Сочетанное действие противоопухолевых препаратов и антибиотиков на микроорганизмы

Шаповал, Ольга Георгиевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сочетанное действие противоопухолевых препаратов и антибиотиков на микроорганизмы
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Сочетанное действие противоопухолевых препаратов и антибиотиков на микроорганизмы"

Шаповал Ольга Георгиевна

На правах рукописи

00345Э184

Сочетанное действие противоопухолевых препаратов и антибиотиков на микроорганизмы

03.00.07-м икробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саратов - 2008

003459184

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор Г.М. Шуб

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор О. Г. Крамарь

доктор медицинских наук, профессор Л.И. Васильева

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. H.H. Бурденко» Росздрава.

Защита состоится «О » среЯриииг. 2000 г. в а час. на заседании диссертационного совета Д 208.008.06 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Волгоградском государственном медицинском университете по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского государственного медицинского университета (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, д. 1).

Автореферат разослан «YS » 2008 года.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Современные достижения терапии злокачественных новообразований позволяют значительно повысить длительную выживаемость больных и обеспечить полное выздоровление при многих нозологических формах (Переводчикова, 2007). В настоящее время в арсенале онкологов имеется более двух десятков различных по химическому строению групп противоопухолевых химиопрепаратов, среди которых таксаны, камптотецины и имидазотетразины внедрены в практику с конца XX века (Поддубная, 2003). Усовершенствование основных методов лечения злокачественных новообразований, в частности радио - и химиотерапии, к сожалению, полностью не исключает реализацию их негативных эффектов. Одним из них является развитие или усугубление уже имеющегося на фоне опухолевого «груза» состояния иммуносупрессии (Волкова, 2007). В связи с этим пациенты с онкологическими заболеваниями составляют группу высокого риска по развитию инфекционных осложнений (Глаузер, 2001; Дмитриева и соавт., 2001; Петухова, 2005). Это во многом обуславливается длительностью химиотерапевтического лечения, его курсовым характером, поддерживающим кумуляцию противоопухолевых препаратов в макроорганизме.

По данным РОНЦ им. H.H. Блохина (2001) 1/3 летальных исходов у онкологических больных связана с инфекциями, которые в зависимости от локализации основного процесса возникают в 12-50% случаев. Из локализованных инфекционных осложнений в онкологии чаще встречаются пневмонии (39%), раневые инфекции (31%), уроинфекции (8%) и инфекции кровотока (9%) (Дмитриева и соавт., 2001). При этом пневмонии являются основной причиной сепсиса, летальность при котором достигает 30% (Нехаев и соавг., 2003).

С течением времени этиологическая структура инфекционных осложнений в онкологии претерпевает изменения. В начале 70-х гг. XX в. основное значение в возникновении инфекций у онкологических больных имели грамотрицательные бактерии, а в 90-е гг. им на смену пришли грамположительные микроорганизмы (Чуданова и соавт., 2003). Однако в настоящее время по сообщениям ряда авторов лидирующие позиции начали возвращаться грамотрицательным микроорганизмам (Гусева и соавт., 2006; Волкова, 2007; Святославов, 2007). Тем не менее, согласно литературным данным, сохраняется наличие взаимосвязи между формой (локализацией) инфекции и её основными возбудителями. В частности одними из постоянных возбудителей инфекций кровотока являются стафилококки, инфекций дыхательных путей и мочевыделительной системы - энтеробактерии (Дмитриева и соавт., 2001-2005).

Инфекции у онкологических больных, особенно на фоне состояния нейтропении, нередко имеют скудную клиническую симптоматику при реальной угрозе фульминантного течения (Птушкин, 1999; Глаузер, 2001; Гусева и соавт., 2006). Эти особенности наряду с высокой частотой возникновения инфекции часто требуют назначения антибиотиков на фоне проводимой противоопухолевой химиотерапии. Некоторые противоопухолевые препараты, например доксорубицин, цисплатин, циклофосфамид, метотрексат, 5-фторурацил обладают умеренной антимикробной активностью (Thielman et al., 2000). С целью этиотропной терапии инфекций в виду высокой токсичности противоопухолевые химиопрепараты не используются. Однако, учитывая возможность одновременного назначения данных препаратов с антибиотиками, изучение их сочетанного действия на микроорганизмы представляет теоретический и практический интерес.

Цель исследования

Цель работы - изучение сочетанного действия противоопухолевых препаратов и антибиотиков на биологические свойства стафилококков и кишечных палочек.

Из противоопухолевых химиопрепаратов нами был выбран доксорубицин - препарат с широким спектром противоопухолевой активности из группы антрациклинов, из антибиотиков - цефтриаксон (цефалоспорин Ш поколения) и амикацин (аминогликозид Ш поколения). Все препараты находят широкое применение в клинической практике. Антрациклины используются при многих нозологических формах злокачественных новообразований - остром миелобластном лейкозе, злокачественных лимфомах, остеосаркоме, межоклеточном раке легкого и др. (Горбунова, 1998; Машковский, 2002; рекомендации Европейского общества медицинской онкологии, 2003). Цефтриаксон и амикацин применяются в лечении инфекций у больных с различной патологией, в том числе и с онкологической (Фомина и др., 1998; Решедько, 1999). В частности комбинации цефтриаксона и амикацина рекомендуются для лечения больных с фебрильными нейтропениями (Колобов и соавт., 2005).

Задачи исследования

1. Определить антимикробную активность доксорубицина в отношении клинических и стандартных (Staphylococcus aureus АТСС 29213 и Escherichia coliATCC 25922) штаммов стафилококков и кишечных палочек.

2. Изучить влияние доксорубицина:

на уровень чувствительности взятых в опыт штаммов S.aureus к цефгриаксону и Е. coli-к амикацину;

- на развитие лекарственной устойчивости штаммов S.aureus к цефтриаксону и E.coli - к амикацину.

3. Изучить влияние сочетаний доксорубицина и цефтриаксона, доксорубицина и амикацина на динамику развития популяции стандартных и клинических штаммов S.aureus и E.coli.

4. Изучить влияние сочетаний доксорубицина и цефтриаксона, доксорубицина и амикацина на экспрессию факторов вирулентности стандартных и клинических штаммов S. aureus (плазмокоагулаза, гемолизины) и E.coli (адгезивная активность).

Научная новизна

Впервые проведено изучение влияния используемого в клинической практике препарата с ДНК-тропным действием доксорубицина на уровень и формирование устойчивости стафилококков к цефтриаксону, кишечных палочек - к амикацину, а также некоторые факторы вирулентности этих возбудителей.

Практическая значимость

Результаты проведенных исследований формируют представление о влиянии противоопухолевых препаратов и антибиотиков на биологические свойства (устойчивость к антимикробным препаратам, вирулентность) микроорганизмов-возбудителей инфекции, а также служат дополнением к имеющимся сведениям по данному вопросу. Полученные данные позволят скорректировать методы ведения онкологических больных, в частности оптимизировать дозы назначаемых антимикробных препаратов, что снижает лекарственную нагрузку на детоксицирующие системы макроорганизма (ткань печени, почек) и имеет экономическую выгоду в связи со снижением расходов на антибиотики.

По материалам диссертации подготовлены и изданы методические рекомендации «Сочетанное действие цитостатиков и антибиотиков на биологические свойства микроорганизмов» (утверждены ЦКМС СГМУ, выписка из протокола № 7 от 20. 03. 08).

Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, онкологии ФПК и ППС, профпатологии и гематологии, а также в лечебную работу клиники гематологии и профпатологии СГМУ.

Положения, выносимые на защиту

1. Доксорубицин обладает умеренной антимикробной активностью в отношении S. aureus и не проявляет её в отношении Е. coli.

2. Доксорубицин оказывает потенцирующее действие на антимикробную активность цефтриаксона в отношении опытных штаммов S. aureus и амикацина - в отношении опытных штаммов Е. coli.

3. Доксорубицин как препарат с ДНК-тропным действием существенно не влияет на развитие устойчивости опытных штаммов к испытуемым антибиотикам.

4. Доксорубицин способен оказывать влияние на вирулентность опытных штаммов S. aureus (продукцию плазмокоагулазы и гемолитическую активность) и Е. coli (адгезивные свойства), однако этот эффект носит штаммовый характер.

Апробация работы

Материалы настоящего исследования представлены на конференциях студентов и молодых ученых Саратовского государственного медицинского университета в 2006-2007 гг., в материалах IX Съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007), XII Международной научной конференции и III Международной научной онкологической конференции (Эйлайт, 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе две в изданиях, входящих в перечень рекомендуемых Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки РФ.

Структура и объём работы

Диссертационная работа изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из введения, 3 глав обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 117 отечественных и 55 иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Штаммы микроорганизмов и питательные среды, использованные в работе .

В работе использованы стандартные штаммы - Staphylococcus aureus А ТСС 29213 и Escherichia coli АТСС 25922 из музея живых культур кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии СГМУ, а также 51

клинический штамм Б.аигеш и 43 - Е.соИ, выделенные от больных с различными формами гнойно-воспалительных заболеваний в 2002-2007 гт.

Для культивирования микроорганизмов использованы стандартные питательные среды: мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар, агар Эндо производства НПО «Питательные среды», г. Махачкала.

Препараты, использованные в работе

В работе использованы коммерческие препараты: цефтриаксона натриевая соль во флаконах по 1 г (ООО «Компания «Деко», г. Москва), амикацина сульфат во флаконах по 0,5 г (ОАО «Синтез», г. Курган), доксорубицин - ЛЭНС во флаконах по 0,01 г (ООО «ЛЭНС-Фарм», г. Москва).

Для определения плазмокоагулазной активности испытуемых штаммов стафилококков использована сухая цитратная кроличья плазма (ФГУП «Микроген» МЗ РФ, г. Москва).

Методы

Определение антимикробной активности (минимальной ингибирующей концентрации - МИК) всех взятых в опыт препаратов в отношении клинических и стандартных штаммов проводили методом двукратных серийных разведений в мясо-пептонном бульоне при концентрации вещества от 200 до 0,09 мкг/мл и микробной нагрузке 2x105 м.т./мл по стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Контролем служил мясо-пептонный бульон без препаратов. Результаты учитывали по наличию и отсутствию видимого роста после инкубации посевов в термостате при I 37°С в течение 24 часов. Для каждого препарата рассчитывали значение МИК50 методом пробитое (Ашмарин, Воробьёв, 1962).

Для изучения влияния противоопухолевого препарата на уровень чувствительности Б.аигеиз к цефтриаксону, Е.соП - к амикаиину штаммы инкубировали в течение суток при I 37°С в мясо-пептонном бульоне с двукратными разведениями антибиотика в присутствии неингибирующих концентраций доксорубицина и определяли МИК антибиотика. Исходя из её значения, рассчитывали коэффициент повышения чувствительности (КПЧ) как отношение МИК в среде без доксорубицина к полученному значению МИК.

Изучение влияния доксорубицина на развитие лекарственной устойчивости стафилококков к цефтриаксону и кишечных палочек к амикацину проводили при пассажах десяти штаммов каждого вида в мясо-пептонном бульоне с постоянной и возрастающей концентрациями антибиотика в присутствии неингибирующих концентраций противопухолевого препарата и микробной нагрузке 2х 10^ м.т./мл по стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича (Глухов, 1965). Всего было проведено 10 пассажей. После каждых пяти пассажей методом двукратных серийных разведений определяли уровень

устойчивости пассажных вариантов к соответствующему антибиотику и рассчитывали значение коэффициента адаптации (Кад) как отношение величины МИК после пассажей к ее исходному значению.

Указанные выше неингибирующие концентрации доксорубицина для опытных штаммов стафилококков составили 'Л и У* МИК. Для опытных штаммов кишечных палочек, нечувствительных к этому препарату, они соответствовали таковым в сыворотке крови человека (сывороточные концентрации - СК) через 1 час и 2 часа после введения терапевтической дозы -100 и 50 мкг/мл соответственно.

Для изучения влияния сочетаний доксорубицина и цефтриаксона на динамику развития популяций стафилококков, доксорубицина и амикацина - на динамику развития популяций кишечных палочек суточные агаровые культуры пяти испытуемых штаммов каждого вида засевали из расчета 200 тыс. м.т./мл в мясо-пептонный бульон:

- содержащий МИК антибиотика;

-содержащий Уг МИК соответствующего антибиотика и доксорубицин в неингибирующей концентрации (для стафилококков - !4 МИК, для кишечных палочек - 100 мкг/мл);

- содержащий МИК доксорубицина (для стафилококков) и 100 мкг доксорубицина (для кишечных палочек);

- не содержащий препаратов.

Посевы инкубировали при ( 37°С в течение 24 часов. До начала инкубации и через 4, 6, 8 и 24 часа культивирования осуществляли отбор проб для измерения оптической плотности (Б) питательной среды на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 560 нм. Согласно полученным данным осуществляли построение графиков, отображающих зависимость оптической плотности мясо-пептонного бульона от времени культивирования.

Факторы вирулентности у исходных вариантов пассажных штаммов стафилококков - гемолизины и плазмокоагулаза определялись стандартными методами (Биргер, 1982). Для количественного определения гемолитической активности исходных и пассажных вариантов взвесь суточной агаровой культуры из расчета 200 тыс. м. т./мл засевали в центрифужные пробирки с мясо-пептонным бульоном. Через 48 часов инкубации при I 37°С полученные бульонные культуры центрифугировали при 2000 об/мин в течение 30 минут. Из надосадочной жидкости готовили двукратные разведения в физиологическом растворе хлорида натрия от 1:2 до 1:64 объёмом 1 мл. В каждое разведение вносили по 2 капли взвеси кроличьих эритроцитов, разведенных физиологическим раствором 1:2. Эритроциты предварительно дважды отмывали в физиологическом растворе хлорида натрия путем центрифугирования при 500 об/мин 15 мин. Результаты учитывали через 24 часа инкубации в термостате при I 37°С по отсутствию или наличию гемолиза, учитывая также его интенсивность. На основании полученных данных определяли титр полного гемолиза.

Для определения плазмокоагулазной активности всех испытуемых штаммов стафилококков суточную агаровую культуру засевали в 0,5 мл разведенной физиологическим раствором хлорида натрия 1:4 цитратной кроличьей плазмы. Посевы помещали в термостат при I 37°С. Результат учитывали через 2,5 и 24 часа при отсутствии «спонтанной» плазмокоагуляции и ее наличии в положительном контроле. Для количественной оценки плазмокоагулазной активности исходных и пассажных вариантов штаммов стафилококков сухую цитратную кроличью плазму разводили физиологическим раствором в отношении 1:1. Суточные бульонные культуры стафилококков центрифугировали при 2000 об/мин в течение 30 минут. Из надосадочной жидкости готовили двухкратные (в 2-32 раза) разведения физиологическим раствором хлорида натрия объёмом 0,5 мл. В каждое из полученных разведений вносили по 0,1 мл разведенной плазмы. Пробирки помещали в термостат (I 37°С) и результат учитывали по отсутствию или наличию плазмокоагуляции через 2,5 часа. На основании полученных данных определяли титр плазмокоагулазы - максимальное разведение надосадочной жидкости, дающее полную коагуляцию.

С целью оценки существенности различий найденных в опыте величин оптической плотности, титров плазмокоагулазы и гемолизинов использовали непараметрический критерий Манна-Уитни для сравнения двух выборок (Гланц, 1999).

Адгезивные свойства исходных штаммов кишечных палочек и их пассажных вариантов определяли по способности микроорганизмов адсорбироваться на поверхности эритроцитов человека 0(1) группы крови, КЬ (+) (Брилис и соавт., 1986; Богданова и соавт., 2006). Свежие эритроциты дважды отмывали физиологическим раствором хлорида натрия при 300 об/мин в течение 15 минут и на их основе готовили взвесь концентрацией 100 млн. клеток на 1 мл физиологического раствора. Из суточных бульонных культур испытуемых штаммов готовили бактериальные взвеси (109 КОЕ/мл по стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича), по 0,3 мл которых вносили в 1 мл физиологического раствора, уже содержащего 0,1 мл взвеси отмытых эритроцитов. Смесь помещали в термостат при I 37°С на 30 мин. Затем на обезжиренном предметном стекле готовили мазки по типу «толстая капля», которые высушивали при 1 37°С и фиксировали этанолом в течение 15 минут. После промывания мазки окрашивали водным фуксином в течение 5 минут. Результаты учитывали при световой микроскопии мазков с использованием иммерсионного объектива (х 90): в каждом мазке подсчитывали количество микроорганизмов, адсорбировавшихся на 25 эритроцитах (по 5 эритроцитов в каждом лоле зрения). Из полученных данных рассчитывали средний показатель адгезии (СПА). По его величине судили об адгезивной активности опытных штаммов.

При СПА 1,01-2,0 микроорганизмы считали низкоадгезивными, 2,01-4,0-среднеадгезивными, более 4,0 - высокоадгезивными. Для статистической оценки полученных значений СПА пассажных вариантов использовали

методику определения существенности различий найденных в опыте средних величин (Ашмарин, Воробьёв, 1962).

Результаты собственных исследований

Антимикробная активность цефтриаксона и амикацина

В отношении изучавшихся штаммов стафилококков антимикробная активность цефтриаксона была невысокой: 3,8% штаммов имело МИК 200, 1,9% - 100, 25% - 12,5, 21,2% - 6,2 мкг/мл (таблица 1). Чувствительными к цефтриаксону (МИК 1,5 и менее мкг/мл) были лишь 13,5% штаммов. Одна треть штаммов (34,6%), для которых МИК равнялась 3,1 мкг/мл, были отнесены к слабо чувствительным (МУК 4.2.1890 - 04. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, приложение 2, таблица 5). Значение МИКм составило 4,6 мкг/мл.

Таблица 1

Чувствительность опытных штаммов S. aureus к цефтриаксону

МИК (мкг/мл) Число штаммов 5. aureus с данным значением МИК

Абсолютное Относительное (%)

Чувствительные 0,75 3 5,8

1,5 4 7,7

Слабо чувствительные 3,1 18 34,6

Устойчивые 6,2 11 21,2

12,5 13 25

100 1 1,9

200 2 3,8

МИК5о 4,6

Антимикробная активность амикацина в отношении опытных штаммов Е. coli была высокой (см. табл. 2): практически все штаммы (86,4%) были чувствительны к этому препарату (МИК от 1,5 до 12,5 мкг/мл), умеренно чувствительны - 11,3% (МИК от 25 до 50 мкг/мл). Доля устойчивых штаммов была низкой: лишь 2,3% имело МИК 100 мкг/мл (МУК 4.2.1890 - 04. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, приложение 2, таблица 2). Значение МИК50 составило 2,8 мкг/мл.

Таблица 2

Чувствительность опытных штаммов Е. coli к амикацину

МИК (мкг/мл) Число штаммов Е. coli с данным значением МИК

Абсолютное Относительное (%)

Чувствительные 1,5 11 25

3,1 13 29,6

6,2 12 27,3

12,5 2 4,5

Умеренно чувствительные 25 4 9

50 1 2,3

Устойчивые 100 1 2,3

МИК5о 2,8

Таким образом, определение чувствительности опытных штаммов S. aureus к цефтриаксону явилось очередным свидетельством широкого распространения устойчивости к ß-лактамным антибиотикам среди данного вида бактерий, в том числе и выделенных в стационарах г.Саратова.

Чувствительность опытных штаммов Е. coli к амикацину очевидно носит региональный характер и в данном случае является благоприятной основой для использования аминогликозидов последних поколений в эмпирической антибиотикотерапии инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями.

Антимикробная активность доксорубнцина

Данные, полученные при определении чувствительности испытуемых штаммов S.aureus к доксорубицину, представлены в таблице 3. Они свидетельствуют о том, что чувствительность опытных штаммов к этому препарату была различной и колебалась в весьма широких пределах - от 1,5 до 25 мкг/мл. Для удобства последующего анализа, принимая во внимание концентрации препарата, которые создаются в крови при введении его терапевтических доз (согласно данным Наседкина, 2001), мы условно разделили все штаммы на устойчивые (МИК 6,2 мкг/мл и выше), слабо чувствительные (МИК 3,1 мкг/мл) и чувствительные (МИК менее 3,1 мкг/мл). Исходя из представленных критериев следует, что лишь 7,7% культур были чувствительны к доксорубицину (МИК 1,5 мкг/мл), 9,6% - слабо чувствительны (МИК 3,1 мкг/мл). Для 17,3% культур МИК доксорубицина равнялась 6,2, для 42,3% - 12,5, а для 23,1 - 25 мкг/мл, т. е. 82,7% были отнесены к устойчивым. В

то же время следует отметить, что культур, для которых МИК превышала 25 мкг/мл, не было. Значение МИК50 составило 7,08 мкг/мл.

Таблица 3

Чувствительность опытных штаммов S. aureus к доксорубицину

МИК (мкг/мл) Число штаммов S. aureus с данным значением МИК

Абсолютное Относительное (%)

Чувствительные 1,5 4 7,7

Слабо чувствительные 3,1 . 5 9,6

Устойчивые 6,2 9 17,3

12,5 22 42,3

25 12 23,1

МИК50 7,08

Все взятые в опыт штаммы Е. coli были устойчивы к доксорубицину. Для 93,2% штаммов МИК составила 1 ООО, для 6,8% - 400 мкг/мл.

Наличие антимикробной активности антрациклинов в отношении грамположительных бактерий показано рядом исследований и поэтому было ожидаемо (Шорин и соавт., 1976; Фёдорова и соавт., 1996). Её отсутствие в отношении опытных штаммов E.coli обусловлено, очевидно, плохим проникновением доксорубицина через богатую липополисахаридами клеточную стенку грамотрицательных бактерий.

Влияние доксорубицина па чувствительность штаммов S. aureus и Е. coli к антибиотикам

Результаты изучения антимикробной активности цефтриаксона и амикацина в отношении стафилококков и кишечных палочек при сочетании с доксорубицином приведены в таблицах 4 и 5. Как видно из представленных в них данных, у стафилококков и кишечных палочек в присутствии доксорубицина отмечалось повышение чувствительности к антибиотикам: для 70% штаммов обоих видов отмечалось снижение МИК антибиотика в 2-32 раза в присутствии 14 МИК и 10Ö мкг доксорубицина, а для 40% штаммов -снижение в 2-8 раз даже при совместном действии с % МИК и 50 мкг доксорубицина соответственно. В присутствии 100 мкг доксорубицина чувствительность кишечных палочек к антибиотику возросла более значительно, чем у стафилококков при 'Л МИК к цефтриаксону: КПЧ 8 и 16 у

18 и 20% штаммов Е. coli и всего лишь у 8 и 4% S. aureus соответственно. В то же время необходимо отметить, что у трети штаммов обоих видов (34 и 30%) чувствительность к антибиотикам при сочетании с опытными концентрациями доксорубицина не изменилась.

Таким образом, доксорубицин в концентрациях, равных 'Л и Vi МИК для S. aureus ,иСК(100и50 м кг/мл) для Е. coli оказывал различное действие на чувствительность этих видов к цефтриаксону и амикацину. Для 2/3 взятых в опыт штаммов это потенцирующее действие, а для 1/3 сочетание было инертным.

Таблица 4

Изменение чувствительности опытных штаммов стафилококков к цефтриаксону в присутствии доксорубицина ('Л и % МИК)

Комбинация цефтриаксона % штаммов, для которых КПЧ составил

0 2 4 8 16 32

-с'ЛМИК доксорубицина 34 30 22 8 4 2

- с V, МИК доксорубицина 58 26 10 б 0 0

Примечание Д1/2 - доксорубицин в концентрации 'Л МИК; Д1М-доксорубицин в концентрации V* МИК

Таблица 5

Изменение чувствительности опытных штаммов кишечных палочек к амикацину в присутствии доксорубицина (100 и 50 мкг/мл)

Комбинация % штаммов, для которых КПЧ составил

амикацина 0 2 4 8 16 32

- со 100 мкг 30 14 16 18 20 2

доксорубицина

- с 50 мкг 59 25 14 2 0 0

доксорубицина

Наличие потенцирующего эффекта доксорубицина на антимикробную активность цефтриаксона и амикацина имеет большое значение при проведении антибиотикотерапии и антибиотикопрофилактики у онкологических больных, поскольку возможность снижения дозы антибиотика даже на '/< позволит уменьшить его расход и снизить нагрузку на детоксицирующие органы.

Влияние доксорубицина на развитие устойчивости штаммов S. aureus и Е. coli к антибиотикам

Определение уровня чувствительности пассажных вариантов штаммов S. aureus к цефтриаксону показало, что большей адаптационной способностью обладали 6 штаммов: в условиях возрастающей концентрации

цефтриаксона составил после 5 пассажей 16,4,4,2,4 и 4, после 10 пассажей -16, 16, 16, 32, 32 и 16 соответственно. При пассажах в условиях постоянной концентрации цефтриаксона эта закономерность сохранилась для 2 штаммов: Кад после 5 пассажей 8 и 2, после 10 пассажей - 16 и 32 соответственно. У 2 штаммов в условиях возрастающей и у 6 штаммов - в условиях постоянной концентраций формирование устойчивости согласно значениям проходило медленнее. Для 2 штаммов адаптация к цефтриаксону в обоих условиях была практически одинакова.

вариантов всех штаммов, культивируемых в условиях возрастающей и постоянной концентрации антибиотика как в присутствии Уг и % МИК доксорубицина, так и без него, существенно не различались.

При пассажах Е.соН большей адаптационной способностью обладало 6 штаммов: в условиях возрастающей концентрации амикацина Кад после 5 пассажей - 8, 16, 8, 16, 16 и 16, после 10 пассажей - 8, 64, 32, 16, 64 и 32 соответственно. Формирование устойчивости у 4 штаммов было выражено слабее: Кад после 5 пассажей штаммов 4,4,2, 2, после 10 пассажей - 8,4, 16 и 8 соответственно. Указанные закономерности сохранились при пассажах в условиях постоянной концентрации амикацина.

Возрастание устойчивости всех опытных штаммов в условиях возрастающей и постоянной концентрации амикацина не имело существенных различий с ее развитием в присутствии как 100, так и 50 мкг доксорубицина.

Полученные данные свидетельствуют, что доксорубицин во взятых концентрациях, не оказывал значимого влияния на развитие лекарственной устойчивости опытных штаммов S.aureus к цефтриаксону и Е. coli к амикацину. Это имеет положительное значение при совместном использовании препаратов в клинической практике.

Влияние доксорубицина и цефтриаксона на динамику развития популяций штаммов S. aureus

Изучение влияния доксорубицина и цефтриаксона на динамику развития популяций штаммов стафилококков проведено на 5 штаммах S.aureus: стандартном - S.aureus АТСС 29213 и четырёх клинических. График изменения оптической плотности среды (D) в зависимости от времени культивирования,

построенный для одного из штаммов, приведен на рисунке 1. Согласно полученным данным у всех штаммов при культивировании в среде, содержащей МИК цефтриаксона и М.ИК доксорубицина, отмечалась задержка или подавление логарифмической фазы роста. Только у одного штамма в МИК цефтриаксона ее наступление совпало с вариантом, пассированым в бульоне без препаратов. Это оказалось неожиданным, и, очевидно, обусловлено выживанием устойчивых клеток. Но при дальнейшем культивировании интенсивность размножения популяции в среде с антибиотиком была ниже, чем в среде без препаратов.

Сочетания цефтриаксона и доксорубицина задерживали развитие популяций всех опытных штаммов. У 2 штаммов этот эффект превалировал над МИК каждого из препаратов.

При парном сравнении совокупности значений оптической плотности, полученных для всех штаммов в разных условиях культивирования, существенность различий установлена для вариантов, культивируемых:

- в мясо-пептонном бульоне без препаратов и в мясо-пептонном бульоне, содержащем МИК цефтриаксона, через 4, 6, 8 и 24 часа после посева;

- в мясо-пептонном бульоне без препаратов и МИК доксорубицина через 24 часа после посева.

При культивировании в среде с МИК цефтриаксона и сочетаниями препаратов различия между значениями оптической плотности были несущественны.

время культивирования, ч

-•-МИКцеф. -»-МИКдокс -*-Сочет-я

Рис. I. Динамика развития популяции штамма S. aureus№161.

Влияние доксорубицина и амикацина на динамику развития популяций штаммов Е. coli

Для изучения влияния доксорубицина и амикацина на динамику развития популяций штаммов кишечных палочек было использовано 5 штаммов E.coli: стандартный - E.coli АТСС 25922 и четыре клинических. График зависимости оптической плотности от времени культивирования для одного из них представлен на рисунке 2.

-к

-мик -дто

-Сочет

время культивирования, ч

Рис. 2. Динамика развития популяции штамма Е.соИ АТСС 25922.

Подобно опытным штаммам стафилококков, у вариантов всех штаммов Е.соН, культивируемых в среде, содержащей МИК антибиотика, отмечалась задержка логарифмической фазы. Аналогичный эффект прослеживался и при культивировании в среде, содержавшей амикацин и доксорубицин. Следует отметить, что хотя взятые в опыт штаммы Е.соИ были нечувствительны к доксорубицину, цитостатик во взятых концентрациях временно нарушал процессы размножения 2 штаммов, на что указывает двухфазный характер кривой роста

Парное сравнение совокупности значений оптической плотности, полученных для всех штаммов в разных условиях культивирования, показало существенность различий для вариантов, культивируемых в мясо-пелтонном бульоне без препаратов и в мясо-пептонном бульоне, содержавшем МИК амикацина. При культивировании в среде, содержавшей МИК амикацина и в среде, содержавшей сочетания препаратов, значения оптической плотности значимо не отличались.

Таким образом, установлено, что сочетания суббаетериостатических концентраций цефтриаксона и амикацина с доксорубицином в отношении опытных культур задерживают развитие микробной популяции как стафилококков, так и кишечных палочек сопоставимо с таковой МИК одного антибиотика, а в отдельных случаях превосходят её влияние.

Влияние доксорубицина и антибиотиков на некоторые биологические свойства опытных штаммов

Плазмокоагулазная активность опытных штаммов S. aureus и их пассажных вариантов

Взятые в опыт 10 штаммов стафилококков обладали коагулазной активностью. У 6 штаммов она была высокой (титр плазмокоагулазы 1:32-1:16), у одного -средней (1:8), и у трёх - низкой (1:2).

После пассажей в мясо-пептонном бульоне без препаратов изменений плазмокоагулазной активности не отмечено. Высокой активностью обладало 6 штаммов, низкой - четыре.

После пассажей в возрастающей концентрации цефтриаксона её снижение по сравнению с контрольными вариантами отмечено у 4 штаммов (в 2- 4 раза) и возрастание - у 2 штаммов (в 8-16 раз). У 4 штаммов она не изменилась.

После пассажей в постоянной концентрации цефтриаксона титр плазмокоагулазы снизился в 2 раза у одного штамма, а его возрастание (в 2-8 раз) отмечено у 3 штаммов. При этом следует отметить, что у 2 штаммов с исходно высоким уровнем плазмокоагулазной активности титр плазмокоагулазы в обоих условиях не менялся, а у 4 штаммов отмечалось его снижение (в 2-4 раза).

При пассажах в условиях постоянной и возрастающих концентраций цефтриаксона в присутствии 'Л и '/« МИК доксорубицина плазмокоагулазная активность по сравнению с пассированными без доксорубицина вариантами у большинства штаммов снижалась в 2-8 раз.

Считаем необходимым отметить, что варианты 4 штаммов, пассированных на среде с Vi МИК доксорубицина без антибиотика, по плазмокоагулазной активности превосходили контрольные варианты. Это

свидетельствует о влиянии одного цитостатика в связи с его ДНК-тропным действием.

Совокупности значений титра плазмокоагулазы существенно не отличались у вариантов, пассированных:

- в среде без препаратов и в среде с постоянной концентрацией цефтриаксона;

- в среде без препаратов и в среде с возрастающей концентрацией цефтриаксона;

- в среде с постоянной концентрацией цефтриаксона и в такой же среде как в 'Л, так и '/< МИК доксорубицина;

- в среде с возрастающей концентрацией цефтриаксона и в такой же среде как в Уз, так и 'Л МИК доксорубицина;

- в среде без препаратов и в среде с 14 МИК доксорубицина

Таким образом, плазмокоагулазная активность стафилококков будучи хромосомным признаком оставалась достаточно стабильной в разных условиях пассажа.

Гемолитическая активность опытных штаммов S. aureus и их пассажных вариантов

Гемолитическую активность в отношении кроличьих эритроцитов изучали у пассажных вариантов 8 штаммов. У контрольных (пассированных без препаратов) вариантов всех штаммов она была достаточно выражена: титр гемолизинов 1:32-1:64.

После пассажей в возрастающей концентрации антибиотика титр гемолизинов снизился (в 4-16 раз) у 5 штаммов, в постоянной концентрации -у 4 штаммов (в 2-16 раз). У 2 штаммов в обоих условиях он не изменялся.

Пассажи в среде, содержащей Уг и У* МИК доксорубицина и возрастающие концентрации цефтриаксона, по сравнению с пассажами в среде с одним антибиотиком, приводили к снижению гемолитической активности (в 2-16 раз) более чем у половины опытных штаммов. При пассажах на среде с 'Л МИК доксорубицина и постоянной концентрацией цефтриаксона эта тенденция отмечена у половины опытных штаммов.

Варианты 4 штаммов, пассированные на среде только с Уг МИК доксорубицина, по гемолитической активности отличались от контролей: титр гемолизинов был ниже, чем у контрольных вариантов в 2-16 раз.

Совокупности значений титра гемолизинов у всех штаммов при парном сравнении вариантов, пассированных в разных условиях, имели существенные различия у вариантов, которые пересевали:

- в среде без препаратов и в среде с постоянной концентрацией цефтриаксона;

- в среде без препаратов и в среде с возрастающей концентрацией цефтриаксона.

В условиях пассажей как в постоянной, так и возрастающей концентрации цефтриаксона и их сочетаниях с "Л и V* МИК доксорубицина титры гемолизинов отличались несущественно. Аналогичные результаты были получены для вариантов, пассированных в среде без препаратов и Уг МИК доксорубицина.

Таким образом, гемолитическая активность штаммов достоверно снижалась после пассажей на среде с антибиотиком, но ее колебания в присутствии доксорубицина были незначимы.

Адгезивные свойства опытных штаммов Е.соП и их пассажных вариантов

Как указывалось выше, об адгезивной активности пассажных вариантов Е.соП судили по их способности адсорбироваться на эритроцитах человека О (I) группы, ЯЬ (+) и выражали величиной среднего показателя адгезии (СПА).

Исходно высокой адгезивной активностью обладал вариант лишь одного штамма (СПА 5,0). У исходных вариантов 6 штаммов она была ниже и оценена как средняя - СПА 2,28 - 3,52. Низкой она оказалась у 3 штаммов (СПА 1,68 -2,0). Контрольные (пассированные в среде без препаратов) варианты 3 штаммов по сравнению с исходными имели достоверно более низкие величины СПА(1,68 - 3,52) а одного штамма - более высокие, 3,48. У 6 штаммов этот показатель существенно не отличался от контроля. Можно предполагать, что изменение адгезивной активности при пассажах на питательной среде свидетельствует о нестабильности этого признака.

При пассажах в условиях постоянной концентрации амикацина адгезивная активность (по сравнению с контролем) достоверно возросла у 3 штаммов (СПА 2,8 - 5,52), а у 2 штаммов - снизилась (СПА 1,4 - 1,84). У 5 штаммов она была близка контрольным вариантам (СПА 1,4 - 3,24).

После пассажей в среде с возрастающей концентрацией амикацина значимое возрастание адгезивной активности отмечено у 3 штаммов (СПА 2,8 -4,72). У одного штамма она достоверно снизилась (СПА 1,2). У 6 штаммов адгезивные свойства значимо не отличались от контрольных вариантов.

Это свидетельствует о том, что пассажи на среде с одним антибиотиком приводят к разнонаправленному изменению адгезивной активности у половины опытных штаммов.

При пассажах в среде с постоянной концентрацией амикацина в присутствии 100 мкг доксорубицина по сравнению с вариантами, пассированными на питательной среде только с одним антибиотиком, величина СПА достоверно изменилась у 3 штаммов: увеличилась у 2 штаммов (с 2,8 до 5,68 и с 1,4 до 1,92) и снизилась у одного (с 1,84 до 1,28). У остальных изменения были несущественны.

В присутствии 50 мкг доксорубицина достоверные изменения адгезивной активности отмечены у 6 штаммов. При этом у 4 штаммов она возросла (СПА 2,92 - 4,76), а у 2 штаммов - снизилась (СПА 4,12 и 1,4).

При пассажах в среде с возрастающей концентрацией амикацина и 100 мкг доксорубицина по сравнению с вариантами, пассированными в средах без цитостатика, значимых изменений СПА у всех пассажных вариантов штаммов не отмечено.

В то же время при пассажах в средах с возрастающей концентрацией амикацина и 50 мкг доксорубицина СПА достоверно снизился у 2 штаммов: с 4,72 до 3,52 и с 3,96 до 2,48 и повысился у одного штамма с 1,52 до 2,2. Приведенные данные свидетельствуют о том, что доксорубицин во взятых концентрациях разнонаправленно влияет на адгезивную активность опытных штаммов при сочетании с амикацином как при пассаже в постоянной, так и в возрастающей концентрации.

Пассажи штаммов на среде со 100 мкг доксорубицина по сравнению с контролем существенно влияли на адгезивную активность 2 штаммов: у одного штамма величина СПА возросла до 4,76, у другого - снизилась до 1,44. У других штаммов этот признак в данных условиях не изменялся.

Таким образом, пассажи на средах с амикацином сопровождаются разнонаправленным изменением адгезивной активности опытных штаммов. Этот эффект сохраняется и в присутствии СК доксорубицина.

В заключении отметим, что сочетания антибиотика и доксорубицина в опытных концентрациях оказали существенное влияние на адгезивную активность штаммов Е.соИ. Изменения плазмокоагулазной и гемолитической активности штаммов Б.аигеив оказались несущественны. Отсутствие однонаправленного влияния опытных препаратов на изменения изучаемых признаков вирулентности по нашему мнению может быть во многом обусловлено сложностью механизмов регуляции этого свойства бактерий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Наличие синергидного эффекта в действии доксорубицина и взятых в опыт антибиотиков (цефтриаксона и амикацина) позволит оптимизировать антибиотикотерапию у онкологических больных, в частности умеренно снижать дозы антимикробных препаратов.

2. Отсутствие влияния доксорубицина на развитие антибиотикоустойчивости опытных штаммов позволяет использовать эти комбинации при длительных циклах антибактериальной и противоопухолевой химиотерапии, не опасаясь появления антибиотикоустойчивых форм бактерий. Однако это не отрицает необходимости постоянного мониторинга за антибиотикочувствительностыо бактерий в онкологической практике.

выводы

1. Доксорубцин - противоопухолевый препарат из группы антрациклинов проявил достаточную антимикробную активность в отношении опытных штаммов S.aureus. В отношении опытных штаммов E.coli данный препарат не обладал антимикробным действием.

2. Доксорубицин в опытных концентрациях оказывал потенцирующее влияние на антимикробную активность цефтриаксона в отношении опытных штаммов S.aureus и амикацина в отношении опытных штаммов E.coli, что следует учитывать при совместном использовании этих препаратов.

3. Присутствие доксорубицина существенно не влияло на развитие устойчивости опытных штаммов S.aureus к цефтриаксону и E.coli - к амикацину, что позволяет использовать эти комбинации в лечебной практике.

4. Доксорубицин в опытных концентрациях усиливал подавляющее действие цефтриаксона на динамику развития популяций штаммов S.aureus и амикацина - на динамику развития популяций штаммов E.coli.

5. Пассажи на средах с 'Л и % МИК доксорубицина в сочетании с цефтриаксоном существенно не изменяли плазмокоагулазную и гемолитическую активность пассажных вариантов стафилококков.

6. Пассажи на средах с неингибирующими концентрациями доксорубицина в сочетании с амикацином разнонаправленно влияли на адгезивную активность опытных штаммов Е. coli.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шаповал О.Г. Изучение антимикробной активности противоопухолевых лекарственных средств / О.Г. Шаповал // Молодые ученые

- здравоохранению региона: Материалы 67 науч.-практ. конф. студентов и молодых специалистов. - Саратов, 2006. - С. 105-106.

2. Шаповал О.Г. Изучение влияния противоопухолевых препаратов на антимикробную активность антибиотиков / О.Г. Шаповал // Молодые ученые -здравоохранению региона: Материалы 67 науч.-практ. конф. студентов и молодых специалистов. - Саратов, 2006. - С. 106.

3. Шаповал О.Г. Изучение влияния доксорубицина на развитие лекарственной устойчивости у стафилококков / О.Г. Шаповал, Н.Г. Ходакова, Г.М. Шуб // Материалы IX всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - Москва, 2007. - Т. 2. - С. 283-284.

4. Заболотникова Е. И. Влияние доксорубицина и цефтриаксона на гемолитическую активность Staphylococcus aureus / Е.И. Заболотникова, О.Г. Шаповал, С.Б. Радевич // Молодежь и наука: итоги и перспективы: Материалы межрегиональной науч.-практ. конф. студентов и молодых ученых с международным участием . - Саратов, 2007. - С. 49-50.

5. Шаповал О.Г. Влияние доксорубицина на развитие устойчивости стафилококков к цефтриаксону / О.Г. Шаповал // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2007. - № 5. - С. 82-84.

6. Шаповал О.Г. Сочетанное действие доксорубицина и амикацина на кишечные палочки / О.Г. Шаповал // Онкология - XXI век: Материалы III Международной научной онкологической конференции 29 апреля - 7 мая 2008 г., Эйлайт. - Пермь, 2008. - Ч. 2. - С. 406.

7. Шаповал О.Г. Влияние доксорубицина на адгезивные свойства кишечных палочек / О.Г. Шаповал // Саратовский научно-медицинский журнал.

- 2008. - Т. 21. - № 3. - С. 33-36.

Подписано к печати 29.11.2008 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Гарнитура «Тайме». Усл.-печ. л. 1. Тираж 100. Заказ №812.

Отпечатано с оригинал-макета в ООО «Принт-Клуб» 410026, г. Саратов, ул. Московская, 160. Тел.: (845-2) 507-888

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Шаповал, Ольга Георгиевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ:

ГЛАВА 1. Основные сведения о противоопухолевых химиопрепаратах.

ГЛАВА 2. Частота и этиологическая структура инфекционных осложнений в онкологии.

ГЛАВА 3. Изучение влияния ДНК-тропных соединений на микроорганизмы.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ:

ГЛАВА 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ДОКСОРУБИЦИНА НА УРОВЕНЬ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ И ФОРМИРОВАНИЕ УСТОЙЧИВОСТИ ОПЫТНЫХ ШТАММОВ К АНТИБИОТИКАМ:

5.1. Антимикробная активность цефтриаксона и амикацина.

5.2. Антимикробная активность доксорубицина

5.3. Влияние доксорубицина на чувствительность штаммов S. aureus и Е. coli к антибиотикам.

5.4. Влияние доксорубицина на развитие устойчивости штаммов

S. aureus и Е. coli к антибиотикам.

ГЛАВА 6. ВЛИЯНИЕ ДОКСОРУБИЦИНА И АНТИБИОТИКОВ НА ДИНАМИКУ РАЗВИТИЯ ПОПУЛЯЦИЙ ОПЫТНЫХ ШТАММОВ 6.1. Влияние доксорубицина и цефтриаксона на динамику развития популяций штаммов S. aureus.

6.2. Влияние доксорубицина и амикацина на динамику развития популяций штаммов Е. coli.

ГЛАВА 7. ВЛИЯНИЕ ДОКСОРУБИЦИНА И АНТИБИОТИКОВ НА НЕКОТОРЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ОПЫТНЫХ ШТАММОВ

7.1. плазмокоагулазная активность опытных штаммов S. aureus и их пассажных вариантов

7.2. гемолитическая активность опытных штаммов S. aureus и их пассажных вариантов

7.3. Адгезивные свойства опытных штаммов Е. coli и их пассажных вариантов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сочетанное действие противоопухолевых препаратов и антибиотиков на микроорганизмы"

В настоящее время отмечается увеличение числа онкологических заболеваний, которые наряду с сердечно-сосудистой патологией и травмами занимают ведущие места среди причин инвалидизации и смертности населения [88, 108]. В России в 2000 г. злокачественные новообразования стали причиной смерти 13,8% мужского и 12,7% женского населения. По данным ВОЗ за 2005 год ежегодно в мире от онкозаболеваний умирает 7 млн. человек, что на 2 млн. больше, чем 10 лет назад. К 2020 году, по мнению экспертов ВОЗ, этот показатель может достигнуть 20 млн. Постепенное возрастание количества новых случаев злокачественных новообразований отмечается и в России: в 2002 г. их число составило 453256, что на 10,7% больше, чем в 1993 г. [31]. У мужчин преобладают поражения органов дыхания, желудка и кожи, у женщин - молочных желез, кожи и матки [30]. Среди детей ведуш^ патологией с высоким процентом летальности (до 50,5%) являются гемобластозы [13].

Актуальность проблемы

Современные методы терапии в онкологии достигли, особенно за последние десятилетия, несомненных успехов, в том числе и возможности полного клинического выздоровления при более широком диапазоне нозологических форм. Это стало возможным благодаря широкому применению радио- и химиотерапии [107]. Отдавая должное этим методам, нельзя забывать об их иммуносупрессивном действии, усугубляющим иммуносупрессивное влияние самой опухоли. В связи с этим существенной проблемой в терапии злокачественных новообразований продолжает оставаться развитие инфекционных осложнений. По данным РОНЦ им. Н. Н. Блохина (2001) они являются причиной летальных исходов у 1/3 онкологических больных. Одними из основных возбудителей в этиологической структуре гнойной инфекции в онкологии среди грамположительных микроорганизмов являются стафилококки, среди грамотрицательных - энтеробактерии.

Специфическая химиотерапия онкологических заболеваний обычно имеет цикловой характер и достаточно продолжительна. Поэтому проявления инфекции на фоне проводимой противоопухолевой химиотерапии достаточно часты, что требует одновременного назначения противоопухолевых и антимикробных химиопрепаратов. В связи с этим изучение влияния противоопухолевых химиопрепаратов и антибиотиков на биологические свойства микроорганизмов представляет большой теоретический и практический интерес.

Целью работы явилось исследование сочетанного действия противоопухолевых препаратов и антибиотиков на биологические" свойства стафилококков и кишечных палочек.

Из цитостатиков мы выбрали доксорубицин - препарат с широким спектром противоопухолевой активности из группы антрациклинов, а из антибиотиков цефалоспорин III поколения - цефтриаксон и аминогликозид III поколения - амикацин.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Определить антимикробную активность доксорубицина в отношении клинических и стандартных {Staphylococcus aureus АТСС 29213 и Escherichia coli АТСС 25922) штаммов стафилококков и кишечных палочек.

2. Изучить влияние доксорубицина:

- на уровень чувствительности взятых в опыт штаммов S.aureus к цефтриаксону и E.coli — к амикацину;

- на развитие лекарственной устойчивости штаммов S. aureus к цефтриаксону и E.coli - к амикацину.

4. Изучить влияние сочетаний доксорубицина и цефтриаксона, доксорубицина и амикацина на экспрессию факторов вирулентности стандартных и клинических штаммов S. aureus (плазмокоагулаза, гемолизин) и E.coli (адгезивная активность).

Научная новизна работы

Впервые проведено изучение влияния используемого в клинической практике препарата с ДНК-тропным действием - доксорубицина на уровень и формирование устойчивости стафилококков к цефтриаксону, кишечных палочек - к амикацину, а также факторы вирулентности этих микроорганизмов.

Практическая значимость работы

Положения, выносимые на защиту

1. Доксорубицин обладает умеренной антимикробной активностью в отношении S.aureus и не проявляет ее в отношении E.coli.

2. Доксорубицин оказывает потенцирующее действие на антимикробную активность цефтриаксона в отношении опытных штаммов S.aureus и амикацина - в отношении опытных штаммов E.coli.

4. Доксорубицин способен оказывать влияние на вирулентность опытных штаммов S.aureus (продукцию плазмокоагулазы и гемолитическую активность) и E.coli (адгезивные свойства), однако этот эффект носит штаммовый характер.

Апробация работы

Материалы настоящего исследования представлены на конференциях студентов и молодых ученых Саратовского государственного медицинского университета в 2006-2007 гг., в материалах IX Съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007 г), XII Международной научной конференции и III Международной научной онкологической конференции (Эйлайт, 2008).

Основные положения диссертации опубликованы в 7 печатных работах.

Структура и объём работы

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Шаповал, Ольга Георгиевна

ВЫВОДЫ

1. Доксорубцин - противоопухолевый препарат из группы антрациклинов проявил достаточную антимикробную активность в отношении опытных штаммов S. aureus. В отношении опытных штаммов Е. coli данный препарат не обладал антимикробным действием.

2. Доксорубицин в опытных концентрациях оказывал потенцирующее влияние на антимикробную активность цефтриаксона в отношении опытных штаммов S. aureus и амикацина в отношении опытных штаммов E.coli, что следует учитывать при совместном использовании этих препаратов.

3. Присутствие доксорубицина существенно не влияло на развитие устойчивости опытных штаммов S. aureus к цефтриаксону и Е. coli - к амикацину, что позволяет использовать эти комбинации в лечебной практике.

4. Доксорубицин в опытных концентрациях способен усиливать подавляющее действие цефтриаксона на динамику развития популяции штаммов S. aureus и амикацина - на динамику развития популяции штаммов E.coli.

5. Пассажи на средах с Уг и Ул МИК доксорубицина в сочетании с цефтриаксоном существенно не изменяли плазмокоагулазную и гемолитическую активность пассажных вариантов S.aureus .

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На современном этапе развития противоопухолевой терапии в арсенале врачей имеется более десятка различных по химическому строению соединений, среди которых имидазотетразины, таксаны и камптотецины начали использоваться на практике совсем недавно, с конца XX века [67, 68]. Благодаря развитию и усовершенствованию основных методов лечения в онкологии удалось достигнуть значительных успехов -высокого процента длительных ремиссий и полного выздоровления при нозологических формах, ранее считавшихся прогностически неблагоприятными [28]. В частности современная терапия позволяет получить ремиссии 65-75% больных острым нелимфобластным лейкозом и 85% больных острым лимфобластным лейкозом [63]. Однако существенной проблемой химиотерапии как одного из базовых методов лечения злокачественных опухолей является ее иммуносупрессивный эффект, следствие которого - развитие инфекционных осложнений у онкологических больных. Этиологическая структура инфекций в онкологии с течением времени претерпевает изменения, выражающиеся в чередовании лидирующего положения грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов. В начале XXI века ведущие позиции в ней начали занимать грамотрицательные бактерии. Тем не менее, согласно литературным данным, можно проследить стойкую взаимосвязь между рядом нозологических форм инфекции и их основными возбудителями. В частности грамотрицательным бактериям ведущее значение принадлежит в этиологии инфекций мочевыводящих путей, а за грамположительными остается главная роль в этиологии бактериемий. Среди грамотрицательных бактерий одним из основных возбудителей инфекции являются кишечные палочки, среди грамположительных -стафилококки. Из 360 штаммов, выделенных из мочи больных, перенесших онкогинекологические операции, 19,2% идентифицированы как E.coli [25]. А среди гемокультур, выделенных от онкобольных, 17 — 21% идентифицированы как S.epidermidis и 9% - как S. aureus [96, 124]. Анализируя данные РОНЦ им. H.H. Блохина за 2003-2004 гг., можно сделать вывод, что общая частота выделения энтеробактерий и стафилококков при разных формах инфекции составляет 22 и 12% соответственно [44].

Течение инфекций у онкологических больных обладает рядом особенностей, одной из которых являются возможность быстрого прогрессирования на фоне состояния миелосупрессии и отсутствие клинически документированого очага при наличии общей интоксикации [19, 23, 34, 55]. Это обуславливает необходимость назначения антибиотиков на фоне проведения противоопухолевой химиотерапии. В литературе в связи с этим нередко используется термин «профилактическое назначение антибиотиков» в онкологии [3, 75, 122, 128, 147, 164]. С таким подходом согласны не все авторы, учитывая возможность развития антибиотикоустойчивых форм и материальные затраты на антимикробные препараты [2, 138, 149, 150]. Однако подобная практика назначения антибиотиков в ряде случаев может иметь жизненно важное значение, поскольку предотвращает развитие или тяжелое течение инфекции [44, 79, 129, 130, 132, 161]. Например, в онкогематологии существует понятие деконтаминации кишечника от грамотрицательной микрофлоры у больных острыми лейкозами для предупреждения развития инфекционных осложнений и эмпирического назначения антимикробных препаратов на фоне состояния фебрильной нейтропении [2, 23].

Сами противоопухолевые химиопрепараты способны проявлять антимикробную активность, поскольку в механизме их действия подразумевается прямое и(или) опосредованное влияние на нуклеиновые кислоты клеток. В частности ее наличие было установлено для антрациклинов, препаратов платины, ряда антиметаболитов фторурацила, метотрексата) и алкилирующих соединений (циклофосфамида) [121, 130]. Однако интерес к проблеме воздействия противоопухолевых химиопрепаратов на микроорганизмы ограничивается их высокой органотоксичностью. По этой причине не представляется возможным использование этих препаратов в целях этиотропной терапии инфекций. Но, учитывая возможность одновременного назначения антибиотиков и антинеопластических химиопрепаратов, большое значение приобретает изучение их сочетанного действия на микроорганизмы. В нашей работе оно было изучено на примере широко применяемых в клинической практике антибиотиков цефтриаксона и амикацина и цитостатического препарата доксорубицина из группы антрациклинов в отношении стандартных и клинических штаммов S. aureus и E.coli. Антрациклины используются при многих нозологических формах злокачественных новообразований [43, 47, 54]. Цефтриаксон и амикацин применяются в лечении инфекций у больных с различной патологией, в том числе и с онкологической [26, 80, 101]. В частности комбинации цефтриаксона и амикацина рекомендуются для лечения больных с фебрильными нейтропениями [5].

Предварительно методом двукратных серийных разведений в мясо-пептонном бульоне определяли чувствительность испытуемых штаммов к опытным препаратам. Результаты этих экспериментов послужили очередным подтверждением широкого распространения устойчивости штаммов S. aureus к ß-лактамным антибиотикам. 86,5% опытных штаммов были устойчивыми к цефтриаксону (МИК 3,1 и более мкг/мл). Из них для 34,6%) величина МИК равнялась 3,1, 21,2% - 6,2 мкг/мл. МИК50 составила 4,6 мкг/мл. Эти результаты соответствуют данным РОНЦ им. H.H. Блохина (2003-2004), согласно которым количество MRS, выделенных из различного клинического материала, достигло 77%. При этом доля MRS А составляла 24%, a MRCNS-53% [78].

Большая часть опытных штаммов E.coli была чувствительна к амикацину: МИК50 - 2,8 мкг/мл. Лишь для 29,6% штаммов значение МИК составило 3,1, для 27,3%-6,2 мкг/мл. Имеющиеся литературные данные также свидетельствуют о пока еще высокой чувствительности грамотрицательных бактерий к аминогликозидам последних поколений. По данным РОНЦ им. H.H. Блохина 75% всех штаммов различных видов, выделенных из разного клинического материала, были чувствительны к амикацину, в то время как к гентамицину чувствительными оказались только 37% штаммов [78]. Однако эта чувствительность может иметь «местные» особенности, тесно связанные с ротацией антибиотиков в данном стационаре или регионе [48, 81, 111]. В частности уровень резистентности энтеробактерий, выделенных из различного патологического материала онкобольных трех стационаров г. Москвы, к амикацину составил 59-81%, тобрамицину - 61-87% [77]. Изучение чувствительности к аминогликозидам возбудителей инфекций у больных без онкопатологии также приводит к различным результатам. Многоцентровое исследование чувствительности грамотрицательных бактерий к аминогликозидам показало, что в фенотипе резистентности к этим антибиотикам амикацин был представлен у 1,7-49,9% культур в зависимости от стационара [81]. В исследовании других авторов резистентными к этому антибиотику были 36% грамотрицательных культур [11]. Разные виды бактерий кишечной группы, выделенные от больных хирургических стационаров Санкт-Петербурга были чуствительны к амикацину в 56-58% случаев [109].

Изучение антимикробной активности доксорубицина показало, что ее уровень достаточно высок для опытных штаммов S.aureus (МИК5о 7,08 мкг/мл при диапазоне значений от 25 до 1,5 мкг/мл).

В отношении опытных штаммов E.coli доксорубицин не проявил антимикробного действия (МИК для 93,2% штаммов 1000 мкг/мл), что оказалось достаточно неожиданным. Это может быть обусловлено незначительным проникновением препарата внутрь клеток данного вида микроорганизмов. Известно, что поступление ряда препаратов (в том числе противоопухолевого антибиотика - актиномицина) в грамотрицательные бактерии затруднено за счет большого количества липополисахаридов в составе клеточной стенки [102]. Это подтверждают литературные и наши данные о наличии антимикробной активности у антрациклинов в отношении грамположительных микроорганизмов, не имеющих богатой липидами клеточной стенки. Согласно исследованиям ряда авторов значения МИК различных препаратов антрациклиновой группы для стандартных штаммов S. aureus составляют от 2,5 до 60 мкг/мл [82, 115]. По вопросу антимикробной активности антрациклинов в отношении грамотрицательных бактерий информация в литературе противоречива. Одни авторы свидетельствуют о ее отсутствии, по данным других она достаточно выражена [27, 82]. Эти расхождения могут быть обусловлены испытанием препаратов, имеющих отличия в химической структуре.

Большой интерес представляет собой наличие синергидного эффекта при сочетании доксорубицина во взятых концентрациях с цефтриаксоном в отношении опытных штаммов S. aureus и амикацином - в отношении опытных штаммов E.coli.

В присутствии доксорубицина чувствительность 70% штаммов обоих видов (S. aureus к цефтриаксону, Е. coli - к амикацину) возросла в 2 -32 раза. При этом необходимо отметить, что ее значительное увеличение (в 8-16 раз) наблюдалось для 12% опытных штаммов S.aureus и 38% - E.coli. Потенцирующее действие доксорубицина на антимикробную активность цефтриаксона и амикацина в отношении опытных штаммов следовало ожидать, учитывая разный механизм их действия. Проявление данного эффекта у нечувствительных к доксорубицину опытных штаммов E.coli обусловлено, очевидно, достаточным поступлением этого препарата в микробную клетку при сочетании с амикацином, играющим роль проводника». Проникновение аминогликозидов внутрь микробных клеток осуществляется через поры с последующим энергозависимым транспортом при участии пермеаз, синтез которых индуцируется самим антибиотиком [14]. При этом пермеазы не проявляют высокой специфичности именно к этой группе препаратов, что не исключает возможности их участия в транспорте антрациклинов. К тому же в литературе имеются сведения о способности аминогликозидов вызывать частичную деструкцию цитоплазматической мембраны микроорганизма [29], что также может способствовать поступлению доксорубицина. В этом отношении по всей вероятности решающую роль играет проникновение аминогликозидов через цитоплазматическую мембрану за счет взаимодействия со свободными радикалами - продуктами работы протонного насоса [14], что и приводит к ее повреждению. Антрациклины сами обладают способностью индуцировать процессы свободно-радикального окисления и в свою очередь могут способствовать проникновению аминогликозидов. В литературе также имеется информация об изменении физико-химических параметров клеточной поверхности у резистентных к антибиотикам микроорганизмов. Так у резистентных к пенициллинам стафилококков и эшерихий она становится менее гидрофильной, у резистентных к стрептомицину - более гидрофильной [70]. Возможно, что в условиях контакта опытных штаммов с амикацином и доксорубицином проницаемость клеточной стенки повысилась, что способствовало их поступлению внутрь микробной клетки.

Наличие потенцирующего эффекта со стороны доксорубицина на антимикробную активность цефтриаксона и амикацина имеет большое значение при проведении антибиотикотерапии и антибиотикопрофилактики у онкологических больных. Возможность снижения дозы антибиотика даже на позволит уменьшить его расход и снизить нагрузку на детоксицирующие органы. Для практической реализации этого эффекта существенное значение имеют концентрации опытных препаратов в сыворотке крови.

Литературные данные о концентрации антрациклинов противоречивы. По данным ряда авторов концентрация этих препаратов в плазме крови животных и человека становится низкой (1-3 мкг/мл) уже через несколько минут после внутривенного введения, а далее в течение часа отмечается ее дальнейшее снижение до десятых долей мкг [52, 69, 71, 76]. При этом следует отметить, что эти значения соответствуют неингибирующим концентрациям доксорубицина для трети опытных штаммов S.aureus. При более высоких дозах доксорубицина у онкогематологических больных его концентрация в крови будет очевидно выше, что подтверждают использованные нами в опыте литературные сведения [42]. В любом случае фармакокинетические параметры антрациклинов могут предполагать реализацию их антимикробного эффекта в зоне локального воспаления, поскольку накопление их в количествах, близких опытным, происходит в тканях [76]. Однако введение в практику липосомальных форм цитостатиков, способствующих сохранению препарата в крови в более высоких концентрациях и преимущественному проникновению в опухолевый и воспалительный очаги, в данной ситуации имеет несомненную перспективу [41, 42]. К тому же доксорубицин при сравнительной характеристике с другими антрациклинами обладает высокой кумулятивной способностью, что может способствовать повышению его концентрации в крови [94]. Анализ фармакокинетических параметров амикацина позволяет сделать вывод, что его остаточные концентрации (не более 10 мкг/мл) в сыворотке крови мало отличаются от пиковых (20-30 мкг/мл), создающихся через час после внутривенного введения терапевтической дозы [90]. Наиболее низкие концентрации цефтриаксона в сыворотке крови создаются через 12 часов и 24 часа (28 и 9 мкг/мл) после внутривенного введения терапевтических доз [92]. Таким образом, приведенные значения наименьших концентраций обоих препаратов в крови соответствуют опытным неингибирующим концентрациям для штаммов, устойчивых к амикацину и цефтриаксону. Теоретически это предполагает реализацию системного, совместного антимикробного действия опытных препаратов в отношении антибиотикоустойчивых культур, высоко чувствительных к доксорубицину.

Влияние доксорубицина на развитие устойчивости опытных штаммов S.aureus к цефтриаксону и E.coli к амикацину после проведенных 10 пассажей оказалось несущественным. Варианты S.aureus, пассированные в неингибирующих концентрациях доксорубицина с постоянной и возрастающими концентрациями цефтриаксона, по значению Кад не отличались от вариантов, пассированных без цитостатика. Подобные результаты были получены и для опытных штаммов E.coli в отношении амикацина.

Формирование индуцированной антибиотикоустойчивости по данным литературы связано с действием антибиотика как фактора отбора спонтанных мутантов или размножением исходно инфицированных R-плазмидой клеток [97]. Очевидно, доксорубицин в опытных концентрациях не препятствовал распространению R-плазмид в микробной популяции E.coli, трансдукции генов устойчивости у S.aureus и значимо не влиял на выживаемость мутантных клеток обоих видов. Указанные положения подтверждают данные, полученные Г.Н. Нещадимом, в отношении отсутствия влияния антрациклина брунеомицина на передачу R-плазмид у E.coli [53].

Отсутствие влияния доксорубицина на развитие устойчивости опытных штаммов к испытуемым антибиотикам имеет практическое значение в плане прогноза формирования устойчивости данных видов микроорганизмов к соответствующим антибиотикам при их применении на фоне терапии доксорубицином. Однако это не позволяет думать об отсутствии необходимости в проведении постоянного микробиологического мониторинга за устойчивостью к антибиотикам у штаммов, выделенных от больных, получающих противоопухолевую терапию.

Снижение чувствительности к цефтриаксону (в 2-4 раза) по сравнению с контролем у вариантов S.aureus, пассированных только в максимальной концентрации доксорубицина (1/2 МИК), может быть обусловлено взаимодействием цитостатика с ДНК микробной клетки в локусах, которые ответственны за синтез белковых структур, связывающих антибиотик. В дополнение следует заметить, что антрациклины не обладают четко выраженной специфичностью в отношении нуклеотидного состава ДНК [17]. Например, множественное интеркалирование ДНК клеток могло привести к изменению структуры и конформации протеиновых пор наружней мембраны, через которые диффундируют гидрофильные антибиотики, в том числе р~лактамы [14]. При сочетании опытных концентраций цефтриаксона и доксорубицина снижение чувствительности опытных штаммов оказалось более выраженным, чем при отдельном использовании каждого из препаратов: Мы полагаем, что это обусловлено прямым вмешательством самого цефтриаксона как главного селективного фактора. Кривые роста микробной популяции, построенные по данным измерения оптической плотности, подтверждают этот результат.

Изучение плазмокоагулазной и гемолитической активности пассажных вариантов штаммов S. aureus показало, что цефтриаксон и доксорубицин в опытных концентрациях как отдельно, так и при сочетании друг с другом способны изменять продукцию этих факторов. Варианты штаммов, пассированные только в постоянной и возрастающих концентрациях цефтриаксона, а также х/г МИК доксорубицина по плазмокоагулазной активности превзошли контрольные варианты, пассированные без препаратов. У вариантов, пассированных в сочетаниях Уг, 'Л МИК доксорубицина и цефтриаксона в постоянной и возрастающих концентрациях, плазмокоагулазная активность преимущественно снижалась по сравнению с вариантами, пассированными в одном антибиотике.

Повышение плазмокоагулазной активности у большинства вариантов S. aureus, пассированных при постоянной и возрастающих концентрациях цефтриаксона, по сравнению с контрольными свидетельствует о воздействии данного антибиотика на этот процесс. Известно, что гены, ответственные за синтез плазмокоагулазы, локализованы в бактериальной хромосоме [95]. Формирование индуцированной антибиотикоустойчивости в данном случае могло привести и к отбору клонов, обладающих более высокой плазмокоагулазной активностью. Будучи хромосомным, этот признак прочно закрепился у потомства при пассажах.

В литературе имеются сведения о снижении вирулентности, в том числе образования плазмокоагулазы, тест-штаммов различных микроорганизмов под влиянием макролидов. Считают, что подобное воздействие этих антибиотиков в субингибиторных концентрациях связано со сдерживанием развития микробной популяции на уровне, недостаточном для экспрессии клеточных белков и непосредственным повреждением факторов вирулентности белковой природы [51]. Полученные результаты в отношении снижения плазмокоагулазной активности соответствуют этим данным.

Сочетание цефтриаксона с Уг и Ул МИК доксорубицина снижало плазмокоагулазную активность штаммов. Поскольку локусы, ответственные за синтез факторов вирулентности, находятся в разных участках ДНК [87], то можно предположить, что под влиянием доксорубицина произошло их интеркалирование, что «выключило» часть генов из функционально активного состояния. Повышение плазмокоагулазной активности штаммов, пассированных на среде только с Уг МИК доксорубицина связано, очевидно, с лучшей адаптацией стафилококков в отсутствие антибиотика к его ДНК-тропному действию. В литературе есть сведения, что индуцируемые карминомицином однонитевые разрывы ДНК в клетках Micrococcus luteus, быстрее восстанавливаются по мере увеличения сроков инкубации культуры с этим антрациклином [98, 99]. То есть по мере пассажей в данной концентрации доксорубицина повышаются репаративные возможности клеточного генома. Следствием этого может явиться усиление экспрессии восстановленных фрагментов, в том числе и кодирующих плазмокоагулазу.

Гемолитическая активность вариантов S.aureus, пассированных в среде с постоянной и возрастающими концентрациями цефтриаксона, Vi МИК доксорубицина была ниже, чем у вариантов, пассированных без препаратов. Гемолитическая активность контрольных вариантов, была выше, чем у исходных штаммов. Сочетание обоих препаратов разнонаправлено влияло на ее динамику по сравнению с вариантами, пассированными без доксорубицина.

Превосходство по гемолитической активности контрольных штаммов S. aureus над исходными свидетельствует о «реанимировании» образования гемолизинов при улучшении условий питания микроорганизмов. К тому же имеются данные о повышении гемолитической активности стафилококков по мере роста и размножения микробной популяции, накопления в среде кислых продуктов обмена [95]. Гемолизины в этих условиях очевидно представляют собой лишний балласт, сбрасываемый при ухудшении условий культивирования. Более низкая, чем у контрольных вариантов гемолитическая активность штаммов, пассированных на среде с цефтриаксоном, является положительным моментом для клинической практики, в частности терапии стафилококковых инфекций. Вероятно, цефтриаксон как препарат без ДНК-тропного действия не оказывает прямого влияния на синтез гемолизинов, но не исключено, что ингибирование им синтеза пептидогликана определенным образом задерживает транспорт данного экзотоксина в окружающую среду. Снижение гемолитической активности вариантов, пассированных на среде с Vi МИК доксорубицина, может быть результатом его ингибирующего действия на Н1у-плазмиды опытных штаммов или взаимодействием с ответственными за синтез гемолизинов хромосомными генами. Снижение гемолитической активности у вариантов, пассированных в сочетаниях обоих препаратов, может быть обусловлено их синергидным эффектом. Возрастание этого признака характерно для вариантов, обладающих высокими адаптационными способностями в этих условиях пассажа.

Однако данные статистической обработки полученных значений титра гемолизинов и плазмокоагулазы показали, что совокупные изменения данных титров существенны только в отношении гемолитической активности вариантов, пассированных в одном антибиотике. Это позволяет сделать вывод об отсутствии значимого влияния самого доксорубицина в опытных концентрациях на эти вирулентные признаки. Это имеет положительное значение для его использования в клинике.

Изучение адгезивной активности пассажных вариантов E.coli показало, что варианты, пассированные в постоянной и возрастающих концентрациях амикацина, имели более высокую адгезивную активность, чем контроли. Адгезивная активность контрольных вариантов разнонаправлено изменялась по сравнению с исходными штаммами. Варианты, пассированные при сочетании постоянной концентрации амикацина и CK доксорубицина, имели более высокую адгезивную активность, чем варианты, пассированные без доксорубицина. Варианты, пассированные при сочетании возрастающих концентраций амикацина и CK доксорубицина по адгезивной активности уступали вариантам, пассированным без цитостатика. Пассажи в CK доксорубицина без антибиотика привели к изменению (увеличению) адгезивной активности только у одного штамма.

Изменение адгезивной активности контрольных вариантов 3 пассажных штаммов E.coli по сравнению с исходными больше в сторону снижения свидетельствует о нестабильности данного признака. Синтез адгезинов у бактерий является процессом, зависящим от многих факторов внешней среды, и кодируется хромосомными генами [12]. Видимо не у всех штаммов после «отрыва» от макроорганизма произошло полное восстановление адгезивной активности при контакте с мишенями эритроцитов. Усиление адгезивной активности вариантов 3 штаммов, пассированных в возрастающей и постоянной концентрациях амикацина, как и в случае плазмокогулазной активности у стафилококков, вероятно явилось результатом селекции антибиотиком потомства клеток с большей степенью выраженности этого хромосомного признака. Имеющиеся в литературе данные также свидетельствуют об увеличении адгезивной активности грамотрицательных бактерий (шигелл и энтероинвазивных Е. coli) в присутствии субминимальных ингибирующих концентраций тетрациклина и хлорамфеникола [56]. В этом случае интересен тот факт, что оба антибиотика, как и амикацин, нарушают синтез белка, что объединяет их по механизму действия.

Изменение адгезивной активности штаммов, пассированных при возрастающей и постоянной концентрациях амикацина в присутствии CK доксорубицина как в сторону ее снижения, так и в сторону увеличения, возможно отражает итог конкурентных взаимоотношений между доксорубицином и клетками E.coli за связывание с ионами Fe (II). Известно, что их концентрация является одним из основных факторов, влияющих на адгезию. Взаимодействие с этими ионами ряда интеркалирующих соединений ведет к превращению их в Fe (III) и инициации в результате этого процесса свободно-радикального окисления

18, 60, 61, 145]. Не исключено, что доксорубицин выступает в роли конкурента с E.coli за связывание ионов Fe (II) эритроцитов. В этих условиях бактериальные клетки должны более активно связывать железо, что приводит к увеличению их адгезивной активности.

Полученные результаты еще раз свидетельствуют о мозаичности генетической регуляции вирулентности, что является причиной лабильности и штаммового характера данного признака.

Таким образом, присутствие двух «неблагоприятных факторов»-антибиотика и доксорубицина в опытных концентрациях обнаружило тенденцию к отсутствию изменений плазмокоагулазной и гемолитической активности штаммов S.aureus и разнонаправленным изменениям адгезивной активности штаммов E.coli. Отсутствие однонаправленного механизма во влиянии опытных препаратов на изучаемые вирулентные признаки по нашему мнению может быть обусловлено сложностью механизмов регуляции коммуникативных сигналов у бактерий. Известно, что за синтез ряда факторов вирулентности, в том числе и синтез гемолизинов у стафилококков, отвечают гены, активация которых обусловлена межклеточными сигналами, «доходящими» до генома с помощью специфических пептидов [22]. Поэтому можно предположить, что микробная популяция, находясь в разных условиях культивирования, имеет неодинаковую численность и поэтому находится на разных этапах «кворум-сенсинга». Соответственно активация транскрипици и трансляции соответствующих оперонов будет происходить у разных популяций неодинаково. Данные, полученные Nalca Y. et al. (2006) о подавляющем влиянии азитромицина на кворум-сенсинг и, как следствие, продукцию факторов вирулентности у P.aeruginosa [162], свидетельствуют о возможном влиянии и других препаратов на этот процесс, в том числе и противоопухолевых.

Выявленные изменения данных факторов могут иметь значение при формировании и циркуляции госпитальных штаммов во нутрибольничной среде онкостационаров, т.е. способствовать возникновению популяции микроорганизмов с высокой или низкой вирулентностью. Формирование микробных сообществ с низкой вирулентностью является эпидемиологически благоприятным фактором.

Поскольку химиотерапия инфекционных и опухолевых заболеваний постоянно развивается, синтезируются новые химиотерапевтические средства с оптимизированными фармакологическими параметрами, оригинальной или модифицированной структурой, изучение сочетанного действия антибиотиков и противоопухолевых препаратов на микроорганизмы не потеряет своей актуальности и в дальнейшем.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Шаповал, Ольга Георгиевна, Волгоград

1. Адгезивные свойства лактобактерий и эшерихий в различных отделах желудочно-кишечного тракта человека в норме и патологии / Е.А. Богданова, Ю.В. Несвижский, A.A. Воробьев, М.В. Брюхова // Вестник РАМН. - 2006. - № 1. - С. 35-38.

2. Алексеев, Г.К. Профилактическое применение антибактериальных препаратов / Г.К. Алексеев // Антибиотики. — 1982. — Т. 27. № 16. — С. 456-465.

3. Антибактериальная химиотерапия при операциях на желудочно-кишечном тракте у онкологических больных / А.П. Кубашева, Э.П. Сорокин, П.Р. Шилов и др.// Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2005. - Т. 7. - № 2. - Приложение 1. - С. 38.

4. Антибиотикопрофилактика при плановых операциях в хирургии / Н.М. Кузин, Н.В. Ефимова, М.И. Сорокина, С.А. Дадвани // Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций: Сб. науч. тр. — М., 1991. С.341-343.

5. Антибиотикотерапия фебрильной нейтропении низкого риска инфекции / C.B. Колобов, Л.Д. Школьник, Г.В. Варлан и др. // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. — 2005. — Т. 7. — № 2. — Приложение 1. С. 35.

6. Астапов, A.A. Подавление акрихином передачи RTF-фактора / A.A. Астапов // Антибиотики. 1970. - Т. 15. - № 1. - С. 46-49.

7. Афиногенов, Г.Е. Алкилсульфонаты и алкиларилсульфонаты как ингибиторы пенициллиназы / Г.Е. Афиногенов, Е.Ф. Панарин // Антибиотики. 1976. - Т. 21. - № ю. - С. 876-880.

8. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, A.A. Воробьев. Ленинград: Медгиз, 1962. - 180 с.

9. Багирова, Н.С. Бактериемии у больных гемобластозами / Н.С. Багирова, Н.В. Дмитриева // Проблемы гематологии и переливания крови. — 2002. — № 4. — С. 21-33.

10. Багирова, Н.С. Инфекции в онкогематологии / Н.С. Багирова // Новое в онкологии / Под ред. И.В. Поддубной, H.A. Огнерубова. — Воронеж, 2001. С. 366-380.

11. Белобородова, Н.В. Сравнительная активность in vitro цефепима и других антибиотиков в отношении клинических штаммов грамотрицательных бактерий / Н.В. Белобородова, Т.Ю. Вострикова, А.И. Мелько // Антибиотики и химиотерапия. — 2003. — № 7. — С. 12-15.

12. Билалов, Ф.С. Особенности некоторых биологических свойств штаммов Escherichia coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями: Автореф. дис.канд. мед. наук / Ф.С. Билалов. — Челябинск, 2007. — 23 с.

13. Бондарь, И.В. Злокачественные новообразования у детей: заболеваемость, смертность, продолжительность жизни / И.В. Бондарь // Российский онкологический журнал. — 2002. — № 1. С. 43-44.

14. Бриан, JI.E. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиопрепаратам / JI.E. Бриан. М.: Медицина, 1984. - 272 с.

15. Бродинова, Н.С. Устранение множественной лекарственной устойчивости у культур кишечной палочки аурантином и УФ-лучами / Н.С. Бродинова, А.Ф. Мороз, Л.И. Шатман // Антибиотики. 1970. - Т. 14.- № 3. С. 244-247.

16. Волкова, З.В. Причины развития инфекции у онкологических больных / З.В. Волкова // XI Российский онкологический конгресс. 2007.- Режим доступа: http//www.rosoncoweb.ru/library/congress/09/09.htm.

17. Гаузе, Г.Ф. Исследование молекулярных механизмов действия и применения противоопухолевых антибиотиков в СССР / Г.Ф. Гаузе, Ю.В. Дудник // Антибиотики. 1982. - Т. 27. - № 12. - С. 889-898.

18. Гершанович, M.JI. Кардиоксан: профилактика кардиотоксичиости антрациклинов / M.JI. Гершанович // Вопросы онкологии. 2004. - Т. 50. - № 4. - С. 482-491.

19. Глаузер, М. Лечение фебрильной нейтропении / М. Глаузер // Современная онкология. 2001. - Т.З. - № 3. - С. 100-102.

20. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. — М.: Практика, 1999.-459 с.

21. Глухов, Н.В. Влияние фуразолидона на экспериментальную дизентерийную инфекцию: Дис. канд. мед. наук / Н.В. Глухов; Саратовский мед. ун-т. Саратов, 1965. - 179 с.

22. Грузина, В.Д. Коммуникативные сигналы бактерий / В.Д. Грузина // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т. 48. - № 10. - С. 3239.

23. Гусева, С.А. Фебрильная нейтропения: методы профилактики и терапии / С.А. Гусева, А.О. Петрушина // Украинский журнал гематологии и трансфузиологии. 2006. - Т. 6. - № 1. - С. 48-57.

24. Давиденко, И.С. Сравнительный анализ комбинаций интаксел+доксорубицин и CAF в первой линии терапии метастатического рака молочной железы / И.С. Давиденко, М.В. Казанцева, O.A. Гончарова // Российский онкологический журнал. 2006. - № 4. - С. 36-39.

25. Дмитриева, Н.В. Лечение и профилактика инфекционных осложнений при расширенных комбинированных операциях у онкогинекологических больных / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова // Русский медицинский журнал. 2003. - Т. 11. - № 18. - С. 1032-1036.

26. Дмитриева, Н.В. Преимущества цефтриаксона при лечении инфекций у онкобольных / Н.В. Дмитриева // Сопроводительная терапия в онкологии. 2005. - № 2. - С. 29-33.

27. Дудник, Ю.В. Усиление бактерицидного действия митомицина С и УФ-облучения некоторыми антрациклиновыми антибиотиками /

28. Ю.В. Дудник, JI.H. Останина, М.И. Резникова // Антибиотики. 1976. -Т. 21.-№ 9.-С. 798-800.

29. Дурнов, JI.A. Детская онкология / JI.A. Дурнов, Г.В. Голдобенко, В .И. Курмашов. М.: Литера, 1997. - 400 с.

30. Егоров, A.M. Развитие антимикробной терапии и новые парадигмы / A.M. Егоров, Ю.О. Сазыкин, В.П. Иванов // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. — 2001. Т.З. - № 2. - С. 98-104.

31. Заболеваемость населения России злокачественными новообразованиями в 2000 г. / В.В. Старинский, Г.В. Петрова, В.И. Чиссов и др. // Российский онкологический журнал. — 2002. № 3. - С. 39-44.

32. Иванова, Л.Ф. Диагностика и лечение инфекционных осложнений при фебрильных нейтропениях у детей, больных острыми лейкозами / Л.Ф. Иванова, Н.В. Дмитриева, Л.А. Дурнов // Современная онкология. 2001. - Т.З. - № 3. - С. 106-108.

33. Инвазивный аспергиллез у иммунокомпрометированных больных / Г.А. Клясова, H.A. Петрова, Г.М. Галетян и др. // Терапевтический архив. 2003. - Т. 75. - № 7. - С. 63-68.

34. Инфекционные осложнения после трансплантации аутологичных гемопоэтических клеток при гемобластозах / Л.П. Менделеева, Н.Е. Митин, Г.А. Клясова и др. // Терапевтический архив. — 2005. Т. 77.7. С. 33-39.

35. Информация для профессионалов здравоохранения: Онкология / Подробно о лекарствах. Bristol-Myers-Squibb. - Режим доступа: http//medi .ru/doc/001 oncop.htm.

36. Клясова, Г.А. Инвазивные микозы в онкогематологии: современное состояние проблемы / Г.А. Клясова // Современная онкология. 2001. - Т. 3. - № 2. - С. 61-65.

37. Клясова, Г.А. Эмпирическая монотерапия цефепимом при фебрильной нейтропении / Г.А. Клясова // Антибиотики и химиотерапия. -2003. Т. 48. - № 7. - С.33-37.

38. Коррекция вторичных иммунодефицитных состояний, индуцированных химиолучевой терапией у онкологических больных / Е.Г. Кузьмина, Г.С. Неприна, O.E. Ватин и др. // Российский онкологический журнал. 2003. - № 2. - С. 32-36.

39. Котельников, А.Г. Инфекционные осложнения при раке органов панкреатодуоденальной зоны / А.Г. Котельников // Сопроводительная терапия в онкологии. — 2005. № 4. - С. 2-8.

40. Левашов, A.B. Факторы индивидуализации лечения послеоперационных раневых осложнений у больных раком желудка / A.B. Левашов // Вопросы онкологии. 2001. - Т. 47. - № 4. - С. 475-477.

41. Липосомальный даунорубицин (даунозом) в лечении рецидива острого промиелобластного лейкоза / A.B. Пивник, Д.Л. Строяковский, П.В. Медведев и др. // Терапевтический архив. — 1999. Т. 71. - № 7. - С. 24-27.

42. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ / А.П. Каплун, Ле Банг Шон, Ю.М. Краснопольский, В.И. Швец // Вопросы медицинской химии. — 1999. — Т.45. № 1.-С. 3-12.

43. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Пособие для врачей / М.Д. Машковский. 14-е изд. - М.: Новая волна, 2002. - Т. 2. - 608 с.

44. Меропенем в лечении тяжелых инфекций у онкологических больных / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова, Н.С. Багирова и др.// Сопроводительная терапия в онкологии. 2005. - № 4. - С. 8-13.

45. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцнер, A.A. Ленцнер // Лабораторное дело. 1986. - № 4. - С. 210-212.

46. Микробиологические аспекты инфекционных осложнений в онкологической клинике / Н.В. Дмитриева, А.З. Смолянская, И.Н. Петухова и др.// Антибиотики и химиотерапия. — 1999. Т. 44. — № 10. — С. 16-19.

47. Минимальные клинические рекомендации Европейского общества медицинской онкологии (ESMO) / Под ред. С.А. Тюляндина, Н.И. Переводчиковой, Д.А. Носова. М.: Издательская группа РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, 2003. - 80 с.

48. Мороз, А.Ф. Предупреждение развития лекарственноустойчивых форм у стафилококков комбинациями антибиотиков с ДНК-тропными веществами / А.Ф. Мороз, Н.С. Бродинова, В.М. Подборнов // Антибиотики. 1971. - Т. 16. -№ 5. - С. 405-408.

49. Навашин, С.М. Макро- и микроорганизм взаимодействие в инфекционном процессе при антибактериальной терапии / С.М. Навашин // Антибиотики и химиотерапия. - 1998. - Т. 43. — № 11. — С. 3-5.

50. Наседкин, Д.С. Разработка способов определения антибиотиков антрациклинового ряда: Автореф. дис. . канд. фарм. наук / Д.С. Наседкин. Пермь, 2001. - 23 с.

51. Нещадим, Г.Н. Изучение путей ограничения антибиотикорезистентности у энтеробактерий в эксперименте: Автореф. дис. . канд. М., 1972.

52. Новые цитостатики в лечении злокачественных опухолей / В.А. Горбунова, М.Б. Бычков, Э.К. Возный и др. М.: УРСС, 1998. -128 с.

53. Нозокомиальные инфекции в онкологической клинике: современное состояние проблемы / А.А. Соколов, С.Д. Митрохин, В.И. Минаев, А.Н. Махсон // Российский онкологический журнал. — 2007. — № 1.- С. 29-37.

54. Норман, Л.Л. Изменение вирулентности и выживаемости шигелл в присутствии антибактериальных препаратов: Автореф. дис. канд. мед. наук / Л.Л. Норман; НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера. — СПб, 2003.

55. Оловникова, Н.И. Терапевтические моноклональные антитела и механизмы их действия / Н.И. Оловникова, Г.Ю. Митерев // Терапевтический архив. 2007. — Т. 79. — № 7. — С. 87-96.

56. О механизме действия карминомицина / Ю.В. Дудник, Л.Н. Останина, Л.И. Козьмян, Г.Г. Гаузе // Антибиотики. 1974. — Т. 19. -№6.- С. 514-517.

57. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: Методические указания. МУК 4.2.1890-04.-91 с.

58. Орел, Н.Ф. Кардиотоксичность антрациклинов: возможности преодоления / Н.Ф. Орел // Современная онкология. — 2004. Т. 6. - № 3. — С. 121-124.

59. Основные клинические данные по препарату КАРДИОКСАН® (дексразоксан). Режим доступа:http//www.cscшssia.ru/шs/publications/cardioxane6.shtml#2.

60. Особенности течения инфекционных процессов у детей с онкологической патологией / Цикл лекций по детской онкологии. — Российский биомедицинский журнал. Т. 2, ст.38. - С. 176-178.

61. Переводчикова, Н.И. Место химиотерапии в системе лечения онкологических больных и выбор терапевтической тактики / Н.И. Переводчикова// Современная онкология. 2001. - Т. 3. - № 2. — С. 66-69.

62. Петухова, И.Н. Антибиотикопрофилактика послеоперационных раневых инфекций / И.Н. Петухова // Сопроводительная терапия в онкологии. 2005. - № 1. - С. 2-10.

63. Подборнов, В.М. Предупреждение развития лекарственноустойчивых форм Е. coli В антибиотиками в сочетании с ДНК-тропными веществами / В.М. Подборнов // Антибиотики. 1972. -Т. 17.-№6. -С. 539-546.

64. Поддубная, И.В. Достижения современной химиотерапии / И.В. Поддубная // Современная онкология. 2003. - Т. 5. — № 2. - С. 49-58.

65. Поддубная, И.В. Химиотерапия злокачественных опухолей на рубеже веков / И.В. Поддубная // Терапевтический архив. 1999. - Т. 71. - № 10.- С. 12-17.

66. Пономарева, Т.Р. Влияние антибиотиков антрациклиновой группы, митомицина и брунеомицина на трансдукцию лекарственной устойчивости у стафилококков / Т.Р. Пономарева, А.З. Смолянская // Антибиотики. 1978. - Т.23. - № 10. - С. 896-901.

67. Попова, H.A. Физико-химические параметры поверхности бактерий и способность связывать пенициллин в связи счувствительностью к пенициллинам и стрептомицину /

68. H.A. Попова // Антибиотики. 1976. - Т. 21. - № 10. - С. 897-902.

69. Предварительные результаты кооперированного клинического изучения нового противоопухолевого антибиотика карминомицина / В.И. Борисов, A.M. Липатов, Н.И. Переводчикова и др.// Антибиотики. — 1976. -Т.21.-№ 11.-С. 1026-1030.

70. Птушкин В.В. Лечение и профилактика инфекций у больных с нейтропенией. Материалы III ежегодной Российской онкологической конференции 29 ноября 1 декабря 1999 г., Санкт-Петербург.

71. Распределение ЗН-карминомицина в организме мышей / М.И. Резникова, В.Л. Карпов, Ю.В. Дудник, B.C. Бажанов // Антибиотики. -1978. Т. 23. -№ 7. - С. 609-611.

72. Резистентность грамотрицательных возбудителей в онкологическом стационаре / З.В. Волкова, И.Н. Петухова, Г.В. Варлан идр.// Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. — 2003. Т. 5. - Приложение 1. - С. 15.

73. Резистентность микроорганизмов возбудителей инфекции у онкологических больных / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова, Н.С. Багирова и др. // Сопроводительная терапия в онкологии. — 2005. — № 1. — С. 17-25.

74. Рехтина, И.Г. О трудностях диагностики туберкулеза у больных с системными заболеваниями крови / И.Г. Рехтина, С.М. Щекочихин // Терапевтический архив. — 1998. Т. 70. - № 4. - С. 60-62.

75. Решедько, Г.К. Значение ферментативной модификации аминогликозидов в развитии резистентности у бактерий / Г.К. Решедько // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 1999. — Т. 1. - № 1.-С. 40-50.

76. Рубомицин (^1 — антрациклиновый метаболит из рубомицин С-продуцирующего штамма 81тер1:отусе5 соегШеотЫёш 2679 / Г.Б. Федорова, Т.П. Голова, Н.М. Архангельская и др.// Антибиотики и химиотерапия. 1996. - Т. 41. - № 3. - С. 3-8.

77. Святославов, Д.С. Антибактериальная профилактика и лечение раневых инфекций у больных опухолями головы и шеи: Автореф. дисс. канд. мед. наук / Д.С. Святославов; Москва, 2007.

78. Севостьянова, Н.В. Особенности иммунологических показателей у онкобольных / Н.В. Севостьянова, Т.М. Исаева, Л.Н. Уразова // Вопросы онкологии. 2001. - Т. 47. -№ 4. - С. 446-448.

79. Сепсис у онкологических больных в раннем послеоперационном периоде: взгляд клинициста / И.В. Нехаев, С.П. Свиридова, О.Г. Мазуринаи др.// Инфекции и антимикробная химиотерапия. 2003. — Т. 5. - №1. -С. 18-21.

80. Сивашинский, М.С. Некоторые пути повышения эффективности химиотерапии больных с диссеминированными солидными опухолями / М.С. Сивашинский // Вопросы онкологии. — 2004. Т. 50. — № 2. - С. 237- 242.

81. Сидоренко, C.B. Инфекционный процесс как «диалог» между хозяином и паразитом / C.B. Сидоренко // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. -2001. Т. 3. — № 4. — С. 301-315.

82. Смертность населения России от злокачественных новообразований в 2000 г. / Н. В. Харченко, В.В. Старинский, Г.В. Петрова, О.П. Грецова // Российский онкологический журнал. 2002. - № 4. - С. 37-40.

83. Смолянская, А.З. Действие 5-фторурацила на передачу фактора множественной лекарственной устойчивости у бактерий / А.З. Смолянская // Антибиотики. 1970. - Т.15. - №1. - С. 38-46.

84. Современная антимикробнная химиотерапия: Руководство для врачей / Под ред. Л.С. Страчунского, С.Н. Козлова. М., Боргес, 2002.

85. Соколов, A.A. Практические рекомендации по оптимизации антибактериальной терапии онкобольных с госпитальной инфекцией / A.A. Соколов, С.Д. Митрохин, А.Н. Махсон // Российский онкологический журнал. 2006. - № 5. - С. 41-45.

86. Справочник лекарств, гомеопатии, БАД / Лекарства с действующим веществом цефтриаксон. — Режим доступа: http//amt.allerg}st.ru/product/ceflri akson-akos.html.

87. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. М.: Медицина, 1982. — 464 с.

88. Сравнительное изучение кардиотоксичности антрациклинового антибиотика карминомицина и адриамицина на белых мышах / Л.Е.

89. Гольдберг, Н.Г. Шепелевцева, И.П. Белова, Т.П. Вертоградова // Антибиотики. 1976.- Т. 21. - № 12.- С. 1106-1113.

90. Стафилококки и стафилококковая инфекция: Коллективная монография / Под ред. Н.Р. Иванова, А.К. Акатова, Н.Н. Блохина, В.В. Игнатова, Н.А. Зайцевой. — Саратов: Изд-во Саратовского ун-та, 1980. — 320 с.

91. Таксономическая структура возбудителей инфекции в онкологической клинике / Н.В. Дмитриева, А.З. Смолянская, И.Н. Петухова и др.// Современная онкология. 2001. - Т. 3. - № 3. - С. 93-96.

92. Терешин, И.М. Преодоление лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных заболеваний / И.М. Терешин. — Ленинград: Медицина, 1977. 184 с.

93. Тренин, А.С. Индукция карминомицином однонитевых разрывов ДНК клеток Micrococcus luteus / А.С. Тренин // Антибиотики. 1979. - Т. 24. -№ 11.-С. 841-846.

94. Тренин, А.С. Исследование индукции карминомицином однонитевых разрывов ДНК в нормальных и опухолевых клетках мыши при внутривенном ведении антибиотика / А.С. Тренин // Антибиотики. — 1980. Т. 25. - № 10. - С. 764-769.

95. Федеральное руководство для врачей по использованию лекарственных средств / Общероссийский общественный фонд «Здоровье человека». М.: ГЭОТАР Медицина, 2000. - 975 с.

96. Фомина, И.П. Антибиотики в профилактике хирургической инфекции (микробиологические и клинические аспекты) / И.П. Фомина, Л.Б. Смирнова, Е.Б. Гельфанд // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - № 9.-С. 35-43.

97. Франклин, Т. Биохимия антимикробного действия / Т. Франклин, Дж. Сноу. М.: Мир, 1984. - 240 с.

98. Цитомегаловирусная инфекция в практике трансплантации костного мозга / С.И. Моисеев, M.JI. Нуйя, В.Н. Чеботкевич и др. // Терапевтический архив. — 2002. Т. 74. - № 7. — С. 44-48.

99. Цитомегаловирусная инфекция у больных гемобластозами / В.Г. Савченко, В.В. Троицкая, А.В Мисюрин и др. // Терапевтический архив. — 2003. Т. 75. - № 7. - С. 52-58.

100. Чеботкевич, В.Н. Респираторные вирусные инфекции у онкогематологических больных (обзор) / В.Н. Чеботкевич, Н.Б. Румель, K.M. Абдулкадыров // Терапевтический архив. 2001. - Т. 73. - № 11.— С. 11-15.

101. Челышева, Г.М. Влияние производных гидроакридина на чувствительность полирезистентных штаммов S. aureus и Е. coli к антибиотикам / Г.М. Челышева, H.A. Заикина, O.A. Малюга // Антибиотики. 1978. - Т. 23. - № 9. - С. 805-809.

102. Чиссов, В.И. Лечение больных со злокачественными новообразованиями в России в 1998 г. / В.Н. Чиссов // Российский онкологический журнал. 2000. - № 4. - С. 38-43,

103. Чиссов, В.И. Современное состояние онкологии и перспективы её развития / В.И. Чиссов // Российский онкологический журнал. 1999. -№ 4. - С. 50-54.

104. Чуданова, Т.В. Особенности применения цефепима в комбинации с амикацином в режиме эмпирической антибиотикотерапии у больных различными формами гемобластозов / Т.В. Чуданова, K.M.

105. Абдулкадыров, В.Н. Чеботкевич // Антибиотики и химиотерапия. -2003. Т. 48. - № 7. - С. 29-32.

106. Швиденко, И.Г. Биологические свойства и лекарственная устойчивость возбудителей протейной инфекции: Дис. докт. мед. наук; Саратовский мед. ин-т. Саратов, 1985. - 259 с.

107. Шендеров, Б.А. Трансмиссивная лекарственная устойчивость бактерий (микробиологические и эпидемиологические аспекты): Дис. докт. мед. наук. / Б.А. Шендеров; Саратовский мед. ин-т. — Саратов, 1975. -374 с.

108. Шильникова, И.И. Анаэробные возбудители инфекций человека / И.И. Шильникова // Сопроводительная терапия в онкологии. — 2005. — № 2.-С. 9-17.

109. Шорин, В.А. Изучение перекрестной устойчивости у опухолевых клеток и стафилококков в отношении противоопухолевых антибиотиков из группы антрациклинов / В.А. Шорин, JI.A. Авербух // Антибиотики. 1976. - Т. 21. - № 10. - С. 914-919.

110. Эмпирическая антибиотическая терапия у больных острыми лейкозами: итоги многоцентрового исследования / Клясова Г.А., Савченко В.Г., Паровичникова E.H. и др. // Терапевтический архив. 1998. - Т. 70. - № 7.-С. 15-21.

111. Юлдашева, Н.Э. Клиническая картина и течение туберкулеза при сочетании с гемобластозами / Н.Э. Юлдашева, М.А. Карачунский, A.B. Пивник // Терапевтический архив. 2004. - Т. 76. - № 3. - С. 49-51.

112. Adderson, Е.Е. Infections caused by coryneform bacteria in pediatric oncology patients / E.E. Adderson, J.W. Boudreaux, R.T. Hayden //

113. The Pediatric infectious disease journal. 2008. - V. 27. - № 2. -P. 136-141.

114. Advances in the serological diagnosis of invasive Aspergillus infections in patients with haematological disorders / J. Maertens, K. Theunissen, T. Lodewyck et al. // Mycoses. 2007. - № 50. - Suppl. 1. — P. 2-17.

115. Analysis of risk factors for postoperative infectious complications. / E. Lohde, S. Muller, M. Luck et al. // Recent advances in Chemotherapy: Proc. 18-th. Intern. Congress Chemotherapy. Stockholm, 1993. - P. 728-729.

116. Antibacterial prophylaxis after chemotherapy for solid tumors and lymphomas / M. Cullen, N. Steven, L. Billingham et al. // New England Journal of Medicine. 2005.- V. 353. - № 10.- P. 988-998.

117. Bacteraemia in febrile neutropenic cancer patients / J. Klastersky, L. Ameye, J. Maertens et al. // International journal of antimicrobial agents. 2007. - V. 30. - Suppl. 1. - P. 51-59.

118. Antimicrobial agents and chemotherapy. — 1998.- V. 42. №7.- P. 1762-1770.

119. Bow, E.J. Considerations in the approach to invasive fungal infection in patients with haematological malignancies / E.J. Bow // British journal of haematology. 2008. - V. 140. - № 2. - P. 133-152.

120. Caspofungin as primary antifungal prophylaxis in stem cell transplant recipients / L.S. Chou, R.E. Lewis, C. Ippoliti et al. // Pharmacotherapy. 2007.- V. 27. -№ 12.- P. 1644-1650.

121. Clinical features of late cytomegalovirus infection after hematopoietic stem cell transplantation / Y. Asano-Mori, Y. Kanda, K. Oshima et al. // International journal of hematology. 2008. - V. 87. - № 3. -P. 310-318.

122. Clostridium difficile colitis associated with cisplatinbased chemotherapy in ovarian cancer patients / M. Emoto, T. Kawarabayashi, M.D. Hachisuga et al. // Gynecologic oncology. 1996.- V. 61.- № 3.- P. 369372.

123. Cytomegalovirus infection in paediatric haemopoietic stem cell transplantation / A.L. Chong, F. Clinton, F. Breatnach et al. // Irish medical journal. 2008.- V. 101.-№ 1.- P. 17-21.

124. Cytomegalovirus oesophagitis in a patient with non-hodgkin's lymphoma / S.S. Hingmire, G. Biswas, A. Bakshi et al. // Indian journal of medical microbiology. 2008. - V. 26. - № 1. - P. 79-80.

125. Denning, P.W. Invasive aspergillosis / P.W. Denning // Clinical infectious diseases: an official publication of the Infectious Diseases Society of America.- 1998.- V. 26. № 6.- P. 781-805.

126. Duedrago, M. Active tuberculosis in a patient with Hodgkin disease. A case report / M. Duedrago, S.M. Duedrago // Revue de pneumologie clinique. 2000. - V. 56. - № 1. - p. 33-35.

127. Effectiveness of antibiotic prophylaxis in critically ill adult patients: systematic review of randomized controlled trials / R. D' Amico, S. Rifferi, C. Leonetti et al. // British medical journal. 1998. - V. 316. - № 7140. - P. 1275-1285.

128. Epidemiological surveillance of surgical wound infections / A. Giacometti, O. Cirioni, A. M. Schimizzi et al. // 3-rd Intern Meeting on the Therapy of Infections. Florence, 2000. - Abstr. B 40.

129. Evaluation of a screening strategy after occurence of two simultaneous contaminating tuberculosis cases in a pediatric oncology department / A. Gauchon, N. Andre, A. Rome et al. // Archives of pediatrics. -2008. V. 15. - № 3. - P. 236-244.

130. Fungal infections after haematology unit renovation: evidence of clinical, environmental and economical impact / R. Araujo, A. Carneiro, S.

131. Costa-Oliveira et al. // European journal of haematolology. 2008. -V. 80.-№5.- P. 436-443.

132. Influenza-associated morbidity in children with cancer / S.K. Tasian, J.R. Park, E.T. Martin, J.A. Englund // Pediatric blood & cancer. — 2008.- V. 50.- № 5.- P. 983-987.

133. Kruger, A. Kardiotoxizität von Anthrazyklinen ein ungelöstes Problem / A. Kruger, L. Wojnowski // Deutsches Ärzteblatt. - 2006. - H. 37. - A. 2393-2397.

134. Levofloxacin to prevent bacterial infection in patients with cancer and neutropenia / G. Bucaneve, A. Micozzi, F. Menichetti et al. // New England Journal of Medicine. 2005. - V. 353. - № 10. - P. 977-987.

135. Lin, M.Z. The evolution of antibodies into versatile tumor-targeting agents / M.Z. Lin, M.A. Teitell, G.J. Schiller // Clinical cancer research: an official journal of the American Association for Cancer Research. 2005. -V. 11.-№ l.- P. 129-138.

136. Lo, N. Antibiotic prophylaxis in chemotherapy-induced neutropenia: time to reconsider / N. Lo, M. Cullen // Hematolgical oncology. 2006. - V. 24. - № 3. - P. 120-125.

137. Maertens, J. Caspofungin: an advanced treatment approach for suspected or confirmed invasive aspergillosis / J. Maertens // International journal of antimicrobial agents. 2006. - V. 27. - № 6. - P. 457-467.

138. Observational study on candidaemia at a university hospital in southern Italy from 1998 to 2004 / G. Caggiano, R. Iatta, A. Laneve et al. // Mycoses. 2008.- V. 51.-№2. - P. 123-128.

139. Patel, R. Acute myeloidleukaemia complicated by antrgic tuberculosis / R. Patel, P.R. Relsey // Clinical and laboratory haematolology. -1996.- V. 18.- № 1.- P. 53-54.

140. Pathogen spectrum and drug resistance of spit samples from cancer patients / X.P. Wu, L. Zhang, X.L. Tan et al. // Ai zheng (Chinese journal of cancer). 2007. - V. 26. - № 12. - P. 1336-1338.

141. Petropoulos, P. Antibiotic prophylaxis in elective colorectal surgery / P. Petropoulos, B. Roche, I. Kuttel // Antibiotic prophylaxis in Surgery. 32 nd World Congress of Surgery. - 1987, Sydney. - P. 61- 68.

142. Pyrgos, V. Pulmonary zygomycosis / V. Pyrgos, S. Shoham, T.J. Walsh // Seminars in respiratory and critical care medicine. — 2008. V. 29. — №2.- P. 111-120.

143. Quorum-sensing antagonistic activities of azithromycin in Pseudomonas aeruginosa PAOl: a global approach / Y. Nalca, L. Jansch, F. Bredenbruch et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 2006. - V. 50. - №5. - P. 1680-1688.

144. Reduction of chemotherapy-induced febrile leucopenia by-prophylactic use of ciprofloxacin and roxithromycin in small-cell lung cancer patients: an EORTC double-blind placebo-controlled phase III study / V.C.

145. Tjan-Heijnen, P.E. Postmus, A. Ardizzoni et al. // Annals of oncology: official journal of the European Society for Medical Oncology. 2001. - V. 12.- № 10.-P. 1359-1368.

146. Risk index for prediction of surgical site infection after oncology operations / E. Velasko, Th. Santos, M. de Souza et al. // American journal of infection control. 1998. - V. 26. - № 3. - P. 217-223.

147. Schimpf, S.C. Gram-negative bacteremia / S.C. Schimpf // Supportive care in cancer: official journal of the Multinational Association of Supportive Care in Cancer. 1993. - № 1. - P. 5-18.

148. Spencer, R.C. Cross-susceptibility of cefpirome and four other beta-lactams against isolates from haematology/oncology and intensive care units / R.C. Spencer // Scandinavion journal of infectious diseases. 1993. -№91 (Suppl.). - P. 25-32.

149. Taylor, E. W. Surgical Infection: Current Concerns / E. W. Taylor // The European journal of surgery.- 1997.- № 163. Suppl. 578. - P. 5-9.

150. The timing of prophylactic administration of antibiotics and risk of surgical wound infection / D. C. Classen, R. S. Ewans, S. L. Restotnik et al. // New England Journal of Medicine. 1992. - V. 326. - № 5. - P. 281-286.

151. Thielman, N.M. Antibiotics-associated colitis / N.M. Thielman // Principles and practice of infectious diseases / G.L. Mandell, I.E. Bennet, R. Dolin (ed.). Philadelphia: Churchill Liwingstone, 2000. - P. 1111- 1126.

152. VIDAL: Лекарственные препараты в России. М.: АстраФармСервис, 2004. - 1488 с.

Информация о работе

Шаповал, Ольга Георгиевна
кандидата медицинских наук
Волгоград, 2009
ВАК 03.00.07

Диссертация

Сочетанное действие противоопухолевых препаратов и антибиотиков на микроорганизмы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы