Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Влияние гемопрепарата на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и его практическая значимость в коррекции дисбиозов

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Влияние гемопрепарата на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и его практическая значимость в коррекции дисбиозов"

На правах рукописи

сЩ

Цыремпилова Нина Алексеевна

ВЛИЯНИЕ ГЕМОПРЕПАРАТА НА МИКРОБИОЦЕНОЗ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ЕГО ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ В КОРРЕКЦИИ ДИСБИОЗОВ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Барнаул -2012

005046027

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» на кафедре микробиологии, вирусологии и ветеринарно-санитарной экспертизы.

заслуженный работник высшей школы РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Цыдыпов Виктор Цыбанович

доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник Разумовская Валентина Владимировна КГБУ Алтайская краевая ветеринарная лаборатория

кандидат ветеринарных наук, доцент Густокашии Константин Анатольевич

Алтайский государственный аграрный университет

Ведущая организация: ГНУ НИИ Ветеринарии Восточной Сибири

СО Россельхозакадемии (г.Чита)

Защита состоится 29 марта 2012 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 при ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет» по адресу: 656049, Алтайский край, г. Барнаул, пр-т Красноармейский, 98, тел./факс 8(3852)31-

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан февраля 2012 г.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

г

Ученый секретарь диссертационного совета С1 П.И. Барышников Общая характеристика работы

1. Общая характеристика работы

1.1. Актуальность темы. Наметившаяся тенденция производства экологически чистых продуктов питания требует новых типов добавок, повышающих продуктивность животных. Одной из реальных альтернатив на сегодняшний день являются пробиотики препараты, содержащие живые культуры микроорганизмов - симбионтов желудочно-кишечного тракта. Их применяют в качестве биологически активных веществ, обладающих ростостимулирующим и лечебно-профилактическим эффектом. Преимущество их в том, что они безвредны и не имеют недостатков, присущих антибиотикам и химиотерапевтическим средствам. Применение пробиотиков в животноводстве затрагивает ряд важных проблем, связанных с регулированием кишечного микробиоценоза, иммунной, гормональной и ферментативной систем организма молодняка. [Аграненко Д.М. 1972, Алиев С.А. 1981 и др.]. Для профилактики здоровья молодняка необходимо поддерживать популяцию полезных бактерий в пищеварительном тракте. Поэтому важно при его выращивании создавать необходимые условия для формирования собственного микробиоценоза, включая применение средств, в том числе пробиотиков, способствующих формированию микрофлоры в нужном для организма направлении [Баймуратова М.А. 2004 и др.]. Существует большое количество пробиотиков, созданных на основе лактобактерий, бифидумбактерий, молочнокислых, целлюлозолитических и других бактерий. Широко применяются в животноводстве и птицеводстве такие новые пробиотики, как реалак, лаком, стрептобифид, ветом-1.1, субалин, целлобактерин, лактоами-ловарин и другие [Карликанова С.Н.1983 и др.]. В начале 90-х годов в ВИЖе на основе каротинсинтезирующей культуры ШюсЬсоссш получен пробиотик - каротинобактерин, эффективный в рационах цыплят-бройлеров, молодняка крупного рогатого скота и свиней [Житенко П.В. 1986 и др.]. Кровь убойных животных представляет собой ценное сырье для производства лечебных препаратов, поскольку имеет высокую биологическую ценность, обусловленную значительным содержанием хорошо усвояемых и полноценных белков, минеральных солей, ферментов, витаминов, Сахаров, лецитина и других веществ [Бубеев А.Т., Данилова Т.Е. Цыренов В .Ж. 2003, 2005, 2006 и др.]. Поэтому кровь животных вызывает особый интерес для разработки новых биологически активных препаратов в профилактике дисбиозов и иммунодефицитов у молодняка сельскохозяйственных животных. [Балтрошевич А.К. 1978; Бубеев А.Т., Данилова Т.Е. Цыренов В.Ж. 2003, 2005,2006 и др.].

1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось установление биологической ценности гемопрепарата на лабораторных и сельскохозяйственных животных, его лечебную и профилактическую эффективность при дисбактериозах, исследование фонового показателя микробиоценоза кишечника у экспериментальных животных.

Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи исследований:

1. Освоить технологию получения гемопрепарата в условиях убойных

пунктов животных.

2. Определить изменение количественного и видового состава микроорганизмов в кишечнике телят под влиянием антгельминтного препарата аверсект-2, как фонового показателя до применения гемопрепарата.

3. Изучить влияние гемопрепарата на состав микробиоценоза пищеварительного тракта кроликов и телят.

4. Изучить биологические свойства, выделенных микроорганизмов (кулыуральльные, морфологические, тинкториальные и биохимические показатели) желудочно-кишечного тракта кроликов и телят до и после применения гемопрепарата.

5. Установить оптимальные дозы и изучить экономическую эффективность применения гемопрепарата при выращивании кроликов и телят.

1.3. Научная новизна. Впервые изучены показатели биологической ценности гемопрепарата, позволяющие рассматривать его в качестве эффективного белкового компонента и источника азотного питания у телят;

Выявлено положительное влияние на микробиоценоз кишечника экспериментальных животных;

Изучена возможность использования гемопрепарата, в качестве компонента функционального питания при профилактике дисбактериозов;

Отработана технология получения крови животных в условиях пункта убоя животных.

1.4. Практическая значимость работы.

В результате проведения комплексных исследований разработаны практические рекомендации по применению гемопрепарата, как объекта биотехнологии. Он может использоваться для коррекции дисбиозных состояний у сельскохозяйственных животных для сохранности общего поголовья молодняка, а также как методический материал в учебном процессе.

На основе проведенных исследований разработана технологическая схема проведения диагностических и ветеринарно-профилактических мероприятий по выявлению дисбактериозов в хозяйствах Республики Бурятия. Разработаны и утверждены методические рекомендации: «Влияние гемопрепарата на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и его практическая значимость в коррекции дисбиозов» (Решения Ученого Совета факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» протокол №6 от 22.02.07 г. и Научно-технического совета Управления ветеринарии Республики Бурятия, протокол №5 от 20.05.2009г.).

1.5. Реализация и внедрение результатов работы. Результаты работы используются в хозяйствах и ветеринарных учреждениях Республики Бурятия при проведении различных лечебно-профилактических мероприятий, влекущих за собой изменение микробиоценоза и дисбиозных состояний. Материалы диссертационной работы применяются для усовершенствования схемы ветеринарно-санитарных мероприятий в хозяйствах региона при составлении ветеринарно-технологических карт противоинвазионных обработок и вакцинаций, вызывающих состояние дисбиоза у молодняка сельскохозяйственных животных.

1.6. Апробация работы. Основные материалы диссертации обсуждены и одобрены на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора Ивана Андреевича Спирюхова «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2007); на Международной научно- практической конференции, посвященной 85-летию кафедры паразитологии (Улан-Удэ, 2008); на Международной научно-пракпгческой конференции, посвященной дню науки (Улан-Удэ, 2009); в сборнике научных трудов: «Биотехнология. Технология пищевых продуктов», посвященная 70-летию со дня рождения Александра Александровича Васильева (Улан-Удэ, 2009); на Всероссийской научной конференции «Эколого-географические аспекты инфектологии» (Улан-Удэ, 2011).

1.7. Публикации. Основные научные положения по теме диссертации отражены в 6 научных работах, в том числе в 2 статьях в журнале «Вестник Бурятской государственной сельскохозяйственной академии имени В.Р. Филиппова» рекомендованном ВАК РФ, методической рекомендации: «Влияние гемопрепарата на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и его практическая значимость в коррекции дисбиозов» (Улан-Удэ 2011г.).

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 119 страницах компьютерного текста на русском языке и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, анализ результатов исследований, выводы, предложения, список использованной литературы. Работа иллюстрирована 35 таблицами и 48 рисунками. Список использованной литературы содержит 136 источников отечественных и иностранных публикаций.

1.9. Основные положения, выносимые на защиту. На защиту выносятся следующие положения:

1. Технология получения гемопрепарата в условиях лаборатории убойного пункта скота;

2. Влияние гемопрепарата на количественный и видовой состав микроорганизмов в кишечнике телят под влиянием антгельминтного препарата аверсект-2, как фонового показателя до его применения;

3. Влияние гемопрепарата на состав и резистентность микрофлоры пищеварительного тракта кроликов и телят и биохимические показатели крови;

4. Характер изменчивости биологических свойств, представителей микробиоценоза (культуральные, морфологические, тинкториальные и биохимические показатели микроорганизмов) желудочно-кишечного тракта кроликов и телят до и после применения гемопрепарата;

5. Экономическая эффективность применения гемопрепарата при выращивании кроликов и телят.

Номер государственной регистрации темы: 0121156755 «Мониторинг ветеринарного благополучия и получение животноводческой продукции высокого санитарного качества».

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследования.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова», в течение с 2006 по 2011 гг. При выполнении научных исследований использованы методы клинического, лабораторного, экономического и статистического направления. Экспериментальный препарат, далее «Гемопрепарат», разработан на кафедре «Биотехнология» ФГБОУ ВПО «Восточно-Сибирский государственный технологический университет»,

Патент РФ №2265361 «Способ предварительной обработки крови убойных животных» опубликованный 10.12.2005, бюл. №34. Авторы Данилова Т. Е., Бубеев А.Т., Тарнуева Н.М., Цыренов В.Ж. В настоящее время приготовление гемопрепарата с лечебной и профилактической целью осуществляется на убойных пунктах. В соответствии с п. 3.2.12.1 Санитарных правил 3.1.085-96 при наличии разрешения Управления ветеринарии и Управления Роспотребнадзора Республики Бурятия.

Материалом исследований в экспериментах служили пробы кала молодняка кроликов и крупного рогатого скота. Отбор и обработка исследуемых проб осуществлялась в соответствии с методами бактериологического анализа ГОСТ 21237 - 75, ГОСТ 10444, ГОСТ- Р 500474, ГОСТ - 7702.2.5.

На первом этапе проведены лабораторные исследования с использованием кроликов (п=36) породы «Великан» со средней живой массой тела 2,5 кг, возраст шести месяцев. Для достоверности полученных результатов исследования проведены в трех сериях. В каждой серии опытов использовали по 12 животных (опыт п=6 и контроль п=6), подобранных по принципу аналогов. Кроликам опытной группы один раз в сутки выпаивали до кормления 20 мл гемопрепарата в течение 7 суток. Производственный эксперимент с гемопрепаратом проводили на телятах в возрасте шести месяцев (п=9), симментальской породы учебного хозяйства «Байкал». Животным по условиям эксперимента выпаивали по 150 мл гемопрепарата внутрь один раз в сутки в течение недели, из допустимой нормы применения препаратов 1-2 мл на 1кг живой массы, средний вес телят составлял 130 кг.

В экспериментальных целях в условиях учебного хозяйства «Байкал», провели работу по определению количественного и видового состава микрофлоры кишечника телят до и после введения антгельминтика аверсект-2 2%-й в дозе 2 мл подкожно в среднюю треть шеи. Для эксперимента было отобрано 9 телят по принципу аналогов, живой массой 130 кг. Содержание и кормление телят соответствовало зоотехническим нормам и правилам. В пробах кала проводили качественный учет сальмонелл, энтеробактерий, стафилококков, дрожжеподобных грибов, бифидо-, и лактобактерий.

Для дифференциации бактериальные посевы высевали на среды Эндо, мясопептонный, кровяной, висмут-сульфит, М497 агары, мясопептонный и печеночный бульоны. Для выявления дрожжеподобных грибов использовали среду Сабуро. Посевы инкубировали при t 37°С, 24-48 часов в термостате ТС-80М. Подсчет колоний каждого вида микроорганизмов выросших на плотных питательных средах проводили с учетом степени разведения проб и количества посевной дозы по методу Баймуратовой и др. (2004). Микробиологическое исследование было

направлено на выделение определенных видов микроорганизмов из смешанной естественной популяции, культивирование и поддержание чистой культуры на искусственных питательных средах, обеспечивающих сохранение биологических свойств микроба с целью определения видовой принадлежности. При идентификации бактерий пользовались определителями микроорганизмов Берджи Д.(1969), Циона P.A. (1948), Штибена В.Д.(1955). Культурально-морфологические, тинкториальные, биохимические свойства выделенных микроорганизмов изучали, используя методы общей микробиологии Биргера М.О. и Герхарда Т.Ф.(1983).

Для световой микроскопии использовали биологические микроскопы с фотокамерой «Миктрон 200М» и «Миктрон 400М». С целью идентификации и дифференциации микробных культур изучали их биохимические свойства, используя набор для биохимической идентификации микроорганизмов: «СИБ» (Система индикаторных бумажек для идентификации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae), который состоит из дисков или полосок хроматографической бумаги, содержащих определенное количество субстрата в сочетании с соответствующим индикатором.

Результаты проведенных тестов обрабатывали с помощью компьютерной программы «Биохимия микроорганизмов 2.0» ГНУ СибФТИ. Это экспертная система, предназначенная для оперативной идентификации возбудителей инфекционных болезней молодняка сельскохозяйственных животных.

Чувствительность микроорганизмов к различным антибиотикам определяли методом диффузии в агар с применением стандартных дисков, содержащих антибиотики.

Биохимические показатели крови лабораторных животных изучали с помощью аппарата «Рефлотрон +2».

Фотографирование проводили с помощью цифрового фотоаппарата марки «Samsung».

Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили при помощи компьютерной программы Microsoft Office Exel 2007.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Технология приготовления гемопрепарата в лаборатории убойного пункта скота в поселке Селендума Селенгинского района Республики Бурятия

Исходное сырье для получения гемопрепарата: 1) кровь крупного рогатого скота; 2) обезжиренное молоко; 3) культура молочнокислых бактерий Lactobacillus acidophilus 20°Т. Молочную сыворотку получали путем фракционирования, сквашенного при 37°С чистыми культурами Lactobacillus acidophilus, обезжиренного молока до достижения титруемой кислотности 260°Т- 270°Т. Выход сыворотки составлял 70%. С сывороткой, полученной при фракционировании сквашенного Lactobacillus Acidophilus обезжиренного молока, в кровь вносится порядка 7 х 103- 8 х 105кл/мл культуры пробиотика. В процессе хранения количество клеток Lactobacillus Acidophilus снижается до 2 х 105- 3 х 105. Снижение количества клеток пробиотика в биоконсервированной крови, равно как и посторонней микрофлоры, связано с неблагоприятными условиями для их развития: рН среды, высокой каталазной активностью, образованием гема при разделении основного белка крови на гем и глобин.

По химическому составу (таблица 1) гемопрепарат до и после обработки ферментом желудочно-кишечного тракта пепсином для прогнозирования количества поступающих в кишечник дополнительных к рациону питательных компонентов получили следующие результаты, отражающие состав гемопрепарата с точки зрения требований, предъявляемых к составу общеупотребительных питательных сред для микроорганизмов. Пепсиновый гидролиз осуществляли в течение 3 часов при физиологических значениях его протекания в желудке.

Таблица 1. Химические свойства гемопрепарата.

№ Показатели Содержание

Пепсиновый гидролиз Гемопрепарат

1 Азот общий, г,% 1,76+0,12 1,66+0,16

2 Азот остаточный, мг,% 385,0+15,0 67,10+6,3

3 Азот полипептидный, мг,% 376,0+21,0 57,40+4,6

4 Азот аминный, % 0,93+0,12 0,11+0,05

5 Аминокислоты незаменимые, мг,% -аспарагиновая -алашш -фенилаланин -лейцин -изолейцин -триптофан -аргинин -цистеин + + + + + + + + 3,00 3,00 3,00 9,00

6 рн 4,0-4,3 4,3-4,6

7 Железо, мг,% 19,2+0,5 11,0+2,7

8 Хлориды, г,% 0,48+0,08 0,38+0,09

9 Глюкоза, мг,% 358,0+37 345,0+14,2

10 Гликоген, мг,% 18,86+1,8 18,40+1,5

Из данных таблицы 1 видно, что по содержанию основного параметра питательных сред - аминному азоту, гемопрепарат уступает пепсину,

однако уже после пепсинового гидролиза данный показатель увеличивался в 9 раз, а азот полнпептидов в 6,6 раза. Содержание ядовитых веществ, например, хлорид-ионов, находились в пределах нормы. Гемопрепарат, как и кровь отличается высоким содержанием микроэлемента железа - 11 0+2 7 мг%. ' '

Таким образом, приготовление гемопрепарата позволяет получать пробиотик высокой биологической ценности, одним из свойств которого является свойство оказывать влияние на микробиоценоз кишечника опытных животных,

3.2. Влияние гемопрепарата на формирование фекального микробиоценоза желудочно-кишечного тракта кроликов

Исследования по применению гемопрепарата на лабораторных животных (кроликах) проводили в трех сериях опытов. Опыт на кроликах проводили в условиях вивария (п=12) породы «Великан» со средней живой массой тела 2,5 кг, в возрасте шести месяцев. Содержание и уход за ними осуществлялся с соблюдением зоотехнических норм и правил. Животные по условию эксперимента были разделены на опытную (п=6) и контрольную (п=6) группы.

Кроликам опытной группы один раз в сутки применяли до кормления по 20 мл гемопрепарата. Материалом для микробиологических исследований служили пробы кала не более 3 часовой давности. Состав микроорганизмов фекалий определяли по стандартному методу.

Микробиологические исследования (таблица 2) фекальной микрофлоры кроликов, получавших гемопрепарат, позволили выявить, что до применения гемопрепарата количество Bifidobacterium spp. составляло (183,6+0,45)х106КОЕ/г, а через 7 суток применения (192,6+0,44) хЮ6КОЕ/г. После выпаивания гемопрепарата в течение 14 суток количество Bifidobacterium spp. составило (196,0±0,36)хЮбКОЕ/г, количество Enterobacterium spp. (7,97±0,59)хЮбКОЕ/г, через 7 суток (8,16+0,65)х 10® КОЕ/г и через 14 суток увеличилось до (8,63+0,54)хЮ6КОЕ/г. Количество Streptococcus spp. до применения гемопрепарата составляло (7,88±0,44)хЮ6КОЕ/г, а через 14 суток применения возбудителя не регистрировали.

Таблица 2. - Влияние гемопрепарата на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта кроликов.____

Микроорганизмы Сроки исследования

До выпаивания (KOE/r) 7 суток (KOE/r) 14суток (KOE/r)

M+m M±m K1 M K1

1.Bifidobacterium spp. 183,6±0,45 1,11* 192,6+0,44 1,15* 196,0+0,36

2.Enterobacterium spp. 7,97±0,59 1,02* 8,16+0,65 1,08 8,63+0,54

3.Str.haemolitycus spp. 7,88+0,44 0,91* 7,16+0,52 —

4.Salmonella spp. 5,34+_0,77 0,92* 4,92+0,89 0,54* 2,9 ±0,24

5.CIostridium spp. 7,71+0,35 0,99 7,68+0,43 0,97 7,52+0,55

6.Staphylococcus spp. 7,76^0,39 0,93 7,14+0,48 0,94 7,23+0,54

7. Candida spp. 5,17+0,91 — — 0,83 4,29+0,35

К1 - сравнение с кроликами контрольной группы , *-р<0.05.

Обобщив все полученные данные, пришли к выводу, что удельное содержание Bifidobacterium spp. и Enterobacterium spp. в фекалиях животных возрастало, соответственно, на 15% (р<0.05) и 8% (р<0.01) после курса приема гемопрепарата в течение 7 суток, на 11% (р<0.001) и 2% (р<0.1) в

течение 14 суток. Частота встречаемости индигенных микробов в фекалиях кроликов составляла 100% и сохранялась в течение эксперимента.

Транзиторные микроорганизмы, такие как Staphylococcus spp. и Candida spp. в фекалиях контрольных животных обнаруживались, в 59% и 100% случаев соответственно с удельным содержанием 7,7 и 5,2 КОЕ/г. У опытных животных после приема препарата количество дрожжеподобных микроорганизмов увеличивалось на 30% по сравнению с контрольной группой. В фекалиях как опытной, так и контрольной групп животных, культура Staphylococcus spp. обнаруживалась во всех с удельным содержанием 7,1-7,2 КОЕ/г. Представители Salmonella spp. и культура Str. Haemolitycus spp. выявлены в фекалиях как опытных, так и контрольных животных, соответственно в 60 и 100% случаев. После курса приема гемопрепарата в течение семи суток у животных отмечается тенденция снижения количества на 33% (р<0.001) и полное исчезновение Str. Haemolitycus spp (р<0.001). Облигатные штаммы анаэробных микроорганизмов (Clostridium spp.) выделялись стабильно в течение всего курса приема гемопрепарата с удельным содержанием 7,71-7,52 КОЕ/г (р<0.01). Во второй и третьей сериях опытов получили аналогичные результаты.

При анализе результатов исследований по влиянию гемопрепарата на формирование фекальной микрофлоры, констатировали, что наиболее устойчивыми к действию гемопрепарата оказались представители индигенных микроорганизмов Bifidobacterium spp., Enterobacterium spp. и транзиторные культуры Staphylococcus spp.: они регистрировались в течение всего курса приема препарата. Более того, количество клеток Bifidobacterium spp. достоверно увеличивалось. Наиболее чувствительными к действию препарата определялись представители рода Salmonella spp.. Их содержание достоверно снижалось. Представители рода Salmonella spp. выявлены в фекалиях как опытных, так и контрольных животных.

После курса приема гемопрепарата у животных отмечается тенденция снижения количества данных микроорганизмов. Удельное содержание Bifidobacterium spp. и Enterobacterium spp. достоверно увеличивалось. Транзиторные микроорганизмы Staphylococcus spp. в фекалиях контрольных животных оставались на одном уровне, а опытных животных достоверно снижались.

3.3. Биологическая характеристика выделенных микробных изолятов

из кала кроликов

3.3.1. Культурально-морфологическая характеристика выделенных

микробных культур

При изучении морфологических свойств выделенных микроорганизмов из экскрементов кроликов обнаружили, что из 51 выделенной микробной культур 17(20%) микробных культур являются грамположительными кокковидной формы, 31 (37%) микробная культура грамположительная и 36 (43%) культур- грамотрицательные палочковидной формы. У выявленных и исследованных микробных культур спорообразования и капсулообразования не выявлено. По культуральным свойствам выделенные микробные культуры от кроликов выглядели следующим образом. В Б-форме выявлялись 84%, а в Я-форме- 16%.

3.3.2. Влияние гемопрепарата на морфологические и биохимические

показатели крови кроликов

Данный этап экспериментальных исследований характеризовал влияние гемопрепарата на морфологический и биохимический состав крови. Динамика морфологии и биохимии крови экспериментальных животных опытной группы (п=6) и контрольной (п=6) проводилась до применения препарата, гемоглобин (73,4+7,5)г/%-опыт; (90,5+10,39)г/%-контроль; эритроциты составили соответственно (2,4+0,25)млн/мл и (2,6+0,27)млн/мл; лейкоциты (3,8+0,63) тыс/мл и (3,7+0,45)тыс/мл; глюкоза (5,5+0,60)ммоль/л и (6,2+0,63)ммоль/л; мочевина (8,3+0,57)ммоль/л и (8,7+0,73)ммоль/л; общий белок (66,4+5,58)г/л и (74,1+6,67)г/л; общий билирубин составил (6,4+0,62)мкмоль/л и (6,7+0,57) мкмоль/л. Достоверных отличий между опытной и контрольной группами не регистрировали. Через семь суток применения гемопрепарата регистрировали увеличение количества гемоглобина до (77,6+7,58)г/%, а в контрольной группе снижалось до (82,2+7,78)г/%. Отмечали незначительное снижение уровня лейкоцитов до (2,3+0,31)тыс/мл в опытной группе и до (2,0+0,3 7)тыс/мл в контрольной группе. Глюкоза составила (5,4+0,54) ммоль/л в опытной группе и (6,1+0,57) ммоль/л в контрольной группе. Мочевина в опытной группе увеличилась до (13,0+2,14 ммоль/л), а в контрольной группе осталась на прежнем уровне (8,8+0,88) ммоль/л. Общий белок незначительно вырос до (68,5+6,49) г/л в опытной группе и до (78,4+6,98) г/л в контрольной группе. А в опытной группе общий билирубин снизился до (6,1+0,53) мкмоль/л.

Проанализировав полученные данные через 14 суток, пришли к выводу, что даже незначительные изменения в функционировании органов и

систем организма неизбежно приводят к тем или иным изменениям в составе периферической крови. Так уровень гемоглобина составил (98,6+15,70)г/% в опытной группе и (85,9+1,15)г/% в контрольной группе. Эритроциты составили (2,4+0,23) млн/мл и (2,5+0,26) млн/мл соответственно. Лейкоциты (6,2+0,4) тыс/мл и (3,4+0,54)тыс/мл. Глюкоза (5,1+0,45) ммоль/л и (6,42+0,53) ммоль/л. Мочевина (5,9+0,91) ммоль/л и (8,0+1,52) ммоль/л. Общий белок (88,3+12,13) г/л и (71,8+6,40) г/л. Общий билирубин (7,3+0,18) и (6,7+0,65) соответственно.

В ходе опыта сравнили полученные нами данные с аналогичными показателями в норме. Количество гемоглобина до применения гемопрепарата составляло (73,4+7,5) г/%, через семь суток применения наблюдали незначительное повышение (77,6+7,58) г/%, а через 14 суток достоверно увеличилось до (98,6+15,70)г/% по сравнению с полученным результатом до применения. Эритроциты до и после применения были на одном уровне (2,4+0,25)млн/мл, лейкоциты (3,8+0,63)тыс/мл, через семь суток применения наблюдали незначительное понижение до (2,3+0,31)тыс/мл и повышались до (6,2+0,40)тыс/мл через 14 суток. Глюкоза (5,5+0,60)ммоль/л, через 7 суток применения наблюдали незначительное понижение до (5,4+0,54), ммоль/л и через 14 суток снизилось до (5,1+0,45)ммоль/л. Мочевина до применения (8,3+0,57)ммоль/л, через 7 суток применения наблюдали повышение до (13,0+2,14)ммоль/л, и через 14 суток снизилось до (5,9+0,91)ммоль/л. "Уровень общего белка до применения гемопрепарата был (66,4+5,58)г/л, через семь суток применения гемопрепарата достоверно возрастал до (68,5+6,49)г/л, через 14 суток увеличился до (88,25+12,13)г/л. Уровень общего белка в норме при этом составляет 78,6 г/л.

3.3.3. Биохимическая характеристика выделенных микробных культур

По результатам постановки биохимических тестов проведен анализ ферментативных свойств выделенных культур до применения гемопрепарата, отрицательные тесты давали: с оксидазой — 16,3%; с В-галактозидазой - 15,25; образование индола - 4,4%; сероводорода - 69,4%; определение уреазы - 59,7%; орнитина - 16,6%; лизина - 37,5%; фенилаланина - 100%; с глюкозой - 32%; в реакции Фогес-Проскауэра -91,6%; взаимодействовали с малонатом натрия - 1,3% микробных культур. Выделенные культуры положительно реагировали, вызывая ферментацию углеводов с образованием кислоты: с глюкозой — 67%; с оксидазой - 1,3%; с В- галактозидазой - 82%; образование индола - 1,3 %, сероводорода - 2,7%; определение уреазы - 40,2%, орнитина - 80,5%, лизина — 59,7%, взаимодействовали с малонатом натрия - 98,6% и цитратом натрия- 100%) выделенных микробных культур. Сомнительные реакции дали

расщепление оксидазы - 75%; с В - галактозидазой - 2,7; орнитином - 2,7 %; с глюкозой - 1,3%; образование индола - 4,1; сероводорода - 27,7%; на реакцию Фогес-Проскауэра - 8,35.Через семь суток применения гемопрепарата данные по изучению биохимических свойств выделенных культур. Из них видно, что отрицательные тесты дали: с В-галактозидазой -19,4%, уреазой - 1,3%, орнитином - 30,5%, лизином - 86,1%; образование индола - 100%; на фенилаланин - 100%; взаимодействовали с цитратом натрия - 5,5%; в реакции Фогес-Проскауэра - 100%. Выделенные культуры положительно реагировали, вызывая ферментацию углеводов с образованием кислоты: с глюкозой - 100%; с В-галактозидазой - 80,5%; уреазой - 98,6, орнитином - 6,8%, лизином - 9,7%, образование сероводорода - 66,6%; взаимодействовали с цитратом натрия - 94,45 и малонатом натрия - 100%. Сомнительные реакции дали с оксидазой - 100%; орнитином - 5,5%; лизином - 4,1%; 4 образование сероводорода -33,3%.Через 14 суток после применения гемопрепарата выделенные культуры дали отрицательные тесты: с В-галактозидазой - 61,1%, уреазой -100%, орнитином - 61,1%, лизином - 90,2%; образование индола - 98,6%, сероводорода - 100%; на фенилаланин - 100%; взаимодействовали с цитратом натрия - 15,2%, с малонатом натрия - 1,3%; в реакции Фогес-Проскауэра - 100%. Положительные тесты дали с В-галактозидазой - 8,8%, орнитином - 34,7%, лизином - 9,7%, с глюкозой - 100%; образование индола - 1,3%; взаимодействовали с цитратом натрия - 84,7%, с малонатом натрия - 98,6%; Сомнительные реакции дали с оксидазой - 100%, с орнитином - 2,7%.

3.3.4. Чувствительность выделенных микробных культур к антибиотикам

Все исследованные культуры, выделенные из кала кроликов, проявляли различную степень чувствительности и устойчивости к антибиотикам. Чувствительность выделенных микробных культур была следующей: к тобрамицину, канамицину и стрептомицину были чувствительны 14% выделенных микробных изолятов; к левомицетину-13%>, к эритромицину и бензилпенициллину -по 12%, к ампицилину- 11%, к тетрациклину- 10%.

Чувствительность выделенных микробных изолятов к антибиотикам через семь суток применения гемопрепарата незначительно изменяется. При этом чувствительность к тобрамицину поднялась до 15%, канамицина уменьшилась до 11%; к стрептомицину также были чувствительны 14%, выделенных микробных изолятов; к левомицетину и эритромицину стали чувствительны 14%, к бензилпенициллину 9%, к ампицилину 11%, к тетрациклину-12%.

Чувствительность выделенных микробных изолятов к антибиотикам через 14 суток применения гемопрепарата незначительно изменяется. При этом чувствительность разных антибиотиков была следующей: к тобрамицину осталась равной 15%, канамицину уменьшилась с 14% до 11%; к стрептомицину чувствительность поднялась с 13% до 14%, выделенных микробных изолятов; к левомицетину и эритромицину чувствительность снизилась с 14% до 12%, к бензилпенициллину поднялась с 9% до 12%, к ампицилину увеличилась с 11% до 15% , к тетрациклину снизилась чувствительность с 12% до 9%.

Таким образом, сравнив между собой полученные данные, можно констатировать, что устойчивость к антибиотикам полезных микробных культур, выделенных из кала кроликов, постепенно повышается при применении гемопрепарата, а уровень резистентности условно-патогенной микрофлоры заметно снижается. Гемопрепарат оказывал благоприятное воздействие на микрофлору кишечника и на биохимию крови организма кроликов. Полученные результаты позволяют контролировать состояние микрофлоры у сельскохозяйственных животных, что даст возможность своевременно корректировать нежелательные изменения микрофлоры желудочно-кишечного тракта и дисбиотические нарушения за счет искусственного введения полезных бактериальных представителей и не допустить развития дисбактериоза в тяжелой форме.

3.4. Фоновые показатели количественного и видового состава микроорганизмов в кишечнике телят под влиянием препарата аверсект-2 в условиях учебного хозяйства «Байкал» перед применением

гемопрепарата

Прежде чем приступить к изучению влияния гемопрепарата на видовой и количественный состав микроорганизмов в кишечнике телят, изучили влияние на микрофлору препарата аверсект-2, который по данным нескольких авторов вызывает дисбиотическое состояние, которое затем следует скорректировать. Для этого в экспериментальных целях в условиях учебного хозяйства «Байкал» провели работу по определению количественного и видового состава микрофлоры кишечника телят до и после введения антгельминтика аверсект-2 2%-й в дозе 2 мл подкожно в среднюю треть шеи. Для эксперимента было отобрано 9 телят по принципу аналогов, в возрасте шести месяцев живой массой 130 кг. Содержание и кормление телят соответствовало зоотехническим нормам и правилам.

До введения антгельминтного препарата аверсект-2 количество полезной микрофлоры составляло: Bifidobacterium spp.-(0,9±0,09)xl06KOE/r, Lactobacterium spp.-(0,51+0,102) хЮбКОЕ/г. Общее микробное число составило (1,22+0,125) хЮ6 КОЕ/г. Условно-патогенная микрофлора была представлена: Salmonella spp.-(0,34±0,131)xl06KOE/r; Staphylococcus spp.

(2,93+0,151)хЮбКОЕ/г; Enterobacterium spp. (1,35±0,255)х10б. Количество дрожжеподобных грибов Candida spp. составляло (1,75±0,279)хЮбКОЕ/г. После применения антгельминтного препарата через семь суток количество полезной микрофлоры снижалось. Так количество Bifidobacterium spp. составило (0,34+0,136)хЮбКОЕ/г, Lactobacterium spp.

(0,36+0,137)хЮбКОЕ/г. Общее микробное число снизилось до (0,6+0,37)хЮ6КОЕ/г. Количество условно-патогенной микрофлоры в среднем составило: Salmonella spp. (1,27+0,132)хЮбКОЕ/г, Staphylococcus spp.- (0,72+0,126)xl0б КОЕ/г, Enterobacterium spp. (1,0+0,32)хЮ6КОЕ/г, дрожжеподобных грибов Candida spp. (1,01+0,146)хЮ6КОЕ/г. Через 14 суток после введения препарата полезная микрофлора была представлена: Bifidobacterium spp. (0,25+0,067)хЮбКОЕ/г, Lactobacterium spp. -(0,47+0,291)х10б КОЕ/г. Общее микробное число составило-(0,45+0,1280)хЮ6КОЕ/г. Условно-патогенную микрофлору формировали: Salmonella spp.- (1,78±0,407)хЮ6КОЕ/г; Staphylococcus spp.-(1,44+0,199)х106КОЕ/г; Enterobacterium spp. (0,98±0,362)хЮ6КОЕ/г и дрожжеподобные грибы Candida spp.- (0,38+0,206)хЮбКОЕ/г. Установлено, что антгельминтный препарат, подавляет нормальную микрофлору. Так негативное влияние антгельминтика аверсект-2 на микробиоценоз кишечника телят проявлялось в подавлении роста полезных микроорганизмов (бифидумбактерии, лактобактерии и др.) на фоне усиления роста и размножения условно-патогенных микроорганизмов.

3.5. Количественный и видовой состав микрофлоры выделенной из проб кала телят под влиянием гемопрепарата, после применения

аверсекта-2

Исследования по влиянию гемопрепарата на количественный и видовой состав микрофлоры выделенной из проб кала телят обработанных аверсектом-2 исследовали до применения гемопрепарата, через 7 суток и через 10 суток применения гемопрепарата.

Установлено, что до применения гемопрепарата у телят опытной группы до применения гемопрепарата общее микробное число составляет (1,22+0,12) х106 КОЕ/г микробных клеток в 1 грамме кала. При этом количество полезной микрофлоры желудочно-кишечного тракта телят составляло: Lactobacterium spp. (0,5+0,29)хЮ6КОЕ/г; Bifidobacterium spp. (1,2+0,40)х 1 ОбКОЕ/г;

Условно-патогенная микрофлора представлена Salmonella spp.-(0,7±0,12)хЮ6КОЕ/г; Staphylococcus spp.- (0,3±0,19)х10б КОЕ/г и Enterobacterium spp. (0,2+0,3 6)xl О6 КОЕ/г. Через 7 суток применения гемопрепарата представлены общим микробным числом- (1,66+0,13) хЮ6 микробных клеток в 1 грамме кала. Отмечено увеличение количества полезной микрофлоры: Lactobacterium spp. до (0,6+0,14)хЮ6КОЕ/г и

Bifidobacterium spp. до (2,9+0,15)хЮбКОЕ/г. Количество условно-патогенной микрофлоры значительно снизилось: Salmonella spp.- до (0,7±0,09)хЮ6КОЕ/г, количество Staphylococcus spp.- снизилось до (0,2+0,13)хЮ6КОЕ/г, количество Enterobacterium spp. снизилось до (0,1±0,25)хЮбКОЕ/г.

Для установления изменений в составе микрофлоры телят после применения гемопрепарата были проведены бактериологические исследования через 10 суток применения препарата.

Полученные данные свидетельствуют о том, что через 14 суток применения гемопрепарата, общее микробное число составляет (0,25+0,067)х 106 КОЕ/г, при этом количество Lactobacterium spp. равнялось (0,5+0,10)х10б КОЕ/г, Bifidobacterium spp.-(2,9+0,16)xl06KOE/r, Salmonella spp.-(0,2+0,01 )x 106 КОЕ/г, Staphylococcus spp.-(0,9±0,09)xl06KOE/r, Enterobacterium spp.-(0,3±0,05)xl 06KOE/r.

Наблюдается увеличение количества полезной микрофлоры Bifidobacterium spp. и Lactobacterium spp. А также восстановление количественного показателя условно-патогенной микрофлоры Salmonella spp. Staphylococcus spp. и Enterobacterium spp. до исходной. В представленных сводных данных по влиянию гемопрепарата на количественный и видовой состав микроорганизмов желудочно-кишечного тракта телят до применения, через 7 суток и через 14 суток применения.

Обобщая результаты исследований по влиянию гемопрепарата на формирование фекальной микрофлоры телят, можно констатировать, что гемопрепарат оказал влияние на представителей индигенных микроорганизмов Bifidobacterium spp., Enterobacterium spp. и транзиторные культуры Staphylococcus spp.: частота их регистрации практически не менялась в течение эксперимента.

Более того, количество клеток Bifidobacterium spp. достоверно увеличилось, отмечалось повышение чувствительности к действию препарата культур рода Salmonella spp. Их содержание достоверно снижалось. После курса приема гемопрепарата у животных отмечается тенденция снижения количества данных микроорганизмов. Удельное содержание Bifidobacterium spp. и Enterobacterium spp. достоверно возрастало. Данные индигенные микробы в кале экспериментальных телят регистрировали у всех опытных животных и сохранялась в течение эксперимента. Установлено, что гемопрепарат усиливает рост численности полезных с одновременным угнетением роста условно-патогенных микроорганизмов.

Таким образом, данный препарат может быть использован в качестве корригирующего средства при дисбактериозах.

3.5.1. Биохимическая характеристика выделенных микробных культур

По результатам постановки биохимических тестов проведен анализ ферментативных свойств выделенных культур до применения гемопрепарата, отрицательные тесты давали: с оксидазой - 26,3% (17 культур); с В-галактозидазой - 15,25 (11 культур); образование индола - 94,4 % (68 культур), сероводорода - 69,4% (50 культур); определение уреазы -59,7% (43 культуры), орнитина - 16,6% (12 культур), лизина - 37,5% (27 культур), фенилаланина- 100% (72 культуры); с глюкозой - 32% (23 культуры); в реакции Фогес-Проскауэра - 91,6% (66 культур); взаимодействовали с малонатом натрия - 1,2% (1 культура). Выделенные культуры положительно реагировали, вызывая ферментацию углеводов с образованием кислоты: с глюкозой - 66,6% (48 культур); с оксидазой - 1,2% ( 1 культур); с В-галактозидазой - 82% (59 культур); образование индола -1,2 % (I культура), сероводорода - 2,7% (2 культуры); определение уреазы -40,2% (29 культуры), орнитина - 80,5% (58 культур), лизина - 59,7% (43 культуры), взаимодействовали с малонатом натрия - 98,6% (71 культура) и цитратом натрия 100% (72 культуры). Сомнительные реакции дали расщепление оксидазы - 75% (54 культуры); с В - галактозидазой - 2,7 (2 культуры), орнитином -2,7 % (2 культуры), с глюкозой - 1,2% (1 культура); образование индола - 4,1 (3 культуры), сероводорода - 27,7% (20 культур); на реакцию Фогес-Проскауэра - 8,35 (6 культур). Через семь суток применения гемопрепарата данные по изучению биохимических свойств выделенных культур отрицательные тесты дали: с В-галактозидазой - 19,4% (14 культур), уреазой - 1,2% (1культура), орнитином - 30,5% (22 культуры), лизином - 86,1 (62 культуры); образование индола - 100% (72 культуры); на фенилаланин - 100% (72 культуры); взаимодействовали с цитратом натрия - 5,5% (4 культуры); в реакции Фогес-Проскауэра - 100% (72 культуры). Выделенные культуры положительно реагировали, вызывая ферментацию углеводов с образованием кислоты: с глюкозой - 100% (72 культуры); с В-галактозидазой - 80,5% (58 культур), уреазой - 98,6 (71 культура), орнитином - 6,8% (46 культур), лизином - 9,7% (7 культур), с образованием сероводорода - 66,6% (48 культур); взаимодействовали с цитратом натрия -94,45 (68 культур) и малонатом натрия - 100% (72 культуры). Сомнительные реакции дали с оксидазой - 100% (72 культуры), орнитином - 5,5% (4культуры), лизином - 4,1% ( 3 культуры), с образованием сероводорода -33,3% ( 24 культуры). Через 10 суток применения гемопрепарата отрицательные тесты: с В-галактозидазой - 61,1% (44 культуры), уреазой -100% (72 культуры), орнитином -61,1% (44 культуры), лизином - 90,2% (65 культур); с образованием индола - 98,6% (71 культура), сероводорода -

100% (72 культуры); на фенилаланин - 100% (72культуры); взаимодействовали с цитратом натрия - 15,2% (11 культур), с малонатом натрия - 1,3% (1 культура); в реакции Фогес - Проскауэра - 100% (72 культуры). Положительные тесты дали с В-галактозидазой- 8,8% (28 культур), орнитином - 34,7% (25 культур), лизином - 9,7% (7 культур), с глюкозой - 100% (72 культуры); образование индола - 1,2% (1 культура); взаимодействовали с цитратом натрия - 84,7% (6 культур), с малонатом натрия - 98,6% (71 культура); Сомнительные реакции дали с оксидазой -100% (72 культуры), с орнитином - 2,7% (2 культуры).

3.5.2. Видовая принадлежность выделенных условно-патогенных

микроорганизмов

Все выделенные культуры микроорганизмов были идентифицированы на основании изученных свойств и представленые к рассмотрению колонии выделенных микроорганизмов состояли из: Staphylococcus aureus - 14 культур; Staphylococcus epidermidis - 8; Staph, saprophytics - 6; no 5 культур - Enterobacter agglomerans, Staphylococcus hominis, Streptococcus faecalis; no 4 культуры -Bacillus lentimorbus, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Citrobacter freundii и no 3 культуры - Bacillus larve, Staphylococcus simulans; no 2 культуры - Bacillus alcalophilus, Enterobacter aerogenes, Bacillus popilliae, Citrobacter amalonaticus, Salmonella gallinarum; и по одной культуре Enterobacter sakazakii и cloacae, Bacillus lentus, Вас. polymyxa, Bacillus megaterium, Вас. alvei, Вас. subtilis. По две культуры -Bacillus subtilis, Enterobacter aerogenes, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus; и по одной культуре - Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Enterobacter agglomerans, Escherichia coli, Citrobacter freundii, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus.

3.5.3. Чувствительность выделенных микробных культур из кала телят

к антибиотикам

Все исследованные культуры, выделенные из кала телят, проявляли различную степень чувствительности и устойчивости к антибиотикам Чувствительность выделенных микробных культур была следующей: к тобрамицину, канамицину и стрептомицину были чувствительны 14% выделенных микробных изолятов; к левомицетину- 13%, к эритромицину и бензилпенициллину- по 12%, к ампицилину- 11%, к тетрациклину- 10%. Чувствительность выделенных микробных изолятов к антибиотикам через 7 суток применения гемопрепарата незначительно изменяется. При этом чувствительность к тобрамицину поднялась до 15%, канамицину уменьшилась до 11%; к стрептомицину были чувствительны 14% выделенных микробных изолятов; к левомицетину и эритромицину стали чувствительны 14% бензилпенициллину - 9%, ампицилину- 11%,

тетрациклину- 12%. Чувствительность выделенных микробных изолятов к антибиотикам, через 14 суток применения гемопрепарата незначительно изменяется. При этом чувствительность разных антибиотиков была следующей: к тобрамицину осталась равной 15%, канамицину уменьшилась с 11% до 8%; к стрептомицину чувствительность снизилась с 14% до 12% выделенных микробных изолятов; к левомицетину и эритромицину чувствительность снизилась с 14% до 12%, к бензилпенициллину поднялась с 9% до 12%, к ампицилину увеличилась с 11% до 15% , к тетрациклину поднялась чувствительность с 12% до 14%.

Таким образом, сравнив между собой полученные данные, видно, что устойчивость микробных культур, выделенных из организма телят, постепенно повышается при применении гемопрепарата, а уровень резистентности условно-патогенной заметно снижается. Значит, гемопрепарат может повышать эффективность антибиотикотерапии.

3.6. Экономическое обоснование применения гемопрепарата

В данном эксперименте была применена биологически активная добавка «Гемопрепарат», разработанный на кафедре «Биотехнология» Восточно-Сибирского государственного университета сотрудниками Патент РФ №2265361 «Способ предварительной обработки крови убойных животных» опубликованный 10.12.2005. Бюл. №34. Авторы Данилова Т.Е., Бубеев А.Т., Тарнуева Н.М., Цыренов В.Ж. Исходным сырьем для получения препарата служили:

Вторичное сырье мясоперерабатывающих предприятий - кровь крупного рогатого скота стоимостью 5 рублей за литр.

Вторичное сырье молокоперерабатывающих предприятий - обезжиренное молоко (обрат) стоимостью 12,5 рублей за литр.

Культура молочнокислых бактерий Lactobacillus acidophilus - препарат «Лактобактерин» стоимостью 75 рублей за упаковку.

Себестоимость препарата на 1 животное составила 9,8 рублей на одно животное. Из расчета: на одно животное применено по 350 мл. Для изготовления 1 литра препарата необходимо 4% молочной сыворотки, 60% крови крепного рогатого скота и одна доза «Лактобактерина».

Таким образом, вычислили, что себестоимость гемопрепарата на одного теленка составляет 9,8 рублей.

ВЫВОДЫ

1. Гемопрепарат, созданный в Восточно-Сибирском государственном университете кафедрой «Биотехнология» Патент РФ №2265361 «Способ предварительной обработки крови убойных животных» может быть использован в ветеринарии при лечении и профилактике дисбиозов

молодняка сельскохозяйственных животных, а также как биологически активный препарат.

2. Показатели биологической ценности гемопрепарата, изученные in vivo, имеют значения, позволяющие рассматривать его в качестве эффективного белкового компонента и источника азотного питания. При применении в течение семи суток кроликам гемопрепарата в дозе 1-2 мл на кг живой массы, при трехкратном повторении опытов выявили увеличение количества полезной микрофлоры.

3. На фоне приема гемопрепарата наблюдаются положительные изменения микробиоценоза кишечника экспериментальных животных.

4. Гемопрепарат может быть использован в качестве компонента функционального питания при профилактике дисбактериоза. Данное утверждение основывается на наличие бифидогенного эффекта -стимулятора роста и развития бифидобактерий.

5. При применении гемопрепарата повышалась эффективность воздействия антибиотиков на условно-патогенную микрофлору (тобрамицин, канамицин, стрептомицин, левомицетин, эритромицин.

6. Полученные данные указывают на возможность элиминации условно-патогенных штаммов микроорганизмов из желудочно-кишечного тракта при условии подбора доз и продолжительности применения гемопрепарата. Данный препарат может быть приготовлен в условиях лицензированных убойных пунктов скота, для широкого производственного применения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. На основе полученных результатов составлены методические рекомендации "ВЛИЯНИЕ ГЕМОПРЕПАРАТА НА МИКРОБИОЦЕНОЗ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ЕГО ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ В КОРРЕКЦИИ ДИСБИОЗОВ".

2. Материалы могут служить источником информации при проведении республиканских совещаний ветеринарных работников Республики Бурятия, касающихся вопросов разработки мер профилактики по предупреждению возникновения заболеваний животных

3. Результаты исследований используются в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарного профиля.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Микробиологические и биохимические показатели организма кроликов после применения гемопрепарата / H.A. Цыремпилова, Т.Е. Данилова, В.Ц. Цыдыпов // Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии: материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора Ивана Андреевича Спирюхова. - Улан-Удэ 2007 -С.126-129.

2. Количественный и видовой состав микроорганизмов в кишечнике телят под влиянием препарата «Аверсект-2» / H.A. Цыремпилова, В.Ц. Цыдыпов // Вестник Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова. - Улан-Удэ, 2009. - С. 105-110.

3. Оценка биологической эффективности гемопрепарата / H.A. Цыремпилова, Т.Е. Данилова, В.Ц. Цыдыпов // Сборник научных трудов Восточно-Сибирского государственного технологического университета: изд-во Восточно-Сибирского технологического университета - Улан-Удэ 2009. — С.86-97.

4. Влияние гемпрепарата на микробиоценоз кишечника телят. / Н.А Цыремпилова, О.С. Дансарунова, Е.А. Дансарунов // Эколого-географические аспекты инфектологии: материалы Всероссийской научной конференции, посвященной 350-летию добровольного вхождения Бурятии в состав Российской империи, 80-летию ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» и 75-летию Новосибирского государственного аграрного университета - Улан-Удэ, 2011.-С. 60-67.

5. Эпизоотическая характеристика инфекционных болезней животных в Иркутской области / H.A. Цыремпилова, Н.И. Дзюбин, В.Ц. Цыдыпов // Эколого-географические аспекты инфектологии: материалы Всероссийской научной конференции, посвященной 350-летию добровольного вхождения Бурятии в состав Российской империи, 80-летию ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» и 75-летию Новосибирского государственного аграрного университета. - Улан-Удэ, 2011.-С. 67-72.

6. Влияние гемопрепарата на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и его практическая значимость в коррекции дисбиозов / H.A. Цыремпилова, А.Д. Цыбикжапов // Вестник Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова. - Улан-Удэ, 2011 -'№4(18). - С. 12-25.

Подписано в печать 00.00.2012 г. Формат 60x90 1/16 Ризография. Усл.п.л. 1,0. Тираж 100 экз. Издательство ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» 670034, г. Улан Удэ, ул.Пушкина ,8 e-mail: rio-bgsha@mail.ru

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Цыремпилова, Нина Алексеевна, Улан-Удэ

61 12-16/81

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ФГБОУ ВПО «БУРЯТСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ им. В.Р. ФИЛИППОВА»

На правах рукописи

ЦЫРЕМПИЛОВА НИНА АЛЕКСЕЕВНА

ВЛИЯНИЕ ГЕМОПРЕПАРАТА НА МИКРОБИОЦЕНОЗ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

ЖИВОТНЫХ

И ЕГО ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ В КОРРЕКЦИИ

ДИСБИОЗОВ.

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель-

заслуженный работник высшей школы РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Цыдыпов Виктор Цыбанович

Улан-Удэ 2012г.

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ........................................................................................3

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..................................................................8

1.1. Роль нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта в жизнедеятельности сельскохозяйственных животных......................................8

1.2. Порядок работы по организации убойных пунктов, в том числе передвижных.....................................................................................

1.3. Технология приготовления гемопрепарата как корректора микрофлоры желудочно-кишечного тракта и его биотехнологическая значимость.........18

1.3.1. Обработка крови убойных животных...........................................18

1.3.2. Основные методы консервирования крови....................................19

1.3.3. Основные способы стабилизации и консервирования крови................23

1.4. Биологические препараты из крови...............................................26

1.5 Заключение..............................................................................27

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..............................................29

2.1. Материалы и методы исследований...............................................29

3. Результаты исследования.............................................................36

3.1. Технология приготовления гемопрепарата в лаборатории убойного пункта скота в поселке Селендума Селенгинского района Республики Бурятия...36

3.2. Влияние гемопрепарата на формирование фекального микробиоценоза желудочно-кишечного тракта кроликов..............................................39

3.3. Биологическая характеристика микробных изолятов выделенных из экскрементов кроликов.......................................................................55

3.3.1. Культурально - морфологическая характеристика выделенных микробных культур.....................................................................................55

3.3.2. Влияние гемопрепарата на морфологические и биохимические показатели крови кроликов............................................................................................57

3.3.3. Биохимическая характеристика выделенных микробных культур......63

1

3.3.4. Чувствительность выделенных микробных культур к антибиотикам...68 3.4. Фоновые показатели количественного и видового состава микроорганизмов в кишечнике телят под влиянием препарата аверсект-2 в условиях учеб-

ного хозяйства «Байкал» перед применением гемопрепарата....................71

3.5. Количественный и видовой состав микрофлоры выделенной из проб кала телят под влиянием гемопрепарата, после применения аверсекта-2..............77

3.6. Биологическая характеристика выделенных микробных изолятов, из кала телят после применения гемопрепарата...................................................81

3.6.1. Морфологические и культуральные свойства................................81

3.6.2. Биохимическая характеристика выделенных микроорганизмов.........82

3.6.3. Видовая принадлежность выделенных условно-патогенных микроорганизмов....................................................................................................................^^

3.6.4. Чувствительность выделенных микробных культур к антибиотикам...89

3.7. Экономическое обоснование применения гемопрепарата........................92

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.............................93

ВЫВОДЫ....................................................................................98

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..................................................99

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.................................100

ПРИЛОЖЕНИЯ...........................................................................по

ВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Наметившаяся тенденция производства экологически чистых продуктов питания требует новых типов добавок, повышающих продуктивность животных. Одной из реальных альтернатив на сегодняшний день являются пробиотики препараты, содержащие живые культуры микроорганизмов - симбионтов желудочно-кишечного тракта. Их применяют в качестве биологически активных веществ, обладающих ростостиму-лирующим и лечебно-профилактическим эффектом. Преимущество их в том, что они безвредны и не имеют недостатков, присущих антибиотикам и хи-миотерапевтическим средствам Применение пробиотиков в животноводстве затрагивает ряд важных проблем, связанных с регулированием кишечного микробиоценоза, иммунной, гормональной и ферментативной систем организма молодняка [3, 5, 7, 8, 23, 24, 26, 28,36, 37, 38, 39, 48,50, 52, 62, 73, 74, 75, 84, 85, 86, 87, 98, 99, 102, 107, 108, 109, 110, 120, 122, 124, 126, 127, 130, 131].

Для профилактики здоровья молодняка необходимо поддерживать популяцию полезных бактерий в пищеварительном тракте. Поэтому важно при его выращивании создавать необходимые условия для формирования собственного микробиоценоза, включая применение средств, в том числе пробиотиков, способствующих формированию микрофлоры в нужном для организма направлении [9, 10, 12, 14, 20, 31, 32, 47, 68, 80].

На сегодняшний день существует большое количество пробиотиков, созданных на основе лактобактерий, бифидумбактерий, молочнокислых, целлюлозолитических и других бактерий [7, 8, 23, 28, 57, 124, 126, 130,133, 136, 137]. Широко применяются в животноводстве и птицеводстве такие новые пробиотики, как реалак, лаком, стрептобифид, ветом-1.1, субалин, цел-лобактерин, лактоамиловарин и другие [8].

В начале 90-х годов в ВИЖе на основе каротинсинтезирующей культуры Шюёососсш получен пробиотик - каротинобактерин, эффективный в раз

ционах цыплят-бройлеров, молодняка крупного рогатого скота и свиней [50, 51,52].

Кровь убойных животных представляет собой ценное сырье для производства лечебных препаратов, поскольку имеет высокую биологическую ценность, обусловленную значительным содержанием хорошо усвояемых и полноценных белков, минеральных солей, ферментов, витаминов, Сахаров, лецитина и других веществ. Поэтому кровь как компонент композиции гемо-препарата (как пробиотик) вызывает интерес в поиске новых биологически активных препаратов в профилактике дисбиозов микрофлоры желудочно-кишечного тракта молодняка животных и иммунодефицитов [3,5, 7, 8, 11,12, 22, 23, 24, 26, 28,36, 37, 38, 39, 48,50, 52, 62, 73, 74, 75, 84, 85, 86, 87, 98, 99, 102, 107, 108, 109, 110, 120, 122, 124, 126, 127, 130, 131].

Цель исследований. Целью настоящей работы явилось установление биологической ценности гемопрепарата на лабораторных и сельскохозяйственных животных, его лечебную и профилактическую эффективность при дисбактериозе, исследование фонового показателя микробиоценоза кишечника у экспериментальных животных.

Для реализации поставленной цели были поставлены следующие задачи исследований:

1. Освоить технологию получения гемопрепарата в условиях убойных пунктов скота.

2. Определить изменение количественного и видового состава микроорганизмов в кишечнике телят под влиянием антгельминтного препарата аверсект-2, как фонового показателя до применения гемопрепарата.

3. Изучить влияние гемопрепарата на состав микробиоценоза пищеварительного тракта кроликов и телят.

5. Изучить биологические свойства, выделенных микроорганизмов (культуральльные, морфологические, тинкториальные и биохимические по-

казатели) желудочно-кишечного тракта кроликов и телят до и после применения гемопрепарата.

6. Установить оптимальные дозы и изучить экономическую эффективность применения гемопрепарата при выращивании кроликов и телят.

Научная новизна. Впервые изучены показатели биологической ценности гемопрепарата, позволяющие рассматривать его в качестве эффективного белкового компонента и источника азотного питания у телят;

Выявлено положительное влияние на микробиоценоз кишечника экспериментальных животных;

Изучена возможность использования гемопрепарата, в качестве компонента функционального питания при профилактике дисбактериозов;

Отработана технология получения крови животных в условиях пункта убоя животных.

Практическая значимость работы.

В результате проведения комплексных исследований разработаны теоретические и практические рекомендации по применению гемопрепарата, как объекта биотехнологии. Он может использоваться для коррекции дисбиоз-ных состояний у сельскохозяйственных животных ветеринарными работниками и зоотехниками для сохранности общего поголовья молодняка, а также как методический материал в учебном процессе.

На основе проведенных исследований разработана технологическая схема проведения диагностических и ветеринарно-профилактических мероприятий по выявлению дисбактериозов в хозяйствах Республики Бурятия. Разработаны и утверждены методические рекомендации: «Влияние гемопрепарата на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и его практическая значимость в коррекции дисбиозов» (Решения Ученого Совета факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО

«Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» протокол №6 от 22.02.07 г. Научно-техническим советом Управления ветеринарии Республики Бурятия, протокол №5 от 20.05.2009г.;

Реализация и внедрение результатов работы. Результаты работы используются в хозяйствах и ветеринарных учреждениях Республики Бурятия при проведении различных ветеринарных лечебно-профилактических мероприятий, влекущих за собой изменение микробиоценоза и дисбиозных состояний.

Материалы диссертационной работы применяются для усовершенствования схемы ветеринарно-санитарных мероприятий в хозяйствах региона при составлении ветеринарно-технологических карт противоинвазионных обработок и вакцинаций, вызывающих состояние дисбиоза у молодняка сельскохозяйственных животных.

Апробация работы. Основные материалы диссертации обсуждены и одобрены на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора Ивана Андреевича Спирюхова «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2007); на Международной научно- практической конференции, посвященной 85-летию кафедры паразитологии (Улан-Удэ, 2008); на Международной научно-практической конференции, посвященной дню науки (Улан-Удэ, 2009); в сборнике научных трудов: «Биотехнология. Технология пищевых продуктов», посвященная 70-летию со дня рождения Александра Александровича Васильева (Улан-Удэ, 2009); на Всероссийской научной конференции «Эколого-географические аспекты инфектологии» (Улан-Удэ, 2011).

Публикации. По результатам исследований опубликовано 6 научных работах, в том числе 2 статьях в журнале «Вестник Бурятской государственной сельскохозяйственной академии имени В.Р. Филиппова» рекомендованном ВАК РФ, методической рекомендации: «Влияние гемопрепарата на мик-

6

робиоценоз желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и его практическая значимость в коррекции дисбиозов» (Улан-Удэ,2011).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 110 страницах компьютерного текста на русском языке и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, анализ результатов исследований, выводы, предложения, список использованной литературы. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 41 рисунком. Список использованной литературы содержит 136 источников отечественных и иностранных публикаций.

Основные положения, выносимые на защиту. На защиту выносятся следующие положения:

1. Технология получения гемопрепарата в условиях лаборатории убойного пункта скота.

2. Влияние гемопрепарата на количественный и видовой состав микроорганизмов в кишечнике телят под влиянием антгельминтного препарата аверсект - 2.

3. Влияние гемопрепарата на состав и резистентность микрофлоры пищеварительного тракта кроликов и телят и биохимические показатели крови.

4. Характер изменчивости биологических свойств, представителей микробиоценоза (культуральные, морфологические, тинкториальные и биохимические показатели микроорганизмов) желудочно-кишечного тракта кроликов и телят до и после применения гемопрепарата.

5. Экономическая эффективность применения гемопрепарата при выращивании кроликов и телят.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Роль нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта в жизнедеятельности сельскохозяйственных животных

После рождения любой организм вступает во взаимодействие с окружающей средой и, в первую очередь, с микроорганизмами, которые могут проникать во все органы и ткани и заселять желудочно-кишечный тракт, где они играют наиболее важную роль для организма.

Для сохранения здоровья организма важно поддерживать необходимое количество полезных бактерий в пищеварительном тракте. Поэтому при выращивании молодняка необходимо создавать условия, обеспечивающие формирование собственного микробиоценоза. Основными факторами, влияющими на его формирование в желудочно-кишечном тракте животных, являются условия содержания, состав рациона [2, 13, 17, 19, 20, 29, 31, 32, 33, 56, 61, 64, 67, 68, 76, 77], время приема первой порции молозива, состояние иммунитета, проведение вакцинаций и применение лекарственных средств [68, 72, 74].

По данным многих авторов, кишечная микрофлора при ее стабилизации является очень сложной и содержит около 1014 микроорганизмов, представляющих более 400 различных видов бактерий. В такой большой и сложной системе устанавливаются сложные взаимосвязи, как между микроорганизмами, так и между макро- и микроорганизмами. При этом кишечная микрофлора участвует в формировании устойчивости организма животного к желудочно-кишечным заболеваниям благодаря таким свойствам, как колонизационная резистентность, бактериальный антагонизм, барьерный эффект, бактериальное вмешательство, конкурентное исключение. Значение микрофлоры ярко просматривается в опытах на гнотобиотических животных. Установлено, что безмикробные животные являются более чувствительными к заболеваниям. У них снижается активность ферментов, чем их близнецы с

полной кишечной флорой. Например, безмикробные морские свинки могут

8

быть убиты 10б клетками Salmonella enteritidis, а морскую свинку с нормальной микрофлорой могут убить 109 клеток сальмонелл. Имеются данные о том, что устойчивость к заболеваниям у птицы может быть повышена путем дачи вылупившимся цыплятам фекальной суспензии от взрослой птицы [6, 13, 14, 30, 31, 32, 46, 61, 63, 64, 67, 76, 77,78, 89, 90, 104].

Несмотря на чрезвычайно важную роль микрофлоры пищеварительного тракта в жизнедеятельности макроорганизма, до настоящего времени нет единой ее классификации. Используя в качестве основы количественный критерий, некоторые авторы подразделяют микрофлору на главную, сопутствующую и остаточную [Принимая всю микрофлору, заселяющую желудочно-кишечный тракт, за 100% к главной относят около 90%. Она включает, в основном бифидобактерии, лактобактерии и бактероиды, которые участвуют в метаболических процессах организма хозяина и играют важную роль. По мнению автора, сопутствующая микрофлора составляет около 10% и состоит из эшерихий, энтерококков и др.(так называемая условно-патогенная микрофлора, всегда присутствующая в пищеварительном тракте). Остаточная не превышает 1%. Сюда относят клебсиеллы, нитробактерии, протеи, дрожжи, клостридии, стафилококки, аэробные бациллы и др. (патогенная микрофлора, способная стать этиологическим фактором заболевания организма животных). Существуют и другие мнения по вопросу классификации. Обычно имеется два различных типа бактериальных популяций, которые могут устанавливаться в пищеварительном тракте. Первой является та, которая существует в тесной взаимосвязи с эпителием кишечника, а вторая встречается свободной в кишечном содержимом. Образующиеся в слизистой кишечника моносахара усваиваются сахаропротеолитическими бактериями (в т.ч. бифидобак-териями), которые локализуются на слизистой и ферментируют углеводы до летучих жирных кислот. При этом побочные продукты метаболизма утилизируются бактериями, функционирующими в просвете кишечника - метано-генными микроорганизмами.

Формирование микробиоценоза кишечника новорожденных телят завершается к 10-дневному возрасту, когда его качественные и количественные показатели сравнительно постоянны. В рубце телят микробная популяция становится стабильной с 6-9-недельного возраста, когда начинают функционировать преджелудки [78]. По литературным данным, в этот период у телят удавалось обнаружить представителей облигатной микрофлоры рубца взрослых животных, в частности Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Streptococcus bovis, Streptococcus faecium, Ruminococcus flavefaciens, Ruminococcus albus, Clostridium cellobioparum, Clostridium cellu-lolyticum, Bacteroides succinogenes, Aspergillus cellulose. Но уже в возрасте 2-4 недель у телят в рубце и сычуге выделено большое количество бактерий [1, 6, 10, 16, 19, 20, 3