Состояние прооксидантно-антиоксидантной системы печени и крови морских свинок разного возраста в норме и при экспериментальном холецистите

Трегубова, Нина Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Состояние прооксидантно-антиоксидантной системы печени и крови морских свинок разного возраста в норме и при экспериментальном холецистите
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Состояние прооксидантно-антиоксидантной системы печени и крови морских свинок разного возраста в норме и при экспериментальном холецистите"

На правах рукописи

Трегубова Нина Владимировна

СОСТОЯНИЕ ПРООКСИДАНТНО-АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ПЕЧЕНИ И КРОВИ МОРСКИХ СВИНОК РАЗНОГО ВОЗРАСТА В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХОЛЕЦИСТИТЕ

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь - 2004

Работа выполнена в научно-исследовательском институте биологии Харьковского национального университета им. В.Н.Каразина

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Никитченко Юрий Викторович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор ГубареваЛюбовь Ивановна,

доктор биологических наук Фралков Валерий Константинович

Ведущая организация:

Астраханский государственный университет

Защита состоится 27 мая 2004 года в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.256.04 при Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корпус 2, аудитория 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корпус 1.

Автореферат разослан апреля 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Т.И. Джандарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Одной из актуальных общебиологических проблем современности является выяснение механизмов, определяющих скорость старения и продолжительность жизни человека и животных. Среди различных гипотез старения одной из ведущих считается свободнорадикальная теория старения (Harman D., 1994; Emanuel N.M, 1985), согласно которой свободным радикалам и продуктам перекисного окисления липидов (ПОЛ) отводится ключевая роль в изменении биомакромолекул клетки при старении.

Вместе с тем, данные литературы о состоянии прооксидантно-антиокси-дантной системы в процессе постнатального онтогенеза (Лемешко В.В., 1991; BaekB.S. etal., 1999; Никигченко Ю.В., Овсянников С.Е., 2000; Stadtman E.R., 2001; Кульчицкий O.K. и др., 2001; Клиц1.М.ташш., 2003; Нестеров И.В.,Тёплый Д.Л., 2003) весьма противоречивы и не позволяют трактовать свободно-радикальную теорию старения, как активацию ПОЛ на поздних этапах онтогенеза. Противоречивость литературных данных может быть объяснена половыми и видовыми особенностями состояния прооксидантно-антиоксидант-ного баланса, а также ограниченным количеством возрастных групп экспериментальных животных, не отражающих все этапы постнатального онтогенеза (Гусейнов Т.М. и др., 1990; Кулинский В.И., Колюниченко Л.С., 1993; Himeno S.et al., 1993). Так, ряд авторов (Rikans L.E. et al., 1991; Китани К., 1993) показали разнонаправленные возрастные изменения интенсивности ПОЛ и активности антиоксидантных ферментов в печени у самцов и самок крыс.

Анализ современных литературных данных не позволяет однозначно оценить роль основной антиоксидантной системы — ферментативной и в частности, GSH-зависимой, в свободнорадикальных механизмах старения. По мнению ряда исследователей (Кулинский В.И., Колюниченко Л.С., 1993),глутатион-пероксидаза является одним из важнейших компонентов антиоксидантной системы, так как восстанавливает перекись водорода (HjOj) и почти все органические перекиси. Однако нет ясности в вопросе о возрастных изменениях активности селензависимой глутатионпероксидазы и особенно селеннезависи-мой глутатионпероксидазы. При этом необходимо отметить, что в печени животных не чувствительных к дефициту селена (морская свинка, кролик) селен-независимая глутатионпероксидаза является основным ферментом, утилизирующим гидроперекиси липидов (Кулинский В.И., Колюниченко Л.С., 1993).

Среди ряда различных лабораторных животных морские свинки наиболее близки к человеку по структуре антиоксидантной системы (Барабой В.А., Сутковой ДА, 1997), наличию жёлчного пузыря (Западнюк И.П. и др., 1983), по характеристикам плаценты (Card S.E. et al., 1989), по радиочувстви-

тельности (Барабой В.А., Сутковой Д.А., 1997) и по другим параметрам (Западнюк И.П. и др., 1983; Card S.E. et al., 1989).

В отношении возрастных изменений прооксидантно-антиоксидантного баланса в тканях морских свинок в литературе имеются единичные сообщения, в основном это данные об исследованиях на тканях головного мозга животных (Zloch Z., Ginter E., 1988; Dhalla A.K., Singal P.K., 1994; Vohra B.P. et al., 2001; LykkesfeldtJ.,2002).

В литературе отсутствуют чёткие представления о возрастных особенностях состояния этой системы при действии ряда стрессорных факторов. В связи с этим, нам представлялось актуальным исследовать возрастные особенности прооксидантно-антиоксидантной системы в печени и крови самцов и самок морских свинок 2-, 12-, 25 и 36-месячного возраста при стрес-сорном воздействии. В качестве такого воздействия был выбран острый холецистит (Бондаренко Н.М. и др., 1981).

В литературе есть данные о нарушении прооксидантно-антиоксидантно-го равновесия при холецистите (Сахаутдинов В.Г. и др., 1981; Лобода Д.И. и др.* 1991; Воевщка О.С., Коломоець М.Ю., 1997). Показано, что гиперлипо-пероксидация является важным звеном в цепи патофизиологических процессов при холецистите (Таджиев И.Я., 1991) и может стать фактором риска литогенеза (Lichtenberg D., et al., 1988; Таджиев И.Я., 1991). Однако наряду с указаниями на достоверное, коррелирующее со степенью выраженности воспалительного процесса в желчевыводящих путях увеличение содержания л ипоперекисей в крови и жёлчи (Сахаутдинов В.Г. и др., 1981; Воевщка О.С., Коломоець М.Ю., 1997), есть работы, в которых отрицается диагностическая ценность данного факта (BraganzaJ.M., etal., 1983; Скуя НА, 1988). Известен факт большей вероятности возникновения с возрастом у людей заболеваний гепатобиллиарной системы (Зайцев В.Т., 1997). Однако данные литературы о возрастных изменениях состояния прооксидантно-антиокси-дантного баланса при холецистите отсутствуют.

Детальное изучение состояния прооксидантно-антиоксидантной системы при старении и при стрессорном воздействии позволит глубже понять свободнорадикальные механизмы старения и выяснить роль физиологической антиоксидантной системы в этом процессе.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось выяснение возрастных закономерностей изменения интенсивности ПОЛ, состояния физиологической антиоксидантной системы печени и крови, а также морфологических изменений печени и жёлчного пузыря морских свинок в норме и при экспериментальном остром холецистите.

Исходя из цели, были определены следующие задачи:

1. Изучить возрастные особенности интенсивности свободно-радикального окисления липидов в печени и крови самцов и самок морских свинок.

2. Исследовать возрастные изменения физиологической (ферментативной и неферментативной) антиоксидантной системы в печени и крови самцов и самок морских свинок.

3. Выяснить возрастные особенности ПОЛ и его регуляции в печени и крови морских свинок при стрессорном воздействии (введение стафилококков и стрептококков в жёлчный пузырь).

4. Исследовать возрастные особенности морфологических изменений ткани печени и стенки желчного пузыря в норме и при экспериментальном холецистите у морских свинок.

5. Изучить изменения интенсивности ПОЛ и его регуляции в крови больных острым и хроническим холециститом.

Научная новизна. На основании проведенных исследований интенсивно -сти перекисного окисления липидов, активности ферментативной и неферментативной антиоксидантной системы в печени и крови самцов и самок морских свинок 2-, 12-, 25- и 36-месячного возраста установлено, что с возрастом увеличивается роль ферментативной антиоксидантной системы в регуляции свободнорадикального окисления липидов. В частности, впервые показано, что активность ферментов утилизирующих гидроперекиси липидов (селензависимой глутатионпероксидазы и селеннезависимой глу-татионпероксидазы) в митохондриях печени, плазме и эритроцитах крови у 25 и 36 месячных морских свинок выше, чем у 2 месячных животных.

Обнаружено, что интенсивность перекисного окисления липидов в митохондриях и гомогенатах печени и содержание продуктов ПОЛ в крови и печени самцов и самок морских свинок снижается с возрастом. При этом в отличие от разнонаправленных возрастных изменений интенсивности ПОЛ в печени самцов и самок крыс (Шкаш Ь.Е. й а1., 1991), у морских свинок разного пола изменения этого процесса было однонаправленными.

Впервые показано, что экспериментальный острый холецистит приводит к более выраженному снижению активности ферментативной антиокси-дантной системы, повышению интенсивности перекисного окисления ли-пидов и нарушению морфологической структуры изученных тканей у старых животных, что может быть основной причиной более высокой чувствительности стареющего организма к стрессорным воздействиям.

Теоретическое и практическое значение работы. Результаты проведенных исследований позволяют глубже понять роль ферментативной антиок-сидантной системы в регуляции перекисного окисления липидов в процессе постнатального онтогенеза. Установленные закономерности регуляции

перекисного окисления липидов при естественном старении и при экспериментальном остром холецистите могут быть использованы для объяснения более высокой чувствительности стареющего организма к возникновению различного рода патологий.

Предложенный коэффициент (антиоксиданты/продукты ПОЛ) оценки состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса при экспериментальном остром холецистите у морских свинок и при остром и хроническом холецистите у людей может быть дополнительным критерием для диагностики холецистита, степени его тяжести, эффективности традиционного лечения и для прогнозирования адъювантной антиоксидантной терапии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Установлено, что интенсивность перекисного окисления липидов в печени и крови при старении самцов и самок морских свинок снижается.

2. С возрастом увеличивается роль ферментативной антиоксидантной системы в регуляции перекисного окисления липидов.

3. Метаболические возможности обеспечения восстановительными эквивалентами в8Н-зависимых антиоксидантных ферментов уменьшаются с возрастом и наблюдается более выраженная активация ПОЛ в печени и крови старых животных при стрессорном воздействии вызываемом введением микробной взвеси стрептококков и стафилококков (экспериментальный острый холецистит). Более выраженная активация ПОЛ при остром холецистите у старых животных согласуется с более выраженными морфологическими изменениями печени и жёлчного пузыря.

Связь работы с научными программами. Диссертационное исследование явилось частью госбюджетной темы НИИ биологии Харьковского национального университета им. В.Н.Каразина "Исследования изменений прооксидан-тно-антиоксидантного гомеостаза при действии факторов, которые влияют на скорость старения, и разработка оптимальных стратегий коррекции возрастных изменений системы антиоксидантной защиты" (№ ДР 0100Ш03313).

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертационной работы были представлены на Ш и V международных симпозиумах: "Биологические механизмы старения" (Харьков, 1998,2002); межвузовской конференции молодых ученых (Харьков, 2001 - 2003); научной юбилейной конференции "Научное наследие академика И. Н. Буланкина и его развитие в современной биологии" (Харьков, 2001); научной Пироговской конференции молодых ученых (Москва, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 научных работ. Среди публикаций - 8 статей опубликованных в специальных изданиях, 1 статья в трудах конференции и 6 тезисов докладов на конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания.материалов и методов исследования, трех разделов результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, включающего 313 источников, из них 128 отечественных и 185 иностранных. Работа изложена на 168 страницах машинописного текста и включает 34 рисунка, 13 таблиц и 10 микрофотографий.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовали самцов и самок морских свинок 2-, 12-, 25 и 36-месячного возраста. Морские свинки обоего пола каждого возраста были разделены на три группы: контрольные, контрольные-ложнооперирован-ные и опытные. У животных опытной группы моделировали острый холецистит (Бондаренко Н.М. и др., 1981). Для этого в желчный пузырь через разрез в брюшной стенке вводили одномиллиардную микробную взвесь (5-гемолитического стрептококка и патогенного стафилококка (Бондаренко Н.М. и др., 1981). Животных декапитировали через пять дней после начала эксперимента. Все манипуляции с животными производили в условиях эфирного наркоза. Объектами исследования были кусочки ткани печени и желчного пузыря, гомогенаты, митохондрии и микросомы печени, плазма и эритроциты крови.

В экспериментах использовали плазму и эритроциты крови крыс-самцов линии Wistar 1-, 3-, 12- и 24-месячного возраста.

Исследовали плазму и эритроциты здоровых доноров (группа контроля из 20 человек) и больных острой (14 человек) и хронической (19 человек) формами холецистита. Измерения проводили при поступлении больных в стационар Дорожной клинической больницы №1 и через 7-10 дней после лапароскопической холецистэктомии. Кровь брали утром натощак из локтевой вены.

Плазму и эритроциты крови, гомогенат печени получали общепринятыми методами.

Митохондрии и микросомы печени получали методом дифференциального центрифугирования (Kamath S.A. et al., 1972).

Содержание гидроперекисей липидов в сыворотке крови определяли по методу (Asakawa, 1980). Диеновые коньюгаты (ДК), триеновые коньюгаты (ТК), оксодиеновые коньюгаты (ОДК) и тетраеновые коньюгаты (ТЕТ) определяли спектрофотометрически в гептановых экстрактах, полученных из плазмы крови и гомогенатов печени (Паранич А. В., 1993). Определение малонового диальдегида (МДА) проводили спектро-фотометрически с 2-тиабарбитуровой кислотой (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. 1972).

Общую антиокислительную активность (АОА) оценивали по степени ин-гибирования исследуемым образцом реакции термического автоокисления олеиновой кислоты (Паранич А.В., 1992).

Спонтанную резистентность эритроцитов определяли по степени гемолиза эритроцитов каллориметрически по методу (Jagery, 1968). Содержание жирорастворимых витаминов-антиоксидантов: А, ß-каротина, СС-токоферо-ла, а-токоферолхинона (ТФХ) и оксотокоферола (ОТФ) определяли спект-рофотометрически после щелочного гидролиза образцов печени и плазмы крови (Jore D., Ferradini С, Patterson L.K., 1986).

Селензависимую (+БеГП) и общую глутатионпероксидазную активности определяли спектрофотометрически (Ланкин и др. 1981), селеннезависи-мую (-Sern) глутатионпероксидазную активность рассчитывали математически, вычитая из общей глутатионпероксидазной актизности +SeITI-aK-тивность; глутатион^-трансферазную активность измеряли с 1-хлор-2,4-ди-нитробензолом (ХДНБ) в качестве субстрата спектрофотометрически (Jones М., Schichting R., Siegara С, 1980); каталазную активность определяли спектрофотометрически как описано (Marklund S., Norgens Son I., Back О., 1981); супероксиддисмутазную активность определяли спектрофотометрически по методу Фридовича и соавторами в модификации Ланкина В.З., 1976; глутатионредуктазную (ГР) активность эритроцитов крови измеряли спектрофотометрически по убыли NADPH (Герасимов A.M. и др., 1976). Глюко-зо-6-фостатдегидрогеназную (Гл-6-ф-ДГ) активность измеряли спектрофотометрически по скорости восстановления NADP+(Glock G.E., McLean P., 1953). Малатдегидрогеназную (МДГ) и изоцитратдегидрогеназную (ИЦДГ) активности изучали флуориметрично по скорости восстановления NADP+ (Усатенко М.С., 1974; Bauman D.E., Brown R.E., Davis C.J., 1970).

Морфологические методы исследования включали структурные, морфо-метрические и гистохимические исследования.

Белок определяли по Лоури и соавт. в модификации Миллера (1959). Полученные результаты обрабатывали статистически, для подтверждения достоверных различий применялись параметрические (t-критерий Стьюдента) и непараметрические (критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) методы (Терен-тьев П.В., Ростова Н.С., 1977; Лакин Г.Ф., 1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Возрастные изменения интенсивности перекисного окисления липидов в печени и крови самцов и самок морских свинок. Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что в плазме крови самцов и самок морс-

ких свинок содержание первичных продуктов ПОЛ - ДК с возрастом не изменялось, а ОД К, ТК и ТЕТ значительно снижалось.

Полученные данные о снижении с возрастом первичных продуктов ПОЛ в плазме крови морских свинок качественно согласуются с данными, полученными на крысах линии Вистар 1-, 3-, 12- и 24-месячного возраста.

В гомогенатах печени самцов и самок морских свинок содержание первичных продуктов ПОЛ (ДК, ОДК, ТК и ТЕТ) с возрастом увеличивалось. Проведенные нами исследования возрастных изменений содержания вторичных продуктов ПОЛ в печени самцов и самок морских свинок позволили установить, что концентрация этих продуктов достоверно увеличивалась к 12-месячному возрасту и при дальнейшем старении (к 36 месяцам) снижалась на 51,9% у самцов и на 46,1 % у самок.

При этом снижение вторичных продуктов ПОЛ - МДА в печени морских свинок при старении и обнаруженное увеличение ДК, ОДК, ТК и ТЕТ, по-видимому, связано с более высокой скоростью утилизации этих первичных продуктов ПОЛ у старых животных.

Исследование интенсивности спонтанного и аскорбат-индуцированного ПОЛ в печени морских свинок позволило установить, что скорость накопления МДА при спонтанном ПОЛ в гомогенате печени снижалась на 47,1% (рис. 1 А), а при аскорбат-индуцированном ПОЛ - на 47,8%(рис. 1 Б).

Интенсивность ПОЛ в митохондриях, как и в гомогенатах печени у 25-месячных морских свинок была ниже, чем у 2-месячных животных (рис. 1 А и Б). Так, скорость накопления МДА при спонтанном ПОЛ снижалась на 31% (рис. 1 А), а при аскорбат-индуцированном ПОЛ - на 25,8% (рис. 1 Б).

Рис. 1. Интенсивность ПОЛ в гомогенатах и митохондриях печени морских свинок 2- и 25-месячного возраста (п=7).

Примечание: А - спонтанное ПОЛ, Б - аскорбат-индуцированное ПОЛ; к - 2-мес, □ — 25-мес; * - Р < 0,05 по сравнению с 2-мес.

В отличие от данных авторов (Rikans L.E. et al., 1991), которые показали разную возрастную направленность в изменении интенсивности ПОЛ в печени самцов и самок крыс, в наших исследованиях содержание продуктов ПОЛ в печени морских свинок разного пола с возрастом изменялось однонаправлено.

В целом, полученные данные при исследовании ПОЛ в условиях in vivo и in vitro свидетельствуют о снижении свободнорадикального окисления ли-пидов в печени и плазме крови морских свинок и крыс при старении.

Ферментативная антиоксидантная система в печени и крови морских свинок разного возраста и пола. Согласно полученным нами данным (рис. 2-А) +SеГП-активность в плазме крови самцов морских свинок значительно увеличивалась (более чем в 4 раза) к 12-месячному возрасту и затем к 36-месяцам снижалась, оставаясь достоверно выше уровня молодых животных. Аналогичным образом изменялась +SеГП-активность в плазме крови самок (рис. 2-А).

Сходная возрастная направленность изменения +SеГП-активности обнаружена нами и в плазме крови крыс.

В эритроцитах крови самцов морских свинок (рис. 2-Б) +SеГП-активность монотонно увеличивалась до 36-месячного возраста. У самок активность изученного фермента достоверно увеличивалась к 12-месяцам и при дальнейшем старении снижалась, оставаясь достоверно выше молодых 2-месячных животных. Обнаруженное увеличение с возрастом +SеГП-активно-сти в эритроцитах крови морских свинок согласуется с полученными данными на крысах.

Возраст, мес.

Рис. 2. Селензависимая глутатионпероксндазная активность в плазме

(А) и эритроцитах (Б) крови морских свинок разного возраста (п=6-7).

Примечание: ■ -самцы, □ -самки, *- Р <0,05 по сравнению с 2-мес, **- Р<0,05 по сравнению с 12-мес, # - Р < 0,05 по сравнению с соответствующей возрастной гррпой самцов.

Возрастных изменений каталазной активности в эритроцитах крови морских свинок нами не обнаружено.

В гомогенатах печени морских свинок обоего пола+8еГП-активность в процессе постнатального онтогенеза снижалась. Обнаруженное снижение с возрастом +8еГП-активности в печени морских свинок не согласуется с данными, полученными раннее в нашей лаборатории при исследовании активности этого фермента в печени крыс (Лемешко В.В. и др., 1987). При этом надо отметить, что по данным ряда авторов (Гусейнов Т.М. и др., 1990; 08Ыпо Я. й а1., 1990, Нтепо 8. й а1., 1993) вклад +8еГГТ-активности в общую глута-тионпероксидазную активность печени морских свинок составлял только 15%.

Действительно, в другой серии опытов на 2- и 25-месячных морских свинках было обнаружено, что активность +8еГП гомогенатов печени 2-месячных животных составляет 13,7%, а у 25-месячных-12,2% от общей глутати-онпероксидазной активности (табл. 1).

Таблица 1

Глутатионпероксидазная активность в гомогенатах печени морских свинок 2- и 25-месячного возраста (нмоль КАОРН/мин • МГ белка; п=8)

Возраст, мес. +5еГП общая ГП -БеГО

(сН202) (с гидропере-

кисью кумола)

2 41,4 ±2,3 301,1 ±26,3 261.0 ±22,6

25 32,2 ± 3,2* 263,0 ±13,3 231,0 ± 12,5

Примечание: * - Р < 0,05 по отношению к 2-месячным.

Активность -8еГП в гомогенате печени 2-месячных морских свинок была в 6 раз выше, чем селензависимая глутатионпероксидазная активность и достоверно не отличалась от активности 25-месячных животных (табл. 1).

Из рассмотренных данных следует, что в гомогенате печени морских свинок в отличие от крыс -8еГП является основным ферментом, утилизирующим гидроперекиси липидов, и особенно, на поздних этапах онтогенеза животных. В связи с этим важно отметить, что и в митохондриях печени морских свинок -8еГП была основным ферментом, утилизирующим гидроперекиси липидов в этих органеллах. Активность этого фермента в митохондриях печени морских свинок увеличивалась к 25-месячному возрасту на 31%.

Активности ферментов, утилизирующих активные формы кислорода -супероксиддисмутазы и - каталазы, в митохондриях печени морских свинок 2- и 25- месячного возраста достоверно не изменялись.

В целом, обнаруженное увеличение с возрастом роли ферментативной антиоксидантной системы и в основном в8И-зависимой в регуляции ПОЛ может свидетельствовать об увеличении нагрузки на ферменты, обеспечивающие эту антиоксидантную систему восстановленными эквивалентами (ОЗИ И МЛБРИ).

Исследование активности основного фермента, обеспечивающего организм восстановленным ОЗИ—глутатионредуктазы, позволило установить, что активность этого фермента снижалась с возрастом в гомогенатах печени и эритроцитах крови морских свинок. Так, в гомогенатах печени старых 36-месячных морских свинок глутатионредуктазная активность снижалась на 74,8% у самцов и 51,1% у самок по сравнению с молодыми 2-месячными животными. В эритроцитах крови 25-месячных морских свинок снижение активности глутатионредуктазы составило 27,5% по отношению к 2-месячным животным.

В митохондриях печени глутатионредуктазная активность у морских свинок с возрастом достоверно не изменялась.

В печени морских свинок в процессе постнатального онтогенеза обнаружено снижение активности и КАОР+-зависимых дегидрогеназ (ИЦДГ, Гл-б-фДГ и МДГ), которые поставляют КЛБРИ для глутатионредуктазной реакции. Так, в частности, Гл-6-фДГ-активность у самцов и самок 36-месячных морских свинок снижалась в 2,2 раза по сравнению с 2-месячными животными, а ИЦДГ-активность - в 3 раза у самцов и 1,6 раза у самок. МДГ-активность у самцов снижалась в 1,6 раза к 12-месячному возрасту и затем практически не изменялась, а у самок уменьшалась в 1,8 раза и затем увеличивалась.

В целом, приведенные экспериментальные данные настоящего раздела работы свидетельствуют, что с возрастом в исследуемых тканях морских свинок и крыс активность ферментативной в8И-зависимой антиоксидант-ной системы увеличивается. При этом обнаруженное снижение с возрастом активности ферментов, генерирующих восстановленный КЛБРИ и в8И, может быть лимитирующим фактором эффективности антиоксидантной защиты у старых животных, и особенно при функциональных напряжениях и экстремальных воздействиях.

Активность неферментативной антиоксидантной системы в печени и крови морских свинок разного возраста и пола. Результаты проведенных исследований позволили установить, что содержание одного из основных жирорастворимых витаминов-антиоксидантов - -токоферола, в гомогенате печени морских свинок обоего пола с возрастом достоверно увеличивалось.

В плазме крови содержание а-токоферола увеличивалось к 12-месячному возрасту в одинаковой степени у самцов и самок. При дальнейшем старении к Зб-месяцам концентрация этого антиоксиданта у морских свинок обоего пола снижалась, оставаясь достоверно выше уровня молодых 2-месячных животных.

Обнаруженные в процессе постнатального онтогенеза изменения диме-ров а-токоферола - ОТФ и ТФХ в печени и в плазме крови согласуются с изменениями витамина Е. Проведённый корреляционный анализ свидетельствует, что между содержанием -токоферола и его активных метаболитов в плазме крови и гомогенате печени морских свинок всех изученных возрастных групп имеются достаточно высокие коэффициенты корреляции.

Обнаружено также, что у самцов и самок морских свинок в гомогенате печени и плазме крови содержание витамина А увеличивалось с возрастом. Исследования возрастных особенностей содержания Р-каротина в печени и крови самцов и самок морских свинок свидетельствуют о том, что содержание этого витамина повышалось к 12-месячному возрасту, а при дальнейшем старении снижалось.

Проведенные исследования возрастных изменений антиокислительной активности (АОА), как интегрального показателя состояния неферментативной антиоксидантной системы крови, позволило установить, что в плазме у самцов морских свинок этот показатель несколько увеличивался к 36-месячному возрасту животных. У самок АОА крови значительно снижалась к 12-месяцам (на 66%) и затем к Зб-месяцам повышалась практически до уровня молодых животных.

АОА печени в процессе старения морских свинок обоего пола монотонно снижалась. Так у самцов это снижение составило 14% и 31,5% для 12- и 36-месячных животных соответственно. У самок возрастное снижение АОА у взрослых и старых морских свинок разнялось 24,4% и 23,1% соответственно.

В связи с тем, что при старении морских свинок АОА в печени снижается, а активность антиоксидантных ферментов не изменяется (-8еГП в гомогенате, СОД и каталаза в митохондриях) или даже увеличивается (-8еШ в митохондриях) можно заключить, что с возрастом в печени животных, как и в крови, увеличивается роль ферментативной антиоксидантной системы в регуляции свободнорадикального окисления липидов.

Возрастные изменения прооксидантно-антиоксидантного равновесия в печени и крови при экспериментальном остром холецистите у самцов и самок морских свинок, Представленные в табл. 2 данные свидетельствуют, что экспериментальный острый холециститу морских свинок сопровожда-

ется увеличением первичных и вторичных продуктов ПОЛ в печени и плазме крови. При этом наиболее выраженное увеличение продуктов ПОЛ наблюдалось у старых 36-месячных животных.

Таблица2

Содержание МДА и Д К в печени и плазме крови морских свинок в норме и при введении микробной взвеси стрептококков и стафилококков

Возраст, Группы МДА, нмоль/гбелкаили ДК, мкмоль/гткани или

мес животных мл плазмы мл плазмы

печень плазма крови печень плазма крови

2 Контроль 248±19 8,211,2 0,35±0,05 0,05610,013

Опыт 365138* 17,113,1* 0,19±0,03" 0,05710,009

12 Контроль 516±59 28±4 0,57±0,15 0,06310,023

Опыт 871±84* 37+2* 0,68±0,11 0,05310,014

36 Контроль 248±20 47±8 1,8010,11 0,06310,021

Опыт 321±23* 92116* 2,3410,09* 0,09110,017*

Примечание: * - Р < 0,005 по сравнению с соответствующем контролем.

Так, содержание ДК, ОДК, ТК и ТЕТ в плазме крови самцов морских свинок в ответ на введение стрептококков и стафилококков достоверно увеличивалось у старых животных, а у молодых не изменялось. Содержание МДА в плазме крови 2-, 12- и 36-месячных подопытных самцов морских свинок увеличивалось на 108%, 35% и 97% соответственно по сравнению с контролем.

В гомогенате печени содержание МДА у 2-, 12- и 36-месячных самцов возрастало на 47%, 68% и 30%, а самок на 53%, 149% и 139% соответственно. Содержание ДК в гомогенате печени у молодых подопытных самцов снижалось, у взрослых не изменялось, а у старых увеличивалось на 33 %.

Известно, что активация ПОЛ в организме при действии стрессорных факторов обусловлена снижением надежности антиоксидантной защиты.

Действительно, проведенные нами исследования позволили установить, что антиокислительная активность в плазме крови подопытных животных всех возрастных групп достоверно снижалась (табл.3).

В печени 36-месячных морских свинок изучаемый показатель, который в норме был существенно ниже, чем у молодых и взрослых животных, в ответ на микробную взвесь существенно не изменялся. В то же время, у 2- и 12-месяч-ных подопытных морских свинок антиокислительная активность в гомогенате печени снижалась столь же выражено как и в плазме крови (табл. 3).

Таблица 3

АОА и глугатиоипероксидазная активность в печени и плазме крови морских свинок разного возраста в норме и при введении микробной взвеси стрептококков и стафилококков

Возраст, мес. Группы животных АОА, % ГП, нмоль ЫАОРН мин/мг белка (мл плазмы)

печень плазма крови печень плазма крови

2 контроль 1,07±0,16 1,52±0,29 40,6±2,1- 172±16

опыт 0,43±0,10* 0,69±0,13' 37,2±2,0 646±НГ

12 контроль 0,92±0,11 2,10+0,26 32,8±1,1 851+141

опыт 0,59±0,06* 1,17±0,26" 27,8±2,5 467±100*

36 контроль 0,6310,07 2,58±0,26 20,4±3,8 280±22

опыт 0,62±0,10 !,62±0,27* Ю,1±1,7* 201±ЗГ

Примечание: * - Р < 0,005 по сравнению с соответствующем контролем.

Исследование активности ферментативной антиоксидантной системы морских свинок показало, что активность +-ЗеГП в тканях в ответ на введение стрептококков и стафилококков, в гомогенатах печени старых 36-месячных самцов снижалась в два раза (табл. 3). В гомогенатах печени молодых и взрослых подопытных животных+-8еГП-активность существенно не изменялась (табл. 3).

Активность глутатионредуктазы в гомогенатах печени морских свинок на 5-ые сутки эксперимента достоверно снижалась у молодых и старых животных, а у взрослых существенно не изменялась.

У подопытных животных существенных изменений в активности ИЦДГ, Гл-6-фДГ и МДГ не обнаружено. Следует только отметить достоверное снижение ИЦДГ-активности у старых 36-месячных морских свинок и МДГ-активности у молодых подопытных животных.

+ЗеГП-активность в эритроцитах крови молодых и старых самцов морских свинок в ответ на введение микробной взвеси не изменялась, а у взрослых достоверно увеличивалась. Вместе с тем, в плазме крови 2-месячных подопытных самцов +8еГП-акгивность достоверно увеличивалась, а у взрослых и старых животных существенно снижалась (табл. 3).

Надёжным показателем состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса при данном стрессорном воздействии, может быть коэффициент (к) отношения активности основного фермента утилизирующего гидроперекиси липидов- глутатионпероксидазы (ГП) и антиокислительной активности (АОА) к содержанию продуктов ПОЛ - диеновым конъюгатам (ДК) и

малоновому диальдегиду (МДА) (к = ГП • АОА / ДК ■ МДА) (табл. 4). При этом активность глутатионпероксидазы, антиокислительная активность и содержание ДК и МДА у соответствующих возрастных групп контрольных животных принята за единицу.

Таблица 4

Коэффициент (к) состояния прооксидантно-антиоксидантного равновесия у морских свинок разного возраста при экспериментальном

остром холецистите

Возраст, мес. • Плазма крови Печень

2 контроль 1 1

опыт 0,81 0,47

12 контроль 1 1

опыт 0,27 0,24

36 контроль 1 1

опыт 0,16 0,28

Представленные в таблице 4 данные свидетельствуют, что в плазме крови подопытных старых морских свинок 36-месячного возраста этот коэффициент был наиболее низким по сравнению со взрослыми и особенно молодыми животными. В печени морских свинок коэффициент прооксидантно-антиоксидантного баланса у молодых подопытных животных был ниже в 2 раза, а у взрослых и старых практически в 4 раза по сравнению с контрольными морскими свинками.

Более выраженное смещение прооксидантно-антиоксидантного баланса у старых животных в ответ на данный стрессорный фактор может объясняться более значительным снижением надёжности антиоксидантной системы и в основном ферментативной в8Н-зависимой. Это тем более вероятно потому, что у старых животных в8Н-зависимая антиоксидантная система является основной защитной системой от свободнорадикального окисления липидов. Более того, обнаруженное снижение способности тканей печени и крови при естественном старении обеспечивать в8Н-зависимую антиоксидантную систему восстановительными эквивалентами, и тот факт, что при возникновении и развитии заболеваний гепатобиллиарной системы снижается концентрация восстановленного глутатиона в организме (Воевщка О.С., Коломо-ець М.Ю., 1997), может дополнительно свидетельствовать о том, что более выраженная активация ПОЛ при остром холецистите у старых животных связана со «срывом» в8Н-зависимой антиоксидантной защиты.

Обнаруженное более выраженное нарушение прооксидантно-антиокси-дантного баланса у старых животных при данном стрессорном воздействии,

по-видимому, является одной из причин известного факта большей вероятности возникновения различных патологий на поздних этапах онтогенеза, и в частности, заболеваний жёлчного пузыря и желчевыводящих путей (Зайцев ВТ. и др., 1997).

Морфологические особенности возрастных изменений паренхимы печени и стенки желчного пузыря у самцов и самок морских свинок в норме и при экспериментальном воспалении желчного пузыря. В норме у морских свинок независимо от пола выявлены возрастные структурные изменения в печеночных клетках в виде увеличения их размеров, уменьшения числа и плотности расположения гепатоцитов и появления в них жировой дистрофии, нарастающей по интенсивности и площади поражения печеночных клеток с возрастом. У отдельных животных контрольной группы во все исследуемые сроки онтогенеза выявлены признаки острого и хронического холецистита, что свидетельствует о склонности некоторых животных этого вида к воспалительным заболеваниям желчного пузыря и диктует необходимость выявлять эту патологию и изымать таких особей из эксперимента.

При экспериментальном остром холецистите у старых 36-месячных морских свинок наблюдали более выраженные морфологические изменения жёлчного пузыря в виде инфильтрации его слизистой оболочки нейтро-фильными гранулоцитами, отёка и набухания собственной пластинки слизистой, десквамации и вакуольной дистрофии эпителия, а также крупнокапельный диффузный жировой гепатоз, который определялся в 90-100% ге-патоцитов печени, в отличие от молодых животных.

В целом, полученные данные о более выраженных морфологических изменениях тканей печени и жёлчного пузыря у старых животных при экспериментальном остром холецистите согласуются с более выраженным нарушением прооксидантно-антиоксидантного баланса.

Перекисное окисление липцдов и его регуляция в крови у пациентов с острым и хроническим холециститом. Полученные нами данные свидетельствуют, что при обеих клинических формах холецистита в крови больных происходит смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в сторону прооксидантов. Это нарушение более выражено при острой форме заболевания и связано, как и у морских свинок с экспериментальным острым холециститом, со снижением глутатионпероксидазной активности.

Коэффициент (к) отношения антиоксидантов к прооксидантам, который у людей рассчитывался, как отношение селензависимой глутатион-перокси-дазной активности к содержанию гидроперекисей липидов (ГПЛ) (к = ГП /

ГПЛ) у больных хроническим холециститом был ниже контроля в 1,9 раза, а у пациентов с острым холециститом - в 2,8 раза.

После холецистэктомии этот коэффициент у больных хроническим холециститом увеличивался в 1,2 раза, а при остром холецистите в 1,8 раза по сравнению с больными до операции.

Таким образом, обнаруженное выраженное снижение коэффициента состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса в зависимости от формы заболевания и повышение его после лечения может быть дополнительным критерием для диагностики холецистита, степени его тяжести, эффективности традиционного лечения и для прогнозирования адъювантной ан-тиоксидантной терапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Молекулярные механизмы, определяющие продолжительность жизни, неизвестны, однако накопленные к настоящему времени экспериментальные данные о закономерностях возрастного развития и старения человека и животных свидетельствуют о существенной роли свободнорадикальных процессов в механизмах старения. В свете свободнорадикальной теории старения, выдвинутой более 40 лет назад Харманом и Эммануэлем, которая в настоящее время продолжает плодотворно развиваться, свободным радикалам отводят ведущую роль в нарушении функции генетического аппарата, мембран и белков-ферментов. Немаловажное значение для экологического аспекта проблемы, затрагивающей механизмы преждевременного старения, имеет изучение возрастных особенностей изменения про-оксидантно-антиоксидакнтного баланса при действии экстремальных факторов окружающей среды.

Результаты выполненного исследования позволяют установить некоторые закономерности состояния прооксидантно-антиоксидантного гомеос-таза печени и крови, а также морфологические особенности изменений паренхимы печени и стенки желчного пузыря морских свинок как при естественном старении морских свинок, так и при оксидативном стрессе. Так установлено, что интенсивность ПОЛ в митохондриях и гомогенатах печени и содержание первичных продуктов ПОЛ (ДК, ОДК, ТК и ТЕТ) в крови и вторичных продуктов ПОЛ (МДА) в печени при старении морских свинок обоего пола снижается. При этом в отличие от разнонаправленных возрастных изменений интенсивности ПОЛ в печени самцов и самок крыс (Rikans L.E et а1., 1991), у морских свинок разного пола изменения этого процесса было однонаправленным. Полученные данные при исследовании состоя-

ния физиологической антиоксидантной системы, свидетельствуют о том, что при старении морских свинок общая ЛОА печени снижается, а активность антиоксидантных ферментов не изменяется или даже увеличивается. Эти данные позволяют сделать вывод о том, что обнаруженное снижение интенсивности ПОЛ в печени и крови при старении морских свинок обоего пола может быть связано с увеличением роли ферментативной антиокси-дантной системы в регуляции свободнорадикального окисления липидов.

Вместе с тем, обнаруженное увеличение с возрастом роли ферментативной антиоксидантной системы и в основном в8И-зависимой в регуляции ПОЛ может свидетельствовать об увеличении нагрузки на ферменты, обеспечивающие эту антиоксидантную систему восстановленными эквивалентами (в8И и N А Б Р И). Действительно, нами было обнаружено снижение с возрастом активности ферментов, генерирующих восстановленный

в8И и КАБРИ (ИЦДГ, Гл-6-фДГ и МДГ). Этот факт может быть лимитирующим фактором эффективности антиоксидантной защиты у старых животных и особенно при функциональных напряжениях и экстремальных воздействиях. Эта гипотеза подтверждается при изучении прооксидантно-антиокси-дантного гомеостаза печени и крови морских свинок с экспериментальным острым холециститом. Метаболические возможности обеспечения восстановительными эквивалентами глутатион-зависимых антиоксидантных ферментов уменьшаются с возрастом и наблюдается более выраженная активация ПОЛ в печени и крови старых животных при стрессорном воздействии.

Полученные данные о более выраженных нарушениях прооксидантно-антиоксидантного баланса у старых животных при экспериментальном остром холецистите согласуются с более выраженными морфологическими изменениями тканей печени и жёлчного пузыря. В частности, в печени всех старых (36-месячных) подопытных морских свинок наблюдался крупнокапельный диффузный жировой гепатоз, который определялся в 90-100% ге-патоцитах, в механизме патогенеза которого важную роль играет процесс ПОЛ. У 2-х месячных подопытных морских свинок диагностировался жировой гепатоз в виде очагового и диффузного мелкокапельного ожирения и определялся в 20-25% объема печеночной паренхимы.

Проведенные нами исследования прооксидантно-антиоксидаитного баланса крови у людей больных острым и хроническим холециститом позволили установить, что при обеих клинических формах холецистита происходит смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в сторону про-оксидантов. Это нарушение более выражено при острой форме заболевания и связано, как и у морских свинок с экспериментальным острым холециститом, со снижением глутатионпероксидазной активности.

Предлагаемый нами коэффициент оценки прооксидантно-антиоксидант-ного баланса при экспериментальном остром холецистите у морских свинок и при остром и хроническом холецистите у людей, может быть дополнительным критерием для диагностики холецистита, степени его тяжести, эффективности традиционного лечения и для прогнозирования адъювант-ной антиоксидантной терапии.

ВЫВОДЫ

1. Обнаружено, что интенсивность свободнорадикального окисления ли-пидов в печени и крови самцов и самок морских свинок снижается с возрастом, за счёт снижения интенсивности спонтанного и аскорбат-индуциро-ванного ПОЛ в митохондриях и гомогенатах печени и уменьшения содержания первичных продуктов ПОЛ (ДК, ОДК, ТК и ТЕТ) в крови и вторичных продуктов ПОЛ (МДА) в печени животных.

2. Установлено, что с возрастом у морских свинок увеличивается роль ферментативной антиоксидантной системы в регуляции свободно-радикального окисления липидов. В частности, активность + SeEO в крови морских свинок обоего пола увеличивается к 12-месячному возрасту и в дальнейшем к 36-месяцам существенно не изменяется (эритроциты), или снижается (плазма), оставаясь достоверно выше уровня 2-месячных животных. В гомогенатах печени морских свинок активность + S e m с возрастом снижалась и составляла от общей глутатионпероксидазной активности 13,7% у 2-месячных и 12,2% у 25-месячных животных. ^еГП-активность с возрастом достоверно не изменялась. В митохондриях печени активность- SeTO увеличивалась на 31 % к 25-месячному возрасту, а СОД и каталазы не изменялась.

3. Метаболические возможности обеспечения восстановительными эквивалентами (NADPH и GSH) GSH-зависимых антиоксидантных ферментов уменьшаются с возрастом. Так, при старении морских свинок ГР, ИЦДГ, Гл-6-ФДГ и МДГ-активности снижаются.

4. Исследование состояния неферментативной антиоксидантной системы показало, что общая антиокислительная активность (АОА) плазмы крови у самцов морских свинок с возрастом увеличивается, а у самок снижается к 12-месяцам (на 66%) и затем к 36-месяцам повышается до уровня молодых животных. В печени морских свинок общая АОА снижается к 36-месячному возрасту на 31,5% у самцов и на 24,4% у самок.

5. Экспериментальный острый холецистит приводит к смещению проокси-дантно-антиоксидантного баланса в сторону прооксидантов в печени и крови, которое более выражено у старых 36-месячных морских свинок и связано

со снижением +8еГП-акгивности и снижением общей АОА Более выраженное смещение прооксидантно-антиоксидантного баланса в сторону проок-сидантов в печени и крови старых 36-месячных морских свинок при экспериментальном остром холецистите согласуется с более выраженными морфологическими изменениями в тканях печени и жёлчного пузыря.

6. В крови людей с острым и хроническим холециститом выявлено смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в сторону проокси-дантов, которое более выражено у больных с острым холециститом и связано со снижением +8еГП-активности.

7. Нами выявлена высокая прогностическая значимость коэффициента оценки прооксидантно-антиоксидантного баланса, который может быть дополнительным критерием для определения степени тяжести холецистита и необходимости применения антиоксидантов, что определяет практическую ценность данного исследования.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Nikitchenko YuV., Tregubova N.V., Bondar VV. Age-dependent features of lipid peroxidation regulation in blood ofrats// School of Fundamental Medicine Journal. -1998. - V. 4, N 2. - P. 19-21.

2. ТрегубоваН.В. Возрастные особенности перекисного окисления липидов в печени и крови морских свинок в норме и при экспериментальном холецистите // Научное наследие академика И. Н. Буланкина и его развитие в современной биохимии: труды научной конференции. - Харьков, 2001. - С. 158-160.

3. Трегубова Н.В., Гуцол А.А. Перекисное окисление липидов и функционирование некоторых антиокислительных ферментативных систем в крови больных острым и хроническим холециститом// Скспериментальна i клЫчнамедицина. - 2002.-N 1.-С.21-23.

4. Трегубова Н.В., Паранич А.В., Никитченко Ю.В. Содержания продуктов перекисного окисления липидов и антиокислительная активность в печени и крови самцов и самок морских свинок разного возраста //Таврический медико-биологический вестник. - 2002. -Т. 5, N 2. - С. 183-187.

5. Трегубова Н.В., Паранич A.B., Никитченко Ю.В. Bíkobi та crareBi змши BMicry жиророзчинних B¡TaMÍH¡B - антиоксидакпв у печшш та KpOBi морсь-ких свинок// Бюлопятавалеолопя.-2002. - Вип. 5. - С. 57-62.

6. Якимова Т.П., Останкова Л.В., Трегубова Н.В. Морфологические особенности возрастных изменений печени и желчного пузыря у самцов и самок морских свинок// В1сникморфологн.-2002.-Т. 8, N2.-^ 216-218.

7. Трегубова Н.В., Никитченко Ю.В. Актившсть плутатионзалежноТ фер-ментативноТ антиоксидантно'1 системи печшци i крови самщв та самиц морських свинок pi3noro Biny//Медична xiiuia. -2003. -Т. 5, N 1. - С. 40-43.

8. Трегубова Н.В., Якимова Т.П., Никитченко Ю.В., Останкова Л.В. Влияние стрептококковой и стафилококковой инфекции на морфогенез и проок-сидантно-антиоксидантный баланс тканей морских свинок разного возраста// BicHHKпроблем бюлоги i медицини.-2003.-Вип.6.-С.28-32.

9. Никитченко Ю.В., ТрегубоваН.В. Возрастные изменения активности глу-татион-зависимой антиоксидантной системы в печени и крови морских сви-нокикрыс//Проблемыстарения идолголетия.-2003.-Т. 12.N2.-C. 134-141.

10. Никитченко Ю.В., Трегубова Н.В., Бондарь В.В. Влияние гипокалорий-ной, продляющей жизнь животных диеты на ферментативную и неферментативную антиоксидазную систему эритроцитов и плазмы крови крыс разного возраста // Биологические механизмы старения. III международный симпозиум: тезисы докладов 19-21 мая 1998 г., с. 20

11. Трегубова Н.В. Перекисное окисление липидов и его регуляция в плазме и эритроцитах крови больных хронической и острой формами холецистита //Медицина третього тисячолгггя: зб1рник тез м1жвуз1вськоТ конференци молодихвчених.Харкш, 17-18 синя 2001р., с.84-85.

12. Трегубова Н.В. Особенности антиокислительного гомеостаза в печени и крови морских свинок разного возраста при экспериментальном холецистите// Медицина третього тисячолгггя: збфниктез м1жвуз1всько1 конференци молодих вчених. XapKiß, 17-18 с1чня 2002р., с.43.

13. Останкова Л.В., Трегубова Н.В. Морфологические изменения печени и желчного пузыря у морских свинок разного возраста // Биологические механизмы старения. Умеждународный симпозиум: тезисы докладов 30 мая -1 июня 2002г., с.58.

14. Трегубова Н.В. Изменения прооксидантно-антиоксидантного баланса и морфогенеза при экспериментальном воспалении желчного пузыря у морских свинок разного возраста//Медицина третьего

м1жвуз1всько1 конференци молодих вчених. Харюв, 20 ачня 2003р., с.41-42.

15. Трегубова Н.В. Изменение прооксидантно-антиоксидантного баланса при воспалении желчного пузыря у человека и при экспериментальном моделировании у морских свинок // Вестник Российского государственного медицинского университета: матер. Пироговской научной конференции. Москва, 20 марта 2003 г., с. 213.

Изд. лиц. серия ИД № 05975 от 03.10.2001 Подписано в печать 20.04.04

Формат 60x84 1/16 Усл.печ.л. 1,34 Уч.-изд.л. 1,01

Бумага офсетная Тираж 100 экз. Заказ 69

Отпечатано в Издательско-полиграфическом комплексе Ставропольского государственного университета.

355009, Ставрополь, ул.Пушкина, 1. •

1-818S

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Трегубова, Нина Владимировна

Список сокращений.

Введение.;.

1. Возрастные особенности прооксидантно-антиоксидантного гомеостаза в норме и при оксидативном стрессе (обзор литературы).

1.1. Механизм свободнорадикального окисления и структурно-функциональная организация физиологической антиоксидантной системы, её биологическая роль в поддержании окислительного гомеостаза.'.

1.2. Свободнорадикальное окисление липидов биомембран и его регуляция в разные периоды постнатального онтогенеза.

1.2.1. Изменение интенсивности свободнорадикального окисления липидов биомембран в процессе постнатального онтогенеза.

1.2.2. Возрастные изменения физиологической антиоксидантной системы.

1.2.3. Возрастные изменения прооксидантно-антиоксидантного баланса при оксидативном стрессе.

2. Материалы и методы исследований.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Препаративные методы.

2.3. Аналитические методы.

2.4. Морфологические методы.

2.5. Характеристика использованных реактивов.

Результаты исследований и их обсуждение

3. Возрастные изменения интенсивности перекисного окисления липидов в печени и крови самцов и самок морских свинок.

4. Регуляция перекисного окисления липидов биомембран в печени и крови морских свинок разного возраста и пола.

4.1. Активность ферментативной антиоксидантной системы в печени и крови морских свинок разного возраста и пола.

4.2. Состояние неферментативной антиоксидантной систем в печени и крови морских свинок разного возраста и пола.

5. Возрастные изменения прооксидантно-антиоксидантного баланса и морфогенеза при воспалении желчного пузыря в эксперименте и в клинике.

5.1. Возрастные изменения прооксидантно-антиоксидантного равновесия в печени и крови при экспериментальном остром холецистите у морских свинок.

5.2. Морфологические особенности возрастных изменений паренхимы печени и стенки желчного пузыря у морских свинок в норме и при экспериментальном воспалении желчного пузыря.

5.3. Перекисное окисление липидов и его регуляция в крови у пациентов с острым и хроническим холециститом.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Состояние прооксидантно-антиоксидантной системы печени и крови морских свинок разного возраста в норме и при экспериментальном холецистите"

Актуальность исследования. Одной из актуальных общебиологических проблем современности является выяснение механизмов, определяющих скорость старения и продолжительность жизни человека и животных. Среди различных гипотез старения одной из ведущих считается свободнорадикальная теория старения [172, 200], согласно которой свободным радикалам и продуктам перекисного окисления липидов отводится ключевая роль в изменении биомакромолекул клетки при старении.

Вместе с тем, данные литературы о состоянии прооксидантно-антиоксидантной системы в процессе постнатального онтогенеза [42, 51, 67, 85, 139, 289] весьма противоречивы и не позволяют трактовать свободнорадикальную теорию старения, как активацию ПОЛ на поздних этапах онтогенеза.

Противоречивость литературных данных может быть объяснена половыми и видовыми особенностями состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса, а также ограниченным количеством возрастных групп экспериментальных животных, не отражающих все этапы постнатального онтогенеза [24, 50, 202]. Так, ряд авторов [41, 274] показали разнонаправленные возрастные изменения интенсивности ПОЛ и активности антиоксидантных ферментов в печени у самцов и самок крыс.

Анализ современных литературных данных не позволяет однозначно оценить роль основной антиоксидантной системы - ферментативной и в частности, GSH-зависимой, в свободнорадикальных механизмах старения. По мнению ряда исследователей [50], глутатионпероксидаза является одним из важнейших компонентов антиоксидантной системы, так как восстанавливает Н2О2 и почти все органические перекиси. Однако нет ясности в вопросе о возрастных изменениях активности селензависимой глутатионпероксидазы и особенно селеннезависимой глутатионпероксидазы.

При этом необходимо отметить, что в печени животных не чувствительных к дефициту селена (морская свинка, кролик) селеннезависимая глутатион-пероксидаза является основным ферментом, утилизирующим гидроперекиси липидов [50].

Среди ряда различных лабораторных животных морские свинки наиболее близки к человеку по структуре антиоксидантной системы [4], наличию жёлчного пузыря [36], по характеристикам плаценты [153], по радиочувствительности [4] и по другим параметрам [36, 153].

В частности, в организме морских свинок, как и у приматов, аскорбиновая кислота не синтезируется [4, 110]. Показано, что в печени морских свинок активность каталазы в 5 раз выше, чем у крыс [259]. Авторы ряда работ [50, 301] отмечают отсутствие селензависимой глутатионпероксидазной активности в печени морских свинок. Однако данные других авторов свидетельствуют, что вклад селензависимой глутатионпероксидазной активности в общую глутатионпероксидазную активность в печени морских свинок составляет 15% [24, 202, 259]. Противоречивы также данные литературы, касающиеся видовых особенностей распределения глутатион-8-трансферазы. Так, одни авторы [50] утверждают, что глутатион-8-трансферазная активность в печени располагается в ряду крыса > человек = морская свинка. Другие же исследователи отмечают, что активность этого фермента в печени морских свинок, наоборот, во много раз выше, чем у крыс [204, 259]. Такая противоречивость данных, вероятно, может быть связанна с тем, что исследования проводились на животных разных возрастных групп.

В литературе отсутствуют чёткие представления о возрастных особенностях состояния этой системы при действии ряда стрессорных факторов. В связи с этим, нам представлялось актуальным исследовать возрастные особенности прооксидантно-антиоксидантной системы в печени и крови самцов и самок морских свинок 2-, 12-, 25 и 36-месячного возраста при стрессорном воздействии. В качестве такого воздействия был выбран острый холецистит [8].

В литературе есть данные о нарушении прооксидантно-антиоксидантного равновесия при холецистите [14, 105, 91]. Показано, что гиперлипопероксидация является важным звеном в цепи патофизиологических процессов при холецистите [91] и может стать фактором риска литогенеза [91]. Однако наряду с указаниями на достоверное, коррелирующее со степенью выраженности воспалительного процесса в желчевыводящих путях увеличение содержания липоперекисей в крови и жёлчи [14, 105], есть работы, в которых отрицается диагностическая ценность данного факта [108а, 149а]. Известен факт большей вероятности возникновения с возрастом у людей заболеваний гепатобиллиарной системы [34]. Однако данные литературы о возрастных изменениях состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса при холецистите отсутствуют.

Исходя из цели, были определены следующие задачи: 1. Изучить возрастные особенности интенсивности свободнорадикального окисления липидов в печени и крови самцов и самок морских свинок.

5. Изучить изменения интенсивности ПОЛ и его регуляции в крови больных острым и хроническим холециститом.

Научная новизна. На основании проведенных исследований интенсивности перекисного окисления липидов, активности ферментативной и неферментативной антиоксидантной системы в печени и крови самцов и самок морских свинок 2-, 12-, 25- и 36-месячного возраста установлено, что с возрастом увеличивается роль ферментативной антиоксидантной системы в регуляции свободнорадикального окисления липидов. В частности, впервые показано, что активность ферментов утилизирующих гидроперекиси липидов (селензависимой глутатионпероксидазы и селеннезависимой глутатион-пероксидазы) в митохондриях печени, плазме и эритроцитах крови у 25- и 36-месячных морских свинок выше, чем у 2-месячных животных.

Обнаружено, что интенсивность перекисного окисления липидов в митохондриях и гомогенатах печени и содержание продуктов ПОЛ в крови и печени самцов и самок морских свинок снижается с возрастом. При этом в отличие от разнонаправленных возрастных изменений интенсивности ПОЛ в печени самцов и самок крыс (Rikans L.E. et al., 1991), у морских свинок разного пола изменения этого процесса было однонаправленными.

Впервые показано, что экспериментальный острый холецистит приводит к более выраженному снижению активности ферментативной антиоксидантной системы, повышению интенсивности перекисного окисления липидов и нарушению морфологической структуры изученных тканей у старых животных, что может быть основной причиной более высокой чувствительности стареющего организма к стрессорным воздействиям.

Теоретическое и практическое значение работы. Результаты проведенных исследований позволяют глубже понять роль ферментативной антиоксидантной системы в регуляции перекисного окисления липидов в процессе постнатального онтогенеза. Установленные закономерности регуляции перекисного окисления липидов при естественном старении и при экспериментальном остром холецистите могут быть использованы для объяснения более высокой чувствительности стареющего организма к возникновению различного рода патологий.

Предложенный коэффициент (антиоксиданты / продукты ПОЛ) оценки состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса при экспериментальном остром холецистите у морских свинок и при остром и хроническом холецистите у людей может быть дополнительным критерием для диагностики холецистита, степени его тяжести, эффективности традиционного лечения и для прогнозирования адъювантной антиоксидантной терапии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

2. G возрастом увеличивается роль ферментативной антиоксидантной системы в регуляции перекисного окисления липидов.

3. Метаболические возможности обеспечения восстановительными эквивалентами GSH-зависимых антиоксидантных ферментов уменьшаются с возрастом и наблюдается более выраженная активация ПОЛ в печени и крови старых животных при стрессорном воздействии вызываемом введением микробной взвеси стрептококков и стафилококков (экспериментальный острый холецистит). Более выраженная активация ПОЛ при остром холецистите у старых животных согласуется с более выраженными морфологическими изменениями печени и желчного пузыря.

Связь работы с научными программами. Диссертационное исследование явилось частью госбюджетной темы НИИ биологии Харьковского национального университета им. В.Н.Каразина "Исследования изменений прооксидантно-антиоксидантного гомеостаза при действии факторов, которые влияют на скорость старения, и разработка оптимальных стратегий коррекции возрастных изменений системы антиоксидантной защиты" (№ др 0100U003313).

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертационной работы были представлены на III и V международных симпозиумах: "Биологические механизмы старения" (Харьков, 1998, 2002); межвузовской конференции молодых учених (Харьков, 2001-2003); научной юбилейной конференции "Научное наследие академика И.Н. Буланкина и его развитие в современной биологии" (Харьков, 2001); научной Пироговской конференции молодых ученых (Москва, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 научных работ. Среди публикаций — 8 статей опубликованных в специальных изданиях, 1 статья в трудах конференции и 6 тезисов докладов на конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех разделов результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, включающего 313 источников, из них 128 отечественных и 185 иностранных. Работа, изложена на 168 страницах машинописного текста и включает 34 рисунка, 13 таблиц и 10 микрофототрафий.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Трегубова, Нина Владимировна

выводы

1. Обнаружено, что интенсивность свободнорадикального окисления липидов в печени и крови самцов и самок морских свинок снижается с возрастом, за счёт снижения интенсивности спонтанного и аскорбат-индуцированного ПОЛ в митохондриях и гомогенатах печени и уменьшения содержания первичных продуктов ПОЛ (ДК, ОДК, ТК и ТЕТ) в крови и вторичных продуктов ПОЛ (МДА) в печени животных.

2. Установлено, что с возрастом у морских свинок увеличивается роль ферментативной антиоксидантной системы в регуляции свободно-радикального окисления липидов. В частности, активность +Sem в крови морских свинок обоего пола увеличивается к 12-месячному возрасту и в дальнейшем к 36-месяцам существенно не изменяется (эритроциты), или снижается (плазма), оставаясь достоверно выше уровня 2-месячных животных. В гомогенатах печени морских свинок активность +SeITT с возрастом снижалась и составляла от общей глутатионпероксидазной активности 13,7% у 2-месячных и 12,2% у 25-месячных животных. -SelTI-активность с возрастом достоверно не изменялась. В митохондриях печени активность -SelTI увеличивалась на 31% к 25-месячному возрасту, а СОД и каталазы не изменялась.

3. Метаболические возможности обеспечения восстановительными; эквивалентами (NADPH и GSH) GSH-зависимых антиоксидантных ферментов уменьшаются с возрастом. Так, при старении морских свинок ГР, ИЦДГ, Гл-6-ФДГ и МДГ-активности снижаются.

4. Исследование состояния неферментативной антиоксидантной системы показало, что общая антиокислительная активность (АОА) плазмы крови у самцов морских свинок с возрастом увеличивается, а у самок снижается к 12-месяцам (на 66%) и затем к 36-месяцам повышается до уровня молодых животных. В печени морских свинок общая АО А снижается к 36-месячному возрасту на 31,5% у самцов и на 24,4% у самок.

5. Экспериментальный острый холецистит приводит к смещению прооксидантно-антиоксидантного баланса в сторону прооксидантов в печени и крови, которое более выражено у старых 36-месячных морских свинок и связано со снижением +8еГП-активности и снижением общей АОА. Более выраженное смещение прооксидантно-антиоксидантного баланса в сторону прооксидантов в печени и крови старых 36-месячных морских свинок при экспериментальном остром холецистите согласуется с более выраженными морфологическими изменениями в тканях печени и жёлчного пузыря.

6. В крови людей с острым и хроническим холециститом выявлено смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в сторону прооксидантов, которое более выражено у больных с острым холециститом и связано со снижением +8еГП-активности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выяснение фундаментальных механизмов старения остаётся одной из наиболее важных и сложных проблем современной биологии, решение которой, будет иметь, большое практическое значение для выяснения механизмов возникновения и развития возрастных заболеваний (сердечно-сосудистых, рак, диабет, катаракта и др.) и для разработки путей их профилактики и лечения. Молекулярные механизмы, определяющие продолжительность жизни, неизвестны, однако накопленные к настоящему времени экспериментальные данные о закономерностях возрастного развития и старения человека и животных свидетельствуют о существенной роли свободнорадикальных процессов в механизмах старения. В свете свободнорадикальной теории старения, выдвинутой более 40 лет назад Харманом и Эммануэлем, которая в настоящее время продолжает плодотворно развиваться, свободным радикалам отводят ведущую роль в нарушении функции генетического аппарата, мембран и белков-ферментов. Немаловажное значение для экологического аспекта проблемы, затрагивающей механизмы преждевременного старения, имеет изучение возрастных особенностей изменения прооксидантно-антиоксидакнтного баланса при действии экстремальных факторов окружающей среды.

Результаты выполненного исследования позволяют установить некоторые закономерности состояния прооксидантно-антиоксидантного гомеостаза печени и крови, а также морфологические особенности изменений паренхимы печени и стенке желчного пузыря морских свинок как при естественном старении морских свинок, так и при оксидативном стрессе. Так установлено, что интенсивность ПОЛ в митохондриях и гомогенатах печени и содержание первичных продуктов ПОЛ (ДК, ОДК, ТК и ТЕТ) в крови и вторичных продуктов ПОЛ (МДА) в печени при старении морских свинок обоего пола снижается. При этом в отличие от разнонаправленных возрастных изменений интенсивности ПОЛ в печени самцов и самок крыс [274] у морских свинок разного пола изменения этого процесса было однонаправленным. Полученные данные при исследовании состояния физиологической антиоксидантной системы, свидетельствуют о том, что при старении морских свинок общая АОА печени снижается, а активность антиоксидантных ферментов не изменяется или даже увеличивается. Эти данные позволяют сделать вывод о том, что обнаруженное снижение интенсивности ПОЛ в печени и крови при старении морских свинок обоего пола может быть связано с увеличением роли ферментативной антиоксидантной системы в регуляции свободнорадикального окисления липидов.

Вместе с тем, обнаруженное увеличение с возрастом роли ферментативной антиоксидантной системы и в основном GSH-зависимой в регуляции ПОЛ может свидетельствовать об увеличении нагрузки на ферменты, обеспечивающие эту антиоксидантную систему восстановленными эквивалентами (GSH и NADPH). Действительно, нами было обнаружено снижение с возрастом активности ферментов, генерирующих восстановленный GSH и NADPH (ИЦДГ, Гл-6-фДГ и МДГ). Этот факт может быть лимитирующим фактором эффективности антиоксидантной защиты у старых животных и особенно при функциональных напряжениях и экстремальных воздействиях. Эта гипотеза подтверждается при изучении прооксидантно-антиоксидантного гомеостаза печени и крови морских свинок с экспериментальным острым холециститом. Метаболические возможности обеспечения восстановительными; эквивалентами глутатион-зависимых антиоксидантных ферментов уменьшаются с возрастом и наблюдается более выраженная активация ПОЛ в печени и крови старых животных при стрессорном воздействии.

Полученные данные о более выраженных нарушениях прооксидантно-антиоксидантного баланса у старых животных при экспериментальном остром холецистите согласуются с более выраженными морфологическими изменениями тканей печени и жёлчного пузыря. В частности, в печени всех старых (36-месячных) подопытных морских свинок наблюдался крупнокапельный диффузный жировой гепатоз, который определялся в 90100% гепатоцитах, в механизме патогенеза которого важную роль играет процесс ПОЛ. У 2-х месячных подопытных морских свинок диагностировался жировой гепатоз в виде очагового и диффузного мелкокапельного ожирения и определялся в 20-25% объема печеночной паренхимы.

Проведенные нами исследования прооксидантно-антиоксидантного баланса крови у людей больных острым и хроническим холециститом позволили установить, что при обеих клинических формах холецистита происходит смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в сторону прооксидантов. Это нарушение более выражено при острой форме заболевания и связано, как и у морских свинок с экспериментальным острым холециститом, со снижением глутатион-пероксидазной активности.

Предлагаемый нами коэффициент оценки прооксидантно-антиоксидантного баланса при экспериментальном остром холецистите у морских свинок и при остром и хроническом холецистите у людей, может быть дополнительным критерием для диагностики холецистита, степени его тяжести, эффективности традиционного лечения и для прогнозирования адъювантной антиоксидантной терапии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Трегубова, Нина Владимировна, Ставрополь

1. Автандилов Г.Г. Основы патологоанатомической практики. М.: РМАПО, 1998.-505 с.

2. Анисимов В.Н., Арутюнян А.В., Опарина Т.И. и др. Возрастные изменения активности свободнорадикальных процессов в тканях и сыворотке крови крыс // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1999. - Т. 84. - С. 502 -507.

3. Анищенко Т.Г., Брилль Г.Е., Романова Т.П., Шорина Л.Н. Половые различия в степени активации перекисного окисления липидов и устойчивости к сердечно-сосудистым повреждениям крыс при стрессе // Бюллетень эксперим. биол. и мед. — 1995. N5. - С. 354-357.

4. Барабой В.А., Сутковой Д.А. Окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и при патологии. К.: Наукова думка, 1997. - 420 с.

5. Баранник Т.В., Никитченко И.В. Активность ключевых ферментов метаболизма гема и пул восстановленного глутатиона в печени крыс после введения хлорида ртути // Биологический вестник. 1997. - Т. 1, N 1. - С. 45 -50.

6. Белова Л.А. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов // Биохимия. — 1997. Т. 62, вып. 6. - С. 659-668.

7. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина, 1989. - 368 с.

8. Бондаренко Н.М., Слинченко Н.З., Савич В.И. Морфологические изменения в стенках внепеченочных желчных протоков при экспериментальном остром холецистите // Клиническая хирургия. 1981.- N 9. - С. 50-54.

9. Бурлакова Е.Б., Молочкина Е.М., Пальмина Н.П., Слепухина Л.В. Изменение антиокислительной активности липидов при старении // Вопр. мед. химии. 1976. - Т. 22, N 4. - С. 541 - 546.

10. Бурлакова Е. Б., Крашаков С. А., Храпова Н.Г. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов. Черноголовка, 1992. - 55 с.

11. Вилков Г.А., Смирнова О.Б., Межова Л.И. Коррекция нейроиммунных реакций регуляцией перекисного окисления липидов // Бюллетень эксперим. биол. и мед. 1993. -N 10. - С. 364-366.

12. Владимиров Ю.А. Нарушение барьерных свойств внутренней и наружной мембран митохондрий, некроз и апоптоз // Биол. мембраны. 2002. -Т. 19, N5.-С. 356-377.

13. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН 1998.-N 7.-С.43-51.13а. Владимиров Ю.А'., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биомембранах. М.: Наука. - 1972. - 252 с.

14. Воевщка О.С., Коломоець М.Ю. Патогенетичне обгрунтування протиоксидантно1 терапп в комплексному лисуванш хрошчних холецистипв // Врачебное дело. 1997. - N 5. - С. 63-66.

15. Воскресенский О.Н. Влияние природных биоантиоксидантов на патологические процессы, связанные со старением // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Общие проблемы биологии. 1986. - Т. 5. - С. 163 - 201.

16. Гамалей И.Г. О регуляторной роли активних форм кислорода в клетке//Цитология. 1999.-Т. 41, N 9.-С. 767.

17. Гарбузова В.Ю., Давыдов В.В. Каталазная активность миокарда при стрессе у взрослых и старых крыс // Пробл. старения и долголетия. 1998. -Т. 7, N 1. - С. 16-19.

18. Гарбузова В.Ю., Давыдов В.В. Каталазная активность миокарда при стрессе у взрослых и старых крыс // Укр. биохим. журн. 1999. - Т. 71, N 1. -С. 83 - 85.

19. Грищенко В.И., Геродес А.Г., Никитченко Ю.В. Влияние низкотемпературного хранения на перекисное окисление липидов и антиоксидантную активность фолликулярной жидкости человека // Проблемы криобиологии. 1998. - N4. - С. 44-47.

20. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени. К.: Здоровье, 1989. - 168 с.

21. Гусев В.А. Свободнорадикальная теория старения в парадигме геронтологии // Успехи геронтол. 2000. - Вып. 4. - С. 41 - 49.

22. Гусев В.А., Панченко Л.Ф. Супероксидный радикал и супе-роксиддисмутаза в свободнорадикальной теории старения // Вопр. мед.химии. 1982. - Т. 28, N 4. - С. 8 - 25.

23. Гусев В.А., Панченко Л.Ф. Современные концепции свободнорадикальной теории старения // Нейрохимия. 1997. - Т. 14, N 1. - С. 14 - 29.

24. Гусейнов Т.М., Насибов Э.М., Джафаров А.И. Участие селена в регуляции перекисного окисления липидов биомембран и активность глутатионпероксидазы // Биохимия. 1990. - Т. 55, вып. 3. - С. 499 -508.

25. Давыдов В.В., Макоед О.Б., Зновенко С.А. Аскорбатзависимое перекисное окисление липидов в сердце взрослых и старых крыс при стрессе // Пробл. старения и долголетия. 1998. - Т. 7, N 2. - С. 103 - 107.

26. Данилович Ю.В. Взаимосвязь образования NO и Н2О2 и их роль в регуляции ионного гомеостаза клеток // Укр. битам, журн. 2001. - Т. 73, N З.-С. 5-18.

27. Дзюба В.Н. Возрастные особенности влияния ишемии на структурно-функциональное состояние митохондрий и перекисное окисление липидов сердца крыс: Дисс. канд. биол. наук: 03.00.04. Харьков, 1998: -128 с.

28. Дубшша О.Ю. Окислювальний стрес i окислювальна модифшащя бшюв//Медичнах1м1я — 2001. — Т. 3, N2.-С. 5-12.

29. Жебель В.Н. Активность ферментов антиоксидантной системы эритроцитов у практически здоровых людей разного возраста // Пробл. старения и долголетия. 1994. - Т. 4, N 2. - С. 178 - 184.

30. Зайчик А. Ш., Чурилов Л.П. Основы общей патологии. Киев ,1998.- 430 с.

31. Новое о патогенезе мультисистемных заболеваний / Под ред. В.Т.Зайцева, Харьков: РИП «Оригинал», 1997. Т. 1. - С. 271.

32. Заморин О.В. Об ограниченности и обоснованности применения индекса Клейна // Деп. Ред. ж. Биофизика. М., 1987. 9. С. 28.10.87. N 7596-В87

33. Западнюк И.П, Западнюк В.И., Захария Е.А., Западнюк Б.В. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Монография. Киев: «Вища школа», 1983. - 363 с.

34. Калиман П.А. Возрастные особенности активности и некоторые механизмы регуляции НАДФ-зависимых дегидрогеназ в процессе развития и старения организма // Биохимия и физиология возрастного развития организма. К.: Наукова думка. - 1992. - С. 107-117.

35. Калуев А.В. Выполняют ли регуляторную роль в клетке взаимодействия активних форм кислорода с ДНК? // Укр. 6ioxiM. журн.1999. Т. 71, N. - С. 104- 108.

36. Карапетян А.В., Мкртчян Н.И. Fe-содержащая супероксиддисмутаза из Pseudomonas aeruginosa // Биохимия. 1996. - Т. 61, вып. 8. - С. 1408-1413.

37. Карнаухов В.Н. Функции каротиноидов объект биофизических исследований // Биофизика. - 2000. - Т. 45, вып. 1. - С. 364-384.

38. Китани К. Старение и печень. Прощание со старым мифом // Пробл. старения и долголетия. 1993. - Т. 3, N 2. - С. 150 - 159.

39. Юпщ I.M., Корда М.М., Посохова К.А., Шкробот C.I. BiKOBi особливост! лшщного статусу печшки щур1в за умов токсичного ураження тетрахлоретаном // Медична х1м1я 2003. - Т. 5, N 1. - С. 44 -47.

40. Юищ I.M. // Укр. 6ioxiM. журн. 1998. - Т. 70, N 8. - С. 106 - 112.

41. Ковш О .Я., Долмаш А.Р., Артюх М.А. Дискуссионные вопросы патогенеза холециститов и жёлчнокаменной болезни / Под ред. А.Ф.Блюгера // Успехи гепатологии. Рига: РМИ, 1980. - С. 206-215.

42. Коломоец Е.В., Калитка В.В. Особенности процессов пероксидного окисления липидов и антиоксидантной защиты у кур в онтогенезе и после воздействия антиоксидантами // Укр. 6ioxiM. журн. 2002. - Т. 74, N 5. - С. 62 -65.

43. Кольтовер В.К., Ноль Х.В. Возрастные особенности генерирования супероксидных радикалов митохондриями сердца крыс // Пробл. старения и долголетия. 1992. - Т. 2, N 4. - С. 355 - 361.

44. Кольтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: исторический очерк // Успехи геронтологии. 2000.- Вып.4.- С. 33-40.

45. Кричковская Л.В., Донченко Г.В., Чернышов С.И., Никитченко Ю.В., Жуков В.И. Природные антиоксиданты (биотехнологические, биологические и медицинские аспекты): Монография. Харьков: ОАО «Модель Вселенной», 2001. - 367 с.

46. Костюк В.А., Потапович А.И., Маслова Г.Т. Состояние антиокислительной защитной ситемы печени крыс при воздействии четыреххлористого углерода // Укр. биохим. журн. 1992. - Т. 64, N 3. - С. 111 - 115.

47. Кулинский В .И., Колесниченко Л.С. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы // Успехи, соврем, биологии. 1993. -Т. 113, вып. 1.-С. 107 - 122.

48. Кульчицкий O.K., Потапенко Р.И., Новикова С.Н. Особенности пероксидного окисления липидов в тканях головного мозга и печени старых крыс при стрессе // Укр. бкшм. журн. 2001. - Т. 73, N 4. - С. 73 - 78.

49. Кульчицкий O.K., Потапенко Р.И., Новикова С.Н. // Мед. х!м!я -2000.-Т. 2, N2.-С.

50. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш. шк,, 1980. - 293 с.

51. Ланкин В.З., Гуревич С.М., Бурлакова Е.Б. Изучение аскорбат-зависимого переокисления липидов тканей при помощи теста с 2-тиобарбитуровой кислотой. В кн.: Биоантиокислители. М.: Наука, 1975, с. 73-78.

52. Лемешко В.В. Система микросомального окисления при развитии и старении организма. Биохимия, 1980, т. 45, N11, с. 1964-1969.

53. Лемешко В.В. Возрастные перестройки структурно-функционального состояния мембранных редокс-систем: Автореф. дис.д-ра биол. наук: 03.00.027 Минск. Минск, 1983. - 36 с.

54. Лемешко В.В., Калиман П.А., Никитченко Ю.В. Перекисное окисление липидов в постъядерной и микросомальной фракциях гомогената печени крыс при старении организма // Биохимия. 1981. - Т. 46, N 4. - С. 620 -627.

55. Лемешко В.В., Калиман П.А., Никитченко Ю.В. Возрастные особенности перекисного окисления липидов печени крыс // Докл. АН УССР. Серия Б. 1981. - N 2. - С. 79 - 81.

56. Лемешко В.В., Калиман П.А., Белостоцкая Л.И. Липофусцин при развитии и старении организма // Биофизика. 1982. - Т. 27, N 4. - С. 733 -734.

57. Лемешко В.В., Никитченко Ю.В. Перекисное окисление липидов митохондрий печени крыс при старении и гипертиреозе // Биохимия. 1982. -Т. 47, N 5. - С. 752 - 759.

58. Лемешко В.В., Никитченко Ю.В. Липопереокисление мембран миокарда и его регуляция при старении миокарда // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1982. - Т. 94, N 11. - С. 12 - 14.

59. Лемешко В .В., Никитченко Ю.В., Калиман П.А. Возрастные особенности индукции перекисного окисления липидов в печени крыс при голодании // Укр. биохим. журн. 1982. - Т. 54, N 3. - С. 325 - 327.

60. Лемешко В.В., Никитченко Ю.В., Калиман П.А. Ферменты антиоксидантной системы печени крыс при старении // Укр. биохим. журн. -1983. -Т. 55,N5.-С. 523 -528.

61. Лемешко В.В., Никитченко Ю.В., Ланкин В.З. Ферменты утилизации гидропероксидов и Ог* ~ в миокарде крыс разного возраста // Бюлл. эксперим. биол. и мед .- 1985.- Т. 99, N 5. С. 563-565.

62. Лемешко В.В., Никитченко Ю.В., Свич И.В., Овсянников С. Е. Перекисное окисление липидов биомембран и его ферментативная регуляция при старении крыс // Укр. биох. журнал. 1987. - Т. 59, N2. - С. 50-57.

63. Литошенко А.Я., Хартвиг М. Митохондрии и старение // Пробл. старения и долголетия. 1998. - Т. 7, N 3. - С. 241-250.

64. Лобода Д.И., Бобров О.Е., Земскова М.В., Лигоненко А.Н. Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы приостром панкреатите и желчекаменной болезни // Врачебное дело. 1991. - N И.-С. 59-60.

65. Лукьянова Л.Д. Гепатоцит. Функционально-метаболические свойстваю М.: Наука. 1985.-271 с.

66. Лю Б.Н. Митохондрии и кислородно-перекисный механизм старения // Успехи современной биологии. 2002. - Т. 122, N 4. - С. 376 - 389.

67. Мамаев В.Б. Замедление старения антиоксидантами: медико-биологические аспекты: Препр. / АН СССР. Ин-т химической физики. -Черноголовка: 1988. 70 с.

68. Мамаев В.Б., Половой диморфизм смертности и антиоксидантный статус // Тезисы докладов IV конференции «Биоантиоксидант», Москва. -1992.-С. 122.

69. Матолшець О.М. BiKOBi особливосп антиоксидантшн системи у тварин з кадм!евим токсикозом // Мед. х1м1я. 2000. - Т. 2, N 1. - С. 44 - 48.

70. Милютин А.А. Структурно-функциональная перестройка биологических мембран и их роль в механизмах регуляции физиологических процессов при старении организма д.б.н. Минск, 1992,320 с.

71. Меркулов Г.А. Курс патологоанатомической техники. Л.: Медгиз. -1961.-280 с.

72. Мозжухина Т.Г., Потапенко Р.И., Орличенко Л.С., . Литошенко А .Я. Изучение характеристик генетического аппарата ядер и митохондрий клеток печени мышей при старении // Укр. биохим. журн. 1996. - Т. 68, N 4. - С. 84 - 90.

73. Моренков Э.Д., Петрова Л.П. Усиление пероксидации липидов в коре мозга крыс с возрастом, после пинеалэктомии и стресса // Цитология. -1999.-Т. 41, N9.-С. 788.

74. Морозов В.И. Участие активных форм кислорода в регуляторных процессах // Труды Международной конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии» С.Петербург: Изд-во СПбМЦ - 1998. - С. 398 -401.

75. Никитченко Ю.В. Изменение перекисного окисления липидов в почке крыс с возрастом // Вестник ХГУ, Харьков. 1984. - N 262. - С. 28 - 30.

76. Никитченко Ю.В. Возрастные изменения и особенности регуляции перекисного окисления липидов биомембран в печени и сердце крыс: Дисс. канд. биол. наук: 03.00.04. Харьков, 1985. - 153 с.

77. Никитченко Ю.В. Перекисное окисление липидов и его регуляция при действии факторов, влияющих на скорость старения // Биологический вестник. 1997. - Т. 1, N 2. - С. 26 - 31.

78. Никитченко Ю.В. Влияние калорийно-ограниченной диеты на ферментативную и неферментативную антиоксидантные системы эритроцитов и плазмы крови крыс разного возраста // Биологический вестник. 1998. - Т. 2, N 2. - С. 16 - 19.

79. Никитченко Ю.В., Овсянников С.Е. Влияние острого охлаждения на свободнорадикальное окисление липидов в органах молодых и старых крыс // В1сник Харшвського ушверситету N 497. Бюф1зичний вюник. 2000. - Вип. 2 (7). - С. 74 - 77.

80. Обухова Л.К. Вклад академика Н.М. Эмануэля в развитие отечественной геронтологии: свободнорадикальные механизмы в процессе старения // Успехи геронтол. 1999. - Вып. 3. - С. 27 - 31.

81. Обухова Л.К., Соловьева А.С. Радиационное старение: инверсия доминантности полушарий головного мозга мышей // Биологический вестник. 2000. - Т. 4., N 1 - 2. - С. 15 - 19.

82. Обухова JI.K., Эмануэль Н.М. Роль свободнорадикальных реакций в молекулярных механизмах старения живых организмов // Успехи химии. — 1983. Т. 52. - С. 353-372.

83. Обухова Л.К., Эмануэль Н.М. Молекулярные механизмы замедления старения антиоксидантами // Итого науки и техн. ВИНИТИ. Общие проблемы биологии. 1984. - Т. 4, N 4. - С. 44 - 80.

84. Парамонова Г.И., Губский Ю.И., Горюшко А.Г. и др. Влияние стресса на перекисное окисление липидов и физико-химическое состояние мембран эндоплазматического ретикулума печени взрослых и старых крыс // Укр. биохим. журн. 1996. - Т. 68, N 5. - G. 47 - 53.

85. Паранич А.В; Возрастные особенности распределения а-токоферола в организме белых крыс в норме и при пролонгировании жизни // Физиол. журн. 1985.-Т. 31,N2.-С. 190- 195.

86. Паранич А.В. Возрастные особенности становления и стабилизации антиокислительного гомеостаза у крыс // Биологический вестник. 1997. - Т. 1, N 2. - С. 43 - 47.

87. Паранич А.В., Копылов А.В., Диарра А. и др. Возрастные особенности антиокислительной активности тканей и тканевых липидов крыс // Пробл. старения и долголетия. 1994. - Т. 4, N 2. - С. 168 - 177.

88. Парашч А.В., Копилов А.В., Амщу Д1арра, Ншшела О.Г. Антиокислювальна актившсть тканин i лшдав у ujypiB pi3Horo BiKy // Ф1зюл. журн. 1995. - Т. 41, N. 1-2. - С. 29-35.

89. Паранич А.В., Погожих Н.И. Связь свободнорадикальных процессов с содержанием витамина Е в печени и надпочечниках белах крыс разного возраста // Физиол. журн. 1987. - Т. 33, N 6. - С. 75-77.

90. Парашч А.В., Черншова О.Ю. BiKOBi особливост1 вм1сту триглщерщцв, вторинних продугав перекисного окисления лшдав та а-токоферолу в тканинах самок niypiB // Физиол. журн. — 1992. Т. 38, N 3. - С. 85-89.

91. Паранич А.В., Чайкина JI.A. Возрастные особенности содержания витамеровтокоферола в сердце и печени крыс разного возраста в норме и при ишемии этих органов in vitro // Физиол. журн. 1991. - Т. 37, N 5. - С. 16-19.

92. Паранич А.В., Чайкина JI.A. Влияние алиментарных факторов на образование первичных и конечных продуктов окисления липидов // Т. 36, N6.-с. 51-55.

93. Паранич А.В., Чайкина JI.A., Трохименко А.Г. О влиянии слабого СВЧ-излучения на содержание жирорастворимых витаминов А и Е в тканях крыс // Биофизика. 1996. - Т. 41, вып. 2. - С. 517-519.

94. Ларина Е.В., Калиман П.А. Механизмы регуляции ферментов в онтогенезе. Харьков: Вища школа, 1978. - 204 с.

95. Саприн А.Н. Ферменты метаболизма и детоксикации ксенобиотиков // Успехи биологической химии 1991 - Т. 32.-С. 146 — 165.

96. Саркисов Д.С., Петрова ЮЛ. Микроскопическая техника. М.: Медицина. 1996. - 544 с.

97. Саундерс В.К. Пероксидазы и каталазы. В кн.: Неорганическая биохимия. - М., 1978. - т. 2. - С. 434-470.

98. Сахаутдинов В.Г., Пашаев И.В., Иванченко В.А. Роль перекисного окисления липидов в диагностике острого холецистита, осложненного желчным перитонитом // Клиническая хирургия. — 1981. N 9. - С. 55-56.

99. Серкиз Я.И., Чеботарев Е.Е., Барабой В.А., Орел В.Э., Чеботарев Г.Е. Хемилюминесценция крови в экспериментальной и клинической онкологии / К.: Наукова думка, 1984. - 184 с.

100. Синицкая Н.С., Хавинсон В.Х. Роль пептидов в свободнорадикальном окислении и старении организма // Успехи современной биологии. 2002. - Т. 122, N 6. - С. 557 - 568.

101. Скулачев В.П. Нефосфорилирующее дыхание как механизм, предотвращающий образование активных форм кислорода // Молекулярная биология. 1995. - Т. 29, N6. - С. 1199-1209

102. Соколовский В.В., Макаров В.Г., Тимофеева В.М. Возрастные и органотканевые особенности состояния антиоксидантной системы белых крыс // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1988. - Т. 24, N 5. - С. 771775.

103. Спиричев В.Б., Матусис И.И., Бронштейн JI.M. Витамин Е // Экспериментальная витаминология. — Минск: наука и техника, 1979.- С. 1857.

104. Сторож Н.М., Храпова Н.Г., Бурлакова Е.Б., Пирогов И.О., Луконькин И.Н., Цымбал И.Н. К механизму обеспечения антиоксидантного гомеостаза // Цитология. 1999. - Т. 41, N 9. - С. 828.

105. Ступина А.С., Бережков Н.В. Морфологические проявления компенсаторно-приспособительных процессов в печени при старении. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1988. N 3. - С. 380382.

106. Сурай П.Ф., Ионов И.А. Биохимические методы контроля метаболизма в органах и тканях птиц и их витаминной обеспеченности (методические рекомендации). Харьков. 1990. - 138 с.

107. Сурай П.Ф., Ионов И.А., Лысенко С.Н. Биологическая роль витамина Е в размножении человека и животных: 2. Самки сельскохозяйственных птиц // Биологический вестник. 1998. - Т. 2, N 2. - С. 3-7.

108. Таджиев И.Я. Значение гиперпероксидации в развитии» хронического бескаменного и калькулезного холецистита // Клиническая медицина. 1991.- N7. - С.70-74.

109. Терентьев П.В., Ростова Н.С. Практикум по биометрии. Л.: Изд-во ЛГУ, 1977.- 151 с.

110. Усатеико М.С. Влияние инсулиннедостаточности и гидрокортизона на активность NADP- и NAD-зависимых малатдегидрогеназ в печени и коре почек крыс // Вопр. мед. химии. 1974. - Т. 20, N 4. - С. 401 -406.

111. Фролыас В.В., Верхрадсышй Н.С., Мигован С.А. та шш. Модель хрошчного ситуащйного стресу та його вплив на темп старшня i тривалють життя щур1в // Oi3KWL журн. 1998. - Т. 44, N 5 - 6. - С. 7 - 13.

112. Фролькис В.В., Григоров Ю.Г., Писарчук К.Л., Медовар Б .Я. Влияние переедания в постнатальном периоде на старение и продолжительность жизни крыс // Пробл. старения и долголетия. 1992. - Т. 2,N4.-С. 339-347.

113. Фролькис В .В., Мурадян Х.К. Старение, эволюция и продление жизни. К.: Наукова думка, 1992. - 335 с.

114. Хавинсон В.X., Морозов В.Г., Анисимов В.Н. Влияние эпитала-мина на свободнорадикальные процессы у человека и животных // Успехи геронтол. 1999. - Вып. 3. - С. 133 - 142.

115. Хансон К.П. Роль апоптоза в старении и возрастной патологии // Успехи геронтол. 1999. - Вып. 3. - С. 103 - 110.

116. Четыркин С.В., Чернухина Л.А., Порохняк Л.А., Донченко Г.В., Кузьменко И.В., Клименко Е.П. Влияние малых доз радиации на содержание витаминов А и Е в печени крыс // Укр. биохим. журн. 1999. - Т. 71, N 2. - С. 38-42.

117. Четыркин С.В. Транспорт и метаболизм витамина А // Укр. 6ioxiM. журн. 2000. - Т. 72, N 3. - С. 12 - 24.

118. Чорновш А.В. Перекисне окисления лшшв та його патогенетична корекщя при шфекцшнш патологи (огляд лггератури) // AML VI. — 2000.- N 2.- С. 17-22.

119. Шаронов Б.П. Окисление белков, молекулярные механизмы и физиологические последствия // IV конференция «Биоантиоксидант» тезисы докладов 1992. - Т. 1 и 2, г. Москва, С. 43.

120. Швец В.Н., Давыдов В.В. Особенности модификации липидного состава миокарда при стрессе у взрослых и старых крыс в условиях стимуляции ферментативного перекисного окисления липидов // Пробл. старения и долголетия. 1994. - Т. 4, N 1. - С. 20 - 28.

121. Ames B.N., Shigenaga М.К., Hagen Т.М. Mitochondrial decay in aging // Biochem. Biophys. Acta 1995. - V. 1271. - P. 165-170.

122. Ames B.N. Endogenous oxidative DNA damage, aging and cancer // Free Rad. Res. Commun. 1989. - N7. - P. 121-128.

123. Amimoto Т., Matsura Т., Koyama S.Y. et al. Acetaminophen-induced hepatic injury in mice: The role of lipid peroxidation and effects of pretreatment with coenzyme Q(10) and a-tocopherol // Free Radic. Biol. Med. 1995. - V. 19, N2.-P. 169- 176.

124. Armstrong R.N. Mechanistic imperatives for the evolution of glutathione transferases // Current Opinion in Chemical Biology. 1998. - V. 2. -P. 618-623.

125. Arnaeiz S. L., Travacio M., Llesuy S., Boveris A. Hydrogen peroxide metabolism during peroxisome proliferation by fenofibrate // Biochim. Biophys. Acta. 1995.-V. 1272.-P. 175-180.

126. Arthur Y., Herbeth В., Guemouri L. Age-related variations of enzymatic defenses against free radicals and peroxides, in Chance B. Free Radicals and Aging. 1992. - P. 359-467.

127. Asakawa Т., Matsushita S. Coloring conditions of tiobarbituris asid test for detecting lipid hidroperoxides // Lipids. 1980. - V. 15, N 3. - P. 137-140.

128. Asuncion J.G., Milan A., Pla R. et al. Mitochondrial glutathione oxidation correlates with age-associated oxidative damage to mitochondrial DNA // FASEB J. 1996. - V. 10, N 2. - P. 333 - 338.

129. Babior B.M. Superoxide: a two-edged sword // Brazilian J. Med. and Biol. Res. 1997. - V. 30. - P. 141-155.

130. Baek B.S., Kwon H.J., Lee K.H. et al. Regional difference of ROS generation, lipid peroxidation and antioxidant enzyme activity in rat brain and their dietary modulation // Arch. Pharm. Res. 1999. - V. 22, N 4. - P. 361 - 366.

131. Bagchi M., Bagchi D., Patterson E.B. et al. Age-related changes in lipid peroxidation and antioxidant defense in Fischer 344 rats // Ann. N.Y. Acad. Sci.1996.-V. 793.-P. 449-452.

132. Ballinger С A, Mendis-Handagama C, Kalmar J R, Arnold R R, and Kinkade J M, Jr. Changes in the localization of catalase during differentiation of neutrophilic granulocytes // Blood. 1994. - N83. -P.2654-2668.

133. Barja G., Herrero A. Oxidative damage to mitochondrial DNA is inversely related to maximum life span in the heart and brain of mammals // FASEB J. 2000. - V. 14. - P. 312 - 318.

134. Bauman D.E., Brown R.E., Davis C.J. Pathways of fatty acid synthesis and reducing equivalent generation in mammary gland of rat, sow and oow // Arch. Biochem, Biophys. 1970. - V. 140, N 1.- C. 237-244.

135. Beckman K.B., Ames B.N. Oxidative decay of DNA // J. Biol. Chem.1997. V. 272. - P. 19633-19636.

136. Beckman K.B., Ames B.N. The free radical theory of aging matures // Physiological reviews. 1998. - V. 78, N2. - P. 547-581.

137. Berr С., Coundray С., Bonithon-Kopp С. et al. Demographic and cardiovascular risk factors in relation to antioxidant status: the EVA study // International J. for Vitamin and Nutrition Research. 1998. - N 01. - P. 3.

138. Berezhkov N.V. The structural bases of liver cell aging and age-related characteristics of their reactivity. // Arkhiv Patology. 1989. - N 51(11) - P. 4047.

139. Borras C., Sastre J., Garcia-Sala D., Lloret A., Pallardo F., Vina J. Mitochondria from females exhibit higher antioxidant gene expression and lower oxidative damage than males // Free Radical Research. 2003. - V. 34, N 5. — P. 546-552.

140. Boucher F., Tanguy S., Besse S. et al. Age-dependent changes in myocardial susceptibility to zero flow ischemia and reperfusion in isolated perfused rat hearts: relation to antioxidant status // Mech. Ageing and Dev. 1998. - V. 103, N3.-P. 301 -316.

141. Biirkle A. Poly(ADP-ribosyl)ation: a posttranslational protein modification linked with genome protection and mammalian longevity // Biogerontology-2000. V.1,N 1. -P. 41-46.

142. Card S.E., Tompkins S.F., Brien J.F. Ontogeny of the activity of alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenases in the liver and placenta of the guinea pig // Biochemical Pharmacology. 1989. - V. 38, N 15. - P. 25352541.

143. Cavazzoni M., Barogi S., Baracca A., Castelli G.P., Lenaz G. The effect of aging and an oxidative stress on peroxide levels and the mitochondrialmembrane potential in isolated rat hepatocytes // FEBS Letters 1999. - V. 449. -P. 53-56.

144. Ceballos-Picot I., Trivier J.M., Nicole A. Age-correlated modifications of copper-zinc dismutase and glutathione-related enzyme activities in human erythrocytes // Clin. Chem. 1992. - N38. - P. 66-70.

145. Chanock S. J., El B. J., Smith R. M., Babior В. M. The respiratory burst oxidase // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269. - P. 24519-24522.

146. Cini M., Moretti A. Studies on lipid peroxidation and protein oxidation in the aging brain //Neurobiology of Aging. 1995. - V. 16, N 1. - P. 53 -57.

147. Congy F. Bonnefont-Rousselot D., Dever S. Study of oxidative stress in the elderly // Press. Med. 1995. - N24. - P. 1115-1118.

148. Cristiano F., Haah J.B., Ianello R.C., Kola I. Changes in the levels of enzymes which modulate the antioxidant balance occur during aging and correlate with cellular damage // Mech. Ageing and Dev. 1995. - V. 80, N 2. - P. 93 - 105.

149. Crapo J. D., Oury Т., Rabouille C., Slot J. W., and Chang L. Y. Copper-zinc superoxide dismutase is primarily a cytosolic protein in human cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89. 1992. - P. 10405-10409.

150. David H, Uerlings I. Nuclear ultrastructure of binuclear and trinuclear hepatocytes. // Zentralbl. Pathol. 1992. - N 138(5). - P. 331-338.

151. Davies K. Protein modification by oxidants and the role of proteolytic enzymes // Biochemical Society Transactions. 1993. - V. 21. - P. 346-353.

152. Davies P, Drath D B, Engel E E, and Huber G L. The localization of catalase in the pulmonary alveolar macrophage // Lab. Invest. 1979. - N40. - P. 221-226.

153. Davies M.J., Fu S., Wang H., Dean R.T. Stable markers of oxidant damage to proteins and their application in the study of human disease // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V. 27, N11 -12. - P. 1151 -1163.

154. De A.K., Darad R. Age-associated changes in antioxidants and antioxidative enzymes in rats // Mech. Ageing and Dev. 1991. - V. 59, N 1 - 2. -P. 123 - 128.

155. Delattre J., Bonnefont-Rousselot Ph.D. Oxidative Stress, free radicals and aging // Biotech. Lab. International 1998. -V. 3, N 2. - P. 21-24.

156. Dhalla A.K., Singal P.K. Antioxidant changes in hypertrophied and failing guinea pig hearts // Am. J. Physiol. 1994. - V. 266, N4 - P 1280-1285.

157. Dizdaroglu M. Oxidative damage to DNA in mammalian chromatin // Mutat. Res.- 1992.-V. 275.-P. 331-342.

158. Dizdaroglu M. Measurement of radiation-induced damage to DNA at the molecular level // Int. J. Radiat. Biol. 1992. - V. 61. - P. 175-183.

159. Dogru-Abbasoglu S., Tamer-Toptani S., Ugurnal B. et al. Lipid peroxidation and antioxidant enzymes in livers and brains of aged rats // Mech. Ageing Dev. 1997. - V. 98, N 2. - P. 177 - 180.

160. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function // Physiol. Rev. 2002. - V 82. - P. 47-95.

161. Emanuel N.M. Kinetics and free-radical mechanisms of ageing and carcinogenesis // Age-related factors in carcinogenesis. Likhachev A., Anisimov V., Montesano R., Eds. (IARC Sci. Publ. N 58). IARC: Lyon. 1985. - P. 127 -149.

162. Emerit J., Klein J. M., Coutellier A. et al. Free radicals and lipid peroxidation in cell biology. Physiopathologic prospects // Pathol. Biol. 1991. — N39. -P. 316-327.

163. Engelmann G.L., Richardson A., Katz A., Fierer J.A. Age-related changes in isolated rat hepatocytes. Comparison of size, morphology, binucleation, and protein content. // Mech. Ageing Dev. 1981. - N 16(4) - P. 385-395.

164. Fahn S., Cohen G. The oxidant stress hypothesis in Parkinson's disease: evidence supporting it// Ann. Neurol. 1992. -N32.-P. 804-812.

165. Faist V., Koenig J., Hoeger H., Elmadfa I. Mitochondrial oxygen consumption, lipid peroxidation and antioxidant enzyme systems in skeletal muscle of senile dystrophic mice // Pflugers Arch. 1998. - V. 437, N 1. - P. 168 -171.

166. Finkel Т., Holbrook N.J. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing // Nature. 2000. - V. 408. - P. 239 - 247.

167. Flohe L. Glutathione: chemical, biochemical and medical aspects. Pt A: Coenzymes and cofactors. V. 3/ Eds Dolphin D. N.Y. 1989. - P. 643.

168. Forman H. J., Azzi A. On the virtual existence of superoxide anion in mitochondria; thoughts regarding its role in palhophysiology//FA.SEB J. 1997. - V. 11.-P. 374-375.

169. Fraga C.G., Shigenaga M.K., Park J.W. Oxidative damage to DNA during aging: 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in rat organ DNA and urine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1990.- V. 87.-P. 4533-4537.

170. Franke H., Goetze E. Electron microscopic studies on "light" and "dark" liver cells in regenerating rat liver. // Acta Biol Med Ger. 1966. - N17(1). -P. 99-115.

171. Fridovich I. Superoxide dismutases // Adv. Enzymol. Relat. Areas MoL Biol. 1986. - N58. - P. 61-97.

172. Fridovich I. Superoxide anion radical (O2" radical anion), superoxide dismutases, and related matters // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272. - P. 1851518517.

173. Fujita S., Chiba M., Suzu Т., Kitani K. Effect of senescence on the hepatic metabolism of drugs affecting the central nervous system in rats and mice // Amsterdam, Oxford, New York: Elsevier Science Publishers B.V., 1986. - P. 103-114.

174. Fulbert J. C., Cals M.J. Free radicals in clinical biology. Origin, pathogenic effect and defense mechanisms // Pathol. Biol. 1992. - V. 40. - P. 6677.

175. Garland D., Zigler J.S., Kinoshita J. Structure changes in bovine lens crystallins induced by ascorbate, metal and oxygen // Arch. Biochem. Biophys. -1986. V.251, N2. - P. 771-776.

176. Geremia E., Baratta D., Zafarana S. Antioxidant enzymatic systems in neuronal and glial cell-endriched fractions of rat brain during aging // Neurochem. Res. 1990. - V. 15. - P. 719-723.

177. Girotti A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effector action in biological systems // J. Lipid Research. 1998. - V. 39. - P. 1529-1542.

178. Glock G.E., McLean P. Survey studies on the properties and assay of glucose-6-phosphate dehydrogenase and 6-phosphogluconate dehydrogenase of rat liver // Biochem. J. 1953. - V. 55, N 3. - P. 404-408.

179. Godin D.V., Wohaieb S.A. Nutritional deficiency, starvation, and tissue antioxidant status // Free Radic. Biol, and Med. 1988. - V. 5, N 3. - P. 165 - 176.

180. Goeptar A. R., Scheerens H., Vermeulen N. P. Oxygen and xenobiotic reductase activities of cytochrome P450. Crit. Rev. Toxicol. — 1995. — V. 25. — P. 26-65.

181. Gonca A. K., Gonu 1 В., Akbulut H. Differential effects of pharmacological doses of melatonin on malondialdehyde and glutathione levels in young and old rats // Gerontology. 1999. - V. 45, N 2. - P. 67 - 71.

182. Grune T. Oxidative stress, aging and the proteasomal system // Biogerontology 2000. - V.l, N 1. - P. 31-40.

183. Gutteridge J. M., Halliwell B. The measurement and mechanism of lipid peroxidation in biological systems // Trends Biochem. Sci. 1990. - V. 15. -P. 129-135.

184. Haan J.B., Cristiano F., Iannello R.S., Kola I. Cu/Zn-superoxide dismutase and glutathione peroxidase during aging // Biochemistry and molecular biology international 1995. - V.35, N 6. - P. 1281-1297.

185. Hall D.M., Oberley T.D., Moseley P.M. et al. Caloric restriction improves thermotolerance and reduces hyperthermia-induced cellular damage in old rats // FASEB J. 2000. - V. 14. - P. 78 - 86.

186. Halliwell B, and Gutteridge J M C. Free radicals in biology and medicine. Oxford: University Press, 1999. - 936 p.

187. Halliwell В., Dizdaroglu M. Tile measurement of oxidative damage to DNA by HPLC and GC/MS techniques. Free Radical Res. Commun. 1992. - V. 16.-P. 75-87.

188. Harman D. Free-radical theory of aging: increasing the functional life span // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1994. - V. 717. - P. 1 -15.

189. Harman D. Free Radicals and Aging // Eds. I. Emerit and B. Chacne. Basel: Birkhauser. 1992.-P. 1-10.

190. Himeno S., Takekawa A., Toyoda H., Imura N. Tissue-specific expression of glutathione peroxidase gene in guinea pigs // Biochem. Biophys. Acta 1993. - V. 1173, N 3. - P. 283-288.

191. Holbrook N., Ikeyama S. Age-related decline in cellular response to oxidative stress: links to growth factor signaling pathways with common defects // Biochem. Pharmacol. 2002. - V. 64. - P. 999-1005.

192. Igarashi Т., Satoh Т., Ueno K., Kitagawa H. Species difference in glutathione level and glutathione related enzyme activities in rats, mice, guinea pigs and hamsters // J. Pharmacobio Dyn. 1983. - V. 6, N 12. - P. 941 - 949.

193. Igarashi Т., Satoh Т., Ueno К., Kitagawa H. Sex-related difference in the hepatic glutathione level and related enzyme activities in rats // J. Biochem. -1983. V. 93, N1.-P. 33 -36.

194. Imre S., Juhasz E. Effect of oxidative stress on inbred mice of different ages // Age. 1987. - V. 10, N 3. - P. 121.

195. Infante J. P. A function for the vitamin E metabolite K-tocopherol quinone as an essential enzyme cofactor for the mitochondrial fatty acid desaturases // FEBS J. 1999. - V. 446. - P. 1-5.

196. Ischiropoulos H., Nadziejko C.E., Kikkawa Y. Effect of aging on pulmonary superoxide dismutase // Mech. Ageing and Dev. 1990. - V. 52, N 1. -P. 11 - 26.

197. Jenkinson S.G., Duncan C.A., Bryan C.L., Lawrence R.A. Effects of age on rat glutathione metabolism // Amer. J. Med. Sci. 1991. - V. 302, N 6. - P. 347 - 352.

198. Ji L.L., Dillon D., Wu E. Alterations of antioxidant enzymes with aging in rat skeletal muscle and liver // Am. J. Physiol. 1990. - V. 258, N 4, Pt. 2. - P. R918-R923.

199. Jones M., Schichting R., Siegara C. P. Glutathione-S-transferase activities in rat liver: effect jf some factors influencing the metabolism of xenobiotions//Pharmasol. Res. Communs.- 1980.- V. 12,N2.-P. 115-128.

200. Jore D., Ferradini C., Patterson L.K. у and pulse radiolytic study of the antioxidant activity of vitamin E. // Radiat. Phys. Chem. 1986. - V.28, N 5/6. -P. 554-558.

201. Joseph J.A., Villalobos-Molina R., Denisova N., Erat S., Jimenez N., J. Strain. Increased sensitivity to oxidative stress and the loss of muscarinic receptor responsiveness in senescence // Ann. NY Acad. Sci. 1996. — V. 786. - P. 112119.

202. Kaliman P.A., Nikitchenko I.V., Sokol O.A., Strelchenko E.V. Regulation of heme oxygenase activity in rat liver during oxidative stress inducedby cobalt chloride and mercury chloride // Biochemistry (Moscow). 2001. - V. 66, N 1. - P. 72-82.л i

203. Kamath S.A., Narayan K.A. Interaction of Ca with endoplasmic reticulum of rat liver: a standart procedure for the isolation of rat liver microsomes. -Anal. Biochem., 1972, V. 48, N1, P. 53-61.

204. Kang J., Choi В., Kim S. Expression and characterization of recombinant human Cu, Zn-superoxide dismutase in Escherichia coli // J. Biochem. Mol. Biol. 1997. - B. 30, N1. - P. 60-65.

205. Koizumi A., Weindruch R., Walford R.L. Influences of dietary restriction and age on liver enzyme activities and lipid peroxidation in mice // J. Nutr. 1987. - V. 117,N2.-P. 361 -367.

206. Koster J. F., Sluiter W. Is increased tissue ferritin a risk factor for atherosclerosis and ischaemic heart disease? Br. Heart. J. — 1995. V. 73. - P. 208-209.

207. Laganiere S., Yu B.P. Anti-lipoperoxidative action of food restriction // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1987.-V. 145, N3,-P. 1185- 1191.

208. Laganiere S., Yu B.P. Effect of chronic food restriction in aging rats. I. Liver subcellular membranes // Mech. Ageing and Dev. 1989. - V. 48, N 3. - P. 207 - 219.

209. Laganiere S., Yu B.P. Effect of chronic food restriction in aging rats. II. Liver cytosolic antioxidants and related enzymes // Mech. Ageing and Dev. 1989. - V. 48, N3.-P. 221 -230.

210. Lake B. G. Mechanisms of hepatocarcinogenicity of peroxisome-proltferating drugs and chemicals // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1995. - V. 35.-P. 483-507.

211. Lasheras C., Huerta J.M., Gonzalez S. et al. Independent and interactive association of blood antioxidants and oxidative damage in elderly people // Free Radical Research. 2002. - V. 36, N 8. - P. 875-882.

212. Lass A., Sohal B.H., Weindruch R. et al. Caloric restriction prevents age-associated accrual of oxidative damage to mouse skeletal muscle mitochondria // Free Radic. Biol. Med. 1998. - V. 25, N 9. - P. 1089 - 1097.

213. Lautermann J., Crann SA.,McLaren J.,Schacht J. Glutathione-dependent antioxidant systems in the mammalian inner ear: effects of againg, ototoxic drugs and noise // Hear Res. 1997. - V. 114, N 1-2. - P. 75-82.

214. Leakey J.E.A., Cunny H.C., Bazare J. et al. Effects of aging and caloric restriction on hepatic drug metabolizing enzymes in the Fischer 344 rat. II: Effects on conjugating enzymes // Mech. Ageing and Dev. 1989. - V. 48, N 2. - P. 157 -166.

215. Lee H.C., Wei Y.H. Mitochondrial alterations, cellular response to oxidative stress and defective degradation of proteins in aging // Biogerontology. -2001.-V. 2,N4.-P. 231 -244.

216. Leeuwenburgh C., Fiebig R., Chandwaney R., Ji L.L. Aging and exercise training in skeletal muscle: responses of glutathione and antioxidant enzyme systems // Am. J. Physiol. 1994. - V. 267, N 2, Pt. 2. - P. R439 - R445.

217. Leeuwenburgh C., Hansen P., Shaish A. et al. Markers of protein oxidation by hydroxyl radical and reactive nitrogen species in tissues of aging rats // Am. J. Physiol. 1998. - V. 274. - P. R453 - R461.

218. Lopez-Torres M., Shindo Y., Packer L. Effect of age on antioxidants and molecular markers of oxidative damage in murine epidermis and dermis // J. Invest. Dermatol. 1994. - V. 102, N 4. - P. 476 - 480.

219. Luo Y., Roth C.S. The roles of dopamine oxidative stress and dopamine receptor signaling in aging and age-related neurodegeneration // Antioxidants. Redox Signal. 2000. - V. 2. - P. 449 - 460.

220. Lykkesfeldt J. Increased oxidative damage in vitamin С deficiency is accompanied by induction of ascorbic acid recycling capacity in young but not mature guinea pigs // Free Radical Research. 2002. - V. 36, N 5. - P. 567-574.

221. Lopez-Torres M., Perez-Campo R., Rojas C., Barja de Quiroga C. Sensitivity to in vitro lipid peroxidation in liver and brain of aged rats // Rev. Esp. Fisiol. 1992. - V. 48, N 3. - P. 191 - 196.

222. Liu R. H., Hotchkiss J. H. Potential genotoxicity of chronically elevated nitric oxide: a review // Mutat. Res. 1995. - V. 339. - P. 73-89.

223. Lykkesfeldt J., HagenT. M., Vinarsky V., Ames B.N. Age-associated decline in ascorbic acid concentration, recycling, and biosynthesis in rat hepatocytes reversal with (R)-a-lipoic acid supplementation // FASEB J. - 1998. -V. 12. - P. 1183-1189.

224. Leeuwenburgh C., Hansen P., Shaish A., Holloszy J., Heinecke J. Markers of protein oxidation by hydroxy 1 radical and reactive nitrogen species in tissues of aging rats // Am. J. Physiol. 1998. - V. 274. - P. 453-461.

225. Mannervik В., Carlberg J., Larson K. // Glutathione: chemical, biochemical and medical aspects. N.Y.: J. Wiley and Sons. 1989. - 475 p.

226. Marklund S., Norgens Son I:, Back O. Normal Cu-Zn-superoxide dismutase, Mn- superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase in Werner's syndrome // J. Gerontol. 1981. - V. .125 36, N 4. - P.405-409.

227. Marklund S. Human copper-containing superoxide dismutase of high molecular weight // Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 1982. - N79. - P. 7634-7638.

228. Marklund S. Extracellular superoxide dismutase in human tissues and human cell lines // J. Clin. Invest. 1984. - N74. - P. 1398-1403.

229. Massie H.R., Aiello U.R., Banziger U. Iron accumulation and lipid peroxidation in aging C57BL/GR mice. // Exp. Gerontol. 1983. - V. 18. - P. 277-285.

230. Matsuo M., Gomi F., Dooley M.M. Age-related alterations in antioxidant capacity and lipid peroxidation in brain liver and lung homogenates of normal and vitamin E-deficient rat // Mech. Ageing and Dev. 1992. - V. 64, N 3. -P. 273 - 292.

231. Mecocci P., MacGarvey U., Kaufman A.E. Oxidative damage to mitochondrial DNA shows marked age-dependent increases in human brain // Ann.Neurol. 1993.-N34.-P. 609-616.

232. Miller S.I. Protein determination for large numbers of sampes // Anal. Chem. 1959. - V. 31, N 5. - P. 964 - 966.

233. Montecinos L., Ramirez В., Lisboa C., Borzone G. Peroxide metabolism on respiratory muscles: effect of growth, maturation and aging // Rev. Med. Chil. 1999. - V. 127, N3. - P. 269 - 275.

234. Mooradian A.D., Uko-eninn A. Age-related changes in the antioxidative potential of cerebral microvessels // Brain Res. 1995. - V. 671, N 1. -P. 159 - 163.

235. Mooradian A.D., Lung C.C. , Shah G. et al. Age-related changes intissue content of malondialdehyde-modified proteins // Life Sciences. 1994. -V. 55, N20.-P. 1561 -566.

236. Moslem M. T. Reactive oxygen species in normal physiology, cell injuiy and phagocytosis // Adv. Exp. Med. Biol. 1994. - V. 366. - P. 17-27.

237. Muscari C., Giaccari A., Giordano E. Role of reactive oxygen species in cardiovascular aging // Mol. Cell Biochem. 1996. -N160. - P. 159-166.

238. Muscari C., Frascaro M., Guarnieri C., Caldarera C.M. Mitochondrial function and superoxide generation from submitochondrial particles of aged rat hearts // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - V. 1015, N 2. - P. 200 - 204.

239. Nikitchenko Yu.V., Tregubova N.V., Bondar V.V. Age-dependent features of lipid peroxidation regulation in blood of rats / / School of Fund. Med. J.- 1998.- V.4, N2. P. 19-21.

240. Nistico G., Ciriolo M.R., Fiskin K. NGF restores decrease in catalase activity and increases superoxide dismutase and glutathione peroxidase activity in the brain of aged rats // Free Radic. Biol. Med. 1992. - V. 12, N3. - P. 177-181.

241. Ozawa T. Genetic and functional changes in mitochondria associated with aging // Physiol. Rev. 1997. - V. 77, N2. - P. 425-464.

242. Pacifici R.E., Davies K. Protein, lipid and DNA repair systems in oxidative stress. The free radical theory of aging revisited // Gerontology. 1991. -N37.-P. 166-180.

243. Pansarasa O., Bertorelli L., Vecchiet J. et al. Age-dependent changes of antioxidant activities and markers of free radical damage in human skeletal muscle // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V. 27, N. 5 - 6. - P. 617 - 622.

244. Papa S., Skulachev V.P. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging//Mol. Cell. Biochem. 1997. - V. 174. - P. 305 - 319.

245. V 264. Pereira В., Rosa L.F.B.P.S., Safi D.A. et al. Control of superoxidedismutase, catalase and glutathione peroxidase activities in rat lymphoid organs by thyroid hormones // J. Endocrinol. 1994. - V. 140, N 1. - P. 73 - 77.•

246. Perez R., Lopez M., Barja Q.G. Aging and lung antioxidant enzymes, , glutathione, and lipid peroxidation in the rat // Free Radic. Biol. Med. 1991. - V. i; 10, N 1. - P. 35 - 39.

247. Pieri C., Falasca M., Moroni F. et al. Antioxidant enzymes in erythrocytes from old and diet restricted old rats // Boll. Soc. Ital. Biol. Sper. -1990. V. 66, N 10. - P. 909 - 914.

248. Pietarinen-Runtti P. Regulation of antioxidant defense in cells derived from the human lung: Academic dissertation. Helsinki, 2000. - 66 p.

249. Poubell P., Chaintreuil J., Bensadoun J. Plasma lipoperoxides and aging. Critical assessment of the thiobarbituric acid method for the measurement of lipoperoxides and malondialdehyde // Biomed. Pharmacother. 1982. - N36. - P. 164-166.

250. Radi R, Turrens J. F., Chang L.Y., Bush K.M., Crapo J.D. and Freeman B.A. Detection of catalase in rat heart mitochondria // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266.-P. 22028-22034.

251. Rao G., Xia E., Richardson A. Effect of age on the expression of antioxidant enzymes in male Fischer 344 rats // Mech. Ageing and Dev. 1990. -V. 53, N 1. - P. 49 - 60.

252. Rao G., Xia E., Nadakavukaren M.J., Ricardson A. Effect of dietary restriction on the age-dependent changes in the expression of antioxidant enzymes in rat liver // J. Nutr. 1990. - V. 120, N 6. - P. 602 - 609.

253. Rickett G. M., Kelly F.J. Developmental expression of antioxidant enzymes in guinea pig lung and liver // Development V. 108, N2. - P. 331-336.

254. Rikans L.E., Hornbrook K.R. Lipid peroxidation, antioxidant protection and aging // Biochim. et Biophys. Acta. 1997. - V. 1362, N 2-3. - P. 116 - 127.

255. Rikans L.E., Moore D.R., Snowden C.D. Sex-dependent differences in the effects of aging on antioxidant defense mechanisms of rat liver // Biochim. et Biophys. Acta. Gen. Subj. 1991. - V. 1074, N 1. - P. 195 - 200.

256. Rodriguez-Martinez M.A., Alonso M.J., Redondo J. et al. Role of lipid peroxidation and the glutathione-dependent antioxidant system in the impairment of endothelium-dependent relaxations with age // Br. J. Pharmacol. 1998. - V. 123, N1.-P. 113 - 121.

257. Rusu C. Aspects of lipid peroxidation in rat liver microsomes in relation to age // Rom. J. Gerontol. Geriatr. 1982. - V. 3, N 1. - P. 81 - 88.

258. Sandstrom J, Karlsson K, Edlund T, and Marklund S L. Heparin-affinity patterns and composition of extracellular superoxide dismutase in human plasma and tissues // Biochem. J. 1993. -V. 294. - P. 853-857.

259. Saxon D.M., Snyder D.L., Chen L.H. Effects of age and food restriction on antioxidant parameters in rats // FASEB J. 1990. - V. 4, N 3. - P. 1566 - 1571.

260. Sevanian A. Lipid damage and repair. // Oxidative damage and repair. Chemical, biological and medical aspects. Oxford, UK, Pergamon press. 1991. -P. 543-549.

261. Shah P.C., Brolin R.E., Amenta P.S., Deshmukh D.R. Effect of aging on intestinal ischemia and reperfusion injury // Mech. Ageing and Dev. 1999. - V. 107, N 1. - P. 37 - 50.

262. Shimizu M., Morita S. Effects fasting on cadmium toxicity, glutathione metabolism, and metallothionein synthesis in rats // Toxicol, and Appl. Pharmacol. 1990. - V. 103, N1.-P. 28-39.

263. Sies H. Oxidative stress. L.: Acad, press. 1985. - 507 p.

264. Sies H., Ketterer B. Glutathione conjugation: mechanisms and biological significance. L.: Acad, press. — 1988. — 480 p.

265. Sies H., Moss K.M. A roll of mitochondrial glutathione peroxidase in modulating mitochondrial oxidation in liver// Eur. J.Biohim. 1979. -V. 84, N 2, -P. 377-383.

266. Sohal R.S., Ku H.H., Agarwal S. et al. Oxidative damage, mitochondrial oxidant generation and antioxidant defenses during aging and in response to food restriction in the mouse // Mech. Ageing and Dev. 1994. - V. 74,N 1.-2.- P. 121 - 133.

267. Semsei I., Rao G., Richardson A. Changes in the expression of superoxide dismutase and catalase as a function of age and dietary restriction // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1989. - V. 164, N 2. - P. 620 - 625.

268. Stadtman E.R. Metal ion-catalyzed oxidation of proteins. Biochemical mechanism and biological consequences // Free Rad. Biol. Med. 1990. - N9. - P. 315-325.

269. Stadtman E.R. Protein oxidation in aging and age-related diseases // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2001. - V. 928. - P. 22 - 38.

270. Stio M., Iantomasi Т., Farilli F. et al. Glutathione metabolism in heart and liver of the aging rat // Biochem. Cell Biol. 1993. - V. 72. - P. 58 - 61.

271. Svensson L., Wu C., Hulthe P. et al. Effect of ageing on extracellular ascorbate concentration in rat brain / // Brain Res. 1993. - V. 609, N 1 - 2. - P. 36 -40.

272. Tian L., Cai Q., Wei H. Alterations of antioxidant enzymes and oxidative damage to macromolecules in different organs of rats during aging // Free Radic. Biol. Med. 1998. - V. 24, N 9. - P. 1477 - 1484.

273. Troen B. R. The Biology of Aging // J. Medicine. 2003. - V. 70, N l.-P. 3-22.

274. Tsuchihashi H., Kigoshi M., Iwatsuki M., Niki E. Action of p-carotene as an antioxidant against lipid peroxidation // Archives of Biochem. and Biophys. 1995.-V. 323, N1, P. 137-147.

275. Venditti P., Balestrieri M., Meo S. D., Leo T. D. Effect of thyroid state on lipid peroxidation, antioxidant defences and susceptibility to oxidative stress in rat tissues // J. Endocrinol. 1997. - V. 115. - P. 151 - 157.

276. Vercellotti G.M. A balanced budget evaluating the iron economy. Clin. Chem. - 1996. - V. 42. - P. 657.

277. Virag L., Imre S. Auto-oxidation test for the determination of lipid peroxidation capacity of liver tissue homogenates of young and old mice // Z. Gerontol. 1991. - V. 24, N 6. - P. 319 - 322.

278. Vlessis A.A., Mela-Riker L. Perinatal development of heart, kidney and liver mitochondrial antioxidant defense // Pediatr. Res. 1989. - V. 26, N 3. — P. 220-226.

279. Wei Y.H., Kao S.H., Lee H.C. Simultaneous increase of mitochondrial DNA deletions and lipid peroxidation in human aging // Ann. N.Y. Acad. Sci. -1996.-V. 786.-P. 24-43.

280. Wendel'A. Enzymatic basis of detoxication // Ed. Jakoby W.B.N.Y.: Acad, press. 1980. - p. 333.

281. Wohaieb S.A., Godin D.V. Starvation-related alterations in free radical tissue defense mechanisms in rats // Diabetes. 1987. - V. 36, N 2. - P. 169 - 173.

282. Wood P. M. The potential diagram for oxygen at pH 7 // Biochem. J. -1988.-V. 253.-P. 287-289.

283. Xia E., Rao G., Van Remmen H. et al. Activities of antioxidant enzymes in various tissues of male Fischer 344 rats are altered by food restriction //J.Nutr.- 1995.-V. 125, N2.-P. 195 -201.

284. Yamamoto K., Volkl A., Hashimoto Т., Fahimi H.D. Catalase in guinea pig hepatocytes is localized in cytoplasm, nuclear matrix and peroxisomes // Eur. J. Cell. Biol. 1988. - V. 46, N 1. - P. 129-135.

285. Yan L.-J., Sohal R.S. Mitochondrial adenine nucleotide translocase is modified oxidatively during aging // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1998. - V. 95, N22.-P. 12896-12901.

286. Yanagawa K., Takeda H., Matsumiya Т., Takasaki M. Age-related change in the alphatocopherolquinone / alphatocopherol ratio in the rat erythrocyte membrane // Nippon Ronen Igakkai Zasshi. 1999. - V. 36, N 5. - P. 335 - 341.

287. Yu B.P. Cellular defenses against damage from reactive oxygen species // Physiol. Rev. 1994. - V. 74, N 1. - P. 139 - 162.

288. Yu B.P., Chen J.J., Kang C.M. et al. Mitochondrial aging and lipoperoxidative products // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1996. - V. 786. - P. 44 - 56.

289. Yuan H.T., В ingle C.D., Kelly F.J. Differential patterns of antioxidant enzyme mRNA expression in guinea pig lung and liver during development // Biochim. Biophys. Acta. 1996.-V. 1305,N3.-P. 163-171.

290. Zainal T.A., Oberley T.D., Allison D.B. et al. Caloric restriction of rhesus monkeys lowers oxidative damage in skeletal muscle // FASEB J. 2000. -V. 14.-P. 1825- 1836.

291. Zhu W., Fung P.C. The roles played by crucial free radicals like lipid free radicals, nitric oxide, and enzymes NOS and NADPH in ССЦ-induced acute liver injury of mice // Free Radic. Biol. Med. 2000. - V. 29 (9), N 1. - P. 870 -880.

292. Zloch Z., Ginter E. Influence of age on the kinetics of vitamin С catabolism in quinea-pigs // Physiol, bohemosl. 1988. - V. 37, N 5. - P. 459-466.

Информация о работе

Трегубова, Нина Владимировна
кандидата биологических наук
Ставрополь, 2004
ВАК 03.00.13

Диссертация

Состояние прооксидантно-антиоксидантной системы печени и крови морских свинок разного возраста в норме и при экспериментальном холецистите - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы