Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

СПОНТАННАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ АКТИНОМИЦЕТОВ-ПРОДУЦЕНТОВ АНТИБИОТИКОВ И СТАБИЛИЗАЦИЯ ИХ БИОСИНТЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ТАКСОНОМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "СПОНТАННАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ АКТИНОМИЦЕТОВ-ПРОДУЦЕНТОВ АНТИБИОТИКОВ И СТАБИЛИЗАЦИЯ ИХ БИОСИНТЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ТАКСОНОМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ"



АКАДЕМИЯ НАУК СССР ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ

На правах рукописи КУЗНЕЦОВ Владимир Дмитриевич

СПОНТАННАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ АКТИНОМИЦЕТОВ-ПРОДУЦЕНТОВ АНТИБИОТИКОВ И СТАБИЛИЗАЦИЯ ИХ БИОСИНТЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ТАКСОНОМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

(Микробиология — 03.00.07)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва —

1975

АКАДЕМИЯ HA7S СССР ... ЛНСГИОТ МШРОЯКНШШ

На правах рувогаея

ИЗНЕЦОВ Вхахкмар Диатравзп

СПОНТАННАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ АГГШЮШЩЕТОВ-ПНШЦЕНТОВ АНТИБИОТИКОВ И СТАБИДИЗАЦИй HI БЮСИНТВТВЧЕСКОИ АКТИВНОСТИ К ТАКСОНОМИЧВСШЦ

свойств ,

(Кпробшожопн - 08.00.0?)

1 atQ р • $ a р • *

дассвртацм яа ооюяааае учено» ствпена доктора баоаоптешх aaj»

. .-Л -■-.Л0..-7-:. -1 ..... J.■'■.:.mv.^x^j

Москва - 1975

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском : институте антибиотиков Министерства медициневой дроиышяениостк (директор - заслуженный деятель науки а техники Латвийской ССР А.В.Саанцкий). г

Научный коосультант -

ддоя-яорреспондеат АН СССР, профессор ГНД.КРАСИДЬНИКОВ]

Остальные оппоненты:

действительны* чдва ¿ПН СССР, доктор бнохотвехих

ааув, профессор Г.Ф.ГАУЗЯ

доктор биологических ааук, профессор А.Е.Ш4СС

доктор биологических наук Н .С .АГ^Е

Диссертация направлйиа на отэнв яа кафедр? биожопш почв факультета почвоведеодя Московского Государственного Университета.

С диссертацией мохдо оананоситься в библиотеке Й»статут в микробиолог«и АН СССР (Постов, Ярофооввиая уд., 7«).

Автореферат разослав "

■£ 1875 г.

Защита диссертации состоится 1975 г.^ Зг*>-*г

аа заседание .Ученого совета Института микробиолога АН СССР.

д.к.осшщая

Ученый секретарь йнстгаута микробиологии АН СССР, кандидат биологических наук

ВВЕДЕНИЕ

ч- ■ ■ '■■'.'■ : Актиноыицеты - лучистые грибки - составляют обширную,

- группу широко распространенных в природе микрсгарганиамов.

В последние три десятилетия анзиаоыиаеты находят пркмеае вив в практике как продуценты целого ряда биологически активных.веществ. Культуры ахтнкомицетов используются для промышленного получения подавляющего большинства применяемых а ие-дицнне антибиотиков« а такхе различных ферментов ■ витаминов.

Среди актиномицетов обнаружены продуценты гормонов, ан--тиметаболятов, веществ, подавляющих процессы передача внехро-мосомшх детерминантов наследственной лекарственной полире-, зистентяости у патогенных бактерий, что имеет большое значение для современной медицины в связи с распространением в при роде возбудителей инфекций, устойчивых а действие многих анти-_ биотиков. ■ V-1'.'

С помощью аюнномкцетов иохяо осуществлять также три не-' формации ряда химических соединений для получения'ценных лекарственных препаратов.'

. Широкое использование актжномицетов в качестве мсточли-ков получения биологически активных соединений явилось одной' из основных причин интенсивного научения их биологии. Однако 1 многие аспекты этой проблемы остаются еще не выяснению», -как например вопросы изучения изменчивости актиномцетсо и -стабилизации их свойств.

достижения в этих областях звание, особенно в области изучения изменчивости, способствуют решению ряда теоретических вопросов* таких как: выявление закономерностей варх-абельностн актжномицетов, определение таксономической зна-^4 чиыости критериев дифференциации лучистых грибков, дааъней-лее совервенствоваяие систематики и т.д.

С другой стороны, разработка вопросов изменчивости и стабилизации хозяйственно ценных свойств актнноинцетов непосредственно связана с практическими задачами, поставленными ХХ1У съездом КПСС перед медицинской и микробиологической промышленность» до увеличение выпуск« продукции, изысканию новых ант«-'

■ биотиков'и повышение производительности груда ("Директивы. [ХНУ смзда КПСС", Йад-во политической литературы 1971, .

стр.14-Х5, 32)» ибо усдешдов их ревезде способствует повышению эффективности производства и поисковых работ.

.'Исходя иа актуальности указанных проблей, представлялось. целесообразным развивать исследования а следувцжх направления! I) изучение спонтаинойизиеичивостш актиноияцетов-продуцен-то»"антибиотиков; 2) выявление закономерностей их измеичяво-сти; 3) оценка различных критериев родовой дифференциации-автиномицетов с исаольаованвем оригинальных моделей; 4) под-; бор я разработка методов стабилизации биосинтмичесвой а к- . ■тшвност« про иы плен шдс каинов - продуцентов антибиотиков; 5) сравнительное изучение эффективности методов стабилизации ^■ восстановления таксономических свойств типовых культур ак-тиномицетов»

'Данная-работа является итогом многолетних исследования , - авторам руководимого им коллектива сотрудников Лаборатории ; культур-продуцентов антибиотиков ВНША.

' ВОбворе литератур* суммированы и обсуждены обцив пробелены изменчивости актияомнцетоа и стабилизация ах свойств. Установлены новые типы изменчивости лучистнхгрибаов, такие , как эписомальная к сезонная» а также сформулированы принципы

■ стабилизации культур^актнномицетов. "■

' . Литературные данные, каоавциеся современного состояния

■ отдельных направлений изучения изменчивости к стабилизации /-"_. ; акгиноиицетов, приведены в качестве введения к соответствую-';

■ Яны главам Экспериментальной части.

. Экспериментальная,часть диссертационной работы яредстав-_ лена даумя разделами, состоящими аз"вести глав, обсуждения результатов и выводов.

В приложении и диссертации представлен'фактический матери ад, касающийся ревизии систематического положения некоторых *актиношщетов-продуцентов антибиотиков, который является эк-.сперинентвльаым подтверждение»,целесообразности использования

предлагаемых нами моделей оценки таксономической значимости / критериев родовой дифференциации атипичных форм актяномице-. тов я проавтишшицетов, а также дана рецептура питательных . сред, рекомендуемых для проведения цопуляционного анализа

культур актиномяцетов и стабилизации их свойств.

РАЗДЕЛ I ' , ^

. спошаниай шмшиаость шииошщЕгое .

, Под теркиаои "измечввость" понимают способность организмов к вариациям. Изменчивость является источником формообразования и один вз факторов эволюция живой прнроды, а также ос-, вовой искусственного отбора. С другой стороны, изменчивость является нежелательным процессом в случае необходимости стабилизации свойств организмов.

' СПОНТАННАЯ щиШШБОСТЬ АйПШОШДШВ-ЛРОДУЦЕНТОВ • Аатишотакоз

• Наиболее ярко изменчивость проявляется у микроорганизмов, среди которых особой вариабельностью отличается группа актиномнцетов ( Lieeice , X32I, KpiCC, 1937, Красильнкков, 1938, 1970 в др.).

Поскольку успех исследований по изменчивости актиномице-тов в значительной степени зависит от применяемых методик, особое вникание было уделено нх отработке к усовериенстаова-нио. Разработанная нами схема изучения спонтанной изменчивости актхнокипегов (Кузнецов,1972) дозволяет осуществлять полноценный попудяционяый аналяа я проводит» сравнительную оценку степени стабильности культур. Указанная схема нашла применение в практике других лабораторий при изучении вариабельности . актиномнцетов, а также при стабилизации промышленных штаммов -продуцентов антибиотиков, ибо вопросы эффективной стабилизации культур акгнкомицетов не могут решаться без детального ■* изучения вариантного состава популяций и биологических особенностей вариантов, составляющих популяцию каждого конкретного штамма.

.Основное внимание было уделено изучению изменчивости про^-мыадеешых штаммов - продуцентов антибиотиков. Показано, что ' ~ популяция любого штамма актиномицета не является однородной я . состоят из вариантов, разлячающихся морфолого-кудьтуральзымк 1 а биохимическими особенностями, а также уровнем антибяотмчес-

кой-активности. При этом характер и степеаь изменчивости ¡наймов - продзцентов антибиотиков зависят.в конечном счете от ге-ветнческих особе няосте ¡ta условий культивирования. Теи не не-' ■ аее,* в -популяцни каждого штамма преобладают варианты, характе-риэувдоеся комплексом свойств, присущи исходной культуре в целом (основной тип)/ Штаммы, подвергавшиеся индуцированному мутагенов? я яоследуцщаму стабилизируюдему отбору, обладают болев узких диапазоном намеичивости по сравнению с "дикими" штаммами, ве претерпевший селекции в лабораторных условиях, либо подвергавшимися воздействии мутагенами, но на проведшими этапа стабилизирующего отбора. -•'"/'

:: * К первой группе принадлежат вяанмы-ародуценты стрепто-^ииадваict.etreptomycini 131 а 773, веомицина - Act.fradi- • ав129, вавкомжщ1на - Act.orlentaiis 906, эритромицина VJUít.erythraeue 782, олваидомицива - Act.antibiotlcus 961, тетрациклина - Aet.aureofaelena 949, новобиоцина - Act.' spheroidая 937, в популяциях которых обнаружено от трех до четырех вариантов. Ко второй - относятся продуценты дактиио- ; !мицина (актиноиицина Д): Act.parvullue 996, Act.гозао-luteus 1177 и Act.olivobrunneue 1531, в состав популяций которых входатот пяти до девяти спонтанных вариантов.- И наконец, з популяции штамма-продуцента каианициоа -.Act.kanamycetlcue 771, полученного путем воздействия мутагенами, но не подвер-гавиегося длительному стабилизирующему отбору, обнаружено. :лесть.вариантов, включая два подваряанта.

Ори сравнительном изучении баосинтетической актавности однотипных спонтанных вариантов, обнаруженных в популяциях^ ■ изученных яхэнмов-продуцентов, выявлена и статистически под- \ тверждена четкая корреляция между морфолого-кудьтуралышми свойствами и средним уровнем антибиотической активности. Варианты основного типа обладают наиболее высоким уровнем знти-биотической активности, в то время как проактнномицетоподоб--'ные варианты лишены способности синтезировать антибиотики.,Про межуточное положение по интенсивности биосинтеза антибиотиков - занимала аспорогенкые, белые, "олигосперовые» и карликовые -варианты. При этом доверительные интервалы уровня активности-.вараантов(?- tsx t Т + -tS^ ) не перекрываются при Р=Ю,95, . что'свидетельствует.о достоверном-различии спонтанных вариаа- .

. ?Г > ' I ,

-'„¿г ;.. ■

зав по указанному (дензнаку. Достоверность, результатов.группи-ровна иучета спонтанных вариантов даже на фоне сравнительно Л ' широкого диапазона колебаний^уровней'аатибиотикообразаван;ш< от- ' дельными представителями одного в того же морфологического вар-> ианта подтверждается также анализом распределения уровней акти-'; вности по вариантам. В тех единичных. случаях, когда• доверитель-\ яые интерзазш уровней активности отдельных вариантов перекрыва-: лясь, проведевие сравнения средних о использованием критерия : ■ Стьвдента в сочетании со сравнительным популяционныы анализом ¡. указанных изолятав позволяло делать заключение о действительной" принадлежности их к определенной группе вариантов. Низкий показатель коэффициента вариация (С) свидетельствовал о стабильности признака аятибиотикообразаваяяя у «дельных вариантов. : -

. Варианты, входящие в осстав популяция того яля иного штаи- ' ыз активоиицета, по ряду свойств, таких как: устойчивость к Л антибиотикам, синтезируемым исходной культурой* характеру вза- •■ имного антагонизма», спектру чувствительности к определенному ', набору антибиотиков «'потреблению источников углерода,, в основ- ; ном сходны между собой, что свидетельствует об относительной '.у стабильности указанных свойств и подчеркивает общность-происхождения вариантов. Таким образом, в пределах популяция варианты' отличаются, главным образом, кулыурально-морфологическими свойствами и уровнем антибиотической активности. . . ..."-■' Изучены я детально охарактеризованы варианты, входящие - в: состав популяций промышленных штаммов. Полученные результаты дают возможность ориентироваться в разнообразии вариантного ' состава популяций всех изученных производственных культур-про-' дуцентов антибиотиков и повышать эффективность стабилизируете-;4: го отбора при поддержании продуктивности культур, то есть вместо' весьма трудоемкой тотальной селекции появляется возможность проводить выборочную селекгош колоний только,основных варган-, тс®, обладающих наиболее высокий уровнем биооинтетической ак-; \ тивностг. Отмеченные колебания уровня антибиотической активное-* ти в .пределах каждого морфологического варианта указывают за , .имеющиеся резервы повышения продуктивности штаммов при проведе- -нни стабилизирующего отбора..

\ " Дальнейшим'.развитием этого направления исследований может'", •явиться, как нам представляется, выявление .'коррелятивных сия- у

заЯ между абсолютный уравнен антибиогяческой активности представителей основных вариантов в другим свойства»«, помимо культурадьно-морфологичесянх. Выявление таких корреляций, нарядус разработкой менее трудоемких методов обнаружения коррелятивных связей, чем прямое определение продуктивности культур, имеет больное значение для практической селекции и стабилизации хозяйственно ценных свойств промыалеяных ятаимов. '

> Показано, что при пассировании культур в их популяциях изменяется количественное соотношение вариантов, одновременно о мам меняется также и соотноаение ¡jaaao логических аод-вариантов в пределах одного и того же морфологического варианта « сторону увеличения относительного числа менее про-дувхивных представителей, что в конечном итоге приводит к снижении уровня антибиотической активности культур в цехом. ; ; Одним иа факторов, влиявших на интенсивность этого процесса, является состав питательных сред, применяемых при пассировании того или иного штампа-продуцента. В результате про-., веденных исследований были подобраны оптимальные для стабилизации, уровня антибиотической активности питательные среда применительно к каждому отамиу-продуцевту. Одновременно с этим произведен подбор сред, способствую«» максимальному выявлению вариантов и рекомендуемых для популяционного анализа активомицетов-продуцентов антибиотиков.

Efa основании изучения изменчивости спонтанных вариантов установлены взаимосвязи между ними в популяции каждого агган-ма актиномицета-продуцента, а также определены степень к характер изменчивости каждого из вариантов» Обнаружены, так называемые,."тупиковые1* варианты, популяции которых полностью состоят аз однотипных колоний. К ним откосятся проактнномице-топодобше варианты. - • '

Ори изучении спонтанноИ изменчивости культур актиномнце-тов,не подвергавшихся длительному стабидизируюцему отбору, было установлено, что они обладает более широким диапазоном вариабельности. Детальному изучение подверглись три вида ак-тивомиаетов этой группы. К ним относились продуценты противо-~опухолевого антибиотика :даятиномкцкна, а число которых входил новый, открытый нами продуцент, принадлежащий к виду Aet.

гозео-1девиа (Кузнецов о соавт.,,1973, Авторское.свидетельство % 415964, 15)73), ранее описанный как продуцент протнвогрибного антибиотика лагозина (Вевм1 в* а!., 1961),

Использование данных« полученных при изучении состава популяция и свойств спонтанных вариантов Ас1.ратШ.ив ЭЭЙ, -продуцента дактиномицнна, - позволило ускорить его селекцию и в сравнительно короткий срок подучить новый штамм, уровень/ антибиотической активности которого превышает уровень актив-■ ■ яости исходной культуры в 300 раз (Кузнецов о соавт., 1972, Авторское свидетельство Я 34^586, 195В, Авторское свидетель- , ство № 44X821, 1974). Отселекционированный штамм послухнд основой для разработки рентабельной технологии производства дактиномицнна. В настоящее время получено разрешение Фармакологического комитета Министерства здравоохранения СССР на медицинское применение и промышленный выпуск дакгяномицнна как нового препарата медицинской промышленности.

Особый интерес представляет закономерное обнаружение впо пуляпиях актиномицетов, синтезирующих комплекс антибиотиков : ("культура-поласинтетики"), спонтанных вариантов, образующих-только одаа антибиотик из комплекса ("варианты-моносянтети- ' ■.". ки"). Это явление необходимо учитывать при оценке антимикробного спектра, как критерия видовой дифференциации актнноыяце-тов. Спонтанные "вариааты-моносинтетики", образующие один-антибиотик (либо иной метаболит) из комплекса веществ,, синте-V зяруемых исходной "кудьтурой-полисинтетиком1*, могут слуиить объектами генетико-биохнмических исследований, а такхе ценными моделями при изучении механизма биосинтеза тех или иных мета-' бодитов. Наконец, "варианты-моносантетики" промышленных ' ятаммов.актиномицетов представляют интерес для практикн'хак источники более экономичного получения хозяйственно полезных продуктов метаболизма ектиномицетов, в связи с утратой имя способности синтезировать "балластные" вещества (близкие по структуре, но менее ценные соединения, пигменты и т.д.), усложняющие процесс химической очистки конечных продуктов.

Как указывалось, диапззон изменчивости "окультуренных" штаммов всегда сокращен по сравнению с диапазоном вариабельности "диких" форм. Аналогичная картина наблюдается у монотиои-

л ческих'апигментяых гидов и у политипическях пигментобразующих. :видов соответственно. Некоторые спонтанные варианты одного '„'я того же вида настолько отличаются друг от друга яо кулму-■рально-морфологическим свойствам, что могут бить ошбочяс .отнесены к разным таксонам, если не учитывать данные изучения ; характера и пределов изменчивости видов. 3 связи с этим пред- -%ставаяется целесообразным уточнить существующее определение ви-У да {Крнсииьняков, 1970), включив в него тезис'о диапазоне иэ-' менчнвости. -

й:- гомологические ряды в наследственной изменчивости

' АКТИНОИИЦЕТОВ

г Обобщение экспериментального материала, накопленного при г- многолетнем научении спонтанной изменчивости актякомицетов, привело нас к выводу о существовании сходства рядов гариаОель-ностиуразныхвидов лучистых грибков. ' , ' /' Так, в составе популяций апигментннх видов актжномицетов .:ввявиена следующие варианты. Основные, которые составляют ■большшство популяции и характеризуются комплексом тзксономи-веских свойств, присущих исходной культуре, "илигосноровые»? ' сформирующие скудный воздушный мицелий. В зависимости от его ' ^'локализация "олнгоспоровые" варианты подразделяются на ряд '.подвариантов. Белые, отличающиеся Отосковного варианта более ■светлой иди белой окраской воздушного мицелия. Аспорогенные -варианты, лишенные воздушного мицелия. Карликовые, характери-эующиеоя ограниченным ростом. Дроактяномидетоподобные. йорми- -7. рующке морщинистые колонии мягкой консистенция, лишенные воз-'

V душного мицелия. Цикл развития их включает стадию фрагмента-циимицелия.

В рядах изменчивости пнгментобразующих видов актияомн-.цетоэ, наряду о перечисленными, обнаружено несколько дополяи-

V * Здаоь термвн "олигоспоровые" не идентичен термину, которым

.обозначают'ашяиомицеты, образующие ограниченное число спор \ - в цепочке.

тельных вариантов, что объясняется увеличением возможности ком бикярования таких признаков кэк образование:хромо^срках а хро-модарных пигментов. X таким вариантам относятся:, деакоиУтзнть*-. споро генные, не/образуюше пигментов; леИкоиттанть; аспороген- ' ныв, лишенные способности синтезировать пигменты и формировать воздуяный мицелий; «оноколернде слосогенние варианты, которые.; на комплекса пигментов, синтезируемых исходной культурой, эо^ разует преимущественно один пигмент. £ пределах вариантов указанного типа существует ряд подвариантов,-различающихся антимикробным спектром, что часто связано ¿редукцией биосинтеза одного из компонентов комплекса пигментов, обладающих антимикробными свойствами. В случаях, когда изменение антимикробного': 'спектра монокодерных вариантов вызвано редукцией биосинтеза ■■ бесцветного антибиотика, число подвариантов увеличивается вследствие увеличения количества комбинируемых признаков. ' Мококолерные "олигоспооовые". а также моноколерные аспороген- -ные варианты отличаются от моноколерных спорогенных вариантов-и их подвариантов ограниченным образованием воздушного мица-■дня или его отсутствием соответственно. Альтерколерные - варианты, обладающие иной (кроме белой) окраской воздушного ми-л целая по сравнению с окраской мицелия исходной культуры,;

Показано, что вариантный состав популяций всех изученных " видов актиномицетов укладывается в указанные ряды.наследственной изменчивости. ■ V _ .„ " ' ?

Швод о параллелизме внутривидовой изменчивости у акти-■ номицетов подтверждается также анализом.литературных данных.'^ Так, подобные вышеуказанным,описаны отдельные варианты.у куль-, тур Act.long!aporua ruber (Крзсс, 1937), Act.coelicolor (Крисс 1937, stanier , 1942, iCpa сальников, Егорова, I960),- Act.scabies (Schaal , 1Э44), Str; ( Act. ) griseus <Sehati. i'akerman.V 1945, 1949, Cervajal , 1946, '1947, . Pittenger, McCoy , jjjSe, Jo nee , 1954, Раутенштейн, 1959, Ерохина, 1962, Шишкина, Алиханян, 1969), Act.lavendulae (Welcsman, Schatz t 1945, ; >s ■■ Nakazawa , I&7I), Act.vlolaceus {Красальников, I9S0),' Act. purpurasсena (Fromraer ,1955), Act.rlmosua (Рудая, 1959, ' " Миндпня, 1959, Nylrl , 1961,- Gordon, Mihm , 1962), Aot.aubtro-plcua (Гаузе, Ночеткова, 1956), Act.kanamyeeticue (Okami et al. , 1956), Act .erytbraeusf Dolesilova, Vane It , 1э59,

-/Раутенштеян, Ретинская, IS6i>, Ретинсхая, Адиханян, I9ti2), Act. áureo faciese (Caateinuovo «г. al. , I96t(, ¿еселоеа, 1969, Рябумко, Крайаок, '1972), Act.ievorts (11 кг а нов, лковло-■"■ ва, Ií¿69)» Act .coeruioorubidua (йреобрэженекая, Манафова, л: Гауэе, "1966), Act.nodoaue ( Жукова, Цыганов, МадышкиааДЭбй), К' Act.aoursel (Лаврентьева с coast., 1973), Act.hygroacopicue ' (Цыганов, Пронина, 1369, 1370), Act.ciroulatue var. monomycin! .-,■■ (Идельчик, 1963), Aot.floridas (Преображенский, I'97I), Act. flavoehromoge ae a var.heliomycini (Терехова С соэвт., 1973 Act.oliToclnereue (Виноградова с соавт., 1974), Act.гоаео-flavue rar.raaeofungim (Никитина, Каркинбаева, 1970), Act. ; mlcbigaoenalв (Орлова с соавт., 1973), Act.aureoverticillue i (Кузнецова с соавт., 1975), Act.longiaaímua rameue (Касымова,

1970), Act.kitaaatoanaia ( Abe at al., IS6b) и Т.д. '-'-' . Основываясь на собственных экспериментальных данных и аыа-лнзе.литературного материала по изменчивости актиномицетов, аы правда к заключение о том, что изменчивость лучистых грибков подчиняется закону гомологических рядов К.И.Вавилова, от: крытого им в 1920 г. ори изучении изменчивости культурных

растений (Вавилов, 1967), который гласит: "Виды и рода,re-, ! нетически блиакие, характеризуются сходными рядами наследст-Г: ванной изменчивости с такой правильностью, что зная ряд форм в.пределах одного вида можно предвидеть нахождение-параддель-иых форм и других видов и родов. Чем ближе генетически распо-, лохвны в общей схеме роды и . диннеоны, тем полнее сходство в рядах их изменчивости".

:: Значительное число работ, в которых приводятся факты па-раллелизиа форм изменчивости различных организмов может слу- i жить подтверждением возможности приложения закона гомологических рядов к разным биологическим объектам: мхам (Лазаренко, 1360), систематически удаленным цветковым растениям (Купцов, I960), грибам (Горленко, 1963), древесным породам (Мамаев,' 1968/Лыпа, 1971), ветвиотоусын ракообразным (Смирнов,1971), дичинкам некоторых насекомых (Шарова, Потоцкая,.1972), миногам (Берг, 13S3), осетровым рыбам (Никольский, 1973), иско-' .; • ааечым табулятам (Лелешус, 1973) и др.

Объяснение закономерностей гоаологичесаих рядоь з ^следственной изменчивости можно найти з токологии генов (Dobshan-aty , IS37, Зоронаов, 1У6о). Определенную лимита f-уюеую упорн-: .доченность топологических рядов аожно объяснить, приняв воаня-мание концепцию несовместимости признаков (Завараин, -1^65, 196Э,1Э73), на основании которой, по зсай вероятности, представляется возможным определение пределов реализуемой измен- > чивости в диапазоне совместимых признаков у эктиноаацетсв..

Установленные нами ряды зорм изменчивости апигментяых и 'яигыентобразуюишх актиноыицетов, по всей видимости, не исчерпывают существующего многообразия внутривидовой изменчивости, актиномицетов, однако они являются исходной позицией для целе-' .направленного изучения изменчивости актиномицетов и пополнения объема этих рядов. Более полное выявление и характеристика .рядов изменчивости актиномицетов имеет большое значение для * решения теоретических и практических проблем. 3 первую очередь это относится к проблемам таксономии актиномицетов и предопре- -деления вариантов, обладавших хозяйственно ценными свойствами.

- Располагая достаточно полной характеристикой ряда изменчивости одного вида актяномицета, легко разобраться в формах изменчивости другого вида и предсказать существование и основ- ' аые свойства "недостающих" (в начальный момент исследования) вариантов.в его популяции. Возможность прогнозирования на основании закона гомологических ря дев была практически подтверж- .:■ дена при поисках первоначально "недостающих" вариантов-в попу- -дяциях некоторых видов актиноиицетов. Так, при изучении изменчивости Aot.fradiae, Act.airreofaciena, Aot.noura»i,. Act. оНтоЬгштеие, Act .ар. 90В (продуцент пиклосерина) первоначально при анализе популяций ке были обнаружены, например, про-актиноыицетоподобные варианты. Однако, зная о существовании подобных вариантов в рядах изменчивости'других зилов активо-мицетов, можно было,предвидеть существование таких зв вариантов а в популяциях перечисленных видов. Применяя разные приемы культивирования, во всех без исключения случаях удалось обнаружить и выделить проактаномацетоподобаые варианты, которые поддерживаются в-лабораторных условиях в течение многих лет, ' стойко сохраняя своя основные свойства, подобно этому, на ос- -новаыии закона гомологических рядов можно предвидеть сущест-. - - 13

. возавие и вести' направленный поиск "ва ри a нт ов-м оное инт et ико s ", представляющих интерес для теоретических исследований или ' для практического использования в качестве продуцентов анти-< биотиков. : - ' ■■"■'■■ .»■' ;

' . Следует, одаако, учитывать возможность сокращения диапазона изменчивости у актиномицетов вследствие.стабилизирующего . отбора, особенно.у высокопродуктивных промышленных штаммов.. Не исключено это явление'и у диких форы при обитании в одно-/ родных условиях. Тем не менее, "Закон гомологических рядов --показывает исследователю-селекционеру 4tá следует искать. Он.

намечает правильности в 'нахождении звеньев, расширяет круто- ,. / -, зор;' вскрывает огромную амплитуду видовой изменчивости... . -/ Мутация, идущие как бы случайное разных направлениях, при : .-'■ объединении их обнаруживают общий закон" (Вавилов, 1967). Однако это не означает признания ортогенеза, ибо существует : ограничение ненаправленностн мутационного процесса генетическими возможностями вида (Шлоков,1Э63) и несовместимостью у -признаков (Заварзии, 1969). ^ ; ■,:

-V ■ аБОАШВДМИЦВИШДУБНЫЕ Ш.РИАНТЬ Ш, модели ДЛЯ

: оценки таксономической значимости .сритериев .'

О'Л РОДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ АКТШЮШЦЕТО¿ id ПРОАКИШО- '. '

i"-.- ■ < : яицетов ■ ■ ''-',..

.'■'" - 'л;-.- ' .; ' .'■.;'-■■ ■.-/.'' ;v. '

' Проатииоыицетоподобше 'варианты, которые, как было показано, можно обнаружить в популяции любого вида актнномицета,. /обладают рядом свойств, присущих представителям родов Actiao-вусое' HProactinoareee ("пограничные" варианты). ' ■ Уже в ранних работах (Jaaaen , 1931,. Кадровский, 1935, Г.Крисе, 1337, Красильников, 1938) отмечены факты обнаружения подобных форм, которые послужили основанием для установления ■ родственных связей, в частности,'между актиноиицетами и про- , чактяномицетами (Красильников,,1938, 1941, 1949, 1970).

Нами-предложено использовать проактнномицетоподобныеэа-' рианты для.целей определения таксономическое значимости (яве-сомости") критериев родовой дифференциации представителей; ' эктиномяцетоз и яроактиномиаетов."

.-..а с следование этого направления представляется актуальным'. '-! в связи с трудностями идентификации атипичных актиномицетов ,'•' ;(аспорогенные формы) ,в дроактиномипетов ■ (,спороген1ше,рормк " актиноидного типа), с одной стороны,и отсутствием вполне чаадек-■ аых моделей для объективной оценки таксономического "веса".. ; 7; .критериев родовой дифференциации - о другой. '

Курное развитие' хемотаксоношш актиномицетов (см.обзор ; дгре, Калакуцкий, ) привело:к увеличение числа яредаага- • "емых критериев родовой дифференциации за счет 'аовых биохимических характеристик,- таксономическая значимость которых де- - ' датируется. Разноречивость выводов, касавшихся "весомости" 'V; ■". биохимических критериев в значительной мере.обусловлена .выбо^ ром объектов (моделей') их оценки. Для оценки значимости лиффе--ренцирувщих признаков используют, как правило, коллекционные,,. . штаммы, в .число которых нередко аклгчены культуры, первоначальное определение которых несет в себе элементы субъективизма, ' иначе называемого "интуицией таксонокиста". Таким.образом, . главным в вопросе объективной'оценки таксономической значимости критериев родовой дифференциации является правильный выбор объектов, поскольку сама оценка, основанная'на определении ; .-'

- стабильности и специфичности признака, не представляет особых затруднений. . , *",■'.

. : При использовании в качестве моделей предложенных вами ."пограничных" форм, в данном случае - проактиномицетоподобных ' вариантов, появляется возможность объективной'оцежки значи- - ^ мости критериев родовой дифференциации актиномицетов и проак^ тиномицетов.

Результаты сравнительного изучения одиннадцати критериев -, родовой дифференциации, в число которых вошш как "класснчес- ; /кие" морфологические, так ивовые хекотэксоионические пока- . .затели, свидетельствует/об их таксономической неравнозначности. _ Зыло установлено, что на основании таких показателей как •культурально-морфологич^схие.свойства и'способность к фрагиен-; тации мицелия в цикле развития невозможна 'родовая доверенна- ' „ация актиномицетов и проактиномицетов. Так, по вультурально- > иорфолохяческим свойствам (вклечая и консистенцию колоний) - г '

- ароактиномнцетоподобные варианты неотличимы от истинных цроак-'

_ Т5 - '

;'"..■ тиномицетов. ({то касается фрагментации мицелия, - признака, -считавшегося до недавнего времени одним аз основных критериев разграничения родов Actinomyces И Eroeetlnomyoee, - ТО. ' V" данный показатель нестабилен. Мицелий части использованных з качестве моделей проактяномааетоподобных вариантов, как и мицелий исходных культур, не подвергался фрагментации в цик; / ле развития, в то время как мицелий другой части указанных вариантов распадался на палочковидные и кокковидные элементы . ■в стадии высокоб83офидьной цитоплазмы. При этом наблюдался ; однотипный характер распада у проактиномицетоподобных вариан-/ тов и типичных проактнномкцетов (Аристархова, 1973).

Антимикробный спектр, обусловленный способностью синтезировать один или несколько антибиотиков, такие не является ста-U: бальным критерием. Было показано, что яроактиномицетоподобные варианты части изученных культур, таких как Act.кешшу с оticuo, ■ Act.aarвofacteпа и Aet.oZlrobrimneue «полностью утратили ■ у . антибиотическую активность, другая часть дроактиномицетоподоб-', v— яыхвариантов, выделенных из популяций Aot.spherold«e, Act. abllcoenais, Act.rimoeuii , обладала болов узким, по сравнению . с исходными культурами, антимикробным спектром в результате '..■'. резкого снижения или утраты способности синтезировать тот или иной антибиотик из комплекса антимикробных веществ, синтезируемых исходной культурой. -Соответственно этому менялся и такой показатель, как ' 'собственная люминесценция, обусловленная присутствием в культурах люмииесцнрующих,антибиотиков.

* Бо'льшш таксономическим весом обладает показатель резис-V темности культур к собственным антибиотикам. Как было пока' за но, все испытанные проактиноыицетоподобные варианты, Нес-'мотря на частичную иди даже полную утрату-способкости сиате-•■ '''знровать антибиотики, сохранили резистентность к ингибируше-му действию высоких концентраций антибиотиков, синтезируемых исходной культурой. Этот интересный факт, по всей вероятное-; ти, может служить одним из показателей независимого комби ни-7 ; ровакия таких свойств как биосинтетическая активность и резистентность к "собственный" антибиотикам.' \,До этой же причине специфика взаимного антагонизма во i

чвсех случаях оказалась одзогялной. Зоказателн зааимяогозйт?-гоннзнаи устойчивости я высоким дозам энтаОиотикСо, ло нааему мнению, могут быть включены в ряд критериев родовой дифференциации актиномицетов и дроактиномицетов, учитывая, что аредстз вители рода Proaotinomycee обладают повышенной чувствительно-, стью к антибиотикам (Красилькиков, ХЭ70). .

Чувствительность к видоспецифичньм актннофагам проактано-киоетоподобных вариантов, в сравнении с исходными культурами,, варьирует. По всей видимости, этот признак может быть исяоль-аован как дополнительный критерий дифференциации при положительном эффекте.

£ аналогичному по значимости разряду должны быть отнесены такие показатели, как чувствительность к лизоциму и способность лизироватьклаточные стенки дрожжей*.

Что,касается спектра потребления источников-углерода, то' этот критерий довольно стабилен, однако его ценность' для родовой дифференциации'сомнительна ввиду низкой специфичности.

Особый интерес для родовой дифференциации представляют тз кие критерии как жирнокислотный состав липидов я.изомерный сос тав диаминоЕШмелииовых кислот (ДАПХ) клеточных стенок.

В составе липидов большинства изученных культур актиномицетов и их проактиномицетоподобных вариантов преобладают жирные кислоты с разветвленной углеродной цепочкой и нечетным ~ числом атомов углерода, что считается характерным для представителей рода ActlBomycee . Однако участи проактиномицетопсдоб аых вариантов, выделенных и« популяций Act.atreptomjcinl löl iot.»ureof«olene, Act.яр. ЭОЬ, наблюдается сдвиг соотношения ' в жирнокислотном составе в сторону уменьшения.содержания ¿ир~" ных кислот с разветвленной углеродной цепью и нечетным'числом' атомов углерода,при одновременном увеличении содержания sap- ' ' 1шх кислот с прямой углеродной цепочкой и четным числом атомов углерода, то есть сдвиг в сторону приобретения сходства с пред ставителяма проактиномицетоа. ьще.далее этот процесс зашел у ~ яроактикомицетоподобного варианта Act.kaoamyo^tieu« , который по указанному признаку не отличается от представителей рода : ftfoacttnomyeea . 3 то же время изменения жаркокислотного состава липидов проактиноаицетоподобнах вариантов.культур ¿ct. . -

- Г7 -

atrsptoeyclni. 773, Act .rlaoeue,. Act .apJieroidea, Act .antlMo-' 'ticue,:Act.orientalia, Act.erythraeua практически-ae происхо-,,--дило. Таким образом, показатель соотношения жирных кислот да-.-пидов*,; вопреки мнению некоторых авторов (Bailio et ai., I9S5,Lan«©llVet al»r 1965), не может считаться первостепен- " : ным критерием родовой дифференциации актиношцгтов и проактино-мицетов. Следует отметить при этом,' что любые количественные показатели уступаютпо своей таксономической ценности качествен- / зим критериям. Более перспективными представляется исследова-, ния,* направленные на поиски в составе липидов'автиноыицетов и проактиномицетов специфичных жирных кислот (Kimura,et el. , 1967).. v -v. ' ■ ■

,. Наиболее стабильным из всех изученных таксономических кри-" .териев родовой дифференциации оказался изомерный.состав ДАШС клеточных стенок. Ни в одном случае не было обнаружено изменения состава дШС, клеточных стенок у проактиномицетоподобных вариантов по сравнению с исходными культурами. Не составлял ',■■' исключения и проактиномицетоподобный вариант Act .kmnajnyceti-eue , который по < жирноки слот ному составу липидов' не отличался' от представителей рода Froactlnoiayceo Этот факт еце раз . ' подчеркивает большую таксономическую значимость показателя . состава Д&ШС как родового дифференцирующего признака по срав- . нению;о показателем состава жирных кислот яипидов.

'у Итак,- проведенные исследования свидетельствуют о возмож-зостм условного использования ороактиномицетододобных вариан- --тов в качестве моделей объективной оценки таксономической зна- , .чймости критериев, предлагаемых для родовой дифференциации ак-тиномицетов и проактиномицетов. Полученные результаты поэволя- v .ютоценить таксономическую значимость критериев родовой дифференциации следую&им образом. Первое место отводятся'такому по-V' казателю как изомерный состав ДШС клеточных стенок. Затем следуют: жирнокислотный состав липидов, микроморфология мицелия в цикле развития, культуралыше свойства,"чувствительность-к 1 -лизсциму. Остальные свойства (наличие или отсутствие $ермен-'-тов,' лмзирувщих клеточные стенки дрожжей, антимикробный спектр, ^собственная люминесценция и др.) могут привлекаться как дополнительные1признака для характеристики культур.

г'.- - Практическим завершением.исследований по определение таксо-'/." комической значимоста'критериев родовой дифференциации с лсаоль-К завамиеы а качестве моделей проактиксмицетододобша вариантов ■■' 7: явился пересмотр!систематического положения культур Ас».егу-1Иг«вив -(продуцент зритрсмидина) и,асI.ог!вс«а11в (продуцент. д. .ванкомицина), которые по таким.показателям, как изомерный! V состав ДАШС,' м'икроморфология в цикле развития, чувствительность ■7' к лизоциму - идентичны представителям рода Рголог^псшусев. <

' "'••', •• ' ' , . • V'-- .'■ - раздел С ._ ' '

, ' СТАБИЛИЗАЦИЯ БИОСИНТКГИЧЕСЯОЙ АКТИВНОСТИ И ТАКСО- -

аошч^Ешхшста шшшшоммщщшов ' V'.,

АЫТЕБИОТИФЬ ■ , . * ' . ■ ' '\7..

. . Одной из актуальных проблем современной микробиологии яв~ ~7 ляется проблема стабилизации:таксономических (качественных) и ■ практически ценных (количественных) свойств микроорганизмов. '

"В настоящем Разделе суммированы результаты экспериыев-* ; . тального! изучения и определения эффективности различных и его- ■. дог' поддерхания антибиотической активности промышленных ивам-'- -мов актиномицетов, а также стабилизации и восстановления таксо-7 .■ . комических свойств типовых культур лучистых гриОшов и длитель- ■ ;' кого'сохранения их кизнесдособности. , - -; с

СТАБИЛИЗАЦИЯ ШОСИШЖИЧёСКОК.¿ЖИВНОСТИ ОКШШьШНЫХ ' иЛАЛУОВ ¿¡СГИНОкИйЕТОВ-ЛРОДУЦЕНТОВ АНТИБИОТИКОВ.

:' ■ • " ■ - -ч ": ■ '■' г- ■ у: ■

Промывленные втаммы актиномицетов при содержании их на .'■.■'.' . искусственных питательных средах в силу своей вариабельности / ■ \ - постепенно снижает бносантетнческув активность, то есть вырож-.. -7.7 дается как продуценты.антибиотиков* Зырождение кулмур-проду-'".:

центов происходит, :в основном, за счет вытесненияяэ подула- . ■ ; цин.высокоактивных, но, как правило, медленно.растущих форм ,.

: низ неактивными, но быстро растущимя-и обильно спорулируюшими -7 .. вариантами (ревертантамх), Скорость и степень вырождения нуль-

тур зависят от генетической природы.организма и условий их '■'". содержания. 7- ■ •

".'■'■.'- - 19 - • ■ '

Л- Как показали исследования, существующие биологические различия между отдельными культурами актиномицетов (даже в прадедах одного вида) приводят к необходимости индивидуального под-, вора методов и условия стабилизации уровня антибиотической ." активности штаммов-продуцентов антибиотиков.

' Изучению и оценке подверглось более десяти методов стабилизации свойств актиномицетов..В их число входили известные, а также модифицированные и разработанные нами метода сохранения уровня биосинтеической активности актнаомицетов-проду-г,центов антибиотиков, основанные на следующих принципах: содержание культур в состоянии анабиоза; перевод культур.в состоя-г нне гиаобиоза (замедленного обмена веществ) или меэабиоае '(замедленной диссимиляция); устранение из популяции атипичных : форм. . .. '

У Показано, что одним из эффективных методов длительной ста--билнэации уровня активности проиыиленных штаммов-продуцентов /стрептомицина,.новобноцина, циклосерина, окснтетрациклина, не- 1 ' омицина, дактиномицинаявляется сохранение лиофильно высушенной суспензии спор в нормальной лошадиной сыворотке без кон- . ;серванта. Однако этот метод не всегда мохет быть применен в производстве, так как не удовлетворяет двум другим требовани-^ям; которые необходимо учитывать при выборе способов стабилиза-.'■ ш'промышленных штаммов, а именно - доступности и удобства -использования в производственных условиях* С этой точки зрения метод якофилизации уступает таким методам, как поддержание 'Штаммов - продуцентов на агаризованных средах или на аерне, 1 ; так как, во-первых, откосится к числу способов, требующих при' денеция специальной аппаратуры, во-вторых, лнофилизироваяная . 'культура непосредственно перед использованием нуждается в ре-".. активации. Это ведет я увеличению числа генераций* что отри-;детально влияет на качество посевного материала. Хроме того, среди промышленных продуцентов встречаются такие штаммы, биоло-^ гнческие свойства которых не дают возможности прибегать к их ^стабилизации путем лиофилизацни. it таким культурам, в частности, "откосится продуцент канаыицняа, - Act.kanemyeatieua - споры ;;которого теряют жизнеспособность в процессе лиофилизацни.

3 связи с этим, для каждого штамма-продуцента были подо<^

- '¿Я -

раны такие методы, которые, помимо эффективности, удовлетворяли остальным перечисленным требоваяаям стэбидизацаи ярсмыа-4ленных культур актиномицетоь. Наиболее универсальными яг них являются: метод почвенных культур и содержание яа'овсяном агаре при температуре .

Для стабилизации свойств эктиномицетоэ - продуцентов а а-_ тибиотиков целесообразно использовать в качестве исходного материала вегетативный мицелий, поскольку генетическая одяород-" ■ ность его выше по сравнению со спорами (Герольд и др., 1366). . Однако устойчивость вегетативного мицелия к знеиним. неблаго-/, приятным условиям ниже, чем устойчивость спор и при лиофидиза- ■ ции обычными методами происходит утрата жизнеспособности вегетативного мицелия. В связи с этим нами был разработан новый способ лиофилизации вегетативного мицелия в почве, который' дает возможность сохранять жизнеспособность и стабилизировать - уровень антибиотической активности посевного материала проммо-ленных штаммов актяномицетоз в течение 3-4 лет.

С целью повышения показателя выживаемости спор актиномн-цетов при их лнофилизацни был модифицирован метод сублимационного' высушиваная суспензия спор на обезжиренной вате. Ис- ' пользование указанного метода дает возможность сокращать сроки неблагоприятного воздействия факторов лиофилизации ва споры -актикомицетов/что способствует увеличению процента их выживаемости в лиофидизироваиной суспензии. '

Разнообразие методов расширяет возможности выбора из них наиболее рациональных для аффективной стабилизации хозяйственно ценных свойств промышленных штаммов-продуцентов антибиоти-кав*'Однако применение любых методов стабилизации, включая я методы консервации, не может полностью предотвратить процесс1 снижения уровня антибиотической активности промышленных штам-моя в течение длительного времени (более 6-ти дет). Снижение уровня активности штаммов сопровождается изменением соотноие-ния вариантов в их популяциях. При этом происходит уменьшение числа основных вариантов, обладающих наиболее высоким уровнем биосинтетической активности, и увеличение процентного содер хани я янзкоактизвых вариантов: белых, аспорогенных, "олигоспоро- " зых", проактиномицетоподобных. Более того,.в популяциях вариантов основного типа преобладающими становятся колонии,-уровень

антибиотической активности которых сдвищт к .нижнему пределу диапазона колебаний этого показателя. Поэтому-для длительной стабилизации активаости'промьшлешшх'штаммов актиномицетов необходимо сочетать методы консервации культур с периодическим отбором активных вариантов из популяции '(стабилизирующий отбор), наиболее рациональные сроки которого определяется особенностями штаммов и методами их предварительной стабилизации. При проведении стабилизирующего отбора'удается яе только поддерживать, но в отдельных случаях и ловыаать уровень антибиотической активности «гамма.

. .СТАБИЛИЗАЦИЯ ТАКСОНОМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И СОШНШ . ^ ДИЗНЕСПОСОШОСТй АКХИНОаЩЕТОЙ /

Если при хранении промышленных атаммов актиномицетов основной целью является стабилизация хозяйственно ценных (количественных) свойств, в.частности - уровня антибиотической активности, то при поддержании типовые культур лучистых грибков, служащих «талонами для идентификации, стабилизации подлежат, таксономические (качественные) признаки, "Нет нужда давать разъяснения, что для развития макробиологии как науки, крайне важно, чтобы микроорганизмы, которые были описаны и изучены одним ученым, были бы предоставлены.в распоряжение других ученых, желаюцих проверить иди расширять сделанные наблюдения" (Kluyref ,1950). Ори этом культуры должны соответствовать оригина&ному описании. Сохранение оригинальных -свойств культур актцномицетоз сопряжено с известным» трудностями. ' ■'„ ... /

Большое значение для правильной оценка эффективности !методов стабилизации таксономических свойств имеет выбор соответствующих критериев, в число которых необходимо.включать наиболее лабильные свойства.

• Результаты исследований показали, что этим требованиям удовлетворяют такие свойства как цигмеятообразование, цвет воздушного и субстратного мицелия. Было установлено также, -что эффективность методов стабилизации таксономических свойств и'жизнеспособяости актиномицетов необходимо оценивать.

дифференцированно, з завиеииости от зтепэни ах'устойчавости а неблагоприятный условиям'внешней среза. 'Так,. представители^ рода Aetinoayeee по-этому признаку аолно' разделить аа' две. -,. группы. В 1-ю группу объединяются сравнительно стабильные культуры, представленные большинством зпорогенных видов. Эо 2-ю группу входят аспорогенные.формы, зиды, формирующие мутовчатые спороносны, а также_ представители Act.nouraei . и Act.'' Kanamyceticue . Актиномицеты, принадлежащие ко 2-й группе,: более чувствительны к неблагоприятным, внешним условиям.

Изучены особенности стабилизации более ¿00 культур аытяно-мицетов шестью раэличнымк-методами' в течение 1-12 'лет. Это V'-'i позволило установить сроки стабилизации таксономических свой- ; ств и жизнеспособности типовых штаммов в зависимости от приме-J ияемых методов, установлено, что для стабилизации таксояомиче-схих свойств и сохранения жизнеспособности представителей группы наиболее эффективным методом является диофидизация спор. Этим способом были стабилизированы.таксономические свойства 97культур актиномицетов в течение 12-ти лет из-числа 1 итаммов.(76,9^), которые сохранили жизнеспособность в'преде-'■■■■■.-; дах указанного срока. Удовлетворительные результаты получены ч-также при применении методов почвенных культур и хранения спор в кварцевом песке. Для стабилизации таксономических - v'-; ;' свойств актиномицетов 2-й группы наиболее^эффективными методами являются: содержание на агаризоваяных средах при температуре: - 20 °С и метод почвенных культур. Нет од лиофидизацяи' мало пригоден для стабилизации культур 2-й группы,.поскольку '■ i уже через 5 лет наступает гибель 50£ штаммов, а через 12 лет все;культуры теряют жизнеспособность. Эффективным методом ста-; билизации аспорогенных форм актиномицетов является содержание;-их в виде почвенных культур,и на агаризоваяных средах под ело-/ ем вазелинового масла. В то же время последний метод яеприго-';. ден для стабилизации спорогенных культур, которые, как права-,'" до, теряют при этом способность .формировать воз дуй шй мицелий.'. >

Таким образом, для стабилизации таксономических свойств >; эктиномицетов как 1-й, так и 2-й групп наиболее аффективными доступным является метод почвенных культур.

ЖСТШМШЕ. ТлВДШ(ЫИЧЕС«Щ СЛи.К1'в ШЙШЙИЦЗГОВ, УТРАЧЕННЫХ-8 ПРОЦЕССЕ ЛАБО^АЮШОГО ¿СУдЬТИШРОВАНЛй

Ори хранении типовых культур актиномицетов любыми методами в лабораторных условиях постепенно происходит изменение их таксономических свойств. Особенно ярко это явление выражено при поддержании культур на искусственных питательных средах,.когда изменение признаков наступает не только вследствие ослабления иди утраты того иди иного свойства, то и в результата его гипертрофии. ¿1 тон н в другом случае типовые культуры теряют свою ценность как видовые эталоны. Поэтому возникает-необходимость восстановления таксономических свойств эталонных культур.

' Как показали исследования, при утрате или изменении таких свойств как окраска мицелия, интенсивность роста, степень пиг-менсообразоаания и спорогенеэа возможность их восстановления г не.исключается. Поэтому изъятию дегенерировавших типовых культур из коллекционного фонда должны предшествовать попытки их восстановления.

'..■ Весьма эффективным способом восстановления как утраченных, так и гипертрофированных таксономических свойств оказался усовершенствованный вами метод почвенных культур. Усовершенствование метода заключалось в создания оптимальных условий для развития актикомицетов и функционирования ферментных систем участвующих в синтезе пягызнтов. С этой целью почву, предназначенную для культивирования дегенерировавших штаммов, обогащали аргияянтовндной глиной, содержащей широкий набор микроэлементов ~в доступной для усвоения форме (Ивкин, Соколов, 1963), комплексом витаминов группы В и глюкозой. Обогащение почвы микрозлемен теми и витаминами производили с таким расчетом, чтобы их конечная концентрация не выходила за пределы нормальной регуляции. функций организма (Иерусалимский, 1949, Ковальский, Андрианова, 1970). '

Сравнительное изучение таксономических свойств ТОО типовых штаммов актиномицетов показало, что при культивировании на искусственных питательных средах в течение 10-ти лет у 37-ми штаммов произошло изменение окраски воздушного и субстратного мицелия, цвета пигмента и интенсивности роста. Ме-

ходом почвенаш: культур у штаммов (из-числа дегенерировавших) была восстановлена окраске воздушного и субстратного мицелия,.У 52% штаммов была восстановлена интенсивность схн-. теза-пигментов и у культур - интенсивность роста, '¿ысо--кая:Эффективнос1Ь модифицированного метода почвенных хультур ,позволяет рекомендовать его для широкого использования в практической работе микробных коллекций при восстановлении таксономических свойств.типовых культур актиномипетов. .

При пассировании актиномицетов через почву наблюдались случаи усиления спорообразования,'а также ослабления окраски мицелия и растворимого пигмента по сравнению с оригинальными-■ описаниями. Как было установлено; обнаруженные на первый взгляд парадоксальные факты объясняются те» обстоятельством, . что оригинальные описания основывались на данных изучения штаммов, у которых.произошли изменения таксономических свой- ств вследствие'длительного культивирования в^лабораторных условиях после выделения из естественных субстратов. В подобных случаях видовые описания не могут считаться правильными, ибо не отражают свойств существующих в природе видов актиномицетов. Обнаружение подобных фактов свидетельствует о необходимости дополнить Правила описания новых видов почвенных актиномицетов пунктом, предусматривающим пассирование куль-' тур через почву перед описанием их таксономических свойств.

Экологический подход к решению проблемы восстановления свойств актиномицетов дал положительные результаты не толь-, .ко.в случае использования метода почвенных культур, ко и при применении других способов, основанных на данном принципе.

Хак, при изучении аОО штаммов, относящихся к международным видовым эталонам, была показана возможность восстановления интенсивности окраски мицелия и способности'¿ормн- . ровать споры.путем инкубации культур в температурных, границах между оптимумом и максимумом развития мезофилов (42 °С).

Для восстановления такого важного дифференцирующего свойства, как способность формировать-спорангия представителями семейства Ас*1ш>р1амсвае , в успехом может быть применен метод культивирования дегенерировавших $орм на пыльце -

'растения, которая'является одним из естественных субстратов' -/. обитания указанных организмов.

Используя экологический подход, нам также удалось воеста " новнть оиоспатетическую активность дегенерировавшего в лабен. '. раторных условиях штзииа-ародацеата.фузидина путем яасснрова-. , вия его через Тего&юа ер . Культура с восстановленной био" синтетической активность» послужила исходной формой для выведения продуктивного штамма (Авторское свидетельство £ 22121а, - 1968), что, в своп очередь, позволило.разработать технологию

промышленного производства данного антибиотика. £ настоящее ^ : время антибиотик фуэидин разрешая фармакологическим комитетом Министерства здравоохранения СССР для'медицннского применения . и промышленного выпуска в качестве нового продукте медицин-■ ской промышленности. ' '' - - 7

■ :; :■■,"',,■ заводь, ; у ■л.'-'.Л:

Изучена спонтанная изменчивость промышленных штаммов ' ч . активомицеюв-продуцентов стрептомицина, канамицина," несмиии->на, важоиииина, эритромицина^олеаядомицина, тетрациклина*,";; ; . яовобиоцина,,дактиномицина. Определены пределы вариабельности 7 ', и охарактеризованы спонтанные варианты каждого из' них. йока-.-\': заной подтверждено статистическими•методами существование . ; коррелятивной связи между комплексом культурально-морфологиче- ^ сккхсвойств спонтанных вариантов-штаммов-продуцентов антибио-. тиков и средним уровнем их биосинтетической активности, что дает возможность выделять из копуляции.наиболее продуктивные ■ ' варианты, руководствуясь визуально определяемыми признаками,;^ . и тем самым резко повысить эффективность' проведения стабили-^ • . эирующего отбора.. ' ; "

' 2.. В популяциях "актиномицетоз-подисинтетиков" обнаруже- ■ Г ны Вв арианты-мо но с и нт етики ", образующие один антибиотик из , " комплекса антибиотических веществ, синтезируемых исходной кулъ-^ турой^"."Варианты—моносинтетики" могут использоваться в'каче-:,.\ стве моделей при генетико-биохимических исследованиях,^ также как продуценты хозяйственно ценных метаболитов. ; .■■■'•■' 3. Разработана схема и усовершенствована методика изучения' .изменчивости актиномицетов, позволяющая наиболее полно выяв-. лять вариантный состав популяции. Показано, что результаты"определения характера и размаха изменчивости актиномицетов'в зна-; ^ читальной мере зависят от' яравильного.подбора питательных сред: : н определения стабильности спонтанных вариантов. • . • /Ч.: Установлено различие диапазонов спонтанной вариабельно-; сти промышленных штаммов и типовых культур актиномицетов. доказано сокращение размаха изменчивости в.процессе:стабилизирую-него отбора. Беспигментные виды обладают более узким1диапазо-' ■■7 ном вариабельности по сравнению с пигмент образ ушами. ■ . .'■■;■

..5. Впервые показано, что явление внутривидовой спонтанной-изменчивости актиномицетов подчиняется закону гомологических*, рядов, сформулированному И .И. Вавиловым при .изучении изменяй' вости культурных растений. Охарактеризованы"гомологические' '.'7;

■ ■ ■ . 1 - г? - ;.";. . ■

ряды спонтанных вариантов беспигмент аыхи пягментобразукдах у. видов. Гомологические ряды беспигментных видов состоят из: .. ' основных, "олигоспоровых", белых, аспорогевных, карликовых, проактикомицетоподобных вариантов.' Гомологические ряды лиг-ментобрааующих видов включают: основные, "олигоспоровые", лейкомутанты спорогенные, лейкомутанты аспорогенвые, моаоко-дерные спорогенвые, монокодерные "олигоспоровые", моноколер-вые аспорогенвые, альтерколерные, карликовые, проактиномице-топодобные варианты. Варианты в свою очередь делятся на под-варианты на основании фиэиолого-биохямических различий. Соот-> нопение различных вариантов в популяции может меняться в зависимости от генотипа и условий культивирования, но преобладают основные варианты, которые характеризуются комплексом таксономических признаков, присущих виду.

6. На основании закона гомологических рядов представля- ' ется возможным ве только классифицировать формы изменчивости актаномицетов, во и прогнозировать свойства спонтанных вари-автов еще не изученных видов, а также отдельных вариантов, которые не выявляются в популяциях при обычных методах исследования. Это положение экспериментально подтверждено на примере прогнозирования и выявления проактиномицетоподобных вариантов в популяциях всех без исключения изученных культур ак-тиномицетов. . _ , >

7. Наличие проектиномицетоподобных вариантов в популяциях- актиномицетов подтверждает положение о существовании родственных связей между актиноыицетамв и проакхиномицетамн.

Предложено использовать цроактиномицетоподобные варианты в качестве моделей для объективной оценки значимости критериев родовой дифференциации. Сравнительное изучение стабильности и специфичности одиннадцати различных таксономических свойств проактиномицетоподобных вариантов и исходных культур актнвомицетов показало, что наибольшим таксономическим "весом" для дифференциации активомяцетов и проактиномице-тов обладает такой биохимический (хемотаксономический) пока- ' эатедь как изомерный состав ДШС. Далее следуют: жирнокислот-ный состав липндов, микроморфология мицелия в цикле разви-.

тня; культуралыше свойства. Остальные таксономические показа тели когут использоваться в качестве дополнительных критериев характеристики культур« поскольку 'дифференциация должна прово даться'с учетом совокупности признаков.Показано, что спектр потребления источников углерода, несмотря на сравнительно высокую стабильность, обладает низким таксономическим "весом" для родовой дифференциации, вследствие слабо выраженной специфичности. "

. Э. Показано, что цроактиномицетоподобные варианты, несмотря на частичную иди полную утрату способности синтезвро- , аать антибиотики, сохраняют резистентность к ингибир^ювему действию высоких концентраций антибиотиков; образуемых исходной культурой, что позволяет использовать это свойство для ! дифференциации атипичных форм актиномицетов-продупентов ав-

тпбиотиков. ' ^

. ,20. Ыа основании данных определения таксономической значимости критериев родовой дифференциации произведен пересмотр систематического положения *.сг .оПвпгаИч я де-к.ехуеьгмия • которые помещены в род Ргоас-ЬШокусея (ВосатчИа).

II. Изучена эффективность более десяти различных методов длительной (до В дет) стабилизации Сиосинтетяческой активности промышленных штаммов-продуцентов антибиотиков и таксономических свойств типовых культур актнномипетов. Показа но, что наиболее эффективным« являются методы, основанные на переводе культур в состояние анабиоза и гипобиоза (лвофнлн-зация, содержание при отрицательных температурах, метод поч-зенных культур).

* 12. Установлено, что методы стабилизации уровня актив- : ностя промышленных агтаммов-продуцентов антибиотиков неоо- . ходимо подбирать индивидуально, применительно к каждому ■ штамму, в соответствии с его биологическими особенностями я диапазонов изменчивости. Рациональные методы стабилизации долаш'сочетать такие показатели, как эффективность, доступность в условиях производства и возможность использования стабилизируемого посевного материала без дополнительного пассирования. Рекомендованы рациональные методы стабилизации, ' уровня антибиотической активности промышленных штаммов с уче-

той указанных требований.

13. Показано, что ни один из испытанных методов стабилизации промышленных продуцентов, включая методы консервации -культур, ае в состоянии обеспечить сохранение уровня Сиосин-тетической активности в течение неограниченного времени. По истечении определенных сроков, продолжительность которых .обусловлена степенью изменчивости культур и используемыми методами стабилизации, наступает снижение.уровня активности ягам нов, сопровождающееся изменением вариантного состава популяций в направлении снижения числа высокоактивных и увеличения 1 количества низкоакгивных вариантов. Сочетание методов консерг вации с периодической селекцией наиболее активных вариантов является наиболее надежным приемом стабилизации промышленных

;культур. '

14. Изучены методы длительной (до 12 лет) стабилизации . таксономических свойств свыше 700 типовых культур и международных видовых эталонов актиномицетов. Экспериментальным путем определены критерии оценки эффективности различных методов стабилизации типовых свойств актиномицетов. Показано,' .что оценку методов необходимо производить дифференцированно, ' в зависимости от степени естественной устойчивости культур к неблагоприятным внешним воздействиям. Даны рекомендации по применению определенных методов стабилизации свойств типовых культур. Эффективными методами стабилизации группы актиноми-цетов, отличающихся пониженной жианеспособностью.(аспороген- ! аые культуры, представители дег.каподусеЗДсие, АеЪ.аоигае!

и группы Тег«1а111&гив') являются: содержание на агаризован- ' ных средах при отрицательных температурах (-а0°-25%), под ,слоем вазелинового масла'и в виде почвенных культур. Для стабилизации жизнеспособности и свойств остальных спорогенных. культур рекомендуются методы диофилизации и почвенных культур.

15. Показана зависимость жизнеспособности спор от условий хранения и способов реактивации. Снижению числа гибнущих при реактивации диофилизированных спор способствует предваритель-наа регидратация в отсутствие'питательного субстрата.

16* Показана возможность восстановления ряда таксоном«- 1 ческих свойств, утраченных культурами актиномицетов в процессе

; поддержания на искусственных'питательных средах/ Наибольшей v эффективностью при этом обладает модифицированный аа'ми'метод : почвенных кудьтур. Установлено, что описании новых видов' зк-'тяноиицетов, которые длительно культивировались в лаборатор-'.них условиях, должно предшествовать пассирование их через "I почву с целью восстановления исходных свойств. ' ' : ' ■'17. Модифицирован, ыетод лиофнлизации, позволявший сок- : ратить время высушивания'в вакууме и тем самым повысить"число сохраняющих жизнеспособность спор в лиофилизируеиой'суспензии. Усовершенствован метод почвенных культур, давний возможность создать благоприятные условия дия развития и гш гм ear ооб разова-иия зктиномицетов*. Предложено обогащать почву, используемую в качестве субстрата, легко доступным для усвоения естественный, комплексом микроэлементов (в виде аргиллитовидных глин) и у витаминами группы В в пределах нормальной регуляции функций организма. Разработан новый метод лиофнлизацни вегетативного мицелия в почве, пригодный для.длительной стабилизации свойств актиномицетов. ,

; ( 19. Отселекционированы новые «гаммы-продуценты противо-.опухолевого антибиотика'дактиномицина и противобактериаль- V-ного антибиотика фуэидина, первый из которых послужил осно- ■ /■ 'вой для разработки'технологии промышленного производства, второй - для получения промышленного штамма. Вродуценты защищены', авторскими свидетельствами. Долучено разрешение 4армакологиче-; ского комитета Управления по внедрению новых лекарственных ; <"; средств и медицинской техники ¡Министерства здравоохранения/ СССР на медицинское применение и промышленный выпуск дактиномицина и фузидина в качестве новых продуктов* медицинское про- . ■ мышлениестн. - /

■'ч' ',: ■ ■ ■"Л ' . : " ■■/'.''.'■ ' .;.'

Рассмотрены основные закономерности изменчивостигактино-аи иегов и вопросы стабилизации их свойств. Уточнено определе-' вие.внда у актяномнцатов. Обсуждеяы возмояшости использования результатов проведенных исследований в теоретическом и прак- , тнческом аспектах. , \ ••

- список

> V печатных работ, в которых изложено

основное содержание диссертации

;■.-.■ I. Кузнецов В.Д., Сорокина Е.И., Вихрова H.H., Крючкова Т.И., Ï; £леопинаГ.Н,, Хохлов A.C., I960..Продуцент акт ином и-

■ Г цина из группы флуоресцирующих актиномицетов. Тр. Ин-та ,

микробиологии АЛ СССР, в.8, 133.

2. Кузнецов В.Д., 1 яги на H.H., IS60. Продуцент антибиотика

типа кандицидина из глобкспориновой группы актиномице-

- тов. Тр.Ин-та микробиологии АН СССР, в.8, 188'.

: ; 3. Кузнецов В.Д., I960. Об использовании актинофага при иден-' тификации и.направленной.поиске некоторых продуцентов , пояиеновых антибиотиков. Антибиотики, т.5, Я» 3, 25.

Кузнецов В .Д., I960. Применение актинофага для кзправленно-*/-'.' го поиска некоторых продуцентов" полаеновых антибиота-- ; ков. докл. АН СССР, т. 135, Л» 4, 981.

"Si Кузнецов В.Д., Лягина H.H., Сорокина S.U., Абызоза Л.Ф.,

1962. Некоторые вопросы хранения культур актиномицетов и грибов в лабораторных условиях. Цакробиодогия, т.31, '. . . , в.4, 731. ' .

. 3. Кузнецов В.Д., 1962. О систематическом положении некоторых актиномицетов, продуцентов гептаеновых антибиотиков. Антибиотики, т.7, * 8, 675.

* 7. Euzneteov- Т.О., Lyagina H .M., So го Ici па 5.1.1962.Physiological properties as taxonomlc feature In classification of actlnomycetee. it acht.JLllg .Kikrobiol., B.2, Н.Э. 307.

/ 8. Кузнецов В.Д., Блинов H.O., Вихрова H.H., 1962. Образование пентаенового и полипептидного антибиотиков продуцентом из группы мутовчатых актиномицетов. ¿¡икробиодо-■ ^ гия, т.31, в.5, '811. "

9. Кузнецов В.Д., 1964. Классификация,биология,культивирование -и хранение микроорганизм о в-продуцентов антибиотиков* В ■V . кн.: "Руководство по микробиол.,клинике и зпидемиод.ин-

; , фекц.болезней", Иэд-во "Медицина", т.4, 517.

. ' .7" - 32 - ' '

10. Кузнецов В.Д., Лягмна Н.М., 1964, Хранение'trизменчивость . Act treptoniyclni (штамм ЛС -I)-продуцента стрептоаица-. ' на. Антибиотики, т.9, № II, 370.

- II.'Кузнецов В.Д., Пнвоварова Э.З., 1»65. к методике высева

диофидьно высушенных спор некоторых актиномнцетов-про-. дуцентов антибиотиков. Микробиология, Т.34, в',1, 176. ■'

12. Кузнецов В.Д., Лягина Семенов С.М., Сорокина Б .И., .'/"- 1965. Об устойчивости некоторых кудьтурально-морфодо-

гвческих свойств актнномицетов припоследовательных пересевах. В кн. "Биология отдельных групп автншшицетов", Изд-во "Наука", 333. '

13. Кузнецов В.Д., 1965. К систематика Aet.galbae , Антибио-. 4 v тики, т.Ю, № 7, 595.

14. Кузнецов В.Д., Семенов С.М.» 1965. Изменчивость продуцента .. фрамнцина (неомицина) - Act .fradiae - в лабораторных

условиях. Антибиотики, т.Ю, № 9 , 788.

П. Кузнецов В .Д., 1965. Фа го лизис актиаомнцетов - одна из причин нарушения процессе биосинтеза некоторых антмбиоти-ков,. Антибиотики, т.Ю, S8, 689. , ' ■■, /

^ 16. Кузнецов В.Д., Лягяна НЛ., Грачева Н.В., Пнвоварова З.В., Соколов АЛ., 1966. Систематическое положение дродуцен-1, тов новобиоцнва. Микробиология, т.35, в.5, 841.

17. Кузнецов В.Д., Соколов A.A., 1966. К систематике let.via*-

eeue , Антибиотики, T.II, Ä 4, 308. '

18. Кузнецов В.Д., 1966. Хранение аатнвомицетов, Антибиотики,7'

т.II, И» 6, 574.

19. Кузнецов В.Д., Супрун ТЛ,,. Смирнова А.Д., Пнвоварова З.В.,

Мелехове Н.П., 1967. Отбор естественных, вариантов, био-. логические свойства, приготовление посевного материала продуцента фузиднна и метод определения антибиотической активности. Антибиотики, т. 12,. ¡в I, 13. -

20. Кузнецов В.Д., Лягина Я.М., Семенов C.U., Янгулова И.В.,

Кобзева Н.Я., 1967. Почвенные культуры как способ восста новдения таксономических признаков актнномицетов. Микробиология, ».36, в.3, 51С.

/.■¿¿.-Кузнецов З.Д.,;Кобзева H.A., 1967. Изменчивость"продуцента канамицина - Act .konanyoeticue - при поддерхаьии в

>. '■ лабораторных условиях. Антибиотики, т.12» Ks 6, 433. v - l;

•22. Кузнецов В .Д., 1967. Хранение актнномицетоа в лаборатор- . них условиях. 3*кн." "Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов", Из д-во" Наука", П., 136.

23. Euzaeteov V.D.,1967« Dleeuselon of_Rautenetein'a paper on ,■■■-'. the "Ue* of »ctlnophagee for the classification of acti-nomycetalM* Int. J.Syet.Baot., V.I7; Ho.2, 154. -

34. Кузнецов В.Д., Новикова Н*Д*. Бартоиевич Ю.З., 1963. Куль- ,<: тнвирование, естественная изменчивость и хранение яро- .: дуцента фуэидаяа. Никол; и фитопатол., т.2, ft I* 58. Д

. 25. Kutneteov T.D. »Yangulo-ra I.V., KhoIchloT» Tu.li., Blinov Ы.О., ; 1968. Taxonomio studies od collection culture«.of acti- • . nomycetee producing oandlaldln and aatimycin A, Int. Conf . on Culture Collections, TolcyoAbstr.Symp. (c),7.

26. Родионова Е.Г., Дмитриева C.B., Кузнецов В.Д., 1968., Естестве наая изменчивость'продуцента стрептомицина -Act.atreptoayciiii 773, Антибиотики, т.13. Иг 2, 114. '

37. Бартошавич D.S., Ависова Д.Н., Вихрова H.H., Кузнецов В.Д.,

v ' Навашн C.U., Петрова U.A., Рапопорт И.А., Смирнова А.Д., ./

- ;'ч-. Haeepcofl А.Ц.» 1963. Штамм Гив141\1т оосв1пеша-10-Ф-Ю4-

продуцент фузидина. Авторское свидетельство ft 2SI2IS,

: .28. Кузнецов В.Д., Лягана U.U., 1963. Хранение продуцента -стрептомицина разными:саособами. Антибиотики,!.13, ft 7, 600. . ■ ' •• ' , '

/ 29. Кузнецов Й.Л., Вихрова H.l(.t 1963. Штамм 16-6-Aot.parrul-

lue- продуцент актнноыицина Д. Авторское свидетель«- / \

- •. . во ft 343536.

-30. Кузнецов В.Д., 1969. Микроорганизмы - продуценты антибиотиков. В {»."Производство антибиотиков", Ивд-во "Ые-дицина". М., 12....

Y 3Г. Кузнецов З.Д., Семенов U.U., Ильинская и.д.у Заничкина

' ' Т.Б., Раутешотейн Я.И.» I96&. Таксономическое изучение":^". ; • ' ■■ коллекционных культур, продуцентов веомицина. днтибио-^' ■ " " V тики, т.14, N° 7, 57s. ...

,32. Кузнецов "В.Д., I9S3. Хранение культур микроорганизмов -..' .'продуцентов антибиотиков.,В ян. "Производство антибиотиков", Изд -во "Медицина*, " . ' •

33.'Кузнецов З.Д., 1969. Культивирование;представителей сем.. . Aotioopianacaae на пыльце растений. Микробиология,; . v/

■ ■ т.3&, B.I, LiZ, . .".

34. Кузнецов л.Д., Вигрова H.H., i969, Таксономическое изуче- '

вне коллекционных культур актиномицетов, продуцентов; 4 _; автиномицина Д. £иделение к идентификация актиномицина . Д. _ Прикл.биохим. и микробная., т.5, в.5, 549.

35. Kuzneteöv 7,D:,Heutenatatn Ya.I., Ifangulova I.V. .KhokiiloT»

Yu.M.,Bllnov И.О.,1970. Пае of actlno^agea for «Uifa-rentiation of actinomycotee pertaining to globiaporine group, Tb* Ac tiaoinyce tales. Int.Sywp.on Taxonomy,7eb.Gue~ -4 tav Flecher Verla«, Jena, 179. "

36. Кузнецов З.Д., Родионова Е.Г., 1970. Изменчивость и хране-/- ,- яие Act.ер. 908 - продуцента циклосерина. Антибиотики, :

т.is, т 7, 5эо. ".."'."' ;

- V: 37. ,Кузнецов В.Д., Янгулова И,В., 1970. Изменчивость Act. orientallа , Антибиотики, т.15; % 12, ХОбз. ' 1

38. Кузнецов В.Д., Родионова Е,Г., 1970. хранение некоторых актиномицетов - продуцентов антибиотиков разными спо-¡i, ' собами, Антибиотики, т.15, » Ю, 37S.

; ЗЭ.,Кузнецов В.Д., Семенов СЛ1.; 1970. Длительное хранение ак- ' - тиномицетов в лиофнлизированном состоянии, Антибиотики,.' ;V/\ т.15, * II, 977. ■.О--:"

.■ 40. Кузнецов В.Д., &ноградова К.А.,,Петрова Л.Н., Полторак '■',' S.A., 1971. Уточнение систематического положения коллек-

ционных штаммов Act .olivaeaua , микробиология, т.40, / 'Л / ; . B.I, 162. ■ ' -

41. Кравцов В.Д., Родионова Е.Г., 1971. Научение эианеспособ-

адсти и культуральвых свойств акгиномицетов,длительно хранившихся в гнофидизированном состоянии, Антибиоти- ' га, т.К, * 7, 58.6.

42. г£увнецов З.Д., Брызгалова Д.С., 1971. фагодизис продуцен-

та новобиоцина - Ае* .врЬегоЫеа 937, Антибиотики, т.16, * 10 , 892;

43. Кузнецов В.Д., Родионова 6.Г., Янгудова И.В., 1972. Хра-

нение акхиномкцетов под слоем вазелинового наела. Антибиотики, т.17, К I, ЭО,

44. Кузнецов В.Д., Янгудова И.В., Родионова Е.Г., 1972. Хра-

нение актиномицетов при температуре - 20°, Антибиотики, т.17, »9 , 690.

-45. Кузнецов В.Д., Янгудова II.В., 1972. Изменчивость Аог. / ая*1Ыо^еиа 961 - продуцента олеандомицина, Антибио-

тики, т.17, К 4, 291. . '

46. Кузнецов В.Д., 1972. Влияние температуры выращивания на

проявление культуральпых свойств у международных видовых эталонов актиаомицатов. Антибиотика, т.17, №3, 208.

47. Кузнецов В.Д., 1972. Изучение изменчивости актиномицетов-

продуцентов антибиотиков и других биологически активных веществ^ Антибиотики, т.17, & 7, 666.

4В* Кузнецов В.Д., Полторак В.А., Филиппова С.Й., 1973. Изучение комплекса антибиотических веществ, образуемых ■ культурой Ас*.гввво-Х^*«1в ¿ Антибиотики, т.18, №5, 428.

' " 49. Кузнецов З.Д., Родионова Е.Г., 1973. Опыт многолетнего хранения актиномицетов на'агариаоваяных питательных средах и в кварцевом песке, Антибиотики, т.18,а 6,511.

50. Кузнецов В.Д., Полторак В.А., ЗДлиппова С.Н..Силаев А.Б., 1973. Продуцент актнномицина Д, Авторское свидетельство 16 415984.

v Ol..-Кузнецов й .Д.,' 1975. Гомологические ряды наследственной ,.

Ч.;.изменчивости актиноиицетов, Антибиотики, т. 18, й 7,

' 579. у . . .

-'52./Кузнецов18.Д.,-Бушуева О.Д., 1973. Влияние диофилизации,.

на выживаемость спор актиномицетов-продуцентов стреп-" ; тоыицина и линкомицива, Антибиотики, т.18,.«Ё 10, 390..-

'■'53. :Лолторак З.А., Филиппова С .а,, Кузнецов ¿.д., 19 73. Соб-.,/ - ственная люминесценция а ат и ном ице тов -про ду ц е вт ов ак-тиномицина Д. Микробиология, т.42, в.5, 8db. "...

S4. Кузнецов В.Д., янгудоза И.8., Родионова £.Г.; Семенов C.ii., , 1975. Длительное хранение актиномицетов в внде почвенных культур. Антибиотики, t.IS, а 12, Ю6Ь. ■";.

: 55.-Кузнецов З.Д., Бушуева О.А., 1974. Влияние температуры"гра-: 'нения дисфодизированных спор актиномицетов'-продуцектов • стрептомицина и динкомицина на их хиз не способность и' ' 'изменчивость. Антибиотики, т.19, £ 3, 6S0. V- ■ /.-=.

56. Кузнецов В .Д., йилашюва С.Я., 1974. Изменчивость Act. oil-тоЬгшюлия -продуцента актиноыицияа Д, Антибиотики, , т.19, % 3, 201. - -. ч " '

-'(:57. Куанецов В.Д., Родионова ¿.Г., 1974. Изучение состава диа-\ миноавмелиновых кислот клеточных■стенок актиномицетов- "■:■■*■ продуцентов антибиотиков и их проактиноиицетоподобкыг; .';-■ ■„■ вариантов, Антибиотики, т.IS, ft 2, Ы. 1 ...■ :ЬГ

58. Кузнецов В .Д., Бушуева О .А,, Брызгалова 1.С., 1374. Измен-:' чивосЪь Act.гевеоХив-яродуцеета динкомицина, Антибио- "Vf. ■ .тики, т.19, № 4, 311. ' . , ' "

'59. Филиппова С.Н., Кузнецов В.Д., 1974. Изменчивость прозу- \Ъ

' , ' ' цента акт а ноли ци на Д - Act .roseo-luteua , двгибиоти- ■

' ; ■ " ' ки, Т.19, К* 2» 104. .

60.' Кузнецов В.Д., Янгулова И.В.,/Денисова С.И., 1974. Штамм ВйИИА 6-75 Aet.parruilus-продуцент дактиномицина, "■",'. Авторское свидетельство й 44I82I. ..■-■"■•■

- S7 -

61. Раутеаштейк Я.И., Кузнецов S.Д., Родионова Е.Г., янгулова:;

II.В., Дмитриева C.B., Дещиц Д.А., Х975. Пересмотр систематического положения >ot.oriwrt*lle (Pittenger et Brlgban) Eras« ,, 1970 и переименование его в Proaotino-

mjooe orientait» (Plttonger et Brlghaa) сотЬ.пот.МИКрО-

биология, ï.44, 528.

62. Кузнецов В.Д., Бушуева Q.A., Родионова Е.Г., 1975. Изучение

состава популяции, антибиотической и трансамидинааной„■ активности Act.atreptomycinl 773 при длительном хранении в лиофихизированном состоянии. Антибиотики, т.20, " te X, 15.

63. Кузнецов В.Д.,1975. Проактнномицетоподобные варианты как

модели для оценки таксономической значимости критериев.!* родовой дифференциации актиномицетов и проактиноницетов. Тезисы докл.У съезда ВЫО, секц. "Систематика микроорганизмов", Ереван, г.

/

_ ■ :_________

Поеллринхйе «ПАТЕНТ*. Минине- Бережкоиская H*ftt>