Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительный анализ морфофункциональных показателей печени голубей и кур-бройлеров в критические периоды онтогенеза

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительный анализ морфофункциональных показателей печени голубей и кур-бройлеров в критические периоды онтогенеза"

На правах рукописи

Хамитова Лязат Ералловна

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПЕЧЕНИ ГОЛУБЕЙ И КУР-БРОЙЛЕРОВ В КРИТИЧЕСКИЕ ПЕРИОДЫ ОНТОГЕНЕЗА

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 3 СЕН 2015 005562482

Астрахань - 2015

005562482

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный педагогический университет», Министерства образования и науки РФ

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент

Антонова Елена Ивановна

Официальные оппоненты: Правоторов Георгий Васильевич, доктор

биологических наук, профессор, ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии, профессор

Мусина Ляля Ахняровна, доктор биологических наук, ФГБУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии», отдел морфологии, ведущий научный сотрудник

Ведущая организация: Федеральное государственное автономное

образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский национальный исследовательский государственный университет» (Новосибирский государственный университет)

Защита диссертации состоится « 23 » октября 2015 года в 10:00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.009.01 при ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет» по адресу: 414000, г. Астрахань, пл. Шаумяна, д.1, ауд. 101.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет» по адресу: 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20а и на сайте http://www.asu.edu.ru

Автореферат разослан « °Р» ¿¿"^Я&Х 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Курьянова Евгения Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Фундаментальным понятием в биологии является понятие о гомеостазе. Особую актуальность приобретает исследование механизмов поддержания гомеостаза организма в непрерывно меняющихся условиях существования и представляет собой центральную проблему биологии и медицины, которая отражает все разнообразие частных проявлений относительной стабильности биологических систем на всех уровнях организации - организменном, тканевом, клеточном и субклеточном.

Взаимоотношение организм-среда носит сложный и многоплановый характер, одним из средообразующих компонентов которого является человек. Проблемы урбоэкосистем состоит в сочетании большого числа действующих естественно-природных, антропогенных и техногенных факторов, соответственно, стресс, который испытывают городские популяции, выше (Коломыц и др., 2000). Интенсивная урбанизация окружающей среды приводит к трансформации сообществ растений и животных (Рахимов, 2012; Егорова и др.,2013). В связи с этим к жизни в городе приспосабливаются виды, которые имеют адаптивный резерв или широкую норму реакции, способные быстро осваивать трансформируемые человеком территории (Галушин, 2005; Рахимов, 2011). В свою очередь, доместикация кур, промышленное разведение привели к изменению поведения, морфологии и функционирования внутренних органов, в том числе и желез пищеварительного тракта, а их эволюция, контролируемая человеком, проходила в разных направлениях, вследствие чего было получено огромное количество самых разнообразных форм кросс-линий кур (Трифонов и др., 2009; Бусловская и др., 2010; Ройтер, 2010; Жилина, 2010; Фисинин и др., 2013). В условиях действия стресса актуально изучение особенностей регенерации органов и тканей, которые непосредственно участвуют в поддержании гомеостаза организма. Печень, как один из таких органов, осуществляет межсистемную кооперацию в организме, а сложность структуры, полифункциональность, быстрота вовлечения в деструктивные и репаративные процессы - определяет интерес исследователей к сравнительному изучению закономерностей структурно-функциональной организации, анализу адаптационных перестроек, выявлению механизмов, обеспечивающих развитие организма в целом (Воробьев, 2009; Ростина, 2012).

Исследование процессов морфогенеза печени на различные критические периоды эмбрио- и постэмбриогенеза ведет к пониманию степени зрелости и функциональных возможностей органов и организма в целом, что особенно важно знать при организации технологии содержания и выращивания птенцов. Эволюционно-адаптивные преобразования во многом определили выживаемость эмбрионов и птенцов у выводковых и птенцовых птиц, которые по степени развития органов и регуляторных систем организма к моменту вылупления из яиц различны и определяются условиями и продолжительностью инкубации (Родимцев, 2004; Бородулина, 2009; Паюшина и др., 2012; Шураков и др., 2013).

Тканевый гомеостаз обеспечивается межклеточными стромально-

паренхимными цитокоммуникациям, динамическим балансом между погибшими и пролиферирующими клетками (Арешидзе и др., 2012; Ельчанинов, 2012). Современные исследования путей ПКГ выделяют апоптоз (ПКГ I типа) и аутофагию (ПКГ II типа) (Poison et al., 2010). В то же время на запуск и соотношение путей, ингибирование и переключение процессов ПКГ большое значение оказывают протоонкоген семейства bcl-2 и ген р53 (Danial, 2010). Актуальным является изучение такого фактора процессивности как PCNA, который отражает как пролиферативную активность, так и участвует в репарации ДНК (Strzalka, 2011; Li, 2013).

Анализ отечественной и зарубежной литературы показал, что исследования печени в вышеосвященом аспекте малочисленны и носят разрозненный характер (Хохлов, 2006; Ткачев, 2007; Антонова, 2009). В связи с этим целью работы является - в сравнительном аспекте изучить морфогенез печени птиц вида Columba livia var. urbana и кур-бройлеров «РОСС-308» в критические периоды онтогенеза на различных уровнях организации живых систем в условиях действия антропогенной нагрузки.

Настоящее исследование проводилось по федеральному плану (№ гос. регистрации 01 9 10 011014).

Задачи исследования:

1. На организменном уровне - определить динамику массы и температуры тела, интегральные показатели организма.

2. На органном уровне - выявить динамику просвета микроциркуляторного русла и гистотопографию печеночного ацинуса.

3. На тканевом/межтканевом уровне - иммуно- и гистохимически в трех зонах печеночного ацинуса изучить динамику стромально-паренхимных соотношений цитотипов печени.

4. На клеточном уровне - в трех зонах печеночного ацинуса выявить закономерности в соотношении показателей пролиферации, реализации различных путей ПКГ, регуляторов клеточного цикла ГЦ.

5. На субклеточном уровне - определить динамику состояния фракций хроматина и распределение популяций ГЦ по стадиям клеточного цикла.

Научная новизна работы: В сравнительном аспекте в условиях антропогенной нагрузки проведен системный анализ гистации печени, установлены механизмы реактивности и пластичности печени на органном, тканевом/межтканевом, клеточном и субклеточном уровнях, формирования структурно-функциональных единиц печени в критические периоды развития организма птиц, отличающихся по степени воздействия человека на процессы гибридизации, а также по типу и условиям развития.

Выявлены общие и частные закономерности, клеточные особенности реакции сосудисто-тканевых компонентов печеночного ацинуса, особенности в динамике клеточного состава периферической крови, стромально/паренхимные соотношения цитотипов печени в различных зонах ацинуса и на различные критические периоды онтогенеза.

Представлены сравнительные данные о механизмах, способах и масштабах регенерации печени, выявлена степень выраженности реактивности и пластичности с позиции гистотопографии печени согласно эволюционно обусловленным закономерностям на различных периодах онтогенеза. Установлены и сопоставлены особенности клеточного цикла, соотношения путей гибели ГЦ, выявлены переключения форм регенерации печени, путей ПКГ ГЦ птиц.

Полученные данные во многом расширяют и углубляют представления в области сравнительной гистологии, цитологии, клеточной биологии, об особенностях морфогенеза печени птенцовых и выводковых птиц на критические периоды развития эмбрио- и постэмбриогенеза в условиях антропогенной нагрузки.

Теоретическая н практическая значимость: Полученные результаты сравнительной морфофункциональной организации печени и клеточного состава периферической крови в критических периодах онтогенеза птиц, выявили топографию реактивных и пластических изменений печеночного ацинуса, особенности клеточных циклов, соотношения путей гибели ГЦ, способов регенерации печени. Расширены представления о тканевом гомеостазе, выявлены сопряженности показателей гомеостаза с критическими периодами развития с позиции уровней организации живых систем. Значительно дополнены представления по эволюционной биологии развития, молекулярной биологии, сравнительной зоологии, экологии животных.

Результаты исследований представляют практический интерес для уточнения показаний к режимам инкубации, позволяют обосновать механизмы нарушений, развивающихся в организме птиц на критических периодах онтогенеза в промышленных условиях разведения. Полученные результаты могут быть использованы для выявления эволюционных механизмов реализации структурно-функциональных компенсаций и их регуляции.

Результаты исследования внедрены в практику ОАО Омской области «Птицефабрика «Сибирская» с 29.09.2014 года.

Материалы и методы исследования: Для решения поставленных задач по выявлению и оценке деструктивных и репаративных процессов, которые сопровождают онтогенез птиц, сформированы две экспериментальные группы: голуби вида Columba Jivia var. urbana Gmelin, 1789; куры-бройлеры четырехлинейного кросса «РОСС-308». Инкубация яиц и птенцов кур-бройлеров проводилась на птицефабрике «Сибирская» г. Омска с соблюдением стандартных условий содержания. Содержание, инкубация яиц и птенцов голубей проходили в условиях городских инфраструктур. В пределах каждой группы выделялись критические периоды (табл. 1), на которые проводился забор материала для исследований (Родимцев, 2005; Клименкова, 2006; Ткачев, 2007; Зайцева, 2010). При проведении эксперимента руководствовались принципами гуманного отношения к животным в соответствии с Международными рекомендациями.

Организменный уровень. После декапитации животных, под легким эфирным наркозом, проводился забор крови, мазки фиксировали в метаноле, окрашивали Азур-Эозином по Романовскому «Диахим-Гемистейн-Р» (Абрис, Россия), по лейкоцитарной формуле определяли ЛИИ и ИСЛК (Островский, 1983).

Органный уровень. Образцы печени фиксировали в 10% - нейтральном забуференном формалине, заливали в гистомикс (ШвКших®, Россия), готовили серийные срезы, окрашивали гематоксилином Майера/эозином (ВюУкгит, Россия), определяли внутренний диаметр сосудов печеночного ацинуса.

Таблица 1

Количество животных, экспериментальные группы и сроки забора материала

Наименование групп Критические периоды онтогенеза и количество особей птиц

Эмбриоген ез (сутки) Период вылуплени я (сутки) Постэмбриональный (сутки)

14 16 18 20 1 10 25 40 122 180

Columba livia - 20 20 - 20 20 20 20 - 20

Кросс «РОСС-308» 20 - - 20 20 20 20 20 20 -

Всего 20 20 20 20 40 40 40 40 20 20

Итого: 280

Тканевый/межтканевый и клеточный уровень. Парафиновые срезы окрашивали антителами стрептавидин-биотиновым методом, после предварительной демаскировки методом HIAR. После депарафинирования и дегидратации срезы инкубировали с первичными, далее с биотинилированными вторичными антителами (Link, DAKO LSAB+Kit Peroxidase). Промывали и инкубировали со стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена (Streptavidin, DAKO LSAB+Kit Peroxidase). В качестве субстрата пероксидазной реакции использовали раствор перекиси водорода. В работе использованы антитела к PCNA (Ncl-L-PCNA; разведение 1:100, «Novocastra»), анти-десмин (NCL-L-DES-DERIL, разведение 1:50, «Novocastra»), CD68 (Ab-3, КР1, разведение 1:25, «Termo scientific»), caspase-3 (CPP32, разведение 1:100, Novocastra), LC3A/B (ab81785, разведение 1:200, «Abcam»), p53 (Protein DO-7, разведение 1:80, «Novocastra») и bcl-2 (bcl-2 Oncoprotein, разведение 1:100, «Novocastra»).

Субклеточный уровень. Метод оптико-структурного анализа (ОСА) ДНК. Отпечатки печени окрашивали по Фельгену в модификации G. Olson, в реактиве Шиффа. На препаратах определяли показатели ядер ГЦ - Area, Perim, Cire, IntDen и обоих фракций хроматина - IntDenD и IntDenL; AreaD и AreaL; CircD и CircL; PerimD и PerimL; PAreaD и PAreaL; CntD и CntL. С дальнейшим определением доли ГЦ в стадии Gq/Gi и S+G2+M клеточного цикла,

гиподиплоидных ГЦ (D). Измерения параметров ДНК проводились на сканирующем микроскопе-фотометре «Люмам ПМ-11» (Козинец, 2002).

Фотографирование и морфометрическая обработка всех гистологических препаратов проводились на световом микроскопе Axio Imager Al с помощью программного обеспечения Axiovision rev. 4.7. («Carl Zeiss», Германия).

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета прикладных программ «STATISTICA-6». Различия считались значимыми при р=0,05. Определяли - среднее значение, медиану, дисперсию, критерий согласия (%2) Пирсона. Наряду с параметрическими (t-критерий Стьюдента), использовали непараметрические методы анализа различий между независимыми выборками (критерий Манн-Уитни, многофакторный дисперсный анализ MANO VA).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В сравнительном аспекте определены пути становления структурно-функциональных единиц печени, динамика микроциркуляторного русла и клеточного состава периферической крови, цитофотометрические показатели обеих фракций хроматина, источники физиологической регенерации печени, топография, соотношение путей и регуляторов гибели ГЦ, стромально-паренхимные сопряженности клеточных типов.

2. В эмбриональный период клеточный состав периферической крови одинаков, на период вылупления меняется разнонаправлено. Реализация программы ПКГ, топография ГЦ, динамика сопряженностей с непаренхимными цитотипами, источниками регенерации и показателями клеточного цикла -видоспецифичны.

3. Первые сутки постэмбриогенеза характеризуются у кур-бройлеров максимальными сдвигами в ЛИИ и ИСЛК, увеличением венозного звена сосудистого русла, большим числом погибших ГЦ. У обеих групп птиц в большей мере активируется программа аутофагии, угнетается пролиферативная активность ГЦ с остановкой клеточного цикла.

4. С 10-х суток до половозрелости динамика показателей клеточного состава периферической крови и сосудистого русла видоспецифичны; в отличие от ранних этапов онтогенеза, ведущей формой ПКГ Гц становится апоптоз на фоне разнонаправленной экспрессии ГЦ белка р53 и bcl-2. Выявляются «волны» пролиферации и специфичность в динамике клеточного цикла. Значительно активируются непаренхимные цитотипы печеночного ацинуса.

Публикации: Основные положения диссертации представлены в 15 печатных работах. В изданиях, рекомендованных ВАК - 6.

Апробация i работы: Результаты исследований обсуждены на VII Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы биологической науки и образования в педагогических ВУЗах» (г. Новосибирск, 2011); П1 эмбриологическом симпозиуме «Югра-Эмбрио» (г. Ханты-Мансийск, 2011); IV конференции «Цитоморфометрия в медицине и биологии: фундаментальные и прикладные аспекты» (г. Москва, 2011); Всероссийской научной конференции

«Регенеративная биология и медицина» (г. Москва, 2011); II Международной научно-практической конференции «Динамика научных исследований - 2011» (Польша, 2011); II Международной интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологий» (г. Казань, 2011); Всероссийской конференции «Профилактическая медицина-2011» (г. Санкт-Петербург, 2011); Международной научно-практической интернет-конференции «Современные проблемы и пути их решения в науке, транспорте, производстве и образовании» (г. Одесса, 2011); 8-ой международной научно-практической конференции «Ключевые вопросы в современной науки» (г. София, 2012); I международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологи и биотехнологии» (г. Ульяновск, 2014).

Личный вклад автора. Сбор материала, методы исследования, используемые в работе, статистическая обработка полученных данных выполнены лично автором в ФГБОУ ВПО «Омский государственный педагогический университет». Доля личного участия автора в совместных публикациях пропорциональна числу авторов.

Объем и структура диссертации. Содержание диссертации изложено на 206 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: обзор литературы, изложение материалов и методов исследования, собственных исследований, обсуждение полученных данных, выводы и список литературы. Работа иллюстрирована 66 фотографиями и схематичными рисунками, 18 таблицами. Список использованной литературы включает 357 работ, из которых 231 зарубежных авторов.

Благодарности: д.б.н., профессору Мкртчан О.З., д.б.н., профессору Бгатовой Н.П., д.м.н., профессору Шурлыгиной A.B., к.в.н., заведующему лабораторией диагностических исследований и биотехнологии ГНУ ВНИИБТЖ Секину Е.Ю., главному ветеринарному врачу ОАО «Птицефабрика «Сибирская» к.в.н. Лашину A.B.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Морфофункциональные особенности развития печени Columba livia и кур

породы кросса «РОСС-308» в критические периоды онтогенеза

на организменном уровне

Сравительный межгрупповой статистический анализ выявил: к периоду вылупления масса тела в большей мере увеличивается в группе Columba livia\ в постэмбриогенезе с 1-х по 25-е сутки нарастание массы тела у обеих групп идет одинаковыми темпами, с 40-х суток в большей мере выражено у кур-бройлеров. Это, по всей видимости, связано с особенностью мясной породы кросса «РОСС-308». Пограничными периодами установления постоянной температуры тела для кур-бройлеров являются период с 1-х по 10-е, а для Columba livia-с, 10-х по 25-е сутки постэмбриогенеза. При этом в эмбриогенезе

и в период вылупления ректальная температура Columba livia в среднем составляет 36,8°С, у кур-бройлеров - 34,2°С; в постэмбриогенезе у кур-бройлеров - 40,8°С, у Columba livia - 39°С. По-видимому, у Columba livia, как представителей птенцовых, и у кур-бройлеров, как представителей выводковых, это связано с развитием jYO-ергических структур ствола головного мозга, развитием механизмов физической и химической терморегуляции (Дунай, 2007).

Клеточный состав периферической крови в эмбриогенезе у обеих групп характеризуется преобладанием числа JI и СЯ, отражая формирование иммунной системы эмбрионов (Шевченко, и др., 2012; Тухтафаров, 2013). К периоду вылупления в обеих группах птиц увеличивается количество СЯ, Э; уменьшается количество JI, ПЯ и в группе Columba livia дополнительно и Б. На 1-е сутки постэмбриогенеза в обеих группах птиц увеличивается количество ПЯ, Б и М, уменьшается число Э. В обеих группах на 10-е сутки до половозрелости увеличивается количество Э и с 40-х суток дополнительно число Б. Увеличение количества М. может отражать как активацию процессов фагоцитоза, так и участие в формировании вместе с тканевыми МФ печени единой моноцитарно-макрофагальной системы организма (Калашникова, 2011). В группе Columba livia на 10-е сутки и к половозрелости увеличивается количество ПЯ и СЯ, с 40-х суток уменьшение числа JI. У кур-бройлеров, напротив, количество JI увеличивается, но уменьшается количество СЯ, а с 25-х суток дополнительно и количество ПЯ.

На все критические периоды особенностью группы кур-бройлеров является значимое преобладание (в разы) количество М и Э. В свою очередь, у Columba livia больше ПЯ, СЯ, Б. Количество JI в группе Columba livia на 1-е сутки больше, а с 10-х суток и до периода половозрелости меньше, чем у кур-бройлеров. Выявленные изменения в клеточном составе периферической крови у обеих групп птиц отражаются в показателях ЛИИ и ИСЛК.

на органном уровне

Гистологическое строение паренхимы печеночного ацинуса в обеих группах птиц от периода эмбриогенеза к 1-м суткам постэмбриогенеза трубчатого типа (рис. 1 Да, б), а с 10-х суток до периода половозрелости -трубчато-трабекулярного. Портальные тракты формируются только к 1-м суткам постэмбриогенеза. У Columba livia количественная плотность ацинусов больше. В обеих группах очаги кроветворения, выявленные в эмбриогенезе, сохраняются до 10-х суток постэмбриогенеза. В группе Columba livia пигментные клетки отмечаются на 1-е сутки, а у кур-бройлеров - на 25-е сутки постэмбриогенеза.

У Columba livia диаметр артериолы и венулы портального тракта от эмбриогенеза к 1-м суткам постэмбриогенеза увеличивается, на 10-е -уменьшается и на последующие сутки вновь увеличивается вплоть до периода половозрелости. Динамика изменения просвета лимфатического сосуда проявляет обратную тенденцию. Увеличение диаметра желчного протока

отмечается на 10-е сутки и период половозрелости. Просвет центральных вен увеличивается в постэмбриогенезе, а просвет синусоидных капилляров расширен на все периоды онтогенеза.

В группе кур-бройлеров увеличение диаметра артериолы и венулы выявлено на период вылупления и 40-е сутки; на 1-е сутки увеличивается диаметр венулы, на 25-е и в период половозрелости - просвет артериолы. Диаметр лимфатических сосудов увеличивается на 25-е сутки и период половозрелости, желчный проток - на 1-е и 40-е сутки, отражая усиление секреции желчи. Просвет центральных вен увеличивается с 10-е суток и до периода половозрелости. Просвет синусоидных капилляров на период вылупления уменьшается, а в постэмбриогенезе увеличивается во всех зонах печеночного ацинуса.

Межгрупповой статистический анализ выявил, что у Columba livia на все периоды развития диаметр артериолы значимо больше, в отличие от диаметра венулы. Значимые отличия диаметра желчного протока у Columba livia больше в период эмбриогенеза и вылупления, на 1-е и 10-е сутки постэмбриогенеза. В группе кур-бройлеров большие показатели лимфатического сосуда в период с 25-х суток до половозрелости.

на тканевом/межтканевом уровне

Преимущественная локализации двуядерных и PCNA-позитивных ГЦ в эмбриогенезе Columba livia отмечена в центролобулярной зоне, в период вылупления - в области портальных трактов и центральных вен. К 1-м суткам количество двуядерных и PCNA-позитивных ГЦ, более чем на 90% уменьшается во всех зонах ацинуса. На 10-е сутки проявляется разнонаправленная динамика. Количество двуядерных и PCNA-позитивных ГЦ увеличивается на 25-е, 40-е сутки и период половозрелости (рис. 1А). В эмбриогенезе локализация С068-позитивных МФ и десмин-позитивных КИ различна. К периоду вылупления и на 1-е сутки число С068-позитивных МФ увеличивается в области центральных вен, десмин-позитивные КИ во всех зонах ацинуса. С 10-х суток к периоду половозрелости количество CD68-позитивных МФ увеличивается (рис. 2). Количество десмин-позитивных КИ уменьшается на 10-е, 25-е и 40-е сутки, но к периоду половозрелости увеличивается (рис. 2Б, 5).

В группе кур-бройлеров число двуядерных ГЦ в эмбриогенезе в основном локализуются в области портального тракта, к периоду вылупления их количество увеличивается во всех зонах ацнуса, затем уменьшается к периоду половозрелости (за исключением 10-х суток). Количество PCNA-позитивных ГЦ от эмбриогенеза к периоду вылупления меняется волнообразно, в зависимости от зоны ацинуса, с увеличением числа к периоду половозрелости. С068-позитивные МФ в эмбриогенезе локализуются в области портального тракта, к периоду вылупления их число увеличивается более чем в 3 раза, таже динамика проявляется со стороны десмин-позитивных КИ. На все периоды онтогенеза количество СБбв-позитивных МФ увеличивается, уменьшение

выявлено только на 25-е сутки по всем зонам ацинуса (рис. 2). Увеличивается число десмин-позитивных КИ на 10-е, 25-е сутки, а к периоду половозрелости -уменьшается (рис. 5).

Согласно межгруповому статистическому анализу в перипортальной зоне в группе Columba livia, в сравнении с курами-бройлерами, количество двуядерных ГЦ на 16-е сутки меньше, к периоду вылупления и половозрелости больше; количество PCNA-позитивных ГЦ в постэмбриогенезе проявляет обратную тенденцию. У Columba livia выявлено также большее число CD68-позитивных МФ и десмин-позитивных КИ на все исследуемые периоды. Количество PCNA-позитивных ГЦ, наоборот, начиная с периода вылупления меньше, в остальные сроки - больше. Количество С068-позитивных МФ на 16-е сутки эмбриогенеза и 25-е постэмбриогенеза (на 37% и 90% соответственно) больше, тогда как на остальные сроки исследования - меньше. У Columba livia количество десмин-позитивных КИ значимо больше. В перивенулярной зоне в группе Columba livia, в эмбриогенезе выявлено большее количество двуядерных и PCNA-позитивных ГЦ, далее изменения числа носит волнообразный характер с увеличением к периоду половозрелости. Количество тканевых МФ в группе Columba livia больше на все исследуемые периоды онтогенезе. Большее количество десмин-позитивных КИ отмечается в период вылупления и половозрелости, в то же время на 10-е и 25-е сутки меньше, чем у кур-бройлеров.

на клеточном уровне (ГЦ)

Анализируя реализацию различных путей ПКГ ГЦ и их регуляцию у Columba livia в эмбриогенезе выявлено - СРР32-позитивных ГЦ больше в центролобулярной зоне, к периоду вылупления - в области портального тракта и центральных вен; в постэмбриогенезе на 1-е и 40-е сутки в данных зонах, напротив, количество уменьшается, тогда как на 10-е, 25-е сутки и к половозрелости во всех зонах увеличивается (рис. 56). ЬСЗАУВ-позитивные ГЦ в эмбриогенезе локализованы в области центральных вен, к вылуплению и на 1-е сутки - в перипортальной и центролобулярной, на 10-е сутки и период половозрелости в центролобулярной и перивенулярной зонах, а на 25-е и 40-е сутки во всех зонах ацинуса их количество уменьшается (рис. 1Г). В эмбриогенезе количество р53-позитивных ГЦ больше в перивенулярной зоне, к периоду вылупления, на 40-е сутки их количество уменьшается; и в зависимости от зоны ацинуса увеличивается с 1-х по 25-е сутки и период половозрелости (рис. 3). bcl-2-позитивные ГЦ в эмбриогенезе и на 1-е сутки локализуются в области портального тракта, к вылуплению - в центролобулярной и перивенулярной зонах, в остальные периоды выявлено уменьшение количества в разных зонах ацинуса (рис. 4).

У кур-бройлеров в эмбриогенезе СРР32-позитивные ГЦ локализованы в перипортальной и центролобулярной зонах, к периоду вылупления их количество в данных зонах на 80% уменьшается. На 1-е сутки увеличивается, на 10-25-е уменьшается, на 40-е сутки и к половозрелости во всех зонах

увеличивается (рис. 5а). В эмбриогенезе ЬСЗА/В-позитивные ГЦ максимально локализуются в центролобулярной зоне, к периоду вылупления - в перипортальной и перивенулярной, на 1-е сутки - в области портального тракта, на 10-25-е сутки в перивенулярной зоне. Уменьшение числа данной популяции ГЦ выявлено на 25-е, 40-е сутки и период половозрелости (рис. 1В). Распределение р53-позитивных ГЦ в эмбриогенезе носит порто-венулярный градиент, а к периоду вылупления их количество увеличивается; на 1-е сутки в пределах ацинуса количество разнонаправлено, на 10-е увеличивается, на 25-е сутки уменьшается, но в области центральных вен на 78% увеличивается. На 40-е сутки увеличивается, на период половозрелости вновь уменьшается (рис. 3). В эмбриогенезе bcl-2-позитивные ГЦ распределеяются в порто-венулярном направлении, которое к периоду вылупления меняется на венуло-портальное. В постэмбриогенезе динамика числа различна, с уменьшением к периоду половозрелости (рис. 4).

на субклеточном уровне

Анализ параметров Фельген-позитивного хроматина ГЦ в эмбриогенезе выявил у Columba livia показатели деконденсированной фракции хроматина: PerimL и AreaL меньше, a IntDenL и CntL на 23% и 16% соответственно больше. Соответственно число гиподиплоидных ГЦ в эмбриогенезе составляет 0,48%, тогда как у кур-бройлеров - 1,88%; ГЦ в Go/Gi стадии у кур-бройлеров также больше (рис. 6, 8).

На период вылупления у Columba livia Area и Perim меньше, при этом IntDen больше. Показатели AreaL, PerimL больше в группе кур-бройлеров. Показатели гетерохроматиновой фракции ГЦ у Columba livia AreaD, PerimD и IntDenD больше в сравнении с группой кур-бройлеров. Таким образом, к периоду вылупления у Columba livia количество гиподиплоидных и пролиферирующих ГЦ больше, и, как следствие, выявлено снижение Area и увеличением общей IntDen. Количество ГЦ в стадию Go/Gi в группе Columba livia составляет 69,3%, а у кур-бройлеров - 86,1% (рис. 7, 9).

В постэмбриогенезе на 1-е сутки у Columba livia, в сравнении с группой кур-бройлеров, Area меньше, вследствие этого выявляется и меньшие показатели Perim и IntDen, CntL на 30% больше, но AreaL и IntDenL меньше. У кур-бройлеров увеличивается количество гиподиплоидных ГЦ, что сопровождается снижением Area, увеличением PerimD и CntD. Увеличивается количество ГЦ в стадии S+G2+M, вследствие этого, у кур-бройлеров количество ГЦ в стадию Go/Gi клеточного цикла уменьшается в сравнении с Columba livia (рис. 10, 11). На 10-е сутки в группе Columba livia Area, IntDen и IntDenL больше, меньше - PerimL. Параметры распределения конденсированной фракции хроматина в группе Columba livia больше, чем у кур-бройлеров. У Columba livia, увеличивается CntD, доля ГЦ в S+G2+M стадии. Соответственно, у кур-бройлеров выявлен больший процент ГЦ в

Рис. 1. Печень птиц. Увеличение ок10хоб20. Протокол HIAR, стрептавидин-биотиновый метод (LSAB), хромоген АЭК. А. Окрашивание антителами к PCNA (Columba livia 16-е сутки эмбриогенеза). Б. Окрашивание антителами к десмину (куры-бройлеры 25-е сутки постэмбриогенеза). В. Окрашивание антителами к СРР32 (Columba livia период половозрелости). Г. Окрашивание антителами к LC3A/B (Columba livia 16-е сутки). Д. Окраска гематоксилин-эозин. 1-е сутки. Увеличение ок10хоб40: а. Куры-бройлеры, б. Columba livia. 1 - пигментные клетки; 2 -вакуолизированная цитоплазма ГЦ; 3 - очаги кроветворения.

.4 сутки 20 сутки 1 сутки 10 сутки 25 сутки 40 сутки 122 сутки Изона 12 зона НЗзона

i i к

1 ■ i i х j ll L i

к L -1 i 1 ti* 1 У *

1бсутки 18 сутки 1 сутки 10 сутки 25 сутки 40сутки 180сутки Изона 12зона ШЗзона

Рис. 2. Динамика количества СЮ68-позитивных МФ в пределах зон печеночного ацинуса в критические периоды онтогенеза.

Куры-бройлеры

14сутхи 20 сутки ley™ Юсугки 25 сутим 40 су™ 122 су™ Изона игзонэ Изона

Columba livia

16сугни 18су™ 1сутки Юсутии 25 су™ 40су™ 180СУТКИ Изсжа 12зона КЗзона

Рис. 3. Динамика количества р53-позитивных ГЦ в пределах печеночного ацинуса в критические периоды онтогенеза.

Куры-бройлеры

i i •

»

l 1 1 í

1* A Ш ЯШ » ¡TÉ 1 m s №« • «В.r

14 су™ 20cy™ ley™ Юсу™ 25сугки ВДсутки 122су™ ■ 1 зона 12зтэ ШЗэонэ

Columba livia

16су™ 1Всуш ley™ Юсу™ 25 су™ 40су™ Шсу™ Измэ ■ 2зона ВЗзшэ

Рис. 4. Динамика количества Ьс1-2-позитивных ГЦ в пределах печеночного ацинуса в критические периоды онтогенеза.

Примечание: р=0,05 *- межгрупповое сравнение; * - внутригрупповое сравнение

в стадии Go/G] (рис. 12, 13). На 25-е сутки параметры ДНК ядер ГЦ в группе кур-бройлеров, сравнении с Columba livia, больше. В группе Columba livia меньше показатели CntD, PerimD и AreaD, но PAreaD больше. Соответственно у кур-бройлеров количество ГЦ меньше в стадии Go/Gi и больше в S+G2+M. При этом у кур-бройлеров отмечается увеличение количества гиподиплоидных ГЦ.

На 40-е сутки в группе Columba livia Area, Perim и как следствие IntDen больше, чем в группе кур-бройлеров. Также больше параметры деконденсированной фракции хроматина: AreaL и PerimL, но CntL на 30% меньше, на 35% меньше PAreaD. У кур-бройлеров резко увеличивается количество гиподиплоидных ГЦ, уменьшается IntDen. В свою очередь, у Columba livia выявлено большее количество ГЦ в стадию Go/Gi - 91%, у кур-бройлеров только 79% (рис. 14, 15). К периоду половозрелости в группе Columba livia выявлены большие показатели PAreaD, AreaD и PerimD, IntDenD и CntD, количество ГЦ в стадии Go/G] - 95%, у кур-бройлеров - 75%. Процент гиподиплоидных ГЦ выше в группе кур-бройлеров, соответственно меньше показатели AreaD, Area, и больше CntD. Наибольшее количество ГЦ в стадии S+G2+M также в группе кур-бройлеров, о чем свидетельствуют большие показатели IntDen и меньшие IntDenD. Процент ГЦ в стадии Go/Gi больше в группе Columba livia (рис. 16, 17).

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, вышеизложенные показатели в системе сопряженностей цитокоммуникативных индукций выявили особенности поддержания тканевого гомеостаза. Так, в эмбриогенезе на фоне дефицита парциального содержания кислорода, несформированной системы терморегуляции, толерантной стратегии метаболической адаптации (Кулинский, 1992; Toledo Fonseca, et al., 2013) в центролобулярной зоне большее количество погибших ГЦ в обеих

группах птиц. И если у Columba livia активации экспрессии ГЦ регуляторов клеточного цикла не выявлено и ведущий путь гибели - апоптоз, то у кур-бройлеров на фоне большого числа р53-позитивных ГЦ в равной мере реализуются обе программы (Levine, 2011; Wild, 2014). Реализация I пути гибели в обеих группах птиц соотносится с трансформацией КИ в десмин-позитивные и увеличением числа двуядерных и PCNA-позитивных ГЦ, а у кур-бройлеров только с числом двуядерных ГЦ. По всей видимости, активирующим фактором для трансформации КИ является потеря контактного торможения и высвобождением TGF-ав связи с гибелью ГЦ (Senoo, et al, 2010).

В перивенулярной зоне - II тип гибели ГЦ у Columba livia реализуется на фоне высокого количества р53-позитивных ГЦ. В обеих группах птиц увеличивается количество двуядерных ГЦ. Выявленная активация программы аутофагии по всей видимости опосредована недостатком питательных веществ у птенцовых, а высокие показатели экспрессии р53 регулирует синтез белка LC3A/B (Желтухин, 2010).

В области портального тракта - у кур-бройлеров высокая активность экспрессии ГЦ белка р53 соотносится с большим числом СРР32-позитивных, двуядерных форм и PCNA-позитивных ГЦ. В то же время у Columba livia выявлено минимальное количество СРР32-позитивных ГЦ соотносится с наибольшим числом р53- и bcl-2-позитивных ГЦ. В обеих группах птиц в области портального тракта выявлено наибольшее количество CD68-позитивных МФ.

Период вылупления характеризуется как фаза плато, сменой стратегии метаболической адаптации с толерантной на резистентную (Кулинский, 1992; Toledo et al., 2013). На этом фоне в области портального тракта у Columba livia реализуются оба пути гибели ГЦ, увеличивается число двуядерных и PCNA-позитивных ГЦ, СБ68-позитивных МФ и десмин позитивных КИ. Реализация обоих путей гибели может являться источником выявленной активации непаренхимных цитотипов (Liu, 2013; Dorward, 2014). В группе кур-бройлеров на фоне снижения экспрессии ГЦ белка bcl-2 активируются только аутофагия.

В центролобулярной зоне у Columba livia увеличение числа погибших ГЦ по пути аутофагии и bcl-2-позитивных ГЦ, тогда как у кур-бройлеров уменьшается число СРР32-позитивных ГЦ на фоне увеличения числа р53-позитивных, двуядерных ГЦ, СБ68-позитивных МФ и десмин-позитивных КИ. Выявленное у обоих групп птиц увеличение числа десмин-позитивных КИ может быть паракринно опосредовано активацией макрофагов, которые вырабатывают комплекс биологически активных веществ - активаторов пролиферативного ответа ГЦ, белок-синтетической функции КИ, запуская, таким образом, процесс регенерации печени (Лукашик, 2011).

В области центральных вен - у Columba livia реализуется программа апоптоза на фоне повышения экспрессии ГЦ белка bcl-2, с увеличением числа непаренхимных цитотипов и числа двуядерных и PCNA-позитивных ГЦ, числа ГЦ в стадии S+G2+M клеточного цикла.

Рис. 5. Columba livia. 16 сутки эмбриогенеза. Рис. 6. Columba livia. 18 сутки (вылупление). Рис. 7. Куры-бройлеры 14 сутки эмбриогенеза.

Рис. 8. Куры-бройлеры 20 сутки эмбриогенеза. Рис. 9. Columba livia. 1 сутки постэмбриогенеза. Рис. 10. Куры-бройлеры 1 сутки постэмбриогенеза.

Рис. 11. Columba livia. 10 сутки постэмбриогенеза. Рис. 12. Куры-бройлеры 10 сутки постэмбриогенеза. Рис. 13. Columba livia. 40 сутки постэмбриогенеза.

100 120 |Х95%дсеериг.|

Диаграмма рассеяния: InIDen и SrDen SrOen =,12973-.4Е-3 ' IntDen Корреляция: г = -,0202

"4,95% доверит.

Диаграмм а рассеяния: InIDen и SrOen SrDen = .06342+ .00952' IriDen Корреляции г = ,91975

Диаграмма рассеяния: IntDen и SrDen SrDen = ,06184 + ,01788 ' IntDen Корреляция: г = ,36665

половозрелость.

Примечание: Двумерное распределение ядер ГЦ по IntDen и SrDen. Многофакторный дисперсный анализ MANOVA (р=0,05).

У кур-бройлеров увеличение количества р53- и bcl-2-позитивных ГЦ сопряженно с увеличением ЬСЗА/В-позитивных ГЦ, отражая активацию аутофагии как альтернативного источника питания и энергии в условиях фазы плато и метаболического стресса (Пархитько, 2012; Púa, 2009). Выявленное увеличение экспрессии ГЦ белка р53 с одной стороны способствует активации аутофагии, с другой - запускает процесс остановки клеточного цикла в G0-Gi стадии, увеличения числа PCNA-позитивных и двуядерных ГЦ (Maiuri et al, 2010; Scherz-Shouval et al., 2010). Увеличение числа С068-позитивных МФ, по всей видимости, носит защитный характер в условиях окислительного стресса и отражает активацию иммунного ответа печени (Филоненко, 2012).

Постэмбриогенез. 1-е сутки после вылупления характеризуются втягиванием желточного мешка, сменой питания. В этот период у кур-бройлеров во всех зонах ацинуса происходит увеличение количества СРР32-позитивных ГЦ, в области портального тракта выявлена активация обоих путей гибели, экспрессия белка р53 ГЦ, увеличивается число СВ68-позитивных МФ. В группе Columba livia в данной зоне, наоборот, уменьшается число СРР32-позитивных ГЦ на фоне увеличения количества bcl-2-позитивных ГЦ и количества СБ68-позитивных МФ. В центролобулярной и перивенулярной зоне у Columba livia увеличивается количество ЬСЗА/В-позитивных, р53-позитивных ГЦ и динамика непаренхимных цитотипов разнонаправлена. На фоне реализации различных путей ПКГ в обеих группах птиц происходит угнетение пролиферативной активности ГЦ, снижается доля ГЦ в стадии S+G2+M.

С 10-х суток до половозрелости в обеих группах устанавливается температура характерная для взрослых особей, для птенцов Columba livia -начало активных полетов (Родимцев, 2004; Бородулина, 2009). При этом в группе Columba livia во всех зонах ацинуса на фоне снижения числа bcl-2-позитивных ГЦ активируются процессы апоптоза, в области портального тракта уменьшается количество десмин-позитивных КИ и увеличивается количество двуядерных форм ГЦ. Большое количество клеток Ито, накапливающих ретиноиды, и секретирующих ряд цитокинов, способных угнетать активность МФ, отражается в уменьшении количества CD68-позитивных МФ. В перипортальной зоне кур-бройлеров, напротив, отмечается угнетение обоих путей гибели ГЦ на фоне активации экспрессии белка bcl-2. В обеих группах птиц уменьшается число PCNA-позитивных и увеличивается число двуядерных ГЦ. У кур-бройлеров в центролобулярной зоне на фоне увеличения р53-, и bcl-2-позитивных ГЦ угнетается I путь гибели, уменьшается число PCNA-позитивных ГЦ, активируются тканевые МФ печени. В перивенулярной зоне - отмечается реализация программы аутофагии на фоне увеличения количества р53-позитивных ГЦ. Увеличивается и количество CD68-позитивных МФ, отражая усиление процессов утилизации клеточного детрита. В группе Columba livia в центролобулярной и перивенулярной зонах, наоборот, отмечается увеличение числа погибших, PCNA- и р53-позитивных ГЦ, скорее всего, данные сопряженности отражают остановку клеточного цикла и запуск чекпойнт системы с целью активации процессов репарации ДНК (Strzalka, 2011;

19

Li, 2013), это подтверждается увеличением числа ГЦ в стадии Go-G¡ клеточного цикла.

На 25-е сутки у Columba livia увеличивается число погибших ГЦ во всех зонах ацинуса по пути апоптоза. В группе кур-бройлеров в перипортальной зоне отмечается угнетение обоих путей ПКГ, с увеличением числа bcl-2-позитивных ГЦ. В обеих группах птиц, и в большей мере у кур-бройлеров, во всех зонах ацинуса отмечается увеличение числа PCNA-позитивных ГЦ, доли ГЦ в стадии S+G2+M. В свою очередь, в группе Columba livia отмечается увеличение количества как PCNA-, так и р53-позитивных ГЦ, отражая остановку клеточного цикла (Strzalka, 2011; Li, 2013). В центролобулярной зоне у Columba livia увеличивается число погибших ГЦ по пути апоптоза, угнетается синтез белка bcl-2, активируются органоспецифичные МФ, увеличивается число двуядерных и PCNA-позитивных ГЦ По всей видимости, активированные МФ, вырабатывая комплекс биологически активных веществ, определяют активацию пролиферации ГЦ (Zimmermann et al, 2012). Увеличение количества двуядерных форм ГЦ и, соответственно, повышение их плоидности, функциональной «мощности» (Gandillet, 2003) отражает закладку будущих клонов одноядерных ГЦ с неограниченным числом потомков. Тогда как у кур-бройлеров выявляется активация КИ, усиление экспрессии ГЦ белка р53 и активация аутофагии.

На 40-е сутки во всех зонах ацинуса у обеих групп птиц угнетается II путь гибели ГЦ. У Columba livia уменьшается число СВ68-позитивных МФ и увеличивается количество PCNA-позитивных ГЦ, при этом в области портального тракта на фоне уменьшения числа р53-позитивных ГЦ активируются процессы апоптоза. У кур-бройлеров отмечается уменьшение числа PCNA-позитивных ГЦ, только в центролобулярной зоне выявленное усиление экспрессии ГЦ белка р53, bcl-2. В области перивенулярной зоны у Columba livia на фоне увеличения числа PCNA-позитивных и двуядерных ГЦ снижается число непаренхимных цитотипов. Тогда как в группе кур-бройлеров увеличивается количество PCNA- и р53-позитивных ГЦ, отмечается активация тканевых МФ. Таким образом, в обеих группах птиц увеличивается доля гиподиплоидных ГЦ, у Columba livia увеличивается также и доля ГЦ в стадии S+G2+M, в группе кур-бройлеров наоборот.

На период половозрелости в обеих группах птиц во всех зонах ацинуса выявлено увеличение количества СРР32-позитивных ГЦ, в области портального тракта и центральных вен отмечается уменьшение числа bcl-2-позитивных ГЦ, при этом у Columba livia (во всех зонах) это сопряжено с одновременной активацией экспрессии ГЦ белка р53. У кур-бройлеров на фоне увеличения количества погибших ГЦ, во всех зонах ацинуса отмечается активация тканевых МФ и PCNA-позитивных ГЦ. У Columba livia активация PCNA-позитивных ГЦ выявлена в отдельных зонах ацинуса, на фоне увеличения числа р53-позитивных ГЦ, отражает запуск процессов репарации ДНК и остановку клеточного цикла (Li, 2013). В перивенулярной зоне у Columba livia, в отличие от кур-бройлеров, увеличиваетя количество десмин-позитивных КИ.

В обеих группах птиц выявлено уменьшение количества ЬСЗА/В-позитивных ГЦ, то есть если в эмбриогенезе, на период вылупления, 1-е сутки постэмбриогенеза стимулом активации аутофагии являлась нехватка питательных веществ, то с переходом на рацион взрослых птиц значение аутофагии проявляется в меньшей мере (Пархитько, 2012; Mehrpour, 2010).

ВЫВОДЫ

1. Ббльшая массы тела в эмбриогенезе выявлена у эмбриона Columba livia, в постэмбриогенезе - у кур-бройлеров. Температура тела у Columba livia, характерная для взрослых особей, устанавливается на более поздних сроках постэмбриогенеза. В периферической крови у обеих групп птиц преобладают Л и СЯ, количество ПЯ меняется волнообразно с увеличением к периоду половозрелости. Количество М и Э в течение онтогенеза больше у кур-бройлеров; Б в эмбриогенезе у Columba livia, в отличие от постэмбриогенеза.

2. Портальные тракты формируются на 1-е, трубчато-трабекулярная организация паренхимы печени - на 10-е сутки постэмбриогенеза. Количественная плотность печеночных ацинусов больше в группе Columba livia. Пигментные клетки в группе Columba livia выявляются на 1-е, а в группе кур-бройлеров на 25-е сутки постэмбриогенеза. В обеих группах птиц очаги кроветворения сохраняются на 1-е сутки. В группе Columba livia внутренний просвет сосудов, за исключением диаметра венулы, больше на всех изучаемых периодах онтогенеза.

3. На тканевом/межтканевом уровне в группе Columba livia, в сравнении с курами-бройлерами, выявленая в эмбриогенезе активация ацитокинетических митозов и увеличение числа PCNA-позитивных ГЦ к периоду вылупления снижается. В постэмбриогенезе количество двуядерных ГЦ больше в группе кур-бройлеров, PCNA-позитивных ГЦ - Columba livia. В обеих группах птиц количество непаренхимных цитотипов больше в группе Columba livia и у обеих групп их локализация определяется особенностью зон печеночного ацинуса.

4. На клеточном уровне в группе Columba livia, в сравнении с курами-бройлерами, в перипортальной и центролобулярной зоне выявлена активация обеих программ ПКГ; увеличение количества р53- и bcl-2-позитивных ГЦ от эмбриогенеза к половозрелости нарастает, в отличие от перивенулярной зоны. На период вылупления и 1-е сутки в обеих группах птиц проявляется активация аутофагии на фоне снижения экспрессии белка bcl-2 и увеличением р53-позитивных ГЦ у кур-бройлеров, тогда как у Columba livia, наоборот. С 10 суток до периода половозрелости выявлена обратная тенденция.

5. В эмбриогенезе у кур-бройлеров выявлено ббльшее количество гиподиплоидных ГЦ и ГЦ в стадии Go/Gi, в группе Columba livia, наоборот, в стадии S+G2+M. К периоду вылупления и на 1-е сутки у Columba livia больше количество как гиподиплоидных, так и пролиферирующих ГЦ. Подобная динамика проявляется в группе кур-бройлеров на 1-е, 25-е, 40-е сутки и период половозрелости.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ

1. Сагалбаева, Л.Е. Динамика показателей клеточного цикла ГЦ экто- и эндотермных животных / Е.И. Антонова, Д.И. Бекова, О.Ю. Шпак // Вестник новых медицинских технологий. - 2011. - №2, Т. XVIII. - С.18-20.

2. Сагалбаева, Л.Е. Структурные и морфометрические показатели эпителия печеночного ацинуса и нефронов после экспериментальной гипертермии в сравнительном ряду позвоночных / Е.И. Антонова, Е.С. Калинина, О.Ю. Шпак, О.З. Мкртчан // III эмбриологический симпозиум «ЮГРА-ЭМБРИО-2011», г. Ханты-Мансийск / Морфология. - 2011. - №5, Т. 140 - с.68.

3. Хамитова, Л.Е. Пути программируемой клеточной гибели и ультраструктурная организация гепатоцитов амфибий вида Rana terrestris в системе in vitro / Е.И. Антонова, Д.И. Бекова, О.Ю. Шпак // Вестник новых медицинских технологий. - 2012. - №2, Т. XIX. - С.91-94.

4. Хамитова, Л.Е. Особенности реорганизации хроматина ядер и показателей клеточного цикла гепатоцитов печени рыб после воздействия высокой внешней температуры / Е.И. Антонова, О.З. Мкртчан, Н.А. Калиненко, Д.И. Омарова, О.Ю. Шпак // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - №6 .DPI; 10.17513 / spno.2012.6.

5. Хамитова Л.Е. Сравнительная динамика показателей программируемой клеточной гибели и пролиферации гепатоцитов в эмбриогенезе кур-бройлеров // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 2,- URL: www.science-education.ru/129-21454

6. Хамитова Л.Е. Динамика интегральных показателей организма и морфогенез печени птиц в критические периоды эмбрионального и постэмбрионального онтогенеза // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 5.- URL: www.science-education.ru/128-21496

Работы, опубликованные в других изданиях:

7. Сагалбаева, Л.Е. Оптико-структурный анализ ДНК ГЦ экто- и эндотермных животных / Е.И. Антонова, О.Ю. Шпак // Цитоморфометрия в медицине и биологии: фундаментальные и прикладные аспекты. Материалы IV конференции г. Москва - 2011, С. 10-12.

8. Сагалбаева Л.Е. Морфобиохимические аспекты функционирования печени экто- и эндотермных животных / Е.И. Антонова, Д.И. Бекова, О.Ю. Шпак // Проблемы биологической науки и образования в педагогических ВУЗах. -Материалы VII Всерос. научно-практической конференции - Новосибирск, 2011.-С. 69-74.

9. Сагалбаева, Л.Е. Гистотопография, цитотипы печени животных с различной системой терморегуляции и стратегией метаболической адаптации / Е.И. Антонова, О.Ю. Шпак // Динамика научных исследований. Материалы Междунар. научно-практической конференции, Польша - 2011. - С. 81-85.

10. Сагалбаева, JI.E. Реактивность и пластичность печени экто- и эндотермных животных на субклеточном уровне после действия гипертермии / Е.И. Антонова, О.Ю. Шпак // Регенеративная биология и медицина. Материалы Всерос. научной конференции, г. Москва-2011. -С. 13-14.

11. Хамитова, Л.Е. Органоспецифичные макрофаги и показатели тканевого гомеостаза печени у животных с различной системой терморегуляции / Е.И. Антонова, Д.И. Бекова, О.Ю. Шпак, 0.3. Мкртчан // Журнал теоретической и практической медицины — 2011. - С. 127-130.

12. Хамитова, Л.Е. Сравнительный анализ активности ферментов печени в моделях in vivo и in vitro у животных с различной системой терморегуляции / Е.И. Антонова, Д.И. Бекова, О.Ю. Шпак // Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологий. Материалы II Междунар. интернет-конференции, Казань -

2011.-С. 341-348.

13. Хамитова, Л.Е. Деструктивные и репаративные процессы в печени амфибий вида Rana terrestris после воздействия гипертермии / Е.И. Антонова, Д.И. Бекова, О.Ю. Шпак // Профилактическая медицина. Материалы Всерос. конференции, Санкт-Петербург - 2011. - С. 22-24.

14. Хамитова, Л.Е. Динамика реорганизации хроматина и показателей клеточного цикла ГЦ птиц вида Columba livia в норме и после гипертермии / Е.И. Антонова, Д.И. Бекова, О.Ю. Шпак // Ключови въпроси в съвременната наука. Материали за 8-а междунар. научна-практична конференция, София. -

2012.-Т. 28.-С. 54-61.

15. Хамитова, Л.Е. Механизмы поддержания тканевого гомеостаза в печени птиц синантропов урбоценозов и гибридных форм кросс-линий кур в эмбриогенезе / Е.И. Антонова, О.З. Мкртчан // Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии: материалы I междунар. научно-практической конференции. Ульяновск, 31 октября 2014. - Ульяновск: Изд-во ФГБОУ ВПО «УлГПУ им. И.Н. Ульянова» -2014. - С. 19-24.

Список сокращений: Б-базофилы, ГЦ-гепатоцит, ИСЛК-индекс сдвига лейкоцитов крови, КИ-кл. Ито, Л—лимфоциты, ЛИИ-лейкоцитарный индекс интоксикации, М—моноциты, МФ — макрофаги, ПКГ - программируемая клеточная гибель, ПЯ-палочкоядерные нейтрофилы, СЯ-сегментоядерные нейтрофилы, Э-эозинофилы, Агеа-общая площадь ядер ГЦ, AreaL/AreaD-площадь де- и конденсированного хроматина, CntL/CntD-количество изолированных участков де- и конденсированного хроматина, IntDen - общая интегральная оптическая плотность ядер, IntDenLftntDenD-HHTerpanbHaH оптическая плотность де- и конденсированного хроматина, PareaL/PareaD-периметр площади де- и конденсированного хроматина, Perim-периметр ядер ГЦ, PerimL/PerimD - периметр де- и конденсированного хроматина, SrDen-средняя оптическая плотность ДНК ГЦ.

Хамитова Лязат Ералловна

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПЕЧЕНИ ГОЛУБЕЙ И КУР-БРОЙЛЕРОВ В КРИТИЧЕСКИЕ ПЕРИОДЫ ОНТОГЕНЕЗА

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 12.03.2015 Формат 60x84/16. Бумага писчая. Оперативный способ печати. Усл. печ. л. 1,25. Тираж 100 экз. Заказ № 087

Отпечатано в «Полиграфическом центре КАН» тел. (3812) 24-70-79, 8-904-585-98-84.

E-mail: pc_kan@mail.ru 644122, г. Омск, ул. Красный Путь, 30 Лицензия ПЛД № 58-47 от 21.04.97