Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов

Зарубина, Ирина Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов"

На правах рукописи

РГБ ОД 2 7 ОКТ 1998

Зарубина Ирина Анатольевна

Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа, 1998

Работа выполнена в Тюменской государственной медицинской академии Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор А.Ш.Бышевский

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Лазарева Д.Н. доктор биологических наук, профессор Чирятьев Е.А.

Ведущее учреждение: Челябинская государственная медицинская академия

специализированного совета Д.084.35.01 при Башкирском государственном медицинском университете (450000, Уфа, ул. Ленина,3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета (450000, Уфа, ул. Ленина,3)

Защита состоится

«.V //

1998 г на заседании

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного Ученого Совета д.м.н. профессор, член-корреспондент АН РБ Э.Г.Давлетов

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Роль свободнорадикального окисления липидов значительна в развитии многих заболеваний [О.А.Ази-зова и др., 1996; С.Л.Плавинский, А.С.Кузнецов, 1997; Р.М.Сафа-ров и др. 1997], что связано с его значением в гомеостазе [Л.К.Обухова, Н.М.Эмануэль, 1983]. Особый интерес представляют состояния с одновременной активацией ПОЛ и гемокоагуля-ции, что может приводить к развитию ДВС [А.Ш.Бышевский и др., 1995; Ипеп е.а., 1996]. Синхронные гиперкоагуляция и активация ПОЛ, сдерживание антиоксидантами гемокоагуляционных сдвигов при этом [И.Ш.Весельский, А.В.Сонник, 1997] указывают на необходимость детального изучения механизмов связи между ПОЛ и гемостазом, в существовании которой уже нет сомнений [В.П.Мищенко, 1981; А.Ш.Бышевский и др., 1992; В.Г.Соловьев, 1997]. Механизмы реализации связи затронуты в единичных работах [В.П.Мищенко, 1981; ЫНапо е.а., 1997], хотя и есть сведения о модификации мембранных липидов под влиянием ПОЛ и роли фосфолипидов в формировании тромбопластической активности клеток [В.Г.Соловьев, 1997;2\лгаа1 е.а., 1980].

Независимо от причины, активация свертывания всегда включает тромбиногенез [Д.М.Зубаиров, 1978], поэтому связь между гиперкоагулемией и ПОЛ может реализоваться через изменения уровня тромбина [А.Ш.Бышевский, 1996]. Это подтверждено данными о влиянии на ПОЛ некоторых клеток крови, участвующих в гемостазе [Б.И.Кузник и др., 1989] и реагирующих на тромбин активацией ПОЛ [И.В.Селиванова, 1994]. Наиболее активно реагируют на тромбин ТЦ раггнеБОп е.а.,1980; 1989]. Результаты серии экспериментальных работ позволили сформулировать представление о положительной связи между системой, обеспечивающей ПОЛ, и тромбинообразованием: «тромбинемия-»акти-вация ПОЛ» и «активация ПОЛ—»-тромбинемия» [С.Л.Галян и др. 1990; А.Ш.Бышевский и др., 1992]. Это представление подтверждено в клинике [В.А.Полякова, 1994]. Есть основания допускать, что ТЦ - важное звено в связи «тромбинемия-ПОЛ» [И.В.Селиванова, 1994; В.Г.Соловьев, 1997], однако, механизмы их участия в этой связи не изучены, хотя ориентируясь на сведения о роли ТЦ в гемостазе и в продукции эндопероксидов, можно ожидать, что эти клетки могут под действием тромбина высвобождать активаторы тромбиногенеза - фф. Р3 и Р4. [Д.М.Зубаиров, 1978; З.С.Баркаган, 1988].

С учетом сказанного и практической значимости сведений о механизмах связи между ПОЛ и гемостазом, мы исследовали роль ТЦ во взаимозависимости «тромбинемия - ПОЛ».

Цель работы - установить, имеется ли зависимость между ПОЛ в ТЦ, их агрегантной активностью и способностью высвобождать факторы свертывания.

Задачи исследования. 1. Экспериментально изучить состояние ПОЛ в ТЦ при экзо- и эндогенной гилертромбинемии, как воздействии, повышающем их агрегационные свойства; 2. Изучить экспериментально агрегационные свойства ТЦ при активации и торможении ПОЛ; 3. Изучить агрегационную активность ТЦ и интенсивность ПОЛ в них при некоторых заболеваниях, характеризующихся ускорением свободнорадикальных процессов и активацией свертывания крови; 4. Изучить экспериментально влияние уровня продуктов ПОЛ в плазме на агрегационную активность ТЦ.

Научная новизна. Впервые показано, что гипертромбинемия, вызываемая введением тромбопластина, усиливающего генерацию тромбина, или введением собственно тромбина в кровоток, вызывает активацию ПОЛ в ТЦ, и снижение антиоксидантного потенциала. Установлено, что сдвиги интенсивности ПОЛ в ТЦ сопровождаются активацией их агрегации и способности к высвобождению фф. Р3 и Р4.

Впервые установлено, что введение животным прооксиданта активирует ПОЛ в ТЦ, их агрегацию и высвобождение фф. Р3 и Р4, введение антиоксидантов ведет к противоположным сдвигам.

Впервые показано, что при заболеваниях, характеризующихся активацией ПОЛ и свертываемости крови (ИЗСД, атероскле-ротические поражения артериальных сосудов, гестоз), повышено содержание продуктов ПОЛ в ТЦ и их способность к агрегации.

Впервые выявлена зависимость между интенсивностью прироста продуктов ПОЛ в ТЦ и приростом их агрегационной активности, зависимость между концентрацией продуктов ПОЛ в окружении ТЦ и их агрегацией и «высвобождающей» активностью.

Практическая ценность работы. Материалы исследований использованы при разработке 2-х методических рекомендаций по применению комплексного антиоксиданта (Витакомплекс) в лечении больных с атеросклеротическими поражениями артерий нижних конечностей в период подготовки и после операций аорто-бедренного и аорто-подколенного шунтирования артерий. Рекомендации внедрены для использования в ОКБ г. Тюмени и Облон-кодиспансере. Результаты работы использованы при написании монографии «Тромбоциты» (А.Ш.Бышевский и др., Тюмень, 1996) и при составлении инструкции по клиническому испытанию Витакомллекса к заявке в Фармкомитет МЗ и МП РФ (препарат под названием Селмевит утвержден для медицинского примене-

ния - «Протокол 10 Фармкомитета от 10 сентября 1997 г»).

Апробация и публикация. Основные положения диссертации доложены на: 1) Международном симпозиуме «Биологически-активные добавки к пище и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространенных заболеваниях». Тюмень, 1995; 2) Международных симпозиумах «Медицина и охрана здоровья». Тюмень, 1996, 1997 гг., 3) 9-й Европейской конференции по гемореологии. Сиена, 1995, 4) конф . Объединения биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири «Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии». Уфа, 1998. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 132 стандартных страницах, включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, собственные данные, их обсуждение, выводы и список литературы. Работа иллюстрирована 26 табл. и 16 рис. Библиографический указатель включает 148 работ отечественных и 65 работ зарубежных авторов. Основные положения, выносимые на защиту. 1. Тромбинемия экзогенного или эндогенного происхождения ведет к активации ПОЛ и снижению антиоксидантного потенциала в ТЦ. 2. Введение в организм прооксиданта сопровождается активацией ПОЛ в ТЦ, ростом их агрегационной активности и способности к высвобождению фф. Р3 и Р4, введение антиоксидантов ограничивает эти изменения и снижает агрегационную и «высвобождающую» активность ТЦ.

3. Интенсивность прироста агрегационной активности пропорциональна приросту содержания продуктов ПОЛ в ТЦ. Агрегационная активность ТЦ и способность к реакции высвобождения повышается с ростом содержания продуктов ПОЛ в субстратной плазме. Между содержанием в субстратной плазме первичных продуктов ПОЛ и агрегационной активностью ТЦ есть прямая зависимость.

4. При заболеваниях, характеризующихся активацией ПОЛ и ги-перкоагулемией (атеросклеротическое поражение сосудов, ИЗСД, беременность, осложненная гестозом) повышено содержание продуктов ПОЛ в ТЦ и их агрегационная активность. Ограничить сдвиги удается введением антиоксиданта «Витакомплекс». Материалы и методы исследования. Опыты проведены на 138 беспородных белых крысах-самцах ( 120±15 г) - животных, для которых известны дозировки про- и антиоксидантов. Каждый эксперимент включал контрольную группу. Кровь брали в шприц из обнаженной яремной вены наркотизированных диэтиловым эфиром крыс, стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия (9:1) [В.П.Балуда и др., 1980]. Рану закрывали кожным швом. В части

опытов вводили s яремную вену тромбин (0,1 мл/100 г, активность - 25 с) или тромбопластин (0,5 мл/100 г, активность - 22 с). В ТЦ определяли: 1) интенсивность спонтанной агрегации [В.П.Балуда и др., 1980], 2) агрегационную активность (агрего-метр «Биомак»). На агрегатограммах устанавливали значения максимальной агрегации /МА/ и начальную скорость /tg а/. Индуктор агрегации - АДФ (конечная концентрация - 0,01 мг/мл [А.Ш.Бышевский и др., 1996]), 3) содержание ф. Р3 в плазме устанавливали по разнице показателей активированного времени свертывания рекальцифицированной плазмы /АВР/ до и после удаления ТЦ, 4) высвобождение ф. Р3 - по разнице показателей АВР в плазме до и после АДФ-агрегации, предварительно удаляя из нее ТЦ [В.П.Балуда и др. 1980], 5) содержание ф. Р4 плазмы -по влиянию прогретой бедной ТЦ плазмы (источник Р4) на тромбин-гепариновое время свертывания субстратной плазмы. Степень укорочения времени свертывания - мера активности ф. Р4. 5) интенсивность высвобождения ф. Р4 при агрегации ТЦ: устанавливали по уровню ф. Рд в плазме после АДФ-агрегации и удаление тромбоцитов. Число ТЦ определяли, как описано [В.В.Меньшиков, 1987]), их выделение и отмывку - по А.Б.Самаль и др. [1990].

Для оценки ПОЛ и антиоксидантной активности ТЦ применил»-методики, включающие определение содержания первичны) /ДК/ и вторичных /ТБК/ продуктов ПОЛ, периода индукции v скорости окисления в модификации В.Н.Ушкаловой и др. (1987) используя флуориметр «Биан 130».

Как комплексный антиоксидант использовали комбинацию ви таминов А, Е, С и Р (0,18, 0,15, 45 и 20 мг/100 г массы соответ ственно). Эти дозы - адекватны средним лечебным дозам для человека [С.Л.Галян и др., 1990; С.А.Ральченко, 1992]. Крысы получали суточную порцию витаминов в составе консистентного ра циона. Как синтетический антиоксидант использовали димефо«^ в дозе 100 мг/100 г, обеспечивающей достаточный антиокси дантный эффект [С.Н.Ельдецова, 1990]. В качестве прооксидант; использован ацетат свинца (5 или 10 мг/100 г массы тела в соста ве рациона). В этих дозах ацетат свинца активирует ПОЛ, снижа! антиоксидантный потенциал за 10-12 дней [А.А.Мкртумян, 1994] По данным ВОЗ при оральном введении всасывается около 5%.

Те же приемы изучения ТЦ использованы при наблюдении з; больными (ИЗСД, атеросклеротические поражения артерий ниж них конечностей и беременные с гестозом легкой степени).

Результаты исследований и их обсуждение.

Активность ТЦ и ПОЛ в них при внутривенном введении тром-бопластина. Тромбопластин ускоряет образование агониста агрегации тромбина [Д.М.Зубаиров, 1978] -. Поэтому при тромбо-пластинемии может повыситься агрегация и, следовательно, можно проследить изменится ли одновременно интенсивность ПОЛ в ТЦ (тромбопластин на ПОЛ не влияет [С.Н.Ельдецова, 1990]).

Крысами вводили взвесь тромбопластина (0,5 мл/100 г, активность 22 с) [В.Г.Соловьев, 1991-97]. Через 1 ч (табл. 1) повысилось содержание в ТЦ ДК и ТБК-продуктов, сократился период индукции, увеличились скорость окисления (активация ПОЛ и снижение антиоксидантной активности) и высвобождение фф. Р3, Рл, возросла способность ТЦ к агрегации и ее начальная скорость.

Таблица 1. Активность ПОЛ, АДФ-агрегация тромбоцитов, уровень фф. Р3 и Р4 в плазме через 1 ч после введения тромбопластина_

Показатели Контроль (п=6) Тромбопластин (п=7)

ДК, А/мг 0,12+0,03 0,34+0,03*

ТБК, ед/мг 0,54+0,06 1,85+0,02*

Период индукции, мин/мл 50,0+3,04 34,1±3,09*

Скорость окисления, мм3/мл в мин 0,72+0,07 0,99±0,05*

СА, % 5,8±0.42 11,3+0,7*

МА, % 61,9+3,1 76,4+3,2*

*<за 4,9+0,08 6,5+0,6*

Ф. Р^ % 89,9±2,3 97,8±2,1 *

Ф.Рл с 2,9+0,03 4,3±0,07*

Обозначения здесь и далее: ДК - диеновые конъюгаты, ТБК - ТБК-активные продукты, СА - спонтанная агрегация, МА - максимальная агрегация, 1д а -начальная скорость агрегации.

Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при внутривенном введении тромбина. Чтобы исключить связь тромбинемии, вызванной тромбопластином, с другими его эффектами [А.Ш.Бышевский и др., 1993], вводили крысам коммерческий препарат тромбина (вызывали тромбинемию, не включая тромбиногенез).

Тромбин вводили в вену (0,1 мл/100 г, активность - 25 с) и через 30 мин брали пробы.

Введение тромбина активировало ПОЛ в ТЦ, агрегацию и реакцию высвобождения интенсивнее, чем тромбопластин.

Таблица 2. Активность ПОЛ, АДФ-агрегация тромбоцитов, уровень фф, Рт и Рл в плазме через 30 мин после введения тромбина_

Показатели Контроль (п=6) Тромбопластин (п=8)

ДК, А/мг 0,12±0,03 0,44+0,04*

ТБК, ед/мг 0,54±0,06 1,99+0,03*

Период индукции, мин/мл 50,0+3,04 32,0+3,00*

Скорость окисления, мм3/мл в мин 0,72±0,0 7 1,09+0,05*

СА, % 5,8±0,42 13,8+0,9*

МА, % 61,9+3,1 84,4+3,6*

»ч а 4,9+0,08 6,9±0,5*

Ф. Р^ % 89,9±2,3 107+3,1*

Ф.Рл с 2,9+0,03 4,5+0,06*

Обозначения: такие же, как 8 табл. 1

Активность ТЦ и ПОЛ в них при эндогенной тромбинемии. При кровопотере активируется ПОЛ из-за гипоксемии, нарушающей транспорт электронов дыхательной цепью [Е.Е.Иванова и др., 1984] и из-за активации тромбиногенеза [Д.М.Зубаиров, 1961]. Мы воспользовались апробированной в этом плане моделью [С.Н.Ельдецова, 1990] - извлечение 25% общего объема циркулирующей крови. Через 30 мин брали пробы крови.

Изменения носили тот же характер, что и при экзогенной тромбинемии: активация ПОЛ в ТЦ, рост их агрегационной способности и усиление высвобождения. Степень прироста несколько выше, чем в опытах с тромбинемией. Видимо, сыграло роль то, что кровопотеря определила и активацию тромбиногенеза (реакция, направленная на ограничение кровопотери), и активацию ПОЛ (гипоксемия). На рис. 1 видно, что изменения максимальной агрегации /МА/ ТЦ и начальной скорости агрегации /Н.СК./ параллельны росту уровня продуктов ПОЛ, что прирост содержания первичных (ДК) и вторичных (ТБК) продуктов ПОЛ при разных ситуациях практически одинаков.

Рис. 1. Степень изменения уровня ДК, ТБК, МА, начальной скорости агрегации (Н.СК.) и спонтанной агрегации (СА) в процентах от исходной (принятой за 100%) при разных экспериментальных ситуациях

Прирост МА и ее начальной скорости отстает, изменяясь в том же направлении. Изменения спонтанной агрегации ближе по интенсивности к изменениям уровня продуктов ПОЛ.

Рис. 2 позволяет заметить, что степень прироста интенсивности высвобождения ф. Р3 выше с увеличением прироста концентрации продуктов ПОЛ. В отличие от индуцированной, спонтанная агрегация меняется с интенсивностью, близкой к сдвигам ПОЛ. Большая степень сдвигов ПОЛ не может толковаться как признак первичности этого изменения и вторичности - изменений коагуля-ционной активности ТЦ - не исключено и то, что сдвиг активности ТЦ - причина заметной активации ПОЛ в них.

450

400

350

300 ■

250 ■

200-

150 ■

100 •

50 ■

0 •

1 1 одк

1 1 □ ТБК

1 ■ Р-3

1 □ Р-4

Рис. 2. Степень изменения уровня ДН, ТБК, фф Р3 и Р4 в процентах от исходной (принятой за 100%) при разных экспериментальных ситуациях

ТЦ при активации или угнетении процессов ПОЛ. Проокси-дант (ацетат свинца) вводили в дозе 5 мг/100 г массы 12 дней, на 13-й брали пробы.

Таблица 3. Активность ПОЛ, АДФ-агрегация тромбоцитов, уровень фф. Р3 и

Показатели Контроль(п=5) Свинец(п=5)

ДК, А/мг 0,12+0,03 0,19+0,02'

ТБК, ед/мг 0,54±0,06 0,69+0,03*

Период индукции, мин/мл 50,0+3,04 41,2+2,1*

Скорость окисления, мм3/мл в мин 0,72±0,07 1,03±0,02*

СА, % 5,8±0,42 8,3+0,21*

МА, % 61,9+3,1 75,6±2,3*

^q а 4,9±0,08 6,3+1,0*

Ф. Р^ % 89,9+4,1 99,1+3,4*

Ф.Рд.с 2,9+0,03 3,4+0,01*

При этом нашли (табл.3) наряду с активацией ПОЛ в ТЦ, рост их коагуляционной активности, особенно спонтанной. Так как в

этом эксперименте действующий фактор - прооксидант, который изменяет свертываемость вторично [А.А.Мкртумян, 1994], можно допустить, что в связке ПОЛ-агрегация ведущий элемент - активация ПОЛ в ТЦ. Это подтверждается и тем, что степень изменения активности ТЦ меньше, чем изменения ПОЛ. Активность ТЦ и ПОЛ в них при введении антиоксидантов. В этих опытах крысам 12 дней вводили антиоксиданты (витамины А, Е, С и Р, угнетающие ПОЛ [С.Л.Галян, 1993]) или прооксидант (свинец): 1) интактный контроль (без дополнений к рациону); 2) получали антиоксидант; 3) только витамины; 4) витамины+проок-сидант. Такие же опыты проведены и с димефосфоном.

Таблица 4. Активность ПОЛ, АДФ-агрегация тромбоцитов, уровень фф. Р3 и Р4 в плазме после введения прооксиданта, антиоксидантов (витаминов), того

Показатели Контроль интактный Свинец Витамины Свинец+вита мины

ДК, А/мг 0,13+0,04 0,22+0,02* 0,09+0,02* 0,15±0,05

ТБК, ед/мг 0,51+0,02 0,78+0,04* 0,45+0,01* 0,58+0,03

Период индукции, мин/мл 50,1+3,07 43,2+2,2* 54,3+2,1 50,9+3,09

Скорость окисления, мм3/мл в мин 0,70+0,04 1,03+0,02* 0,57+0,03* 0,72+0,02

СА, % 5,5+0,21 7,8+0,22* 4,7±0,12 5,3±0,23

МА, % 61,2+3,1 75,5+2,4* 53,9+2,1* 62,8+3,0

а 4,7±0,06 6,2±1,1* 4,6+0,08 4,9+0,07

Ф. Р^ % 89,0+3,3 98,2±3,3* 83,1±3,0 91,0+2,8

Ф.РЛ с 2,8+0,02 3,5+0,02* 2,1+0,04 3,1+0,03

Из данных табл. 4 видно, что введение прооксиданта активировало ПОЛ и снизило антиоксидантную активность в ТЦ. Активировались и ТЦ: рост максимальной АДФ-агрегации, ее начальной скорости, спонтанной агрегации и высвобождения фф. Р3 и Р4.

Введение только витаминов слегка снизило интенсивность ПОЛ в ТЦ и их активность: снижение МА, тенденция к снижению СА и высвобождения ТЦ.

При одновременном введении прооксиданта и антиоксидантов не выявлено достоверных отличий и даже тенденций к сдвигам.

Следовательно, сдвиги активности ТЦ при введении прооксиданта - результат активации ПОЛ в них: блокада эффекта прооксиданта антиоксидантами предупредила сдвиги коагу-ляционной активности. Угнетение ПОЛ антиоксидантами, сопровождающееся ослаблением агрегации и ограничением реакции

высвобождения, говорит об этом же.

Димефосфон вызвал такие же сдвиги, как и витамины-антиоксиданты. Следовательно, снижение активности ТЦ после введения витаминов, сопряжено с их антиоксидантными, а не специфическими свойствами.

Активность ТЦ и ПОЛ в них при патологии. Представляло интерес изучить интенсивность ПОЛ в ТЦ, агрегацию и способность к высвобождению при патологических состояниях. Как объект исследований мы выбрали ИЗСД, атеросклеротические поражения артерий нижних конечностей и беременность, осложненную гес-тозом - состояния с изменениями ТЦ [А.А.Непаева, 1997; Ю.И.Цирук, 1998].

Активность ТЦ и ПОЛ в них при неосложненном ИЗСД. При ИЗСД, даже неосложненном, наблюдается гипероксидация липид-ного бислоя мембран ТЦ за счет активации фосфолипазы А2, снижения антиоксидантной защиты и модификации фосфолипидов мембран ТЦ [Ф.З.Меерсон, 1993; е.а., 1993]. Применение антиоксидантов ограничивает эти сдвиги в ТЦ [А.А.Непаева, 1997].

Работа выполнена в эндокринологическом отделении ГКБ N 2 и в ОКБ при консультации д.м.н. А.А.Нелаевой. Диагностику проводили по критериям ВОЗ (1985) и клинической классификации СД (ВНО эндокринологов, Дагомыс, 1991г.). Наблюдали 112 больных неосложненным ИЗСД, средний возраст - 28±0,5 лет (59 мужчин и 53 женщины). Средняя длительность заболевания - 7,9±0,5 г. В целом проявления ИЗСД соответствовали данным литературы (М.И.Балаболкин, 1994). Детальная клиническая характеристика больных - в работе А.А.Нелаевой [1997]. Все пациенты получали заместительную терапию Выявлено (табл. 5), что у больных значительно усилены ПОЛ в ТЦ, спонтанная агрегация, начальная скорость АДФ-агрегации. МА ниже, чем у доноров, высвобождение повышено. Снижение МА при использованном методе оценки (прирост светопропускания в плазме, отражающий способность ТЦ к агрегации всего объема исследуемой пробы) не противоречит тому, что Т$115ш е. а. [1992] нашли рост МА при ИЗСД. В нашем случае снижение МА не связано с уменьшением числа ТЦ (даже ее уменьшение в 2 раза не ведет к снижению АДФ-индуцируемой МА [В.Г.Соловьев, 1991; И.В.Селиванова, 1994]), в то время как на фоне экзогенной тромбинемии МА резко падает [А.Ш.Бышевский, 1996]. Поэтому снижение МА в данном случае - не признак снижения активности ТЦ. Видимо, часть ТЦ уже в

кровотоке истощила агрегационныи потенциал, т.к. в отличие от экспериментальных данных, представленных выше, здесь речь идет о длительном процессе, в ходе которого часть ТЦ уже истощена.

При ИЗСД постоянно напряжены гемокоагуляционные процессы, что ведет к появлению признаков ДВС-синдрома с хроническим течением [А.А.Нелаева, 1997]. Это подтверждается тем, что при компенсации нарушений углеводного обмена при ИЗСД МА ТЦ возрастает, приближаясь к значениям у здоровых, то же происходит и при использовании антиоксидантов [А.А.Нелаева, 1997].

Таблица 5. Активность ПОЛ, АДФ-агрегация ТЦ, уровень фф. Р3 и Р4 в

плазме у больных ИЗСД.

Показатели Контроль(здоровые Больные с ИЗСД

доноры, п=15) (п=112)

ДК, А/мг 0,15+0,02 0,42+0,03*

ТБК, ед/мг 0,58+0,08 1,29+0,04*

Период индукции, мин/мл 41,0+3,01 32,2+2,09*

Скорость окисления, ММ3/мЛ в мин 0,77+0,05 1,44±0,06*

СА, % 6,1±0,41 15,6+1,3*

МА, % 97,3+3,2 86,0+2,2*

а 5,2+0,07 7,4+0,2*

Ф. Рч % 79,0+2,2 93,9±2,0*

Ф.Рдс 2,9+0,03 4,1±0,03*

Обозначения: такие же, как в табл. 1

Активность ТЦ и ПОЛ в них при атерасклеротическом поражении артерий нижних конечностей. Выбор этой патологии связан с тем, что атеросклеротические поражения сосудов, особенно с ишемией, ведут к активации ПОЛ и изменениям, в частности, тромбоцитарного звена [Ьаггап Р. еЬ а1., 1996; О^и е1. а!., 1996].

Совместно с хирургом Тюменской ОКБ К.В.Горбатиковым изучали ТЦ при атеросклеротических нарушениях артерий нижних конечностей в предоперационном периоде и после операций аор-то-бедренного и бедренно-подколенного шунтирования при использовании в комплексе обычных лечебных мероприятий Вита-комплекса. Витакомплекс (или селмевит, протокол № 10 от 25. 09. 97 г Фармакологического государственного Комитета) -

мощный антиоксидант [А.Ш.Бышевский и др., 1995 - 1997; Ю.Ф.Удалов и др., 1997], - комбинация витаминов с минеральными веществами. Одна таблетка содержит: ретинола ацетат -0,0005, токоферола ацетат - 0,0075, тиамина бромид - 0,00075, пиридокснна гидрохлорид - 0,0025, рибофлавин - 0,001, аксорби-новая кислота - 0,035, рутин - 0,0125, никотинамид - 0,004, панто-тенат кальция - 0,0025, фопиевая кислота - 0,0005, липоевая кислота - 0,001 г; цианкобаламин - 3 мкг, а также железо двухвалентное - 0,0025, медь двухвалентная - 0,0004, кальций - 0,025, кобальт двухвалентный - 0,0005, марганец, цинк, магний и селен, двухвалентные соответственно 0,0012, 0,002, 0,025 и 0,025 г, фосфор (Р5")- 0,03 и метионин - 0,1 г.

Отбор проб крови проводили: за день до операции, через 12, 7-8 и на 14-21 сут (в день снятия кожных швов при заживлении раны первичным натяжением). Больных разделили на 2 группы (табл. 6), кроме того, исследовали кровь доноров.

Таблица 6. Распределение наблюдавшихся больных по группам

Группа сравнения - пациенты с облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей, неполучавшие Витакомплекса до и после операции 45

Основная группа - пациенты с обпитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей, получавшие Витакомплекс р,о и после операции 51

Здоровые доноры-мужчины, 40-60 лет 22

Обе группы близки по характеристикам благодаря попарному распределению больных. Больные основной группы кроме стандартной терапии получали Витакомплекс: 2 драже 2 раза в день в течение 9-12 сут со дня поступления, а с 3-х сут после операции -2 драже 1 раз в день в течение 14-16 сут (до снятия швов).

Внутри обеих групп выделено по 2 подгруппы, отличающиеся исходной хронической ишемии нижних конечностей - 2Б и 3-4 степень. Средний возраст пациентов в группе сравнения - 55,6, в основной - 52,7 г. Исследования перед операцией (табл. 7) выявили что: 1) уровень продуктов ПОЛ в ТЦ повышен у больных в большей степени при ишемии 3-4: 2) число ТЦ повышено одинаково у обеих групп, 3) МА снижена в равной степени, начальная скорость увеличена в обеих группах, но заметнее при ишемии 3-4.

Следовательно, у больных с атеросклеротическими поражениями артерий нижних конечностей изменения аналогичны обнаруженным у больных с ИЗСД: активация ПОЛ в ТЦ и их агрегэ-

ции.

Таблица 7. Характеристика ТЦ у больных с атероскперотическим поражени-_ем сосудов нижних конечностей в зависимости от степени ишемии

Показатели Доноры Аорто-подвздошное и бедренно-подколенное шунтирование

ишемия 25 (п=49) ишемия 3-4 (п=47)

ДК, А/мг липидов 0,15+0,06 0,20±0,003* 0,33+0,004**

ТБК, ед/мг липидов 0,67+0,009 0,72±0,005* 0,85±0,02**

ТЦ, тыс/мкл 271+6,5 365+11,0* 363+8,9*

МА, % 96,3+2,6 85,1+2,0* 52,2±1,7*

♦д а 5,8+0,12 6,3+0,11* 7,1+0,21**

Обозначения: * - достоверно в сравнении с донорами, ** - в сравнении

с больными при ишемии 2Б

Группа сравнения. После операции у больных с ишемией 2Б выявлено (табл. 8): 1. На 1-2 сут число ТЦ и МА упали, начальная скорость агрегации возросла; 2.На 7-8 сут число ТЦ оставалось сниженным, заметнее снизилась МА и еще больше увеличилась ее начальная скорость; З.На 14-21 сут число ТЦ восстановилось до предоперационного уровня, а МА и ее начальной скорости остались на уровне 7-8 сут; А. Уровень продуктов ПОЛ в ТЦ оставался после операции выше найденного перед операцией.

Таблица 8. ПОЛ в ТЦ и их агрегационная активность после операции у больных с атероскперотическим поражением аорто-подвздошного и бедренно-_ подколенного сегмента (ишемия 2Б)._

Показатели Больные с поражением аорто-подвздошного и бедренно-подколенного сегмента (22 человека)

до операции После операции

1-2 сут 7-8 сут 14-21 сут

ДК, А/мг липидов 0,20±0,003 0,33+0,004* 0,30±0,003* 0,27±0,002*

ТБК, ед/мг липидов 0,72+0,005 0,8510,02* 0,86±0,03* 0,79±0,04*

ТЦ, тыс/мкл 365+11,0 270±5,9* 299±12,3* 359+10,1"

МА, % 85,1+2,0 81,0+1,4* 73,2+1,5*" 72,1+1,6*

а 6,8+0,11 7,2+0,12* 7,5+0,1 Г" 7,4+0,13*

Обозначения: * достоверное отличие между показателями колонки 2-й и 1-й, " - между колонками 3-й и 2-й, 4-й и 2-й.

Таблица 9. ПОЛ в ГЦ и их агрегационная активность после операции у больных с атеросклеротическим поражением аорто-подвздошного и бедренно-_ подколенного сегмента (ишемия 3-4)._

Показатели Больные с поражением аорто-подвздошного и бедренно-подколенного сегмента (23 человека)

до операции после операции через:

1-2 сут 7-8 сут 14-21 сут

ДК, А/мг ли-пидов 0,33+0,004 0,59±0,005* 0,64±0,006* 0,59+0,002*

ТБК, ед/мг липидов 0,85±0,02 0,99+0,03* 1,09±0,007* 0,90±0,05*

ТЦ, тыс/мкл 363±8,9 214+4,8* 231±17,1* 333+10,1"

МА, % 82,2±1,7 72,0+1,5* 69,3±1,8* 71,0+1,5*

а 7,1±0,21 7,9+0,21* 8,1+0,22* 8,1+0,12*

Обозначения: как к табл. 8

У больных с ишемией 3-4 изменения существеннее (табл.9): ПОЛ протекает интенсивнее, число ТЦ упало в 1-8 сут заметнее, хотя к выписке вернулось к предоперационному уровню. Значительнее упала МА и начальная скорость агрегации.

Основная особенность изменений с интересующих нас позиций: с увеличением степени активации ПОЛ растет и степень изменений, характеризующих агрегационную активность ТЦ. От глубины ишемии зависит и степень интенсификации ПОЛ.

Группа основная (получали Витакомплекс). После оперативного вмешательства у больных с ишемией 2Б наблюдали следующее (табл. 10).

Таблица 10. ПОЛ в ТЦ и их агрегационная активность после операции у больных с атеросклеротическим поражением аорто-подвздошного и бед-ренно-подколенного сегмента (ишемия 2Б), получавших Витакомплекс.

Показатели Больные с поражением аорто-подвздошного и бедренно-подколенного сегмента (27 человек)

до операции После операции через:

1-2 сут 7-8 сут 14-21 сут

ДК, А/мг липидов 0,18+0,002* 0,20±0,004* 0,16±0,003" 0,11+0,01*"

ТБК, ед/мг липидов 0,73+0,005* 0,76+0,02* 0,36+0,01*" 0,31+0,01*"

ТЦ, тыс/мкл 345+12,0* 300±5,5 368+5,5" 381±11,7

МА, % 86,2+1,9* 81,0+1,4*" 82,0+1,4* 87,2+1,8"

а 6,1±0,12* 6,7+0,12*" 6,3+0,12* 5,8+0,11

Обозначения: как к табл. 8.

На 1-2 сут после операции нет подъема концентрации продуктов ПОЛ в ТЦ, позднее их уровень снижался. Число ТЦ не изменялось, а МА снизилась в 1-8 сут в меньшей степени, нем у группы сравнения, и нормализовалась к выписке. Начальная скорость агрегации незначительно удлиняется в 1-2 сут, возвращаясь к исходному значению к 7-8 сут. Следовательно, дополнение терапии Витакомплексом ограничило интенсификацию ПОЛ в первые дни после операции и подавило ПОЛ в последующие.

У больных с ишемией 3-4 степени, получавших Витакомплекс, изменения сходны с рассмотренными в табл. 10. Отличия в том, что на 1-2 сут имелось небольшое повышение уровня ДК, однако, в последующем произошло их снижение, как и при ишемии 2Б.

Таким образом, Витакомплекс, ограничив в первые дни и даже снизив интенсивность ПОЛ в последующем ограничивает изменений агрегации ТЦ. Это заметнее при ишемии 2Б, когда интенсивность ПОЛ в ТЦ уже в исходных условиях менее значительна.

Полученные данные - еще один признак связи ПОЛ в ТЦ с их способностью к агрегации: 1) перед операцией интенсивность ПОЛ выше при ишемии 3-4 степени, а после операции ПОЛ растет заметнее, чем при ишемии 2Б, антиоксидант ограничивает активацию ПОЛ после операции и снижает с 7-8 дня; 2) однонаправ-лено с ПОЛ меняются показатели агрегации, что еще заметнее при сопоставлении с данными у больных с 3-4 степенью ишемии. Это видно при сопоставлении интенсивных величин (табл. 11).

Таблица 11. Отклонения (в % от исходных) показателей после операции аор-

Показатели После операции

1-2 сут 7-8 сут 14-21 сут

ДК. +78,8±5,5*" +93,9±6,6*" +78,8+5,1*"

+ 18,1±1,1*" -66,7±4,1*" -63,6+3,7*"

ТБК +83,7+0, Г" +28,0+2,0*" +28,2+1,7

-18,6±1,2*" -65,3+3,7*" -66,7+5,1*"*

К-во ТЦ, -41,0±1,0*" -18,7±3,2*" . -7,2+1,0" ^ 0,0

-28,6+2,1*" 8,5+1,7

МА -12,0±1,2*" -15,7±1,0* -13,6±1,2*"

-5,1+0,9" + 1,2+0,3" +8,9+1,3"

1д а + 11,3±1,1* + 14,0±2,2*" +14,0+1,7*"

+ 10,3+1,4* -4,4+0,3" -13,2+1,1"

Обозначения: 1. Верхняя строка - стандартная терапия, нижняя - то же + Витакомплекс. 2. * - достоверное отличие от исходного уровня, " - то же при назначении Витакомплекса относительно данных у неполучавших его. Знаки + или " перед цифрой - рост или уменьшение показателя соответственно.

Заключая предварительный анализ данных, полученных при исследовании больных с атеросклеротическими поражениями, отметим основное: 1) активации ПОЛ в ТЦ у больных сопутствует рост начальной скорости агрегации при снижении МА; 2) после операции нарастает активация ПОЛ и усиливаются сдвиги, характеризующие состояние ТЦ; 3) при назначении антиоксиданта ослабляются сдвиги ПОЛ и изменения агрегационных свойств ТЦ.

Активность ТЦ и ПОЛ в ник при беременности, осложненной гестозом. Эта часть работы проведена в акушерско-гинеко-логической клинике ТГМА на базе ГКБ № 3 г. Тюмени при консультации зав. каф. акушерства и гинекологии ТГМА проф. В.А.Поляковой и участии асс. кафедры к.м.н Т.П.Шевлюковой.

Контрольная группа - беременные, поступающие в роддом в экстренном порядке в связи с началом родовой деятельности. Их обследование в конце беременности проводили в женской консультации. Беременные основной группы поступали в отделение патологии беременных №1 по направлению женской консультации для выявления осложнений беременности, оценки тяжести и лечения, на дородовую госпитализацию и для решения вопроса о методе родоразрешения и подготовки к родам.

В стационаре проводили: сбор и анализ анамнестических данных, осмотр, оценку общего состояния и объективное обследование органов и систем; осмотр шейки матки в зеркалах; влагалищное исследование; наружное акушерское исследование с анатомической оценкой таза, консультацию окулиста и терапевта.

Агрегацию ТЦ и ПОЛ в них определяли у 135 женщин - 20 здоровых небеременных (2-я фаза менструального цикла, средний возраст - 26±0,5 лет), у 115 беременных (от 15 до 41 г -группа доноров). Беременные женщины разделены на 2 группы (табл. 12).

Таблица 12. Распределение обследованных женщин по группам

Группы Количество

Доноры во II фазе менструального цикла 20

Здоровые беременные (39-40 нед.) 30

Беременные с гестозом легкой степени (обычное печение) 50

Беременные с гестозом легкой степени (+ Витакомплекс) 35

У здоровых беременных перед родами число ТЦ, агрегация и интенсивность ПОЛ перед родами не отличались от найденных у доноров, хотя, как это известно, [В.А.Полякова, 1994], повышенная готовность к свертыванию у них выявляется. Через сутки после родов и позднее число ТЦ у них не изменилось (табл. 13), МА

повысилась к 4-7 сут, начальная скорость агрегации была несколько повышенной весь послеродовый период, а активность ПОЛ в ТЦ нарастала. Это согласуется с данными, полученными в экспериментах и в наблюдениях за больными с атероскле-ротическими поражениями артерий.

Таблица 13. АДФ-агрегация и ПОЛ в ТЦ после родов у женщин с неос-_пожненной беременностью_

Показатели Перед родами 1 сут 2-3 сут 4-7 сут

ТЦ мыс/мкп) 271±)0,1 281+27,0 254±15,0 252±36,0

МА, % 80,4+2,2 88,1±11,8 79,5±5,6 102,0+7,7*

¡д а 5,6+0,1 6,3±0,2 6,9+0,4* 6,8+0,2*

ДК, А/мг липидов 0,21+0,003 0,33+0,004* 0,35+0,002* 0,53±0,003*

ТБК, ед/мг липидов 0,36+0,02 0,47+0,04* 0,42+0,03* 0,51+0,04*

Примечания: знак * - достоверное отличие от исходного.

Беременные с гестозом разделены на 2 группы: 50 - обычное лечение, 35 - еще и Витакомплекс.

Таблица 14. Состояние ТЦ после родоразрешения у беременных с гестозом _на фоне приема Витакомплекса и без него._

Показатели Перед родами 1 сут 2-3 сут 4-7 сут

ТЦ 271+10,1 381+27,0 254115,0 252+36,0

тыс/мкл 265+ 39,0 303± 24,0 333124,0 258+24

246 ±17,0 262± 12,6 281+21,9 363+22,3*+

МА, % 80,4+2,2 88,1 + 11,8 79,515,6 102,0+7,7*

79,8+ 9,3 75,0± 9,3 79,8+ 6,8 89,2110,4*

61,0+ 4,2*+ 52,0+5,6* 51,7+6,5* 71,817,7*

tg а 5,6+0,2 6,3+1,4" 6,710,6** 6,210,8

6,2+1,0 5,2+0,6* 6,110,7* 8,1+1,2*

5,0+0,8 4,5+0,6*+ 4,5+1,0*+ 6,511,2+

ДК, А/мг 0,21±0,003 0,33+0,004* 0,3510,01* 0,5310,03"

ЛИПИДОВ 0.31+0,02* 0,57±0,009* 0,63+0,05* 0,5910,04*

0,25+0,02+ 0,19±0,05*+ 0,1410,02*+ 0,1610,01* +

ТБК, ед/мг 0,36+0,02 г 0,4710,04* 0,42+0,03* 0,5110,04"

липидов 0,49+0,10* 0,5710,05* 0,05510,04* 0,61+0,03*

0,2910,06+ 0,21+0,02*+ 0,17+0,02*+ 0,16+0,02*+

Примечания: 1) 1-я строка - здоровые беременные; 2-я - беременные с гестозом (обычное лечение); 3-я - беременные с гестозом, получавшие Витакомплекс; 2) сравнение проводили со здоровыми беременными (знак*), с "невитаминизированными" - знак +.; сравнении с исходным - знак * (только для здоровых беременных)

При гестозе также не наблюдали изменения числа ТЦ, но выявили рост МА к концу наблюдений и ее ускорение на 2-7 сут (табл. 14).

Агрегация ТЦ у беременных с гестозом на фоне Витаком-плекса после родов такая же, как у беременных без осложнений: снижение МА и начальной скорости агрегации - признаки активации ТЦ. Существенно, что ПОЛ интенсифицировано у больных с гестозом значительнее, чем у здоровых беременных. На фоне Витакомплекса прироста содержания продуктов ПОЛ в ТЦ не наблюдали, а после родов, когда продолжительность введения ан-тиоксидантов была достаточной, наблюдали спад активности ПОЛ в ТЦ.

Таким образом, и в этой части наблюдений выявляется зависимость между активацией ПОЛ и агрегацией ТЦ. В отличие от больных с атеросклеротическими поражениями и больных с ИЗСД (хронические процессы), у беременных росту интенсивности ПОЛ соответствуют согласованные изменения агрегации ТЦ - однонаправленное изменение МА и ее начальной скорости. Напомним, что у больных с атеросклеротическими поражениями и у больных с ИЗСД активации ПОЛ соответствовал рост начальной скорости агрегации и снижение МА. Мы рассматривали это несоответствие, как следствие истощения части ТЦ из-за непрерывно повышенной готовности к агрегации. У беременных этой парадоксальной реакции не было, т.к. процесс отличается малой продолжительностью.

В целом наблюдения при трех различных состояниях, моментом, объединяющим которые, является напряжение гемостаза, обнаружено, что одновременно с интенсификацией ПОЛ в ТЦ всегда растет агрегационная активность - рост начальной скорости образования агрегатов. Если же патологическое состояние длится продолжительно, наряду с повышением способности ТЦ к склеиванию, общее число ТЦ, участвующих в агрегации может быть уменьшено вследствие перехода в состояние рефрактерности. Это не противоречит утверждению о зависимости агрегации ТЦ от ПОЛ в них.

Выше показано, что гипертромбинемия сопровождается активацией ПОЛ и ростом агрегационной активности ТЦ. Однако тромбин ускоряет ПОЛ и через нарушение микроциркуляции (это ведет к гипоксии и, следовательно, к активации ПОЛ), и через ускорение агрегации (как агонист этого процесса). Следовательно, эксперименты с гипертромбинемией не позволяют категорично сказать, что первично - активация коагуляционных функций ТЦ или

активация в них ПОЛ. Однако наблюдения, выявившие отставание роста агрегации от прироста интенсивности ПОЛ, а также то, что прооксидант активирует ТЦ, а антиоксиданты угнетают, позволяют поставить на первое место интенсификацию ПОЛ и рассматривать рост агрегационной активности как следствие.

Чтобы опровергнуть или подтвердить предположение, провели опыты с целью выявить, влияет ли присутствие продуктов ПОЛ в среде пребывания ТЦ на их агрегацию и реакцию высвобождения.

Связь ПОЛ в ТЦ с их агрегацией. Сопоставляя начальную скорость АДФ-агрегации с содержанием продуктов ПОЛ в ТЦ, мы нашли (рис. 3} прямую зависимость начальной скорости от концентрации ДК: с ростом концентрации растет начальная скорость.

Зависимость начальной скорости от концентрации ТБК-продуктов менее выразительна (рис. 4): при разных концентрациях ТБК-продуктов ♦д а растет медленно. Следовательно, скорость определяет в первую очередь концентрация ДК.

Рис. 4. Начальная скорость агрегации в зависимости от концентрации ТБК-активных продуктов

Это вынудило нас экспериментально изучить зависимость агрегации и высвобождения ТЦ от концентрации в окружении первичных продуктов ПОЛ без учета концентрацию вторичных продуктов, освободиться от которых не представлялось возможным.

Влияние бесклеточной плазмы крыс с разным содержанием ДК на начальную спорость АДФ-индуцированной агрегации ТЦ. Вводя крысам разные дозы про- или антиоксиданта, получили бес-тромбоцитные плазмы с разной концентрацией продуктов ПОЛ и исследовали ее влияние на агрегацию ТЦ, преинкубируя с субстратной плазмой. Как видно из табл. 14, содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ (ДК и ТБК) падает при введении анти-оксидантов и растет - при введении прооксиданта пропорционально дозе. Интенсивность сдвига начальной скорости агрегации ТЦ растет с увеличением концентрации продуктов ПОЛ.

Таблица 14. Влияние бесклеточной плазмы крыс с разным содержанием продуктов ПОЛ на начальную скорость АДФ-агрегации ТЦ субстратной

плазмы. _

Бесклеточная плазма крыс, получавших: ДК, А/мг липида ТБК, ед/мг липида 1д а

интактный контроль 0,080+0,002 0,22+0,009 5,5+0,07

димефосфон, мг/100 г: 100 200 300

0,051±0.0003* 0,12+0,004* 4,9±0,05*

0,044+0,0005* 0,09+0,005* 4,2±0,03*

0,031+0,002* 0,07+0,003* 3,9±0,03*

Ацетат свинца, мг/100 г: 5 10

1,022+0,0032* 0,63+0,012* 6,3+0,04*

1,0341+0,0033* 0,96±0,010* 7,2+0,05*

Далее, получили плазму с высоким содержанием продуктов ПОЛ, повысили его (концентрирование на сефадексе О-Ю), приготовили разведения, каждое из которых экспонировали с субстратной плазмой и определяли агрегацию ТЦ.

10 ч

5 -' • "

О -1-1-1-1

0,49 0,77 1,02 1,54 3,08

Рис. 5. Зависимость начальной скорости агрегации ТЦ от концентрации продуктов ПОЛ. Абсцисса - концентрация ДК: 0,0, 3,08, далее - 1,54, 1,02, 0,77 и 0,55 А/мг липида. Ордината - начальная скорость агрегации а).

На рис. 5 видно, что между концентрацией продуктов ПОЛ и начальной скоростью агрегации ТЦ есть прямая зависимость, близкая к линейной на протяжении всех изученных концентраций.

Изменения уровня высвобождаемых фф. Р3, Р4 напоминает изменения а агрегации (рис. 15): растет концентрация ДК, преин-кубируемых с ТЦ - усиливается высвобождение факторов.

Таким образом, есть пропорциональность между концентрацией ДК и активацией ТЦ: выше концентрация их в среде, окружающей ТЦ, - выше активность ТЦ. Изменениям агрегации во всех описанных выше опытах на животных, как и в последнем, сопутствуют однозначные по биологическому смыслу изменения интенсивности реакции высвобождения. Итак, предположение о реализации эффекта про- или антиоксидантов на агрегацию ТЦ через изменение уровня продуктов ПОЛ в среде, их окружающей, подтверждается.

Таблица 15. Концентрация свободных фф. Р3 и Р^ после АДФ-агрегации тромбоцитов, экспонированных с разными концентрациями продуктов ПОЛ (п=5^__

Концентрация ДК, А/мг лилида Концентрация высвободившихся тром-боцитарных факторов:

Р3., %

0,0 (контроль) 90,1+2,8 3,1+0,02

0,49 87,4+2,4 2,9+0,04

0,77 96,9+3,1 3,6+0,03

1,02 104+3,2* 3,9±0,03*

1,54 119+3,6* 4,2+0,04*

3,08 126+4,2* 4,7±0,04*

Примечание: * достоверные отличия от контрольных значений

Следовательно, ТЦ - звено цепи, соединяющей свободнора-дикальные процессы и гемокоагуляцию. Их роль заключается е том, что эти клетки реагируют на изменения концентрации продуктов ПОЛ в них и в окружении усилением своих гемостатиче-ских функций (агрегация и реакция высвобождения прокоагулян-тов). Согласно недавно полученным данным [А.А.Вакулин, 1998, И.А.Дементьева, 1998; И.В.Ральченко, 1998], ТЦ, возможно, являются звеном, соединяющим в связке «ПОЛ-гемостаз» эффекть эритроцитов и некоторых популяций лейкоцитов - клеток, способных интенсифицировать агрегацию и реакцию высвобождения TL через выделяемые в среду продукты ПОЛ. Велика вероятное^ того, что позитивный эффект антиоксидантов в предупреждении ^ ограничении тромбогеморрагий при оперативных вмешательства; [В.М.Шафер, 1989; В.А.Полякова, 1995; Т.П.Шевлюкова, 1996

реализуется, наряду с другими путями, еще и через ограничение активности тромбоцитарного компонента гемостаза.

6. ВЫВОДЫ

1. При экспериментальной гипертромбинемии ¡n vivo в тромбоцитах растет содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ, их спонтанная, максимальная АДФ-индуцированная агрегация, ее начальная скорость и высвобождение фф. Р3 и Р4.

2. Введение прооксиданта животным увеличивает содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ в тромбоцитах, их спонтанную, АДФ-индуцируемую агрегацию, ее начальную скорость и высвобождение фф. Р3 и Р4. При введении антиоксидантов животным уровень продуктов ПОЛ в тромбоцитах, их агрегационная активность, а также высвобождение фф. Р3 и Р4 снижаются.

3. У больных инсулинзависимым сахарным диабетом, у больных с атеросклеротическими нарушениями артерий нижних конечностей и беременных с гестозом (состояния, характеризующиеся гиперкоагулемией) повышено содержание продуктов ПОЛ в тромбоцитах и начальная скорость их агрегации.

4. Интенсивность ПОЛ в тромбоцитах и их активация у больных инсулинзависимым сахарным диабетом ограничиваются введением в комплекс терапевтических мероприятий антиоксиданта.

5. У больных с атеросклеротическими нарушениями артерий нижних конечностей после операции шунтирования сосудов и у беременных с гестозом после родоразрешения интенсивность ПОЛ в тромбоцитах и начальная скорость их агрегации нарастают, назначение антиоксиданта ограничивает эти сдвиги.

6. Существует прямая зависимость между концентрацией продуктов ПОЛ в тромбоцитах или в их окружении с одной стороны, их агрегантной активностью и способностью к высвобождению фф. Р3 и Р4 - с другой.

Полученные данные дополнительно обосновывают применение антиоксидантов для ограничения нарушений гемостаза при ги-перкоагулемиях, характеризующихся гипероксидацией:

1) тромбоциты - важное звено в цепи процессов, обеспечивающих взаимозависимость между свободнорадикальным окислением и состоянием гемостаза: активация ПОЛ в организме активация ПОЛ и накопление продуктов пероксидации в тромбоцитах -> рост агрегантной активности тромбоцитов и способности к высвобождению фф. Р3 и Р4, -» ускорение тромбиногенеза -> активация ПОЛ и т.д.

2) согласно такому взгляду природные антиоксиданты могут рассматриваться как доступное физиологическое средство ограничения гемокоагуляционных сдвигов, особенно при одновременном использовании с антикоагулянтами, которые ограничивают процессы в рассмотренной выше цепи событий на уровне тром-биногенеза.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Prevention of the syndrome of DIC with vitamins A, E, С and P // Clin Hemoreology. - 1995. - 15. - 33. - 586-586 (соавт. А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, И.А.Зарубина и др.)

2. Витамины А, Е, С и Р в профилактике ДВС-синдрома // Матер. Международного симпозиума «Биологически активные добавки к пище - нутрицевтики - и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространенных заболеваниях». -Тюмень, 1995. С. 33-35.

3. Гемостаз у лиц пожилого возраста с атеросклеротически-ми нарушениями преимущественное поражение артерий нижних конечностей) //В сб. Пожилой человек. Качество жизни. - Тюмень, 1998.- С. 18.

4. Влияние Витакомплекса на гемостатические сдвиги у лиц пожилого возраста после реконструктивной шунтирующей операции на сосудах нижних конечностей // Там же. - С. 22.

5. Витамины-антиоксиданты в лечении сахарного диабета // Матер. 5 Российской конф. «Биоантиоксидант. М., -1998. - С.

6. Профилактика гиперкоагулемии потребления в послеоперационном периоде, интраоперационных кровотечений, ранних тромбозов шунтов у больных облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей // Методич. указания для врачей. Минздрав РФ, ТГМА, ОКБ. - 1998. - 24 с (соавт. Горба-тиков К.В., Бышевский А.Ш., Нелаев B.C. и др.)

7. Применение комплексного антиоксиданта Селмевит в лечении больных с атеросклеротическим поражением артерий нижних конечностей до и после операции аорто-бедренного шунтирования // Методич. указания для врачей. Минздрав РФ, ТГМА, ОКБ. - 1998. - С. 23 (соавт. Горбатиков К.В., Бышевский А.Ш., Нелаев B.C. и др.).

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АВР активированное время свертывания рекальцифицированной

плазмы

ДК диеновые коньюгаты

ДВС диссеминированное внутрисосудистое свертывание

ИЗСД инсулинзависимый сахарный диабет

МДА малоновый диальдегид

МА максимальная агрегация

Н.СК. начальная скорость агрегации

ПОЛ перекисное окисление липидов

СА спонтанная агрегация

СД сахарный диабет

ТБК тиобарбитуровая кислота

ТЦ тромбоциты

ф. фактор

фф. факторы

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зарубина, Ирина Анатольевна

I. Введение

2.1. Перекисное окисление липидов

2.2. Гиперкоагулемия и ПОЛ I

2.3. Тромбоциты и процессы ПОЛ 2.

2>„ Материалы ш методы исследований

4о Результаты собственных исследований

4.1. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при гипертром-бинемии

4.1.1. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при внутривенном введлении тромбопластина

4.1.2. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при внутривенном введении тромбина

4.1.3. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при эндогенной тромбинемии

4.2. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при акти вации или угнетении процессов ПОЛ

4.2.1. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при активации или угнетении процессов ПОЛ

4.2.2. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при введении антиоксидантов

4.3. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при патологии

4.3.1. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при неос-ложненном инсулинзависимом сахарном диабете

4.3.2. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при ате-росклеротическом поражении артерий нижних конечностей

4.3.3. Активность тромбоцитов и ПОЛ в них при беременности, осложненной гестозом

4.4. Влияние первичных и вторичных продуктов ПОЛ на агрегацию и реакцию высвобождения тромбоцитов 74 4.4.1. Связь ПОЛ в тромбоцитах с агрегационной активностью по данным вышепредставленных наблюдений 74 результатов и заключение

Введение Диссертация по биологии, на тему "Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов"

Актуальность проблемы. Роль свободнорадикального окисления липидов в развитии многих заболеваний засвидетельствована в ряде работ последних лет [О.А.Азизова и др., 1996; Д.В.Морозов и др., 1996; Е.П. Шувалова и др., 1996; С.Л.Плавинский, А.С.Кузнецов, 1997; Р.М.Сафаров и др. 1997]. Связано это в первую очередь с его значением в гомеостазе вообще [Л.К.Обухова, Н.М.Эмануэль, 1983]. Среди многочисленных заболеваний, для которых характерна интенсификация свободнорадикальных процессов, особый интерес представляют те, при которых одновременно наблюдается активация ПОЛ, как следствие ускоренного образования свободных радикалов, и рост свертываемости крови. Такое сочетание может приводить к развитию ДВС [А.Ш.Бышевский и др., 1995; 1996; Zhen е.а., 1996].

Синхронно обнаруживаемые гиперкоагуляция и активация ПОЛ у больных [Л.В.Шаталина и др., 1996; В.З.Ланкин, 1997] и экспериментальных животных, сдерживание антиоксидантами ге-мокоагуляционных сдвигов при одновременно ускоренном процессе ПОЛ [А.А.Гарганеева и др., 1997; И.Ш.Весельский, A.B.Сонник, 1997] свидетельствует о необходимости детального изучения механизмов взаимосвязи между свободнорадикальными процессами и гемокоагуляцией. Существование такой связи уже не вызывает сомнений, начиная с работ В.П.Мищенко [1981] и ряда последующих [Э.С.Габриелян, С.Э.Акопов, 1985; А.Ш.Бышевский и др., 1991, 1992, С.Л.Галян, 1993; В.Г.Соловьев, 1997]. Механизмы же реализации связи затронуты в единичных сообщениях [В.П.Мищенко, 1981; Borzak е.а. 1998]. Тем не менее, есть сведения о модификации мембранных липидов под влиянием свободнорадикального окисления, о роли фосфолипидов в формировании тромбопластической активности клеток и тканей [В.Г.Соловьев, 1997; И.В.Раль-ченко, 1998; 2\уаа1 е.а., 1980].

Так как независимо от триггерного механизма активация свертывания всегда включает тромбинообразование [Б.А.Кудряшов, 1975; Д.М.Зубаиров, 1978], вполне вероятно, что связь между повышением свертывающей активности крови и интенсификацией ПОЛ может реализоваться через изменения уровня тромбина до степени гипертромбинемии [А.Ш.Бышевский, 1996; В.Г.Соловьев, 1997]. В подтверждение такого предположения исследовали механизм влияния тромбинемии на ПОЛ некоторых клеток крови, как образований, активно участвующих в гемостазе [Б.И.Кузник и др., 1989; А.Ш.Бышевский и др., 1996] и реагирующих на тромбин активацией процессов ПОЛ [С.Н.Ельдецова, 1990; И.В.Селиванова, 1994]. Наиболее активно реагирующие на тромбин клетки - тромбоциты, которые располагают специализированными рецепторами к этому белку [Э.С.Габриелян, С.Э.Акопов, 1985; ЛагшеБоп е.а.,1980] и имеют системы, продуцирующие эндоперекиси простагландинов феББ, 1989].

В нашей лаборатории, начиная с 80 гг. изучается связь между ПОЛ и гемостазом. Результаты серии экспериментальных работ позволили сформулировать представление о существовании положительной обратной связи между системой, обеспечивающей ПОЛ, и системой тромбинообразования. В предельно кратком виде это представление выражается схемой «тромбинемия —» активация ПОЛ» и «активация ПОЛ -> тромбинемия» [А.Ш.Бышевский и др., 1989, 1992; С.Л.Галян и др. 1990; С.Н.Ельдецова, 1990; И.В.Селиванова, 1994]. Представление, основанное на экспериментально полученных фактах, получило подтверждение-и в клинических исследованиях [С.Л.Галян, 1993; В.А.Полякова, 1994; Т.П.Шевлюко-ва, 1996]. Есть экспериментальные данные, позволяющие допускать, что тромбоциты - одно из важных звеньев связи «тром-бинемия-ПОЛ» [И.В.Селиванова, 1994; В.Г.Соловьев, 1997]. Вместе с тем, механизмы участия тромбоцитов в обеспечении этой связи не изучены, есть лишь основания (ориентируясь на сведения о роли тромбоцитов в гемостазе и их роли в продукции эндоперокси-дов) считать, что эти клетки могут под действием тромбина высвобождать факторы плазмокоагуляции, активирующие тромбиногенез - фф. Р3 и Р4. [Д.М.Зубаиров, 1978; З.С.Баркаган, 1988; А.Ш.Бы-шевский и др., 1990].

На основании сказанного и принимая во внимание практическую значимость сведений о механизмах связи между свободнора-дикальными процессами и гемостазом, мы сочли целесообразным предпринять исследования для уточнения роли важного компонента гемостаза - тромбоцитов в обеспечении двусторонней зависимости «тромбинемия - ПОЛ».

Цель работы - установить, существует ли зависимость между перекисным окислением липидов в тромбоцитах, их агрегантной активностью и способностью высвобождать факторы свертывания.

Задачи исследования.

1. Экспериментально изучить состояние ПОЛ при экзогенной и эндогенной гипертромбинемии в тромбоцитах, как воздействии, повышающем агрегационные свойства этих клеток;

2. Изучить экспериментально агрегационные свойства тромбоцитов при активации ПОЛ;

3. Изучить экспериментально агрегационные свойства тромбоцитов при торможении ПОЛ;

4. Изучить агрегационную активность тромбоцитов и интенсивность ПОЛ в них при некоторых заболеваниях, характеризующихся ускорением свободнорадикальных процессов и активацией свертывания крови

5. Изучить экспериментально влияние уровня продуктов ПОЛ в плазме на агрегационную активность тромбоцитов.

Научная новизна.

Впервые показано, что гипертромбинемия, вызываемая введением тромбопластина, усиливающего генерацию тромбина, или введением собственно тромбина в кровоток вызывает активацию ПОЛ в тромбоцитах (рост содержания первичных и вторичных продуктов пероксидации), и снижение антиоксидантного потенциала (укорочение периода индукции и рост скорости окисления). Установлено, что сдвиги интенсивности ПОЛ в тромбоцитах сопровождаются активацией их агрегантных свойств и способности к высвобождению факторов Р3 и Р4.

Впервые установлено, что введение в организм экспериментальных животных прооксиданта повышает интенсивность ПОЛ в тромбоцитах, ускоряет агрегацию и высвобождение фф. Р3 и Р4, а введение в организм животных антиоксидантов ограничивает интенсивность ПОЛ в тромбоцитах, снижает их агрегационную активность и способность к высвобождению фф. Р3 и Р4.

Впервые показано, что при заболеваниях, характеризующихся активацией ПОЛ и свертываемости крови (инсулинзависимый сахарный диабет /ИЗСД/), атеросклеротические поражения артериальных сосудов, гестоз), повышено содержание продуктов пероксидации в тромбоцитах и их способность к агрегации.

Впервые выявлена прямая зависимость (близкая к линейной) между интенсивностью прироста продуктов ПОЛ в тромбоцитах и приростом их агрегационной активности, а также зависимость между концентрацией продуктов пероксидации в окружении тромбоцитов и их агрегационной и «высвобождающей» активностью.

Практическая ценность работы. Материалы исследований использованы при разработке методических рекомендаций по применению комплексного антиоксиданта (препарат селмевит или Вита-комплекс) в лечении больных с атеросклеротическими поражениями артерий нижних конечностей в период подготовки и после операций аорто-бедренного и аорто-подколенного шунтирования артерий - методические рекомендации по применению комплексного антиоксиданта «Селмевит» в лечении больных с атеросклеротическим поражением артерий нижних конечностей до и после операции ар-териовенозного шунтирования. Внедрены в ОКБ и Облонкодиспан-сере. Результаты работы использованы при написании монографии «Тромбоциты» (А.Ш.Бышевский и др., Тюмень, 1996), а также при составлении инструкции по клиническому испытанию Витаком-плекса к заявке в Фармакологический Комитет МЗ и МП РФ (препарат под названием Селмевит утвержден для медицинского применения - «Протокол № 10 Фармакологического государственного комитета от 10 сентября 1997 г»).

Апробация и публикация. Основные положения диссертации доложены на 1) Международном симпозиуме «Биологически активные добавки к пище - нутрицевтики - и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространенных заболеваниях». Тюмень, 1995; 2) Международном симпозиуме «Медицина и охрана здоровья». Тюмень, 1996, 1997 гг, 3) 9-й Европейской конференции по гемореологии. Сиена, 1995, 4) Конф. Объединения биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири «Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии». Уфа, 1998.

По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 132.страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания использованных приемов и методов исследования,

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Зарубина, Ирина Анатольевна

6. ВЫВОДЫ

1. При экспериментальной гипертромбинемии in vivo в тромбоцитах растет содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ, их спонтанная, максимальная АДФ-индуцированная агрегация и ее начальная скорость, а также высвобождение фф. Р3 и Р4.

- 108

6. Существует прямая, близкая к линейной, зависимость между содержанием продуктов ПОЛ в тромбоцитах и их окружении с одной стороны, их агрегантной активностью, а также способностью к высвобождению фф. Р3 и Р4 - с другой.

Полученные данные - дополнительное обоснование к применению антиоксидантов для ограничения нарушений гемостаза при ги-перкоагулемиях, характеризующихся гипероксидацией:

1) тромбоциты - важное звено в цепи процессов, обеспечивающих взаимозависимость между свободнорадикальным окислением И состоянием гемостаза: активация ПОЛ в организме -> активация

ПОЛ и накопление продуктов пероксидации в тромбоцитах -» рост агрегантной активности тромбоцитов и способности к высвобождению фф. Рз и Р4, ускорение тромбиногенеза активация ПОЛ и т.д.

2) согласно такому взгляду природные антиоксиданты могут рассматриваться как физиологическое доступное средство ограничения гемокоагуляционных сдвигов, особенно при одновременном использовании с антикоагулянтами, которые ограничивают процессы в рассмотренной выше цепи событий на уровне тромбиногенеза.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Прямые и косвенные признаки существования двусторонней " связи между ПОЛ и гемостазом [В.П.Мищенко, 1981; А.Ш.Бышевский и др., 1996; 2\уаа1 е.а., 1980], данные о свойстве тромбоцитов реагировать на тромбинемию активацией ПОЛ в этих клетках [В.П.Мищенко, 1981; Воггак е.а.,, 1998], сведения о тромбоцитах, как клетках, имеющих мощную систему синтеза эндопе-роксидов [Э.С.Габриелян, С.Э. Акопов, 1985; С.Н.Ельдецова, 1990; 2Ьеп е.а., 1996] актуализируют изучение зависимости между состоянием ПОЛ в тромбоцитах и их агрегационной активностью. Этот вид активности полифункциональных клеток, какими являются тромбоциты [Н.Н.Петрищев, 1994], - определяющий момент их участия в гемостазе, кроме того, этот вид активности сопряжен со способностью тромбоцитов к реакции высвобождения, в ходе которой в плазме крови растет уровень компонентов, участвующих в коагуляционном гемостазе - фф. Р3, Р4 и другие [Ж.Фермилен, М.Ферстрате, 1984, 1986; В.П.Балуда и др. 1995].

Вышесказанное обосновало необходимость исследований, посвященных изучению зависимости между ПОЛ в тромбоцитах, их агрегантной активностью и способностью высвобождать важнейшие факторы свертывания.

Для достижения цели мы экспериментально изучали ПОЛ в тромбоцитах при воздействиях, повышающих их агрегацию и реакцию высвобождения, воздействиях, активирующих и угнетающих ПОЛ, контролируя состояние ПОЛ в тромбоцитах, их агрегацию и способность к высвобождению прокоагулянтов. Кроме того изучали ПОЛ в тромбоцитах и их активность при некоторых заболеваниях, характеризующихся ускорением свободнорадикальных процессов и активацией свертывания крови.

В заключение изучили экспериментально зависимость агре-гационной активности тромбоцитов и их способности к высвобождению от состояния ПОЛ в окружении клеток.

Представлялось наиболее целесообразным (согласно цели исследований) в первую очередь изучить состояние ПОЛ в тромбоцитах и их активность при воздействиях, несомненно активирующих свертывание.

Введение животным тромбопластина - активатора тромбино-образования по внешнему механизму [Д.М.Зубаиров, 1978; А.Ш.Бышевский и др., 1993] - приводило к избыточному накоплению продуктов ПОЛ в тромбоцитах, одновременно удлинялся период индукции и увеличивалась скорость окисления. Все это -признаки интенсификации процессов ПОЛ в клетках со снижением антиоксидантного потенциала. Одновременно выявлялось усиление агрегации и реакции высвобождения.

Решить, какое из названных явлений (активация ПОЛ или тромбоцитов) первично, можно было лишь на том основании, что воздействие (введение тромбопластина) использовано как инициатор тромбинемии, следовательно, тромбинемия сопровождается активацией ПОЛ в тромбоцитах. В этом плане наши данные согласуются с представлением, согласно которому в эксперименте тромбинемия, независимо от ее происхождения, сопровождается ростом активности ПОЛ в плазме и эритроцитах [С.Н.Ельдецова, 1990; С.А.Ральченко, 1992].

Видимо, тромбинемия в нашем случае - причина активации ПОЛ в тромбоцитах. Активация ПОЛ в этих клетках может, судя по некоторым данным [А.А.Вакулин, 1998; Ьпдо е.а., 1980], сопровождаться ростом агрегации и интенсификацией высвобождения.

Не исключалось, однако, что эффект тромбопластина опосредован не через тромбиногенез, а иными путями: например, известно, что тканевой тромбопластин (ф. III плазмокоагуляции) способен катализировать ряд других процессов [А.Ш.Бышевский, Д.М.Зубаиров, О.А.Терсенов, 1993]. Чтобы исключить или подтвердить такую возможность, мы вводили в кровоток тромбин, функция которого - превращения фибриногена и аутоактивация тромбиноге-неза [В.П.Балуда и др., 1995]. Оказалось, что и после введения тромбина в тромбоцитах активируется ПОЛ, причем, в большей степени, чем после введения тромбопластина (рис. 6).

Рис. 6. Степень изменения (ордината, %) уровня диеновых конъ-югатов (ДК), ТБК-активных продуктов, спонтанной агрегации (СА) и ее начальной скорости (Нач. ск.) после введения тромбина (светлые столбики) или тромбопластина (серые столбики) или после кровопотери (черные столбики).

Это исключает предположение, согласно которому тромбопластин активирует тромбоциты в обход своей специфической функции - активации тромбиногенеза. Возможное возражение, допускающее эффект тромбина на тромбоциты через фибринообра-зование, исключен прямыми наблюдениями: в дефибринированной плазме тромбин повышает уровень продуктов ПОЛ в плазме и эритроцитах [С.Н.Ельдецова, 1990; В.Г.Соловьев, 1997].

При воздействии, провоцирующем эндогенную тромбинемию и одновременно гипоксию (кровопотеря), также нашли активацию ПОЛ в тромбоцитах, превосходящую по интенсивности вызванную тромбином. Мы связываем это с одновременным действием двух факторов: эндогенной тромбинемии и гипоксемии, сопутствующим кровопотере. Интересно, что и степень изменения активности тромбоцитов при кровопотере значительнее. На данной стадии анализа это можно принять как признак того, что активация тромбоцитов - следствие активации ПОЛ.

Таким образом, допустимо, что активация тромбоцитов вторична по отношению к активации ПОЛ, как и изменения реакции высвобождения, следовавшие за изменениями агрегации (ее начальная скорость, спонтанная и максимальная АДФ-агрегация).

Следуя логике, определенной задачами исследований, в очередных экспериментах мы модифицировали интенсивность процессов ПОЛ, воздействуя прооксидантом или антиоксидантами.

В качестве прооксиданта выбран свинец, о котором известны важные для нас особенности: введение ацетата свинца в использованной нами дозе активирует ПОЛ наряду с признаками частичной блокады порфиринового обмена и лишь при более длительном введении (или увеличении дозы) вызывает в качестве вторичного сдвига активацию свертывания крови [А.А.Мкртумян, 1994]. В соответствие с задачей, нам и было необходимо вызвать активацию ПОЛ в качестве первичного изменения.

После введения соли свинца (в течение 12 дней) активность процессов ПОЛ в тромбоцитах повысилась в сравнительно небольшой степени, снизился и антиоксидантный потенциал. Одновременно выявились признаки активации тромбоцитов: рост спонтанной и АДФ-индуцированной агрегации, ее начальной скорости, интенсификация высвобождения фф. Р3 и Р4.

По результатам этого эксперимента можно было с большей определенностью полагать, что изменения активности тромбоцитов вторичны: 1) ацетат свинца - прооксидант (блокатор НЭ-групп цис-теиновых ферментов и других белков), 2) ацетат свинца существенно не влияет на тромбинемию [А.А.Мкртумян, 1994; И.А.Дементьева, 1998], 3) невысокой степени сдвига ПОЛ при введении свинца соответствует небольшая степень активации тромбоцитов по данным этого эксперимента (см. табл. 4 на стр. 46).

Располагая на этом этапе наблюдений данными о тромбоцитах от животных в разных экспериментальных ситуациях, следовательно, с разной интенсивностью ПОЛ, при одновременном наличии характеристик, относящихся к агрегации и высвобождению, мы можем сопоставить два параметра: степень ПОЛ и степень активации тромбоцитов.

Рис. 7. Зависимость показателей активности тромбоцитов (ордината) от концентрации в них диеновых конъюгатов (абсцисса). Столбики против каждой концентрации ДК (слева направо): 1-й - спонтанная агрегация, 2-й - АДФ-агрегация, 3-й - начальная скорость агрегации, 4-й - ф. Рз и 5-й - ф. Р4.

На рис. 7 сопоставлены концентрации первичных продуктов ПОЛ со спонтанной и АДФ-индуцированной агрегацией, с интенсивностью высвобождения фф. Р3 и Р4.

Графическое изображение позволяет видеть, что спонтанная и АДФ-агрегация, и в меньшей степени - начальная скорость агрегации увеличиваются по мере роста концентрации ДК. Высвобождение ф. Р3 линейно нарастает с увеличением концентрации ДК, а ф. Р4 - менее выражено, но пропорционально концентрации ДК.

В итоге, активация тромбоцитов растет пропорционально концентрации первичных продуктов ПОЛ в них, поэтому предпочтительнее рассматривать активацию как вторичное явление. В особенности это касается спонтанной агрегации, характеризующей способность клеток образовывать агрегаты в кровотоке, и реакции высвобождения ф. Р3, являющегося тромбоцитарным тромбопла-стином, появление которого ведет к ускорению процессов активации протромбиназы по внутреннему механизму [Д.М.Зубаиров, 1978; А.Ш.Бышевский и др., 1991]. Максимальная АДФ-агрегация меньше зависит от уровня ДК - видимо, изменение скорости агрегации не сопровождается адекватным ростом полноты агрегации.

Аналогичный анализ с использованием в качестве аргумента концентрации вторичных продуктов ПОЛ, выявил, что в принципе рост их содержания сопровождается активацией тромбоцитов, однако, зависимость далека от линейной - есть значительные флюктуации на протяжении кривой.

При введении витаминов-антиоксидантов (витамины А, В, С и Р) обнаруживалось угнетение ПОЛ и рост антиоксидантной активности в тромбоцитах (снижение уровня первичных и вторичных продуктов пероксидации невелико, но достоверно, удлинение периода индукции не подтверждено статистически, снижение скорости окисления также невелико, но достоверно - табл. 5, стр. 48). Этим сдвигам ПОЛ сопутствовали тенденция к ограничению спонтанной агрегации, снижение максимальной АДФ-агрегации при сохранении ее обычной начальной скорости и слабо выраженной тенденции к ограничению реакции высвобождения фф. Р3 и Р4. В совокупности эти данные - дополнительное свидетельство зависимости агрегационных и «высобождающих» свойств тромбоцита от интенсивности ПОЛ.

Наиболее интересны результаты опытов с введением про- и антиоксидантов одновременно (свинца и витаминов): антиоксидан-ты, компенсируя изменения ПОЛ, вызываемые прооксидантом, устраняют сдвиги агрегационной активности тромбоцитов, и их способности к высвобождению факторов свертывания.

Рис. 8. Изменения в тромбоцитах (в % относительно контроля) концентрации ДК, спонтанной агрегации, начальной скорости, высвобождения фф. Р3 и Р4 при введении свинца- (светлые столбики), витаминов-антиоксидантов (серые столбики), свинца и витаминов одновременно (черные столбики). Знак * - достоверные отличия.

Это четко видно при графическом анализе наиболее демонстративно изменявшихся показателей ПОЛ и активности тромбоцитов (рис. 8): 1) приросту концентрации ДК при введении свинца соответствует активация тромбоцитов (ускорение спонтанной агрегации, увеличение начальной скорости АДФ-агрегации, усиленное высвобождение тромбоцитарных факторов), 2) снижению концентрации ДК при введении витаминов соответствует тенденция к ограничению активности тромбоцитов (по тем же признакам), 3) отсутствию изменений концентрации ДК при одновременном введении витаминов и свинца не меняются характеристики тромбоцитов.

При повторении эксперимента с заменой комплекса витами-нов-антиоксидантов синтетическим антиоксидантом димефосфоном получены весьма близкие результаты (рис. 9).

Нач.ск.

Рис. 9. Изменения в тромбоцитах (в % относительно контроля) концентрации ДК, спонтанной агрегации, начальной скорости, высвобождения фф. Рз и Р4 при введении свинца (светлые столбики), димефосфона (серые столбики), свинца и димефосфона одновременно (черные столбики). Знак * - достоверные отличия.

На рис. 9 (как и на рис. 8), видно, что введение прооксиданта (свинца) сопровождается ростом концентрации ДК и соответственно повышением агрегационной активности тромбоцитов. При введении димефосфона существенно снизилась концентрация Дк в клетках и соответственно - их активность. При одновременном введении свинца и димефосфона достоверных отличий всех показателей от контроля не наблюдалось. Следовательно, «чистый» антиок-сидант, как и витамины-антиоксиданты, снижая концентрацию в тромбоцитах ДК, одновременно предупредил рост активности тромбоцитов. Можно с еще большей уверенностью говорить о том, что именно сдвиги ПОЛ в тромбоцитах обусловливают изменения их коагуляционной активности.

Известно, что тромбоциты участвуют в гемостазе не только за счет адгезии и агрегации, которые ведут к образованию тромбо-цитарной пробки или к укреплению фибринового сгустка путем превращения его в кровоостанавливающий тромб [Б.А.Кудряшов, 1975; Д.М.Зубаиров, 1978; З.С.Баркаган, 1988]. Есть иные механизмы участия пластинок в гемокоагуляции: 1) высвобождение ф. Рз, ускоряющего реакции, следующие за контактной фазой - взаимодействие фф. IX, VIII, II при участии ф.1У [Д.М.Зубаиров, 1978; Ж.Фермилен, М.Ферстрате, 1984, 1986]; 2) высвобождение ф. Р4, ограничивающего антикоагулянтный эффект гепарина практически на всех этапах ферментативного каскада свертывания [З.С.Баркаган, 1988; А.Ш.Бышевский и др., 1991].

В связи с этим, представленные выше данные могут служить объяснением уже известного эффекта - сдерживание антиоксидан-тами гемокоагуляционных сдвигов при различного рода экспериментальных состояниях, ведущих к тромбинемии. Так, С.А.Ральчен-ко [1992] и С.Л.Галян [1993] показали, что такие воздействия, как гетерогемотрансфузия, травматический токсикоз, каловый перитонит, кровопотеря и другие ведут к гипертромбинемии, достигающей степени ДВС крови. На фоне предварительного насыщения организма животных антиоксидантами в дозах, снижающих уровень продуктов пероксидации в плазме и эритроцитах, интенсивность гемокоагуляционных сдвигов ослабляется и период восстановления исходного состояния гемостаза сокращается. То же обнаружено при операции остеосинтеза (лечение перелома длинных трубчатых костей) в эксперименте и клинике [А.А.Вакулин, 1993].

На основании полученных нами данных можно полагать, что антиоксиданты, ограничивают участие тромбоцитов в активации свертывания, вызываемого тромбинемией: ослабляется агрегация и реакция высвобождения, следовательно, ограничивается интенсивность аутоактивации тромбинообразования по пути «ф. Р3 -» ускорение реакций взаимодействия ф. IX с VIII и ф. VIII с ф. X -» ф. X» и, в меньшей степени, ф. Ха с ф. II (реакция, ведущая к образованию тромбина - ф. На).

При ограничении процессов ПОЛ антиоксидантами снижается и высвобождение ф. Р4 - антигепарина. Его ограниченная продукция - условие более эффективной «работы» гепарина. Следовательно, антиоксиданты через влияние на тромбоциты, способствуют повышению противосвертывающего потенциала крови.

Обнаружив зависимость между содержанием продуктов ПОЛ в тромбоцитах и их активностью при экспериментальной гипертром-бинемии, выявив, что антиоксиданты, снижая ПОЛ в тромбоцитах, уменьшают и их коагулоактивность, мы далее изучили те же характеристики у больных с заболеваниями, сопровождающимися ги-пертромбинемией, обусловливающей повышенную свертывающую активность. В качестве таких состояний использованы патогенетически различные патологические процессы, отобранные для наблюдения по одному признаку - наклонность к гиперкоагулемии: 1) ин-сулинзависимый сахарный диабет, 2) атеросклеротические нарушения артериальных сосудов нижних конечностей и 3) беременность, осложненная гестозом.

У клинически однородной группы больных с ИЗСД нашли заметное повышение концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ в тромбоцитах. Этому сопутствовало значительное увеличение спонтанной агрегации и начальной скорости АДФ-агрегации при небольшом снижении показателя максимальной АДФ-агрегации и высоком показателе реакции высвобождения фф Рз и Р4. В совокупности эти данные согласовываются с полученными нами в условиях эксперимента, особенно, если принять во внимание, что экспериментальная гипертромбинемия сопровождается признаками развития ДВС крови [В.Г.Соловьев, 1997], а у наших больных с ИЗСД также наблюдались четкие признаки гипер-коагулемии - прирост продуктов деградации фибриногена, растворимых комплексов фибриногена и рассогласованность показателей общей свертывающей активности [А.А.Нелаева, 1997]. Единственный противоречивый, на первый взгляд, момент - у больных снижен показатель максимальной АДФ-агрегации, в то время как у экспериментальных животных он повышался.

Мы склонны объяснять это расхождение следующим образом. Экспериментальные животные исследовались в условиях остро возникающей тромбинемии - отбор проб через 1 ч после воздействия (введение тромбопластина или тромбина внутривенно) или на 13-й день ежедневного введения прооксиданта. В этих экспериментах тромбоциты непродолжительное время находились в состоянии повышенной активности и прирост спонтанной активации составлял от 42 (введение свинца) до 138 (введение тромбина). У больных ИЗСД прирост спонтанной активации составил 156% по сравнению со здоровыми донорами. Видимо, это и обусловило снижение максимальной агрегации у больных: начальная скорость агрегации у них выше, чем у доноров, а максимум прироста светопро-пускания - показателя, по которому учитывается максимальная агрегация - ниже, поскольку число участвующих в агрегации тромбоцитов упало в связи с высокой спонтанной агрегацией.

Связывать этот эффект с уменьшением числа тромбоцитов на единицу объема крови нет оснований: 1) их количество у больных ИЗСД существенно не менялось [А.А.Нелаева, 1997], 2) даже при снижении общего числа тромбоцитов в 2 раза максимальная агрегация заметно не меняется [В.Г.Соловьев, 1997]. Более того, максимальная агрегация и не может меняться в зависимости от концентрации тромбоцитов, поскольку прирост светопропускания учитывается по отношению к его исходному значению в тестируемой плазме. Остается только одна возможность объяснить этот эффект - длительное нахождение тромбоцитов (продолжительность заболевания у обследуемых - преимущественно от 2 до 10 лет -табл. 7, стр. 54) в состоянии повышенной активности привело к появлению клеток, потерявших способность к агрегации (рефрактерные клетки). Такому объяснению отчасти противоречит то, что в эксперименте с кровопотерей, где вследствие одновременного действия двух факторов (тромбинемия и гипоксемия) наблюдается наиболее значительный прирост и спонтанной, и максимальной агрегации. Однако напомним, что определения осуществляли всего через 30 мин после крововзятия, когда еще не успело «истощиться» достаточное число тромбоцитов.

В пользу высказанного предположения свидетельствует и тот факт, что при компенсации нарушений углеводного обмена обычными для таких состояний лечебными мероприятиями степень снижения максимальной агрегации уменьшается. Показано также, что применение антиоксидантов у больных ИЗСД ограничивает клинические проявления заболевания [А.А.Нелаева, 1997].

У больных с атеросклеротическим поражением артерий нижних конечностей с признаками ишемии (состояние также сопровождающемся гиперкоагулемией [К.В.Горбатиков, 1998; Ек е1 а1., 1991]) мы нашли повышенное содержание продуктов ПОЛ в тромбоцитах и увеличение начальной скорости агрегации. Степень сдвигов тем выше, чем выраженнее ишемия. Как и у больных с ИЗСД, максимальная АДФ-агрегация оказалась несколько уменьшенной (к сожалению, спонтанную агрегацию у этих больных мы не имели возможности определять).

После операции (аорто-бедренный или бедренно-подколенный шунт), являющейся и стресс-воздействием, и фактором, обусловливающим поступление в кровоток фрагментов клеточных мембран с тромбопластической свойствами [А.Ш.Бышевский, Д.М.Зу-баиров, О.А.Терсенов, 1993], свертывание активировалось до степени ДВС переходной стадии [К.В.Горбатиков, 1998]. В этих условиях мы находили рост содержания продуктов ПОЛ в тромбоцитах и начальной скорости их агрегации. Изменения были более заметными при глубокой исходной ишемии. У больных с ишемией 2Б степени к моменту выписки изменения существенно сгладились, а при ишемии 3-4 степени сохранялись до конца наблюдений

График динамики ДК и начальной скорости АДФ-агрегации после операции в зависимости от степени ишемии позволяет констатировать (рис. 10), что при ишемии 3-4 степени уровень ДК в тромбоцитах выше исходного весь послеоперационный период, как и начальная скорость АДФ-агрегации.

1-2 сут 7-8 сут 14-21 сут

Рис. 10. Степень изменения содержания ДК (исчерченные столбики при ишемии 3-4, черные - при ишемии 2Б) и начальной скорости агрегации (серые столбики при ишемии 3-4, белые - при ишемии 2Б) после операции (в % относительно показателей перед операцией).

Аналогичная группа больных, которые в отличие от рассмотренных выше, получала дополнительно к обычной терапии еще и антиоксидант (препарат Витакомплекс), заметно отличалась в послеоперационном по динамике изменения ДК и начальной скорости АДФ-агрегации (рис. 11).

Здесь видно, что уровень ДК в тромбоцитах падает относительно исходного (обнаруженного перед оперативным вмешательством) в степени, пропорциональной продолжительности введения антиоксиданта, параллельно снижается и начальная скорость АДФ-индуцируемой агрегации.

1-2 сут 7-8 сут 14-21 сут

Рис. 11. Степень изменения содержания ДК (исчерченные столбики при ишемии 3-4, черные при ишемии 2Б) и начальной скорости агрегации (серые столбики при ишемии 3-4, белые - при ишемии 2Б) после операции (в % относительно показателей перед операцией) у больных, получавших антиоксидант (Витакомплекс)

Анализ рассмотренных изменений позволяет утверждать следующее:

1. При атеросклеротическом поражении сосудов нижних конечностей, заболевании, в ходе которого нарушения липидного обмена и гипоксемия [К.В.Горбатиков, 1998; Оа^еи-Штаг а1., 1990; ЕНпёег, "\Уа11с1ш5, 1994] обусловливают активацию ПОЛ, наряду с избыточным накоплением продуктов ПОЛ в тромбоцитах растет начальная скорость АДФ-агрегации при одновременном снижении максимальной АДФ-агрегации.

2. После экстремального воздействия (оперативное вмешательство) в тромбоцитах эти отклонения усугубляются пропорционально степени исходной ишемии у больных.

3. Введение комплексного антиоксиданта" ограничивает и снижает уровень ДК против значения в предоперационном периоде и даже против значения у доноров. Одновременно сокращается период восстановления начальной скорости агрегации тромбоцитов и их максимальной агрегации к состоянию перед операцией.

4. Совокупность данных указывает на зависимость между ПОЛ в тромбоцитах и их агрегацией при заболевании, в патогенезе которого существенную роль играет активация ПОЛ и которое сопровождается активацией свертываемости крови - гиперкоагулемией.

Обратимся к еще одной патологии - осложненной гестозом беременности. Изучение ПОЛ и агрегации в тромбоцитах у этих женщин информативно в свете наших задач потому, что, во-первых, в предродовом периоде наблюдается той или иной степени гиперкоа-гулемия, усиливающаяся после родов [Bauer, 1995; Wangala е.а., 1995], во-вторых, потому, что гестоз интенсифицирует гемокоагу-ляционные сдвиги настолько, что уже в предродовом периоде наблюдаются признаки начальной стадии ДВС [Ю.И.Цирук, 1998; De Luca Brunori е. а., 1988], усугубляющиеся после родоразрешения и даже приводящие к гибели [Х.Д.Айрекат, 1996; Dombrowski е. а., 1995], и, в-третьих, роды из-за спазма сосудов и нарушения микроциркуляции, особенно при гестозе [Д.Д.Зербино, Л.Л.Лукасевич, 1989; Э.Д.Загородняя, 1996; Redman, Roberts, 1993], а также из-за снижения эндогенного антиоксидантного потенциала [В.В.Абрам-ченко и др., 1995; Пока, 1994] ведут к активации процессов ПОЛ [А.Г.Разбойникова, 1992; Н.И.Размахина, Л.С.Александров, 1994].

У здоровых беременных мы не нашли заметных изменений концентрации продуктов ПОЛ и агрегационной активности тромбоцитов - имела место лишь тенденция к ускорению этих процессов. Через 1-3 сут после родов повысился уровень ДК и ТБК-активных продуктов в тромбоцитах и увеличилась начальная скорость АДФагрегации и, в меньшей степени, - максимальной агрегации. Повышение сохранялось и на 4-7 сут. У беременных с гестозом эти явления выражены заметнее, особенно в послеродовом периоде. Назначение антиоксиданта в предродовом периоде и после родов ограничило эти изменения и сократило время их исчезновения. Естественно, уровень продуктов ПОЛ в тромбоцитах при введении антиоксиданта снижался ниже его значений у женщин-доноров.

Здесь уместно напомнить, что у больных с атеросклеротиче-скими поражениями артерий нижних конечностей и у больных с ИЗСД, наряду с интенсификацией ПОЛ в тромбоцитах и повышением начальной скорости их АДФ-агрегации, сниженной оказывался максимальный уровень АДФ-агрегации. Мы объясняли это, будто бы, парадоксальное явление тем, что при продолжительно протекающем патологическом процессе длительное пребывание тромбоцитов в состоянии активации ведет к появлению рефрактерных или, корректнее, «истощенных» клеток. То, что в послеродовом периоде не было спада максимальной агрегации, а, напротив, наклонность к ее повышению, подтверждает высказанное соображение: продолжительность родов и послеродового периода не сопоставима с продолжительностью атеросклеротического процесса или сахарного диабета у наблюдавшихся нами больных: у родильниц истощения тромбоцитов при сравнительно небольшой активации и кратковременности реакции напряжения истощение не наступало.

Сопоставление данных, полученных в экспериментах с первичной гипертромбинемией, первичной гипероксидацией и одновременным введением про- и антиоксидантов, указывает на несомненную связь между состоянием ПОЛ и активацией тромбоцитов. Отставание сдвигов агрегационной и «высвобождающей» активности тромбоцитов от сдвигов ПОЛ в них, способность антиоксидантов ослаблять сдвиги активности тромбоцитов, в том числе и в условиях одновременного введения прооксиданта или прокоагулянта (тромбина, тромбопластина), - указание на. первичность сдвигов ПОЛ в паре «ПОЛ тромбоцитов-активность тромбоцитов». Это допущение подтверждается и наличием прямой зависимости между концентрацией ДК в тромбоцитах, их агрегационной активностью и способностью высвобождать фф. Р3 и Р4. Однако лишь опыты in vitro могли явиться основанием для более категоричного суждения о приоритетности изменений ПОЛ или коагуляционной активности тромбоцитов, и, следовательно, о месте тромбоцитов в связи «ПОЛ-гемостаз», доказанной многочисленными исследованиями [В.П.Мищенко, 1981; А.А.Мкртумян, 1994; С.Л.Галян, 1993; И.В.Раль-ченко, 1998]. Прежде всего мы проанализировали зависимость агрегации от ПОЛ, используя все полученные нами в экспериментах и у больных данные об уровне первичных и вторичных продуктов пероксидации с одной стороны, и начальной скорости агрегации (величина, стабильно повышавшаяся с ростом ПОЛ) тромбоцитов -с другой. При этом выяснилось что с ростом концентрации ДК в тромбоцитах начальная скорость их агрегации растет пропорционально и график зависимости приближается к линейному (рис. 3, стр. 75). Зависимость между концентрацией вторичных продуктов ПОЛ (ТБК-активных) и начальной скоростью не может быть оценена однозначно, хотя отчасти пропорциональность выявляется. Это вынуждает нас выяснить, есть ли согласованность между изменениями концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ в тромбоцитах.

Анализируя по данным таблиц 23 и 24 (стр. 74 и 76) эту зависимость, мы получили графики, представленные ниже.

На рис. 12 видно, что по мере нарастания концентрации ДК в тромбоцитах концентрация вторичных продуктов ПОЛ (ТБК-актив-ных) в среднем возрастает, однако, отдельные участки кривой концентрации ТБК (кривая М) отличаются высокой степенью флюк-туаций. Следовательно, строгой зависимости между содержанием первичных и вторичных продуктов ПОЛ в тромбоцитах при разных экспериментальных ситуациях и патологических состояниях не выявлено. Поэтому ожидать строгой зависимости скорости агрегации от концентрации ТБК-активных продуктов ПОЛ не приходится, т.к. скорость агрегации линейно зависит от концентрации диеновых конъюгатов.

Рис. 12. График зависимости концентрации ТБК-активных продуктов в тромбоцитах от концентрации ДК в них. М - усредненная кривая концентраций ТБК

Вместе с тем, направленность изменений средней концентрации ТБК-активных продуктов от концентрации диеновых конъюгатов такова: концентрация первых растет вслед за ростом концентрации вторых. Следовательно, можно говорить и о зависимости начальной скорости агрегации от тех и других продуктов ПОЛ, с той разницей, что от уровня диеновых конъюгатов скорость агрегации зависит практически линейно - видимо, они и являются фактором, определяющим готовность тромбоцитов к агрегации.

Заключая исследования, мы попытались в прямом эксперименте изучить зависимость начальной скорости агрегации и интенсивности высвобождения фф. Р3 и Р4 от концентрации продуктов ПОЛ, используя как источник продуктов ПОЛ бесклеточную плазму с разным их содержанием. Получив плазму с разной концентрацией продуктов ПОЛ у крыс, которым предварительно вводили про-оксидант или антиоксидант в неодинаковых дозах, инкубировали ее с субстратной, используемой для определения агрегации.

Анализ полученных данных подтвердил, что начальная скорость агрегации зависит от концентрации ДК и ТБК (рис. 13).

В данном случае концентрация продуктов ПОЛ менялась в ситуациях, создаваемых введением про- или антиоксиданта, видимо, поэтому зависимость между концентрацией первичных и вторичных продуктов ПОЛ выразительнее, как и зависимость начальной скорости агрегации от концентрации каждого из этих продуктов.

Следовательно, если концентрация первичных и вторичных продуктов ПОЛ изменяется согласованно, зависимость начальной скорости агрегации от концентрации этих продуктов порознь приближается к линейной в обоих случаях.

Изменения ПОЛ в тромбоцитах при разных экспериментальных или клинических ситуациях сопровождаются однонаправленными, но не согласованными количественно сдвигами концентрации первичных и вторичных продуктов пероксидации.

120 100 80 60 40 20 0

Рис. 13. График начальной скорости агрегации при разных концентрациях ДК и ТБК.

Видимо, предпочтительнее в таких исследованиях учитывать зависимость начальной скорости агрегации от концентрации ДК.

Это подтвердилось экспериментально при использовании разных разведений плазмы с высокой концентрацией продуктов ПОЛ (в этом случае концентрации ДК и ТБК изменяются в одинаковой степени). Оценив влияние разных разведений плазмы на начальную скорость агрегации тромбоцитов, построили график зависимости начальной скорости агрегации тромбоцитов от концентрации ДК. Этот анализ выявил пропорциональность изменений в данном случае и график зависимости оказался близким к линейному (рис. 5, стр. 80).

В заключение проведем анализ зависимости интенсивности высвобождения фф. Рз и Р4 от концентрации ДК. Напомним, что в этом эксперименте использованы разные концентрации ДК, полученные путем разведения исходной (следовательно, и концентрация ТБК-активных продуктов изменялась пропорционально).

Представленные ниже (рис. 14) графики свидетельствуют о том, что при увеличении концентрации ДК в среде преинкубации тромбоцитов, интенсивность высвобождения фф. Р3 и Р4 растет. Прирост характеризуется линейной зависимостью, но не является пропорциональным: с увеличением концентрации ДК от минималь

-mól

ДК

- ТБК

- Нач ск. ной до максимально исследованной (в 6,28 раза) высвобождение ф. Р3 и ф. Р4 увеличилось только в 1,67 раза каждого.

Рис. 14. Изменения степени высвобождения фф. Р3 и Р4 в зависимости от концентрации ДК в тромбоцитах.

В конечном счете, и начальная скорость агрегации, и интенсивность высвобождения фф. Р3 и Р4 повышаются при увеличении концентрации ДК в среде. Однако зависимость агрегации от уровня ДК более тесная, чем зависимость реакции высвобождения. Связано это, видимо, с тем, что реакция высвобождения определяется концентрацией продуктов ПОЛ не непосредственно, а через скорость агрегации, с интенсивностью которой она находится в сложной связи [Snyder е.а., 1989].

К сожалению, нет возможности сопоставить полученные нами данные с имеющимися в литературе - мы не встретили аналогичных работ. Однако известны близкие по характеру исследования, цель которых - выяснить, влияет ли интенсивность ПОЛ в организме на проагрегантную способность эритроцитов и лейкоцитов [А.А.Вакулин, 1998]. Исследователь нашел, что, чем выше интенсивность ПОЛ в организме донатора клеток, тем выше проагре-гантный эффект клеток. Показано также, что эритроциты и некоторые фракции лейкоцитов реализуют проагрегационные свойства через высвобождаемые ими продукты ПОЛ [И.В.Ральченко, 1998]. Это косвенно подтверждает установленную нами зависимость агрегационной способности тромбоцитов от уровня продуктов ПОЛ.

• ♦

Заключая обсуждение результатов нашей работы, обратим внимание на главные моменты.

Активация ПОЛ в тромбоцитах при разнообразных экспериментальных ситуациях (гипертромбинемия экзогенная или эндогенная) сопровождается повышением агрегационной активности тромбоцитов, проявляющимся ростом спонтанной агрегации, начальной скорости и максимального значения АДФ-индуцируемой агрегации, а также интенсификацией высвобождения фф. Р3 и Р4.

Интенсификация ПОЛ при введении животным прооксиданта повышает содержание продуктов пероксидации в тромбоцитах, что также сопровождается ростом спонтанной агрегации, начальной скорости и максимального уровня АДФ-индуцируемой агрегации, а также усиленным высвобождением фф. Р3 и Р4.

Угнетение процессов ПОЛ у животных введением антиокси-дантов сопровождается снижением содержания продуктов пероксидации в тромбоцитах, снижением их агрегационной активности и замедлением реакции высвобождения. При одновременном введении про- и антиоксиданта сдвиги в тромбоцитах, возникающие при их введении порознь, не обнаруживаются.

При неосложненном ИЗСД и атеросклеротических поражениях артерий нижних конечностей - заболеваниях, на течении которых сказывается состояние гемостаза (в том числе и его тромбоцитар-ного звена), как патогенетического фактора или как фактора, осложняющего течение основного патологического процесса, - наблюдается повышенное содержание продуктов ПОЛ в тромбоцитах, увеличение начальной скорости АДФ-агрегации при ограничении максимально достижимого уровня агрегации.

При беременности, осложненной гестозом, аналогичные изменения в тромбоцитах сопровождаются, однако, ростом максимального уровня АДФ-агрегации.

После стресс-воздействия (операция шунтирования артерий, родоразрешение) наблюдается дополнительный прирост содержания продуктов ПОЛ в тромбоцитах и усугубление описанных изменений их активности.

Назначение всем упомянутым больным комплексного антиок-сиданта (Витакомплекса) на фоне обычных терапевтических мероприятий ограничивает изменения концентрации продуктов ПОЛ в Тромбоцитах и их активности.

Полученные данные в совокупности со сведениями о роли тромбоцитов в гемостазе [Ж.Фермилен, М.Ферстрате, 1984, 1986; Д.М.Зубаиров, 1978; З.С.Баркаган, 1988; В.П.Балуда и др. 1995] позволяют полагать, что этим клеткам принадлежит важное место в реализации описанной ранее [В.П.Мищенко, 1981; А.Ш.Бышевс-кий, 1994] связи между свободнорадикальными процесса и гемо-коагуляцией. Это подтверждает предположения И.В.Селивановой [1994], высказанные на основании наблюдений, согласно которым тромбоциты реагируют на тромбин активацией ПОЛ.

Выполненные нами в последней части работы эксперименты -прямое свидетельство существования связи ПОЛ-тромбоциты, связи, поддающейся количественной оценке.

Таким образом, тромбоциты - звено цепи, соединяющей сво-боднорадикальные процессы и гемокоагуляцию. Их роль заключает

- 106ся в том, что эти клетки реагируют на изменения концентрации продуктов ПОЛ в них и в окружении усилением своих гемостати-ческих функций (агрегация и реакция высвобождения прокоагу-лянтов). Согласно недавно полученным данным [А.А.Вакулин, 1998; И.А.Дементьева, 1998; И.В.Ральченко, 1998], тромбоциты, возможно, являются звеном, соединяющим в связке «ПОЛ-гемостаз» эффекты эритроцитов и некоторых популяций лейкоцитов -клеток, способных интенсифицировать агрегацию и реакцию высвобождения тромбоцитов через выделяемые в среду продукты ПОЛ.

Велика вероятность того, что неоднократно установленный позитивный эффект антиоксидантов в предупреждении и ограничении тромбогеморрагий при оперативных вмешательствах [А.А.Вакулин, 1994; В.А.Полякова, 1994; Т.П.Шевлюкова, 1996] реализуется, наряду с другими путями, через ограничение активности тромбоци-тарного компонента гемостаза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зарубина, Ирина Анатольевна, Тюмень

1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокисли-тельные вещества. Л.: Наука, 1985. - 228 с.

2. Абрамченко В.В., Костюшов Е.В., Щербина JI.A. Антиокси-данты и антигипоксанты в акушерстве. С.-Петербург, 1995. - 117 с.

3. Айдарханов Б.Б., Локшина Э.А., Липская Е.Г. Молекулярные аспекты механизма антиокислительной активности витамина Е: особенности действия ос и у-токоферолов / / Вопр. мед. химии. -1989. №3. - С. 2-9.

4. Айрекат Х.Д. Профилактика материнской смертности при акушерских кровотечениях: Автореф. дисс. . канд. мед. наук,- М., 1996. 20 с.

5. Алмазов В.А., Гуревич B.C., Шатилина Л.В. и др. Роль гипероксидации липидов в нарушении структурной организации тром-боцитарных мембран // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1992. -114. - 9. - С. 265-267.

6. Архипенко Ю.В., Газдаров А.К., Каган В.Е. и др. Перекисное окисление липидов в направлении транспорта Са2+ через мембраны саркоплазматического ретикулума при Е-авитаминозе / / Биохимия. 1976. - № 10. - С. 1898-1902.

7. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. М.: Наука, 1975. - 326 с.

8. Базазьян Г.Г. Диетический фактор, атеросклероз и система свертывания крови. М.: Медицина. 1982. 276 с.

9. Ю.Балаболкин М.И. Сахарный диабет. М.: Медицина, 1994. -383 с.

10. П.Балашова Т.С., Багирова Н.И., Зверев Д.В. и др. Гемолитико-уремический синдром как клиническое проявление оксидантного стресса // Вест. РАМН. 1996. - №9. - С. 20-23.

11. Балуда В.П., Балуда М.В., Деянов И.И., Тлепшуков И.К. Физиология системы гемостаза. М., 1995. 243 с.

12. Балуда В.П., Баркаган З.С., Гольдберг Е.Д. и др. Лабор. методы исследования системы гемостаза. Томск, 1980. - 310 с.

13. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. -М.: Медицина, 1988. 526 с.

14. Бондарь И.А. Клинические, метаболические и иммунные особенности формирования поздних осложнений сахарного диабета: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Новосибирск, 1997. - 44 с.

15. Бурлакова Е.Б. Актуальные вопросы современной онкологии: Тез. докл. Изд. МГУ, 1968. - В. 1. - 50 с.

16. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты: новые идеи и повторение пройденного // Биоантиоксидант. Тюмень. - 1997. - С. 3-4.

17. Бурлакова Е.Б. Свободнорадикальное окисление липидов в норме и патологии. М.: Наука, 1976. - 18 с.

18. Бурлакова Е.Б., Алексеенко A.B., Молочкина Е.И., Пальмина Н.И., Храпова Н.Г. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте. М., 1975. - С. 7-16.

19. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты // Успехи химии. 1985. -№9. - С. 1540-1558.

20. Бышевский А.Ш. Влияние витамина, никотиновой кислоты, витаминов В12 и Е на толерантность крыс к тромбину / / Матер. 1-й конф. укр. фармакол. общества. Тернополь, 1966. - С. 27-28.

21. Бышевский А.Ш. О некоторых перспективных направлениях в изучении гемостаза / / Международный симпозиум "Физиология и патология гемостаза". Симферополь-Полтава, 1994. - С. 9-10.

22. Бышевский А.Ш. Результаты и перспективы изучения гемостаза / / Медико-биологический вестник им. Я.Д.Витебского, 1996.- 2 (6). С. 20-21.

23. Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Горбатиков К.В. и др. Профилактика тромбогеморрагий витаминами-антиоксидантами / / Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии. Санкт-Петербург, 1995. - С. 176-177.

24. Бышевский А.Ш., Кожевников В.Н. Витамины и здоровье женщины. Красноярск, 1991. - 191 с.

25. Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Дементьева И.А. и др. Тромбоциты. Тюмень; МАИ, 1996. - 249 с.

26. Бышевский А.Ш., Галян СЛ., Ельдецова С.Н. и др. Роль тромбоцитов в защитном эффекте сочетания витаминов А, Е, Р и С при тромбинемии / / Гематол. и трансфузиол., 1995. 40. - 5. -С.9-11.

27. Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Соловьев В.Г., Ральченко С.А. Влияние поливитаминных препаратов на свертываемость крови при экспериментальной гиперкоагулемии / / Вопр. питания, 1992. 1. -С. 48-52.

28. Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Шафер В.М. и др. Влияние витаминов А, Е, С, Р и РР на свертываемость крови при экспериментальной тромбопластинемии // Вопр. питания, 1989. 6. - С. 50-52.

29. Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Шафер В.М., Ральченко С.А. Витаминные комплексы в профилактике тромбогеморрагических осложнений у хирургических больных / / Всес. конф. "Клиническая витаминология": Тез. докл. М., 1991. - С. 71-72.

30. Бышевский А.Ш., Зубаиров Д.М., Терсенов Л.А. Тромбопла-стин. Новосибирск: изд-во Новосибирского университета, 1993. -177 с.

31. Бышевский А.Ш., Кожевников В.Н. Свертываемость крови при реакции напряжения. Свердловск, Средне-Уральское книжн. Изд-во, 1986. 172 с.

32. Бышевский А.Ш., Полякова В.А., Цирук Ю.И. Клиническая эффективность антиоксидантной терапии поздних гестозов легкой степени / / Междун. симпозиум "Медицина и охрана здоровья". -Тюмень, 1996. С. 49-50.

33. Бышевский А.Ш., Соловьев Г.С., Соловьев В.Г., Соловьев C.B. Влияние витаминов А, Е, С, Р на интенсивность внутрисосу-дистого свертывания крови в эксперименте / / Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1992. - 2. - С. 262-265.

34. Бышевский А.Ш., Терсенов O.A., Чирятьев Е.А. и др. Биохимические компоненты свертывания крови. Свердловск: Изд-во Уральского университета, 1990. - 212 с.

35. ЗЭ.Вакулин A.A. Гемокоагуляция при переломах длинных трубчатых костей и остеосинтезе, влияние комбинации витаминов-антиоксидантов. Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Тюмень, 1993. - 23 с.

36. Вакулин A.A. Роль эритроцитов и лейкоцитов в поддержании активности тромбоцитов в зависимости от состояния ПОЛ. Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Челябинск, 1998. 42 с.

37. Весельский И.Ш., Сонник A.B. Применение корректоров процессов перекисного окисления липидов и гемостаза в комплексном лечении больных с цереброваскулярными расстройствами / / Ж-л неврол. и психиатр, им. С.С. Корсакова. 1997. - №2. - С. 5154.

38. Визир А.Д., Башкина Н.Ф., Беленичев И.Ф. и др. Состояние свободнорадикального окисления у больных гипертонической болезнью II стадии // Тер. Архив. 1995. - №5. - С. 18-19.

39. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. 1987. - № 5. - С. 830-844.

40. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биомембранах. М., 1972. - 237 с.

41. Габриелян Э.С., Акопов С.Э. Клетки крови и кровообращение. Ереван: Айястан, 1985. 257 с.

42. Гаврилов O.K., Кавешникова Б.Ф. Роль простагландинов в системе PACK / / Проблемы и гипотезы в учении о свертывании крови (ред. О.К.Гаврилов). М.: Медицина, 1981. С. 75-99.

43. Галян C.JI. Предупреждение и ограничение витаминами-антиоксидантами нарушений гемостаза, вызываемых тромбинемией: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Челябинск, 1993. - 44 с.

44. Галян С.Л., Бышевский А.Ш., Шафер В.М. и др. Гемокоагу-ляционные сдвиги при операционной травме и экзогенной тромбо-пластинемии на фоне витаминизации / / Вопр. мед. химии, 1990. -2. С. 41-45.

45. Гарганеева A.A., Тепляков А.Т., Петроченко Е.В. Эффективность коррекции расстройств тромбоцитарного плазменного гемостаза и микроциркуляции антиоксидантом эмоксипином у больных инфарктом миокарда / / Биоантиоксидант. Тюмень. - 1997. - С. 64-66.

46. Говорова Н.Ю., Шариков Б.П., Лызлова С.Н. Влияние низкомолекулярных соединений на хемилюминисценцию люминола, обусловленную действием продуктов миелопероксидазного катализа и экзогенного гипохлорита // Биохимия. 1988. - «№12. - С. 2025-2032.

47. Горбатиков К.В. Влияние Витакомплекса на гемокоагуляцию и ПОЛ у больных облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей после аорто-бедренной и бедренно-подколенной реконструкции: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Челябинск, 1998. - 19с.

48. Дементьева И.А. Влияние витаминов-антиоксидантов на ан-тиагрегантную активность соединений, модифицирующих превращение в тромбоцитах арахидоновой кислоты. Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Челябинск, 1998. - 41 с.

49. Дубинина Е.Е. Антиоксидантная система плазмы крови / / Укр. биохим. ж-л. 1992. - С. 3-15.

50. Ельдецова С.Н. Гемокоагуляционные сдвиги и активность радикальных процессов в плазме и эритроцитах при экстремальныхвоздействиях в эксперименте: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -Челябинск, 1990. 124 с.

51. Журавлев А.И. Спонтанная биохемилюминесценция животных тканей / / Биохемилюминесценция. М: Наука, 1983. - С. 329.бб.Журавлев А.И., Журавлева А.И. Сверхслабое свечение сыворотки крови и его значение в комплексной диагностике. М., 1975. - 128 с.

52. Журавлев А.И., Пантюшенко В.Т. Свободнорадикальная биология. М„ 1989. - 60 с.58.3агородняя Э.Д. Патогенез, терапия и профилактика гестоза: Автореф. дисс. . докт. мед наук. М., 1996. - 49 с.

53. Иванова Е.Б., Лебедева К.А., Ревенко З.Г., Красильникова Н.Г. Влияние факторов гипоксии на структурно-функциональнуюорганизацию клеточных мембран у детей. В кн. "Физиология и патология клеточных мембран". - Свердловск. - 1984. - 73 с.

54. Иванова Н.В. Эффективность эфферентной терапии в коррекции физико-химических параметров мембран тромбоцитов у,ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС // Биоантиоксидант. -Тюмень. 1997. - С. 146-147.

55. Исамбаева В.А. Система свертывания крови и адаптация к природной гипоксии. JL, 1983. - 151 с.

56. Каган В.Е., Архипенко Ю.В., Писарев В.А. и др. Повреждение мембран саркоплазматического ретикулума при перекисном окислении и его роль в развитии мышечной патологии. В кн.: Биофизика мембран. - М., 1981. - С. 88-95.

57. Касимова Т.М., Мирталипов Д.Т., Абидов A.A. Липидный состав тромбоцитов при сахарном диабете в зависимости от степени микроангиопатии / / Пробл. эндокринол. 1987. - 4. - С. 20-23.

58. Коркушко О.В., Коваленко А.Н. Система свертывания крови при старении. Киев: Здоровье, 1985. - 216 с.

59. Круглякова К.Е., Гендель Л.Я. Действие антиоксидантов на биологические структуры / / Биоантиоксидант. Тюмень. - 1997. -С. 4-5.

60. Крыжановский Т.Н., Лескова Г.Ф., Удовиченко В.И. и др. Защитный эффект фосфатидилхолиновых липосом при геморрагическом шоке у кошек / / Бюл. эксп. биол. и мед. 1995. - «№5. - С. 480-484.

61. Кубатиев A.A., Андреев C.B. Эндогенные простагландины в динамике индуцированной агрегации тромбоцитов / / Актуальные проблемы гемостазиологии /Ред. Б.В.Петровский, Е.И.Чазов, В.С.Андреев. М.: Наука, 1981. - С. 150-152.

62. Кубатиев A.A., Балашова Т.С., Смирнова В.Ю. и др. Влияние нафтиурофурила на перекисное окисление липидов сыворотки имембран эритроцитов больных инсулинзависимым сахарным диабетом / / Бюлл. эксп. биол. и мед. 1996. - №9. - С. 338-341.

63. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания. М., 1975,,- 48.8 с., .

64. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков H.H. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. М.: Медицина, 1989. - 320 с.

65. Кузник Б.И., Михайлов В.Д., Альфонсов В.В. Тромбогемор-рагический синдром в онкологии. Томск, 1983. - 168 с.

66. Курганов Б.И. Аллостерические ферменты. М.: Наука, 1978. - 246 с.

67. Кухтина E.H., Храпова Н.Г., Бурлакова Е.Б. и др. Особенности антиокислительного действия токоферолов как природных ан-тиоксидантов // Докл. АН СССР. 1983. - №3. - С. 729-732.

68. Ланкин А.Н., Закирова Л.В., Касаткина Л.В. и др. Перекиси липипдов и атеросклероз. Содержание продуктов перекисного окисления липидов в крови больных ишемической болезнью сердца // Кардиология. 1979. - №10. - С. 69-72.

69. Ланкин В.З. Атеросклероз как пример свободнорадикальной патологии: механизмы нарушения ферментативной регуляции процессов свободнорадикального ПОЛ в биомембранах при атерогене-зе / / Междунар. симп. "Биоантиоксидант". Тюмень, 1997. С. 5153.

70. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Ракита Д.Р. и др. Влияние а-токоферола на супероксиддисмутазную и глутатионпероксидазную активность цитозоля и митохондрий печени мышей / / Биохимия. -1983. №9. - С. 1555-1558.

71. Ланкин В.З , Бондарь Т.Н. Регуляция активности глутатион-зависимых антиоксидантных ферментов продуктами фосфолипазного гидролиза / / Междунар. симп. "Биоантиоксидант". Тюмень, 1997. С. 53-57.

72. Лебедев A.B., Левицкий Д.О., Логинов В.А. Кислород как индуктор переноса ионов кальция через бислойные липидные мембраны // Докл. АН СССР. 1980. - №6. - С. 1494-1497.

73. Лобарева Л.С., Денисов Л.Н., Якушева Е.О. Витамины анти-оксидантного действия и ревматические заболевания // Вопр. питания. 1995. - №4. - С. 24-30.

74. Лукьянова Л.Д., Балмуханов Б.С., Усолев А.Т. Кислородза-висимые процессы в клетке и ее функциональное состояние. М.: Наука, 1982. - 298 с.

75. Мазовецкий А.Г., Беликов В.К. Сахарный диабет. М.: Медицина, 1987. - С. 32-38.

76. Мазовецкий А.Г., Беликов В.К. Сахарный диабет. М.: Медицина, 1987. - 288 с.

77. Маркосян A.A. Онтогенез системы свертывания крови. Л., 1968. - 136 с.

78. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина, 1981. - 272 с.

79. Меерсон Ф.З. Физиология адаптационных процессов / / М.: Медицина, 1986. 145 с.

80. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессовых и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина, 1984. - 269 с.

81. Меерсон Ф.З., Малышев И.Ю. Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца. М.: Наука, 1993. - 159 с.

82. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. - 365 с.

83. Мингазетдинова Л.Н., Закирова А.Н. -Перекиси липидов и система гемостаза при инфаркте миокарда, осложненном нарушениями ритма сердца / / Кардиология. 1993. - «№2. - С. 24-26.

84. Миррахимов М.М. Лечение внутренних болезней горным климатом. Л., 1977. - 208 с.

85. Эб.Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксидан-ты и свертываемость крови /Ред. Б.В.Петровский, Е.И.Чазов, В.С.Андреев. М.: Наука, 1981. - С. 153-157.

86. Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксидан-ты и свертываемость крови / / Актуальные проблемы гемостазио-логии: под. ред. Б.В.Петровского. 1981. - 253 с.

87. Мищенко В.П., Лобань Г.А., Дубинская Г.М. и др. Перекис-ные механизмы нарушений гемостаза и их роль в патогенезе ряда заболеваний / / Всесоюз. конф. "Актуальные проблемы гемостаза в клинической практике" : Тез. докл. М., 1987. - С. 104-106.

88. Мкртумян A.M. Влияние Компливита на гемокоагуляцион-ные сдвиги, ПОЛ, содержание молекул средней массы и свободных аминокислот в плазме крови при воздействии свинца: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Челябинск, 1994. - 22 с.

89. ЮО.Морозов Д.В., Губань В.И., Новоженов A.B. Эффективность антиоксидантной терапии при пневмонии / / Военно-мед. ж-л. -1996. №5. - С. 49-50.

90. Назаров П.В., Лидер В.А. К механизму мембраностабилизи-рующего действия витаминов К и Е в условиях хронической интоксикации белых крыс фенолом / / Вопр. питания. 1996. - №2. - С 11-15.

91. Нелаева A.A. Клинико-патогенетическое значение состояния клеточных мембран элементов крови у больных инсулинзави-симым сахарным диабетом. Методы коррекции / / Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М., 1997. - 42 с.

92. ЮЗ.Нелаева A.A. О применении антиоксиданта (а-токоферола ацетата) в лечении сахарного диабета / / Пробл. эндокринол. -1993.- 39.- 2.-С. 4.

93. Ю4.Нелаева A.A. Структурно-функциональные нарушения клеточных мембран лимфоцитов у больных инсулинзависимым сахарным диабетом: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Киев, 1989. - 24 с.

94. Обухова Л.К., Эмануэль Н.М. Роль свободнорадикальных реакций окисления в молекулярных механизмах старения живых организмов // Успехи химии. 1983. - вып. 3. - С. 353-372.

95. Юб.Перцов С.С., Балашова Т.С., Кубатиев A.A. и др. Перекис-ное окисление липидов и антиоксидантные ферменты мозга крыс при остром эмоциональном стрессе : влияние интерлейкина Iß / / Бюлл. эксп. биол. и мед. 1995. - №9. - С. 244-247.

96. Петрищев H.H. Тромборезистентность сосудов. Санкт-Петербург, 1994. 129 с.

97. Плавинский С.Л., Кузнецов A.C. Перекисное повреждение липопротеинов высокой плотности и их холестерин-акцепторная функция у пациентов с ишемической болезнью сердца и у здоровых лиц // Физиол. человека. 1997. - №1. - С. 103-107.

98. Полтавец Н.И. Оценка антиоксидантного потенциала тромбоцитов больных системной красной волчанкой / / Биоантиокси-дант. Тюмень. - 1997. - С. 203-204.

99. Ю.Полякова В.А. Патогенетическое обоснование применения антиоксидантов для профилактики тромбогеморрагических нарушений при беременности, родах, в послеродовом и послеоперационном периодах: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М., 1994. - 43 с.

100. Ш.Полякова В.А., Кожевников В.Н., Соболь Т.В. и др. Изменения коагуляционной активности крови под влиянием витаминов А, Е, С, Р после операции кесарева сечения / / Обмен веществ в норме и патологии: Тез. зональной конф. Тюмень, 1992. - С. 91.

101. Полякова В.А., Соловьев В.Г., Галян С.Л. и др. Коррекция гемостаза витаминами А, Е, С и Р при оперативном вмешательстве/ Обмен веществ в норме и патологии: Тез. зональной конференции. Тюмень, 1992. - С. 93.

102. ПЗ.Полякова В.А., Цирук Ю.И. Гемокоагуляция у беременных с гестозом перед и после родоразрешения / / Медико-биологический вестник. 1997. - 1. - С. 6-7.

103. Разбойникова А.Г. Активация перекисного окисления липидов клеточных мембран эритроцитов в биоритмическом аспекте, как пусковой механизм развития гестоза: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Омск, 1992. - 19 с.

104. Пб.Размахина Н.И., Александров Л.С. Особенности перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы при гестозах / / Современные проблемы диагностики и лечения нарушений репродуктивного здоровья женщины: Сб. трудов. Ростов, 1994. - С. 133.

105. Ральченко И.В. Роль тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов в реализации связи между гемостазом и интенсивностью ПОЛ. Автореф. дисс. . докт. биолог. Наук. Уфа, 1998. - 42 с.

106. Ральченко С.А. Влияние поливитаминных комплексов на развитие диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови // Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Тюмень, 1992. - 24 с.

107. Рудько И.А., Балашова Т.С., Кубатиев A.A. и др. Состояние прооксидантной и антиоксидантной систем эритроцита у больных хронической почечной недостаточностью / / Тер. Архив. 1995. -№8. - С. 7-10.

108. Самаль А.Б., Черенкевич С.Н., Хмара Н.Ф. Агрегация тромбоцитов: методы изучения и механизмы. Минск, 1990. - 104 с.

109. Свинец. Всемирная организация здравоохранения. - 1980. -47 с.

110. Селиванова И.В. Роль тромбоцитов в активации ПОЛ тромбином: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Челябинск, 1994. - 24 с.

111. Сергеенко A.A. Содержание стабильных форм простацикли-на, тромбоксана А в крови при диабетической ангиопатии / / Проблемы эндокринологии. 1991. - 34. - 4. - С. 24-26.

112. Скипетров В., Рейман Л., Корешкова Г. Состояние свертывающей и антисвертывающей системы при оварио-менструальном цикле / / Проблемы гематол. и переливания крови. 1964. - 8. - С. 15-17.

113. Скипетров В.П. Тканевая система свертывания крови и тромбогеморрагический синдром в хирургии. Саранск, 1978. - 24 с.

114. Соколов И.М. Влияние антиоксидантной терапии на состояние систем энергообмена и антиоксидантной защиты у больных в остром периоде инфаркта миокарда // Анестезиол. и реанима-тол. 1995. - №5. - С. 21-23.

115. Соловьев В.Г. К механизму защитного действия витаминов А, Е, С и Р при тромбинемии: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. -Челябинск, 1991. 24 с.

116. Соловьев В.Г. Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки в регуляции тромбинемии при активации перекисного окисления липидов: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Челябинск, 1997. - 43 с.

117. Соловьев В.Г., Селиванова И.В., Ельдецова С.Н. и др. Вопросы питания, 1995. 4. - С. 30-32.

118. Таран Ю.П., Шишкина Л.Н., Евсеенко Л.С. и др. Влияние 6-метилурацила на параметры системы регуляции пероксидного окисления липидов при термическом ожоге / / Пат. физиол. и эксп. терапия. 1995. - №1. - С. 40-43.

119. Тонский Я.И., Корда М.М., Клищ И.М. и др. Роль антиок-сидантной ситемы в патогенезе токсического гепатита / / Пат. физиол. и эксп. терапия. 1996. - №2. - С. 43-45.

120. Тюкавкина H.A., Руленко И.А., Колесник Ю.А. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки / / Вопр. питания. 1996. - №2. - С. 33-38.

121. Ушкалова В.Н., Иоанидис Н.В., Деева З.М. и др. Комплексный анализ липидов крови спектрофотометрическим, флуорометри-ческим и кинетическим методами / / Лаб. Дело. 1987. - 6. - С. 446-460.

122. Ушкалова В.Н., Иоанидис Н.В., Кадочникова Г.Д., Деева З.М. Контроль перекисного окисления липидов. Новосибирск: изд-во Новосиб. Ун-та, 1993. - 182 с.

123. Фермилен Ж., Ферстрате М. Гемостаз. М.: Медицина. -1984. - 393 с.

124. Фермилен Ж., Ферстрате М. Тромбозы. М.: Медицина. -1986. 238 с.

125. Хышиктуев Б.С. Антиоксидантные системы организма при бронхолегочной патологии / / Вест. РАМН. 1996. - №9. - С. 2327.

126. Цебржинский О.И. Некоторые новые аспекты антиокси-. дантного статуса / / Межвуз. Сборник "Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза". Полтава, 1993. - С. 183-197.

127. Цебржинский О.И. Некоторые аспекты антиоксидантного статуса / / Межвуз. сборник "Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза". Полтава, 1992.- С. 120-155.

128. Цирук Ю.И. Коррекция витаминами-антиоксидантами гемо-коагуляционных нарушений у беременных с гестозом // Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Омск, 1998. - 22 с.

129. Четверикова Л.К., Иноземцева Л.И. Роль липопероксидации в патогенезе гриппозной инфекции и поиск средств противовирусной защиты // Вестн. РАМН. 1996. - «№3. - С. 37-40.

130. МЗ.Чулкова Т.М. Роль процессов тромбообразования в атеросклерозе / / Вопр. мед. химии. 1989. - №4. - С. 2-8.

131. Шаталина Л.В., Михайлова И.А., Федоров В.В. и др. Пере-кисное окисление липидов и функциональная активность тромбоцитов при гипертрофической кардиомиопатии / / Кардиология. -1996. №5. - С. 55-59.

132. Шафер В.М. Коррекция гемокоагуляционных сдвигов при экспериментальной тромбопластинемии комплексом витаминов А, Е, С, Р и РР: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Челябинск, 1989.- 24 с.

133. Шафер В.М., Ибрагимова С.Н., Галян С.Л. и др. Способ предупреждения гемокоагуляционных осложнений острой гемической гипоксии комплексом витаминов А, Е, С и Р / / Рационализаторское предложение. Тюмень, 1989. - № 91.

134. Шевлюкова Т.П. Гемокоагуляционные сдвиги у больных миомой матки до и после операции, их коррекция витаминами-антиоксидантами: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Томск, 1996.- 24 с

135. Шувалова Е.П., Антонова Т.В., Алексеева Е.А. Значение перекисного окисления липидов в патогенезе лептоспироза и его осложнений / / Тер. архив. 1996. - №11. - С. 38-40.

136. Aarts Р.А.М.М., Bolhuis Р.А., Sakariassen K.S. et al. Red blood cells zice is important for adherence of blood platelets to artery subendothelium // Blood. 1983. - 62. - 1. - P. 214-217.

137. Aítenburg S., Bozza P., Cordeiro R. Et al. Adrenergic modulation of the blood neutrophilia by platelet activating factor in rats // Eur. J. Pharmacol., 1994. 256. - 1. - P. 45-49.

138. Bauer K.A. Management of paatients with herreediraty defects predisposing to thrombosis including pregnant women / / Thromb. Haemost. 1995, Jul., - Vol. 74, №1. - P. 94-100.

139. Belch J.J.F. Platelets and oxygen free radical / / Platelets. -1992. 3. - 4. - P. 175-180.

140. Borzak S., Fuchs C.P., Kraft P.L. e.a. Effect of prior aspirin and anti-ischemic therapy on outcome of patients with unstable angina // Am. J. Cariol. 1998. - 81. - 61. P. 678-681.

141. Brox J.H., Nordoy A. The effect of polyunsaturated fatty acids on endothelial cells and their production of prostacyclin, thromboxane and platelet inhibitory activity / / Thromb. and Haemost. 1983. - 50.- №4. P. 762-767.

142. Bruckdorfer K.R., Jacobson M., Riicve-Evans C. Endothelium-derived relaxing factor, (nitrig oxide), lipoprotein oxidation andatherosclerosis // Biochem. Soc. Trans. 1990. - 118. - 6. - P.1061-1063.

143. Buczynski A., Dziedziczak-Buczynska M., Kedziora J. Et al. Aktywnose SOD-1 oraz stezenie dialdehydu malonowego w krwikach plytkowych u osob z choroba niedokrwiena serca / / Pol. Tyg. Lek. -1989. 44. - 23. - S. 548-550.

144. Burton G.W., Ingold K.U. Vitamin E; Application of the principles of physical organic chemistry to the exploration of oils structire and function / / Acc. Chem. Res. 1986. - Vol. 19. - №7. -P. 194-201.

145. Catella-Lawson F., FitzGerald G.A. Oxidative stress and platelet activation in diabetes mellitus / / Diabetes Res. Clin. Pract. -1996. Suppl. 30. - P. 13-18.

146. Chang C., Bevers E., Comfuries P. et al. Contribution of platelet microparticle formation and dranul secretion to the transbilayer migration of phosphotidylserine / / Blood. 1991. - 78. -10. - P. 395.

147. Darleu-Usmar V.M., Lelchuk R„ O'Lery V.J. et. Al. Oxidation of low-density lipoprotein and macrophage derived foam cells / / Biochem. Soc. Trans. 1990. - 18. - 6. - P. 1064-1066.

148. Davi C., Ciftano L., Averna M. et al. Tromboxan biosynthesis and platelet function in tupe 1 diabetes mellitus / / N. Engl. J. Med. -1993. 25. - P. 1769-1774.

149. De Luca Brunori I., Brunori E., Filippeschi M. Et al. Anticoagulant and antithrombolic activités in humanterm placentas from normal and toxemic women // New Trends Gynaecol, and obstet. 1988. - Vol. 4. - №1. - P. 47-53.

150. Dilberto E.J., Allen P.L. Mechanism ß-hydroxylation semidehydroascorbate as the enzymic oxidation product of ascorbate // J. Biol. Chem. 1981. - Vol. 256. - P. 3385-3387.

151. Dombrowski M.P., Bottoms S.F., Saleh A.A. et al. Third stage of labor: analysis of duration and clinical practice / / Am. J. Obstet. -Gynecol. 1995, Apr. - Vol. 172. - №4. - P. 1279-1284.

152. Ek B., Humble L. Corellation between oxidation of low density lipoproteins and prostacyclin synthesis in cultured smoot muscle cells // Biochem. Pharmacol. 1991. - 41. - 5. - P. 695-699.

153. Elinder L.S., Waldius G. Antioxidants and atherosclerosis progression: unresolved questions / / Curr Opin Lipidol. 1994. - 5. -4./ - P. 265-268.

154. Hansen P.R. The significance of oxidized low density lipoprotein in atherosclerosis / / Ugescr-Laeger / 1996. - 158. - 19. - P. 2706-2710.

155. Faint R.W., Mythen M., Mackie I.J. et al. Platelet aggregation induced by neutrophils in vitro in rediuced in multiple system organ failure // Brit. J. Haematol. 1992. - 80. - Suppl. 1. - P. 10.

156. Jamieson G.A., Okimura T., Hasitz M. Structure and function of platelet glycocalicin // Thromb. and Haemost. 1980. - Vol. 42. -№5. - P. 1673-1678.

157. Kasaikina O.T., Ozhogina O.A. Exploratiry study of ß-carotene autoxidation using nitroxyl radicals // In.: Magnetic resonanse in medicine. 1994. - Vol. 6. - Tokio: Japan Society of Magnetic Resonanse for Life Science.

158. Kitagava Shuji., Kotani K., Kametani F. Inhibitiry mechanism of cyspoleusaturated fatty acid on mobilization: cyclic AMP levels and membrane fluiditud / / Biochim. et Biophis. Acta Mol. Cell. Res. -1990. 1054. - 1. - P. 114-118.

159. Lagarde M., Croset M., Bordet J.C. et. AI. Peroxide dependence of polyunsaturated fatty acid oxygenation in platelets and endothelium // Agents and Action. 1987. - 22. - 3-4. - P. 335-336.

160. Langenstroer P., Pieper G.M. Regulation of spontaneous EDRF release in diabetic rat aaorta by oxygen free radicals / / Amer. J. Phisiol. 1992. - 263. - 1. - P. H257-H265.

161. Lazzari P., Madini G., Zoppi A et. AI. // epidemioligy of fibrinigen in a population aged>40 yers: a cross-sectional study. -Fibrinilysis. 1996. - 10. - Suppl. 1. - P. 16.

162. Lecerf J.M., Luc J., Fruchart J.C. Vitamin E, antioxidants and atherosclerosis // Rev. Med. Interne. 1994. - 15. - 10. - P. 641-649.

163. Livio M., Raitar G., Merini J. Et al. MDA formation in rat platelet-rich plasma // Trhomb. And Haemost. 1980. - 44. - 2. - P. 52-55.

164. Lynch S.M., Morrow J.D., Roberts L.J. et al. Formation on non-cyclooxigenase-derived prostanoids in plasma and low density lipoprotein exposed to oxidative stress in vitro //J. Clin. Invest. -1994. 93. - 3. - P. 998-1004.

165. Marcus A.J. The role of prostaglandins in platelet function / / Progr. Haematol., Vol. 11., New York e.a. 1979. - P. 147-172.

166. Mazzanti L., Faloia E., Rabini R.A. et al. Diabetes mellitus induces red blood cell plasma membrane alterations //J. Clin. Biochem. 1992. - 25. - 1. - P. 41-46.

167. Mitchinson M.J. The new face of atherosclerosis / / Brit. J. Clin. Pract. 1994. - 48. - 3. - P. 149-151.

168. Morita I., Ochi H., Murota S. et al. Effects of peroxides on vascular endothelial cells and platelets / / Med. Biochem. and Chem. 1988. - 2. - 3. - P. 1041-1044.

169. Murarnatsu N., Kondo T. Platelet adhesion onto sulfonated artificial red blood cells //J. Biomed. Mater. Res. 1981. - 15. - 3. -P. 383-392.

170. Ono M., Ithoh C. Cell adhesion molecules on platelet // Rinsho Byori. -1996. Dec; 44(12). - P. 1132-1137.

171. Ono Y., Ratch M., Tsushima S. Changes in platelet aggregation and arachidonate casade during blood sugar control in diabetic patients //J. Jap. Diabet. Soc. 1994. - 32. - 10. - P. 760762.

172. Prager E., Sunder-Plassmann R., Hansmann C. et al. Interaction of CD31 with a heterophilic counterreceptor involved in down-regulation of human T cell responses //J. Exp. Med. 1996. -Jul 1; 184 (1). - P. 41-50.

173. Redman C., Roberts J. Maanagement of pre-eclampsia / / Lancet. 1993. - Vol. 341. - №8858. - P. 1451-1454.

174. Renaud S. Alpha-linoleic acid, platelets lipids and function // Biol. Eff. and Nutr. Essent.: Proc. NATO Adv. Res. Workshop, Belgirate, 1988. N.Y., London, 1989. - P. 263-267.

175. Salonen R., Seppanen K., Kantela M. et al. Relationship of serum selenium and antioxidants to plasma lipoproteins / / Atherosclerosis. 1988. - 70. - 1-2. - P. 155-160.

176. Santoro S., Cunningham L.W. Collagen-mediatedplatelet aggregation // Thromb. and Haemost. 1980. - 43. - 2. - P. 158-162.

177. Savolainen H. Labilization of urebral lysosomes by autologous fraction and a superoxide scander in vitro / / Biochem. And Biophys. Res. Commun. 1979. - 86. - №4. - P. 1222-1226.

178. Selac M.A. Cathepsin G activates platelets in the ptesence of plasma and stimulates phosphatidic acid formations and lysosomal enzyme release // Platelets, 1993. 3. - 2. - P. 85-89.

179. Siess W. Molecular mechanisms of platelet activation / / Physiol. Rev. 1989. - 69. - №1. - P. 158-178.

180. Snyder E.L., Home W.C., Napychanc P. et al. Calcium-dependent proteolysis of actin during storage of platelet concentrates // Blood. 1989. - 73. - 5. - P. 1380-1385.

181. Stein Y., Stein O. Lipoprotein interaction with vascular tissue / / Atherosclerosis 8: Proc. 8th Int. Symp., Rome, 1988. Amsterdam etc. 1989. - P. 25-32.

182. Steinberg D. Metabolism modified lipoproteins by cells of the artery wall // Atherosclerosis 8: Proc. 8th Int. Symp., Rome, 1988. -Amsterdam etc. 1989. P. 365-367.

183. Steinberg D. Oxidative modification of LDL: mechanism and consequences //J. Cell. Biochem. 1991. - Suppl. 15c. - P. 204-204.

184. Steiner M. Vitamin E: more than antioxidant // Clin. Cardiol., 1993. 16. - 4. - P. 1-16.

185. Suidan H.S., Clemetson K.J., Brown-Luedi M., et al. The serine protease qranzyme A does not induce platelet aggregation but inhibits responses triqqered by thrombin // Biochem. J. 1996. -May 1:315 (Pt 3): P. 939-945.

186. Tomeo A.C., Geller M., Watkins T.R. et al. Antioxidant effects of tocotrienols in patients with hyperlipidemia and carotid stenosis / / Lipids. 1995. - 30. - 12. - P. 1179-1183.

187. Tsutsui M., Tamasawa A., Boku A. et al. // РЖБ, Реф. 1 M 2065. J. Jap. Diabet. Soc. 1992. - 35. - 4. - P. 309-315.

188. Valles J., Santos M.T., Aznar J. et al. Erytrocytes Methabolically enhance collagen-induced platelet responsinevess via increased thromboxane production, adenosine diphosphate release, and reruitment // Blood. 1991. - 78. - 1. - P. 154-162.

189. Vericel E., Polette A., Lemaitre M. Etat pro- and antioxidant des plaquettes sanguines humaines. С. R. Seaces Soc. Biol., 1995. -189. 3. - P. 476.

190. Vitoux D., Chappuis P., Arnaud J. et al. Selenium, glutationperoxydase, peroxides and platelet function / / Ann. Biol. Clin. Paris. 1996. - 54. - 5. - P. 181-187.

191. Wachnik A., Biro O., Biro L. Hepatic lipid peroxidation and trace elements-nutritional status in streptozotocin induced diabetic rats 77Z. Ernahrunswiss. 1992. - Vol. 31, M. 2. - P. 103-109.

192. Wangala P., Riethmuller D., Nguyen S., Maillet R., Colette C. Les hemorragies meconnues de laa delivrance / / Rev. Fr. Gynecol.-Obstet. 1995, Apr.-May. - Vol. 90. - №4. - P. 215-219.

193. White C.R., Brock T.A., Chang L.Y. et al. Superoxide and peroxynintine in atherosclerosis / / Proc. Natl. Acad. Sei USA. -1994. 91. - 3. - 1. - P. 55-62.

194. Yuan Y., Schoenwaelder S.M., Salem H.H., Jackson S.P. The bioactive phospholipid, lysophosphatidylcholine, induces cellular effects via G-protein-dependent activation of adenylyl cyclase // J. Biol. Chem. 1996. - Oct. 25; 271 (43): P. 27090-27098.

195. Zhen Z.Y., Guo Y.C., Zyang Z.G., Yan L., Ge P.J., Jin H.M. Experimental study on microthrombi and myocardial injuries // Microvasc Res. 1996. - 51 (1): P. 99-107.- 132

196. Zwaal R.F.A., Rosing J., Tans G. E.a. Topological and kinetic aspects of phospholipids in blood coagulation / / The regulation of coagulation. Amsterdam, 1980. - P. 95 -115.

Информация о работе

Зарубина, Ирина Анатольевна
кандидата биологических наук
Тюмень, 1998
ВАК 03.00.04

Диссертация

Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зарубина, Ирина Анатольевна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов"

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Зарубина, Ирина Анатольевна

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зарубина, Ирина Анатольевна, Тюмень

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Связь перекисного окисления липидов с агрегационной активностью тромбоцитов
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия