Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Иммунобиологические закономерности и совершенствование технологии воспроизведения сельскохозяйственных животных

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Иммунобиологические закономерности и совершенствование технологии воспроизведения сельскохозяйственных животных"

A

у

И* фмм рукописи

Субботин Ал«кс«ндр Данилович ■ .

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ И

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ • ВОСПРОИЗВЕДЕНИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Специальность 03.00.13 - "Физиологам чтим и *в«»атеы>Г

Автор*ф«рат ,

уч»ной ст«пани доктора биологмчаских Иву«

п. Дуброиицм, НоскоасмоА обл* 1М8

С*-У- jtftf^GttettZ ~ fas&fz&tcf Ote-Utek&Mü? wcfaf&cifgetstea?.

Работе выполнена в отделе биоаовии воспроизведения и искусственною осеменения ВовроссиОсково нлучно-

исследовательского института животноводство. .

Научный конеультатнт:

• доктор биолоаическш неух. профессор ИЛ.Соколоасмм. Официальны» оппоненты:

-доктор биологических наук,профессор КтанскиЙЮД.

• доктор биологических наук, профессор Рмттнянои K.M.

• доктор биологически* неук, профессор Бурков ИЛ

Вадущм учр*жд»нм»:

Всероссийский иаучно-мссладоватальский и нети ут раза«д«ния и ганатеки животных (П*нмнград-Лушхи н).

Защита диссертации состоится "-У/f," fflsa ¿ода « 10

чесов на заседании диссертационного 'бовёта Д 02ÖiS.(rt ipj Всероссийском научно-исспедоейтельском инегм.' pre

животноводства. .

Адрес института; "*' -- , .

' " . • • .__s

142012. п. Дубровицы, HoiJcui^i.c.jj района Москоаской области.

С диссертацией можно ознакомиться в бфлиотеко ВИЖш. Автореферат разослан

екоииться а би&лиотеко ВИ)К 199ft.

Ученый секретарь диссерташокнс^{

совета, кандидат биологичФкхч* 8.П. ГУБАН

1, ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ :

1.1.АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Метод искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, разработанный русским биодогом Ильей Ивановичем Ивановым в ¿900-1923 гг., а затем развитый и усовершенствованный академиком ВАСХНИЛ 8.К.М«ловановыы, профессором И.И.Соколовской и их учениками (1023-1996 гг.)« позволяет успешно решать проблема воспроизведения и в количественных, и в качественных аспектах, а открытие возможности неограниченно-долгого хранения семени в глубоко-охлажденном состоянии (Мидованов В,К., Соколовская И.И., Смирнов И,В., открытие п.103, 1947 г.). Двет возможность осуществлять самые смелые планы селекционно-племенной работы в самых .широких масштабах.

вместе с тем, показатели работы по воспроизведении животных а среднем по России остаются пока низкими.

Неудовлетворительные показатели по воспроизведении животных чащ» всего объясняют низкой ошюдотворяемостью, ставя при атом полный знак равенства между понятием "оплодотворяемость" и терминами "стельность", "супоросность", "суягность".

Нслду тем, многими научными исследованиями доказано, что истинная оплодотворяемость, т.е. слияние яйцеклеток со сперматозоидами и формирование зигот, составляет а то и 100Х (Л.Ф.Бондаревская,196в, И.И.Соколовская, 1976, Мингазов Т.Д., 1983, Квасницкий A.B., 1933, Демесинов В., 1983, Kldder U.E. et al,, 1054, Lalnj J.A.,. 1948, Diskin M.G,, SreenanJ.M., I960, Hunter R.H.F., 1934 и другие).

Разница между уровнем оплсдотворяемости и показателями стельности, супоросности либо суягности приходите? ' на пренаталъкые потери. При осеменении коров их доля составляет, таким образом, от 30 до BOX, а свиноводстве и овцеводстве - от 15 до 401,

Вменены многие * факторы, влияющие на оплодотворяемоеть ооцитов и на сохранность эмбрионов; Среди них - генетические, флэиологическке, иммунные, , гормональные,' алиментарные, климатические, организационно-технологические и другие. Вместе с тем, данные, о влиянии.этих факторов на воспроизведение получены разными авторами в конкретных специфических условиях проведенных ими экспериментов (климат, питание, сезон, технология к г,р.) и

■ ЦЕНТРАЛЬНАЯ НАУЧИЛЯ БИБЛИОТЕКА Моск. „ - <- w а-адемии им. К. л, I имиряэава

Инв. fJo/т"^'? я . /"7 / ,

применимость их выводов не мо»вт быть абсолютной а иных условиях., Кроме того, • исследования значения иммунных факторов »■ воспроизведении, начало которым было положено болгарским академиком Братаяовым К. (1990-1087) к И.И,Сокадовской (1068-1996)', развиты еще недостаточно, а отдельные аспекты этого направления, в частности иммунология яйцеклеток, живчиков и их отдельных структуру их значение приоОъединении' гамет - вообще мало изучены.

1.2. ЦЕЛЬ И ЗАДАЧ! ИССЛЕДОВАНИЙ. В связи с вышеизложенным -целью наших исследовании было выяснить, какая часть животных

. после неудачных осеменений приходится на самок с отсутствием оплодотворения, а какая часть - на животных с пренатальными потерями, разработать приемы уменьшения этих потерь и повышения' эффективности искусственного осеменения. *

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие ' задачи: ,

- выяснить, с учетом литературных источников и собственных экспериментов, истинную .оплодотворяемоетъ яйцеклеток- у сельскохозяйственных животных при искусственном осеменении, т.». процентное отношение зигот к числу овулировавших яйцеклеток,

- изучить иммунобиологию яйцеклеток, живчиков и их отдельных структур, и выяснить их значение в оплодотворении,

- изучить значение ■ состояния иммунной системы самок^для ■ пренатальной-выживаемости и результатов осеменения, ' .

• выяснить значение внутренней среды подовых путей самок для ' воспроизведения, изучить эффективность искусственного осеменения в связи с закономерностями послеотельных изменений воспроизводительных оргаиЬв у коров, ' . -> '

- изучить особенности овуляции у коров в связи с сезонами года с целью совершенствования технологии искусственного осеменения,

' - изучить эффективность.традиционной системы выборки коров в охоте и разработать научную базу для автоматизации этого процесса - в скотоводстве.

1.3. НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Предложена оригинальная методика добывания и накопления- антигенного материала" ооцитов млекопитающих, разработан способ определения активности иммунных

сывороток к ОЭЦНТ8М животных.

В опытах вне организма доказано реципрокное влияние живчиков и оэлеммы ооцитов в процесс» их объединения, показана возможность. определения степени физиологической зрелости роцктов по уровню устойчивости оолеммы к литическому воздействию иа не» суспензии живчиков.

Доказана общность антигенов внутреннего слоя прозрачной зоны (Zona pelluclda) ооцитов и вещества акросомы живчиков с антигенами групп крови и на этой основе предложена научная гипотеза объяснения механизма реализации избирательности оплодотворения. 1 Предложена новая схема периодизации послеотельного периода и этапности возобновления готовности матки коров . к новому плодоношению,

Предложена оригинальная методика выявления отцовских антигенов на структурах бластомеров зигот и внеэародышевых оболочках ранних эмбрионов.

Определена структура эмбриональных потерь у самок с иммунодефицитом и предложены новые приемы повышения эмбриональной выживаемости с использованием 'специфической и неспецифической антигенной стимуляции самок.

£чявлена корреляция между уровнем гемоглобина в крови ' самок и юс воспроизводительными способностями. Показана возможность нормального воспроизведения в свиноводстве от применения мини-доз >семени. Выяснена связь между изменениями .отдельных физиологических параметров самок (степень двигательной активности, динамика удоев, динамика изменений внутривлагалищной температуры) и процессом формирования половой доминанта, что даат основу для разработки системы автоматизации ^выборки охоты у коров.

Нл основе изучения особенностей овуляция у короа предложен новый режим искусственного осеменения, предполагающий однократное осеменение в летний период и двукратное - в зиане-етойловый, с 20-24-часовым интервалом между первым и вторым осеменением. '

■ 1.4. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. Организация ■ искусственного . осеменения коров с' учетом выявленных закономерностей .. послеотелъных ' - изменений воспроизводительных органов позволяет повысить• . эффективность осеменений на S6-30V, чтр.может дать на - .-,

практике экономический эффект от снижения ««производительных затрат на содержании бесплодных животных и экономию труда, материалов и семени при их осеменении.

Применение приема антигенной стимуляции при осеменении коров и свиней, обеспечивающее уменьшение частоты перегудов на 10-1БХ, дает вольтой экономический эффект в результате снижения непроизводительных затрат на содержании "холостых" маток и от уменьшения затрат труда и семени,

Предлагаемый режим однократного искусственного осеменения коров в летн?-пастбищный период позволяет получить большую экономию материалов, труда и семени,-

Результаты проведенных исследований положены в основу технологических, методических и практических рекомендаций, в частности!

- ЕШевской технологии искусственного осеменения крупного, рогатого скота,-

- методических рекомендаций по иммунологии воспроизведения,

- методических рекомендаций по изучению антигенных свойств ооцягов млекопитающих,

-практических рекомендации по улучшению результативности искусственного осеменения коров, . - '.

1,5, ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ НА ЗАЩИТУ. ■; Истинная оплодотворяемость. у сельскохозяйственных

млекопитающих при осеменении в обычных хозяйственных условиях составляет 00-100Х к числу овулкрующях яйцеклеток, причем у животных о провоцированной овуляцией она бывает выше в сравнении с животными со спонтанной овуляцией.'

" - Объединение гамет в процессе оплодотворения имеет иммунную природу, а иммунобиологические свойстве ооцитов и живчиков в основном влияют на избирательность оплодотворения, и в меньшей степени на уровень ошюдотворяемости. 1■ ¡* ■

- Уровень эмбриональной выживаемости у сельскохозяйственных млекопитающих зависит от активности иммунной системы самок. Применение активации иммунной системы в условиях иммунодефицита представляет практический прием повышения результативности

.осеменений,. * '

результативность осеменения в скотоводстве связана со ■■степенью завершенности •послеотельных ■ изменений

'воспроизводительных органов.

' ' - Формирование подовой: доминанты у коров сопровождается• закономерными изменениями величины таких физиологических параметров, как удой, стелена двигательной активности и показатель внутривлагалищной температуры. Это может составить основу для разработки системы автоматизированной выборки окоты у коров.

- Динамика, овуляции у коров, определяемой ло отношению к моменту выявления течки либо охоты, связана . с сезонными факторами, с учетом выявленных особенностей овуляции при • организации искусственного осеменения в летне-пастбищный сезон можно рекомендовать однократное осеменение - вечером того дня, когда выявлена охота, а в зимне-стойловый - двукратное, причем первое - через 10-12 часов после выявления признаков течки либо охоты, а второе - через 20-24 часа после первого.

1.$. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ, Основные результаты исследований по теме диссертации доложены, на трех Всесоюзных симпозиумах по иммунологии воспроизведения (в 1977 г. а Новосибирске, в 1Э90 г. в Москве, в 1967 г. 9 Киеве), на четырех Международных. симпозиумах по иммунологии воспроизведения (в Варне, Болгария - в 1978, 1965 и 1938~году и. в,- Киеве - в 1996 году), на трех Международных Конгрессах по иммунологии репродукции (в 1983 г, в Японии (Киото), в 1986 г. в Торонто (Канада) и в-1989 г. в ФРГ, г.Киль), на научно-теоретической конференции- "Научные чтения памяти академика В.К.Милованова" 22. апреля 1993 г. (Быково, • Московской обл.), на научно-практической конференции "Современные.' проблемы воспроизводства стада" 13-21 июня i960 г. (РАМИ, Быково. Московской обл.), на научно-теоретической конференции', "50 лет Открытия замораживания семени" 23 октября 1997 г. (Быково, Московской области). ' '

1.7. ПУБЛИКАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ. ДИССЕРТАЦИИ. Всего по теме диссертации опубликовано 74 печатных- работы', в том числе в журналах "Животноводство", "Зоотехния"; "Доклады- ВАСХНИЛ", "Сельскохозяйственная биология", "Вестник сельскохозяйственной науки", а. изданиях Болгарской Академии- наук, публиковавших •материалы Международных. симпозиумов по иммунологии

воспроизведения, в журнале "AJR1M" (American Journal ■ of

Reproductive limnology and Microbiology), в журнале "Journal of Reproductive Immunology", публиковавшем нахериакы Международных Конгрессов по иммунология воспроизведения, в журнале "Biología et lrounoloela RepnxJuctlonls" издательства Болгарской Академии наук, а сборниках докладов Всесоюзных симпозиумов по иммунологам (г.Новосибирск, 1977 г., г.Москва, I960 г.. г.Киев, 1987 г.), в сборниках научных трудов ВИХа.

1.8. СШШ1 H СТРУКТУРА PAB07U. Диссертация изложена . ва ¿95 страницах машинописи, состоит из введения (общей характеристики работы), четырех глав, выводов, практических предложений к списка литературы. Каждая из четырех глав включает обзор литературы, описание материалов, методов и результатов собственных исследований, а такхе их обсуждение,

В диссертация во таблиц к 36 рисунков (в приложениях) • Список литератур«! из ББ4 источников, нэ которых 311 - на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛ и методы исследований.

Рьбота выполнена в отделе биологии воспроизведения л искусственного осеменения сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства (ВИКа) в период о 1S71 по 1090 Von. Общая схема исследований приводится ниже.

Экспериментальные исследования' проведены а лабораториях и в виварии отдела биологии воспроизведения , а опыты с животтшп а експеримеитальных хозяйствах ВИ*а"Щапово", "Кжеиово-Чегадаево"» в колхозе имени К. Маркса Ре омского района Молдавии, в совхозах Подольского и Каширского районов. Московской области, на свинокомплексах "Сафоновский" Московской области, "Алексеевский" Самарской области, "Зедеиедай" Республики Коми/ ъ овцесовхозе. "Кала-и-Мор" Туркмении.

Ю&ьектами исследований был» норови, свиньи, овф, ифолмкн, лабораторные животные - крысы, морские ... свивки, мыпш, а такяо гймвты млекопитающих: ооцитм и живчики всех основных ■'■ видов сельскохозяйственных и лабораторных животных,' их

воспроизводительные органы и ткани.

ОЩАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

■ i

В работа использованы общеприменимые методы гистологии; гистохимии, иммунологии, гематологии, ветеринарной гинекологии, биотехнологии, в том l числе оплодотворение вне организма, применены.технологии., искусственного осеменения крупного рогатого скота,. свиней., . и - овец. Статистическую обработку данных экспериментов проводили . по Плохинскому H.A. (1970) с использованием формулы альтернативней изменчивости.

Шесте с тем, помимо общепринятых методов исследований для решения специфических задач, нами были предложены и использованы оригинальные методы, изготовлены специальные устройства. 6 частности, предложена и использована система тестов для исследования■иммунобиологических свойств гамет, методика выявления отцовских антигенов на клеточных структурах зигот и внегародыаееых оболочках ранних- эмбрионов, предложены и изготовлены устройства для взятия содержимого матки крупных животных для бактериологических исследований, биотом для прижизненного взятия образцов эндометрия с цель» гистологических исследований, методы подготовки антигенного материала ооцитов для иммунологических исследований, методы освобождения ооцитов от клеток лучистого венца и от прозрачной зоны, разработан способ определения активности иммунных сывороток к ооцнтам,

2.1, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ИСТИННОЙ ШЛОЙОТВОРЯЕМОСТИ ООЦИТОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ ЖИВОТНЫХ,

выяснения уровня истинной' оплодотвориемости ооцитов осемененных самок убивали через 24-48 часов после осеменения, извлекали яйцеводы, промывали их изотоническим раствором хлористого натрия. Промывную жидкость собирали в часовые стекла и под микроскопом при увеличении 40-5а раз отыскивали зиготы либо неоплодотворенные ооцнты. При этом свиней осеменяли дважды в одну охоту (сразу же после выборки охоты, а затем спустя 24 часа), вводя каждый раз по 5 млрд. живчиков в объеме 100 мл. Овец осеменяли однократно, через 6 часов после выборки охоты, дозой 0,2 ш (400 млн. свежевзятого неразбавленного семени) а тейку матки. Крольчихам семя (по 0,2 мл свежевзятого неразбавленного семени с содержанием 20-30 млн.живчиков) вводили к . своду влагалища, на шейки матки, через пол-часа после спаривания с ваэектомироаанным самцом. - ч . v

Признаками оплодотворения считали присутствие в перивителлиновом пространстве. второго полярного тела, либо наличие бдастомеров делящихся _,зкгот.

- 2.2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДУ ИЗУЧЕНИЯ ЙШУНОЕИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ГАМЕТ И ЯХ ЗНАЧЕНИЯ В ПРОЦЕССЕ ОПЛОДОТВОРЕНИЯ. ; Исследования проведены с; использованием ооцитов крупного 'рогатого скота, свиней, , овец, кроликов, . крыс, мышей, песцов, че'рно-бурых лисиц и человека. .■ i ' V1

- и -

Осцчты добывали из яичников убитых животных по предложенной нами методике. , Яичники измельчали, гомогенизировали в Изотоническом растворе хлорида натрия, экстракт пропускали через каскад сетчатых фильтров с размерами ячеек от ЭОО микрон до 1 ми, дважды центрифугировали при 15 г (по 3 минуты), осадок наносили на предметные стекла и с использованием стекляных капиллярных пипеток отлавливали в нем фолликулярные ооциты. Рсего таким образом было добыто к использовано 22 тыс. ооцитов крупного рогатого скота, 19 тыс, ооцатов свиней, 16 тыс. ооцитов (фоликов, по 8 тыс. ооцитов мышей и крыс.

Кроме того, нами предложена к использована оригинальная методика освобождения ооцитов от фолликулярных клеток и клеток 1 лучистого венца, а также освобождения ооцитов от прозрачной зоны (гопа ре11ис!с1а) с целью изучения иммунобиологических свойств отдельных структур ооцитов.

Для приготовления иммунных сывороток к ооцктам и живчикам использовали морских свинок и кроликов.

Морских свинок иммунизировали подкожно, трехкратено, с 7-дн. интервалом, вводя каждый раз экстракт 600-1000 ооцитов в объеме 0,5-0,0 мл в смеси равным объемом полного адиованта Фрейнда. На 7-й день после последней инъекции антигена животных обескровливали и готовили иммунную сыворотку.

Кроликов иммунизировали под конъюнктиву, верхнего века, вводя за раз экстракт 300-500 ооцитов а объеме 0,2 мл. Всего проводили по 10-15 инъекций, с двухдневным интервалом. Убой и приготовление иммунной сыворотки проводили через 14 дней после последней инъекции антигена. *

' Для выявления наличия, в жидкостях антител к ооцитам нами были предложены и использованы тест преципитации на прозрачной зоне, протеолитический тест, тесты иммунофлуоресценции и адгезии

ХМ8ЧИК08.-. '

Для выявления сходства шмуногенов эритроцитов ("групповых факторов") и антигенного веществя ооцитов использовали иммунные сыворотки ("реагенты") свиней,. иммунизированных эритроцитами животных с известными группами крови, в частности, реагенты к системам Еа, ЕЬ, Ес1, ЕС, Ар, Ка, КЬ, Ва, На, Га, № и I., а также иммунную сыворотку морских свинок к пулу эритроцитов кроликов. 1 -■* Маркерами служили меченные ШТД иммунные сыворотки к

глобулинам свяней к короля сыпок,

»начинав для исследования Оргия у э я кул я той, у »фантов - в одних случаях -семенников, в других - жэ рвэпк участия эпвдяджяса, в тртп - иэ эякулятоа.

Для проведения «плов по кспольэовавя часовые стекла либо Фал ь кона и термостатированную юкру микроскопа ЫСЫ2. Опдкм помещали в суспензяо миачяиов в среде Дшьбекяо у&и«пгЬат'а, которую вакры Культивировать проводка* в апшосфере,. газ:кислород В'соотмеяии 00:6:Б.

Лля выяснения влияния антител к ооцитам а эмбриогенез проводил* пассивную ншуижэацяо 1фож»ч

то-есть внутривенно вводили крольчихам вмуяяу» сыворотку ооцитам крольчих - в резные срок* ю шмвиил к осеменения. . *-.''_

2.3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ЮТЧЕНИЯ ДАКТОГОР. -СДГСаВВЯЭДДО« ^ . "\ ЗДВРИ0КАЛЫ1У1) СШИВАШХТЬ. ; -

Выяснение влияния ' состояния ■ восвроитвсдятелввых цжшв у "коров, степени эавервенвости иослеотельн результативность их осемеяений проведело Ь молочного стада колхоза им. К. Ызриса Реэлаского коров экспериментальных . хозяйств : БХЖа -"Кленово-Чегодаево", а Каиирсюто районов Ыосипасмой облает*.- '

Кормяеяя» соответствовало нормам ВИХа, достаточна. Летом - зеленая масса злановоЧ кукурузы. ' КоЛикорма во пихателгностк составляли 21Х ■Зимой кукурузный либо травяной силос, сегая, режа или кукурузных стеблей* свекловичный,

-35-Б01 питательности рациона. 8 в каротине удовлетворялась яа

Условяя содержанля ■..-. бшш:-* в • - юххоэе 'кругло-годовое стойловое,* с " в_ экспериментальных хозяйствах . ЕЯЖа

' бгспривя9ю-Саксавое,: Ьеэ гасть^--.^^^ ;^^ ¿'V Ч.^

Дхяизучеяы

фуяицжжальяого сопииша воспроизводительных органов применяли метод траясректаяьвсй пальпация матки и янчвюшв. В яичниках Я9П1{В!Ц1П1ин яелтне тела , нОо фолликулы. Исследования ■эчяналя со 2-Э-го - дня после отела и проводили с 5-7-дкевкым EfrepssjQM до тех пор, пана два последовательных измерения давали аашяаяовиА результат.

Кая язучеюш линя«кпд даслеотелышх изменений гистоструктур малое у вдияя > тех же норов в разные сроки после отела методом thMin» Сраля обрвэда тканей эндометрия (маточной стенки), для •tero Curo преджшено ж сконструировано специальное устройство -Сюгж. ССрээф фиксировали я формалине, а затеи с использованием аЗц^рэспростравеюаос гястояогяческих метадоз готовили гистосрезы я кэучали характерен икя основных гистоструктур маточной стенки: оифи&жтго эшггелия, • железистого эпителия, маточных желез, вм мэдшии клвточиу» nonyxstyxo эндометрия

Восведовакяя дввамккя бактериальной заселенности полости tema у мэров после отела провели в стаде коров колхоза мсКЛОДкса. Для извлечения образцов содержимого из полости рогов шлем «ам било предложено я изготовлено специальное устройство, с исоольэеваяием которого можно было Орать неизменным содержимое (ояшгж) рогов матки я переносить его без риска контаминации в стермльяу» вжтагельвуо среду.

2.4. НАТОПАЛ К ЬЕГОЙИ ИЗУЧЕНИЯ ЭАКОНСЫЕРНОСГПЯ «ЖИРОВАНИЯ ХГООБОв ДОМНАКТЫ К ДИНАМИКИ ОВУЛЯЦИИ У когев в связи с

СЕЭОНШ ГОДА.

Виюяешю замооомерюстей формирования половой ^ вшааты и истек корреляций ее с изменениями отдельных ■ физиологических параметров провеса с использованием поголовья молочных ферм экспериментального хозяйства ВНХа "Изпово" и совхозов 'Путь Ялькча" м "Эезмя Октября" Подольского района Московской области.

Дхх определения связей между динамикой формирования половой доошая» ■ эижоисмеряостя! л изменений степени двигательной активности у коров применили цлйровые вагомеры ВМ-0 Пензенского часового завода. Их закрепляли ва плюсневом суставе поров, п в ооределенаое время : считывали показатель количества . движений.

Дяя выявления связи формирусцейса половой доминанты с величиной удоя проводили индивидуальный учет удоев от каждой

. коровы раздельно по дойкам: утренней, обеденной и вечерней -накануне охоты, в процессе охоты и после охоты, а для выяснения корреляций между динамикой формирования половой доминанты и изменениями внутривлагалииной температуры проводили в те же сроки измерения внутривлагалишиой температуры (с использованием обычных ветеринарных термометров Therm.Nomslglas).

В этих же стадах изучали и динамику овуляции у коров по отношению к моменту обнаружения течки либо охоты. Для этого методом трансректальной пальпации выясняли степень развития фолликулов у коров в момент обнаружения признаков течки либо охоты, а затем повторяли исследования с 12-часовым интервалом вплоть до овуляции.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ,

3.1. Изучение истинной оплодотворяемостн ооцитов у

сельскохозяйственных животных, Онлодотворяемость ооцитов у, крольчих была изучена в связи с раз&м характером фолликулогенеза: часть крольчих осеменяли я естественную охоту, а у других ее стимулировали СЧК (таб.1).

Таблица 1.

. . Истинная оплодотворяемое» ооцитов у крольчих.

Характер фоллику- Число Из них с опло- Всего Из них опло-логенеза .¿;. самок дотверенными ооцитов дотворенных

' "■ -'г.. , ОП1ДИТЭМИ Г» X

. Естественный \7 7 100 51 51 100

i Стимулированный С 5 -100 . 64 64* 100

J/ Г ' . " ' ' ' 1 . „ ,. ... Iktl. i II- - I. . I ■!■■ I ■■

- у 7 зигот (9Х) отмечены признаки дегенерации. • Kfw видно из таблицы 1, у крольчих . при искусственном осеменении оплодотворяются все 100Х ооцитов. ■ /К-; Абсолютная, 100Х-ная оплодотворяемость ооцитов была и в опыте по выяснению влияния, на оплодотворяемость степени активности иммунной ; системы: у всех 9 крольчих все ооцнты были •оплодотворенными. . V. ; -V • i

i-ОллодотвОряемость. ооцитов у свиней представлена в таблице»?.;

ТаЛдиШ 2.

Оплодотворяемость ооцитов у свиней

Хозяйство Срок Число 8 т.ч. Общее В т.ч.

убоя пос- маток с оплодот- число ' оплодотво-ле осем. воренными яйцекае- ренных

(час.) ооцитами ток п X

п X

"Алексеевский" 26-50 10 9 90 ВО 61 79

"Зегенецкий" 2& 3 3 100 44 44 100

В среднем: .13 12 92 124 105 89,7

Как видно из таблицы 2, У свиней при искусственном осеменении оплодотворение ооцитов происходит у 90-100!". .свгаоматок. Опыт по выяснению' истинной оплодотворяемостн у овец проведен в стаде каракульских маток с-за "Кала-и-Мор" в Туркмении (табл.З).

Таблица 3.

Оплодотворяемость ооцнтов у овец

Способ осе- Число Из них! мс кения овец ;_

Из числа■овулировавших овец:

С овуля- Без С ошюдотво-.Без оплодотво-цией овул. рением рения.'

п % п X

Естественное 2 2 0 1

Искусственное 37 36* !■- 29

91

1

3

* - у 4-х овец ооцяты утеряны при вымывании. Как видно из данных таблиц 3, у каракульских овец даже при однократном искусственном .осеменении в 91Х случаев из 100 происходит.истинное оплодотворение ооцитов. •

Данные по оплодотвориемости ооцитов у крупного рогатого скота приводим по результатам экспериментов других исследователей (таб. 4)

Таблица 4.

Оадодотворя емостъ яйцеклеток у крупного рогатого скота

Возрастная - Число Процент Авторы, четочниж

• группа жиэ-х оолодотв. ооцнтов "

Телки , ,. 44 . 100 Lain? J.А., 1943

- Телки ■ 74 : 100 Christian R.E., Casida L.E..1SS1

; Коровы, про- *

■- блемиые . 104 03 Та» же

.. Телки _ ; , 39; ' 100 Kidder Н.Е. et al.,1954

■■• Коровы "г 54 ' Ев Тем *е

.' Телки '" '' 144 92 Таутерис 8.Р., 1980

Телки мясные EQ 100 Hill J.B. et al.,1970

■ .Коровы 04 100 Ayalon N., 1972

; Телкя . 250 --Ю : Diskln M.0.,STeenan J.W. ,lft80

Коровы *.-' 65 100 Usurer R.R., Chenault J.R.,1983

, Телки 102 . 83 Там *e

Коровы • .-* эо 100(37)* Деыесииов В., 1088

Коровы £0 ' 100 toniraaqB Т.Д. ,1983

« - 100К - к чпслу овулкровавякх корсэ, 67Х - к общему чяслу осемененных, .i . - " - .

Я? приведенного в таблице 4 анализа можно сделать вывод, что я у , крупного ~ рогатого скота, как н у других вюгов сельскохозяйственных животных, истинная ошюдотворяемость ооодтож составляет от 92 до 1СОХ, а разницу между эти»<* значениями в показателями стельности, cyirov-оскости ' либо сунгностп следует . относить на превахакьюю потеря.

Т 3.2.Изучение иммунобиология гамет я их отдельных структур в -усьчзи с оплодотворением.

,-.'3.2.1. Иииуво-биофизические свойства и видовые особенности 'л;1;: дрозрамгой зоны оститов млекопитающих. ^ ' Обработка ооцятов яшуяными'сыворотками к ооцнт» приводит к форыироваяи» ща поверхности прозрачной зоны (Ъсгл pellucida)

одтически- плотного слоя преципитате, делает «розрзчнуо зону 'устойчивой к разрушавшему действии протеолюпеских ферментов, препятствует хне организма контактам жквчлюА с наружной погерхностьБ прозрачной гоны. 1

Ыявлеиа абсолютная тканевая специфичность ■ вещества прозрачной эсны: ни одна из ткаяей в жидкостей организма, использованных для осадденгд иммунной сыворотки .1 к ооцитам (печень, почка, эритроциты, плазма крови я другие), не изменяли ее специфического действия на прозрачную зону. В то же время выявлена относительная видовая антигенная специфичность ооцктов резвых видов мшат них (таблица б).

.. Таблица-5. -

Взаимодействие иммунных сывороток к ооцитам разных видов животных с прозрачной зоной в межвидовых сочетаниях (по 10 олцитов а каддом варианте). ,

Доноры • ' Результат взаимодействия с аитксызороткамн:

осирггов , ....;_;_ •■ ;_

К ооцитам К ооцитам К ооцитам К ооцитш ' . • ., коров свкней . кроликов мышей

Корова +

Сьинья ♦

Овца : ' ■ +

Крольчиха -

Порская свинка' . -1*кь ■ '

Крыса -

Кошка

Лисица

Человек

Примечание: знак свидетельствует о положительной

реакции, т.е. о том, . что после инкубации ооцитов в соответствующих внтисыворотках на поверхности прозрачной зоны формировался прецкгттациоишй слой и она становилась устойчивой к протеолитическим ферментам, - знак - показатель отрицательной реакции, а знак "♦у". - показатель положительной, во

слабовыраженной реакция.- . *

И? таблицы , Б видно, что в .пределах определенных таксономических единиц ("копытные" -корова, свинья и овод, "грызуны" - кролик, морская свинка, "мышевидные" - ооциты обладают антигенной общностью, а за пределами этих единиц -видовой специфичность».

Выло выяснено, что фактор, аналогичным образом изменяющий биофизические свойства прозрачной зоны ооцитов, содержится также -и 8 плазме семени хряка и (в меньшей степени) кролика (табл.3) ' ■ Таблица 8.

\ Действие плаэда семени животных на прозрачную зону ооцитов.

- Доноры плазмы Ооциты коров Ооциты свиней Ооциты крольчих семени - .

; ■ V г- > Тест Титр Тест Титр Тест Титр

преци- протео- преци- протео- преци- протео-| 'у.'?,1/'-'- пи*вц. лизиса питац. лизиса' яитац. лизиса

V хр«к • • + .. эг + га + зг

■ " Кголик • - ' + ' . 4 ' + 4 + 4

•", Вмч *■•■:'_,-."'' . -0 - О * - О

' Бпран // "•."•' ' ' -"'■ О - - ' О . О

, 'V Лунные таблицы в показывают, что на прозрачной зоне ооцитов животных после контактов вне организма с плазмой семени хряка или . кролика на ( поверхности прозрачной зоны формируется прецнпитациошшй слой, а в растворах лротеолитических ферментов & целостность сохраняется до 32-кратного разбавления.

3.2.2.Изучение антигенных особенностей ооцитов й живчиков. ^;'■1'-'"- -■ с.х.животных в связи с групповыми факторам».

V,' выяснено, что свойства внутреннего слоя прозрачной зоны £ иные в сравнении со свойствами наружного слоя. В составе вещества - внутреннего слоя нами выявлены антигены, сходные с антигенами •Л групп- крови .(таблица 7). . .

Таким образом,: как показывают данные таблицы 7, в составе ; прозрачной,зоны ооцитов есть икмуногены, сходные с иммуногенами ^'эритроцитов,-располагаются они на внутренней поверхности ^прозрачной зоны я обладают видовой специфичностью. •■ ; ,!

< Ьшо выяснено, что антигены, сходные с антигенами групп крови, выявляются и .на живчиках, на поверхности акросомного чехлика, причем у • кроликов - на живчиках из извитых канальцев семенника, у хряков и Саранов - на живчиках из эякулята.

ТлЛдица 7. .

Реакция ооцитов животных на иммунные сыворотка к групповыым. факторам свиней.

Доноры ооцитов

Число Доля ооцитов (XX) с положительной самок реакцией внутреннего слоя прозрачной ЗОНЫ1

Вг.егс .

Иэккх:

+++

Свиньи:

-"положительны»" 28(112) 75±4 47+5 ~ 23

-"отрицательные" 27(106) 55±б 26+4 - . £9

Коровы 4(16) 0 0 О

Крольчихи ' 5(20) О О О

' Примечание: - "положительные" свиньи обладательниц той или иной группы крови, "отрицательные" - свиньи, у- которых соответствующая группа крови отсутствовала. .

Э.2.3, Значение прозрачной зоны и оодемма ооцитов в процессе' объединения гамет и в связи с алло- и ксен''генными сочетаниями. •

Во взаимодействии живчиков с ооцитаыи - как с прозрачной зоной, так и с оолеммой (после освобождения ооцитов от прозрачной зоны), выявлены видовые различия. В некоторых межвидовых сочетаниях (например живчики быка и осцнты крольчих, свиней) налипание живчиков на проэрач**гую зону не происходит, а при контактах с прозрачной зоной живчики обездвиживаются. В других сочетаниях живчики налипают на поверхность прозрачной - зоны', сохраняя при этом подвижность жгутиков.(кролик - баран, корова -кролик).

Отмечены видовые особенности во взаимодействии живчиков с

оолеммой ооцитов, освобожденных от прозрачной гоны.

Выло выяснено, например, что живчики быке не налипают на оолемму. беэзонкых ооцитов кроликов, а при случайных контактах с оолеммой живчики теряют подвижность. Вместе с тем, в суспензии живчиков быка происходит разрушение (лизис) оолеммы ооцитов крольчих. При этом было выяснено, что фактор, инактивирующий живчиков быка при контактах с оолеммой ооцитов кролика, исходит от оолеммы,' нст не иэ ооплазмы.

Степень устойчивости оолеммы беэзонных ооцитов крольчих к лизису в суспензии живчиков быка зависит от степени физиологической зрелости ооцитов. Было выяснено, в частности, что оолемма ооцитов, созревших под влиянием обработки гонадотропинами СЮС, более устойчива в сравнении с оолеммой естественно созревших ооцитов (таблица 8).

Таблица 0.

Продолжительность сохранения целостности оолеммы ооцитов ■ • "крольчих в суспензии живчиков быка в связи с гормональной стимуляцией фолликулогенеэа.

Группа опыта . Число Ооцнты, сохранившие оолемму (X)

ооцктов

До 10 »от. От 10 до Свыше

' - . ' ^■ ■ - - , *Л ■ ' 40 минут 40 МИНУТ

Естественный фоллн-

кулогенез , 60 • -18 4

Стимулированный , * ? ' -

фолликулогенез • 60 Эв*7 -кУ; ■ 22 ; ^г

* - Р ¿0,001, :

- .' Дачные таблицы В показывают возможность использования теста устойчивости оолеммы безэонных ооцитов в суспензии живчиков для определения степени физиологической зрелости ооцитов, что мажет иметь значение для решения отдельных задач С)ютехнологии. * '•• 3.2.4. Изучение влияния анти-ооцитных и анти-живчиков«*

антител на оплодотворение и результативность осеменения. ■уу, " .Опыт: гю ,, оплодотворению ; вне организма проведен С ^использованием..'трубных ^ (добытых из яйцеводов поел» овуляцги):

- lí) -

ооцитов (тайл.9).

Таблица 9.

Влияние обработки ооцитов крольчих антвооцитной сывороткой но оплодотворение вне организма.

. Группа опыта

Число ооцитов Иэ них с признаками оплодотворения

Ооциты предварительно обработаны антисыворот-шй к ооцитам Ооциты баз обработок

1Б 11

О 2

Как видно иэ данных таблицы 9, контакт ооцитов с антителом к оодатам препятствует оплодотворению вне организма.

Чтобы выяснить, как влияет присутствие в крови самок антител к ооцитам на оплодотворяемость в организме и на плодовитость) в крольчихам антитела к ооцитам были введены в кровоток на разных этапах по отношений к . овуляции. Часть крольчих была убита для эыаснеиия реакции ооцитов на введенную антаооцитвую сыворотку и определения оплодотворяемости, а часть оставлена на окрол.

Выло выяснено, что уже через 4 часа после введения в кровоток антитела иммунной антнооцитяой сыворотки достигают мишениt филируются ка поверхности прозрачной зоны как фолликулярных, так и трубных ооцитов. Вместе с тем/ у крольчих, убитых на 2-3-й день'После введения антисыворотки и осеменения, все ооциты были .оплодотворенными (29 эигот у трех крольчих), а 2 крольчихи, оставленные на окрол, онролились, принесли 19 киэдх нормальных крольчат.

Следовательно, присутствие в крови самок антител к ооцитам не может служить причиной отсутствия оплодотворения у кроликов,

Ькло проведено исследование по выяснению 'наличия в крови поров аутоантител к ооцитам, как возможной причины многократных безрезультатных осеменений, В совхозе "Кокствнтиново" Московской области у 1в коров, безрезультатно осемененных по 5-8 раз, исследовали сыворотку крови иа наличие в пей' аутоаятител к ооцитам. Ни один из предложенных нами тестов не показал присутствия.антител к ооцитам в крови проблемных коров.

Следовательно, наличия аутоантитед к ооцитам, как причины нарушений воспроизведения в скотоводстве, либо нет вовсе, либо она имеет несущественное значение.

Выло выяснено, что живчики, обработанные иммунными

сыворотками к живчикам, вне организма теряют способность вступать в контакт с ооцитами. Вместе с тем, исследования показали, что нет достоверной связи между титром естественных спермагглютияинов у воров {совхоз "Путь Ильича" Московской обл.) и результатами осеменения] вариации величины титра спермагглютининов 'были одинаковыми у коров разного физиологического состояния и .одинаковыми с живчиками разных быков.

Следовательно, присутствие в организме самок антител к живчикам, в частности спермагглютининов, ' не мелет свидетельствовать о неблагоприятном прогнозе для воспроизведения, ; который при прочих равных условиях обусловлен состоянием . гемато-гекиталькых барьеров.

3.?.5, Иммунобиологические свойства гамет и избирательность/ оплодотворения.

■ •„ . . Анализ выявленных особенностей иммунобиологических свойств ооцитов, живчиков и их отдельных структур (прозрачной зоны, оолеммы, акросомы живчиков) дает нам основание сформулировать свою научную ' гипотезу возможного механизма реализации > избирательности оплодотворения, ш всходим при этом из того, что . активная роль в этом процессе принадлежит ооциту, а реализуется .'через посредство различных его структур (см.схему), '

_ нлружмол)

- -«о* ПЗ

- бьпер в№ГТ«КН*Г0

ПЗ

—: 6Армр оомк^Ы

^ ■..'.' .'• К. г'.. ' ■. ::■■.*

1 '/л * ^ ' <: ^ .'•■

Рис.!. , гипотетического мсхАнмьмА . , '

. МАлЮДЦМИ ИКИРАТЛЛЬМРСТ* ООЛОЛОТвОр«НИЯ у а в.-х^,' V

' 1 Таким образе«, первым селективным барьером на пути живчиков представляется наружный слой прозрачной зоны ооцита, На этом уровне происходит, по-видимому, видовой отбор: живчик» самцов другого вида преодолеть его не могут.

Вторым барьером на пути многочисленных живчиков, одновременно взаимодействующих с ооцитом, представляется внутренний слой прозрачной зоны.- Здесь может происходить предпочтительный отбор, обеспечиваться условия наибольшего благоприятствования для прохождения живчиков с той или иной структурой зритроцитных антигенов (а возможно и антигенов других систем, в частности систем гистосовместимости).

Третий барьер «а пути живчиков, которые скапливаются в большом числе в яерпвителлиновом пространстве ооцита, может представлять оолемма ооцита. ¡'(Сак показали наши исследования, оолемма может .в отношении одних живчиков оказывать иммобилизирусщее действие, в отношении других монет быть более совместимой. Критерии предпочтения в этом случае пока не выяснены.

Э.З. ИЗУЧЕНИЕ ФАКТОРОВ, ОБУСЛОВЛИВАЩИХ ЭМБРИОНАЛЬНУЮ ВЫЖИВАЕМОСТЬ, И РАЗРАБОТКА ПРИЕМОВ ЕЕ УЛУЧШЕНИЯ.

• 3,3.1. Изучение значения местного иммунного ответа половых путей для воспроизведения.

Жиэчики, как носители чужеродных для самки1 антигенов, продвигаясь по ее половым, путям и вступая в зону действия, иммунекомпетентных«клеток, вызывают адекватный иммунный ответ, в том числе и местный. . '

Источником чужеродных отцовских антигенов могут служить, вместе с тем, структуры и ткани эмбриона.

Примененная нами • модификацда метода непрямой

иммунофлуоресценции в организме показала, что внтитела К отцовским антигенам, будучи нарочито введенными в кровь матери, выявляются уже на структурах бпастомеров ,4-клеточных зигот. Вместе с тем, пока они одеты прозрачной зоной, они не имеют прямого контакта с клетками иммунной системы матери. На более поздних сроках, в частности на 9-10-й день (у крольчих), мы обнаруживали их на поверхности трофобласта.и амниотической оболочки, но не на тканях эмбриона, что может- быть свидетедством . в пользу

■;/'; - гг.-

иммукопротективного еначения внезародьшевых эмбриональных оболочек.

Огшт по изучение влияния местного иммунного ответа прловых. путей на осеменение и эмбриогенез!, иг его значения для воспроизведения был проведен нами на .свиньях. Свиней осеменяли искусственно, вводя им по Б-7 млрд. живчиков в объеме 100 мл разбавленного семени, затем убили их в- разные сроки после осеменения, исследовали наличие антител к живчикам и эмбрионам (таблица 10).

Таблица 10.

Значение Я1ГА с антигенам» живчиков и эмбрионов в сьяороп» крови и маточной слизи осемененных свиней.

Физиологическое Число Титр РИГА я сыво- Титр РПГА В маточ-состояиие евино- маток ротке крови ной слизи

..маток ■ ' '

К живчи- к бласто- к живчя- К Сласто-кям цистам ■ кам цистам

День охоты 18 16(8-32)10(8-32) О О 7-й день-после

осеменения Я в Зв(в-в4) О, . О

14-й день после ;

осеменения 10 13(4-32) 1в(8-в4) 3 . 4

..." : Примечание; - в скобках показаны вариации.

Как видно иэ'таблицы 10, антитела я живчикам и бластоцистам появляются в маточной слизи лишь к 14 дням после осеменения, - причем антитела к живчикам - класса иммобилиэинов. В сыворотке крови к этому сроку антител такого; класса не выявлено, что : говорит об их местном синтезе, на уровне слизистых покровов я половых путей. *

• Для выяснения значения специфической-антигенной стимуляции л половых путей живчиками нами был проведен модельный опыт по .¿интрадеритонеальному осеменению «фольчих, когда дозу семени >(60-70 млн.живчиков) вводили не во влагалище, а через прокол Сршкой стенки';. Живчики проникали иэ брюшной полости в яйцеводы, оплодотворяли ооциты. - Вместе с,тем, рождаемость была пониженной.

- £3

•1 '

Если же при такой ж« способе осеменения "мы дополнительно вводили убитык живчиков во влагалище (либо 'антитела к живчикам в кровоток), результат рождаемости существеЯйе>:тювысился (таблица И).

*ТяЯЛица 11. •

Влияние специфической антигенной стимуляции крольчих при . интраперитояеальнсм осеменении на имплантацию и рождаемость.

Группа опыта Для определения им- Дм определения'рож-

плкнтации даемости

Осеме- Из них с им- Осеме- Иэ них -ок^ нено плантацией нено .'рЙАМАссЬ

г» X n X

Кнтралеритонеаль-

нке осеменение до-

полнено введением

мертвых живчиков в 7 77,8*14 б ( 3 60±22*

Вез дополнитель-

ной стимуляции 13 6 61,6114 22 в 27J9*

* - Р ¿.0,1.

Как видно из таблицы 11, .дополнительная антигенная стимуляция половых путей крольчих антигенами убитого семени улучшила результат интраперитонеалького осеменения, ' .

Бичи проведены опыты по выяснению. возможности ул.чтения результативности осеменения' свиней мини-дозами семени при условии дополнительной антигенной стимуляции' матки антигенами убитого семени. Часть "маток осеменили мини-дозой семени (всего по г мл свежевзктого семени, т.е. по 280-300 млн.. живчиков с прямолинейно-поступательным движением), а других - такой же дозой живых , но с добавлением млрд.убитых (нагревание при +5П

град.Ц.) живчиков (таблица 12). *

- .

, Табл.12. Влияние добавки убитых живчиков к мине-дозв * живых на результативность искусственного осеменения свиноматок (комплекс "Сафоновский" Московской обл.)

, Варианты опыта Осеме- Опоросилось Получено поро-

• - нсно __росят:

'V'V' ■ 1 МЧТОК П -X .■. '

■ .;- , ■ ■. Всего На одну ■V матку

25О-300 мля.жгаых ..

■ живчиков х 3 \ 2 40+22» 18 в,0

260-300 млн.живых ■ , '*} • : > - - .''*

живчиков штос 7 млрд....!. ■■' ; г■ V .1' - ..-.

'убитых • 11 в 82+12* 116 12,7

,: - Р ¿0,05. ■ ■

Как видно иэ тайлицы 12, применение мини-дозы семени хряка (я 10-20 раз. ыеньпей в сравнении. с обычно применяемой при искусственном осеменении) поэоляет, при условии дополнительной, антигенной стимуляции антигенами убитого семени, получать нормальные показатели воспроизведения, что может * быть - перспективным в случаях необходимости более широкого распространения выдающихся генотипов хряков. .. ГД - ,3.3.2. Изучение связи состояния иммунореактивности организма ^ -'сямок с результативностью осеменения. К?учепие влияния иммунной системы самок на результативность ^.осеменения проведено с использованием модели искусственно \ вызываемого иммунодефицита. Кчихам в кровь вводили суспенэио .микрочастиц (размерами 1-3 микрона) инертного материала, в-частности карбоновых частиц "китайской" тужи. Этот прием вызывает подавление моно-нуклеарной фагоцитирующей системы*(ШС), нарушает .

1 слаженность кооперации клеток системы иммунного ответа..

'Наши,исследования показали, • что преимущественное поглощение; '.карбоновых частиц осуществляется легочными (альвеолярными) >*акро-V ' фагами^и.в меньией степени ~ перптонеальными. ■

Для изучения -влияния .искусственного . ихмунодефщита на • результат, бееменения . крольчихам . через сутки после осеменения

введи внутривенно по 4 мл 2,5* взвеси карбоновых частиц. Часть . крольчих оставили до родов, часть - увили на разных стадиях эмбриогенеза для определения эмбриональной выживаемости (таб.13).

' ТяГ'Лица 13.

Влияние блокады ШС иа величину и, структуру эмбриональных потерь у крольчих.

Группа опыта Число Среднее - Из них (а XX);

' самок число - ■

V; ' .. < ' эггот Дожили Погибли Погибли Погибли

т 1 до ро- до им- на стад, иа стад. -

- самку ждения плаятац. плацен- плода

1 . (0-8дк.) тации

..■"■-.■. Ч ' ■'' • <е-1адн.) ...

Блокада МФО 23 10,6 33* 23 22** 1? :

Реэ "обработок 39 ■ в,О . ■ 64* ; 23 " б»* \ ■'- в \

• / * - Р £. 0,09. ** - Р ¿0,05. -•..; ;

, . Данные таблицы 13 показывает, что эмбриональны« потери происходят и в естественных условиях , (до рождения доживают в4Х-зигот), однако в условиях иммунодефицита эти потери существенно возрастают. Так, если на , стации зиготы и бластоцисты (предлмплаитанионная стадия) и .' на поздней плодовой стадии величина пренаталъиых потерь в опыте и контроле -достоверно не различалась, то на стадии плацентацки величина эмбриояальной гибели под влиянием юшунодефицита достоверно повышалась. /Г.

3.3,3. Разработка приемов иммуномодуляции самок для предупреждения эмбриональных потерь., - Для уменьшения эмбриональных - потерь у крольчих. Оыла* . применена стимуляция иммунной системы с использованием.в качество иммуностимуляторов АСД-Ф2 (антисептик-стимулятор Дорогова, 2-я : фракция) и препарат "Митра", разработанный Букаровым Н.Г. (ВИЖ), представляющий полисах аридный компонент клеточных мембран'. . 'дрожжевых грибков. АСД вводили по 0,01 из на 1.кг массы,'

■ однократно, "Ннгру" - по 0,1 мл на 1 кг массы, дважды -..через 2 я -. ' " 5 дней после осеменения. : •*•,.•' ' ■ . ';/.•■•;• V.. -''• ''

;'В результате применения АСД до рождения дожили-'бвХ гягот ;. -

(против 64 в контроле, разница и» достоверна), от применения "Нитры" рождаемость составила вбХ, Улучшение результативности осеменений произошло в обоих случаях эа счет уменьшения потерь на стадии плацентации.

Была испытана возможность улучшения результативности осеменений коров с использованием приема иммуностнмуляцни. 8 качестве иммуностимулятора использована "Нитра", которую вводили внутримышечно) на 0-7-й день после осеменения, по Б мл маточного раствора, однократно (таблица 14).

ТаЗл.14.Влияние обработок коров "Нитрой" на результативность искусственного осеменения (эксп.хоз-во "Щапова").

Группы опыта Осеменено Из них стали стельными

коров от 1-го осеменения

* ЧИ"ЯО X

Иммуностимуляция 68 05

Без обработок (контроль) 668 232 41,5±2*

* -. Р ¿0,05.

Как видно из таблицы 14, препарат "Нитра" может ■ быть использование молочных фермах для улучшения, показателей воспроизведения.

В опытах по применению иммукостимуляции для улучшение воспроизведения у свиней "мы применили в. качестве иммуностимуляторе нативное неразбавленное свежевзятое семя хряков.

Через 3 дня после осеменения свиноматкам (основное стадо) вводили внутримышечно (в область шеи) по 2 мл нативного семени хряков. Учет результатов ' провели по отсутствию, перегулов свиноматок в течение 30 дней после осеменения.

Из 40 маток, подвергнутых иммуностимуляции, не повторили течку 34 (85Х), а в контроле из 028 маток в повторную охоту не пришли 353(58Х),при статистически достоверной разнице(Р ¿0,001).

Енло предположено, что состояние иммунодефицита самок может быть сопряжено с уменьшением- уровня гемоглобина. Дня проверки этого предположения был проведен анализ результативности осеменений у кроликов и коров в связи с уровнем гемоглобина в кх

крови. Было выяснено, в частности, что у крольчих с концентрацией гемоглобина свыше 11,5 т/Х уровень рождаемости был 72,4Х, а при содержании гемоглобина менее 11,6 т/Х -всего 60* <Р ¿0,1).

Среди коров, в крови которых содержалось , свыше 11 г/Х гемоглобина, нарушения воспроизведения отмечены лишь в ЮХ случаев, а среди коров с содержанием гемоглобина менее в,5 т/Х таких коров было 49? (Р ¿0,01).

Э.Э.4. Степень завершенности послеотельных преобразований рг^производительных органов в связи с воспроизведением.

3.3.4.1. Динамика послеотельиых изменений морфологических параметров матки.

Анализ результативности искусственного осеменения коров в связи со сроком его проведения после отела, проведенный во многих хозяйствах разных зон страны, показывает, что * поспешные осеменения »осле отела (в течение первого же месяца) дзет низкий процент стельности. По мере отсрочки первого осеменения результативность осеменений повышается (таблица 15).

. ТпГл.1б.Результативность искусственного осеменения коров в связи со сроком его проведения ("Щапово", 1903 г.).

Срок 1-го Число Из них;

осеменения коров

после отела Стельные от Пере- В т.ч. Доля коров ВЫ-

1-ГО осей. гуля- много- с межтечк. С ра-

п X ли кратно интервалом ке- .

(*> более 24дв. . вакс

'(*> • ' (X)

До ЭО дня . ге- ,б 18+7** 23 • 7Э,9±9* 47,а 14,3.

С 31 по 45 лю 41 37 69 60,916 62,1- ; 13,5

С 45 по 00 15а 70 45±4** ее 53,5+6* 40,5 8,3

С 61 ПО 90 226 77 34 ..149 59,714 40,3 . ■ 8,0

Позже 90-го 302 128 42 174 60,314 33,3 У 17, г

В среднем * 662. 321 39,0 661 59,7±2 42,7 * • " - • 12,4

* - Р ¿ 0,03 *. *' ' • - Р ¿0,001. -

Как видно из таблицы 16, приемлемую результативность грлучают лишь тогда, когда первое осеменение проводят не ранее 45-го дня после отела: От ранних осеменений телятся всего 16Х коров, остальные повторяют течку, причем большинство иэ них многократно, а 14Х остаются яловыми и выбраковываются.

Дня выяснения причин низких показателей эффективности ранних, послеотельных осеменений мы проведи изучение динамики изменений функций яичников после отела (таблица 18).

Таблица 16.

Динамика послеотельных изменений фуикциональ кого состояния яичников (зксп.хоз-во "Щапово").

Срок после оте- Число коров Из них с яичниками: Ла (в неделях) (иаСдюдеиий!

С желтым С parTv^jîM Свободными . телом фолликулом

1 6 0 0 3(100)«

г - • . 34 . . 0 10(29) 24(71)

: ъ . 68 4, 17(29) 37(64)

4 73 13(19) 23(38) 32(43)

, ^ в 48 ■ 12(25) 12(26) 24(60).

. з ■: 23 6(22) 9(39) 9(39)

-'■ 7 17 4(24) 3(36) 7(41)

: 8 • " 10 1(10) 2(20) 7(70)

*.- в скобках - процент к числу наблюдений.. Кэд видно иэ данных таблицы 16, персистенции желтых тел беременности не выявлено,, а у 29Х коров уде к концу 2-й недели появлялись растущие фолликулы, к концу третьей недели уже обнаруживали овуляцию (желтые тела цикла), т.е. фолликулярная функция яичников восстанавливается относительно быстро. -

вместе с тем, восстановление морфологических параметров матш отстает от темпов возобновления фолликулярной функции яичников (таблица 17).

гэ ~

7ввл.17. Динамика послеотежъного восстановления морфологических параметров матки у коров ("Щалово", ф. Песье).

Сроч после Число на- Из них: ■ -

■ отела блпдений : ■ ■■

(недели) (коров) С увеличенными ро- . С увеличенной

• < гами матки шейкой матки

' ' '< ЧИ'.'ЛО * число ■г

1-. 10 10 100 10 100

г . 39 , зв 100 '36 100 *

3 59 ■ . 39 ез 67 ' ев ..

4 73 17 23 ,67 78

Р ■ у 4в б 10 23 46 '

6 22 ' 1 .6 ■ 45 '

7 17 0 0 б 29

8 ю ■ ■ 0 0 2 20

Как видно из таблицы 17, у большинства коров рога матки . приобретает размеры, характерные для небеременного состояния, лишь к концу месяца после отела, а шейка матки в темпах инволюции отстает от темпов послестелького восстановления размеров рогов мчтки-

Э.Э.4.2. Посяеотельная_трансформация ■ Гистоструктур

эндометрия. . . *

ПОКРОВНЫЙ ЭПИТЕЛИЯ эндометрия у глубокостелышх коров однослойный) цилиндрический и высокоцилиидрическкй, ■ сплошь покрывает всю поверхность эндометрия, причем цитологические1 характеристик» беременного к иебеременкого рега одинаковы.

В первые'часы после- отела уже видны признаки ослабления связи клеток покровного эпителия с базальной мембраной, ■ а ка отдельных участках начинается его отслоение.

. К 3-5 дням после отела клетки покровного эпителия в массе отторгаются от базальной мембраны, в строке много лейкоцитов,, •преимущественно сегменто-ядерных нейтрофилов,

, к 10-13 дням покровный эпителий на большей части поверхности. .эндометрия'оказывается ' отторженкым,// слущеншде, .^. тнфильтрацкя .

форменных элементов крови продолжается, среди клеток белой кроен преобладают лимфоциты.

К 80-23 дням после отела, ко времени проявления первой течки, начинается резпителизацнн эндометрия: он покрывается однослойным эпителием с цилиндрическими клетками, богатыми протоплазмой.

К 00-35 дням покровный эпителий становится 1,5-2 -рядным, вместе с тем инфильтрация лейкоцитов в строку эндометрия и сквозь покровный эпителий я полость матки остается значительной.

К 50 дням покровный эпителий преобразуется в кногорядный с высоковдлиндрическими клетками, а инфильтрация клеток белой крови в строку эндометрия и через покровный эпителий прекращается.

МАТОЧНЫЕ ЖЕЛЕЗЫ в поздние сроки стельности достигают максимального развития: диаметр их поперечных срезов составляет 260-300 микронов, а в среднем равен. 153 микронам. Отчетливо заметны признаки активного секретирования, причем одновременно присутствуют все типы секреции*, и мерокрингой, и апокринный, к холэкринкый. Просветы желез заполнены гранулами секрета, фрагментами цитоплазма и ядрами клеток железистого эпителия, встречаются также клетки крови, что в совокупности и составляет эмбриотрсф, "маточное молочко", которое плод испольэует для роста и развития. Аналогичные картины активного сегрегирование отмечаются в железах и рсга-плодовместнлища, и свободного рога.. -

Б первые 3-S дней после отела протоплазма клеток железистого эпителия уплотняется, в ней появлнются точечные гранулы, ядра перемещаются к апикальному ' полюсу, четко вырдаен процесс фагоцитоза. Заметно качало отторжения железистых клеток, выполнивших свою змбриотрофную функцию я ставших для.организма ненужными, лишними.

В течение Е-й недели после отела процесс отторжения железистого эпителия продолжается, и уже к . 10-13 дням в большинстве желез эпителиальные клетки отторгнуты, просветы желеэ заполнены детритом. Цитологические изменения маточных желез происходят синхронно а обоих рогах матки.

К £2-23 дням после ' отела в эндометрии зарождаются новые железы с регенерированным железистым эпителием. Часто встречаются картины клеточных митоэоа, вместе с тем признаков функциональной активности, секретирования желез к этому времени еще нет.

К РО-35 дням после отела число срезов желез на 1 мм ка. поперечного сечения рога матки заметно возрастает - как вследствие возрастающей извитости желез, так и начавшегося дихотомического их ветвления. Явных признаков секреткрования желез еще нет.

К 50 дням после отела ветвление и извитость маточных желез достигает максимума, число срезов желез на 1 мм кв. увеличивается вдвое по сравнению с.предыдущим сроком и достигает 68. Полость желез уменьшается вследствие увеличения высоты железистых клеток, которые становятся богатыми протоплазмой, - приобретают бокаловидную, цилиндрическую и высокоцилиндрическую форму, с ресничками на апикальном полюсе, с активными признаками секретирования. Этот срок можно считать временем возобновления матки к новому плодоношению.

3.3,1,3. Изменения бактериальной заселенности полости матки

коров после отела, В процессе отела происходит : заселение полости матки микрофлорой, в особенности при слабой резистентности организма и слабом нервно-мышечном тонусе.

В 1972-73 гг. . на ферме к-эа им К.Маркса в Молдавии мы изучили динамику бактериальной заселенности полости матки после отела (таблица 18).

Твкл.16. Динамика микробной заселенности полости матки коров■ в период течки. ■

Порядковый Число Из них в сроки после отела:

ногг»р течки коров 1 " ' * • ' " " -■ ' ■ '.

Дп 30 дней С 31 по 60-й день

' ; ' ■ Вото Из них без Всего Из них без

■ " П[>"б микробов ' проб микробов

/ о х • п х

, Пррвая 30 : 24 8 '3348* : 64 -.67- Л ■

'Вторая либо ■ .С-'-;1. -■'■.■ ■' . .

треть* течка - 18. " - - Л 18 16 88+8*

* - Р ¿.0,001.;

Из данных твблтв* 18 следует, что для освобождения полости • матки от микрофлоры имеет значение как гремя, прсаедяее после отела, так н порядковый номер течки. Практически «а полное . освобождение матки от микрофлоры происходит ко времени 2-й либо 3-й течки, к 60 дням после отела.

Тштем образом, систематизируя динамику морфо функциональных, • гистологических и эмбриологических изменений воспроизводительных органов, можно предложить следующую периодизацию н этапноеть возобновления готовности к новому плодоношению1

-на первом этапе, завершающемся к 16-24 дням, происходит возобновление фолликулярной функции яичников, -1

- на втором - к* 30 дна после отела, происходит восстановление матки по размерам до состояния, характерного для нэбеременной, •

: - на трэтьем - к 45-50 дням, происходит обновление структур железистого эндометрия и начинается синтез эмбг.ротрофа маточнши железами, '

- на четвертой - к 50>В0 дням, происходит освобождение метки от микрофлоры п завершение готовности ее к новому плодоношению.

3.4; ВОСПРОИЗВЕДЕНИЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В СВЯЗИ О [К.'РАЗЕИНОСТЫО ПОЛОВОЙ ДОМИНАНТЫ И СРОКСЫ ОСШЕНООЯЛО ОТНОШЕНИЮ (С сеулвдии, 3.4.1 • Причины анзструса в связи с особенностями

традиционной системы" выявления охоты У коров. Исследование проведено в 1986 г. с использованием поголовья ферм зкеп.хоз-ва ВИЯа "Щапово" и ссзхозоз "Знамя Октября" и "Путь Ильича" Подольского района Московской области.

Коров, у которых по 2-3 месяца не отмечадзеь охота, исследовали на предмет выяснения причин анзструса. При этом с использованием метода трансректальной пальпации регистрировали в яичниках присутствие зреющих фолликулов, четко выраженных желтых тел либо кистоэных признаков. По величине и наличию либо отсутствию фолликулов и желтых тел ставили диагноз гипофункции.

Распределение коров по причинам анзструса представлено в •таблице 19.

Тпг>д.1в. Распределение коров с-эа "Знамя Октября" ■ и ф.Песье ("Иапово") по причинам аяэструса.

Причини шэс труса Коровы фТэна- коровы фермы .. Всего ' ма Октября" "Песье" ■

п X п X п Х

ГИЛ'^ККЦИЯ яичников в Б,7 в 14,в 12 8,3

Эндометриты 9 е,в . - ■ - ' ■ . ■ ' 9 ' 6,1

Хромота 1 1,0 2 •4,9 , 3 2,1

Лх>тсальная киста ■ .3 2,6 -' 1 2,4 ' 4 2,7

Фаг щкуднрная киста 4 3,8 - ' ^ Т ' ' 4 2', 7

Пр^ттуск охоты во' 57,2 19 40,3 , 79 54,1

Персистент.желтое тело 9 8,6 - : 9 6,1

Ьр^ очееидн.причин 13 12,3 13 31,7; 26 17,8

Во» го 105 100,0 41 100^0 149 100,0

Из данных теблкцы 19 видно, что основная доля коров, долгое время остающихся неосемененными после отела, приходится на тех, у которых охота и овуляция фактически были, но они остались невыявленными, охоту у них пропустили.

Длч того, чтобы повысить объективность в таксик важном эвене системы воспроиэведния, как выявление охоты, мы попытались найти такие физиологические параметры, изменение которых происходит параллельно формированию половой доминанты, а учет этих изменений допускает применение объективных . физических измерительных устройств. В качестве таких параметров были выбраны три; ./. . ..

изменение степени двигательной активности» V.'■' -

■! , -" изменение внутривлагалидной температуры, ■, ^ "■ '

..г- - изменение удоя, /...V; ч

Учут количества движении коров провели 'с использованием шагомеров, которые закрепляли на шхсневом суставе иоров. г..

Анализ показав, ■ что при свободном содержании (пастьба или-, моцион в загоне^ степень двигательной активности ' коров* вЛ состоянии охоты превышает аналогичный показатель у коров вне 5 охоты в 1,6-2 раза. Так, при пастьбе в течение 4;часов короаы »;

ого» "ввзагажн" m .11083 патов, в ese аш - по E931. При ссдерхаяия в эагоее в течение 3 часов аналогичны» показатели бмза, соответственно, 4144 и 2071.

При содержанки в стойле роэишу 8 пжаэааяях хагоиероо у корсга a more к вне охоты в« бшо.

5нутрвмагахгг)1аа температура у ыжекэпитащлх в продолжение полового цгкха изменяется: а (шшушрнуп фазу, с угасанием Ерогестзгеваан функция желтого тела она уменьшается, а посла сяуллцял к июю функционирования желтого тела г повышается.

Проведении^ вамп исследования . погнзал:, что по динамике irw hi. uní вяутрявлагалвчяой . температуры шею судип» о frremи н1 ичеснш состоят* коров. Cuso выяснено, в частности, что у пора* с ярко-выраженной ценовой доютзятой я овуляцией происходит заметное уменьшение внутрявлагаияргай температур« - на С,Э гред.Ц я более. ЛоЬле овуляция виутрнцвг&хгаЕная температура лгдшяаетгя, достигая Оаэалвяого уровня.

Стесеяь сядч'няж вяутршагахицяой тегшерзтуры оказалась в сххэя со степень» выраженности соловой доминанты: у коров с хсршо афэяа>шм пожавши рефлексами уровень снижения вше, у яцив со гмС(1Ш[Н1яши1Н орюкаквя, которые ве stuvjuaici оеувщяеб. свяжем» температуры составило 0,2 град.Ц я менее.

Сяожевке удоя у мэров в состояния охоты - ' факр. оОфшлисмык. Вместе с тем,' следует уточнить, . как долго" грваииид эта лактгцяоваая депрессии, как связав уровень <*няврияя удоя со степеяьл вдажеявоств половой доминанты, как эти щ»М(нхи cooTHodtim во времен* с моментом овуляция в разные сезам года.

Црааедешз» вами исследования показали, что ярко-выраженная наводни доминанта сощювсядается более чем двукратнш снижением удав (в сравнения с удоем за соответствующую дойку г предадуиме див), прячем скяхевве это отмечается,только за одну какую-либо Хавку: утреннпо, обеденную Л1»5о вечернюю. В последущуо дайку УХРя воостаяавигеаетск я* даже может суммироваться, так'что если учитывать общи удой за сутки - заюпых колебаний можно и не

Шло-выяснено также, что в зимний период у большинства коров «тернах между ыоментсы снижения удоя я временен ; овуляции составляет от 25 до Эв часов, а в летний период - от 12 до 24

чссст.Графически связи мезду изменениями изученных параметра» к форыироаалием половой домшшвты отражены ва рис. 2.

Тапм образом, еехя техническая Саза лозваюгг дцяскиц учет к измеряйте в дкяаато изученных фягямстячесияя сарметрл, Судет возюшиств - тыьио еря одвонременжа» мтиомизии учете всех трех параметров - ергениэсзая. «этекаткпехваету» систему выборки коров в шщс.

"S-4.Z. ОсоОряиости овулясяж у коров в связи с ига.

Кручение времен* сгуляцяи у коров со отгоеенм» к ка*кту выявления прязвзгая течгая либо скота срет-гево какя в К91-92 гг. ва фермах черко-пестрсго сшта совхозов "Saas ОшЯщ" - я "ХУп йлькча" цэсталигкой сйлзсти.

В ctckjobwh перпс-д герое содержали яа цеояэк, с радетм нерегуляркъм ыошкики в эагояад, для осемекеяхх карса еггйхрахя'зо признака* течки ш возоу^веяия.

В strrsee время кггров воасат, вочм> сакфзп в кршдд-ка щжгязи. Для осеменении отбцзаяя ш ердаяакам ре£хлса. яеоойвтаоюстя.

о ершах овуляция по опоят к течкн либо ехстм представлены в таблице 20.

Tcdi.ZO. Ратертяметж щха по срокам свулжцжн во к ысменту выявления течки дпбо охоты.

Пг-рмод Признак*, Число Кэ них с нитервалэм от í^f ©*. по котср. гсров вшюпи тетя хибо omni д-члд ortipea ещишш (ше.): .-. "

ВЧЛЭ 3Q

До 12 1Э-24 . 23-33 37-43 43-00

П .1 - I» 1 П , I П I

СгаЁшшя Течка ÖS* - 9 13 20 2Э 22 S2 12 13 -

Сгийхонт Охота ЗЭ** 1 3 10 30 15 45 2 в Д З " Rar-гбхед. Охотз 69*** 3 -3 00 63 17 1Э ; 45> 3 3 -

* |Щ. . ^____ " ' | | !■■ ■ ■ | | ИИ | Г' | | | | ' ' |' | " II "|||" " |

- * - у адвсяя кореш гэ es Солхвхул подвергся атрезяя,у 4-х - - : гапггогжжу перерсязеки», ^

** ~ у 2-х гаров нз : ЗЭ-х овуднщя - отсутствовала, \'у 2-х

\ .

Рис,2, Изменения двкгАгелыю* лкя/шгтх, вмггтиылщщиоЛ

ГЕНПСРАТУРМ И УДОЙ У МЙО& в СвЯЗ* С <Г>С?МР0ВАНЧ£М ЛОЛРЧОЙ ДОМИНАНТЫ

- зе -

фолликула трансформировались в кисты,

■ - у одной из вв коров фолликул трансформировался в кисту.

Ка* видно из таблицы £0, - динамика овуляции в разные сезоны года различается а зависимости от того, что брать за точку отсчета.

В УСЛОВИЯХ ПОДМОСКОВЬЯ в стойловый период, при отсчете от момента обнаружения течки либо возбуждения» в первые 12 часов овуляции.не было ни у одной коровы. В следующие 12 часов овуляция отмечена у 13* коров, у 29* коров она прошла спустя 25-36 часов с момента обнаружения признаков течки, у 32Х - через 37-48 часов, а у 18* - только через 46-60 часов.

Динамика овуляции в пастбищный сезон существенно отличается от того, .что наблюдается в г«мне-стойловый период: у 71* корсв овуляция проходит в промежутке от 12 до 24 часов с момента выявления охоты (признаков рефлекса' неподвижности) и лишь у 91 коров она осуществляется - погже зЬ часов*.

3.4,3. Сравнительное изучение однократного и двукратного осеменения коров в связи с сезоном года.

Если принять за аксиому много раз исследованные данные о времени сохранения оплодотворяющей способности живчиков быка в . половых путях коровы, а именно срок 24-30 часов, то о учетом особенностей овуляции режим осеменения в стойловый период следует скорректировать по сравнению с тем, что записан в действующей инструкции по искусственному осеменению коров и телок (издание 1988 Г.). -

С учетом выявленных особенностей овуляции в эимне-стойловый .период следует проводить двукратное осеменение, причем первое -через 10-12 часов после обнаружения признаков течки либо возбуждения коровы, а второй раз - через.20-24 часа после первого.;

В пастбищный период можно обходиться однократным осеменением, есля его проводить вечером того дня, мсгда выявлен рефлекс неподвижности.

Для проверки такого режима мы провели сравнительное ■ испытание однократного и двукратного осеменения, данные которого" приведены в таблице 21.

it'^yKT iff T'fi' rw цун^дчи Я Д

с cexn HKS , 193ДО7 гг. J

H<jlfM¡»tffff ПТТ yiji^nHBiy i

Чх-да Еэ Ш X Чисто bu X

кия стаж. мщ сшн.

or 1-го ох 1-го OML

{с uCpa во май) 204 114 E5.0£3* SO 37 74t«* Детв^- mi

(С мае BD ош£{») as £5 33 20 (0,б1Эм

Б сргкявж zas 1вэ ea.4i3—' вз ет еэ.вгб**

- - Р ¿-Q.C2, *.-p¿0,l

к» тяПлпзд ZI, двукратно»

оерофвпм джугратжку, то я ендаеу

несудественное значение.

7. Присутствие в организме самок спермаггдютияюгов не может^свидетельствовать о неблагоприятном прогнозе для воспроизведения, который при прочих равных условиях определяется состоянием гемато-генитальных барьеров.

8. Выявленные нами особенности иммунобиологических свойств ооцитов и их отдельных структур имеют значение в осуществлении избирательности оплодотворения, а именно! наружный сдой прозрачной зоны выступает селективным барьером для предотвращения межвидовых объединений гамет, внутренний слой -как барьер для живчиков с неподходящей для данной пары структурой эритроцитных антигенов, а оояемма - как еще один селективный барьер, дающий предпочтение одним, и препятствухшый объединению с другими живчиками по невыясненным пока критериям.

9. Процесс послеотельных преобразований в воспроизводительных органа* крупного рогатого скг.та, определяющих готовность самок * к - новому плодоношению, осуществляется в закономерной последовательности - к включает 4 этапа: а) возобновление фолликулярной функции яичников, б) восстановление размеров матки до состояния, . характерного для небеременных, в) обновление гистоструктур эндометрия и возобновление секреции эмбриотрофа маточными железами, " г) освобождение матки, ох» микрофлоры.

10.'Готовность к новому, плодоношении после отела определяется у крупного' рогатого скота степенью завершенности преобразований гистоструктур эндометрия, возобновлением производства эмбриотрофа маточными железами и освобождением матки от микрофлоры. Совокупность этих условий складывается к 45-50 дням после отела.

11. Отцовские антигены, в частности антигены, идентичные лимфоциты, выявляются уже у 2-суточных зигот ' на клеточных мембранах бластомеров. Антитела к отцовским антигенам эмбрионов, будучи нарочито введенными в кровь матери, фиксируются ,в первую очередь .на поверхности трофобласта и внезародышевых ободочек, не проникая к тканям плода.

12. Активное состояние иммунной системы самок в период осеменения и первые дни после него - необходимое" условие нормального эмбриогенеза. Блокада популяции мононуклеарных

фагоцитов вызывает угнетение иммунной системы у осемененных самок и снижение эмбриональной выживаемости.

1Й. Угнетение иммунной системы, вызванное блокадой мононуклеврной фагоцитирующей системы, сопровождается снижением уровня гемоглобина в крови животных.

14,-В ответ на введение семени хряка в матку свиней развивается местный иммунный ответ эндометрия, выражаемый появлением спермоиммоСилиэирующих антител в маточной слизи, изменением соотношения популяций лимфоцитов, в увеличении доли макрофагов в субэпителиальном слое эндометрия,

1 ES - Удовлетворительный уровень супоросности и нормальную 'плодовитость можно получать и от использования дозы семени, в десятки раз меньшей применяемой на практике, при условии одновременного введения в матку антигенов убитого семени.

16. Дополнительная антигенная стимуляция свиноматок > посредством внутримышечного введения цельного семени хряка повышает эффективность осеменения, достоверно уменьшая у них процент перегулов.

1?, При интраперитонеальком осеменении крольчих возможно нормальное оплодотворение яйцеклеток, ембриогенеэ и рождение потомства, однако такой способ осеменения сопряжен с пониженной эмбриональной выживаемостью. Предотвратить эмбриональные потери можно дополнительной стимуляцией крольчих антигенами убитого семени либо антителами к антигенам отца будущих эмбрионов.

19. Формирование половой доминанты у норов сопровождается усилением степени двигательной активности, снижением внутривлагалишной температуры и существенным снижением удоя.-Изменения,всех этих параметров поддаются объективному инструментальному измерению и учету и могут быть положены в •основу разработки автоматизированной системы выборки охоты у коров.

' 19. В зимний стойловый период овуляция у коров, определенная по отношению к моменту выявления, схоты, происходит в более-поздний срок в сравнении с овуляцией в летний пастбищный период.

feo. При осеменении коров в летний период однократное осеменение по эффективности не уступает двукратному.' 'v. ' , ■;■"

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ .1. Для распространения ценных генотипов

хряков-производителей можно применять 10-кратно-уменьшенную дозу их семени (против применяемой обычно в практике искусственного осеменения) с одновременным введением убитого семени менее ценных хряков. *

2. Для повышения результативности искусственного осеменения свиней использовать прием внутримышечной обработки цельным неразбавленным семенем хряков, вводя его по 2 мл в область шеи осемененных свиноматок через 3 дня после осеменения.

3. Для прогноза благополучия окролоэ или воспроизводительных способностей коров использовать определение концентрации гемоглобина в :ix крозя.

4. В условиях средней полосы России а летне-пастбищный период проводить однократное осеменение коров - вечером того дня, когда выявлена охота. 8 эимне-стойловый период применять двукратное осеменение коров в одну охоту, причем первое осеменение проводить спустя 10-12 часов после выявления признаков течки либо охоты, а второе - через £0-24 часа.

5. При разработке систедо автоматизированного выбора коров в охоте применить выявленные закономерности изменений таких физиологических параметров,. как степень двигательной активности, снижение удоя и изменение внутривлагалищной температуры. . ,

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Субботу А. Д. Особенности изменений половых органов после отела коров, //животноводство. -1974. -I. -С.41-43.

2. Субботин А.Д. Сроки осеменения ксров а связи с изменением ендометрия. //Вестник сельскохозяйственной. науки, 1974, -2. гС, 123-125.

:3. Субботин А.Д., Соколовекая И,И.,- Вронская A.B. к др. Иммунобиологические свойства ооцитов млекопитающих. //Доклады ВАСХНИЛ., -1977.' -8. -С.20-30.

4.. Соколовская И.И., Субботин А.Д. Иммунные свойства ооцитов млекопитающих я. связи с оплодотворением. //Иммунология репродукции.. Труды ; 4 Международного симпозиума. Варна, ИР Болгария. /Иэд-во БАН. ХЗофия." 1979. -0.386-399.

Б. Соколовская И.И., Горбунов В.И., Субботин А.Д. Эндометрий

коров, как важнейшая структура г емато-генитадьпого барьера. //Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения животных. Со.науч.гр.ВИЖ. /дубровицы, 1977. -ч,2, вьш.Э. -С.85-91.

5. Субботин А.Д., Соловьева Н,П. Действие вне организма протигоживчиковых антител на контакты ооцитов с живчиками. //2-й Всесоюзный симпозиум по иммунологии воспроизведения. Тез.докладов, /Москва, 1980. -С.29.

7.- Субботин А,Д. Оплодотворение вне организма - способ изучения иммунных1 реакций в системе "живчик-ооцит". //Тез.докл.2-го Всесосэн.симп. иммунол.воспроизведения. /М:, -1980. -С.149.

8. Субботин А.Д,, Соколовская И.И. Иммунобиофизические свойства прозрачной зоны ооцитов млекопитающих в связи с оплодотворением. //Доклады ВАСХНИЛ. -1961, -1 -С.24-25.

9. A.D.Subbotín, J.I.Sokolovskaya. Antigenic Properties of Mammalian Ovocytes and Fertilization. //Academia Sclentíarum Bulgarlca, Sofia./ Biología et Irrmunoloeia Reproduction is. 1982, -8. -p.22-26.

10. Александр Д. Субботин, Ирина И, - Соколовская, Иммунобиофизические свойства прозрачной зоны ооцитов и живчиков млекопитающих, //Academia Scientiarum Bulffarica, Sofia. /Biología et Inmunología Reproductlonis. 1983. -8. -p.64-87.

11. L,Ernst, A.Subbotin, Localization in gametes and the specie's peculiarity of the erytrocyte'a inmunogens. //Journal of Reproductive Iimmology. -1963 (suppl.). -p.59, ' s'

1?. Ирина И.Соколовская, Александр Д.Субботин, Сергей П.Везеико и др. Антигенные свойства гамет в связи с групповыми факторами, //Academia Scientiarm Bulgarlca, Sofia. . /Biología et: lummoloffia Reproductionia, -1963. -8. -p,21-25.

13. I.I.Sokolovskaya, A.D.Subbotín. Antigens of oocytes structures and sperms, capacltation in relation to in vitro fertilization. //Am. J.Reprod, iTOtunol.Hicrobyol. .'. -106G. y-v.7; -n.21 -p.49. . ■.-". '.' <'

14. Субботин А.Д., Таг Т.А., Соколовская И.И. Иммунные реакции млекопитающих на интраперитонеальное ■ осеменение. //Доклады БАСХНИЛ. -1884. -10, -С.32-34. '. ..,/; . •

16. Субботин А.Д.,/Соколовская И.И; V Способ определения

активности иммунных сывороток к ооцитам. Авторское свидетельство СССР на изобретение N 1216026. Приоритет от 11.01,1980. Зарегистрировано 01.11.1886 г.

16. Соколовская И.И., Субботин А.Д., Брояская А.В.. и Др. Методические рекомендации по иммунологии воспроизведения. /ВИЯ, Дубровицы. -1985. -78с.

17. Subbotln A.D., Oyvadis R.N. The ansvers of sow's Immune system en artificial insemination. //J.Reprod. Immunol. -I988(suppl.).-USA. -p.24.

18. Субботин А.Д., Соколовская И.И., Таг Т.А. Полноценность стимулированного фодликулогенеза у крольчих. //Доклады ВАСХНИЛ. -1987. -8. -С.35-38. -

19. Соколовская И.И., Субботин А.Д. Методические рекомендации по: приготовлению специфических антисыаороток к антигенам самца. /ВИВ, Дубровицм. -1987. -14с. .

20. Субботин А.Д., Таг Т.А. Местный иммунные ответ подового пути самок на осеменение, //кинология репродукции. Тез. докл. 2-ГО всесоюзн.симп. /Киев. -1987, -С.75-73.

21. Subbotln A.D. The local, iranune response of sow's endometrium on diluted semen in relation to farrow results. //4-th Intern.Congress of Reprod; Immunology. /Kiel, FRG, Julj^ 20-29.*.-1989. -p.281,

22. Subbotln A.0. Species zona pellucIda's and ovocyte's oolemma peculiarities. //Am. J.Reprod. Imunol.Microbyol. -1988, -v,16. -n.2. -p.58.

23. Subfcotin A.O., Sokolovskaya 1.1. Paternal antigens on rabbit tubal zygotes: and extraembryonic envelopes surfaces. //Am. J.Reprod. Immunol.Microbiol. -1988, -v,16, -n.2, -p.75,

24. Субботин-'А.Д. Оплодотворение у сельскохозяйственных мдекопитавшдк и иммунобиологические свойства гамет." //Воспроизводство и искусственное осеменение с.х.животных. Сб.Науч.тр.ВНПО, ВАСХНИЛ. /М: -I960. -С. 24-28.

2Ь. Субботин.А.Д., Зиневич Л.А. Предупреждение эмбриональных: потерь важнейший' резерв улучшения воспроизводства стада. //Воспроизводство и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. Сб.нзучн.Тр.ВШГО, ВАСХНИЛ. /М., -1990. -С.20-24.

20. Субботин А.Д, Особенности оплодотворения

сельскохозяйственных животных^ в связи с )ал*унобиологкивскими

-44-

I * > '

свойствами гамет. //Сельскохозяйственная биология, -1991. п.2. -01-66.

.27, Субботин А.Д, Оптимальная доза. //Свиноводство. -1992. -п.4. -С.20-28.

2в, Субботин А.Д,, Соколовская ,И,И, Практические рекомендации по улучшению результативности искусственного осеменения коров. /ВИЖ, Дубровицы. -1992. -22с.

28, Субботин А.Д, Пути улучшения результативности искусственного осеменения коров. //Зоотехния. -1993, -п.9, -С. 23-23,

30. Субботин А.Д, Особенности овуляции и развития зигот у каракульских овец, //Эоотехиня. -1996. -п.7. -С,28-30,

31, Субботин А.Д. Формирование половой доминанты у . коров, //Зоотехния. -190Ö. -п.10. -С.24-26,

Субботин А.Д,,- Голышев H.A. Специфическая и неспецифическая антигенная стимуляция иммунной системы как средство предупреждения эмбриональной смертности.у млекопитающих. //Современные проблемы воспроизводства стада с.х.животных, Тез.ваучно-практич.понфер. /Быково, Московской обл., РАМЖ. -1999. -С.111.

ЗУ, Субботин А.Д. Эффективность воспроизведения в связи со сроками овуляции и осеменения коров, //Закономерности и пути регулирования воспроизведения животных, Мнловановские чтения. Сб.научи.тр. /ВИЖ. -1997. -вып.68. -С. 16-17, .'

34, Субботин А.Д, Опоросы свиней от мини-доз замороженного семени. //Тез.научно-практ.конфер. "Эффективность развития свиноводства в современных условиях рыночной экономики"; /РАМК, П.Быково, Моск. обл. -1998. -ч,2. -с.39. . .

Зак.УТ76 Tip,100 »кч. 1,6 у.р.л. • Тип. ШИИ КПО "Луч" г.Подольск M.Q.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Субботин, Александр Данилович

Введение

1, ГЛАВА 1. ОЕЛОДОТВОРЯЕМОСТЬ ООЦИТОВ И ВЫЖИВАЕ-ЮСТЬ ЭМБРИОНОВ У МЛЕКОПИТАЩИХ.

1.1. Обзор литературы.

1.1.1. Оплодотворя емос ть ооцитов и эмбриоальная выживаемость у крупного рогатого скота .

1Л.2. Оплодотворяемость ооцитов и змбрио-[альная выживаемость у свиней.

1.1.3. Оплодотворяемость ооцитов и змбрио-[альная выживаемость у овец .£

1.1.4. Оплодотворяемость ооцитов и эмбрио-[аяьная выживаемость у крольчих

1.2. Результаты собственных исследований оплодотворяе-юсти ооцитов у сельскохозяйственных млекопитающих

1.2.1. Материал и методы исследований.

1.2.2. Изучение оплодотворяемости ооцитов у свиней

1.2.3. Изучение оплодотворяемости ооцитов у овец

1.2.4. Оплодотворяемость ооцитов у крольчих

1.3. Обсуждение.

2. ГЛАВА 2. ИММУНОБИОЛОГИЯ ГАМЕТ И ОПЛОДОТВОРНИЕ.

2.1. Обзор литературы.

2 = 1.1. Иммуногенность живчиков и ее значение в процессах оплодотворения.

2.1.2. Антигенные свойства ооцитов и их значение з воспроизведении

2.1.3. Иммунные свойства гамет и избиратель-юстьоплодотворения

2.2. Материал и методы исследований иммунных свойств чамет млекопитающих и их значения в оплодотворении -----.

2.2.1. Подготовка антигенного материала.

2.2.2. Приготовление иммунных сывороток к ооцитам

2.2.3. Освобождение ооцитов от клеток лучистого венца и эт прозрачной зоны.

2.2.4. Разработка тестоЕ для выявления наличия и определе-шя активности антител к ооцитам в жидкостях

2.3. Результаты исследований

2.3.1. Иммуно-биологические свойства и видовые особенноси прозрачной зоны ооцитов млекопитающих

3.2. Разработка способа определения активности иммуных сывороток к ооцитам

3.3. Особенности влияния на прозрачную зону ооци-ов млекопитающих специфических антисывороток, раститель-ых и животных гемагглютининов

2.3.4. Изучение антигенных особенностей ооцитов и живчи-DB млекопитающих в связи с групповыми факторами

2.3.5. Значение прозрачной зоны и оолеммы в процес-е объединения гамет и оплодотворения в связи с алло- и ксено-енными сочетаниями

2,3.8. Оплодотворение вне организма как метод исследова-ия значения структур ооцитов в процессе объединения гамет

2.3.7. Изучение влияния антиооцитных и антиживчико-six антител на оплодотворение и результативность осеменения

2.4. Обсуждение

3, ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ФАКТОРОВ, ОБУСЛОВЛИВАЮЩИХ ЭМБРИОНАЛЬНО ВЫЖИВАЕМОСТЬ, И РАЗРАБОТКА ПРИЕМОВ ЕЕ УЛУЧШЕНИЯ.

3.1. Введение.

3.2. Изучение закономерностей послеотельных измене-ай воспроизводительных органов у коров.

3.2.1. Литературный обзор

3.2.1.1. Динамика функциональных изменений половой ястемы коров после отела.

3.2.1.2. Последовательность и особенности послеотельjíx изменений матки коров.

3.2.1.2.1. Изменения размеров матки.

3.2.1.2.2. Регенерация гистоструктур эндометрия

3.2.1.2.3. Динамика послеотельных изменений бактериальш заселенности матки у коров

3-2.1.3. Эффективность воспроизведения коров в связи ) сроками осеменения после отела

3.2.2. Собственные исследования

3.2.2.1. Материал и методы.

3.2.2.1.1. Изучение динамики послеотельных изменений морфо-функционального состояния воспроизводительных органов. ISO

3.2.2.1.2. Изучение гистоструктур маточной стенки

8.2.2.1.3. Изучение бактериальной заселенности полости матки

3.2.2.1.4. Изучение влияния времени осеменения после отела на его результат.

3.2.2.2. Результаты исследований.

3.2.2.2.1. Динамика послеотельных изменений морфо-функционального состояния воспроизводительных органов.

3.2.2.2.2. Послеотельная трансформация гистоструктур эндометрия.

3.2.2.2.3. Изменения бактериальной заселенности полости матки коров после отела.

3.2.2.2.4. Результативность осеменений в связи со временем их проведения после отела

3.2.3. Обсуждение.

З.Й/Результативность воспроизведения в связи с состоянием иммунной системы самок

3.3.1. Обзор литературы

3.3.2. Материал и методы исследований

3.3.2.1. Выявление отцовских антигенов на структурах ранних зигот, внезародышевых оболочках и тканях эмбрионов

3.3.2.2. Изучение местного иммунного ответа половых путей самок на осеменение . '

3.3.2.3. Изучение связи состояния иммунной системы с результативностью воспроизведения

3.3.2.4. Интраперитонеальное осеменение - как модель для исследования роли иммунной системы в воспроизведении

3.3.2.5. Изыскание возможностей улучшения воспроизведения свиней с использованием приемов иммуномодуляции

3.3.2.6. Применение иммуностимуляции для улучшения воспроизведения в скотоводстве.

3.3.2.7. Изучение связей состояния иммунной системы с концентрацией гемоглобина в крови самок

3,3.3. Обсуждение.

4. ГЛАВА 4. ВОСПРОИЗВЕДЕНИЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В СВЯЗИ С ВЫРАЖЕННОСТЬЮ ПОЛОВОЙ ДОМИНАНТЫ И СРОКОМ ОСЕМЕНЕНИЯ ПО ОТНОШЕНИЮ К ОВУЛЯЦИИ

4.1. Обзор литературы

4.1.1. Сравнительная результативность естественной случки и искусственного осеменения коров.

4.1.2. Особенности формирования и проявления половой доминанты у крупного рогатого скота.

4.1.3. Методы выявления коров для осеменения и уточнения оптимального времени введения семени в продолжение течки

4.1.4. Передвижение и выживаемость живчиков и ооцитов в половых путях самок млекопитающих

4.1.5. Время овуляции по отношению к охоте и срок осеменения в продолжение половой доминанты.

4Л.8. Результативность воспроизведения животных в связи с кратностью осеменения в одну рхоту

4.2. Материал, методы и результаты исследований

4.2.1. Изучение причин анзструса и выяснение эффективности традиционной системы выявления охоты у коров.

4.2.2. Изучение изменений биофизических параметров у коров в связи с формированием половой доминанты

4.2.3. Исследование особенностей овуляции у коров в связи с сезоном года.

4.2.4. Сравнительное изучение эффективности однократного и двукратного осеменения коров в связи с сезоном года .

4.3. Обсуждение

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунобиологические закономерности и совершенствование технологии воспроизведения сельскохозяйственных животных"

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Продукты питания животного происхождения в пищевом рационе людей составляют согласно научно-обоснованным нормам от 25 до 50 процентов потребности в протеинах и такую же долю потребности в энергетических веществах.

Вместе с тем, такая структура рациона в большинстве стран, в том чисте и в Российской Федерации, не обеспечивается.

Главная причина - это недостаточное развитие животноводства.

Многие факторы оказывают влияние на состояние животноводства: и политико-экономические, и природно-климатические, и научно-технологические , организационно-хозяйственные и демографические. В ряду других факторов, определяющих уровень развития животноводства, существенное значение имеет рациональная организация воспроизведения животных.

Метод искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, разработанный великим русским биологом И. И. Ивановым в 1900-1928 гг., а затем развитый и усовершенствованный академиком ВАСХНИЛ В.К.Миловановым, профессором И.И.Соколовской и их учениками (1928-1992) позволяет успешно решать проблемы воспроизведения и в количественных, и в качественных аспектах.

Еще в 1923 году, в разрушенной гражданской войной и иностранной интервенцией России, И.И.Иванов, исследуя проблемы искусственного осеменения сельскохозяйственных животных и говоря о перспективах метода - писал: ".Нельзя также забывать, что кроме материальной выгоды от эксплуатации метода искусственного оплодотворения домашних животных, мы можем в значительной степени получить экономию во времени. Раньше для создания местной породы или даже однородного стада от того или другого ценного родоначальника требовались десятки лет, теперь это может быть достигнуто е значительно более короткий срок, причем при избытке потомства возможен и более строгий отбор. Значение метода искусственного оплодотворения в зоотехнии в ближайшем будущем должно еще увеличиться в связи с решением двух основных вопросов, стоящих на очереди, а именно: повышение числа самок, оплодотворяемых при искусственном оплодотворении за случной сезон одним самцом; сохранение на продолжительное время и пересылка на значительные расстояния семенной жидкости".

Научно-технические достижения школы академика В,К.Милованова, созданная на их основе новая научная отрасль - биология воспроизведения и искусственное осеменение - дают возможность управлять процессом воспроизведения сельскохозяйственных животных, регулировать его в желательных для практики направлениях.

Разработка методов взятия семени от самцов-производителей, его разбавления, хранения и применения для искусственного осеменения позволяет тысячекратно увеличить потенциал использования высокоценных животных, а открытие метода неограниченно-долгого хранения семени при -196 градусах Цельсия (В.К.Милованов, И.И.Соколовская, И.В.Смирнов, 1947) дало в руки селекционеров возможности для осуществления самых смелых планов.

Применение достижений биологии воспроизведения и искусственного осеменения позволило, в частности, в странах с развитым животноводством за 25 лет (с 1970 по 1995 год) повысить молочную продуктивность с 3-х до 8 тыс.литров от коровы в год. В той же степени возросли показатели мясной продуктивности крупного рогатого скота и свиней, продуктивные качества овец.

В Российской Федерации известны многие хозяйства и стада, где получают по 8-7 тыс.литров молока от коровы (племзавод Гле-6оеской птицефабрики, племферма "Дубровицы" экспериментального хозяйства ВЙЖа, племзавод "Заря Подмосковья"), свинокомплексы, где добились высокой интенсивности использования свиноматок (2,2 опороса и 20 поросят от одной свиноматки в год) и 700-800 г среднесуточных привесов свиней на откорме ("Сафоновский" в Подмосковье, "Поволжский" в Самарской области, колхоз им.Фрунзе Белгородской области и другие).

Вместе с тем, показатели работы по воспроизведению животных в среднем по России остаются низкими. Так, в последнее десятилетие (1985-1995) от каждых 100 коров получали в год всего по 80-82 теленка, от каждых 100 свиноматок - по 1200-1300 поросят, от 100 овцематок - по 80-100 ягнят.

Плохие показатели результативности осеменений объясняют чаще Есего низкой оплодотворяемостью, ставя при этом полный знак равенства между понятием "оплодотворяемость" и термином "стельность", "супоросность", "суягность".

Между тем доказано, что вне зависимости от условий осеменения, истинная оплодотворяемость, т.е. слияние яйцеклеток со сперматозоидами и формирование зигот, составляет 90, а то и 100 про

- з центов, т.е. доля животных с отсутствием оплодотворения составляет всего около 10 процентов. Это показано и е работах с крупным рогатым скотом, и со свиньями, и с овцами (И.И.Соколовская,1976, Л.Ф.Вондаревская,1966, Kidder Н.Е. et al., 1954, Diskin M.G., Sreenan J.M.,1980, Hunter R.H.F.,1984, Maurer R.R., Chenault J.R.,1983, Мингазов Т.А.,1988, Laing J.А.,1949, Демеси-нов Б., 1988, Hill J.R. et al.,1970, Folge С.,1978, Blockey М.А. et al.,1975, Квасницкий A.B., 1983, Мартыненко H.A., 1971).

Разница между уровнем оплодотворяемости и показателями стельности, супоросности либо суягности приходится на эмбриональные потери. При осеменении коров их доля составляет, таким образом, от 30 до 50 процентов, в свиноводстве и овцеводстве - от 15 до 40 процентов.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Много внешних факторов и факторов внутренней среды организма оказывают влияние на оплодотворение ооцитов и на сохранность эмбрионов. Среди них - генетические, физиологические, иммунные, гормональные, алиментарные, климатические, технологические, ветери-нарно-санитарные и другие. Вместе с тем, известные научные данные о влиянии этих факторов на воспроизведение получены разными авторами в конкретных специфических условиях проведенных ими экспериментов (климат, питание, сезон, технология, режим осеменения и т.д.), и применимость их выводов не может быть абсолютной в иных условиях.

Кроме того, исследования значения иммунных факторов в воспроизведении, начало которым было положено Братановым К. (1960-1987) и И.И.Соколовской (1965-1995), развиты еще недостаточно, а отдельные аспекты этого направления, в частности иммунология яйцеклеток, живчиков и их отдельных структур, место этих явлений при объединении гамет - вообще мало изучены.

Влияние внутренней среды половых путей самок и времени введения семени на результативность искусственного осеменения изучали многие (Заянчковский И.Ф.,1962, Губаревич И.М.,1969, Решетникова Н.М., 1969, Горбунов В.И.,1972, Шейкин В.Н.,1972, Шипилов B.C.,1967, Van Demark N.L., Salisbury S.W. , 1950, Morrow D.A., 1966, Olds D., Cooper Ph.T., 1970, Ortavan R et. al., 1971, Нежданов А.Г. и др., 1973).

Вместе с тем, остаются не исследованными многие аспекты этой

- 4 проблемы, в частности - динамика послеотельных изменений отдельных структур эндометрия, возможность влияния на темпы этих изменений, сеязь результативности искусственного осеменения с особенностями технологии.

В связи со всем вышесказанным - целью наших исследований было:

-вьтснить, какая часть животных после безрезультатных осеменений приходится на самок с отсутствием оплодотворения и какая - на животных с эмбриональными потерями, разработать приемы уменьшения этих потерь и повышения эффективности искусственного осеменения.

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

- Выяснить, с учетом литературных источников и собственных экспериментов, истинную оплодотворяемость у сельскохозяйственных млекопитающих при искусственном осеменении, т.е. процентное отношение зигот к числу овулировавших яйцеклеток,

- Выяснить факторы, влияющие на оплодотворение и эмбриогенез, в частности:

-изучить иммунобиологию яйцеклеток, живчиков и их отдельных структур, и выяснить их значение в оплодотворении;

- изучить значение состояния иммунной системы самок для пренатальной выживаемости и результатов осеменения,

- выяснить значение внутренней среды половых путей самок для воспроизведения, изучить эффективность искусственного осеменения в связи с закономерностями послеотельных изменений воспроизводительных органов у коров,

- изучить особенности овуляции у коров в связи с сезонами года и особенностями содержания с целью совершенствования технологии искусственного осеменения;

- изучить эффективность традиционной системы выборки коров в охоте и разработать научную базу для автоматизации этого процесса в скотоводстве.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые при изучении иммуно-биологических свойств гамет с.х.млекопитающих применен комплекс иммунологических тестов (протеолитический тест, тесты преципитации адгезии на поверхности прозрачной зоны ооцитов, иммунофлуоресценции),предложена оригинальная методика добывания и накопления антигенного материала ооцитов млекопитающих, предложен способ определения активности иммунных сывороток к ооцитам животных. Доказана абсолютная тканевая и относительная видовая специфичность антигенов ооцитов млекопитающих. В опытах вне организма доказано реципрокное влияние живчиков и оолеммы ооцитов в процессе их объединения, показана возможность определения степени физиологической зрелости ооцитов по уровню устойчивости оолеммы к литическому воздействию на нее суспензии живчиков. Доказана общность антигенов вещества внутреннего слоя прозрачной зоны ооцитов с антигенами групп крови и на этой основе предложена научная гипотеза объяснения механизма реализации избирательности оплодотворения.

На основании результатов комплексного изучения процессов послеотельных изменений воспроизводительных органов у коров предложена новая схема периодизации послеотельного периода и этапности возобновления готовности матки коров к новому плодоношению.

Предложена оригинальная методика выявления отцовских антигенов на структурах бластомеров зигот и внезародышевых оболочках ранних эмбрионов. Определена структура эмбриональных потерь у самок с иммунодефицитом и предложены новые приемы повышения эмбриональной выживаемости с использованием специфической м неспецифической антигенной стимуляции самок.

Выявлена корреляция между уровнем гемоглобина в крови самок и их воспроизводительными способностями, на этой основе предложен тест прогнозирования благополучия воспроизведения у крупного рогатого скота и кроликов.

Показана возможность нормального воспроизведения в свиноводстве от применения мини-доз семени (в десятки раз меньше применяемых в практике искусственного осеменения) с дополнительной специфической антигенной стимуляцией.

Исследования корреляций между изменениями отдельных физиологических параметров самок (степень двигательной активности, динамика удоев, изменения внутриЕлагалищной температуры) и процессом формирования половой доминанты показали возможность автоматизации процесса выборки коров для осеменения.

На основе изучения особенностей овуляции у коров предложен новый режим искусственного осеменения, предполагающий однократное

- 6 осеменения в летне-пастбищный период и двукратное - е зимне-стойловый, с 20-24-часовым интервалом между первым и вторым осеменением.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. Организация искусственного осеменения коров с учетом выявленных закономерностей послеотельных изменений воспроизводительных органов позволяет поеысить эффективность осеменений на 25-30%. Обработка коров витамином А в условиях его недостатка в организме улучшает результативность осеменений на 20-30%. На практике это может дать значительный экономический эффект от снижения непроизводительных затрат на содержание животных и экономию труда, материалов и семени при их осеменении.

Применение приема антигенной стимуляции при осеменении коров и свиней, обеспечивающее уменьшение частоты перегулов на 10-15%, может дать большой экономический эффект в результате снижения непроизводительных затрат на содержание маток и от уменьшения затрат труда и семени.

Предлагаемый режим однократного искусственного осеменния коров в летне-пастбищный период позволяет получить большую экономию материалов, труда и семени.

Результаты проведенных исследований положены в основу изданных методических и практических рекомендаций:

- методических рекомендаций по иммунологии воспроизведения,

- методических рекомендаций по изучению антигенных свойств ооцитов млекопитающих,

- практических рекомендаций по улучшению результативности искусственного осеменения коров.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

- Истинная оплодотворяемость у сельскохозяйственных млекопитающих при осеменении в обычных хозяйственных условиях составляет 90-100% к числу овулирующих яйцеклеток, причем более высокой она бывает у животных с провоцированной овуляцией.

- Объединение гамет в процессе оплодотворения имеет иммунную природу, а иммунобиологические свойства ооцитов и живчиков в основном влияют на избирательность оплодотворения, и е меньшей степени на уровень оплодотворяемости.

- Уровень эмбриональной выживаемости у сельскохозяйственных ч г млекопитающих зависит от активности иммунной системы самок. Применение активации иммунной системы в условиях иммунодефицита представляет практический прием повышения результативности осеменений.

- Результативность осеменения в скотоводстве связана со степенью завершенности послеотельных изменений воспроизводительных органов.

- Формирование половой доминанты у коров сопровождается закономерными изменениями величины таких физиологических параметров, как удой, степень двигательной активности и показатель внутривлагалищной температуры. Это может составить основу для разработки системы автоматизированной выборки охоты у коров. Динамика овуляции у коров, определяемой по отношению к моменту выявления течки либо охоты, связана с сезонными факторами. С учетом выявленных особенностей овуляции при организации искусственного осеменения в летне-пастбищный сезон можно рекомендовать однократное осеменение - вечером того дня, когда выявлена охота, а в зимне-стойловый - двукратное, причем первое - через 10-12 часов после выявления признаков течки либо охоты, а второе - через 20-24 часа после первого.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты исследований по теме диссертации доложены на Всесоюзных симпозиумах по иммунологии воспроизведения (в Новосибирске в 1977 г., в 1980 г. в Москве, в 1987 г. в Киеве), на Международных симпозиумах по иммунологии воспроизведения (в 1978 г. в Варне, Болгария, в 1985 г. е Варне, в 1988 г. в Варне, в 1998 г. в Киеве), на Международных конгрессах по иммунологии репродукции (в 1983 г. в Японии, Киото, е 1988 г. в Торонто, Канада, в 1989 г. в ФРГ, Киль), на научно-теоретической конференции "Научные чтения памяти академика В.К.Милованова", 22 апреля 1993 г., Быково, Московской обл., на научно-практической конференции "Современные проблемы воспроизводства стада", 18-21 июня 1998 г., РАШ, Быково, Московской обл., на научно-теоретической конференции "50 лет Открытия замораживания семени", 23 октября 1997 г., Быково, Московской обл.

- 8

ПУБЛИКАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДИССЕРТАЦИИ. Всего по теме диссертации опубликовано 74 печатных работы, в том числе в журналах "Животноводство", "Зоотехния", "Доклады ВАСХНИЛ",

Сельскохозяйственная биология", "Вестник сельскохозяйственной науки", в изданиях Болгарской Академии Наук, публиковавших материалы Международных симпозиумов по иммунологии воспроизведения, в журнале "AJRIM" (American Journal of Reproduci Immunolojy and Microbiology) и журнале "Journal of Reproduci: Immunology", публиковавших материалы Международных Конгрессов по иммунологии воспроизведения, в журнале "Biologla et Immunologia Reproduction!s" изд-Еа Болгарской Академии Наук, в сборниках докладов Всесоюзных симпозиумов (г.Новосибирск,1977, г.Москва,1980, г.Киев, 1987), в сборниках научных трудов ВИЖа.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на 296 стр. машинописи, состоит из введения (общей характеристики работы) и 4-х глав. Каждая глава включает обзор литературы, описание материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждение, выводы и предложения. В диссертации 67 таблиц, 36 рисунков (в приложениях), список литературы из 554 источников, в том числе 311 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Субботин, Александр Данилович

ВЫВОДЫ

1. Истинная оплодотворяемость ооцитов, т.е. объединение живчиков с яйцеклетками с образованием зигот, и при естественном, и при искусственном осеменении бывает высокой и составляет 90-100% к числу овулирозавпшх яйцеклеток, причем у животных с провоцированной овуляцией показатель истинной оплодотворяемости выше, чем у животных со спонтанной овуляцией.

2. Вещество прозрачной зоны ооцитов млекопитающих обладает высокой иммуногенностыо, абсолютной тканевой и относительной видовой специфичностью. Специфические иммуногены прозрачной зоны располагаются на ее внешней поверхности. При взаимодействий вне организма с иммунными сыворотками к ооцитам прозрачная зона становится недоступной для контактов с живчиками.

3. Внутренний слой прозрачной зоны обладает иными, в сравнении с наружным, свойствами: здесь располагаются антигены, сходные с антигенами групп крови.

4. Прозрачная зона ооцитов и оолемма ооцитов, освобожденных от прозрачной зоны, оказывают в некоторых межвидовых сочетаниях (например, живчики быка - ооциты крольчих) иммобилизирующее действие на живчиков, а живчики, в свою очередь, способны лизировать, разрушать оолемму. Фактор, иммсбилизирующий живчиков при взаимодействии с ооцитами освобожденными от прозрачной зоны, связан с оолеммой, но не с ооплазмой ооцита.

Б. В плазме семени хряка и (в меньшей степени) кролика есть фактор, влияющий на биофизические свойства прозрачной зоны ооцитов: под его влиянием прозрачная зона становится устойчивой к разрушающему действию протеолитических ферментов, на ее поверхности формируется оптически-плотный слой преципитата.

6. Антитела к ооцитам, будучи нарочито введенными самке при пассивной иммунизации, быстро фиксируются на прозрачной зоне как фолликулярных, так и трубных (овулировавших) ооцитов, но не препятствуют оплодотворению и не снижают плодовитость.

Наличия аутоантител к ооцитам, как причины нарушений воспроизведения в скотоводстве, либо нет вовсе, либо они имеют несущественное значение. Присутствие в организме самок спермагглютининов не может свидетельствовать о неблагоприятном прогнозе для воспроизведения, который при прочих равных условиях определяется состоянием гемато-генитальных барьеров,

8, Выявленные нами особенности иммунобиологических свойств

---------£----------ооцитов и их отдельных структур имеют значение в осуществлении избирательностиоплодотворения, а именно: наружный слой прозрачной зоны выступает селективным барьером для предотвращения межвидовых объединений гамет, внутренний слой -как барьер для живчиков с неподходящей для данной пары структурой зритроцитных антигенов, а болемма - как еще один селективный барьер, дающий предпочтение одним, и препятствующий объединению с другими живчиками по невыясненным пока критериям.

9. Процесс послеотельных преобразований в воспроизводительных органах крупного рогатого скота, определяющих готовность самок к новому плодоношению, осуществляется в закономерной последовательности и включает 4 этапа: а) возобновление фолликулярной функции яичников, б) восстановление размеров матки до состояния, характерного для небеременных, в) обновление гистоструктур эндометрия и возобновление секреции змбриотрофа маточными железами, г) освобождение матки от микрофлоры.

10. Готовность к новому плодоношению после отела определяется у крупного рогатого скота степенью завершенности преобразований гистоструктур эндометрия, возобновлением производства змбриотрофа маточными железами и освобождением матки от микрофлоры. Совокупность этих условий складывается к 45-50 дням после отела,

11. Отцовские антигены, в частности антигены, идентичные лчмфоцитным, выявляются уже у Е-суточных зигот на клеточных мембранах бластомеров. Антитела к отцовским антигенам эмбрионов, будучи нарочито введенными в кровь матери, фиксируются в первую очередь на поверхности трофобласта и вкезародышевых оболочек, не проникая к тканям плода,

12. Активное состояние иммунной системы самок в период осеменения и первые дни после него - необходимое условие нормального эмбриогенеза. Блокада популяции мононуклеарных фагоцитов вызывает угнетение иммунной системы у осемененных самок и снижение эмбриональной выживаемости.

13. Угнетение иммунной системы, вызванное блокадой мононуклеарной фагоцитирующей системы, сопровождается снижением уровня гемоглобина в крови животных,

14. В ответ на введение семени хряка в матку свиней развивается местный иммунный ответ эндометрия, выражаемый появлением спермоиммобилизирующих антител в маточной слизи, изменением соотношения популяций лимфоцитов, в увеличении доли макрофагов в субэпителиальном слое эндометрия.

15. Удовлетворительный уровень супоросности и нормальную плодовитость можно получать и от использования дозы семени, в десятки раз меньшей применяемой на практике, при условии одновременного введения в матку антигенов убитого семени.

18. Дополнительная антигенная стимуляция свиноматок посредством внутримышечного введения цельного семени хряка повышает эффективность осеменения, достоверно уменьшая у них процент перегулов,

17. При интраперитонеальном осеменении крольчих возможно нормальное оплодотворение яйцеклеток, эмбриогенез и рождение потомства, однако такой способ осеменения сопряжен с пониженной эмбриональной выживаемостью. Предотвратить эмбриональные потери можно дополнительной стимуляцией крольчих антигенами убитого семени либо антителами к антигенам отца будущих эмбрионов.

18. Формирование половой доминанты у коров сопровождается усилением степенидвигательной активности, снижением внутривлагалищной температуры - и существенным снижением удоя, Изменения всех этих параметров поддаются объективному инструментальному измерению и учету и могут быть положены в основу разработки автоматизированной системы выборки охоты у коров.

19. В зимний стойловый период овуляция у коров, определенная по отношению к моменту выявления охоты, происходит в более поздний срок в сравнении с овуляцией в летний пастбищный период.

20. При осеменении коров в летний период однократное осеменение по эффективности не уступает двукратному.

7, ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для распространения ценных генотипов хряков-производителей можно применять 10-кратно-уменьшенную дозу их семени (против применяемой обычно в практике искусственного осеменения) с одновременным введением убитого семени менее ценных хряков,

2. Для повышения результативности искусственного осеменения свиней использовать прием внутримышечной обработки цельным неразбавленным семенем хряков, вводя его по 2 мл в область шеи осемененных свиноматок через 3 дня после осеменения.

3. Для прогноза благополучия окролов или воспроизводительных способностей коров использовать определение концентрации гемоглобина в их крови.

4. В условиях средней полосы России в летне-пастбищный период проводить однократное осеменение коров - вечером того дня, когда выявлена охота. В зимне-стойловый период применять двукратное осеменение коров в одну охоту, причем первое осеменение проводить спустя 10-12 часов после выявления признаков течки либо охоты, а второе - через 20-24 часа.

5. При разработке системы автоматизированного выбора коров в охоте применять выявленные закономерности изменений таких физиологических параметров, как степень двигательной активности, снижение удоя и изменение внутривлагалищной температуры.

БЛАГОДАРНОСТИ.

В заключение выражаю искреннюю благодарность и признательность моему Учителю, научному консультанту доктору биологических наук, профессору Ирине Ивановне Соколовской за ценные советы, моральную поддержку и помощь в написании данной работы.

Искренне благодарю руководство ВИЖа в лице директора ВИЖа, академика РАСХН Стрекозова Николая Ивановича за предоставленные условия и возможности для работы над диссертацией.

Выражаю сердечную признательность коллективу отдела биологии воспроизведения животных ВИЖа: зав,отделом, канд.биол.наук Жильцову Н.З., ведущим научным сотрудникам отдела Голышеву H.A., Голубь B.C., Чичилову A.B., техническим работникам Васькиной Т,В., Федоровой М.Е., Емельяновой Т.П. за моральную поддержку к помощь в работе над диссертацией.

Благодарю руководство и специалистов экспериментальных хозяйств ВИЖа "Щапово" и "Кленово-Чегодаево" за предоставленную

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные нами исследования показали, что часто употребляемое объяснение низких показателей воспроизведения при искусственном осеменении низкой оплодотворяемостью - некорректно. В действительности уровень истинной оплодотворяемости ооцитов у самок сельскохозяйственных животных при искусственном осеменении в обычных хозяйственных условиях составляет от 90 до 100%, к числу овулировавших яйцеклеток. Практика, между тем, показывает, что от первого осеменения телятся от 40 до 601 коров, рождаемость у озец и свиней составляет от 60 до 80%. Разницу между показателем оплодотворяемости и конечными результатами осеменения следует относить на счет прекатальных потерь, которые составляют у крупного рогатого скота от 30 до 50%, у свиней и овец - от 10 до 30%,

В процессе оплодотворения, объединения яйцеклеток и живчиков, участвуют, как показали наши исследования, иммунные реакции, обусловленные особеностью антигенных, иммунных свойств гамет и их отдельных структур. Вне организма в определенных условиях эти реакции препятствуют объединению гамет и оплодотворению. В организме же отрицательные последствия аналогичных иммунных явлений не проявляются, процесс оплодотворения не нарушается,

Вместе с тем, выявленная нами общность антигенной структуры ооцитов и живчиков с антигенной структурой эритроцитов, особенность локализации этих антигенов на внутренней поверхности прозрачной зоны ооцитов (zona pel'lucida) и в акросоме живчиков, а также особенности реципрокного влияния живчиков, прозрачной зоны и оолеммы ооцитов в процессе их объединения дали нам основание для Формулирования гипотезы о роли и месте этих структур в механизме реализации избирательности оплодотворения.

В модельных опытах была выяснена величина и структура эмбриональных потерь у самок в условиях иммунодефицита, т.е. неадекватного состояния иммунной системы осемененных животных и показаны возможные приемы предотвращения этих потерь. Опыты на животных в условиях ферм (с коровами, свиньями) показали, что использование иммуностимуляторов может стать практическим приемом для улучшения показателей воспроизведения в животноводстве. исследование иммунного ответа половых путей на искусственное осеменение свиноматок и результаты модельного опыта с использованием интраперитонеального осеменения крольчих показали, что одним из условий нормальной эмбриональной выживаемости является адекватный местный иммунный ответ половых путей на осеменение. Практическим выводом из этого могут стать рекомендации по более широкому распространению выдающихся по генетическому потенциалу хряков-производителей, В наших опытах показано, что нормальный уровень воспроизведения у свиней можно получать от использования при искусственном осеменении мини-доз семени, в десятки раз меньших в сравнении с обычно применяемыми в практике искусственного осеменения свиней,

Анализ эффективности осеменений в скотоводстве показал зависимость результативности от сроков проведения первого осеменения по отношению ко времени отела. Проведенные исследования показали, что определяющим фактором в этом случае выступает состояние внутренней среды половых путей, степень завершенности послеотельных изменений матки и отдельных ее структур, таких как покровный эпителий, маточные железы.

Изучение динамики послеотельных изменений генеративной функции яичников и морфологических параметров матки показало, что процесс возобновления фолликулярной функции опережает процесс восстановления размеров матки и функций ее гистоструктур. Низкая эффективность ранних послеотельных осеменений - это следствие, таким образом, отсутствия в матке необходимых условий для нормального эмбриогенеза. Эту закономерность следует учитывать при организации искусственного осеменения в скотоводстве.

Проведенные исследования показали, что у животных с провоцированной овуляцией, у которых овуляция происходит только в ответ на спаривание к осуществляется в строго фиксированные сроки (у крольчих, например, через 10-12 часов после спаривания), у животных со спонтанной овуляцией вскрытие фолликула и выход яйцеклетки в яйцевод происходят без внешних заметных признаков. Проведенные наблюдения показали, что если за момент отсчета брать факт обнаружения течки у коров, то в зимне-стойловый сезон овуляцию у одних можно ожидать через 12-24 часа, у других - через £4-36 часов, а у некоторых - только через 49-60 часов. Такие большие колебания в сроках овуляции по отношению к моменту обнаружения признаков течки затрудняют решение вопроса о выборе оптимального времени введения семени, зачастую осеменения бывают преждевременными, задолго до овуляции, В таких условиях, как показано было в специальных исследованиях (Бондаревская Л.Ф,, 1966), происходит старение живчиков и эмбриональная смертность из-за низкой жизнеспособности зигот.

Динамика овуляции в летне-пастбищный период существенно отличается: по отношению к моменту обнаружения охоты (рефлекса неподвижности) у абсолютного большинства коров она проходит в сроки от 12 до 36 часов.

Выявленные нами особенности овуляции у коров в связи с сезонами года следует учитывать в практике при выборе режима осеменения: в зимне-стойловый период, когда есть риск преждевременного осеменения по отношению к овуляции, следует применять двукратное осеменение, а в летний сезон достаточно и однократного.

Таким образом, проведенное нами изучение иммунобиологических закономерности воспроизведения сельскохозяйственных животных позволяет сделать некоторые теоретические выводы и практические предложения по совершенствованию технологии воспроизведения, но вместе с тем порождает ряд вопросов, на которые еще предстоит дать ответ.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Субботин, Александр Данилович, Дубровицы

1. Абду М.С.С., Соколовская И.И. Эмбриональная выживаемость и динамика пренатального развития у крольчих при искусственном осеменении '/ Кролиководство.-1987. -№. С20-22,

2. Б. Алешин Б.В. Регуляция гипофизарных функций. Гипоталамо-гипофи-ззрный комплекс. //Руководство по эндокринологии. /М: Медицина, 1973. С27-31.

3. Алиев А.А., Петров Г.Е., Григорьев А.А. Динамика концентрации зитеинизируюшего гормона, прогестерона и эстрадиола-17-бета в крови «ров в периоды полового цикла и начальных стадий стельности. //Доклады ВАСХНИЛ. -1991. -т. -С36-39.

4. Алиев Н.Я. Послеродовые эндометриты у коров. //Ветеринария. 1973. -№. -С71-72.

5. Андриевский В,Я, Непл1дн1сть кор!в та заходи боротьби з нею. •Киев: Издательство сельскохозяйственной литературы, -1962. -с118.

6. Апатенко В.М. Иммунодефицит у животных. //Ветеринария. -1992. -Ж5. -С29-30.

7. Аржаев A.M. Использование сурфагона для стимуляции овуляции в шоктанный и индуцированный эстрофаном эструс у молочных коров: Автореферат дис. .канд.биол.наук /ВИЖ. Дубровицы, Московской обл. -1992, -29с,

8. Арзуманян Е.А. Влияние продолжительности сервис-периода на продолжительность, плодовитость и долголетие коров. /Вестник ТСХА, -1965. -вып.3, -С47-50.

9. Бабичева Л.Я. Оплодотворяемость коров в связи с функцией яич-шков и свойствами слизистых оболочек половых путей: Дис, .канд.би-ж.наук /ВИЖ. Дубровицы, Московской обл. -1968. 24с.- 255

10. Балтакмен P.A. Сроки использования дойных коров бурой латышской породы и некоторые факторы, влияющие на долголетие коров :Ав-чзреф. дис. . .канд. с.х.наук./Тарту. 1989. -22с.

11. Бернатонис A.A. К вопросу нормализации послеродового периода i сокращения количества дней бесплодия у коров: Авторе®, дис. ,,канд.с,х.наук,/Каунас, -1967, ~24с,

12. Бесхлебнов A.B. Об оптимальных сроках осеменения коров в период охоты. //Проблемы животноводства, -1938. -Ш. -С73-78,

13. Бесхлебнов A.B. Сроки овуляции у коров, //Сб.работ молодых ченых в области ветеринарии. /М: Сельхозгиз. -1940. -033-37,

14. Бесхлебнов A.B. Яловость крупного рогатого скота и борьба с ей. -М: Сельхозгиз, 1952, -138с,

15. Бочаров И,А, Основные причины бесплодия крупного рогатого дота и мероприятия по его устранению. //Сб.работ Ленинградского ве~ 'института, /Ленинград. -1961?. -вып.29, -09-14,£56

16. Бочаров И.А., Соколов H.H., Вайнтрауб A.M. Об условиях возникновения послеродовой инфекции у коров. /УСб.работ Ленинградского зетинститута. /Ленинград: Сельхозгиз. -1952. -вып.13. -С197-201.

17. Братанов К., Диков В., Радев Г. и др. Исследования иммунологии воспроизведения. 7.Роль спермоантител при осеменении коров с незаконченней инволюцией матки и скрытыми эндометритами. //Ветеринарно-ме-рцинские науки /НРБ, София. -1965. -N¡2. -С323-332.

18. Бронская A.B., Радченков В.П., Махорская И.В, Предотвращение ¡швамизолом эмбриональной смертности у самок с угнетенной иммунной шетемой. //Тез.докл. 1-го Всесоюзн.иммунодогич.съезда. /М: 1989. -Т2. ■ С24,

19. Вронская A.B., Решетникова Н.М., Турко Т.М. Действие иммунос-глмуляции и витаминизации (А) коров на воспроизведение. //Закономерность и пути регулирования воспроизведения животных. /ВИЖ, Сб.трудов.1997. -вып.58. -С87-88.

20. Бугров А,Д., Невинный H.A., Бандура А.И. и др. Трансплантация змбрионов в опытном хозяйстве "Кутузовка" Харьковской области, '/Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. /ВНПО по мем.делу. Сб.трудов, М: 1988. -С62-64.

21. Бугров А,Д., Величко И.М., Передера К.Б. и др. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота в условиях племенных хозяйств. '/Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. /ВНПО по мем.делу. Сб. работ. М: 1988. -С98-102,

22. Букаров Н.Г.,. Шавырин И.И., Федотова Е.Г. Сравнительное изучение сохранности телят, полученных от быков голштинской и холмогорской пород, //Закономерности и пути регулирования воспроизведения животных. /ВИЖ, Об.научн.трудов. -1997.- вып.58. -С60-61.

23. Бурдина В.Г. Ректо-цервикальный метод осеменения коров и те-гок. //Животноводство, -1968, №2, -051-54,

24. Бурков И.А. Иммуногенез в первые дни супоросности свиноматок, '/тр. 5-го Международного симпозиума по иммунологии воспроизведен, /София; БАН. -1982. -С172-175.

25. Бутенкс Г.М. Проблема оценки иммунного статуса человека и возрастные изменения иммунитета. Обзор, //Иммунология. -1993. -Щ.-С4-6.

26. Вербицкий М.Ш., Кулаков В.И., Папазов И.П. и др. Роль сенсибилизации к антигенам спермы и яйцеклетки в развитии бесплодия в бра-se, //Иммунология репродукции. Тр.4-го Международного симпозиума. /СоpR7 ия: БАН. -1979. -С404-410.

27. Волкова Л.С. Иммунологические взаимоотношения организма мате-и и плода. -М: Медицина, 1970, -180с.

28. Волкова Л.С., Чен Р,И,, Любимова А.И. Особенности реакций им-унитета у женщин, страдающих повторным невынашиванием беременности. /Иммунология репродукции. Тр.4-го Международного симпозиума, /София: АН, -1979, -С668-671,

29. Волосков П.А. Основы борьбы с бесплодием крупного рогатого кота, -М: Сельхозгиз. -i960, -208с.

30. Волохов Т.И., Павличенко В.П. Роль спермоантител разной спе-ифичкости в оплодотворении и эмбриональном развитии крупного рогатого кота. //Иммунология репродукции, Тез.4-го Всесоюзного симпозиума. Киев: 1990. -С18-19.

31. Воронцов В,В, Усовершенствование методики определения опти-алького времени осеменения и ранней диагностики стельности коров, /Бюлл.НИИ жив,Лесостепи и Полесья УССР. Харьков. -1986. -вып.ШЗ. 018-22,

32. Воскобойников В.М. До и после отела, //Сельское хозяйство Бе~ оруссии. -1958. -т. -029-30,

33. Гзлазюк Л,В, Антиспермальные антитела и локальный иммунитет в инамике менструального цикла у бесплодных женщин. //Иммунология реп-одукции. Тез,4-го Всесоюзного симпозиума, /Киев, -1990, -020-21,

34. Талетян В.А, Эффективность осеменения коров смешанным семенем йков различных пород и возрастов: Дис. . .канд.с,х.наук. /ВШ. Дубро-щы, Московской обл. -1971. -162с,

35. Герасимова А, Продолжительность охоты и время овуляции у ко-ов, //Проблемы животноводства. -1938, ~Ш2. -С24-26,

36. Голота H.A., Сирацкий И.З. Связь трансферинового локуса АА с непроизводительной функцией у крупного рогатого скота. //Иммунология азмножения. Тр.2-го Международного симпозиума, /София: БАН. -1973 0587-590,

37. Гольдман И.Л., Соколовская И.И,, Будникова A.B. Реакция ласттрансформации лимфоцитов крови (РБТЛ) крупного рогатого скота, /Методические реком.по проблемам иммунологии сельскохозяйственных жи-отных, /ВИЖ. Дубровицы, Московской обл, -1982, -046-50,

38. Горбунов В.И. Эффективность воспроизведения коров в связи с орфофизиологическими изменениями слизистых оболочек половых путей: ис, ,,, канд.биол,наук. /ВШ. Дубровицы, Московской обл. -1972,

39. Горев Э.Л, Восстановление репродуктивной функции и аспекты ее ?8туляции у коров после родов. -Душанбе: Дониш. -1981, -336с.

40. Гоцуляк H.H., Янчий Р.И,, Ильчевич Н.В. и др. Антитела изменяют возбудимость ооцитов, //Иммунология репродукции. Тез,4-го Всесо->зн.симпозиума. /Киев. -1990. -030-31,

41. Гроза А.Е. Влияние локсурана на эффективность иммунизации и 511живаемость эмбрионов у самок с угнетенной системой мононуклеарных фагоцитов. //Иммунология репродукции. Тез. 3-го Всесоюзного симпозиума. /Киев. -1987. -0110-111.

42. Губаревич Я,Г, pH и вязкость секрета шейки матки во время ?ечки и прогноз овуляции у крупного рогатого скота, //Об, работ Ленинградского ветинститута. -1939, -вып.9. -046-49.

43. Губаревич Я.Г,, Воскобойников В.М., Семченков В.Б. Зависимость оплодотворяемости коров от времени осеменения после отела, //Материалы итоговой научной конференции. /Витебский ветинститут. -1969. •063-66.

44. Гуков Ф.Д., Карпуть И,М., Оеврюк И.З. Аутоиммунные реакции и бесплодие у коров, //Иммунология репродукции, Тез,4-го Всесоюзн.симпозиума. /Киев. -1990. -034-35.

45. Гулянский Л.Н., Петрунин Д.Д., Татаринов Ю.О. Иммунорегуля-?орные свойства плацентарных белков. //Иммунология репродукции. :ез.4-то Всесоюзн.симпозиума. /Киев. -1990. -0143-144.

46. Демесинов Б. Влияние высокой температуры окружающей среды на выживаемость зародышей у молочного скота в условиях Туркменистана. '/Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных, /ВНПО по 1лемделу в животноводстве. -М: -1988. -064-69.

47. Докукина И.Ю., Роговская Т.А., Резников В.А. Роль локальных штиспермальных антител в этиологии женского бесплодия. //Иммунология репродукции. Тез.4-го Всесоюзн.симпозиума, /Киев. -1990. -038.

48. Дранник Г.Н., Монтаг Т.О.} Овсиенко М.Н. и др. Перспектива течения бесплодия иммунизацией женщин Т- либо B-лимфоцитами мужа. '/Иммунология репродукции. Тез. 4-го Всесоюзн.симпозиума. /Киев.-'1990, -041-42«

49. Дыокар Э, Клеточные взаимодействияв развитии животных» -Mi1. Мир, -1978, -330с.

50. Елошевский ф.И, иплодотворяемость и продуктивность коров в связи со сроком первого осеменения после отела. //Сб.научн.работ. /ВШ„ Дубровицы, Московской обл. -1970, -вып.17. -023-26.

51. Ельчанинов В.В., Белоножкин В,П., Насибов Ш.Н. Проблемы физиологии и патологии репродуктивной функции коров. 4.1. Вопросы физиологии и размножения крупного рогатого скота. -Щербинская типография, 1997, -291с,

52. Жаркин В,В,, Сахончик П.Е., Зацепин П.Ф. Связь воспроизводительной функций высокопродуктивных коров с уровнем минерального обмена. //Закономерности и пути регулирования воспроизведения животных.

53. Миловановские чтения. Сб.научн,трудов, /ВИЖ. Дубровицы. -1997, -вып.58. -с,17-19.

54. Иванов И.И. Взаимоотношение между овуляцией и течкой у шец. //Известия С.-Петербургской биологической лаборатории. 'Спб. -1915. -т.15. -вып.1-2. -С.108-107.

55. Ильинский Е.В. Экспериментальные исследования иммунных факторов, влияющих на воспроизведение крупного рогатого скота, //Иммунология размножения. Тр. 2-го Междунар.симпозиума. /София: ВАН. -1973, ■0,605-608.

56. Ильинский Е.В,, Яковлев Т.А. Причины эмбриональной смертности г крупного рогатого скота и свиней в хозяйствах Кубани. //Труды Кубанского СХИ. /Красндар. -1975. -вып.97(125). -С.34-38.

57. Инглиш П., Смит У., Мак-Лин А. Свиноматка. Повышение ее продуктивности, -М: Мир. -1981. -214с.7?. Инструкция по искусственному осменению крупного рогатого ско-;а на 1935 год. -М: HKS СССР Колхозная Многотиражка. -1935. -30с,

58. Инструкция по проведению искусственного осеменения крупного югатого скота на 1937 год. -М; Издат.Наркомзема СССР, -1937, -38с.

59. Инструкция по проведению искусственного осеменения крупного югатого скота. -М: Изд-во наркомзема СССР, -1939. -32с,

60. Инструкция по искусственному осеменению крупного югатого скота. -М: Изд-во МСХ СССР. -1958. -42с.

61. Инструкция по искусственному осеменению коров и телок на колхозных и совхозных пунктах. -М: Колос, -1966. -47с.

62. Инструкция по искусственному осеменению коров и телок третье издание). -М:Россельхозиздат. -1970, -87с,

63. Инструкция по искусственному осеменению коров и телок, М: Агропромиздат. -1988. -26с.

64. Ишутов A.A. Изучение половых рефлексов коров в целях повыше-ия эффективности выявления их для осеменения в условиях промышленных комплексов: Автореф. дис. .канд.биол.наук. /ВИ1, Дубровицы. -1980. 22с,

65. Карманова Е.П, 0 сроках осеменения коров после отела, //Наука сельскому хозяйству. /Петрозаводск. -1972. -С.98-103.

66. Карначев П.И., Смирнова Л,д. О сроках осеменения коров после >тела.//Сб. научн.трудов НИИСХ Центральных районов Нечерноземной зоны.

67. Немчиновка. -1973, -вып.30, -С.136-141.

68. Квасницкий A.B. Генеративная функция яичников и плодовитость сельскохозяйственных животных, //Научн. тр.Полтавского СМ. /Полтава. 1959. Т.6. -С.48-81.

69. Квасницкий A.B. Вопросы возрастной физиологии размножения животных, //Возрастная физиология животных, -М: Колос, -1987. -С.220-257

70. Квасницкий A.B. Искусственное осеменение свиней. -Киев. •1983, -188с,

71. Кедров В.К. Повышение воспроизводительной способности лошадей и коров. //Борьба с яловостью и бесплодием с.х.животных. -М; Сель-юзгиз. -1956. -С.98-101.

72. Кирчев П., Ананиев I, Иммунологические исследования у женщиндлительным бесплодием. //Иммунология размножения. Тр.2-го Между-lap.симпозиума. /София: БАН, -1973. -С,374-379.

73. Клинский Ю.Д. Зоотехническая эндокринология в практике животноводства, //Сб. научн, трудов. /ВИЖ. Дубровицы, Московской обл. 1989. -вып.52. -С.82-88.

74. Ковалев Л.И. Эффективность различных способов искусственного юеменения коров. //Болезни с.х.животных в Забайкалье и на Дальнем юстоке и меры борьбы с ними. /Благовещенск. -1985, -С,22-25.

75. Комлацкий В,И,, Милько B.C. Способ определения количества зижений животного и устройство для его осуществления. //A.c. £581927, СССР. -Опублик.07.05.90. -бюлл. Ш17,

76. Кононов В,П., Васильева Э.Г., Солдатенков Н.К. Обусловлен-ость оптимального времени осеменения свиноматок свежевзятым и крио-онсервированным семенем, //Вестник с,х,науки, -1990. -MS. -С.124-129.

77. Кононов Г.А. Применение биопсии эндометрия для диагностики есплодия у коров. //Ветеринария. -1958. -№3, -С.91-93.

78. Крамарекко Н,М. Воспроизводство стада. -М: Московский рабо-ий, -1969, ~118с,

79. Кузнецов М.П. Оплодотворение и многоплодие каракульских овец зависимости от методов случки. //Каракулеводство и звероводство.1948, -№5. -С,36-38.

80. Кушнер Х.Ф,, Новик И,Е, Экспериментальные данные о половом роцессе у кур. //Животноводство, -1958. -Ш. -и.55-61.

81. Кюбар Х.В. 0. послеродовой инволюции матки коровы. //Ветери-£фия. -1976, -М4. -С.75-78,

82. Милованов В.К. Доказательство избирательности оплодотворения высших животных. //Яровизация. -1940. -W5. -С.33-36.

83. Милованов В.К, Биология воспроизведения и искусственное освоение сельскохозяйственных животных. -М: Изд-во с.х.литературы, жур-шов и плакатов, -1962. -696с.

84. Милованов В.К. Биологические и зоотехнические аспекты проб-змы оплодотворяемости и плодовитости сельскохозяйственных животных,

85. Сазонов М.Г. Применение некоторых лекарственных веществ при субинволюций матки и эндометритах к роль гинекологической диспансеризации в профилактике бесплодия коров: автореф. дис. .канд.вет.наук. /Воронеж. -1971. -22с.

86. Салихов Ф., Шакиров Ф., Салихова М. Влияние сервис-периода эта молочную продуктивность. //Молочное и мясное скотоводство. -1988. -Ml. -С.45-46.

87. Сарапкин А.Г. Организация и технология искусственного осеменения в скотоводстве. -Каменка, Пензенской обл. -1974. -30с,16?. Сарычева М.М. Влияние витамина А на воспроизведение у сви-вей, //Свиноводство. -1968. -т. -С.39-41.

88. Свечин К.Б., Аршавский А.И,, Квасницкий А,В. и др. Возрастная физиология животных. -М: Колос. -1967. -431с.

89. Северцов А.Н. Морфологические закономерности эволюции. ~М; № СССР, -1939, -161с.

90. Сеглинь А.К. Подвижность и выживаемость живчиков в половом гракте коров в зависимости от способа осеменения. //Животноводство, -1965. -ШЗ. -0.79-82.

91. Сеглинь А.К. Об оптимальных сроках первого осеменения коров после отела. //Животноводство. -1967. -Ш. -С.54-56.

92. Сеглинь А.К,, Лаукс Л.П., Емельянова М.В. Восстановление воспроизводительных органов после отела и наступление новой стельности. //животноводство, -1971, -Щ. -С.61-83.

93. Серванчук М.Н. Некоторые вопросы морфологии, гормональной функции и терапии персистентных желтых тел яичников у коров и телок: автореф. дис. .канд.вет.наук. /Львов, -1972, -2бс.

94. Смирнова Е.И, Ановуляторныи половой цикл у крупного рогатого-скота. //Бюлл. экспериментальной биологии и медицины, -1954. -fêl-2. 0.87-89.

95. Смирнова О.В., Кузьмина Т.А. Определение бактерицидной активности сыворотки крови по Монселю и Треффенсу в Модификации Смирно-юй О.В. и Кузьминой Т.А. //Тр. Целиноградского СХИ. /Целиноград. •1971. -Т.8. -вып.10. -С.9-10.

96. Соколовская И.И, Иммунорегуляция воспроизводительных процессов. //Закономерности и пути регулирования воспроизведения животных, ;б, научн. трудов. /ВЙЖ. Дубровицы, Московской обл. -1997, -вып.58.и uti ,

97. Соколовская И,И,, Бронская A.B., Субботин А.Д, и др. //Методические рекомендации по иммунологии воспроизведения. /ВИЖ. Дубровицы. •1985, -78с,

98. Соколовская И,И,, Бутаков А,К,, Кононов В.И, и др. йммувоби-уюгические реакции организма самок на живчики, //Иммунология размножения, Тр.2-го Междунар,симпозиума. /София; ВАН. -1973. -С.265-283,

99. Соколовская И,И., Дроздова Л.П. О некоторых вопросах оплодотворения животных, //Журнал общей биологии, -1954« -Мб, -С.439-445,

100. Соколовская И,И,, Милованов В,К, -Иммунолгия воспроизведения швотных. -М: Колос, -1981. -264с.

101. Соколовская И.И,j Островский Ф.M, Цитологические, физиологические и иммунные реакции на вазектомию, травму и перегрев семенников, '/Иммунология размножения. Тр. 2-го Междунар. симпозиума, /София: БАН. -1973, -С, 106-117,

102. ЕЮ, Субботин А.Д, j Соколовская И,И, , Таг Т.А, Полноценность •тимулированного фолликулогенеза у крольчих, //Доклады ВАСХНИЛ. 1987, -т. -С.36-38,¡С ( и

103. Субботин А.Д. Пути улучшения результативности искусственного осеменения коров, //Зоотехния, -1993, -9. =0.23-35.

104. Сысоев A.A. Иммунологическая реактивность и воспроизводительная функция коров, //Ветеринария, -Ш. -С.77-82.

105. Таутерис В.Р. Истинная оплодотворяемоеть коров и эмбриональ-1ая смертность в разные периоды стельности, //Биология воспроизведения ! искусственное осеменение с,х.животных, Сб. трудов, /ВИЖ. М: Колос. -1966, -вып.З. -С.145-148.

106. Теличкун C.B., Клюпа И.Г. Белки беременности (ББ) и регуля-?орные субпопуляции Т-лимфоцитов у женщин при угрозе невынашивания беременности на ранних сроках, //Иммунология репродукции. Тез,4-го Все-:оюзн.симпозиума, /Киев, -1990, -С.214-215,

107. Терци М. Генетика и животная клетка. -М: Мир. -1997. -177с.

108. Толпеко Г,А. Влияние подбора по группам крови на репродук-;ивные качества свиноматок, //Сб. трудов Кубанского СХИ, /Краснодар. •1983, -вып.227(255). -С.68-71.

109. Тюпич М.М. 0 кратности искусственного осеменения коров, '/Бюлл.научно-техн. информации,/ВИЖ, -М: -1957. -Ш. -с.32-34,

110. Указания по искусственному осеменению крупного рогатого ско•a, -Mi Колос, -1961, -36с,25, Устинкина Т.И. Аллоиммунизация антигенами семени в бесплод-:ом браке. //Тез. 2-го Всесоюзного симпозиума по иммунологии воспроизведения. -М: -1980. -0,171,

111. Файрушин Г.М. Оплодотворяемость у каракульских овец, осеме-енныхв разные сезоны года, //Биостимуляторы в животноводстве. -Ташкент: ФАН, -1967, -С,145-147,

112. Фидлер Р., Вербицкий М.Ш., Горошко О.Г. Моноклональные антитела к антигенам прозрачной зоны яйцеклетки свиньи как контрацептивный препарат. //Иммунология репродукции. Тез. 4-го Всесоюзн.симпозиу-ш. /Киев, -1990, -0.99-100.

113. Фролов В,М,, Германов В,Г., Пересадкин H.A. Некоторые механизмы иммунных нарушений в патогенезе невынашивания беременности, '/Иммунология. -1992. -Ш. -0.54-58.

114. Хозей В.Е. Течение послеродового периода и оплодотворяемость горев красной степной породы (в условиях Южной зоны Запорожской облас-?и): дис. .канд.вет.наук. /Московская вет.академия. -М: -1972. -154с

115. Чомаев А,И, Действие биостимуляторов на воспроизводительнуюрункцию высокопродуктивных коров, //Закономерности и пути регулирова•:£■1 iCвия воспроизведения животных. Сб.научи, трудов, /ВШ. Дубровицы, Московской обл. -1997, -вып.58, -С.49-50.

116. Шипклов В.С, Физиологическое и экономическое значение уплотненных отелов. //Животноводство. -1967, -МЗ. -С.52-54.

117. Штейман С,И, Совершенствование молочного стада, -М: Сельхоз-гиз. -1950. -126с,

118. Зйдригевич Е.В., Шевченко А.Я,, Лысенко Л.й. К вопросу о сроках осеменения коров после отела в связи с уровнем продуктивности. 36, научи, трудов, /Одесский ОКИ. -Одесса: -1970. -Т.18. ~М4. ■0.97-103.

119. Юрина Н.А., Радостина А.И. Морфофункциональная гетерогенность и взаимодействие клеток соединительной ткани. -М: Медицина. •■1990, -322с.

120. Яблонский В,А,, Шахтий П.Д. Эффективность осеменения коров з различные сроки после отела, //Сб. научн. трудов, /Кишиневский ОХИ, -Кишинев: -1975, -Т.143. -0,132-135.

121. Blockey M.A., Parr R.A., Restall B.J. Westage of ova in young merino ewes, //Australian Yet.J, -1975. -№51. -P.298-300.

122. Bustedt H,, Bergchtold M. Veränderungen der Qlucoso-Oonzent-ration und der Zahl der eosinophilen Leukoziten im Bett von rindern intra und postpartum, //Berliner Muncnenes tierartl. Wochenschz.1968, -v.8i. -№12, -p.243-245.

123. Boyd L.J. Walt 80 days before rebreeding. //Hoard's Dairyman. -1969. -V.114. -NSu, -P,1206-1207,

124. Buch N.C., Tyler W.J., Casida L.E. Postpartum estrus and involution of the uterus in an experimental herd of Hoistein-Frisisn xjws. //J.Dairy Sci, -1955, -№38, -P.73-79.

125. El-Banna A,A,, Hafez E.S.E. Egg transport in beef cattle, //J.Anim.Sci. -1970. V.30. -I®, -P.430-432.

126. Erski-Biljic M,, Varadin M., Borjanovic S, Antibodies against spermatozoa as a possible cause of bovine infertility. //Иммунология репродукции, Тр.4-го Междунар.Симп. /София; ВАН, -1979,-С.309-315.

127. Esslemont R.J, Silent heat. //Dairy Farmer, -1973, -V.20. -P.26-27.

128. Farooq A,A,, Srivastava P.N. The biochemical structure of the zona pellucida, -1980. v.191, -P.827-829,

129. Faulk W.P., Hunt J.S. Human placentae. View from an immunological dias. //Am.J,Reprod.Immunol, -1989, -V.21. -P.108-113.

130. Am.J.Vet.Res. -1947, №. ~P,299-300,

131. Gullbring B, Investigation on the occurence of blood group antigens in spermatozoa from men. and serological demonstration of the segregation of characters, //Acta med.Scsnd. -1957, -Y.49. -ЖЗ, -P.169-172.

132. Gulias B.J., Gwatkin R.B.L., Juan L.Immunization of cynomo-logus monkeys with porein zonae pellucida. //J.Reprod.Immunol. -1933, -Suppl, -P.55.

133. Gwatkin R.B., Meyenhofer M., Williams D.T, Localization of ;ona antigen in bovine ovary sections by fluorescent antibody, //Gsme-:e Research. -1979, -№2, -P.201-203.

134. Gwatkin R.B.L., Williams D.T. Immunization of female rabbits ?ith heat-solubilized bovine zonae. Production of anti-zona antibody and inhibition of fertility. //Gamete Research, -1978, -Nil, -P.19-22.

135. Hunter R.H.F., Wi limit I. Sperm transport in the cow, Perio-ailatory redistribution of viable cells within the oviduct. //Rep-"od,Nutr,Dev, -1984, -V.24 (5A), -P.597-608,

136. Kindahl H,, Grsnstrom E,, Edqvist L. et al. Progesterone and lD~ceto~i3}14-dihydro~prost3glandin F-2-alfa levels In peripheral circulation after intrauterine iodine infusions in cows, //Acta Vet.Scand,, -1977, -»18, -P,274-277,

137. Klima F,, Tiemann U., Katzwinkel S, et al. Early pregnancy factor (EPF) in cattle. //First Intern.Forum of reprod,Immunology, /Magdeburg, -june 19-23, 1990. -P.82.

138. Lillie F.R. Problems of fertilization. University Press. /Chicago. -1919. -p.173.

139. Macmillsn K,L,, Fielden E,D., Morris G.R, et al. Factors influencing A.I. conception rates, //N.-Z. J,Experimental Agriculture, -1977. ~№. -P, 265-271,

140. Martal J., Lacroix M.C., Loudes C. et al. Trophoblastin an sntiluteolytic protein in early pregnancy in sheep, //J,Reprod,Fert. -1979. -V,56. -P.63-73.400, Mattner P.E., Braden A.W.H. Studies in fleck mating of she

141. Fertilization and prenatal mortality,

142. Aust.J.Exp,Agr.Anim.Husb, -1967, -W. -P. 110-116.

143. Moghissi K.3. Accuracy of BBT for ovulation detection. '"/Pert 11.SteriL -1976, -V.27. -P. 1415-1421,

144. Moghissi K.S. Prediction and detection of ovulation. '/Pert,SteriL -1980, -¥,34, -P.89-96.

145. Moos J,, Pecnicova J. Zona pellucida binding proteins of 3bo-sr spermatozoa, //Abst.First Intern,Forum of Reprod, Immunology, /Magna burg} 1990, -P.70.

146. Morgenstern L.L. ABO blood group antigens on human spermatozoa. //6-th Cong.Intern,Reprod,Anim,Insem,Artif, /Paris, -1988. -V.l. •P.557-580.

147. Mori T., Nishimotc T., Kohda N. et al. A method for specific ietection of antibodies to the zona pellucida in infertile women. VFert.SteriL -1979, -V.32. -№. -P.67-72,

148. Morrow D.A. The herdman's responsibility in preventing breeding problems in dairy cattle, //Jersey J, -1966, -¥,13, -HQ, -P.51-55.

149. Morrow D.A,, Roberts S.J. Postpartum ovarian activity and involution of the uterus and cervix in dairy cattle, //J.Cornell,Yet. •1989. -V,2. -P.172-211,

150. Morton H,, Morton D.J., Ellendorf F. The appearence and characteristics of early pregnancy factor in the pig. //J,Reprod.Fertil. •1983, -¥,89, ~m. -P.437-446,

151. Morton H., Mancarrow C.D., Scaramuzzi R.J, et al. Detection if early pregnancy in the sheep by rosette inhibition test. //J,Reprod. Fertil, -1979, -¥.55, -P.75-80. •

152. Morton H,, Rolfe 8.E., McNeill L. et al. Early pregnancy "actor. Tissues involved in its production in the mouse. //J,Reprod. Immunol, -1980, -m. -P.73-82.

153. Pincus G., Enzmann E.V. Fertilization in the rabbit, //Brit,J.Exp.Biol, -1932, "N19, -P.81-84.