Диссертации » Биологические науки » Физиология

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Последствия гипоксии периода раннего органогенеза у крыс и их пептидная коррекция
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Последствия гипоксии периода раннего органогенеза у крыс и их пептидная коррекция"

На правах рукописи

Граф Анастасия Викторовна

ПОСЛЕДСТВИЯ ГИПОКСИИ ПЕРИОДА РАННЕГО ОРГАНОГЕНЕЗА У КРЫС И ИХ ПЕПТИДНАЯ КОРРЕКЦИЯ

специальность 03.00.13 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2005

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова (заведующий кафедрой - академик РАМН И.П. Ашмарин).

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского

Защита состоится 12 декабря 2005 г. в 15 ч 30 мин на заседании диссертационного совета Д501.001.93 при Московском государственном университете им. М.В. Ломоносова на Биологическом факультете по адресу: 119992, Москва, Ленинские горы, МГУ им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет, ауд. М-1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ.

Автореферат разослан 12 ноября 2005 г.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор биологических наук профессор Н.А. Соколова

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕН ТЫ:

доктор медицинских наук профессор А.Г. Камкин

доктор биологических наук профессор В.Б. Кошелев

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор биологических наук

Б.А. Умарова

2006-4

\iog г.

zim^

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема ухудшения здоровья беременных и, как следствие этого, высокий процент перинатальных потерь и патологий дальнейшег о развития является одной из наиболее актуальных в современной медицине. Из всех стрессирующих воздействий, которым может быть подвержен зародыш в период внутриутробного развития, гипоксия - одно из наиболее распространенных и клинически значимых, приводящее к эмбриотоксическим последствиям и различным патологиям развития.

В эмбриогенезе человека и животных выделяют 2 критических периода: первый - доимплантационный (1-5-й дни после оплодотворения), второй -период интенсивного органогенеза (13-17-й дни развития у крыс, 3-8-я неделя у человека). Изучению влияния гипоксии в эти периоды, а также в последний триместр беременности на развитие новорожденных посвящено много работ. Последствия воздействия острого гипоксического стресса в период раннего органогенеза (9-10-й дни развития у крыс; 1-3-я неделя у человека) практически не изучены.

Одним из возможных путей коррекции негативных последствий гипоксии является использование регуляторных пептидов. Это обусловлено, прежде всего, их полифункциональностью и способностью к запуску каскадных реакций. Ранее в исследованиях, проведенных на нашей кафедре, было показано, что высокой нейропротекторной активностью, а также антигипоксическими свойствами обладает трипептид PGP.

Цель и задачи исследования. Исходя из вышесказанного, целью данного исследования явилось изучение влияния острой гипоксии периода раннего ортногенеза на течение беременности у белых беспородных крыс и на последующее развитие их поюмства, а также возможность пептидной коррекции вызванных гипоксией нарушений.

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Оценить влияние острой гипобарической гипоксии (ОГТ), осуществленной в период раннего органогенеза (9-10-й день беременности), на течение беременности у самок белых беспородных крыс по ряду функциональных показателей: устойчивость к гипоксии, поведенческие характеристики и вегетативный баланс (по данным ЭКГ).

2. Изучить влияние пренаталыюй ОГТ' на потомство по показателям физического развития, по ряду поведенческих и вегетативных параметров (in vivo), а также оценить последствия пренатальной OIT в экспериментах in vitro по биохимическим и цитоморфологическим показателям.

3. Оценить влияние терапевтического введения трипептида PGP, вводимого интраназально на ) 3-15-й дни постнатального периода, на развитие потомства по ряду перечисленных выше показателей.

Научная новизна. Диссертационная работа является одной из первых работ, посвященных комплексному исследованию влияния острой гипоксии периода раннего органогенеза на течение беременности и последующее развитие потомства у крыс и возможности пептидной коррекции возникших нарушений. Показано, что у беременных крыс в период раннего органогенеза устойчивость к острому кислородному голоданию снижается. При этом выявлена зависимость степени постгипоксических нарушений как у самок крыс, так и у их потомства от устойчивости к острой гипоксии. Впервые показано, что можно предсказать устойчивость к гипоксического стрессу у беременных крыс по исходной ЧСС, а уже на следующий день после стрессорного воздействия можно предсказать исход беременности у низкоустойчивых к гипоксии самок по изменению поведения и показателей ЭКГ в "Открытом поле".

Впервые показано, что период раннего органогенеза относится к критическим периодам эмбриогенеза; что острое гипоксическое воздействие на

организм матери в этот период приводит к генерализованным влияниям на развитие зародыша, в результате которых происходят нарушения вегетативного баланса, баланса биогенных аминов в структурах мозга, поведения, а также нарушения нейрональной организации гиппокампа. Эти нарушения сохраняются и у взрослых животных, то есть, скорее всего, носят уже необратимый характер.

Выявлено коррегирующее действие интраназаггьного (и/н) терапевтического введения трипептида PGP (в дозе 1 мг/кг) 13-15-дневным крысятам на развитие половозрелого потомства, пережившего пренатальную гипоксию.

Полученные в работе данные могут быть использованы при пре- и постнатальной диагностике нарушений развития, для своевременной профилактики патологических последствий и для ранней терапии постнатальных дисфункций, связанных с внутриутробной гипоксией.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были представлены на ECNP Workshop On Neuropsychopharmacology for Young Scientists in Europe (Nice, 2004); Central/East European C.I.N.P. Regional Meeting (Brno, 2004); the 4lh International Forum of European Neuroscience (Portugal, 2004); 17,h Congress of the Furopean College of Neuropsychopharmacology (Stockholm,

2004); XIX Съезде физиологического общества им. И.П. Павлова. (Екатеринбург, 2004); Всероссийской конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем" (Санкт-Петербург, 2005), 1 Съезде физиологов СНГ' (Сочи, 2005); the 8th ECNP Regional Meeting (Moscow, 2005); IV Российской конференции с международным участием "Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция" (Москва, 2005); 18th Congress of the European College of Neuropsychopharmacology (Amsterdam, 2005) и на заседании кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ (Москва,

2005).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 170 страницах, содержит 39 рисунков и 17 таблиц. Список литературы включает 220 источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа была выполнена на беременных самках белых нелинейных крыс весом 250-300г (п=148) и их новорожденных детенышах обоих полов (общее число п= 1040).

Острой гипобарической гипоксии (ОГТ) подвергали самок крыс на 9-10-й день беременности. Этот период соответствовал началу выделения из эктодермы нейроэктодермального зачатка. Моделирование ОГГ осуществляли в барокамере при разрежении атмосферы в 145 мм рт. ст., что соответствует высоте 11500 м над уровнем моря. Подъем на "высоту" осуществляли за 1 минуту. В отдельной серии экспериментов определяли резистентность к ОГТ небеременных самок (п= 25).

Во время моделирования острой гипоксии у самок регистрировали время жизни на "высоте" (ВЖ, с). Животных, у которых время жизни на "высоте" было меньше 5 минут, относили к группе низкоустойчивых (НУ), с ВЖ больше 5, но меньше 10 минут - к среднеустойчивым (СУ), а животных, у которых в течение 10 минут с момента окончания подъема на "высоту" остановка дыхания не наступала - к высокоустойчивым (ВУ). Рассчитывали коэффициент общей устойчивости (КОУ= п(ВУ)/ п(НУ)).

Кроме того, до гипоксии, во время гипоксии и в период восстановления осуществляли запись ЭКГ при помощи программы "Iscope", по которой оценивали длительность R-R интервала. В программе "Spike-сЗ" производили обработку записи регистрации ЭКГ. Статистическую обработку полученной информации осуществляли при помощи программы "Intervals" (автор Воронцов

Д.Д.), анализирующей записи ЭКГ и рассчитывающей: амплитуду моды (АМ0), % - долю наиболее часто встречающегося Я-Я- интервала в выборке; вариабельность ритма (разброс выборки; ДХ), мс - разницу между максимальным и минимальным значениями К-Я- интервала в выборке; коэффициент монотонности (Км = АМо/дХ, где АМ0 - амплитуда моды, ЛХ -разброс выборки). По изменению этих показателей косвенно оценивали состояние вегетативного баланса.

Последствия острой гипоксии для самок оценивали по изменению поведенческих харакхеристик в тестах "Приподнятый крестобразный лабиринт" (ПКЛ) и "Открытое поле" (ОП), по изменениям ЭКГ в свободном поведении в раннем постгипоксическом периоде (через 24 часа после моделирования ОГТ), а также по исходу беременности.

При тестировании в "Приподнятом крестообразном лабиринте" крыс помещали в центр лабиринта мордой в светлый отсек и в течение 3-х минут регистрировали: латентный период первого захода в темный отсек, суммарное время пребывания на светлых лучах, количество выходов на светлые лучи, количество выглядываний из темных отсеков, количество заходов в темные отсеки, количество свешиваний со светлых лучей, вертикальную двигательную активность (ВДА), груминг. Затем рассчитывали коэффициент риска (К риска) - количество выходов на светлые лучи лабиринта + количество стоек на свету н количество свешиваний на свету; и коэффициент тревожности (К трев) = фуминг + количество выглядываний + дефекации.

Тссшрование животных в "Открытом поле" проводили в течение 4-х минут: первые 2 минуты в полной тишине при свете красной лампы мощностью 15 Вт, затем в течение 1-й минуты при ярком свете и последнюю минуту в полной тишине при свете красной лампы. При тестировании животных помещали в центр арены и в течение 4-х минут визуально регистрировали следующие показатели: латентный период (ЛП, с; время пребывания в центре ноля с момента посадки до пересечения малой

окружности); I оризонтальную двигательную активность (ГДА); вертикальную двигательную активность (ВДА); груминг; выходы в центр поля; отходы от стенки; дефекации; ЭКГ.

Последствия острой гипоксии для потомства оценивали по следующим показателям: физическое развитие (прибавка веса и роста: рассчитывали индекс Кетле — ИК = т/12 (кг/м2)), становление ориентировочно-исследовательских реакций в тесте "Норковая камера", уровень тревожности - в гесге "Приподнятый крестообразный лабиринт".

Тестирование в ПКЛ проводили по той же схеме, что и у самок. Тестирование крысят осуществляли на 22-й, 36-й, 57-й дни постнатального развития.

В Норковой камере тестирование проводили в течение 4-х минут: первые 2 минуты в полной тишине при свете красной лампы мощностью 15 Вт, затем в течение ] -й минуты при ярком свете и последнюю минуту в полной тишине при свете красной лампы. Визуально оценивали: горизонтальную двигательную активность, вертикальную двигательную активность, груминг и количество обследованных норок. Тестирование крысят осуществляли на 15-й, 22-й, 36-й, 57-й дни постнатального развития.

На 57-й день развития параллельно с поведенческим тестированием в норковой камере осуществляли регистрацию ЭКГ, а также оценивали способность к обучению в тесте "Условный рефлекс пассивного избегания" (УРПИ). Условный рефлекс пассивного избегания вырабатывали в специальной камере, разделенной перегородкой с небольшим отверстием на два неравных отсека: меньший, ярко освещенный, и больший, затемненный. В камере был установлен решетчатый пол, соединенный с источником тока. В основе этого метода определение латентного периода перехода из светлого в затемненный отсек исходно и через 3 дня (день воспроизведения навыка) после удара электрическим током (У=90В, Я=50Гц). Способность к обучению оценивали по увеличению времени пребывания в светлой части камеры на второй день тестирования.

Дополнительно в экспериментах in vitro проводили регистрацию хронотропного показателя в культуре кардиомиоцитов (КМЦ), выделенных из предсердий новорожденных крысят. Эксперименты проводили на базе Медико-генетического научного центра РЛМН под руководством вне Неверовой М. Е. КМЦ выделяли из сердец диссоциацией раствором трипсина и культивировали на покровных стеклах в пенициллиновых пузырьках в среде 199 с добавлением 10%-й эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота. Определение сократительной активности КМЦ, помещенных на покровных стеклах в специальную камеру объемом 300 мкл, расположенную на предметном столике микроскопа, проводили при помощи фотометрического окуляра, установленного на микроскопе и имеющего выход на компьютер.

На 57-60-й дни постнатального развития были проведены еще две серии экспериментов in vitro: по изучению уровня биогенных аминов в головном мозге и плотности распределения пирамидных нейронов в CAI и СА4 полях гиппокампа.

Определение уровня биогенных аминов в стволе и коре больших полушарий головного мозга крысят обоих полов проводили методом флуоресцентного анализа: дофамина и норадреналина по G. Metcolf (1974), ссротонина по Е.Р. Miller, R.P. Maikel (1970). Взятие проб проводили на 57-60-й дни жизни. Эксперимента данной серии проводили на базе кафедры биофизики биологического факультета МГУ под руководством профессора Гончаренко E.H.

Определение состояния нейрональных популяций пирамидных клеток полей CAI и СА4 гиппокампа у половозрелых крыс проводили по специально разработанному методу морфометричсского анализа Аврущенко М.Ш. (1994), который позволяет количественно оценить изменения состояния нейрональных популяций по их общей плотности. Эксперименты данной серии проводили на базе института реаниматологии РАМН под руководством профессора Аврущенко М.Ш.

Для исследования возможности коррекции негативных влияний пренатальной гипоксии на развитие потомства на 13-15-й дни постнатального развития крысятам интран&зально вводили трипептид PGP в дозе 1 мг/кг. Контролем в данном случае служили как животные, не подвергавшиеся воздействию пренатальной гипоксии, так и перенесшие внутриутробную гипоксию, которым в том же возрасте вводили и/н физиологический раствор.

Статистическая обработка результатов. Обрабо1ку резулыаюв осуществляли при помощи пакетов статистических программ "STATIST" и "EXCEL". При сравнении характеристик массивов данных применяли параметрический t-критерий Стьюдента, а также ряд непараметрических критериев (Вилкоксона-Манна-Уитни и точный метод Фишера).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Влияние острого гипоксичсского стресса на течение беременности.

Предварительная оценка резистентности к острой гипоксии небеременных самок и крыс на 9-10-й день беременности выявила значительное преобладание у беременных крыс низкой устойчивости к ОГТ (табл.1). При моделировании ОГГ уже к концу 1-й минуты пребывания "на высоте" во всех группах наблюдалось увеличение средних значений R-R-интервалов, что косвенно свидетельствует о смещении баланса вегетативной регуляции в сторону усиления парасимпатического компонента и говорит об истощении компенсаторных механизмов. У НУ-самок этот прирост длительности R-R-интервалов был наиболее выражен и достоверно отличался от соответствующих показателей у СУ- и ВУ-крыс. Такая же направленность сохранялась и к моменту окончания гипоксии (табл. 2).

Таблица 1. Резистентность к острой гипобарической гипоксии у небеременных и

беременны» самок крыс.

Группа Показатель Острая гипоба жческая гипоксия

Небеременные самки (п=25) Беременные самки (п=99)

% нижоустойчивых (НУ) 20 52,5#

% среднеустойчивых (СУ) 12 28,3*

% высокоустойчивмх (ВУ) 68* 19,2#*

КОУ 3.4 0.36#

Условные обозначения' КОУ - коэффициент общей устойчивости (ВУ/НУ). НУ - низкоустойчивые самки, СУ - среднеустойчивые самки, ВУ - высокоустойчивые самки # - отличия между небеременными и беременными самками крыс (р<0,05) *- отличия от НУ - самок крыс (р<0,05)

Таблица 2. Сравнение изменения средних значений Я-К-интервалов до и во время

моделирования ОГГ (ср. ± ош.ср.).

Группа средние значения Л-Н-интервалов в норме (до моделирования ОГТ), мс И-Я в Д % по отношению к норме

1-я минута гипоксии окончание гипоксии

НУ (п=34) 120.6±1.5 196,6 ±60.1 178,3 ±21.3

СУ (в=18) 127.6+1.9* 139,6 ±49.6* 116,4 ±8.2*

ВУ (в=12) 134.0+4.6* 95,7 ± 46.0* 95,7 ± 18.1*

Условные обозначения: НУ - низкоустойчивые самки; СУ - среднеустойчивые самки; ВУ -высокоустойчивые самки *- отличия от НУ самок крыс (р<0,05)

Анализ влияния гипоксического стресса на исход беременности показал, что этот показатель во многом зависел от устойчивости самки к гипоксии; в группе высокоустойчивых к гипоксии животных было достоверно больше не родивших самок; а среди низкоустойчивых - больше- пометов со 100% гибелью потомства и мертворожденными крысят (табл. 3).

Таблица 3. Влияние острой гипобарической гипоксии в период раннего

ор| аногенеза на исход беременности.

Группа % не родивших самок % пометов со 100% гибелью погомсгва % мертворожденных крысят

Контроль 10 5 1.9

НУ 12 17* 4.4*

СУ 18 7 26

ВУ 37 5 1.8

Контроль - самки, не подвергавшиеся воздействию острой гипоксии; НУ - низкоустойчивые самки; СУ - среднеустойчивые самки; ВУ - высокоустойчивые самки *- отличия от контроля (р<0,05)

Исходя их этих данных мы проанализировали поведение самок и показатели ЭКГ в раннем постгипоксическом периоде в соответствии с исходом беременности. Проведенный анализ показал, что в подгруппе низкоустойчивых к гипоксии самок с неблагоприятным исходом беременности выявлялся целый ряд отличий от контрольных животных: снижение ГДА и ВДА на протяжении всего периода тестирования. В подгруппах СУ- и ВУ-самок с таким же исходом беременности отличий или вообще не было, или они встречались крайне редко (табл. 4)

Таблица 4. Сравнение уровня ориентировочно-исследовательской активности в

тесте «Открытое поле» через 24 ч после моделирования ОГГ у беременных самок с благоприятным и пебла! оприятпым исходами беременности (ср. ± ош.ср.)._

иоказателн группа ГДА ВДА

1 МИН 2 мин 3 мин 4 мин 1 мии 2 мин 3 мин 4 мин

Контроль +(п=32) 35 8±2 7 19.0+1 8 22 7+2.2 12.2+1 9 4 9+0.6 4 ¡+06 5 3+0 6 2 6+0 5

-(п-7) 38 8±3.8 17.0+3 0 26 0+6 1 12 6+5 6 5 0±04 2 4+0.6 5 0±0 8 0 6+0 5

НУ +(л=34) 18 7+2 9 17 2±| 6 26 !±2 2 10 2±1 7 5 0±0 6 4 1±0 5 5 5+0 5 2 5+0 7

-(11=13) тшж*- ; !<>№.б#* ЪШз** 3 4±0 4 3.6Ю.6?* 1

ГУ +(п-18) 33 8±2 5 13 2±2 5 26 5±4 1 12 3+2.8 5 5±0 5 3 4+1 0 4.5+0 7 2±0 5

46 4±6 4 18 4±3 3 30_t5.0 11 8±5 1 5 8±1.5 S-тж 4.6±1.7Х»

ВУ +<п=8) 36.0±3 9 14 3+3 9 24.7+3 1 10.6+1.4 4 3±0 9 3 4±1 9 5 1±0 6 1 7+0 6

- <п=5) 37.0+6.7 19 8+4 6 31 3±4 9 8 3±2 1 6 5±!.7 4 5+11 4.8±1.1 2.8±1 1

Условные обозначения- ОГГ - острая гипобарнческая гипоксия; ГДА- горизонтальная двигательная активность; ВДА - вертикальная двигательная активность Контроль - самки, не подвергавшиеся воздействию острой гипоксии, НУ - низкоустойчивые самки; СУ -среднеусгойчивые самки; ВУ - высокоустойчивые самки,

(+) - благоприятный исход беременности, (-) - небла! оприятный исход беременности; И - отличия между самками с (+) и (-) исходами беременности (р<0,05); *- отличия от контроля (р<0,05)

По показателям ЭКГ в свободном поведении больше всего отличий от контрольной группы было также у низкоустойчивых к гипоксии самок с неблагоприятным исходом беременности: достоверно выше были средние значения 11-11-интервалов и Км (табл.5). Следует отметить, что однонаправленное изменение этих показателей свидетельствует о нарушении вегетативного баланса регуляции сердечной деятельности, так как в норме увеличение длительности И-Я -интервалов сопровождается уменьшением Км.

Таблица 5. Сравнение показателей ЭКГ в тесте «Открытое поле» через 24 ч после моделирования ОГГ у беременных самок с благоприятным и _ неблагоприятным исходами беременности (ср. ± ош.ср.)._

показатели группа К-К интервал, мс Км

1 МИ11 2 мин 3 мин 4 мин 1 мин 2 мин 3 мин 4 мин

к (ж трап. +(в=32) 1173+1 2 117011.3 1203+1 7 121 8±2 0 1710 03 0 17+003 0 14*002 0 14+0 01

-<п=7) 123 211 8 121 4±1 2 123 1±2 1 131 4+5 9 0 131« 02 0 181004 0 10+0 05 0 1710 04

НУ +(п=34) 119 0+1 9 1174±1 9 121 3+1 9 122 2±2 0 0 161002 021+003 0 1610 02 0 16+0 03

-<п=13) "уиШмг МШШ! Ш.&Ш*' 12Итт 0..М&«** = -СИЛОЙ» аш ш* о.ям О»'

ГУ +(п=18) 121 6+2 5 120011 4* 125 4+1 8 126 5±2 7 0211007 0 18+0 04 0 1710 07 0 18+0 07

-(п=6) 121 7+1 4 119 1116* 125 9+1 7 128 412 0 020+0 05 0 28+0 06 0 1210 04 0 13+0 03

ВУ +(п=в) 124 2+2 6» 121 3 ±24 122 0±1 8 123 1+33 0091002 0М10М 0 16+0 04 0 13+004

123 2+1 7 1199±2 1 126 7+2 6 128 114 1 0 1210 02 0 24<0 07 0211006 0 19+0 06

Условные обозначения: ОГГ - острая гипобарическая гипоксия; Км - коэффициент монотонности (Км=АМо/лХ, |де АМо -доля наиболее часто встречающихся значений Я-Я-интервалов; — вариабельность ритма). Контроль - самки, не подвергавшиеся воздействию острой гипоксии; НУ-низкоустойчивые самки; СУ-среднеустойчивые самки; ВУ-вьгсокоустойчивые самки;

(+) - благоприятный исход беременности, (-) - неблагоприятный исход беременности; # - отличия между самками с (+) и (-) исходами беременности (р<0,05);

*- отличия от контроля (р<0,05).

На основании вышеприведенных данных можно сделать вывод, что острая гипоксия периода раннего органогенеза в группе беременных НУ-самок вызывает более глубокие негативные последствия, чем в группах ВУ- и СУ-самок. Уже на следующий день после гипоксии можно предсказать исход беременности в первой группе по изменению поведения и показателей ЭКГ. Более того, уже но характеристикам ЭКГ, регистрируемой до гипокси чес кого воздействия, можно выявить потенциально НУ- самок.

Можно предположить, что и вероятность рождения потомства с отклонениями в развитии у таких самок выше, чем у средне- и высокоустойчивых, несмотря на то, что в условиях кислородного юлодания они провели меньше времени. Поэтому далее в автореферате будут представлены только данные о влиянии прснаталыгой гипоксии на развитие потомства низкоустойчивых самок.

Влияние пренатальной гипоксии периода раннего органогенеза на развитие потомства.

Крысята, пережившие пренатапьную гипоксию, родились недоношенными и достоверно хуже прибавляли в весе и росте в последующие дни

постнаталъного развития вплоть до половозрелости. Межполовые различия в физическом развитии у них проявлялись также позже, чем в контроле (табл. 6). Таблица 6. Влияния пренатальной гипоксии, проведенной на стадии раннего

органогенеза, на индекс Кетле (ср. ± ош.ср.).

дни жизни группа 2-й 15-й 22-й 36-й 57-й

Контроль самцы(п=113) 2.26±0.01 3.19±0.03 3.26±0.03 4.55±0.04 6.12*0.05

самки(п=126) 2.27±0.01 3.19*0.02 3.27*0 03 4.39*0.03# 5.42*0.04#

НУ с»мцы(п=*98) 2.18-1=0.01* 3.08±0.02* 3.24±0.04» 4.21±0.09* 5.76±0.07*

самки (п-106) 2,1710.04* 3.04*0.03* 3.16*0.03* 4.24*0.04* 5.19*0 07#*

Условные обозначения: НУ - крысята от низкоустойчивых к гипоксии самок;

* - отличия от контроля (р<0,05);

# - отличия между самцами и самками (р<0,05).

Потомство низкоустойчивых к гипоксии самок также достоверно позже открывало глаза, чем контрольная группа.

Кроме того, у них была выше частота летальных исходов в раннем постнатальном периоде.

Полученные данные позволили предположить, что отставание в физическом развитии могло оказать влияние и на поведенческие характеристики.

Острая гипоксия, перенесенная крысятами внутриутробно, по-разному повлияла на детенышей различных возрастов. Так, в 15-дневном возрасте детеныши низкоустойчивых самок показывали повышенную горизонтальную и вертикальную двигательную активность, а в 22-х дневном возрасте не отличались от контрольных животных но уровню ориентировочно-исследовательской активности. На 36-й и 57-й дни постнатального развития снижение горизонтальной и вертикальной двигательных активностей наблюдали только у женского потомства низкоустойчивых самок. Возрастная динамика ориентировочно-исследовательской активности у потомства, подвергавшегося воздействию острой гипоксии, не отличалась от контрольной. Однако самки контрольной группе уже на 36-й день постнатального развития

самцы

15

22

36

НОРКОВАЯ КАМЕРА

40 ¡|зо

20 10 О

57

22

36

57

ПРИПОДНЯТЫЙ КРЕСТООБРАЗНЫЙ ЛАБИРИНТ

I *

ж

2 0

57

-^-Контроль (а=113) —»—Контроль (в-126)

-0-ОГГву(в«в8) -D-ОГГ ву (п=106)

Рис.1. Отставленные влияния пренатальной гипоксии, проведенной на стадии

органогенеза, на поведенческие характеристики в тестах "Норковая камера" ■ "Приподнятый крестообразный лабиринт": возрастная динамика

Условные обозначения' контроль - потомство санок, не подвергавшихся воздействию Острой гипоксии в период органогенеза; ОГТ ну - крысята or низхоустойчивых к гипоксии самок Г ДА - горизонтальная двигательная активность; В ДА- вертикальная двигательная активность; К трев - коэффициент тревожности (К трсв = дефекации+ груминИ- количество выглядываний), К риска - коэффициент риска (К риска = количество выходов на светлые лучи лабиринта + количество стоек на свету + количество свешиваннй на свету ) * - отлична от контрольной группы (р<0,05)

отличались повышенной двигательной и ориентировочно-исследовательской активностью по сравнению с самцами, тогда как самки и самцы, пережившие пренатальную гипоксию, не отличались друг от друга и на 57-й день (рис.1).

Тестирование в 11КЛ также показало, что на женское потомство пренатальная гипоксия оказала больше влияния: на 36-й день постнатального развития самки характеризовались повышенным уровнем тревожности, а на 57-й день, наоборот, пониженным. И женское, и мужское потомство низкоустойчивых к гипоксии самок характеризовалось повышенным коэффициентом риска на 57-й день (рис. 1).

Потомство низкоустойчивых самок обоих полов достоверно хуже обучалось в тесте УРПИ на 57-й день постнатального развития (рис.2).

самцы самки

В контроль (самцы п—31; самки п=37) С ОГГ ну (самцы п=26; самки п=28)

Рис.2. Влияния пренатальной гипоксии, проведенной на стадии органогенеза, на обучение в тесте "Условный рефлекс пассивно! о избегания" у половозрелых крысят (на 57-61-й дни жизни).

Условные обозначения: ОГГ ну - крысята от низкоустойчивых самок; ЛП1- 1 время захода в темный отсек камеры в 1-й день тестирования, с; ЛП2-время захода в темный отсек камеры во 2-й день тестирования, с. * - отличия от контроля (р<^0,05).

Таким образом, пренатальная гипоксия является для пережившего ее потомства мощным стрессорным фактором и, следовательно, может привести к сдвигу баланса биогенных аминов в ЦНС. В связи с этим нами была проведена серия экспериментов по исследованию влияний пренатальной гипоксии на

баланс биогенных аминов в I (НС у половозрелого потомства низкоустойчивых самок.

Как видно из таблицы 7, пренатальная гипоксия периода органогенеза в потомстве низкоустойчивых к гипоксии самок привела к значительным изменениям содержания биогенных аминов головного мозга (ГМ) как у самцов, так и у самок. У женского потомства пизкоустойчивых самок наблюдалось увеличение уровня серотонина и дофамина в стволе ГМ (на 35% и 32% соответственно). Увеличение уровня серотонина коррелировало с их гипоаю ивностью в норковой камере. У мужского потомства низкоустойчивых самок были выявлены более существенные последствия внутриу фобной гипоксии: увеличение уровней дофамина и норадреналина в стволе (на 32% и 23% соответственно) и коре ГМ (на 42% и 38% соответственно).

Таблица 7. Влияние пренаталыюй гипоксии периода раннего органогенеза на

уровень биогеиных аминов в столе и коре юловного мозга у половозрелого потомства низкоустойчивых к гипоксии самок ( ср. ± ош.ср.)_

биоамины Iруппа ствол (мкг/г) кора (мкг/г)

5-НТ ДА НА 5-НТ ДА НА

контроль самцы (п=20) 0,73*0,09 0,6! ±0,03 0,39*0,03 0,53*0,08 0,40*0,05 0,21+0,06

самки (п-21) 0.63±0,08# 0,59-10,01 0.4ПО, 11 0,40^0 !3# 0.49Щ04П 0,22 ±0,07

опыт самцы (п=17) 0,87*0,08 0,81*0,08+ 0,48*0,02+ 0,48*0,02 0,57*0,05'" 0,29*0,04*

самки (п-15> 0,85*0,11* 0,7**0,67« 0,44+0,07 0,46±0,08 0,45±0,04# 0.2Ш.05

Условные обозначения: контроль - потомство самок, не подвергавшихся воздействию ос|рой гипоксии; опыт - потомство низкоустойчивых самок; 5-НТ -серотонин, ДА - дофамин, НА-норадренапин.

♦-отличия от контроля (р<0,05) # - отличия между самцами и самками (р<0,05)

Так как пренатальная гипоксия привела к нарушениям поведения, ухудшению способности к обучению и сдвигу баланса биогенных аминов, то мы предположили, что в резулыаге гипоксического стресса мог пострадать гиппокамп, который в эмбриональном периоде очень чувствителен к

воздействию анонсирующих и стрессирующих факторов. Кроме тою, гиппокамп отвечает за огромное количество функций, в том числе за обучение, поведение, память, и имеет проекции всех моноаминергических нейронов.

В нашей работе мы исследовали морфологическое состояние двух нейрональных популяций гиппокамиа - пирамидных клеток CAI и СА4 областей, имеющих неодинаковую ранимость при ишемии и характеризующихся функциональными особенностями и различиями в связях с другими отделами мозга. Как видно из таблицы 9, пренагальная гипоксия периода раннего органогенеза повлияла на общую плотность нейронов с сателлитной глией в CAI и СА4 полях гиппокампа как у самцов, так и у самок. Причем у самцов эти изменения были более выражены. Нейроны с сателлитной глией более устойчивы к переходу в морфологически измененное состояние и/или выпадению, чем свободные нейроны. Учитывая важную роль глии в поддержании гомеостаза нейронов в нормальных и патологических условиях, можно полагать, что обнаруженное снижение глиальных элементов приводит к нарушению нейро-глиального соотношения и может лежать в основе неврологических расстройств, наблюдаемых у потомства низкоустойчивых к гипоксии самок на протяжении всего периода исследований.

Таблица 9. Влияние препатальной гипоксии периода органогенеза на плотность распределения пирамидных клеток разных типов в CAI н СА4 полях _гиппокампа у потомства низкоустойчивых самок (на 1 мм длины слоя)

Группа Гип нейронов Контроль Опыт

свободные с глией свободные с глией

Общая плотность популяции пирамидных нейронов СА1 ноля самцы (п=5) 197,04=5,2 79,2±3,4 ! 88,7±9,1 60,7±},8*

самки (п=5) 195.5HÍJ Н2.Ш.З 179,715,1 ' 72,6±1,4Ч

Общая плотность популяции пирамидных нейронов СА4 поля самцы (п=5) 110,5±8,2 72,3±4,2 101,6±2,2 50,9±1,2*

самки (п=5) 10S,414,7 66 4*1,6 9S, 1±3 3 58,0±3,0*#

Условные обозначения- контропь - потомство самок, не подвергавшихся во ¡действию острой гипоксии, опыт - потомство низкоустойчивых самок

* - 01личия от контроля (р<0,05)

# - отличия между самцами и самками (р<0,05)

Низкий вес при рождении, а также наблюдаемый в половозрелом возрасте сдвиг баланса биогенных аминов, скорее всего, могли отразиться на состоянии сердечно-сосудистой системы. С целью проверки данного предположения мы исследовали сократительную активность кардиомиоциюв у новорожденных крысят и ЧСС у половозрелых животных.

Анализ прямого влияния пренатальной гипоксии на функциональную активность кардиомиоцитов показал, что для новорожденных крысят, перенесших внутриутробную гипоксию, была характерна достоверно более высокая частота сокращений предсердных КМЦ(рис. 3).

Рис. 3. Влияние пренатальной i иноксии, проведенной на стадии раннего органогенеза, на сократительную активность кардиомиоцитов.

Условные обозначения конгроль - потомство, не подвергавшееся воздействию острой гипоксии в период органогенеза, OIT ну - крысята от низкоустойчивых к гипоксии самок

*- отличия от контрольной группы (р<0,05)

Как видно на рис. 4, у половозрелого потомства низкоустойчивых к гипоксии самок обоих полов наблюдались те же.отличия в хронотронном показателе, что и в раннем постнатальном периоде: в опытной группе длительность R-R-ингервалов была достоверно ниже, чем в контрольной, а ЧСС достоверно выше (рис. 4); но если в раннем постнатальном периоде наблюдали изменения только на уровне кардиомиоцитов, то у взрослых животных изменения затрагивали также и регуляторные контуры. Оценка вегетативного баланса регуляции ЧСС показала отчетливое преобладание в этой группе симпатического компонента: отмечалось достоверное увеличение АМ0 и Км (рис.4).

•

*

I 50

но№Гроль (и-28) OII ну (»»29)

11,0 9,0 | 7,0 5,0 3,0

О контроль (п~22) -0-01Т ну (п=26)

11,0 9,0 | 7,0 5,0

3,0 4-

• контроль (11=24) -О-ОГТ ну (п-ЗЗ)

Рис.4. Показатели ЭКГ у мужского и женского потомства низкоустойчивых к гипоксии самок

иа 57-й день постнатальною развития: средние значения И-Я интервалов, Км и АМ.

Условные обозначения кошроль - потомство самок, не подвергавшихся воздействию острой гипоксии в период органогенеза, ОГТ ну - крысята от низкоустойчивых самок, АМо- амплитуда моды, %, Км - коэффициент монотонности,

На основании приведенных данных можно сделать заключение, что острое гипоксической воздействие на организм матери в период раннего органогенеза может привести к генерализованным влияниям на развитие зародыша, следствием чего и могут быть те нарушения вегетативного баланса, баланса биогенных аминов в структурах мозга, поведения, а также нарушения нейрональной организации гиппокампа, которые мы наблюдаем в наших исследованиях на разных стадиях постнатального развития. Как показывают наши данные, эти нарушения сохраняются и у взрослых животных, то есть, скорее всего, носят уже необратимый характер

Исследование влияний терапевтического интраназального введения трипептида Pro-Glv-Pro на последствия пренатальной гипоксии у половозрелого потомства.

Для коррекции наблюдаемых нарушений мы вводили крысятам и/н пептид PGP в дозе 1 мг/кг на 13-15-й дни постнатального развития. Данный срок введения был выбран на основании литера гурных данных, свидетельствующих о том, что крысята этого возраста соответствуют по строению M03ia новорожденным детям [Vannucci R.C. et al., 1999], то есть периоду, когда еще не произошло полное завершение организации ГЭБ [Adinolfi М., 1985]. Интраназалыгый способ введения был выбран как 'обеспечивающий доставку исследуемого соединения непосредственно к структурам мозга. Кроме юго, этот способ является неинвазивным, что также очень важно для крысят данного возраста. [Pietrowsky R., 1996]. Выбор препарата сделан на основании его высокой нейропротекторной активности, показанной раннее [Сафарова и др., 2002].

Как видно из таблицы 10, практически все негативные последствия пренатальной гипоксии, наблюдаемые у половозрелого потомства, были устранены интраназальным введением пептида, за исключением изменений

индекса Кетле, отражающего физическое развитие, уровня ДА в столе ГМ и ЧСС у самцов.

В отдельной серии экспериментов были проанализированы собственные эффек1ы PGP. В отсутствие гипоксии через 6 недель после введение пептида увеличивались ГДА и ВДА животных. Сопоставление терапевтического эффекта пептида на фоне гипоксического воздействия с собственными эффектами PGP показало, что только в двух случаях терапевтический эффект пептида можно обьяснить собственными эффектами пептида.

Таблица 10. Коррелирующее влияние терапевтического итрапазального введения пешида на последствия пренатальной гипоксии у 57-дневного _по гомс! ва иизкоуст ойчивых к гипоксии самок_

группа Самцы Самки

ОГГ PGP or Г ну ОГГ ну PGP ОГГну

характеристики "У + PGP +PGP

ИК U 0 V U 0 0

ГДА 0 0 0 u ft 0

ВДА ft ft 0 u ft 0

К грев 0 0 0 tt 0 0

К риска ft 0 0 ft 0 0

С'ероюнин в стволе ГМ 0 0 0 ft 0 0

Норадреиалин в с i воле I'M ft 0 0 0 0 0

Дофамин в стволе ГМ ft 0 ft ft 0 0

Серогонин в коре ГМ 0 0 0 0 0 0

Норадреналин в коре ГМ ft 0 0 0 0 0

Дофамин в коре ГМ ft 0 0 0 0 0

ЧСС ft 0 ft ft 0 0

Км ft 0 0 ft 0 0

АМ0 ft 0 0 ft 0 0

Условные обозначении. ОГГ - острая гипобарическая гипоксия; 01 I ну - крьюна от низкоустойчивых самок, которым на 13-15-й дни постнагального развигия интраназально вводили физиологический раствор. ОГГ ну+РОР - крысята от низкоустойчивых самок, которым на 13-1 S-й дни постнаталыюго развития интраназально вводили трипептид Pro-Gly-Pro; Т или ■I - достоверное увеличение или уменьшение исследуемою показателя по сравнению с контрольной группой, не подвергавшейся воздействию 1ипоксии, 0 отсутствие отличий от контрольной группы; ИК - индекс Кетлс = т/12 (кг/м1), ГДА - горизонтальная двигательная активность; ВДА вертикальная двж азельная активность, К грен - коэффициент тревожности; К риска коэффициент риска; I'M - головной мозг, ЧСС чаезота сердечных сокращений, АМ0- амплигуда моды, Км - коэффициент монотонности

Таким образом, на основании полученных нами данных мы предполагаем, что в основе защитного действия трипептида лежит его способность положительно влиять на нарушенный гомеостаз организма за счет воздействия

на процессы каскадных реакций, патологически измененные на стадии раннего эмбриогенеза под влиянием острого пренатально! о гипоксического воздействия.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Общий анализ полученных данных позволяет сделать вывод, что период раннего органогенеза (9-10-й дни беременности у крыс) является кршическим для течения беременности и постнатального развития потомства.

В этот период происходит резкое снижение устойчивости беременных крыс к острому гипоксическому воздействию по сравнению с небеременными особями: КОУ у беременных самок ниже в 9,5 раз. При этом устойчивость к гипоксии, вероятно, можно предсказать еще до начала моделирования гипоксии: у потенциально НУ - самок фоновая ЧСС достоверно выше, чем у СУ- и ВУ-животных; что может отражать их исходно более высокую "стрессированность" и определять их низкую устойчивость к стрессу и длительность "следа" повреждающего воздействия. Это подтверждается и тем фактом, что уже на следующий день после моделирования ОГГ можно предсказать исход беременности у низкоустойчивых самок к гипоксии по изменению поведенческих параметров и характеристик ЭКГ.

Острая гипоксия увеличивает риск неблагоприятного исхода беременности. Причем у низкоустойчивых к гипоксии самок выше вероятность 100% гибели потомства, а также рождения мертворожденных детенышей и гибели потомства в раннем постнатальном периоде.

У потомства низкоусгойчивых самок наблюдалось также больше

нарушений развития в постнатальном периоде, которые сохранялись до 57-го

дня, то есть до взрослого состояния: отставание в физическом развшии,

нарушение ориентировочно-исследовательской реакции, изменение уровня

тревожности, снижение способности к обучению. Причем изменения

поведенческих параметров были больше выражены у женского потомства

низкоустойчивых самок, что привело к устранению выраженных в контроле

21

отличий в поведении между самцами и самками. На фоне увеличенного уровня серогонина в стволе головного мозга у самок наблюдаемые изменения поведения, могут косвенно свидетельствовать об их маскулинизации [Ткаченко А.А., 1997].

Терапевтическое инграназальное введение пептида PGP крысятам грудного возраста (на 13-15-й дни постнатально! о развития) полностью устранило негативные последствия острой иренатальной гипоксии у половозрелою женского потомства низкоустойчивых самок; у мужского потомства нивелировало практически всс негативные последствия, не устранив отставание в физическом развитии и нарушения ЧСС.

ВЫВОДЫ

1. Беременные крысы в период раннего органогенеза (9-10-й день беременности) менее устойчивы к острой гипобарической гипоксии, чем небеременные. По резистентности к острой гипобарической гипоксии беременные крысы подразделяются на низко- (52,5%), средне- (28,3%) и высокоустойчивых (19,2%).

2. Устойчивость к гипоксии можно предсказав по исходному уровню ЧСС: у потенциально низкоусюйчивых беременных самок она достоверно выше, чем у среднеустойчивых и высокоустойчивых.

3. Вероятность неблагоприятного исхода беременности у самок, переживших 1 ипоксию, выше, чем у не подвергавшихся острой гипоксии.

4. У низкоусюйчивых к гипоксии самок уже на следующий день после моделирования гипоксии можно предсказать исход беременности по поведенческим характеристикам и показателям ЭКГ

5. Острая гипоксия периода раннего органогенеза нарушает процесс нормального постнагального развития потомства. Отклонения в развитии больше выражены в потомстве низкоустойчивых крыс.

6. Нарушения в развитии потомства низкоустойчивых к гипоксии самок сохранялись до половозрелого периода.

7. Последствия пренатапьной гипоксии по ряду характеристик достоверно различались у мужского и женского потомства.

8. В женском потомстве низкоустойчивых самок отмечались признаки маскулинизации по показателям поведенческих паттернов и уровню

' серотонина в стволе головно1 о мозга.

9. Терапевтическое интраназальное введение пептида PGP (в дозе 1мг/кг) на ' 13-15-й дни постнатального развития устраняло практически все

выявленные негативные последствия гипоксии у взрослого потомства низкоустойчивых к гипоксии самок.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Graf А. V., Samaylenkova N.S, Maslava MV., Maklakova A.S., Sokolova N.A., Goncharenko E.N, Shestakova S.V. The antenatal acute hypoxia stress: physiological and biochemical consequences: peptidergic correction// 35* Annual General Meeting of the European Brain and Behavior Society. -Barcelona, September 2003.

2. Санжиева Л.Ц., Гоаф А В.. Маслова MB, Лелекова ТВ., Соколова H.A. Влияние острой гипоксии беременных самок крыс на сократительную активность лимфатических сосудов потомства// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2004. - Т. 138. - №7. - С. 16-18.

«

3. Граф A.B., Маслова М.В., Маюшкова А С, Соколова Н. А , Крушинская Я В, Готаренко E.H., Кудряшова Н.Ю., Байжуманов A.A. Биохимические

*

корреляты острой пренатальной гипоксии у беременных самок крыс и их потомства//Нейрохимия. - 2004. - Т.21. -№4. - С.307-310.

4. Graf А. V.. Maslova М. V., Maklakova A.S., Sokolova N.A., Goncharenko E.N.,

*

Bayzhymanov A A , Avrushenko M.Sh Antenatal hypoxia influence on the

f

development of CNS// ECNP Workshop On Neuropsychopharmacology for Young Scientists in Europe. - Nice, March 2004. - P.33-34.

5. Graf A V.. Maslova MV., Maklakova A.S., Sokolova N.A, Goncharenko E.N., Bayzhymanov A.A., Avruschenko M.Sh. Antenatal hypoxia influence on the development of CNS// Abstracts of the 4th International Forum of European Neuroscience. - Portugal, July, 2004. - V.2. - P.A044.

6- Graf A. V.. Maslova MV, Maklakova A.S., Sokolova NA , Kudryashova N.U., Krushinskaya Ya V, Goncharenko EN, Bayzhymanov A A. The acute perinatal hypoxia influences on descendants' behavioral activity and bioamines levels depend upon the period of pregnancy// Central/East European C.I.N.P. Regional Meeting. - Psychiatrie. - 2004. - Supplement 4. - P.22.

7. Graf A. V., Maslova M.V., Maklakova A.S., Sokolova N A, Kudryashova N.U, Krushinskaya Ya.V., Goncharenko E.N, Bayzhymanov A.A. The behavioral and biochemical consequences of acute prenatal hypoxia in descendants depend upon the period of pregnancy// The 17lh Congress of the European College of Neuropsychopharmacology. - Stockholm, October 2004. - S.395-396.

8. Граф А.В.. Маслова M.B., Маклакова А.С., Соколова НА., Гончаренко Е.Н., Байжуманов А.А., Крушинская Я В Антенатальная острая гипоксия на разных стадиях эмбриогенеза изменяет паттерны поведения и уровень биоаминов у потомства// Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2005. - Т.91. - №2. - С. 152-157.

9. Маслова М В, Граф А. В, Маклакова А С, Крушинская Я В, Соколова Л А , Кошелев В Б Ос грая гипоксия в период органогенеза изменяет баланс вегетативной регуляции сердца у беременных самок крыс// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2005. - Т. 139. - №2. - С. 147149.

10. Graf А V. Maslova М V, Maklakova A.S., Sokolova N А , Kudryashova N U., Krushinskaya Ya V., Goncharenko E.N., Bayzhymanov A.A.. The role of gestational acute stress in the development of perinatal pathologies// The 8,h ECNP Regional Meeting. - Moscow, April, 2005. - S.158.

Подписано к печати 14 Ц. 0$ Тираж Ш экз Заказ >199

ООП МГУ

№2 2 0 2 9

РНБ Русский фонд

2006^4 17062

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Граф, Анастасия Викторовна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Критические периоды развития.

Глава 2. Беременность в норме и при патологиях.

Глава 3. Влияние пренатальной гипоксии на появление патологий развития в постнатальном периоде.

Влияние острой и хронической гипоксии плода на центральную нервную систему.:.

Сердечно-сосудистые изменения, вызываемые острой и хронической гипоксией.

Отставленные эффекты действия пренатальной гипоксии.

Глава 4. Возможные пути профилактики и терапии негативных влияний пренатальной гипоксии в постнатальном периоде.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

I. Исследование влияний острой гипобарической гипоксии на течение беременности.

Исследование резистентности беременных крыс к острой гипобарической гипоксии.„•.

Регистрация поведенческой активности и ЭКГ у беременных крыс. в ^постгипоксическом »периоде в тесте "Открытое поле".

Регистрация уровня тревожности у беременных крыс в постгипоксическом периоде в тесте "Приподнятый крестообразный лабиринт".

И.<Исследованиешлияний острой пренатальной гипоксии в период органогенеза нафазвитие потомства.

Тест "Норковая камера".

Тест "Приподнятый ^крестообразный лабиринт".

Тест "'Избегание плавания".

Тест "Условный рефлекс .пассивного избегания".

Определение уровня биогенных аминов в головном мозге крысят .65 Определение состояния нейрональных популяций пирамидных клеток СА1 и СА4 полей гиппокампа у половозрелых крыс.

Регистрация сократительной активности кардиомиоцитов новорожденных крысят.

МТТ-анализ.

Регистрация ЭКГ в свободном поведении

РЕЗУЛЬТАТЫ.

Часть 1. Исследование влияний острой гипобарической гипоксии в период органогенеза (на 9-10-й день беременности) на течение беременности.

1.1. Исследование резистентности беременных крыс в период органогенеза к острой гипобарической гипоксии.

1.2. Отставленные влияния острой гипобарической гипоксии в период органогенеза на поведенческие паттерны; на ЭКГ и вегетативный баланс беременных самок.

Часть 2. Влияния остройтипоксии в<период раннего органогенеза (на» 9-10-йдень беременности) на развитие потомства; пептидергическая коррекция.

2.1. Влияния острой гипоксии в период раннего органогенеза (на 9-10-й день беременности) на развитие потомства.90"

2.2. Коррекция пептидом PGP влияний проведенной на стадии органогенеза острой гипоксии на развитие мужского и женского потомства в постпубертатном периоде.

2.3. Исследование собственных эффектов пептида PGP на развитие новорожденных крысят.

Часть 3. Исследование влияний пренатальной гипоксииг периода органогенеза на структурные и биохимические характеристики центральной нервной и сердечно-сосудистой систем потомства низкоустойчивых к гипоксии самок.11

3.1. Исследование влияний пренатальной гипоксии периода раннего органогенеза на уровни биогенных аминов в структурах головного мозга кортикостерона в крови и надпочечниках.

3.2. Исследование влияний пренатальной гипоксии периода раннего органогенеза на нейрональные популяции СА1 и СА4 полей гиппокампа.

3.3. Исследование влияний пренатальной гипоксии периода раннего органогенеза на хронотропную активность предсердных кардиомиоцитов новорожденных крысят и показатели ЭКГ половозрелых животных.

3.4. Коррекция пептидом PGP влияний пренатальной гипоксии периода органогенеза на структурные и биохимические характеристики центральной нервной и сердечно-сосудистой систем потомства низкоустойчивых самок.

ОБСУЖДЕНИЕ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Последствия гипоксии периода раннего органогенеза у крыс и их пептидная коррекция"

Вопросы, связанные с изучениями медико-демографических процессов, особенно касающиеся воспроизводства и состояния здоровья населения, всегда находились в числе наиболее актуальных. Проблема ухудшения здоровья беременных и как следствие этого высокий процент перинатальных потерь и патологий дальнейшего развития является одной из наиболее актуальных в современной медицине. Из всех стрессирующих воздействий, которым может быть подвержен зародыш в период внутриутробного развития, гипоксия - одно из наиболее важных, распространенных и клинически значимых, приводящее к эмбриотоксическим последствиям и различным патологиям развития. В основном это связано с 1ем, чю в период внутриутробного развития большинство повреждающих факторов реализуют свой эффект в сис1еме мать-плацента-плод. Острая гипоксия может возникать на самых различных сроках беременности как неспецифическое проявление токсикозов и болезнен сердечнососудистой системы и дыхагельной системы, курение и употребление алкоголя во время беременности и г п. Дети, пережившие жизнеугрожающее событие в период внутриутробного развития, гораздо чаще умирают от синдрома внезапной смерти. У детей, перенесших в анамнезе антенатальную гипоксию, регистрируют задержку физического развития, изменение баланса висцеральных систем и биогенных аминов, морфологические и функциональные повреждения мозга, сердца, легких и др [Жукова Т.П. и др., 1984; Эдельштейн Э.А., 1988; Шабалов Н П., 1990]. Преиатальпой гипоксии принадлежит решающая роль в задержке биологического созрсваиия центральной нервной системы и высших функций головного мозга у детей. Очень часю микроповреждеиия головного мозга, вызванные внутриутробной гипоксией, в постиатальном периоде вообще не диагностируются, однако по мере роста и развития ребенка нарушения функций, обусловленные внутриутробным стрессом, из скрытых становятся хорошо видимыми и в конечном итоге приводят к тем или иным нарушениями социальной адаптации [Яременко Б.Р., 2002].

Эффекты препатальной гипоксии на организм новорожденного зависят от 1яжесги воздейс1вия, индивидуальной голерашности и срока внутриутробного развития. В эмбриогенезе человека и животных выделяют 2 критических периода: первый - доимплантациоиный (1-5 дни после оплодотворения), второй - период интенсивного органогенеза (13-17 дни развития у крыс, 3-8 педеля у человека). Изучению влияния гипоксии в эти периоды, а также гипоксии последнего триместра беременное!и па развитие новорожденного посвящено много работ. Воздействие острого гипоксического стресса в период раннего органогенеза (9-Ю-й дни развития у крыс, 1-3 неделя у человека) практически не изучено.

Одним из возможных путей если не полного устранения, то хотя бы облегчения негативных последствий гипоксии, является использование с этой целью регуляторных пептидов. Регуляторные пептиды - класс физиологически активных веществ протеиновой природы, играющих ключевую роль в регуляции и реализации разнообразных функций организма не только в норме, но и при патологических состояниях. К особенностям регуляторных пептидов следует отнести их полифункциональность и каскадный характер действия. приводящий к пролонгированию пептидергических влияний [Ашмарип И.Г1. 1996].

К таким регуляторам относи 1Ся трипептид PGP. Ранее в исследованиях Бадмаевой К.Е. (2005) было показано, что PGP обладает антигипоксическим действием и высокой нейропротекгорной активностью, а также выраженным протекторным действием в условиях патологии при нарушении поведения крыс, подвергавшихся сгрессогенному воздействию, предо гвращая значительное повышение тревожности и снижение уровня ориентировочно-исследовательской активносш [Бадмаева С.Е , 2005].

Таким образом, целью данного исследования явилось изучение влияния острой гипоксии периода раннего органогенеза на течение беременности у самок белых беспородных крыс и на последующее развитие их потомс1ва, а также возможность коррекции вызванных гипоксией нарушений.

Задачи исследования:

1. Оценить влияние острой гипобарической гипоксии (ОГГ), осущес1влешюй в период раннего органогенеза (9-10-й день беремеипосги), на течение беременности у самок белых беспородных крыс по ряду функциональных показателей: устойчивость к гипоксии, поведенческие характеристики и вегетативный баланс (по данным ЭКГ).

2. Изучить влияние пренатальпой ОГГ на потомство по показателям физического развития, по ряду поведенческих и вегетативных параметров (in vivo), а также оценить последствия пренатальпой ОГГ в экспериментах in vitio по биохимическим и цигоморфологическим показателям.

3. Оценить влияние терапевтического введения трипептида PGP, вводимого шпрапазалыю на 13-15-й дни посгпатального периода, на развитие потомства по ряду перечисленных выше показателей.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Граф, Анастасия Викторовна

выводы

1. Беременные крысы в период раннего органогенеза (9-10-й день беременности) менее устойчивы к острой гипобарической гипоксии, чем небеременные. По резистентности к острой гипобарической гипоксии беременные крысы подразделяются на низко- (52,5%), средне- (28,3%) и высокоустойчивых (19,2%).

2. Устойчивость к гипоксии можно предсказать по исходному уровню ЧСС у потенциально низкоустойчивых беременных самок она достоверно выше, чем у среднеустойчивых и высокоустойчивых.

3. Вероятность неблагоприятного исхода беременности у самок, переживших гипоксию, выше, чем у пе подвергавшихся острой гипоксии.

4. У низкоустойчивых к гипоксии самок уже на следующий день после моделирования гипоксии можно предсказать исход беременности по поведенческим характеристикам и показателям ЭКГ

5. Ос фая гипоксия периода раннего органогенеза нарушает процесс нормального постнатального развития погомс!ва. Отклонения в развитии больше выражены в потомстве пизкоустойчивых к гипоксии крыс.

6. Нарушения в развитии потомства низкоустойчивых к гипоксии самок сохранялись до периода половой зрелости.

7. Последствия пренатальной гипоксии по ряду характеристик достоверно различались у мужского и женского потомства.

8. В женском потомстве низкоустойчивых к гипоксии самок отмечались признаки маскулинизации по показателям поведенческих паттернов и уровню серотонина в стволе головного мозга.

9. Терапевтическое инграназальпое введение пептида PGP (в дозе 1 мг/кг) на 13-15-й дни постиатальпого развития устраняло практически все выявленные негативные последствия гипоксии у взрослого потомства пизкоустойчивых к гипоксии самок.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Граф, Анастасия Викторовна, Москва

1. Абрамченко В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве (Оксидативный стресс в акушерстве и его терапия антиоксидантами и антигипоксантами). // СПб. Изд.: ДЕАН. 2001.400 с.

2. Аврущенко М.Ш.. Герштейн Л.М., Саморукова И.В. и др. Постреанимационные изменения нейрональных популяций гиппокампа у крыс с различной способностью к обучению. // БЭБиМ. 1996. Т. 132. 382-386.

3. Архипов В.В., Валеев Р.Ш, Махмутходжаев А.Ш. Заболевания легких при беременности. // М.: Атмосфера. 2002. 87с.

4. Аршавский И.А. Физиологические механизмы и закономерности индивидуального развития. // М. Изд-во: Наука. 1982. 182с.

5. Ашмарин И.П.. Ка1менская М.А. Нейропептиды в синапгической передаче // Итоги науки и гехники. ВИНИТИ. Сер. Физиология человека и живогных. М. 1988. Т.34 С 31-89.

6. Ашмарин И.П., Каменский А.А., Ляпина Л.А. и др. Глипролины как самостоятельные регуляюры и стабилизашры других пептидов // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 2002. № 1. 24-27.

7. Ашмарин И.П., Каразеева Е.П., Ляпина Л А. и др. Регуляторная активность простейших пролинсодержащих пептидов PG, GP, PGP и GPGG и возможные ИСГ0ЧПИ1СИ их биосинтеза// Биохимия. 1998. Т.бЗ, вып. 2. 149-155.

8. Ашмарин И.П., Незавибагько В.Н., Мясоедов М.Ф. и др. Ноотроппый аналог адренокортикотропина 4-10 семакс. 15-ти летний опыт разработки и изучения // Журнал ВИД. 1997. Т.47. Вып.2. 420-429.

9. Ашмарин И.П., Обухова М.Ф. Регуляторные пептиды, функционально непрерывная совокупность // Биохимия. 1986. Т.51. Вып.4. 3-8.

10. Бадмаева СЕ, Копылова Г.П., Абушапова Н.Н. Влияния глипролинов па стрессогенные нарушения поведения крыс. // Росс. Физиол. Жури. им. И.М.Сеченоваю 2005. Т. 91. № 5. 2005.

11. Баевский P.M. Прогнозирование состояний на грани нормы и патологии. М. Изд-во: Медицина. 1979. 298с.

12. Балан П.В. Острая гипобарическая гипоксия в постнатальном периоде: влияние регулчторных пептидов: Дис. на соиск. степ. канд. биол. наук. М. Изд-во: МГУ. 1999. 189с.

13. Балан П.В., Маклакова А.С., Крушинская Я.В. и др. Сравнительный анализ устойчивости у острой гипобарической гипоксии новорожденных и взрослых экспериментальных животных. // Акуш. и ген. 1998. № 3. 20-23.

14. Барашнев Ю.И. Клинико-морфологическая характеристика и исходы церебральных расстройсгв при гипоксически-ишемических энцефалопагиях. // Акуш и ген. 2000. № 5. 39-42.

15. Бастрикова Н.А. Влияние геморрагического шока на процессы обучения и поведение крыс в постреанимационном периоде: Дис. па соиск. степ. канд. биол. наук. // М. Изд-во: МГУ. 1997. 182с.

16. Биленко М.В. РХшемические и реперфузионные повреждения органов (Молекулярные механизмы, пути повреждения и лечения). // М. Медицина. 1989 368 с.

17. Бойко С С , Жердев В.П., Дворяпинов А.А. и др. Фармакокинетика дипешидного аналога пирацетама с ноогроппой активностью ГВС-11 и его основных метаболитов // Экспер. клин, фармакол. 1997. Т. 60, № 2. 53-55.

18. Бойко С С , Жердев В.П., Дворянипов А.А. и др. Фармакокинетика и метаболизм гептапентида - перспективногго синтетического аналога тафтсина с психостимулирующим действием у крыс // Эксп. и клин, фармакол. 1998. Т. 61. № 5. С 42-45.

19. Брагин Е.О., Ясенцов В.В. Опиоидные и монаминовые механизмы регуляции функций организма в экстремальных условиях // Итоги науки и техники. ВПИТИ. Сер. Физиология человека и животных. М. 1991. Т.47. 180с.

20. Бродин СВ., Янович В.Х.. Метаболизм Р-'^'С. глицина в тканях крыс in vitro // Укр. Биохим. Журн. 1996. Т. 68, № 2. 34-37.

21. Васьковский Б.В., Ю.А. Золотарев, Жуйкова СЕ. и др. Изучение распределения •'lIlPGP в организме крыс // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 2003. № 3. 41-45.

22. Ватаева Л.А., Косткин В.Б., Макухина Г В. и др. Поведение в "Открытом ноле" у самок и самцов крыс, подвергавшихся действию гипоксии в различные сроки пренатального периода развития. // Докл Акад Наук. 2001. Т. 380. № 1. 125-127.

23. Воронина Т.А., Середенин СБ. Ноотропные препараты, достижения и новые проблемы // Экспер. и клин, фармакология. 2002. Т. 61, № 4. 3-9.

24. Глазачев О С . Орлова М.А. Индивидуально-типоогические критерии нрогнозирвоания устойчивости человека к острой гипоксии. // Сб тезисов Четвертой Российской конференции "Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция". 2005. 28.

25. Гончарепко Е.Н., Антонова СВ., Шестакова СВ. и др.. Функциональные и биохимические характеристики острой гипобарртческой гипоксии у новорожденных и взрослых крыс // Акушерство и гинекология. 1999. №3. 51-53.

26. Гудашева Т.А., Бойко С, Акпаров В.Х. и др. Идентификация в мозге крыс цикло- пролилглицина. нового эндогенного пептида с ноогропной активноегью // ДАН. 1996. Г 350 №6. С 834-836

27. Гудашева Т.Л., Консгантинопольский М.А.. Островская Р.У и др.. Анксиолитичсская активность ноотропного эндогенного дипсптида цикло-пролил-глицина в тесте приподнятого крестообразного лабиринта // БЭБиМ. 2001. Т.131, №5. 464-466.

28. Гудашева Т.А., Островская Р.У., Трофимов С. и др. Новый эндогенный дипептнд циклопролилглицин подобен пирацетаму по селективности мнемотропного эффекта // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1999. Т. 128, №10. 411-413.

29. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Мясоедов Н.Ф. и др. Эффективность семакса в остром периоде полушарного ишемического инсульта// Неврология и психотерапия. 1997. Т. 97. №6. 26-34.

30. Гусев Е.И., Ссворцова В.И. Ишемия мозга. // М.: Медицина. 2001. 248-274.

31. Држевецкая И.А. Эндокринная система растущего организма. // М. Изд-во: Высшая школа. 1987. 71с.

32. Дубынин В.А. Постнатальная нейрогропная активность |3-казоморфинов (регуляция поведения взрослых и новорожденных млекопитающих).// Автореферат диссершции на соискание ученой степени доктора биологических наук. 2001. 47 с.

33. Жукова Т П., Знаменская Е И., Паленова Н.Г Стрзтстурные изменения мозга. Перинатальная патология // Под ред. М.Я.Студеникиной. Совместное издание СССР-ГДР. // М.: Медицина, 1984. 45-83

34. Зефиров Т.Л. Нервная регуляция сердечного ритма крыс в постнатальном онтогенезе. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук. Казань. 1999. 39с.

35. Золотарев Ю Д.. Жуйкова Е.. Ашмарин И.П. и др. Метаболизм пептида при разных способах введения // БЭБиМ. 2003. Т. 135. № 4. 422-423.

36. Зуфаров К.Д. Новые данные о пищеваригельно-всасывашльных функциях тонкой кишки и почек новорожденных // БЭБиМ. 1998. Т. 125-126, № 1. 4-5.

37. Р1влева Ю.А.. Дубинин В.Д., Дмитриева Т.Д. и др. Влияние р-казоморфина-7 на материнско-де1ское взаимодействие белых крыс // Вест. Моск. Ун-та. 2003. Сер 16: "Биология". № 4. С 3-8.

38. Инструментальные методы исследования сердечно-сосудисюй системы (Справочник). Под. ред. Виноградовой Т.С. М. Изд-во: Медицина. 1996. 416с.

39. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии. М. Изд-во: МГУ. 1968. 275с.

40. Кассиль В.Г., Отеллин В.А., Хожай Л.И. и др. Критические периоды развития головного мозга. // Рос. Физиол. Жури. им. И.М.Сеченова. 2000. Т. 86. № 11. 1418-1425.

41. Киитрая П.Я., Курчишвили В.И. Эффективность применения антогопистов опиоидных пептидов при экспериментальной гипоксии // Сб. отечественных Статей. 1988. 38-40.

42. Классификация перинатальных повреждений нервной системы у новорожденных. Методические рекомендации. // М.: ВУНМЦ МЗ РФ. 2000. 40 с.

43. Корнеев Д.А. Исследование некоторых кислородзависимых процессов на изолированном сокращающемся сердце при гипоксии // Дис. канд. биол. наук. М., 1985.

44. Корнеев А.А., Попова О.А. Окислительный метаболизм и функция ^moкapдa крыс с разной чувствительностью к кислородной недостаточности в условиях гипоксии. // Патол. физиол. и эксперим. терапия. 1987, №36, с. 28-30.

45. Кретович В.Л. Введение в энзимологию. // М.: Наука. 1967. 351 с.

46. Крушинская Я.В. Повьппение резистентности к геморрагии и гипобарической гипоксии комплексом регуляторных пептидов: Дис. на соиск. степ. канд. биол. наук. // М. Изд-во: МГУ. 1996. 142с.

47. Кушаковский Н.С. Аритмии сердца. // -Пб. Изд-во: Гиппокрак 1992. 273 с.

48. Лебедько О.А., Яценко Т.В., Тимошин С., Рубина А.Ю. Влияние пептидного морфогена гидры на постгипоксические нарушения у крысят, подвергну i ых пренатальной гипоксии //// Бюл. Экспер Биол и Мед. 1997. Т.123. №3. 269-272.

49. Левицкая Н.Г.. Себенцова Е.А.. Глазова Н.Ю. и др Исследование нейрогропной активности продуктов ферментативной деградации семакса // Доют АН. 2000. Т 372 № 2 . 268-271.

50. Ливанова Л.М., Лукьянова Л.М. Влияние длительной адаптации к гипоксии па поведенческие реакции в открытом поле крыс с разным типом устойчивости. // Журнал ВИД. 1993. Т. 43, № 4, с. 808-816

51. Лукьянова Л.Д. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксическпх средств. // М. Типогр.: Министерства Здравоохранения СССР. 1990. 18с.

52. Мазо В.К., Лоранская И.Д., Зорин Н. и др. Оценка проницаемости кишечного барьера для макромолекул у больных с болезнью крона и язвенным колитом // Педиатрия. 1997. №2. 19-24.

53. Мазуров В.И. Биохимия коллагеповых белков. // М.: Медицина. 1974. 248 с.

54. Маряшева Н.В. Нарушение реологических и каогуляционных свойств крови при гипоксии плода и новорожденного и их коррекцияю. // Автореф. дис. на соиск. степ, канд. мед. паук. М. 1987.

55. Маслова М.В Острая гипоксия в период прогестации у крыс и ее влияния на развитие потомства; пептидергическая коррекция: Дис. на соиск. степ. канд. биол. наук. // М. Изд-во: МГУ. 1999. 170с.

56. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Харьков. // Изд-во: Торсинг. 1997. 560с.

57. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. // М. 1988. 256с.

58. Меяиванов А.П. Патология системы мать - плацента - плод (руководство для врачей). М., 1999.448 с.

59. Мочалова Т.А. Влияние алкогольной инюксикации самок белых крыс на сие i ему эритропа у поюмства в раннем посхнатальном органогенезе. Лвтореф. дис. ... канд. биол. наук . Тверь, 2003. 22 с.

60. Объекхы биологии развития. Под ред. Бакулипа Э.Д.. Баранова B.C. и др. // М. Изд- во: Наука. 1975.579с.

61. Панина О.Б., Бугереыко Е.10., Сичинова Л.Г. Развитие эмбриона (плода) и оболочек плодного яйца в первом триместре беременности по данным эхографии // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. 1998. № 2. 59-65;

62. Пучков В.Ф. Учение П.Г.Светлова о критических периодах развития и его значение для современной эмбриологии.//Морфология. 1993. Т. 105,№11.С. 147-158.

63. Радзипский В.Е., Демидова Е.М., Базовая М.Ю и др. Эффективность раннего мониторировиаия гестационного процесса у женщин с риском невынашивания беременности. // Журнал акушерства и женских болезней. 2002. № 4. Т. LI. 8-12.

64. Розен В.Б. Основы эндокринологии. // М. Изд-во: МГУ. 1994. 384с.

65. Савельев СВ. Стадии эмбрионального развития мозга человека. // М.: Изд. "Веди". 2002.110с.

66. Савельева Г.М. Реанимация и ингенсивная терапия новорожденных. // М. 1981.

67. Сафарова Э.Ф. Шрам С И., Гривенников И.А. и др. Трофическое действие ноотропных пептидных препаратов церебролизина и семакса на культивируемые клетки феохромоцитомы крысы // БЭБиМ. 2002. Т. 133, № 4. 462-465.

68. Середенин СБ., Гудашева Т.Д., Бойко С. и др. Эндогенный дипептид циклопролилглицин проявляет селективную анксиолитическую активность у животных с выраженной реакцией страха// БЭБиМ. 2002 Т. 133 № 4. 417-419

69. Симонова Л.В., Ко1лукова Н.П., Гайдукова Ы.В И' др Постгипоксическая дезадаптация сердечно-сосудистой системы у новорожденных дегей // Российский вестник перина!ологии и педиатрии. 2001. Т.46. №2. 8-12

70. Сичинава Л.Г. Перинатальные гипоксические поражения ЦПС плода и новорожденного: Авюреф. дисс.... докт. мед. наук. // М., 1993. 40 с.

71. Соколова Ы.А., Маслова М.В., Маклакова А.С., Ашмарин И.П. Пренагальный гипоксический стресс: физиологические и биохимические последсгвия. коррекция регуляторными пептидами // Успехи физиологических наук. 2002 Т 33 №2 С 56-67

72. Сорокин А.Б. Нейрофизиологическое исследование синдрома дефицита внимания у детей младшего школьного возраста: Автореферат на соисканрю ученой степегш кандидата биологических наук. // М. 1999.

73. Тимофеева П.М., Иезуитова Н.Ы., Громова Л.В. Современные представления о всасывании моносахаридов, аминокислот и пептидов в тонкой кишке млекопитающих//Успехи физиол. наук. 2000. Т.31. №4. 24-37.

74. Титов А.. Каменский А.А. Роль ориентировочного и оборонительного компонентов в поведении белых крыс в условиях "открытого поля" // Жури. Высшая Нервная Деятелыюсть. 1980. Т.ЗО. №4. 704-707.

75. Тюкова Н.В., Меньшикова Л.И., Макарова В.И. и др. Изменения вегетативной регуляции сердечного ритма у детей, испытавших перинатальную гипоксию // Вестник ари1мологии. 2000. №18. 125-126.

76. Харламова Н.В., Чаша Т.В. Анализ показателей сердечного ритма при различных видах терапии новорожденных с перинатальной гипоксической энцефа;юпат ней // Вестник аритмологии. 2000. №18. 126-127.

77. Чернобаева Г Н Особенности регуляции окислительного метаболизма мозга животных в различной индивидуальной чувствительностью к кислородной недостаточности: Дис. канд. биол. наук.: М., 1985

78. Чехонин В.П., Лебедев СВ., Володин Н.Н. и др. Экспериментальное моделирование перинатального гипоксически-ишемического поражения мозга. // Вопросы геникологии. акушерства и перинатологии. 2002. Т.1.№2 С 9-16.

79. Чижов А.Я. Егорова Е.Б., Караш Ю.М. и др. Экспериментальная оценка возможности модифицирования неспецифической резне ген шости организма магери, плода и новорожденного к экстремсльным факюрам. // Акушерство и гинекология. 1986. № 3 . 26-29.

80. Чижов А.Я, Филимонов В.Г., Караш Ю.М. и др. О биоритме напряжения кислорода тканях матки и плода. // Бюл. Экспер Биол и Мед. 1981. № 3. 392-394.

81. Шабалов Н.П. Асфиксия новорожденных. // Л.: Медицина, 1990.

82. Шехтмап М.М., Елохииа Т.Б. Некоторые методы прогнозирования поздних токсикозов у беременных. // Акушерство и гинекология. 1996. № 3. 3-6.

83. Шибай В.М.. Артериальная гипертензия у беременных. // Рос. Мед. Журнал. 1999 Т. 7 №18. 15-22.

84. Эдельштейн Э.А. Перинатальные гипоксичесхсие неврологические синдромы. // М. Изд-во: ЦОЛИУВ. 1998. 152с.

85. Яременко Б.Р., Яременко А.Б., Горяинова Т.Б. Минимальные дисфункции головного мозга у детей // -П.: Салит. 2002. 125.

86. Adhwlfi М. The development of the human blood-CSF-biain banieT. // Dev A4ed Child Neurol 1985. V. 27. P. 532-537

87. Amini SA, Dunstan RII, Dunklcy PR et al. Oxidative sUess and fetoxicity of alcohol consumption duiing piegnancy. // Free Radic Biol Med. 1996. V. 21. № 3. P.357-365.

88. Anton RF, Becker HC, Randall CL. Ethanol increases PGE and tromboxane production in mouse pregnant uterine tissue.// Life Sciences. 1990. V 46. P. 1145-1153.

89. Appel N.M., Kiritsy-Roy J.A., Van Loon G.R. Hypothalamuc opioid peptide regulation of catecholamine secretion//Neuropeptides. 1984. V.5. N1-3. P.287-290.

90. Ashmarin LP., Nezavibatko V.N., Levitskaya N.G. et al . Design and investigation of an ACTG(4-10) analogue lacking D-ammo acids and hydrophobic radicals // Neuroscience research communications. 1995. V.1'6. № 2 . P 105-112.

91. Bae S. Xiao Y., Li G. Effect of maternal chronic hypoxia exposure during gestation on apoptosis in fetal lat heart. // Am J Physiol Heart Ciic Physiol. 2003. V. 285.11983-И990.

92. Bai J.P., Amidon G.L. Stiuctuial specificity of mucosal-cell transport and metabolism of peptide drugs: implication for oral peptide drug deliveiy // Pharm. Res. 1992. V.9. № 8. P. 969-978.

93. Balduini W , De Angelis V . Mazzoni E et al. Long-lasting behavioral alterations following a hypoxic/ischemic bram injury in neonatal rats. // Bram Reseach 2000 V 859. P. 318-325.

94. Balin B.J., Bioadwell R.D.. Salcman M. et al. Avenues for entry of peiyphcially administered piotein to the central nervous system in mouse, lat and squirrel monkey // .1. Сотр. Neurol. 1986. V.251. P. 260-280.

95. Batler W.T., Ponds S.L. Chemical studies on the cyanogen bromide peptides of rat skin collagen. Amino acid sequence of 1-CB4 // Biochemistry. 1971. V. 10, № 11. P. 2076-2081.

96. Bertolini A., Guarini S., Feiraii W., Rompianesi E. Adienocoiticotropin leveisal of experimental hemorrhagic shock is antagonized by morphine // Life Sci. 1986. V.39. N.14. P.1271-1280.

97. Blennow M., Ingvar M., Lagererantz H. Early F.FDG positron emission tomography m infants with hypoxic-ishemic encephalopathy shows hypermetabolism during the postasphyctic period. // Acta Pediatr. 1995. V. 84. P. 1289-1295.

98. BtambiIla P., Peiez J.. Baraie F. et al. GABAergic dysfunction in mood disorder. // Mol. Psychiatiy. 2003. V. 150. P. 1015-1019.

99. Brownell LG. West P, ICryger MH. Breathing during sleep in normal pregnant women. Am RevRespirDis 1986;133:38-41.

100. Calvert J W . Zhou C . Nanda A. et al. Effect of hyperbaric oxigen on apoptosis m neonatal hypoxia-icshemia rat model. // .1 Appl Physiol. 2003 V. 95 (5) P 2072.

101. Cheung E., Wong N., Mortola J.P. Compliance of the lespiratoiy system in newborn and adult rats after gestation in hypoxia//J. Сотр. Physiol. B.. 2000. V. 170(3). P. 193-199.

102. Clark SI., Cottor DB, Lee W et al. Cential hemodynamic assessment of normal term piegnancy. // Am. J Obstet Gynaecol. 1989. V. 161. P. 1439-1442.

103. Dezateux С , Stocks J., Dundas 1. et al. Impaired airway fimction and wheezing in infancy // Am J Respir Crit Care Med. 1999. V. 159. P. 403-410.

104. Dodic M., Peers A., Coghlan J.P. et al. Can excess glucocorticoid, in utero, predispose to cardiovascular and metabolic disease in middle age? // Trends Endocrinol Metab. 1999. V.

105. S.Dunlap E.D., Samols E . Waite L С Pfeifer M.A. Development of a method to determme autonomic nervous system function in the rat // Metobolism. 1987 V 36. N.2 P 193-197

106. Faull K.F., Schier G.M., Schlesinger P. et al. The mass spectrometric identification of dipeptides in the mine of a patient suffering from clironic skin ulceiation and oedema // Clin. Chim. Acta. 1976. V.15,№2. P. 313-321.

107. Feifar. Z. Prevention against ischemic heart disease: a critical review. In: Modern Trends in Cardiology, edited by M. F. Oliver. // Boston. MA: Butterworth-Heinemann. 1975. P. 465-499.

108. Ganapathy V. Prasad PD, Ganapathy ME et al. Drugs of abuse and placental transport. // Adv Drug Deliv Rev. 1999. V. 38. P. 99-110. •^a •

109. Gauda E.B., Bamford O., Gerfen C.R. Developmental expression of tyrosin hydioxylase, D2- dopamine leceptor and substance P genes in the caiotid body of the lat. // Neuroscience. 1996. V. 75. P. 969-977.

110. Genbacev O. To proliferate or to divide - to be or not to be. // Early Piegnancy, 2001, V 5, P. 63-64

111. Genbacev O., Joslin R. et al. Hypoxia alters early gestation human cytotrophoblasl differentiation/invasion in vitro and models the placental defects that occur in pie-eclampsia // J. Clin. Invest. - 1997, V. 97, № 2, P 540-550

112. Gilland E., Hagbcig II. NMDA-dependent inciease of cerebial glucose utilisation aftei hypoxia in the immature rat. // J Cereb Blood Flow Metab. 1996. V. 16. P. 1005-1013.

113. Gilliand F.D., Berhaiie K., McConnell R. et al. Maternal smoking during pregnancy, enviiomental tobacco smoke exposuie and childhood lung function. //Thoiax. 2000. V. 55. P. 271-276.

114. Golub M.S., Eisele J.H. Jr.. Donald J.M. Effect of intrapartum meperidine on the behavioral consequences of neonatal oxygen deprivation in rhesus monkey infants // Dev. Pharmacol. Ther. 1991. V. 16(4). P. 231-240.

115. Gomez LA, Alekseev AE, Aleksandrova LA, Brady PA, Terzic A. Use of the MTT assay in adult ventricular cardiomyocytes to assess viability: effects of adenosine and potassium on cellular survival.//J Mol Cell Cardiol. 1997 V 29 № 4. P. 1255-66.

116. Jauniax E, Waltson AL, Hcmpstock J et al. Onset of maternal aiteiial blood flow and placental oxidative shess: a possible factor in human early piegnancy failuie. // Am J Pathol. 2000. V. 157. P. 2111-2122.

117. Jolmston M.V., Trescher W.H., Ishida A. et al. Neurobiology of Hypoxic-Ischemic Injury in the Developing Biain. // Pediatr Res. 2001. V. 49. P. 735-741.

118. Kesmodel U, Wisborg K, Henriksen ТВ et al. Moderate alcohol intake in pregnancy and the risk of spontaneous abortion. // Alcohol & AlcohoHsm. 2002. V. 37. №1. P. 87-92.

119. Kleiman JC, Pierre MB J. Madans JH et al. The effects of maternal smoking on fetal and infant mortality.//Am J Epidemiol. 1988: V. 127 P'^274-282.

120. ICraczkowski J.J.. Semczuk M. Comparison of changes in optical density of mu-opioid receptois in the brain of adult lats after prenatal and postnatal hypoxia // Ginekol. Pot. 1998.V. 69(12).P. 963-967.

121. Kraczkowski J.J., Semczuk M. Plec zmiany w gestosci receptorow ukladu opioidowego pod wplywem niedotlenienia// Ginekol. Pot. 2000. V.71 (8). P. 927-930.

122. Lazareva A.V. Lazarev lu.A. Effect of chain length on formation of double-layer structure of Z-(GIy-Pro-Gly)n-OMeoligotripeptides//Biofiziki. 1997 V. 42. № 4 P 806-810.

123. Le .1., Pcrier C , Peyroche S. et al. Urine glycyl-L-pioIine inciease and skin tiophicity // Amino Acids. 1999. V. 17, № 3. P. 315-322.

124. Lcfcourt LA, Rodis JF. Obstuiclive sleep apnea in pregnancy. // Obstet Gynecol Surv. 1996.V.51,№8. P.503-506.

125. Levin D.L. et. all. Puimonaiy microthiombi syndiome in newborn infant with amesponsive peisistent puimonaiy hipertension // J. Pediatr. 1983. V.102. P.299-303.

126. Leviton A., Fenton Т., Kuban K.C. et al. Labor and delivery characteristics and the risk of geiminal matrix hemorrhage in low birth weight infants. // J Child Neurol. 1991. V. 6. P. 35-40.

127. Lewis A.M., Mathieu-Costello O., Mc Millan P.J et al. Effect of long-teim high-altitude hypoxia on the capillarity of the ovine fetal heait // Am. J. Physiol. 1999. V. 277(2). H756-II762.

128. Liggins G.C, Howie R.N. A controlled trial of antepartum glucocorticoid tieatment for prevention of the lespiratory distress syndrome in piematuie infants. Pediatrics 1972. V. 50:515-25

129. Lm L. York D. Comparison of the effects of enterostatm on food intake and gastric empting m rats // Brian Res. 1997. V. 745. P. 205-209. ISl.Mabry RL. Rhinitis of pregnancy. South Med J 1986;79:965-71.

130. Magistretti P.J., Pellerin L., Rothman D.L. et al. Energy on demand. // Science.1999. V.

131. Magness RR. Zheng J Maternal cardiovascular alterations during pregnancy In Gluckmann PD, Heymann MA, eds. // Pediatric and Perinatal Perspectives: The Scientific Basis. London, UK: Arnold. 1996. P. 762-772.

132. Mamet J., Peyronnet J.. Peirin D. et al. Long-teim prenatal hypoxia alteis matuiation of adrenal medulla in lat. // Pediatric research. V 51. № 2. 2002. P. 207-217.

133. Matthews S.G. Antenatal glucocorticoids and programming of the developing CNS. // Intern Pediatric Research 2000. V. 47. № 3 p. 291-300.

134. McMorrow LE Chromosome damage induced by ethanol. // Annals of the New York Acad of Sciences. 1991. V. 625. P. 830-831.

135. Milnei A.D., Maish M.J. Ingram D.M. et al. Effects of smoking in pregnancy on neonatal lung function. // Aich Dis Child Fetal Neonatal Ed. 1999. V. 80. P. 8-14. '&

136. Mishell DR. Davajan V. Reproductive Endocrinology, Infertility and Contiaception. Philadelphia // Pa: Fa Davis; 1979. P. 123-124.

137. Moji H, MuiataT, Moiinobu T et al. Plasma levels of retinol. Retinol-binding protein, all- trans beta-carotene and ciyptoxanthin in low birth weight infants. // J Nutr Sci Vitaminol. 1995. V. 41. P. 595-606.

138. Molina Y, Vedia I, McDonald В et al. Nitric oxide-induccd S-nitosylation of glyceialdehyde-3-phosphate dehydrogenase inhibits enzymatic activity and incieases endogenous ADP-ribosylation. / /J Biol Chem. 1992. V. 267. V. 24929-24932.

139. Mori is JM, Gopaul NK et al. Circulating markers of oxidative stiess are laised in noimal piegnancy and pie-eclampsia. // Br J Obstet Gynaecol. 1998. V. 105. P. 1195-1199.

140. Muneoka K., Mikuni M., Ogawa T. et al. Pienatal dexamethasone exposure alteis brain monoamine metabolism and adrenocortical response in rat offspring. // Am .1 Physiol. 1997.V. 273. P. 1669-1675.

141. Murotsuki J., Challis J.R. Han VK. et al. Chronik tetal placental embolization and hypoxemia cause hypertension and myocardial hypertrophy in fetal sheep. // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 1997. V. 272. R201-b^07.

142. Pennington SN. Ethanol-induced giowth inhibition: the lole of cyclic AMP-dcpcndcnt piotein kinase. // Alcoholism: Clinical and Expeiimental Reseach V. 12. P. 125-129.

143. Peyronnet J.. Daimaz Y., Ehrstrom M. et al. Long-lasting adverse effects of prenatal hypoxia on developing atonomic nervous system and cardiovascular parameters in rats. // Pflugers Arch. 2002. V. 443 (5-6). P. 858-865.

144. Peyronnet J., Roux J.C, Tang L.Q. et al. Prenatal hypoxia impairs the postnatal development of neural and functional chemoafferent pathway in rat. // J Physiol. 2000. V. 524 (2). P 525-537

145. Pietrowsky R., Struben С Molle M. et al. Brain potential changes aftei intranasal versus intravenous administration of vasopressin: functional evidence for a faciliated nosc-biain passage for peptides // Biol. Psychiatry. 1996. 39:332-340.

146. Pilkington S. Carli F. DakmrJVIJ. et al Increase m Mallampati score during pregnancy // Br J Anaesth. 1995 V 74. P. 638-642.

147. Powell S.R., Mantell L.L., Garramone V. et al. Acute effects of nonlcthal on utero hypoxia on fetal guinea pig heart and lack of peisistent cardiac or ceiebial effects in the neonate. // Biol Neonate. 2004. V.86 (4). P. 240-246.

148. Issues 1-2. P. 86-91. ISl.Sala M, Perez J., Soloff P. et all. Stiess and hippocampall abnormalities in psychiatric disordes. // J. Europ. Neuropsychopharm. 2004. V.I4. № 5. P.393-405

149. Sameshinia H, Ikenoue T. Long-term magnesium sulfate treatment as protection against hypoxic-ischemic biain injury in seven-day-old lats. // Am J Obster Gynecol. 2001. V.

151. Samonina G., Aslimaiin I., Lyapina L. Glyproline peptide Family: review on bioactivity and possible origins // Phatophysiology. 2002. V. 8. P. 229-234.

152. Sapolsky R.M. Why stress is bad for your bram. // Science. 1996. V 273 P 749-750

153. Sapolsky R.M., Uno H., Rebert C.S. et al. Hippocampal damage associated with prolonged glucocorticoid exposure in primates. // J. Neurosci. 1990. V. 10. P. 2897-2902.

154. Schobel H., Fischer Т., Heuzer K. et al. Preeclampsia - a state of sympathetic overactivity.//New Engl. J. Med. 1996. V. 14. P. 1480-1485.

155. Schwarz KB. Cox JM. Sharma S et al. Prooxidant effects of maternal smoking and formula in newborn infants. // J Pediatr Gastroent of Nutr. 1997. V. 24. P 68-74.

156. Sekhon H.S.. Keller J.A., Benowitz N.L. et al. Prenatal Nicotine Exposure Alteis Pulmonary Function in Newborn Rliesus Monkeys. // Am J Respii Crit Gate Md. 2001.V.

158. Shinwell E.S., Karlpus M.. Reich D. Early postnatal dexamethasone treatment and increased incidence of cerebral palsy. //// Arch Dis Child Fetal and Neonatal Ed. 2000. V.

159. Sies H. Oxidative stress 11. Oxidants and antioxidants // Academic Press London 1991

160. Sladek SM, Magness RR, Conrad KP. Nitric oxide and pregnancy. // Am. J Obstet Gynaecol. 1997. V. 272. P. 441-463.

161. Slater TF. Fiee ladical mechanism in tissue injuiy. // Biochemical journal. 1984. V. 222. P. 1-15.

162. Smith C.V.Hansen T.N., Martin N.F. et al. Oxidant sliess lesponses in piemaluic infants duiing exposure to hyperoxia. // Pediatr Res. 1993. V. 34. P. 360-364.

163. Sorbye H., Svanes K. The role of blood flow in gastric mucosal defense, damage and healing // Dig. Dis. Sci. 1994. V.12. № 5. P. 305-317.

164. St-Louis J, Sicotle B. Piostoglandin- or endolelian-mediated vasodilatation is not involved in the blunted responses of blood vessels to vasocontiictois in pregnant rats. // Am. J Obstet Gynaecol. 1992. V. 166. P. 684-692.

165. Stubner UP, Giuber D. Berger UE. et al. The influence of female sex hoimones on nasal reactivity in seasonal alleigic rhinitis. // Allergy. 1999. V. 54. P. 865-871.

166. Sugmo N, nakamura Y, Takeda О et al. Changes m activities of superoxide dismutase and lipid peroxide in corpus luteum during pregnancy m rats. // J Reprod and Fertility. 1993. V. 97. P. 347-351.

167. Suzuki K, Minei LJ, Jonson ЕЕ. Effect of nicotine upon uterine blood flow in the pregnant rhesus monkey. // Am. J. Obstet Gynecol. 1980. V. 136. P. 1009-1013

168. Tager LB.. Hanrahan J.P.. Brown R.W Lung function, pre- and postnatal smoke exposure, and wheezing in the first year of life. // Am Rev Respir Dis. 1992. V. 147 P 811-817.

169. Towfighi J., Mauger D., Vannucci R. et al. Influence of age on the ceiebial lesions in a immaluic lat model of cerebral hypoxia-ischemia: a light micioscopic study. // Develop Brain Res. 1997. V. 100. P. 149-160.

170. Upton M.N.. Watt G.C., Smith G.D et al. Permanent effects of maternal smoking on offsprings' lung function. // Lancet. 1998. P. 352.

171. Vannucci C.R.. Perlman J.M. Interventions for Perinatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy. // Pediatrics. 1997. V. 100. № 6. P. 1004-1013.

172. Vannucci R.C., Connor J.R., Mauger D.T. et al. Rat model of peiinatal hypoxic-ischemic brain damage. // J Neuros Res. 1999. V. 55. P. 158-163

173. Vannucci RC. Experimental biology of ceiebral hypoxia-ishemia: lelation to perinatal biain damage. // Pediatr Res. 1990. V. 27. P. 317-326.

174. Volpe JJ. Brain in)'uiy in the piemature infant - cuirent concepts of pathogenesis and pievention. // Biol Neonate. 1992. V. 62. P. 231-242.

175. Ward H.E., Jolinson E.A., Salm A.K. et al. Effects of pienalal stress on defensive withdrawal behavior and coiticotropin releasing factor systems in rat biain, // Physiol Behav. 2000. V. 70 (3-4). P. 359-366.

176. White L.D.. Lawson E.E. Effect of chronic pienatal hypoxia on tyiosine hydioxylase: a phenylethanolanine N-methyltiansferase messenger RNA and piotein levels in medulla oblongata of postnatal lat // Pediatr. Res. 1997. V. 42(4). P. 455-462.

177. Williams DJ, Vallance PJT, Neild GH et al. Nitiic oxide-mediated vasodilatation in human piegnancy. // Am. J Obstet Gynaecol. 1997. V. 272. P. 748-752.

178. Wmdham GC. Fenster L, Swan SH. Moderate maternal alcohol consumption and risk ot spontaneous abortion. // Epidemiology. 1997. V. 8. P. 509-514.

179. Windle W.F. Phisiology of the fetus. Relation to brain damage in the perinatal period. // Illiois, USA: Ch. С Thomas Publ., 1971.

180. Ylikorkala O, Halmesmaki E., Viinika L. Urinary prostacyclin and thromboxane metabolites m drinking pregnant women and m their infants: relations to the fetal alchol eifects. // Obstetrics and Gynecology. 1988. V. 71. P. 61-66.

181. Zhang .1., Zheng F. The role of paraventricular nucleus of hypothalamus in stiess-ulcer foimation in lats // Brain. Res. 1997. V. 761. № 2. P. 203-209.

182. Zhang L. Prenatal hypoxia and caidiac programming. // J Soc Gynecol Investig. 2005. V.

183. Zuspan F.P. Preventing preeclampsia. / /N Eng J Med. 1993. V. 329. P. 1265-1266.

Информация о работе
  • Граф, Анастасия Викторовна
  • кандидата биологических наук
  • Москва, 2005
  • ВАК 03.00.13
Диссертация
Последствия гипоксии периода раннего органогенеза у крыс и их пептидная коррекция - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно
Автореферат
Последствия гипоксии периода раннего органогенеза у крыс и их пептидная коррекция - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации
Похожие работы