Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Систематика, морфологическая характеристика и биологические свойства возбудителей дерматоматозов, общих для животных и человека

ВАК РФ 03.00.24, Микология

Автореферат диссертации по теме "Систематика, морфологическая характеристика и биологические свойства возбудителей дерматоматозов, общих для животных и человека"

(1 С -

московский государственный университет имени М.в.ломоносова биологический факультет

На правах рукописи УДК 619:616.5-002.828:636

ИВАНОВА Лвдмвла Григорьевна

СИСТЕМАТИКА, М0Р5СЖ0ГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ЕИШОГИЧЕСЯКЕ СВОЙСТВА' ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ДЕРМТ05ИТ03СВ, ОБЩЕ! ДНЯ ЖйЗОГШХ 1 ЧЕЛОВЕКА

. 03,03.24 - школогяя

Л в ? о р е гр з са:

длссгохсця.ч кг сстекякгз ученой сггпаил - дог; орг. б&оьоглч&скех каук

¿1оо1за - 1592

Работа выполнена во Всесоюзном ордена Ленина яаучно-исаледовательскоа институте экспериментальной ветерякаряя иыеяя Я.Р.Коваленко.

Официальнне оппонента: доктор биологических наук

И.И.СИДОРСВА

доктор биологических науг, профессор, за слуге ннеЗ : деятель наука РСФСР

Л.П.ДЫЖШ03

доктор медицинских наук,

профессор

В.Ы.ЛЕЩЕНКО

Ведущее учреждение: Всесовзнкй научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экология.

Защита диссертации состоится " 1992 г.

в($Л& час, на заседания специализированной совета Л.053.05.65 ь Московское государственной университете ей. М.В.Ломоносова во адресу: 11989Э, Москва, Ленинские горн, МГУ, Биологический факультет, аудитория ,Ы-1.

С диссертацией казне ческэго факультета ЫГУ.

Автореферат разослан

ознакомиться в библиотеке Еяологи-^^/иОША 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

С.Н.Лекоодева

- . ! ошая характеристика работы

АКТУАЛЬНОСТЬ проедая. Среди мнкотическнх зоонозов, вызываемых различными видами грибов, наиболее широко распространены во всей мире дерыатофитозы (дерыатомикозы), которые отмечаются как у аивотных, так и у лвдей. Дер/атофитозы наносят большой ' экономический ущерб аизотноводству и цредставлявт кеднко-содиг-альную проблему во многих странах, так как больные skbothhb (собаки, кошки, крупный рогатый скот, лошади к др.) нередко слу-sas источником заражения ладей ( H.English, 1972; Е.А.Медведева, 1973; А.Х.Саркдсов, Ш78; П.Н.Пестерэв, 1980; С.Г.Андриасян, IS8I; I.Altéras et al, IS86; E.Bifonzo et al, 1936; L.Zaror et al,1387).

• Анализ икевдейся инборыации по этой проблеме показывает, что иногне аспекты дерматофитозов ецэ неизвестна и грзбузг исследований до механизму заражения инфекцией, специфическим не- • годan диагностики, мероприятиям по борьбе и эффективной терапии. Вопросы систематики, ira реология, биологических и экологических; особенностей дер^зтофитов остается еце недостаточно изученными.

Охкрнтие советских ученых (А.Х.Саркисов, В.П..Королева,-Я.И.НишгЛоров, С.Б. Петрович, Д. ¡¿.Яблочник, IS33) свойства алей-рий (шкроконидий) 'деркатофитов создавать у кзвотных иммунитет к дерьатофитозаи, позволило разработать и внедрить в гшрохув •• ветзрннарнуз практику ряд вакцин, облздчщкх высоким профилактические и лэчебшм действием - 1ТФ-130, С—П—I, МЕЙТАВАК. Однако созданные вакцины формирует у животных устойчивость к зара-нению только однзн определенный видом возбудителя, в то время как известно более 10.видов возбудителей, способных вызывать : заболевания у животных.

Описание новых видов возбудителей деркатофитозов требует постоянного изучения их видового состава и проведения исследований в области систематики.

Во всем гшре широко изучается распространение дэрматофитов и других кератинофильных грибов в почве, а также на цдекопита-ОДИХ И птицах ( H.Basset et al, 1966; R.Houin et al, 1973; F.Ma-riat et al, 1976; P.Bufrene, 1986 и др.). Выяснение эпизоотоло-гического значения почвы и диких млекопзтаицих, как потенциальных источников микотических инфекций, остаются актуальными во-. просаш. Немаловажное значение приобретает такяе определение роли грибов, контаыинпрувдих кожный и волосяной покров 2ИВОТНЫХ

и человека, в патогенезе кожных заболеваний ( T.Kushida et ai, 1972; J.W.Rippon, IS77;R.Ah0, 1983; A.R.Waldorf, 1986).

Учитывая этиологическую роль дрожжей и сапрофитных грибов в koshhx заболеваниях, современная классификация грибных болезней кожи дифференцирует понятия дерматомикозы и дерматофитозы (p.Kieistein et ai, 1987). Дерматомикозы включают болезни кожи и ее добавочных образований, а также отомикозн и окуломикозы, вызываемые дерыатофитами, дрожками или плесневыми грибами. Дерматофитозы - это болезни кожи и ее придатков, вызываемые ТОЛЬКО дерматофитаыи родов Microsporum Gruby, Trichophyton Malmsten И Epidermophyton Satouraud.

/1- ' ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.• Изучить видовой состав, морфо-биологические свойства и естественную изменчивость возбудителей . дерматофитозов, общих для животных и человека. На основе анализа таксономических критериев разработать систему идентификации возбудителей дерматофитозов. Изучить. биологические свойства возбудителя трихофитии верблюдов, отработать биотехнологию производства новой вакцины Камелвак-ТС и внедрить ее в практику борьбы с трихофитией,верйлвдов.

Для достижения.поставленной цели были определены следую-' щие задачи:

1. Провести микологическое исследование патологического материала и волосяного покрова животных, подозреваемых в забо- ■ леваяии дерьгатофигозами. Определить видовой состав возбудителей, и контаминирунцую ыикофлору-j

2. Выяснить распространение кератинофильных грибов в почвах животноводческих ферм и пастбищ на территории нашей страны и установить их патогенный потенциал*

3. Изучить кулыурально-морфологические признаки дерыато-фитов при развитии на различных питательных средах и вариабельность этих признаков внутри рода, вида и разновидности. Изучить штаммовую и популяционную изменчивость культур.

4. Провести диагностическую оценку морфологических критериев для идентификации видов и разновидностей и разработать ключ для определения основных возбудителей дерматофитозов животных.

5. Изучить кератинолитическую активность и морфологические особенности развития зоофильных и геофильных дерматофитов и родственных грибов на волосах животных в культуре»

6. Провести сравнительное изучение антигенных особенностей

различных видов дерштофитов, характеризующих их видовую специфичность.

7. Определить патогенные свойства видов н разновидностей дарыатофитов, а также вариантов культур, составляющих популяцию одного ¡наша, влияние популяционннх пересевов на проявление вирулентности, восприимчивость лабораторных и сельскохозяйственных животных к заражению различными видами дерматофитов.

8. Изучить естественную изменчивость и биологические особенности возбудителя трихофитии верблюдов и провести направленную селекцию культур дай получения производственных штаммов, используемых для изготовления и контроля вякцднн против трихофитии верблюдов и внедрить ее в практику борьбы с трихофитией верблюдов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.. Установлено, что дерматофитозы животных на террарии нашей страны вызываются 10 нвдаот и разновидностями Д^рматофитоз, относящихся К родам Trichophyton Malaisten И Microapoiu» Oruby.

Описал нозый для науки вид возбудителя трихофитии взрблв-

ДОВ Trichophyton sarkiaovii Ivanova et Polyakov sp.nov. Изучены егс культурэльно-морфологинеские, патогенные и ишуногез-кие свойсгват

Впернле в насей стране определено, что микроспория зибот-шс: обусловлена, кросэ основного гида M.caais Bodin , дзуыя его раЗНОЗДцНОС'ВВШ и. canis var.distortun (Di Иеппа et iiarplea) Mat-suaioto, Padhye et Ajello и M.cania var.ooesum Ivanova et. Po-lyakov var.nov..,

Kosaa разнОВИДЕОСГЬ M. canis var.obesiua Ivanova et Polyaicov var.nov. выделена от больных лошадей, тигров и серебристо-^ер-ных лисиц,

Вперзые в вашей страна проведено систематическое изучение культургльЕО-!.»р|ологическнх признаков основных возбудителей ЗООНОЗНЫХ ДОр.И.ТОфИТОЗОВ, ОТНОСЯЩИХСЯ К 15 шдам И разновидностям родов Trichophyton Ifalnaten н Microaporua Oruby 0 утютои

амплдгуда их изменчивости при развитии за различных питательных средах. Показана сложная1 отруктура вида у дерматофитов; культу- ' ры, состаЕЛйпцие популяцию вида или штамма, различаются по морфологическим признакам и биологическим свойствам С кератиноли-тической активности, питательным потребностям, патогенным и антигенным свойствам.

Установлено, чао наиболее ва^нш.: таксопэгскчзскшд признаком у дергатофатоз яззяегас форма; размерк :ш:таконгг1а?: г ко;й?гзс7-во у hex пзрэгородок. Для звдентЕфжкацзЕ видов используется комплекс признаков: текстура колоний, пигмэктади!:.. скорость роста, ж>рхслсгия репродуктивных, структур (гжкроксщдай.; ка-жроконвдЗ:) г образование артроспор е хлаындоспор. Прикладное систематическое значение имеет кераишояитическая ахлизноетз и криологический тип разрушения волос in vitro , урзазная активность, аетягенвая структура.

Дана качественная и количественная характеристика хлгло^ю-рк, контаыишодщвй очаги кожных поракеяий е волосяной покров у 10 видов хзвотннх. '

Енявлевн .зколого-географичоские законокерносхи распространения кераишофкльЕых грибов в почвах ишзтясводчзских ферм и пастбищ б различите регионах нашей страж. Оцредэлен патогенный потенциал Еыделеззнх гржбов,

Разработан метод получения стандартных антигенов из дерма-тофитов белковой природы. Антигенный анализ фракций. полученных зтим методом из культур дерматофитов, выявил видовую специфичность антигенного комплекса дерматофитоз и серологическое родство видов внутри родов.

Получен аттенуированнык вакцинной штаьой T.sE.rkisovii й 551/68, обяздащин высокой вммуногешостью ж необходимыми технологическими показателя:.® (а»с. .'¿.1177922 от S,G5.25).

Отозлекционирован вирулентный птамм Е,sarkisovii .'г 724/Ей. исполъзуешй благодаря стабильным свойствам. для- контроля иг^уно-генности вакцины против трихофитии зербзшдов (а.с, К II85S4S от 1.07.85).

Разработана кодификация питательной среды сусло-агар; повышавшая спорообразование ж накопление биомассн вакцинного г вирулентного шгакзов в 2-е раза.

Отработана биотехнология производства новой вапппвг: Каыашзак-ТС для профилактики и лечения трихофитии вэрблшдез (а.с. й 1199574 от 6.07.25),

ФАКТИЧЕСКАЯ ДКННОСТЬ РАБ31Ы. Разработаян е кепользувтея в ветеринарных лабораториях "Методические указания по лабораторий!; диагностике дэрматофитозов sebotehx" (утвзргдены ТУБ ТШЗ пщ Совете ttaacrpoB СССР 7.02.£0.).

Разработаны "¡¿етодаческие рекомендации по приготовлению

- о -

антигенов из нужьтув грябов-цзратсфптоз" (расс:.сстрзын и одо-брзны работай комиссией ОНКват "Эпизоотологии и лрсйпяактика икфзкцгонкнз: болезней глвоттаг' 1.03.SO»),

0зз,и.ана л з-эдрзка s гзтеригарнуя практику вакцина Канел-ваг.-Ю д.-ia прсй^-л^гзг'Л s летенш :р«хс*итпл взрбхэдоз (Приказ 173 СССР « 125 о? 3,10,38.},

s jrrepsssHa Г?3 Гссагрэпрсга СССР пормагчвпо-на катстезлезге, хсетсоль и дриненензе

- П~;сг.—гд-: —5 пэг-о-сз^енл-о - kceîjo.t? г-ззшжк Еа'лздвах-ТС ijzz-L ,-глг. ^с-^дзкгпгк з ззрблэдсз

г. ,;-7 ; -

- тсзоэсг I0-G7—ЭЗЗ-SS кг гчаашг Кг:латг2д«10 üzc" г. я: вэрс'.^доз

(2i.G?isJ:

• Г'Гсс'.-лзг.гнг.ч К Л'рггкгпсглгз згкяхп? Кг^елват.-ТС (30.С7.8С).-гтрс-изэодот"" з

:• :■ „• г.. ••. -.:•.-". гсззп з 'Ibrc-üpi1^:-:- о к^гггг-тлзз: но лтсчн-

з ~ г----.г.т^яч.^йя^уту зеезгнез: c^p-tr^çr-* :зяггваи \yrssz;:s-.-3? Г-'i Гсозгр^грсга СССР IS-Ol,S3.). OCfcOBSS Г^ЛО^Н^!, ЗБЕОСЙ&З SÄ S¿S>1TI:

I- X/Jsiypasbso-i.^pyj^cî^eoïBK харгктэрн?7гка оснознип: bosöt^sssäöü зоснозннг дезнагофзх-огоз, зогвогвзннэ!» игглэнчв-восзз R53X цг^згзтаз среди ггггкюв г з-дэптзшЕгг при разгзгна з одгь*ахззш: тггэхаяс: к полученная зксзэровах&гьша! путем под воздействием различшгс условий культивирования=

2. Комплекс морфо-биологлческиг свойств деркатойитоз. вагона гдроолсгзчзскво таксономические критерии, питательные по- : ■гребносги, каратинолитическнг : патогенные и аигигеннкэ свойства, для снстзка идентификации видов и разновидностей дешатофи-гоз. Внутривидовая структура деркатойитов.

3. Результата экспериментального изучения биологии к изменчивости криологических признаков нового вида возбудителя ■трихофитии ^грблодсв. Создание з отработка биотехнологии производства ваэдипн лгмзяиак-ТС для ллофилактгки и лечения три-лоеттнн взрблгдоз.

АПРОБАЦИЯ РАЮШ. Материалы диссертации доложены на заседания! ученых советов Всесоюзного в.-в. института экспериментальной ветеринария mi. Я.Р.Коваленко ВАСШИ (I98I-I990 г.г.), Всесоюзной научной конференции ш проблемам эпизоотологии (Казань, 1983 г.), Советско-Шведском1 симпозиуме "Дерматомикозн животных и меры борьбы с ними" (Москва, 1983 г.), Всесоюзной на^ учно-технической конференции "Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней сельскохозяйственных животных" (Москва, 1985 г.), I Международном микологическом симпозиуме "Актуальные вопросы медицинской микологии: заболевания, вызываемые условно-патогенными грибами" (Ленинград, 1987 г.), II Международном микологической симпозиуме "Микозы и иммунодефицит" (Ленинград*, 1991 г;), семинарах врачей-микологов ветеринарных лабораторий (Москва, 1981, 1985, 1987, 1988, 1989 г.г.).

Результаты основных этапов исследований по создание вакцины Камэлвак-ТС прошли комиссионные испытания; совместно со Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветпрепа-рагов (1984, 1985, 1988 г.г.). Вакцина Камелвак-ТС экспонировалась на ВДНХ СССР (Москва, 1990 г., серебряная медаль).

ПУБМКАЖИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. По материалам диссертации опубликовано 29 научных статей, методические указания и методические рекомендации, получено 3 авторских свидетельства на изобретения.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диосертация изложена на 322 страницах машинописного текста и состоит из введения, двух глав обзора литературы,;; семи глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и приложения. Диссертация содерЕИт 43 таблицы, иллюстрирована 176 рисунками. Список литератур! включает 680 источников, в том числе 190 отечественных и 490 иностранных авторов.

111

Приношу глубокую благодарность академику ВАСХНИЛ А.Х.Сар-хисову за научные консультации и научно-ме тодиче скую помощь в организации и проведении исследований. Выражаю признательность всем, кто оказывал содействие в выполнении данного исследования, принимал участие в обсуждении полученных результатов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Проведено исследование.1678 образцов патологического материала от 24 видев сельскохозяйственных, промысловых, домашних и содержащаяся з зрелищных предприятиях животных (крупного рогатого скота, яков, зебу, буйволов, северных оленей, овец, коз, верблюдов, лам, лозадей, тигров, леопардов, пантер, львов, волков, корсаков, серебристо-черных лисвц, песцов, нутрий, кроликов, собак, домашних кошек, морских сванок, лабораторных мышей), подозреваемых в заболевании.дерматофзтозачл„

Ддагноз на дешатофатоз ставала на основании клинической кзр1Енн заболевания а результатов лабораториях асследований.

Лабораторная диагностика дерматофитояа включала: лшкнес-центкнй анялаз, тзкзосйопею патологического иатерзала,.ввделе-няе частой культуры возбудителя, иденглфнкагзю вдда возбудителя я определение патогенных свойств на лаборатории* еиботшх.

Ярн нзучешш кэнтадпняругчей микофлорн пагерналон для исследования слуг-зля волосы а чешуйка кожа с .очагов поражения от различных видов животных, подозреваемых в заболевания дермато-фятозгшз, а шг-iZS волосн о различных непораженных частей тела, йс следований подвергли нате риал от 383 янвозшг -.крупного рогатого скота, лонадеЗ, северных оленей, нербхюдов, лам, сайгаков, т.агроз. донишних кошек, собак и пресноводного дельфина, "атердал наследована мнкроскодвчески а кулиурально.

Для язучонпя каратиноолльянх тухвов било исследовано 144 "образца почвы, отобранной ка территории животноводческих ферм и пастбищ из 10 регионов налей страны. Образцы отбирались в стерильные бумажные пакетики. Еыделение кератинофильных грибов из почвы проводили методом волосяной приманка по Ванбрейзегему (IS52). Изолировано и изучено 234 штамма кератинофильных грибов. Кератднолатические свойстза грибов определяли при культивировании. на волосах телят з яеребят.

Изучены культурально-морфологическде особенности 1420 итаазоз деркатофитов, относящихся к 15 вида"; л разновлдностям РОДОВ Trichophyton lialnsten и JiicrosporiMi Gruby дои росте на разлзчЕых: питательных средах. Культуры грибов выращиваяа при темпер. 20° С, 26° С я 37° С. Для культивирования грибов использовала среды - сусло-агар, агар Сабуро, средз Гркгораки и Гкб-лэра, картофельный а морковный агары (рН 6;2-6,7).

- В -

При изучении популяционной изменчивости к проведении ступенчатого отбора использовали метод серийных разведений, обеспечивавший поучение моноспоровых холодай. Споровые суспензии рассевали на питательные средн в чашки Петря.

Для определения вопуляционного состава культур засевали 40-50 чашек Петри и через 15-20 сут выращивания изучали морфологию выросших колоний. За критерий оценки изменчивости культу-рально-морфологических признаков принимали содержание в популяции различных вариантов, выраженное в процентах в общему числу просмотренных колоний.

Ступенчатый отбор культуры проводили путем рассева вариантов, обладающих повышенным спорообразованием, в изучаемой популяции, и последующим выделением наиболее типичных для каздого штампа и быстрорастущих колоний,.

Влияние попудяционкых пересевов на спорообразование культур изучали путем последовательных пересевов культур с интервалом 14 сут и определением накопления микроконидяй при каждом пересеве.

. При определении патогенных свойств дерматофитов использовали метод накожного заражения.. Патогенные, свойства, изучены у . 150 штаммов дерматофитов всех выделенных видов. Опыты проведены на 500 морских свинках, 250 кроликах, 50 крысах, 15 телятах, 10 северных оленях и.10 верблюжатах..

Сравнительное изучение антигенных особенностей проводилось на 30 штаммах одиннадцати видов и разновидностей дерматофитов.. В качестве антигенов использовали белковые фракции, полученные из - грибницы методом солевого экстрагирования на холоду. Гипериымунные сыворотки ко всем видам дерматофитов получали путем внутримышечных и внутривенных введений кроликам споровых взвесей еивых культур.

Изучение активности антисывороток и сравнение антигенных препаратов из культур дерматофитов проводилЕ методом двойной радиальной иммунодиффузаи (РИД) по Ухтерлони. Антигенную"структуру препаратов из культур дерматофитов изучали методом юздно-электрофореза (ИЭФ).

Результаты экспериментов и измерений морфологических элементов грибов подвергнуты статистической обработке по среднему стандарту отклонений для каждой группы экспериментов, нахояде-шш ошибки средней арифметической, определению значений критерия достоверности в уровня вероятностей.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

I. ВИДОВОЙ СОСТАВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ДЕРМАТОФИТОЗОВ .ЖИВОТНЫХ

.1.1. Возбудители дерматофигозов, выделенные от разных видов глиюгшс:

Микроскопическая картина паразитической стадии развития возбудителей з патологическом материале при трихофитии и микроспории не имеет четких дкф$еренцирущиг признаков.

Для группы видоз дешатофитов характерным является размер артросиор в патологическом материале, который составляет при трихофитии 3-5 нкм шш <МЗ мкм. при микроспории - 1,5-3,5 шм.

От обследованных животных выделено з идентифицировано 1358 нташсв дерматофптов, относящихся, к -10 издам и разновидностям СОДОЗ Trichophyton Iialn3ten л riicrosporum Gruby (табл.1).

При исследовании патологического ыатриала от крупного рогатого скота", зебу, буйволов, северных оленей з коз выделены культура возбудителя т.verrucosus Bodin. О? овецизолирована разновидность ЭТОГО гриба Т.verrucosus! var.autotrophicua Scot-.

Впервые наделен 2 изучен возбудитель дорматофатоза верблюдов з вашэй охране. Результаты изучения кулыурально-ааорфологи-ческих признаков и биологических свойств культур дали нам основание считать возбудитель трихофитии Еэрблэдов еоеыы вздоы дер-ыатофита, названным Trichophyton sarkisovii Xvanova et Polyakov ap-.aov.. Данный гриб вызывает заболевание у одногорбых, двугорбых верблЕдов и их гибридов в верблюдоводческих хозяйствах Казахстана, Узбекистана и Туркменки.

Широко распространенным видом дермагофнга, пораяавдим большое ЧИСЛО ЕИЕОТНЫХ, ЯВЛЯвТСЯ ВИД T.nentagrophyte3 (Robin) Bianchard. Культуры возбудителя выделены от лисиц, песцов,-кроликов, юрских свинок, лабораторных шшей, а тагосе животных, содержащихся в цярковых предприятиях - яка, пантеры, волка, корсака z собаки»

Лбиадя зсспрншчаЕЫ к заражению несколькими видамге дер-ЫаТОфИТОВ - T.e^uinua, T.mentagrophytea, li.equinum, M.canis И U.gypsevra.

Гриб u.canis Eodin поражает многие вида еезотных лрк разных «>депгэяз!ч. Аналзз видсзого состава гозбудптзлей

'-г;у;ссг-7',r.rs т:г:-"-.ол. с-о :ао:;э -"чог^сю в'с? гогречз-

- 10 - Таблида I

виды ДЗЖГОФИТОВ, ВЦДЕЖШЗ от еивотшх

Количество i

Вид зозбудшзля выделенных штажов Вид 2ИЕОТКОГО

T.verrucosum Bodin 812 Крупный рогатый скот, зебу, буйволы, северные олени, козы

T.verrucosua var.autotrophi- 10 Овцы

curn Scott

T.sarkisovii Ivanova et 270 Верблюды

Polyakov 3p.nov.

T.equinun (Matruchat et Das;- ю Лошади

sonville) Gedoelst

T.mentagrophytes (Rotin) i2s Лошади, ЯКЕ, ВОЛКЕ,

Blanchard песцы, сэрзористо-чер- . ные лисицы, кролики, нутрии, пантеры, собаки, корсаки, лабораторные МЫЗЕ

M.equinum Gueguen 7 Лошади

M.canis Bodin 97 Тигры, пантеры, лошади, песца, серебристо-черные лисицы, собаки, кошки, кволики, ламы, львы, леопарды

M.canis var.obesua (Conant) 10 Тигры, лошади, серебрис-

Ivanova et Polyakov var.nov. то -черные лисицы

M.canis var.distortvua (Di 3 Пантеры, серебристо-чер-

Merrna et Marples) Hatsumoto, ные лисицы

Padhye et Ajello

M.gypseum (Bodin) Cuiart et 10 Лошади

Grigorakia

ются две развовидаости этого гриба. Разновидность M.canis var. distortum (Di Menna et liarples) Jäatsumoto, Padhye et Ajelloöima выделена от одной пантеры из цирка и двух серебристо-черных лисиц из звероводческого хозяйства, обнаруяение этого гриба составило 2,8? от ойщего числа изолированных шташов M.canis . Разновидность M.caniß var.obesum Ivanova et.Polyakov var.nov. изолирована из кояныг поракений тигров, лошадей и серебристо-черных лисиц в 9,2$ случаев.

При микологическом исследовании конных поражений у людей, контактирующих с больными животными, установлено поражение 5 видами зоофШЕЬНЫХ дерыатофитов - T.verrucosum, Т.mentagrophytes,

т.ечи1тлп, т.загкхБСуП, к.сагйз, что подтверждает значение зооф'игьных дэр'лтофлтоз з распространении этой инфекции среди ледеЗ.

1.2. Морфологическая характеристика первичных культур

".кз реологическая характеристика каздого вида дерматофита в первичных культурах чаде всего галичла. Предварительную дифференциации видов дерматофигов могно провести по морфологии и особенностям.роста на питательной среде для изоляции.

Характерный признак первичных культур ?.уеггисозит - образование больного количества цепочек артроспор, микроконидин единичные.

Отличительный признак культур возбудителя трихофитии верб- ■ лвдов и.загМаотИ—выделение коричневого пигмента, дифрунди-рущего в питательную срэду, хорошо проявляется при развитии к агаре Сабуро. Кроме того своеобразие культур выражается з крупных размерах морфологических элементов - мицелия, артросиор, хлащдоспор, жкроконцщга единичные ш отсутствует.

Культуры Х'.пйг^аегорЬугзз мсхто дзффзрзнцировать от других видов по быстроцу росту на питательных средах. Колонии распростертые мучнистые или зернистые, обратная сторона колонии окрашивается в пурпурный цвет, образование шкрококидкй обильное.

Первичные культуры т^шишл характеризуется укерекнорас-тущими белыми, бархатистыми колониями и многочисленными овальными микроконидиямк.

Рост культур ц.смиз распростертый, паутинисты!:, колонии сероватые или бекезые, субстратный мицелий окрашен в яелтый ш оранжевый: цвет, макроконвдил часто обильные.

Колонии м^ш.пит распростертые, паутинистые или пленчатые, сероватые, коричневатые, радаально-складчатые, макроконидии единичные пли' отсутствуют.

Культуры и.зурвеиа быстрорастущие, колонии бархатисто-мучнистые, зернистые, плоские, песочного цьета или крешвые с гелтовато-рызеватнм субстратным мицелием. Образовании- макроко-нздзй'обильное.

1.3. Микофлора, контаминирунцая очаги-кокшх горакений и волосяной покров животных

Проведенная работа показала, что почти все образцы патологического материала были контаминировани сапрофитными грибами. Идентифицирован 41 ввд грибов, принадлежащих 19 родам, которые относятсякклассам. Oomycetea, Ascomycetes И Deuteromycetes.

Степень засшрения грибами очагов кожных поражений и волосяного покрова у различных животных была неодинаковой (табл.2).

£ наибольшей степени были контаминированы спорами грибов образцы от крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов, в связи с чем выделение возбудителей дерматофитозов от этих животных часто бывает затруднено из-за опережающего роста сапрофит? ной микофлоры.

У всех животных цреобладапцими контаминантами были виды Aspergillus, Penicillium, Mucor И представители сем. Dematia-сеа.

Кератинофильный гриб Cbrysosporiua из патологического материала выделялся редко (2 образда от крупного рогатого скота и 3 - от верблюда). Другой гриб с выраженными хератинолитичес-КИМИ свойствами Scopulariopsis brevicaulia (Sacc.)Bainier .ДОВОЛЬНО часто присутствовал в образцах почти'от всех животных.

Образцы волос от тигров и домашних вошек были в наименьшей степени контаминированы сапрофитными грибами, а из отдельных образцов возбудитель M.canis выделялся в чистой культуре.

Четких доказательств роли грибов-контаминантов, как первичных патогенов в нашей работе нет. Однако, некоторые виды грибов, возможно, имели значение в патогенезе кожных поражений. Это относится К ВИДУ Scopulariopsis brevicaulis (Sacc.) Bainier В случае массового выделения его и микроскопического обнаружения в кожных поражениях у нескольких лошадей и коров; A glaucus Link , доминирующего в контаминации поражений ламы, и Rhizopus nigricans Enrenber , единственного гриба, выделенного с облысевших шелушащихся участков кожи кошки.

Таблица 2

Степень контаминации образцов волос яивотных • различными видами сапрофитных грибов .

Животное Всего исслв- довано' Количество образцов, из которых взделены грибы с определенной частотой встречаемости Общее количество

образцов 0 1-2 вида 3-4 втпуз 5 и более видов выделенных видов

Крупный рогатый скот 150 - 20 72 58 33

Лошади 30 - 8 13 9 24

Северные олени 35 - 10 16 9 16

Верблэды 85 - 18 41 2S 36

Лама I - - - - 9

Сайгаки 20 3 13 4 - 7

Тигры 25 5 7 12 I 14

Конки 20 4 6 10 I Г7

Собаки IS I 8 6 2 19

Дельфинн I - - - Г 5

2. КЕРАТИНОШЕЬКЫЕ ГРИШ, ОЕЕЕАЩИЕ В Л0ЧВА1 ЗИЕОТКОЕОДЧЕСКйХ 5ЕРМ РАЗЛИЧНЫХ РЕГИОНОВ НАШЕЙ СТРАНЫ

Из образцоз почв различных регионов нашей страны выделены кератинофяльные Грибы, относящиеся К родам Trichophyton Malrasten , Llicrosporum Gruby И Chryso3porium Corda (табл.3).

Ендовой состав кератинофильннх грибов, обитающих в почвах, зависит от типа почвы, климатических условий и характерен для каждого региона.

Наиболее разнообразная флора кератянойыьных грибов обнаружена в почва?; средней полосы России. Чаще других выделялся вид S.tsrreetra (75-10$ образцоз) К I.aje-Xloi (88-100/5 образцов). Око.та 503 образцоз содвраали h.'gypneum . Вед li.oooksi был выделен только из 2-х образцоз почвы Московской обл. Впда сьгузо-sporiÜQ присутствовали но во всех образцах почвн.

Иной состав кератинофильных грибов был обнаружен в почве Ставропольского края. Он бил представлен вдга!,гч ti.gyp3eun (11%),

Chr.Xaratinopnilum (222) II Chr.nerdariun (27^). ПоЧЕН ЧеЛЯ0ШГ-

ci-'-c:i обл., еод&.и?.лк з 75>5 образцов 5.a<olloi Е 3 25-30^ образ-

Таблица 3

Обнаружение кератикофильных к кератиколитических ' грибов в образцах почвы из различных регионов нашей страны

Виды выделенных грибов

Изучаемая область

3 « «

Ен tá О й

3 §

со о в!

fj к f о О«

H W О о

§1 sa

Количество выделенных видов.грибов (в %)

Общее количество виде- 6 4 ленных видов грибов

Microaporum gypseum 50 60 (Bodin) Cuiart et Grigorakis

M.cookei Ajello 12,4 -

Trichophyton ajelloi 62 80 (Vanbreuseghem) A¿ello

Г.terrestre Durie et 75 80 Prey

Chrysosporium kerati- 6,2 20 nophilum (Frey)Carmicha-el

Chr.asperatum Canal- 37,5 — chael

Chr.tropicum Carmichael - -

Chr.merdarium (Lihk) - — Carmichael

Chr.anamorph Arthroderma - -tuh e rc ulatum Kuehn

Fusarium solaay (M&rt.) - -App.et Wr.

Pénicillium lilacinum - -Thon

Scopulariopsia brevica- - -ulis (Sacc.) Bainier

б 3 3 3 X

- - - II -75 - - - -

50 1,7 II,I 33 -

12,1 33,3 - 33 - - 27,7 25 1,7 - 22 -

--- 25---- - II 25 - - - ----25--- -50 - - - - 33,3 - -

5 4 4 50 75 XI

100 100 -100 75 -50 25 22

ЦОЗ три ВИДа Chrysosporium. ....

В образцах песчаной почвы Казахстана и- Узбекистана обнаружено незначительнее количество лсератинофильных грибов,, в. основном-рода chrysosporium. Только в одной пробе почвы из Куста-яайской. обл. был выделен вид M.cookei. Среди..изолированных ке-ратинофилов преобладал вид chr.tropicum , тлеющий термофильные свойства.

С.помощью "волосяной приманки"-из почвы.были изолированы сапрофитные грибы, обладающие кератинолитическими свойствами -

3copulariop3is brevicaulis, Fusarium aolani.H Pénicillium lilaci-

num. Род chrysosporium Corda имеет.ярковыраженные-.кератиноли-тические свойства а считается-родственным дерматофитам. Виды этого рода-не. образуют, типичных макроконвдий .и имеют в. основном одноклетные.шкроконидии.-у. которых, изредка.может. быть 1-2 перегородки.. Размеры конидий имеют таксономическое значение-Виды тагае. различаются по культуральным признакам,, скоростью роста на питательных средах и температурным, оптимумом. .

. . Многие из исследованных-птаимов всех.видов.грибов-проявили. слабые патогеннне. свойства, для .лабораторных животных, (морских свинок). Патологические, изменения на. коже.характеризева-. лись гиперемией, шелушением ила образованием поверхностных некротических корочек, клинические признаки появлялись на 5-7-е ' сут после ..заражения я сохранялись. 15-20 сут. При. микроскопическом исследовании патологического материала- обнаруживали только развитие мицелия в кожных, чешуйках я .вокруг "волоса. _

. - Полученные нами данные подтверждают, роль почвенных керати-яофильянх я. кератинолктических грибов, как потенциальных патогенов для лавотных д человека.

3. К?Ш/?МШ0^Ю№№1МЕСШ ШЖт И Ф!©ИОЩГЖЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ДЗРМАТСШТОВ

3.1. Вариабельность культуралБно-корфологдяесках признаков я внутряпопудяционная изменчивость

. Морфологическое изучение Ï420 шгаг.мов дермятофатов, относящихся Г. 15 ладам Я разНОВЕДЯОСТЯМ - T.verrucocuia Badin, T.ver-

-_-ucoswa var.au-cotropûicun (Bodin) Scott, S.r-entagrophytes (Robin) ГЗ} ancaard, ?,2quinun (Katrushot st Hassonville) Gadoelst, T.sar--ipovj.-î. Хучло .'a it mvakov. T.gallir.as (Meçain) Silva, ratafia

''.-«»■iuxJaai) Sibsunud. iVaafcrstîsoiàts) A.jello. T-ter-

restre Durie et Prey, M.canis Bodin, M.canis var.distorturn (Hi Merina et Marples) JSatsumoto, Padhye et Ajello, M.canis var. obe-sum (Consult) Ivanova et Polyakov, M.equinum Gueguen, M.gypseum (Bodin) Cuiart et Grigorakis, M.cookei. Ajello, .выделенных.Из различных источников (разные виды животных, человек, почва),- показало, что эти грабы обладают значительной изменчивостью культу-ральных признаков как в природных изолятах, так и в-эксперименте. Каждый вид.дерматофита представлен несколькими-морфологическими вариантами,. которые различаются не только текстурой колоний и их.пигментацией при выращивании на питательных средах,.а также., разнообразием .репродуктивных.структур (микроконидий, ма1фокони-дий) и-.различной.интенсивностью их.образования...........

Микроконидии-присутствуют-у. всех.видов дерматофитов,. но количественное образование-их различноеФорма и размеры никроко-нидий. .варьируют, в культурах одного вида, но, в основном, типична для кавдого из них.

. . Видам Trichophyton свойственно обильное. образование мик-роконядай, однако в первичных.изолятах.некоторых-видов. (..T.ver-. гисозшп, T.sarkisovii ) оно скудное или.вовсе. отсутствует.. Только. в последующих-пассажах.на. питательных средах конидиогенез у

отдельных штамиов) мохет возрастать....... ......-............

.. .. Для. видов Microsporum - характерно, скудное -формирование, микроконидий, однако оно может увеличиваться-в процессе культивирования на питательных .средах. .Форма микроконидий.у. дерматофи- ~ тов ыог.ет. быть округлая, овальная,. грушевидная, .каплевидная, булавовидная и-палочковидная. Размеры колеблятся в пределах

1-5 х 1,5-12. ыш. ■■■........................

. Ь'акроконидии в культурах дермагофитов хорошо дифферент^ рованные морфологические структуры. Они различаются, формой,. количеством перегородок, толщиной,, и строением оболочки, размером'

(табл.4). • .....

. . У видов Trichophyton . .макроконидии имеют тонгую гладкую. оболочку» форма.удлиненно-овальная, -эллиптическая, булавовидная или неправильная, образуются в небольшом количестве, а в некоторых культурах отсутствуют. Размеры вариабельны и составляют 3-10 х 12-60 мкм.

Большинство ВИДОВ Microsporum формируют МаЕфОКОНИДИЯ в первых генерациях в значительном количестве. Исключение составляет вид M.equinum , у которого макроконидии обнаруживаются в еди-

Таблица 4

Сравнительная морфологическая характеристика макроконидий у различные видов дерматофитов

Вид дермагофита Форма макрокояидий Число клеток размеры (мкм)

T.verrucosun удлиненные, неправильной формы 2-9 3-8 х 20-50

Т.уеггисозил var. autotrophicwa удлиненные,: неправильной формы 2-9 3-8 х 20-50

T.mentagrophytes удлиненно-эллиптические, булавовидные 4-7 5-10 х 30-50

Т.equinum удлиненно-овальные, 2-5 булавовидные 3-7 х 15-35

Т. sarkisovii удлиненно-овальные 2-7 5-10 х 16г50

T.gallinae удлиненно-эллиптические ,булавовидные' ' 3-10 6-10 х 15-50

P.rubrum цилиндрические, булавовидные 3-6 4-6 х 15-30

T.ajelloi веретеноввдные, цилиндрические 4-12 4-6 х 32-60

T.terrestre булавовидные, удлиненно-овальные 4-6 4-7 х 12-25

M.canis веретеноввдные 3-12 10-20 х 35-90

M. cania var. distortum веретеноввдные, уродливые 3-10 8-20 х 29-84

M.cania var. obesvun веретеновидные, эллиптические 3-8 9-19 х 25 -5 8

M.gypseum цилиндрические, эллиптические, булавовидные 4-6 - .7-14 х 30-50

IJ.cookei эллиптические 4-10 I2rI8 X 46-68

M. equJnua веретеновидные 2-5 5-8 х 15-35

ничном количестве иля отсутствуют. Уакронэяпдня у ввдов этого рода толстсстензЕЗ, с гладкой, бородавчатой или ворсинчатой оболочкой, шогскаиерпне, форма чаще веретеновздная или эллиптическая, цалзедрячесяая, булавовидная. Размера разнообразны и варьируют в пределах 7-20 х 15-90 т.

У вида м.сагЛв , входящие в его состав две разновидности, отличаются ст основного вида формой, количеством клеток я размерами максоксвдщй.

Основываясь на результатах изучения изменчивости диагностических признаков многочисленных культур видов дерматофитов, мы установили у культур возбудителя трихофитии верблвдов отличительные признаки от описанных в литературе видов дерыатофитов, а также особенности культур M.canis , в результате чего нами ОПИСаН НОВЫЙ ДЛЯ НауКЕ ВИД ВОЗбуДИТеЛЯ ТрИХОфИТИИ - T.sarkisovii Ivanova et Poiyakov sp.nov. и определена самостоятельность разновидности возбудителя микроспории ЖИВОТНЫХ - M.canis var. obesum Ivanova et Poiyakov var.nov...

■ ■ Анализ культурально-мор£ологических признаков дераатофи-тов, амплитуды изменчивости их при развитии на различных питательных средах, при разных температурах, штаммовой и популя-ционной изменчивости показал, что при идентификации видов необходимо учитывать следующие характеристики: I - скорость роста колоний (медленно-, умеренно- и быстрорастущие); 2 - текстуру колоний, пименталзп) при развитии на сусло-агаре и агаре Сабуро; 3 - кониддеобравование: форма и размеры махроконидий, микроконидий, соотношение и количество макроконидйй в микроконидий. Наиболее важным диагностическим признаком для разграничения видов и разновидностей является форма и размеры макроконидий и количество перегородок у них.

На основе указанных признаков составлен ключ для определения видов основных возбудителей дерматофитозов и наиболее распространенных почвенных дерматофитов.

Как показали исследования, вида дерлатофитов имеют сложную структуру и состоят из разновидностей, штаммов и вариантов. Наличие биотипов подтверждается выделением изолятов или клонов, отличающихся вирулентностью, споробразупцей активностью, пигментацией, питательными потребностями и другими признаками.

3.2. Влияние состава питательной среды на развитие дерыатофитов

Б качестве пкатвльных сред использовали сусло-агар (7°по ' Баллингу), различные модификации картофельного агара и агар Сабуро с 0,1% дрожжевого экстракта.

Картофельные среда использовали в разных рецептурах, содержащих различное количество картофеля, глюкозы, дрожжевого экстракта и другие компаненты. В процессе проведенной работы был получен состав картофельной среды наиболее благоцрвдтный для культивирования дердатойитов в следующей модификации: кар-

тсфзль - 500 г, глюкоза - 20 г, хлористый натрий - 5 г, дрожжевой экстракт - I г, вода дистиллированная до I л, рЭ естественный (6,2-6,5). Для приготовления твердых сред добавляется 2-2,5% агар-агара.

Результаты изучения роста дерматофитоз на различных питательных средах показали, что накопление биомассы всех штаммов на картофельной среде идет активнее по сравнению с сусловой средой. Обогащенная среда Сабуро оказалась наиболее благоприятной ИЗ ВСЕХ СрвД ДЛЯ развития ШТаММОВ T.ajelloi, M.eanis, M.gypseum И M.cookei . Культуры Т.mentagrophytes показали нетребовательность к питательному субстрату.

Сравнение ЕнтешпБности спорообразования различных штаммов дорматофптов продемонстрировало, что состав питательной среды сутзес-ГЕОнпо влзязт на конидиогенез разных видов. Внутри вида также наблвдаотся изменчивость спорообразования у различие: пггамызз.

ЗоЗ. Изучение уреазной активности дерыатофитов и кераганофильных грибов

В тесте на уреазную активность испытаны все используемые В работе ВИДЫ родов Trichophyton , Microsporum И Chrysospori-um . Культуры всех видов.за исключением Т.rubrum, T.equinum, T.galiinae , утилизировали мочевину. Изменение цвета питательной среды у большинства культур, используемых мочевину для своего развития, отмечалось ухе на 2-3 сут роста. К 7-м сут у всех штаммов выявлялась способность утилизировать мочевину, которая к 14 сут была наиболее выражена.

Анализ полученных данных показал, что разновидности дер-матофитов не обличаются по уреазной активности от видов, в которые они входят. Также не отмечено существенных различий среди штаммов, соотавлявдих популяцию вида. Одн&ко^лекоторые штаммы внутри вида различаются по интенсивности разложения мочевины.

Таким образом, способность использовать мочевину при росте на питательной сгздз является видовым свойством дерлатофита. Тест определения урзазяой активности южно применить для дифференциации ГЭДОВ И разграничения культур Т.mentagrophytes С морйоЛОГИЧЕСКИ СХОДНЫМИ ИЛИ атипичными штаммами Т.rubrum, T.equinum и T.galiinae.

3.4. Кератинолитические свойства дерма тортов

ВИДЫ T.verrucosum, T.sarkisovii, • Т. equinuma M.equinue'слабо развиваются в культуре на волосе, распространение грибницы ограниченное. В культурах т .verrucosum наблюдалось образование шцелиальных чехлов вокруг волоса или проникновение гиф внутрь волоса. У отдельных штаммов этого возбудителя отмечена фрагментация мицелия на артроспорн и формирование чехлов из артроспор. Подобный характер развития обнаружен у гриба T.sarkisovii.

Культуры Т.mentagrophytes HM.canis рОСЛИ быстро И ПОкрывали пышной грибншрй все волосы. Мицелий распространялся по поверхности волос и проникал внутрь. Морфология этих видов грибов была такой же, как и на питательных средах.

Почвенные дерматофитн T.ajelloi и ы.gypaeum обильно развивались на волосах в культуре и образовывали морфологические структуры, характерные для сапрофитного роста.

Разрушение волос грибами сопровождалось эрозивным поражением поверхности, расщеплением волос на волокна (коаксиальный тип) и перпендикулярной исчерченностью волос с образованием вздутий на их поверхности, впоследствии разрнвахщихсн и способ-ствущих распадению волоса (ректаыцулярный тип). .

■ В наибольшей степени кератшголитнческая активность прояв-лалась у: гриба M.gypseum , через две нздёли роста гриб вызывал почти полный лизис волос.

Образование "органов-перфораторов" наблюдали только в культурах Т.ajelloi , M.gypseua и Т.mentagrophytes.

. Виды Chrysosporium поражали волосы по коаксиальному типу со средней степенью кератинолиза.

Проведенная работа показала-, что разные вида дерыатофитов различаются степенью кератинолитической активности, типом разрушения волос, интенсивностью развития ыицэлиальной массы и морфологий культур на Еолосе.

4. ввдосшещжеость аяжгееной структуры

.дармшштов

В предварительных исследованиях, выполненных совместно с кандидатом ветеринарных наук И.Д.Поляковым, бнло проведено сравнительное нзучениз антигенных препаратов, полученных различными методаг,ш из культур дерыатофитов в реакции имь^унодиффузии в агаровой геле.

В дальнейшей работе в качестве антигенных препаратов использовали белковые фракции, полученные из грибницы экстракцией 0,15 М раствором хлорида натрия на холоду, обладающие высокой активностьв в используемых реакциях.

Гипериммунные антпсыворотки ко всем видам грибов получали путем внутримышечных и внутривенных введений кроликам споровых Езвесей живых культур в физиологическом растворе. Проводили 20-25 инъекций каздые 3^= сут, чередуя способ введения. Количество клеток на введение составляло 25-30 млн. Сыворотки лио-фильно высушивали и хранили на- холоду.

Получены и изучены гипериммунные антисыворотки к антигенам ИЗ разных штаммов Т.уеггисоБит (ТВ), Т.ечи1пит (ТЕ), Т.шеп-1;авгорЬугез (ТМ), Т.загк!зогИ (ТС), Т.гиЪгиш (ТР), Т.а]е11о1 (ТА) ,'М.сап1з (Ж), М.сапхз уаг.сИз-ЬогЬит (МКД), М.сап1з уаг. оЪезит (МКО), M.equinгж(ЫE), Ы.gypseum (ИГ).

Антителообразование на введение антигенов из трихофитонов у кроликов происходит быстрее, чем на антигены из микроспорумов.

Антигены вступают в перекрестные реакции с антисыворотка-ыи к другим видам дерматошитов, но в этих реакциях редко выявляются общие детерминанты, показывающие полное или частичное родство. Так, например, было отмечено родство по одной детерминанте между некоторыми видами трихофитонов: ТВ с ТС, ТЕ, Ш я ТР; ТС с ТВ, ТМ, ТЕ и ТР; ТЕ с ТВ, ТМ и ТС; ТТЛ с ТВ, "ЕЕ,В! и ТР; ТР с Ш, ТВ'и ТС; среди микроспорумов выявлено родство между МЕ и МГ, но в реакции о антисывороткой к ТА, межродовые связи МЕ и ТС в реакции с антисывороткой к ТС, а МЕ и ТЕ с антисывороткой к ТЕ.

Специфичность антисывороток также была установлена при их титрации. Титр антител с гомологичными антигенами составлял 1:16-1:64. Реакции с гетерологичными антигенами либо отсутствовали, либо проходили с нативными сыворотками или при их разведении 1:2.

Использование метода иммунодиффузии в агаровом геле позволило выявить иммунологическув специфичность антисывороток к различным видам дерыатофитов, а такге способность к перекрестным реакциям с антигенными детерминантами гетерологичных видов дерлатофитов. Получанные данные свидетельствуют о самостоятельности антигенного комплекса каждого вида дерштофита и выявляет сеязи мезду близкородственными белками.

С помощью перекрестного иымуноэлктрофореза проводили ка-

чественный анализ антигенных препаратов.

Для каждого вида деритойита количество- антигенных детерминант было различным. Наибольшее их число' выявлено в культурах Trichophyton - 10-15 линий. Антигенные препараты из культур Microsporum характеризовалась 5-8 линиями преципитации.

У каждого вида дерлатофига обнаружено от I до 3-х специфических антигенных детерминант, показывающих различия между видами и группами видов. Вида Trichophyton образуют группу, отличавшуюся ОТ Kicrosporum.

Анализ количества общих анх-агенкнх детерминант позволяет проследить некоторую взапмосвяь мегду видами внутри рода. Отмечена антигенная близость ТМсТЕпТРивтоже время у TP имеется много общих антигенов с ТС.

Продемонстрирована самостоятельность вида T.sarkisovii, выявлением у него специфическая: антигенных детерминант.

Установлено также различие в антигенных комплексах у разновидностей M.canis.

В опытах на кроликах показана видовая специфичность антигенных комплексов изученных культур дерлатофитов, что коррелирует с данными, полученными в РИД и ИЭФ.

5. ПАТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ Д2РМАТ0ФИТ0 ЭОВ

Проведенные исследования по изучению патогенных свойств дегаатофитов на лабораторных животных (морских свинках, кроликах, белых крысах) показали, что все культуры, выделенные от животных, вызывают заражение морских сеиеок и кроликов. Белые крысы оказались восприимчивыми-не ко всем видам дерлато-фитоз. Наиболее чувствительными они были к зарглоша культурами T-mentagrophytes , который вызывал талере; с пелушение пря накожном заражении. Виды ь&сгоарогиш нз прояпхли патогенных свойств ко отношению к белым красам,

На морских cEi^isax трихофития з микроспория цротеглза с болез БнралепнымЕ клиническими признаками, а патологь^ещай процесс заканчивается быстрее,- чем у кроликов. Первые клинические признака (гиперемия5 шелушение) появляются j морское свинок на 5-7-е сут после зараяеяия, а у кроликов чаще весго на 2-Э-е сут. Продолжительность течения заболевамя у мор^'.ЕС свинок составляем "55-40"сут, в то время как у крелххкоь зйогда

затягивается до 60 к более сут, особенно при заражении турами Т.теп^ггорйугез.

Степень проявления клинических признаков в большэй степени зависит от вирулентности штамма, чем от вида возбудителя. Эпизоотические штаммы дерлатофитов в. большинстве своем обладают высокой вирулентностью.

Длительное пассагирование и ступенчатый отбор культур на питательных средах ослабляет вирулентные свойства штаммов.

На примере культур т.заэлазоуИ было показано, что варианты культур, составляющие популяцию одного штамма, различаются по вирулентности.

При изучении восприимчивости сельскохозяйственных животных к отдельным видам дерматофнтов с целью выявления биологических особенностей возбудителей проведено перекрестное заражение телят крупного рогатого скота, северных оленей и верблюдов культурами, выделенными от этих видов животных.

В опытах показано, что культуры т.уеггисозип, выделенные от северных оленей, вызывают заражение телят крупного рогатого скота с проявлением типичных клинических признаков трихофитии. • Результаты перекрестного заражении дали такую же картину. Таким образом, штаммы, выделенные от северных оленей и крупного рогатого скота,не различались по патогенным свойствам в отношении этих животных.

Экспериментальное воспроизведение трихофитии культурой т.загк±зоу11 на телятах показало слабую вирулентность этого вида для крупного рогатого скота. Такие же результаты были получены при заражении верблюдов культурами т.уеггисозип.В то же время культуры т.загМзоуЦ проявили выраженные патогенные свойства для верблюдов. Полученные данные свидетельствуют о биологических различиях этих двух видов.

6. изучение естественной изменчивости культур возбудителя тшсдаш берблщов и направленная' ищт дня получения производственных шташюв.

сознание вакцины для профилактики и лечения трихошии нешвдов

с 1981 г. в лаборатории микологии и антибиотиков БИЭВ проводилась работа по созданию средств специфической профилактики трихофитии верблюдов.

Вопросы эпизоотологии, клинического проявления дерматофн-

тоза верблюдов, формирование иммунитета и испытание иммуноген-ной активности вакцины на верблюдах изучались каяд.вет.наук И.Д.Поляковым.

Эпизоотологическими наблюдениями и экспериментальными исследованиями было установлено, что у верблкщов, переболевших естественной я экспериментальной трихофитией формируется невосприимчивость к последующему заражению (И.Д.Поляков, Л.Г. Иванова, 1985; И.Д.Поляков и др.,1"1989).

: Эти данные послужили основанием к проведению работ по соз-4 данию средств специфической профилактики (вакцины) против трихофитии верблвдов.

Для решения поставленной проблемы проведено изучение естественной изменчивости культурально-морфологических признаков и сяорообразующей способности возбудителя трихофития верблюдов T.sarkisovii, направленная селекция штаммов для получения технологичных производственных штаммов и разработка биотехнологии изготовления вакцины для профилактики и лечения трихофитии верблюдов .

G.I. Изменчивость культурально-корфологпческих признаков î.sarkisovii при пассанирсванпя на питательных средах и при различных условиях культивпрозаняя

Первичные культуры обладают очень медленным ростом и состоят, главным образом, из мицелия и спор вегетативного размножения.

При многократных пересевах и длительном пассажироваяии на питательных средах у отдельных щташов изменяются культураль-ные признаки. Воздушная часть колоний становится более барха-* • тистой, ровной, окраска мщеяия - белой или кремовой, макроио-нйдбй образуется латерально на конечных чаог-ях гиф, могут формироваться ыакроконидии.

При изучении популяцнонной'изменчивости культур , было отмечено, что колонии, составляющие популяцию одного штаыма. могут диссоциировать на несколько морфологических вариантов с различным уровнем спорообразования. При этом аопулящюнкая изменчивость зависит от состава питательной среды.

Биологически активные вещества - витамины группа В, еккоге-новая кислота, не стимулируют рост- культур T.sarkisovii . Отмечается зависимость иктенривность развития и спорообразования культур от источника азота. Гидролизаты белков, пептон актя-

Базируют рост культур.

6.2. Получение производственного штамма, обладающего высокой иммуногенностыо и необходимыми технологическими показателями при изготовлении вакцины

В результате многолетнего пассажироЕагшя на питательных средах при различных условиях культивирования выявлены штаммы, обладающие наиболее быстрым ростом и повышенным спорообразованием. При использовании метода ступенчатого отбора из гетерогенной популяции культуры гриба отселекцяонирован штамм # 551/68, значительно отличающийся от исходного повышенной энергией роста, стабильностью: культуралышх признаков и высоким уровнем спорообразования. Спорообразующая активность отобранного таима в 54 раза превышала образование микроконвдий в исходной популяция штамма. При этом вирулентность штамма била снижена, а яммуногеннне свойства сохранились на высокой уровне. Полученная культура предложена в качестве вакцинного штага».

Отработаны условия выращивания вакцинного штамма и модифицирована питательная среда, благоприятствующая наилучшему накоплению биомассы штамма и повышающая уровень спорообразования штамма в 2-3 раза. Питательная среда сусло-агар с 0,5£ ферментативного гидролизага кшечннх белков (ФШ-с) рекомендована для использования ее при выращивании вакцинного штамма при изготовления вакцины против трихофития верблюдов в производственных условиях.

Изучение динамики спорообразования штамма показало, что максимум этот признак достигает на 18-22 сут, что было учтено при производстве вакцины. Длительные пересевы штамма на питательных средах приводят к снижению уровня спорообразования и появлению гетерогенных вариантов. Это обстоятельство под-тверадает необходимость проведения постоянного поддерживающего отбора по признаку спорообразования л однородности морфологических вариантов.

6.3. Получение шташа для контроля иммуногенностя вакцины

Одним из методов контроля яшуногенности вакцин служит заражение иммунизированных глвотных вирулентной культурой

возбудителя, вызывающего заболевание животного, против которого создана вакцина.

В результате направленного отбора был получен штамм й 724/69, обладающий рядом свойств, которые позволяют использовать его для контроля ишуногеяносга вакцины. Штамм характеризуется однородной популяцией и повышенным уровнем спорообразования, превышавшим образование микроконидий в исходной популяция в 21 раз. Благодаря этим свойствам,можно применять определенную заражающую дозу, стандартизируя ее по количеству микроконидий.

Полуденная культура предложена в качестве штамма, используемого для контроля иммуногенности ванцккы против трихофития верблздов.

Проверка патогенных свойств отселзкционированного штамма показала, что при зарагзнаи восприимчивых животных (морских свинок, кроликов, верб ледов) путем нанесения па скари5кдаро--">-.- 1 ванную кожу споровой взвеси у животных взвивались типичные клинические признаки болезни, а вирулентность штамма, практически, не снизилась.

6.4. Создание вакцины Какелвак-ТС для профилактики и лечения трихофитии верблхдов.

В основу технологии изготовления вакцины против трихофитии верблюдов из штамма т.загк1вотпД Ш 551/68 были взяты принципы изготовления живой сухой вакцины против трихофитии крупного рогатого скота - ЛТФ-130. Вакцина приготавливается лио-фильновысушенной и ре суспензируется перед применением в физиологической растворе (рН 6,2-7,0). '

В процессе работы получены данные по ссновяым параметрам изготовления вакцины в лабораторных и пролаазлекных условиях. Отработан состав вакцины, обеспечивапяиа высокув активность и стабильность при хранении.

Сохранность микроконидий после сублимации вакцины, изготовленной по отработанной вами технологии, составляла 55-25#.

Полученная вакцина названа Камзлвак-ТС и предназначена для профилактики и лечения трихофитии верблхдов, вызванной возбудителем т.еагк1зоуИ.

3 Каль/ииссксм бяоцеха Эстонии с 19&5 г. било начато сижю-прсг.^шленное производство, а с 1339 гпромышленное производство вакцины. Объем опитно-про:.жшлешшх серий составлял 25-30 тыс. доз захцикы з год. Потребность в вакцякз в первые годы при прсмыиленяо?! производстве определялась 60-80 тыс. доз з год. Широкое производственное испытание закцлш: проводилось в верблюдоводческих хозяйствах разлпчппх областей Казахстана л Узбекистана. Изготовление вакцины Какелзак-ТС проводилось в соответствия с нормативно-технической дохсументавдей, утвераденноЗ ГУВ Госагрепрота' СССР.

Изготовленные промгплепныз серки вакцины полностью удовлетворяли требованиям ТУ и били отправлены в верб лсдоводчес-кие хозяйства'Казахстана, Узбехшстана и Туркмении согласно поступившим заязквм для иммунизация кявотных.

Совместно с ВШКИ ветпрепарптоз проЕедека апробация вакцины с положительным результатом я рекомендована для широкого внедрения в ветгринарнуп практику (Приказ ГУВ Госагропромз СССР й 125 от 6 октября 1383 г.).

ВЫВОДЫ

1. При микологическом исследовании 1678 образцов патологического материала от 24 видов сельскохозяйственных, промысловых, домашних, содержащихся в зрелищних предприятиях животных (коров, якоз,.зебу, буйволов, северных оленей, овец, коз, верблюдов, лам, лошадей, мгров, леопардов, пантер,'львов, волков, корсаков, серебристо-черных лясиц, песцов, нутрий, кроликов, ссбак, домалких кошек, морских свинок, лабораторных мышей) выделено 1358 чистых культур возбудателей дерматофйтозов.

2. Возбудители дермзтофитозов отпесенн к 10 видам в разновидностям рОДОЗ Trichophyton Kalsisten и Щсгозрогип Gruby -

Т.verrucosus Bodin, Т.verrucosus var.autotrophicum Scott, U.sar-kisovii Ivanova et Polyakov sp.r.ov. , T.equinum (Katruchot et Bassanville) Gedoolst, T.aentagrophytes (Hobin) Blanchard, M.equinun Guegaen; Jl.eanis Bodin, ü.canis var.distortun: (Di Kcn-na et Marpies) Matsuiaoto, Padhye et Ajello, K.canis var.obesvua (Conant) Ivanova et Polyakov var.nov., II. gypssun (Bodin) Cuiart et Grigorakis.

3. Установлен новый для науки вкд возбудителя трихофитии зерблвдоз - Trichophyton sarkisovii Ivanova, Polyakov sp.nov., вызывающий заболевание одногорбых, двугорбых верблвдоз и их гибрздов.

4. Впервые в нашей стране описана новая разновидность Microsporum canis var.obesum Ivanova et Polyakov var.nov., которая вызывает заболевание тигров, лошадей и серебристо-черных лисиц.

5. Сапрофитная микофлора, конт&чшнярующая кожнне поражения и волосяной покров животных разнообразна я представлена 41 видом грибов, принадлежащих к 19 родам из классов Oonycetes, As-comycetes И Deuteromycetes.

6. Из внешней среда в условиях животноводческих ферм и пастбищ выделены кератинофильные гриба - H.gypseum (Bodir.) Cuiart et Grigorakis, M.cookei Ajello, T.ajelloi (Vanbreuseghesa) Ajello, T.terreetre Durie'et Frey, Chrysosporium keratinophilun (Frey) Carmichael, Chr.asperatua Carmichael, Chr.tropicum Carmichael, Chr.asrdarium (Link) Carmichacl, Chr.einamorph Arthroderna tuberculatus Kuehn. Видовой состав кератинофьльных грибов й пх колгчествеггг'.сг лсисутствяг в ncuaicc згьзагс о-? тяпа по^вы,

Fjiis;aTii4s ехкз: у словак я характерен для каждого регионе.

7. Ез ПОЧВН ЗЗОЛЗРОВЭНН ВЯДЯ Ecopulariopsis brsvicaulis (Saccardo) Bainisr,. Fusariu.": soiany (Mart.) App.cb V.'r. , ?eni~ cillium Lilacir.ura Thon, обЛЭДЗШНе КераТЯНОЛЯТЯЧеСКПКЯ СВОЙСТВаМИ.

8. Культуры дерматофятов обладаю? значительно'! вариабельностью культу ралышх признаков. Казднй вид дерматофйта представлен несколькими морфологическими вариантами, которые различаются текстурой колоний, пигментацией при внрашявеняг на разных питательных средах, разнообразием репродуктивных структур (ми-крокснздий, макроконидий) я разлячноЗ интенсивностью их образования;

9. Прл идентификации видое дерматофягов таксономическое значение имеют - скорость роста колоний, текстура колоний, пигментация воздушного я субстратного мицелия, конлдлеобргзопание (форма и размеры макроконидий, шкроконадий, соотношение их в культуре). Форма и размеры макроконидий, как и количество перегородок, с учетом амплитуды их изменчивости является наиболее важным диагностическим признаком. На основе указанных характеристик составлен ключ для определения 15 видов д разновидностей основнкх возбудителей дзрматофитозоз, сбщях для.зявоткнх

з человека, я наиболее распространенных почвепккх дерматоф^тоз.

10. Установлена антигенная специфичность солерастворгмпх белковых фракций из культур дерматофдтоз с по:лощьа реакции вммунодифЗузии в агаровом геле и иммуноэлектрофореза, Выявлено антигенное родство мелду ВВДаМИ T.aentagrophyteSj i.equinum P. T.rubrum. Обнаружение специфических антигенных детерминант подтвердило самостоятельность вида т.sarkisovii. Определена специфичность антигенных ко.чплексов разновидностей гриба к. cams . Виды Microsporum образуют серологическую группу, отличающуюся от Trichophyton.

П. При экспериментальном воспроизведении дерматсфитозов на восприимчивых лабораторных животных степень проявления клинических признаков в большей степени зависят от вирулентности штамма, чем от вида возбудителя. Эпизоотические штаммы дерла-тофитов в большинстве своем обладают высокой вирулентностью.

Варианты культур, составляющие популяцию одного штамма, различаются по вирулентно см. Длительное пассаяирование л ступенчатый отбор культур на питательных средах ослабляет виру-

ленткые свойства дерматофитов.

12. Установлена биологическая специализация видов т.verrucosus . заселенного от крупного рогатого скота,и T.s&rkisovii, выделенного от верблюдов, к зтям видам животных при прямом и перекрестном заражении. Различий по патогенным свойствам культур т.verrucosus, выделенных от крупного рогатого скота и северных оленене обнаружено.

. 13. Отселекцаонирован вакцянный etcsm t.sarkisoviijj 551/68, значительно отличающийся от исходного эпизоотического повышенной энергией роста, стабильностью культуралышх признаков я высоким уровнем спорообразования. Споросбразукщая активность штамма повнгена в 54 раза по сравнению с неходким штаммом. Отработаны условия выращивания вакцинного штамма к модьфяцировака питательная среда (сусло-агар с 0,5^ Шь-с), благопряятствующая наилучшему накоплению биомассы, и увеличивающая спорообразование ставка в 2-3 раза.

14. Подучен штаги T.sarkisovii й 724/63 со стабильными свойствами, что позволило использовать его для контроля Июму-ногенности вакцины. Благодаря высокой спорообразупщей способности, можно применять определенную заражающую дозу, стандартизируя ее по кояячеста? михрокоЕщуЕй.

15. Разработана технология проглшлеЕксго проЕзвсдства новой вакцины Камелвак-ТС, обладающей высокой профилактической л лечебной оффектизиостью при трихофлтш верблцдов. Изготовлены опытно-промышленные л промышленные серии вакцины ъ количестве более 200 тыс. доз, которые с положительным результатом применены в верблюдоводческих хозяйствах Казахстана, Узбекистана

и Туркмения.

УтЕерздена нормативно-техническая документация на изготовление, контроль и применение вакцины Камелвак-ТС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Внедрены в практику ветеринарных лабораторий методы лабораторной диагностики дерматофитозов животных, которые вошли в:

- Методические указания по лабораторной диагностике дерматофитозов животных (утверждены ГУБ ТКПЗ при Совете Министров СССР 7 февраля 1990 г.);

- Инструкцию о мероприятиях по профилактике л ликвидации заболевания животных стригущим лишаем (утверждена ГУВ Госагро-прома СССР 18 января 1983 г.)'.

Внедрена в ветеринарную практику вакцина Камелвак-ТС для профилактики и лечения трихофитии верблюдов (Приказ 17В Госаг-ропроыа СССР.-й 125 от 6 ноября 1988 г.):

- Инструкция по изготовлению и контролю вакцины Камелвак-ТС живой сухой для профилактика и лечения трихофитии верблюдов (утв. ГУВ Госагропрома СССР 22 июля 1988 г.);

- Технические условия 10-07-033-88 на вакцину Камелвак-ТС живую сухую для профилактики и лечения трихофитии верблюдов (утв. 17В Госагропрома СССР 21 июля 1988 г.);

- Наставление по применению вакцины Камелвак-ТС (Утв. ГУВ Госагропрома СССР 30 июля 1988,г.).

■ Организовано промышленное производство вакцины в Хальялас-скоы биоцехе Эстония.

... Разработаны, для использования в научно-исследовательских учреждениях специалистами в области микологии, ветеринарии я медицины:

- Методические рекомендации по приготовлению антигенов из культур грибов-дерыатофитов (одобрены рабочей комиссией ОНКвет I июня 1990 г.);

- Схема определения основных видов возбудителей дерматофитозов животных;

- Ключ для определения видов основных возбудителей дерматофитозов, общих для животных и человека, и наиболее распространенных почвенных дерматофитов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕУ.Е JffißSFTADiiM

1. Барадлез Б.К.. Изаноза Л.Г. ТрЕтафзтяя северных олэкей п опыт ее лккзкдаци // Кнформацконнй лпсток й 56-79, ВНТИ; Якутск. 1979. 4 с,

2. Иванова Л.Г, Развихяг дэрг'зхоолхоз in vitro ее волосах глзстных //Балл. Бззсоюзн.' п.-:,. пп-ха гксперикект.зетеря-нарки au. Я.В.КоЕЗле.хкс. Был.32, Ll.r IS20, С.63-65,

3. Г'зэ?Г0за Л.Г. Trichophyton, vsrrucosua В о din . IS32 -возбудитель дерматомякоза северных" олэнеЬ .// Бэзх.БсессгэзЕ. н.-з. SE-xa экслзрклзнх.вотзрвпарлг» им.Я.Р.Коваленко. Гай. 42. Ы.г IS3I; c.23-2'i.

4= Головина Е.П., Иванова 1.1.. Поляков Д.. Пз£0г&васт.:ь е 2Л'.г7Еог-еы:ость r?«»5-':03 Irichcpr.y-t er. vferi'icon-Ä разного зсс— логического псоясхогздснЕЯ .// Бэлл. Зсзсс»таг,н.-«:, га-са ггсса*-pffi.ieüT.ESTepüsap2Ä Я.Р.Еозгдегжо. Bim.45. Н., ISS2, С.59-31.

5. Бзрздззз Б.П.. 032 Л.Г, Возбуянтэчз огрлгу^мто лм~ тая северных оленин // Кбучк.-ггхк. бам. СО ВАСлНКд. Зк&скцг-очныг болэгнн гявотщзс Якугзп. 1Ус2. 5 С.24-27.

6. Поляюз И.Д-; йззнова ii.l\ зьойжшез /У 3 Актуальнее проблемы гетзряЕарлй 2. пс-счхзгленнсм г^ЕСгхководсхзз. Tes. докл. Всес. екэяы колодых учеьак Ё сьегааякстоз. Зст.СС?. 19-27 anp. IS33 г, -iL BÄCXB/Di. ISS3. C.I4S-I47. .

7. Поляков И.Д., Иванова 1.Г. Еемторые вопросы зпязеохо-логия трихсфатки зеролкдов // В сб. Актуальные вопросы эпизс-охологяк, Тез .докл. Всесоззн. научн. конш. по прсблгыа;.! эпизоотологии (8-10 воля IS83 г.). - Казань. IS83. C.I60-I6I.

8. Иванова Л.Г., ПОЛЯКОВ Й.Д. Trichophyton sarkicovii Ivanova et Polyakov ap.nov. - НОВЫЙ ВИД Патогенного гриба, вызывающего дерыатомикоз ьгрблкдев // ¡■Ликологяя и фигопатоло- -гия. IS33. Т.17. Вап.5. С.366-357.

9. Головина Н.П., Иванова Л.Г. Сравнительное изучение роста е спорообразования цультур дерматофятов не различных питательных средах /'/ Бита. Есесоюзп. н.-и. ан-та эксперимент, ветеринария яы. Я.Р.Коваленко. Вып. 49. л'., 1983. С.92-95.

10. Еарадкгв Б.Н., Иванова Л.Г. Трихофития оленей // Ветеринария. 1984. Л 3. С.45-47.

11. Петрович С.З.,- Поляков й,Д., Иванова Л.Г., Утыелидзе О.Г., Свиридова И.Г. Microsporia gypscum - возбудитель

шкрсснориЕ лсгадзя /7 Взтеринарпл. IS84. К 3. С.69-70,

12. Иванова Л,Г. Еоз^удитолз двалатсяихсзов х'лвотннх // Евлл. Всесояан. я,--л, su—x-s скспзр-пгзкт.¿sоврагаони sí.. Я.Р. Коваленко. Вне. 5^. и., ÏS84. C.S-I7.

13. Иванове Л.Г.г Голована H.H. Обкиа методы мйкояоклес-ках йсоледо// Б со. учебно-елетода^йохах иатарЕзлсз "Сценка загрязнения прсдуг.тоз «ккотоксячаса"s рзд. В.АЛусельлн. Li. ЩП ГШ1. 1985. Ï.3. С.33-37.

■14. Поляков й.Д... йзйяова Л.Г. Игнате? пся трпхойитпи зерблсдоз // В сб. Ак'^уальнье -вопроси пройглактпхн и лечена: болезней с/х лнвотга^. Тзз. Всес. н.-техи. конференций :млоднх учение (21-23 мая IS55 г.). Ï.Ï. IS85. С.228.

15. Иванова Л.Г., Поляков Й.Д. Сравнительная оценка антигенных препаратов из дерматофитов в реакция ик?«7еодпф®7зйе // Бшл. Зсесовзн:н.-я. шме-г згепергмеят.ветеранарпа д«.Я.Р.Коваленко. Вып.57, С, ISS5. С.41-44,

16. Поляков И.Д., Иванова Л.Г. ллаязвеское проявление л дифференциальная диагностика тряхофнтяя верблкяов // Балл. Зсесотан. гя-та вксперикепг. ветеринария еу. Я.Р.Ковален-' ico . Внп.59. M., 1285. С.41-44.

17. йзанова Л.Г. Вультурально-^дащюлогЕческпе и биологические свойства возбудителя тряхойятхш вепблкдов // Тру.тш Всз-сошн. не—ï-a эксперимент, зетерязарди ям. Я.Р.&свялгяпо. Т, 65. К.. IS87. С.54-60.

18. Королева В.П., кзаноза Л.Г. Возбудителя дерматомико-зов S3B0ÏHHX а их лабораторная диагностика /¿Гоуда Бсесогзн. л,-и. ия-тг зкспер.таззт. згтерккася.ч им. Я.?,Коваленко. '1.55. U.. Ï9S7. С. 32-41.

ÎS. Иванова Л.Г. Биологяческзе сго£стзя нового srça возбудителя трихофитии верблюдов // В сб. Актуальные вопрос« v.szr-цинской экологии. Тез. докл. I ¿.»еддунао. Нйкол. сэ.шозк?.*.'.?. (14-18 сен?. 1987 г.). Ленинград, ISS7, С,27.

20. Поляков И.Д., Иванова Л.Г. Клиническое проявление дернатомикоза у разню: еедох; еивотнъе,' вызванного возбудителем трихофития зеролэдоз /'/ Бздл. Всесоазн. нн-та зкеле-римент. ветеринарии им. Я.Р.Ховаланко. Вып. 65. 1983, С.43-45.

21. Саркдсов A.I., Поляков К.Д., Иванова Л.Г. Дэжзтотптпя вербладов и биологические свойства возбудителя // Ветеринария. Ï989. й 10. С.31-35.

22. Саркясов А.Х., Поляков И.Д., Иванова Л.Г. Камелвак-ТС - высокоэффективное средство специфической профилактике заболевания трихофитией (стригущим лишаем) и полного излечения больных животных (Реклама) // Ветеринария. 1989. й 10. C.8I.

23. Поляков И.Д., Иванова Л.Г., 2арков И.И., Летягин К.П. Испытание эффективности применения вакцины ЛТФ-130 при трихофитии верблюдов // Труды Всесоюзн. н.-и. ин-та эксперимент, ветеринарии им. Я.Р.Коваленко. Т. 67. М., 1989, с, П1-П6.

' 24. Поляков И.Д., Иванова Л.Г. Антигенная специфичность возбудителей дерматофитозов животных // Труды Всесоюзн. н.-и. ин-та эксперимент, ветеринарии им. Я.Р.Коваленко. Т. 67. М., 1989. С. II6-I23.

25. Иванова Л.Г. Кератинофялыше и кератинолитаческие грибы почв животноводческих ферм различных регионов нашей страны // Е.-СЛЛ. Всесоюзн. н.-и. ин-та 'эксперимент, ветеринарии им. Я.Р.Коваленко. Вып.72. М., 1989. С. 32-57.

26. Иванова Л.Г. Микофлора очагов поражений коки у животных, подозреваемых в заболевания дерыатомякозами // Бюлл. Всесоюзн. н.^а.ин-та эксперимент, ветеринарии им. Я.Р.Коваленко. Вып. 72. М., 1989. C.I6-22.

27. Поляков И.Д., Иванова Л.Г. Микроспория животных, обусловленная комплексом Kicroeporum canis // В сб. Микозы и иммунодефицита. Матер. II Ыеьдунар. мякол.Симпозиума (9-II октября 1991 г.). Ленинград, 1991.

28. Иванова Л.Г. Изучение уреазной активности дарматофи-тсв и коратш:оф:;ль;:ых грибов // Балл. Всесоюзн. н.-я. ин-та эксперимент, ветеринарии им. Я.Р.Коваленко. Вып. 76-77. №.. 1992.

29. Иванова Л.Г., Поляков И.Д. ЬЛорфо-биологичеекая характеристика Hicrosporum cania Bodin и его внутривидовая структура // Микология и фитопатология. (В печати).

30. Иванова Л.Г. Методические указания по лабораторной диагностике дерматофитозов животных. (Глаьзеоупр., 7502.90) / ГКПЗ при Совете Министров СССР..М., 1990.'21 с.

31. Поляков И.Д., Иванова Л.Г. Методические рекомендации по приготовлению антигенов из культур грибов-дзрматофитов (ОНКвет, 1.06.90) М., ВАСХНИЛ. 1990. 10 с.

32. A.c. ß II77972 А 61 К 39/00. Штамм гриба Tricfcophytor. 3ariciaovii . используеш^для изготовления вакданы против три-

хофитии верблюдов / Саркйсов А.Х., Иванова Л.Г., Поляков И.Д. - 1985.

33. А.с. К II88949 А 61 К 39/00. Штамм гриба Trichophyton sarkisovii • используемый для контроля имыуногенностя вакцин

против трихофития верблщов / ИвановаJl.r., Поляков И.Д. -1985.

34. А.с. J5 II90574 А 61 К 39/00. Вакцина против трихофитии верблюдов / Саркйсов А.Х., Иванова Л.Г., Поляков И.Д., Хамиев С.Х. - 1985.

35. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины Камел-вак-ТС нивой сухой для профилактики и лечения трихофитии верб-ладов (Главветупр. 22.07.88.) / Саркйсов А.Х., Иванова Л.Г., Поляков И.Д.

36. Технические условия 10-07-033-88 на вакцину Камелвак-ТС живую сухую для профилактики и лечения трихофитии верблюдов (Главветупр. 21.07.88) / Саркйсов А.Х., Иванова Л.Г., Поляков Й.Д., Жарков И.И., Летягин К.П., Мохина Т.Н.

37. Наставление по применению вакцины Камелвак-ТС (Главветупр. 30.07.88) / Саркйсов А.Х., Поляков И.Д., Иванова Л.Г.

ЛМа^ф-