Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль модификационных преобразований липидного компонента мембран в регуляции некоторых нейро-эндокринных взаимоотношений

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Роль модификационных преобразований липидного компонента мембран в регуляции некоторых нейро-эндокринных взаимоотношений"

национальная академия наук республики армения

(Институт биохимии им. г.х.буниатяна

^ На правах рукописи

, •

- о '

ВАРТАНЯН ГАЯНЭ САРКИСОВНА

УДК 577.125+577.151.05

ОЛЬ МОДИФИКАЦИОННЫХ ПРЕОБРАЗОВАНИЙ ЛИПИДНОГО ОМПОНЕНТА МЕМБРАН В РЕГУЛЯЦИИ НЕКОТОРЫХ НЕЙРО-ЭНДОКРИННЫХ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ (Q-.00.04 биохимия)

автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

• ЕРЕВАН - 1997

¿лзишигФ 4дгьршпъ8пыэ-зи*ь ОФЗПЫЭ-ЗПКЪЧ/ЬРЬ ивдаыгм! и <ши 4.-е. РПК1/М11э-з1Гьь цъ^иъ ^ьъиишмгмлзъ кьшмпьэ

УЬпицф ¡^гш^шОГш]

11Ш"1Ц*ьВ11Ч» Ч-ЦЗЦЪЪ иЦРЧ-Ш»

ПЬБа 577.125+577.151.05

Рйаигмхигыгкьмч» ихш^ацзкь АЦ/ЩТ-РМ!»

11 '№3>11,|ЦЗМ1*Ь Ч-ЬРр ПРПСЧ,ШРП-

ФП 1и<ЦРЦР-ЪРП№3Л Ы/ЬЪРПЫГ ( О- 00.04 -ЦЬГшиЩиЦни )

цзьъшипипмэ-зиъ иъатю-ьр

^ызищршбш^шо ц1)Ыр]1(ШЪг[) ЦП^БПф С)]15ш1]шй шив^бшй ¡ш^уЬ^и ИшОшг

ъгьчиъ -1997

Работа выполнена в Ереванском Государственном медицине» университете им. М. Гераци

*

Научный консультант:

академик АМН РА, д.б.нпрофессор Агаджанов М.

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение: кафедра биохимии Ереванского Госуниверситет

заседании специализированного совета ич-2 при институте оиохими HAH РА им. Г.Х.Буниагяна

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Институ биохимии (Ереван-44, ул.П. Севака 5/1)

д.б.н., профессор Геворкян Э.С. д.м.н., профессор Амроян Э.А. д.б.н., профессор Баджинян С.А.

Защита диссертации состоится

автореферат разослан

# " Шс^Х 1997

Ученый секретарь специализированного Совета 042 докт. биол. наук, профессор Симонян А./

Актуальность проблемы. Проблема научно-обоснованного целенаправленного поиска болеутоляющих средств центрального и периферического действия продолжает оставаться весьма. актуальной для современной медицины. При этом, наряду с интенсивными поисками наиболее приемлемых для клиники лекарственных средств, все более очевидной становится необходимость изучения молекулярно-биохимических механизмов их действия, рассматриваемых в настоящее время как проявление глубоких видоизменений координации метаболических процессов.

Особенно многообещающими представляются перспективы подобного подхода в отношении наркотических анальгетиков и их антагонистов - высокоэффективных химических соединений, мишенью действия которых являются опиатные рецепторы. Интерес к веществам, действующим через опиоидную рецепторную систему, особенно возрос в связи с доказательствами участия опиоидергической нейротрансмиссии в молекулярных механизмах стресса и лекарственной зависимости, сведениями о тесном функциональном контакте эндогенной опиоидной системы с адренергической, серотонинергической и дофаминергической системами, ее связи с эндокринной и иммунной системами организма (Ноп Т., 1994; ,1о<Заг Ь. е1 а!., 1994).

При этом, на сегодняшний день весьма немногочисленны и дискуссионны сведения о функциональных нарушениях, имеющих место в центральных и периферических регуляторных системах под влиянием опиоидных агонистов и антагЛшстов, о нейрохимических механизмах, лежащих в основе толерантности и влечения к наркотикам. Вместе с тем изучение отмеченных процессов представляет большой интерес в плане выявления тонких биохимических механизмов, лежащих в основе определенных нейрогормональных взаимоотношений.

В данном аспекте максимального внимания заслуживает сахарный диабет - тяжелейшая метаболическая патология, сопровождающаяся многочисленными осложнениями, в том числе со стороны нервной системы. Согласно сравнительно недавно появившейся в литературе информации (Каше1 Л. е1 а1., 1992, 1993, 1994, 1995), в условиях этой

патологии имеют место определенные нарушения эндогенной опиоидной системы, также как и разнонаправленные изменения чувствительности отдельных типов опиатных рецепторов. Следует отметить, что, несмотря на многочисленные, исследования на протяжении многих лет, на сегодняшний день остаются проблематичными молекулярные механизмы отмеченной патологии, причем наибольший пробел в этой области связан с идентификацией молекулярных событий, имеющих место непосредственно после связывания инсулина со своим мембранным рецептором (Al-Habori, 1993; Zawalich W. et al., 1995}.

Представления о гетерогенности диабета все более расширяются, требуя, соответственно, адекватных методов лечения. Весьма перспективным в отмеченном плане представляется поиск препаратов растительного происхождения, проводимый с учетом традиционного опыта народной медицины, нашедшего во многих отношениях свое научно-экспериментальное подтверждение. В этой связи экспертный комитет Всемирной Организации Здравоохранения отметил в качестве одной из ведущих рекомендаций дальнейшее развитие исследований б области традиционных методов лечения (WHO Expert Committee, 1980; Watt J. et al.,1988). Считается общепризнанным, что успешное развитие подобных исследований способно послужить естественным ключом к будущему диабетологической фармации.

В контексте вышеуказанных проблем весьма актуальными представляются исследования по изучению функционирования универсальных систем сигнальной трансдукции, в частности фосфоинозитидного пути передачи клеточного сигнала, деятельность которого, согласно современным представлениям, тесно связана с процессами модификации липидного компонента мембран, осуществляемыми преимущественно путем изменений активности ферментных систем, катализирующих процессы деацилирования и реацилирования фосфолипидов (Hirata F. et al., 1980; Huang J. et al., 1992; Asaok-a Y. et al., 1993; Akamatsu Y. et al., 1994; Soydel J. et al., 1994).

Как известно, реакция высвобождения арахидоновой кислоты под влиянием соответствующих фосфолипаз выступает в роли лимитирующего фактора в процессах дальнейшей трансформации этой кислоты по липоксигеназному и циклооксигеназному путям с формированием соответствующих модуляторов, регулирующих

многочисленные клеточные процессы (Nishizuka Y. et al., 1989; Ojeda S., 1989). Изучение роли отмеченных процессов в сложных взаимоотношениях между отмеченными звеньями нейроэндокринной системы и тонких биохимических механизмах действия изученных фармакологически активных соединений, несомненно, будет способствовать, с одной стороны, формированию качественно новых концепций относительно функционирования этих систем в норме и патологии, с другой - разработке современных терапевтических подходов к решению некоторых проблем эндокринологии, неврологии и психиатрии.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы явилось изучение функционирования универсальных систем сигнальной трансдукции и роли модификационных преобразований липидного компонента мембран в реализации определенных взаимосвязей между отдельными звеньями нейроэндокринной системы в норме и патологии и в тонких биохимических механизмах фармакологических эффектов некоторых соединений синтетического и природного происхождения.

В специфические задачи работы, в частности, входило:

1. Изучение возможности инициации фосфоинозитидного цикла в синаптосомах крыс, премеченных 14С-арахидоновой кислотой под влиянием опиоидпого агониста фенаридина и его антагониста, а также процессов деацилирования-реацилирования фосфолипидов в аналогичных условиях эксперимента.

2. Исследование влияния отмеченных соединений на процессы трансформации арахидоновой кислоты в полиморфноядерных лейкоцитах человека.

3. Определение уровня содержания циклических нуклеотидов (сАМР и cGMP) в corpus striatum белых крыс под действием агониста и антагониста.

4. Исследование действия вышеуказанных соединений на активность

некоторых ферментов гликолиза (нейроспецифическая енолаза, М2 «

изофермент пируваткиназы, гексокиназа).

5. Изучение быстрых и пролонгированных модификационных преобразований липидного компонента мембран в условиях сахарного диабета

6. Выявление закономерностей функционирования ферментных

систем де-ацилирования-реацилирования фосфолипидов под влиянием фенаридина в лимфоцитах больных сахарным диабетом в условиях инициации фосфоинозитидного цикла. 7. Исследование возможных биохимических механизмов гипогликемического действия триоксиоктадекадиеновых кислот, выделенных из Bryonia alba L., путем изучения влияния на:

а) функциональное состояние цикла "глюкоза - жирные кислоты";

б) образование некоторых продуктов циклооксигеназного и липоксигеназного путей трансформации арахидоновой кислоты (ПГЕ2, Пта и 5-ЩТЕ) ;

в) активность некоторых ферментов углеводного метаболизма (гексокиназа, гликогенфосфорилаза, фосфопротеинфосфатаза).

Научная новизна работы. Полученные результаты свидетельствуют об участии фосфоинозитидной сигнальной системы, функционирующей в кооперации с различными ферментными системами обмена фосфолипидов, а также процессов трансформации арахидоновой кислоты по липоксигеназному пути в тонких биохимических механизмах действия изученных соединений. Более того, полученные данные относительно влияния отмеченных соединений на активность некоторых ферментов гликолитнческого пути метаболизма глюкозы, а также уровень циклических нуклеотидов, выступающих, как известно, в роли биохимических корреляторов синдрома опиатной абстиненции, позволяют заключить о возможной роли сложных функциональных взаимосвязей между вышеописанными процессами в . реализации фармакологических эффектов изученных соединений. Изучение действия опиовдного агониста на процессы модификации липидного компонента мембран в условиях диабета позволило обнаружить определенные качественно новые закономерности относительно взаимозависимости изменений метаболического статуса организма и процессов опиоидергпческой нейротрансмиссии в условиях диабета.

Полученные результаты позволяют выдвинуть качественно новую концепцию относительно взаимосвязи процессов изменения чувствительности различных опиатных рецепторов с модификационными преобразованиями их липидного микроокружения на уровне функционирования фосфоинозитидного сигнального домена.

Практическое значение работы. Вышеописанные подходы, несомненно, будут способствовать не только более корректному применению изученных физиологически активных соединений в терапевтических целях, но и позволят внести определенный вклад в фундаментальные представления относительно функционирования нервной системы и патогенеза сахарного диабета с его многочисленными осложнениями. Более того, полученные данные могут быть использованы при разработке новых терапевтических подходов не только для решения проблем наркомании, но и при лечении некоторых психических заболеваний и неврологических расстройств, в частности, связанных с эндокринной патологией.

В конечном счете, сведения о тонких биохимических механизмах влияния отмеченных фармакологически-активных соединений могли бы послужить отправной точкой для качественно новых подходов к разработке лекарственных средств на основе целенаправленных попыток вмешательства на уровне функционирования рецепторных систем, нейромедиаторов, вторичных мессенджеров.

Помимо вышеизложенного, результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать экстракт корней Bryonia alba в качестве эффективного гипогликемического средства при сахарном диабете, оказывающего отчетливое нормализующее действие на некоторые стороны липидного метаболизма.

Материалы диссертационной Оработы могут быть включены в соответствующие разделы преподавания курсов биохимии^. нейрохимии, эндокринологии.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на отчетных сессиях Ереванского Медуниверситета (1988, 1997), а также представлены на Международном конгрессе по природным соединениям в качестве медицинских агентов (Страсбург, 1980), на XYI Всемирном конгрессе Международной ассоциации по исследованию жиров (Будапешт, 1983), на XYI и XXII конгрессах ФЕБО (Москва, 1984 и Стокгольм, 1993), Ш и 1У Всесоюзных конференциях "Биоантиоксидант" (Москва, 1989, 1993), на X и XI Европейских нейрохимических съездах (Иерусалим, 1994 и Гронинген, 1996), на ХУ и ХУ1 Всемирных конференциях по нейрохимии (Киото, 1995 и Бостон, 1997).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 27 печатных работ.

Объем и структура работы. Работа изложена на 210 страницах машинописного текста, содержит 32 рисунка и> 7 таблиц, библиография включает 312 наименований литературных источников на русском и английском языках.

В главе 1 ("Обзор литературы") рассматриваются опиатные рецепторы, их классификация и механизмы сигнальной трансдукции,

ч

приводятся современные данные о механизмах действия инсулина, роли отдельных вторичных мессенджеров в реализации эффектов этого гормона, а также информация о растительных препаратах, традиционно используемых в терапии диабета и их активных ■компонентах. Наряду с вышеизложенным, обсуждаются определенные аспекты нейро-эндокринных взаимоотношений, в частности, нарушения опиоидергической нейротрансмиссии в условиях сахарного диабета.

В главе 2 приводится описание материалов и методов исследования. Описываются способы мечения фосфолипидов мембран радиоактивными предшественниками и стимуляции клеток различными внешними сигналами. Приводится описание методов определения активностей ферментных систем обмена фосфолипидов с использованием радиоактивных субстратов, методы выделения и ГЖХ анализа жирнокислотного состава отдельных классов липидов, метод ВЭЖХ хроматографии эйкозаноидов, методы

радиоиммунологического анализа содержания циклических нуклеотидов и некоторых эйкозаноидов. Краткое содержание остальных разделов работы приводится ниже.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ВОЗМОЖНЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ НОВОГО ОПИОИДНОГО АГОНИСТА ФЕНАРИДИНА И ЕГО АНТАГОНИСТА

Препарат фенаридин, синтезированный в ИТ ОХ HAH РА ( согласно постановлению Фармкомитета СССР от 26 марта 1990 г. препарат рекомендован для применения в медицинских целях ) относится к наркотическим анальгетикам мощного типа действия. Результаты фармакологических исследований продемонстрировали превосходство фенаридина по активности над морфином, промедолом, фентанилом и, по продолжительности действия, над фентанилом. Принадлежащий к тому же ряду химических соединеений фенетам относится к числу "чистых" антагонистов наркотических соединений типа налоксона (Вартанян P.C., 1985; Власенко Э.В., 1985).

1. Изучение катаболизма фосфоннозитидов под влиянием опиоидного агониста фенаридина и антагспгаста фенетама

Многочисленными исследованиями последних двух десятилетий

продемонстрирована важная роль фосфолипидов и продуктов их

метаболизма в структурной организации и функциональной

активности мембран и клеток в целом. В частности,

продемонстрировано участие широкого спектра ферментных систем

обмена фосфолипидов в быстрых модификационных преобразованиях

плазматических мембран в процессе трансмембранной передачи

внешних сигналов самой разнообразной природы. Ведущая роль в

этих процессах отводится функционированию фосфоинозитидного

цикла - мембранесвязанного каскадного механизма, преобразующего

внешние сигналы во внутриклеточные путем образования вторичных

посредников, и являющегося одним из универсальных механизмов,

участвующих в формировании клеточного ответа под влиянием t

различных физиологически-активных соединений. Ключевым этапом в каскаде молекулярных событий, формирующих клеточный ответ, является передача сигнала фосфоинозитид-специфичной фосфолипазе С, расщепляющей полифосфоинозитиды с образованием двух вторичных посредников: инозитол-1,4,5-трифосфата и 1,2-диацилглицерола (1,2-ДГ), вызывающих, соответственно,

высвобождение внутриклеточного запасного Са21 и активацию протеинкиназы С ( Berridge М., 1984; Wolf М., 1985; Drummond А., 1986).

Учитывая выщеизложснное, перед нами была поставлена задача изучить влияние огшоидного агониста фенаридина и его антагониста на возможность инициации фосфоинозитидного цикла.

Как показали результаты проведенных исследований, уже на 5-й секунде инкубации с испытуемыми соединениями наблюдаются заметные сдвиги в отношении выхода 1,2-ДГ, причем на 10-й секунде инкубации наблюдается их противоположная направленность ( рис.1). Столь быстротечные, выраженные изменения в отношении выхода 1,2-ДГ, очевидно, следует рассматривать как результат специфического, рецептор-опосредованного действия изученных соединений в отношении фосфоинозитид-специфичной фосфолипазы С, что согласуется с некоторыми литературными данными о возможном участии фосфоинозитидного пути в молекулярных механизмах действия морфина и функционировании эндогенной опиоидной системы (RafFa R. et al., 1992; Xu H. et al., 1992). На 10-й секунде инкубации с испытуемыми веществами, помимо вышеотмеченных, имеют место значительные, противоположно направленные изменения в отношении высвобождения арахидоновой кислоты, что можно, с одной стороны, объяснить разнонаправленным влиянием этих веществ в отношении ферментов деацилирования определенного пула фосфоинозитидов, с другой - их противоположным действием на процессы биосинтеза эйкозаноидов. Возможность высвобождения арахидоновой кислоты под действием ДГ-липты, по-видимому, в данном случае исключается, поскольку изменения в процессах высвобождения 1,2-ДГ и арахидоновой кислоты обнаруживают сходную направленность под действием отмеченных факторов.

Таким образом, реализация фармакологических эффектов изученных соединений на клеточном уровне осуществляется при участии фосфоинозитидной сигнальной системы.

а

120

100

80 60

иг-яг

V

\

I_1_1_

О £ 10

тг ■ 1 \\ яи Ч

1 1 \Д « 1

1 / • Г 1Т и 1 . 1

0 5/0 0 5/0

секунЪы

Рис. 1. Влияние фенаридина (сплошная линия) и фенетама (пунктир) на выход 1,2- диацилглицерола (1,2-ДГ) и арахидоновой кислоты (АК) в синаптосомах головного мозга белых крыс, премеченных 14С арахидоновой кислотой.

3.2. Влияние фенаридина и фенетама на ферментативную систему деацилирования-реацнлирования в синаптосомах головного мозга белых

крыс.

Исследованиями последних лет продемонстрированы многочисленные факты, свидетельствующие о существовании тесной-взаимосвязи фосфоинозитидного пути передачи клеточного сигнала с процессами модификации липидного бислоя мембран, осуществляемыми путем изменений активности ферментных систем, участвующих, в частности, в процессах деацилирования-реацнлирования мембранных фосфолипидов ^¡Бк Н. е1 а!., 1992; ОаШ С. е1 а1., 1993; №капо Н. е! а1., 1994).

Как показали результаты проведенных исследований (рис.2), в синаптосомах, предварительно меченных 14С-олеиновой кислотой, уже на 5 сек. инкубации как с фенаридином, так и с антагонистом обнаруживается заметное повышение концентрации 2-ыС-олеоил-лизофосфатидилхолина - прямого продукта действия фосфолипазы А,. Следует отметить, что несмотря на однонаправленность, отмеченные сдвиги различались степенью выраженнности.

Реакция высвобождения неэстерифицированной олеиновой

кислоты во втором положении фосфолипида может быть результатом как непосредственного действия фосфолипазы А^ так и каскадной системы фосфолипаза А1 - лизофосфолипаза. Согласно полученным данным (рис.2), влияние испытуемых соединений на реакции высвобождения олеиновой кислоты (ОК) оказалось также однонаправленными, но не столь выраженным.

Примечательно, что сдвиги в содержании фосфатидилхолина (ФХ), особенно на 5 сек. инкубации, под действием фенаридина и фенетама достоверно не различались и не были столь выражены, как для лизофосфатидилхолина. По-видимому, активация процессов деацилирования ФХ в результате лигандтрецепторного взаимодействия., служит сигналом для межфракционных взаимопревращений фосфатидилсерина (ФС) и фосфатидилэтаноламина (ФЭ) в результате последовательных реакций их декарбоксилирования и метилирования соответственно, обеспечивающих в определенной степени компенсацию убыли фракции ФХ (Нпа1а Р. (К а!., 1979, 1980).

Как известно, наличие активностей дсацилирующих ферментов предполагает также функционирование противоположно направленных процессов реацшшрования, осуществляемых ацил-Ко А: лизофо сф о липид- ацилтрансфер азами.

Сравнение количественных изменений в отношении процессов реацилирования фосфолипидов (рис.3) продемонстрировало их идентичность на 5 сек. инкубации в отношении ФХ, ФС и ФЭ, что,' возможно, свидетельствует о схожести механизмов модификации мембранного бислоя, задействованных отмеченными внешними. сигналами.

Однако, уже на 10 сек. инкубации обнаруживается диаметрально противоположное влияние этих веществ в отношении ФЭ и несравненно большая выраженность действия фенаридина в отношении ФС по сравнению с антагонистом.

Таким образом, на основании полученных данных можно заключить, что на начальном, мембраносвязанном этапе транслокации информации изученных агониста и антагониста в качестве механизмов быстрой модификации синаптосомальных мембран, наряду с инициацией фосфоинозитидного цикла, выступают ферментативные системы деацилирования-реацилирования и фракционных взаимопревращений близких по структуре фосфолипидов.

Рис. 2. Влияние фенаридшш (аыошнаи линия) и фанатами (пунктир) на процессы деацилирования фисфшпидинхо/шиа (ФХ) в сшшптосомах головного мозга белых крыс, премечепных 14С - олеиновой кислотой (ОК).

Рис. 3. Влияние фенаридшш (сплошная линия) и фанатами (пунктир) на процессы реацшировапия фосфнлипидов в сшшптосомах головного мозга белых крыс, примеченных !4С-алсиновой кислотой.

3.3. Влияние фенаридина и фенетама на процессы трансформации арахидоновой кислооты в полиморфноядерных лейкоцитах человека.

Учитывая то, что процессы высвобождения арахидоновой кислоты - предшественника различных эйкозаноидов, осуществляются именно ферментными системами, деацилирующими фосфолипйды, а также сведения о том, что некоторые эйкозаноиды участвуют в модуляции боли (Ferreira N. et al., 1979) представляло несомненный интерес изучение влияния фенаридина и фенетама на процессы трансформации арахидоновой кислоты в полиморфноядерных лейкоцитах человека (рис.4-5). Как следует из приведенных рисунков, инкубация с изученными соединениями сопровождалась определенными сдвигами в содержании ННТ, 5-НЕТЕ и 12-НЕТЕ. Особого интереса, на наш взгляд, заслуживает установленный нами факт противоположного шшяиня агопнста и антагониста в отношении лейкотриена В4 - липидпого медиатора шлералыезин и воспаления

(Evans J. et al., 1985; VcGee J. et al., 1985; Samuelsson B. et al., 1989), что, повидимому, предполагает разнонаправленное влияние их на активность лейкотриен А4-гидролазы - фермента, лимитирующего скорость образования лейкотриена В4. Показано (Griffin К. et al., 1992), что этот фермент бифункционален и может модулировать боль и воспаление двумя самостоятельными молекулярными путями: образованием субстрата гипералгезии и воспаления - лейкотриена В4 и

деградацией эндогенных опиоидных пептидов. Указанные соединения проявили противоположное действие в отношении неферментативного пути трансформации LTB,, в 6E-LTB, и I2S-6E-LTB, соответственно (рис.4,5).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о возможном вовлечении процессов трансформации арахидоновой кислоты по липоксигеназному пути в тонкие биохимические механизмы действия изученного агониста и антагониста.

Рис. 4. Влияние фенаридина на образование различных эйкозапоидов в полиморфноядерных лейкоцитах человека.

Рис. 5. Влияние фенстама на образование различных эйкозапоидов в полиморфноядерных лейкоцитах человека.

3.4. Влияние фенаридина н фенетама на содержание циклических нуклеотвдов в Corpus striatum белых крыс.

Как известно, в реализации эффектов различных фармакологически-активных соединнений, в том числе, опиоидной природы, помимо фосфоинозитидного сигнального механизма, принимает участие также универсальная каскадная регуляторная система при участии сАМР в качестве вторичного мессенджера. Деятельность аденилатциклазной системы связывают, в частности, в большей степени,с механизмами хронического воздействия опиоидов, . процессами опиатной абстиненции и толерантности (Maldonado R., 1996; Avidor Reiss Т. et al., 1996). Полученные результаты по определению концентрации сАМР в corpus striatum белых крыс под. влиянием различных концентраций изученных соединений в различные сроки после введения (рис.6), а также в условиях их сочетанного применения, свидетельствуют об участии отмеченного универсального механизма сигнальной трансдукции с механизмах пролонгированных воздействий изученных соединений.

sftS-MMK СТО- мин й Контроль!

Рис.6. Влияние фенаридина и фенетама на уровень сАМР в Corpus striatum

белых крыс.

1 - контроль; 2 - 4 - фенаридин (0.05 - 5 иг/кг соответственно) 5 - фенаридин (0,05 мг/кг) фепетам (2 мг/кг); 6 - фенетам (2 т/кг) черные столбика - 15 мин; серые - 30 мин после введения препаратов.

3.5. Гликолитические ферменты мозга в качестве возможных молекулярных мишеней для действия анальгетиков.

Изпестно, что интенсивность метаболизма глюкозы меняется под действием опиоидов, причем показано, что снижение метаболической активности глюкозы в определенной степени коррелирует с силой субъективного эффекта этих соединений, в то время как для опиатной абстиненции характерна избыточная активность соответствующих метаболических путей (Но11о\уау М., 1991) . В связи с изложенным, естественно было предположить, что гликолитические ферменты, в особенности их нейроспецифичные формы, могут быть подвержены регулирующему влиянию веществ, действующих через опиоидную рецепторную систему. Предпринятые в этой связи исследования (рис.7-11) показали, что фенаридин является конкурентным ингибитором нейроспецифической енолазы и неконкурентным ингибитором М2 изофермента пируваткиназы. В то же время опиоидный антагонист фенетам практически не проявлял пнгибирующего действия в широком диапазоне концентраций. Поскольку препараты морфина, как было установлено, также угнетают' активность отмеченных ферментов, но в несколько меньшей степени, можно предположить, что степень ингибирования определенным образом коррелирует с силой анальгетического воздействия. Особого внимания, с нашей точки зрения, заслуживает факт подавления нейроспецифической енолазы, поскольку для такого нерегуляторного "равновесного" фермента на сегодняшний день известно весьма ограниченное число эффекторов.

Таким образом, полученные результаты не только в значительной степени дополняют сведения литературы о тонких биохимических механизмах действия соединений, осуществляемого на уровне опиоидной рецепторной системы, но и открывают определенные перспективы перед практической медициной в плане целенаправленного поиска лекарственных средств, с позиций вмешательства на уровне активации рецепторов клеток-мишеней, в деятельность вторичных мессенджеров и других компонентов, принимающих участие в формировании клеточного ответа.

% от начальной акт.

200 100

Вт

♦Гепагйкче И Гепе1ат

ММ100

Рис. 7. Изменение активности енолазы при воздействии фенаридина и

фенетама

о

1/ДАзад 14111

Рис. 8. Зависимость активности енолазы от концентрации фенаридина в координатах Лаинуивера-Бэрка

1/Д240 ™П

600

500

400 + Б1=5тМ

^^-Збо ■ ___ ■ 32=1 ОтМ

----------- А Б3=15тМ

х 34=20тМ

^ 100

п .

I-,-, -,-,-, р]

-50 -40 -20 0 20 40 60 1

Рис. 9. Определение константы ингибирования енолазной активности фенаридином в координатах Диксона. Ш=50тМ

Рис. 10. Определение константы ингибирования растворимой пируват киназной активности (фенаридином в координатах Диксона. Ю—ЗтМ

1/ДА340 пип

Рис. 11. Определение константы ингибирования мембраносвязанной синаптосомальной пируват киназной активности фенаридином в координатах ' Диксона. КМ0.1тМ

4. ИЗУЧЕНИЕ БЫСТРЫХ И ПРОЛОНГИРОВАННЫХ ПРОЦЕССОВ МОДИФИКАЦИИ ЛИПИДНОГО КОМПОНЕНТА МЕМБРАН В УСЛОВИЯХ САХАРНОГО ДИАБЕТА

Согласно современным представлениям, при диабете имеет место нарушение функционирования многих нейроэндокринных систем, в том числе, опиоидергической (Уояеу Ь. и а1., 1994), однако до сих пор остаются малоизученными тонкие биохимические механизмы взаимоотношений этих систем, в частности, их возможная роль в возникновении неврологических осложнений, столь свойственных отмеченной патологии. Между тем, уже сам факт наличия опиатных рецепторов на поверхности панкреатических клеток (РаНисса Р. еГ а1., 1996) свидетельствует об их возможном участии и процессах эндокринной секреции островков. В литературе последних лет появились сообщения относительно изменений концентрации отдельных эндогенных опиоидов, также как и о разнонаправленных изменениях чувствительности отдельных типов опиатных рецепторов при диабете ( Капш ]. е1 а1., 1994, 1995, 1996; РаНисса Р., 1996), возможно, связанных с изменениями их аффинности к соответствующим лигандам, во многом определяемой липидным микроокружением рецепторов. Более того, в этиологии некоторых форм диабетических нейропатий важная роль отводится нарушениям функционирования фосфоинозитидного цикла (Keogh Я.е1 а1., 1997).

В связи с изложенным, весьма актуальным представляется изучение влияния на отмеченные процессы при диабете соединений, мишенью действия которых являются опиатные рецепторы. Следует отметить, что, несмотря на многочисленные исследования, на сегодняшний день остаются проблематичными молекулярные механизмы патогенеза отмеченной патологии, причем наибольший пробел в этой области связан с идентификацией молекулярных событий, имеющих место непосредственно после связывания инсулина со своим мембранным рецептором.

Учитывая вышеизложенное, нами были предприняты исследовавния по изучению процессов включения и распределения 14С-арахидоновой кислоты в отдельные фракции фосфолипидов и нейтральных липидов мембран, лимфоцитов больных сахарным диабетом, а также возможности модификации этих липидных компонентов в условиях быстрой (5 сек.) стимуляции клеток.

Изучение отмеченных процессов при сахарном диабете

представлялось особенно резонным в связи с тем, что плазматическая мембрана является мишеныо для действия самых разнообразных факторов, имеющих отношение к этиологии диабета. Исходя из представлений о тесной связи эндокринной и иммунной систем' организма и принимая во внимание роль аутоиммунного дефицита в этиологии диабета, нами в качестве объекта исследований были выбраны Т-лимфоциты.

Результаты исследований по изучению процессов включения и распределения С-арахидоиловой кислоты в отдельные фракции фосфолипидов и нейтральных липидов в условиях отсутствия внешнего сигнала свидетельствуют об изменениях по сравнению с контролем исходного "морфофункционального статуса" клеток при диабете. Пониженный уровень включения 14С-арахидоновой кислоты во фракцию ФХ (рис.12) на фоне значительного повышения ее в неэтерифицированной форме и тенденции к повышению лизофосфатидилхолинов (ЛФХ) , по всей видимости, связан с активацией при диабете процессов деацилирования ФХ, что находится в соответствии с литературными данньши, а также с результатами наших исследований по изучению жирнокислотного состава отдельных липидных фракций при аллоксановом диабете.

Рис.12. Включение и процентное распределение 14 С- арахидоновой кислоты в

фосфолипиды лимфоцитов периферической крови человека в норме и при сахарном диабете в течение 60 мин. Здесь и на рис. 12 - численные значения на оси ординат отражают % от суммы включенной в разные фосфолипиды радиоактивной арахидоновой кислоты. * - Р < 0,05, к - контроль, д - диабет.

Констатированные нами в условиях патологии изменения в процессах включения и распределения метки в различные фракции нейтральных липидов (рис.13) свидетельствуют об идентичной закономерности в отношении шггенсификации процессов деацилирования в условиях патологии.

Проведенные исследования позволили выявить определенные закономерности также в процессах быстрых модификационных преобразованию! липидного компонента арахидонат-меченых лимфоцитов при сахарном диабете (рис. 14 -15).

Рис.13. Включение и процентное pancnpeдeJ!C>шe 14С-арахидоновой кислоты в нейтральные липиды лимфоцитов периферической крови человека в норме и при сахарном диабете в течение 60 мин.

Таким образом, полученные результаты позволили выявить и в значительной степени дополнить сведения относительно формирования в условиях изученной патологии нового хронически измененного "метаболического статуса" липопротеинового бислоя мембран, продемонстрировать определенную тканеспецифичность в изменениях жирнокислотного состава и содержания отдельных липидных фракций и установить, в частности, превалирование в условиях патологии процессов деацилирования над процессами реацилирования, а также определенные специфические изменения на стадии рецептор-опосредуемой модификации липидного компонента мембран на фоне стимуляции фосфоинозитидного цикла.

Я Контроль □ Диабет

Рис. 14. Модификациопные преобразования фосфолипидов лимфоцитов периферической крови человека в норме и при сахарном диабете под действием КонА ( 5 сек.). Здесь и на рис.15 численные значения на оси ординат отражают % от контроля (в качестве контроля взяты исходные уровни включения радиоактивности в исследованные фракции липидов.

Рис. 15. Модификациопные преобразования нейтральных липидов лимфоцитов периферической крови человека в норме и при сахарном диабете под действием КонА.

Факт влияния изученных нами соединений опиоидной природы на универсальные регуляторные системы и процессы модификации липидного бислоя мембран, в значительной степени преобразованные в условиях сахарного диабета, в совокупности с вышеприведенными сведениями литературы о нарушениях опиоидной рецепторной системы при этой патологии, послужил предпосылкой для изучения влияния фенаридина на процессы модификации липидного. компонента мембран лимфоцитов больных сахарным диабетом в условиях инициации фосфоинозитидного цикла (рис. 16).

в Контроль+Фенариин О Диабет+Фенаредин

120 ■

110"

100

л

т

тг

90 "

1.2-ДГ

ЖК

80

Рис. 16. Влияние фепаридшш на процессы модификационных преобразовании ' отдельных липидных фракций лимфоцитов периферической крови человека под действием КонА.

Воздерживаясь от перечисления различных механизмов, возможно, ответственных за выявленные в условиях сахарного диабета и под влиянием исследованного нами агониста сдвиги в быстрых модификационных преобразованиях липидного бислоя и под влиянием исследованного нами агониста, мы сочли целесообразным при интерпретации полученных данных акцентировать основное внимание на доминирующей метаболической направленности и заключить, что изменения ноцицепции при диабете, возможно, хотя бы отчасти, обусловлены нарушением функционирования домена, включающего процессы катаболизма фосфоинозитидов и деацилирования фосфатидилхолинов.

Объяснение во всех деталях причинно-следственных взаимоотношений между отмеченными сигналами и пусковыми звеньями модификационных преобразований липидного компонента мембран, безусловно, нуждается в проведении дальнейших исследований с применением как соединений, способных задействовать различные типы опиатных рецепторов, так и специфических ингибиторов и активаторов отдельных звеньев фосфоинозитидного цикла, возможно, позволит выявить определенные закономерности в функционировании сложных взаимосвязей между нервной и эндокринной системами организма, их роли в генезе эндокринной патологии, в частности, сахарного диабета.

ИЗУЧЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ ТРИОКСИОКТАДЕКАДИЕНОВЫХ КИСЛОТ ИЗ Bryonia alba L. ПРИ АЛЛОКСАНОВОМ ДИАБЕТЕ

В эксперименте на белых крысах с аллоксановым диабетом нами продемонстрировано гипогликемическое действие тригидроксиокта-декадиеновых кислот (ТГОДК), выделенных из корней переступня белого (Bryonia alba L.), издавна применяемых в народной медицине Армении. Отмеченные кислоты наделены простагландиноподобной • активностью (Panossian A.G. et al., 1979, 1983). Образование С-20 гомологов этих кислот (содержащих 1,2,5-тригидрокси-2Е-. пентаеновую группировку) было констатировано в лейкоцитах, тромбоцитах и легких из 12-НРЕТЕ - продукта липоксигеназного пути окисления арахидоновой кислоты (Jones R. L. et al., I97S; Bryant R.W. et al., 1982; Pace-Asciak С., 1983) . Особого внимания заслуживает образование подобных соединений в островках Лангерганса, где им, наряду с некоторыми другими метаболитами липоксигеназного пути, отводится определенная роль в качестве модуляторов секреции инсулина (Metz Z., 1983, 1985; Turk J. et al., 1984).

Изменения гликемической кривой находятся в тесной зависимости от концентрации в крови неэстерифицированных жирных кислот, выступающих в роли дополнительных энергетических субстратов при различных функциональных и патологических состояниях организма (Rändle P.J. et al., 1988; McGarry J.D., 1992). Реципрокная взаимосвязь между скоростью утилизации глюкозы в мышцах, с одной стороны, и интенсивностью мобилизации жирных кислот из жировой ткани с их последующим окислением а мышцах, с другой, рассматривается в концепции цикла глюкоза -жирные кислоты (Rändle P.J., 1963).

Согласно результатам исследований по изучению состава и содержания отдельных липидных фракций (рис.17), ТГОДК оказывают нормализующее влияниие в отношении систем функционирующих в цикле глюкоза-жирные кислоты. Более того, согласно результатам проведенных нами исследований, ТГОДК способствуют значительной нормализации жирнокислотного состава фосфолипидов в различных тканях аллоксандиабетических крыс (рис. 18-19).

500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0

□ КОНТРОЛЬ

□ ДИАБЕТ

□ ДИАБЕТ + ТГОДК

141.1

134.5

59.7

476.6

243

112.7

нэжк

тг

Рис. 17. Влияние тригидроксиоктадскадиеновых кислот (ТГОДК) па содержание пеэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) и триглицерийов в крови (1), мышечной (2-3) и жировой (4-5) тканях крыс при аллоксановом

диабете.

<16 16 : о 16 : i 13 : о 18 : i 18 : 2 20 : 4

Рис. 18. Влияние тригидроксиоктадскадиеновых кислот (ТГОДК) на жирпокиаготный состав (%) фосфолипидов мышечной ткани аллоксандиабшических крыс.

Рис. 19. Влияние тригидроксиоктадскадиеновых кислот (ТГОДК) на жириокислотный состав (%) фосфолипидов жировой ткани аплоксандиабетичсских крыс.

Особенно примечательной, на наш взгляд, является динамика изменений содержания арахидоновой кислоты в связи со сведениями литературы о ее роли не только в качестве предшественника эйкозаноидов, но и самостоятельно функционирующего фактора, участвующего в секреции инсулина (Band A.M., 1993; Howell S.L., 1994) .

Нормализация жирнокислотного состава фосфолипидов на фоне тенденциии к реэтерификации в состоянии обеспечить строительный материал для обменных процессов в мембранах, обеспечивающих нормальные физико-химические свойства, необходимые для транслокации информации инсулина,с одной стороны, и для восстановления процессов клеточной проницаемости, в частности, для глюкозы - с другой. Восстановление процессов этерификации в состоянии обеспечить также определенный пул диацилглицерола -вторичного мессенджера фосфоинозитидного универсального сигнального механизма и одного из возможных посредников внутриклеточного влияния инсулина.

Факт нормализующего влияния ТГОДК на соотношение свободной и этерифицированной арахидоновой кислоты послужил предпосылкой для выявления эффектов ТГОДК на уровень некоторых эйкозаноидов (PGE2, PGF2i, 5-НЕТЕ).

Таблица. Содержание ПГЕ2, ПГТЬ и 5-НЕТЕ в плазме крови белых крыс при аллоксановом диабете и после введений ТОДК. (М + ш), п = 7-8

параметр контроль диабет диабет+ТГОДК

ПГЕ2 пг/л 786,1 ± 59,7 1052,3 + 80,8* 1296,1 + 104,0

IirF2a нг/мл 15,4 ± 1,1 2,3 ±0,1 20,6 + 1,7*

5-НЕТЕ пг/мл 95,4 ± 15,5 71,4 + 22,2 251,8 + 24,6*

*- Р < 0,05

На основании полученных данных невозможно в простой причинно-следственной форме интерпретировать взаимоотношения описанных эффектов с гипогликемическим действием ТГОДК, однако они позволяют предложить активацию окислительного метаболизма арахидоновой кислоты в качестве одного из возможных механизмов реализации гипогликемического эффекта ТГОДК.

Вышеизложенное, наряду с результатами исследований по' изучению влияния ТГОДК на метаболизм гликогена позволяют, заключить об участии ациклических продуктов окисления-арахидоновой кислоты в регуляции углеводно-липидного метаболизма. ! В целях более корректной интерпретации этого положения,-несомненно, представляет интерес проведение в дальнейшем соответствующих исследований с использованием С-20 гомологов вышеуказанных соединений.

В целом, установленное нами гипогликемическое действие ТГОДК в совокупности с нормализующим влиянием их на определенные стороны липидного метаболизма, особенно уязвимые при диабете, находится в полном согласии с принятой на сегодняшний день, концепцией о роли традиционной растительной медицины в плане качественно новых подходов относительно упорядочения каскада-метаболических нарушений при диабете. Более того, полученные результаты выдвигают изучение липидного метаболизма на передний план, наравне с такими показателями как уровень глюкозы в крови, в качестве теста в отношении приемлемости того или иного компонента, традиционно используемого в народной медицине.

Наконец, полученные результаты позволяют рекомендовать в практическую медицину новое антидиабетическое средство растительного происхождения, практически лишенное побочных эффектов, показаниями к применению которого могут служить также его антиатерогенная и антиатеросклеротическая, противосвер-тывающая активность, тонизирующее и стимулирующее свойства (Oreckhov A.N. et al., 1994; Hamberg М., 1991; Pashinian et al., 1981).

Таким образом, совокупность представленных экспериментальных данных в значительной степени дополняет сведения литературы и с новой точки зрения освещает многие нерешенные проблемы нейрозидокршгологии, а также позволяют рекомендовать качественно новые подходы в плане целенаправленного поиска лекарственных средств синтетического и природного происхождения и изучения биохимических механизмов их действия.

30

ВЫВОДЫ

1. Фармакологические эффекты опиоидного агониста фенаридина и антагониста фенетама на клеточном уровне реализуются, посредством инициации фосфоинозитидного сигнального механизма, на функционирование которого ' отмеченные соединения оказывают противоположное действие.

2. На начальном, мембраносвязанном этапе транслокации информации изученных агониста и антагониста в качестве механизмов быстрой модификации синаптосомальных мембран,' наряду с инициацией фосфоинозитидного цикла, выступают ферментативные системы деацилирования-реацшшрования и фракционных взаимопревращений близких по структуре фосфолипидов.

3. Противоположное влияние фенаридина и фенетама на образование лейкотриена В4 - фактора гиперальгезии и воспаления, свидетельствует о возможной роли процессов трансформации арахидоновой кислоты по липоксигеназному пути в тонких биохимических механизмах действия изученных соединений.

4. В условиях пролонгированного влияния фенаридина и фенетама в corpus striatum белых крыс имеют место значительные изменения в содержании сАМР - вторичного мессенджера аденилатциклазной универсальной регуляторной системы и биохимического коррелятора синдрома опиатной абстиненции.

5. Показано, что фенаридин является конкурентным ингибитором нейроспецифической енолазы и неконкурентным ингибитором М2 изофермента пируваткиназы. Антагонист фенетам не оказывает, ингибирующ'его влияния на активность отмеченных ферментов в широком диапазоне концентраций.

6. При сахарном диабете имеют место значительные отклонения в процессах включения и перераспределения |4С-арахидоновой

кислоты, а также в модификационных преобразованиях отдельных фракций липидов на ранних, рецептор-опосредованных стадиях стимуляции лимфоцитов.

7. Выявленные при сахарном диабете модификационные изменения жирнокислотного и фракционного составов липидов различных клеточных популяций свидетельствуют об установлении в условиях патологии видоизмененного "метаболического статуса" мембран, характеризующегося превалированием процессов деацилирования.

8. В реализации гипогликемического действия триоксиоктадекади-еновых кислот, выделенных из Bryonia alba, определенная роль отводится коррегирующему влиянию этих соединений на:

а) функционирование цикла глюкоза - жирные кислоты;

б) образование некоторых эйкозанопдов;. в) отдельные ферментные системы обмена гликогена.

9. В качестве одной из возможных мембранных мишеней, задействованных в нарушениях функционирования опиоиднон рецепторной системы при диабете выступает липопротеиновый домен фосфоинозитидного сигнального механизма.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Вартанян Г.С., Карагезян К.Г., Паносян А.Г. Влияние физиологически-активных соединений из Bryonia alba на некоторые стороны липидного метаболизма в головном мозгу и других тканях при аллоксановом диабете. //Нейрохимия, 1982, 1, 2, 139.

2. Парсаданян Г.К., Тер-Татевосян Л.П., Мартикян А.Р., Вартанян Г.С.,, Карагезян К.Г. Аллоксановый диабет как модель для. изучения инсулинрегулируемых ферментов обмена гликогена. //Биол.ж.Арм., 1983, 36, 6, 519-521.

3. Martikian A.R., Vartanyan G.S., Karaguezian K.G. The effect of-

chronic diabetes, induced by alloxan, on the content and fatty acid composition of some lipid fractions in rat tissues. //Abstr. of Papers of, 16 th World Congress of the Int. Soc. for Fat Res., 1983, Budapest, 1049-1057.

4. Вартанян Г.С. Гипогликемическое действие тригидроксиоктадекадиеновых кислот из Bryonia alba L. и их влияние на содержание и жирнокислотный состав отдельных липидных фракций в тканях белых крыс с аллоксановым диабетом. //Тез. докл. ХУ1 конф. ФЕБО, Москва, 1984, 423.

5. Мартикян А.Р., Вартанян Г.С., Карагезян К.Г. Изучение жирнокислотного состава и содержания отдельных липидных фракций в жировой и мышечной тканях белых крыс с аллоксановым диабетом. //Бюл. эксп. биол. и мед., 1984, 98, 7, 33-35.

6. Мартикян А.Р., Вартанян Г.С., Карагезян К.Г. Изучение состава и содержания неэстерифицированных жирных кислот в головном мозге белых крыс с аллоксановым диабетом. // Нейрохимия, 1984, 3, 3, 288-289.

7. Вартанян Г.С., Парсаданян Г.К., Карагезян К.Г. Влияние тригидроксиоктадекадиеновых кислот из Bryonia alba на активность ферментов обмена гликогена при аллоксановом диабете. // Бюл. эксп. биол. и мед., 1984, 97, 3, 295-297.

8. Мартикян А.Р., Вартанян Г.С., Карагезян К.Г. Изучение жирнокислотного состава и переокисления липидов в микросомах головного мозга белых крыс с аллоксановым диабетом. // Вопросы мед. химии, 1.985, 31,3, 86-87.

9. Вартанян Г.С., Паносян А.Г., Карагезян К.Г., Геворкян Г.А. Влияние тригидроксиоктадекадиеновых кислот из Bryonia alba L. на содержание простагландинов Е2, F2a и 5-НЕТЕ в крови крыс при аллоксановом диабете. //Бюл. эксп, биол, и мед, 1986, 101, 4, 418-419.

10. Вартанян Г.С., Агаджанов М.И. Влияние тригидроксиоктадекадиеновых кислот из Bryonia alba L. на метаболизм арахидоновой кислоты при диабете. //Тез. 67-й отчета, науч. сессии ЕрМИ, 1988, 35.

И. Вартанян Г.С., Паносян А.Г., Агаджанов М.И. Влияние

тригидрокси-октадекадиеновых кислот из Bryonia alba на метаболизм эйкозпноидоп при диабете. //Тез. докл. Ш Всес. конф. "Биоантиоксидант", 1989, П, 96.

12. Вартанян Г.С., Бурназян Р.А., Агаджанов .М.И. Влияние наркотического анальгетика фенаридина и антагониста наркотических анальгетиков Ф1 на содержание циклических

нуклеотидов • в головном мозге белых крыс. // Воп. мед. химии, 1990, 36, 49-50.

13. Вартанян Г.С., Агаджанов М.И. Влияние наркотического анальгетика фенаридина и его антагониста Ф1 на интенсивность перекисного окисления липидов в головном мозге белых крыс. //Тез. 1У конф. "Биоантиоксидант", 1993, 1, 111.

14. Vartanian G.S., Mkrtchian S.L., Tadevosian U.V., Shaljian A.L., Agadjanov M.I., Mkhitarian V.G. Phospholipase A2 and lipid peroxidation: the effect of antioxydant on phospholipid hydrolysis. //Abstr. of 22nd FEBS Meeting, 1993, Stokholm, 214.

15. Nazarian K.B., Vartanian G.S., Kostanian A.A., Agadjanov M.I. Brain glycolitic enzymes: possible molecular targets for several analgetics. // 10 ESN Meeting, Jerusalem, Israel. J.Neurochemistry, 1994, 63,S. 1,84.

16. Vartanian G.S., Agadjanov M.I., Tadevosian U.V., Batikian T.B. The study of phosphoinositide cycle functioning and phospholipids deacylation-reacylation processes in rat brain synaptosomes followed by effects of opioid agonist fenaridin and it's antagonist. // Abstr. of 15th Meeting, Kyoto, Japan, July 2-7, J.Neurochemistry, 1995, 65, S.59.

17. Agadjanov M.I., Vartanian G.S. The possible mechanisms involved in new opioid agonist fenaridin and it's antagonist effects. // 11th ESN Meeting, Groningen, the Netherlands. J.Neurochemistry, 1996, 66, S2, 107.

18. Вартанян Г.С., Агаджанов М.И. Влияние опиоидного агониста фенаридина и его антагониста на превращения арахидоновой кислоты в лейкоцитах человека. // Мат. науч. конф. поев. 30-летию основ, каф. биофизики Ереванского Госуниверситета, 1996, 79.

19. Agadjanova Е.М., Vartanian G.S. The study of phospholipids deacylation-reacylation reactions in rat brain synaptosomes followed by effects of new opioid agonist fenaridin and it's antagonist. //Abstr. book

of 12 th Int.Med.Sci. St. Congr., Istambul, 1996, 92.

20. Вартанян Г.С., Агаджанов М.И., Тадевосян Ю.В., Батикян Т.Е. Изучение катаболизма фосфоинозитидов в синаптосомах. головного мозга белых крыс под влиянием опиоидного агониста фенаридина и его антагониста. //Бюл. эксп. биол. и мед., 1996, 10, 405-407.

21. Vartanian G.S., Agadjanov M.I., Tadevosian U.V. The possible role of rapid membrane lipid modification processes in some communications between neural and endocrine systems. // 16th Biennal Meeting of the International Society for Neurocheniistry. Boston, Massachusetts, USA, July 20-26, 1997, S 16.

22. Вартанян Г.С., Агаджанов М.И. Изучение роли липидного компонента мембран в функционировании некоторых нейроэндокринных взаимоотношений. // Мат. отчетн. сессии ЕрМУ, 1997, 4.

23. Агаджанов М.И., Вартанян Г.С., Тадевосян Ю.В. Биохимические механизмы действия нового опиоидного агониста фенаридина и его антагониста. //Мед. наука Армении, 1997, 37, 3-4, 36-47.

24. Вартанян Г.С., Агаджанов М.И., Тадевосян Ю.В., Батикян Т.Б. Влияние нового опиоидного агониста фенаридина и его. антагониста на ферментативную систему деацилирования-' реацилирования в синаптосомах головного мозга белых крыс. // Вопросы мед. химии, 1997, 3, 27-32.

25. Agadjanov M.I., Vartanian G.S. The possible mechanisms involved in new opioid agonist fenaridin and it's antagonist effects. // Neurochemistry: Cellular, Molecular and Clinical Aspects, 1997. pp.1019-1023.

26. Karaguezian K.G., Vartanian G.S., Agadjanov M.I., Panossian A.G., Hoult J.R.S. Restoration of disordered glucose-fatty acid cycle in alloxandiabetic rats by trihydroxyoctadecadie-noic acids from Bryonia alba L., native Armenian medical plant. //Planta medica, in press.

27. Вартанян Г.С., Агаджанов М.И., Карагезян К.Г. Регулирующее влияние тригидроксиоктадекадиеновых кислот из Bryonia alba на функционирование цикла глюкоза - жирные кислоты при аллоксановом диабете. // Доклады Российской Академии Наук, в печати.

ШГФПФЦОФР

L^luiumuiüpp йфрфид h pççLupuiquiûpti фифгрифО puiriuirçpiuiîuiuji i5nqji^){iljmgtinû iqpnghuGhpJi ijhp[i mumiîQiuufipnipjuiQp npn¿ .. .■jiuipÚLulininqjmiujliu ml]inlii) QjnipbpJi uiqqbgmpjuiQ ljhüump¡iúJiuiljmQ',. l¡uipquii|np]i¿ úhfuui QJiqúGhpnuS Jiü¿u|hu QnpúuijnuS, uij Qujbu fy GhjpntQi]nt]p]i(i hiuúuil]ujpqli [uuidquijuluiü ujuijtfuiGQbpnuî:

ñiuniúQmuJipilh^ hû шщшщу^шдйшйч^ршшд^ридйшй !J)hpúbQuiuij]i(i huiiSuil|uipqhp}i, фn u фгф ünqjim Ji quij [i (i glil}i]i qnpüniGhnipjuiG, {íQjujhu QmU шршр1щпОшрр1Ц1 úji 2ШРР lîhpmpniJiinQhpJi umuijuigiîuiû i|pm оифгфг} mqnQJium фЬСшр^гфГф U uiGmuiqnQtiuin ,|)hûhmmiî[i uiqrjhgnipjmQ ор^йш^шфгфрриСШЬрр: LLnim]hL n^mrjpnipjmû hû ixipduiG[i mqnûjiuui^ U uiûmiuqnQ}iuinp uipiuúmqünphü ЬшЦшпшЦ uiqrçbgiupjniGp [îQjiqhu фтфгфСпфифцшфО uiqrpuÛ2iuGiu|[iG huiiîuiliuipqfi hplpmpquijfili úfijünpq bpljuig{iiqijigbpjiG]i, uijGujhu h[ дшф U pnppnpiîmCi iîhq]iunnnp - ihjl}nuipIihG B4 шпш2шдйшй iqpnghuQhpti ijpui:

Q-puiljuiGnipjuiQ ú'h$> шпЦш ini|jm[Qhpp i^rnjiHiI hû 2шРшРш1ииФ-iqiujdiuüGbpniil oiq]inlir}bpqlili GhjprunpuiGuiîiiu{iiujli ujpnghufi ¡uuiûquipmtfûhp}] liuiuJiG: b/Gbp)i| i}hpp 2ШРШ1Ц,11Ш<)119> JiG^tqhu Giuh 2ифшрш]ииф tplmujmpnqbQhqnLiï lîuiuûuiljgnq inuipphp qnpönGQhjiJ] huiúuip рищиШршфй ujpngbuGhpli Ijuipluip rçbpjig niunitfGuiufipi]h[ , t .^tûmpJiqliQli mqqlignipjniûp ijiu]jii}Qhji]i йпгфЭДйрпд^пй

фпфп{иподт00Ьр11 ijpiu: Uinuigi|iu& uii¡jm[Qhpp i|ljuijnitf hü, np й2фл& hlii}uiGquiq]iG i]|iíímljniií фпифгфйпд^ифгрлфО uiqquiÜ2Ui(iuij]iG qnúbGp hmQqJiumûnuî t «pmquiQpmjpQ p{ipuifu», npp Ghpqpui^nuí t Œngpghiqgfimjji fuuiGqiupniúGhpfi uqpnghuQbpnuí:

UmhGuiIimunipjiuG iShp 2ШРШ11Р11Ш^ фшшпш1]шй шф]ш]йьрр U hqpmlimgmpjniüübpti niühü n¿ újiuijG hJiiíGuipuip qjiuimlimû, mjjU liuipLnp lllipuinuilpiiG G2iuGuiljni.pjniG, Gnp iSnmbgmúGhp uinui2uii]phpii| qhpmtí[i2ng(ihp[i qfimuiljiuGnphG h¡iiíúmi|npi[mír GupuinuiliuijfiG npnünuííibpfi hujúuip:

Av-/