Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структурно-функциональная характеристика ионоцитов жабр и почки некоторых видов рыб при изменении солености окружающей среды

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Структурно-функциональная характеристика ионоцитов жабр и почки некоторых видов рыб при изменении солености окружающей среды"

На правах рукописи

ииз165216 КОРНИЕНКО

Михаил Сергеевич

Структурно-функциональная характеристика ионоцитов жабр и почки некоторых видов рыб при изменении солености окружающей среды

03 00 25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 3 МАР 200Я

Владивосток - 2008 £ииа

003165216

Работа выполнена в Институте биологии моря имени А. В. Жирмунского ДВО РАН

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор

Максимович Александр Александрович

Официальные оппоненты доктор биологических наук

Вараксин Анатолий Алексеевич кандидат биологических наук, доцент Рыбалкина Светлана Михайловна

Ведущая организация Институт эволюционной физиологии и биохимии

имени И М Сеченова РАН

Защита состоится «27» марта 2008 г в «10» часов на заседании диссертационного совета Д 005 008 01 при Институте биологии моря имени AB Жирмунского ДВО РАН по адресу 690041, г Владивосток, ул Пальчевского, 17 Телефон (4232) 310-905, факс (4232) 310-900, e-mail inmarbio@mail pnmorye ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биологии моря имени А В Жирмунского ДВО РАН (690041, г Владивосток, ул Пальчевского, 17) Отзывы просим присылать на e-mail mvaschenko@mail ru

Автореферат разослан « U » февраля 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук &сш<е+(ебс> м д за1цепко

ОБЩАЯ ХАРАК ГЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность Работа посвящена проблеме морфогенеза клеток в процессе адаптации животных к изменению условий окружающей среды Костистые рыбы - это самая многочиспенная в систематическом тане и самая разнообразная в экологическом отношении группа среди позвоночных животных Они населяют как пресные, так и морские водоемы Некоторые эвригалинные виды в своем жизненном цикле в ходе миграций из рек в море несколько раз сталкиваются с изменением солености среды обитания При этом успех адаптации зависит от способности рыб перестраивать свой водно-солевой обмен с гипоосмотического типа регуляции на гиперосмотический тип или обратно Клеточные и молекулярные механизмы, обеспечивающие смену типа осморегуляции рыб, до сих пор остаются до конца неясными

Существует довольно большое число работ, посвященных данной проблеме, однако в мировой практике такие исследования выполнены лишь на небольшом числе модельных объектов, таких как виды родов Salmo, Oncorhyrtchus, Tilapia Вместе с тем, единичные работы, осуществленные на других видах, зачастую сопровождаются интересными результатами и выводами

В заливе Петра Великого Японского моря обитает большое число эвригалинных видов рыб Чтобы проследить изменения в осморегулирующей системе, происходящие при смене типа осморегуляции, как у проходных рыб, так и у эвригалинных, были выбраны три вида рыб дальневосточная красноперка, восьмилинейный терпуг и рыба-игла Рыба-игла была включена в этот список как интересный объект, у которого постоянство ионного состава необходимо обеспечивать не только в организме, но и внутри выводковой сумки, где находятся икринки с развивающимися эмбрионами

Цель работы - исследование структурно-функциональных механизмов адаптации эвригалинных видов рыб к воде различной солености Задачи исследования

- изучить особенности ультраструктурного строения хлоридных клеток жаберного эпителия у дальневосточной красноперки, восьмилинейного терпуга и рыбы-иглы,

- выявить особенности ультраструктурного строения клеток почечных канальцев у дальневосточной красноперки и рыбы-иглы,

- проследить структурно-функциональные изменения клеток жаберного эпителия и почечных канальцев при изменении солености окружающей среды

Научная новизна. Впервые выполнены исследования изменений, происходящих в ионоцитах (хлоридных клетках жаберного эпителия и клетках почечных канальцев) при изменении солености окружающей среды у видов Tribolodon brandti (сем Cyprmidae), Hexagrammes octogrammus (сем Hexagrammidae) и Syngnathus acusimilis (сем Syngnathidae) Изучены механизмы осморегуляции дальневосточной красноперки в ходе нерестовых, зимовальных и нагульных миграций Впервые показано, что высокая степень эвригалинности некоторых видов рыб прибрежно-эсту арного комплекса обусловлена постоянным наличием на протяжении всего жизненного цикла в их жаберном эпителии ионоцитов пресноводного и морского типа

Практическое значение. Результаты проведенного исследования расширяют представления о механизмах адаптации костистых рыб к изменению солености окружающей среды Результаты работы могут быть использованы в рыбоводстве для разработки рекомендаций по определению оптимальных сроков перевода выращиваемой молоди эвригалинных рыб в морскую воду, а также в курсах лекций по гистологии, цитологии и физиологии животных для студентов биологических специальностей ВУЗов

Апробация работы. Основные результаты работы представлены на конференции молодых ученых Научно-образовательного центра ДВГУ «Морская биота» (Владивосток, 2002), на I Съезде физиологов стран СНГ (Сочи, 2005), на ежегодных научных конференциях Института биологии моря в 2006 и 2007 годах, на заседаниях семинара по морфологии, физиологии и биохимии Института биологии моря и семинара Лаборатории физиологии ИБМ Работа была выполнена при поддержке гранта ДВО РАН (2005)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы, в том числе 2 статьи в журналах из списка рекомендуемого ВАК, одна статья принята в печать

Структура и объем работы Диссертация изложена на 114 страницах и состоит из введения, четырех основных глав, списка литературы, включающего 135 названий (из них 127 иностранных авторов), и 69 рисунков (схемы и электронно-микроскопические фотографии)

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Соленость внутренней среды рыб составляет примерно одну треть от солености морской воды Поэтому в морской воде происходит диффузия ионов в организм, а в пресной, наоборот, из организма во внешнюю среду Чтобы компенсировать эти явления, в морской воде рыбам необходимо выделять ионы, а в пресной - адсорбировать Если у высших позвоночных основным осморегулирующим органом являются почки, то у рыб осморегулирующие функции выполняют почки, кишечник и жабры, причем ведущая роль в осморегуляции принадлежит именно жабрам (Evans, 1993)

Хлоридные клетки - это один из наиболее хорошо исследованных типов клеток жаберного эпителия рыб, именно они отвечают за обмен ионов (Pisam, Rambourg, 1991, Jurss, Bastrop, 1995, Perry, 1997, Evans et al, 1999) У рыб адаптированных к морской воде в жаберном эпителии присутствуют хлоридные

клетки морского типа и вспомогательные клетки Эти два типа клеток формируют многоклеточные комплексы в эпителии филамента У рыб, адаптированных к пресной воде, различают два типа собственно хлоридных клеток, это а-хлоридные клетки (бледно-окрашенные удлиненные клетки, расположенные у основании ламеллы в близком контакте с кровеносными капиллярами) и ß-хлоридные клетки (более темные, яйцевидной формы клетки, расположенные в межламмеллярной области эпителия филаментов) Вспомогательные клетки у рыб, адаптированных к пресной воде, отсутствуют

У эвригалинных видов и мигрирующих видов, обитающих преимущественно в пресной воде, при переносе в морскую воду а-хлоридные клетки трансформируются в морские хлоридные клетки, появляются вспомогательные клетки и начинается формирование многоклеточных комплексов Повышается проницаемость межклеточных контактов ß-хлоридные клетки дегенерируют путем апоптоза Зачастую эти процессы сопровождаются увеличением жаберной Ка+,К+-АТФ-азной активности (Sasai et al, 1998, Uchida et al, 1996, 2000, Lin, Hwang, 2004) При переносе рыб из морской воды в пресную наблюдаются обратные процессы (Katoh, Kaneko, 2003, Lima, Kültz, 2004, Fielder et al, 2007)

Почка позвоночных животных построена по единому принципу структуры, обеспечивающие процесс ультрафильтрации, соединены с системой канальцев, обеспечивающих реабсорбцию большинства компонентов профильтрованой жидкости и секрецию ряда веществ в мочу Почки рыбы, как и почки низших позвоночных, не приспособлены для поддержания гомеостаза (Hickman, Trump, 1969)

Материал и методы

Работа была выполнена на биологической станции «Восток» и в аквариальной Института биологии моря имени А В Жирмунского ДВО РАН Объектом исследования служили неполовозрелые особи дальневосточной

красноперки Tnbolodon brandti Dybowskn, 1872, взрослые особи восьмилинейного терпуга Hexagrammos octogrammus Pallas, 1810 и взрослые самцы рыбы-иглы Syngnathus acusimihs Gunther, 1873

Дальневосточная красноперка была отловлена в конце мая ставным неводом в заливе Петра Великого Японского моря Соленость воды в месте отлова составляла 21%о Всего в работе было использовано 20 особей дальневосточной красноперки Через 2 недели после адаптации к аквариальным условиям в воде соленостью 23%о, 15 рыб пересадили в пресную воду Через 1 сутки после пересадки у 5 рыб взяли образцы тканей Рыбы, адаптированные к аквариальным условиям, служили контролем Оставшихся 10 рыб содержали в пресной воде в течение 70 суток Затем 5 рыб снова пересадили в морскую воду Через 1 сутки у них и у контрольных рыб из пресной воды взяли пробы крови и образцы тканей для электронно-микроскопических исследований Для сравнения была взята кровь у Т brandti, отловленных в заливе Петра Великого и в реке Раздольная Образцы тканей от 5 экземпляров в каждой точке эксперимента брали независимо от пола

Терпуги Н octogrammui были выловлены с помощью ловушки в прибрежной зоне залива Восток на глубине около 1 м, где соленость воды в это время составляла 10%о Для адаптации к аквариальным условиям и полносоленой морской воде 62 особи восьмилинейного терпуга выдерживали в течение 10 дней в аэрируемых бассейнах с проточной морской водой, соленость которой была 32%о После адаптации к полносоленой морской воде две группы рыб пересадили в разбавленную морскую воду соленостью 10%о Через трое суток адаптации к воде соленостью 10%о вторую группу рыб перевели в воду соленостью 3%о Третью группу подвергли прямому переносу из морской воды в пресную Оставшиеся в морской воде 5 рыб послужили контролем

Рыба-игла была отловлена неводом в начале июня в заливе Восток

Японского моря Соленость воды в месте оттова составляла 28%о После семи суток адаптации к аквариальным условиям и морской воде соленостью 32 %о по 5 рыб были пересажены в воду соленостью 22%о, 12%о, 5%о и в пресную вод> S acusunilis содержались в аквариумах объемом 100 л с аэрируемой и фильтруемой водой Через 7 суток после пересадки в разведенную морскую воду по 5 рыб из каждого аквариума были использованы для взятия образцов тканей Рыбы из морской воды служили контролем Всего в работе было использовано 25 особей рыбы-иглы

У всех трех видов были взяты образцы ткани жаберного эпителия, кроме того, у дальневосточной красноперки и рыбы-иглы для электронно-микроскопического исследования были взяты образцы ткани почки Уровень натрия в сыворотке крови у Н octogrammus определяли через 1,6, 12, 24 и 72 ч, у Т brandti только через 24 ч У рыбы-иглы не удалось измерить концентрацию ионов в сыворотке крови из-за малого объема крови

Для исследований, связанных со сканирующей микроскопией ткани жаберного эпителия исследуемых рыб были обезвожены путем пропускания через батарею спиртов и ацетонов, подвергнуты напылению, а затем просмотрены и сфотографированы с помощью сканирующего микроскопа Leo 430

Для ультраструктурных исследований кусочки ткани фиксировали в охлажденном (4°С) 2%-ном растворе глутаральдегида-параформальдегида на 0 1 М какодилатном буфере (рН 7 4) с добавлением NaCl в соответствии с соленостью среды, в которой содержался образец После чего дофиксировали в 1%-ном растворе четырехокиси осмия при той же температуре в течение 1 ч Материал контрастировали в 2%-ном спиртовом растворе уранилацетата, дегидратировали по общепринятой методике и заливали в смесь эпон 812-аралдит

Обзорные препараты получали путем изготовления полутонких (1 мкм) срезов с блоков, залитых для электронной микроскопии Срезы окрашивали метиленовым синим, а затем просматривали под световым микроскопом «Olimpus» или «Polyvar»

Ультратонкие срезы, приготовленные на ультратоме «Reichert Ultracut Е», после дополнительного контрастирования цитратом свинца просматривали и фотографировали на трансмиссионных электронных микроскопах «JEM-100B» и «JEM-100S»

Кровь собирали в пробирку путем каудэктомии После свертывания крови, сыворотку отбирали пипеткой и разводили в 50 раз бидистиллированной водой Концентрацию ионов натрия в пробах определяли на атомно-абсорбционном спектрофотометре Nippon Garral Ash, модель АА 855 Результаты

В ходе проведенных экспериментов особи дальневосточной красноперки прекрасно адаптировались как к пресной, так и к морской воде и сохраняли активность на протяжении всего эксперимента

У восьмилинейного терпуга, помещенного в воду соленостью 10%о, в течение всего срока эксперимента (72 ч) выживаемость составила 100% К концу третьих суток эксперимента все рыбы оставались активными Во второй группе, переведенной в воду соленостью 3%о после предварительной успешной адаптации к воде 10%о, состояние рыб было хорошим в течение первых 6 ч Все рыбы были подвижны и активно брали корм Через 12 ч экспозиции состояние рыб заметно ухудшилось, но все рыбы были живы Через 24 ч экспозиции смертность составила 38% В третьей группе рыб, пересаженных в пресную воду сразу из морской воды (32%о), период 50% смертности составит 5 ч

Выживаемость рыбы-иглы в воде соленостью 32%о, 22%о, 12%о и 5%о в течение семи суток эксперимента составила 100% В течение всего времени рыбы оставались подвижными, оборонительные реакции были в норме, что

свидетельствует об удовлетворительном физиологическом состоянии У рыбы-иглы, пересаженной в пресную воду, период 50% смертности составил 0 5ч 100% смертность морской иглы в пресной воде наблюдалась в течение одного часа

У красноперки, адаптированной к морской воде хлоридные клетки располагались как у основания жаберных ламелл, так и в межламеллярном районе В жаберном эпителии представлены несколько типов хлоридных клеток светлые хлоридные клетки, темные хлоридные клетки, а также вспомогательные клетки

Митохондрии, тубулярная система и эндоплазматический ретикулум занимают весь объем цитоплазмы хлоридных клеток, за исключением узкой апикальной зоны Тубулярная система представлена плотной сетью микроскопических трубочек, тесно связанных между собой, с постоянным диаметром 35—40 нм Микротрубочки примерно равной длины, соединяясь между собой, образуют сеть, состоящую из 5- и 6-гранных ячеек В базальной и латеральных областях зрелых хлоридных клеток обнаружены многочисленные слияния трубочек тубулярной системы с плазматической мембраной клетки Эндоплазматический ретикулум, развит гораздо меньше Его трубочки более широкие, длинные, прямые и менее разветвленные Аппарат Гольджи находится в околоядерной области Апикальная мембрана клетки формирует микрогребни и микроворсинки

Иногда в эпителии жаберных филаментов встречаются комплексы хлоридных клеток, состоящие из 2-4 клеток В апикальной зоне клетки комплексов соединены между собой короткими высокопроницаемыми контактами, тогда как с соседними респираторными клетками хлоридные клетки соединяются плотными межклеточными контактами

Таблица 1

Концентрация ионов натрия в сыворотке крови у дальневосточной красноперки Tribolodon brandit в разных условиях обитания

Концентрация ионов Na+, ммоль/л

Время после пересадки Пересадка из морской воды в пресную (аквариальная) « 'g s | tj d 1 1 a | « Я 1 f a ? В" 1 с §■ s H S о 03 Амурский залив Устье p Раздольная p Раздольная (перед нерестом) р Раздольная (после нереста)

Оч 190 ±6 139 ±4 188±5 196±3 143±6 134±4

24 ч 154 ±4 150 ± 5

Таблица 2

Динамика концентрации ионов натрия в сыворотке крови у восьмилинейного терпуга Hexagrammos оси^гаттш при пересадке в пресную и разбавленную морскую воду (ммоль/л)

Время экспозиции Концентрация ионов Na', ммоль/л

Морская вода 10%о 3%0 Пресная вода

0ч 173 4 ± 1 4 173 4 ± 1 4 147 0 ± 3 9 173 4 ± 1 4

1 ч 167 0 ± 3 7 142 5+4 0 148 3+5 6

6 ч 157 0 ± 3 9 135 8 ±4 6 91 0 + 29

12 ч 151 5 + 3 1 126 5 +7 7

24 ч 147 3 ± 5 3 93 6 + 2 6

72 ч 147 0 ± 3 9

Концентрация ионов натрия в сыворотке крови дальневосточной красноперки, адаптированной к морской воде, равнялась 190 ± 6 ммоль/л (табл 1)

Через сутки после переноса красноперки из морской воды в пресную общее количество хлоридных клеток незначительно снизилось Строение зретых хлоридных клеток почти не изменилось, но они в большей степени, чем в контроле были прикрыты респираторными клетками В верхних клеточных слоях появились апоптирующие клетки, иногда в соседстве с макрофагами В более глубоких клеточных слоях первичного эпителия активизировались процессы пролиферации и дифференцировки клеток

В сыворотке крови Т ЪгапЛг, пересаженных в пресную воду, наблюдалось существенное снижение концентрации ионов Ка' с 190 ± 6 до 154 ± 4 ммоль/л (табл 1)

После 70 дней адаптации к пресной воде количество хлоридных клеток в эпителии жаберных филаментов дальневосточной красноперки снизилось По сравнению с морским контролем почти в два раза уменьшился относительный объем тубулярной системы и митохондрий Тубулярная система зрелых светлых хлоридных клеток имела вид типичный для пресноводных рыб более тонкие, длинные и мало ветвящиеся трубочки Количество митохондрий уменьшилось Они стали тоньше и длиннее

В верхнем слое первичного эпителия по-прежнему встречались крупные светлые и темные хлоридные клетки, рядом с которыми были отмечены вспомогательные клетки

Концентрация ионов Иа в сыворотке крови дальневосточной красноперки, адаптированной к пресной воде, снизилась до 139 ± 4 ммоль/л, что составило 73% от морского значения (табл 1)

Через 24 часа после переноса Т ЬгапЛг из пресной воды в морскую, общее количество хлоридных клеток несколько увеличилось по сравнению с

пресноводным контролем Возросло количество митохондрий, увеличился просвет трубочек тубулярной системы В цитоплазме темных хлоридных клеток активизировался шероховатый эндоплазматический ретикулум, значительно увеличилось количество свободных рибосом 3 глубоких клеточных слоях первичного эпителия появилось множество малодиференцированных клеток

Концентрация ионов Ка* в сыворотке крови рыб, пересаженных из пресной воды в морскую, через 24 часа увеличилась до 150±5 ммоль/л (табл 1)

В жаберном эпителии восьмилинейного терпуга Н ос^гаттив адаптированного к морской воде отмечены слизистые клетки, покровные клетки, малодифференцированные клетки, хлоридные и вспомогательные клетки Хлоридные клетки представлены только одним, так называемым «морским», типом и образуют комплексы со вспомогательными клетками В комплекс объединяются 1-2 крупные зрелые хлоридные клетки и 2-3 вспомогательные клетки Клетки концентрируются в межламеллярном пространстае и у основания ламелл Ядра хлоридных клеток правильной формы, хроматин умеренно конденсированный По всей цитоплазме располагаются многочисленные митохондрии, с узкими, плоскими и плотно упакованными кристами, в темном матриксе митохондрий отмечены электронно-плотные гранулы Тубулярный ретикулум формирует густую, обильно разветвленную систему, состоящую из прямых трубочек постоянного диаметра (40-50 нм), среди которых располагаются все органеллы клетки Шероховатый эндоплазматический ретикулум развит преимущественно в околоядерной зоне Апикальная мембрана хлоридных клеток, образующих многоклеточные комплексы, формирует короткие микроворсинки Часть хлоридных клеток расположенных на поверхности филаментов прикрыта отростками респираторных клеток

Концентрация ионов Ка+ в сыворотке крови восьмилинейного терпуга, адаптированного к морской воде составила 173 4 ± 1 4 ммоль/л (табл 2)

Через 24 часа после пересадки в воду соленостью 10%о общая топография жаберного эпителия оставалась практически такой же, как и у рыб в морской воде У некоторых хлоридных клеток уменьшилась электронная плотность ядер В апикальных районах хлоридных клеток появились многочисленные везикулы с электронно-плотным содержимым На апикальной поверхности хлоридных клеток образовались складки Количество элементов тубулярного ретикулума и митохондрий уменьшилось, снизилась и плотность митохондриального матрикса В некоторых хлоридных клетках наблюдалось набухание тубулярного ретикулума Канальцы становились менее разветвленными, их диаметр увеличился в несколько раз Повсюду в цитоплазме наблюдались свободные рибосомы

В течение первых 6 часов в сыворотке крови Н осю^гаттик наблюдалось снижение уровня ионов Иа+ К 12 часам экспозиции концентрация ионов Ма+ стабилизировалась и в дальнейшем оставалась на постоянном уровне 85-87% по сравнению с контролем После 72 часов содержания в воде с соленостью 10%, среднее значение уровня Ма+ в крови восьмилинейного терпуга составило 147 0 ± 3 9 ммоль/ л (табл 2)

У рыб, проведших 24 часа в воде соленостью 3%о общая топография жаберного эпителия по сравнению с предыдущим периодом значительно изменилась Активизировались слизистые клетки Появились многочисленные картины отслаивания клеток Тубулярная система почти всех хлоридных клеток вакуолизировалась, матрикс митохондрий плотный, размеры и форма митохондрий не изменились Гораздо чаще, чем в предыдущей группе, встречались картины разных стадий физиологической гибели клеток

После пересадки из морской воды в воду соленостью 3%о в течение первых 6 часов резких изменений концентрации ионов Ка~ в крови восьмилинейного терпуга не произошло Среднее значение уровня Ыа+ снизилось на 8% Однако в дальнейшем стабилизации уровня ионов в крови

Н ос1о^гаттич не наблюдалось К 24 часам экспозиции уровень Ка+ достоверно снизился до 64% (93 6 ± 2 6 ммоль/л) по сравнению с контролем (табл 2)

В жаберном эпителии рыб, содержавшихся в пресной воде, через 6 часов значительно активизировались слизистые клетки Отмечалась вакуолизация респираторных клеток Хлоридные клетки также были угнетены

В митохондриях хлоридных клеток видны признаки деструкции Количество митохондрий несколько уменьшилось В некоторых клетках видны группы лизосом и деструктурированных митохондрий Плотность и строение туб\лярпой сети существенно не изменились В цитоплазме присутствуют свободные рибосомы Значительно чаще, чем у рыб в олигогалинной и мезогалинной воде, встречаются клетки с признаками лизиса Наблюдаются многочисленные картины некротического разрушения клеток

Концентрация ионов Ма* в крови восьмилинейного терпуга значительно снизилась уже через 1 час после пересадки в пресную воду и по сравнению с контролем составила 85% Через 6 часов уровень Ма4" упал до 52% (910 + 29 ммоль/л) (табл 2)

В жаберном эпителии рыбы-иглы присутствует только один тип хлоридных клеток - «морской» Эти крупные округлые клетки локализованы в межламеллярных районах филаментарного эпителия и, в меньшей степени, на ламеллах У 5 астштт/», адаптированных к воде соленостью 32 %о, 22 %о, 12 %о и 5 %о, хлоридные клетки не различались по своей ультраструктуре Строение этих клеток было типичным для рыб, обитающих в морской воде Контактирующие между собой зрелые хлоридные клетки связаны в апикальной области высокопроницаемыми межклеточными контактами

В цитоплазме хлоридных клеток рыбы-иглы наблюдалось множество митохондрий и хорошо развитая тубулярная система В узкой зоне, примыкающей к клеточной мембране, тубулы настолько плотно упакованы, что

занимают практически всю цитоплазму В базапьной и латеральной части клетки тубулы сливаются с плазмолеммой

У рыбы-иглы, также как и у дальневосточной красноперки, (адаптированной как к пресной, так и к морской воде) общее строение почки и ультраструктура клеток нефрона, в целом, одинаковы Различаются они количеством и относительным объемом органелл, в основном митохондрий и складок базальной мембраны

Как и большинства костистых рыб, у исследуемых видов почка гломерулярная Вслед за капсулой Боумена следует шеечный сегменг нефрона Клетки шеечного сегмента снабжены длинными ресничками, которые создают дополнительный напор жидкости в канальце Особенностью этого отдела является большое количество секреторных клеток

Шеечный сегмент переходит в проксимальный сегмент нефрона Клетки этого сегмента представляют собой пирамидальный эпителий со щеточной каймой и ядром, расположенным в базальной части клетки Как и в шеечном отделе, часть клеток канальца выполняет секреторную функцию Однако в этом участке нефрона секреторных клеток меньше, чем в шеечном отделе, и количество их уменьшается по направлению к концу канальца Эпителиальные клетки проксимального канальца отличает присутствие щеточной каемки Цитоплазма клеток мало насыщена митохондриями и лизосомами Клетки канальца имеют трапециевидную или цилиндрическую форму Высота клеток проксимального канальца 18-28 мкм Клетки имеют приблизительно одинаковую по высоте щеточную кайму (3-3 5 мкм) Под щеточной каймой располагается так называемая зона эндоцитоза Это поверхностный участок цитоплазмы, заполненный инвагинациями плазматической мембраны у основания микроворсинок

Ядра клеток крупные, овальной формы, находятся преимущественно в базальнои части клетки В них имеется одно или два ядрышка с нечеткими контурами Основная масса митохондрий локализована в базолатеральной области, рядом с ядром В базальной части клетки имеется большое количество складок плазматической мембраны Иногда эти складки образуют петли вокруг митохондрий

Небольшой отрезок канальца, следующий непосредственно за шеечным отделом, образован клетками высотой около 20 мкм со слабо развитой невысокой щеточной каймой, широкие микроворсинки которой располагаются разреженно и имеют длину порядка 1 мкм Для таких клеток также характерна относительно небольшая зона эндоцитоза Эти клетки сменяются наиболее высокими клетками канальца (25-28 мкм), которые отличаются густой щеточной каймой, образованной узкими, плотно расположенными микроворсинками и хорошо развитой зоной эндоцитоза За ними следуют клетки высотой 20-25 мкм, с небольшой и часто едва различимой зоной эндоцитоза

На поверхности цилиндрических клеток дистального канальца, высота которых также 20-25 мкм, практически нет микроворсинок Цитоплазма этих клеток богата мелкими вакуолями с прозрачным содержимым и насыщена грану тами гликогена, что придает ей значительную электронную плотность От основания клетки к ее свободной поверхности, вокруг ядра, обтекая его, проходят параллельные ряды складок плазматической мембраны Как правило, в базальной области эти складки переходят в плазматическую мембрану клеток Между складками плазматической мембраны располагаются многочисленные удлиненные митохондрии, имеющие большое количество крист и электронно-плотный матрикс, свободным остается только апикальный участок цитоплазмы

Изменения в ультраструктуре клеток проксимальных канальцев, связанные с нахождением рыбы в опресненной воде, состояли в уменьшении

количества митохондрий и в снижении электронной плотности их матрикса Длина большинства митохондрий уменьшилась, но их расположение в клетке практически не изменилось, наибольшая их концентрация по-прежнему наблюдается в базальной части клетки Одновременно отмечается уменьшение длины и количества складок базальной мембраны, контактирующих с митохондриями

Обсуждение результатов

В проведенных нами экспериментах выживаемость трех исследованных видов в воде соленостью 5 %о и выше в течение всего времени эксперимента составила 100%, что свидетельствует об успешной адаптации рыб к мезогалинной воде Динамика концентрации ионов в крови восьмилинейного терпуга также подтверждает этот факт При помещении Н о&о^аттт и 5 асгдат;/« в воду меньшей солености наблюдалась гибель рыб и только дальневосточная красноперка Т Ъгапйп успешно адаптировалась как к морской, так и к пресной воде

Общая морфология жаберного аппарата и ультраструктура хлоридных клеток у исследованных видов не отличались от описанных ранее Однако если у восьмилинейного терпуга и рыбы-иглы присутствовал только один тип хлоридных клеток, что характерно для морских рыб, то у дальневосточной красноперки, адаптированной к морской воде, было обнаружено два типа хлоридных клеток, различающихся электронной плотностью цитоплазмы и морфологически схожих с а- и Р-хлоридными клетками пресноводных рыб Помимо этих двух типов хлоридных клеток присутствовали и вспомогательные клетки, которые сохранялись и у красноперок, адаптированных к пресной воде Вероятно, именно сохранение всех клеточных типов, как в пресной, так и в морской воде, обеспечивает успех адаптации красноперок к резкому изменению солености среды

Через сутки после переноса дальневосточной красноперки из морской воды в пресную значительных изменений в ультраструктуре хлоридных клеток не наблюдалось, это говорит о том, что ее клеткам не требуется значительной перестройки для смены типа осморегуляции По прошествии семидесяти суток наблюдались более явные изменения ультраструктуры Тубулярная система зрелых светлых хлоридных клеток имела вид типичный для пресноводных рыб трубочки стали более тонкими, длинными и менее ветвящимися Количество митохондрий уменьшилось, они также стали тоньше и длиннее Эти изменения служат индикатором того, что при долговременной адаптации происходит замена уже имевшихся в эпителии жабр хлоридных клеток, которые при смене среды обитания рыбы только меняли свой тип осморегуляции, на новые клетки, изначально приспособленные к другому типу осморегуляции

В наших экспериментах концентрация ионов Na+ в крови дальневосточной красноперки, адаптированной к морской воде, соответствовала концентрации Na+ в крови рыб, отловленных в Амурском заливе (190 ± 6 ммол/л) У рыб, проведших 70 суток в аквариуме с пресной водой, концентрация ионов совпадала с концентрацией у рыб, отловленных в р Раздольная, и составила 139 ± 4 ммол/л (табл 1) Через 24 часа после переноса из морской воды в пресную и наоборот у рыб наблюдалась примерно одинаковая концентрация Na+ - 150-155 ммоль/л Согласно литературным данным, к этом> времени концентрация ионов должна стабилизироваться на постоянном уровне, в нашем эксперименте этого не произошло, следовательно, можно говорить о том, что клетки, сменившие тип осморегуляции, справляются с поддержанием ионного баланса хуже, чем клетки, изначально приспособленные к данному типу осморегуляции

Изменения, происходящие в жаберном эпителии восьмилинейного терпуга при смене солености окружающей среды являются скорее следствием

физиологического стресса Уже при переносе Н осЮ^аттш из морской воды в воду соленостью 10%о в хлоридных клетках его жаберного эпителия увеличивалось число лизосом, расширялось перинуклеарное пространство и межмембранное пространство При пересадке в воду соленостью 3%о изменения, связанные с попыткой перехода к гиперосмотической регуляции, были наиболее выражены Совпадение этих признаков с признаками, описанными в литературе и характеризующими адаптации к изменению солености у других эвригалинных видов, говорит об универсальности механизмов реакции на изменение солености окружающей среды в первые часы стресса. Однако эти изменения не приводят к появлению в жаберном эпителии клеток, характерных для пресноводных рыб

В случае прямого переноса терпуга из морской воды в пресную физиологический стресс намного превышал тот, что имел место при постепенном переносе сначала в мезогалинную, а затем в олигогалинную воду Наблюдалось большое количество гибнущих клеток

Стабилизация концентрации ионов в крови восьмилинейного терпуга наблюдалась только при перемещении в воду соленостью 10%о Момент стабилизации концентрации наступил через 24 часа после пересадки, что соответствует литературным данным по другим видам рыб При пересадке в воду меньшей солености концентрация ионов Ка+ в крови не стабилизировалась, а постепенно снижалась, и при уменьшении концентрации ионов Ыа4 в два раза наблюдалась гибель рыб Период 50% смертности при перемещении терпуга из морской воды в пресную составил 5 ч

У рыбы-иглы при изменении солености среды обитания также не наблюдалось изменений в ультраструктуре хлоридных клеток, однако это вызвано скорее ее полной неспособностью к смене типа осморегуляции При прямом переносе в пресную воду все рыбы гибли в течение часа Столь малый срок 100% смертности в сравнении с восьмилинейным терпугом обусловлен,

во-первых, меньшими размерами рыбы иглы и, соответственно, меньшим объемом крови, а во-вторых, тем, что хлоридные клетки терпуга, вероятно, оказались более лабильными и, хотя и не завершили смену типа осморегуляции, все же были эффективнее в условиях пресной воды, чем неизмененные хлоридные клетки рыбы-иглы

В связи с тем, что у восьмилинейного терпуга и рыбы-иглы хлоридные клетки не в состоянии справиться с сильными изменениями солености окр>жающей среды, в жаберном эпителии присутствует большое количество слизистых клеток, которые активируются при изменении солености, обеспечивая жаберному эпителию дополнительную защиту на некоторый промежуток времени У дальневосточной красноперки число слизистых клеток не столь велико

Исследования ультраструктуры почек дальневосточной красноперки и рыбы-иглы показали, что изменения, происходящие в них при изменении солености среды, незначительны Это в первую очередь уменьшение количества и размеров митохондрий в клетках почечных канальцев, вызванное снижением энергозатрат на реабсорбцию воды Полученные нами результаты подтверждают литературные данные о незначительности роли почки в осморегуляции рыб

Выводы

1 Эвригалинные виды рыб имеют различные стратегии адаптации к изменению солености воды Активная стратегия дальневосточной красноперки ТпЬо1ос1оп ЪгапЛг направлена на смену типа осморегуляции с гипоосмотического на гиперосмотический тип или наоборот Это обеспечивает высокую степень эвригалинности рыб, позволяя им неоднократно мигрировать из моря в реки и обратно При этом в жаберном эпителии появляются новые типы хлоридных клеток Пассивная стратегия

физиологической адаптации у менее эвригалинных видов -восьмилинейного терпуга Hexagrammos octogrammus и рыбы-иглы Syngnathus acusimilis направлена на снижение ионной проницаемости эпителиев, при этом не происходит смены типа осморсгуляции

2 Впервые показано, что высокая степень эвригалинности дальневосточной красноперки Tribolodon brandit обусловлена постоянным наличием на протяжении всего жизненного цикла в их жаберном эпителии хлоридных клеток, как морского, так и пресноводного типов В зависимости от солености окружающей среды активизируется тот или иной тип хлоридных клеток, что позволяет этому виду успешно адаптироваться к резким изменениям солености

3 Эвригалинные виды рыб прибрежно-эстуарного комплекса восьмилинейный терпуг Hexagrammos octogrammus и рыба-игла Syngnathus acusimihs переносят длительное опреснение воды, но не способны полностью адаптироваться к пресной воде Сохранение ионного гомеостаза у этих рыб в опресненной воде обеспечивается в первую очередь за счет снижения ионной проницаемости жаберного эпителия путем соответствующих изменений ультраструктуры хлоридных клеток морского типа и активизации слизистых клеток Хлоридные клетки пресноводного типа у них не формируются

4 Почечные канальцы играют второстепенную роль в осморегуляции эвригалинных рыб Это подтверждается незначительными ультраструктурными изменениями нефронов в процессе адаптации рыб к существенным изменениям солености окружающей среды

СПИОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1 Серков В M , Корниенко M С Структура и функция хлоридных клеток

жаберного эпителия у восьмилинейного терпуга Hexagrammos octogrammus

Pallas (Scorpaeniformes, Hexagrammidaej при изменении солености среды // Материаты конференции студентов, аспирантов и молодых ученых НОЦ ДВГУ «Морская биота», Владивосток (1-2 октября 2002) г Владивосток изд-во ДВГУ 2002 С 36-37

2 Серков В М , Корниенко М С Динамика концентрации ионов натрия и кальция в крови у восьмилинейного терпуга Hexagrammos octogrammus Pallas (Scorpaeniformes, Hexagrammidae) при изменении солености среды // Вопросы ихтиологии 2003 Т 43, № 1 С 134-36

3. Серков В М, Корниенко М С Структурные и функциональные особенности хлоридных клеток жаберного эпителия дальневосточной красноперки Trybolodon brandti (сем Cypnmdae), адаптированных к воде различной солености // Научные труды I Съезда физиологов стран СНГ, Сочи, Дагомыс (18-23 сентября 2005 г) М Медицина-здоровье 2005 С 97

4 Серков В М, Корниенко М С, Колобов В А Структурно-функциональная характеристика жаберного эпителия и выводковой камеры рыбы-иглы Syngnathus acusimilis (Syngnathidae Gasterosteiformes) при изменении солености воды // Вопросы ихтиологии 2007 Т 47, № 6 С 794—798

О О

- _ У

КОРНИЕНКО МИХАИЛ СЕРГЕЕВИЧ

Структурно-функциональная характеристика ионоцитов жабр и почек некоторых видов рыб при изменении солености окружающей среды

03 00 25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 20 02 2008 г Формат 60x90/16 1 уч -изд л Тираж 100 экз Заказ №89 Отпечатано в типографии издательского центра ФГУП «ТИНРО-Центр» Г Владивосток, у л Западная, 10

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Корниенко, Михаил Сергеевич

Оглавление.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Строение жаберного аппарата костистых рыб.

1.2. Клеточный состав жаберного эпителия.

1.2.1. Опорные клетки.

1.2.2. Покровные клетки.

1.2.3. Недифференцированные клетки.

1.2.4. Слизистые клетки.

1.2.5. Нейроэпителиальные клетки.

1.2.6. Редко встречающиеся типы клеток.

1.2.7. Хлоридные клетки.

1.3. Хлоридные клетки жаберного эпителия морских рыб.

1.4. Хлоридные клетки жаберного эпителия пресноводных рыб.

1.5. Хлоридные клетки в эпителии ламелл.

1.6. Методы идентификации хлоридных клеток в жаберном эпителии.

1.7. Характеристика хлоридных клеток жаберного эпителия рыб при изменении солености среды.

1.8. Механизм работы хлоридных клеток в морской и пресной воде.

1.9. Строение почек рыб.

2. Материалы и методы.

3. Результаты.

3.1. Общая характеристика жаберного эпителия исследованых видов.

3.2. Характеристика жаберного эпителия дальневосточной красноперки при изменении солености окружающей среды.

3.3. Характеристика жаберного эпителия восьмилинейного терпуга при изменении солености окружающей среды.

3.4. Характеристика жаберного эпителия рыбы иглы при изменении солености окружающей среды.

3.5. Общая характеристика почечных канальцев дальневосточной красноперки и восьмилинейного терпуга.

4. Обсуждение результатов.

5. Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Структурно-функциональная характеристика ионоцитов жабр и почки некоторых видов рыб при изменении солености окружающей среды"

Актуальность. Работа посвящена проблеме морфогенеза клеток в процессе адаптации животных к изменению условий окружающей среды. Костистые рыбы - это самая многочисленная в систематическом плане и самая разнообразная в экологическом отношении группа среди позвоночных животных. Они населяют как пресные, так и морские водоемы. Некоторые эвригалинные виды в своем жизненном цикле в ходе миграций из рек в море несколько раз меняют соленость среды обитания. При этом успех адаптации зависит от способности рыб перестраивать свой водно-солевой обмен с гипоосмотического типа регуляции на гиперосмотический тип или обратно. Клеточные и молекулярные механизмы, обеспечивающие смену типа осморегуляции рыб, до сих пор остаются до конца неясными.

Существует довольно большое число работ, посвященных данной проблеме, однако почти все они выполнены на небольшом числе модельных объектов, таких как виды родов Salmo, Oncorhynchus, Tilapia. Вместе с тем, единичные работы, осуществленные на других видах, зачастую сопровождаются интересными результатами и выводами.

В нашей работе мы исследовали три вида рыб: дальневосточную красноперку Tribolodon brandti, восьмилинейного терпуга Hexagrammos octogrammus (сем. Hexagrammidae) и рыбу-иглу Syngnathus acusimilis. На примере этих видов мы хотели проследить изменения в осморегулирующих органах, происходящие при смене типа осморегуляции, как у проходных рыб, так и у эвригалинных.

Цель работы - исследование структурно-функциональных механизмов адаптации эвригалинных видов рыб к воде различной солености. Задачи исследования:

- изучить особенности ультраструктурного строения хлоридных клеток жаберного эпителия у дальневосточной красноперки, восьмилинейного терпуга и рыбы-иглы;

- выявить особенности ультраструктурного строения клеток почечных канальцев у дальневосточной красноперки и рыбы-иглы;

- проследить структурно-функциональные изменения клеток жаберного эпителия и почечных канальцев при изменении солености окружающей среды.

Научная новизна. Впервые выполнены исследования изменений, происходящих в ионоцитах (хлоридных клетках жаберного эпителия и клетках почечных канальцев) при изменении солености окружающей среды у видов Tribolodon brandti (сем. Cyprinidae), Hexagrammos octogrammus (сем. Hexagrammidae) и Syngnathus acusimilis (сем. Syngnathidae). Изучены механизмы осморегуляции дальневосточной красноперки в ходе нерестовых, зимовальных и нагульных миграций. Впервые показано, что высокая степень эвригалинности некоторых видов рыб прибрежно-эстуарного комплекса обусловлена постоянным наличием на протяжении всего жизненного цикла в их жаберном эпителии ионоцитов пресноводного и морского типа.

Практическое значение. Результаты проведенного исследования расширяют представления о механизмах адаптации костистых рыб к изменению солености окружающей среды. Результаты работы могут быть использованы в рыбоводстве для разработки рекомендаций по определению оптимальных сроков перевода выращиваемой молоди эвригалинных рыб в морскую воду, а также в курсах лекций по гистологии, цитологии и физиологии животных для студентов биологических специальностей ВУЗов.

Апробация работы. Основные результаты работы представлены на конференции молодых ученых Научно-образовательного центра ДВГУ «Морская биота» (Владивосток, 2002), на I Съезде физиологов стран СНГ (Сочи, 2005), на ежегодных научных конференциях Института биологии моря в 2006 и 2007 годах, на заседаниях семинара по морфологии, физиологии и биохимии Института биологии моря и семинара Лаборатории физиологии ИБМ. Работа была выполнена при поддержке гранта ДВО РАН (2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы, в том числе 2 статьи в журналах из списка рекомендуемого ВАК; одна статья принята в печать.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 114 страницах и состоит из введения, четырех основных глав, списка литературы, включающего 135 названий (из них 127 иностранных авторов), и 69 рисунков (схемы и электронно-микроскопические фотографии).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Корниенко, Михаил Сергеевич

5. Выводы

1. Эвригалинные виды рыб имеют различные стратегии адаптации к изменению солености воды. Активная стратегия дальневосточной красноперки Tribolodon brandti направлена на смену типа осморегуляции с гиперосмотического на гипоосмотический тип или наоборот. За счет включения в работу соответственно хлоридных клеток морского или пресноводных типов. Это обеспечивает высокую степень эвригалинности рыб, позволяя им мигрировать из моря в реки и обратно. Пассивная стратегия физиологической адаптации у менее эвригалинных видов — восьмилинейного терпуга Hexagrammos octogrammus и рыбы-иглы Syngnathus acusimilis направлена на снижение ионной проницаемости эпителиев, при этом не происходит смены типа осморегуляции.

2. Впервые показано, что высокая степень эвригалинности дальневосточной красноперки Tribolodon brandti обусловлена постоянным наличием на протяжении всего жизненного цикла в их жаберном эпителии хлоридных клеток, как морского, так и пресноводного типов. В зависимости от солености окружающей среды активизируется тот или иной тип хлоридных клеток, что позволяет этому виду успешно адаптироваться к резким изменениям солености.

3. Эвригалинные виды рыб прибрежно-эстуарного комплекса восьмилинейный терпуг Hexagrammos octogrammus и рыба-игла Syngnathus acusimilis переносят длительное опреснение воды, но не способны полностью адаптироваться к пресной воде. Сохранение ионного гомеостаза у этих рыб в опресненной воде обеспечивается в первую очередь за счет снижения ионной проницаемости жаберного эпителия путем соответствующих изменений ультраструктуры хлоридных клеток морского типа и активизации слизистых клеток. Хлоридные клетки пресноводного типа у них не формируются.

4. Почечные канальцы играют второстепенную роль в осморегуляции эвригалинных рыб. Это подтверждается незначительными ультраструктурными изменениями нефронов в процессе адаптации рыб к существенным изменениям солености окружающей среды.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Корниенко, Михаил Сергеевич, Владивосток

1. Аминева В. А., Яржомбек А. А. Физиология рыб. М.: Легк. и пищ. пром-сть, 1984. 200 с.

2. Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология: В 3-х т. Т. 3.: Пер. с англ. / Под. ред. Р. Сопера. М.:Мир, 1990. 376 с.

3. Дроздов A.JI, Корниенко Е.С., Краснолуцкий А.В. Размножение и развитие приморской морской иглы Syngnathus acusimilis II Биол. моря. 1997. Т. 23, № 5. С. 304-308.

4. Наточин Ю.В. Ионорегулирующая функция почки. Л.: Наука. 1976. 267с.

5. Наумов Н. П., Карташев Н. Н. Зоология позвоночных. Ч. 1. — М: Высш. школа, 1979. 333 с.л

6. Новиков Н.П., Соколовский А.П., Соколовская Т.Г., Яковлев Ю.М. Рыбы Приморья. Владивосток: Дальпресс, 2002. 550с

7. Степанов В.В. Характеристика температуры и солености вод залива Восток Японского моря // Биологические исследования залива Восток. Владивосток. 1976. С. 12-22.

8. Шмидт-Ниельсен К. Физиология животных. Приспособление и среда. Кн. 2 : Пер. с англ. М.: Мир. 1982. 384 с.

9. Avella M., Masoni A., Bornancin M., Mayer-Gostan N. Gill morphology and sodium influx in the rainbow trout (Salmo gairdneri) acclimated to artificial freshwater environments // J. Exp. Zool. 1987. V. 241. P. 159-169.

10. Avella M., Bornancin M. A new analysis of ammonia and sodium transport through the gills of the freshwater rainbow trout {Salmo gairdneri) II J. Exp. Biol. 1989. V. 142. P. 155-175.

11. Barber D.L., Mills W., Jensen D.N. New observations on the rodlet cell (Rhabdospora thelohani) in the white sucker Catostomus commersoni (Lace'pe de): LM and EM studies // J. Fish. Biol. 1979. V. 14. P. 277-284.

12. Bartels H., Moldenhauer A., Potter I.C. Changes in the apical surface of chloride cells following acclimation of lampreys to seawater // Am. J. Physiol. 1996. V. 270. P. R125-R133.

13. Bartels H. Assemblies of linear arrays of particles in the apical plasma membrane of mitochondria-rich cells in the gill epithelium of the Atlantic hagfish {Myxine glutinosa). II Cell Tissue Res. 1985. V. 238. P. 229-238.

14. Bartels H. Intercellular junctions in the gill epithelium of thev Atlantic hagfish, Myxine glutinosa II Cell .Tissue Res. 1988. V. 254. P. 573-583.

15. Bindon S.D., Fenwick J.C., Perry S.F. Branchial chloride cell proliferation in the rainbow trout, Oncorhynchus mykiss: implications for gas transfer // Can. J. Zool. 1994. V. 72. P. 1395-1402.

16. Borgatti A., Pagliarani A., Ventrella V. Gill Na+/K+-ATPase involvement and regulation during salmonid adaptation to salt water // Сотр. Biochem. Phisiol. A-comp. physiol. 1992. V. 102. P. 637-643.

17. Cataldi E., Garibaldi L., Grosetti D., Leoni G., Cataudella S. Variations in renal morphology during adaptation to salinities in tilapias // Envir. Biol. Fish. 1991. V. 31. P. 101-106.

18. Chang I.C., Lee Т.Н., Yang C.H., Wei Y.Y., Chou F.I., Hwang P-P. Morphology and function of gill mitochondria-rich cells in fish acclimated to different environments // Physiol. Biochem. Zool. 2001. V. 74. P. 111-119.

19. Cioni C., Merich D., Cataldi E., Cataudella S. Fine structure of chloride cells in freshwater- and seawater-adapted Oreochromis niloticus (Linnaeus) and Oreochromis mossambicus (Peters) // J. Fish Biol. 1991. V. 39. P. 197-209.

20. Claiborne J.B., Edwards S.L., Morrison-Shetlar A.I. Acid-base regulation in fishes: cellular and molecular mechanisms // J. Exp. Zool. 2002. V. 293 P. 302319.

21. Crespo S. Surface morphology of dogfish (Scyliorhinus canicula) gill epithelium and surface morphological changes following treatment with zinc sulfate: a scanning electron microscope study // Mar. Biol. 1982.V. 67 P. 159-166.

22. Daborn K., Cozzi R.R.F., Marshall W.S. Dynamics of pavement cell-chloride cell interactions during abrupt salinity change in Fundulus heteroclitus II J. Exp. Biol. 2001. V. 204. P. 1889-1899.

23. Dunel-Erb S., Chevalier C., Laurent P. Distribution of neuroepithelial cells and neurons in the trout gill filament: comparison in spring and winter // Can. J. Zool. 1994. V. 72. P. 1794-1799.

24. Ellis L.C., Youson J.H., Ultrastructure of the pronephric kidney in upstream migrant sea lamprey, Petromyzon marinus L. // Amer. J. Anat. 1989. V. 185. P. 429-443.

25. Evans D.H., Piermarini P.M., Potts W.T.W. Ionic transport in the fish gill epithelium // J. Exp. Zool. 1999. V. 283. P. 641-652.

26. Evans D.H. Osmotic and ionic regulation. In: The Physiology of Fishes, edited by Evans D.H. Boca Raton. FL: CRC, 1993, P. 315-341.

27. Fielder D.S., Allan G.L., Pepperall D., M. Pankhurst P.M. The effects of changes in salinity on osmoregulation and chloride cell morphology of juvenile Australian snapper, Pagrus auratus II Aquaculture. 2007. V. 272. P. 656-666.

28. Foskett J.K., Logsdon C.D., Turner Т., Machen Т.Е., Bern H.A. Differentiation of the chloride extrusion mechanism during seawater adaptation of a teleost fish, the cichlid Sarotherodon mossambicus II J. Exp. Biol. 1981. V. 93. P. 209-224.

29. Galvez F., Reid S.D., Hawkings G., Goss G.G. Isolation and characterization of mitochondria-rich cell types from the gill of freshwater rainbow trout // Am. J. Physiol. 2002. V. 282. P. R658-R668.

30. Garcia-Romeu F., Masoni A. Sur la mise en e'vidence des cellules a chlorure de la branchie des poissons // Arch. Anat. Microsc. 1970. V. 59. P.289-294.

31. Goss G.G., Perry S., Wood C., Laurent P. Mechanisms of ion and acid-base regulation at the gills of fresh-water fish // J. Exp. Zool. 1992. V. 263. P. 143-159.

32. Goss G.G., Laurent P., Perry S.F. Gill morphology during hypercapnia in brown bullhead (Ictalurus nebulosus): role of chloride cells and pavement cells in acid-base regulation // J. Fish. Biol. 1994. V. 45. P. 705-718.

33. Greco A.M., Fenwick J.C., Perry S.F. The effects of softwater acclimation on gill structure in the rainbow trout Oncorhynchus mykiss II Cell Tissue Res. 1996. V. 285. P. 75-82.

34. Hickman C.P., Trump B.F. The kidney // Fish Physiology. Vol. 1. New York: Academic Press, 1969. P. 91-239.

35. Hirai N., Tagawa- M., Kaneko Т., Seikai Т., Tanaka M. Distributional changes in branchial chloride cells during freshwater adaptation in Japanese sea bass Lateolabrax japonicus II Zool. Sci. 1999. V. 16. P. 43-49.

36. Hiroi J., Kaneko Т., Tanaka M. In vivo sequential changes in chloride cell morphology in the yolk-sac membrane of Mozambique tilapia {Oreochromis mossambicus) embryos and larvae during seawater adaptation // J. Exp. Biol. 1999. V. 202. P. 3485-3495.

37. Holland J.W., Rowley A.F. Studies on the eosinophilic granule cells in the gills of the rainbow trout, Oncorhynchys mykiss II Сотр. Biochem. Physiol. 1998. V. 120. P. 321-328.

38. Hootman S.R., Philpott C.W. Accessory cells in the teleost branchial epithelium // Am. J. Physiol. 1980. V. 238. P. R199-R206.

39. Huang C.Y., Lee W., Lin H.C.Functional differentiation in the anterior gills of the aquatic air-breathing fish, Trichogaster leeri II J. Сотр. Physiol. В. 2008. V.178 P.l 11-121.

40. Hughes G.M. General anatomy of the gills. In: Hoar W.S., Randall D.J., editors // Fish physiology 1984. V. 10A. New York: Academic Press. P. 1-72.

41. Hwang P. Multicellular complex of chloride cells in the gills of freshwater teleosts // J. Morphol. 1988. V. 196. P. 15-22.

42. Hwang P.P., Hirano. R. Effects of environmental salinity on intercellular organization and junctional structure of chloride cells in early stages of teleost development // J. Exp. Zool. 1985. V. 236. P. 115-126.

43. Jurss K., Bastrop R. The function of mitochondria-rich cells (chloride cells) in teleost gills // Rev. Fish. Biol. 1995. V. 5. P. 235-255.

44. Kaneko Т., Shiraishi K., Katoh F., Hasegawa S., Hiroi J. Chloride cells during early life stages of fish and their functional differentiation // Fish. Sci. 2002. V. 68. P. 1-9.

45. Karnaky K.J., Degnan K.J., Garretson L.T., Zadunaisky J.A. Identification and quantification of mitochondria-rich cells in transporting epithelia // Am. J. Physiol. 1984. V. 246. P. R770-R775.

46. Katoh F., Hasegawa S., Kita J., Takagi Y., Kaneko T. Distinct seawater and freshwater types of chloride cells in killifish, Fundulus heteroclitus II Can. J. Zool. 2001. V. 79. P. 822-829.

47. Kawahara Т., Sasaki Т., Higashi S. Intercellular junctions in chloride and pavement cells of Oplegnethus fasciatus II J. Electron. Microsc. 1982. V. 31. P. 162-170.

48. Keys A., Willmer E.N. "Chloride secreting cells" in the gills of fishes, with special reference to the common eel // J. Physiol. 1932. V. 76. P. 368-378.

49. Madsen S.S. Enhanced hypoosmoregulatory response to growth hormone after Cortisol treatment in immature rainbow trout, Salmo gairdneri II Fish Physiol. Biochem. 1990. V. 8. P. 271-279.

50. Maetz J. Fish gills: mechanisms of salt transfer in freshwater and sea water // Phil. Trans. Roy. Soc. Lond. 1971. V. 262. P. 209-249.

51. Maina. J.N. A morphometric analysis of chloride cells in the gills of the teleosts Oreochromis aicalicus and Oreochromis niloticus and a description of presumptive urea-excreting cells in O. aicalicus II J. Anat. 1991. V. 175. P. 131145.

52. Mallatt J., Paulsen C. Gill ultrastructure of the Pacific hagfish Eptatretus stoutill Am. J. Anat. 1986. V. 177. P. 243-269.

53. Mallery C. A carrier enzyme basis for ammonium excretion in teleost gill. NH4+-stimulated Na- dependent ATPase activity in Opsanus beta // Сотр. Biochem. Physiol. 1983. V. 74A, P. 889-897.

54. Marshall W.S. Na+, CI", Ca2+ and Zn2+ Transport by Fish Gills: Retrospective Review and Prospective Synthesis // J. Exp. Zool. 2002. V. 293 P. 264-283

55. Marshall W.S. Transepithelial potential and short-circuit current across the isolated skin of Cillichthys mirabilis (Teleostei: Gobiidae) acclimated to 5% and 100% seawater // J. Сотр. Physiol. 1977. V. 114. P. 157-165.

56. Marshall W.S., Bryson S.E., Wood C.M. Calcium transport by isolated skin of rainbow trout // J. Exp. Biol. 1992. V. 166. P. 297-316.

57. McCormick S.D. Fluorescent labelling of Na+,K+-ATPase in intact cells by use of a fluorescent derivative of ouabain: salinity and chloride cells // Cell Tissue Res. 1990. V. 260. P. 529-533.

58. Nonnotte G., Nonnotte L., Kirsch R. Chloride-cells and chloride exchange in the skin of a sea-water teleost, the shanny {Blennius pholis L.) // Cell Tissue Res. 1979. V. 199. P. 387-396.

59. Olson K.R. Scanning electron microscopy of the fish gill. In: Munshi J.S.D., Dutta H.M., editors. Fish morphology. Horizon of new research. Rotterdam: AA Balkema. 1996. P. 32-45.

60. Olson K.R. The cardiovascular system. In: Evans DH, editor. The physiology of fishes. Boca Raton: CRC Press. 1998. P. 129-154.

61. Olson K.R Vascular anatomy of the fish gill // J. Exp. Zool. 2002. V. 293. P. 214-231.

62. Partridge С., Shardo J., Boettcher A. Osmoregulatory role of the brood pouch in the euryhaline Gulf pipefish, Syngnathus scovelli // Сотр. Biochem. Physiol. A.: Mol. Integr. Physiol. 2007. V. 147. P. 556-561.

63. Perry S.F., Laurent P. Adaptational responses of rainbow trout to lowered external NaCl concentration: contribution of the branchial chloride cell // J. Exp. Biol. 1989. V. 147. P. 147-168.

64. Perry S.F. The chloride*cell: structure and function in the gills of freshwater fishes // Annu. Rev. Physiol. 1997. V. 59. P. 325-347.

65. Perry S.F. Relationships between branchial chloride cells and gas transfer in freshwater fish // Сотр. Biochem. Physiol. 1998. V. 119A. P. 9-16.

66. Philpott C.W. Tubular system membranes of teleost chloride cells: osmotic response and transport sites // Am. J. Physiol. 1980. V. 238. P. R171-R184.

67. Pisam Mr, Auperin В., Prunet P., Rentier-Dulrue F., Martial J., Rambourg A. a and P chloride cells in the gill epithelium of the saltwater adapted tilapia Oreochromis niloticus //Anat. Rec. 1993. V. 235. P. 275-284.

68. Pisam M., Boeuf G., Prunet P., Rambourg A. Ultrastructural features of mitochondria-rich cells in stenohaline freshwater and seawater fishes // Am. J. Anat. 1990. V. 187. P. 21-31.

69. Pisam M., Boeuf G., Prunet P., Rambourg A. Two types of chloride cells in the gill epithelium of freshwater-adapted euryhaline fish: Lebistes reticulatus; their modifications during adaptation to saltwater // Am. J. Anat. 1987. V. 179. P. 4050.

70. Pisam M., LeMoal C., Auperin В., Prunet P., Rambourg A. Apical structures of "mitochondria-rich" a and p cells in euryhaline fish gill: their behaviour in various living conditions // Anat. Rec. 1995. V. 241. P. 13-24.

71. Pisam M., Prunet. P., Boeuf G, Rambourg A. Ultrastructural features of chloride cells in the gill epithelium of the Atlantic salmon, Salmo salar, and their modifications during smoltification // Am. J. Anat. 1988. V. 183. P. 235-244.

72. Pisam M., Prunet P., Rambourg A. Accessory cells in the gill epithelium of freshwater rainbow trout Salmo gairdneri II Am. J. Anat. 1989. V. 184. P. 311320.

73. Pisam M., Rambourg A. Mitochondria-rich cells in the gill epithelium of teleost fishes: an ultrastructural approach // Int. Rev. Cytol. 1991. V. 130. P. 191— 232.

74. Randall D.J, Wilson J.M., Peng K.W, Kok W.K., Kuah S.S.L, Chew S.F., Lam T.J, Ip Y.K. The mudskipper, Periophthalmodon schloesseri, actively transports NH4+ against a concentration gradient I I Am. J. Physiol. 1999. V. 277. P. R1562-R1567. :

75. Richman N.H, Tai de Dias S, Nishioka- R.S, Prunet P, Bern H.A. Osmoregulatory and endocrine relationships with chloride cell morphology and density during smoltification in coho salmon (Oncorhynchus kisutch) // Aquaculture. 1987. V. 60. P. 265-285.

76. Rojo M.C, Blanquez M.J, Gonzalez M.E. A histochemical study of the distribution of lectin binding sites in the developing branchial area of the trout Salmo trutta I/ J. Anat. 1996. V. 189. P. 609-621.

77. Rombough P.J. The gill of fish larvae. Is it primarily a respiratory or an ionoregulatory structure? // J. Fish. Biol. 1999. V. 55. P. 186-204.

78. Saboia S.M.T, Hernandez-Blazquez F.J, Mota D.L, Bittencourt A.M. Mucous cell types in the branchial epithelium of the euryhaline fish Poecilia vivipara II J. Fish Biol. 1996. V. 49. P. 545-548.

79. Sakamoto T, Yokota S, Ando M. Rapid morphological oscillation of mitochondria-rich cell in estuarine mudskipper following salinity changes // J. Exp. Zool. 2000. V. 286. P. 666-669.

80. Sandbacka M., Lilius H., Enkvist M.O.K., Isomaa В. Rainbow trout gill epithelial cells in primary culture communicate through gap junctions as demonstrated by dye-coupling // Fish. Physiol. Biochem. 1998. V. 19. P. 287-292.

81. Sardet C., Pisam M., Maetz J. The surface epithelium of teleostean fish gills. Cellular and junctional adaptations of the chloride cell in relation to salt adaptation // J. Cell. Biol. 1979. V. 80. P. 96-117.

82. Sasai S., Kaneko Т., Hasegawa S., Tsukamoto K. Morphological alteration in two types of gill chloride cells in Japanese eels (Anguilla japonica) during catadromous migration // Can. J. Zool. 1998 V. 76; P. 1480-1487.

83. Shirai N., Utida S. Development and degeneration of the chloride cell during sea water and fresh water adaptation of the Japanese eel: Anguilla japonica H Z. Zellforsch. 1970. V. 103. P. 247-264.

84. Sturla M., Masini M.A., Prato P., Grattarola C., Uva B. Mitochondria-rich cells in gills and skin of an African lungfish, Protopterus annectens II Cell Tissue Res. 2001. V. 303. P. 351-358.

85. Sundin L., Nilsson S. Brachial innervation // J. Exp. Zool. 2002. V. 293. P. 232-248.

86. Tsai J-C., Hwang P-P. Effects of wheat germ agglutinin and colchicine on microtubules of the mitochondria-rich cells and Ca2+ uptake in tilapia (Oreochromis mossambicus) larvae // J. Exp. Biol. 1998. V. 201. P. 2263-2271.

87. Uchida K., Kaneko Т., Yamauchi K., Hirano T. Morphometrical analysis of chloride cell activity in the filaments and lamellae and changes in Na+, K+-ATPase activity during seawater adaptation in chum salmon fry // J. Exp. Zool. 1996 V. 276. P. 193-200.

88. Varsamos S., Diaz J.P., Charmantier G., Flik G., Blasco C., Connes R. Branchial chloride cells in sea bass {Dicentrarchus labrax) adapted to fresh water, seawater, and doubly concentrated seawater // J. Exp. Zool. 2002 V. 293. P. 12-26.

89. Verbost P., Schoenmakers Т., Flik G., Wendelaar Bonga S.E. Kinetics of ATP- and Na'-gradient driven Ca2+ transport in basolateral membranes from gills of freshwater- and seawater-adapted tilapia//J. Exp. Biol. 1994. V. 186. P. 95-108.

90. Watrin A., Mayer-Gostan N. Simultaneous recognition of ionocytes and mucous cells in the gill epithelium of turbot and in the rat stomach // J. Exp. Zool. 1996. V. 276. P. 95-101.

91. Wendelaar Bonga S.E., van der Meij C.J.M. Degeneration and death, by apoptosis and necrosis, of the pavement and chloride cells in the gills of the teleost Oreochromis mossambicus И Cell Tissue Res. 1989. V. 255. P. 235-243.

92. Wilson J.M., Laurent P. Fish Gill Morphology: Inside Out // J. Exp. Zool. 2002. V. 293 P. 192-213.

93. Wilson J.M., Kok W.K., Randall D.J., Vogl A.W., Ip Y.K. Fine structure of the gill epithelium of the terrestrial mudskipper, Periophthalmodon schlosseri II Cell Tissue Res. 1999. V. 298. P. 345-356.

94. Wilson J.M., Randall D.J., Donowitz M., Vogl A.W., Ip Y.K. Immunolocalization of ion-transport proteins to branchial epithelium mitochondria-rich cells in the mudskipper {Periophthalmodon schlosseri) II J. Exp. Biol. 2000b. V. 203. P. 2297-2310.

95. Wilson J.M., Vogl A.W., Randall D.J. Gill morphology of the neon tetra, Paracheirodon innesi. In: Val A.L., Randall D.J., MacKinlay D., editors. Physiology of Tropical Fishes. Alpharetta, GA: American Fisheries Society. 1996. P. 123- 128.

96. Wilson J.M., Vogl A.W., Randall D.J. Branchial mitochondria-rich cells in the dogfish {Squalus acanthias) II Сотр. Biochem. Physiol. А. 2002. V. 132. P. 365-374.

97. Witters H., Berckmans P., Vangenechten C. Immunolocalization of Na+,K+-ATPase in the gill epithelium of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss II Cell Tissue Res. 1996. V. 283. P. 461-468.

98. Yoshikawa J., Mccormick S., Young G., Bern H. Effects of salinity on chloride cells and Na+, K+-ATPase activity in the teleost Gillichthys-Mirabilis II Сотр. Biochem. Physiol. А. 1993. V. 105. P. 311-317.