Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль механизмов репарации ДНК в радиационном адаптивном ответе Drosophila melanogaster

ВАК РФ 03.02.08, Экология (по отраслям)

Автореферат диссертации по теме "Роль механизмов репарации ДНК в радиационном адаптивном ответе Drosophila melanogaster"

На правах рукописи

Шилова Любовь Алексеевна

РОЛЬ МЕХАНИЗМОВ РЕПАРАЦИИ ДНК В РАДИАЦИОННОМ АДАПТИВНОМ ОТВЕТЕ 011030РН1ЬА МЕЬАМОСА Я ТЕЯ

03.02.08 - экология (биология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 3 НОЯ 2014

Сыктывкар 2014

005554955

Работа выполнена в отделе радиоэкологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук

Научный руководитель: Москалев Алексей Александрович,

доктор биологических наук, доцент, заведующий лабораторией молекулярной радиобиологии и геронтологии Института биологии Коми НЦ УрО РАН, заведующий кафедрой экологии Сыктывкарского государственного университета, заведующий лабораторией генетики продолжительности жизни и старения в Московском физико-техническом институте

Официальные оппоненты: Осипов Андреян Николаевич,

доктор биологических наук, заведующий лабораторией радиационной биофизики Государственного научного центра Российской Федерации - Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна

Мыльников Сергей Владимирович,

кандидат биологических наук, доцент кафедры генетики и селекции Санкт-Петербургского государственного университета

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное уч-

реждение науки Институт экологии растений и животных Уральского отделения Российской академии наук (г. Екатеринбург)

Защита состоится 19 декабря 2014 г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д-004.007.01 в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биологии Коми научного центра Уральского отделения РАН по адресу: 167982, г. Сыктывкар, ГСП-2, ул. Коммунистическая, 28

e-mail: dissovet@ib.komisc.ru

Сайт института: www.ib.komisc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Коми научного центра Уральского отделения РАН по адресу: 167982, г. Сыктывкар, ул. Коммунистическая, 24.

Автореферат разослан « » 2014 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета -■»- Кудяшева Алевтина Григорьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Основной задачей факториальной экологии является изучение механизмов ответа биологических систем на стрессовые воздействия окружающей среды, которые отражают возможности данных систем использовать эволюционно возникшие адаптивные морфогенетические программы (Васильев, 1988, 2005). Основной целью естественного отбора является обеспечение воспроизводства вида, в связи с чем, генетические программы ограничивают жизнь репродуктивным периодом (Skulachev, 2001). Однако существуют разногласия относительно существования специальных генетических программ (Мыльников, 1997).

Эндогенные и экзогенные факторы приводят к большому количеству повреждений, при этом повреждения молекул ДНК наиболее опасны вследствие угрозы нарушения генетической информации. Например, облучение или поступление ионов тяжелых металлов в организм животных приводит к дозозависимому увеличению количества ДНК-белковых сшивок в клетках головного мозга (Осипов, Сыпин, 1999). Накопление большого количества не восстановленных повреждений ДНК, особенно в участках, которые кодируют жизненно-важные белки, снижает приспособленность особи. Репарация ДНК является одним из ключевых механизмов ответа на повреждения ДНК. На данный момент имеется небольшое количество данных о роли генов репарации ДНК в обеспечении стрессоустойчивости целого организма. Известно, что с возрастом происходит снижение эффективности репарации ДНК (Guo et al., 1998; Mechanisms and implications..., 2000; Age-related loss..., 2006; Vyjayanti, Rao, 2006). Установлено, что мутации некоторых генов репарации ДНК могут приводить к снижению продолжительности жизни (ПЖ) и гиперчувствительности к стрессовым воздействиям (Down-regulation of..., 1997; Restoring DNA repair..., 2005; Carter et al., 2005; Kujoth et al., 2005).

Для выявления роли генов в регуляции ПЖ и стрессоустойчивости обычно используют экспериментальные подходы, заключающиеся в снижении активности или полном выключении исследуемых генов, либо в искусственной сверхактивации этих генов. Удобным объектом подобных исследований является плодовая мушка Drosophila melanogaster, находящаяся в контролируемых лабораторных условиях, которые позволяют оценивать действие исследуемого фактора в «чистом» виде. Наряду с этим, наличие полной информации о геноме и обширной коллекции лабораторных линий с различными генетическими модификациями, простоте содержания и короткому жизненному циклу позволяют не только исследовать механизмы действия фактора, но и оценить роль генотипа.

Цель и задачи исследования. Цель исследования заключалась в изучении роли генов репарации ДНК в обеспечении устойчивости Drosophila melanogaster к различным повреждающим факторам окружающей среды (ионизирующее излучение, действие прооксидантов, гипертермия,

голодание). Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1) исследовать радиоадаптивный ответ и эффект радиационного гор-мезиса по продолжительности жизни у особей Drosophila melanogaster линии дикого типа Canton-S и линий с мутациями генов репарации ДНК (D-Gadd.45, mei-9, Mus209, mus210, Mus309, okr, spn-B);

2) оценить влияние хронического (40 сГр) воздействия у-излучения на предимагинальных стадиях развития на изменение уровня экспрессии генов репарации ДНК (D-Gadd45, mei-9, Mus209, mus210, Mus309, okr, spn-B) у имаго линии дикого типа Canton-S с возрастом;

3) проанализировать выживаемость после острого (30 Гр) воздействия у-излучения у дрозофил со сверхэкспрессией генов репарации ДНК (Brca2, D-Gadd45, Husl,Ku80, mei-9, mnk, mus210, Rrpl, spn-B, WRNexo);

4) изучить устойчивость к действию прооксидантов, гипертермии и голодания у дрозофил со сверхэкспрессией генов репарации ДНК (Вгса2, D-Gadd45, Husl, Ки80, mei-9, mnk, mus210, Rrpl, spn-B, WRNexo).

Научная новизна. Впервые в комплексных экспериментах in vivo доказана роль генов, участвующих в распознавании повреждений ДНК (D-Gadd45, Husl, mnh, Mus309), генов эксцизионной репарации нукле-отидов (mei-9, mus210, Mus209) и оснований (Mus209, Rrpl), генов репарации двуцепочечных разрывов ДНК по типу гомологичной рекомбинации (Brca2, Mus309, okr, spn-B) и негомологичного воссоединения концов (Ки80, WRNexo) в обеспечении устойчивости целостного организма к стресс-факторам различной природы - ионизирующему излучению, действию прооксидантов, гипертермии, голоданию. Доказано, что хроническое воздействие у-излучения в малой дозе (40 сГр) на предимагинальных стадиях развития особей линии дикого типа Canton-S приводит к увеличению экспрессии большинства изученных генов репарации ДНК у имаго, которая сохраняется на протяжении всей жизни дрозофил. Показано, что кондиционная повсеместная сверхэкспрессия исследуемых генов репарации ДНК не индуцирует устойчивость к у-излучению, но сверхактивация генов Brca2, D-Gadd45, Husl, mnk, mus210, Ku80, Rrpl, spn-B и WRNexo повышает устойчивость дрозофил к действию прооксидантов, гипертермии и голоданию.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследования раскрывают роль исследуемых механизмов репарации ДНК в ответе целого организма на такие факторы среды как ионизирующее излучение, действие прооксидантов, гипертермия, голодание. С помощью доступных демографических методов анализа изучены и изложены связи между отдельными клеточными процессами в изменении параметров жизнедеятельности целого организма, в частности, продолжительности жизни. Наличие ортологов исследуемых генов в геноме человека и млекопитающих позволяет рассматривать их в качестве мишеней для разработки препаратов фармакологического и генотера-певтического улучшения стрессоустойчивости организма в целях радиопротекции, геропротекции и цитопротекции, а также для прогнозирования отдаленных последствий облучения организма.

Личный вклад автора. Соискатель принимал активное участие в постановке и решении задач исследования, в сборе экспериментальных данных, самостоятельно провел статистическую обработку и анализ данных, обобщение результатов и подготовку публикаций.

Апробация. Результаты работы докладывались на научных конференциях молодых ученых Института биологии (Сыктывкар, 2012, 2013), на международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2012, 2014), международной конференции «Генетика старения и долголетия» (Москва, 2012; Сочи, 2014), ежегодном съезде европейского общества по радиационным исследованиям (Италия, 2012; Ирландия, 2013; Греция, 2014), международной школе молодых учёных по молекулярной генетике «Непостоянство генома» (Звенигород, 2012), международном съезде геронтологов и гериатров (Сеул, 2013), международной конференции «БИОРАД-2014» (Сыктывкар, 2014).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 работ, в том числе пять статей в рецензируемых журналах из списка изданий, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из ведения, четырех глав (обзор литературы, материалы и методы, результаты, обсуждение результатов), выводов, приложения и списка цитируемой литературы, содержащего 432 источника публикаций, в том числе 378 публикаций из зарубежных изданий. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста и содержит 12 таблиц и 23 рисунка.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В главе рассмотрены данные литературы по основным механизмам влияния экологических факторов (ионизирующее излучение, действие прооксидантов, голодание и гипертермия) на ПЖ и старение организма. Обсуждаются эффекты окислительного стресса основных клеточных структур (липидов, белков, нуклеиновых кислот), биологические ответы на действие ионизирующих излучений (в частности, в малых дозах) и их молекулярно-генетические механизмы. Особое внимание уделяется обсуждению механизмов репарации ДНК и их вкладу в регуляцию продолжительности жизни организма и стрессоустойчивость.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Линии Drosophila melanogaster. Для проведения экспериментов использовали следующие лабораторные линии Drosophila melanogaster: линия дикого типа Canton-S; линии с мутациями в исследуемых генах репарации ДНК: mei-9/ (генотип: w1 mei-9-u), mei-9/+ (генотип: w1 mei-9^/0(1 )DX, у1 f1), Mus209/+ (генотип: Mus209Bl bpr cn/CyO), Mus309/

+ (генотип: Mus309m гу50в/ ТМЗ, Sb1 ryRK), spn-B/+ (генотип: Dp(l;Y)Bs, B+; ru1 st1 spn-B1 e> са'/ТМЗ, Sb1), okr/+ (генотип: okr*'910 cn1 bw'/CyO) (Bloomington Stock Center, США), D-Gadd45/ D-Gadd45, D-Gadd45/ + (генотип: y*w*; P{GawB}Gadd45NP03S1 /СуО, P{UAS-lacZ.UW14}UW14), mus210/+ (генотип: mus2WGI/CyO) («Kyoto Stock Center», Япония); линии дрозофил, в геном которых встроены дополнительные копии исследуемых генов под контролем промотора UAS, индуцируемого драйвером GAL4: и)1118, UAS-Brca2; w"18, UAS-Husl; w1118, UAS-mnk, UAS-spn-B (любезно предоставлены Dr. Schupbach, «Princeton University», Прин-стон, США), wlns, UAS-Ku80; w"18, UAS-mei-9; w!1!S, UAS-mus210; w1118, UAS-Rrpl; w"18, UAS-WRNexo (созданы с передачей авторских прав под заказ в «Genetivision», Хьюстон, США); В качестве драйверной (тестер-ной) использовали линию P{Act5C(-FRT)GAL4.Switch.PR}3/TM6B, Tb1 (далее - GS-GAL4) («Bloomington Stock Center», США).

Дрозофил содержали в термостате при 25 °С и 12-часовом режиме освещения на стандартной агарно-дрожжевой питательной среде (Ashburner, 1989).

Активация кондиционной повсеместной сверхэкспрессии генов репарации ДНК. Для сверхактивации генов репарации ДНК использовали 1Ш486-активируемый GeneSwitch (A conditional..., 2001; PfSwitch]..., 2001), GAL4/UAS метод (Brand, Perrimon, 1993).

Оценка стрессоустойчивости. Для определения устойчивости к действию прооксидантов дрозофил рассаживали в банки с фильтровальной бумагой, пропитанной раствором 20 мМ параквата (Methyl Viologen, Sigma) в 5%-ной сахарозе, при температуре 25 °С. Для оценки устойчивости к тепловому шоку мух содержали на стандартной агарно-дрожжевой питательной среде, при температуре 35 "С. Для определения устойчивости к голоданию дрозофил помещали в банки с фильтровальной бумагой, пропитанной водой, при температуре 25 "С. Эксперименты вели до гибели последней дрозофилы. Два раза в день подсчитывали количество умерших особей, после чего анализировали показатели выживаемости: медианную и среднюю ПЖ, процент умерших особей через 24 и 48 ч после начала воздействия.

Оценка выживаемости при действии облучения. Хроническое воздействие ИИ в дозе 40 сГр осуществляли от внешнего источника 228Ra (от стадии яйца до вылета имаго, в среднем 12 сут) при мощности дозы 0.14 сГр/ч. Острое воздействие в дозе 30 Гр осуществляли от внешнего источника 60Со (50 мин) при мощности дозы 0.6 Гр/мин (Рокус AM).

Для оценки влияния искусственной индукции генов репарации ДНК на радиоустойчивость особей каждого варианта разделили на четыре группы: 1) без облучения, без сверхэкспрессии; 2) без облучения со сверхэкспрессией; 3) 30 Гр без сверхэкспрессии; 4) 30 Гр со сверхэкспрессией. Для исследования радиоадаптивного ответа у дрозофил линии дикого типа Canton-S и линий с мутациями в генах репарации ДНК особей каждого из изучаемых генотипов разделили на четыре группы:

1) без облучения; 2) особи, подвергшиеся на предимагинальных стадиях развития хроническому воздействию ИИ в дозе 40 сГр; 3) особи, подвергшиеся острому воздействию ИИ в дозе 30 Гр сразу после вылета имаго; 4) особи, последовательно подвергшиеся хроническому и острому облучению (40 сГр + 30 Гр).

Ежедневно проводили подсчет числа умерших мух. По полученным данным строили кривые выживаемости и рассчитывали среднюю, медианную, минимальную, максимальную ПЖ, возраст 90%-ной смертности и время удвоения интенсивности смертности.

Оценка возраст-зависимой динамики экспрессии изучаемых генов. Изучали возраст-зависимое изменение экспрессии генов репарации ДНК у облученных в дозе 40 сГр и необлученных особей линии дикого типа Canton-S на 1, 14, 28, 42 и 56 сут после вылета имаго. Хроническое воздействие ИИ в дозе 40 сГр осуществляли от внешнего источника 226Ra (от стадии яйца до вылета имаго, в среднем 12 сут) при мощности дозы 0.14 сГр/ч.

Экспрессию генов измеряли методом количественного ПЦР в «реальном времени» с этапом обратной транскрипции (ОТ-ПЦР). РНК выделяли с помощью Aurum Total RNA mini kit (Bio-Rad) по инструкции изготовителя. Из полученного раствора РНК синтезировали кДНК по инструкции SuperScript III First Strand Synthesis System for RT-PCR (Invitrogen). Реакционную смесь для проведения реакции ПЦР готовили по инструкции изготовителя Applied Byosystems (Invitrogen) с красителем SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) и праймеров (СИНТОЛ). Полимеразную цепную реакцию проводили в амплифика-торе CFX96 (Bio-Rad), используя следующую программу: 1) 95 °С в течение 10 мин, 2) 95 "С в течение 15 с, 3) 60 °С в течение 60 с, 4) этапы 2-3 повторяли 50 раз.

Экспрессию исследуемых генов рассчитывали относительно экспрессии гена домашнего хозяйства ß-Tubulin с использованием программного обеспечения CFX Manager (Bio-Rad).

Статистический анализ результатов. Для сравнения распределения смертности в выборках использовали критерий Колмогорова-Смирнова (Fleming et al., 1980), для сравнения различий по медианной ПЖ -критерий Гехана-Бреслоу-Вилкоксона (Breslow, 1970). Достоверность различий по максимальной ПЖ оценивали с помощью метода Ванг-Аллисона (Statistical methods..., 2004). Для сравнения доли умерших особей спустя 24 или 48 ч использовали ср-критерий Фишера для выборочных долей (Fisher, 1915). Достоверность различий между значениями относительной экспрессии генов оценивали с помощью t-критерия Стьюдента для независимых выборок (Student, 1908). Анализ данных выполняли в статистических пакетах Statistica 8.0 (StatSoft), WinModest 1.0.2 (Pletcher, 1999) и R 3.0.1 (R Core Team).

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Радиоадаптивный ответ и эффект радиационного гормезиса по показателям продолжительности жизни у линии дикого типа Caлíoл-S и линий с мутациями в генах репарации ДНК в ответ на у-излучение

Исследовали радиоадаптивный ответ и эффект радиационного гормезиса у линии дикого типа СаШоп-Б и линий с мутациями в генах ответа на повреждение ДНК {Б-Оайй45), эксцизионной репарации ДНК (те1-9, тив210, Мив209), репарации двуцепочечных разрывов ДНК (ойг, врп-В, Мив309).

Хроническое воздействие у-излучения в малых дозах на предимаги-нальных стадиях развития индуцировало радиоадаптивный ответ на острое воздействие у-излучения у особей линии дикого типа Сап^п-Б. Воздействие только острого облучения в дозе 30 Гр снизило медианную ПЖ (МПЖ) самцов и самок на 51-57%, возраст 90% -ной смертности на 34-55% (р<0.001). Предварительное хроническое воздействие у-излуче-ния в дозе 40 сГр способствовало тому, что после острого облучения МПЖ снизилась только на 6-21%, возраст 90%-ной смертности на 312% (р<0.001) (рис. 1). Обнаружено проявление радиационного гормезиса. Воздействие в дозе 40 сГр на предимагинальных стадиях развития способствовало увеличению МПЖ на 12-15%, относительно нео-блученных особей (р<0.001). Анализ других параметров ПЖ (средняя ПЖ, МРШТ, возраст гибели 90% особей) подтвердил данный результат. Радиоадаптивный ответ и радиационный гормезис сохранялись у гете-розигот с мутациями генов Мив209 (гомолог гена РСЫА млекопитающих) и тиз210 (ХРС), но проявлялись в меньшей степени, чем у особей дикого типа СаЫоп-Б. Так, различия по МПЖ между вариантами эксперимента с острым облучением в дозе 30 Гр и последовательным воздействием излучения при дозах 40 сГр и 30 Гр у этих генотипов составил 5-21% (р<0.001) (рис. 1). У самцов и самок дрозофил с мутациями генов те1-9 (ХРР) и гена 0-0ас1с145 (Сайй45) радиоадаптивный ответ и эффект гормезиса отсутствовали. У гомо- и гемизигот с мутацией гена те1-9, подверженных острому облучению с предоблучением относительно особей без предоблучения наблюдали снижение МПЖ на 18-34%, возраста 90%-ной смертности на 7-9% (р<0.001). У гетерози-гот наблюдали снижение МПЖ на 18%, возраста 90% -ной смертности на 5% (рис. 1). У особей-гомозигот с мутациями в гене Т>-Оайй45 наблюдали снижение МПЖ на 10-30%, возраста 90%-ной смертности на 19%, по сравнению с необлученными мухами. Здесь же у гетерозигот наблюдали снижение МПЖ лишь на 5-14%, возраста 90%-ной смертности на 8-19% (¿><0.001) (рис. 1).

У гетерозигот с мутацией в гене МивЗОЭ (В1тп) радиоадаптивный ответ отсутствовал. Однако у самцов данной линии проявлялся эффект гормезиса. Наблюдали увеличение МПЖ на 16%, возраста 90%-ной смертности на 21%, по сравнению с необлученными особями (р<0.001) (рис. 1). Радиоадаптивный ответ сохранялся у гетерозигот с мутациями

в генах эрп-В (ХВССЗ) и о/гг (гай54), но проявлялся в меньшей степени по сравнению с особями линии дикого типа СаМоп-Б. МПЖ увеличилась на 10-14%, возраст 90%-ной смертности на 5-13%. Эффекта радиационного гормезиса у данных линий не обнаружено (рис. 1).

33

СапЬзп-£

?? Сап(оп-Б

??

Мт209/+

?? тиз210/~г

33

Мш309/+

33

тш210/+

??

те\-9/тег-9

?? зз

Ми*309/+ 0-Сас1(145/0-Сгас1с145

г? зз ?г зз

0-0ааа45/0-аш45 0-всн1<145/+ 1>-С^45/+ срп-В/+

Рис. 1. Влияние различных режимов воздействия у-излучения на продолжительность жизни самцов ((5(5) и самок (99) дрозофил линии дикого типа СаЫоп-Э и особей с мутациями в генах репарации ДНК. Данные двух повторностей были объединены. По оси ОУ - Функция дожития, по оси ОХ - Возраст, сут.

Обозначения:-без облучения, — 40 сГр,..........30 Гр, —40 сГр + 30 Гр; * р<0.001,

** р<0.05 Без облучения относительно 40 сГр, # р<0.001, ## р<0.05 30 Гр относительно 40 сГр + 30 Гр по критерию Колмогорова-Смирнова.

?? окг/+

Таким образом, у особей с мутациями в генах эксцизионной репарации ДНК и генов репарации двухнитевых разрывов ДНК радиоадаптивный ответ отсутствует, либо проявляется в меньшей степени, чем у особей линии дикого типа Canton S.

3.2. Возраст-зависимое изменение уровня экспрессии генов репарации ДНК у линии дикого типа Canton-S после хронического воздействия у-излучения

После хронического воздействия ИИ на предимагинальных стадиях развития в дозе 40 сГр у имаго линии дикого типа Canton-S наблюдали повышение экспрессии генов репарации ДНК mei-9, mus210, Mus209, Mus309, spn-B и okr в 1.6-2.6 раза по сравнению с необлученными животными (р<0.05 по t-критерию Стьюдента). Повышенные уровни экспрессии генов mei-9, Mus209 и Mus309 сохранялись до 56 сут жизни. Активность гена D-Gadd45 на протяжении всей жизни не различалась между контрольными и облученными животными.

Таким образом, хроническое воздействие ионизирующего излучения в малой дозе на предимагинальных стадиях развития приводит к увеличению экспрессии большинства изученных генов ответа на повреждение ДНК, эксцизионной репарации ДНК и гомологичной рекомбинации, которая сохраняется на протяжении всей жизни дрозофил.

3.3. Оценка выживаемости при остром облучении у линий со сверхэкспрессией генов репарации ДНК

Кондиционная повсеместная сверхэкспрессия генов, которые участвуют в распознавании повреждений ДНК D-Gadd.45, Husl, mnk не повышала устойчивость дрозофил к действию облучения в дозе 30 Гр, а наоборот, усиливала негативное влияние острого облучения на ПЖ.

Рис. 2 Влияние кондиционной повсеместной сверхэкспрессии генов репарации ДНК на медианную продолжительность жизни (МПЖ) самцов (¿¿) и самок (99) ОгозорШа те1апода8{ег, подверженных у-излучению в дозе 30 Гр. Данные двух повторностей были объединены. Показаны ошибки медианы.

Обозначения: О-без сверхэкспрессии, без сверхэкспрессии 30 Гр, И-сверхэкспрессия, 11 - сверхэкспрессия 30 Гр. * р<0.05 без сверхэкспрессии 30 Гр относительно сверхэкспрессия 30 Гр, # р<0.05 без сверхэкспрессии относительно сверхэкспрессия по критерию Гехана-Бреслоу-Вилкоксона.

Наблюдали снижение МПЖ на 71-75% по сравнению с облученными особями без сверхэкспрессии (р<0.05) (рис. 2). У облученных дрозофил, с кондиционной повсеместной сверхактивацией генов эксцизион-ной репарации В.гр1, теЬ-Э, тиэЁЮ наблюдали снижение МПЖ на 5974% (рис. 2). У дрозофил с кондиционной повсеместной сверхэкспрессией генов репарации двуцепочечных разрывов ДНК Вгса2, врп-В, Ки80 и ЖДАГехо также не обнаружили повышения устойчивости к острому у-излучению. Наблюдали снижение МПЖ на 58-67% (р<0.05). Анализ других параметров ПЖ (средняя ПЖ, М1ШТ, возраст гибели 90% особей) подтвердил данный результат.

Во всех вариантах исследования кондиционная повсеместная сверхактивация генов репарации ДНК приводила к снижению параметров ПЖ, относительно мух без сверхэкспрессии. Например, наблюдали снижение МПЖ на 49-72% (р<0.05) (рис. 2).

Таким образом, кондиционная повсеместная сверхэкспрессия исследуемых генов репарации ДНК не индуцировала устойчивость БгозоркИа твЫпоцавЬег к острому воздействию у-излучения, а наоборот усиливала негативное влияние острого воздействия в дозе 30 Гр на ПЖ.

3.4. Влияние кондиционной повсеместной сверхэкспрессии генов репарации ДНК на устойчивость особей ОговорКИа те1апо§а81ег к действию стресс-факторов различной природы (прооксиданту параквату, гипертермии, голоданию) Сверхэкспрессия генов репарации ДНК эрп-В и тив210 у самцов и генов Т)-Сай(145, Ниэ1 и эрп-В у самок увеличивала МПЖ в условиях прооксиданта параквата на 15-77%, относительно особей без сверхэкспрессии (р<0.05) (см. таблицу). У самцов со сверхэкспрессией генов Вгса2, Нив! и В.гр1, а также самок со сверхэкспрессией тппЬ. средняя ПЖ в условиях гипертермии была выше на 7-55% по сравнению с контрольными особями (р<0.05) (см. таблицу). Повышенная транскрипционная активность генов Вгса2, В-Сас1<145, зрп-В, \VRNexo у самцов привела к повышению средней ПЖ в условиях голодания на 8-45%, относительно особей без сверхэкспрессии (р<0.05). Сверхэкспрессия генов репарации ДНК в остальных вариантах не повлияла на медианную выживаемость, либо вызвала негативный эффект (см. таблицу).

Таким образом, кондиционная повсеместная сверхэкспрессия генов Вгса2, В Са(1(145, Ниэ1, тпк, тиз210, Ки80, Игр1, врп-В и \VRNexo повышает устойчивость (повышение одного или нескольких параметров выживаемости) дрозофил к исследуемым стресс-факторам. В остальных вариантах экспериментов наличие в геноме дрозофил дополнительных активных копий генов репарации ДНК либо не стимулировало стрес-соустойчивость особей, либо ухудшало ее.

Влияние сверхэкспрессии генов репарации ДНК на устойчивость особей ОговорИНа те1аподаз1ег к действию прооксиданта параквата, гипертермии и голодания

Вариант эксперимента Паракват 20 мМ Гипертермия 35 °С Голодание

М Х±&т 48 ч М Х±Ат 24 ч М Х±Ат 48 ч

3 иА8-Вгса2/в5-вА1.4 (-) 54 53.3±1.7* 46 33 36.610.9 6 32 36.411.0 98

3 иАЗ-Впса2/вЗ-вА1.4 (+) 46 49.6±3.0 59* 48* 39.611.0* 12 48* 44.111.5* 81*

9 иА5-Вгса2/в5-СА14 (-) 31 40.9±2.0 73 48 41.810.8 5 48 42.311.1 80

9 иА8-Вгса2/вЗ-вА1.4 (+) 22* 35.1±2.1* 82* 33* 34.5Ю.6* 14* 33* 38.811.0 96*

3 иА5-С)-ваМ45/вЗ-вА14 (-) 48 42±1.2 92 33 34.710.8 31 56 62.910.9 85

3 иА&0-Са<1а45/в5-вА1-4 (+) 33* 33.9±1* 97* 33 3710.7 * 30 69* 5711.9* 33*

$ иА5-0-вас!а45/в5-вА14 (-) 24 29.4±0.6 100 48 39.910.7 13 56 55.610.5 24

9 L/ДS-D-Gacíc(4б/GS-GЛL4 (+) 33* 34.8±0.9 * 96* 24* 33.811.1* 54* 56 6012.4* 49*

3 иАЭ-Низ 1/вЭ-вА1.4 (-) 55 62.4±2.3 28 23 29.811.0 9 48 40.610.8 86

3 иА5-Низ1/в5-вА14 (+) 55* 51.6±3.1* 50* 32* 34.611.1* 31* 48 48.911.2* 78*

9 иАЗ-Ни51/вЗ-вМ-4 (-) 46 45.9±2.0 66 32 29.510.8 45 48 52.111.2 59

9 иАЗ-Ни51/в8-вА1.4 (+) 55* 62.3±2.8* 46* 32 37.010.9* 9* 48 44.611.3* 71*

3 иА5-Ки80/в5-вА14 (-) 78 80.0±1.5 9 39 32.810.8 38 32 38.911.0 30

3 иА5-Ки80/в5-вА1.4 (+) 70 76.7±2.6 18* 24* 26.310.8* 76* 32 34.911.1* 99*

9 иА8-Ки80/СЗ-вА1.4 (-) 46 58.3±2.4 56 39 38.910.3 2 48 42.111.2 100

9 иА8-Ки80/в5-вА14 (+) 31 56.1±3.5 58 39 35.810.7* 17* 32* 36.610.9* 76*

в иА5-пк1-9/в5-вМ4 (-) 78 84.9±3.5 25 39 32.210.9 40 48 42.212.1 66

3 иАЗ-тэ1- 9/вЗ-СА1.4 (+) 46* 59.1+2.6* 52* 24* 28.010.8* 69* 48 40.311.0* 87*

9 иА8-гге1-9/в5'вА14 (-) 70 69.9±3.5 41 39 36.710.7 14 48 53.411.8 68

9 иА8-тв1-9/в5-вА14 (+) 70 73.7±4.4 43 39 39.610.7* 9 48 48.611.6* 65

3 иА5-гтк/в8-вА14 (-) 54 54.3±2.2 26 31 33.810.9 23 33 37.910.8 93

3 иА5-пг)к/в5-вА14 (+) 31* 38.3±1.6* 66* 31 32.510.8 20 48 40.911.4* 73*

9 иА5-гткУв5-вА14 (-) 55 51.4±1.8 46 31 36.110.6 4 48 43.211.1 84

9 ^^ЛS-m^Л/GS-G/í^L4 (+) 48 50.9±2.1 60* 48* 40.110.8* 5 48 39.311.1 94

3 иАЗ-т15210/вЗ-вА1-4 (-) 55 60.4±2.3 32 32 27.410.5 49 48 43.111.1 88

3 иА&гги5210/в5-вА14 (+) 70* 69.5±2.4 30 23* 23.710.4* 85* 48 38.111.1 99*

9 иАЗ-ггив210/в5-вА14 (-) 46 49.1 ±2.3 67 39 39.410.3 2 48 41.411.0 93

9 иАЗ-гт$210/в8-вА1-4 (+) 30* 42.6±2.1 81* 39 32.610.8* 34* 48 44.711.3* 69*

3 иА5-Ргр1/в5-вА14 (-) 72 63.2±1.9 31 24 27.510.8 67 56 60.111.4 29

3 иА8-Р!гр1/в8-вА1-4 (+) 72 62.3±2.2 33 39* 34.410.7* 26* 47* 50.711.3* 62*

9 иАЗ-Ргр1/вЗ-вА14 (-) 72 68.0±2.7 38 39 38.610.5 7 47 55.011.1 55

9 иА5-Игр1/в5-вА14 (+) 47* 48.2±2.0* 73* 24* 29.310.9* 57* 47 49.811.6* 51

3 иА5-8рп-В/в8-вА1-4 (-) 31 38.4±2.2 4 48 28.710.5 5 31 34.610.9 100

3 иАЗ-5рп-В/вЗ-вА14 (+) 55* 61.4±1.5 4 48 32.210.9 4 48* 40.911.1 91*

$ иАЗ-врп-В/СЗ-вА14 (-) 31 38.3±1.9 4 31 42.210.8 2 48 50.211.4 5

9 иА^рп-&вЗ-вА14 (+) 40* 38.3±1.7 5 31 44.110.7 1 48 52.111.1 4

3 иАЗ-\ЛШехо/в5-вА14 (-) 80 81.6±3.0 26 32 29.410.6 42 31 32.211.1 98

с? иА&-\ЛШехо/в8-вА14 (+) 80 64.913.3* 37 32 30.4Ю.5 26* 48* 46.811.0* 75*

9 иА5-\ЛШехо/вЗ-вА14 (-) 95 91.114.0 28 32 29.810.5 37 48 44.410.8 93

9 иА5-\№Ыехо/в5-вА14 (+) 72* 77.913.5* 36* 32 33.610.8 21* 48 43.010.9 91

Обозначения. ¿-самцы;?-самки^(-) - без сверхэкспрессии; (+) - сверхэкспрессия; М - медианная продолжительность жизни (сут); Х±Дт - средняя продолжительность жизни (сут); 24 ч и 48 ч -процент умерших особей через 24 и 48 ч после начала воздействия; N - количество мух в выборке;

* р<0.05 (М- критерий Гехана-Бреслоу-Вилкоксона; Х±,\т - критерий Колмогорова-Смирнова, 24 ч и 48 ч- ф-критерий Фишера). Объем выборки: 90-230 мух на вариант.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

На сегодняшний день остаются нерешенными вопросы о дифференцированном вкладе молекулярно-клеточных процессов в эффекты, наблюдаемые на организменном уровне. В то же время это именно те изменения, которые играют определяющую роль в приспособленности особи и популяции к условиям окружающей среды. Согласно данным Лауры Саундерс и Эрика Вердина, неблагоприятные условия среды вызывают активацию внутриклеточных механизмов стрессоустойчиво-сти и формирование адаптивного ответа по ПЖ у Caenorhabditis elegans (Saunders, Verdin, 2009). Используя линии Drosophila melanogaster с мутациями и сверхэкспрессией генов репарации ДНК и применяя ПЖ в качестве интегрального показателя стрессоустойчивости организма, мы изучили участие данных генов в обеспечении устойчивости дрозофил к действию различных факторов окружающей среды (ионизирующее излучение, действие прооксидантов, гипертермия, голодание).

В проведенных нами экспериментах, дрозофилы с мутациями генов mei-9, D-Gadd45, Mus309 не проявляли радиоадаптивный ответ и эффект радиационного гормезиса, за исключением самцов с мутацией в гене Mus309, у которых наблюдали эффект гормезиса (рис. 1). Это свидетельствует о важной роли данных генов в защите организма от воздействия радиационных повреждений. Ген mei-9 является ортологом гена эксцизионной репарации ДНК млекопитающих XPF, который необходим для инициации эксцизионной репарации нуклеотидов (Boyd et al., 1976). Из данных литературы, известно, что рентгеновское облучение личинок третьего возраста (перед стадией куколки) с мутацией mei-9A1 индуцирует остановку клеточного цикла в клетках крыла има-гинального диска (Kondo, Perrimon, 2011) и возникновение апоптоти-ческих участков в клетках сетчатки (Jassim et al., 2003). Гомо- и геми-зиготы с мутацией mei-9*' и mei-9A2 чувствительны к таким факторам среды, как метил-метансульфонат и у-лучи (Gatti, 1979; Smith, 1976; Flores, Engels, 1999; Radford et al., 2005). Ген D-Gadd45 контролирует активность белков эксцизионной репарации нуклеотидов и оснований, а также обеспечивает доступность поврежденных участков ДНК для ферментов репарации (Ma et al., 2009). По данным литературы известно, что гены семейства Gadd45 также участвуют в ответе на окислительный стресс, гипоксию, низкочастотные электромагнитные поля, гиперосмотический стресс, воспалительный и онкогенный стресс, воздействие ксенобиотиков (например, мышьяк) и алкилирующих агентов (например, сульфонат метил метан), соединения хрома (VI), циспла-тин, а также на другие загрязнители почв, воздуха и воды (Induction by ionizing..., 1991; Price, Calderwood, 1992; Zhang et al., 2001; DeHaan et al., 2001; Bulavin et al., 2003; Induction of pro-apoptotic..., 2004; Bower et al., 2006; Electromagnetic fields affect..., 2005; Low pH induces..., 2006; Sen et al., 2007; The transcription..., 2009). Ген Mus309 кодирует гомолог RecQ-геликазы синдрома Блума, которая осуществляет раскручивание двойной спирали ДНК (Weinert, Rio, 2007), данный процесс

необходим для различных видов репарации однонитевых и двунитевых разрывов ДНК. Из литературы известно, что личинки с мутацией Mus309D2/Mus309D3 обладают повышенной чувствительностью к таким факторам среды, как метил-метансульфонат и у-излучение (Beall, Rio, 1996; McVey et al., 2007). У особей-гетерозигот с мутациями в генах Mus209, mus210, spn-B и okr радиоадаптивный ответ сохранялся, но проявлялись в меньшей степени, чем у особей линии дикого типа CantonS (рис. 1), это указывает на то, что данные гены принимают участие в ответе на действие ИИ. Ген Mus209 кодирует гомолог белка млекопитающих PCNA и участвует в эксцизионной репарации оснований и нук-леотидов, репарации мисматчей, репарации двунитевых разрывов, а также в процессе репликации ДНК (Henderson et al., 1994; Characterization of a..., 2006). Из литературы известно, что особи с мутацией Mus209B1 чувствительны к гипертермии, ИИ и метил-метансульфонату (Henderson et al., 1994). Ген mus210 является гомологом гена белка ХРС млекопитающих, который необходим для инициации эксцизионной репарации нуклеотидов. Известно, что в ответ на ИИ происходит активация данного гена (Long-term ХРС..., 2007; In vitro radiation..., 2007). У особей с мутацией mus210G1 скорость удаления УФ-индуциро-ванных пиримидиновых димеров значительно ниже, чем у особей дикого типа (Luchkina et al., 1982). Ген spn-B является гомологом гена белка репарации двунитевых разрывов ДНК XRCC3 млекопитающих, который отвечает за гомологичную рекомбинацию и негомологичное воссоединение концов ДНК (Lee, Orr-Weaver, 2003). Известно, что мутанты spn-B1 малочувствительны к рентгеновскому облучению в период от 24 до 72 ч после откладки яиц (Staeva-Vieira et al., 2003). Ген okr является ортологом гена rad54 млекопитающих, продукт данного гена участвует в гомологичной рекомбинации (The Drosophila melanogaster..., 1999). Мутанты по данному гену характеризуются гиперчувствительностью к факторам среды метил-метансульфонату и рентгеновскому облучению (The Drosophila melanogaster..., 1999).

Феномен радиационного гормезиса и радиоадаптивного ответа связан с активацией защитных систем организма в ответ на воздействие радиоактивного излучения в малой дозе. В результате организм становится подготовленным к последующему острому повреждающему воздействию фактора. В пользу данного общепринятого объяснения говорят полученные нами результаты по возраст-зависимому изменению экспрессии генов репарации ДНК. После хронического воздействия у-излучения в дозе 40 сГр у особей линии дикого типа Canton-S наблюдали повышение экспрессии генов mei-9, mus210, Mus209, spn-B, okr, Mus309 в 1.6-2.6 раза, по сравнению с необлученными животными. Повышенный уровень экспрессии генов mei-9, Mus209 и Mus309, после воздействия ИИ, сохранялся до 56 сут жизни. Вероятно, увеличение активности этих генов способствует устойчивости организма к последующему воздействию спонтанных и индуцированных стресс-факторов, и

обеспечивает долгосрочные эффекты хронического облучения в малой дозе, в частности, гормезис по ПЖ.

Основываясь на полученных данных, предположили, что избыточная экспрессия генов репарации ДНК приведет к повышению устойчивости к ионизирующей радиации, действию прооксидантов, гипертермии и голоданию. Было показано, что кондиционная повсеместная сверхэкспрессия генов, которые участвуют в распознавании повреждений ДНК (D-Gadd45, Husl, mnk), эксцизионной репарации нуклеоти-дов (mei-9, mus210) и оснований (Rrpl), репарации двуцепочечных разрывов ДНК по типу гомологичной рекомбинации (Brca2, spn-B) и негомологичного воссоединения концов (Ки80, WRNexo) не индуцировала устойчивость к острому воздействию у-излучения, а наоборот усиливала негативное влияние острого воздействия в дозе 30 Гр на ПЖ. При этом сама кондиционная повсеместная активация генов репарации ДНК приводит к достоверному снижению исследуемых параметров ПЖ, относительно мух без сверхэкспрессии. Сверхэкспрессия генов репарации Brca2, D-Gadd45, Husl, mnk, mus210, Ku80, Rrpl, spn-B и WRNexo у самцов и/или самок приводила к повышению устойчивости к действию прооксидантов, гипертермии и голодания. В целом, белки, кодируемые этими генами необходимы для инициации и координации различных механизмов репарации однонитевых и двунитевых разрывов ДНК (An essential role..., 2007; Functional analysis of..., 2008; Klovstad et al., 2008; Saunders et al., 2008; Ma et al., 2009; A network of..., 2009; DmWRNexo is..., 2009; Structure and functional..., 2009; Roy et al., 2011; Kadir et al., 2012; Kuper, Kisker, 2013). По-видимому, эти процессы играют важную роль в обеспечении устойчивости дрозофил к данным факторам. В остальных вариантах экспериментов наличие в геноме дрозофил дополнительных активных копий генов репарации ДНК либо не стимулировало стрессоустойчивость особей, либо ухудшало ее.

Причиной отсутствия или слабой выраженности стимулирования стрессо- и радиоустойчивости может быть недостаточная эпигенетическая регуляция процесса репарации ДНК. Например, показано, что в фибробластах человека повышенная активность генов репарации ДНК замедляет клеточное старение только на фоне одновременной сверхэкспрессии гена деацетилазы гистонов SIRT6 (Sirtuin 6..., 2012). Другой причиной снижения ПЖ может быть нарушение баланса между различными внутриклеточными путями и энергетическое истощение, поскольку репарация ДНК - это процесс, требующий больших энергетических затрат (Effect of poly..., 2001). Следовательно, сверхактивация изучаемых генов могла привести к чрезмерному расходу энергии в ущерб другим жизненно важным процессам. При этом наши данные согласуются с теорией Михаила Благосклонного, согласно которой, старение организма и возраст-зависимые болезни начинаются с гиперфункций клетки (Blagosklonny, 2009).

выводы

1. Хроническое воздействие у-излучения в малых дозах (40 сГр) на предимагинальных стадиях развития индуцировало эффект радиационного гормезиса и радиоадаптивный ответ на острое (30 Гр) воздействие излучения у особей линии дикого типа Canton-S. Особи с мутациями в генах, которые участвуют в распознавании повреждений ДНК (D-Gadd45), эксцизионной репарации нуклеотидов (mei-9) и репарации по типу гомологичной рекомбинации (Mus309) радиоадаптивный ответ и эффект радиационного гормезиса не проявляли, за исключением самцов с мутацией в гене Mus309, у которых наблюдали эффект гормезиса. У особей с мутациями в остальных генах радиоадаптивный ответ и эффект радиационного гормезиса сохранялся, но проявлялся в меньшей степени, чем у особей линии дикого типа Canton-S.

2. Хроническое воздействие ионизирующего излучения в малой дозе (40 сГр) на предимагинальных стадиях развития особей линии дикого типа Canton-S привело к увеличению экспрессии генов эксцизионной репарации ДНК (mei-9, mus210, Mus209) и репарации двуцепочечных разрывов (Mus309, spn-B, okr) у имаго, которая сохранялась до конца жизни дрозофил. Экспрессия гена D-Gadd45 между облученными и нео-блученными особями с возрастом не изменялась.

3. У трансгенных линий дрозофил, кондиционно-индуцированная повсеместная сверхэкспрессия генов эксцизионной репарации (mei-9, mus210, Rrpl), репарации двуцепочечных разрывов (Brca2, spn-B, Ки80, WRNexo) и генов распознавания повреждений (D-Gadd45, Husl, mnk) снижала устойчивость дрозофил к гамма-излучению в дозе 30 Гр по параметрам продолжительности жизни, относительно облученных особей без сверхэкспрессии.

4. Кондиционная повсеместная сверхэкспрессия генов, которые участвуют в распознавании повреждений ДНК (D-Gadd45, Husl, mnk), генов эксцизионной репарации нуклеотидов (mus210) и оснований (Rrpl), генов репарации двуцепочечных разрывов ДНК по типу гомологичной рекомбинации (Brca2, spn-B) и негомологичного воссоединения концов (Ки80, WRNexo) повышает устойчивость дрозофил к исследуемым стресс-факторам. В остальных вариантах экспериментов наличие в геноме дрозофил дополнительных активных копий генов репарации ДНК либо не стимулировало стрессоустойчивость особей, либо ухудшало ее.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Работы, опубликованные в изданиях, рекомендованных ВАК РФ:

1) The role of D-GADD45 in oxidative, thermal and genotoxic stress resistance / A. Moskalev, E. Plyusnina, M. Shaposhnikov, L. Shilova, et al. // Cell Cycle. 2012. Vol. 11. № 22. P. 4222-4241.

2) Анализ экспрессии генов как метод детектирования малых доз ионизирующих излучений, формальдегида и диоксинов / М.В. Шапошников, Е.Н. Плюснина, С.Н. Плюснин, О.А. Шосталь, JI.A. Шилова, и др. // Теоретическая и прикладная экология. 2013. №2. С. 20-28.

3) The effects of pectins on life span and stress resistance in Drosophila melanogaster / M. Shaposhnikov, D. Latkin, E. Plyusnina, L. Shilova, et al. // Biogerontology. 2014. Vol. 15. I. 2. P. 113-127.

4) Шилова JI.A., Плюснина E.H., Москалев A.A. Влияние кондиционной повсеместной сверхэкспрессии генов репарации ДНК на устойчивость особей Drosophila melanogaster к действию стресс-факторов различной природы (оксидативному стрессу, тепловому шоку, голоданию) // Известия Коми НЦ УрО РАН. 2014. №2. С. 41-45.

5) Роль генов репарации ДНК в радиационно-индуцированном изменении продолжительности жизни Drosophila melanogaster / JI.A. Шилова, Е.Н. Плюснина, Н.В. Земская, А.А Москалев // Радиационная биология. Радиоэкология. 2014. №5. С. 482-492.

В прочих изданиях:

1) Участие генов репарации ДНК в радиоадаптивном ответе у Drosophila melanogaster / Е.Н. Плюснина, Е.В. Романова, Л.А.Шилова и др. // 16-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых. Пущино, 2012. С. 331-332.

2) Плюснина Е.Н., Шилова JI.A., Москалев А.А. Исследование радиоадаптивного ответа у особей Drosophila melanogaster с мутациями в генах репарации ДНК // Материалы докладов XIX Всероссийской молодежной научной конференции. Сыктывкар, 2012. С. 202.

3) Plyusnina E.N., Shilova L.A., Moskalev A.A. The role of D-GADD45 gene in lifespan regulation and radioadaptive response formation in Drosophila melanogaster // Genetics of aging and longevity: Abstracts of reports of 2nd international conference. Moscow, 2012. P. 71.

4) Radiation-induced adaptive response in fruit flies with mutations in DNA repair genes / A. Moskalev, E. Plyusnina, E. Romanova, L. Shilova // 39th Annual Meeting of the European Radiation Research Society. Vietri sul Mare, Italy, 2012. P.30.

5) Шилова JI.A., Плюснина E.H., Москалев A.A. Роль генов репарации ДНК в формировании адаптивного ответа у Drosophila melanogaster // Пятая Международная школа молодых учёных по молекулярной генетике. Звенигород, 2012. С. 69.

6) Шилова JI.A., Сивергина Ю.С., Плюснина Е.Н. Влияние сверхэкспрессии генов репарации ДНК на стрессоустойчивость Drosophila melanogaster // II Всероссийская (XVII) молодежная научная конференция. Сыктывкар, 2013. С. 154-155.

7) Plyusnina E.N., Shilova L.A., Moskalev A.A. Stress-response genes in lifespan regulation and formation of long-term effects induced by ionizing irradiation in Drosophila melanogaster // The Journal of Nutrition, Health & Aging, 2013. V. 17. P. S169-S170.

8) Plyusnina E.N., Shilova L.A., Moskalev A.A. Effects of DNA excision repair gene activity on lifespan and radioresistence in Drosophila melanogaster // 40th Annual Meeting of the European radiation research society. Dublin Castle, Ireland, 2013. P. 19.

9) Shilova L.A., Plyusnina E.N., Moskalev A.A. Effects of gammairradiation on age-dependent dynamics of stress-response gene expression in Drosophila melanogaster // 40th Annual Meeting of the European radiation research society. Dublin Castle, Ireland, 2013. P. 21.

10) Плюснина E.H., Шилова Л.А., Москалев A.A. Влияние активности генов репарации ДНК на продолжительность жизни и радиочувствительность Drosophila melanogaster // Материалы Международной конференции БИОРАД-2014. Сыктывкар, 2014. С. 95.

11) Механизмы радиационного гормезиса на модели дрозофилы / А.А. Москалев, М.В. Шапошников, Е.Н. Плюснина, Л.А. Шилова и др. // Материалы Международной конференции БИОРАД-2014. Сыктывкар, 2014. С. 64-68.

12) DNA repair in Drosophila aging and hormesis / E.N. Plyusnina, L.A. Shilova, M.V. Shaposhnikov et al. // Genetics of aging and longevity: Abstracts reports of 3rd international conference. Sochi, 2014. P. 48.

13) Investigation of resistance to acute y-irradiation of Drosophila melanogaster individuals with DNA repair gene overexpression / L.A. Shilova, E.N. Plyusnina, N.V. Zemskaya et al. // Genetics of aging and longevity: Abstracts reports of 3rd international conference. Sochi, 2014. P. 97.

14) Влияние активности гена D-GADD45 на продолжительность жизни и стрессо-устойчивость особей Drosophila melanogaster / Е.Н. Плюснина, Л.А. Шилова, О.В. Шосталь и др. // 18-я Международная Пущин-ская школа-конференция молодых ученых. Пущино, 2014. С. 270-271.

15) Investigation of resistance to acute y-irradiation of Drosophila melanogaster individuals with different types of conditional overexpression of DNA repair genes / L. Shilova, N. Zemskaya, A. Moskalev // 41th Annual Meeting of the European radiation research society. Rhodes, Greece, 2014. P. 212.

А

Лицензия № 19-32 от 26.11.96 г. КР 0033 от 03.03.97 г. Тираж 100 Заказ 20(14)

Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения РАН 167982, г. Сыктывкар, ул. Коммунистическая, д. 28