Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитогенетическое изучение пырея AGROPYRON INTERMEDIUM и пшенично-пырейных гибридов

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Цитогенетическое изучение пырея AGROPYRON INTERMEDIUM и пшенично-пырейных гибридов"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ РАЗВИТИЯ ИМ. Н.К. КОЛЬЦОВА

л I / На правах, рукописи

ВИШНЯКОВА ХАВА САФИУДЯОВНА

УДК 575.222.73: 575.224.232: 575.853'316.7: 576.316.7

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПЫРЕЯ АОНОРУЮТ ШШШШ И ПШЕНИЧНО-ПЫРЕИНЫХ ГИБРИДОВ

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1993

Работа выполнена в Лаборатории цитогенетики Институт сельскохозяйственной биотехнологии ВАСХНИЛ и в Лаборатори хромосомных технологий Центра "Биоинхенерия" РАН.

Научный руководитель -

Официальные оппоненты -

доктор биологических наук, профессор В. Ю. Поляков

доктор биологических наук, В. Г. Митрофанов, кандидат биологических наук Н.Л. Болыпева.

Ведущая организация - Институт общей генетики РАН.

Защита диссертации состоится 1993г.

мин. на заседали специализированного ученого совета Д 002.85.01. цри Институте биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН по адресу: I17808 г. Москва, ул. Вавилова, 26.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН.

Автореферат разослан " " 1993г.

Ученый секретарь специализированного совета

кандидат биологических, наук Е. М. Протопопова.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одной из актуальных проблем современной цитогенетики является установление геномной структуры культурных злаков и их диких сородичей, используемых в селекции (Dewey, 1984).

В практическом плане эта работа необходима для сохранения биологического разнообразия сортов различных видов растений, в том числе такой ценной сельскохозяйственной культуры, как мягкая пшеница. В настоящее время интенсивное возделывание одних и тех же сортов мягкой пшеницы, а также использование их при выведении новых сортов, привело к ухудшению генофонда Tritioum aestivum по целому ряду важных для практических целей признаков (Feldman, 1988; Kimber, 1984; Knott, 1986; Riley, 1984). Для того, чтобы передать пшенице такие хозяйственно-ценные признаки как устойчивость к грибным заболеваниям, морозостойкость, повышенное содержание бежа в зерне и многодетность в качестве донора используют Agpopyron intermedium (Knott et al., 1976., Gauderon, et al., 1976, Цицин, 1981).

Однако для того, чтобы осуществить передачу признаков пырея пшенице, необходимо пройти целый ряд промежуточных этапов, которые включают получение неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (НППА), дисомных дополненных линий (ДЦЛ) и гибридов МЛ с пшеницей. В нашей стране, такой подход был разработан Н.В Цициным, Б.А. Вакаром, Г.Д. Лапченко, Г.Л. Ячевской и до сих пор широко используется в селекции пшениц. Однако, если следовать такой схеме, то для получения нового сорта с нужными селекционными признаками приходится затрачивать много времени на проведение диаллельных схем скрещиваний разных линий, отбор и анализ мейоза всех полученных гибридных комбинаций. Значительно ускорить этот процесс можно путем направленного конструирования геномов мягкой пшеницы с помощью введения в их кариотип хромосом пырея, несущих определенный признак. Эта работа требует соблюдения по крайней мере 3-х условий:

1. необходимо точно идентифицировать хромосомы пырея.

2. необходимо установить соответствие между определенным

признаком и индивидуальной хромосомой пырея.

3. необходимо отобрать для гибридизации ЩИ, несущие

предварительно маркированные хромосомы.

В настоящее время в литературе известно только 3 работы, в 1-120 2. ,

которых с помощью метода дифференциального окрашивания проводилась идентификация хромосом пырея (P. Zhensan, 1982; Потапова и др., 1983; Friebe et al., 1992). Однако, этих работ явно недостаточно для цитогенетической характеристики кариотипа пырея, так как Agropyron intermedium в силу своей широкой распространенности представляет собой чрезвычайно гетерогенный вид (Friebe et al., 1992). Следствием этого является необходимым изучить хромосомы пырея для каждой популяции Agropyron intermedium, используемых в селекции и установления геномной структуры различных дисомных дополненных линий.

Цель и задачи работы. Непосредственными задачами

исследования являлись:

1. Провести полную идентификацию хромосом пырея Agropyron intermedium, двух форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и четырех дисомных пшенично-пырейных дополненных линий.

2. Предложить цитологическую номенклатуру хромосом Agropyron intermedium.

3. Выявить внутрипопуляционный полиморфизм хромосом Agropyron intermedium по рисунку С-окрашивания.

4. Установить геномную структуру неполных пшенично- пырейных амфидиплоидов.

5. Провести цитогенетическое изучение 4-х дисомных пшенично-пырейных дополненных линий.

6. Установить, какие хромосомы пырея несут признаки устойчивости к мучнистой росе, бурой ржавчине, и отрастания.

Научная новизна и практическая ценность работы. Проведена полная идентификация хромосом пырея Agropyron intermedium, двух форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и четырех дисомных пшенично-пырейных дополненных линий. Предложена цитологическая номенклатура хромосом Agropyron intermedium, в которой выделены 2 родственных генома и один отличный от них. Эти данные и результаты анализа мейоза подтверждают представления о пырее, как об аутоаллогексаплоидном по происхождению виде. Выявлен внутрипопуляционный полиморфизм хромосом Agropyron intermedium по рисунку С-окрашивания. Показаны различия в стабильности отдельных гетерохроматиновых сегментов. Показано, что геномы пырея в изученных формах неполных пшенично-пырейных амфидиплоидах являются синтетическими, то есть включают представителей всех 3-х геномов Agropyron intermedium. Проведено цитогенетическое изучение 4-х дисомных пшенично-пырейных

дополненных линий, что дало возможность' установить, какие хромосомы пырея несут признаки устойчивости к мучнистой росе, бурой ржавчине, и отрастания. В практическом плане результаты работы позволяют установить соответствие наиболее важных для селекции признаков с определенной хромосомой пырея. На основе этих данных можно создать коллекции дисомных дополненных пшенично-пырейных линий с маркированными хромосомами пырея и использовать различные дисомные дополненные пшенично-пырейные линии для направленной селекции мягкой пшеницы.

Апробация результатов. Материалы диссертации были представлены на У1 Всесоюзном совещании по структуре и функциям хромосом (Пущино, 1988г.), на 1Г, У и П съездах ВОГИС (Кишинев, 1982, Москва, 1987; Минск, 1992), на Всесоюзном совещании "Частная генетика растений" (Киев, 1989), на и Росс, симпозиуме. "Новые метода биотехнологии растений (Пущино, 1993).

Структура и объем диссертации-. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы из242 наименований, из них /^иностранных источника. Работа содержит страниц, включая рисунков и 9 таблиц.

Публикации. По теме диссертации опубликовано II работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Материалы исследования.

В работе использовали материалы, полученные в лаборатории отдаленной гибридизации НПО "Подмосковье":

1. Клон 7/1 из кавказской популяции Agropyron intermedium (Host) Beauv. (2n=42);

2. Неполный пшенично-пырейный амфидаплоид (НППА)153 (2п=56) получен Г.Д. Лапченко и представляет Р12 [Мильтурум Безенчукский гибрид х Agropyron intermedium (2n=42) Host]. Форма устойчива к мучнистой росе, стеблевой ржавчине и гетерогенна по устойчивости к бурой ржавчине. В популяции этой формы содержаться 24,8^3,0% анеуплоидов.

3. Форма НППА139 (2п=56) создана Г.Д. Лапченко и Ю.А. Ивановым и представляет собой [ППИ х Agropyron intermedium (2n=42)]. Форма недостаточно отселектирована, расщепляется по содержанию белка в зерне и имеет 39,4-1,5% анеуплоидов.

4. Дисомная дополненная линия ДВД1828 (2п=44) выделена из

гибридной популяции НППА153 х ПШЕНИЦА. Она представлена отрастающей и неотрастаицей семьями. Все семьи этой формы не поражаются мучнистой росой.

Б. ДЦЛ13Э (2п=44) выщепилась спонтанно в цитологически нестабильной форме НППА139. Для анализа были взяты две семьи ДДЛ139 остистая и безостая устойчивые к бурой ржавчине.

6.Сорт пшеницы "Мироновская 808". Сорт полученный Н.В. Ремесло в Мироновском НИИСХ.

2. Методы исследования.

При анализе кариотипов использовали модифицированный метод дифференциального окрашивания хромосом (IorcLansky et.al.1978) В полученных метафазных пластинках вначале подсчитывали общее число хромосом. Для анализа отбирались 10-15 метафазных пластинок с полным набором хромосом. Кариотипы анализировались на позитивных опечатках метафазных пластинок при увеличении в 4000 раз. На фотографиях хромосомы вырезали и делали расклейки. Идентификацию хромосом пшеницы (ABD геномов) проводили на основе генетической номенклатуре.

Для изучения характера конъюгации хромосом и их числа в мейозе молодые колосья на стадии выхода в трубку фиксировали в фиксаторе Ньюкомера (Newoomer, 195Э).Подсчет числа хромосом и изучение характера конъюгации проводили на временных, давленных ацето- карминовых препаратах в Ml (метафаза I) мейоза. Данные опытов обрабатывались по Плохинскому Н.А. (1970), Доспехову Б.А. (1979) И Drisooll С. J.et.al. (1979)

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ХАРАКТЕРИСТИКА КАРИОТИПА AGROPYEON INTERMEDIUM (2n=42) (HOST) BEAUV.

I. Идентификация митотических хромосом Agropyron Intermedium, клон 7/1.

Распределение гетерохроматиновых (ГХ)' сегментов в индивидуальных хромосомах Agropyron Intermedium было изучено на десяти полных метафазных пластинках. Для удобства описания структуры хромосом в работе приняты следующие обозначения: I-хромосомы произвольно пронумерованы от I до 21 ; 2-плечи хромосом обозначены буквами s-короткое плечо и L-длинное плечо ; 3-гетерохроматиновые сегменты последовательно пронумерованы, начиная с центромеры (рис. I).

По рисунку распределения гетерохроматиновых сегментов надежно идентифицируются все хромосомы этого вида. Хромосомы кариотипа по соотношению плеч либо метацентрические, либо субметацентрические. Девятнадцать хромосом набора имеют мелкие сегменты центромерного гетерохроматина. У хромосом I и 19 центромерные сегменты крупнее. Так же неоднороден размер теломерных сегментов. У пятнадцати хромосом (1,2,4,6,7,6,8,10, 11,12,15,16,17,18,19) обнаружены крупные гетерохроматиновые сегменты в теломерах одного или двух плеч, у остальных теломерные сегменты значительно мельче или отсутствуют. В девятнадцати хромосомах выявлены интерстициальные блоки гетерохроматина, причем их размеры значительно варьируют от очень мелких (хромосомы 3, 13, 14, 20, 21) до крупных (хромосомы I, 10, II). В хромосоме 7 не обнаружены интерстициальные ГХ сегменты. По характеру дифференциального окрашивания выявлено 3 пары спутничных хромосом (4, II, 18), у которых в районах вторичных перетяжки всегда располагаются сегменты гетерохроматина. Размер спутников неодинаков, наиболее крупным спутником обладает хромосома 4.

Таким образом, изучение дифференциально окрашенных хромосом показало, что все хромосомы пырея обладают индивидуальным рисунком С-окрашивания, поэтому могут быть надежно идентифицированы. В то же время при анализе каждой полной метафазной пластинки было обнаружено, что некоторые гомологичные хромосомы гетероморфвы, то есть различаются по размерам ГХ сегментов, а также по наличию или отсутствию гетерохроматиновых блоков в определенных локусах гомологичных хромосом. Анализ 10 метафазных пластинок показал, что гетероморфны гомологи хромосом I, 2, 5, 8, II, 15, 17, 18, 19.

2. Полиморфизм хромосом пырея одного клона.

Среди проанализированных метафазных пластинок хромосомы 3, 4, 6, 7, 9, 10, 12, 13, 14, 16, 20, 21 имеют постоянный рисунок распределения гетерохроматина. В этих хромосомах стабильными также являются размеры ГХ сегментов. В хромосомах I, 2, 5, 8, II, 15, 17, 18, 19 гомологи принадлежащие разным метафазным пластинкам, могут различатся в деталях рисунка дифференциального окрашивания. Различия заключаются в размерах, наличии или отсутствии некоторых сегментов. Цри этом основные характерные черты рисунка С-окрашивания сохраняются, что позволяет надежно ¿- <3.0%.

идентифицировать кавдую хромосому.

Все обнаруженные варианты рисунка с-окрашивания полиморфных хромосом представлены в табл. I.

Таблица I

Характер изменчивости С-сегментов полиморфных хромосом

A. Intermedium

N хромосомы Варьирующие сегменты

по размерам по наличию в соответствующих

локусах

I IS3 1ЬЭ 1Ы1 IS1 IS5 IX.5 IL7 1Ы1

2 2S3

5 5S3

8 8ЬЗ

II IIS6 IIS3 IIL5

15 I5S3 ISil

17 1715

18 I8S3

19 19 1.1. I9S7 I9S3

Полиморфные хромосомы в изученных пластинках встречаются в различных комбинациях, которые представлены в табл. 2. Буквенные индексы обозначают варианты рисунка С-окрашенных гомологов. Частота встречаемости вариантов полиморфных хромосом в изученной выборке неодинакова. Так, хромосома 1к среди 20 гомологичных хромосом обнаружена I раз, а вариант 1а найден в 8 случаях из 20. Для хромосом 17, 18 один из вариантов всречается значительно реке другого. Варианты 17а и 186 найдены в 4 случаях из 20. Гомологи хромосомы 2 во всех метафазных пластинках всегда гетероморфны. Хромосомы I, 8 обнаруживаются почти всегда в гетероморфном состоянии. Хромосомы 5, 18 встречаются в гетероморфном состоянии соответственно в I и 2 метафазных пластинках. На основании

б

Таблица 2

Комбинация различных вариантов полиморфных гомологичных хромосом Agropyron intermedium.

N мета- N хромосомы

фазы I 2 5 8 II 15 17 18 19

I ж,з а,б б,б а,б в.г а,а б,б а,а а,6

2 б.в а,б а,б а.б а,в в,в 6,0 а,б б.г

3 а,д а,б б,б а,б б,г а,в 6,6 а,а а,в

4 а,г а.б а,а а,б б,б а,а а,а а,а а,а

5 а,в а,б а,а а,б б,б б,в а,а а,а 6,в

6 а.е а,б б,б а.б в,в б,б 6,6 б,б а, б

7 д,и а,б а,а а.б а,а б,б б,б а,б 6,6

8 а,а а,б б,б 6,6 в,в б,в 6,6 а,а 6,6

9 Д.в а,б б,б а,б а,в б,б 6,6 а,а а,6

10 а,а а,б а,а а,б б,б а,а 6,6 а,а а,а

изученных рисунков дифференциального окрашивания составлена общая схема распределения гетерохроматина в кариотипе клона 7/1 Agropyron intermedium, где указаны все места локализации ГХ сегментов и их максимальные размеры (рис.1).

3. Различия в стабильности отдельных С-сегментов.

Сопоставление рисунка С-окрашенных полиморфных гомологов в отдельных метафазных пластинках и у различных растений показало, что блоки ГХ обладают одинаковой "стабильностью" по размерам и по их присутствию в соответствующих локусах хромосом. Можно выделить "стабильные" ГХ сегменты, которые во всех случаях обнаруживаются в хромосомах и всегда имеют одинаковые размеры. Это сегменты 4S7, 4S5 7L3, IOST, I0S5, I0S3, I2S5, I2L3. (рис.1). Сегменты IIS6, I8S3, 5S3 также присутствуют всегда, но могут значительно варьировать по своим размерам. Небольшая часть блоков ГХ проявляет сильную "нестабильность": сегменты 1S9, 1Ы1, 1S5. варьируют по размерам и по наличию в соответствующих локусах

Рис. I. Обобщенные идеограммы распределения ГХ по длине хромосом А^горугоп inteгпlвdlш.

сплошной линией обозначены ГХ сегменты, встречающиеся во всех вариантах хромосом; штриховкой - "непостоянные" ГХ сегменты; стрелкой - ГХ сегменты варьирующие в размерах.

4. Внутригеномная "гомеология" хромосом шфея.

По характеру распределения ГХ сегментов все хромосомы ^горугоп ^епиеНит можно условно разделить на две группы ;рис.1). Первая группа включает хромосомы, которые по рисунку с-;егментадии строго индивидуальны и не имеют аналогов в кариотипе. )то хромосомы I, 2, 3, 4, 5, 6, 7. В другой группе удалось )Онарукить сходство по общей морфологии и по распределению ГХ в зести парах хромосом: 8 - 15;9 - 16;10 - 17;12 - 19; 13 - 20; 14 - 21. Среди спутничных хромосом наибольшим сходством обладают сромосомы II и 18, хотя они различаются по наличию крупного штерстициального сегмента Пьз в длинном плече хромосомы II. Ипутничная хромосома 4 обладает более индивидуальным рисунком С-зкрашивания и поэтому может быть отнесена к первой группе хромосом.

5. Мейотическая конъюгация хромосом.

Характерной особенностью мейоза клона 7/1 является появление в М1 большого количества клеток с мультивалентами. Изучение мейоза в течение трех лет показало, что процент клеток с мультивалентами в разные годы различен (табл.3). В то же время максимум мультивалентов на клетку сохраняется постоянным. В М1 мейоза образуется квадривалет'Ы (1-3 на клетку) и в редких случаям- гексаваленты, гепгаваленты (0,01-0,03 на клетку). В некоторых клетках на стадии диакинеза наблюдается формирование типичных транслокационных крестов.

Таблица 3

Число клеток М1 мейоза с мультивалентами у клона 7/1 в различные годы исследования

Годы исследований

Стадия мейоза I II III

Изучено М1 132 100 100

Процент М1 с мультивалентами 71,2±3 ,9 8Б,0±3,Б 61 ,0±4,9

Для выявленя возможной причины образования мультивалентов был проведен анализ мейоза у растений, полученных при самоопылении

4 I 1 ?

клона 7/1. Оказалось, что инцухт клона приводит к снижению количества клеток с мультивалентами и одновременно снижает долю мультивалентов в клетке.

На стадии диакинеза наблюдаются максимум 3 бивалента, ассоциированных с ядрышком. Отмечены случаи ассоциации с ядрышком квадривалента.

Как уже упоминалось, до настоящего времени нет единого мнения о геномной формуле этого вида. В литературе имеются только две работы, в которых были проведены попытки идентификации хромосом пырея с помощью дифференциального окрашивания (Потапова и др.,1983, P.Zhensan.,1982). Только к моменту написания диссертационной работы была опубликована еще одна статья (Friebe, et al., 1992), посвященная анализу С-окрашенных хромосом Agropyron intermedium. Потапова и Щапова идентифицировали этим методом у Agropyron glauoum (СИНОМИМ A.intermedium(Host) Beauv) 13 из 21 хромосомы. В остальных хромосомах A. glauoum авторам не удалось выявить мелкие интерстициальные сегменты, которые в основном определяют индивидуальность хромосом пырея,. По рисунку С-окрашивании 12 хромосом A. glauoum сопоставимы с хромосомами клона 7/1. P.Zhensan идентифицированы все хромосомы А. intermedium. Однако в этой работе на идиограммах не отражены различия в размерах отдельных ГХ сегментов. В связи с этим

ттлт>аni«л«»ттл ппттлnmлпптт гчгтттг ттотттттт/-\ г» nnntr m mnmnim ттпптпЛ лоЛлшч UU UU U1UU AU1U <JUUU l_> i fin»i I Ч и 1 Ji ¡' \r 1" ' 'И1 ' U ^iuwj VLU 1U1 UllUi llUlUUJi ^/UWV/ AUf

так как у клона 7/1 интерстициальные сегменты значительно варьируют в размерах от очень мелких (сегменты 131.3,141.3,21 S3, 2IL5) до крупных (сегменты I0S3,IIL3). P.Zhensan указывает, что в кариотипе A. intermedium имеются две пары спутничных хромосом. В отличие от этих данных у клона 7/1 вторичная перетяжка обнаружена в трех парах хромосом. Такое количество ядрышкообразущих хромосом найдено в кариотипе Agropyron glauoum (Потапова, Щапова, 1983). В пользу наличия трех ядрышкообразующих хромосом говорят данные об ассоциации трех бивалентов с ядрышком в профазе мейоза. В работе (Friebe, et al., 1992) приведен более детальный анализ С-окрашенного кариотипа ¿.intermedium по 75. У семи хромосом выявлены по два варианта полиморфных хромосом. Авторы при сравнение С-окрашенных хромосом A.intermedium по 75 с нашим клоном 7/1 A. intermedium обнаружили только две сходные по морфологии и С-окраске хромосомы. В связи с тем, что пырей является широкорастраненным и чрезвычайно гетерогенным видом, можно предположить, что указанные различия в С-окрашивании

хромосом А. intermedium отражают кариологическке особенности разных популяций этого вида. Другая возможная причина несоответствия данных может определяться разрешающей способностью используемых методов. Так, на гексаплоидном тритикале была продемонстрирована зависимость выявляемого рисунка распределения ГХ от модификации методики окрашивания и качества реактивов (GustaiBon J.P. et al., 1984).

В целом данные литературы и результаты настоящей работы показывают, что А. Intermedium имеет типичный для перекрестноопыляющихся культур рисунок распределения гетерохроматина, который в основном располагается в дистальных частях плеч хромосом и в теломерах (Атаева и др.,1982, Endo el al., 1984).

Показано увеличение степени вариабельности сегментов по мере их удаления от центромеры. Это может свидетельствовать о том, что ири образовании в популяции пырея вариантов полиморфных хромосом значительная роль принадлежала хромосомным рекомбинациям вбменного типа. Характер конъюгации хромосом пырея в мейозе указывает на то, что возможным типом рекомбинации хромосом этого вида являются транслокации. Наличие транслокации подтверждает формированием в диакинезе типичных транслокационных крестов, а также обнаружением гекса- и гептавалентов, которые не могут образовываться при конъюгации гомеологов. Другим подтверждением существования транслокаций у пырея является анализ конъюгации хромосом у растений, полученных от инцухтирования клона 7/1. Как оказалось, даже однократное самоопыление снижает количество клеток с мультивалентами и количество мультивалентов в отдельной клетке. Это может происходить при переходе гетерозигот по транслокациям в гомозиготное состояние, которое обусловливает в MI нормальную бивалентную конъюгацию. Таким образом, наличие у клона 7/1 транслокаций может служить одной из причин полиморфизма хромосом в его кариотипе.

Обращает на себя внимание тот факт, что в данной популяции не все хромосомы обладают одинаковой степенью полиморфизма: 9 пар хромосом в изученных пластинках имеют 2 и более вариантов, 12 хромосом всегда стабильны по рисунку сегментации. Среди нестабильных хромосом наиболее изменчивой является хромосома I (8 вариантов), имеющая наибольшее количество гетерохроматиновых сегментов. Частота встречаемости отдельных вариантов различна. Так как пырей -перекрестноопыляющийся вид, то следствием

полиморфизма его хромосом является выраженный гетероморфизм гомологов, то есть гетерозиготность по рисунку С-окрашивания. На изученной выборке не удалось установить корреляцию между степенью полиморфизма хромосом и частотой встречаемости гетерозигот по С-окрашиваншо. Особый интерес представляет хромосома 2 гомологи которой всегда гетероморфны 9(табл.2). По-видимому, такое неслучайное распределение вариантов хромосом говорит о важном значении гетеро- и гомозиготности хромосом в жизнеспособности клона 7/1.

В то же время , несмотря на сильно выраженный полиморфизм все хромосомы достаточно надежно идентифицируются по характеру распределения ГХ сегментов. При этом в геноме A. intermedium выявляется 7 пар хромосом со строго индивидуальным рисунком С-окрапшвания и 7 пар сходных по морфологии и распределению ГХ сегментов хромосом. Это позволяет по рисунку С-окрашивания хромосом в кариотипе 7/1 выделить три обособленных генома (рис.1). Естественно, что геномная структура клона, изображенная на рис.1, является условной и отражает в основном гомологию сходных по С-окрашиванию хромосом . Косвенно о родстве геномов клона 7/1 свидетельствует картина мейотической конъюгации хромосом, образующих в MI квадриваленты. Относительно редкая частота квадривалентов может отражать значительную дивергенцию хромосом родственных субгеномов. Таким образом, в целом полученные данные подтверадают представления о пырее, как об аутоаллогексаплоидном по происхождению и "виде.

ХАРАКТЕРИСТИКА КАРИОТИПОВ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ И НЕПОЛНЫХ ПШЕНИЧНО- ПЫРЕИНЫХ АМФИДИПЛОВДОВ(2п=56).

В связи с тем, что основное место в наших исследованиях занимают гибриды пшеницы, было необходимо детально изучить и охарактеризовать кариотип сорта мягкой пшеницы с применением того же метода, который использовали для анализа гибридных форм. Нами был детально изучен дифференциально окрашенный кариотип сорта мягкой пшеницы "Мироновская 808".

I.С-окрашивание митотических хромосом неполных пшенично-пырейшх амфидиплоидов 139 и 153. :

методом дифференциального окрашивания изучено распределение гетерохроматиновых (ГХ) сегментов в митотических хромосомах форм

Рис. 2. Идаограммы С-окрашенных хромосом НППА 139

НППА 139 и 153. Анализ хромосом проводился по 10 полным метафазным пластинкам. На рис. 2, 3 представлены идаограммы дифференциально окрашенных хромосом НППА 139 и 153.

По рисунку С-окращивания надежно идентифицируются все 28 пар хромосом изученных форм. В их кариотипах выяляются 42 хромосомы, соответствующие хромосомам мягкой пшеницы и 14 хромосом, аналогичных хромосомам пырея.

Пшеничные хромосомы представлены полным, набором А, в и Б геномами Тг1Иоит аевН-тит. В проанализированных кариотипах внутри каждого НППА полиморфизм С-окрашенных хромосом пшеницы практически отсутствует (рис. 2, 3). В то же время при сравнении индивидуальных хромосом между изученными формами наблюдались различия у хромосом 1А, 4А, 5А, 6А.

Рис. 3. Идаограммы С-окрашенных хромосом НППА 153.

В изученных формах НППА геном пырея представлен как одинаковыми, так и разными хромосомами. Форма ШЛА 153 имеет 7 пар гомологов с типичным для Agropyron intermedium рисунком распределения ГХ сегментов. Согласно предложенной ранее нами номенклатуре, эти хромосомы соответствуют N I, 10, II, 15, 16, 18, 19. У НППА 139 из хромосом пырея четко идентифицируются 6 пар гомологов, которые соответсввуют N 4, 7, 12, 15, 16, 19 хромосомам Agropyron intermedium. Хромосома 4- спутничная. Одна пара гомологов НППА 139 имеет необычный для хромосом пырея рисунок распределения ГХ сегментов. Это субметацентрическая хромосома имеет в коротком плече крупный проксимальный сегмент близ центромеры, два интерстициальных сегмента и небольшой теломерный ГХ сегмент.

Детальное изучение кариотипов НППА показало, что геномы пырея у них частично различны. Три хромосомы (15, 16, 19) имеют однотипный рисунок С-окрашивания в НППА 139 и 153. Хромосомы 15 и 19 в изученных формах представлены разными вариантами полиморфных хромосом, обнаруженных нами при анализе С-окрашенного нариотипа A.intermedium. Остальные четыре хромосомы в кариотипах 2-х изученных форм НППА резко различаются по рисунку распределения ГХ сегментов.

При изучении большого количества метафазных пластинок НППА 139 выявилась нестабильность кариотипа этой формы. Наряду с полными метафазными пластинками, которые . использовались для изучения дифференциально окрашенных хромосом у эуплоидных растений, встречались отдельные анеуплоидные растения с числом хромосом от 53 до 55. У части анеуплоидных растений наблюдалась акроцентрическая хромосома с небольшим ГХ сегментами в теломере длинного плеча и в районе близ центромеры короткого плеча.

2. Конъюгация хромосом в Ml мейоза НППА 139, 153 и у гибрида Fj между ниш.

В табл.4 приведены данные по конъгации хромосом в Ml мейоза у НППА 139 и 153, гибрида Fj (НППА 153 х НППА 139) и двух сортов пшеницы "Мироновская 808" и "Кавказ". По сравнению с сортами пшеницы "Мироновская 808" и " Кавказ" у НППА обнаружено повышенное образование числа унивалентов. Скрещивание форм НППА 153 и 139 показало, что у гибрида Fj наряду с нормальной конъюгирующими хромосомами встречаются также униваленты и мультиваленты. При этом у гибрида Fj (153x139) возрастает не только процент клеток с мультивалентами, но и максимум мультивалентов в клетке. Повышается также число хромосом, включенных в мультивалентный комплекс.

Анализ мейоза у в популяции, состоящей из 155 растений НППА 139 показал, что она гетерогенна по наличию телоцентрических хромосом, встречаются растения с нормальным кариотипом (51,2 -4,0$), с гетероморфизм бивалентом, включающим нормальную и телоцентрицескую хромосомы(7,7 - 2,1$) и растений имеющих 2 гомологичных телоцентрика(40,б - 3,9$), которые в Ml мейоза образуют дителоцентрический бивалент.

Сравнение коллекции форм НППА (2п=56) по типу колоса показало, что их условно можно разделить на 3 подгруппы: формы с полупшеничным, полупырейным и промежуточным между ними типом

Конъюгация хромосом в М1 мейоза у форм НППА № 139 и 153, гибрида (НППА 139 х НППА 153) и сортов пшеницы

Изучено 7, конъюги-руюших хромосом Колебание Среднее число унивал. на MI 7. MI с муль-тивален-тами Максимум муль-тивал. в MI

рас т. И1 бивалентов унива-лентов

НППА 139 25 501 97,9±0,6 24-28 0 - 8 1,17 8,8 2

НППА 153 25 598 97,8*0,6 24-28 0 - 8 1,24 4,7 1

153 х 139 8 245 93,6±1,6 22-28 0 - 10 3,57 30,6 2

Мир. 808 32 675 99,6±0,2 19-21 0 - 4 0,17 3,1 1

Кавказ 28 446 99,4±0,4 18-21 0 - 6 0,24 5,2 1

колоса.

В данной работе изучались представители полушеничной подгруппы НППА. В свою очередь формы, входящие в полупшеничную подгруппу, морфологически и физиолого-биохимически несколько различаются между собой (Ячевская и др., 1966; Новиков, 1975; Лапченко, 1973). Задача настоящей работы состояла в том чтобы установить, в какой мере эти различия связаны с особенностями геномной структуры данных форм.

Для идентификации пшеничных хромосом у НППА использовали собственные результаты и данные литературы по изучению структуры дифференциально С-окрашенных кариотипов различных сортов пшеницы (Gill, 1987; Лазарева и др., 1988; Badaeva, et al., 1990; Gill, et al., 1991). Хромосомы пырея у гибридов были идентифицированы согласно номеклатуре предложенной нами ранее. Согласно этой номенклатуры геном пырея состоит из трех геномов х=7. Один геном включает хромосомы, которые по рисунку С-окрашивания строго индивидуальны, а у двух других геномов выявлено сходство по общей морфологии и распределению ГХ сегментов, то есть гомеология по семи парам хромосом. Эти данные подтвердили представление о пырее, как о аутоаллогексаплоидном виде.

дифференциальная С-окраска хромосом НППА подтвердила данные о том, что геном НППА (2п=56) включает 42 хромосомы пшеницы и 14 хромосом пырея. Это же подтверждает и анализ конъюгации хромосом

Конъюгация хромосом в Ml мейоза гибридов FI НППА (2п=56) х пшеница (2п=42)

Комбинация скрещивания Изучено 7. II с конъюгацией

растений Ml 21"+7 меньше 7 больше 7 среднее число унивал.

39 х Мироновская 808 14 375 78,7±2,1 5,1 16,2 7,3

53 х Мироновская 808 5 134 62,7±4,2 2,9 34,4 7,1

39 х Кавказ 7 169 62,1±3,7 5,3 32,5 8,1

53 х Кавказ 7 164 62,2±3,8 6,7 31,1 7,6

в Ml мейоза у гибридов FI мейоза НППА 139 х Мироновская 808, НППА 153 х Мироновская 808, НППА 139х Кавказ и ШЛА 153х Кавказ (табл.5). Результаты изучения конъюгации хромосом показали, что данные гибриды с сортом Мироновская 808 в среднем образовывали 7,3 и 7.1 унивалента на Ml мейоза и 8,1 и 7,3 унивалента с сортом Кавказ соответственно. Несколько более высокое среднее число унивалентов с сортом Кавказ в обеих гибридных комбинациях по сравнению с сортом Мироновская 808, по-видимому, объясняется наличием у сорта Кавказ IB/1R транслокации. Образование же Ml мейоза с числом унивавалентов меньше 7-ми (от 2,9& до 6,7% МКП) говорит о возможности аутосиндетической конъюгации хромосом пырея, а клеток с числом унивалентов выше 7-ми ( от 1В,2% до 34,4% МКП) указывает на существование асинапсиса, характерного для отдаленных гибридов. Наличие Ml мейоза с повышенным числом унивалентов указывает на потенциальную возможность получения в последующих поколениях аналогичных вариантов скрещиваний линий пшеницы с замещенными хромосомами пырея.

Таким образом, число хромосом пырея в . НППА соответствует трем геномам пшеницы и одному геному пырея. Согласно номенклатуре, основанной на дифференциальной окраске хромосом A.Intermedium хромосомы генома пырея, входящего в изученные формы НППА 139 -и НППА 153 (2п=56) представлены не каким-либо одним целым геномом пырея, а включает хромосомы изо всех 3-х геномов.

Цитологическая стабильность ЛЛЛ 828 и 139

Линия Год Изучено растений Растений с числом хромосом Процент растений с 2п=44

44 : 43 42 41

ДДЛ 828/1 68 62 4 2 91.2±3.4

ЛЛЛ 828/11 89 82 5 1 1 92.1±2.9

ЛДЛ 139/1 - 76 70 3 3 92.1±3.1

ЛЛЛ 139/11 118 108 4 6 91.5*2.6

Иироновская 808* 138 133 5 9б.4±1.6+

í

для Мироновской 808 2п = 42.

Три пары хромосом пнрейного генома в обоих формах НППА имею-одинаковый характер окрашивания и сходную морфологию, а четыр* пары хромосом отличаются го рисунку распределения ГХ сегментов I общей морфологии. Наличие разных хромосом пырея у этих фор» подтверждает также изучение конъюгации хромосом у гибридов Р^ (ШЛА 153 х НППА 139), которые имели в М1 мейоза средни» конъюгацию хромосом 25,71Г + 0,07Г11 + 0,2^- + 3,571.

В то же время повышение числа мультивалентов в М1 мейоза 5 гибридов Р1 по сравнению с сортами мягких пшениц и исходными формами можно объяснить различием по транслокациям у хромосом пшениц, входящих в состав НППА, а также существованием транслокаций мевду хромосомами пырея.

ХАРАКТЕРИСТИКА КАРИОТИПОВ ДИСОМНЫХ ДОПОЛНЕННЫХ ЛИНИИ.

I. С-окрашивание митотических хромосом дисомных дополненных

ЛИНИЙ^

Материалом для получения 4-х шненично-пырейных ДПД послужили изученные ранее формы НППА 139 и 153. В процессе селекции из цитологически нестабильной формы НППА 139 спонтанно выщепились исходные растения ДЩ1 139 безостая и ДПД 139 остистая.

Конъюгация хромосом в MI мейоза и мейотический индекс ДДЛ

Линия, сорт Год Изучено MI Процент MI с унивалентами MI с мультивален-тами (7.) Средняя частота образования хиазм Изучено тетрад Мейотический индекс

Ш 828/1 781 3.7*0.68 0.64*0.03 42.19 1290 96.2*0.53

Ш 828/11 782 10.87il.10 4.60*0.08 40.93 2485 95.0*0.4

ДДЛ 139/1 702 6.13*0.90 1.70*0.05 41.62 1194 97.3*0.5

ДДЛ 139/11 493 10.75*1.40 2.23*0.07 41.70 1029 94.5*0.7

Мирон.808/1 662 6.80*0.98 3.63*0.11 39.98 2335 98.0*0.3

Мирон.808/11 754 7.56±0.97 1.86*0.14 40.39 2138 96.0*0.4

В гибридной популяции ШЛА 153 х ПШЕНИЦА возникли растения ДДЛ 828 отрастающая и ДЩГ 828 неотрастащая.

Как показал подсчет числа хромосом в популяциях ДДЛ 139 и ДДЛ 828, они цитологически довольно константны и 44-хромосомные растения составляют от 91.2 - 3.4$ до 92.1 - 3.1$, соответственно при содержании эуплоидов в сорте мягкой пшеницы "Мироновская 808" 96.4 ¿ 1.6$ (табл.6). Следовательно, они лишь немного уступают "Мироновской 808". Цитологическую стабильность ДДЛ подтвердил также анализ мейоза. Результаты исследований'показали (табл.7), что колебания мейотического индекса в течении нескольких, лет наблюдений у ДДЛ практически не отличается от аналогичного показателя пшеницы сорта "Мироновская 808".

Детальный анализ дифференциально окрашенных хромосом изученных ДДЛ показал, что их кариотипы представлены хромосомами пшеницы (А, В, D геномы) и по одной дополненной хромосоме Судя по дифференциальной окраске дополненные хромосомы являются хромосомами пырея. Хромосомы пырея различаются в разных линиях ДЦЛ, но одинаковы в семьях, производных от одной формы. Так кариотипы ДДЛ 139 остистая и ДДЛ 139 безостая содержат идентичную по рисунку С-окрашивания хромосому пырея N7 и эта же хромосома обнаружена в геноме пырея -в исходной форме- НППА 139 (рис.2). Кариотипы ДДЛ 828 отрастающая и ДДЛ 828 неотрастающая содержат

Конъюгация хромосом в М1 мейоза гибридов ЛЛЛ 828 и 139 с исходными родительскими формами и между собой.

Число хромосом у гибридов (2п) Изучено Средняя частота образования хиазм Колебание

Комбинация скрещивания растений М1 Средняя формула конъюгации растений в.М1 унива-лентов мультивалентов

ДЛЛ139хМир.808 43 6 244 20,68П+0,014Ш+ ТУ т +0,081+1,27 38,99 0-5 0-1

ДДЛ828х1ир.808 43 9 236 20,70П+0,08Ш+ +0,0921У+1,211 38,82 0-5 0-1

ДДЛ828хДДЛ139 44 6 247 20,6711+0,05111+ ТУ т +0,08 '+2,321 39,32 1-6 0-1

ДЛЛ828хНППА153 50 7 263 21,41И+0,06Ш+ ТУ Т +0,18+6,28 39,98 6-12 0-2

ЛДЛ139хЕППА139 50 8 278 21,3911+0,05111+ ТУ т +0,21+6,23 40,04 4-10 0-12

идентичную пару, соответствующую хромосоме N11 и эта же хромосома обнаружена в исходной форме НППА 153 (рис.3) из которой она выщипилась.

Сравнение геномов пшеницы у ДЦЛ с изученными ранее исходными НППА показало полную идентичность хромосом пшеницы у этих форм по характеру распределения ГХ сегментов.

2. Конъюгация хромосом в М1 мейоза дисомных дополненных линий!

Анализ мейоза НППА, ДДЛ и их гибридов выявил следующие особенности конъюгации их хромосом (табл.8).

(I). В М1 мейоза ДЩ1828 и 139 наблюдается небольшое число мультивалентов (от 0.6± 0.03%).

(2). У гибридов в Fj, полученных от скрещивания ДДЛх Мироновскую 808 в Ml мейоза образуется в среднем 1.27 унивалента на МКП с ДЦЛ 139 и I.21 унивалента с ДЦЛ 828.В двух случаях из 244 проанализированных гибридов ДЦЛ 139 х Мироновскую 808 в Ml две МКП имели 20"и I"•, а в комбинациях ДЦЛ828 х Мироновскую 808 обнаружено 3 таких клетки. Это говорит о довольно редкой вожможности конъюгации пшеничных хромосом с пырейной.

(3). У пшениц, входящих в состав ДЦЛ в Ml обнаружен один квадриваленг и один тривалент.

(4). При скрещивании ДДЛ с исходными для них НППА 139 и 153 на Ml приходится около 6 унивалента (6.23 и 6.28 соответственно).

(5). У гибридов ?j, полученных при скрещивании ДЦЛ 828 х ДДЛ 139 в Ml на одну клетку приходится около 2.32 унивалента.

Проведенное в работе детальное сопоставление рисунка диференциально окрашенных хромосом Agropyron Intermedium (2n=42), неполных пшенично-пырейных ам&вдиплоидов (НППА 2п=56), 4-х пшенично- пырейных дисомных дополненных линий (ДЦЛ 2п=44) и особенностей мейотической конъюгации их хромосом позволило установить кариотипический статус НППА и ДДЛ.

Для кариотипического анализа были взяты растения, возникшие спонтанно из гибридной популяции НППА 153 х пшеница и спонтанно выщепившиеся растения в НППА 139. Эти растения стали родоначальниками семей ДЦЛ. Как показал анализ дифференциально окрашенных хромосом исходных форм НППА (2п=56) они содержат 7 пар хромосом пырея , а ДДЛ (2п=44) имеют по одной паре дополненных хромосом пырея. Тот факт , что они в Ml мейоза растения с 2п=44 образуют небольшое число мультивалентов, также свидетельствует о том, что являются дисомно дополненными линиями, а не тетрасомиками по пшеничной хромосоме. Анализ конъюгации хромосом у гибридов Fj ДЦЛ х Мироновскую 808 также подтвердил, что исследуемые формы являются дисомными по хромосоме пырея, так как у таких гибридов Fj в Ml мейоза образовалось по I униваленту.

Тот факт, что у гибридов ДЦЛ 139 х Мироновская 808 встречаются клетки с тривалентами, говорит о том , что либо оущэотвуэт "слабая гомеология между одной из хромосом Мироновская 808 и пырейной хромосомой ДДД139 либо о том , что пырейные хромосомы имеют небольшую транслокацию от хромосомы пшеницы. Однако, обнаружить гомологию или транслокацию по рисунку С-окрапшвания не удалось. Поэтому, можно предположить, что сорт Мироновская 808 обладает более слабым геном бивалентной

конъюгации хромосом (ген Рь на БВ хромосоме) или дополненная хромосома пырея, содержит ген(ы), немного подавляющие действие РУ аллеля. Дополнительным подтверждением наличия в ДДЛ неизменно! хромосомы пырея явились данные по конъюгации хромосом в гибрида! да с исходными для них НППА. В таких гибридах в М1 мейозс обнаружено около 6 унивалентов, что говорит о конюгации шрейно! хромосомы ДДЛ с хромосомой пырея, входящей в соста! сответствующего НППА (2п=56). Важно выяснить, одинаковые илх разные хромосомы добавлены к кариотипу мягкой пшеницы у ДДЛ 139 1 ДДЛ 828.

Как показало дифференциальное окрашивание, у 2-х изучению НППА, которые являются исходными формами для ДДЛ, геном пырея представлен 3-мя одинаковыми и 4-мя различными хромосомами . Эти данные свидетельствует в пользу того, что при образовании гибридных форм НППА (2п=56), произошедших от скрещивания (пшеница х пырей) не происходит преимущественной сегрегации какого-либо генома пырея и добавление хромосом к кариотипу мягкой пшеницы происходит случайно. Важным следствием этих наблюдений является то, что предложенная в работе геномная классификация хромосом пырея отчасти является искусственной или, стабильность геномов пырея ниже, чем например у пшеницы. На основании этих данных логично ожидать, что "сконструированные" ДЦЛ могут иметь разные хромосомы пырея. Это предположение подтвердилось при аналиве дифференциально окрашенных хромосом ДДЛ. Хромосомы пырея в ДЦЛ 139 и ДДЛ 828 четко различаются по .рисунку распределения ГХ сегментов, что является одним из критериев для отнесения их к разным группам комшшментарности. Прямое доказательство генетических различий пырейных хромосом в ДДЛ 139 и ДНЯ 828 получены при анализе мейотической конъюгации. Как оказалось у гибридов (ДЦЛ828 х ДДЛ139) в М1 мейоза чаще всего образуется 2 унивалента на клетку. Следовательно, добавленные хромосомы пырея у ДР 828 и ДДЛ 139 содержат различные гены.

Таким образом, использование ДЦЛ дает возможность установить соответствие определенных признаков, которые получены ДДЛ от пырея с индивидуальными хромосомами пырея.

Выражаю глубокую благодарность моему учителю Алексею Борисовичу Иорданскому а также Галине Львовне Ячевской, Елене Михайловне Лазаревой и Татьяне Петровне Переладовой за большой вклад в проведение данной работы.

выводы

1. Детальный анализ рисунка дифференциального С-окрашивания фомосом, а также изучение мейотической конъюгации хромосом юзволило провести полную идентификацию хромосом пырея Agropyron Lntennedium, двух форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и [етырех дисомных пшенично-пырейных дополненных линий.

2. Предложена цитологическая номенклатура хромосом Agropyron intermedium, в которой выделены 2 родственных генома и один >тличный от них. Эти данные и результаты анализа мейоза юдтверждают представления о пырее, как об аутоаллогексаплоидном ю происхождению виде.

3. Выявлен внутрипопуляционный полиморфизм хромосом Lgropyron intermedium по рисунку С-окрашивания. Показаны различия > стабильности отдельных гетерохроматиновых сегментов. Степень ¡ариабельности гетерохроматиновых сегментов в хромосомах увеличивается по направлению от центромеры к теломере.

4. Показано, что геномы пырея в изученных формах НППА шляются синтетическими, то есть включают представителей всех 3-х ■еномов Agropyron intermedium. У НППА 139 обнаружена хромосома, »бразовавшаяся в результате транслокации между [еидентифицированными хромосомами пшеницы и Agropyron -ntermedium.

5. Проведено цитогенетическое изучение 4-х дисомных шенично-пырейных дополненных линий. Наличие в ДЦЛ дополненных :ромосом пырея подтверждается анализом мейотической конъюгации :ромосом у гибридов Р1, полученных от скрещивания ДДЛ с мягкой шеницей "Мироновская 808" и исходными родительскими формами НППА 2п=56).

6. Изучение ДДЛ дает возможность установить, какие хромосомы нрея несут признаки устойчивости к мучнистой росе, бурой »жавчине, и отрастания.

ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЮЩИЕ РАБОТЫ:

1. Атаева Д.М.', Иорданский А.Б., Айзатулина (Вишнякова) Х.С. Кариотипический полиморфизм культурной ржи. Доклады АН СССР, 1982, Т. 264, N 1, С. 234-237.

2. Айзатулина (Вишнякова) Х.С. Кариотипический полиморфизм гексаплоидных тритикале. Тез. докл. ГУ съезда ВОГИС. Кишинев, 1982. т. 2, с. 17.

3. Лазарева Е.М., Айзатулина (Вишнякова) Х.С. Цитогенетическое картирование генома мягкой пшеницы сорта Чайниз Спринт. Тез. докл. У съезда ВОГИС. Москва, 1987, т. IV, ч. 4, с. 43.

4. Иорданский А.Б., Атаева Д.М., Айзатулина (Вйшнякова) Х.С., Лазарева Е.М., Кузьменко С.П., Переладова Т.П., Романова А.Б. Методические рекомендации по использованию методе дифференциального окрашивания хромосом в селекции. Изд-вс ВАСХНИЛ. Отделение растениеводства и селекции. Москва, 1987, 41 с.

5. Лазарева Е.М., Айзатулина (Вишнякова) Х.С. Изучение локализации гетерохроматина в хромосомах пшеницы сорта Чайшге Спринт и его дителоцентрических линий. Цитология и генетика, 1988, Т. 22, N 1, С. 36-40.

6. Айзатулина (Вишнякова) Х.С., Ячевская Г.Л., Переладова Т.П. Изучение геномной структуры Agropyron intermedium (Host) Beauv. Цитология и генетика, 1989, т. 23, N 5, с. 15-21.

7. Айзатулина (Вишнякова) Х.С., Ячевская Г.Л. Изучение структуры кариотипов двух форм неполных пшенично-пырейныз амфидшхлоидов (2п=5б). Тез. докл. Всесоюзн. совещ. Частна* генетика растений. 23-25 мая. 1989. т. 1, с. 5.

8. Вишнякова Х.С., Поляков В.Ю. Хромосомный анализ гибридо! Agropyron intermedium Host (Beauv) И Tritioum aestivum L. em. Thell. Материалы VI съезда ВОГИС. Минск, 1992, ч. 2, с. 27.

9. Вишнякова Х.С., Ячевская Г.Л., Поляков В.Ю. Дисомные дополненные пшенично-пырейные линии как модель дл* цитогенетического картирования хромосом Agropyron intermediun (Hoet) Beauv. (2n=42). Тез. докл. II Росс. симп. "Новые методы биотехнологии растений", Пущино, 1993, с. 194.

ю. Вишнякова Х.С., Ячевская Г.Л., Поляков В.Ю. Изучение геномно! структуры двух форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидоБ (2п=5б). Генетика, 1993, (в печати).

11. Вишнякова Х.С., Ячевская Г.Л., Поляков В.Ю. Изучение геномноГ структуры шенично-пырэйных дисомных дополненных линий. Генетика, 1993, (в печати).

__

Подл, к печати !&/>_- 9)г Л; Ф. i0t90h(,

Бум. тип. №2 Физ. п. л. I, S~ Уч.-млд. л. 1,С

Заказ 1J.0Z, Тира*

Московского университета - -----

|03009г-Мосета. ул. Герцена. 5/7. Типография ордена «Знак Почета» пзд-ва МГУ. Москва, Ленинские горы