Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ЦИГОПАТОЛОГИЯ ПОРАЖЕННОЙ ВИРУСАМИ (ВТМ, ХВК) РАСТИТЕЛЬНОЙ КЛЕТКИ И ПРОБЛЕМА УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "ЦИГОПАТОЛОГИЯ ПОРАЖЕННОЙ ВИРУСАМИ (ВТМ, ХВК) РАСТИТЕЛЬНОЙ КЛЕТКИ И ПРОБЛЕМА УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ"

A-moi

ОРДЕНА ДДША К ОРДЕНА ДОТШ НАРОДОВ АШВДН ЮТ УССР

ОРДЕНА ПУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ МИКРОЩОЛОГЩ И ВИЕЛХНШИ ш. Д.Х.ЭШШШОГО

На правах рукописи

РЕШ)В Анатолий Васильевич

УДК 576.335 + 632.38 + 632.933.1

ЦШШАТОЛОГИЯ ПОРАЖЕННОЙ ВИРУСАМИ (ВТМ, ХВК) РАСШГЕШОЙ КЛЕТКИ И ПРОШШ. УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ

03.00,06 - варусологня

Автореферат диссертации на соискание ученей степени доктора биологических наук

Киев - 1983

Работа выполнена в лаборатории оЛцеіІ вжрусологии Биологоню чвонного института ДЕХ) АН СССР,

Официальное оппонента:

доктор биологических наук, профессор А.I.Бойко доктор биологических наук, профессор Т.Д. Вердеревская доктор оиологичоских наук И.Э.Тадьшский

Ведущая организация: Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева

Защита состоится " 1990 г. в '

часов на заседании специализированного совета Д 016.06.01 по эащпто диссертаций на соискание ученой степени доктора ¿во « логических наук дри Институте микробиологии к вируоологии ш. Д.К.Зайолотного АН УССР (252143, Киев - 143, уд. Заболотного, 154» Институт микрр-'лизгш и вирусологии им. Д.К.Эа -істотного).

7 лізсогтз.-ознакомиться в библиотеке Мнотиту-

т,-ё " -г? опт им. Д.К,Заболотного АН УССР.

-

.--■^—•реферат разослав * --¿-¿-г?^ тээо г.

Тчений секретарь люциалиэи^Еанного совета кандидат биологических науь.

Э.А.Коваленко

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЛШТЬ!

Проблема устойчивости расте::ий к вирусам является одной гз ватнєііішис проблей ф:іговирусолопЕі,іше-

яцих как теоретическое, так и практическое значение. Эта прскЗ -лема охватывает ряд типов взаимодействий. растений іі вирусов.ре-зулътирувдйхся в локализации инфекции (реащия сзерулувстзгав -льности, крайняя устойчивость, сушшмшальные иафекщт) либо в системном распространенна ее, еотіровоздащекся разным уровнем накопления вируса а различной степенью поражения растения. Не -хахкэдо, нокгролируедиа локализацию инфекции, а также огралкчи-ващие накопление вирусов ери системных заболеваниях расташгй, активно исследуются, однако до конца не выяскены. Поэтому даль-нвйшее научение их является актуальним.

Пелт> я вадами ксщедозздзд,. Основная цель работы состояла в изучении эевдгшшс ыэханизнов клеток листьев растений при лока -льном к системном поражении вирусом табачной мозаихк (ВШ) а X-вирусом картофеля (ХВК). При этом ставились следуадие задача:

- дать ультраструктурную характеристику ВГЛІ- и ХИС-кндуциро-ванных локальних некрозов п окруждлвда юс тканей;

- изучить накопление ВВІ г 2ВК в разновозрастных листьях системно поражаемых растений-хозяев;

- последовать ультраструктуру клеток разновозрастных листьев табака и дурыагй, инфицированных соответственно, Ш1І и ХВК;

- изучить ультраструктуру кдемк листьев говоренії, инфицированных НШ;

- исследовать влишше актиноыицина Д (АВД) и хинетцна на ультраст^гтстуру клеток и накопление в них вирусов;

- выявить локализацию клелой фосфатази з клетках при локальном я системном вирусном поражении;

- исследовать влияние вирусное инфекции на активность гидролиз в листьях;

- изучлть ооотонние вирусных частдц в пораженных клетках;

- изучить способность ХВК размножаться в устоіічивнх к БЕД тканях (ВТМ-иядуцированные цринекрознае зокн на листьях дурмака; темно-зеленые ткани на системно зараженных листьях табака);

- провести сравнительный анализ взаимодействдаї клеток листьев дурмана с разтш по патогенности штатами ХВК,а также кле -ток листьев различающихся го поражаеыостц сортов табака а кар -тофеля, соответственно, с ВШ к ХВК.

ЦЕНТРАЛЬНАЯ НАУЧНАЯ библиотека Моск. сзльскохоэ. академии

- г -

Научная норизть Впервые показано, что часть клаток BIM- и XDK-иыдуцироэйШШХ локальных некрозов не проявляет реакции сеeprijjствит^льностн, а отдельные плетки молодцу системно зараженных ВШ лнотьов табака нодаергаются некротаэащщ. Выявлена обратная зависимость иенду активность» лизосомального ком -партыэнта растительных клеток до заражения и способностью их к нядашкешш вирусов, Обнаружено, что в ответ на заражение ак -тевность литичеокого аппарата клеток возрастает, особенно значительно з прадаекроэных зонах, характеризуиоихся локальной приобретенной устойчивооты>, к в молодых системно заразенных листьях. Установлено, что в процесса у.азвит£я локальных ж сис-тешшх инфекцуй ыьруси подвергайся дзструшщи гвдролазаш, наболев вкраденной в кликах локальных некрозов и молода* системно инфицированных листьов. Показано разрушение вирусных частиц ПОД действием ГИДрОЛДЗ ПрИЫвКрОЗКНХ ЗОН in Vitro. Впервые установлено, что наяЗольяеа деструктивное действие на вируснне частица оказывай? гидролазы пршзекроэша; гон, индущ!-. руемах гомологичным вирусом. Показано» что ВТМ-индуцировашшя устойчивость (б пршег.роаних зонах ва листьях дурыана и в тех-но-зелещас тканях на сиотешо инфицированных листьях табака) но препятствует активной репродукции ХВК и» таким образом, отличается от нэ олецифлчной в отношении вируса устойчивости, обусловленной интерфброноподобнкми веществами. В клетках парен-iinjH базальной зоны верхушечных листьев табака и дурмана, системно зараяешшх, соответственно, HTM и ХВК. впервые обнаруже-шг значительна отхохдшая клазмалзшы от кдеточиой оболочки; в результате такой реакции происходит разрыв алазмодосмегшых связей, что пр&лятствузт межклеточному иеречедещтю вирусов.Установлена обратная корреляция мехду размножением ХВК и образована эч лВК-спецкфкческах ламинарных структур <ЛС), Выявлены икшЗкторшм свойстса ДО в1 отношении ХБК. Впервые обнаружена гавигииссть и^гду Сектой кянэтина ва репродукцию влр>сов z erc BJiiiiüeti аа ростову» акгАшость tk£ü6ü. Установлено, что в клетках молодых листьев, заметно растущих под влигашск хикети-иа, фгтогорион значительно ингнбируэт размножение вирусов. Показано, что активность задатках реакций клеток при вирусном ■¿арааешш находится в прдмэ^ корреляции с патогшшостыо отам -ьое z порагашость» разтенгй.

Е лгеге прэделгляо*! работы сфср.'улироьана логическая кон -

- З -

цепция защиты растений от вирусов, открывающая новое напраи -ление исследований проблемы иммунитета в фитовирусологки,

Пр^уги^еская ценность. Проведенные исследования расширяют существувдие представления о защитных противовирусных ыеха -низмах растений. Установленная нами прямая завзсіиость между активностью вирусшідуаированшх зощитшх реакций и степенью поракаемоств клеток может бить использована для оценки пора -жаемооти или толерантности сельскохо зяйственных культур при заражении ях вирусами и, таким образом, слушать доя у скореная селекции относительно устойтавих сортов. На основания полу -ченных дянрчг о тон, что сщльнопатогенный ттаым ХЕК индуцирует в клетках более активное формирование ЛС, митохондрий, аг-ранулярных элементов эндоплазматического ретккулума (ЭР), а вирионы втого штамма подвергаются значительной дестоукции г сравнении со олабопатогэшшм штаммом, предложены способы оценки степени- патогенности шташов ХВК; поданы две заявки на изобретение, по которым получены положительные решения. Раз -работая курс лекций "Цитологические основы устойчивости рас -тений к патогенам". для студентов (Іиодого-дочвенного факультета ДШУ, включающий материалы данной работы. Предложен морфо-метрлческий метод щенки количества вирусов в клетках, кото -рый может быть использован в вирусологических лабораториях вря изучении репродукции вирусов.

Дппогіяіпиг р^бдтн. Материалы диссертации докладывались л обсуждались на Ш-УХ Всесоюзных симпозиумах по применения электронной микроскопия в ботанических исследованиях (Петроза -аодаж,І974; Рига,1978; КкпмневДЭвЗ; Киев,1988), 10 ц II Вое-совэыыг конференциях по електронної! микроскопии (Ташкент, 1976; Таллин, 1979), 15 Чехословацкой конференции по электронной микроскопии (ПрагаД977), Всесоюзном совещании ш вирусным болезням о.-х. растевкв к мерам борьбы о ними (Ленинград Д978), УШ Всесоюзном совещании по теории и практике использования иммунитета с.-х. культур к вирусным болезням (Вильнюс,1984), ущ всесоюзном совещании по иммунитету с.-х. растений к болезням и вредителям (Рига, 1386), на заседании отдела физиологии и вирусологии Еиолого-почвенного института .ДВО АН СССР, на Ученом совете Ш Ж» АН СССР, на вирусологической секции Института микробиологии и вирусологии им.Д-К.Заболотного АН УССР.

рублчдаигт. По тем© диссертации опублшдаваао 53 работы.

Стэтглур? ^аботн. ./Диссертация состоит из двух тоысв.

Том I содержит вводекзо, обзор литературы, описание материалов и методов, экспериментальную часть (четыре глава с обсуждениями результатов), заключение, вывода и список датированной ж -торатуры. (ев! наименование). Текст изложен на 233 страницах, источает 23 таблицы и 26 рисунков. Том П {приложение) содержит 116 страниц, на двух из которых представлены условные обозна -чения, а на. осталышх размещен« 631 микрофотография с иодяися-

На защиту выкосятся следувщие положения:

I* Этическая концепция иммунитета растений к вирусам.

2. Представление об отличии устойчивости в ВДА-иядуцарован-ных пршрзкрозных зонах и темно-зеленах тканях от устойчивости, обусловленной интерфероноподабнкки веществами.

3. Положение о toíí, что часть меток ВТЫ- и JBK-андударо -гашшх локальных некрозов не проявляет реакции сэерхчувсхвя -тельности, а отдельные клетки колодах системно инфицированных ВТМ листьев табака подвергаются недротизавди.

4. Представление об ограничивающей роли ХВК-специфнческих ЛС в накоплении 2ВК в клетках.

5* Полоксние о во эможкостк использован ля защитных нротиво -вирусных реакций клеток для оценки патогенности штаммов вирусов и поражаемости растений.

П. ОБЪЕКТЫ И МЕТОЛУ ИССВДОВАМЯ

Работа выполнена на растениях табака - Hicottana tabaco L. (Самсун,

ПоремоквЦ-ЗЗ, Юбилейный), дурмана — Datura stratnoniuta l. , гофрены - coiupiivena globosa l. , картофеля (Дриекульский ранний. Долинный), выращенных в теплице. Растения картофеля выращивали из оздоровленного и ©годом культуры апикальной иеристе-ш материала, цхадоставденного Н,Ф Лис едкой.

В качеогве даокулша обычно использовали сох листьев табака и дурыша, заракеннык, соответственно, обычным шташом БШ и сальноштогеннш шташом ХВК (Рейган, Колесникова,1973) .Иногда инокулямоы служили очищенные вирусные препараты, подученные по известным методикам (ota^i et aL.,197^,1977)- В отдельных опытах доя заражения использовали сок листьев дурыана, инфицированных слабопзтогечным штаммом ХВК (РеЙ^юан.Колесникова,

Инфвкцпонно сть гоыогснатоа едя частично очищенных впрусккх препаратов, полученных из листьев, зараженных ВТМ, оценкэаля на 10-15 половинках листьев табака (Ксантп нк), а эара-ошнос ХВК - sa 10-15 половинках листьев гоьфоеш»

Определение удельной инфекцконнссти №1 в препаратах кз разновозрастных листьев табака проводили путем оценки не -тиккого поглощения при 260 ни с учетом светорассеяния вирус -них суспензий методом экстраполяции (Доброз, 1931).

При изучении влияния АИД на репродукция вирусов листая отделяли от растений и разрезали по средней шике. Ohüthus по -ловинки листьев в течение суток до заражеши либо в разные сроки (О, 24, 48 ч) после заражения выдзржзалл на растворах АВД (50, 10, I цкг/ил), контрольные - на воде. Остальное время опытов oie половинки листьев ишеубирозали на воде или во влак-ной камере. В ряда опытов обработка листьев проводилась в за -тененных условиях.

Исследования по изучению действия шшетина на размножение вирусов проводили на разновозрастных листьях. Из половинок изолированных механически инфицированных листьзв выбивали диски, которые помещали на воду или растворы кинетика (0,1; I; 10; 25; 50 мкг/мл). Через сутки опытные дкеки перекосили m воду,контрольные выдерживали на воде а течение всего опыта. В тех случаях, когда доследования провожал на ллстмх, не отделенных от растений, опытные половинки листьев э течение первого дня после заражения периодически смачивали кинетином» контрольные

- водой.

Для ое,унки содержания ингибиторов вирусов в листьях к гомо-геватаы из неинфицировгнша листьев добавляли очищенные вирусные препараты. Полученные смеси выдерживали 10-30 мин при ком-ватной температуре, после чего определят их иыфокциоиноегь.

Активность ШКазы, аротеаз, кислой фосфат азы в .¡щетьлх on -ределядн, применяя методики, описанные, соответственно, Татарской я др. (I9&S), Л.П.Алокоеенко (1968), Д.Рэем и др. (Hai, et al., "!979)*

Ультратонкие срезы тканей получали, руководствуясь извест -наш методиками (Упкли,1975). Иор^шетричзские исследования проводили, используя рацее разработанные метода (weitei, лэбЭ; Киселева и Хр. ,1974). Нами предложен цорцюматрическнй метод оценки количества вирусов в клетке. Внутриклеточную локализа -

цію кислой фос-фатазн изучала с пмюпуав иуцфщироваїшого негода Гомори (ЯоДда н др. ,Х982). Для выявления вирусных частиц,а їакжа ХВК*-ищуішрозаншх ЛС в суспензиях применяли метод не * гаишного контрастирования 2^-нэй фосфорноводьфраисзоїі кислотой СФЖ) (Развязккна и др.,1966; Королев, 1980). При имыуыо -элоктрсшномщфоскощческэм исследовании вирусных частиц в суспензиях цршеїиии способ, получивший название техники декорирования {Королев,1980). Используемые в работе антисыворотки щхэдостгзлени Р.В.Гнутоаой.

Фраки» ХВК-спеирфйческих ЛС выделяли г.з зараженных УВК листьев табака {Саысун), используя о неиморіаш модв^икащшш катодану,' прелиоаэнную дня ввделенЕЯ ^ушндрических включений, яндуцарувмых потивирусами (НіеЬзгг «г аі., 1971)-

Злектрофоретичес:щК анализ структурных. вирусных балков проведали в полшкршшшдкем геле в денатурируюсдас условиях яо Лэшлц (Ілеппйі еі аі., 1970).

Статистическую обработку результатов проводали во стандартной кзтодаке (Лающ,1973). Доверительная вероятность принята равной 0,65.

Ш. ЗАРАКТЕРИСТИКА ПАТОГЕНЕЗА У РАСТЕНИЙ ПРИ ДОКШЙОЫ ВИРУСНОМ ПОРШШИИ

Локалытд ракроз. Проведенное нами ультраструктурно« изучение раавиваюнросся локальных некрозов как на отделенных, так я ва не СТД6Л9НИШ. от растений листьях дурмана н гоийгены, инфи-цировгшных, соответственно, ЕШ и ХВК, показало, что реакции клетох на вирус различны. &5льшая часть иа£щмрозанщп клеток проявляет острую реакцию сверхчувствительности (СВЧ) и подвергается быстрой а полной кокротизацги. Наряду с некротизирован-ннш на всех наследованных стадиях развития некрозов <3,4,5,7, 10-е сух после зоракения листьев) обнаружены хлетки, решщиа которых на ршродущии вих^са существенно отличается от СЪЧ ответа х сходна с реакцией системно инфицированных меток. В таких клетках, г отличи« от накрегекзироваанах, накапливается знаиттэлькое количество вируенше частиц, навлвдаются виру син -дуцироазннне «сличения.

Наш уоїаноачеао, что развитие локальных некрозов сопровождай ія деструкцией вирусных частиц и уменьшение» количества юс в клетках. Так, в клетках НШ-лвду>дароБагощх некрозов (как проявляти, так и це проявлявшие реакцию СВЧ) вираоны часто набу-

хам, приобретают повышенную плотность и слипаются либо становятся •'тонкими"» слабоконтрасткши. Набухшие а "тонкие" вирио-вы обнаруживаются и в обработанные ®ВК гомогенатах из некрозов. б процессе некрогепеэа процентное содержание вирусних частиц нормальной длины снижается и увеличивается количество коротких частиц. При этой активность "разрезания" вкриоиов на фрашенты наиболее вырааена в некрозах на не отделениях от растений листьях. Инерционность (рис. X), а также количество структур -ного вируоного белка (рве. 2) в вокроэах после достижения максимума падают.

Рис. I. Изменение относительной шфзкционнос-ти 20 ЕШ-яндуцирован -ных локальных некрозов, формируемых на отделенных (I) и не отделенных (2) от растений дурмана листьях, в процессе развития инфекции. Инфекционность раосчи -тывалась на одинаковую площадь некрозов.

В элекгронномккроскопи -ческих исследованиях s при оценка иа$елцшшностн (рис.1) доказано, что в некрозах,образующихся на инфицированных ( BTU несорванных листьях дурмана, накапливается сущест -венно меньше вируса в сравнении о некрозами на изолиро -ванных листьях. Эта результаты находятся в соответствии с ранее шдучешиво (weint -raub et ai.,1967). Мохно полагать, что клетки не отде -данных от растении листьев обладает более сильными механизмами , ограничивавшими накопление вирусов, чем клетки изолированных листьев.

Г4""

■ • А 6 6 Г Д £ ' -гїппг-Г-"

Г •

Г-•) rr.it-! : / ,

•*• X V; V V -. 4 :. .* 1

1 * Ї J Ь t і t - І 1 1 Г ■ І"/ t-L І- п "І Г

■ ili"* т-

TU m^ ^ f

■■■■■ Л

>. '■ ■' "'■- Л

Рис. 2. Элекгрофорвграм4а белков гоыогенатов нэ ШИ-инду-цированных локальных некрозов, формируемых не не отделенных от

18(Е) етт после заражения.

Тк^'и, пу^актцу^ локлшма некроз«. При исследований клеток пр^шфозшл; зон нами выявлены существенные изменения их . ультраструктуры, зависящие от ыестонаховдеккя клеток относи -телько края некрозов.

Наиболее значат елише морфологические аношлив, отраяавдие ацсо!^» активность протекающих литкчесжих процессов, обнаружены в клетках, граничащих с некрозами. Тонопласты в таких клетках часто стааоаятся необычно шютшаш либо подвер^ажся дест-рукщс:. Ядра ыогут быть некротнзцрованы. Тилакоидн хлорошшс -тоз утратаваюг структурированность, граны становятся аморфными» увелгсэается количество хшютоглобул. Наблдщшгся хлоропласта с чашегидньма инвагинациями. Митохондрии претерпевают различ -кке д&стк'ктшше изменения. Нередко митохондрии, микротела, цистерна ЭР "иши" в коллапсированные участки гиалоплаамы. Образуются мелкие вакуоли, цитосегресош, цитосоиы.

кестки, удаленные от края локальных некрозов на 1-2 ш, ха -растеризуются высокой метаболической активностью. Об этом, в частности, свидетельствует ультраструктурно-иорфсиаетричесхиИ анализ меток мезофилла ВГМ-индуцироэанншс ирщекрозшх зон

(табл- Таблица I

Некоторые морфоыетричоские параметры клэток мезофилла ЖД-жцуцарованных пршекрозных зон на листьях дурмана

Параметры Значеній параметров Отношение

прішекр^зная здоровая^ ткань (П) т

Объешь плотность митохондрий, % от объема клетка 4 і 0,5 2 ± 0,5 2

Число митохондрий в 100 щи3 7,В ± 0,7 2*6 £ 0,3 3

Поверхность мембран грану -лярного ЭР в I мне», ыкм2

Объемная плотность макротел, % от.объема клетки

Число микротел в 100 ыкм3

1,37 ± 0,3 0,27 І 0,04 5,07

I ± о,оа 1,4 ±0,06

0,2 0,3

± 0,03 ±0,04

5

4,67

Б таких клетках выявляются крупные дцрышхк, содержащие гра-нулярыай кошюнент, значительно возрастаю! поверхность грану -лярного ЭР, обьешая плотность я число митохондрий, имеицкх развитие кристы. Это указывает .на формирование в клетках активного Ог"скогштаэ.^/шого аппарата а согласуется с данными ряда

автороз о б штеиоивдсм синтезе в тканях, окружающих некрозы, веществ белковой природы, которым отводится вазная роль в противовирусной устойчивости (Липснц,Князев,1971; ЬоеЬецвгеіп, 1972; Ладютша,ТаВмла,1979; Коваленко, 1983). Активнее образование микротал (табл. I), особенно содержащих кристаллоиды', о учетом существующих представлений (БелицерД978), вероятно, является адаптационным механизмом, направленным, в частности, на предохранение клеток от токсического действия Н^. Нередко в клетках формируются мелкие вакуоли, мулитявеэинуляраыв тела, увеличивается количество диктиосом. Клетки, расположенные на расстоянии 5 ш и более от края локальних некрозов, морфологически существенно не отличается от клеток здоровых листьев.

В опытах по выявлению в клетках првдекрозных зон кислой фосфатаза продукт реакции Гоиори обнаружен наш как в компонентах лизосомального компартаента (в диктиосомах, цистернах ЭР, вакуолях, мультавезикулярішх телах), так и в гиалоплазме. Про -веденные биохимические исследования показали, что активность гидролаэ (протеаз, РНКазы, кислой фосфатази) в тканях, окружи» щах некрозы, существенно возрастает в сравнении со здоровими листьями.

В специально выполненных експериментах нами установлено, что при смешивании очищенных препаратов ВШ и ХВК с гомогенатами из индуцированных этими вирусами пр. . іекрозшк зон вирусные частицы подвергаются значительной деструкции, проявляющейся в резком снижении количества их в исходных препаратах, в набухании, не -тончении, поперечном "разрезании" вирионов. Смешивание вирусов о гомогенатами, предварительно прогретыми на кипящей водяной бане, не вызывает разрушения вирионов; по-видимому, это обусловлено инактивацией гидродаз. Гомогенати из здоровых листьев, а также из принекре&шх зон, индуцируемых гетерологичнш вирусом, хотя и оказывают деструктивное действие на исследуемый виру с, но в значительно меньшей степени, чем гомогенате из пранекроэных зон, индуцируемых гомологичным вирусом. Подобные результаты получены и при оценке действия гомогенатов на иафекционность ви -руенше препаратов: наибольшее ингибироваыие инфекцйонности наблюдается при смешивании вируса с гомогенатами из прішекрозшх зон, индуццруешх гомологичным вирусом. Эти далные сведет елъст-вуют о некоторой специфичности гвдролаз в вирусиадуцированных дринекрозных зонах. Аргументом в пользу специфичности протеаз.

содержащихся ь ауянехроэша зонах, шлу ! служить лолуч«щые каин результаты электрофореткческого анализа структурного балка ШЛ пооА^ смодкпания вируса о гомогенатами. оказалось, что m -кубещя ВГМ о соком из ЯШ-ьыдуцированных принокрозных зон вы -энвает значительное уменьшение содержания (или полное рааруие -ние) кашадшого бедка, предотвращаемое ингибитором протеаэ фе -нилиетилсульфошуфлюоридом (fflace), в то время как смешивание НТК о сокси ез здоровых лкзтьбв либо из ХВК-индуцированннх при-нехрозвых зон оуявственно не влияет на количество бедка ИМ (рис. 3).

Ми полагаем, что деструкция виру ж s; гаотиц э принекрозных зоозя гидролазами, которые могут об.:- ,. -л. свзцифотностьэ к ин -дуцарухщему вирусу, является одаиы ira основных механизмов локализации пнфэвдин.

2 3 4 S S

3 .ЛЦ

згм-

Т- -Ч

T'vr.. Я. Ялй1Л*ПЛ|Т|ГкТ№ГГЯиИй ft'Fninrt'TriUnTVI ^ЩГЪЛ nnAITATVmd wni

ЗЛ!-ш)дуцаровщшнх принекрозных зон (ВВЙ-пнэ) (3,47, ХВК-газ (ô.Vj и здоровчх листьев дурдава (6,9), 5 - смесь BÎSI, гомо -

Гената из ВТМ-пнз с Й£0Ф.

Еаздитод. емдтгащрй, тркЕсгаши в лист-^qx дурдан^. ¿акуздирнг. S2LlïJ2!iL Прк ецэшнном заражении листьев дурмана 31М и ХВК в клепсох лоюлошх некрозов наряду с ВТМ наш: наблюдались час -тици ХВК, а иногда а ХВК-спецнфцч&скио 10.

В клотках принекрозных зон на расстоянии около 2 ш от края некрозов, фо^суемах. на траленных двумя вирусаиа листья«, частицы ВШ зыярггь не удалось. В то же вра'Л ХВК активно раз-

" п -

множается в таких клетках. Это свидетельстнуэт о ток, что миа-НХ8Ш локальной приобретенной устойчивости, развиваемые против ШУ, ие эффективны в отношении ХВК и, таким образом, отличатся от не спешфгщых в отношения вируса механизмов действия внтер-фероноподобных веществ.

При одновременном заражении листьев двумя вирусами ХВК на -наплавается в клетках цринекрозных зон в большей, а ЛС образуются в меньшем количестве, чем в клетках листьев, заражошшх только ХВК. Активное накопление ХВК происходит на фоне стимуляции в клетках лнтвяескшс процессов, вызывающих деструкции кле -точных структур и пополнение пула предшественников, которые,видимо, используются в репликации ХВК* Следует заметить, что частицы ХВК в течение нескольких дней не претерпевали заметных деструктивных изменений в клетках ВЩ-тщуцарованных цринекроз-ных зон, содержащих гидролазы, эффективно разрушающе ВГ«1. Это может служить дополнительным аргументом в пользу спецдЕтчностн подобных гидролаз.

Л. ХАРАКТЕРИСТИКИ ПАТОГЕНЕЗА У РАСТЕНИЙ ПРИ СИСТЕМНОМ

ЩКГСНСМ ПОРАЖЕНИИ »

рдкодцекие ЩМ Ч jpp.ii В наших экспериментах, вшіолнеіших на растениях табака (Самсун) н дурмана, системно инфицированных, соответственно, ВГЦ и ХВК, первичные симптомы в вице посветлэ-ння жляок появлялись на "критических" листьях на 4-5-е сут после заражения нижних листьев. В этот момент распределение инфек-цконноотн в лиотьях растений характеризуется типичной и-обраэ-ной кривой (.ТаЪаЪаеМ, 19?2>> в шоку лиру ешз: а критических листьях обнаруживается максимальная инфскционность, в промежуточ -вых - относительно низкая. Сравнительно низкая инфекционное» выявляется и в листьях, расположенных выше критических. Через 14 сут после заражения растений наибольшая инфекционнооть обнаруживается в зрелых листьях, в несущей симптомы апикальной части (зона А) верхушечных листьев имеет более низкое значение, а в бессимптомной баэальной части (зона £) тех хе листьев - неэ -аачитедьна (рис. 4).

Ингибиторные свойства гомогенатов из верхушечных и зрелых листьев в отношении вгщ и ХВК существенно не различались, а следовательно, не могли повлиять на оценку содержания вирусов.

В обработанных ФВК препаратах сока из зоны В верхушечных листьев системно зараженных растений лишь изредка встречались

3:

!

ШХЗ/С

1

Пгд

п

единичные влрусные частица, тогда как э ¿¡зд^бка* арми^^ах из воны А тех же листьев и зрелых листьев наблвдались многочисленные вирисшы.

При системно« заражении накопле -нне вирусов в листьях обусловлено как размножением, так и транспорте« вирусных чаотиц с штоком ассимядя-юв, наибольшим в молодых растущих листьях (Курсаиов, 1976). В цроцос-ое онтогенеза раотения аэтрагирую -щая одособнооть листьев» а следовательно, и активность транспорта ас-сшаилятов (и вирусов) в них меняются, Чтобы исключить влияние транс -локации вирусных частиц по проводящей системе растения на содержание их в тканях и оценить накопление вируса в листьях разного возраста, связанное только с размножением его, наш проведены исследования на изолированных механически инфицированных листьях. Для того, чтобы свести к минимуму влияние различной эффективности первичного заражения на размножение вирусов в разновозрастных тканях, исследовали накопление вирусов в верхушеч -нше и зрелых листьях от начальных стадий до насыщения. Установ -лено, что инфекционное«» в очень молодых тканях зоны В иэолнро -ванных верхушечных листьев табака (длиной около 3 см), механи -чески зараженных ВШ или ХВК, значительно ниже, чей в зрелых листьях (рис. 5).

Ингибиторные свойства гомогенатов из изолированных зрелых листьев и зоны Б в отношении вирусных препаратов существенно не различались и так же, как и в случае системно инфицированных лвотъев, не могли повлиять на оценку содержания вирусов.

Таким .образом, в очень молодых листьях вирусы (ВОД, ХВК) размножаются значительно слабее, чем в зрелых.

Для выявления клеточных факторов, влияющих на накопление вирусов в тканях разного возраста, проведены исследования по изу-

Рис. 4. Относительная^ жгёюкциокность ¿азалыюй (I) и апикальной (2) частой верхушечных и зрелых (3) листьев табака к дурмана, системно инфицированных, соответственно, В1М и ХВК, через 14 сут после заражения растений.

- ІЗ -

Pec, 5. Кнфвкциошіость гомогенатod листьев табака, механически инфицированных ВТМ (а) и ХВК (б), относительно очищенных вирусных препаратов. I - листья сродіего яруса; 2 - базальная часть верхушечных листьев.

чению внутриклеточного развития вирусов и шр/сиздуцЕровашнх изменений ультраструктуры меток.

ЗОштоастсуктура гтоток разновозрастна лтатт,-

sa*. Дри ультраструктурном изучении ыолодах (критических) листь-€ш табака, системно пинцированных ВЇМ, нами показано, что в момент появления на них первичит симптомов (5-е сут после за -ракекия растений) в клетках обнаруживаются едишгдше варионы либо небольшие скопления их. В этот пзриод инфекции клетка ха -ракгерЕЗуются высокой метаболической активностью в сравнения со здоровш'-контролем. 04 этом сведетельствуюг крупные яіцішшг,со-деркащие гранулярный компонент, рыхлая структура хроматина,обилие рибосом в цитоплазме, развитая система мембран хлоропластом к митохондри2. В то же время появление вирусных частиц в клет -ках сопровождается стимуляцкой литичеекдх процессов. На »то, в частности, указывают образование мелких вакуолей, актш.щия аппарата Гольджи, формирование электроннопрозрачных зон з цито -плазме. В таких зонах наряду с остатками мембранных структур обнаруживается скопления вирусішх частиц, вирионы в которые имеют слабоконтрастннй, истонченный ввд либо отличаются необычно высокой электронной плоацосты» и слипаются, образуя сгустка, в которых отдельные вирионы не различается. Каблщасшсл аяоиа -лип вирионов мы связыэаем с их дестругциеП. Нередко участки цитоплазмы, содержащие вирус, образует вштвания в ЦВ, связан;им

- Il -

о основной дктоялаэиэа узкой "шайкой", йодсбниэ "дорага" цито -зяавкй с вирусными частщамк могут водностью утрачивать озяэь с осяовяой цитоплазмой и перемещаться в 1Щ. Отпочковысаниа участков цдасиказма с вирусом в ЦБ, которая функционирует как вторичная лязосома (Белицср,1978), на наш взгляд, представляет собой активную реакцию клетки, направленную на изоляцию патогена, отторжение аго в зону, где он моает быть затем подвергнут дест -

^^альнеШаез развитие инфекции в системно инфицированных молодых листьях табака сопровождается формированием в плетках гра -нулярко-фибриллярных включений, прогрессирующим ншктлением вирусных частиц, деструктивными изменения»«! клеточных структур и шряонов.

Как показали проведенные исследования, часть клоток молодых системно гаразешш: ВШ листьев табака подвергается некротиза -циа (тейл. 2). По частоте некрогпзации их можно расположить в следующем порядке: основные клетки верхнего, затеи нижнего эпи-дерияса, клетка губчатой паренхиш, паренхимы проводящей ткани» палисадной паренхимы. В некротизированных * клетках количество вируса в 3-4 раза меньше,чем в клетках (Ses признаков коллапса. -

Таблица 2

Некротизация клеток системно инфицированного ВШ молодого листа табака ССамсун) через II сут после заражения растения

Ткань Число исследованных клеток Число некротизированных клеток % некротизированных КЛ^-рК

Верхний зпидершс 312 109 35

Палисадная парадаиа 63Ô 10 1»6

Губчатая паренхима 592 80 13 ,5

Паренхима проводящей ткани 174 20 11,5

Нижний эпидермис 434 113 26

В' инфицированных 1ВК клетках критических листьев дуршана на 5-е сут пооле заражения растений наряду с вирусными частицами выявляются ЛС, количество которых так же, как и вирионов, по мере развития инфекции возрастает. В ранний период инфекции метки характеризуется активным метаболизмом. В ядрах наблюдаются крушше ядрышки. Хлоропласт к митохондрии имеют развитые внутренние мембраны. Увеличивается количество мембран грануляр-

- к -

ного ЭР, микрстйл. Надо^шше вируса сопропотдается стимуляцией литического компартмвнта. Появляется хлороаласты с чашешиепш инвагинациями, в которых иногда обнаруживается вириона, Форш -рувтея агранудярные элементы ЭР, мие линоподоСнкэ тола, цитосо -мы, автолитичеекке вакуоли. Наблюдаются различные деструктивные изменения органолл. Вирусные частицы нередко выглядят истонченными, сла^оконтраотнымн и, видимо, подвергаются деструвдщ.

В процессе онтогенеза сястамнз заражению, растений крлтичес-кие листья становятся зрелыми. В клетках эрелш: листьев накал -ливаетая значительное количество вирусных частиц. В заражении; ВТМ клетках листьев табака вирионы обнаруживается в цитоплазме и ЦЗ. Образуйся гранулярно-фабролляраые я т^бчатне включения. В инфицированных ХЕК клетках зрелых листьев дурмана вирусные частицы БЫявляатся главным образом в цитоплазме в виде разллч -ных скоплений и отдельных вкраоксв. НаблЕкавкся 1С, ко в ые.чь -тем количество, чем в молодое листьях. В цитоплазме системно зараженных клеток зрелых листьев, обычно в содержащих вирус участках, выявляются празнгдг активаций лизкесхих процесс ос. Однако подобные признака в этом случае мыреаеин в ыеньпей ств -пени, а аномальные вирионы встречается река, чем в клетках критических листьев.

В системно инфицированных метках зоны А вирусные частицу накапливаются в довольно большом количестве. Репродукция ЕШ сопровождается формированием гранулярно-фибриллпрных вкшэчеш^!. В -заракенных ШС клетках активно образуйся ЛС, количество которых заметно превышав™ наблюдаемое в эрелкс листьях. Часто ЛС имеют закрученный вид и "охватывают" вирусные частицы. На ран -них стадиях иж&екщд в клетках зоны А обнаруживается крупные ядра, возрастает число митохондрий, имеющих развито креюта,значительно увеличивается (особенно в зараженных ХВК клетках) ко -лачество ьккротал и мембран гранулярного ЭР. Вместе о три, а зараженных клетках активируются лктичеекпе процессп. Форкярулгся иелкие вакуоли, ■влехтронноарозрачние зоны в вдтоплазгдг. В подобных зонах, а также в ЦВ, вместе с вирусными частицами выяешшт-ся лизирутоие мембранные структура; при этил вириони приобретают сяабоконтрастний либо необычно плотный вид. Особенно лрчо признаки активации литического аппарата вкрожиы з клетках зо:ш А, скстешю инфицированных ХВК. Очень часто в таких клетках руксгся ццтосегресош, цитосомы, автолитичеекгсо закуоли. В эо;шх

- № -

образовали ;іх нсбладмяс;: »прусш» ^ж-гї-^з. В учаііках цитоплаз-ш лнфццарсзенніас клеток» граїшчшфіх о Іу), обядигаваятея скопления ХВіС, "«горце веглядяг вшс анор^вио хяопьео(5разще массы.Вмзета о варусом у товошіаста выяаляья-ся лизируадке клгкдаыз коыпе -центы. Значительно возрастает количество агрануллрнісс мембран ЭР* дактиозоц, ыультивезшчг лирных тел, осмйэфильашс глобул. Цистерны ах'рйкулярного ЭР набухают и превращается в вакуолеао.чобные структуры. Формируются яольцеобразішо профили ретикулума.

Методой Гокорк в сиотемко зараженных ЕШ и ЇВК клетках зоны А выявляется высокая активность кислой фосфатази. В большом коли -ч-ьйтво продует реакции обнарузавается на таогшенаях вирусных частиц к в цитоплазме вокруг них. Иногда 'гг.-киз гранулы фосфата сви- * ьда ассоциированы о отдельными вирисиые;. В инфицированных ХВК клетках плотный црацигштат вклазея в цистернах ЭР, диктиосомах, отчлзкяемых ши пузырьках, а также в пузырьках, содержащихся в шваткнациях тодовлазта и совместных инвагинациях тонопласта и олазкалешы в ЦБ. 3 зонах выоохоЯ активности кислой фосфатаэы випускне частицц аередко виглкдга слабокоатрастннии„ истоаченны-ш, вероятно. вследствие деогрукздя под действием гидролаз.

В здоровых клетках продукт реакций Гомори выявляется в тонко-дисиерсном виде и в значительно меньшем количестве, чем в зара -генных клетках. При инкубации материала без экзогенного субстрата лабо с ингибитором №7 осадок фосфата свинца наблюдается редко и в незначительном количестве. При проведении реакции Го -мори после 5-«вдутного кяшпения образцов в гдутаральдегиде в них могут выявляться лишь следовые количества прег^шитата.

Клетка зеш Б как здоровых, так и системно зараженных верху -шачша листьев тойаьа и дурмаиа сохраняют признаки ыеристемати -чеекпх клеток. Ядра круташе. Рибосоыа плотно заполняют пространство между оргшышшыи. Митохондрии овальной форми с небольшим число?! краст а светльш зонаш в матриксе. Пластиди имеют слабо рзодвде скстоку талаковдов. Иногда у кытохондрйй и пластид фор-шдгюгея.чашеввдмые инвагинации. Во мнвгзх клетках отсутствует ЦЕ, во обнарукавшгел многочисленные мелкие вакуоли. Наблвдаюгся диктлосоиы и момбраны гранулярного и ^гранулярного ЭР. Цистерны аграаудярвдго рехикулуїігі тлеют набувшій вид.

Гіри исследовании лэкагаззагда кислой фосфатази в здоровых и за-раченннх глотках зоны Б продукт реакции Гоыори выявлен в мелких Ші^ялях а -сивдмиюаив, в элементах ЭР, аппарате Гольдам, мато -хондріш*. Значігтельїше отлолегыля фосфата евліща наблюдаются на

- 17 -

клеточных ободочках и в пераплаэыатач&екад пространстве,

В клетках самой нижной части зони Б састешо инфицированных ВШ веркуеечных ластьев табака вируснне чветицк не наолюдаются; в некоторых из вышерасподояенных клеток появляются едцнлчшо вириокц и небольшие агрегаты ВІТІ. В содержащих вирус клетках увеличивается в сравнении со здоровыми количество митохондрии, утрачиващих кристы и матрдасс к превраіцамцихся в вакуолеподоб -нне структурт»; в швепшациях ипохондрий обнаруживается сирус-ные частицы; создается впечатление "захвата* вирионов органел -лами. Пространство, заплаченное а подобных инвагинациях, выглядит более светлым в сравнении с окружающей цатозлаэиоС. Иногда изэа-гинацик митохондрий ассоциированы с очагами лизиса. Випвоны в клетках зоны Б приобретают слабокоатрастный вид либо набухают и слипаются, образуя аморфные осшюфшьныа скопления. Часто такие схопленая, видам, лизнрувщях варионов находятся з контисте с вакусдеподобными митохондриями.

Отдельные клетки губчатой парвшцаы и паренхимы проводящей ткани зоны В системно инфицированных ВШ верхушечных листьев табака подвергаются векротизации, В некротизироваалш: клетках обычно выявляется небольшое количество вируса.

При исследовании большого числа даренхимных клеток зоны Б на эарйдашшх ХЖ растениях дурнана нам не удалось виявить в них ни вирусных частиц, ни ДС. Іаравдериая особенность таких клеток -значительное отхождение цзазиахеизы от клеточной оболочка с об -разеванием между ними обширных вон, содержащих яарацуралыше тела; в результате мекклаточнне плазмодесмешше связи нарушается.

Иногда подобные отхожденяя иоазмалешы от клеточных оболочок о разрывом илазмодесм наблшадтся и в не подвергнутых коллапсу шіш, гр&нячащх о некротиажроваишшж «яям^ в зоне £ скс -мою жн$вщровбнних ВТМ листьев табака.

Отделение верхушечных днотьев от растений о последущей инкубацией их во влажных камерах сопровождается быстрой дифференциацией клеток зоны £ (исчезает цитоплазмахкчвекне вакуоли, появляется ЦВ, хаоропдасты а митохондрии приобретает развитую систему внутренних мембран).

Ира механическом заражении ВШ иэолировааних верхушечных листьев табака вирусные частицы накапливается 9 клетках зоны В в значительно большем количестве, чем в подобных клетках системно инфицированных листьев. В противоположность клеткам зона В

системно клфгицгровшшшс ХВК верхушечіщх листьев дурмана з подобное клетках изолированных и механически заракенных листьев ваб -людалпсь и вирусные частицы, и ЛС.

из зараженных ХВК листьев и контрастировании? ФВК ЛС при иссле -аоввнли в злеістронком микроскопе выглядят как мембраноподобные образована, соответствуют« моделям ЛС, подученным на основе серийных сразоа. Смешивание фракций ЛС с ХВЗ оказывает ингиби -торный Еффокт на инфекционность вируса, снижая ее в ореднек на 30 %,

Активность гшюолаэ в здоровых и системно ияФишюованных разновозрастных листьях, в исследованиях, проведенных на верхушеч -їда и зр^шх листьях растений табака и дурмана, нами выявлена обратная гавгсшлость между возрастом листьев и активностью в них гидролаз (протеаз, РНКазы, кислой фосфатази). Как у здоровых,так и у инфицированиях растений (через 14 сут после заражения) наи -большая активность гидролаз обнаруживается в зоне Б верхушечных листьев, более низкая - в зоне А тех же листьев и наименьшая - в зрелых листьях. В зараженных листьях активность гидролаз существенно выше, чем Б здоровых.

"сследовакиз состодшш ВЯЛ в разновозрастна тртрты^ ■габгщд. 3 обработанных ФВК препаратах сока ив зон А н Б верхушечных листьев табаке, системно шфацировшшых ВТК, наряду с вируонымн частицами нормального диаметра (около 18 ни) мы наблюдали ано -малыше вирионы, которые имели значительно меньший диаметр либо приобретали набраний вид. В препаратах из зрелых листьев аномальные вирионы встречались редко. Анализ распределения частиц ВТМ по д иаметрам в препаратах из разновозрастных листьев показал .что в зрелых листьях содержится 78,59 % частиц нормального диаметра, 4,99 % кабухшх и 16,42 % "тонких" частиц. В зонах А и Б верху -шечных листьев выявлено, соответственно, 11,37 и 6,49 % нормальных, 11,63 и 27,76 % набухших и 77 и 65,75^"то«ких" вирионов.

В експериментах, выполненных наїли о помощью ш/ыунной электронной микроскопии, обнаружено, что вирионы нормального диаметра полностью покрываются специфической антисывороткой, В то жэ время "тонкие" вирионы остаются непокрытыми антителами. Ми полагаем, что появление таких вирионов связано с частичным цротеолизом кап-.сидного белка, в процессе которого удаляют од двтерышшшше группы, ответственные за связывание-с антителами.

В серии опытов установлено, что удельная инфекционность ВШ в

препаратах из систешо ивфицированлнх верхушечных листьев табака, содержащих большое количество аномальных вирионов, б 1,5-2,5 раза ниже, чек в препаратах из зрелых листьев. Это, видимо, связано о нарушением отрукгуры каасида у аномальных вирионов и дос -гушосгал их РНК действию РНКазы,

Полученные данные свидетельствуют о том, что важным фактором, винящим на накопление вирусов в листьях разного возраста, является литнчеохая активность клеток.

Наибольшей литической активностью в наших опытах обладали клетки зоны Б как здоровых, так в системно зараженных верхушечных листьев. Подобная активность прежде всего связана о большим количеством мелких вакуолей, являющихся, как известно (У at tie, Moor,-) 963; Васильев,1972; Белицер,1978), фитадиэосомеми, а также с аппаратам Гольдки и ЭР. В соответствии с некоторыми данники (011-vö1г&,1975)■ литической фикцией, обычно не свойственной им, в клетках зоны В, видимо, обладают вакуолеподобше митохондрии .Сообщалось, что митохондрии (Роговин, Фомина,1983) и пластиды (Васильев ,1977) о чашевидными инвагшшцюша могут проявлять автофаговую функцию. Вероятно, подобную функцию они выполняют и в клетках зоны Б. О высокой литической активности зоны В свидетелю! -яцжг ваш биохимические и цитохамичеокие данные.

В процессе дифференциации клеток логический потенциал их снижается: исчезают мелкие важуоди-лизосомы; митохондрия и пластиды, приобретая развитую систему внутренних мембран, утрачиваю? литическую фушщию; уменьшается активность гвдролаз, регистрируемая в биохимических и цитохимических исследованиях.

В ответ на заражение литическая активность и клеток зоиы В, и дифференцированных клеток (зоны А, зрелых листьев) возрастает. Наибольшая литическая активность при системном заражении нрясуща зоне Б,несколько ниже - зоне А и наименьшая - врелда листьям.

Наши набдвдения показывают, что н развитие систешой инфекции сопровождается внутриклеточной деотрукцией вирусных частиц, в большей отелени выраженной в клетках верхушечных листьев, в меньшей - в клетках зрелых листьев, в ооотвеготвкн с ях логическим потенциалом.

Следует подчеркнуть, что разрушение вирусных частиц в клетках молодых листьев, в частности, в зоне А, а также на рациях стадиях инфекции в критических Листьях не является следствием тотального автолиза клеток. Белее того, стимуляция лизос спального кои-

паргмент?,, ùOj слов лазающая, акгивцуя деструкцию вируских частиц в эти: случаях, наблюдается параллельно с актнзацней фушсциональ -иого состояния оргалслл а поэтому может рассматриваться ¡сак за — паяная протш;овпруслал реакция клеток.

И'учекте то?,? паст птатуp;j тенно-зелелнх зон сисудмно заражен -ми В"' ляотьэр gadaip?-, При ультраструктурном исследовании тем -но-зедаыщ; тканей сзстемко кнфицирозацннх БТМ листьев табака ш подтвердила даышо (At&ittson, Matthews,1970) об очень слабом накопления Едрусша: части в клотнах зткх тканей. Однако, вопреки мщ&каз (AtliinsoM, Matthews, 1970) о нормальной ультраструктуре клеток т^,тно-зсле:1Кх зон, нааа наблюдения свидетельствуют о том, что з таз'*'х тетках при наличии в них вяруснцх частиц могут развеваться деструктивные процессы, приводящие иногда к нвкротиза -iizi: протопласта. Подобные аномалии в клетках темно-зеленых участков, на каш ззгляд, язлявтся следствием проявления защитных npoT-jBCEKpycHiас механизмов.

Изучение размещения ХВК в системно поражзинях B1Î.1 'листьях табака. Результаты наших исследований системно инфицированных ИМ лястьев табака, механически заракегшшс ХВК, показывают, что ЗЭК разг.иолается как в светло-зеленых, содорщщх значительное количество ВХМ, так ив устойчивых к ВШ темно-зеленых зонах. Следует отметить, что в клетках светло-зеленых участков ХВК размножается в меньшой, степени, а ЛС формируются более активно, чем в клетках темно-зеленых гон. Тот факт, что в клетках темно-зеленых тканей ВШ накапливается очень слабо, а ХВК размножается зеоыса активно, указывает на специфичность устойчивости этих тканей к вирусу-дацуктору.

Характеристика патогенеза в клугках листыда гдлфрены. инйрцц-ровзшкд,- fffiL Ери заражении листьев гоыЬрена ВТ» на них формируются хлоротичныо зонн, вапешшавдае локальные некрозы; однако локализации шфекцид не происходит. В клетках хяоротичныг зон найдадаютоя шссы вируса, в клетках se sa пределами этих зон вирусные частицы накапливаются в значительно меньшей количестве. Характерной особенностью клеток окруяащкх хлоротичаые зонн тканей язляются явно выраженные признаки активации литнческого ал -парата (влектроннопрозрачные зонц в цитоплазме; лизирулцзе мато-яовдрж, часто контактирующие с вакуолями; формирующиеся у мито-хондрлй а микротел ицвагинации, которые могут быть ассоциированы с очагами лизиса; образующиеся ццтосош и др.). Вирусные частпця

- 2Г -

обычно обнадеживаются в злсктроннопрозрачзпд зонах п гаеюс аномальный вид (истончешюсть, слабая контрастность либо воваеек -над плотность, слипание вирионов), что свидетельствует об их деструктивнюс изменениях. Таким образом, актгващп xirinecrtEx процессов, обуслоалквзжая деструкции варусаых чаетлц, явяязтся вашим фактором, ограштвавдлм накопление ВТМ в клоксах га пределами хлоротячных зон.

У. ВЛИЯНИЕ акшсмеша Д и кшзгша НА взшюдаЯстаз РЛСП-ГГЕЮЖ МЕТОК С ВТМ И ХЗК

Дейстзие АМД на оззмнакстрте вирусов. В наших опытах подучена дакчые, что кнкубацдя листьев дурмана в течение 24 ч на растворах ЖД (50,10, I мкг/ви) стимулирует рааянояенив ХЕК. Наиболее эффективна обработка листьев, предшествующая заражению. Так,если листья вадераивали на №Д (50 мкг/кл) в течгиг.е cyroi; до заражения, то инфекционнооть гомогенатов, а такко очищенных ви -русных препаратов, полученных из ккх, возрастала в 2,5 раза в сравнении о контролем. Подобное влияние АМД о:сазывап на ифев -циоднооть и в заражению: BIM листья табака.

при изучении влияния АМД на кинетику размножения ВИЛ и ХВК, соответственно, в лиотьях табака и думала нами установлено,что в нерааведешюм ¿оке зараженных листьев, обработанных антибиотиком, инфекциоыьость обнаруживает4 л уже через 15 ч после шюкуля-ции, в то время как в необработанных.-, .ртщ ца вторые сутки. На 2-5-е сут после заражения ищ£экционность в обработанных А.ЦД листьях значительно увеличивалась в сравнении с контролем, а на 4-5 сут - достигала некоторого шксицуш, который шло изменялся до конца опыта (ряс, 6). В необработанных листьях икфекционностз достигала вркаэрзо такого хе максимума, не на 1-2 сут позже.

Влияние антибиотика на ультрастэтктуру круток к вт'тп^'.таточное развитие рируоов. При обработке изолированию: листьев табака и душмана АМД (10 мкг/мл) наиболее заметние изменения в .тетках обнаруживаются в хлоропласта*. Так, в то время,л<ак в клетках

здоровых листьев, но обработанных ДВД, эти органеиыьГнаЧ-й день..........

эксперимента обычно имели нормальную толакоидну» систему, при обработка антибиотиком твлакогии утрачивали структурированность, а граны приобретали аморфный вид. Особенно существенные моыэненкя хлоропластов наблюдались в клетках* обработаюсь А!ЛД титрованных листьев; в этом случае отдельные тглакозды, входятш и состав гран, не различались либо разл;гчолись с трудом, а грг^ш вэтлядьяк

е

2

t i J 4 5 a 7 $ Л«

* t i * 3 S 7 9 Jutt

Fito. 6. Отвоситэльная шфекционаость в обработанных ÍI) и нз обработанных (2) А1.Щ (10 ь-кг/мл) листьях табака (а) и дурмана (ó), зараженных, соответственно, ВТМ и ЕЖ.

как бвссгруктурнне осмнсфшшше образования^ Заыатша изменений в шсфолоют. ядер, ыкгохондрзй и других органедн под действием ад обычно не наблюдалось,

С помощь« морфометрсческого метода показано, что АЭД способствуй репродукции ВТЫ и ХВК. При изучении влияния АМД на раз -мнсхйкаэ ХЕК наряду с оценкой накопления вируса в клэгках про -веден морфонеЛгеескай анализ ряда клеточных компонентов (табл.3). Установлено, что в обработанных дИД инфицированных клетках (че -роз 4 сут после заражения) существенно снижалась объемная плот -ность и число матохокдрзй д микротел, поверхность аграяуляраих глеыонтов 9?, обьемчая шютаость ДО. По существующим представлениям, матсхондрки (Ыашанский и др.,1972) и микротела (Белицер, 1978) играыт парную роль в обеспечении клеточного гомеостаза.Ин-гиЗадуя образование этих органелл, АВД, следовательно, подавляет адалтациоакыэ механики пораженной клетки. Наблюдаемые в инфицированных ХВЙ кловдах агранулярные элементы ЗР, часто приобретающие набухший вед, содержат гвдрола&и, которые высвобождаются в цитоЕшазь^' и вазывакт деструкции вирусных частиц. Поэтому увеличите количества подобных ретикулярных структур в ответ на sapa-г.еше, biwímo» является защитной реакцией клзток, подавляемой ангцбиотщон. Отнмуллруя р&продукцлд ХВК, АЫД инщбирует образование .к. Такш образом, ю.ювт место обратная зависимость между

размножение» ХВК и формированием ЛС.

Таблица 2

Влияние АМД на некоторые морфонетрически е параметры клеток мезофилла листьев дурмана, инфицированных ХВК

Параметры

Значения параметров (X + s^)

в коитсола I 11 ПК действ«;: ЛМЯ

4,6 £ 0,3 3,3 ± 0,3

9,9 ± 0,6 G,0 ± 0,5

1,0 ± 0,06 0,33 ± о.ое

4,7 ±0,4 2,55 ± 0,3

4,52 t 0,8 2,4S ± 0,7

44,3 ± е,0 79,7 ± 8,0

10,7 ± 1,5 3,S.¿ 0,5

Объемная плотность митохондрий, % от объема клетки

Число митохондрий в 100 мюг

Объемная плотность микротел, % от объеиа клетки

Число микротел в ICO мкМ3

Поверхность агранулярнкх элементов ЭР в I мки3, mkm¿

Число„профилей частиц ХВК на I w среза метки

Объемная плотноегь ЛС, % от объема клетки

Как известно, ЩЦ является ингибитором синтеза ыРЯК, а еле -доватедько, ингибирует и синтез клеточных белков, что ведет к развитие катаболизма. На ультраструктурном уровне это правде во«*о проявляется в деструктивных изменениях хлоропластов, ТаКШ) образом, стимуляция размножения вирусов АВД на началкка этапах инфекции (15 ч - 4 сут), видимо, связана о тем, что антибзотиг, .блокируя синтез клеточных «РНК, обусловливает преимущество ей -русной РНК в реплпкэции я трансляции, а также о тем, что в клетках увеличивается пул метаболитов, которые могут использоваться в синтезе вирусных нуклеопротеидов. Кроме того, как показали наши исследования, отицуляция размножения вирусов ЛМД может быть связана и о подавленном антибиотиком защитных факторов клеток. К подобны* факторам в инфицированных ХВК клетках ш, ь частности, относим новообразование митохондрий, микротел, ЛС, агрекуляриых аяемонтов ЭР. Одинаковый уровень шфекцяонноота в обработанных и не обработанных ШД зараженных листьях на поздних стадиях инфекции (&-8-0 сут), возможно, отражает способность ВТМ и ХВК оказывать на клетку такое же действие, как и антибиотик, которое, однако, проявляется с некоторой задержкой. Тот факт, чтов дашь: опытах АМН стимулировал репродукцию ВШ и ХВК при обработке ^ас--^ тьев перед заражением либо в раяние сроки после заражения, свя -детельствует против представления (Еобб1вг «е а1., 1979) об учас-

ш: клеточный .ШИ в стаддо репродукции фятсвирусов.

Дд^отвяе яз размножение ЯГМ и ХВК. В наших экспери-

ментах киавткн (10, 25 мкг/мл) вызывал значительный рост молоди? ллетьов верхних ярусов. ЭЛфекТ его на рост зрелых и стареющих дистьез бил меиее. выражен либо не наблвдзлся.

Действие фнтогормона на размножение Б*Ш и ХВК, соответственно, в листьях табака и дурмана, оцкшваемое по инфекцконнооти гжогеи&тов а полученных иг- них частично очищенных вирусных пре-юратов, коррелировало о его влияниям на ростовую активность ткаасЗ. В молодых листьях этиетш значительно (в 2-2,5 раза) щ-гибирэзал репродукцию вирусов. В лист*«*?. средних и нижних ярусов эффект его на накопление вирусов в&рьнр^знл. Низкие концентрации фюго гормона (0,1 к I мктДи) существенно не влдялл ни на роот ллзтьев, ш на размножение а них вирусов; концентрация 50 мкг/мл карздко вызывала токсический эффект.

Обработка листлов кенэтшом (25 мкг/мл) заметно не изменяла ингчбаторныо свойства листовых гомогенатов в отношении очищенных, вирусных препаратов, а такае активность ГНКаэы в тканях и, следовательно, мь могла повлиять на оценку икфекцяонности.

тутатаие Ишот^уттщ на удатрастотктург. клеток а внутриклеточной р^затгтяе сируроэ., Проведенные наш электронноиикросколкчес -кяэ исследования подтвердила лкгибитореый аффект кинетика на размножение ВГМ и ХВК. Показано, что в инфицированные ВШ киет -ках молоди: листьев табака, не обработанных фитогоршоном, часто форшфуатся большие сколлелия вирусных частиц. В обработанных кккеткяои метках такие скопления вируса наблюдаются значительно реде, В этом случае видтснае частицы обычно были представлены сраЕютзльпо нзбодьпнми агрегатами ли$о отдельными вириоиами.Ло-добккй образом кииетин влкял и на накопление ХВК в клетках лис -тьов дуркака. С помощью ирозеданного в этом случае морфо.четри -ческого анализа установлено, что число профилей частиц ХВК в расчете ка адЕагчнуп пчощздь среза вдэтки обработанных кннетином лкстьез (тараэ 4 оут после заражения) было в 1,4 раза меньше,чем в контроле. Еитрбкруя репродукцию ХВК, фатогоржш стимулирует оЗразоЕакдо ЛС.

Обработка кшвтнком активирует клеточнш! метаболизм, тормозит раазитг© катаболизма. Так, в инфицированных В1Ы клетках, листьев таЛ^-л фатогормон стимулирует функциональное состояние ядер.уве-.с-.чльас? количество к объомцую плотность митохондрий, способствует сохрчкешк структуры ме1.:3рал хлороплэстов. Действие кинети-

на на инфицированные ХЕК клеткк листьов дувана отличается некоторым своеобразием s сравнении с пнфищфоващшж BTU клеткэки листьев табака. Это выраяается в активация лвзосомалыюго кои -паргмента, в ' ■частности, в увеличении иозерхности агранултрких элементов ЭР, а также в форииродоиш митохондрий с шгвагкаация-мн. Мы полагаем, что повышение в инфицированных ХВК клетках, об-рейотавкш: кинетинш, липгчоского потенциала так se, как я боле« активное образование в них ЛС, играет защитную роль.

Таким образом, ингибирование репродукции вирусов киноткиоу, наблщаемое нами в молодых листьях, видимо, обусловливается тех, что фитогорыон, являясь индукторов, активирует метаболизм и тормозит процессы распада клеточных ксшонситоз, создавая деЗкздгг предшественников, необходимых для вирусснецифических синтезов, с одной стороны, а с другой - стшулирует защитные мегкашзж. клеток.

ух. сцшка. по?те.!хтк рдстнай с помощью -

УЛЬТРАСТЕГШИЮГО АНАЛИЗА

Важным условием успеха в сояекцлп вкрусоусто£т1ша сортов растений является разработка быстрых и надежное способов оцеащ устойчивости образцов. Подобная оценка не дрздстаэяяот большего труда в тех случаях, когда растения пра инфицировании педарга -югея сильному системному поражения (обдай некроз, хлороз, ст;.*д -ранне верхушек и т.д. ) либо на листьях формируются ло.хадышо некрозы. Ситуация осложняется, когда необходимо оценить относительную устойчивость системно инфицированных образцов.

Обычно испытание селекционного материала на вирусоустойча -вость проводят путем выращивания его вместе с сильно порашаими (контрольными) растениями на инфекционном фоне. Однако сшптоыы контрольных растении варьируют, что затрудняет оценку относительной устойчивости селекционных образцов (Дьяков , 1904). Поэтому разработка методов оценки устойчивости остается актуальной.

В последнее время для оценка относительной устойчивости рас -тений картофеля к вирусам предложен ультраструктурный метод,ос -нованный на анализе нарушений структуры органедд у разных сортов после заражения (Елоцкая,1984; Палилова и др.,1985), Подобный подход прадотавляется нам перспективным.

Планируя настоящую работу, мы придавали вашое значение выявлению защитных клеточных реакций, штудируемых в отвчт на вирусное заранение, полагая, что их можно будет неяешьзовать s качестве критериев при оценке устойчивости раетешй. апгтт?

проведенных наш исследований, а также литературных даших,привел нас к заключению, что развитие защитных реакций в инфицированном растении, проявляющихся на ультраструктурном уровне, обычно находится в прямой зависимости не с устойчивостью, а с поракаеиостью растения. В данном разделе приведена доподнитель-ные данные, подтверждающие это заключение.

При морфометрическсм шапизе паренхнмных клеток листьев дурмана. системно инфицированных разнопатогенньши штаммами ХВК,нами показано, что сильнопатогенный шташ накапливается в меньшей стенеш: и вызывает более активное формирование ЛС, митохондрий, агрануля.шых элементов ЭР, чем слабопатогенный (табл. 4), Репродукция сг "ьяолатогечного штамма сопровождается деструктишшш изменениями клеточных структур. В первую очередь подоЛшм ІІЗМЄ-неш^ы подвергаются хлоропласти (слипание тилакоидов, аморфность гран, формирование чашевидных инвагинаций). Аномальные изменения хлоропластов вызывает и слабопатогенный шташ, но значительно реже, чем иильнозатогэнный. На основании подученных данных нами предложен способ оценки степени патогенности штаммов ХВК, в соответствие с которым, аз двух штаммов более патогенкш считается тот, который вызывает новообразование в клетках большего количества ДС, митохондрий, агранулярных мембран ЭР,

Таблица 4

Влияние заражения разнопатогеяншя штаммами ХВК на морфомвтричеокде параметры клеток мезофшша листьев дурдана

ХВК 1 Здоровый контроль

Параметры сильнодато-генный слабовато-| генный [

Число профилей частиц ХВК на I мкм2 среза клетки 45 ± 5,0 82 ± 9,0 —

Объемная плотность ЛС, % от объема клетка 15,2 І 1,6 7,6 ± 0,7 -

Чдсло^м^тохондрий в 6,2 І 0,3 а.0 ± 0,3 2,3 ± 0,3

Поверхность агранулярио-го ЭР в I »км^, ыкм2 7,5*± 0,8 2,2 ± 0,3 1,37 ± 0,2

Сравнительное исследование ультраструктуры пареихиышх кло -ток системно инфицированных БШ молодых листьев различающихся по поражаемооте сортов табака показало, что на 7-е сут после заражения растений в тетках сильновоспришчшюго (более пора-

жаеыого) сорта Перемо*ец-6Э накапливается значительно меньше вируса, а удирастикгурные изменения Сформирование цитогааэмати-ческих вакуолей, вакуоленодобных митохондрий, алектрониоцрозрач-ных эон в цитоплазме, деструкция хлоронластов), свгдотельсгвуя-вд® об актяьации литяческмх процессов, болез внраленц, чем в клетках оредновсспршагшвого (относительно устойчивого) сорта Юбилейный.

Подобные данные получены а при исследовании клеток систешо инфицированных сильнопатоганныи штаммом ХВК листьев разнолора -хаемых сортов картофеля. Установлено, что в клетках болэе поражаемого сорта Приекульсклй ранний накапливается существенно шнша вируса и формируется больше ЛС, а также в большей степени вьфэдены признаки стимуляции литячеокях процессов (активация аг-ранудярыого ЭР, деструкция органелл) в сравнении с монее поражаемым сортом Долдакый,

Таким образом, степень шраяаемосги растений вирусами корре -лирует с развитие« в инфицированных клетках защитных механизмов в, предо всего, о активацсей дизосомального компаргыанта. Сгаму-шщ лвткчвсжлго аппарата, обусловливающая деструкцию вирусных частиц и, следовательно, играющая защитную роль, в то же зреш ьедет к деструкции клеточных структур, то есть к поражен® кл9 -ток. Поетому высокая степень ах-т^аацкн лизосомальнсго компарт -мента и развития логических лроцшоов иоіут служить диагкости -ческим признаком поражаемых (неустойчивых) сортов, а также силь-нопатогенних шташов. Напротив, сравнительно слабая стимуляция литкчеоких процессов в зареванных клетках является критерием толерантности (слабой норажаемости, относительной устойчивости) сорта либо слабой патогенности шташа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе аровеюащ исследования по изучению защитных механизмов растительных клеток при локальном и системном вируш.чж поражении.

Сформулирована логическая концепция защиты растений от виру -сов, сущность которой заключается го внутриклеточпой деструкция вирусных частиц гидролазами* Сделан вывод, что разрушение вирусных частиц в пршекрозных зонах гидролаэамк, которое йогу? обладать специфичностью к шдупярующему их вирусу, ЯЬЛЯОТСЯ ОДШШ КЗ основных механизмов локализации инфекцки.

При ультраструктурно» изучении ВШ- и ХВК-иыдуцироваяншс лэ -

иуяьшх кекрогов наряду с нзкротлзврояа^'шгиИ ка всзх кссладован-ш стадиях развития, нахрозов (3,4,5,7,10-е сут после заражения листьев) вщшле;ж глзткп, не проявляющие реакции сверхчувстви -тельиости IX обкзружгоащке сходство с системно инфицированными клетками. С другой сторона, показано, что отдельные глэтки системно инфицированиях ВТЫ колодах листьев табака (критических листьев, зоны 5 верхуаечкых листьев) подвергаются некротизаиии. Тшсш образов, клети листа гетерогенны по реакции на вирус.

Результата изучения системных инфекций свидетельствуют о том, что в клетках очень молодщс тканей зо^ц 5 верхушечных листьев вгрусн накали шаптся в значительно мгг'-пгз.; количестве, чем в более да1форен1Б*.рова1П1ш: клетках апикальной части тох же листьев, й такзо грелгэс листьев. Полученные данный позволяют заключить, что слабое накопление вирусных частиц в метках зоны Б связано с 2ысо'лОй литъчес^ой активностью этих клеток как до, так и после заражения (сревышащей подобную активность дифференцированных глегок), а такте о кекоторщя другими факторзш. К таким факго - ■ ра-й мошю отвести наблюдаемое при системном зарадекия в клетках зога Б анатпелььов отхсгдение плазшлемш от клеточной оболоч -ки, в результате чего происходит разрыв плаомодезмеакых связей; это, вщцыо, прэдятструст межклеточному перемещению вирусов,Кро-мо того, обнаруженная в зоне Б системно инфицированных ЗШ вер -хуаочкщ лдстьез табака кекротизэцяя парешошшх клеток проводящей ткани а грчтгчащи: о глеюк губчатой паренхимы, вероятно, отралаэт развитие в нас механизмов, ограничивающих трансло -е2д'лы вирусньк частиц кз проеодщцэй системы.

О.чредале:п'.ов вншакие в работе удалено изучению репродукции ярусов и взаимодействия ах с клетками при обработке жстьэв мО-дайикагораыа метаоолпзыа - АГДД л кинетииом. Установлено, что АМД {50, 1С и I ли^г/'ыл), нримоаевныИ до заражения или в раша:э сроки теле* заражения, стсыулн^ует размножение вирусов. Это, видимо, обусловлено тем, что антпСдотик пнг^бирует синтез клеточных мН1К, гшьгоает раж-дне к&то.'Зоякзма Суве.1,ичьвад пул метаболитов, пс -иользусгцх в сщг.теза олрусних гуклсояроговдов) и подавляет за -пуп^е клеток. ДзЛствие кгщэтина (10, 25 мкг/мл) на

рач.дог.сщю вирусов коррелирует с ого влиянием на ростозузо ак -ТИХОСТЬ ТКОНЛ. В МОЛОДУХ ЛИСТЬЯХ БЭрХЗИХ ярусов, которые ак -растут при обработка кшеттк«, шцтогормон значительно ив~ ГПоПрУеТ репро^кцио вирусов. Подобий аффЫХТ, ПО-1ЯШПЫОИУ, свя-

- Ц9 -

ван о тем, что кинетнн, обладал ,щхукхор;шм действием» стииули-рует метаболизм, тормозит развитие катаболизма и создает дефи -цит предшественников, необходимых дтя синтеза вирусов, а также активирует защитные факторы клеток.

При исследовании внутриклеточного развития ХВК в различных -системах выявлена обратная зависимость между интенсивностью накопления вируса и формированием в клетках ХВК-спацифичеоких JIG. Кроме того, показано, что фракция ЛС оказывает икгибкторішй эффект на инфекционность очищенных препаратов ХЕК. На основании . этих ляннкт выдвигается положение об ограничивающей роли АС в накоплении ХВК в клетках.

В ряде. экспериментов установлено, что ХВК активно размножается в устойчивых к ВГМ тканях (в ВШ-индуцированных пршекрозных зо; нах на листьях дурмана и в темно-зеленых тканях системно инфицированных ВИЛ листьев табака).Это свидетельствует о таи, что ме -х&нцзмы устойчивости, развиваемые против ВТМ, не эффективны а отношении другого вируса (ХВК) и,следовательно,отличается от защитных механизмов,индуцируемых интерферонолодобными веществами.

На основании результатов, полученных при изучении взаимодей -ствия растений дурмана с разноштогешшми штаммами ХВК, а также раэнопоражаемых сортов табака и картофеля, соответственно, с ВШ ж ХЬІС, сделан вывод о существовали! прямой зависимости между активацией лизосомального компаргмента и других защитных реакций клеток и поражаємостыо растений. Выявленная зависимость позволяет оценивать отелень поражаемости растений и патогенности штаммов вирусов.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что в очень молодых верхушечных листьях табака а дурмана (особенно в базальной зоне), зараженных, соответственно, ВШ и ХВК, вирусы накапливаются в меньшем количестве, чем в зрелых ЛИОТЬЯХ.

2. Показано, что обработка листьев до заражения или в ранние сроки после заражения АМД (I, 10, 50 мкг/мя) стимулирует репродукцию вирусов. Действие, на размножение вирусов кинетика (10,2? нкг/мл) зависит от возраста листьев да обработки. В клетках молодих листьев, заметно растувдсх под влиянием кинетина, фитогор-мон значительно ингибирует репродукцию вирусов.

3. На основании ыорфологнческлх, био- и цитохимических исследований щпщшетея лятическая концепция иммунитета растений к at-

- зо -

pycaj.1. Вііявлонг обратная зависимость между активностью лизосо -мальиого компаргмента растительных клеток до заражения и способностью их к накоплению вирусов. Показано, что в ответ на зара -жение активность днтического аппарата клеток возрастает. Стимуляция лкгосомального компгртмента наиболее виражена в клетках пркнекрознкх зон, характеркзуюедхся локальной приобретенной устойчивостью, а таїгае а клетках молодых системно зараженных листьев. Установлено, что в прсцесое развития локальных и систем -них инфекций вирусные частицы подвергаются деструкции гидрола -заш. В наибольшей степени вирусы разрушаются в клетках локальній неврозов и молодых системно инфицированных листьев. Показана дестрг'щдя вирусных чаотяц под действием гидролаз принехроз-ных зон in vitro. Установлено, что наиболее эффективное разрушение вирусных частиц вызывают гидролазы принекрозньк зон, ин -дуцируе;*лх гомологичным вирусом. Подобные гидролазы могут иг -рать существенную роль в локализации инфекция.

4» Установлено, что ВТЫ-шщувдрованная устойчивость (в клетках иринекрозннх зон на листьях дуршна и темно-зеленых тканей системно инфицированных листьев табака) не препятствует актив -ной репродукции ХЕК и, таким образом, отличается от не специфичной в отношенж вируса устойчивости, обусловленной шторферо -нонодобнігш веществами.

5. Показано, что часть клеток ВШ- и ХВК-индуцкрованных ло -кальяых некрозов на проявляет реакции сверхчувствительности, а отдельные клетки системно инфицированных ВТИ молодых листьев табака подвергаются некротизации.

6. В клетках паренхимы базальной зоны верхушечных листьев табака и дурмана, системно инфицированных, соответственно, ВО! и J3K, обнаружены значительные отхождения плазмалешы от клеточной оболочки. Происходящее при этом нарушение плаэмодесменных овя -з ей препятствует межклеточному распространению вирусов.

7. При исследовании внутриклеточного развития ХВК в различ -ных системах {листья дурмана, инфицированные разнспахогенными штаммами, разного возраста, обработанные АЫД и кшетином; ВЗЫ--кндуцированные лринекрозные зоны; темно- и светло-зеленые ткани системно инфицированных ВШ листьев табака; разные сорта картофеля) выявлена обратная зависимость меаду интенсивностью размножения вируса и формированием ХВК-спедафических ЛС. Показано, что ЛС снижают инфекционностъ ХЕК la vitro. Выдвигается положе-

SI -

нив об ограничивающей роля ЛС в накоплении ХЕК в icictr-ax.

8, Установлено, что активность защитных реакций клоток при вирусной заражении находится в прямой корреляции с патогеннос-тью штаммов и поражаемоотью растений и мотет слагать для их оценки.

Списск работ, оцубликованнцх по материалам дассертацли:

1. Реунова Г.Д., Реунов A.B.-, Рейфмаи В.Г. Влияние актипо -ыицина Д на репродукцию Х-вируса картофоля и вируса табачной мозаика // Вирусные болезни растений Дальнего Востока. - Вла -давооток; ДВНЦ АН СССР, 1973. - 14/117/. - С. 73-78.

2. Keunova G.Û,, Eeunov A.V., ieifman V.G. ETlect óf actiao-

X

mycia D on potato virus*multiplication in Datura straiaoniio leaves // Virology. - 1975.'- 52, H 2. - P. 502-506.

3. Реунов A.B., Реунова Г.Д., Гриченш A.M. Электроннокга -роокопичеокое исследование действия кинетша на размножение Х-вируса картофеля в листьях Datura stramonium L. // Электронная микросколия в ботанических исследованиях /Петрозаводск, 1974/: Тез.докл. - Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР, 1974. - С. 216-218.

4. Реунов A.B., Реунова Г.Д., Гричэнюк A.M. ЗлеКтрокномикро-скошяеское изучение внутриклеточных включений, ннлуцируемше Хцвадгсом картофеля // Цитология. - 1975, - 17, JÍ 7. - С. 854866.

5. Реунов A.B., Реунова Г.Д., Шмайдзнко Г.В. Влияние кинети-на на раэынсленме вируса табачной мозаики в листьях Datura stra-Bonium L." // Парусные болезни растений Дальнего Востока. -Владивосток: ДВНЦ АН СССР. 1976. - 25/128/. - С. I7I-I74.

6. Реунов A.B., Реунова Г.Д. 0 возможной репрессия клеточного генома Х-вирусом картофеля // Вирусные болозни растений Дальнего Востока. - Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1976. - 25/128/. - С. 283-284.

7. PeíyBC® A.B., Щетинин Т.В. Метода цитохимии в фитовирусо -логин // Метаболизм больного растения. - Владивосток: ДШЩ АН СССР, 1976. - 40/143/. - С. 45-89,

8. Реунов A.B., Реунова Г.Д., Васильева Л.А., Пактюхнна Б.А. Влияние кинетика на активность НЦСазы листьев табака, здоровых в зараженных ïffît // Метаболизм больного растения. - Владивос -ток: ДЕНЦ АН СССР, 1976. - 40/143/. - С. 133-134.

~ зз -

9. Реуноз A.B., Реунова Г.Д., Рейган В.Г. К вопросу о морфологии внутриклеточных включений, иадуцируешх Х-вирусом картофеля // Цитология. - 1976. - 10, й XI. - С. 1397-1396.

10. Реунов A.B., Реунова Г.Д., Рейфадн В.Г., Полякова A.M. Электроаномикроскопичзское изучение вирусспецнфачоских структур, индуцируемых в растительной клетке Х-влрусом картофеля, а юс возможная биологическая роль // X Всесоюзн.конф. по электронной ижроскошш /Ташкент, 1976/: Тез.докл. - М,, 1976. - С. 52-53.

11. Реунов A.B., Реунова Г.Д., Васильева Л.А. Кинетика разы -ношения ВШ и ХВК в листьях системно поpa^a&vüx растений-хозяев, обработанных актшомшушом Д // Вируса г вкргеныэ болезни растений Дальнего Востока. - Владивосток: ДШЦ АН СССР, 1977. - 48 /151/. - С. 13-15.

12. Реунов A.D., Реунова Г.Д., Полякова A.M., Рейган В.Г. Морфология внутриклеточных структур, индуцируемых ХВК // Вирусы и вирусные болезни растений Дальнего Востока. - Владивосток: ЖЦ АН СССР, 1977. - 48/151/. - С. 20-22.

13. Реунов A.B., Реунова Г.Д., Васильева Л.А. Влияние кинети-на на размножение фктопатогенных вирусов в листьях системно по -раяаешх растений-хозяев ff Вирусы и вирусные болезни растений Дальнего Востока. - Вяадивооток: ДВНЦ АН СССР, 1977. - 48/I5K -С. 23-26.

14. Васдоьева i.A., Реунова Г.Д., Реунов A.B. Размножение вируса табачной мозаики в листьях bicotiana t&bacum l. разного возраста ff Вирусы н вирусные болезни растений Дальнего Востока. - Владивосток: ДВВД АН СССР, 1977. - 4B/I5I/.' - С. II0-II2.

15. Реунов A.B., Реунова Г.Д., Пилона Т.Т. Ингибирование размножения вируса табачной иоэашеи и Х-эируса картофеля кинетиноы в листьях локально поражаемых растений-хозяев // Изв. АН СССР. Сор. биол. - 1977. - 4. - С. 621-323.

16. Реунов A.B., Реунова Г.Д. Морфология и возможная биологическая роль внутриклеточных включений, индуцируемых Х-вируоом

карт-зфеля // Proceed. XVй1 CiecboalQwe conference on electron microscopy. - Родне, 197?. - Vol. A. - P. 269-27Ф.

17. Beurov I.V., äeunova «.!>., Vaeilyeva L.A., Beifaan V.O. Effect of ki&etin on toDeссо mosale virus «nd potato virus X replication in leavea ol sjntemic bo eta // Piijtop&tbol. Z- -1ЭУ7. - 90, К 2. - S. 542-3*9.

IB. Реунов A.B. Улираструктура клеток верхушечных листьев

Datura stramonium l>., системно эаршшнных Х-вирусом картофоля // Зируоше болезни с.-х. растений и меры борьбы с ними. - Л.,

1978. - Вып. 2. - С. 121-122.

19. Реунов А.В. Изучение ультраструктури клоток листьев Ні-oottana te-bacua ь., инфицированных вирусом табачной мозаики // Электронная микроскопия в ботанических исследованиях /Fiira, 1978/: Тез. докл. - Рига: Зннатне, IS78. - С. 224-236.

20. Реунов А.В., Лапшина Л.А. Об ультраст^'ктуре клеток верхушечных листьев табака, шфщіровашшх ВТМ // Вирозы растений.

- Владивосток: ДШЦ All СССР, IS79. - 54/157/. - С. 117-121.

21. Ладанна Л, А., Реунов А.В. Ингїібирующее действие кяеточ -ных Фракций, содержащих ХВК-шиуцированные структуры, на кяфек-ционность ХВК // Вирозы растении. - Владивосток: ЛЕЩ АК СССР,

1979. - 54/157/. - С. 155-157.

22. Реунов А.В., Полякова A.M. Сравнительное исследование ультраструктуры ^пидеошоа здоровых и іпіфшдарованннх: вирусом табачной мозаики листьев табака // XI Всесоюзн.конф. по элект -ронной мшфосдодди Ааллин,197Э/: Газ.доіи. - М.: Наука, IS7S.

- С. 159.

23. beubov a.v. ULtrastructural features of the parenchyma of younr? leaves of Datura stramonium L. eyeteoically inXeoted witii potato virus X // Virology* - 1979. - 96, 3 2. - P. 265-269.

24. Реунов А.В. К вопросу о развитии автолиткчоских процес -оов в клетках мезофилла верхушвчнш: листьев дурмана обыкновенного, системно пораженных Х-вирусом картофеля // Цитология. -

1980. - 22, ft 6. - С. 626-630.

25. Реунов А.В., Реунова Г.Д., Лаішшна Л.А., РеІЇфшн В.Г. Некоторые особенности ультраструктуры паренхимных клеток разновозрастных ЛИСТЬеВ Datura stramonium L., СІГСТЄМН0 инициированных Х-вирусом картофеля // Фазиол. раст. - i960. - 27, J8 I. -С. 99-104.

26. Beunov А. V., Reunova li.D., Lapshiaa ¿.A., Be і Глад V.G. Belatioa of replication of tobacco mosaic virus end potato virus X to age in detached leaves of Nicotiana tabaeun // ihytopsthoi. Z. - 1981. - 101, H 1. - S. 16-гі.

27. Реунов A.B., Каторская В.П. Сравнительное изучение ульт-растигктуры мезофилла светло- и темно-зеленых участков мозанч -ных листьев табака, пор&ченных FIM // Вируонае болезни растений.

- Владивосток: ДВЩ All СССР, 1981. - С. 44-46.

- 34 -

28. Реунов A.B., Лога С.Н. Элоктршнэнлжроскодяч« скоо изучение распределения ВГМ и ХВК в некрозам и принекрозных зонах листьев natura etraaoniun L. при смешанном заражении // Вирус-ние болезни растений. - Владивосток*. ДВ1Щ Ali СССР, 1981. - С. 47-49.

29. FeyHOB A.B., Лапшина Л.А. О влиянии кинет¡ша на ультраструктуру клеток тзсфилла изолированных листьев табака и размножение в них вируса табачной мозаики //Цитология. - 1982.

- 24, Д 10. - С. 1230-1233.

30. Реунов A.B., Лега С.Н., Нагорская В.П. Размноаение Х-ви-руса картофеля в устойчивых к ВТЫ листовых тканях // intern.Wissenschaft. Tagung Probleme BeelStenz Bilanzen Krankheitserreger sowie tierische Schaderreger. - Halle, 1982. - S. 80.

31. Реунов A.B., Нагорская В.П. Электронномикроскопическоe изучение размножения XBK и его влияния на содержание ВШ в темно-зеленых зонах мозаичных листьев табака, системно инфнцаро -ванных ВШ // Влияние вирусов на обмен растений. - Владивосток: ДШЩ АН СССР, 1983. - С, 40-44.

32. Лапшина Л.А., Реунов A.B. Действие актиношцина Д на ультраструктуру клеток мезофилла листьев табака и репродукцию в них вируса табачной мозаики // Цитология и генетика. - 1983.

- 25, * 9. - С. 3-7.

33. Реунов A.B., Лапшина Л.А. Злектронномикроскопическое изучение влияния актшомицина Д на репродукцию Х-вируса картофеля в клетках шзофшиа листьев дурмана // Цитология. - 1983. - 25,

В 9. - С. I0I9-IQ25.

34. Реунов A.B., Полякова А.Ы., РеЩман В.Г, Ультраструктур -ная характеристика вирусного патогенеза в палисадной паренхиме молодых листьев табака, системно шфщировашшх ВШ // Физиол. раот. - 1983. - 30, * I. - С. 115-122.

35. Лапшина Л.А., Реунов A.B. К вопрооу о развитии логических процессов в растительной клетке при вирусном поражении // ДАН СССР. - 1983. - 271, * I, - С. 255-256.

36. Лапшина Л.А., Реунов A.B. , Рейфман В.Г. Электронно-цитохимическое изучение активности кислой фосфатазн в клетках мезофилла листьев табака, пораженных вирусом табачной мозаики // Ультраструктурная организация растений / Кишинев, 1983/: Тез. докл. - Кишинев: Штиинца, 1983. - 0. 94-95.

37. Реунов A.B., Полякова А.М. Изучение ультраструктуры эпи-

дерлиса молодых листьев табака, системно ши^кцирозоншас вирусом табачной мозаики // Улыраструктурпая организация растений /Кишинев,1983/: Тез.докл. -.Кишинев: Штлинца, 1983. - С. 123.

Зв. Eevuvov д.V., besa. S.S. Observation o£ potato virus X la tobccco nosalс virus (3MV)-Induced local lesiona and surrounding zoaee in leaves or lírtura utraeoniun L. in mixed iaiectioi // Phytopathol. Z. - 198?. - 107, H £. - a. 2?6-262.

39. Eeunov ¿.V., Lapshiaa L.A. Study of tbe multiplicatica of potato virus £ in variously aged leavee of tí&tara etramonium X» // íhytopathol. Acad. Sel. Hung. - 1964, - 19, H - P* 259302.

40. Реунов A.B., ЛамшнаХА. О некоторых цитологических тестах устойчивости растительной клетки к Х-вирусу картофеля // Теория и практика использования иммунитета с.-х. гфльтур к be -

s русным болезням /Вильнюс,1984/: Тез.докл. - Вильнюс, 1984. - С. 252-254.

41. Реуноь A.B., Лога С.И. Электронио-микроскопическое исследование клеток мезофилла устойчивых к КШ зон, окружающих ВШ--индуцированнае локальные некрозы на листьях Datura stramonium Ь. // Цитология к генетика. - 1984. - 18, 4. - С.' 249-255.

42. Роунов A.B., Латана Л.А. Локализация кислой фоофатазы а клетках мезофилла листьев дурман, системно шь^щщровашых Х-ви-русом картофеля // Цитология. - '¿385. - 27, # 5. - С. 592-502.

43. Реунов A.B., Полякова А,М.,. Рейган В.Г. Ультраструктура эпидермиса листьев табака, инфиццроваяных вирусом табачной мозаики // Физиол. раст. - 1985. - 32, й 5. - С. 998-1003.

44. Лега С.П., Казачкова Л.А., Реунов А,В. Активность ЙЖазы В участках листьев Satura stramoDiwn L., Окружающих НШчП£ДуЩ1-рованные локальные некрозы // Взаимоотношения вирусов с «лотками растения-хозяина. - Владивосток: ДИЩ АН СССР, 1985. - С.132-134.

45. Реунов A.B., Полякова A.M. О некротизации клеток ллстьов табака, системно пораженного вирусом табачной но зашей /ДЬтчро-биол. «уры. - 1986. - 48, И 6. - С. G4-68.

46. Реунов A.B., ЛШШна Л.А., РеЩман В.Г. Об ономалышх ми-тохондр'дях в кльтках базадьно'Д зоны здоровых к иифицироьашщх BTJ верхушечных листьев табака // Цитология и генетика. - 1236. - 20. Л 3, г С. 209-211.

47. Полякова А.У., Роунов A.B. О явлении шжротрзлщзг клеток в системно инфицированных ВЦ.' листьях табака // Tä Всесоюзной

совещание по юьлужгготу с.-х. paort;^! а болезням и предателям /Рига, 1986/; Теэ.докл. - Рига, 1986. - Ч. 13. - С. 62-63.

43. пеунов A.D. Цитологические основы устойчивости растений к патогенаи (методические указания). - Владивосток: ДЗО АН ССОР, 1988. - 32 с.

49. Реунов A.B., Лапшина Л.А. О некрозе клеток базальной зона растущих листьев таба:а, системно инфицированных вирусом та -бачной мозаики // Цитология, - 1988. - 30, J6 I. - С. 104-106.

50. Лашына Л.А., Реунов А.З, Влияние кинетша на ультра -структуру клеток листьев дурмана и размножение в них Х-вируоа картофеля // Ультраструктура растоюй Даза, 1Э38/: Таз. докл. УІ Всесоюзн.симп. - Киев, I9ÖS. - С. ЙСО.

51. Реунов A.B., Лапшина Л.А., Полякова А.М., Лега С.Н., На-і'орская В. П. О гетерогенности ответных реакций клеток листа на вируску» инфекцию (элекгронномикроскопаческое исследование) // Ультраструктура растений /Каев, 1938/: Тез.докл. УХ Всесоюзн. симп. - Киев. - С. 224.

52. Реунов A.B., Лапшина I.A., Райзман В.Г., Романова С.А.

Способ относитбльной оценкк ОТеПеНИ ПаТОГеНКОСТИ ШТШШ)В Х-ви -

руса картофеля // Авторская заявка. Ä 4372862/31-13. Рвение о выдаче авторского свидетельства от 30 января i960 г.

53. Реунов A.B., Лапшина Л.А., Нагорская В.П, Споооб (щенки относительной штогшшости штаммов Х-вируеа картофеля // Авторская заявка, JS 4373040/31-13. Решение а вадаче авторского сви -детельства от 30 января 1989 г.

Анатолий Васильевич РЕУПОВ

ЩТОПЛТОЖЯШ ПОРАЖЕННОЙ ВИРУСАМИ (БТМ, ЛЗК) РАСТИТЕКЕНОЙ КЛЕШ И ПРОЕША УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ

Автореферат

Подписано к печати 4.01.90 г, БД 14001. Формат 60x84/10. Печать офсетная. Усл.п.л. 2,09, Уч.-язд.л. 2,13. Тираж 100 экз. Заказ 5. Бесплатно_

Отпечатано в офсетно-ротапргатном цехе НЮ ДВО АЯ СССР 690600, Владивосток, Ленинская, 50