Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структурно-функциональные изменения компонентов системы гемостаза при воздействии ультразвукового излучения

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Структурно-функциональные изменения компонентов системы гемостаза при воздействии ультразвукового излучения"

СИМФЕРОПОЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ии. И.В-ФРУНЗЕ

На правах рукописи ВРОНСКАЯ Алла Андреевна

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОМПОНЕНТОВ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИЙ УЛЬТРАЗВУКОВОГО ИЗЛУЧЕНИЯ

03-00.13 - физиология человека и животных

Автореферат

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

/ 7 (¡ЮН 1383 РТ6 ОД - 7 той «93

Симферополь ~ 1993

Работа выполнена на кафедре биофизики Крымского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института

Научный руководитель - доктор биологических наук

профессор Б-ф. Русяев

Официальные оппоненты :

доктор медицинских наук, профессор В.П. Мищенко кандидат биологических наук, доцент В.Б. Макеев

Ведущее учреждением : Запорожский медицинский

институт

Зашита состоится " июня 1993 г. в "\Hi$" часов

на заседании специализированного Совета К 068.43.01 в Симферопольском государственной университете ин« И.В.фрунзв (333036, Крым, Симферополь, ул. Ялтинская 1 4 5

i

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Симферопольского Госуниверситета

Автореферат разослан " Ч " мая 1993 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, доктор биологических наук профессор

Н.А. Темурьянц

- о -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ кт у а ль и ость проблемы. К числу наибо-ве актуальных проблем современной медицины относятся диаг-□стика,профилактика и лечение сердечно-сосудистых заболвва-ий. По данннм ВОЗ среди ссисзних причин летальных исходов ри нарушении кровообращения особенна часта выступают пато-2ннкэ реакции системы геиостаза.

Система геиостаза обладает высокой чувствительностью к зздекстви» Физических Факторов (электроиагнитного, нагнит-эгп и электрического поля, оптического, ультрафиолетового злучений) (Пятницкий, 1991; Гриненко и соавт., 1992; Улаи;ик, 392 5 Prate's: , 19Б9? Heath и соавт-, 19905 Rani Mohan и завт.,1991).С одной стпрскы, такая ёиптропиоать провоциру-г развитие патологических генокоагулкцианкых реакций при вменении физического рЕжима биосферы (Сидшсин,19915 7е-зрьгшц, 19925 Ксзинец, 1993? Kandier и соазт., 19915 Lisie-ics Jersy, 1991)j а с другой - Физические воздействия при-шгнатся для коррекции системы гемостаза: свертывающей спс-збнссти крови, процессов ретракции и фибринолиза, реологи-зских c3gi4ctb крови, КОЛИЧЕСТВа форменных элементов крови 1алолЕТкина, 19В35 Богданов;и соавт., 19395 Потвхина и cost., 1992 5Русяев, 19В0-19925 Bilchter, Seger Jarjies, 19915 dar и соавт-,1991).

Изучение биологических эффектов и биофизических неханиз-!в их реализации при использовании Физических полей и из-1ЧЕНИЙ способствовало Формировании принципиально новых набавлений в геностазиологии! гравитационной хирургии крови 'аврилов, 19ВЗ), квантовой гемотерапии (Иваненко, Титарен-W 19905 Самойлова и соавт., 19905 Снапое+ 19915 СИ jzen-nbt и соавт-, 1991), пктразазальной лазерной хирургии

- 4 -

(Ashley Siman и саавт., 1991; Geschwind, 1991 ).

Применение эффективных средств защиты ат патологических проявлений» профилактика и лечение патологических реакций, повышение эффективности терапевтического использования Физических Факторов требуют детального исследования биологических эффектов и механизмов их взаимодействия с компонентами системы свертывания крови. И если для электрических, магнитных и электромагнитных полей подобные сведения, хотя и в ограниченная объеме встречаются в периодических изданиях, то для ультразвукового излучения таких данных явно недостаточна. Ине!зтся лииь Фрагментарные наблюдения, в которых обнаружена изменение коагуляционных свойств тромбоцитов , денатурирующее влияние на Фибриноген при высоких ин-тенсивноптях (Балашова и соавт», 197В? Banbarg, 1978), благоприятное влияние ультразвука и фанафореза на кровообращение и обменные процессы в тканях (Марсачиывилли и саавт-, 1983", Баъдсевич и соавт 19ВВ Саврасов и саавт., 19Вв; ñlnard и саавт., 19В7).

Ограниченность данных о биологических эффектах не позволяет рассмотреть и теоретически описать возможные биофизические механизмы взаимодействия ультразвукового излучения со структурными уровнями организма, обосновать выбор интен-сивностей для диагностического и терапевтического применения. Именно поэтому изучение биологических эффектов и механизмов действия ультразвука на компоненты системы гемостаза представляют достаточго актуальную проблему, имеющую вааное теоретическое и больиое практическое значение. Целью исследования явилось комплексное изучение биологических реакций молекулярного, клеточного и тканевого звеньев системы гемостаза при воздействии ультра-

лсозпга кэлдчвния, анализ $иапологичссхпх и Знафязичвсгсих саннзмпв его взаииодействня с бмологаческнпп субстратами, а д з ч и и с с л е д о в а и и я. 3 соответствии о пз-азлянпой цэлья з рз£сте рвались задачи по изучения влиа-э ультразвукового излучении различных интепсиз-зтей яэ:

- процесс гакекеггдлпцки я £::£р:;нол:?за»

- £:шдсгкчеспсие звойстза и каггуляцкеникэ реакции ?рск5о-цитзз (згрегац:::г кроплкъзс пластинок, раакчни освобождения Факторов генскоггулггдии. рзтракцгкэ крпзпизгз сгустка? ультраструктуру) 5

- биологические свойства г: к с у л глгл с инк т? раакции эритроцитов (ГЕнал::тичвсну:э " яехзджч&екдя ргзпатснткасть ? оовебоздекив Факторов гакспсоЕгдлпцш 1 изинканив Форкы» Рзолсгкческив характзристкки).

- пЕракиснпз скислвние лмзидпв и его роль в нзханизиах биологических реакций отютзпм гвиостазз»

- пзрзичшгй гемостаз«

з н □ з н ы е п п л о к а и я я, выносимые на з щ и т у • 1 • Ультразвуковое излучения стимулирует началъ-? этапы свЕртываиия крези и угизтает образование оконча-!ьисго Фибрина.

2. Реакция нолвкулярного звена гвнакоагуляции ! дльтразз^иовпи облучении пропзияетоя в ппзьпгэаии трон-гласткчЕской я анткгепариназой способности плазнн бедной :мбсцк?аип, з появлении растввряних кокплексов Фибрин-ма-?ара и продуктов рзгагэплвния фибриногена* в дгнвтекгш зцесоа поляквризацни Фибрина при всех дозах облучения«

3- Улътраззуксвсв и злу чем:: с сткиулируат первом >тару» Фазу агрегации тромбоцитов» реакции асвсбаэгдйния

троибопластических и антигепаркновых соединений угнетает ретракции крпзянпго сгустка. ^уккциональиыа изменения сопровождаются ноди1?шсецк2й у л ь т р а с т р у к т у р и: упакь'-ганиен размера и числа алы?а-гран«.л 1 увеличением количества псевдоподии.

4. Ультразвуковое излучение уианыгает кислотную резистентность и местность кнкбран эритроцитов пропорционально интенсивности! стимулирует осзобопдешзе тронбояласти-чеосих и антигепаринавых соединений, способствует увеличении размеров клеток.

5- Изучаемый физический фактор вызывает накопление продуктов перекисиого окисления липидаз в ненбраная эритроцитов.При высоких интенсизностях этот эффект нарастает. Научная новизна и практическая з н а ч и и □ с т ь исследования» Б хода проза-денной работы наки разработан приоритетный кандухтокатри-ческий катод и устройство дли исследования ретракции кровяного сгустка (Авторсксэ свидетельство 1377700» основанные на биофизическом кадэлирссании травкирзвапного сосуда» Впервые вылвлена высокая чувствительность молекулярного к клеточного ззЕ1шез системы ГЕиастаза к ультразвуковоку о£лучан;из. В частности1 на молекулярном уровне особенно высокой чувствительность*;! сбладаэт гапокоагуляционнке Факторы, участвупцка в первой Фазе свертывания (образования протронёиназя) х! ^армировании окончательного Фибрина.

Впервые получены экспериментальные данные| свидетельствующие о тон) что ультразвуковое излучение модифицирует лппо-пратЕиновуи матрицу зритроцитарных намбран! уменьшает их жесткость, способствует освобождении! соединений с троийопла-стической активность»» увеличивает диапетр эритроцитов? вызывает сФвруляцим и разрушение клеток-

Впервые установлена что ультразвуковое излучение сталирует индуцированную агрегации кровяных пластинок, реак-■м освобождения интерклеточных Факторов гемокоагуляции, нетает ретракции кровяного сгустка, стимулирует первичный 'мостаз, вызывает ультраструктурные перестройки тромбоцита-!ых органелл.

Впервые высказано предположение) что ведущий механизмом, ¡еспечиванпднм выявленные биологические эффекты, является >рекиснае окисление лмпидоз-

Полученные в настоящем исследовании данные о зависи-1сти выраженности Физиологических и биофизических реакций • интенсивности ультразвукового излучения позволяют обос-)вать дозы для физиотерапевтического использования мехаии-зского Фактора в клинической практике, сссбенно при тромбо-!болических состояниях- Выявленная высокая чувствительность шпонентного гемокоагуляционного процесса и особенно тром-щитов позволяет использовать ультразвуковое излучение для )нкциональной диагностики праморбитных нарушений клеточного !Ена системы гемостаза.

Результаты проведенных исследований, их теоретический зализ используются в учебном процессе на кафедре биофизи-! Крыммединститута, на кафедре физиологии человека и 1Вотных и биофизики Симферопольского Госуниверситета, а .«сив могут быть рекомендованы для внедрения в учебный про-;сс на аналогичных кафедрах других ВУЗов.

Диссертация выполнена в соответствии с координационнными чанами НИР Министерства охраны здоровья Украины (19В6 -?90 гг■),Крыммединститута по проблеме 0.69.01.06.11.03.Н1, 1ФР темы 5В-0007 "Разработка и внедрение в практику новых шмато-физиологических комплексов с целью повышения эф-

- В -

Фективности лечения и профилактики гипертонической болезни и начальных проявлений недостаточности нозгавогс кровообращения атеросклеротического генеза" ( 19В6 - 1990).-Апробация работы- Основные положения диссертации долоаены на : научных конференциях профессорско-преподавательского состава Кркнмединститута и Симферопольского Гссуниверситета (19Б7 - 1993гг.)! совместном заседании 5 Пленума Украинского республиканского правления БНМТО и 4 Пленума Потавского областного правления БНМТО и областной научно-практической конференции: "Роль медицинской техники в интенсификации лечебно-диагностического процесса" (Полтава, 1937); на межвузовской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов: "физиология и патология пере-кисиого окисления липидоз,гемостаза и иммунногенеза" (Полтава, 1990) ? на 13 съезде Украинского Физиологического общества им. И.П- Павлова: "Развитие Физиологии в Украинской ССР за 19В1 - 1990 гг." (Карьков, 1990).

Публикации - По результатам исследований, соыедиих в диссертации опубликованы пять работ .

Обген и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав,выводов и списка цитированной литературы. Работа изложена на 120 страницах, содержит 18 таблиц и 15 рисунков. Список литературы включает 307 наименований,из них 140 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования. Экспериментальная часть работы выполнена на образцах крови, полученной у 170 практически здоровых лиц в возрасте от 18

) 40 лет. Объектами исследования служили^ нитратная кровь,

1азма с низким содержанием тромбоцитов, взвесь эритроцитов

изотоническом солевом растворе (0.05*/, НаС1) ■

В качестве источника ультразвукового излучения применялся

■андарткнй Физиотерапевтический генератор УЗТ-101, излучан-

й непрерывно на частоте ВВО кГц в диапазоне интенсивностей з

05 - 1-0 Вт/см -Длительность воздействия соответствовала непринятой Физиотерапевтической экспозиции з пределах 5 -минут•

Троибопластические, аитихоагулянтныЕ, Фибриназные и фиб-нолитические свойства контрольных и экспериментальных об-зцов крови, плазмы с низким м высоким содержанием тромбо-тов, реакции освобождения факторов гемскоагуляции эрмтро-таии сценивали с памоцыэ комплекса биохимических тестов ' энвни рекальцификацки <ВегдегЬоГ, Р.ска, 1954) ,трокбкковога змени (5з1ггаа1, 1957)| времени потребления протромбина этовциксва, Федорова,1961)? лизиса эуглобулинов (Кокагзук, !ш< , 1954) фибриназной активности (Балуда и соавт., 30); концентрации Фибриногена (Рутберг,1961)• Для выявления продуктов паракоагуляции в контрольных и еткых субстратах проводили этаноловый тест <1пдгага и со-1902).

Свертиваивди способность цельней крови,плазиы с высоким низким содержанием тромбоцитов посла рекалъцификации суб-1атов регистрировали на анализаторе гемокоагуляции :М-01 и коагулографе Н-334- Контрольные и опытные тромбо-стсграикы и электрскоагулограмкы оценивали по общеприня-методике (Пинкус ,1972 ¡.Якунин, 1973| Балуда и со., 19В0).

Исследование агрегации тромбоцитов проводили фотоиетри-

ческим методом Вага (1962) в модификации В.ф. РуояЕва (193В). Индукторами агрегации служили адреналин и АДФ, изготовленные заводом химраактивов "Ренал" (Будапешт, Венгрия).

Морфологические особенности тромбоцитов • до к после экспериментального воздействия изучали с помощью электронного микроскопа УЭМВ-ЮОК У41 , а затЕМ ультраструктурныа изменения оценивали на электрошшграмках по методике А-Кэма и соавт. (1958).

Устойчивость эритроцитов в присутствии соляной кислоты определяли с помощью Фотометра ЮрК-З-УХА-4-2 (Клац и соавт., 1966), а перекиануи резистентность эритроцитов па методу йгера (Спиричев и соавт«, 1979).

Изменение супвроксиддисвутазной активности (СОД) крови изучали па методу О-С-Брусова и соавт- (1976).

Количество эритроцитов до и после воздействия ультразвука подсчитывали в камере Горяева при увеличении ок.10 х об.30 на микроскопе БИОЛАМ (Грибова, 1979). Диаметр контрольных к опытных эритроцитов измеряли с поиощьк скуляр-никрометра при увеличении ак-10 х об-ЗО в камере Горяева (Гольдберг и соавт.,1980).

Для изучения реактивности тканевого звена системы гемостаза регистрировали время кровотечения по Дуке (1910).

Механические свойства интакткых и опытных эритроцитов определяли с поиощьн электроседиментационного индекса (Ру-сяев, Чернов, 19В7), в основе которого леаит измерение электрического сопротивления крови е процессе оседания клеток в поле инерционных пил- ,

Процесс оседания эритроцитов оценивали с помощью элек-траседиментационного индекса: В1 = (Изо - 13а)/ Р.а ,

! Да - иачаль*;-» сопраткслеикв субстрата; Rao - сспро-лснйй субЬтрата ".spaa 30 пандт центриздгярозй'пш • Эластичность яймбран двфсрякруекых эритрпцптез характа-озали яндэксса релаксации! 02 = (Нсо - Р.чо)/ Пчо , Нчо - сопротивление одбстрата через 10 яикят после пк-чэлия центрифуги■

Зроцосг. ретракции кровяного сгустка регистрировали d строднзй какарв < Рзсявз , Врспсяап» 1987) с ппяоадз глк'гоиетра РУ-8Е-1 на потбициояетрв КСП-4.

яолдчвннкэ экспвриивн^эльиив результаты ггадзергну-¡татиптячвекой обработке для связанных и iJECsnoatnnax рдений. Достоверность ивжду кентрплъкк^'л и спыгмнп:: кип определили по крятврки Стъйдвнта (Гублпр, 1990). з ч л ь т а т ы и с с л е д о п а и и я и и х с g ж дани а» В1!ргггмисстъ коагцлпшкшкмх едзягез э ультрааз'^ссзсго аблдчяшип иесит ^sct-п-:й характер п зкт ат ого янтвксизиаати. На начальных этапах евврткза-кропи зкяпляагся стиядляруггтдав действие кссдедуексга jscKcra фактора, зыражеикасть кстарсга возрастает па дзеличвнкя дозы ультразвука. Аналогичные эдоехтм наб-:и Г.В. Христолибсаа (1972), А-А. Иалалезткипа (1983), юнена, А В:1ла:'ял?с, 1972; Д.В. Подольская ( 1972) и др. •адии образования скснчатвльксго »иёрина проявляется sikssb действие ультразвука. Как пскаекзст акалиа оэластсграиныi в епктккх субстратах укенызается ска-о^разования «кбрина, эластичность, амплитуда ратрак-•ерпвзкего сгустка-

талъпсв изучение кпагулзцяанкых свойств бестрскбоцит-чазпи показалоf что '¿льтравочкозеа излучение сткпдли-збразосанкв протроибмназн. На тронбоэластограинах зкпе-

риментальных образца:: унвкъиается время реакции <Ш и позы-иавтся скорость свертывания (параметр К). В результате проведанных биохимических тестов выявлено уменьшение вренени рекалъцификации, траибинсвого времени, повышение утилизации протромбина - Эти данные свидетельствуют о возрастании троибоплэстической к антигепариновон способности плазмы бедкой тромбоцитами- Обращает на себя внимание то, что

о

излучение интенсивностью 0.2 Вт/сн является пороговым. С повышением интенсивности ультразвука процент отклонения опытных данных по сравнении с контролем увеличивается. В стадии образования и стабилизации Фибринового сгустка проявляется угнетающее действие ультразвука. Об этеи свидетельствует достоверное уненъьгекие показателя эластичности сгустка (Е) на тромбозластогракме, угнетение фмбриназнон активности и снижение количества образованного Фибрина.

Положительный этаиодовый тест в экспериментальной плазме указызает на появление растворимых комплексов фибрин-ионана-ра с продуктами расщепления Фибриногена. Полученные данные позволяют заключить, что ультразвуковое излучение способно модифицировать молекулы прокоагулпнтов к ингибиторов гемо-коагуляции.

По всей видимости, сдвиговые напряжения в гиперакустическом поле вызывают деформацию и деструкцию Факторов ХП, X, П, активация которых связана с процессами отщепления Фрагментов от этих полимеров• Аналогичным механизмом следует объяснить трансформацию молекул Фибриногена. Убедительные доводом в пользу рассматриваемого механизма могут служить наблюдения, в которых обнаружена появление Фибрян-конопаров при высоких скоростях сдвига потока крови ('Г^Ьигд Рип и соавт-, 1991 ). По «нению авторов, эти данные свидетельству-

- lo -

eût о наруланиа поляаернзацяи Фибрян-язнохЕра • Еоли активация прсзкоагулпнтоз связана а рпс-гэплэнийй биополимера» ка:с это имязт Rearo при обтном протекания прпцэпса гкмсвсоагу-

лпции, то в здьтраавутсзпса псде катгеитрацип активного фермента koset возрастать• Поэтску птимулпрушдЕа влияние ультразвука на образованна пратрамбиназм я тромбина а плазма с низким содержанием тромбоцитсв следует объяснить Фрагментацией прокоагулянтоз, дчастодждах з абрааазеиии пра-троибкнааы. Именно этим ияхапизве» ой-ьяснпэтсп попираний тромбопластическсй, сниаггткга антнгепаринозей активнее?» а увеличение скорости абргепзгнкя фибрина, выявляем::" на транбоэлзстсграммах. На исключено, что ультразвук способствует появления набольшего количества тромбина а результате деструкции молекулк протромбина. Кпсзенннп подтврряде-нксп такого сьзгсда коза? служить изкенэнкэ Фориы кинетических кривых» получянпих с псясиыэ графического диФФерзн-цирозания трснбоэяастогргип • Экспоненциальная зависимость скорости посла экспериментального пппдпйствия азидатзлъотзу-ET о релаксационном характера аёраапзгпип фибрина,когда этот показатель достигает наксяаума на начальных этапах процесса.

Онязлакксэ в h-t-hîx экспериментах кнгибировзннэ Фпбрнпааы еце больна угнетает Формирование кпрептзорикого фибрина, йаруевниэ процесса полимеризации «яёрииа долина подавлять ретракции креапнаго сгустка » что обнаружена нами з пзедэ-духвдга опытах. Аналсгичкке представления на механизм зез-дэяствиа ультразвукового излучения рзздэдгазт другие иссле-дазэтали Ольпкиар, 1973,* Салсйьсз» 2900? Ггпд ¡lasaba а ссзвт., 1977), в работах которых выявлено иадв1>:гдяр!д;г;эа вдкякиэ ультразвука на активность ферментов-

При исследовании контрольных и экспериментальных трон-

бсцитов натз установлено, что ультразвуковое излучение изменяет структуру и яушсцив кровяных пластинок прспорцио-нально интенсивности, начиная с 0-05 Вт/пи

Облучение плаз:ш богатой тропбоцитаки способствует со-краквшш врепени реакции (К), повыиенпгз скорости свертывания (К), уненьиании константы спиерезпса (С) ка трокбоэласто-грашах. Графическое диФФервнцкрованае трокбзэластсгра^и-ческих кривых выявляет увеличение скорсстп форнпрзвашш Фибрина после ультразвукового воздействия.

При этой отпечается изменение «горны кривей, которая на экспериментальных графиках выро:-::дается е экспоненту. Биохимический анализ подтверждает результаты трсмбоэластогра-Фичепкого исследования. Более вкраяеинав поаькаиив тронбо-пластпческой и антигепаринзвой способности исследуеиых субстратов по сравнение с реакцией "бестрохбоциткой плаз-кн" , на паи взгляд, следует объяснить стимуляцией ультразвуковые излучение;-! реакции освобождения тропбпцитарных факторов генскоагуляцкя (Факторов 3 и 4). Здесь укестно отпетить, что ШЗпеез и соавт. (197В) наблюдали

оссоёоадвнив из тромбоцитов бета-троибоглобулина и фактора 4 после ультразвукового облучения.

При изучении йдф-индуцированной агрегации контрольных и опытных тромбоцитов установлено, что ультразвуковое облучение сильнее стииулирувт 1-ю фазу агрегации при интенсивности 2

0.2 - 0.4 Вт/сп^ , вторая фаза процесса активируется в неныган степами•

Обнаруженные кани биологические эффекты объясняются способность» ультразвукового излучения модифицировать Функциональные свойства тронбоцитаркых мембран, что проявляется в повышении чувствительности рецепторного аппарата к воздей-

»ию экзогенного индуктора агрегации, а такке в стимуляции мления тромбоцитарних Факторов гекокоагуляции и эндсген-: агрегантов- Вполне вероятно, что механическое воздвй-ше активирует тромбоциты в результате Формирования зстагландинов, которые образуются из липидов в ходе гкти-И1И фосфолипазы ( Аигзпез и соавт-, 1984). Мобилизация нсидоновой кислоты из мембран и образование эндоперекисей зсобствует появлению тромбоксана А2, который стимулирует зегацкзэ и реакцию освобождения Фактороз гемскоагуляции из звяных пластинок ■

Анализ электронно-микроскопических фотографий позволяет сличить, что изменение внутренней структуры кровяных 1стинок после ультраззукового облучвнип обусловлено его здействмен на клеточные мембраны. Зтст вывод подтверждала образованием в экспериментальных тромбоцитах большего зичества псевдоподии3 причем их число возрастает прспср-знальио увеличению дозы облучения- Во-вторых, ультраззу-5сэ излучение способствует уменьшению диаметра и коли-зтва альфа-гранул. Неконец, индекс сферичности <откоыание гениального к минимальному диаметру тромбоцитов) увеличился достоверно при всех интенсмпнсстях-В наиих экспериментах выявлен различный харазстер трсм-ситаркых реакций в зависимости от дозы ультразвукового ¡учения. При интенсивности ультразвукового излучения )5 и 0.4 Вт/см наблюдается специфическая реакция

¡нбоцитов! уменьиается размер и число альфа-гранул, ¡езавт цитоскелет, увеличивается число псевдоподии. 1 морфологические изменения следует расценивать как |ультат активации кровяных пластинок, что подтверждается ¡ными биохимического и инструментального исследования, в

котором выявлена стимуляция процессов агрегации и освобождения биологически активных соединений. При интенсивности 1•О Вт/си происходит разрушение морфологических компонентов тромбоцитов. Изменение Функциональных сзойств и структуры тромбоцитов при механических воздействиях наблюдали и другие исследователи. Так, Е. Bamborg (1978) сообщает, что механическое встряхивание суспензии кровяных пластинок вызывает изменение Формы тромбоцитов, а К. Yu Sinraon и соавт., (1979) обраружил повышение агрегирующей и коагулирующей активности при воздействии на суспензию кровяных: пластинок ооцилляторного потока-

В наблюдениях , проведенных in vivo, нами установлено, что ультразвуковое излучение ускоряет первичный гемостаз. Длительность кровотечения уменьшается пропорционально интенсивности Физического Фактора, а при 1.0 Вт/см ^ сокращается в среднем на 40У, . Очевидна, полученные результаты объясняются выявленной in vitro активацией тромбоцитов. Однако в этом гемостатическок процессе нельзя исключить вазоконстрккторныЕ механизмы, а Т5кк:е освобождение из сосудистой стенки Факторов гемокоагуляции и индукторов агрегации кровяных пластинок.

В следующей серии наблюдений нами установлено, что ультразвуковое излучение изменяет биологические и Фуикцио-ральные свойства эритроцитов, стимулирует освобождение из них веществ, усиливающих тромбопластическун и антигепариновую способность субстратной плазмы. Этот вывод подтверждается сокращением времени рекальцификации, тромбинового времени и повышением потребления протромбина ■ Такие как и в предыдущих наблюдениях, обнаруженный эффект усиливается при увеличении интенсивности ультразвука«Результаты настоя-

щей серии наблюдений свидетельствуют о существовании общей закономерности изменения гекокоагуляционных свойств Форменных элементов крови, подвергнутых ультразвуковому облучению-Как тромбоциты, так и эритроциты после экспериментального воздействия освобождают биологически активные соединения, ускоряющие гемокоагулящиз. Обнаруженные эффекты объясняются способностью ультразвукозсго излучения изменять функциональные свойстза мембран зритроцитпз. А» Иа1;га1 (1991) в своем обзоре сообщает о том, что мембрана эритроцитов в силу своих анизотропных реологических сзойстз обладает очень малой стойкостью к сдвиговой деформации.

При изучении деформируемости эритроцитов кондуктоиетри-ческим методом нами установлено, что индекс седиментации и релаксации опытных клеток уменьшается по мэре увеличения интенсивности облучения ( рис. 1). Эти результаты позволяют заключить, что освобождение тромбопластических соединений из эритроцитов приводит к изменении структуры липсяротеиновой 1атрицм мембраны и уменьшении ее упругих свойств. По гнени» И.А- Владимирова и соавт. (1971) механическое запряженив способно модифицировать мембранные липиды и выз-гать конформационные нарушения в фосфолипидах и липопро-•еинавьпс комплексах-

Снижение кислотной резистентности эрмтроцитоз, выявленное ; последующих опытах? свидетельствует о появлении в изучавши суспензии нестойких эритроцитов, легко разрушающихся в рисутствии соляной кислоты- Аналогичные эффекты при механи-еских воздействиях наблзздали другие исследователи (Ыепоти-овский и соавт., 15В0? Резничензга, 1972 Брагинская, 1979).

С помощью светозой микроскопии нами установлено, что оличество облученных эритроцитов существенно уменьшается, а

- 1В -

диаметр неразрушенных эритроцитов увеличивается достоверно по сравнении с контролен. В этих экспериментах вдалась доказать, что плазма крови оказывает протекторное влияние на эритроциты, повергнутые ультразвуковому воздействии• Если

процент разрушения эритроцитов при минимальной интенсив-о

ности 0-03 Вт/см в изотоническом солевом растворе Нас! составляет , то в плазме этот показатель равен 5-7^.

Защитное действие биополимеров отмечают Ь. Кос! 1 сек и соавт. (1990)- В проведенных экспериментах они наблюдали структурные изменения в мембранах эритроцитов под действием напряжения сдвига в жидкой среде, лишенной белка, в то время как в плазме и сызоротке подобные морфологические изменения отсутствовали-

Результаты проведенных нами экспериментов, особенно по защитному влиянию плазменных белков на эритроциты заставляют обратить внимание на возможность ультразвуковой стимуляции перекионого окисления липидов-. Интерес к этой проблеме определяется такав и тем 1 что многие исследователи обнаруживали в озвучиваемых растворах белка перекисные радикалы (Эльпинер, 15?3; Сейфутдинов, Красникова, 1989? Рудкк, Ярема, 1991).

Поскольку антиоксидантная защита эритроцитов в организме обеспечивается рядом Ферментов, среди которых определяющую роль играет супероксиддисмутаза, возможно по изменению ее активности судить об уровне перекисного окисления липидов. В ходе проводимых экспериментов нам удалось установить, что при малых интенсивностях ультразвукового облучения активность суперсксиддисмутазы крови незначительно повышается-(рис. 2)-Это указывает на активацию антиоксидантной системы, потому,что уже при палых интенсивностях развивается пв-

leîciîcwoG окисление лмпндсв ( Рудкк, Крена, 1991). Начинал : интенсивности 0»7 Вт/сиперззснснон окисление липидоа ?ВЕЛичийаЕтап настолько, что зинссть гктистсислитэлъиых ms--гакияков исчерпываетсяt активность пдпэрснскддиокутасы пинается по сравнению с контролем, и и кз?«ёр?.иах зритрсцнтоз ¡акапливаются продутстн перезспсногп скислекил.

В следующем серии наблюдений исследовали переименую резистентность эритрсцитсз, подвергнутых ультразвуковому об-!учеиию. Как показывает анализ полученных результатов рис- 2 ), изучаемый показатель уменьшается особенна при :нтенсиз:-:зоти 0.7 и 1.0 Вт/см •

Результаты проведанного ксслэдсзания позволяют заклю-!ять? что кояпскенты системы гемостаза (ректоры гаискпагу-:яции» Форменные элемента крови) сбладзкт пысгосай чувстзя-'ельностыз к ультразвуковому излучаип;. Экспериментальное ^лучение изучаемых субстргтов крези, плазмы с носким и зы-1СКПМ содержанием тромбоцитов, суспензии эритроцитов , отполирует начальные этапы гжскоггулЕЦКпнксго процесса (прэ-:м«1£эвтвенно Формирование кротраибянаса) , индуцированную грегзцию троибсцитоз, модифицирует их ультрэструктуру, •сидиваэт освобождение Факторов овартнзания крози из <?ср-енкых элементов, снижает рш-ндиссть я кислотную рэзистен-кссть эритроцитов, способствует увеличении их размеров, хтявирувт процесс перакиснсго сявслания лмпидоз, ускоряет врвичнкЯ гэксстаз. Вместе с тза ультраппукзпеэ излучение ксквзет Фрагментацию молекул аабрйиоггла, ннгиёируат Фкб-пиазную активность, нарушает процесс Фориировзиип*окзнча-вльного фибрина. 1'кражеикссть обнаруженных 6йологпчйс?сйх ФФшктов пропорциональна интенсивности ультразвукового изучения, прпиекяейсго в Физиотерапевтической практике.

- 20 -

В Ы В 0 Д Ы

1. Установлено, что ультразвуковое излучение усиливает тронбопластические, антигепариновыа свойства крови, плазмы богатой и бедной тромбоцитами, уиеньиает Фибри-назнуп способность,, количество образованного Фибрина, способствует появлении в крови растворимых комплексов Фибрин-вононера. Выраженность коагуляциоиных реакций пропорциональны интенсивности используемого воздействия.

2> Изучаемый Физический оактор активирует тромбоциты, что проявляется в стимуляции индуцирозанной агрегации, реакции освобождения Факторов гемокоагуляции (Факторов 3 и 4). физиологические реакции тромбоцитов сопровождается закономерными ультраструктурными изменениями¡ на злектро-нограммах выявлено увеличение количества псевдоподии, умекьиаппг размеров альфа-гранул, нарушение Формы кровяных пластинок.

3. С памоуыз разработанного нами приоритетного кондуктометрического метода исследования ретракции кровяного сгустка (A.C. Ы Í3777Q0) установлено, что ультразвуковоа излучение угнетает механохикнчвский процесс пропорционально интенсивности.

4. Ультразвуковое излучение способствует освобождении Факторов гемокоагуляции из эритроцитов, уменьшает йесткость мембран, сникает кислотнуи резистентность, увеличивает диаметр, а при интенсивности 0.7 и 1«0 Вт/си^- вызывает механическое разрушение-

5> Ультразвуковое излучение уменьшает активность суперок-сиддисмутазы и перекиснуи разкстантность эритроцитов.

6. При воздействии in vivo ультразвуковое излучение стимулирует первичный гемостаз, причем укорочение длительности

храватвчэаия пропорциональна интенсивности изучаемого

Фактора.

П о и -?, тер и а л л м 4 и о о в р т а и и и п у б л и к о в а п и след у п ц ив работ и-1« Русявв Вронская А»А» Гнмокоагулпцианиыэ эффекты

льтраяпукоппга излучения /'/Таз. докл. Ссвиестнога заседания итого пленума Украинского респ. правления БНМТО чзтпвртогз Пленума Полтлппкзго Обл- правления ЗНМТО к пбл-аучна-практичпехяй тсанФ» 1'Ф.элъ квд'гцкиской тоггяихи з üstsh-пфикацяи .ггчеб'ло-диагнагтичяскгггз процесса" - - Полта-э-. Í9B7. - С- S1 -

2. Рузяеп 3-Я,, Вранскап А>А> Электродная камера для •он.-р.лстпяятрячоекзге; ионпреиип рзтргаехки крог-вгтго пгуст-п // Аптарпкае свидетельпгза N 1377700, 1937.

3. Русявв В-Т'»-; Вронская А-А- Гаяанойгуляцкс.-ат.те эффекты льтраозуковего издучгняя //Медшяяский рафяраткзннй куриал-

К., 1967. - раздал KYÜ, публ. 327; - рукопись N Д-13279.

4. Брянская A.A. Влияния ультразвука на дпеперонуя ста-ялъяасть элементов крози // Тез. до:-:, кй'звуззвпкаи научно-рахтичйской конференции молодых ученых и специалистов "(ринология и патолегяп перпккснсго окислений липидоп, гемос-аза и иммуногенеза". - Полтава- - 1990» - С- б - 7.

5» Руслан В.0., Вранська А-А.5 Лвсзза Л.Л-» Черев 0-I-, Понедельников Н-Ш», Паокар С.В-? Калигi на B.I. iaaiatt4HÍ принципа та способ« кврупання систвно» гвмоота-а // Роззиток я1ятолог11 в Укратксьнэй РСР за 19В1 -990 роки: сб. натерт ал13 ХУ з i яду Укратнсъкого Ф1ai слоенного тозариства. - XapKis, 1990. - С. 45 - 46.

Cl

vh

лН

£ 2 ri M

"4l » •

ü