Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ И РЕГУЛЯЦИИ ИММУННОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА В СВЯЗИ С СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ В СКОТОВОДСТВЕ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ И РЕГУЛЯЦИИ ИММУННОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА В СВЯЗИ С СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ В СКОТОВОДСТВЕ"

-з-гщ,

На правах руксавси

Абшпэа Ахмеаага Имаш Огпы

РАЗРАБОТКА .МЕТОДОВ ОЦЕНКИ И РЕГУЛЯЦИЙ ИММУННОГО ООСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА В СВЯЗИ С СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ В СКОТОВОДСТВА

03, ОС. 13 - Фвэнологня человека ы жи&отаых

АВТОРЕФЕРАТ

адссвртации на соискание ученой степени доктор* биологических наук

ДУБРСВИЦЫ - -

Работа выполнена в Отделе биологии воспроизведения и искусственного осеыенетя сельскохозяйственных животных Всероссийского паучно-исследовательского института животноводства. 4

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор И.Е. ООКШЖЭСАЯ .

Офиаиажьвые олгкжеят; заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Ю.1. МККХНЙ доктор биологических наук, профессор А.Н. УСПЕНСКИЙ доктор биологических наук А.С. ЕЮТЦ

Везущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимики и питания сельскохозяйственных животных.

Защита диссертации состоится -1999 г. в 10 часов на заседании Специализированного Совета Д.ОЕОЛб.сг при Всероссийском научно-исследовательской институт» животноводства.

Адрес института : 142012, Московская область. Подольский район, пос. Дуоровиш.

С диссертацией иожно ознакомиться в библиотеке ВИЗа.

Автореферат разослан 1996 г.

Ученый секретарь Специализированного Совет догалор биологических аау профессор "Ч*."'' б* А. НШЯШК»

1. СЕДАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ

1.1. Акхуажвосхь .теми \

Совершенствование технологии воспроизводства с-х животных со-' ЕШеыие эффективности искусственного осеменения маточного norô-, ловья, как свежим так и глубокоохлазаекнш семенем,; требует даль-нейпего изучения функционального состояния организма 2швстяьи, его иммунного статуса (Б.К. Милованов, 1989, К.И. Соколовская, 1993. ', 1994, Ю.Д.Кдинсгай, 1994. А.Н. Успенский, 1991. 'В.П.Коаснов, Горбунова Р.И.,1975, A.B. БрОНСКЗЯ И Др. 1990 , В.В. Еаркин; 1938,' в.п. радченков, 1993 , Н.М. Решетникова, 1996 . А. А. Кочетков', 1938, К.D.Bratanov,V.Оíhov, 1967, G.A.Voisin, 1993, S/ Sîiulman , 1993). ;

Наряду с этим, актуальными являются разработки по совершенствованию технологии получения ( К.Н.Шйдуддиа.1994, А.И. Авилов и др. 1994), оценки качества ( А.С.Ерохин, В.И. Деряжекцев, К.Д.Куч-гаша и яр. 199£ , A.C. Срохин. 1994, В.П.Кононов и др. 1993), кри-снэнсервации (В.П.Кононов. 19S2, А.Н. Успенский, В.А. Наук, Iii i ) и использования семени (А.й,АОалов, И.И.Соколовская. 1993) самцов - производителей.

Акроскопический метод оценки качества семени, криопонсервация в соломинках, аэродинамический метод оттаивания и визоцервикальное осеменение маток с использованием светопроводного расширителя, благодаря легкости технического исполнения, гигиеничности и технологичности, являются доступными и перспективными для широкого использования а практике.

Модернизированный визоиервикадьный способ искусственного осе* менения коров и телок, становится часты) прогрессивной технологии воспроизводства крупного рогатого скота и способен обеспечить высокий процент стельности (А.и.Авилов, Р.Н.Ойаадис. 1965).

Наши исследования являются составной частью программ совершенствования технологии воспроизводства крупного рогатого скота , роализуеши совместно с сотрудниками Отдела биологии воспроизведения и искусственного осеменения с-х животных ВИХа и специалистами хозяйств С 1980 по 1995 Г. . - ' '

Работа выполнена в соответствии с программой 0.GX.42,. N госрегистрации 7е" тп, ífl ттг^ ; ^^ i |'i ги-чт-тт методы воспро-

^ ^¿вхемьй/ изведения и вску^ст^^^^^ред^^х

ииГй^Шг

животных

- 3 -

1.2. Цш и задачи цссжшят

Цель работа - разработка и алробаазк эффективности тестов оценки и. управления иммунным статусом организма в связи с совер-Евнстйованием технологий воспроиззедекия животных при искусственном осеменении, разработка методов для повышения точности оценки воспроизводительного потенциала самцов-производителей, совершенствования технологии получения, оценки качества, криоконсервашга и использования семени быков-производителей.

Ляя реализации указанной цели были поставлены задачи:

1. Применительно к крупному рогатому ;«оту, разрабогать тесты оценки иммунного статуса, определить связь иммунного состояния организма с воспроизводительными Функциями;

'* С. Разработать экспресс - метод диагностики полноценности эя-кулятов, оСесггечивзюяиЙ высокую эффективность контр&и качества семени и осеменения маток;

3. Усовершенствовать технологию криоконсервации семени бы-кэв-производителей, путем подбора состава сред для разбавления и замораживания семени и предварительной обработки физическими методами отдельных компонентов среды;

4. Изучить связь иммунного статуса организма о сохранность» новорожденных телят в молозивный период, разработать и испытать приемы я средства, предотвращавшие возникновение иммунодефщитшк состояний у »фупного рогатого скота;

5. Усовершенствовать технологию первикального метода искусственного осеменения коров"й телок, на основе использования свето-проводного расширителя ■ и осеменитедьного инструмента с геликоидом, криоконсервашга семеки в соломинках, .аэродинамического оттаивания семёниГ" . '...

6. Выяснить эффективность использования семени зебу для повышения адаптационных и воспроизводительных качеств еврспейасил пород крупного рогатого скота в условиях сухого жаркого климата.

7. Разработать технологию получения, (фиоконсерьашж и использования семени родствевнда к Bovinae диких форм ' (Bison ьопз-sus-зубр ) ,. р целью обогащения генофонда крупного рогатого скота.

1.3. Научная вотова к практическая звамкмосхь

ВперЕШ разработан .t апробирован кошлекс кммуколсгкческкк тестов, отражающих как Функциональное состояние целостного ■ оргаг низма, так и отдельных клеток - живчиков в эякулята?: (ПйЖ-реааии иммобилизации живчиков в аутосыворотке 1фови.бкков, ' РЪЯ-Й-розетно-, формирующие с живчиками лимфоциты). г '■''.■■;■. •... Ji;'

Разработан новый тест (APT - аллергическая реакция -Т-ткпз) для' оценки иммунного статуса коров и телок. Предлагаемые, т естыи приемы позволяют выявить,- устранить и предотвратить аутоиммунность у Сыков производителей, улучшить воспроизводство стада и сохранность молодняка. _.." >.-'"j

Всервые разработан препарат обдадапшй иммуноиодугирушими свойствами - ЕИТЭЫ , использование которого обеспечило Û5-98I сох-, раиность новорожденных телят, а такте Оелково-витаиинвая сгота (ШО. предотвращающая и устраняющая при скармливании аутоиммунность у быков- производителей.

Установлена орратная зависимость характеристик заморожеп-о -оттаянного семени ( подвижность, живучесть, целостность акросом ) от глубины переохлаждения. .

Разработан метол оценки заыороженно-оттаянного семени (Ак-po-2J более точно определяющий биологическую полноценность живчиков и прегнозируюавй результативность осеменения.

Разработана и апробирована новая среда более эффективно ваги* сзюоая живчиков при замораживании (A.C. N 1080819, 1984 г.).

Предложенная усовершенствованная технология цервикадького метола искусственного осеменения коров и телок, дополненная акрос комическим методом оценки качества семени, аэродинамическим оттаиванием и глубоким введением семени б шейку матки, повшает результативность осеменения.

Апробация новой технологии визоцервикалького осеменения коров в 4-х хозяйствах, с осеменением.861 коровы и телки показала ôo,3 X - "8 Z уровень стельности.

Впервые разработана техника получения и «ритеонсерваиия зпи-дизшадьного семени зубра (Bison bcnasus),. позволившая получить r::'çiuKux телят (л»5).

негсд позволяет обогатить hoeuw генетическим материалом генофонд деияанего. скота, Hcs^e гоны могут стать объектом геннс^цяенеркых

КССЛСдОЕаНКЙ.

1.4. Осяавнш оожмеяия, юлюсюше на защиту:

- у 6-10 X, бьгков-производителей имеет место аутоиымувность, снижающая результативность осеменения ва 10-15 X и спершпродукцию на 30 Z, ■ Иммунный статус оргакигма находится в непосредственной связи с репродуктивной функцией и служит индикатором его воспроизводительного потенциала ; ' -

- препараты для иммунорегудяции , повышение воспроизводительных качеств ^сохранности молодняка ;

- использование достижений иммунологии и новых,приемов в искусственном осеменении животных, более совершенная ввзоцервикаль-ная технологии искусственного осеменения коров и телок, новый крио-протектор:

- технология получения, хранения и использования /семени ли -ких видов животных, в .частности зубра, позволявшая преодолеть изолирующие поведенческие барьеры, способствуя взаимному обогащению генофондов гетерологическими генами.

Эта технология тагеке создает возможности для пополнения дикой фауны, .тавотными созданными трудом человека.

1.5. Апробация получении результатов

Материалы исследований доложены:

ка ежегодных отчетах ВИЖ -1984-1995 гг., межотдельской научной конференции БИХа (1996), Мкловановских. чтениях (ВИЖ 1993. 1994). на производственном совещании специалистов Нейтральной станция искусственного осеменения РФ (1927). на производственних совещаниях зооветспециалистов Сальянского и Нефтечалинского районов Азербайджана (1937,1988). Подольского района Московской области (1983), V, VI, VII Международных симпозиумах по иммунологии воспроизведения ( Болгария, г;Варна, 1983, 1935, 1983); III, tv, v Всесоюзных симпозиумах по иммунологии воспроизведешь ( У|фаина, г. Киев, 1937,1990,1993), I, Всесоюзном съезда иммунологов {Россия, сочи, 1989).' . '.'"

Диссертационные материалы . также - экспонировались ка выставке достижений народного хозяйства СССР С1929) и Всероссийском выставочном центре (1995). ■

1.6. Публикация результатов исследований*

г

Основные результаты ''сследований» выполненных по теме диосе! талии, опубликованы в 55 научных работах. Наиболее полно содержа вне диссертации отражают £б работ, цкткросакных в автореферате.

1.7, Объем н структура работ

Диссертация изложена на ^^страикиак машинописного текста, состоит из введения, обзора литература, материалов к метопов, результатов исследований и их обсуждения , заключения , выводов , предложений производству» списка литературы. Работа иллюстрирована таблицами. ^^ рисунками и фотографиями. Слисок литератури содержит ' ^^источниксв, в тем числе /Üí^na иностранных языках.

Выражаю благодарность коллегам по совместной работе.

2. Катернаш и методы исследования

Исследования проводили в 19S0-1995 гг. в Отделе" биологии Еоспроизведекия и искусственного о-семенения сельскохозяйственных киеэтных t ïlczauzilcx иодмоскоьь«, р^збсдяенх черно-пестрый

erar, на HG10 PI', е заповедниках Рязанской и Московской областей е coursетстБКй со схемой Kl.

С опытах по изучению аутсиммунности проведи аттестации £00 быков-производителей üClíO.

Изучению аутоиммунноети быков предаествовали модельные опыты па кроликах (п-С4?). На начало наших исследований t медицин с к;;; литературе били приведены результаты отдельных опытов на лабораторных хдЕОТных, из которых следозало, что семл, семенная плазма, а та;же секреты добаьочнш половых желез (СШШ обладай? иммунс-гсквшя свойствами. Аутоиммунную реакшго проявляют санш на травму семенника (С.с.Райшша, 1935). В нагих предварительных опытах на кроликах была апробирована эффективность тестов - розеткоформкрую-ших с эритроцитами барана лимфоцитов (РОЛ-Э), розеткоформирующх с живчиками лимфоцитов (Р1Л-Ж, по С.С.Ргйциной. 19S5, в нашей модификации) и аутогенолизобразуших клеток - АГОК (Ы.П.Клемяарская, 1969), а также таа-реакиии ии^-'Я'-гизашз! дивчиков (И. И. Соколове-кал, Д.И. Абилое и др. 1390).

СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

Рис.1

Для снижения я устранения негативных последствий аутокииун-рэсти быюэв производителей изучено влияние скаршшвшлы им препаратов , содержащих лирор^творимые витамины (ЖРВ). Седксво-юта-мианой пасты (БЕЛ) и с&дково-виташшиой смеси - (ВВС) на качество сеыени и результативность осеменения (И.И.Соколовская и др. :1990). Теллтам с признаками иммунодефицита выпаивали со Ю их-витаминной зиудьсик (БКТЭМ) в течение 10 суток (а. В.Вронская,А.кГаоилов, Н.П.Соловьева» 1987). В опытах по изучении состсйнш'иммугаой сис-\ теш и жизнеспособности телят в иодочный период, в зависимости ст! iix обеспеченности жирорастворимыми витаминами, использовали: - 5000' телят черно-пестрой породи в 1-30 дневном возрасте.' V^

Для улучшения воспроизводства у "проблемных" . коров^ нсштзкЦ' иммуностимуляторы - витамины и беламизол (синтетический аналог,ле-вамизола, а. И. Авилов и яр. 1935). а для стимуляции функции яичника - сурфагон -аналог рилизкнг гормона (Ю.Д.Каинский и др. 1993).

Подбор компонентов среды БЭКС, для разбавления семеви животных осуществлялся do методике В.К.Кидовазова (1962). Семя от быков Срэли 3 раза в Z невели по 3 зякудятаа в одно взятие и проводили сценку объема, концентрации , подвижности, и состояния акрисом лнвчиков до и после криококсерващш. Концентрацию живчиков определяли iovo5лектрокодориыетркчеосиы методом, процент подвижных живчиков - микроскопирсванием при 200х увеличении, состояние их акро-ссм изучали акросколическим методом с испохьвованием темнолольного конденсора ОЙ-10 при увеличении ?50х. Оценку качества ааморожеа-но-оттаянного семени дополнили учетом сохранности акросом живчиков (А.и.Авилов,1984). Эсидшшыалькое сема еуСрсв для гибридизации с лсилЕним скотом готовили следукгкм образом: после отстрела у сам-шь-зуСроБ извлекали семенники, отделяли э&кдидимис и помечали его е синтетическую среду для достижения 10 кратного разведения 'а.И.АСидов и др. 1994). Замораживание семени проводили в гранулах ка фторопластовой пластике (Н.П.йаешзэ, 1368). После замораживала. оттаивали несколько гранул, . проверяли подвижность и сохранность aitpocow живчиков.

Семенем зубров осеменяла коров. Осеменение прободшш усовер-а.онствованким наш визоцервикальнш методом.

Статистическую обработку полученных данных прогелк общепринятый! метода)«! (Е.К. Меркурьева , 1Э&3). Символы *.** и *** означают достоверность разницы на ypoiae НО, 05, Р<0,01 и Р<0,001 соответственно.

3. Результатн иссдедсвамий ■

- 3.11 Иммунный ответ к характеристики эякулятоа в связи с ауто-.аалоникуниаацнянм экстрактом живчиков и травкой семенника. в нодзльных опытах на кроликах

/ В модель ввд опытах было изучено влмяьие активной иммунизации на шмунный ответ, выявляемый РФЛ-Э тестом (табл. 1) ■

Табдшк 1. Влияние шмун.гзадай экстрактом кивчикоб и транш ; сеиенникоз на характеристики эякулятов

Экспериментальная ; группа п РМ-Э , х Неповрежденные ак-росоыы г ' Обь-Эякулята - ид Общее число живчиков КДН." Подвижность, X

Аутоишуаизация Адлоиммунизацкя Травма семенника 9. Разница -♦37,0 по сравш - 12 5 ник» с - 0,3 «□играли -330 гн (П-9) '■ -20

7 +32.0 -15 -0,2. -90 -10

3 а ал •. +39,0 -0.3 -310 -СО

Данше, приведенные в табл. 1 свидетельствуют о том, что иммунизация экстрактом кивчиков и травма семенников . сопровождается статистически достоверным увеличением числа Р®Л-3 лимфоцитов при одновременном ухудшении характеристик эякулятов^ Направленность воздействия ауто-, аддоимиуииэации и травш семенника*на характеристики эякулятов является однотипней. Во всех трех случаях у подопытных животных отмечено снижение целостности акроссм хиечиюэ, обьема эякулятов, общего!числа живчиков и их гюдышюсти. В после-душих опытах показано, что число живых крольчат . родившихся ст осеменения спермой иммунизированных кроликов составило лива. 11,0-43й от контрольных данных. ■

Анологичные результаты получеиы при использовании в качестве кмйувсгева семенной плазмы в разных дозах, а также секрета до5а-сочных половых желез (СЛЕГ).

Ташш образом, в модельных опытах установлена сопряженность иммунного статуса организма с его воспроизводительными функшями. Поэтому, следующим этапом насих исследований бшо изучение предполагавшихся аутоиммунных реакций у быков-производителей.

3.2. Аутоиммунные антитела у бикав-производителей

Для более точной оценки иммунного статуса организмз возникла необходимость б дополнении теста, выявлявшего аутсиммунностъ ь клеточной реакции розеткоформирования <РФД~Ж). С этой цель» нами, разработан метод выявления иммунореактивности клеток в сыворотке крови - реакция иммобилизации живчиков (ПМ). Реакция основана на том, что при взаимодействии с живчиками, в присутствии комплемента морской свинки, наступает их обездвиживание и выпадение осадка. Затем они выпадают в осадок на дно лунки.

Титром аутоантител в сыворотке считали последнее разведение при котором живчики полностью ойездв;г«шались и выпадали в осадок. Исследования показали (табл. 2), что аутоиммунные антитела, выявляемые в ИМ , вырабатываются у 15* быков.

Таблица 2. Распределение образцов семени быков по тиграм антител в реакции иммобилизации живчиков

Исследовано быков Е 1381-69 гг. в т.ч. с титром аутоантител

0 2 4 8 16 4-16

940 . (100 5) езг 67,2 174 18,5 77 8.2 44 4.7 13 1.4 134 14.3

Из табл. 2 видно, что доля проб с титром аутоантител 4-1С еостсзляет 14,25 X, ас титрами антител 8-16 - б,IX. Сопоставление титров аутоантител с подвижностью сперма не выявило связи названными параметрам:. В то де время уровень антител у бы-кпа-производителей оказал влияние на число живчиков в эякуляте г на их устойчивость к замераживагна* .

- И -

3.2.1. Влияние урста аутокакунниг агггктел яэ йгезлагичсскш - характеристики сэдекх

Из . данных. ' приведенных в таЛв. 3 видно, что у быков выразатываадкх . аутоантитела снижено общее .число живчиков в эзкулятах, а также устойчивость семени к замораживанию на 34 г (Р<о,оо1). ;

Таблица 3. влияние уровня аутоантител на число живчиков в эякуляте и их устойчивость'при «фиококсервацин

ТИТЦ аутоантител в РШЯ Число быков Подвижность живчиков ^ (X) Получе» зякуля-тов за месяц i Живчиков в эякуляте <шрд) Пригодных для исполь.' (доз)

всего, X

0 4-16 . Разница. 18 18 80 -~ 80: "— • 347 -340.: 6,14 +-0.0S 5,65 +-0,06 0/49*** 3110 2051 1059 100 , 66 ■ .„•И**' 1 f

Полученные в опытах по замораживанию спермы данные/ вызвал необходимость анализа влияния аутоантител у быков на результат! осеменения коров ( табл. 4).

Таблица 4. Влияние аутоиымукности быков на результативность осеменения коров • ' ..

Иммунный . статус в РИМЕ Исследовано быков Осеменено коров' • Из них не повторили течку в течение 1 месяца

всего . 'X. " всего Z

Отрицательный 31 52,5 Э6262- ,25730

Положительный IT- 37,5 .7663 ; - 4519 64 0.5***

РИМЕ, * J' и - •

С титром 8-Í6 IO, £0,0 ; 3741 2313 61+-0.8***

■ Сопоставление данных аутоимчукности (АИ)_сыков с результатами осеменения коров, показало достоверное снижение процента стельности от быков, проявивших АИ в РИЩ,

3.3. Оценка круглого стагусл организма В клеточиой И гуыо-. радьноЯ реэкшпх

В исследованиях установлена специфичность МЛ- Ж и PJ0.1I. Показано, что тест выявляет клеточный иммунный ответ на поверхностные аа-

гиге!1Ные структуры живчиков. При этом модно установить как само наличие сенсибилизированных к антигенам живчиков Т-лю^сщггсв, так и их локализацию на мембране.

>1з данных таблицы Б видна взаимосвязь результатов, получаемых в в клеточных и гуморальных реакциях - РЗЛ-Х и РИМЕ, при аттестации быков различного иммунного статуса.

Таблица 5. Взаимосвязь клеточного и гуморального тестов при оценке иммунного статуса быков

Титры в гуморальной реакции (ЯШ) Аттестовано быков Исследовано по £00 лимфоцитов от каждого Сына

' всего из ккг реагировали в клеточкой реакции (PM-Ej

всего X

0 17 3403 £9 0.85+-0.2

£-4 10 2000 108 5,15+-0,Б«*

6-16 f 1400 113 8.07+-0.7***

Из данных табл.5 ргднс, что в числе быков аттестовании* как зтрипаггльных в ВЕ.2 , было всего лияь 0.S5 Z роэеткофоризфуксих с ооС'Стьенкши жав'йками лимфоцитов. По мере повакеник титра аутоан-титед, выявляемых в гуморальной реакции (РИМЖ). повивается и проект лш^аигов с&нскбилиэировакшх к собственным жназдкок. Та;; V v бикон, отнесенш« к группе с уровнем аутоантител 8-1&, сеисиби-лнзирокшиымн оказались 8,07 X (Р<0.001) лимфзпитоь.

Вз^агосвязь между используемыми тестами оценки иммунного статуса ("¡ез^ов оценили по корреляциямккм коэффициентам..

Анализ показал высокую статистически достоверную корреляцию ' между результатами, полученными в сперноспецифических методах Р12Л и Р2Л-Д (Г-+0.35). Относительно невысокую корреляцию с данными . тестами проявил распространенный метод, выявляю^ розеткоформиру-кюе с эритроцитами Саравз лимфоциты (РЬЛ-Э). Коэффициенты корреляции при этом составили 0,33 и 0.41.

3.3.1. Связь иммунного статуса 0мхов-производителей о результативность» осемеиснкя коров

Лучение влияния аутоиммунности быков на результаты осеменения коров ( табл.6 ), показало статистически достоверную связь между ними,- чем выге АИ тем ниже числс плодотворно осемененных коров. На практике снижение стельности от АИ составляет 7-Ю х.

Таблица б. Влияние иммунного статуса Сынов-производителей на результативность осеменения коров

Еыки . Р5Л-1 Титр Осеменено Стельность

юо «) ЯШ коров п (X)

Злегант 721 12 в 10 6(60)

Фауст 494 е а 242 133(57)

Линь 462495 б 4 506 270(53)

Персуадер 10064 . 0 0 2754 . 1959(70)

Семит 783 0 0 215 ■ 156(73)

Тайнилан 177 0,5* 0 . 193 152(77)

Данные, приведенные в табл. б показывают, что использование в осеменении.спермы аутоиммунных Симов, выявленных в реакциях РМ-ж и РГО.К (быки Злегант, Сауст, Линь) . пригело к:снижению результативности осеменения на 16 <Р<0,001). Исследование большего числа коров (л - 40000) такче подтвердило этот1вывод.

Эти результаты указывают на актуальность контроля и учета иммунологического статуса быков-производителей. Проявление аутс;м-мунных реакций организма сопряжено с достоверным вменением урогка биохимических показателей крови, в частности с содержанием 6 не,1 каротина и общего бедка.

- и -

3.4. Регуляция иммунного состояния организма Сдаов-производителей. путем контроля в рационе иммуностимулирующих норковых добавок

Подученные результаты влияния иммуностимуляторов и некоторых биологически активных веществ на воспроизводительную функшэо, послужили основанием для контроля их уровня в рационах бымов. Практический интерес представлял изучение вопроса о том, скажет ди влияние скармливание белково - витаминной смеси (БВС) на иммунный■ ответ и качественные показатели семени Оыкоб (табл.7). -

Таблица 7. Влияние скармливания белково-витаминной смеси быкам-производителям на иммунный статус, содержание каротина в крови и слермопродукшоо

Группа РФЛ-Я Каротин Семяпродукакя

п (2) (мг X) (МЛ)

Контроль. 18 5.0+-0.6 о,1ез+-о,С4 4.92+-0.С6

Опытная 18 1,3 +- 0,4*** 0,570 +-0,02 *** 5,35+*0,09***

Из данных тздл. 7 видно, что скармливание БВС снизило аутсим-мугшоеть быков и повысило уровень каротина в крови.

Полученные данные также показали, что скармливание БВС одновременно повлияло на улучшение количественных и* качественных показателей. Б частности повысилась устойчивость семени к криоконсер-сации. При этом на £5 % увеличился выход семени на быка, на 18 X увеличилось количество эякулятов с высокой подвижностью и в 2 раза снкгклось число выбракованных эякулятов. Обобщение полученных данных указывает на необходимость индивидуального нормирования кормлений быков, учитывающих витаминную обеспеченность организма при' активной семяпредукоии,

3.5 Контроль иммунного состояния при гчращиваним м использовании племенных бшов

Наши опиты показали, что в период выращивания до Z летнего возраста у быков не были обнаружена аутс:г.мунные реакции, Еыявляе-

t ш» в тестах РКМХ и РФЛ-I. Анализ многолетних данных {1980-1989 ' гг.) , полученных на 200 би^ах ШЮ показал, что аутоиммунные реакции в титре 8-16 выявляются с трехлетнего возраста, у быков-производителей в возрасте 8 лет и более титры аутоиммункости снижались до 1:4-1:8. ,

3.0. Контроль иммунного состояния коров и повышение резуль-тахявност* осеменения

В опытах, проведенных совместно с' И.И.Соколовской, А.В.БронскоЙ и Б.Г. Скопцом, был разработан метод оценки-иммунного состояния ксров в аллергической реакции типа Т (APT), путем внут-риколшого введения фитогемагглютинкна ( табл. 8).

Таблица 8. Связь иммунного состояния коров в сухостойный "период с благополучием отелов и показателями — __воспроизводства '

Состояние иммунной системы Число норов Утолщение ножной складки (мм) Показатели воспроизводства

Дни от отела до I охоты Сервис период

Угнетенное Нормальное 65 83 1,74 +-0,14 2,83 +-0,11 52+ -4,0 33+ -10 69+-0 42+-8

Из данных табл. 8 видно/ что сниженная АРТ-реактивность у коров сигнализирует об ожидаемом неблагополучия предстоящих родов, удлинении сервис периода и продолжительности промежутка от отела до прихода в охоту.

Изучение действия беламиэола - иыкуномодулятора на воспроизводительную Функцию коров показало, что оптимальной является их обработка эа 16-30 суток до отела. Введение беламизсла в первые % недели после осеменения не было эффективным.

.Благоприятное воздействие на воспроизведение у коров оказало введение в их раиион жирорастворимых витаминов. Сервис период у них сократился с 96 до 69 дней.

3.7. Регуляция юшушшго статуса каворааяекша тваят

Необходимость повыиегзя сохранности молодняка с ослазденвой 1!ммуной системой, обусловленной недостаточность!! поступления в организм биологически активных веществ, и в первую очередь жирорастворимых витаминов, послужила основанием для проведения соответс-твувдего исследования. Для этого было изучено иммунное состояние телят на комплексе ведюково совхоза " Путь Ильича" Подольского района московской области , в связи с выпаиванием витаминной эггуль-сии, ВИТЭи) использованной нами в качестве средства для стимуляции иммунной системы ( табл.9 1.

Таблица 9. Влияние выпаивания витаминной эмульсии на иммунный статус организма телят, оцениваемый по уровне роэеткофорцируших лимфоцитов их крови

Группы телят Интервал от рождения до исследования ( сутки )

0 1 Р№ 5 Э I 10

Опытная п«9 18.3+-0.Э 20.£+-0,8 21.5+-1.0 25,5+~1,0

Контрольная г.-9 17.3+-1.2 18,61-1,С 22.5+-0.9 11.5+-0.7

из данных, приведенных в табл. 9 видно, что выпаивание витаминной эмульсии существенно повлияло на численность розеткооЭразу-етих клеток у телят. В группе животных, получавших эмульсию с момента рождения до 10 дневного возраста, число роаеткоформируюсих клеток постепенно увеличилось, в то врзмя как в контрольной - число их на ю день шло ниже в 2 раза. Это снижение сопровождалось расстройством желудочно-кишечного тракта неинфекционной природы у " ив 9 (78 I) телят.

В опытной группе, где кроме молозива телята получали препарат БИТЭМ, клинических заболеваний не было.

: ; 3.7.1.0аевка уровня юмунного ответа у телят в аллергический

кггточнаа реакции

Изучение влияния вшивания телятам ВИТЗЫ показало (таол. 10). что у телят, получавших указанный препарат, иммунный ответ на введение СТА был более интенсивным. При этом телята со стимулированной иммунной системой в меньшей мере подвержены расстройству желудочно-кишечного тракта и на 111 их сохранность была выше.

Препарат БйТЗМ Сил использован с положительным экономическим эффектом на 5000 телятах в 5 хозяйствах Подмосковья.

Таблица 10. Влияние регуляции иммунного статуса телят на их сохранность

Группа телят Число "'■■ животных Расстройство жел.кишечного тракта (X) Сохранность' (X) Выбраковка (X)

Опытная £5 27+-8.0 100 0

Контрольная • ' 45 ■ 4Q+-7.0 89+-4,7 11,1

Анализ показал.что коэффициент корреляции между уровнем ро-зеткообразущих клеток и утолщением кожной складки в аллергической реакции у телят, в контрольной группе,. Oui положительным (г-0,46*** ). как i l опытной, (г-0.56*** ).

Это значит, что обе реакции состояния иммунной системы однозначно определяют иммунный статус животных.

Обобщая результаты исследований, по сравнительному изучению эффективности использования тестов РФЛ-Э и APT, для оценки иммунного статуса телят можно сказать, что техника проведения APT теста является более простой по сравнению с тестом РФЛ-Э и может быть использована с такой яе результативность» как и РФЛ-Э тест.

Таким образом, наши разработки позволяют выявлять отклонения лунной природы и управлять иммунным состоянием , путем дачи животным иммуностимулирующих препаратов. !

3.3. Соверденсгвовакке гехнояагга оолучеякя. едевхм» кртюконеервзцкк и использования семени бикав

3.8.1. Влияние последовательности получения эякухттав

ва качество отмени

Установлено, что в последовательно полученных 2-3 эякулятах содержится разный объем жидкости каудальной части апидидикиса и секрета добавочных половых желез, в свежеваятш семени, от первого к третьему эякуляту увеличивается объем, но снижается концентрация. Однако, морфология акросом живчиков г свежевзятоы эякуляте не зависит от последовательности получения эякулята, но при чигомои-сервашш наиболее криоустойчивы эякулята 2-го и 3-го взятия. Они превосходят первый эякулят по подвижности и сохранности акросом. Так. в эакулятах 1-го, 2-го. и 3-го взятия живчики имели подвижность 75 - 76 х. После замораживания-оттаивания подвижность соответственно составила 45Х . 52 t и 55 I. Полученные данные даст основание пологать, что при долгосрочном хранении генетического материала высокоценных быков следует замораживать не смешанные эяку-ляты, а эякуляты с указанием порядкового номера их получения.

Исследования режима замораживания-оттаивания семени показа -ли, что кристаллизация проходит в пределах температур от - 6°С до -15°с и она для семени каждого быка индивидуальна. Определяющим фактором для выживаемости живчиков является глубина переохлаждения. Лучшие показатели семени еаыораженно - оттаянного в соломинках были получены при минимальном его охлаждении {-Б^С). При оттаивании семени подвижность снизилась в 1,3 раза. После инкубации в течение 4 часов она снизилась в 3 раза, а число живчиков с нормальными акросомами в 1,2 раза.

Корреляционный анализ глубины переохлаждения с характеристиками эякулятов выявил существование отрицательной свави с исходной концентрацией живчиков в семени.

3.8.2. Акроскошпссккй метод определения бюлагмчгсхоА

полноценности юшчмшв

Установлено, что для определения биологической полноценности живчиков эффективным является метод оценки целостности акросом. В основу новой разработки бил положен акрог;жпический метод (Акро-l),

средложеквый К.И. Соколовской (1980). Его модифицировали путем за-_ иены фтористого аатриа ва желатин, который замедлил поступательное движение живчиков {Акро-2 ).

Сравнительный анализ показал, что 1 I фтористый натрий обездвиживая живчики, зависает долю поврежденных. При использовании желатина, смака белее точно отражает качество семени.

Метод "Акро-2" позволяет дифференцированно подходить к определение морфологии.подвижных и неподвижных живчиков.

Несовпадение сохранности акросом с их подвижность», после за-иераживания-оттаивания.семени, показывает на недостаточную информативность глазомерной оценки подвижности семени под мшфосвэлом и необходимость внесения изменений в существующую технологию. Полученные результаты согласуются с данными В.П.Кононова и М.М. Мамбе-талиева (1994) о том, что подвижность заи^роженно-оттаянного семени не межет служить надежной оценкой его биологической полноценности и оплодотворяющей способности.

3.8.3, Савероюнетвавакне технологии кржжонсервацкн семени быков-прозеваякгелей

Важным элементом технологии чшоконсервации семени является состав занитаых сред для ее разбавления и замораживания.

Учитывая важную роль воды, как компонента состава сред, нами изучено влияние ее предварительного замораживания-оттаивания и озвучивания ва (фиопротекторные свойства сред, приготовленных с ее использованием.

Установлено, что процедуры замораживания-оттаивания и озвучивания воды, в которой растворяют компоненты среды, повышает устойчивость живчиков к холодовому действию, а после размораживания их - подвижность и сохранность акросом.

Аналогичную картину получили после обработки волы ультра -звуком. (22 Мгц, 5 мин. экспозиция). Подвижность живч:«ов после замораживания-оттаивания была наивысшей при использовании в составе криосротектора эамороженно-еттаянно- озвученной годы. Подвижность живчиков составила 53 X против 46 I (Р<0.05). при использовании кипяченной воды.

Эффект обработки воды проявился в изменений вязкости и диэлектрической проницаемости.

- го -

3.8.4. Влияние сроков хранения семени в замороженном состоят.

кик на Сжиптшесш характержояи почихав; '

Чувствительность акросом живчиков к кркокэнсервааии в вависи-«ости от степени их зрелости и наличия на их поверхности семенной плазмы» изучили на эпидидималышх живчиках вубра. иввлеченныхкв каудалыюго участка (табл.11). Последние, как иевестно.'еяе не имели контакта с семенной плазмой-

Таблица 11. Сохранность акросом живчиков ив каудахьной части ' .

эпкдидимиса аубров до и после криоконсерваш с':

Оценка семени сохранность акросом, живчиков вубра (X)

Морус Монт

До замораживания 89,0 1,2. 82,6 +-; 1,6

Оттаивание после криоконсервацки 54,6 +- 3.1 . 67.0 +- 2,8

Оттаивание после 20 суток хранения 54,5 3,1 67,6 «- 2,7

Оттаивание после 5 лет хранения 54,0 +-- г,а 64,0 2,6

Исследование показало, что срок хранения эпидидималышх живчиков зубров в пределах 5 дет не влияет на их биологическую полису ценность. ' , .*

3.0.5. Влияние состава средм для разбавления семени бжав ма сто криобиологические свойства

В многочисленных спытах показано влияние состава сред ка результаты замораживания* оттаивания спер! и. Оптимальной по составу а количественным соотношениям отдельных кс- 'понентов является предложенная среда БЭКС. Она кыоет следусснй состав ( на 1 литр диегкх-

- CI -

дированной воды): сахароза-101,2 г; комплексная соль КагСаЭСТА -* 6.0 Г; желток куриного яйцг>-50,0 ыд; глицерин ГОСТ 6259-75-40 мл; ПГЭНХ-0,005 г; пенициллин и стрептомицин по 300 тыс.ед.). Данная среда названа БЭКС- для Быка, с Зхинахромом . Коыпдевсонатом, Сахарок (A.C. N 1080819, 1984 г.). •

В таблице 12 приведены данные характеризующие криозаштиые свойства предлагаемой среды.

ТайлицЕ 12. Качество заыорожеяно-огтаянного семени при ..использовании. трех уровней концентрации ;■ компонентов среды - БЭКС -

Концентрация компонентов среды V Абсолютная "живучесть (в часах) j Полупериод подвкл^ости (в часах) Сохранность акросом жючиков (Z)

Минимальная Оптимальная Максимальная S.0+- 2,6 ■ ■ 11,1+- 3,1 39,0 +-1,5***

8,5+- 2,5 - ■ ; 17,8+- 4,6 61,0 +-1,5***

б,0+- 2,6 12,9+- 4,1 57,0 +-i,e

Из данных табл. 12 видно, «то уровни концентрации (минимальный, максимальный и оптимальный) оказывают статистически достовернее влияние на физиологические характеристики семени. Экспериментальным путем была определена оптимальная концентрация компонентов в среде БЭКС.

Сравнительные испытания криопротекторкык свойств трех сред (ЕЗКДСАКО, ЛФРМГЖ и ВЭКС)*показали, что максимальный полупериэд содвижности спермы соответствует степени разбавления БЗКС 1:8 -1:32. Указанная среда также гарантирует высокую сохранность (61Х) акросом 'замороженно-оттаянного семени и превосходит по указанному показателю другие среда. ;> / ■; ■:'■ \

Результативность двухкратного осеменения в одну охоту коров при использований сравниваемых!сред существенно не различалась, но при этом проявилась тенденция, к повышению на 5 Z числа стельных коров (66 X против 61 X) от применения БЭКС.-Исследование криоза-щитных свойств новой среды показало,' что протектор БЗКС обладает более высокими показателями по периоду подвижности, по сравнению с криспротектором в состав которого входит три углевода { лг*;тоза,

фруктоза, раффиноза), солевой ¡тмпонент - сульфат магния и традиционные-глицерин. желток куриного яйца, спермосан ( В.А.Наук, Г.Е. дарий и др, 1573).- Эта среда.в литературе принято обозначать как лгРМГЖ. Дополнительное преимущество БЭКС - то, что ее производство девевле в 15 раз. Это послужило основанием для рекомендации ее-использования в производственкых целях.

3.8.6. Совершенствование технологам оервккалыюго квехекмя сенеки к половые пути маток с использованием свето-ороводншс рэскирителей и гелхкощвиа наконечюиот

Использование трубчатых светопроводных расширителей,- конструкции академика Б.К. Миловадова, позволяет определить мор-: Фо-функциональное состояние шейки матки и слизистой влагадшгд: (A.n. Абилов, Р.Н.Ойвадис, t986) .

Усовершенствовали осеменительный инструмент, оснащенный пластиковым левоврашяювдмся геликоидным наконечником, соответствующим структуре внутренней поверхности шейки матки и позволяющий глубоко ввести семя, без нанесения травм слизистой.

1 Нами изучена эффективность использования этик инструментов, в сражении с традиционным металлическим влагалищным расскрителем (там. 13).

Таблица 13. Результаты осеменения коров и телок усовершенствованным виэоцервикадьным способом

Хозяйство Осеменено маток Установлена стельность n (£)

С-а "Путь Ильича" 278 17е(бз,з)

К-з им. Жданова 102 80(78,0)

К-э "Еяи Мугань" 381 ' 279(73.0)

К-з им.Мичурина I 100 72(72.0)

Результативность осеменения коров и телок усовершенствованным jизсц»:-рвiгкальнь&: метсдсм в хозяйствах, рхполатсенных в различных ?кслого-географических зонах была высокой - 63,3-72.0 X (70,5 S)

__ стельности. Предлагаемая технология является более эффективной, она светает урозень - физячесгсх усилий техника- осеменатора. кскль-чаег травмы рук и отвечает гигиеническим требованиям.

3.8.7 Вжмянмэ генетических к озрзтитпеских факторов на вое-протаводнгельнум способность коров и толок

Изучено влияние генетических факторов и стрессовых воздействий условий дармого и сухого климата Муганьсгай степи Азербайджана. на воспроизводительные функции коров { табл. 14).

Таблица 14. Воспроизводительные показатели норов разных генетических груш

Порода, . группа ■ поров Число норов В Т. Ч. проблемных Учтено Показатели воспроизводства ( без учета проблемных коров )

'Стельные от 1 осемея- Сервис пер.(да.)

N п X К л £

Симментальская £63 64 24,7 1S9 140 67.8 80 +-3

Симментальская

х голштин.(Г1) £95 54 18,3 241 158 €5.5 78 +-3

Литовская ч/п 154 54 35.0 100 63 66.0 86 +-7

Литовская ч/к —

х голштин.(Fi) 27 9 33,3 18 10 55,6 80 +-9

F1 х зебу 21. 2 ; 9.5 19 12 58,0 Эо 4-7

Представляет интерес низкий процент проблемных воров среди помесей симментальская х гадзтинекзя ( 13,3 X). По воспрокзасд:?-тельным, качествам симментальские кс;юш существенно прсвосхслят черно-пестры». Лучоие результат« s ззтутийоД зоне ии?ли

гибриды F1 ( сикмен. х голзгтин.) х вебу. Прс-блемнно ixposa составил!: 9.5 Z. Эти результаты указыв^гка г^лесоо^ззкость лсполъэо-

вания зебу для повышения воспроизводства стада в жарких регионах страны. ■ ■■

3.8.8. Разрзбока технологии получения, оценки, грапеккя м исподьаазаккя сеиекх зубров

Технология получения семени от диких зубров (Blson bonasus), с использованием искусственной вагины не разработана^ -.-;■ несмотря на потребность в ней. ' в нашей стране« зубры представляют интерсс.не только s связи с охраной и восстановлением : природной Фаукы, ■ .* во такке для использований в генетических программах разведения дог машиего скота. Межвидовая гибридизация зубра с крупным -рогатым скотом , с использованием згошшимаяьного семени, представляет,' практический интерес (Л.К.Эрнст, А.И.Авилов, Т.П.Сишш и др. 1933; А.И.Абялов , Л.К.Эрнст, Н-И.Стрекоэов и др. 1S94).

В этих целях изучена возможность получения и использования эпидвдкыального семени, взятого от отстрелянных животных. ' .

Выяснилось, что с целью предотвращения снижения качества ..семени требуется оперативность проведения процедуры извлечения содержимого из эпидидимиса. Характеристики качества* полученного се* мени приведены в табл. 15.

Таблица 16. Количественные и качественные характеристики эпидидималыюго семени зубра

Показатели эпидидимасьного семени Выявлены колебания в пределах

Обгем извлеченной жидкости . Концентрация живчиков Всего живчиков Выход семени на быка Подвижность 18 - 20 мл

2,8 - 3,0 млрд/ мл

7,8 -16,4 МЛРД

120 -160 ДОЗ

60-70 X

Из таблицы 15 ьцдко, что получений-; ;емя из зпидкцкмяса по

__ физиологическим показателям удовлетворяет условиям необходимым для крисаовсерваади. Изучены оевдгныз параметры ваморожекно-оттаянкого семени зубров ( табл.16 ). .'

Таблица 16;'. Биологическая полноценность семени зубров ■. после вамораживания-оттаивання

Показатели эшдядшздьного семени " Выявлены колебания в пределах (X)

Эозинодобных живчиков до замораживания , - после оттаивания 54-59

. 43-46

- после 4 ч. инкубации, 38°С 20-28

Нормальных, акросом до замор. 83-89

- после оттаивания ' 55-67 ' ------ .. .

- после 4 ч.инкубации, 33°С -; 42-44 "

Анализ образцов семени показал, что в аамороженно-оттаянном зпидидиыадьном семени зубров снизилось число живчиков как . эозино-фобных, так и с нормальными акросомаии. в пропорциях характерных для бычьего семени.

. Для практической работы важное значение имеет гарантия биологической полноценности спермы при ее длительной кркоконсерваиии в жидком азоте. Изучение качества спермы после разных сроков храяе-: ния в жидком азоте, выявило, что показатели биологической подно-иеаности семени менялись лишь в течение первого месяца^хракения. Б течение последующего пятилетнего периода исследований никаких изменений свойств семени не выявлено.: Это показывает, что крмоион-сервация семени зубров происходит!по тем же закономерностям, что и семени быков крупного рогатого скота, V

Прямым доказательством полноценности- криокоясерв::роБанкого семени, в наших ошлах, служило рожден»? гибридных телят от обратного скрещивания -.путем осеменения «эрос семенем зубра (табл.17).

Из материалов таблицы 17 видно,'что за^рожеяно-оттая'шое семя зубров позволило получить жизнеспособнее потомство.

Таблица 17. Рождение гибридных телят при осеменении ; коров' \ . зачороженио-оттаянным эпидкиэгальным семенем зубра

Способ размножения Родилось телят Масса при рождении (кг) Живая масса тела в S мес.(кг) Предолга- _■: тельность , ; стельности

Скрещивание 6 43 49 - 215 V,-

Чистопород -кое разведение . 6 . 34 - 38 176 . ■ - .sas;-'..;

Семя было использовало после длительного , в панной случае» б летнего хранения в жидком азоте.

Масса тела гибридных телят при рождении в среднем составила 43 кг, т.е. на û кг была выше массы телят, полученных при чистопородном разведении черно-пестрого скота, гибридные телята росли лучшо чистопородных черно-пестрых и в S месячном возрасте масса их тела достигла 215 кг, проявляя выраженный гетерозис. Разница по живой массе тела составила 40 кг в пользу гибридного потомства.

Установлено, что стельность коров, вынашивающих гибридных телят короче на 22 дня. В этой связи изучили продолжительность стельности у зубриц в природных условиях. Анализ показал , что у 234 зубриц. в Окском заповеднике, в период с 1363 по 1933 г. продолжительность стельности не превысила 270 дней. При этом средний уровень стельности составил 63 X.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты исследований позволяй заключить, что разработаны тесты позволнюЕие выявить аутоиммунные состояния у быков-прокззо-дктедей и коров. Выявление феномена иммунных нарушений » его влияния на воспроизводительный потенциал бикол и коров, является важным фактором влияющим на технологию и эффективность искусственного осенейопия крупного рогатого скота (АЛ' Авилов , А.А,Кочетков ,

И.Н.Соколовская и др. 1929, li.IL Соколовская, А.К. Абклов, А.А.Ко-'четгэв я др. 1990; Abllov A.!., Sokolovskaya I.I.. 1992).

' Аутоиммунность быков необходимо выявлять з реакциях розетш-формирования с лимфоцитами крови (FbJI-E) в иммобилизации живчиков в аутосыворотке крови (Ш). Указанные два метода лапт хороео воспроизводимые результат и могут, быть использованы для оценки клеточного и гуморального иммунного статуса организма. Акросоыа -органоид живчика . обладающий наиболее выраженными антигенными свойствами, в связи с чем она является шяеньп атаки антителами. Нарушение структурной целостности ее приводит к снижению оплодотворяющей способности семени. Морфоиммунологичеоюе изучение акро* . сома позволило предложить экспресс метод определения оплодотворяющей способности живчиков ( Р.Н.Сйвадкс , А.И.Авилов, К.", Соколовская, 1984)получивший распространение в практике.

Новыми в научно-теоретическом отношении являются серия исследований, в которой'показана, что дефецит в рационе каротина и витамина А являются условиями развития аутоиммунного процесса. В этой связи разработаны рецепты. ' содержащие в легютсвоаемой форме витамин Д.. Введение в рашган бедково - витаминной пасты (Б8Ш снимает аутоиммунные реакции и улучшает качественные и количественные характеристики эяк/лятов. В этих экспериментах прослеживается непосредственная связь иммунной системы с питанием животных ( И.И. Соколовская, А.И. Абилов, А.А.Кочетков и др. 1990). Полученные результаты указывай ва необходимость уточнения норм витаминного питания быков-производителей в период их активной слермопродукции.

В опытах по повышению сохранности телят выяснено, что путем выпаивания витаминной эмульсии удается повысить сохранность молодняка в молозивный период aa'95-S8 z. У животных, получавших препарат ВИТЗЫ, не были- выявлены сдвиги в иммунореактивности . (Д.В.Брояская ,А.И.Абилов ,Н.П. Соловьева, 1968).

В опытах по контролю иммунного статуса у поров установлено, что разработанная методика выявления apt СИ - И". Соколовская А.В. Вронская . "А.Й.АСилов и др. 1987) позволяет определить иммунный статус короз к телок.' Для снижения отрицательных последствий иммунодефицита следует использовать препараты аярорастворикмх витаминов, а также синтетический иммуностимулятор беллмиэол (А.И.АОилов.( И.К.Соколовская, В.в.Едьчгнинсв и др. 1993). В практическом плане актуальны исследования , по поиску более эффективных криопротекторов, С этой целью предложена ноаая среда для раз-

-га-

бавления и замораживания семени (A.C. N 1080819), По криобиологическим свойствам БЗКС не уступает аналогам, его изготовление обходится дешевле (В.К.МилОвапв.И.И. Соколовская, A.n. Абилов идр, 1984). Изучены изменения характеристик сред, путем обработки У/ воды для их приготовления (А.й.Абилов , И.И.Соколовская 1893}. -Исследования по усовершенствованию визонервикального ' искусственного осеменения позволили внести новый элемент -.акросомный метод оценки качества замороженно-оттаянкого семени, позволяющий точнее селекционировать эякуляты. обуславливавшие более высокую результативность осеменений. "'V '^Х-v=;

Другим прогрессивным элементом указанной технологии стала криоконсерваиия семени в соломинках и аэродинамическое оттаивание. ' Третий - осеменение с использованием светопроводного расширителя с гелнкокдным наконечником. Исследования показали существенные прей-мущества усовершенствованной ' технологии. ...

Усовершенствованный визоцервикальный метод в технолсгичеспом■ отношении является более прогрессивным и получает широкое расп-. . ространение в практике искусственного осеменения молочного скота (В.К. Мадованов, И.И. Соколовская, А.и. Авилов над. 1989).

В целях расширения использования искусственного осеменения ■ для обогащения генофонда домашних животных новыми генами,'и создания новых промежуточных форм скота, разработана технология получения и криоконоервирования эпидимального семени зубров, позволяющая получать гибриды с крупным рогатым.скотом (А.И. Авилов, Л.К.Эрнст. Н.К. Стрекозов и др. 1994 ).

Первые опыты по получению гибридов Bison bcnasus к Bos taurus, были начаты И.И.Ивановым (1914). В настоящее время технические возможности в области воспроизведения существенно возросли и позволяют продвинуться дальES. "

Разработка технологии получения, использования и криоконсер-вации эпкдндимального семени зубра (Л.К. Эрнст, А.И.Абилов , т.П.Сипко и др. 1993 ,; т'п.Силко , А.И.Абкдов, А.В.Шуркал » др. 1993) расширяет возможности использования генофонда родственных крупному, рогатому скоту видов животных и открывает перспективы - по

сохранению редких и исчезающих видов животных.

* * *

- 29 -5. 8 II В О Д Н

1. У 6-101 «Зыков- производителей цсио выявлена аутоимыунность, стаскавшая результативность осеменения маток на 10-151. спермопро-дугашю на 00 X. Образующиеся в результате иммунизации в организме ауто- или алдоиммунные сдвиги нарушает сперматогенез и повреждают живчиков на разных этапах созревания.

£. Аутоиммунность к антигенам семени у самцов выявляется методом розетнофоршрованкя лимфоцитов крови с аутологичными живчиками (РЗД-Х) и в реакции иммобкхизации живчиков в аутосыеоротке крови самцов с добавлением комплемента (РИМ!).

3. Наиболее сильными антигенными свойствами у живчиков обладает ацюсома. в связи с чем она является мишенью для аутоантител. Аутоиммунизадая у самцов сопровождается снижением устойчивости ак-. росомы и сгермы к криогенным воздействиям.

4. Экспресс метод определения оплодотворяющей способности живчиков по состоянию их акросом может быть применен в практике искусственного осеменения не только для оценки качества семени, но и для анализа свойств разрабатываемых сред. Метод позволяет одновременно и точно определить качество оттаянного после'замораживания семени по подвижности и сохранности акросом живчиков.

5. Дефицит в рационе каротина и жирорастворимых витаминов, является фоком для:развития аутоиммунности у быков. Использование Селково-витаминной пасты предотвращает развитие аутоиммунных реакций и снижает уровень антиспермальных антител в крови самцов, улучшает качественные и количественные показатели семени.

Скармливание новорожденным: телятам витаминкой эмульсии (ВИТЭМ) способствует повышению жизнеспособности, позволяет нормализовать их иммунную систему в первые дни жизни.

6. Для контроля иммунного статуса коров целесообразно использовать тест, основанный на аллергической реакции Т-типа(АРТ). Снижение отрицательных, последствий иммунодефицитвьк состояний на воспроиаводсто достигается путем иммуностимуляции функций организма с использованием жирорастворимых витаминов и синтетического им-муномодулятсра беламизола.

7. Разработанная среда для замораживания семени (БЭКС), по технологическим свойствам не уступает известным, а ее изготовление обходится в 15 раз дешевле '

8. При замораживании семени степень его переохлаждения отри* цате ль но коррелирует с сохранность» акросом живчиков.. Специальная обработка веды для приготовления сред повышает эффективность крио-консервашш.

9. Усовершенствованный метод искусственного осеменения коров и телок, на основе акроскопической оценки качества семени, крио-' консервации семени в соломинках, аэродинамического оттаивания и осеменения при помощи светопроводного расширителя с геликоидным наконечником,, более технологичен и может быть использован в качестве основного метода на производстве.

10. В экологических зонах с жарким сухим климатом гибридные коровы, полученные при скрещивании европейских пород с зебу, имели преимущества по показателям воспроизводства, гибриды легко перекосят неблагоприятные условия ,. в меньшей мере подвержены стрессам и заболеваниям.

11. Разработана методика криоконсервирования ашцкаимального семени зубров, обеспечивающая 55-57Х сохранность акросом живчиков, и получение гибридных телят..

в. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для выявления аутоиммунности у быков на племпредприятиях предлагаем применить гуморальные (РИМ!) и клеточные (PSJI-I) тесты. Устранение и предотвращение этого состояния может бить достигнуто скармливанием белково-витаминной пасты (ВВП).

Z. Для достижения 95-68 х сохранности телят, в хозяйствах выращивавших молодняк крупного рогатого скота, рекомендуем выпаивать телятам, в молозивный период, препарат ВИТЭ4.

3. Для разбавления: и замораживания сиерш быков на племпредприятиях к станциях искусственного осеменения РФ рекомендуем новый биологически . и экономически эффекг:эный протектор БЭКС (авт.свид-во n 1041819, 198-1 г.).

4. В целях' повшения результативности осеменения'it технологичности процесса^ департаменту животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода РФ рексмещгуеы внедрять - в производство усовершенствованный визоцервикальный метод искусственного: осеменения коров и ■ телок-

5. В инструкцию по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных , предлагаем включить акроскоггаческий.метод- оценки качества замороженно-оттаянвого семени быков. Акроскопическое наблюдение, более точно чем традиционные тесты, отражает биологическую полноценность живчиков и позволяет повысить результативность осеменения'за счет правильной селекции зякулятсш.

Список апу&шиковатшх paffoer по теме диссертации

1. Мнлсванов В.К.. Соколовская И.И.. Абилов А.К. и др. Среда для разбавления спермы.с.-х. животных. Автор., свидет. N 1080819. 1984 г.

2. Соколовская И.И.. Ойвадис Р.Н., Абилов А.И. Экспресс метод определения оплодотворяющей способности живчиков (Акросгааи-ческкй тест). Метод, рекомендации по иммунологии воспроизведения.- ВИХ, Дубровины.- 1985.- С.40-45.

3. Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н.. Абилов А.И. и др. Реакция живчиков Ська на аутосыворотку >фови вне организма в связи с результатами осеменения// Биология и иммунология репродукция. - София.- 1985.- N11.- С.15-1?.

4: Соколовская:К.И., Ойвадис Р.Н., Абилов А.И. Действие иммукн-ааши самцов, аутоплазмой спермы на ее качество.и результа-- тивность осеменения// Доклады ВАСХНИЛ.-1986.-Ni -с.£9-31.

5. Абилов А.И., Ойвадис Р.Н. Технологические приемы искусствен-"ного осеменения коров// Животноводство.- 1985.- N7.-С.44-46. - б. Соколовская И.И., Скопец Б.Г., Абилов А.И. к др.* Методические рекомендации со выявленио иммунодефиците: состояний воров в реакции гиперчувствительности ■■' замедленного типа (ГЧЗТ).- ВЙЖ, Дубровицы, 1987.- 12с.

• 7. Соколовская И.И., Абилов А.И..Вронская A.B., и др. Сохранность ^елят - важный резерв улучкония воспроизводства// Животноводство. - 1937.- Ш.- С.45-47. . í ■ ■

- зг

3. Соколовская и.к., Абилов А.И., Кочетков А.А.' и лр. Антитела .V к семенной плазме кродиюэв и их влияние . на характеристику эякулятов и результативность осеменения// Вести, с.-х. на- i УКИ.- 1983.- N7.- С.83-88. ' .' V;v' ;

9, Abilov- A.I., Bronskaya A.V. The influence changes * of ' • physiological cows status on E-KFC number// AJRIM,.— 1S88.-

v.ie.- p.76. .

10. Bronskaya . A.V., Abilov А.1., Solovyova N. P. et.al. Relationship between Immune reaction In E-RFC. ART with FHA and health of calves// AJRIM.- 1988 - V.16.- P.77. . '

11. Абилов А.И, Вронская А.В.. Соколовская И.И. Влияние физио- '. логического состояния коров на активность иммунного ответа// Зоотехния,- 1988.- N9.- С.43-44, '. ' .

12. Соколовская И.И., Абилов А.И., Кочетков А.А. и ар. Выявление спонтанной аутоимыунности быков в кл^то*^^ оэрет^чях// Доклады ВАСЭШИЛ.- 1988,- N12,- С.£4-27

13. Милованов В.к., Соколовская и.и. Аб^деа ЛЛ. х Повышение эффективности воспроизводства крупного роггто'%. «г ота/Л*То-техния 1989.-N1.-C.59-63.

14. Abilov А. К, Та? Т.A. Comparative effestivity о* nethods. fcr bulls spontaneous autoimmunity Insahilnatlm // J, Reprod. Immunol,- 1989,- У,63,- P.181.

15. Абилов А.И., Кочетков А. А., Соколовская И.К. tt др. Ay то иммунность быков и воспроизводительные функции// Зоотехния.-1989.- N5.- С.61-64.

16. Абилов А.и. - Причины возникновения аутоантитех к сперматазоидам у сакиов и способы их устранения. // I Бсесоюэн. шмунол- съезд. Тезисы докл. II том, Сочи, M.1989.-C.S.

1?. Абилов А.И., таг Т.А. Проблемы аутоиммунности быков в работе станций искусственного осеменения // IY Всесоюзн. симпозиум по иммунологии репродукции. Киев.1990.-С.10.

18. Соколовская U.K., лбклов А.И,. Кочетков А.А.и др. Методические рекомендации по выявлению, устранению и .предотвращению аутоиммунности у быков-производителей.-ВИЖ, ЛуОровады,1990.-31с.

19. Abilov АЛ., Sokolovskaya 1.1. The Reveal Ins* of Bulls autoimmunity In connection with technology of stres uslne for artlflcal lnsenlnatlcn/л J. : Immunol. Isiitunop.- 1S92.-Y.12.-, N2.- P.8.

. 20. Abllov A. I. The apperense of bulls autoimmunity dependence of their see//, Imnunol. 'of Seprod. Int. Symp. - Ukraine. Kiev, 1993.- P.4.

21. Абилов А.И., . Соколовская И. И. Обработка воды ' при приготовлении сред для разбавления семени быков// Зоотехния,-.1993.- КЗ.- С.25-27.

22. Сипко Т.П.;АОкловА.И.,ОурхалА.В. и лр. Создание (фиобанка сперш зубра как способ сохранения генетического

. полиморфизма вика// Генетика-1983.- N12.-0.2051-2056.

23. Эрнст Л.К., Абилов А.И.. Сипко Т.П. и др. Межвидовая гибридизация зубра о крупным рогатым скотом// Молочное и мясное скотоводство.- 1993.- N4.- С.19-21.

24. Абилов А.И., . Эрнст Л. К. . Стрекозов Н.И. и др. Получение гибридов путем осеменения- домашних коров зпидидимадьным семенем диких зубров: Метод. рекомендации.-ВИИ, Лубровиш. 1994.-26с.

25. Абилов А.И., Фараджов А.Ф.Дахырова Э.А. гибридизация сишентах - гслштютских помесей с зебу. //Зоотехния.-1994. -N6.-C.8-10.

26. Абидов А.И., Соколовская И.И., Едьчанияов В.В. идр. Улучшение воспроизводительных функций у коров с помощь» беламизола к сурФагона// Зоотехния.- 1985.- N5.- 0.22-23.

Подписано к печати 15*05.1996 г* Заказ 374.

Тираж 75 »кз, ОЗъем 1,2 уч.-изд, л. (

ПМЛ ВЮКа