Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние гамма-облученного зернофуража на белых крыс и полученное от них потомство

ВАК РФ 03.01.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние гамма-облученного зернофуража на белых крыс и полученное от них потомство"

На правах рукописи

МАЛУШКО АНТОН ВИКТОРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ГАММА-ОБЛУЧЕННОГО ЗЕРНОФУРАЖА НА БЕЛЫХ КРЫС И ПОЛУЧЕННОЕ ОТ НИХ ПОТОМСТВО

03.01.01 — радиобиология 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005569886

Казань-2015

005569886

Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» и ФГБОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия»

Научные руководители: заслуженный деятель науки РТ,

доктор биологических наук, профессор Конюхов Геннадий Владимирович

заслуженный работник высшей школы РФ, доктор биологических наук, профессор Великанов Валериан Иванович

Официальные оппоненты: Саенко Юрий Владимирович -

доктор биологических наук, начальник лаборатории молекулярной и клеточной биологии Научно-исследовательского технологического института им. С.П. Капица ФПБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»

Бжков Владимир Олегович -

доктор ветеринарных наук, главный научный сотрудник отдела животноводства и ветеринарии ФГБНУ «Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения»

Ведущая организация: Московская государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина

Защита состоится « 28 » апреля 2015 г. в Ю00 часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, г. Казань, Научный городок - 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Электронный вариант автореферата и текста объявления о защите размещен на официальном сайте ВАК РФ www.vak.ed.gov.ru. текст диссертации, автореферата, отзыв научных руководителей - на официальном сайте ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» www.vnivi.ru

Автореферат разослан «/?» февраля 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

В.И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. В настоящее время одним из приоритетных направлений в науке и технике является изучение возможности практического использования в сельском хозяйстве ионизирующих излучений.

Ранее проведенными исследованиями установлена высокая эффективность радиационных технологий для увеличения сроков хранения животноводческой и растениеводческой продукции при сохранении её биологической полноценности и безвредности [8,17].

Многократно усилившаяся после аварии на Чернобыльской АЭС радиофобия, а также экономические проблемы 90-х годов привели в совокупности к резкому снижению использования радиационных технологий в сельском хозяйстве и пищевой промышленности. Между тем, по данным МАГАТЭ, во всем мире усиливается интерес к использованию таких технологий в хозяйственных целях. В частности, в 69 странах действует разрешение на облучение более чем 80 видов продукции, около 40 стран проводят облучение пищевой продукции на постоянной основе. В мире работают более 100 промышленных установок для стерилизации медицинских изделий, крупнотоннажные установки для дезинсекции зерна, предотвращения прорастания картофеля и лука, предпосевного облучения семян, обеззараживания кормов, удлинения сроков хранения продуктов питания, половой стерилизации насекомых-вредителей растений и животных [1,23].

Исследования физико-химических и биохимических превращений, протекающих в продуктах под действием ионизирующих излучений, показывают высокую эффективность подавления жизнедеятельности патогенных микроорганизмов, что позволяет значительно увеличить сроки хранения продукции при сохранении ее питательных свойств [3].

В настоящее время в России проведение гамма-облучения продуктов сдерживается недостаточной изученностью безопасности продукции, подвергнутой радиационной обработке, отсутствием достаточного количества установок и нормативно-правовой базы, а также специалистов нужной квалификации для управления этой технологией и хранения облученных пищевых продуктов. Кроме того, нельзя не принимать во внимание и определенную настороженность потребителя к облученным продуктам питания.

В связи с этим, проблема изучения влияния гамма-облученного корма на организм животных имеет как теоретическое, так и практическое значение.

Степень разработанности темы. Проведенные в 60-80-е гг. прошлого века научно-практические работы заложили основы применения

ионизирующих излучений в сельском хозяйстве и пищевой промышленности, согласно которым радиационные технологии могут быть использованы для повышения урожайности и улучшения качества продукции, увеличения сроков её хранения и снижения потерь при хранении, уничтожения патогенной микрофлоры и насекомых-вредителей, селекции новых сортов [12]. В работах [6], [19] показаны перспективы применения радиационных технологий в агропромышленном производстве. В настоящее время в России необходима разработка и совершенствование нормативно-правовой базы применения таких технологий в народном хозяйстве. Для этого актуальным является изучение безопасности облученных сельскохозяйственных продуктов в ранние и отдаленные периоды после радиационной обработки.

Цель и задачи исследований. Целью работы явилось изучение влияния облученного зернофуража на организм белых крыс и полученное от них потомство.

Для достижения поставленной цели были определены следующие основные задачи:

1. Изучить влияние подвергнутого гамма-облучению зернофуража на клинико-гематологические и биохимические показатели белых крыс.

2. Изучить влияние на макро- и микроскопическую картину внутренних органов белых крыс гамма-облученного зерна при длительном его поступлении в организм.

3. Определить биологический эффект облученного корма на организм белых крыс в зависимости от срока хранения зерна после облучения.

4. Определить отдаленные последствия кормления родителей облученным зерном на крысят 1-го, 2-го и 3-го поколений.

Научная новизна исследований. На основании изучения биологического действия длительного поступления в организм зернофуража, подвергнутого лучевой дезинсекции, впервые установлено, что б-месячное скармливание белым крысам корма, облученного в дозе 300 Гр, не оказывает гемотоксического, эмбриотоксического действия и не вызывает патоморфологических изменений у животных.

Установлено также, что биологическое действие облученного зерна на родителей и полученное от них потомство зависит от сроков хранения зерна после облучения: так, если 6-месячное скармливание родителям облученного зерна с 10-45-суточным хранением не оказывало неблагоприятного влияния на рост, развитие, жизнеспособность и плодовитость родителей, то скармливание такого зерна с 1-10-суточным сроком хранением крысятам-отьемышам 1-го поколения оказывало гемотоксический (лейкопения, нейтрофилия),

гепатотоксический (гипоплазия печени), спленотоксический (гиперплазия селезенки) эффекты.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные данные указывают, что зерно, подвергнутое лучевой обработке в дозе 300 Гр, можно использовать на корм животным с 10-45-суточным сроком хранения после гамма-облучения. Учитывая гемотоксический, гепатотоксический и спленотоксический эффекты для кормления потомков белых крыс, получавших облученное зерно с 1-10-суточным сроком хранения, рекомендуется использовать зернофураж спустя 10 сут после гамма-облучения.

Материалы диссертации вошли в «Методические рекомендации по оценке биологической полноценности и безвредности облученных продуктов», утвержденные ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 4 декабря 2014 г.

Полученные результаты рекомендуем использовать на практике при кормлении животных кормами, подвергнутыми лучевой обработке и в учебном процессе при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий по таким предметам, как радиобиология, диагностика болезней, терапия животных, патология, онкология и морфология животных, оформлении учебно-методических указаний для студентов профильных высших профессиональных образовательных учреждений.

Методология и методы исследования. Исследования выполнены в 20102014 гг. в отделе радиобиологии ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» г. Казань и на кафедре анатомии, хирургии и внутренних незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» в соответствии с планом НИР (номер государственной регистрации 01200202604).

В работе использовали зерно овса и ячменя, подвергнутое лучевой обработке на гамма-установке «Исследователь» в дозе 300 Гр.

Объектом исследования являлись белые крысы, у которых исследовали кровь, внутренние органы (сердце, легкое, печень, селезенку, почки и надпочечники) и их потомки 1-3 поколений, содержавшиеся в условиях вивария [20].

Исследования проводились с использованием радиобиологических, клинических, гематологических, биохимических, гистоморфологических и математических методов.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- клинико-гематологические и биохимические показатели крови белых крыс, получавших корма, подвергнутые гамма-облучению в дезинсекционной дозе 300 Гр;

- макро- и микроскопическая картина органов белых крыс, получавших корма, подвергнутые лучевой дезинсекции;

- безопасность скармливания животным зернофуража, подвергнутого облучению в дозе 300 Гр.

Степень достоверности и апробация результатов исследований. Достоверность научных исследований подтверждается комплексностью исследований, большим объемом проведенных анализов при изучении влияния корма, облученного в дозе 300 Гр, на организм белых крыс.

Основные научные положения, выводы и рекомендации диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Всероссийской научно-практической конференции «Современные научно-практические достижения в ветеринарии» (Киров, 2013); 3-ем Международном конгрессе ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2014); Объединенном XII Конгрессе МАМ и VII Съезде ВНОАГЭ (Тюмень, 2014); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР и БАССР, д.б.н., профессора П.Т. Тихонова «Актуальные направления инновационного развития животноводства и ветеринарной медицины» (Уфа, 2014); Международной научно-практической конференции «Перспективы развития современных сельскохозяйственных наук» (Воронеж, 2014).

Публикация результатов исследований. Основное содержание диссертации и ее научные положения опубликованы в 8 печатных работах, в том числе 4 статьи в изданиях, входящих в перечень рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, основная часть, заключение, список сокращений и условных обозначений, список использованной литературы, список иллюстративного материала и приложение. Работа иллюстрирована 44 рисунками и содержит 21 таблицу. Список литературы включает 194 источника, в том числе 40 - зарубежных авторов.

2 ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В этом разделе на основании изучения источников литературы обобщены и обсуждены следующие вопросы: использование ионизирующих излучений для обработки сельскохозяйственных и пищевых продуктов; использование радиационных технологий для повышения сохранности и качества зерна и зернопродуктов; действие ионизирующих излучений на сельскохозяйственную продукцию, животных, насекомых и микроорганизмы.

2.2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования выполнены в 2010-2014 гг. в отделе радиобиологии ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» и на кафедре анатомии, хирургии и внутренних незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» в соответствии с планом НИР (номер государственной регистрации 01200202604).

В работе использовали зерно овса и ячменя, подвергнутое лучевой обработке на гамма-установке «Исследователь» в дезинсекционной дозе (300 Гр).

Критериями оценки влияния зерна, облученного в дозе 300 Гр, на организм белых крыс служили изучения росто-весовых, клинико-гематологических, биохимических и гистоморфологических показателей.

В первой серии опытов использовали 45 белых крысят-отьемышей живой массой 56,0±1,6 г, которые были разделены на 3 группы по 15 в каждой. Животным 1-й группы скармливали зерно овса и ячменя в течение 6 мес с 1-10-суточным сроком хранения после облучения в количестве 40% по массе рациона. Животным 2-й группы скармливали зерно овса и ячменя в течение 6 мес с 10-45-суточным сроком хранения после облучения в количестве 40% по массе рациона. Третья группа служила биологическим контролем и получала необлученное зерно с основным рационом.

Во второй серии опытов использовали крысят-отьемышей массой 54,0±1,4 г от родителей 1-й группы по 30 животных в каждом поколении. Животные получали стандартный рацион. Подопытных животных распределяли в группы по принципу аналогов. Крысята-отьемыши контрольной группы получали необлученное зерно. Опытным крысятам в течение 6 мес скармливали зерно ячменя и овса с 1-10-суточным сроком

хранения после облучения в количестве 40% по массе рациона. Всего использовано 135 животных.

Для облучения зерна использовали гамма-установку «Исследователь» с источником излучения б0Со. Мощность дозы составляла 5,36 х 10"2 Кл/(кг • с).

Определение температуры тела, числа сердечных сокращений и дыхательных движений в 1 минуту; изменение массы тела; визуальный осмотр кожи, волосяного покрова, слизистых оболочек.

Для взятия крови опытных и контрольных животных подвергали декапитации [16]. Определяли содержание эритроцитов и лейкоцитов подсчетом в камере Горяева, содержание гемоглобина по методу Сали с помощью гемометра ГС-3, тромбоцитов, процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов, гематокрит, цветной показатель, СОЭ [10, 11]. Дифференциальный подсчет лейкоцитов и учет качественных изменений в морфологии крови проводили на окрашенных по Романовскому-Гимза мазках с вычислением процентного содержания и выведением лейкограммы [5, 7,]. Содержание общего белка определяли рефрактометрическим методом, кальций - по Моизесу и Заку в модификации Усовича А.Т., фосфор - по Бригсу в модификации Юделовича В.Я. [13], креатинин по методу Лаппера, активность ферментов АЛТ, АСТ методом Рейтмана-Френкеля, а-амилазу по методу Каравея [10].

Для морфологических и биохимических исследований применяли стандартные растворы, необходимые химические реактивы, посуду, а также холодильники, термостаты, водяные бани, центрифуги и т.д.

После патологоанатомического исследования тушек крыс проводили полную эвисцерацию органов с последующим отделением печени, селезенки, сердца, легких, почек и надпочечников [2, 9, 18]. Абсолютную массу паренхиматозных органов определяли сразу же после вскрытия.

Для гистологических исследований брали кусочки органов 1x1x0,5 см в однотипных местах. Пробы печени, селезенки, сердца, легких, почек и надпочечников фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Фиксацию проводили при комнатной температуре 18-20 °С. Фиксированный материал после тщательной промывки обезвоживали путем проведения через спирты возрастающей концентрации по общепринятой методике. После этого готовили парафиновые срезы с помощью микротома санного МС-2, из каждого кусочка получали по 5 сегментальных срезов толщиной 5-6 мкм. Препараты окрашивали с применением гематоксилина и эозина [4,15,22].

Оценку состояния воспроизводительной функции крыс проводили с учетом данных особенностей половых циклов. В течение всего периода беременности учитывали клиническое состояние белых крыс, проводили

гематологические исследования, фиксировали процесс родов, количественные и качественные характеристики приплода.

Обработку полученного в ходе экспериментов цифрового материала осуществляли на персональном компьютере с использованием прикладных программ Microsoft Word 2010, Microsoft Excel 2010 [20].

2.3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.3.1 Клинико-гематологические и биохимические показатели крови белых крыс, получавших корма, подвергнутые лучевой обработке

В первой серии опытов у белых крыс 1-й и 2-й групп клинические признаки были без видимых изменений: они выглядели активными, реагировали на внешние раздражители, потребляли корм и воду, температура, пульс, дыхание были в пределах физиологической нормы. Контуры тела, положение головы были без изменений. Слизистая глаз влажная, без изменений. Кожный покров гладкий, движения животных естественные, суставы без изменений. Случаев гибели животных не было. Животные опытных групп ничем не отличались от контрольных сверстников.

Результаты изучения морфологических показателей крови белых крыс, получавших в рационе облученный зернофураж, представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Морфологические показатели крови белых крыс, получавших

в рационе облученное зерно (М±т, п=45)

Показатель Группа

1 2 3

Эритроциты, 10и/л 6,4±0,8 6,5±0,6 6,3±1,2

Гемоглобин, г/л 132,5±5,5 132,8±5,9 133,0±8,9

Тромбоциты, 10'/л 379,5±27,6 380,5±10,9 372,2±19,1

Цветной показатель 0,90±0,02 0,90±0,09 0,90±0,02

СОЭ, мм/г 7,7±2,0 6,5±2,0 8,0±1,2

Гематокрит, % 33,8±3,5 34,2±1,5 32,8±1,6

Лейкоциты, Ю'/л 9,10±0,50 9,50±0,40 9,20±0,70

Из данных таблицы 1 видно, что количество эритроцитов, тромбоцитов, гемоглобина, ЦП, гематокрит и СОЭ у крыс опытных групп не имели достоверного различия с контролем. Наблюдаемые колебания не выходили за пределы физиологических границ.

Определение общего количества лейкоцитов в крови имеет большое диагностическое значение, но не дает представления о соотношении между

отдельными их видами и об их качественных изменениях при различных физиологических состояниях организма, характер течения которых накладывает существенный отпечаток на лейкограмму крови (таблица 2). Таблица 2 - Лейкограмма белых крыс, получавших в рационе облученное

зерно (М±т, п=45)

Показатель Группа

1 2 3

Лейкоциты, 10Yn 9,10±0,50 9,50±0,40 9,20±0,70

Базофилы, % 0,20±0,02 0,20±0,02 0,30±0,03

Эозинофилы, % 4,70±0,20 4,70±0,30 4,70±0,30

Нейтрофилы, % юные 0,10±0,02 0,20±0,02 0,30±0,01

палочкояд. 3,50±0,32 3,50±0,31 3,70±0,35

сегментояд. 30,20±1,05 30,70±1,10 30,0±1,03

Лимфоциты, % 63,00±4,10 61,00±4,30 62,70±6,50

Моноциты, % 3,50±0,30 3,50±0,40 3,50±0,40

Содержание эозинофилов, б азофилов, лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов у животных опытных групп также не отличалось от соответствующих показателей крыс контрольной группы.

Уровень общего белка в сыворотке крови животных является одним из критериев оценки обеспеченности организма питательными веществами (таблица 3).

Таблица 3 - Биохимические показатели белых крыс, получавших в рационе

облученное зерно (М±т, п=45)

Показатель Группа

1 2 3

Общий белок, г/л 70,30±4,06 71,50±2,19 70,2±3,1

Креатинин, ммоль/л 78,6±16,2 78,5±6,4 79,2±10,5

а-амилаза, мг х л/сек 37,6±6,2 37,6±6,2 38,4±4,3

ACT, ммоль/л 3,9±0,4 4,1 ±0,1 4,08±0,50

АЛТ, ммоль/л 3,7±0,3 3,6±0,3 3,8±0,3

Са, ммоль/л 2,0±0,1 2,2±0,1 2,0±0,2

Р, ммоль/л 0,80±0,08 0,90±0,05 0,9±0,1

Содержание общего белка, кальция, фосфора, креатинина крови у животных 1-й и 2-й групп находилось в пределах физиологической нормы.

При анализе результатов исследования было установлено, что скармливание белым крысам 1-й и 2-й группы у-облученного зерна не приводило к значительным изменениям активности ферментов сыворотки крови по сравнению с контролем. Разница в средней активности а-амилазы в

опытных и контрольной группах не превышала индивидуальных колебаний внутри каждой группы.

2.3.2 Гистоморфология органов белых крыс, получавших корма, подвергнутые лучевой обработке

В результате проведенных исследований макроскопической картины внутренних органов белых крыс опытных групп установлено, что легкие светло-розового цвета, воздушные, упруго-эластической консистенции, края ровные, слегка притуплены, разделения на доли четко просматриваются. Правое легкое подразделяется на три доли, левое - на четыре. Поверхность разреза слегка увлажненная, дольчатый рисунок сохранен, кровенаполнение сосудов умеренное (рисунок 1).

Печень в объеме не увеличена, четко разделена на доли, форма органа сохранена, красно-коричневого цвета, края острые, поверхность гладкая и блестящая, консистенция упругая. Желчный пузырь расположен на висцеральной поверхности между квадратной и правой долями, умеренно заполнен темно-зеленого цвета желчью. Поверхность разреза слегка увлажненная, кровеносные сосуды умеренно кровенаполнены, дольчатый рисунок органа слабо выражен, что является видовой особенностью органа у крыс (рисунок 2).

I II III I и П1

t Щ ir

Рисунок 1 - Легкие белых крыс Рисунок 2 - Печень белых крыс

Сердце округло-овальной формы, упругой консистенции, перикард тонкий, прозрачный, в его полости содержится незначительное количество прозрачной жидкости. Эпикард и эндокард - гладкие, блестящие, серовато-красноватого цвета. Миокард - упругий, красного цвета, рисунок волокнистого строения сохранен (рисунок 3).

Селезенка лентовидной формы, края ровные, несколько закруглены, поверхность гладкая, темно-вишневого цвета, упругой консистенции, соскоб с поверхности разреза незначительный. На разрезе рисунок фолликулярного и трабекулярного строения сохранен (рисунок 4).

I II

III

I I I

III

Рисунок 3 - Сердце белых крыс Рисунок 4 - Селезенка белых крыс

Почки бобовидной формы, в объеме не увеличены, поверхность гладкая, блестящая, коричневато-красного цвета, консистенция органа упругая. Околопочечная капсула тонкая, прозрачная, легко снимается. Поверхность разреза ровная, умеренно влажная, граница коркового и мозгового вещества сохранена. Слизистая почечной лоханки серовато-беловатого цвета ровная, слегка влажная (рисунок 5).

I II III

Ш Ш О»

Рисунок 5 - Почки белых крыс

Надпочечники в объеме не увеличены, с поверхности серовато-желтоватого оттенка, округло-овальной формы, упругой консистенции, граница коркового и мозгового вещества без видимых изменений.

Таким образом, при сравнительном морфологическом анализе результатов макроскопической картины внутренних органов установлено, что видимых различий этого показателя в момент вскрытия белых крыс 1-й, 2-й и 3-й групп не наблюдается.

Установлено, что относительная масса внутренних органов животных 1-й, 2-й и 3-й групп, представленных в таблице 4, также не имела существенных различий.

При гистологическом анализе печени видно дольчатое и балочное строение органа с сохраненной гистоархитектоникой. Междольковая соединительная ткань образует тонкие перегородки, разделяющие поверхность среза на классические дольки. Портальные тракты образуют печеночные триады, располагающиеся на вершине долек. В середине долек расположены

Таблица 4 - Относительная масса внутренних органов белых крыс (%), получавших корма, подвергнутые лучевой обработке (М±ш)

Орган Группа

1 2 3

Печень 3,40±0,30 3,50±0,40 3,30±0,20

Селезенка 0,22±0,07 0,23±0,08 0,25±0,09

Сердце 0,42±0,04 0,40±0,02 0,42±0,04

Легкие 0,69±0,04 0,69±0,04 0,70±0,007

Почки 1,0б±0,07 1,04±0,06 1,05±0,09

Надпочечники 0,010±0,002 0,010±0,002 0,010±0,001

центральные вены, в которые впадают извилистые синусоидные гемокапилляры. Желчные капилляры достигают вершины долек, формируют в междольковой соединительной ткани желчные протоки (рисунки 6, 7). Гепатоциты полигональной формы, с хорошо выраженным округлым ядром, иногда с 2-3 ядрышками, цитоплазма - однородная, розоватого цвета. В центролобулярных гепатоцитах прослеживается небольшая зернистость. Перипортальные гепатоциты содержат два ядра, свидетельствующие о физиологической регенерации (рисунок 8).

йМ^ШШйШшВШ

НМШНР

Рисунок 6 - Триада в

междольковой соединительной ткани печени крысы 1 -й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

В легких - гистоархитектоника сохранена, альвеолы заполнены воздухом, альвеолярные перегородки тонкие, выстланы пневмоцитами, ядра клеток крупные, округлые. В межальвеолярных перегородках просматриваются кровеносные сосуды капиллярного типа, умеренно заполненные кровью. Бронхи среднего калибра, выстланы многорядным мерцательным эпителием, бронхиолы - однослойным многорядным мерцательным эпителием, содержащим бокаловидные, реснитчатые и вставочные клетки. Стенка бронхиолы трехслойна, образована слизистой, гладкомышечной и адвентициальной оболочками. В адвентиции бронхиол в перибронхиальной соединительной ткани обнаруживаются единичные лимфоидные фолликулы (рисунки 9, 10, 11).

Рисунок 7 - Междольковая соединительная ткань с триадой в печени крысы 2-й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 8 -

Центролобулярная и перипортальная зоны долек печени крысы 3-й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 9 -Перибронхиальная лимфоидная ткань в легком крысы 1 -й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 10 -Перибронхиальные лимфоидные фолликулы в легком крысы 2-й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 11 - Участок бронхиолы воздухоносных путей с лимфотическим фолликулом и альвеол газообменного отдела легких у крыс 3-й группы.

Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

В селезенке сохранена гистоархитектоника, с поверхности орган покрыт соединительнотканной капсулой, образованной плотной волокнистой соединительной тканью, содержащей гладкомышечные клетки, коллагеновые и эластические волокна. От капсулы внутрь отходят трабекулы, формирующие трабекулярный аппарат органа, в котором локализуются кровеносные сосуды и нервы. Структура органа представлена красной и белой пульпой. Белая пульпа сформирована мелкими лимфоидными фолликулами с наличием слабо выраженных светлых центров (рисунок 13). Маргинальные зоны фолликулов широкие, содержат малые лимфоциты. Ретикулярная ткань красной пульпы заполнена клеточными элементами. Она содержит венозные синусы, эритроциты, макрофаги-сидерофаги и небольшое количество малых лимфоцитов, плазматических клеток, эозинофильных гранулоцитов (рисунки 12, 14).

Рисунок 13 - Фолликулы белой пульпы со слабо выраженными светлыми центрами в селезенке крысы

2-й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

В миокарде просматривается четко выраженная структура поперечнополосатой мышечной ткани, представленной кардиомиоцитами (рисунок 16). В цитоплазме кардиомиоцитов четко просматривается исчерченность, в центре

Рисунок 12 - Фолликулы белой и клетки красной пульпы селезенки крысы 1 -й

группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 14 - Фолликулы белой пульпы, трабекула с трабекулярными сосудами и красная пульпа селезенки крысы 3-й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

клеток располагаются ядра овальной формы с мелкодисперсным хроматином. Саркоплазма - интенсивно окрашена. Границы кардиомиоцитов хорошо выражены в виде вставочных дисков (рисунки 15, 17).

Рисунок 15 - Волокна из кардиомиоцитов в миокарде крысы 1 -й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 17 - Поперечный гистосрез участка миокарда крысы 3-й группы с объединением кардиомиоцитов в волокна. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 16 -Кардиомиоциты, формирующие волокна миокарда в сердце крысы

2-й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

В почках сохранена гистоархитектоника. Орган с поверхности покрыт соединительнотканной капсулой, с единичными гладкомышечными клетками. Паренхима органа четко подразделяется на корковое и мозговое вещество. Корковое вещество представлено почечными тельцами, имеющими вид плотных округлых структур, образованных клубочками капилляров, окруженными капсулой нефрона (Шумлянского-Боумена). На препарате просматривается незначительной величины полость почечного тельца. Извитые канальцы проксимального отдела на срезе представлены в продольном и поперечном сечении. Канальцы выстланы однослойным кубическим эпителием, содержащим округлые ядра, цитоплазма однородная, окрашена в розовый цвет. В интерстициальной ткани обнаруживаются кровеносные сосуды умеренно заполненные кровью (рисунки 18, 19). Мозговое вещество образует продольные тяжи - мозговые лучи, которых содержат петли нефронов и собирательные трубочки (рисунок 20).

Рисунок 18 - Умеренное полнокровие сосудов интерстиции коркового вещества почки крысы 1 -й

группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 19 - Корковое вещество с умеренным полнокровием сосудов интерстиции в почке крысы

2-й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 20 - Гистосрез коркового вещества с хорошо сформированными гломерулами капилляров в почке крысы 3-й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Надпочечники имеют свойственную органу гистоархитектонику. Они покрыты соединительнотканной капсулой, от которой внутрь органа отходит тонкая сеть коллагеновых волокон, образующих строму органа. На периферии располагается корковое вещество, а в центре мозговое. Корковое вещество содержит три зоны эндокриноцитов: клубочковую, пучковую и сетчатую (рисунок 21), между клетками располагаются многочисленные капилляры (рисунок 22). Мозговое вещество состоит из скоплений крупных полигональных клеток, разделенных соединительнотканными прослойками с синусоидными гемокапиллярами. В мозговом веществе выделяются светлые и темные эндокриноциты, с округлыми ядрами и однородной цитоплазмой (рисунок 23).

. .......

ттттШшь

Рисунок 21 - Участок коркового вещества с хорошо сформированными клубочковой и пучковой зонами эндокриноцитов в надпочечнике крысы 1 -й группы. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 22 - Корковое вещество надпочечника крысы 2-й группы с хорошо выраженными клубочковой, пучковой и сетчатой зонами. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

Рисунок 23 - Участок надпочечника крысы 3-й группы с хорошо выраженными клубочковой, пучковой и сетчатой зонами коркового вещества и мозговым веществом. Окраска гематоксилином и эозином. хЮО

В результате сравнительного анализа полученных данных специфических различий в гистологической структуре внутренних органов у белых крыс 1-й, 2-й и 3-й групп не выявлено.

Продолжая исследования, изучали влияние облученного зерна на воспроизводительную функцию животных. Условия скармливания гамма-облученного зернофуража подопытным животным были аналогичны таковым в экспериментах на крысятах-отъемышах.

Критерием оценки биологического действия облученного зерна на воспроизводительную функцию крыс служило количество новорожденных крысят на одну самку за один окот, количество мертворожденных, уродов, неоплодотворенных самок в опытных и контрольных группах белых крыс, а также жизнеспособность полученного от них потомства.

Результаты изучения воспроизводительной функции крыс и полученного от них потомства представлены в таблицах 5, 6, 7.

Таблица 5 - Изменения живой массы (г) крысят-отьемышей в возрасте 1, 15 и 34 сут при скармливании зерна, облученного в дозе 300 Гр

Группа

1 2 3

Возраст -1 сут

40,7±1,3 40,5±1,5 41,0±1,5

Возраст -15 сут

68,6±2,7 68,4±3,7 68,1±4,1

Возраст - 34 сут

103,0±2,7 106,2±4,4 107,9±3,6

Таблица 6 - Количество новорожденных крысят на 1 самку за один окот по группам

Окот Группа

1 2 3

первый 9,80±0,59 10,50±0,86 11,20±0,45

второй 6,80±0,47 8,50±0,58 9,50±0,64

третий 6,00±0,39 6,50±0,61 7,10±0,48

Таблица 7 - Количество новорожденных крысят на 1 самку в помете у крыс 1-3 поколений, родители которых получали зерно, облученное в дозе 300 Гр с 1-10-суточным сроком хранения

Поколение Группа

крыс контрольная опытная

1 9,70±0,48 8,20±0,48

2 8,ОСЫ),71 7,ОСЫ),61

3 7,60±0,41 6,20±0,47

Из данных таблиц 5-7 видно, что потомство за три окота от белых крыс, получавших зернофураж, облученный в дозе 300 Гр с 1-10-суточным сроком хранения, характеризуется меньшей массой тела при рождении, гибелью отдельных потомков в первые дни жизни.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что у животных 1-3 поколений от белых крыс, получавших в течение 6-месяцев облученный зернофураж в дозе 300 Гр с 1-10-суточным сроком хранения, выявлены во втором и третьем поколениях дефекты в строении глаз. В приплоде третьего поколения преобладало количество народившихся самцов.

Таким образом, длительное поступление в организм лабораторных животных зернофуража, подвергнутого гамма-облучению в дозе 300 Гр с 10-45-суточным сроком хранения, не оказывало отрицательного влияния на клинико-гематологические и биохимические показатели и воспроизводительную

функцию белых крыс, что свидетельствует о безвредности и доброкачественности исследуемого зерна.

2.33 Клинико-гематологические и биохимические показатели кровн белых крыс 1-3 поколений, получавших корма, подвергнутые лучевой

обработке

Во второй серии у белых крыс, получавших зернофураж с 1-10 суточным сроком хранения, 1-3 поколений наблюдалось небольшое угнетение общего состояния, животные чувствовали себя удовлетворительно, вяло реагировали на внешние раздражители. Показатели температуры, пульса, дыхания колебались незначительно в пределах физиологических границ, снижение аппетита было незначительное. Живая масса была не стабильная. Контуры тела, положение головы были без изменений. Отмечали незначительную анемию видимых слизистых оболочек. Волосяной покров гладкий, движения животных естественные, суставы без изменений. У некоторых крыс отмечали расстройство деятельности ЖКТ. Случаев гибели животных не было.

Клиническая картина у белых крыс при скармливании им облученного в дозе 300 Гр зерна в количестве 40% по массе рациона с 1-10-суточным сроком хранения была схожа с таковой у животных, облученных малыми дозами, но менее выраженной (таблица 8).

Как видно из данных таблицы 8, содержание эритроцитов, тромбоцитов, гемоглобина, гематокрит, скорость оседания эритроцитов, ЦП у крыс опытной группы 1-3 поколений существенно не отличались от таковых у контрольных животных и находились в пределах физиологических норм. Однако в лейкограмме белых крыс первого поколения по сравнению с последующими поколениями отмечалась лейкопения: количество лейкоцитов уменьшалось до 8,1±0,2х10% (Р<0,01), 9,2±0,2 х10% и 10,5±0,4 х109/л соответственно в первом, втором и третьем поколениях. Отмечалось процентное увеличение содержания нейтрофилов, особенно молодых клеток - юных и палочкоядерных у крыс первого поколения на 0,5% (Р<0,001) и 4,2% (Р<0,001) соответственно по сравнению с животными второго и третьего поколений.

Наблюдаемое понижение количества лейкоцитов свидетельствует о повреждении кроветворной системы, чрезвычайно чувствительной к действию радиации [13].

Различия в содержании общего белка, кальция, фосфора, креатинина, активности АЛТ, ACT и сс-амилазы у потомков не превышала среднестатистических колебаний этих показателей по группам.

Таблица 8 - Морфологические и биохимические показатели белых крыс 1-3 поколений, получавших в рационе облученное зерно с 1-10-суточным сроком хранения (М±ш, п=90)

Показатель Первое поколение Второе поколение Третье поколение

контроль опыт контроль опыт контроль опыт

Эритроциты, Ю'^/л 6,2±1,5 6,7±0,8 6,7±1,2 7,1 ±0,3 6,9±0,4 6,7±1,2

Гемоглобин, г/л 132,0±1,2 133,4±2,9 133,5±2,7 134,2±2,7 133,2±7,6 133,0±8,9

Тромбоциты, 10у/л 377,2±19,1 381,1 ±7,9 378,5±13,0 381,5±5,4 375,3±15,2 378,1±12,4

Цветной показатель 0,90±0,07 0,90±0,06 0,90±0,07 0,90±0,06 0,90±0,02 0,90±0,04

СОЭ, мм/г 6,2±1,4 6,7±1,7 8,2±0,7 7,7±1,5 6,2±1,7 6,8±2,1

Гематокрит, % 35,20±2,05 36,8±2,5 32,7±0,5 34,05±0,50 34,2±1,5 35,5±2,5

Лейкоциты, 107л 10,7±0,8 8,1 ±0,2* 9,6±0,1 9,2±0,2 10,6±0,6 10,5±0,4

Базофилы, % 0,30±0,02 0,40±0,05 0,20±0,02 0,20±0,02 0,20±0,03 0,20±0,03

Эозинофилы, % 3,7±0,4 4,6±0,4 4,5±0,2 4,5±0,3 3,9±0,4 3,8±0,5

Нейтрофилы, % юные 0,20±0,01 0,50±0,01** 0,20±0,01 0,10±0,01 0,20±0,01 0,20±0,01

палочкояд. 3,70±0,36 4,20±0,41** 3,50±0,31 3,50±0,33 3,70±0,47 3,80±0,35

сегментояд. 31,20±1,05 31,5±1,1 31,50±1,05 31,2±1,1 30,50±1,05 30,2±1,1

Лимфоциты, % 64,5±5,8 63,8±4,3 62,2±4,7 63,5±5,2 63,1 ±4,2 63,8±4,1

Моноциты, % 3,5±0,3 3,4±0,3 3,7±0,2 3,7±0,3 3,5±0,3 3,5±0,4

Общий белок, г/л 70,6±5,8 72,1 ±3,5 71,4±1,7 71,05±1,90 73,8±4,7 74,5±5,7

Креатинин, ммоль/л 82,4±3,6 83,3±7Г2 80,2±2,9 79,7±5,2 78,2±6,5 78,5±6,9

а-амилаза, мг х л/сек 39,7±3,4 38,8±1,2 39,7±2,7 39,3±0,8 38,4±4,3 39,1 ±0,6

ACT, ммоль/л 4,1 ±0,3 4,2±0,4 4,05±0,30 4,1 ±0,2 4,1 ±0,2 4,09±0,40

АЛТ, ммоль/л 3,6±0,3 3,3±0,2 4,07±0,20 3,9±0,3 3,7±0,3 3,8±0,3

Са, ммоль/л 2,6±0,4 2,1 ±0,2 2,15±0,40 2,05±0,09 2,4±0,1 2,2±0,4

Р, ммоль/л 0,9±0,1 0,80±0,09 0,90±0,08 0,90±0,02 0,9±0,1 0,9±0,2

Примечание: * р < 0,01 ** р < 0,001

2.3.4 Гистоморфология органов белых крыс 1-3 поколений, получавших корма, подвергнутые лучевой обработке

Через 6 мес от начала кормления в макроскопической картине внутренних органов белых крыс 1-3 поколений опытной группы специфических различий не выявлено.

Относительная масса внутренних органов белых крыс первого поколения, получавших облученное зерно, имела некоторые различия с контролем: так, масса печени уменьшалась на 12%, сердца, легких, почек и надпочечников не изменялась, селезенки - увеличивалась на 20%. У белых крыс второго и третьего поколений изменений морфологической структуры внутренних органов на момент вскрытия не отмечалось (таблица 9).

Таблица 9 - Относительная масса внутренних органов белых крыс 1-3 поколений, получавших корма, подвергнутые лучевой обработке

Орган Первое поколение Второе поколение Третье поколение

контроль опыт контроль опьгг контроль опыт

Печень 3,40±0,30 3,00±0,20* 3,10±0,10 3,30±0,20 3,10±0,10 3,10±0,10

Селезенка 0,23±0,08 0,31±0,09«* 0,22±0,07 0,23±0,08 0,23±0,08 0,24±0,09

Сердце 0,40±0,02 0,43±0,05 0,40±0,02 0,40±0,02 0,30±0,01 0,30±0,01

Легкие 0,69±0,03 0,72±0,06 0,63±0,04 0,65±0,04 0,63±0,04 0,64±0,03

Почки 1,02±0,08 0,96±0,07 1,06±0,07 1,07±0,08 1,05±0,06 1,06±0,07

Надпочечники 0,01±0,00 0,01±0,00 0,01±0,00 0,01±0,00 0,01±0,00 0,01±0,00

Примечание: * р < 0,01 ** р < 0,001

Проведенный нами гистологический анализ не выявил у белых крыс опытной группы 1-3 поколений существенных различий в микроскопической картине внутренних органов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании проведенных экспериментов нами подтверждена безвредность использования на корм животным зерна, подвергнутого радиационному ингибированию развития насекомых с 10-45-суточным сроком хранения, после облучения. Обобщение и анализ полученных результатов обосновывает следующие выводы:

1. Длительное скармливание белым крысам зерна, подвергнутого гамма-облучению в дозе 300 Гр с 1-10 и с 10-45-суточным периодом хранения, не оказывает отрицательного влияния на физиологические, клинико-гематологические, биохимические показатели и макро-микроструктуру внутренних органов. Однако у белых крыс, получавшие зерно, облученное в дозе 300 Гр с 1-10-суточным сроком хранения, наблюдалась тенденция к уменьшению количества новорожденных крысят.

2. Ежедневное в течение 6-мес скармливание белым крысам первого поколения зерна, подвергнутого лучевой обработке в дозе 300 Гр с 1-10-суточным сроком хранения, приводит к уменьшению количества лейкоцитов, увеличению процентного содержания нейтрофилов, особенно молодых клеток -юных - на 0,5% и палочкоядерных - на 4,2%, уменьшению массы печени и увеличению массы селезенки.

3. Установлено, что потомки второго и третьего поколений от белых крыс, получавших в рационе 40% зерна, подвергнутого лучевой обработке в

дозе 300 Гр с 1-10-суточным сроком хранения, не имеют отличий в росте, развитии, биохимических показателях, макро- и микроскопической картине внутренних органов от своих контрольных сверстников.

4. Потомство 3-го окота, получавшее облученное зерно в дозе 300 Гр с 1-10-суточным сроком хранения, характеризуется меньшей массой тела при рождении и гибелью отдельных потомков в первые дни жизни.

5. При исследовании трех поколений потомков белых крыс, получавших облученное зерно в дозе 300 Гр с 1-10-суточным сроком хранения, выявлены во втором и третьем поколениях дефекты в строении глаз. В приплоде третьего поколения преобладало количество народившихся самцов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Зерно, подвергнутое гамма-облучению в дозе 300 Гр с 10-45-суточным сроком хранения после лучевой обработки, можно использовать в корм животным без ограничений.

2. Для снижения негативного воздействия зерна с 1-10-суточным сроком хранения после гамма-облучения, рекомендуем использовать зернофураж на корм животным спустя 10 сут после лучевой обработки.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Акатов, A.A. Ядерная энергия на службе человечества / A.A. Акатов, Ю.С. Коряковский - М.: Издат. Общественный совет Госкорпорации «Росатом», 2011. - 24 с.

2. Васильев, Ю.Г. Цитология. Гистология. Эмбриология / Ю.Г. Васильев, Е.И. Трошин, В.В. Яглов - Учебник (специальная литература). -СПб.: Издательство «Лань», 2009. - 576 е.: ил.

3. Веселова, Т.В. Изменение состояния семян при их хранении, проращивании и под действием внешних факторов (ионизирующего излучения в малых дозах и других слабых воздействий), определяемой методом замедленной люминесценции: дис. ... канд. биол. наук / Т.В. Веселов И -Москва, 2008. - 275 с.

4. Жаров, A.B. Вскрытие и патоморфологическая диагностика болезней животных / A.B. Жаров, И.В. Иванов, А.П. Стрельников; под ред. A.B. Жарова. - М.: Колос, 2000. - 400 с.

5. Жербин, Е.А. Радиационная гематология / Е.А. Жербин, А.Б. Чухловин - М.: «Медицина», 1989. - 176 е., ил.

6. Иванов, A.B. Радиационные технологии в народном хозяйстве / A.B. Иванов, A.A. Иванов, Г.В. Конюхов // Медицина: целевые проекты. Ядерная медицина. № 10,2011. - С. 54-55.

7. Карпуть, И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных / ИМ. Карпуть - Мн.: Издат. «Ураджай», 1986. - 183 е., ил.

8. Кодекс Алиментариус. Облученные продукты питания. Совместная программа ФАО/ВОЗ по стандартам на пищевые продукты. - М.: Издательство «Весь Мир», 2007. - 24 с.

9. Козлов, H.A. Общая гистология. Ткани домашних млекопитающих животных / H.A. Козлов - СПб.: Лань, 2004. - 223 с.

10. Кондрахин, И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики / И.П. Кондрахин, A.B. Архипов, В.И. Левченко, Г.А. Таланов и [др.] - Справочник. - М.: Колос. 2004. - 511 с.

11. Кудрявцев, A.A. Клиническая гематология животных / A.A. Кудрявцев, Л.А. Кудрявцева - М.: Колос, 1974. - 399 с.

12. Кузин, A.M. Прикладная радиобиология (Теоретические и технические основы) / A.M. Кузин, Д.А. Каушанский - М.: Энергоиздат, 1981. -224 с.

13. Лебедев, П.Т. Методы исследования кормов, органов и тканей животных / П.Т. Лебедев, А.Т. Усович - М.: Россельхозиздат. 1976. - 389 с.

14. Мельникова, С.К. Влияние растительных радиотоксинов на животный организм / С.К. Мельникова, В.А. Копылов; под ред. A.M. Кузина // Радиотоксины, их природа и роль в биологическом действии радиации высокой энергии. - М.: Атомиздат, 1966. - С. 86-91.

15. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов - Издательство «Медицина» Ленинградское отделение, 5 изд., испр. и доп., 1969. - 423 с.

16. Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных. [Электронный ресурс]. № 742 от 13.11.1984. - М., 1984. - Режим доступа: http://www.msu.ru/bioetika/Prikaz-minvuz.doc.

17. Рачинский, В.В. Применение изотопов и радиации в сельском хозйстве / В.В. Рачинский - М.: Издательство МСХА, 1992. - 172 с.

18. Самусев, Р.П. Атлас по цитологии, гистологии и эмбриологии / Р.П. Самусев, Г.И. Пупышева, A.B. Смирнов - Учебное пособие для студентов высш. мед. учеб. заведений. - М.: ООО Издательский дом «ОНИКС 21 век»: ООО Издат-во «Мир и Образование», 2004. - 400 е., с ил.

19. Санжарова, Н.И. Перспективы применения радиационных технологий в агропромышленном производстве / Н.И. Санжарова, С.А, Герасышн, P.M. Алексахин, Г.В. Козьмин, H.H. Лой, H.H. Исамов //

Двухмесячный научно-практический журнал «Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук», - №5. - сентябрь-октябрь 2013. - С. 21-23.

20. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев): СНИП 1045-73, утв. 06.04.1973. - М.; Госстандарт, 2011. -15 с.

21. Стрелков, Р.Б. Методика научных исследований и статистическая обработка результатов / Р.Б. Стрелков - М.: Наука, 1996. - 308 с.

22. Сулейманов, С.М. Методы морфологических исследований (методическое пособие). - 2-е изд. перераб. и доп. / С.М. Сулейманов - ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии, Воронеж, 2007. - 87 с.

23. Ярмоненко, С.П. Радиобиология человека и животных / С.П. Ярмоненко, А.Л. Вайнсон - Учебное пособие. - М.: «Высшая школа», 2004. -549 с.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Малушко, A.B. Морфологические и биохимические показатели крови белых крыс получавших корма, подвергнутые лучевой обработке / A.B. Малушко, Г.В. Конюхов, В.И. Великанов, М.А. Паркина, Я.М. Курбангалеев // Научно-производственный журнал «Ветеринарный врач». - 2012. - №6. - С. 1819*

2. Малушко, A.B. Морфологическая картина паренхиматозных органов белых крыс, получавших корма подвергнутые лучевой обработке / A.B. Малушко, Г.В. Конюхов, В.И. Великанов, М.А. Паркина, Я.М. Курбангалеев, Г.З. Шигапова // Научно-производственный журнал «Ветеринарный врач». -2013.-№2. -С. 21-23*

3. Малушко, A.B. Состояние физиолого-биохимических показателей крови белых крыс, получавших корма, подвергнутые лучевой обработке / A.B. Малушко, Г.В. Конюхов, В.И. Великанов, М.А. Паркина, Я.М. Курбангалеев // Всероссийская научно-практическая конференция «Современные научно-практические достижения в ветеринарии». Выпуск №4. 11-12 апреля 2013 г., Киров. - С. 39-40.

4. Малушко, A.B. Физиолого-биохимические показатели крови белых крыс, получавших корма, подвергнутые лучевой обработке / A.B. Малушко, Г.В. Конюхов, В.И. Великанов, М.А. Паркина, Я.М. Курбангалеев // Материалы Ш-го Международного конгресса ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии». 21-23 мая 2014 г., Санкт-Петербург. - С. 171-173.

5. Великанов, В.И. Микроскопическая картина паренхиматозных органов белых крыс, получавших корма подвергнутые лучевой обработке // В.И. Великанов, A.B. Малушко, М.А. Паркина, Г.В. Конюхов, Я.М. Курбангалеев, Г.З. Шигапова // Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология». Том 145. Санкт-Петербург. «ЭСКУЛАП» 2014 г. - С. 42.*

6. Малушко, A.B. Физиолого-биохимическая картина крови белых крыс, получавших корма, подвергнутые лучевой обработке / A.B. Малушко, Г.В. Конюхов, В.И. Великанов, Я.М. Курбангалеев // Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР и БАССР, д.б.н., профессора П.Т. Тихонова «Актуальные направления инновационного развития животноводства и ветеринарной медицины». 18 ноября 2014 г. БГАУ, Уфа. - С. 49-52.

7. Малушко, A.B. Гистологическая оценка некоторых органов белых крыс 1-го поколения, получавших корма, подвергнутые лучевой обработке // A.B. Малушко, Г.В. Конюхов, В.И. Великанов, Я.М. Курбангалеев, Г.З. Шигапова // Международная научно-практическая конференция «Перспективы развития современных сельскохозяйственных наук». 8 декабря 2014 г. Воронеж. ИЦРОН. -С. 14-16.

8. Малушко, A.B. Гематологические и морфологические показатели потомков белых крыс получавших зернофураж, подвергнутый гамма-облучению / A.B. Малушко // Научно-производственный журнал «Ветеринарный врач». - 2015. - №1. - С. 33-36.*

* - публикации в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных ВАК Минобрнауки России.

Отпечатано в типографии «Пиксель». г.Нижний Новгород. Тел. 8-910-390-8131 Заказ №96. Тираж 100 экз. Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная. Печать цифровая.