Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Системные метаболические признаки митохондриальной дисфункции у пациентов с гипергомоцистеинемией

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Системные метаболические признаки митохондриальной дисфункции у пациентов с гипергомоцистеинемией"

005009071

На правах рукописи

Маевская Екатерина Геннадьевна

СИСТЕМНЫЕ МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ У ПАЦИЕНТОВ С ГИПЕРГОМОЦИСТЕИНЕМИЕЙ

03.01.04 - биохимия 14.01.11 - нервные болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 0ЕЗ

Санкт-Петербург 2012

005009071

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет имени академика И.П.Павлова» Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Жлоба Александр Анатольевич доктор медицинских наук, доцент Никитина Вероника Владленовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Карпищенко Анатолий Иванович, доктор медицинских наук, профессор Чутко Леонид Семенович.

Ведущее учреждение: Санкт-Петербургская Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

Защита диссертации состоится »ЦЭ&^^ЗЛ-42012 г. в часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 208.090.03 при Санкт-Петербургском Государственном медицинском университете имени академика И.П.Павлова (197022, Санкт-Петербург, ул. Л.Толстого, д. 6/8).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Санкт-Петербургского Государственного медицинского университета имени академика И.П.Павлова.

Автореферат разослан «'^>>¡ЯН-ЁСс^-^ 2012 г.

Ученый секретарь Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций доктор медицинских наук, профессор В.Ф. Митрейкин

Актуальность проблемы. Умеренная гипергомоцистеинемия (ГГЦ) (12-30 мкмоль/л), встречающаяся у взрослых зависит преимущественно от нехватки витамина В9 и В12. Анализ общего гомоцистеина (оГци) позволяет выявлять нарушения ферментативных реакций, в которых участвуют коферментные формы витаминов В9, В12 и В6. Известно, что при внутриклеточном дефиците витамина В12 может наблюдаться ГГЦ одновременно с метилмалоновой ацидемией (М'МА), (Andres Е.,. et al. 2004; Светлицкая С.Г., 2004). Параллельно ММА следует оценивать развитие лактоацидемии - показателя митохондриальной дисфункции. Различают первичную и вторичную митохондриальную дисфункцию (ВМД). В первом случае развиваются врожденные органические ацидемии (метилмалоновая и другие), которые обычно приводят к ацидозу, сопровождающемуся тяжелыми нарушениями со стороны сердечнососудистой и нервной систем. ВМД у лиц пожилого возраста изучена в меньшей степени. Она может зависеть от внутриклеточного дефицита витамина В12 и следовательно сопровождаться ГГЦ. В результате дефицита в митохондриях аденозилкобаламина развивается ММА, а при недостатке в цитоплазме метилкобаламина также и ГГЦ. Часто после констатации отсутствия дефицита в содержании витамина В12 в крови ГГЦ приписывают дефициту фолиевой кислоты. Однако нарастающие неврологические нарушения заставляют выяснять причины развития клинической картины, характерной для нарушения митохондриальной энергетики в различных тканях. Одна из актуальных проблем современной клинической биохимии состоит в разработке и рекомендации тестов, выявляющих нарушения прямого и анаплеротических путей митохондриального энергетического метаболизма, пригодных для диагностики ВМД. Для диагностики ВМД у взрослых и в старшей возрастной группе необходимо предложить тесты, позволяющие оценить сдвиги в метаболоме плазмы крови в пуле источников и интермедиатов энергетического метаболизма митохондрий. Из-за ограниченности методов, позволяющих констатировать развитие конкретных митохондрпальных нарушений, лечение неврологических и сердечнососудистых заболеваний проводится без учета необходимости коррекции митохондриальной дисфункции.

Цель работы заключается в изучении проявления системных признаков митохондриальной дисфункции в условиях повышенного содержания общего гомоцистеина, в том числе, при нарушении его транспорта белками крови у лиц старшей возрастной группы.

Задачи исследования: 1. Изучить перераспределение гомоцистеина (Гци) из альбуминовой фракции в состав крупномолекулярной фракции белков крови в условиях

активации альфа-2-макроглобулина (а2-МГ) трипсином методом ультрафильтрации с последующим анализом Гци .

2. Изучить фильтруемость Гци, связанного с белками плазмы крови лиц с заболеваниями сердечно-сосудистой системы, в том числе с нарушением внугрисосуд истого свертывания и фибринолиза.

3. Изучить проявления ВМД и ГГЦ у пациентов без дефицита витамина В12 в плазме крови.

4. Изучить изменения в спектре аминокислот плазмы крови, являющихся источниками ММК и интермедиатов цикла Кребса.

5. Изучить проявления ВМД при ГГЦ и ММА у лиц с церебро-васкулярной патологией и интеллектуально-мнестическими нарушениями.

Положения, выносимые на защиту:

1. Определение фильтрации Гци, связанного с белками плазмы крови, позволяет выявить лиц с более тяжелой в патогенетическом отношении ГГЦ. Активация а2-МГ трипсином или эндогенными протеиназами в условиях внутрисосудистого свертывания и фибринолиза способствует перераспределению Гци из альбуминовой фракции в состав крупномолекулярной фракции белков крови. Это проявляется в снижении фильтрации Гци, связанного с белками плазмы крови. Снижение коэффициента фильтрации Гци, у лиц с активацией внутрисосудистого свертывания и фибринолиза встречается также в отсутствие ГГЦ.

2. Митохондриальная дисфункция у пациентов с сердечнососудистыми заболеваниями, в том числе, старшей возрастной группы, в случаях с метилмалоновой ацидемией и ГГЦ характеризуется повышенными уровнями лактата и пирувата.

3. Митохондриальная дисфункция у пациентов с сердечнососудистыми заболеваниями, в том числе, старшей возрастной группы проявляется в виде корреляции содержания аминокислот анаплеротических источников интермедиатов цикла Кребса с уровнями лактата и аланина.

4. Повышение уровней ММК и оГци в плазме крови негативно влияют на процессы памяти и мышления. У лиц старшей возрастной группы с проявлениями митохондриальной дисфункции в условиях ММА главным образом страдают процессы краткосрочной памяти.

Научная новизна исследования

В работе проведено изучение развития ВМД при ГГЦ и изменении транспорта Гци белками крови при нарушении коферментных функций витаминов В9 и В12. Обнаружено, что у лиц старшей возрастной группы, при ГГЦ и перераспределении потока транспорта Гци с а2-МГ фракцией белков развивается ММА и лактоацидемия. Последняя характеризует ВМД. Это объясняет причину развития неврологических нарушений,

параллельно эндотелиальной дисфункции при ГТЦ - известо, что митохондрион клетки весьма чувствителен к повышению уровня лактата. Показано, что эндотелиальная дисфункция может зависеть не столько от повышения оГци, сколько от связывания исследуемого аминотиола с фракцией белков, включающей а2-МГ. В образцах лиц с активацией внутрисосудистого свертывания в отсутствие ГГЦ обнаружено усиление связывания Гци с этой фракцией. Установлено, что наряду с эндотелиальной дисфункцией у лиц пожилого возраста с сердечнососудистыми заболеваниями развивается ВМД в виде лактат- и иируват-ацидемиямии. Высокая ММА (>5мкМ) сопровождается выраженной ГГЦ. ВМД в старшей возрастной группе (>55 лет) зависит от нарушения анаплеротического пути образования сукцината. Также показано, что избыточные количества ММК и оГци в плазме крови негативно влияют на процессы краткосрочной памяти и мышления.

Научио-практическая значимость

Метод определения коэффициента фильтрации Гци может быть использован для определения активации патогенетически важного процесса связывания этого аминотиола крупномолекулярными белками крови. Определение ММК, наряду с тестированием витаминов В12 и фолиевой кислоты в крови, необходимо для своевременного выявления митохондриальной дисфункции, ведущей к тяжелым неврологическим и сердечно-сосудистым заболеваниям. Определение ММК важно также для дифференциальной диагностики В12 и В9 - зависимых ГГЦ.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты работы внедрены в практик}' обследования больных неврологических и кардиологических отделений клиник СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова, поликлинике № 31 г. Санкт-Петербурга и используются при проведении лекций и занятий на факультете постдипломного образования. Получено разрешение на применение модифицированной диагностической технологии: «Лабораторная диагностическая технология выявления метилмалоновой ацидемии»,А.А. Жлоба, Е.Г. Маевская, В.В. Никитина, № ФС 2010/122,02.04.10.

Апробация диссертации и публикации Апробация работы проведена на совместном заседании отдела биохимии НИЦ и проблемной комиссии «Патология» (протокол №11, от 15 декабря 2011 г.). Результаты исследований доложены на ежегодных межвузовских конференциях молодых ученых: «ЬХХ конференция молодых ученых «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины» - 2009», «III Международный молодежный медицинский конгресс - Санкт-Петербургские научные чтения - 2009», «ЬХХ1 конференция молодых ученых «Актуальные вопросы

экспериментальной и клинической медицины» - 2010», «LXXII конференция молодых ученых «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины»-2011», «IV Международный молодежный медицинский конгресс - Санкт-Петербургские научные чтения - 2011». За исследование, результаты которого доложены на IV Международном молодежном медицинском конгрессе, Е.Г. Маевская награждена дипломом I степени. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ, остальные - в научно-практических журналах и материалах конференций.

Личный вклад автора

Диссертант самостоятельно освоил и применил все методики биохимического анализа и методики нейропсихологического тестирования. В сборе материала, постановке и решении задач исследования диссертанту принадлежит ведущая роль. Статистическую обработку и анализ данных автор выполнил самостоятельно.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 132 страницах текста в формате А4 и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, результатов исследования, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения.Работа содержит 27 рисунков и 12 таблиц. Библиографический указатель включает 127 литературных источников. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ, остальные - в научно-практических журналах и материалах конференций.

Материалы и методы исследования Клинические наблюдения и лабораторные исследования проводились с 2007 по 2011 год на базе клиник СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова и поликлиники № 31 Петроградского района. Всего было обследовано 206 человек; из них неврологически осмотрено 58 пациентов и в 187 образцах плазмы крови были определены биохимические параметры (рис.1).

Жидкофазной, твердофазной экстракциями и ультрафильтрационной технологией с использованием картриджей Vivaspin 100 и 300 (Sartorius, Germany) получали препараты плазмы крови. В препаратах основных и референтных групп определяли оГци и его фракции, ММК, сукцинат и спектр аминокислот ВЭЖХ-анализом; лактат, пируват, активированный и общий а2-МГ - энзиматическим тестом. Витамины В12, фолиевую кислоту определяли ИФА-анализом.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием методов параметрической и непараметрической

I

1 7

статистики. Методы дескриптивной статистики включали в себя оценку среднего арифметического и ошибку среднего. Соответствие параметров наблюдаемого статистического распределения теоретическим распределениям оценивали с помощью критериев Колмогорова -Смирнова и Лильефорса. Достоверность различий между выборками оценивали с помощью критерия Манна-Уитни. Использовались также методы корреляционного анализа критерием Спирмена (г). Статистическая обработка материала выполнялась с использованием компьютерной статистической программы SPSS 15. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы принимали равным 0,05.

Образцы плазмы крови N=187

7"

^V Группа 3 V' пациентов с такими же заболеваниями и нарушениями внутрисосуднст ого свертывания N=60

у А.

Л

Группа 1 пациентов с сердечнососудистыми заболеваниями и ГГЦ N=23

I

Группа 2 пациентов с такими

же заболеваниями без отклонения

содержания витамина В12 в крови и неизвестным уровнем оГцн N=26

А*_у

Группа 4 пациентов с преимуществен но церебро-васкулярными нарушениями N=53

Референтная группа 5 (30-40 лет) N=12

Референтная группа б (20 лет) N=1$

Рис. I. Сведения о группах пациентов, у которых получены образцы плазмы крови для проведения ретроспективного исследования.

Результаты исследования ЗЛ Оценка связывания гомоцистеииа крупномолекулярными фракциями белков крови

В первой серии экспериментов было проведено сравнение фильтрующей способности двух типов мембран Vivaspin с различными по размеру порами. Для этого была использована плазма крови группы пациентов с ГГЦ, но без нарушений гемостаза. Целью этих опытов было определение типа фильтров, пропускающих молекулы с размером меньше 100 кД (альбумин ~65кД). При использовании фильтров Vivaspin 300 MVCO PES («Sartorius») в низкомолекулярную фракцию при ГГЦ от 15

до 20 мкМ в среднем попадает 37% данного аминотиола, тогда как для фильтров Vivaspin 100 MVCO PES этот процент примерно в два раза ниже, что свидетельствует о неполной фильтрации Гни, связанного с альбуминами. Поэтому в дальнейших экспериментах использовали фильтры 300 MVCO PES с пределом эксклюзии около 300 кД, пропускающие альбумины и большую часть глобулинов и не пропускающие фракцию с а2-МГ.

Рис. 2. Медианная оценка уровней Гни и глутатиона.

(А) 1- а препаратах образцов плазмы, разбавленных в 5 раз физраствором до фракционирования; 2- в их ультрафильтратах; 3-в ультрафильтратах, полученных после обработки плазмы трипсином.

(Б) Коэффициенты фильтрации Кф Гци и глутатиона (Кф = Концентрация с фильтрате/Концентрация суммарно в препарате плазмы) до и после активации трипсином а2-МГ в препаратах плазмы крови, *- р< 0,05.

Уровни Гци в отличие от уровней глутатиона существенно снижаются в ультрафильтратах плазмы крови (рис. 2А). Активация трипсином приводит к снижению Кф Гци (р<0,05), но не влияет на фильтрацию глутатиона (рис. 2Б). Это соответствует сведениям о том, что Гци образует более прочные дисульфидные связи с белком, вытесняя другие аминотиолы [Жлоба A.A., Никитина В.В., 2004].

Фильтрация Гци плазмы крови пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями как без сопутствующих нарушений гемостаза (группа №

1), так и при активации внутрисосудистого свертывания (группа № 3) была значительно и достоверно понижена (р<0,05) по отношению к плазме крови референтной группы (табл.1). Коэффициенты фильтрации не обнаруживали корреляционной связи с уровнями оГци в этих группах.

При рассмотрении данных табл. 1 обращает на себя внимание больший разброс вариант в выборке группы № 1, пациентов с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями, чем в группе 3 - пациентов с присоединением синдрома активации внутрисосудистого свертывания и фибринолиза.

Таблица 1.

Общий гомоцистеин и показатели ею фильтрации в исследуемых

группах лиц

Группы пациентов оГци, мкМ (М±т) Кф Гци

Среднее (М±т) Медиана (25%-75% процентили)

Референтная группа № 6 (N=13) 7,8±0,5 0,58±0,06 0,48 (0,43 — 0,79)

Группа № 1 (N=23) 19,1 ±3,2 0,38±0,05 0,27* (0,18 — 0,62)

Группа № 3 (N=17) 12,1±1,6 0,29±0,03 0,27* (0,18 — 0,36)

*- р< 0,05 по сравнению с показателем референтной группы

Таким образом, фильтрация Гии является самостоятельным и не зависящим от уровня оГци показателем. Определение Кф Гци может быть использовано для тестирования процесса связывания этого аминотиола крупномолекулярными белками крови, прежде всего, активированным а2-МГ с возможностью LRP-интернализации путем рецеш орого эндоцитоза. Кф Гци оценивает его долю, участвующую в метаболизме клеток медии сосудистой стенки при прогрессировавши атеросклероза.

3.2 Проявления митохондриальной дисфункции при ги пер том оц исте и н е м ии

ГГЦ взрослых и старшей возрастной группы (>55лет) может сопровождаться М'МА (Andres Е. N. et al. 2004). Этот вид ацидемии указывает на ВМД, проявляющуюся нарушением анаплеротического пути

образования сукцината из ММК. ВМД в изученных группах, в том числе с ГГЦ, являлась результатом возможного внутриклеточного дефицита коферментных форм витаминов В12 и В9. В качестве дополнительных маркеров митохондриальной дисфункции нами были выбраны лактат и нируват (табл. 2).

Данные таблицы 2 показывают, что уровни ММК, оГци, лактата, пирувата и активированного а2-МГ были достоверно повышены, а Кф свидетельствовал о снижении фильтрации Гци в подгруппе №4 - лиц с нарушениями кровообращения и неврологическими отклонениями.

Таблица 2.

Показатели митоховдриальной дисфункции и Кф Гии у лиц старшей возрастной группы

Показатель Подгруппа (№4) пациентов > 55 лет Референтная группа

М±т (медиана) М±щ (25%-75% процентили) (медиана)

оГци, мкМ 16,1 ±2,7 (11,9*) 7,8±0,5 (7,9)

Кф Гци 0,42±0,1 (0,27*) 0,43 — 0,79 (0,48)

ММК, мкМ б,0±4,1 (1,0*) 0,2 — 0,56 (Rasmussen К. 1989)

Лактат, мМ 1,80±0,5 (1,40*) 0,1 —0,3 (0,22)

Пируват, мМ 0,13±0,02 (0,12*) 0,02 — 0,07 (по Тиц Н. У., 1986)

Активирований а2-МГ по БАПА-гидролазной активности, м-ед./мл 4,4±1,4 (5,7*) >0,1

*-(/?<0,05) в сравнении с референтной группой

Таким образом, митохондриальная дисфункция при ММА и ГГЦ в старше возрастной группе сопровождается выраженными лакто- и пируват-ацидемиями.

Лакгоацидемия была обнаружена в образцах других изученных групп пациентов (рнс. 3). Суммарно в 160 образцах плазмы крови групп № 1,2,3,4 уровень оГци составил 14,5±0,96 мкМ (Ме=11,6 мкМ), что соответствовало умеренной ГГЦ. Из них в 120 образцах плазмы крови (группы № 2, 3, 4) определяли уровень лактата, а в 54 также и М.МК (табл.3).

Шт

групп я 2 N-2«

Ёа»

Рис.3. Лактат плазмы крови в группах лиц: №2- с дефицитом витамина В9; №3 - с нарушением внутрнсосудистого свертывания; №4 - с мозговыми дисфункциями и нарушениями со стороны сердечно-сосудистой системы и №5- сравнения, (*р<0,05).

Таблица 3.

Основные биохимические пир а метры в группах № 1, 2,3 и 4.

Показатель N М±т, (медиана, процентили),*-/><(),05. Референтные интервалы

Процентили (медиана)

оГци, мкМ 160 14,5±0,96 (11,6; 7,7- 16,9*) 5,3 — 7.1 (6,1)

Лактат, мМ 120 2,0±0,13 (1,54; 0,86 - 2,81*) 0,1 —0,3 (0,22)

ММК, мкМ. 54 4,8±1,1 (2,3; 0,9 -5,8 *) 0,2 — 0,56 (Rasmussen К., 1989)

3.3. Мнтохондриальная дисфункция, связанная с нарушением анаилерогического пути утилизации разветвленных аминокислот при отсутствии дефицита кобаламина в крови

В 26 образцах плазмы крови лиц (группа №2), страдающих сердечнососудистой патологией с выявленным дефицитом фолата и без дефицита витамина В12 в крови обнаруживается ММА и ГГЦ. Уровни исследуемых аминокислот в плазме крови этой группы достоверно не повышались по отношению к группе сравнения, наоборот, имелась тенденция (0,05<р<0,1) к понижению концентрации аминокислот валина и изолейцина. Выявлены достоверные положительные корреляции между уровнями лактата и аланина, изолейцина и треонина, а также - уровнями аланина и изолейцина (рис. 4).

Концентрация аминокислот в плазме крови, мкМ

Рис. 4. Зависимость между уровнями лактата и аланина (г=0,53; р<0,05), лактата и изолейцина (г=0,45; /;<0,О5), лактата и треонина (ге=0,53; р<0,05).

Мнтохондриальная дисфункция в изученных образцах пациентов прявляется также в виде положительной корреляционной связи между уровнями аминокислот-аналлеротических источников сукцината с аминокислотой, уровень которой может возрастать за счет накопления пирувата, а именно - аланином. Уровень ММК в изучаемых образцах был повышен и в среднем составил 4,2±0,9 мкМ (р<0,05), а уровень сукцината был в пределах референтных границ нормы и в среднем составлял 6,3±1,7 мкМ. Концентрация сукцината в плазме крови может колебаться от 1 до

25 мкМ, при верхней референтной границе ММК не выше 0,56 мкМ (Schmedes А., Brandslund I. 2006).

Алании может образовываться из пирувата путем трансамниирования, тем самым накапливаться при ВМД. Обнаруживается прямая корреляционная зависимость между уровнями аланина и лактата, однако концентрация аланина в исследуемой группе не отличалась от референтных значений, тогда как уровень лактата был достоверно повышен: 1,86±0,26 мМ (медиана= 1,40 мМ). Таким образом, уровень лактата повышается в большей степени, чем уровень аланина. В исследованных образцах пациентов митохондриальную дисфункцию, протекающую при нарушении анаплеротического пути образования сукцнната, дополнительно характеризует ММА. 5. Метилмалоновая ацидемия в старшей возрастной группе может развиваться без существенного повышения в содержании ампнокнелот-анаплеротических источников метилмалоновой кислоты.

3.4 Изучение проявлений митохондриальной дисфункции при ГГЦ у больных с неврологическими нарушениями

У 58 пациентов лиц с церебро-васкулярнымн болезнями выявляли маркеры митохондриальной дисфункции при ГГЦ. У 28 пациентов в анамнезе был инсульт. На момент осмотра выявлены лица с последствиями ОНМК (N=16), остаточные явления — наблюдались у 12 пациентов. При этом в 17,8% встречались геморрагический (Л'=5), а в 81,2% - ишемический инсульт (Лг=23).Чаще встречался инсульт в бассейне каротидных артерий (57,1%) (Л- 16); в бассейне вертебральных артерий инсульт встречался в 42,9% (7V=12). С возрастом снижаются процессы памяти и мышления. Доказано, что повышение уровня ММК в плазме крови, встречающееся при дефиците кобаламина у лиц пожилого возраста, влияет на выраженность когнитивных функций (Cracken С. et al. 2006.). 19 человек исследовали по шкале депрессии Гамильтона. Средний балл по шкале депрессии Гамильтона составил — 15,2±0,9 (медиана — 15,0), что соответствовало депрессивному состоянию. 38 человек тестировали по шкале MMSE, средний уровень составил 25,4±0,7 баллон (медиана — 27,0), что соответствовало преддементным нарушениям. Выявлена зависимость между интеллектуально-мнестическими расстройствами и возрастом (г=-0,4; /><0,05; Аг=38). Дефицит витаминов В12 и В9 проявляется очаговой неврологической симптоматикой и нарушением высших мозговых функций. ММК и оГци являются маркерами дефицита кобаламина, и избыток этих метаболитов нейротоксичсн. Так, ММА приводит к синтезу аномального миелина за счет накопления жирных кислот с разветвленными углеводородными цепочками, что лежит в

основе многих нейродегенеративных заболеваний. Выявлены отрицательные связи между когнитивно-эмоциональным статусом и уровнями оГци и ММК по данным корреляционного анализа.

ММА и ГГЦ, часто выявляемые у пожилых лиц с наличием церебро-васкулярных заболеваний, негативно влияют иа процессы памяти и мышления.

У лиц с церебро-васкулярными заболеваниями, проявляющимися очаговыми неврологическими расстройствами и нарушением ишеллекгуально-мнестических функций чаще выявляется вторичная митохондрнальная дисфункция, которая сопровождается л а кто- и нируват- ацидемиями.

Выводы:

1. Связывание гомоцистеина крупномолекулярными белками крови, в том числе активированным альфа-2-макроглобулииом, проявляется снижением коэффициента фильтрации данного аминотиола. Коэффициент фильтрации, является самостоятельным и не зависящим от оГци показателем.

2. Активация альфа-2-макроглобулина трипсином в образцах плазмы крови ведет к перераспределению гомоцистеина из альбуминовой фракции в состав крупномолекулярной фракции белков крови.

3. В образцах плазмы крови лиц с заболеваниями сердечно-сосудистой системы старшей возрастной группы наблюдается снижение коэффициента фильтрации гомоцистеина, в особенности у лиц с активацией внутрисосудистого свертывания и фибринолиза.

4. Метилмалоновая ацидемия, развивающаяся у лиц старшей возрастной группы на фоне гипергомоцистеинемии в отсутствие понижения уровня витамина В12, характеризуется наличием других признаков митохондриальной дисфункции, включая повышение уровней молочной, пировиноградной кислот и в меньшей степени аминокислоты аланина.

5. Метилмалоновая ацидемия в старшей возрастной группе может развиваться без существенного повышения в содержании аминокислот-анаплеротическнх источников метилмалоновой кислоты.

6. Метилмалоновая ацидемия и гипергомоцистеинемии, выявляемые у пожилых лиц с наличием церебро-васкулярных заболеваний, негативно влияют на процессы памяти и мышления.

7. У лиц с церебро-васкулярными заболеваниями с очаговыми неврологическими расстройствами и нарушением интеллектуалы ю-мнестических функций выявляется вторичная митохондриапьная дисфункция, которая сопровождается лакто- и пируват- ацидемиями.

Практические рекомендации:

1. Для дополнительной характеристики состояния пациента при гипергомоцистеинемии рекомендуется определять его Кф. Метод определения Кф Гци может быть использован для оценики его доли, участвующей в метаболизме тканей сосудистой стенки при прогрессировании атеросклероза. Референтные границы Кф группы сравнения составляют: нижняя - 0,43, а верхняя - 0,79.

2. Лабораторно-диагностическая технология определения метилмалоновой кислоты может быть рекомендована в практику оснащенных хроматографическим оборудованием центров для выявления скрытого дефицита витамина В12.

3. У лиц, страдающих сердечно-сосудистыми заболеваниями, в том числе цереброваскулярной патологией с проявлением интеллектуально-мнестических расстройств, эидотелиальная и митохондриальная дисфункции диагностируются по уровням лактата, пирувата, метилмалоновой кислоты, общего гомоцистеина, а также оценки его Кф. Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Маевская Е.Г. Гипергомоцистеинемия у больных с цереброваскулярной патологией/ Скоромец A.A., Баранцевич Е.Р., Жлоба

A.A., Никитина В.В., Маевская Е.Г.,Блашко ЭЛ., Александрова JI.A// Артериальная гипертензия. - 2008. - Т. 1. -№1. - Приложение №1. - С.90.

2. Маевская Е.Г. Биохимические параметры плазмы крови у пациентов, страдающих цереброваскулярной болезнью с когнитивными нарушениями/Никитина В.В., Маевская Е.Г., Жлоба A.A., Скоромец A.A., Баранцевич Е.Р.//Пушковские чтения- Под ред. В. Н. Анисимова, А.Л. Арьева. - IV научно-практическая геронтологическая конференция с международным участием .- СПб.- 2008. - С.215 - 216.

3. Маевская Е.Г. Клиническое наблюдение пациентки с дефектом гена метилелтетрагидрофолатредуктазы, страдающей цереброваскулярной болезнью, гипергомоцистеинемией/Никитина

B.В., Маевская Е.Г., Скоромец A.A., Баранцевич Е.Р.//Неврологическнй журнал. - 2009. - №4. — С. 32 - 34.

4. Маевская Е.Г. Происхождение и лабораторная диагностика метилмалоновой ацидемии у взрослых/Маевская Е. Г., Жлоба A.A., Блашко Э.Л.//Ученые записки СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова. -2009. - Т.16. - № 1. - С.12 -16.

5. Маевская Е.Г. Биохимические критерии нарушения коферментнон функции витамина В12 в диагностике неврологических нарушений/Маевская Е.Г //LXX конференция молодых ученых» «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины».-СПб¡"Издательство СПбГМУ,- 2009. - С. 51.

6. Маевская Е.Г. Дополнительная лабораторная диагностика при функциональном дефиците витамина В12/ Жлоба A.A., Блашко Э.Л., Маевская Е.Г. //IV научно-практическая конференция - г. Сыктывкар.- ГО РАН,- 2009.-С.24-27.

7. Маевская Е.Г. Анализ общего и связанного с белками плазмы гомоцистеина в лабораторной диагностике атеросклероза /Маевская Е.Г.// 111 Международный молодежный медицинский конгресс - Санкт-Петербургские научные чтения,- СПб:Издательство СП6ГМУ.-2009.-С.92.

8. Маевская Е.Г. Эндогенный ингибитор эндотедиальной NO-синтазы АДМА в составе фракции основных пептидов плазмы крови/ Жлоба A.A., СубботинаТ.Ф., БлашкоЭ.Л., МаевскаяЕ.Г., Тимофеев A.B.// Второй международный конгресс: «Артериальная гипертензия - от Короткова до наших дней» - 2009.-Т15,- П№2. - С.40 - 41.

9. Маевская Е.Г. Технология анализа фракции общего гомоцистеина, связанного с крупномолекулярными белками плазмы крови /Жлоба A.A., Блашко Э.Л., Маевская Е.ГУ/Второй международный конгресс: «Аргериальная гипертензия - от Короткова до наших дней»,- 2009. - Т15.-Приложение № 2. - С. 41.

10. Маевская Е.Г. Аминокислоты как источники мегшшалоновой кислоты у лиц старшего возраста/Маевская Е.Г.// III Ежегодная научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов,-«Федеральный Центр сердца, крови и эндокринологии им. В. А Алмазова» СПб. - 2011.- .34. - http://www.almazovceatre.ru/sites/default/files/. (11.01.12)

11. Маевская Е.Г. Дисфункция анаплеротического пути энергетического метаболизма от аминокислот к сукцинату у лиц старшей возрастной группы/ Жлоба A.A., Маевская Е.Г.// Артериальная гипертензия. - 2011. - T.17.-J4»!.- С.74 - 78.

12. Маевская Е.Г. Обмен разветвленных аминокислот и глицина с митохондриальной дисфункцией/ Маевская Е.Г.// IV Международный молодежный медицинский конгресс. - Санкт-Петербургские научные чтения - 2011. - С. 112,- www.sovetsno.spb.ru .- (11.01.2012).

Сокращения:

а2-МГ - альфа-2-макроглобулин, ВМ'Д - вторичная митохондриальная дисфункция, ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография, ГГЦ - гипергомоцистеинемия, Гци - гомоцистеии в свободной восстановленной или окисленной форме, в том числе в виде смешанного дисульфида, МКМ - метилмалонил-СоА-мутаза, ММА - метилмалоновая ацидемия, ММК - метилмалоновая кислота, оГци - общий гомоцистеии плазмы крови выявляемый в анализе после восстановления всех форм Гци, ОНМК- острое нарушение мозгового кровообращения, инсульт.

Подписано в печать 12.01.2012 Тираж 100 экз. заказ № 785

Отпечатано в ИП Баранеико А.П. ИНН 780108397898, 190000, СПб, Средний пр. В.О., 28/29 кв. 14