать на различные структуры клетки. Именно это обстоятельство и объясняет довольно высокую сопротивляемость хроническому воздействию кадмия по сравнению с острой токсичностью [9, 19]. Толерантность к кадмию имеет генетический механизм. Повторные дозы вызывают активацию генов, кодирующих металлотионины и скорость транскрипции с этих генов [19, 140].

В «период адаптации» (3-ий месяц наблюдения) изменения эритроцитов периферической крови крыс носили следующий характер: диаметр и площадь клеток под действием кадмия (1, 10 и 100 мкг/кг) увеличивались в среднем на 3 — 4% и 8 - 9%, соответственно. Периметр, высота и объем эритроцитов оставались на уровне контрольных величин. Возрастало значение индекса сферичности эритроцитов (на 5 — 18 - 9%, соответственно). Количество нормоцитов во всех группах незначительно повышалось на фоне некоторого (в пределах 5 - 6%) снижения числа макроцитов.

Электронная микроскопия также не выявила значимых отличий от контроля в распределении эритроцитов по отдельным субпопуляциям. Не исключена возможность, это является следствием адаптации животных к длительному воздействию тяжелого металла.

Интенсивность перекисьзависимой хемилюминесценции эритроцитов была высокой во всех группах наблюдения, обуславливая активацию перекисного окисления мембран эритроцитов. Это отразилось также и на показателях кислотной резистентности эритроцитов — максимальная скорость гемолиза увеличивалась незначительно, а время 50 и 100% гемолиза уменьшалось на 18-10 — 16%и 15-10-12%, соответственно.

Таким образом, зарегистрированные нами изменения морфофункционального статуса эритроцитов периферической крови крыс можно рассматривать в качестве особенностей ответной реакции эритрона на длительное воздействие различных концентраций кадмия. Так, для состояния кадмиевой интоксикации является характерным: изменение метрических параметров циркулирующих эритроцитов (особенно диаметра, периметра и высоты клеток); микроцитоз (повышение числа микроцитов за счет истощения групп нормо- и макроцитов — молодых клеточных форм); увеличение интенсивности перекисного окисления липидов эритроцитарных мембран и снижение кислотной резистентности клеток; эхиноцитоз и снижение деформируемости клеток, т.е. типичные признаки развития токсической анемии. При этом, поскольку уровень изменения перечисленных показателей непосредственно зависит от действующей концентрации ионов металла, возможность выявления и регистрации ранних изменений в организме, происходящих при воздействии этого токсиканта, имеет большое значение.

Одним из основных антропогенных источников эмиссии кадмия в биосферу считается производство стали и цветных металлов. Поэтому основную группу риска составляют длительно работающие сотрудники металлургических предприятий, подверженные разным уровням воздействия этого металла.

Ещё один источник кадмия - сигаретный дым. Общее загрязнение кадмием организма курильщика с большим стажем курения примерно в 2 — 3 раза больше, чем у некурящего [19].

В связи с этим комплекс предложенных нами критериев оценки морфофункционального состояния эритроцитов был апробирован при изучении влияния ионов кадмия на красные клетки периферической крови человека в условиях экзогенной хронической кадмиевой интоксикации. Нами обследованы мужчины-курильщики «со стажем» более 10 лет и работники металлургического производства, которые в силу естественных причин имели длительный (10 и более лет) контакт с соединениями кадмия. В качестве группы сравнения были также проанализированы клетки крови больных хронической почечной недостаточностью (ХПН) в терминальной стадии как пример хронической интоксикации иного генеза (эндогенной уремической интоксикации).

Анализ размерных параметров фазово-интерференционных портретов эритроцитов периферической крови в наблюдаемых нами группах людей выявил, что у курильщиков величины диаметра, периметра и площади эритроцитов оставались в пределах значений контрольной (донорской) группы. Однако при этом отмечалось увеличение средних по популяции значений фазовой высоты и объема клеток по сравнению с соответствующими показателями практически здоровых доноров на 8 и 15%, соответственно.

Высота и особенно объем эритроцитов — параметры отражающие содержание гемоглобина в клетках. Чем больше объем клетки, тем выше содержание гемоглобина в ней. Известно, что Cd2+ имеет большое сродство к гемоглобину, в силу этого обстоятельства последний успешно конкурирует за связывание кадмия со всеми биолигандами, за исключением металлотионинов [9, 21]. Вероятно, нарушение ионами кадмия строения белковых цепей гемоглобина приводит к компенсаторному увеличению количества этого белка в клетках, что необходимо для обеспечения сохранения кислородного гомеостаза.

У работников металлургического производства наблюдалась иная морфологическая картина: диаметр, периметр и площадь клеток достоверно снижались на 4, 5 и 7%, соответственно. Высота и объем клеток увеличивались, как и в группе курильщиков, но эти изменения были выражены слабее (4 и 9% против 8 и 15%, соответственно).

Важно подчеркнуть, что у лиц, подверженных длительному воздействию Cd2+ (и у курильщиков, и у рабочих), регистрировалось значительное снижение индекса сферичности эритроцитов (на 14%) по сравнению с практически здоровыми донорами, что свидетельствует о снижении деформируемости клеток.

Популяционный анализ эритроцитов по величине их диаметра показал, что у курильщиков содержание макроформ повышалось до 22% (в контроле — 14%), количество же микро- и нормоцитов изменялось незначительно и составляло 4 и 74%, соответственно (в контроле - 6 и 80%). Так как макроциты представлены преимущественно молодыми незрелыми клетками, то в данном случае можно говорить о признаках стимуляции эритропоэза.

Известно, что в условиях отравления табачным дымом у людей с нормальным гемоглобином, неумеренно курящих (больше одной пачки сигарет в день), в результате активации эритропоэза может развиться эритроцитоз. В эритроцитах повышается содержание Cd-гемоглобина и СО-гемоглобина, не переносящих кислород, и увеличение общей эритро-цитарной массы обеспечивает потребность организма в кислороде [37].

У рабочих, напротив, число микроцитов увеличивалось до 11 % по сравнению с контрольной группой (6%), а количество макроцитов снижалось до 8% (14% в контроле). При этом содержание нормоцитов не отличалось от значений донорской группы. По-видимому, токсическое действие ионов кадмия проявляется не только в компенсаторной стимуляции эритропоэза, но также и в уменьшении срока жизни циркулирующих эритроцитов за счет ускорения связанных с возрастом изменений красных клеток крови -увеличениия числа микроцитов и снижения деформируемости клеток. Подобная картина наблюдалась и в хроническом эксперименте на крысах при действии средней и максимальной концентрации хлорида кадмия после первого месяца затравки.

Хемилюминесцентный анализ крови, характеризующий равновесие между интенсивностью свободнорадикальных окислительных процессов и активностью антиоксидантных систем, показал, что у людей с кадмиевой интоксикацией была повышена интенсивность перекисной хемилюминесценции эритроцитов. И у курильщиков, и у рабочих установлено увеличение интенсивности хемилюминесценции по сравнению с контрольными значениями на 20,1 и 22,5%, соответственно, а величины светосуммы импульсов на 5,3 и 22,6%, соответственно.

Стимуляция перекисного окисления липидов кадмием может быть связана с его ингибирующим воздействием на некоторые ферменты-антиоксиданты. Известно, что активность эритроцитарной супероксид-дисмутазы и каталазы под воздействием кадмия уменьшается. [73, 98, 125]. Еще одна причина усиления окислительного повреждения клеток кроется в истощении содержания глутатиона в эритроцитах при кадмиевой обработке [70, 85, 126]. Глутатион принимает участие во всех основных процессах, связанных с сохранением структуры эритроцита. Способный легко окисляться, он защищает от окисления и инактивации ряд ферментов, содержащихся в эритроците и имеющих сульфогидрильные группы.

Таким образом, нами установлено, что у людей, подверженных риску хронической экзогенной интоксикации кадмием, наблюдаются изменения морфофункциональных параметров эритроцитов периферической крови. Увеличение высоты и объема эритроцитов, особенно заметное у курильщиков, по-видимому, связано как с увеличением концентрации внутриклеточного гемоглобина, так и с нарушением электролитного баланса клеток. Повышенное содержание макроцитов — физиологически более молодых клеток - свидетельствует об активации процессов эритропоэза, что, вероятно, является компенсаторной реакцией организма на воздействие ионов кадмия. Зарегистрированное нами уменьшение соотношения площади поверхности клетки к ее объему (индекс сферичности), указывает на снижение способности эритроцитов к деформации, что отрицательно сказывается на их микроциркуляции.

Результаты хемилюминесцентного анализа клеток позволяют говорить о существенной активации ПОЛ в эритроцитах крови человека кадмием, что может быть следствием снижения антиокислительной ферментативной активности клеток.

Совокупность зарегистрированных нами изменений показателей морфофункционального состояния эритроцитов свидетельствует о развитии симптомов токсической анемии, вызванной хронической кадмиевой интоксикацией.

Развитие токсической анемии является одним из наиболее характерных осложнений и у больных хронической почечной недостаточностью (ХПН) [15, 16, 44]. Ее прогрессирование непосредственно связано с угнетением эритропоэза, а также с уменьшением срока жизни циркулирующих эритроцитов вследствие ряда причин, одной из которых является влияние на клетки токсических веществ плазмы. Развитие анемии на клеточном уровне сопровождается снижением активности мембраносвязанных ферментов, уменьшением содержания липопротеидов, изменением внутриклеточного метаболизма, нарушением эластичности эритроцитов и т.д. [43, 44].

Для нас представлялось важным сравнить явления перестройки морфофункционального состояния эритроцитарного звена в условиях токсической анемии экзогенного (интоксикация кадмием) и эндогенного (хроническая почечная недостаточность) генеза.

Анализ размерных параметров фазово-интерференционных портретов живых функционирующих клеток у больных ХПН выявил, что средние по популяции значения фазовой высоты и объема эритроцитов периферической крови у больных ХПН по сравнению с соответствующими показателями контрольной группы были снижены в среднем на 10 и 13%, соответственно. Диаметр и периметр эритроцитов оставались практически неизменными. Площадь клеток уменьшалась на 5%. Коэффициент сферичности снижался относительно контроля на 10%.

Зарегистрированное нами снижение таких показателей как фазовая высота и объем эритроцитов, непосредственно связанных с содержанием внутриклеточного гемоглобина, было подтверждено и лабораторными данными (уменьшением уровня внутриклеточного гемоглобина и гемоглобина цельной крови).

Популяционный анализ показал, что в периферической крови больных ХПН количество «нормоцитов» уменьшалось до 71% (80% у доноров), а «макро-» и «микроцитов» составляло 17 и 12% (против 14% и 6% в контрольной группе). Увеличение «макроцитов» демонстрирует несколько повышенное содержание молодых незрелых эритроцитов. Снижение количества «нормоцитов» и увеличение практически в два раза «микроцитов» могут свидетельствовать о функциональной неполноценности циркулирующих клеток и ускорении возрастных изменений клеток красной крови.

Кроме того, у больных ХПН наблюдалось значительное снижение содержания дискоцитов (42%), увеличение эхиноцитов (12%) и сфероцитов (44%>), т.е. выраженный пойкилоцитоз со сфероцитозом — преобладанием предгемолитических форм, обладающих сниженным внутриклеточным метаболизмом и дефектами мембранных липидов. Высокий процент обратимо трансформированных клеток (эхиноцитов) вызван, по-видимому, совместным действием как внутренних (уменьшение АТФ, накопление кальция), так и внешних (различные плазменные агенты) факторов.

Особенности эритроцитов при ХПН, выявленные с помощью хемилюминесцентного анализа, носили следующий характер: максимальная интенсивность и общая светосумма импульсов достоверно возрастали на 9% и 5%, соответственно, а время перекисной хемилюминесценции эритроцитов уменьшалось на 14%. По-видимому, увеличение интенсивности внутриклеточного метаболизма, наряду с пониженной активностью мембраносвязанных ферментов, приводит к усилению перекисного окисления липидов. Кроме того, при функционировании эритроцитов в условиях уремической плазмы происходит истощение антиоксидантной системы клеток, что в итоге является причиной снижения защиты клеток от повреждающего действия свободных радикалов и перекисного окисления.

Параллельно были проанализированы традиционные гематологические показатели, эритроцитарные индексы и некоторые параметры гомеостаза у больных ХПН. Выявленное снижение числа эритроцитов, уровня гемоглобина и величины гематокрита являются классическими признаками токсической уремической анемии. Кроме того, развитие неспецифического хронического эндотоксикоза сопровождалось накоплением продуктов азотистого метаболизма, дисэлектролитемией и склонностью к ацидозу.

Резюмируя вышеизложенное, можно утверждать, что использованные нами показатели являются объективными и высокоинформативными критериями оценки морфофункционального состояния эритроцитов периферической крови в условиях нормы и патологии, в данном случае токсической анемии. Анализ полученных данных позволяет выявить черты сходства и различия хронической интоксикации эндогенного и экзогенного характера.

Является очевидным, что во всех наблюдаемых группах людей (курильщики, рабочие металлургического производства, больные ХПН) зарегистрированы общие признаки анемии, с характерным достоверным уменьшением величин периметра и площади эритроцитов, снижением индекса сферичности клеток, повышением уровня перекисного окисления липидов. Уменьшение диаметра эритроцитов и увеличение содержания микроцитов также являются важной составляющей развития анемического состояния, за исключением хронических курильщиков. Зарегистрированная тенденция к увеличению среднего по популяции диаметра клеток и, соответственно, повышенное содержание макроцитов в этой группе указывает на активацию процессов эритропоэза, что, по-видимому, является реакцией организма на воздействие микродоз ионов кадмия.

В то же время изменения таких оптико-геометрические параметров как высота и объем эритроцитов четко демонстрируют особенности реакции красных клеток крови на действие различных токсических агентов. В условиях кадмиевой интоксикации (и у курильщиков, и у рабочих) отмечается увеличение этих показателей, степень выраженности которых непосредственно связана с уровнем Cd в организме. При эндогенной уремической интоксикации высота и объем эритроцитов достоверно снижаются.

Таким образом, предложенный нами комплекс критериев оценки морфофункционального состояния эритроцитов (оптико-геометрические параметры клеток, популяционный состав, соотношение морфологических классов) в совокупности с функциональной характеристикой мембраны клетки позволяют не только установить наличие токсической анемии, но и дифференцировать ее различные варианты (кадмиевая экзогенная интоксикация у курильщиков и рабочих и эндогенная интоксикация у больных ХПН). Подробная характеристика морфофункционального состояния красных клеток крови дает возможность выявить степень тяжести анемических состояний и может служить для оперативной и объективной оценки воздействия токсикантов на систему крови и организм в целом.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Тугарев, Аркадий Александрович, Москва

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.: Медицина, 1990. — 384 с.

2. Авцын А.П., Строчкова J1.C., Жаворонков А.А. Клеточный гомеостаз и микроэлементы // Архив патологии. 1988. - Т. L, № 9. - С. 6 - 11.

3. Богомазов М.Я., Волкова Н.А. Особенности метаболизма кадмия при различных путях его поступления в организм // Научные труды Московской ветеринарной акад. М., 1983. - Т. 102, С. 35.

4. Боровская И.Н. Антиокислительная система организма, ее значение // Вестник РАМН. 1995. - № 6. - С. 53 - 60.

5. Верболович В.П., Макашев Ж.К., Петренко Е.П. Зависимость резистентности эритроцитов от активности антиокислительных ферментов // Гематология и трансфузиология. — 1985. Т. 30, № 5. - С. 31 — 35.

6. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. — 252 с.

7. Волкова Н.А., Карплюк И.А. Изучение мутагенной активности кадмия при пероральном поступлении // Российский медицинский журнал. 1990. — №5.-С. 74-75.

8. Воробьева Р.С. Кадмий. М.: Наука, 1984. - 48 с.

9. Ю.Воробьева Р.С., Бубнова Н.И. Действие на организм элементарного и теллуристого кадмия // Гигиена труда и профессиональные заболевания. — 1981. -№ 2. С. 42-43.

10. П.Воробьева P.C., Еремеева Е.П. Состояние сердечно-сосудистой системы при воздействии кадмия // Гигиена и санитария. 1980. - № 10. - С. 22 -24.

11. Воробьева Р.С., Шабалина Л.П. Сравнительная токсичность соединений кадмия // Актуальные проблемы гигиены труда. — М., 1978. — С. 14-18.

12. И.Гонский Я.И. Влияние хлорида кадмия на интенсивность тканевого дыхания гомогенатов печени и мозга крыс // Украинский биохимический журнал. 1980. - Т. 52. - № 6. - С. 706 - 710.

13. Гончарова Е.И., Пинаев Г.П. Белки цитоскелета эритроцитов // Цитология. 1988. -Т. 30. -№ 1.-С. 5- 18.

14. Гринштейн Ю.И., Калинина И.А., Витман Т.В. Деформируемость эритроцитов у больных острой и хронической почечной недостаточностью // Терапевтический архив. 1986. - Т. 58. - № 12. - С. 91 - 93.

15. Гудим Т.В., Ландарь В.А., Ряполова И.В., Козинец Г.И. Поверхностная архитектоника и деформируемость эритроцитов у больных с терминальной стадией хронической почечной недостаточности // Лабораторное дело. 1989. -№ 9. - С. 35 - 38.

16. Длин В.В., Османов И.М. Роль тяжелых металлов в формировании заболеваний у детей // Российский медицинский журнал. 1997. - № 6. — С. 48-50.

17. Дубинина Е.Е. Антиокислительная система плазмы крови // Укр. Биохимический журнал. Киев, 1992. — Т. 64. - № 2. - С. 3 - 15.

18. Ершов Ю.А., Плетенева Т.В. Механизмы токсического действия неорганических соединений. -М.: Медицина, 1989. 270 с.

19. Журавлев А.К., Шерстнев М.П. Метод регистрации перекисной хемилюминесценции плазмы крови // Лабораторное дело. 1985. - № 7. -С. 586-587.21.3игель X., Зигель А. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов / Пер. с англ. М.: Мир, 1993. С. 147- 152.

20. Иванов Н.И. Эстафетные механизмы в процессах ПОЛ биологических мембран // Вопросы медицинской химии. 1984. - Т. 25. - Вып. 4. -С. 80-84.

21. Ильинов А.Н., Рязанов И.А., Осипов, А.Н. Кислотные эритрограммы мышей при отравлениях Zn, Cd и Pb // Токсикологический вестник. — 1997.-№4.-С. 10- 14.

22. Калиничева В.И., Аладышева Т.В. Механизмы регуляции перекисного окисления липидов // Педиатрия. — 1985. №11. - С. 69 - 72.

23. Кобелева Н.А. Оценка реакций гонад и щитовидной железы на действие хлорида кадмия по микроморфометрическим показателям // Эндокринная система организма и токсические факторы внешней среды. Тезизы научной конференции. Л. - 1980. - С. 151 - 156.

24. Козинец Г.И., Погорелов В.М., Шмаров Д.А. и др. Клетки крови -современные технологии их анализа. М.: Триада - фарм. - 2002. — С. 465-505.

25. Козинец Г.И., Быкова И.А., Шапранова Э.Д. и др. Влияние на эритрон различных экологических факторов по данным интерферометрии эритроцитов // Гематология и трансфузиология. 1987. - Т. 32, № 11. — С. 39-43.

26. Костенко В.Г., Яковлева В.И. Морфологическая и функциональная характеристика изменений эритроцитов мышей in vitro в присутствии двухвалентных ионов ртути и кадмия // Цитология. 1971. — Т. 13, № 12. — С. 1475- 1482.

27. Крымский Л.Д., Нестайко Г.В., Рыбалов А.Г. Растровая электронная микроскопия крови и сосудов. М.: Медицина, 1976. - 275 с.

28. Левина Э.Н. Общая токсикология металлов. — Л.: Медицина, 1982. 240 с.

29. Ликутова И.В., Белова Е.А. Специфическое действие кадмия при пер-оральном поступлении в организм с водой // Гигиена и санитария. 1984. - № 7. - С. 70-72.

30. Литвинов Н.Н., Казачков В.И., Гасимова З.М. Морфофункциональное состояние системы мононуклеарных фагоцитов крыс при эмбриотоксичес-ком воздействии кадмия // Арх. Анатомии, гистологии и эмбриологии. — 1990.-Т. 98, № 1.-С. 60-67.

31. Марри Р., Греннер Д., Мейс П., Родуэли В. Биохимия человека. В 2-х томах/Пер. с англ.-М.: Мир, 1993.-Т. 2.-С. 199-204.

32. Микоэлян Э.М., Шалджян A.JL ПОЛ в эритроцитарных мембранах и крови при стрессе // Экспериментальная и клиническая медицина. — 1984. Т. 24, № 2. - С. 123 - 130.

33. Мильчаков В.И., Дементьев И.И., Трекова Н.А. Перекисное окисление липидов и хемолюминесценция плазмы крови при ИК // Вопросы мед. Химии. 1986. - Т. 32. - Вып. 1. - С. 21 - 26.

34. Михалева Л.М. Кадмийзависимая патология человека // Арх. патологии. -1988. Т. 50, № 9. - С. 81 - 85.

35. Моисеева О.И. Транспорт кислорода кровью (роль эритроцитов) // Физиологический журнал СССР им. И.М. Сеченова. 1986. - Т. 72, № 1. -С. 93- 103.

36. Павлова О.Е. Влияние озона на реологические свойства крови: Дисс. канд. биол. наук. -М., 1998. 139 с.

37. Ройтман Е.В., Дементьева И.И., Азизова О.А. и др. Изменение реологических свойств крови и осмотической резистентности эритроцитов приактивации свободнорадикальных процессов // Клиническая лабораторная диагностика. 2001. - № 3. - С. 42 - 43.

38. Савушкин А.В. Влияние нативного яда некоторых представителей аспидовых змей на реологические свойства крови: Дисс. канд. биол. наук. М., 1999.- 143 с.

39. Самойлов М.В., Наумов А.Г. Морфофункциональная характеристика эритроцитов как критерий тяжести эндогенной интоксикации // Российский медицинский журнал. 2000. - №1. - С. 31 - 33.

40. Самойлов М.В., Данилков А.П., Кудрявцев Ю.В., Наумов А.Г. Морфологические особенности эритроцитов при гемосорбции у больных с хронической почечной недостаточностью и гнойной интоксикацией // Урология и нефрология. 1993. - №1. - С. 34 - 37.

41. Седачев В.Г., Неменко Б.А., Гончаров Н.П. Некоторые гематологические показатели при действии тяжелых металлов // Гигиена труда, профессиональная патология и токсикология. Сборник трудов. — Алма-Ата, 1984.-С. 150-151.

42. Соколовский В.В., Давлетов Э.Г. О механизме гемолитического действия тяжелых металлов // Цитология. 1974. - Т. 16, № 5. - С. 648 - 650.

43. Софронов В.Г., Титов В.В., Хасанова P.M. Морфологические и биохимические показатели крови при отравлении белых крыс соединениями свинца, кадмия и ртути // Актуальные проблемы ветеринарной науки. Тезисы докладов. -М., 1999. С. 73 — 74.

44. Сторожок С.А., Соловьев С.В. Структурные и функциональные особенности цитоскелета мембраны эритроцита // Вопросы медицинской химии. 1992.-Т. 38.-Вып. 2.-С. 14-17.

45. Тычинский В.П. Когерентная фазовая микроскопия внутриклеточных процессов // Успехи физических наук. 2001. - Т. 171, №6. — С. 649 - 662.

46. Тычинский В.П. Компьютерный фазовый микроскоп. -М.: Знание, 1989. — 63 с.

47. Черницкий Е.А. Структура и функции эритроцитарных мембран. — Минск, 1981.-215с.

48. Шабалина Л.П. Вопросы гигиены труда и промышленной токсикологии при получении и применении соединений кадмия: Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1967. - 27с.

49. Шерстнев М.П., Ли B.C., Халилов Э.М. и др. Хемилюминесценция эритроцитов разного возраста в присутствии перекиси водорода // Пробл. Гематологии и переливания крови. 1982. — Т. 27, № 10. — С.50 — 52.

50. Шмидт Р., Тевс Г. Физиология человека. В 3-х томах / Пер. с англ. М.: Мир, 1996. - Т. 2, - С. 414 - 453.

51. Akerman К.Е., Honkaniemi J., Scott I.G. et al. Interaction of Cd2+ with the calmodulin-activated (Ca2++ Mg2+)-ATPase activity of human erythrocyte ghosts // Biochim. Biophys. Acta. 1985. - V. 845, № 1. - P. 48 - 53.

52. A1-Nasser Ibrahim A. Cadmium hepatotoxity and alteration of the mitochondrial function // J. Toxicol. Clin. Toxicol. 2000. - V. 38, №4. -P. 407-413.

53. Amoruso M.A., Witz G., Goldstein B.D. Alteration of erythrocyte membrane fluidity by heavy metal cations // Toxicol. Ind. Health. 1987. - V. 3, № 1. -P. 135- 144.

54. An X., Lecomte M.C., Chasis J.A. et al. Shear-response of the spectrin dimer-tetramer equilibrium in the red blood cell membrane // J. Biol. Chem. 2002. -V. 277, № 35. - P. 31796 - 31800.

55. Asami K., Yamaguchi T. Electrical and morphological changes of human erythrocytes under high hydrostatic pressure followed by dielectric spectroscopy // Ann. Biomed. Eng. 1999. - V. 27, № 4. - P. 427 - 435.

56. Arkowitz R., Hoehn-Berlage M., Gersonde K. The effect of cadmium ions on 2,3-bisphosphoglycerate in erythrocytes studied with 31P NMR // FEBS Lett. -1987.-V. 217, № 1.-P. 21 -24.

57. Arkowitz R., Gersonde K. Effect of cadmium ions on dioxygen affinity and polyphosphate activity of human red blood cells // Blut. 1988. - V. 56, № 4. — P. 185- 190.

58. Bartoss G., Swierozynsky В., Goudko R. Aging of the erythrocyte. Cation content // Experimentia. 1981. - V. 37, № 10. - P. 723 - 724.

59. Baumann M. The role of human red blood cell membrane skeletal proteins in repetitive membrane strain and rupture // Mol. Membr. Biol. 2002. - V. 19, №2.-P. 149-153.

60. Bennett V., Baines A.J. Spectrin and ankyrin-based pathways: Metazoan inventions for integrating cells into tissues // Phisiol. Rev. 2001. - V. 81, № 3. - P. 1353- 1392.

61. Bernard A.M., Amor A.O., Lauwerys R.R. Decrease of erythrocyte and glomerular membrane negative charges in chronic cadmium poisoning // Br. J. Ind. Med. 1988. - V. 45, № 2. - P. 112 - 115.

62. Bessis M. La forme et la deformabilite des erythrocytes normaux etdans anemies hemolytiques congenitales // Nouv. Rev. Franc. Hematol. 1977.-V. 18, № l.-P. 75-94.

63. Bessis M., Mohandas N. Blood Cells. 1977. - V. 3. - P. 229 - 239.

64. Beytut E., Yuce A., Kamiloglu N.N. et al. Role of dietary vitamin E in cadmium-induced oxidative damage in rabbit's blood, liver and kidneys // Int. J. Vitam. Nutr. Res. 2003. - V. 73, № 5. P. 351 - 355.

65. Birchmeier W., Singer S.J. On the mechanism of ATP-induced shape changes in human erythrocyte membranes. II. The role of ATP // J. Cell. Biol. 1977. — V. 73, №9.-P. 647-659.

66. Bhattachryya M. H. Bioavailability of orally administered cadmium and lead to the mother, fetus and neonate during pregnancy and lactation: an overiew // Sci. Total Environ. 1983. - V. 28. - P. 327 - 342.

67. Bomhard E.M., Maruhn D., Rinke M. Time course of chronic oral cadmium nephrotoxity in Wistar rats: excretion of urinary enzymes // Drug and Chem. Toxicol. 1999. - V. 22, № 4. - P. 679 - 703.

68. Borovoi A.G., Naats E.I., Oppel U.G. Scattering of light by a red blood cell // J. Biomed. Optics 1998. - V. 3. - № 3. - P. 364 - 372.

69. Braeckman В., Brys K., Rzeznik U. et al. Cadmium pathology in an insect cell line: ultrastructural and biochemical effects // Tissue and Cell. 1999. - V. 31, № l.-P. 45-52.

70. Cantinella L. R., Klaasen C. D. Decreased effectiveness of chelation therapy with time after acute cadmium poisoning // Toxicol, appl. Pharmacol. 1982. — V. 63.-P. 173- 180.

71. Chowdhury M.J., Grosell M., McDonald D.G. et al. Plasma clearance of cadmium and zinc in non-acclimated and metal-acclimated trout // Aquat. Toxicol. 2003. - V. 64, № 3. - P. 259 - 275.

72. Das M., Mukhopadhyay S., Addya S. et al. Effects of in vivo cadmium administration to rats on certain functional parameters of isolated erythrocytes // Indian J. Exp. Biol. 1987. - V. 25, № 4. - P. 244 - 248.

73. Delaunay J. Molecular basis of red cell membrane disorders // Acta Haematol. — 2002.-V. 108, №4.-P.210-218.

74. Domanska K., Grosicki A., Kowalski B. Effect of subchronic cadmium exposure on hepatic and renal glutathion, glutathion S-transferase, and superoxide dismutase in rats // Bull. Vet. Inst. Pulawy. 1999. - V. 43, № 2. P. 203 - 209.

75. Fahmy M.A., Aly F.A. In vivo and in vitro studies on the genotoxicity of cadmium chloride in mice // J. Appl. Toxicol. 2000. - V. 20, № 3. - P. 231 - 238.

76. Foulkes E.C. On the mechanism of cellular cadmium uptake // Biol. Trace. Elem. Res. 1989. - V. 21, № 4. - P. 195 - 200.

77. Foulkes E.C. On the mechanism of transfer of heavy metals across cell membranes // Toxicology. 1988. - V. 52, № 3. - P. 263 - 272.

78. Frame M.D., Milanick M.A. Mn and Cd transport by the Na-Ca exchanger of ferret red blood cells // Am. J. Physiol. 1991. - V. 261, № 3 (Pt 1). - P. 467 -475.

79. Fung Y.C., Tsang W.C.O., Patictucci P. High-resolution data on the geometry of red blood cell // Biorheology.- 1981. V. 18, № 3. - P. 369 - 370.

80. Garty M., Wong K.L., Klaassen C.D. Redistribution of cadmium to blood of rats // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1981. - V. 59, № 3. - P. 548 - 554.

81. Garty M., Bracken W.M., Klaassen C.D. Cadmium uptake by rat red blood cells // Toxicology. 1986. - V. 42, №2-3. - P. 111-119.

82. Gasiewicz T.A., Smith J.C. Interactions of cadmium and selenium in rat plasma in vivo and in vitro // Biochim. Biophys. Acta. 1976. - V.428, № 1. - P.l 13 -121.

83. Gedde M.M., Yang E., Huestis W.H. Shape response of human erythrocytes to altered cell pH// Blood. 1995. -V. 86, № 4. - P. 1595 - 1599.

84. Gedde M.M., Yang E., Huestis W.H. Resolution of the paradox of red cell shape changes in low and high pH // Biochim. Biophys. Acta. — 1999. -V. 1417, №2.-P. 246-253.

85. Gimsa J. A possible molecular mechanism governing human erythrocyte shape // Biophys. J. 1998. - V. 75. - P. 568 - 569.

86. Grabowska M., Guminska M. Effect of lead and cadmium ions on the ATPase ■ji activity of the human erythrocyte membrane // Folia Med. Cracov. — 1987.

87. V. 28, № 1 -2.-P. 123- 130.

88. Grasseschi R.M., Ramaswamy R.B., Levine D.J. et al. Cadmium accumulation and detoxification by alveolar macrophages of cigarette smokers // Chest. -2003. V. 124, № 5. - P. 1924 - 1928.

89. Guilhermino L., Soares A.M., Carvalho A.P. et al. Effects of cadmium and parathion exposure on hematology and blood biochemistry of adult male rats // Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1998. - V. 60, № 1. - P. 52 - 59.

90. Gumuslu S., Yargicoglu P., Agar A. et al. Effect of cadmium on antioxidant status in alloxane-induced diabetic rats // Biol. Trace Elem. Res. — 1997. -V. 57, № 2 — P. 105-114.

91. Hamada Т., Tanimoto A., Sasaguri Y. Apoptosis induced by cadmium // Apoptosis. 1997. - V. 2, № 4. - P. 359 - 367.

92. Hamada Т., Tanimoto A., Arima N. et al. Altered membrane skeleton of red blood cells participates in cadmium-induced anemia // Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. - V. 45, № 4. - P. 841 - 847.

93. Hamada Т., Tanimoto A., Arima N. et al. Pathological study of splenomegaly associated with cadmium-induced anemia in rats // J. Uoeh. 1998. - V. 20, № 1.-P. 11 - 19.

94. Hanspal M., Hanspal J.S., Kenneth E.S. et al. Molecular basis of spectrin deficiency in heraditary pyropoikilocytosis // Blood. 1993. - V. 82, № 5. — P. 1652- 1660.

95. Horiguchi H., Teranishi H., Niiya K. et al. Hypoproduction of erythropoietin contributes to anemia in chronic cadmium intoxication: clinical study on itai-itai disease in Japan // Arch. Toxicol. 1994. - V. 68, № 10. - P. 632 - 636.

96. Horn N.M., Thomas A.L. Interactions between the histidine stimulation of cadmium and zinc influx into human erythrocytes // J. Physiol. 1996. -V. 496 (Pt3).-P. 711-718.

97. Hubskyi 1.1., Ersteniuk H.M. Study of hemoglobin system components and antioxidation enzymes in cadmium intoxication // Ukr. Biokhim. Zh. — 2002. -V. 74, №5.-P. 124-127.

98. Hubskyi I.I., Ersteniuk H.M., Briuzhina T.S. et al. Fatty acid composition of lipids in erythrocytes and blood plasma in cadmium intoxication and its correction with unitiol // Ukr. Biokhim. Zh. 2003. - V. 75, № 5. - P. 103 -105.

99. Iglic A., Kralj-Iglic V., Bozic B. et al. Torocyte shapes of red blood cell daughter vesicles // Bioelectrochemistry. 2000. - V. 52, № 2. - P. 203 -211.

100. Iglic A., Kralj-Iglic V., Hagerstrand H. Amphiphile induced echinocyte-spheroechinocyte transformation of red blood cell shape // Eur. Biophys. J. -1998. V. 27, № 4. - P. 335 - 339.

101. Jagetia G.C., Adiga S.K. Cadmium chloride induces dose-dependent increases in the frequency of micronuclei in mouse bone marrow // Mutat. Res. — 1994. -V. 306, № l.-P. 85-90.

102. Jan M, Frantisek N. Cadmium-induced changes in cation-osmotic haemolysis in rats // Environ. Toxicol. Pharmacol. 2000. - V. 8, № 2. - P. 79 - 81.

103. Kadima W., Rabenstein D.L. A quantitative study of the complexation of cadmium in hemolyzed human erythrocytes by 1H NMR spectroscopy // J. Inorg. Biochem. 1990. - V. 40, № 2. - P. 141 - 149.

104. Kamashwaran S.R., Crawford D.L. Mechanisms of cadmium resistance in anaerobic bacterial enrichments degrading pentachlorophenol // Can. J. Microbiol. 2003. - V. 49, № 7. - P. 418 - 424.

105. Karmakar R., Bhattacharya R., Chatterjee M. Biochemical, haematological and histopathological study in relation to time-related cadmium-induced hepatotoxicity in mice // Biometals. 2000. - V. 13, № 3. - P. 231 - 239.

106. Kasuba V., Rozgaj R., Saric M.M. et al. Evaluation of genotoxic damage of cadmium chloride in peripheral blood of suckling Wistar rats // J. Appl. Toxicol. 2002. - V. 22, № 4. - P. 271 - 277.

107. Klapcinska В., Poprzecki S., Dolezych B. et al. Cadmium-induced changes in hematology and 2,3-DPG levels in rats // Bull. Environ. Contam. Toxicol. -2000. V. 64, № 1. - P. 93 - 99.

108. Kostic M.M., Ognjanovic В., Dimitrijevic S. et al. Cadmium-induced changes of antioxidant and metabolic status in red blood cells of rats: in vivo effects // Eur. J. Haematol. 1993. - V. 51, № 2. - P. 86 - 92.

109. Kuliszewski M.J., Nicholls D.M. Translation of rat kidney mRNA afterjKcadmium administration // Int. J. Biochem. 1982. - V. 14, № 1. - P. 33 - 40.

110. Kunimoto M., Miura Т., Kubota K. An apparent acceleration of age-related changes of rat red blood cells by cadmium // Toxicol. Appl. Pharmacol. — 1985. V. 77, № 3. - P. 451 - 457.

111. Kunimoto M., Miura T. Vesicle release from rat red cell ghosts and increased association of cell membrane proteins with cytoskeletons induced by cadmium //Biochim. Biophys Acta. 1985. - V. 816, № 1. - P. 37 - 45.ф

112. Kunimoto M., Miyasaka K., Miura T. Changes in membrane properties of rat red blood cells induced by cadmium accumulating in the membrane fraction // J. Biochem. (Tokyo) 1986. - V. 99, № 2. - P. 397 - 406.

113. Kunimoto M., Miura T. Density increment and decreased survival of rat red blood cells induced by cadmium // Environ. Res. 1986. - V. 39, № 1. — P. 86-95.

114. Kuypers F.A. Red cell membrane damage // J. Heart. Valve. Dis. 1998. —1. И V. 7, №4.-P. 387-395.

115. La Cell R.L., Weed R.I. The contribution of normal and pathological erythrocytes to blood reology // Progress in Hematology. 1971. - V. 2, № l.-P. 1-31.

116. La Celle R.L., Weed R.I., Santillo P.А. Патологическое значение нарушений формы эритроцитов // Мембраны и болезнь (под. ред. Болис JL, Хоффмана Д.Ф., Лифа А.) пер. с англ. М.: Медицина, 1980. - С. 17 — 35.

117. Levin G.G., Vishnyakov G.N., Kozinets G.I. et al. Blood cells research usingmethods of microinterferometry // SPIE. 1997. - V. 2982. - P. 490 - 495.

118. Lijnen P., Staessen J., Fagard R. et al. Effect of cadmium on trans-membrane Na+ and K+ transport systems in human erythrocytes // Br. J. Ind. Med. -1991. V. 48, № 6. - P. 392 - 398.

119. Liu S.C., Derick L.H., Agre P. et al. Alteration of the erythrocyte membrane skeletal ultrastructure in hereditary spherocytosis, hereditary elliptocytosis and pyropoikilocytosis // Blood. 1990. - V. 76, № 1. - P. 198 - 205.

120. Lou M., Garay R., Alda J.O. Cadmium uptake through the anion exchanger in human red blood cells // J. Physiol. 1991. - V. 443, № 11. - P. 123 - 136.

121. Mackova N.O., Lenikova S., Fedorocko P. et al. Effects of cadmium on haemopoiesis in irradiated and non-irradiated mice: 2. Relationship to the number of circulating blood cells and haemopoiesis // Physiol. Res. 1996. -V. 45, №2.-P. 101-106.

122. McMullin M.F. The molecular basis of disorders of the red cell membrane // J. Clin. Pathol. 1999. - V. 52. - P. 245 - 248.

123. Min K.S., Ohyanagi N., Ohta M. et al. Effect of erythropoiesis on splenic cadmium-metallothionein level following an injection of CdC12 in mice // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1995. - V. 134, № 2. - P. 235 - 240.

124. Mohandas N., Chasis J.A. Red blood cell deformability, membrane material properties and shape: regulation by transmembrane, skeletal and cytosolic proteins and lipids // Semin. Hematol. 1993. - V. 30, № 3. - P. 171 - 192.

125. Mukhopadhyay S., Ghosh N., Chattopadhyay D. et al. Uptake of cadmium by isolated human red blood cells // Indian. J. Exp. Biol. 1989. - V. 27, № 1. -P. 69-71.

126. Mukhopadhyay S., Lim G.H.W., Wortis M. Echinocyte shapes: bending, stretching, and shear determine spicule shape and spacing // Biophys. J. -2002. V. 82. - P. 1756 - 1772.

127. Nakao M. New insights into regulation of erythrocyte shape // Curr. Opin. Hematol. 2002. - V. 9, № 2. - P. 127 - 132.

128. Nelson M. An overview of the use of flow cytometry in the analysis of mixed red cell populations // Pathology. 1999. - V. 31, № 3. - P. 191 - 198.

129. Nush G.B., Meiselman H.J. Red cell agening: changes in deformobility and other possible determinats of in vivo survival // Microcirculation. — 1981. -V. 1, № 3. P. 255-284.

130. Nguyen Q.H., Chien P.K. Cadmium uptake kinetics in human erythrocytes // Biol. Trace. Elem. Res. 1989. - V. 22, № 2. - P. 119 - 129.

131. Nordberg G. Factors influencing metabolism and toxicity of metals // Environ. Hlth. 1988. - V. 25. - P. 3 - 41.

132. Panemangalore M., Bebe F.N. Effects of low oral lead and cadmium exposure and zinc status of heme metabolites in weanling rats // Int. J. Occup. Med. Environ. Health. 1996. - V. 9, № 2. - P. 141 - 151.

133. Picart C., Dalhaimer P., Discher D.E. Actin protofilament orientation in deformation of the erythrocyte membrane skeleton // Biophys. J. — 2000. -V. 79.-P. 2987-3000.

134. Pleban P. Cadmium concentrations in blood // Science. 1980. — V. 208, №4443. -P. 520.

135. Plishker G.A. Effects of cadmium and zinc on calcium uptake in human red blood cells // Am. J. Physiol. 1984. - V. 247, № 3 (Pt 1). - P. 143 - 149.

136. Rabenstein D.L., Isab A.A., Kadima W. et al. A proton nuclear magnetic resonance study of the interaction of cadmium with human erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta. 1983.-V. 762, №4.-P. 531 -541.

137. Sarkar S., Yadav P., Trivedi R. et al. Cadmium-induced lipid-peroxidation and the status of the antioxidant system in rat-tissues // J. Trace Elem. in Med. Biol. 1995. - V. 9, № 3. - P. 144 - 149.

138. Sarkar S, Yadav P, Bhatnagar D. Cadmium-induced lipid peroxidation and the antioxidant system in rat erythrocytes: the role of antioxidants // J. Trace. Elem. Med. Biol. 1997.-V. 11,№ l.-P. 8- 13.

139. Sarkar S., Yadav P., Bhatnagar D. Lipid peroxidative damage on cadmium exposure and alterations in antioxidant system in rat erythrocytes: a study with relation to time //Biometals. 1998.- V. 11, № 2. - P. 153 - 157.

140. Savigni D.L., Morgan E.H. Transport mechanisms for iron and other transition metals in rat and rabbit erythroid cells // J. Physiol. 1998. - V. 508 (Pt3).-P. 837-850.

141. Saxena R.K., Seshadri V. Measurement of osmotic resistance of normal and pathological human red blood cells // Indian J. Physiol. Pharmacol. — 1983. -V. 27, № l.-P. 1 -6.

142. Sheetz M.P., Singer S.J. Equilibrium and kinetic effects of drugs on the shapes of human erythrocytes // J. Cell. Biol. 1976. - V. 70. - P. 247 - 251.

143. Sheetz M.P., Singer S J. On the mechanism of ATP-induced shape changes in human erythrocyte membranes. The role of the spectrin complex // J. Cell. Biol. 1977. V. 73 - P. 638 - 646.

144. Shen B.W., Josephs R., Steck T.L. Ultrastructure of the intact skeleton of the human erythrocyte membrane // J. Cell. Biol. 1986. - V. 102. - P. 997 -1006.

145. Skulskii I.A., Glasunov V.V., Manninen V. Cadmium as a tool for studying calcium-dependent cation permeability of the human red blood cell membrane // Gen. Physiol. Biophys. 1991. - V. 10, № 6. - P. 549 - 560.

146. Soares S.S., Aureliano M., Joaquim N. et al. Cadmium and vanadate oligomers effects on methaemoglobin reductase activity from Lusitanian toadfish: in vivo and in vitro studies // J Inorg Biochem. 2003. — V. 94, № 3. - P. 285-290.

147. Stajn A, Zikic R.V., Ognjanovic B. et al. Effect of cadmium and selenium on the antioxidant defense system in rat kidneys // Сотр. Biochem. Physiol. -1997.-V. 117, № 2. P. 167- 172.

148. Stoev S.D., Grozeva N., Simeonov R. Experimental cadmium poisoning in sheep // Exp. Toxicol. Pathol. 2003. - V. 55, № 4. - P. 309 - 314.

149. Sun H.Y., Wang К. The ultrafiltration and ESR study of Cd2+ binding to human erythrocyte spectrin // J. Inorg. Biochem. 1995. - V. 60, № 2. -P. 79-87.

150. Sunderman F.W. Metals and lipid peroxidation // Acta Pharmacol. Toxicol. (Copenh). 1986. - V. 59, № 7. - P. 248 - 255.

151. Suwalsky M., Ungerer В., Villena F. et al. HgC12 disrupts the structure of the human erythrocyte membrane and model phospholipid bilayers // J. Inorg. Biochem. 2000. - V. 81, № 4. - P. 267 - 273.

152. Suzuki K., Ikebuchi H., Terao T. Mercuric and cadmium ions stimulate phosphorylation of band 4.2 protein on human erythrocyte membranes // J. Biol. Chem. 1985. - V. 260, № 7. - P. 4526 - 4530.

153. Takeuchi M., Miyamoto H., Sako Y. et al. Structure of the erythrocyte membrane skeleton as observed by atomic force microscopy // Biophysical J. 1998. - V. 74, № 5. - P. 2171 - 2183.

154. Tanaka K., Min K.S., Onosaka S. et al. Synthesis and degradation of erythrocyte metallothionein in cadmium-administered mice // Experientia Suppl. 1987. - V. 52. - P. 525 - 532.

155. Tanaka K., Min K.S., Onosaka S. et al. The origin of metallothionein in red blood cells // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1985. - V. 78, № 1. - P. 63 - 68.

156. Telisman S., Jurasovic J., Pizent A. et al. Blood pressure in relation to biomarkers of lead, cadmium, copper, zinc, and selenium in men without occupational exposure to metals // Environ. Res. 2001. - V. 87, № 2. -P. 57-68.

157. Tillmann W., Levin C., Prindull G. Rheological properties of young and aged human erythrocytes // Clin. Wschr. 1980. - V. 58, № 11. - P. 569 - 574.

158. Tillmann W. Membrane deformability of erythrocytes with g-6-ph of dehydrogenase // Acta Hematology. 1977. - V. 57, № 3. - P. 162- 167.

159. Thomas J.P., Bachowski G.J., Girotti A.W. Inhibition of cell membrane lipid peroxidation by cadmium- and zinc-metallothioneins // Biochim. Biophys. Acta. 1986. - V. 884, № 3. - P. 448 - 461.

160. Toledo M.A., Goncalves G.S., de Gouveia C.M. et al. Progressive inactivation of plasma membrane (Ca2+/Mg2+)ATPase by Cd2+ in the absence of ATP and reversible inhibition during catalysis // Biochemistry. 1998. — V. 37, №44.-P. 15261 - 15267.

161. Tse W.T., Lux S.E. Red blood cell membrane disorders // British J. Haematol. 1999.-V. 104,№ l.-P. 2- 13.

162. Tsuchia K. Lead // Handbook on the toxicology of metals / Ed. L. Friberg. -Elsevier. 1979. - P. 311 - 316.

163. Turchetti V., De Matteis C., Leoncini F. et al. Variations of erythrocyte morphology in different pathologies // Clin. Hemorheol. Microcirc. — 1997. -V. 17, № 3.-P. 209-215.

164. Vasilenko I., Babakova S., Kiseleva E. et al. Real-time monitoring of the functional status of platelets treated by infukoll using computer-aided laser phase microscope // SPIE. 1998. - V. 3567. - P. 310 - 322.

165. Venugoral В., Lyckey T. D. Metal toxicity in mammals. New York: Plenum press, 1978. - Vol. 2. - P. 46 - 67.

166. Verbost P.M., Flik G., Pang P.K. et al. Cadmium inhibition of the erythrocyte Ca2+ pump. A molecular interpretation // J. Biol. Chem. 1989. — V. 264, № 10.-P. 5613-5615.

167. Visser G.J., Peters P.H., Theuvenet A.P. Cadmium ion is a non-competitive inhibitor of red cell Ca2+-ATPase activity // Biochim. Biophys. Acta. -1993.-V. 1152,№ l.-P. 26-34.

168. Wasowicz W., Gromadzinska J., Rydzynski K. Blood concentration of essential trace elements and heavy metals in workers exposed to lead and cadmium // Int. J. Occup. Med. Environ. Health. 2001. - V. 14, № 3. -P. 223-229.

169. Weed R. Y., Merrill E. W. Metabolic dependence of red cell deformability // J. Clin. Invest. 1969. - V. 48, № 5. - P. 759 - 809.

170. Wesenberg G.B., Wesenberg F. Effect of cadmium on the immune response in rats // Environ. Res. 1983. - V. 31, № 2. - P. 413 - 419.

171. White Т.Е., Baggs R.B., Miller R.K. Central nervous system lesions in the Wistar rat fetus following direct fetal injections of cadmium // Teratology. -1990.-V. 42, №1.-P. 7-13.

172. Wong P. A basis of echinocytosis and stomatocytosis in the disc-sphere transformations of erythrocyte // J. Theor. Biol. 1999. - V. 196 - P. 343 -361.

173. Woo M.K., Lee A., Fischer R.S. et al. The lens membrane skeleton contains structures preferentially enriched in spectrin-actin or tropomodulin-actin complexes // Cell. Motility and the Cytoskeleton. 2000. - V. 46. - P. 257 -268.

174. Yamashina S., Katsumata O. Structural analysis of red blood cell membrane with an atomic force microscope // J. Electron. Microscopy. 2000. - V. 49, № 3. - P. 445-451.

175. Yang M. Effect of sulfhydryl reagents on spectrin states on the erythrocyte membrane // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. - V. 192, № 2. -P. 918-925.

176. Yokoyama K., Araki S., Sato H. et al. Circadian rhythms of seven heavy metals in plasma, erythrocytes and urine in men: observation in metal workers // Ind. Health. 2000. - V. 38, № 2. - P. 205 - 212.

177. Zikic R.V., Stajn A.S., Pavlovic S.Z. et al. Activities of superoxide dismutase and catalase in erythrocytes and plasma transaminases of goldfish (Carassiusauratus gibelio Bloch.) exposed to cadmium I I Physiol. Res. — 2001. — V. 50, № l.-P. 105-111.

178. Zherbin E.A., Chukhlovin A.B., Koteles G.J. et al. Effects in vitro of cadmium ions on some membrane and nuclear parameters of normal and irradiated thymic lymphoid cells // Arch. Toxicol. 1986. - V. 59, № 1. — P. 21 -25.

179. Zwaal R.F.A., Schroit A.J. Pathophysiologic implications of membrane phospholipid asymmetry in blood cells // Blood. — 1997. Vol. 89, № 4. -P. 1121-1132.