Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

СОДЕРЖАНИЕ АЗОТИСТЫХ СОЕДИНЕНИИ И ФОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА ЗЕРНА ПШЕНИЦЫ И ФАСОЛИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЕСПЕЧЕННОСТИ МАГНИЕМ И КАЛЬЦИЕМ

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "СОДЕРЖАНИЕ АЗОТИСТЫХ СОЕДИНЕНИИ И ФОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА ЗЕРНА ПШЕНИЦЫ И ФАСОЛИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЕСПЕЧЕННОСТИ МАГНИЕМ И КАЛЬЦИЕМ"

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА

Михаил Николаевич КОНДРАТЬЕВ

СОДЕРЖАНИЕ АЗОТИСТЫХ СОЕДИНЕНИИ

И ФОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА ЗЕРНА ПШЕНИЦЫ И ФАСОЛИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЕСПЕЧЕННОСТИ МАГНИЕМ И КАЛЬЦИЕМ

На правах рукописи

(Специальность 03.00.04 — биохимия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА — 1975

УХ' ■<..{.(.р-р о.(. <.с-

"V /V-

/ССХ-С- Сг О с-С С - Сог С с-а-С

Диссертационная работа выполнена на кафедре агрономической и биологической химии и Агрохимической опытной станции им. Д. Н. Прянишникова Московской ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственной академии им. К- А. Тимирязева.

Диссертация изложена на 148 страницах, содержит 4 таблицы и 53 рисунка. Список использованной литературы включает 382 'наименования, в т. ч. 134 иностранных авторов.

Научный руководитель — доктор биологических наук профессор Плешков Б. П.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук 3. И. Журбицкий, доктор биологических наук А. Е. Петров-Спиридонов.

Ведущее предприятие — Всесоюзный научно-исследовательский институт удобрений и агропочвоведения им. Д. Н. Прянишникова.

Автореферат разослан <«^¿2» ^1975 г

Защита диссертации состоится на заседании Ученого совета факультета почвоведения и агрохимии ТСХА «¿Я?- » 1976 г. & -/<530 гсгс ' '

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ ТСХА (корпус 10).

Просим Вас принять участие в работе Совета или прислать письменный отзыв по данному реферату, заверенный печатью в 2-х экземплярах, по адресу: 125008, Москва А-8, ул. Тимирязевская 47, корпус 8, Ученый совет ТСХА.

Ученый секретарь Сов.етЯ О^у^'

доце нт С--"С^Г

Ф. А. Девочкин

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время одной из важнейших проблем является : увеличение производства растительного белка,и повышение его.биологической ценности. Многочисленными исследованиями установлена значительная изменчивость содержания белка : в растениях не только в зависимости от сортовых особенностей растений, но и иод влиянием свойств почвы и минеральных удобрений (Княгиничев, 1951; Плешков, 1967; Павлов, 1967; Мосолов, 1968).; : : С - - .

> Величину урожая иепу химический состав определяют био-' химические процессы," протекающие в растениях, поэтому внесение той или иной дозы удобрения, и особенно соотношение между основными элементами питания в удобрениях, должны быть физиологически обоснованы (Журбицкий,"Вахмистров, •1964).-. . • Ч .

Па необходимость, создания - определённого , соотношения между магнием и.кальцием, а также одног.и двухвалентными гкатионами в питательной;среде для получения максимальной продуктивности растений указывается.п исследованиях Д. Н'. Прянишникова (1928, 1939), Петербургского (1967,-1968), Петрова-Спиридонова (1963, 1967, 1968),"Крастиной (1973, .1974).:, ... ' „ . -

Исследования;но, изучению роли магния и "кальция в азотном обмене растений' весьма ограничены; при этом,\ главным образом, они выполнялись в-системах in ;Vitro. Показано, на. пример, что ионы магния и кальция играют важную роль в активации нитратредуцирующих ферментов - (Старцева, 1968; Приходько, Нижко/1973f Paulsen et al., 1968,41969), глутамин-синтетазы (Евстигнеева и др., 1971, „ 1972, 1973, 1974; O'Neal et al., 1973), глутаматдегидрогеназы (Paulsen et al., 1969; Cooper et al., 1974), глута'мат-аспартат-аминотрансфера-3bf(Ellis et. al., 1961; Cooper et al., 1974), а также в целом ряде реакций надмолекулярном уровне в процессе. :биосинтеза белка (Киселев и др., 1971). '

Другими исследованиями выявлено, что кальций нередко является антагонистом магния, ингибируя те ферменты, которые активируются магнием (Лндреенко, 1967; Гении и др., .1972; Young et al., 1963). Широко известны антагонистические.

-—- ■ .1 :;

сЯШШ

азаимоотношения'между магнием и.кальцием при поглощении их корнями', растении (Кедров-Зихман, 1960; Мазаева,. 1960; *Л\аг5шцкий, 1967; Трещов и др., 1968).

В этой связи представляется" весьма важным найтилтрин-, ципиальные зависимости между условиями питания;магнием и кальцием и процессами обмена веществ в растении,лфи,которых формируются высокие урожаи с хорошим качеством., ^ Целью-настоящей работы являлось изучение влйяния.обе-спеченности растении магнием и кальцием на содержание об-, щего азота и ¿го фракций, а также форм небелкового-азота на формирование и состав фонда свободных аминокислот в ие-гетативных органах растений и отток их в зерно. Кроме того, исследовался фракционный'состав белков зерна в процессе со-. зревания,их биологическая и . пищевая ценность. . ■

" Условия проведения опытов и методика исследований : - -

Исследования проводились в вегетационных опытах (песчаные культуры) с.пшеницей'Лютесценс-758 и фасолью Щедрая' на питательной смеси Арнона-Хогланда.

Для .решения поставленных задач - были.- проведены два опытагпо;изучению влияния,нарастающего во.времени дефицита магния и кальция на азотный обмен у пшеницы й фасоли, и четыре вегетационных опыта по изучению влияния соотношений между магнием и кальцием в питательной среде "на состав азотистых соединений В:3ерие! ^'¿¿¿Г^л ^ ~

■* Первая «часть наших7 исследований, проводилась" с использованием 0,25 смеси Арнона-Хогланда 'и заключала в* себе следующие варианты: 1 — контроль" (1/4 смеси Лрнона-Хогланда);" 2 — смесь без Мк; 3 — смесь - без Са; 4 ^ смесь без и Са.

В вариантах 2, 3, 4 магний и кальций заменялись эквивалентными количествами натрия в форме солей тех же кислот.

Изучение состава азотистых соединений пшеницы и фасоли в условиях различных соотношений магния и кальция в питательной среде проводили в опытах,"заложенных по следующей схеме (табл. 1). -"¿гу.-' V* *

Повторность'опытов при учете;; урожая' пшеницы и фаео-, ли — 5-кратная. ■

:В опытах по изучению влияния дефицита магния и кальция: на-азотный обмен растений пробы ф^оли^дтбирались.каждые дней с момента поипления~11ерпого листа, а пшеницы — при появлении т7шичшН~признаков;магниевой-!! кальциевой недостаточности (ЗО-^^евные^р^хения). При изучении, влияния соотношения М"й и Са на состав-азотистых соединений вегетативных органов и зерна фасоли и пшеницы пробыг брались улпненицы в'фазы начала формирования зерна (5-й день после цветения), молочной (опыт 1—15-й день; опыт 2— 12-й

Таблица 1

Схема проведения опытов по изучению соотношения-М£ и Са в питательной среде , -........ ■■■■•-• •

•Vi варианта

Отношение Mg : Ca . (мэкв/10 кг)

Обозначения вариантов

Серия.

Высокая обеспеченность азотом (полная смесь Лрнона-Хогланда) (Mg+Ca) :К = 1 : 1

Опыт 1 1

- 2

3

4

■■■.■* 5 G

,10:00 25:75 40 : G0

55:45 70:30 85: 15

Са-вариант . контроль

Mg-вариант

Ca-cejiim

Mg-серия

Средняя, обеспеченность азотом (1/2 смеси Лрнона-Хогланда) V Л (MR+Ca) :К=3: 1 ,....••;

Опыт 2 1

. 2 3

•38: 112 60 : 90 105 :45 -

Са-вариант - контроль ' Mg-вариант

день), тестообразной (опыт 1 — 21-й день) . восковой (опыт 2 — 23-й день) и уборочной (опыт 1 — 36-й день, опыт 2 — 30-й день; у фасоли — в фазы,.начала формирования зерна (5-й день после цветения)зеленой' (опыт 1 — 18-й день, опыт-2 — :15-й день), желто-зеленой'(опыт 1 — 29-й день, опыт 2—25:и день) и уборочной" (опыт 1 — 39-й день, опыт 2 —32-й ..день); спелости. Пробы при взятии фиксировались-жидким азотом и лпофильно высушивались. " . - - : . . ; Содержание общего и-небелкового азота определяли по методу Кьельдаля-Иодльбауэра, белковый , азот — методом Баршптейна но разности между общим и небелковым азотом. Формы небелкового азота определяли методом Конвея (Петербургский, 1968). -.....

i „• Содержание свободных: -аминокислот и аминокислотный ^состав гидролизатов суммарных белков определяли на аминокислотном анализаторе Hd—1200Е. Гидролиз препаратов бел-;ков.проводился 6н HCl в запаянных ампулах при 105°С в течение 24 часов и соотношении белок : кислота' 1 : 400. -. ¡ч1 Свободные аминокислоты определяли в надосадочной жидкости после обработки растительного материала боратным буфером (pH—12,3), осаждення белков трихлоруксусной кислотой и двойной очистки на колонках, заполненных катионитом

' КУ-2.~ Фракционирование суммарных белков проводили по ■ методике Осборна (Плешков,. 1968) с экстракцией труднорастворимых белков последовательно карбонатным (рН 9,35) г •и боратнымЦрН 12,3) буферами. г г - 1}

. - Определение биологической и пищевой ценности белков ^

■ зерна пшеницы и фасоли проводили расчетным - методом , (Кбграсгу"е£'а1., 1961).

СОДЕРЖАНИЕ И СОСТАВ АЗОТИСТЫХ СОЕДИНЕНИЙ ПРИ ИСКЛЮЧЕНИИ МАГНИЯ И КАЛЬЦИЯ ИЗ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

: 1. Общий азот и его фракции в растениях пшеницы и фасоли

Одним из методов выявления роли питательных элементов в метаболических процессах," : протекающих в растении,: является изучение обмена веществ при создании у них дефицита этих элементов. . .^ • ~ ' - " : ;

Фасоль'. Исследования показали, что уже)на 7-й день с мо-• мента появления первого "листа наблюдалось заметное: отста-. - вание в росте и накоплений растительной *. массы (растениями

■ фасоли вариантов без кальция, а также без магния и кальция • в питательной "среде (рис. 1 А) ¿Отсутствие магния в питательной среде отражалось на развитии корней с.третьей недели роста растеншЦ . . ; . , " ■

: В'началб""своего развития фасоль слабо реагировала на отсутствие магния в питательной среде, так как для начала роста количества магния, содержащегося в семенах, было достаточно. Кальций необходим фасоли с,первых дней ее роста . .и развития.- - ; -

■ В_листьях растений всех опытных вариантов, а такж^в.кор; ^_]ШХ_фасоли ¿¡рн дефиците магния уменьшение относительного содержания общего азота на единицу сухого вещества при сравнении с растениями, выращенными на полной питательной смеси,:происходило заметно : медленнее^в-результате чего на 28-й день Г содержание в них : азота было в 1,5—2 раза выше, чем в контроле (рис. 1Б). В корнях 28-дневных растений, вы: . ращенных на питательной смеси без кальция, а также_магиия

: п кальция,, содержание азота было в 2—4 раза_вышалр

сравнению с контролем.

' При рассмотрении внутренних механизмов жизнедеятель-«ности растений' можно было ожидать, что дефицит магния .и кальция,. в первую очередь, отразится , на синтезе , белков, так как со всей очевидностью установлено, что кальций и, особен-' но,'магний являются необходимыми факторами для нормального хода ряда реакций их синтеза на молекулярном, уровне (Киселев и др., 1971).

• Полученные данные (рис. 1В) показывают, что в условиях нарастающего во времени" дефицита магния » кальция происходило резкое^^меиьшенис-содержания-белкорого-азохд, np'iij-этом дефицит, магния в большей степени отразилсяу^его со< держании в листьях; растений, а кальция — в корнях/^ Наи-^ меньшее содержание белкового азота в листьях и корнях фасоли отмечалось|П£и одновременном отсутствии Mg и Са|в питательной среде. .: • " ' - ^ ^- ' • , . ;

Пшеница. Исследования по выявлению роли магния и кальция в накоплении общего азота и его фракций растениями пшеницы проводились/на 30-дневных проростках после появления заметных признаков магниевой и кальциевой недрста-. точностц](Мазаева, 1951; Магницкий, 1956; Helms, 1971).

Дефицит Mg и Са в растениях менее резко затрагивал азотный обмен у пшеницы по сравнению с фасолью;

Тем не менее, совершенно, четко • выявилось, что, как и у . растений фасоли, при отсутствии' магния и кальция в питательной среде уменьшалось"содержание белкового азота и возрастала доля небелкового,[резко уменьшалось отношение белковый N: небелковый Ж (табл.: 2). * ••■V. Г "

. . ' - Таблица 2

Содержание общего азота и его фракций : • "

" ч ■ ■ ■ . ч в проростках пшеницы .. .. . "", *".

• Корни гос- Надземная масса

- * Фракции азота конт- без без конт- без „ без

роль Мй Са роль МВ Са

N общий (г/о от сух. в-ва) . . . 3,60 3,37 3,40. "4,82 3,76 3,93

N белковый (% от сух. в-ва) . . 2,99 2,74 - 2,57 4,32 2,81 3,34

N - небелкозый (% 5 от сух. в-ва) . 0,61 0,63 0,83 0,50 0,95 0,59

' . белковый N " . —

Отношение —7-¡Г"Г!— ■■:".'" небелковый N . .■ 4,9 : 4,4 3,1 8,6 - 3,0 5.7

Так же, как и в опытах с фасолью, влияние дефицита маг- -ния на содержание1 фракций общего азота сильней проявлялось в .надземной массе, а кальция— в корнях.1

2. Формы небелкового азота в растениях пшеницы и фасоли

Фасоль. В течение: первых семи" дней роста в корнях и листьях растений, выращенных без внесения магния и кальция " в питательную среду,¿содержание нитратов было в 1.5—2 раза - меньше по сравнению с контрольными растениями, что объ-~ яснялось, очевидно, воздействием, дефицита у растений,на-званных катионов нд_поглотительные механизмы корневой .^'системы (рис. 2)7~В течение последующих;трех недель экспе-

:римента содержание нитратов;у опытных растении резко возрастало, так как в-^случае дефицита магния или кальция, как выявлено в системах in vitro,.существенно.снижается"активность нитрат- и нитритредуктазы_ДРаи1зеп>Harper,1968). Сле-.. довательно. 1 накапливавшийся в корнях и листьях-/растений фасоли аммиак (рис.2) имел эндогенное происхождение^] - -" ' (ЗДеньшение содержания _нитратов_в корнях .28-дневных , растений,"выращенных на питательной смеси при одновременном исключении магния и кальция, предпочтительно объяснить -] i х~п е р е м е щ е н иё м~сГт plfnc пи р а ц и о н н ы м током в листья фасоли^ (рис. 2). Общую тенденцию к накоплению нитратов у растений, выращенных на питательной среде без магния илй:кальция, можно объяснить также ингибир9ванием нитратредуктазы аммиаком (Евстигнеева, 1970),~который в значительном коли- > честпе содержался и растениях". . "

-. ПшёницаУ У 30-дневных растений пшеницы,дефицит магния увеличивал содержание нитратов в надземной массе и корнях, а дефицит кальция только в корнях (табл. 3). . 4

. ■ - ;г\:','"■ ,, Таблица.

. Содержание аммиачного и нитратного азота и свободных аминокислот .^ с .' в проростках пшеницы (мг на 100 г сух. в-ва), ■..■■■.■-'.•

^Соединения ~.. . азота Надземная масса Корни

контроль без Mg без-Са контроль . без Mr ' без Са '

Нитраты Аммиак г -Аминокислоты 42 25 5800 - ; 66 13 : 5600 : .G6 ; • . 40 5270 25 14 5000. , 72 ' 12. <■ 5210 - '23 - 13 4500 •

/Содержание аммиачной формы небелкового азота было повышенным только_п корнях р^стении_1!рн_дефиц11те калышиУ Меньшее накопление^нитратной и аммиачной форм небелко-" вого-азота в растениях пшеницы^ по сравнению с фасолью в условиях нарастающег^у. них. дефицита магния и: кальция, с одной стороны, объясняется ра;щ6й_треб6вательностью культур к;этим элементам питания/ с -другой—{меньшим содержанием азотистых веществ у зерновых, по сравнению с зернобо-; бовыми^ • 1 - .■■;■•- -

3. Содержание и состав фонда свободных аминокислот в органах пшеницы и фасоли ■. ~

Фасоль. При определении содержания свободных . аминокислот в листьях фасоли было найдено, что по истечении семи дней их количество у. растений вариантов без магния," кальция, -а:-также при одновременном отсутствии магния и: кальция^в питательной среде было в 1,5—2 раза больше, чем в контроле. >

особенно п последнем.случае (рис. 3), что объясняется угнетением "накопления белка в листьях (рис. 1В) : при. дефиците у растении магния и кальция. - <

,В.последующие семь дней дефицит в отдельности магния и кальция отрицательно сказался уже на накоплении/- фонда свободных аминокислот,^причём влияние дефицита кальция на уменьшение содержания -аминокислот было ,выражено"гСиль-; нее, чем магния.Недостаток последнего больше сказывался на; содержании белков (рисЛВ)- : -В листьях фасоли,выращенной на питательной среде без магния и кальция, в течение всего эксперимента- 'содержание свободных аминокислот /возрастало, что, по всей видимости, связано не столько с накоплением аминокислот в процессе биосинтеза, сколько с высвобождением их в: результате возросшей интенсивности протеолиза белковых'соединений' и блокированию метаболических путей превращения аминокислот (рис. Л В). Содержание' аснарагиновой. кислоты и аспарагнна как основных соединений, накапливающихся при регрессивном обмене веществ, в листьях "фасоли эт6го;варианта было в 5— 6 раз больше но сравненню-с контролем. - ' ■

При дефиците только магния или только кальция существенно уменьшалось содержание в листьях фасоли моноамино-дикарбоно1шх аминокислот;!! гих. амидов^- ключевых соединений пметаболизме .Гаминокислот, а также первичных аминокислот— аланина, серина,' глицина. • V?•-В целом исключение магния и кальцияГиз питательной среды; отражалось на ""содержании в фонде .свободных " аминокислот всех шестнадцати определенныхнами аминбкислот.- .

Пшеница.*В исследованиях с пшеницей дефицит.у растений .магния-и-кальция.^уменьшая содержание, «суммарного бёлкаг* вызывал увелинение содержания свободных1аминокислот лишь в корнях II только.при,дефиците [магния (табл.: 3), .что свидетельствует о влиянии дефицита этих катионов! канона биосинтез белков, так "и аминокислот, при этом ^воздействие отсутствия кальция в питательной среде проявилось сильнее, чем отсутствие магния. ' - 'З^У/.-1"- :

Отсутствие магния и кальция в питательной среде вызывало уменьшение содержания^ фонде свободных' аминокислот в надземной массе пшеницы ¿шзина, глутаминовой кислоты -Ь-глутамина, аснарагиновой кислоты + аспарагина„ .треонина, валина, изолейцина и лейцина, а в корнях —лизина, аргинина, глутаминовой кислоты + глутамина, глицина и валина.ч: ;* - ' Дефицит кальцияу растенш"Гпшеницы„ сильно отразившись ца содержании Ясвободных аминокислот в корнях, очевидно, повлиял и на их~транспорт с восходящим током,лак как для этого варианта характерно наименьшее содержание свободных-.аминокислот и в надземной массе пшеницы. - -

СОСТАВ АЗОТИСТЫХ СОЕДИНЕНИИ И ФОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА ЗЕРНА ПШЕНИЦЫ И ФАСОЛИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СООТНОШЕНИЯХ МАГНИЯ И КАЛЬЦИЯ В ПИТАТ|ВЛЬНОИ СРЕДЕ :

..[ Проведенные нами исследования по изучению влияния дефицита у растений магния и кальцйя на состав азотистых соединений" показали, что эти катионы обладают идентичными ' функциями во многих процессах азотного обмена относительно количественного накопления продуктов реакций. Тем не менее, -со всей очевидностью следует, что.за общими функциями количественных изменений тех или иных продуктов азотного обмена скрываются значительные'качественные различия от воздействия этих элементов питания. ;

I. Урожай и содержание белков в зерне пшеницы , - и фасоли , _ "

. Нашими исследованиями выявлено, что соотношения магния и кальция в питательной среде являются неодинаковыми для получения оптимального урожая и. максимального накопления белка в зерне." При высокой обеспеченности растений. азотом и другими питательными элементами оптимальный-

' • ..... •' • ■ Таблица 4

::: Урожай й некоторые показатели качества зерна пшеницы и фасоли

Пшеница . • Фасоль-.

- ■ Отношение - , Уро- Вес Белок Сбор Уро- Вес ; Белок Сбор

:Мв:Са (млэкв) жай 1000 белка жай 1000 белка

г зерен г " г зерен (%) г

сосуд (Г) сосуд сосуд (Г) : |СОСУД

(Мй+Са) : К = 1 :1

;10:90 . . . -г 18,3 33,5 16,7/ 2,89 37,7, 310 21,3 8,02

25:75 . . 22,2 32,4 18,9 -3,97 . 40,2. 308 22,2 9,00

40:60 . V . .... 26,7 31,1 15,6- •3,94 .43,1" 306 20,4' 8,80

55:45-; ... ' 24,5 30,8 14,9 3,44 42,7 303 23,6 10,10

.70:30 . ... 25,8 30,7 17,7 4,32 41,4 302 25,0" 10,40

85: 15 ~ . ... . 23,7 29,0 14,5 3,25 41,1 298 22,4. .9,21

НСРо,95 = 0,6 г/сосуд 1,2 г/сосуд

(Мд+Са) : К=3: 1,

38: 112;:. . .. . .. 10,0 23,4 14,9 1,49 35,8 259 •; 17,9"

60:90 . . . . 11,8 21,5 10,3 1,22 41,6 256 12,3

105:45 . . . . 11,0 20,9 13,2 1,45 38,4" 252 16,4

6,42 5,12 6,31

НСР0,95 =

-8 .

0,8 г/сосуд

1 г/сосуд

180-г

90-

ОД.

а . а и о

: О е) ' о,

■ о» <м

а

я 90.

1------7 4

о±

6-і

3-

0-1

6-1

3-

0 л

14 21 28

14 21 28 7 14 21 28 7

дни после появления первого ласта

Рас.1

Динамика накопления растительной пассы и содержание общего и белкового азота проросткама

фасоли. - -

А-содергание растгтельной массы; Б,В-общиЯ и белковый азот/ в % на сухой вес /

Л-конхроль, 2-без кальция, 3-без ¡галка, 4-6ез.кальция и иатняя

ш,

7 I* 21 28 7 14 21 дна после появления первого ласта...

■ Рис¿2

■ Содержание форы небелкового азота в проростках фасоли / з ЫГ на 100г сух.в-ва / 1-контроль,2-без кальция,З-без магния,4-без кальция и магния

9000-,

5500-

2000 2

Данамика содерганая свободных аишояаслот в листьях фасоли /шсмолвй на 1СЮг сух.в-ва/

обозначения си. э рис.2

. д с е .н я ц а

■ кодос+"$лагп . зерно

5 18 29 39 5 18 29 39 18 29 39 . .' дни после ^цветения

. Рпс;4 ;

Динаиика содержания белкового азота в органах ппенаца и фасслг

отношение Мо:Са /нэкв/: 1-40:б0/контраиь/,2-25:75/Са-вариан1/, • 3-70:30Д9-варианз/

■ ПШЕНИЦІ . - «АСОДЪ ' А. Високая обеспеченность азогоа /Mg+Са/ : Е=І :І

35СО-!

о я )

m

4 1750-

а а

OJ

я

я 1500-

я \

з

H о

s _і

= 750-і

о я

0J

В

0

Б. Средняя обеспеченность азотом /Ид*Са/ : К=3 : І

25 20 15

IOS

о 0

Vi

в

о

о м X

20 S

-10

?ес.5

Co^spz3E28 свободах акипсягслог /заатргховазше столбша/ и бэлха /незааіряхованнив сіслошш/ в зерне паеница г фасош в лазу уборочной спглосїз.

1-лон1роль,2Ч;а-зарЕаят,3-Уд-Бараан1

г ол о- с +

ЕДА В

« | л а г 0

4-

Я

I О

н

(г, О

5 15 21 36 5 15 21 36 5 15 21 36

и—ь

10 т

1-4 со 8-

а

и 6-

В)

4-

2-

0..

V

л.

Ф А А

С 5

Л Ь В

г г

\\ \

: и.

Л-!

5 18 29 39 5 18 29 39 5 18 29 39

Л.

18 29 39 тени

15 21 36 15 21 36 15 21 36 18 29 39

Д Н Е Л О С Д е Ц В е

' ' Рис.6

Фориирование.фракционного состава белков зерна пшеницы и фасоли (Д'д*Са/:К = 1:1) I - 20нгроль»2 - Са-варианг,3 - ад-вариант Фр&сцзи белков: А-зодорастворииая, Б-солерастзорииая, В-труднорастворикая

п. В Е В И. и А

СЗОбОДЕЫб 'В белке

золос+яфлагя

1600 т

§1200 я

& 800 о

400

в) к

X «

«

§2000■ я

Я1600-31200-

Р£ О

? воо-

я о

400-

Ф к С . 0 Л

свободн ые зерно корнз1 створкз з е р

алан и н, с е р и нх, г л и а и н*

~' \

2 I

01 I-и

J I .. ' „ I

|||| I I I I I "1

5 18 29 39 5 18 29 18 29 39

5 15 21 36 15 21 36 15 21 36

глутаминоЕая кислота+глутаиин,аспарагиноБая кислота+аспарагин

I

01 1111 I_и

5 15 21 36 15 21 36 15 21 36 ДНИ поел

1_1_I_I

J

5 18 29 39 5 18 29 18 29 39 е цветени Рис.7

Динашша содергания первичных аминокислот в органа! пшеницы и фасоли(/Ь!д+Са/:К

в белке н о

I

18 29 39

I

Г 30

20

10 » сл о

э

0

а

40 3

30 Ё 20 10 0

18 29 39 я

«1:1)

с з обо д н ы е в бедяе : а ¡3 В Н И . И - А Eoлoc+nфлaг,, з б р н о

3000 Т

50

40

30

-20

ь>

-ю о. а>

.0 Я о

и

5 18 29 39 5 18 29 18 29 39 18 29 39 д.нй пос л в ив. в 16 н из

' Рис.8

Динамика содержания незаменимых аюшокисдот в органах пиеиище и фасоли(/М9+Са/:К = 1:1)

I - контроль, 2 - Са-вариант, з - Нд-вариа'нг '

70 60 50 40

ПШЕЖЩА' , ФАСОЛЬ

(ид+Са):К = 1:1

биологическая ценность

21 36 18 29 Ш0+Са):К = 3:1 биологическая ценность

23 30 15 25 : дни после цветения.

Рас.Э '

Формирование биологической и пицезсй ценности белков зераа ппэницы и фасоли

обозначения см.в рис.8

урожай ишецииы.и.фасоли.был.полу.чен.при.соотношени» .маг-'нйя и кальция равном^Ш^_0_(млэкв/10 кг),- а_максимальное

• содержание белка^ зерне и сбор его с урожаем наблюдалось при-соотношёнйях 25 : 75_(Са-вариантУ и 70:30 (Мк-вариант)

; (табл.4). ~ ГТ~ V ' 7 ~ 1

"При;средней обеспеченности растений питательными элементами и^ при отношении в среде суммы м а ш и я _и_к а л ь ц и я ;; к калию, равном 3 : I, оптимальный урожай зерна,был получен при соотношении магния и кальция, равном 60:90, а максимальное содержание белка соответственно при' 38: 112 (Са-вариант) и 105 :45 (Мй-вариант). В целом, растения пшеницы и фасоли вариантов Мд^рг1И,несколько__превосходили. - по урожайности растения.Са-серии. Вес 1000 зерен повышался

• с увеличением~отношения Са : Мц в питательной среде на обоих уровнях обеспеченности питательными элементами, однако число зерен в колосе растений Са-вариантов по сравнению с Мй-вариантами было на 10—15% меньше, что находится в соответствии с ролью магния как элемента необходимого для процессов оплодотворения у растений (Мазаева, 1957; Фур- , сов, 1970). -

—■•-2.' Динамика накопления общего азота и его фракций в зерне пшеницы и фасоли

Соотношение Мц и Са в питательной среде практичес е изменял о_х ар актера.оттока азотистых соединений из вегетативных органов в зерно пшеницы и фасоли, однако заметно от-ражалось.на количественной^стороне этогР-Процесса. . "Г При высокой обеспеченности' азотом и другими питатель-, ными элементами большему накоплению белков в зерне пшеницы опытных, вариантов в фазу уборочной спелости предшествовало большее их содержание по сравнению с контролем в колосе-флаге на ранних фазах спелости зерна (рис. 4), при-чем\гидролиз белковых соединений и отток их из колоса-фла- . ' га в зерно пшеницы проявлялся преимущественно в период между тестообразной и уборочной спелостьюА . . -

В опыте с фасолью большему накоплению белков в зерне опытных вариантов предшествовало их большее накопление но сравнению с контролем в корнях растений ,Са-варнанта и створках бобов у растений Мй-варианта, а гидролиз белковых соединений и отток их из корней и створок в зерно фасоли происходил равномерно, начиная с момента формирования зерна (рис. 4). - , ■ , "

. В условиях высокой обеспеченности, пшеницы и фасоли азотом,в зерне и вегетативных органах растений ¿Мй- и Са-ва-риантов содержалось и повышенное количество свободных аминокислот, что говорит о благоприятном воздействии магния *

и кальция как<на"накопление белков, так и биосинтез амино-* кислот, при этом биосинтез и ириток свободпых "аминокислот; в зерно превосходил скорость ^включения их в белок''(рис. 5) ;; При средней обеспеченности азотом в^зёрне растении Mg-.ii Са;, вариантов "с . повышенным

меньшее по сравнению..с контролем содержание свободных аминокислот, что можно "объяснить преобладанием процесса* накопления белков в зерне растении этих вариантов над при-; током аминокислот из вегетативных органов~; .-■;•-., ч ,.

Л; - - ; ' •-••< •' -.-••. . 1

-- V' 3. Формирование фракционного состава белков.

_ зерна пшеницы и фасоли. ^ "

: Фракции суммарных.белков вегетативных органов, пршш-' мающие • участие в .формировании, белкового комплекса зерна пшеницы и^фасоли,*подвержены <значительным;¿количествен-, ным измёнениям~в зависимости от-обеспеченности . растении магнием и кальцием, а их гидролиз и отток азотистых соеди-нений'сдвигался;во времени. . , - г ." . ^г>Пшеница;1В2условиях -высокой •■обеспеченностиух,азотом.*; у растений Мк^и С.а~-вариантов;с повыше! ты м с од е р ж а н и е м -белка - в* зерне по хравн_ен11ю1 с-контролем ..^гидролиз и 'отт^к вбдора^воримых ?:белков^.нзТколоса-флага:. нач!111ался. .'лишь в^фазу^естообразно?1_спелост1у(рис. 6). Гидролиз,и отток из ка10сагФлага:с6лерастворймых бетюв^уТр'астений'контрольно'. го варианта проходил более заметно между началом:.формнро-вания зерна!» молочной1спелостью11в:то;время:как%у="растений: Са-варианта — в- период между ; молочноГги уборочной спел остью ¿а» в. М^-в а р и а нтё —' м ёжду,-тестообразной- и уборочной' спело1;т'ью:^]^диченне1сод£ржания^г белка в зерне; растений М^в_арцанта у:произошло, за счет соле- и труднорастворимых 'белков,- а С¿-варианта — за счег-водо- и солерастворимых белков и белков*; остатка". -- ^_ .-^гРъ . Фасоль. При высокой обеспеченности азотом и другими.питательными. элемёнтамн у. растений и>:Са-вариантов по сравнению с контролем' гидролиз и отток солерастворимых белков из створок бобов начинался значительно раньше II про-; исходил в пёриодс между, после цветения (рис.,6)."С другой стороны,-гидролиз; и Ътток/труднорастворн-; мых белков^из створок" в, зерно;у растений *яконтрольного ва^ рйанта;происходйл от;начала^формирования зерна.(5:н"день после'цветения) доуборочной;спелости:(39-й;день)^в"то.время'как.у. Са- й Мр-вариантов, с повышением содержания бел/ ка в зерне,: он преимущественно ^кончался к 29-мудшо после цветения. - Увеличение .'¡содержания белка в зерне фасоли Мй". и Са-варнантов произошло; за счет одновременного возрастания доли всех фракцийчсуммарного- белка, тем не менее .10 ' . ■ .Г

"магнии способствовал большему но.-сравнению с кальцием накоплению соле- и труднорЪстворимых белков (рис. 6). -• " '' В случае средней обеспеченности азотом и преобладании 'в питательной среде двухвалентных катионов на одновалентными увеличение содержания: белка-в зерне фасоли Mg-ва-рпанта происходило за счет водорастворимых.белков и белков остатка, а Са-варианта— за счет труднорастворимых белков, в том числе белков остатка. ^ i

• Таким образом, формирование фракционного состава белков зерна" пшеницы и фасоли, определяемое соотношением ;магния »'кальция в питательной среде, в известной мере за' висит от вида культуры и уровня обеспеченности растений азотом и другими питательными элементами.

- ^ 4. Содержание и состав аминокислот в зерне пшеницы и фасоли

/Содержащие jiepiiiiMiibix аминокислот является в знача-;

тельной лиТре- прямым показателем на_сколько__интен-.

стшо врастешш^проходят^процессы. асспмнлншиизкзогеннога и эндогеииого^аммиака. Растения используют различные_ре^ "¿¿шхориы для того, чтобьГЩЙ1[ПШит_ь^ углерод_ор-ганических соединений, в том числе предшественников аминокислот, по тому или иному пути в зависимости от'потребно-стей растения; определяемых его . физиологическим состоянием и, наряду с другими воздействиями внешней среды, условиями питания. . -Пшеница. При высокой обеспеченности питательным» элементами и отношеншГсуммы магния и кальция,к калию, равно м~~1 : 1, преобладание" магния над кальцием - обуславливало большее содержание в колосегфла7е по сравнению с другими ^ вариантами он ы~та~~м о 11 о а м й 11 о д 11 к а р б о н о в ы х к и с л ojr_ 11 их амн-дов_; (рис. 7), что находится"« соответствии с ролью магния как" активатора _ глутамин-^ и асиарагинсинтетазы (Евстигнеева и др.; 1971, 1972; O'Neal^ 1973) ^ Ассимиляция аммиака в колосе-флаге растений Mg-варнанта в зна~чйтельно меньшей сте-иени шла через «фотосинтетические» первичные аминокисло-, ты — аланингесрин и глицин. : В фазу молочной спелости в зерне пшеницы Mg- и Са-ва-риантов~од!ю1времёГ1но,содержалось .большее-количество пер-Bji4Hux_a\iiiHOKiiMOT (рис. 7), что говорит о высокой способ-, ности растений ассимилировать аммиак в.случае.повышенного накопления ими белка в _зерне. Последующее более быстрое по"сравнению с контролем уменьшение содержания в фонде свободных аминокислот глицина, аланина_и. серина коррелировало с. увеличением их - доли в суммарном__белке зерна

кислот — у.растений ТЧ^варианта.

Фасоль.~Воздействие: соотношения магния и кальция в пи-: тательной среде на процессы, оттока; первичных-аминокислот: из ^вегетативных'органов в. зерно наиболее отчетливо прояви-; лось*; в опыте с фасолью(рис.\.:7)? Возрастание :г соотношения ; Mg :Са;способствовало оттокуТаланйнаГ се]рина и тлицина из кор ней -р астений в период между 5-м : и : 29-м днями посл е цве- ; тения'г а^глутаминовой^ аспарапшовой кислот '.и их:амидов — между 5-м:и"18-м*днями,; причем^к 18-му дню происходило рез-5 кое возрастаниеходержания 'первичных¡аминокислот:в створ-'; ках: бобов "растений.Mg-варианта;:Последующий -затем;: отток -первичных аминокислот из створок бобов: в зерно происходил лучше.также у растений Мр-вариаита (рис. 7). В зерне растений Mg-; и Са-вариант'ов "в:фа*зу уборочной .спелости, большее'

■ содержание моноаминоднкарбоновых>кислот и их-;амидов- соответствовало их ? меньшему относительному "содержанию в суммарном белке. ' ■. . .

Таким образом, у: фасоли магний, является элементом,' определяющим интенсивный отток ...первичных аминокислот из вегетативных органов в зерно. ' - "

.5. Содержание незаменимых аминокислот, --;: формирование биологической и пищевой ценности белков ... : - зерна пшеницы и фасоли ~ ' ;

г.. Основным показателем качества-зерновых,,и зернобобовых" культур является содержание белков "в зерне. Однако количе-* ство.белка-еще не .определяет ценности ; продукта. ™ Большое значение; имеет .;и^качесгвейный^состав]белков>>'\.именно: _со-^ держание_незамениш^ ^шнокислрт, их_со~0тношение между. собои,а_уакже_отнс>шещ1е_между незаменимыми и;заменимы-мнтаминокислотами^^^;^;^.,^,; ~ Г" '"^"Пшеница. При высокой обеспеченности азотом и отношении! в питательной среде!суммы "магния ir кальция к калию, рав-

■ ном в колосе-флаге-растений с • повышенным * содержанием, белка в з е р н е ç ( M "л i С а - в а р и а и т ) - отмечалось,н самое высокое,содержание незаменнмых аминокислот.на рашщх_фа-

-зах.'спелости^(рис;-8). - . .......... . - - Г

;В .процессе"накопления белков в.зерне: в период от молоч-11ой' до,уборочной_спелости бол ее . интенсивное -уменьшение со- -держания незаменимых аминокислот в фонде свободных аминокислот зерНа Л12- и:Са:вариантов коррелировало с^в^,]Иче1. ние.\1_11х_от1юсительного_содерждция_^суммарном-б.елке-в-фа-.

тТОднако соответствие между повышенным содержанием бел-; ка, незаменимых аминокислот, содержащихся в нем, и биоло- |

jo

гическон.цепност.ыо белка.отмечалось только у растении Са:ва^, риацта (рис. 8 и 9). . "

При средней, обеспеченности__азотом~и отношении суммы

магния "и, кгГльцняТТкалию, равном 3 : 1, увеличение содержа- -ния;белка-в зерне, сопровождаемое увеличением его биологической и пищевой ценности наблюдалось, наоборот,.урастений <У\д-варианта. '.

"Фасоль. В'растениях фасоли по аналогии с пшеницей уве- . личение содержания белка в зерне y'Mg- и'Са-вариантов сопровождалось повышением в его составе количества незаме-нимых'аминокислот, однако четкой связи между их биосинте-зом-и оттоком в зерно, а также содержанием в фонде свободных аминокислот и накоплением в белке в зависимости от соотношения магния и кальция в питательной среде не обнаруживалось (рис. 8).

. *- При высокой обеспеченности фасоли азотом увеличение.содержания белка в зерне растений Mg- и Са-вариантов по сравнению с контролем сопровождалось снижением биологической ценности белков (рис. 9). Лимитирующими незаменимыми аминокислотами в белках зерна Mg-варианта были фенилаланин и метионин, а в зерне Са-варианта также лизин и треонин.

При средней обеспеченности фасоли азотом увеличение содержания белка, сопровождаемое повышением его пищевой и-биологической ценности," отмечалось у растений . Са-варианта, причем последнее было тем не менее ниже по сравнению-с контролем (рис. 9).

Таким образом, отмечаемая видовая и фоновая (по содержанию азота и других питательных элементов) специфичность в формировании бирлогической и пищевой ценности белков-зерна пшеницы и фасоли может в значительной степени определяться соотношением магния и кальция в питательной среде.

Выводы ,

1. Проведенные исследования показали, что установленное в системах in vitro участие катионов кальция и магния в активации целого ряда ферментов азотного обмена, имеет место и в живых растениях,,о чем говорят данные содержания азотистых соединений, являющихся конечными продуктами реакций, катализируемых этими ферментами.

2. При отсутствии магния и кальция, в питательной среде в первые семь дней роста в корнях и листьях фасоли нитра-

-тов содержалось меньше, чем в контроле. В дальнейшем возросший дефицит у фасоли этих элементов увеличивал в 5— 10 раз содержание нитратов в листьях и корнях 28-дневных растений опытных вариантов.

30-дневных ."растений, пшеницы 'при отсутствии магния п. питательной среде нитраты-накапливались в надземной массе и корнях, а-при отсутствии кальция;—-только в,корнях.;

- Зл'У.; фасоли отсутствие Г? магния-"и кальция,в питательной среде вызывало редкое, (в 5—15 раз) увеличение содержания аммиачного"азота как<в"листьях;";так и корнях. У "пшеницьг увелйченйе .содержания ■аммиака происходило только в" кор-. нях-при дефиците кальция."^-" ' - -V - * ~т' ':

.-«4.";В:условиях отсутствия магния и кальция^в, питательной среде' уменьшениесодержания " белкового: азота' у7-дневных растений фасоли- сопровождалось ;увеличением, содержания свободных аминокислот.?^-Нарастающий™--дефицит.::..магния-и кальция в' дальнейшем сни'жал содержание в листьяхкакбел-кового азотаУ так й свободных аминокислот,:при этом отсутствие в питательнойсреде кальция сильнее отразилось на со дер-жании"гсвободных;-аминокислот, а отсутствие магния — на со-" держании белкового "азота. , - „

*" "£'При одновременн6м отсутствии магния и кальция в листьях фасоли отмечалось,самое низкое содержание белкового азота н 'наибольшее^содержание свободных ^ аминокислот, особенно аспарагйновойГкислоты и аспарагина.

У пшеницы уменьшение - содержания ? белкового азота, сопровождаемое увеличением ;фонда^ свободных аминокислот, наблюдалось только в корнях растений; выращенных без'вне-сения'магния. . " - " -': '

Отсутствие магния-и кальция в питательной среде резко отразилось 'на^содержании; в"- фонде свободных аминокислот 28-дневных»растений фасоли и"пшеницыГ";- первичных . аминокислот: . глутаминовой' 'кислоты + глутамина, :-аспарагиновой кислотыЧ-аспа*рагина,'-аланйна, серина и глицина.; -:%7лИсследстаниями по изучению влияния",соотношения магния: Шкальция^на.: урожай лк накопление^ белка; в4 зерне! расте-: ниями пшеницы й,фасоли^^выявлено,' что соотношёння этих ка-' тйонов п'питателыюй среде являются неодинаковыми для получения максимального.урожая* и-максимального, накопи белкадВГзёрнеГ'Пркгвыф

иТравном соотношении 6днот?"и ^двухвалентных ;катнонов мак-: симальный урожай пшеницы и фасоли "получался при соотио-лпении Мд.и Са,': равном:'40 ": 60 (мэкв/10 кг) . При'. средней обеспеченности азотом и преобладании двухвалентных катионов таким •вотношёниём"^ было 60': 90.'В'первом случае"макси-мЪльное содержание бёлка:й;самый высокий сбор белка с уро-'. жаем -.зёр-на; пшёницы: и Гфас<>л и. пол учался .(при««»отношениях' М"д;и"Са,~'равнь1Х?125': 75 (Са-вариант); и«70: 30-(Мд;-вариант). ,Во 'втором гт максимальное"содержание белка ;и-самый'высокий сбор его с урожаем:нолучены правоотношениях 'Мц II Са, ;равных 37,6 : 112,5 >(Са-вариант) и 105 :45 (Мд-вариант).

- 8. Соотношение М^: Са в питательной среде " практически не изменяло характера оттока 'азотистых соединений из веге-~ татнвных.органов в зерно^растённн пшеницы и фасоли, но заметно влияло;на количественную сторону этого процесса. Магний-способствовал оттоку азотистых' соединений в большей степени, чем:кальций;- .." • " - 5 : " ^ • ■•■-.".;

* _ зПри высокой обеспеченности растений питательными элементами, большему накоплению белка В' зерне Са- и М^-ва-риантов в фазу уборочной спелости предшествовало их боль-шее^накопление,';по ^сравнению с контролем в вегетативных органах, на ранних фазах спелости зерна. - ;

9. Во все фазы спелости пшеницы и фасоли в условиях высокой, обеспеченности растений азотом и другими элементами соотношения магния и кальция "в питательной среде, оптимальные/для накопления белка в зерне, были лучшими и для накопления свободных аминокислот. •

При средней обеспеченности азотом" зерно*с максималь-: ным содержанием белка в М&-. и Са-вариантах имело наименьшее содержание свободных аминокислот, что говорит о благоприятном воздействии магния и кальция на использование свободных аминокислот в синтезе белков. .'.'.- \:.

- Формирование фракционного состава белков зерна пшеницы и фасош!,: определяемое соотношениями магния и кальция Гв* питательной среде, мало зависело от вида культуры, но в большей-степени от.^уровня обеспеченности растений азотом и другими питательными элементами. -

"11. Повышение содержания белка в зерне, сопровождаемое одновременным увеличением его биологической и пищевой ценности, было характерно в основном для пшеницы,, при этом в опыте со средней обеспеченностью растений азотом данное явление отмечалось-для:. варианта с преобладанием магния над кальцием, а при высокой — кальция над магнием. 1

."<12. Из результатов проведенных исследований вытекают два обстоятельства важных для практики сельскохозяйствен-* ного производства. Во-первых, при диагностике обеспеченности растений азотом по определению содержания азотистых соединений "в вегетативных органах необходимо контролировать обеспеченность растений магнием и кальцием в течение всего ¡вегетационного периода. Во-вторых, применение больших доз азотных ^удобрений под зерновые должно- предусматривать высокую обеспеченность их магнием и кальцием на почвах, ^бедных этими элементами. \ \

По теме диссертации опубликованы работы

• Г.^Влияние соотношения магния и кальция в питательной среде-"на фракционный и аминокислотный состав белка в зер-.не.пшеницы. Известия ТСХЛ, Л"в 5, 1971 г. '

■ ;2. Азотистые соединения проростков пшеницы- при дефиците магния и кальция в питательной среде. Известия ТСХА, №6, 1971г. -

• " 3. Соотношение между магнием:и кальцием в питательной среде и содержание свободных аминокислот в зерне пшеницы. Докл. ВЛСХНИЛ, выи. 4, 1972 г.

4. Аминокислотный состав и качество фасоли при различном соотношении магния и кальция. Вестник с/х науки, № 9, 1973 г. -

. "5. Динамика накопления азотистых, соединений и метаболизм аминокислот в процессе налива зерна яровой - пшеницы при различном соотношении магния и кальция в питательной среде*. Физиология растений, т. 21, № 4, 1974 г. ~ "

у .6. Динамика:азотистых соединентги формирование качества- белка зерна пшеницы-в-условиях преобладания в пита- ; тельной среде магния и кальция.-Агрохимия,-1, 1975 г. :

7. ¿Метаболизм аминокислот у фасоли в условиях дефицита магния и кальция в питательной среде;:С/х.биология, т. 10, № 4,' 1975 г. -/ .

... Материалы диссертационной работы были' доложены на научной конференции в ТСХА."Москва, 1971 г.; на Всес. науч-; но-технической конференции-по химизации растениеводства й: качеству с/х продукции (Киев, февраль, 1972 г.); на Всесоюзном :семинаре по физиол.-биох. процессам, опред. величину и качество урожая пшеницы (Казань, ноябрь, 1972 г.); на межреспубликанской научно-техн. конф..по обмену, опытом в ускорении-темпов-научн.-техн.ирогр.: в .сел. "х-ве (Ленинград, но-ябрь,.1973 г.) и - опубликованы в тезисах докладов.• - :

Михаил Николаевич Кондратьев

Объем 1 п. л. Заказ 1878. Тираж 150

Типография Московской с.-х: академии им. К. Л. Тимирязева . -125008. Москва Л-8, Тимирязевская ул., 44