Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка методов оценки и регуляции иммунного состояния организма в связи с совершенствованием технологии искусственного осеменения в скотоводстве

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка методов оценки и регуляции иммунного состояния организма в связи с совершенствованием технологии искусственного осеменения в скотоводстве"



На правах рухоанск.

Абилоз Ахмезага Имаи: Огяы

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ И РЕГУЛ ЯШ'И ИММУННОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА Б СВЯЗИ с СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИ!! ИСКУСОТВГУННОРО ОСЕМЕНЕНИЯ В СКОТОВОДСТВЕ

03. ОС. 13 - Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

ЦУЬРОБИЦЫ -

Работа выполнена в Отделе биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства.

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор В. В. «КОЯЖЖАЯ .

Официальные оппонент: заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор С. Д. КОШСКНЙ доктор биологических наук, профессор А.Н. УСЯЕВСКНЙ доктор биологических наук A.C. ЕРОХ«Ч

Ведуцее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимики и питания сельскохозяйственных животных.

Залита диссертации состоится ■¿¿¿Р/'&Я^ 1996 г. в

10 часов на заседании Специализированного Совета Д.020.16.02 при Всероссийской научно-исследовательском институте жизотноводстга.

Адрес института : 142012, Московская область, Подольский район, пос. Дубровины.

С диссертацией «южно ознакомиться в библиотеке ВИЖа.

Автореферат разослан " iggs г.

Учений секретарь Специализированного Совета доктор биологических наук,

профессор П.А. НАУ132Я

í. ОЕЗДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1. Актуальность тыщ

Совершенствование технологии воспроизводства с-х животных яо-нкаекие эффективности искусственного осеменения маточного пс-го-

нейпего изучения функционального состояния организма .»честны:-., его "■"л-нного стаг.сл. (Б.К Милованов. 1989, И.И. Соколовская, 1993, &.Д.Клш;сг-5й, 1994, А.Н. Успенский, 1591, В.П.Консноь, Горбунова Р.И.,1975, A.B. Вронская и др. 1930 , В.В. Жаркин. 1333, Е..П. Радченков, 199S . H.M. Решетникова. 1936 , А.А.Кочетков, 1985, K.D.Bratanov,V.Dlt'.ov, 1967, G.A.Voisin. 1993, S. Shulmaii , 19931.

Наряду о этим, актуальными являются разработки по совершенствованию технологии получения ( К.Н.Шайдулдин.1994, А.И. Абилов и .iL. 1994), оценки качества ( А.С.Ерохин, В.И. Яеряженцев, К.Д.Куч-:SIH¿ й Др. 1SS£ , A.C. Еремин, 1934. '¿.Л. Кононов и ДР- 1993?, кри-:;:онсервации (В.П.Консноь. 15££. A.h. Успенский, Е.А. Наук. -- -и использования семени :'А.И. Абюгов, И. И.Соколовская. 1993) езкиос - лроизводителей.

Акроскопический метел оценки качества семени, »чрксггнсерваци>» : -;ломинкач, аэродинамический метол оттаивания и визоцервикальное : ,-гуенение маток с использованием светопроводного расширителя. ■^Лигодаря легкости технического исполнения, гигиеничности и технологичности. являются доступными и перспективными для широкого ис-/¡гльзования в практике.

МслерниоирсЕанний визоцервккалыги'й способ искусственного осеменения коров и телок, становится частью прогрессивкой технологии воспроизводства крупного рогатого скота и способен обеспечить высокий процент стельности (А.И.Абилов. Р.Н.Ойвадис, 1965).

Наш', исследования являются составной частью программ совер-ыспСХБования технологии восг.локгводства гаупного рогатого скота , ;:---лнзуемьк совместно с сотрудниками Отдела биологии воспрсигвед*-и искусственного осеменения с-х животных БИЖа и специалистами хозяйств с 1S80 по 1995 г.

Работа выполнена в соответствии с программой о.сх.42, N госрегистрации 760.70.43, тема 21 " Усовершенствовать методы воспроизведения и искусственного осеменения с-х животных "

1.2. Цель и задачи всслегованкя

Цель работы - разработка и апробация эффективности тестов оценки и управления иммунным статусом организма в связи с совер-генстьованием технологии воспроизведения животных при искусственном осеменении, разработка методов для повышения точности оценки воспроизводитель кого потенциала самцов-производителей, совершенствования технологии получения, оценки качества, криоконсервации к использования семени быков-производителей.

аЛЯ реализации указанной цели были поставлены задачи:

г. Применительно к крупному рогатом, скоту, разработать тесты оценки иммунного статуса, определить сеязь иммунного состояния организма с воспроизводительными функциями;

2. Разработать экспресс - метод диагностики полноценности зя-кулятов, обеспечивающий высокую эффективность контроля качества семени и осеменения маток;

3. Усовершенствовать технологию криоконсервации семени быков- производителей, путем подбора состава сред для разбавления и замораживания семени и предварительной обработки физическими методами отдельных компонентов среды;

4. Изучить связь иммунного статуса организма с сохранностью новорожденных телят в молозивный период, разработать и испытать приемы и средства, предотвращающие возникновение иммунодефицитньк состояний у крупного рогатого скота;

5. Усовершенствовать технологию цервикального метода искусственного осеменения коров й телок, на основе использования светс-проводного расширителя и осеменительного инструмента с геликоидом, криоконсервации семени в соломинках, аэродинамического оттаивания семени;

6. Выяснить эффективность использования семени зебу для повышения адаптационных и воспроизводительных качеств европейски до-род крупного рогатого скота в условиях сухого жаркого климата.

7. Разработать технолог™ получения, криоконсервации к использования семени родстЕекных к Воу1пае диких форм (В1зоп ьспа-зиз-зубр } , р целью обогащения генофонда крупного рогатого скота.

i. 3. Научная нсжкзна к практическая значимость-

=первые poopабстан .: апробипован комплекс аялунслс -ических IvCüb, стражаизш*: как ;• я-тинскальнс* со/тояние целостно" сгга-rai: и стельных клеток - зошчкксг. s згжхятау (tfü&-y-:&3HA .:"*>сскли;.щик живчиков с аутосьзорсс^е крое и РЭД-Ж-позетко-

фС-рМИРУЮШИе С ЖИВЧИКаМИ ЛНМфОЦКТг .

."¿¿работая новый тест (AFT - аллергическая реакция Т-с/.па) саеики иил'янст ct^rvea. ксрсе и телец. Предлагаемые тесты и псиемы позволяют выявить, устранить и предстзрагкть аутоим.ч,к::ссть V :-нков производителей, улучшить воспроизводство стада и сохранность молодняка.

Впервые разработан препарат обладавший иммуномодулкрулшими свойствами - ЕКТЗМ , использование которого обеспечило 85-98а ссх-ганкость новорожденных телят, а тагеке белксво-витаминная пг~та прелстврагаюшая и устраняющая при скармливании аутокммун-

Усгьасьйсн* обратная зависимости характеристик замсрс.г.-г"- -:тгзлчнсгс семени ; псдвиашость, живучесть, целостность зкрсо >

' [ -С."1:; е I!v: ? - '«ОС.

:.сстап метод оценки г. с; icроженко-оттаянного семени • „к-ссл--е точно споеделясзий биглогичелгус полноценность и-

•..• пртгясгир-д-^лк результативность осеменения.

; ..сработана и сшрсбийсвана ковал среда более эффективно зйпз!-:рас-шаа живчиков при замораживании (A.C. N 1080819. 1й4 г.).

;.р сложенная усовершенствованная технология цервикалького не-• /сгг/хтвеннсг: о.он:;- огоон и телок, дополненная акооско-г.;песккм методом оценки качества семени, азродикамиче:::им от-.*.»к:--тлем и глубоким введением семени в шейку матки, повышает резулъха-!",'?"<~>стъ осеменения.

А::;, ебаци?. новой те.--?слогкк вкэоиервикального осеменения ко-I нсспк.твах. : :::-.: г пением ¿51 кос-оьь; г гел.-з». иоклсл." . : ". - *; уровень стельности.

":г.-гсг-;е рас рас. тана техника получения и криокснгервацк;' эяи-лнзимадького семокк зубра tEiocn tonftsus). погьилиьаая пол.чиг-г::брнлних телят (п=5).

пооюля.ет обогатить новы" генетическим материалом генофонд дрм.?л!него скота. Ксвгге гоны могу г стать объектом геннаскенерных исследований.

1.4. Основные положения, выкоснхие на запрету:

- у 6-10 X, быков-производителей имеет место аутоиммунность, снижающая результативность осеменения на 10-15 7, и спермопродукшго на 30 X. Иммунный статус организма находится в непосредственной связи с репродуктивной Функцией и служит индикатором его воспроизводительного потенциала ;

- препараты для ишунорсгуляции , повышение воспроизводительных качеств и сохранности молодняка ;

- использование достижений иммунологии и новых приемов в ис-кусстьенноы осеменении животных, более совершенная визоцервикаль-кая технологии искусственного осеменения коров и телок, новый крио-протектор;

- технология получения, хранения и использования семени ди -ких видов животных, в частности зубра, позволяющая преодолеть изолирующие поведенческие барьеры, способствуя взаимному обогащению генофондов гетерологическими генами.

Эта технология также создает возможности для пополнения дикой Фауны, животными созданными трудом человека.

1.5. Апробация полученных результатов

Материалы исследований доложены:

на ежегодных отчетах БИЯ -1984-1995 гг., межотдельской научной конференции ВИЖа (1996), Миловановских чтениях (ВИЖ 1993, 1994), на производственном совещании специалистов Центральной станции искусственного осеменения Pí> (19-37), на производственных совещаниях зооветспециалистов Сальянского и Нефтечалинского районов Азербайджана (1987,1938), Подольского района Московской области (1988), Y, VI, VII Международных симпозиумах по иммунологии воспроизведения ( Болгария, г.Варна, 1983, 1985, 1988); III, IV, v Всесоюзных симпозиумах по иммунологии воспроизведения ( Украина, г. Киев, 1987,1930,1993), I Всесоюзном съезде иммунологов (Россия, Сочи , 1989).

Диссертационные материалы также • экспонировались на виставкс-достюкений народного хозяйства СССР (1989) и Всероссийском выставочном центре (1995).

1.6. Публикация результатов исследовании.

Ген "ну 5 r??v.*J-4,arM "сследоьанйк, л г. тем? ли?.;-1

Hiïe лиссстацки Z.I г: с.'т,:: :Г Е аг тсре^рате.

1.7. Объем и структура работу

Диосеьтаик.-. хгяохена на сгрангаау машинописного текста, состоит из введения, осгоре ли:ературу. материалов и «етсз^Е, ре-с'.'.игатс! исследований и их обсуждения , заключения , выводов , предложений поокз£сдс?£у, списка литераг/рк. Работа иллюстрирогана Я? таблицами. рисунка.-«'. к /5 -¿отс-г рафиями. Список литературы содержи? источников, в тем числе /¿Рна иностранных языг^с-:.

?ыражж благодарность коллегам по совместной работе.

2. Материалы и мегольг исследований

:-:а кроликах ¡n^-,... ..;. ::.y-\v.: пж>и и: ел-: л..хан;:и i ;.ii:;<. литературе били приведены результаты отдельных опытов ни лаб.;--герцы:-: ;с,гcTüííx, nz которых следовало, что семя, семенная плазма, /с::- •••••:: : лоб^'очниу половых желез (СДПН) обладают икмукс* . •.••::•>:v.: с; ;• тт.г."й аутоиммунную реакцию проявляют самиы на тратт* ■.>.'■:■ гчп'.кн ''^.С.Раицина, ¿3S5). Б наших предварительных опытах на •*. - лиг с-: с-лробирсЕана эс^ектиЕн зет:-. тестов - розеткоформирукг щкх с йршрс.ш:го:.'.и барана лимфоцитоЕ ;?ФЛ-Э>, резеткэ^ормирхчещ'..'. .. живчиками лимфоцитов (РМ-Ж, по С.С.Райшкой, 19S5, б иагс-й модификации) и аутогемслизобразухжих клеток - АГОК Ш.П.Клемларская, 1368), а также PÎ2.K-реакции илм^илпзащи живчиков (И.К.Соколовская, А.И. Лбилов и др. 1990J.

СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

Рис.1

Для снижения и устранения негативных последствий аутсиммун-быков ароиёволктолсй изучено влияние скармливания км npeúa-~ъ , содержалва л.кросг-'гтвсркыые витамины (ЖРБ). бедизвс-Бита-мшаой пасты (ВВП. и белкс-во-витаминной смеси (ВВС; на качество :;-моки и результативность осеменения (И.И.Соколовская и др, 1960).

..ч.м с признаками иммунодефицита выпаивали по 10 мл витаминкой эмульсии (БИТЭМ) Б течение 10 суток (А.В.Вронская, А.К.Абилов, н •!.Соловьева, 198'). В опытах по изучению состояния ишушюи система >: жизнеспособности телят в молочный период, в зависимости от их обеспеченности жирорастворимыми витаминами, исполъзсьали 5000 телят черно-пестрой породы в 1-Х' дневном возрасте.

Для улучшения воспроизводства у "проблемных" коров испытаны иммуностимуляторы - Еитамюш и беламизол (синтетический аналог ле-вамизола, А.И. Абилов й др. 1995), а для стимуляции функции яичника - сурфагон -аналог рилизинг гормона (Ю.Д.Клинский и др. 1993).

Подбор компонентов среды БЭКС, для разбавления семени живот-:fbv осуществлялся по методике Р.К.Милованойа (1962).Семя от быков *г-эли 3 раза в С недели ло £ эякулпаа в одно взятие- и проводили .v.-kkv обьема, кониектр£<ти , лсдвижностк, и состояния ак;.-./Сом •:.:бчик'ое до и после криококсерьашш. Концентрацию жиьчипов опреде-— .-о-,о?л':'ктр-:«од--риметрическим методом, процент подвижных жив- микроскопирсзакием при 200х увеличении, состояние их акро-иэучали ачроскопическим методом с использованием темнопо.и ноге Ой-Ю при увеличении ?50х. Оценку качества заморожен-но-оттаянного семени дополнили учетом сохранности акросом живчиков Абилов. 1984). Эпидилимальное семя зубров для гибридизации с --им скотом готосили '..'-"^дук,22!м cíprisom: посм? ОТСТрвЛЗ v сэм" цое-зубров извлекали семенники, отделяли зякдидимис к п?меша.'л; его ? синтетическую среду для достижения 10 краткого разведения и Абилов и др. 1994). -Замораживание семени проводили в гранулах . горопластовой пластине ГН.П.ЮЕстсо, 1968). После заморджива-

t:::¿, СПОИВаЛИ НГСКСЛЬКО ГРЭНУЛ, ПрОБсрЯЛИ ПОДВИЖНОСТЬ И СГХрвЮ-, акросом живчиков.'

'.именем зубров осеменяли коров.Осеменение проводили усовершенствованным наш в и го це р a i ¡каль кьм методом.

Статистическую обработку полученных данных провели об^-.-г.рикя-TUMü мс-тодаг,« (Е.К. Мгркурьева , 1953). Символы *,** и *** означают достоверность разницы на ypv¿H? Р<0,С5, Р<0,01 и Р<0,001 соответственно.

3- Результаты исследований

3.1. Иммунный ответ и характеристики эякулятов в связи с ауто~, аязаюшунизацняык экстрактом живчиков и травмой семенника, в модельных опытах на кроликах

В модельных опытах было изучено влияние активной иммунизации на иммунный ответ, выявляемый РФЛ-З тостом (табл. 1)

Таблица 1. Влияние иммуклзаций экстрактом живчиков и травмы семенников на характеристики эякулятов

Экспериментальная группа п РФЛ-Э % Неповрежденные ак-росомы X йбъ-:а эякулята мл Общее число живчиков млн. Подвижность , •• А

Аутоиммунигация Аллоиммунизация Травма семенника 9 Разница *** +37,0 по сравш - 12 ;НИО с - 0,3 «штрол« -330 ;м (п=9) -20

7 +32,0 -15 -0,2 -90 -10

3 АА А +39,0 -44 -0.3 -310 -60

Данные, приведенные в табл. 1 свидетельствуют о том, что иммунизация экстрактом живчиков и травма семенников сопровождается статистически достоверным увеличением числа РФЛ-З лимфоцитов при одновременном ухудшении характеристик эякулятов. Направленность воздействия ауто-, аллоиммунизации и травмы семенника' на характеристики эякулятов является однотипной. Во всех трех случаях у подопытных животных отмечено снижение целостности акросом живчиков, обьема эякулятов, общего числа живчиков и их подвижности. В последующих опытах показано, что число кисых крольчат , родившихся от осеменения спермой иммунизированных кроликов составило лиеь 11,0-43% от контрольных данных.

д--:г.-:г:.г-;"г:* ре?^льггты получены при использовании ь качестве

чел "еденной пл&мь в ръ ¡ник дозах, а также сскрет,.- дсса-половых .т.елез (СД1£".1. Т.мз-.у :5разс.*, £ модельных опыта:-; установлена сопряженность ¿мкуццого статуса организма с его воспроизводительна,«'. гу:'.-~иямй.

. следующим этапом нагих исследований было изучение предпо-л-.^кку.се аутоиммунных реакций у быков-производителей.

¿.г. Аутоиымункцо аипигла у бь-тов-произ водителей

Лля более точной оценки иммунного статуса организма возникла ••.{'озходиюсгь в дополнении теста, выявляющего аугсиммукнлсгть ь клс точной реакции рогеткофермирования (РФЛ-Ж). С этой целью нами разработан метод выявления иммунореактивности ¡теток в сы крови - реакция иммобилизации живчиков (РйМЖ). Реакция основана на том, что при взаимодействии с хивчиками, в присутствии комплемента у ской сгинки. наступает их обездвиживание и выпадение осашса. они выпадамт е оона дне лупки.

Т;-.оом а-/гоантнтед I сивср-лке считали послетнее р ; " ...>■ -птерем ливчики гг-.чслхыс об'.^."хклк»ались и выпадали в лс..---г.'мния показали ¡гаол. С), что аутоиммунные антитела, ¡и.-: .-.- ••ъ . ьираЗатиьжтся у 15* бикс в.

:а'лица 2. Распределение образцов семени быков по ти.; антител £ рэаглхпи иммобилизации живчиков

! Исследовано быков в т.ч. с титром аутоантител

2 8 16 4- 16

940 е 1 ПЛ Т 1 632 67,2 174 18,5 77 8,2 44 4,7 13 1.4 134 14,3

та':.-., с видно, что доля проб с титрсм аутоактите» 4-16 ...;"хллет 14.'¿5 *, а с титрами антител 8-16 - £.1%. Сопос.у-.ьде аие титров аутоантител с подвижностью сперму не выявило связи :.;еуду названными параметрами. Р. то же время уровень антител у быке,::-производителей о:са?ал влияние на число живчиков в эякуляте г на их устойчивость к замораживапю"! .

3.2.1. Влияние уровня аутозимуннш антител из биологические характеристики еэмекм

Из . данных, приведенных в табл. 3 видно, что у быков вырабатывающих аутоантитела снижено общее число живчиков в зякулятах, а также устойчивость семени к замораживанию на 34 2 (Р<0,001).

Таблица 3. Влияние уровня аутоантител на число живчиков в эякуляте и их устойчивость при криоконсервации

Титры аутоантител в РИМЕ Число быков Подвижность живчиков (2) Подучев зякуля-тов за •месяц > Живчиков в эякуляте (млрд) Пригодных для исполь. (доз)

всего, %

0 18 80 347 6,14 +-0,06 3110 100

4-16 . 18 80 — 340 5,65 +-0,06 2051 66

Разница . - 0,49*** 1059 34*** ______ .. 1

Полученные в опытах по замораживанию спермы данные, вызвал необходимость анализа влияния аутоантител у быков на результат! осеменения коров ( табл. 4).

Таблица 4. Влияние аутоиммунности быков на результативность осеменения коров

Иммунный статус в РИМЖ Исследовано быков Осеменено коров • Из них не в течение повторили течку 1 месяца

всего г всего 2

Отрицательный 31 62,5 36262 25739 71+-0.2

Положительный 17 37,5 7663 4919 54+-0.5***

РИШ,

С титром 8-16 10 20,0 3741 2313 61+-0,8**.*

Сопоставление данных аутоиммунности гди) быков с результатами осеменения коров, показало достоверное снижение процента стельности от быков, проявивших АИ в РИМЖ.

- \ъ •

3.3. Опенка гг:к.-у::дага егагуса сргаккзиз в клеточной и гуморальной реакциях

5 исследованиях установлена специфичность РТ^-Ж и В"И. Показано, то РХЛ-ж тест выявляет клеточный иммунный ответ на поверхностные ан: ен.ны'- структуры живчиков. При этом можно устаноьигь как само нали-сенсибилизирсьанных к антигенам живчиков Т-лкм&сцктов. так и их локализацию на мембране.

даете-: таблиц« 5 видна взаимосвязь результатов, получаемых в с :сл«г:чйиХ и гуморальных {.»^акиинл. - РйЛ-2 л ТОЙ. при аттестации различного иммукного статуса.

Таблица 5. Взаимосвязь клеточного и гуморального тестов при оценке именного статуса быкои

rz

--г---)

Аттестовано j Исследовано по 2Ш лимфоцитов от быков ! каждого быка

i-----

Титры в гуморальной

реакции

; : всего , не нку реагировали в кг.с -

! i точной реакции (PJJI-JK

всегс

34Х 2f

Г ООО ' 106

-L-

8, С?+-0,7л**

Лз дачных табл.5 видно, что в числе быков аттестоваликак -тп'.шательних в Р>й.££ , было всего лишь 0,ВГ " роэеткоформир'лщих с глг:.;г:ауи лимфоците?.. По м:р; лов^-чип титр? лутоэн-ы:лил?л '-гл в "•.>срас1иси ге акции .'-Имл . r.ci кла- с_- и прс-с .".и: сь1с;Л«ди:крэвбнгих к собственным живчикам. Таг-; ;> ... . о:;;-. к г,гуппе с уровнем ьутоантит-.'Л b-'.i. с. :•> сиби-

/.;:..нросаишлли оказались 8,0? Z (P^O.GOl) лимфоцитов.

Взаимосвязь между используемыми тестами оценки иммунного сте-Tvoa с.1л;оз оценили по корреляико;;нкм коэффициентам.

Анализ показал высокую статистически достоверную корреляцию межлу результатами, полученными в спермоспецифических методах РИМЕ и РФЛ-Ж (г=+0,85). Относительно невысокую корреляцию с данными тестами проявил распространенный метод, выявляющий розеткоформиру-юшие с эритроцита.»«! барана лимфоциты (РМ-Э). Коэффициенты корреляции при этом составили 0,38 и 0,41.

3.3.1. Связь иммунного статуса быков - производителей с результативность и осеменения коров

Изучение влияния аутоиммунности быков на результаты осеменения коров { табл.6 ), показало статистически достоверную связь ме.глу ними,- чем выше АИ тем ниже число плодотворно осемененных коров. На практике снижение стельности от АИ составляет 7-10 X.

Таблица 6. Влияние иммунного статуса быков-производителе»: на результативность осеменения коров

, Быки РФЛ-а Титр Осеменено Стельность

асио (Z) РИШ коров n (Z)

Элегант 721 12 8 10 6(60)

Фауст 494 8 8 242 139(57)

Линь 482495 6 4 505 270(53)

Персуадер 13064 0 Q 2764 1959(70)

Семит 788 0 0 215 156(73)

Тайнллан 177 0,5 0 193 152(77)

Данные, приведенные в табл. б показывают, что использование в осеменении спермы аутоиммунных быкоз, выявленных в реакциях РФЛ-Ж и РШ1 (быки Элегант, Фауст, Линь) , привело к снижению результативности осеменения на 16 X (Р<0,001). Исследование большего числа коров fn = 40000) также подтвердило этот вывод.

Эти результаты указывают на актуальность контроля и учета иммунологического статуса быков-производктепей. Проявление аутоиммунных реакций организма сопряжено с достоверным »ггмекением уровня биохимических показателей крови, в частности с сбдержАни«--». в ней каротина и общего белка.

3.4. Регуллцкя иммунного состояния организма бцков-производителей . путем кскгроля в рационе никуностимулирутаих •'эрмоЕых добавок

Подученные результаты влияния кмм\ нгстимудяторов и некоторых ?1:глспг-г<-ск1! а-ггиькю: ьетегтк на гссг.рптгслктельную функции, послужили осноьаигск для контрс-лл и>. ургп-? н рационах быкоЕ. 1\: -чески*» интерес представлял изучение вопроса о том, с.-зт.ет ли =.-.кя-п::с ск»4»мдаание бедковс - витаминной смеси (ВВС) на иммунный ответ и качественные показатели семени быкгв ¡табл.?).

Таблица ?.Влияние скармливания белковс-витаминной смеси быкам-производителям на иммунный статус, содержали? каротина в крови и спермопродукцию

......... Г !

Группа 1 1 РФЛ-Ж Каротин ! Семяпродукиия |

(иг ! (мл:- !

г.сктголь. 1 15 ; '>-;. е

? г. и - 'з-ч \ 1 \ 1 г * ~ - . 4 хп*-*

лзджл табл. г бидис, что скармливание ЕВС снизклс аутс;?»-■ чтть б икс в и лсгысклс уровень Каротина £ крови

Полученные данные также доказали, что скармливание ЕВ? "дкос-«гс повлияло на улучшение количественных и качественных . •.;■:.Е четности яогысилась устойчивость семени к криокснсер-вации. При этом нь '¿Б Г. увеличился семени на бы к г.. на *

увеличилось количество эякулятов с высокой подвижностью к ъ 2. раза снг.силось число выбракованных эякулятов. Обобщение полученных дан.:-, .■. -.клгываот на необходимость индивидуального нормирования корм-

иыксь, учйтысэюаих витаминную ооесйечснвгсть организма при* активной семяпродукнии.

3.5 Контроль иммунного состэяккя пру. вчрзщиваним и использовании племенных быков

Наши опыты показали, что в период сырашивания до 2 летнего возраста у быков не были обнаружены аугс;.л{укные реакции, Еыявляе-

те в гестах РИМЕ и РФЛ-Ж. Анализ многолетних данных (1980-1989 гг.) , подученных на 200 бю:ах ЦСйО показал, что аутоиммунные реакции в титре S-16 выявляется с трехлетнего возраста. У быков-производителей в возрасте 8 лет и более титры аутоиммунности снижались ДО 1:4-1:8.

3.6.Контроль иммунного состояния коров к повышение результативности осеменения

В опытах, проведенных совместно с И.И.Соколовской, А.В.Вронской и Б.Г. Скопцом, был рззработан метод оценки иммунного состояния ксров в аллергической реакции типа Т (APT), путем внут-рикожного введения фитогемаггдютинина ( %а6л. 8).

Таблица 8. Связь иммунного состояния коров в сухостойный период с благополучием отелов и показателями ^воспроизводства

Состояние иммунной системы Число коров Утолщение кожной складки (мм) Показатели воспроизводства

Дни от отела до 1 охоты Сервис период

Угнетенное Нормальное 65 83 1,74 +-0,14 2.83 +-0,11 52+ -4,0 ?3+ -10 69+-Э 42+-8

Из данных табл. 8 видно, что сниженная APT-реактивность у коров сигнализирует об ожидаемом неблагополучии предстоящих родов, удлинении сервис периода и продолжительности промежутка от отела до прихода в охоту.

Изучение действия беламизола - иммуномодулятора на воспроизводительную функцию коров показало, что оптимальной является их обработка за 16-30 суток до отела. Введение беламизсла в первые 2 недели после осеменения не было эффективным.

Благоприятное воздействие на воспроизведение у коров оказзлс введение в их рацион жирорастворимых витаминов. Сервис период у них сократился с 96 до 69 дней.

_ * с, _

л. —

3.7. Регуляцкк кынунного статуса новорокденииг телят

Необходимость п-выле: ня сохранности молодняка с ослабленной .-члг.'кой системой, обусловленной недостаточность«: поступления е организм биологически активных веществ, к в первую очередь жирорастворимых витаминов, послужила основанием для проведения соответс-тг;,глто исследования. Для этого было изучено иммунное состояние тслдт на комплексе 5едюко»о совхоза " Путь Ильича" Подольского района Московской области . ь связи с выпаиванием витаминной э!луль-тии, ВМТЗМ использованной нами г качестве средства для симуляции ии.г/нной системы ( табл.9 ).

Таблица 9. Влияние выпаивания витаминной эмульсии на иммунный статус организма телят, оцениваемый по уровню розеткоформируюдах лимфоцитов их крови

; Интервал ст мхлення до исследования Группы ! - сутки ;

I-------------,--------

т 7- • л

С .V

( Опытная | - !

I Кснтооль- | | ная г,=9 |

;__I

'•: данных. г.рг'.Ес-д^нны* в табл. с видно, что выпаивание вита-:•>••.• льсик существенно довдиелг на численность родеткообразу-у телят. Е хрулпс животных. получавших эмульсию с мс-•.••Т; : :«-лнчи?. до 1С пневнтг: ьсзгалта, число роветкоформируосих клеток постепенно увеличилось. г т: е:змя как в коитосльнпй - число их на 1С день било ниже Б 2 раза. Это снижение сопровождалось расстройством жедудочно-кшечного тракта неинфекционной природы у из ? (78 X) телят.

г опытной группе, где кроме молозива телята получали препарат БКГа4 клинических заболеваний не было.

1С

17,3—1.2 ! 18,

. ¿г, р-I

I

3.7.1. Оценка уровня иммунного ответа у телят в аллергической ккточкой реакции

Научение влияния выпивания телятам 8ИТШ показало (табл. 10). что у телят, получавших указанный препарат, иммунный ответ на введение ФГА был более интенсивным. При этом телята со стимулированной иммунной системой в меньшей мере подвержены расстройству желудочно-кишечного тракта и на 11 2 их сохранность была выше.

Препарат ВИТЗМ был использован с положительным экономическим эффектом на 5000 телятах в 5 хозяйствах Подмосковья.

Таблица 10. Влияние регуляции иммунного статуса телят на их сохранность

Группа телят Число животных Расстройство жел.кишечного тракта (Z) Сохранность" (2) Выбраковка (2)

Опытная 26 27+-8,0 100 0

Контрольная - 45 40+-7,0 89+-4,7 11,1

Анализ показал.что коэффициент корреляции между уровнем ро-зеткообразувших клеток и утолщением кожной складки в аллергической реакции у телят, в контрольной группе, был положительным (г«0,46*** ), как и в опытной. (г=0,5б*** ).

Это аначцт. что обе реакции состояния иммунной системы однозначно определяют иммунный статус животных.

Обобщая результаты исследований, по сравнительному изучению эффективности использования тестов РИ1-Э и APT, для оценки иммунного статуса телят можно сказать, что техника проведения APT теста является более простой по сравнению с тестом РФЛ-Э и может быть использована с такой же результативностью как и РФЛ-3 тест.

Таким обраасм, наши разработки позволяв? выявлять отклонения лунной природы и управлять иммунным состояниэы , путем дачи животным иммуностимулирующих препаратов.

3.8. Совершенствование технологии получения, ецггпш, криоконсервацкн к использования ссмени бжаз

3.8.1. Влияние последователь кости получс:ги зякулятов

на качество сеиеки

Установлено, что в последовательно получению; 2-3 зякулятах содержится разный объем жидкости каудальной части эпидидккиса и секрета добавочных половых желез. В свежевзятоы семени, от первого к третьему эякуляту увеличивается объем, но снижается концентрация. Однако, морфология акросом живчиков в свежевзятом эякуляте не зависит от последовательности получения згпсулята. но при криокон-сервашш наиболее криоустойчивы эякуляты Е-го и 3-го взятия. Они превосходят первый зякудят по подвижности и сохранности акросом. Так, в зякулятах 1-го, 2-го, и 3-го взятия живчики имели подвижность 75 - 76 X. После замораживания-оттаивания подвижность соответственно составила 45% , 52 X и 55 £. Полученные данные дают основание пологать, что при долгосрочном хранении генетического материала высокоценных быков следует замораживать не смешанные эякуляты, а эякуляты с указанием порядкового номера их получения.

Исследования режима замораживания-оттаивания семени показа -лк, что кристаллизация проходит б пределах температур от - 5°С дс ".С и она для семени каждого быка индивидуальна. Определяющим рготором для выживаемости живчиков является глубина переохлаждения. Лучшие показатели семени замороженно - оттаянного в соломинках были получены при минимальном его охлаждении (-5°С;. При отта-:ии семени подвижность снизилась в 1,3 раза. После инкубации в течение 4 часов она снизилась в 3 раза, а число живчиков с нормальными акросомами в 1,2 раза.

Корреляционный анализ глубины переохлаждения с характеристи-

зякулятов выявил существование отрицательной связи с исходной .-. .:;центрацкей живчиков в семени.

3.8.2. Акроскопичссккй метод определения бмолагкчасксЗ

полноценности гашчккан

Установлено, что для определения биологической полноценности живчиков эффективным является метод оценки целостности акрссом. В основу новой разработки был положен акроскспический метод (Акро-1),

предложений К. Я. Соколовской (1980). Его модифицировали путем замены фтористого натрия на желатин, который замедлил поступательное двкгэние живчиков (Акро-2 ).

Сравнительный анализ показал, что 1 1 фтористый натрий обездвиживав живчики, завышает долю поврежденных. При использовании желатина, сценка более точно отражает качество семени.

Метод "Акро-2" позволяет дифференцированно подходить к определению морфологии подвижных и неподвижных живчикое.

Несовпадение сохранности акросом с их подвижностью, после замораживания-оттаивания, семени, показывает на недостаточную информативность глазомерной оценки подвижности семени под микроскопом к необходимость внесения изменений в существующую технологию. Полученные результаты согласуются с данными В.П.Кононова и М.М. Мамбе-талиева (1994) о том, что подвижность за^роженно-оттаянного семени не может служить надежной оценкой его биологической полноценности и оплодотворяющей способности.

3.8.3. Совершенствование технологии криоконсервации семени бкаюв-производителей

Важным элементом технологии криокснсерьации семени является состав защитных сред для ее разбавления и замораживания.

Учитывая важную роль воды, как компонента состава сред, нь/.«-: изучено влияние ее предварительного замораживания-оттаивания и осваивания на криопротектооные свойства ссед, приготовленных с ее использованием.

Установлено, что процедуры заморакивания-оттаивания и озвучивания воды, в которой растворяют компоненты среды, повышают устойчивость живчиков к холодовому действию, а после размораживания их - подвижность и сохранность акросом.

Аналогичную картину получили после обработки воды ультра -звуком. (22 Мгц, 5 мин. экспозиция). Подыссчооть живч:«ов после замораживания-оттаивания была наивысшей при использовании б составе криопротектора замороженно-сттаякно- озвученка;; если. Полги* -ность живчиков составила 53 2 против 46 2 (Р<0,05), при использовании кипяченной воды.

Эффект обработки воды проявился в изменении вязкости и диэлектрической проницаемости.

3.8.4. Вляякие сроков хранения семени в закоро/г,енноы оостоя-шш на Ьюлопяеские характерггстккк гккв'-аоюв

Чувствительность акросом живчиков к криоконсерьации в зависимости от степени их зрелости и наличия на их поверхности семенной плазмы, изучили на зпидидимальных хиЕЧЯках зубра, извлеченных из каудальаого участка (табл. 11). Послплние, как известно, еще не имели контакта с семенной плазмой.

Таблица 11. Сохранность акросом живчиков из каудальной части зпидидимиса зуброЕ до и после криоконсерваци

Г..........— Оценка семени 1 1 Сохранность акросом, живчиков зубра (X)

Морус Монт

! ; До замораживания 1 89,0 1,2 82,5 1,6

; Оттаивание после : криохонсервации 54,5 +- 3.1 67,0 +- 2,8

1 Оттаивание после 1 20 суток хранения 54,5 +- 3,1 67,5 +- 2,7

1 Оттаивание после ! 1 Ь лет хранения 54,0 +- 2,9 1 ! 64,0 +- 2,9

Исследование показало, что срок хранения эпидидимальных живчиков зубров в пределах 5 лет не влияет на их биологическую полноценность .

3.8.5. Влияние состава среди для разбавления сеиаии бккоз на его криобиологические свойства

В многочисленных опытах показано влияние состава сред ка результаты замораживания- оттаивания спермы. Оптимальной но составу и количественным соотношениям отдельных гх -понентов является предложенная среда ВЭКС. Она имеет оледуюкий состав ( на 1 лито дкстил-

дированкой воды): сахароза-101,2 г; комплексная соль ЫагСаЭДТА -6,0 г; желток куриного яйц?-50,0 мл; глицерин ГОСТ 6259-75-40 мл; ПГЭНХ-0,005 г; пенициллин и стрептомицин по 300 тыс.ед.). Данная среда названа БЭКС- для Быка, с Зхинохромом , Комплексонатом, Сахаром (A.C. N 1080819, 1984 г.).

В таблице 12 приведены данные характеризующие криозащитные свойства предлагаемой среды.

Таблица 12. Качество замороженно-оттаянного семени при использовании трех уровней концентрации компонентов среды - БЭКС -

Концентрация компонентов среды Абсолютная живучесть (в часах) Полупериод подвижности (в часах) Сохранность акросом жизчиков U)

Минимальная Оптимальная Максимальная 5,0+- 2,6 11.1+- 3,1 39,0 +-1,5***

8)5+- 2|5 1?,8+- 4,6 61,0 +-1,5***

6,0+- 2,6 12,9+- 4,1 57,0 +-1,6

Из данных табл. 12 видно, что уровни концентрации (минимальный, максимальный и оптимальный) оказывают статистически достоверное влияние на физиологические характеристики семени. Экспериментальным путем была определена оптимальная концентрация компонентов в среде БЭКС.

Сравнительные испытания криопротекторных свойств трех сред (БЗКАСАКО, ЛЬРМГЖ и БЭКС) показали, что максимальный полупериод подвижности спермы соответствует степени разбавления БЭКС 1:8 -1:32. Указанная среда также гарантирует высокую сохранность (61%) акросом замороженно-оттаянного семени и превосходит по указанному показателю другие среды.

Результативность двухкратного осеменения в одну охоту коров при использовании сравниваемых сред существенно не различалась, но при этом проявилась тенденция к повышении на 5 X числа стельных коров (66 % против 61 X) от применения БЭКС. Исследование криога-щитных свойств новой среды показало, что протектор БЭКС обладает более высокими показателями по периоду подвижности, по сравнению с криопротектороы в состав которого еходит три углевода ( лактоза,

;руктсза. раффиноза";. сод^всй :»мпонент - сульфат- магния и тради-

:____.иные-глицерин, желтей куриного яйца, сг.ермосак ( Е.А. Наук, Г.Е.

1:с,и'. и др, Ю'З1. Эта среда в литературе прик.го обозначать ¡сак "'-"■Г.?.. г-леднйгельяое преимуществе БЭКС - то. что ее производство з^вле в 15 раз. Это послужило основанием для рекомендации ее ис-сСЕ-анн?. ? лооизвозственкыу рел.-.к.

3.8.б.Совершенствование технологии первикального введения сеиенм в половые пути каток с использованием светопроводы юг расширителей и гелнконднше наконечнихсз

Использование трубчатых езетопроводных расширителей, кснс-ггукции академика Б.к. Миловачова. позволяет определить кор-фс-функциональное состояние шейки матки и слизистой влагалища ¡А.И. Абилов, Р.Н.Ойвадис, 1985) .

Усовершенствовали осемените ль ный инструмент, оснащенный плас-'.'о-сго'у леьоггчсшвимся голикоидным наконечником, соответствующим .-г.-..::,се внутренней поверхности лейки матки и псгвсляший глгг-кс

аиг'.-чеяа эффективности использования зти>: инструментов, ь •о-- --":■::'.;< с традиционным м.-тзллическим влагалищным расширителем

гда 12. резульгаты осеменения коров и телок ссовера вованяьаг визе дерн юаа ным способом

| до ¿листве чсемеканс 1 Установлена ! стельнос:1 ~ с' ( 1

1 ! !>з "Путь Ильича" 278 176(63,3) | I

1 102 30(78.0) '

*." о "сни Мугань" 1 279(73,0) 1

1 ! К-з им. Мичурина 100 ; ( С С / £-,и } |

Результативность 'осеменения коров и телок усовершенствованным эизсцорыасальным методом в хозяйствах, расположенных в различных :::одого-г?огр2|1:ических зонах била высокой - 63,3-72,0 % (70,5 X)

стельности. Предлагаемая технология является более эффективной, она снижает уровень физически усилий техника-осеменатора, исключает травмы рук и отвечает гигиеническим требованиям.

3.8.7 Внешне генетических я паратонических факторов на воспроизводитель ную способность коров м телок

Изучено влияние генетических факторов и стрессовых воздействий условий жаркого и сухого климата Муганьской степи Азербайджана, на воспроизводительные функции коров ( табл. 14).

Таблица 14. Воспроизводительные показатели коров разных генетических групп

Порода, группа коров Число коров В т. ч. проблемных Учтено Показатели воспроизводства ( без учета проблемных коров )

Стельные от 1 осемен. Сервис пер.(да.)

M п 7. N п г

Симментальская 263 64 24,7 199 140 67,8 80 +-3

Симментальская

х голштин.(Р1) 295 54 18,3 241 158 65,5 78 +-3

Литовская ч/п 154 54 35,0 100 66 66,0 86 +-7

Литовская ч/п

X голштин. (И) 27 9 33,3 18 10 55,6 80 +-9

П х зебу 21 О 9.5 19 12 58.0 98 +-7

Представляет интерес низкий процент проблемных корон среди помесей симментальская х гслштинск&ч ( 18.3 Z). По воспроизводи тельным качествам симментальские коровы существенно превосходя* черно-пестры::. Лучшие результаты в жаркой еасушшвой зоне имели гибриды F1 ( симмен. х голаггин.) к весу. Прсблс-мнке корош соота-вкяг: 9,5 Z. Эти результаты указывает ка ¡••--.••.-.oocOi-я:;ч;ста л.колъео-

.-:е£у для яоть&гнзх яосщзокзводетва стала в жарких регионах

- ¡.¡."ЭЛЫ

я.З.й Разробска технологии получения, оценки. крзг.'^кня и испадьаааашш семени зубров

Технология получении семени от дика зубро? ЬспаггиБ),

<- использованием искусственной вагины не разработана, несмотря ¡¡а потребность б ней. В нашей стране, зубры представляет интерес не только з связи с охраной и восстановлением природной Фауны, ко г--хх6 для использования е генетических программах разведения домашнего скота. Межвидовая гибридизация зубра с крупных! рогатым скотом , с использованием эпидидимального семени, представляет практический интерес (Л.К.Эрнст, А.И.Абилов, Т.П.Сипко и др. 1933, А.И.Абилов , Л.К.Эрнст, Н.И.Стрекозов и др. 1994).

В этих целях изучена возможность получения и использования знидидим&яьного семени, взятого от отстрелянных животных.

выяснилось, что с целью предотвращения снижения качества семени требуется онера'/иььисть проведения процедур« извлечения содержимого из эиидидимиса. Характеристики качества полученггого се ноивол^иы в табл. 15.

Габлипа 15. Количественные и качественные характеристики эпидидимального сенеяч з^/бра

пг;'-\?атели эпидидимального ;емени Выявлены кояеоания в преде-лл>:

Объем извлеченной жидкости 18 - 20 «л

Концентрация живчиков 2,8 - 3,0 млрд/ мл

Всего живчиков 7,8 -16,4 У^гл

Выход семени на быка 120 доз

Подвижность . . . _______________________________ 60 -70 X

Из таблицы 15 видно, что получение; гемя из эпизиднииса по

физиологическим показателям удовлетворяет условиям необходимым для крисхонсервации. Изучены основные параметра з&чороженно-оттаянкогс семени зубров ( табл. 16 ).

Таблица 16. Биологическая полноценность семени зубров после замораживания-оттаивания

Показатели эпидидю;ального семени Выявлены колебания в пределах (X)

Эозинофобных живчиков до замораживания - после оттаивания 54-53

43-45

- после 4 ч. инкубации, 38°С 20-28

Нормальных- акросом до замор. 83-89

- после оттаивания 55-67

- после 4 ч.инкубации, 33°С 42-44

Анализ образцов семени показал, что в завороженно-оттаянном зпидидимальном семени зубров снизилось число живчиков как эозино-фобных, так и с нормальными акросомами, в пропорциях характерных для бычьего семени.

Для практической работы важное значение имеет гарантия биологической полноценности спермы при ее длительной криоконсервапии в жидком азоте. Изучение качества спермы после разных сроков хранения в жидком азоте, выявило, что показатели биологической полноценности семени менялись лишь в течение первого месяца хранения. В течение последующего пятилетнего периода исследований ника!шх изменений свойств семени не выявлено. Зто показывает, что криоксн-сервация семени зубров происходит по тем же закономерностям, что и семени быков крупного рогатого скота.

Прямым доказательством полноценности криоконоерЕированкого семени, в нашх опытах, служило рождение гибридных телят от обратного скрещивания - путем осеменения коров семенем зубра (табл.17).

Из материалов таблицы 17 видно, что здаорат.епнс-отта.ишог семя зубров позволило подучить жизнеспособное ПОТОМСТВО,

Таблица 1?. Рале кие гкбридккл телят ггри осеменении .коров

5з.морож0Нг.о-оттаякн&!У злидидимальным семенем зубра

Способ размножения Родилось телят Масса при рождении (КГ; Живая масса тела в 5 мес.(кг) Продолжительность стельности

Скрещивание 5 43 - 49 215 263

Чистопород -кое разведение 6 34 - 3S 175 285

Семя было использовано после длительного , в данном случае, 5

летнего хранения в жидком аготе.

Масса тела гибридных телят при рождении в среднем составила AZ кг, т.е. на 9 кг была выше массы телят, полученных при чистопородном разведении черно-пестрого скота. Гибридные телята росли ;.y'i_. чистопородных черно-псстрых и Б 5 месячном возрасте масса их Т1. достигла 215 кг, проявляя Еыраженный гетерозис. Разница по ой массе тела составила 40 кг б пользу гибридного потомства.

Установлено, что стельность коров, вынашивающих гибридных телят короче на 22 дня» В згой связи изучили продолжительность . .лыюсти у зубриц в природных условиях. Анализ показал , что у зубриц, в Окском заповеднике, в период с 1953 по 1933 г. продолжительность стельности не превысила 270 дней. При этом средний уровень стельности составил 63 X.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

гезультаты исследований позволяют заключить, что разработала тосты позволяющие выявить аутоиммунные состояния у быков-производителей и коров. Выявление Феномена иммунных нарушений к его влияния на воспроизводительный потенциал быков и коров, является важном фактором влшты на технологию и эффективность искусственного осеменения крупного рогатого скота (А.г: Абилов . А.А.Кочетков ,

И.И.Соколовская и др. 1989, Л.И. Соколовская, А.К. Абилов, А.А.Кочетков и др. 1990; Abilov А.!., Sokolcvskaya I.I., 1992).

Аутоиммунность быков необходимо выявлять з реакциях розетко-формирования .. с лимфоцитами крови (Р&Я-Е) и иммобилизации живчиков в аутосыворотке крови (РИМЕ). Указанные два метода дачт хорошо воспроизводимые результаты и могут быть использованы для оценки клеточного и гуморального иммунного статуса организма. Акросома -органоид живчика , обладаосщй наиболее выраженными антигенными свойствами, в связи с чей она является мишенью атаки антителами. Нарушение структурной целостности ее приводит к снижению оплодотворяющей способности семени. Морфоиммунологическое изучение акро-сомы позволило предложить экспресс метод определения оплодотворяющей способности живчиков ( Р.Н.Ойвадис , А.И.Абилов, И.И. Соколовская, 1984), получивший распространение в практике.

Новыми в научно-теоретическом отношении являются серия исследований, в которой показана, что дефецит в рационе каротина и витамина А являются условиями развития аутоиммунного процесса. В этой связи разработаны рецепты, содержащие в легкоусвояемой форме витамин А.. Введение в рацион белково - витаминной пасты (ВВП) снимает аутоиммунные реакции и улучшает качественные и количественные характеристики эякулятов. В этих экспериментах прослеживается непосредственная связь иммунной системы с питанием животных ( И.И. Соколовская, А.И. Абилов, А.А.Кочетков и др. 1990). Полученные результаты указывают на необходимость уточнения норм витаминного питания быков-производителей в период их активной спермопродукции.

В опытах по повышению сохранности телят выяснено, что путем выпаивания витаминной эмульсии удается повысить сохранность молодняка в молозивный период на 95-98 2. У животных, получавших препарат ВИТЗМ, не были выявлены сдвиги в иммунореактивности (A.B.Вронская ,А.И.Абилов ,Н.П. Соловьева, 1988).

В опытах по контролю иммунного статуса у коров установлено, что разработанная методика выявления АРТ (К.И\Соколовская А.В.Вронская , А.И.Абкдов и др. 1987) позволяет определить иммунный статус короз и телок. Для снижения отрицательных последствий иммунодефицита следует использовать препараты аярорастворимых витаминов, а также синтетический иммуностимулятор беламизол (А.И.Абилов, , И.И.Соколовская, В. В. Ель ч зашив и др. 1993). В практическом плане актуальны исследования , по гюясг-г/ более эфректив-ных криопротекторов. С этой целью предложена нолая среда для раз-

бавления и замораживания семени (A.C. N ÍDS0819J. По криобизлоги-•ч-ским свойствам БЗКС не уступает аналогам, его изготовление сбхо-" дигся дешевле (Б.К.миловагов.И.И. Соколовская, А.И. Абилов и др. i534). Изучены изменения характеристик сред, путем обработки зсль; для их приготовления i.A.Абилов , И.К.Соколовская . 1993).

Исследования по усовершенствованию визоцервикадьного искусственного осеменения позволили внести новый элемент - акросомный метод оценки качества замороженно-оттаянного семени, позволяющий точнее селекционировать эякуляты, обуславливающие более высокую сезуль тативность осемвн-ний.

Другим прогрессивным элементом указанной технологии стала кркоконсервация семени в соломинках и аэродинамическое оттаивание. Тоетий - осеменение с использованием светопроводного расширителя с геликоидным наконечником. Исследования показали существенные преимущества усовершенствованной технологии.

Усовершенствованный визоцервикальный метод в технологическом отношении является более прогрессивным и получает широкое распространение в практике искусственного осеменения молочного екта •.В.К. Милованов. и.У.. Соколовская, А.й. Абилов и др. 1983).

? целях расширения использования искусственного осеменения о~л „.„гзсс-дия генофонда домашних животных новыми гена».«, и созда-•ия йогл-, проелутэчных Ферм скота, разработана технология получе-и чр,".. консервирования эпидимадьного семени зубров, позволяющая —.'лучагь гибриды с крупным рогатым осотом (А.И. Абилов, Л.К.Эрнст -.-i. •Г-рэкозов к др. 1994

Первые опыты по получек;so гибридов Bison ocnasüä л ¿os lau-'или начаты И."."заксв;.-' '1914). В настоящее воемя технически зосмсхн-.сти в oco.'vCTH воспроизведения существеьао возросли и позволяют продвинуться дальке.

Разработка технологии получения, использования и криоконсер-зации злидидимального семени зубра (Л.К. Эрнст, А.И.Абилов , ;.Л. zv.:nx¡ 'л др. i033 . Т.п.Сипко , А.И.Абилов, А.В.Шурхал и др. : .-К! ра> -дкряет возможности использования генофонда р-лдственных ".'.'П":м7 оогагому скоту пилоз животных и открывает перспективы по

со-: н;сз редких и ксчегсааих видов животных.

* * *

5. ВЫВОДЫ

1. У 6-102 быков-производителей ЦСЙО выявлена аутоиммунность, снижающая результативность осеменения маток на 10-152, спермопро-дукцию на 30 2. Образующиеся в результате иммунизации в организме ауто- или аллсиммунные сдвиги нарушают сперматогенез и повреждают живчиков на разных этапах созревания.

2. Аутоиммунность к антигенам семени у самцов выявляется методом розеткоформирования лимфоцитов крови с аутологичными живчиками (РФЛ-Ж) и в реакции иммобилизации живчиков в аутосыворотке крови самцов с добавлением комплемента (РИЩ).

3. Наиболее сильными антигенными свойствами у живчиков обладает акросома, в связи с чем она является мишенью для аутоантител. Аутоиымунизация у самцов сопровождается снижением устойчивости ак-росомы и спермы к криогенным воздействиям.

4. Экспресс метод определения оплодотворяющей способности живчиков по состоянию их акросом может быть применен в практике искусственного осемеьения не только для оценки качества семени, не и для анализа свойств разрабатываемых сред. Метод позволяет одновременно и точно определить качество оттаянного после замораживания семени по подвижности и сохранности акросом живчиков.

5. Дефицит в рационе каротина и жирорастворимых Екташнов, является фоном для развития аутоиммунности у быков. Использование белково-витаминной пасты предотвращает развитие аутоиммунных реакций и снижает уровень антиспермальных антител в крови самцов, улучшает качественные и количественные показатели семени.

Скармливание новорожденным телятам витаминной эмульсии (ВИТЗМ) способствует повышению жизнеспособности, позволяет нормализовать их иммунную систему в первые дни жизни.

6. Для контроля иммунного статуса коров целесообразно использовать тест, основанный на аллергической реакции Т-типа (APT). Снижение отрицательных последствий иммунодефицитных состояний на воспроизводсто достигается путем иммуностимуляции Функций организма с использованием жирорастворимых витаминов и синтетического им-муномодулятсра беламизола.

7. Разработанная среда для заисраживанкя семени (БЭК"), по •;е/нсдогическим свойствам не уступает изгестным, а et нзгс: ;.ы?нис-обходитсй в 15 раз леш«?.'-

с. При замораживании семени степень его перс-охлаждения отрицательно коррелирует с сохранностью акросом живчиков. Специальная обработка волы для приготовлении сое л повышает эффективность расконсервации.

9. Усовершенствованный метод искусственного осемекеьпг* коров и телок, на основе акроскопической оценки качества семени, крио-консервации семени в соломинках, аэродинамического оттаивания и осеменения при помощи светопроводного расширителя с геликоидным наконечником, более технологичен и может быть использован ъ качестве основного метода на производстве.

1С. В экологических зонах с жарким сухим климатом гибридные кс с се и, подученные при скгешя&чни европейских порог с sei у. .*•■•• ли сс-еимунестг.а по показателям воспроизводства, гибриды легко г, : : сят неблагоприятные условия . в меньшей мере подвержена -т:--:. ч- s

заболеваниям.

U . =аг-оаботана методика криокснсервирования йпидш/мад* ь: г: .т-у-ни е.броь, обеспечивающая 55-57Х сохранность акооеом живчик:t. нсл/чение гибридных теляч.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для выявления аутоиммунности у быков на племпредприятиях предлагаем применить гуморальные (РИМ») и клеточные (РЗЛ-Ж) тесты.

сто.чн'-пн.е и предотвращение этого состояния может быть достигнуто скармливанием белксво- витаминной пасты (БВП).

2. Х~я достижения 95-98 X сохранности телят, в хозяйствах вы-роошваиеих молодняк крупного рогатого скота, ре;;оуекдуеы выпаивать телятам, в молозивный период, препарат ВИТЭМ.

3. Для разбавления и замораживания спермы быков на племпредприятиях и станциях искусственного осеменения РФ рекомендуем ноеый биологически и экономически эффективный протектор БЭКС (Авт.свид-во N ''""0819, 1984 г.).

4. В. целях повышения результативности осеменения к технологичности процесса, департаменту животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода РФ рекомендуем внедрять в производство усовершенствованный визоцервикальный метод искусственного осеменения коров и телок.

5. В инструкцию по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных , предлагаем включить акроскопический метод оценки качества заыороженно-оттаянного семени быков. Акроскопическое наблюдение, более точно чем традиционные тесты, отражает биологическую полноценность живчиков и позволяет повысить результативность осеменения за счет правильной селекции зякулятов.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Милсванов В.К., Соколовская И.И., Абилов А.К. и др. Среда для разбавления спермы с.-х. животных. Автор. свидет. N 1080819. 1984 г.

2. Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н., Абилов А.И. Экспресс метод определения оплодотворяющей способности живчиков (Акроскопический тест). Метод, рекомендации по иммунологии воспроизведения.- ВИЖ, Дубровицы.- 1985.- С.40-45.

3. Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н., Абилов А.И. и др. Реакция живчиков быка на аутосыворотку крови вне организма в связи с результатами осеменения// Биология и иммунология репродукции. - София.- 1985.- N11.- С.15-1?.

4. Соколовская И.И.. Ойвадис Р.Н., Абилов А.И. Действие иммунизации самцов аутоплазмой спермы на ее качество и результативность осеменения// Доклады ВАСХНИЛ.-1936.-Н1 -С.29-31.

5. Абилов А.И., Ойвадис Р.Н. Технологические приемы искусственного осеменения коров// Животноводство.- 1985.- N7.-С.44-46.

6. Соколовская И.И.. Скопец Б.Г.. Абилов А.И. и др.'Методические рекомендации по выявлению иммунодефицитных состояний коров в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЧЗТ).- ВИЖ, Дубровицы, 1987.- 12с.

7. Соколовская И.И., Абилов А.И., Брокская A.B., и др. Сохранность телят - важный резерв улучеония воспроизводства// Животноводство.- 1987.- N8.- С.45-47.

: Тлколрв-.кай '¿.Ж.. Абилср »..К . Кочетков А.А. • к ао. Антитела ..

-..': плазме ¿роли.*:» и иу влияние на характеристику эякуллтор к оезультативность осеменения/.' Весте, с.-х. ка-••ки, - 1955. - JT - С. 55 BS. э. АЫ1о» <». ¡., Етопзкауа A.V. Тле influence changes of ohys.olojncai cows status on ¡Г-FTC number// AJRIM. - 1988.-V .If • 7 г

10. Bronskaya A.V., Abllov A.I., Sclovyova N.P. et.al. ppi^^e^jp oei»e#(i ¡¡¡типе reaction In E-RFC, ART with FHA and health or caives// AJEiM - i33S - V. 16.- P.77. :*.. Абилов А.И, Вронская A.E., Соколовская И.И. Влияние физиологического состояния коров на активность иммунного ответа// Зоотехния,- 19.88.- N9.- С.43-44. 12. Соколовская И.И., Абилов А.И., Кочетков А.А. и др. Выявление спонтанной аутсиммунности быков в кл^го"'~ ч оеак"чях// Доклады ВАСХНИЛ.- 1988,- N12,- С.24-27 13 милованое В.К.. Соколовская И.И Аб- -оч "■ ' : Повышение эффективности коспрси&Есдгтва крупного рогг~с- s_ ота/-'" т>\-:ккк 1989 -к:.-':. г: U AciiOV а 1.. Таг т .. Tcw.-irative effес^-,1о* rotnods. ':: bui.; грог-» arrcjur autoimmunity ins:-.,i'a£.t,lor. // J. rspiod. Immune j . - 133» - '.£3 - F t8i

АбпЛС? А.И., ЧОЧ^ТКО'- ¡..к. Соколовская i' И И Др Аутоим-м-.'чнооть быков и воспроизводительные Фунглии/-' Зоотехния.-NC.- С.51-54.

*Р- Абилов А.И. Причины возникновения аутоантител к

;.*•: ¡.татазоидам -а«:;: г >' способы и> устранения. /./ Г

иммунол. г*-.-..г. Тезисы логл:. II том, Сочи. М. 1989.-С. 5.

17. Абилов А.К., Таг Т.Д. Проблемы аутоиммунности быков в работе станций ип-'сстгенг.ого ооем»нения // IY Всесоюзн. симпозиум

пр нсJij ;iи р"г:рр;'.'кипи. Киев. 1993.-С 1С. 1Я Соколовская. , ЛР;;лоь л. П., K.cv тксг А.А.к

др '¿етоличегкие рекомендации по выявлен)*: . устранения и ссевстврз&едо? аутоиммунности у быков-пг,тк.-.вслктс-лек. ~ВИ&. Л'/бровииы, 1990.-Sic.

19. Abilov A.I.. Sokolovskaya I.I. The Revealing - of Bulls autoimmunity In connection with technology of sires using for artlflcal insemination// J. Innunol. Inmunop.- 1992.-V.12.- N2.- P.8.

20. AMlov A.I. The apperense of bulls autoimmunity dependence of their age// Immunol, of Reprod. Int. Symp. - Ukraine, Kiev, 1993.- P.4.

21. Абилов А.И., Соколовская И.И. Обработка вода при приготовлении сред для разбавления семени быков// Зоотехния." 1993." N8.- С.25-27.

22. Сипко Т.П..Абилов А.И., Шурхал А.В. и др. Создание криобанка спермы зубра как способ сохранения генетического полиморфизма вида// Генетика-1993. - N12. -С.2051-2056.

23. Эрнст Л.К., Абилов А.И.. Сипко Т.П. и др. Межвидовая гибридизация зубра с крупным рогатым скотом// Молочное и мясное скотоводство.- 1993.- N4.- С.19-21.

24. Абилов А.И., Эрнст Л.К., Стрекозов Н.И. и др. Получение гибридов путем осеменения домашних коров эпидидимальным семенем диких зубров. Метод. рекомендации. -ВИЖ, Дубровицы,1994.-26с.

25. Абилов А.И., Фараджов А.Ф..Тахирова З.А. Гибридизация симментал - голштинских помесей с зебу.//Зоотехния.-1994. -N6.-С.8-10.

25. Абилов А.И.. Соколовская И.И., Ельчаяинов В.В. и др. Улучшение воспроизводительных функций у коров с помощью беламизола и сурфагона//Зоотехния.- 1995.- N5.- С.22-23.